Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Кальцийзависимые и эндотелийзависимые механизмы гуморальных констрикторных реакций венозных сосудов скелетной мускулатуры

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Кальцийзависимые и эндотелийзависимые механизмы гуморальных констрикторных реакций венозных сосудов скелетной мускулатуры"

6361

ЦВЯЩЕНКО Татьяна Юрьевна

КАЛЫЦ1ЙЗАВПСИМЫЕ И ЭНДОТЕШШЗАВИСПМЫЕ МЕХАНИЗМЫ ГУМОРАЛЬНЫХ КОНСТРНКТОРНЫХ РЕАКЦИЙ ВЕНОЗНЫХ СОСУДОВ СКЕЛЕТНОЙ МУСКУЛАТУРЫ

03.03.01 - Физиология

Автореферат

Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2010

004616361

Работа выполнена в Отделе физиологии висцеральных систем Учреждения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН, Санкт-Петербург

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Кудряшов Юрий Анатольевич

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук профессор Лосев Николай Андреевич

доктор медицинских наук профессор Власов Тимур Дмитриевич

Ведущая организация:

Институт эволюционной физиологии и биохимии РАН им. И.М. Сеченова, Санкт-Петербург

Защита состоится «28» декабря 2010 в 13тчасов на заседании Диссертационного совета Д 001.022.03 при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАМН по адресу :197376, Санкт-Петербург, Каменоостровсиш пр.,69/71

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Научно-исследовательского института экспериментальной медицины СЗО РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул акад. Павлова,12

Автореферат разослан «_» ноября 2010г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор Л.В. Пучкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность_проблемы. Физиология венозного отдела

сердечнососудистой системы имеет относительно небольшую историю. Согласно современным представлениям (Б.И. ТкаченкоД979; Б.И. Ткаченко, Ю.А. Кудряшов, А.В. Самопленко,2000), венозные сосуды предназначены для осуществления двух функций - емкостной и резпстивной, первая из которых служит для обеспечения адекватного венозного возврата крови от органов к сердцу, а вторая - для поддержания гидростатического капиллярного давления, одного пз показателен обменной функции мпкрососудов. Малоразработанным направлением исследований в физиологии органного кровообращения является изучение роли кальцнпзависимых механизмов в регуляции активных реакций вен на гуморальные раздражители, в реализации резистивной и емкостной функций венозных сосудов. Ведущая роль ионов кальция в реализации как электро-, так и фармакомеханнческого сопряжения процессов возбуждения и сокращения в гладких мышцах сосудов была показана еще в 1968 г. В работе Somlyo ( Soinlyo A.V., Somlyo А.Р., 1968г). Вместе с тем большинство исследований, касающихся механизмов регуляции кальциевого обмена в сосудистых мноцитах, выполнено на артериальных сосудах ( Р.С. Орлов и др.,1971; Bayer -Symposium IX «Cardiovascular Effects of Diliydropyridine-Type Calcium Antagonists and Agonists», 1985; Kim A. Dora et al, 2008). Сведения о венозных сосудах в указанных работах практически не представлены, хотя известно (Kudiyasliov et al, 1989; Torok et al, 1997), что сократительные реакции сегментов брыжеечных вен кролика в большей степенн зависят от входа в мноциты ионов кальцпя, чем реакции сегментов артерий. Многочисленные исследования механизмов транслокацип ионов кальция в гладкомышечных клетках проводятся на сегментах крупных артериальных сосудов с использованием веществ, обладающих свойствами блокаторов кальциевых

каналов, т.е. ограничивающих вход кальция в клетки и уменьшающих его внутриклеточную концентрацию (Fleckenstein, 1985).

Другим направлением шггенспвно развиваемых исследований регуляции венозных сосудов, их реактивности к действию гуморальных стимулов является изучение роли венозного эндотелия. Это направление получило свое развитие начиная с 1980 года после публикации работы R. F. Furchgott и J. V. Zawadzki. Следует отметить, что исследование роли эндотелия в изменениях реактивности кровеносных сосудов к гуморальным воздействиям проводится, как правило, на сегментах крупных артериальных сосудов и аорте(Алс!о Н et al,2006; Mandala et.al, 2007). А исследования на венозных сосудах единичны (Ma J et.al, 2006). В указанном плане проведение исследований на органных венозных сосудах является актуальным.

В настоящее время является актуальным изучение взаимодействия кальциевых и эндотелпальных механизмов, участвующих в изменении реактивности органных венозных сосудов. По данному вопросу имеются лишь единичные работы (Jimenez et.al, 2001) в которых, однако, отсутствует единое мнение по поводу этого взаимодействия. Отмечается заметное преобладание исследований в пользу наличия такого взаимодействия, вместе с тем и противоположная точка зрения остается значимой. Очевидно, что исследования в указанном плане должны быть направлены на выяснение условий и степени взаимодействия кальциевых и эндотелпальных факторов, зависимости этого взаимодействия и функциональной принадлежности сосудов, включая возможные различия в регуляции тонуса органных венозных сосудов. Большинство исследований, проведены на сегментах и полосках крупных артериальных сосудов и аорты, т.е. в жёстких биохимических условиях, позволяющих производить точный анализ полученных данных, но малорепрезентативны по сравнению с исследованиями в условиях, приближающихся к физиологическим, т.е. при перфузии венозных сосудов

аутокровыо животного с применением методов динамической регистрации изменений сопротивления кровотоку в венозных сосудах.

Цель_исследования. Определение кальцийзависнмых и

эндотелийзависимых механизмов и их взаимодействия в гуморальной регуляции венозных сосудов скелетной мускулатуры в условиях перфузии аутокровыо животных.

Задачи исследования.

1. Изучить реакции изолированной большой подкожной вены задней конечности кошки на норадреналин н/нли ангиотензш! II при сочетанном влиянии блокатора кальциевых каналов верапамила п деэндотелпзацнп этанолом пли гемоглобином.

2. Исследовать изменения реактивности к норадреналпну изолированной большой подкожной вены задней конечности в условиях блокады кальциевых каналов нпфедипином н при деэндотелизацни этанолом или гемоглобином.

3. Охарактеризовать констрпкторные (норадреналин, ангпотензпн II) реакции большой подкожной вены задней конечности in vivo при действии антагониста кальция нпфедшпгна до и после угнетения эндотелиальных факторов гемоглобином.

4. Определить величину констрпкторных (норадреналин, ангнотензин II) реакций глубоких вен задней конечности кошки при действии антагониста кальция нифедипина до и после угнетения эндотелиальных факторов этанолом.

Научная новизна. Впервые показано, что блокада выделения эндотелиальных факторов вызывает увеличение констрпкторных реакций на норадреналин ir ангпотензпн глубоких и поверхностных вен задней конечности кошки.

Получены новые экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что блокаторы кальциевых канатов верапамил и нифедипнн приводят к понижению констрпкторных реакций поверхностных и глубоких венозных

5

сосудов задней конечности кошки независимо от функциональной полноценности венозных эндотелпоцитов.

В исследованиях обнаружено, что феномен возвращения констрпкторных реакций к исходному уровню (имевшему место до действия блокаторов кальциевых каналов) имеет органную специфичность, то есть имеет место на поверхностных венах задней конечности и не проявляется на глубоких.

Научно - практическое значение работы. Полученные в процессе работы ранее неизвестные материалы о взаимоотношениях кальциевых и эндотелнальных механизмов в регуляции венозных сосудов скелетной мускулатуры относятся к фундаментальным физиологическим разработкам.

Обнаруженные в работе экспериментальные факты, касающиеся кальциевых и эндотелнальных механизмов изменения реактивности венозных сосудов скелетной мускулатуры могут открыть новые пути поиска превентивных мероприятии и разработку лекарственных средств для коррекции нарушений реактивности периферических вен в результате повреждений венозных мноцнтов и эндотелпоцитов.

Установленные в работе закономерности и механизмы регуляции венозного тонуса с участием кальциевых и эндотелнальных факторов при действии гуморальных стимулов и фармакологических средств на вены органов и тканей могут быть использованы в лекционных курсах в ВУЗах медико -биологического профиля, а также в соответствующих пособиях и руководствах.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Блокаторы кальциевых канатов верапамнл п ннфедиппн приводят к понижению констрпкторных реакций поверхностных и глубоких венозных сосудов задней конечности кошки независимо от функциональной полноценности венозных эндотелпоцитов.

2. Блокада выделения расслабляющих эндотелнальных факторов экзогенным гемоглобином и/или деэндотелпзацпя этанолом увеличивает

констрикторные реакции подкожной и глубоких вен задней конечности кошек на норадренашга и ангнотензин II.

3. Сочетанное влияние повреждающих факторов на венозные эндотелиощггы, то есть химической или физико-химической деэндотелнзацнн на фоне действия антагонистов кальция приводит к возвращению констрикторных реакций подкожной вены задней конечности к исходному уровню, имевшему место до применения блокаторов кальциевых каналов. Этот феномен не проявляется на глубоких венах.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на заседании Отдела физиологии висцеральных систем НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН; на научно-практической конференщш «Актуальные вопросы клинической н экспериментальной медицины» (16-17 мая 2007 года г. Санкт-Петербург); на IV всероссийской с международным участием школе-конференцни по физиологии кровообращения (17-19 ноября 2008 г. Москва); на III Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения — 2009» (2-4 декабря 2009 года г. Санкт-Петербург).

Публикации По теме диссертации опубликовано 2 статьи в рецензируемых журналах из списка ВАК РФ и тезисы 5 докладов.

Личный вклад автора в проведении исследования Соискателем были проведены: анализ литературы по теме исследования, спланированы и проведены эксперименты, статистически обработаны полученные данные, написание статен и подготовка докладов на конференциях. Морфологические исследования были проведены совместно со с.н.с., к.б.н. Отдела общей и частной морфологии НИИЭМ СЗО РАМН Л.А. Федосихиной.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего

168 источников. Работа изложена на 114 страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследования проведены на венозных сосудах задней конечности кошек, наркотизированных уретаном (1,1 г/кг, в/в) и/или этаминалом натрия (30-40 мг/кг, в/м), с применением гепарина (1500 Ед/кг, в/в). Все эксперименты проведены с соблюдением основных биотических правил обращения с животными .

В Отделе физиологии висцеральных систем разработаны методы перфузии аутокровью животного выделенной большой подкожной вены задней конечности, н глубоких венозных сосудов икроножной мышцы кошек (in situ). Также был использован метод (Webb-Peploe, Shepherd, 1969) перфузии большой подкожной вены задней конечности ( in vivo).

Метод регистрации динамических нзменешгй сопротивления кровотоку выделенной большой подкожной вены задней конечности у кошек.

Большую подкожную вену задней конечности (кошек) изолировали от окружающих тканей на протяжении от голеностопного сустава до места впадения в бедренную вену. Вену перфузировали гепаринизированной (1500 ед) артериальной аутокровью животного в режиме постоянного пульсирующего кровотока (частота пульсаций составляла 134 имп/мин, пульсовое давление 15-20 мм рт.сг.). Перфузпонное давление поддерживали на уровне 20-25 мм рт. ст., что с учетом падения давления в катетере на 10-15 мм рт.ст. не превышало физиологически допустимых величин венозного давления для данного региона. О сдвигах сопротивления кровотоку при воздействиях судили по изменениям перфузнонного давления, регистрируемого электроманометром на механотронных преобразователях. В экспериментах подобного рода, то есть при перфузии подкожной вены в условиях стабилизированного кровотока, сдвиги перфузнонного давления отражают изменение сопротивления исследуемого сосуда. Об изменениях кровенаполнения вены судили с помощью метода аккумулографии (Б.И. Ткаченко,1979), позволяющего регистрировать в динамике кровенаполнение органных венозных сосудов, а в данном случае большой подкожной вены задней конечности кошек.

Метод регистращш динамических изменении сопротивления кровотоку большой подкожной вены fin vivo!

Изменение сопротивления постоянному кровотоку большой подкожной вены задней конечностн кошек определяли in vivo по методу, предложенному Вебб-Пеплое и Шефердом (Webb-Peploe, Shepherd, 1969). Выделяли участок этой вены в области голеностопного сустава н вводили в просвет вены; катетер, через который осуществляли перфузию этого сосуда в режиме Стабилизированного кровотока артериальной кровью, забираемой го бедренной артерип контралатеральной конечности того же животного. Перфузионное давление поддерживали на уровне 20-25 мм рт.ст., что с учетом падения давления на катетере на 10-15 мм рт.ст. не превышало физиологически допустимых значений венозного давления для данного региона. !

О сдвигах сопротивления ■ судили по изменению перфузнонного давления, регистрируемого элекгроманометром. Метод был применен в проведенных исследованиях вследствие минимальной травматачностн, корректности измерений сдвигов венозного сопротивления кровотоку большой подкожной вены.

Метод регистрации изменений сопротивления глубоких вен задней конечностп кошки.

Принцип метода регистрации динамических изменений посткапиллярного сопротивления кровотоку в икроножной мышце кошек основан на морфологических особенностях строения глубокой я поверхностной (подкожной) венозных систем задних конечностей млекопитающих, связанных через посредство коммуншсангаых венозных

стволов (v.v. commuiiicants). Однонаправленность этой связи определяется наличием клапанного аппарата в коммуникантных венах, препятствующего поступлению крови из системы глубоких (внутримышечных) вен конечностей млекопитающих в систему поверхностных (v. saphena magua et parva) при физиологически допустимых уровнях енозного давления. Наличие второй системы вепозного оттока крови от мышц конечностей позвошшо осуществить добавочную к основной перфузии вен препарата голени кошки.

Описанный метод параллельной перфузии внутримышечных венозных сосудов голени кровью по естественному пути - артериальные сосуды и капилляры, - а также раствором декстрана через посредство поверхностных вен, впадающих в глубокие вены мышечного препарата, позволил учитывать динамические изменения посткашшлярного сопротивления в ответ на действие вазоактивных веществ, введенных в артериальное русло голени. В силу того, что внутримышечные вены перфузировали параллельно кровью и раствором декстрана в режиме постоянного потока, - изменения венозного перфузионного давления отражали изменения посткапиллярного сопротивления в икроножной мышце.

В экспериментах использовали следующие препараты:

1. С целью получения констрикторных реакций венозных сосудов скелетной мускулатуры, болюсно вводили норадреналин (норадреналнна шдрохлорпд) в дозе 5 мкг и ангиотензина П (анпютензинампд) 5 мкг в 0,1 мл 6% раствора декстрана.

2. В качестве блокаторов медленных кальциевых каналов использовали верапамил и/или нифедшшн, которые растворяли в 6% растворе декстрана. Указанные вещества инфузнровали с помощью микроиъектора. Верапамил использовали в дозах 6,25; 12,25; 25 и 50 мкг, содержащихся в 0,1 мл декстрана, а нифедшшн в дозе 1 мкг в 1 мл растворе декстрана Инфузню производили со скоростью 0,1 мл в шш (верапамил) н 1 мл в мин (нифедшшн).

3. Химическую деэндотелизацию подкожной вены осуществляли путем инфузип 1% раствора лошадиного гемоглобина. Физико-химическое повреждение эндотелия вены исследуемого органа производили путем инфузни в нее (предварительно «промытую» физиологическим раствором) 12 % раствора этанола в объеме 5 мл. После этого вену промывали физиологическим раствором и возобновляли перфузию кровью животного. Температуру поступающей в вену крови поддерживали на постоянном уровне (37°С) при помощи ультратермостата (U -15 Gennany).

Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием t -критерия при помощи пакета программ STATISTTCA 8.0. Разность средних значений в несвязанных выборках считали достоверной при р<0,05.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Изменения сопротивления кровотоку и емкости изолированной большой подкожной вены в ответ на действие норадреналнна и/или ангиотензина П при сочетанном влиянии вевапамила и деэндотелнззпип (этанолом, гемоглобином).

Исследования показали, что в проведенных опытах норадреналин и ангпотензин вызывали сокращение гладких мышц большой подкожной вены задней конечности кошки, что проявлялось повышением перфузионного давления на 17±1,9 мм рт.ст. для норадреналнна и 11,25±1,1 мм рт.ст. для ангиотенз1ша. Уменьшение кровенаполнения при этом составляло 0,143±0,012

мл для норадреналина п 0,06±0,008 мл для ангаотензина. После окончания реакции производили деэндотелнзацпю подкожной вены этанолом. Электронномикроскопическпе исследования (исследования проведены в Отделе общей и частной морфологии НИЙЭМ СЗО РАМН) показали, что в результате действия на подкожную вену 12 % раствора этанола происходит повреждение сосудистого эндотелия, являющееся по данным литературы (Караганов Я.Л. п др, 1989; Куприянов В.В., 1986), стресс - реакцией эндотелиоцитов на действие химического агента. При этом структура гладкомышечных элементов вены по данным электронной микроскопии не изменялась.

После нарушения функциональной целостности эндотелия венозной стенки этанолом величины сократительных реакций на норадреналин и ангпотензин II возросли, что проявлялось в повышении перфузнонного давления на 31±5,8 мм рт.ст. на норадреналин и 16±2,25 мм рт.ст. на ангпотензин. Также при этом имело место понижении кровенаполнения подкожной вены на 0,178±0,025 мл и 0,16±0,02 мл на норадреналин и ангиотензин соответственно. Это увеличение сократительных реакций может быть объяснено снятием действия расслабляющих факторов, выделяемых эндотелиоцитами (Медведева H.A., Шендеров С.М.,1989). На фоне деэндотелизащш производили инфузпю верапамнла в различных дозировках (6,25; 12,5; 25; 50 мкг/млн). В проведенных экспериментах имело место дозозависпмое уменьшение перфузнонного давления при действии норадреналина и ангпотензина. Понижение кровенаполнения вены в ответ на действие норадреналина и ангпотензина также имело дозозависпмое ослабление. На основании этих данных сделано заключение о том, что действие блокатора кальциевых каналов верапамнла в отношении реакций большой подкожной вены на норадреналин и ангпотензин (повышение перфузионного давления и снижение кровенаполнения) проявляется в условиях

Ю

деэндотелизацни, и следовательно, не зависит от функционального состояния венозных эндотелиоцптов.

Затем была изменена последовательность предъявляемых повреждающих факторов, то есть сначала проводилась инфузия блокатора кальциевых каналов верапашша, с последующей деэндотелизацпей этанолом. Фоновые значение сократительных реакций большой подкожной вены на норадреналин п ангнотензин составляли в отношении повышения сопротивления соответственно 17,7±5,1 мм рт.ст. и 17,5±б,3 мм рт.ст,а в отношении снпжешы кровенаполнення 0,09±0,01 мл н 0,07=0,01мл. После инфузни верапампла имело место дозозависпмое уменьшение сократительных реакций на норадреналин и ангнотензин. На фоне ннфузни блокатора кальциевых каналов производили физико-химическую деэндотелизацию вены этанолом, после чего сократительные реакции на норадреналин и ангнотензин значительно возросли по величине и составляли 16,5±3 мм рт.ст. и 20±8,2 мм.рт.ст. соответственно по сопротивлению; а по кровенаполнению на норадреналин п ангнотензин были соответственно равны 0,09±0,01мл и 0,12±0,04 мл. Таким образом, был выявлен феномен возрастания, сниженных действием блокатора кальциевых каналов, сократительных реакций большой подкожной вены на норадреналин и ангнотензин на фоне продолжающегося действия блокатора кальциевых каналов, но после деэндотелнзацип этанолом. Опираясь на данные литературы ( Gogfraind Т., Engleme С., Wibo М.,1985; Kim A Dora et al, 1997), можно предполагать, что открываются новые каналы, независимые от данного блокатора кальциевых каналов, использованного в экспериментах. Также были проведены эксперименты с использованием лошадиного гемоглобина в качестве химического (Toda N., Okaimira Т., 1998) деэндотелпзатора. Этот способ нарушения функциональной целостности эндотелия сосудов описан в литературе и является классическим (Toda N., Okamura Т., 1998). Деэндотелизацию производили путем инфузни 1 % раствора лошадиного гемоглобина в вену.

Фоновые значения увеличения сопротивления кровотоку при действии норадреналнна в данной серии составляли 31±6,5 мм рт.ст., а изменения кровенаполнения было равно 0,3±0,04 мл. После ннфузии блокатора кальциевых каналов верапампла сократительные реакции вены уменьшились, что отразилось на меньшем повышении перфузионного давления в реакциях на норадреналин они были равны 6,5±1,5мм рт.ст.; при этом изменения кровенаполнения составляло всего лишь 0,025±0,00б мл. При ннфузпи экзогенного гемоглобина средние величины сократительных реакций вены на норадреналин значительно возросли и составили 34±8,75 мм рт.ст., а изменения кровенаполнения составляло 0,355±0,065 мл. На основании данных этой серга1 экспериментов сделано заключение о том, что на фоне действия блокатора кальциевых каналов верапампла химическая деэндотелизацня экзогенным гемоглобином, так же как и в опытах в которых в качестве деэндотелнзатора применяли этанол, имело место повышение сократительных реакций подкожной вены выше фоновых значении.

Представленные результаты свидетельствуют о том, что феномен возвращения констрнкторных реакций большой подкожной вены на норадреналин и ангиотензин П после химической и физико-химической деэндотелизацни гемоглобином и/или этанолом, к исходному уровню, который был отмечен до его понижения блокатором кальциевых каналов верапамнлом, проявляется при дезндотелпзацшг как этанолом, так н гемоглобином.

Изменения сопротивления кровотоку и емкости изолированной вены на норадреналин при инфузии нифедггппна пли при деэндотелизашт этанолом и гемоглобином.

Проведенные исследования показали, что в условиях относительной физиологической нормы норадреналин вызывал сокращение гладких мышц подкожной вены задней конечности кошки, что проявлялось повышением перфузпонного давления на 11,3±1,8 мм рт.ст.( р<0,05) Уменьшение венозного кровенаполнения при этом составляло 0,18±0,01(р<0,05) мл. После окончания

12

реакции производили деэндотелизгищю подкожной вены этанолом. Для этого применяли метод повреждения эндотелия венозных сосудов этанолом (12%).

После нарушения функциональной полноценности эндотелия венозной стенки этанолом величины сократительных реакции на норадреналнн возросли, что проявлялось в повышеншг сопротивления кровотоку на 23,8±2,8 мм рт.ст. (р<0,05) и при этом имело место понижение кровенаполнения подкожной вены на 0,26±0,02 мл (р<0,05). Это увеличение сократительных реакций может быть объяснено снятием действия расслабляющих факторов, выделяемых эндотелиоцпгами (Медведева Н.А., Шендеров С.М.,1989). На фоне деэндотелшации производили инфузшо нифедипина (1мкг/мин). После действия блокатора кальциевых каналов (Тогок 1.,Ткас11еико В.1., Кис1гуа$1юу У.А.,Тогокоуа 11,1997) имело место резкое понижение величин реакций вены на норадреналнн. Так, увеличение сопротивления кровотоку составило лишь 4.4±1,25 мм рт.ст., а уменьшение кровенаполнения вены - 0,12±0,02 мл.( р<0,05). На основании этих исследований сделано заключение о том, что действие блокатора кальциевых каналов не зависит от состояния сосудистых эндотелноцптов.

В следующей серии опытов фоновые значения сократительных реакции вены на норадреналнн составили по сопротивлению 20±2,2 мм рт.ст.( р<0,05), а по кровенаполнению 0,18±0,012 мл (р<0,05). После ннфузин нифедишша сократительные реакщш на норадреналнн резко уменьшались и составляли в отношении сопротивления кровотоку 12,5±0,9 мм рт.ст.( р<0,05), а уменьшеш1е кровенаполнения составляло 0,08±0,01 мл (р<0,05). После деэндотелизацпи вены этанолом, произведенной на фоне действия блокатора кальциевых каналов нифедипина, сократительные реакщш на норадреналнн значительно возрастали по величине н приближались к фоновым значениям. Это особенно проявлялось в отношении повышения сопротивления кровотоку, поскольку оно составляло 19±1,9 мм рт.ст.; прн этом реакции по изменению ёмкости также возрастали и были равны 0,15±0,02 мл. Таким образом, был подтвержден

13

феномен, выявленный в исследованиях, с применением в качестве блокатора кальциевых каналов верапампла, который характеризовался возрастанием сократительных реакций на норадреналин после деэндотелпзащш этанолом на фоне продолжающегося действия нифедпгаша. Опираясь на данные литературы (Kim A. Dora et al, 1997), можно предполагать, что открываются новые кальциевые каналы, независимые от блокатора кальциевых каналов, использованного в экспериментах.

Следующим этапом исследований явилось применение лошадиного гемоглобина для деэндотелизации вены:. Химическую деэпдотелпзацию производили путем инфузии 1% раствора лошадиного гемоглобина в вену. В условиях инфузии гемоглобина средние величины сократительных реакций вены на норадреналин значительно возрастали и составляли 26, б ±3,7 мм рт.ст.(р<0,05), а изменение кровенаполнения составляло 0,25±0,02 мл( р<0,05). Следовательно, так же, как и в экспериментах с применением для деэндотелизации 12% раствора этанола, в этой серии опытов увеличение сократительных реакций на норадреналин происходило, по-видимому, в результате устранения расслабляющих факторов, выделяемых эндотелиоцитамп. Инфузпя блокатора кальциевых каналов ннфедшпша приводила к выраженному уменьшению сократительных реакций на норадреналин и составляла 13 ±3,8 мм рт.ст.(р<0,05), а изменении ёмкости -0,11±0,02 мл.(р<0,05). Эти исследования подтверждают, что действие блокатора кальциевых каналов не зависит от целостности эндотелия сосудов.

В следующей cepiui экспериментов очередность предъявления повреждающих факторов была изменена. Начальная инфузпя блокатора кальциевых каналов нифеднпина приводила к уменьшению сократительных реакций на норадреналин, а последующая химическая деэндотелнзацни гемоглобином возвращала реакции к уровню близкому к тому, который был до действия повреждающих факторов.

В результате проведенных исследований на изолированной большой подкожной вене задней конечности кошки с применением в качестве деэндотелизаторов раствора этанола и гемоглобина получены данные, свидетельствующие, с одной стороны об автономности, а с другой стороны об определенной зависимости кальциевых и эндотелиальных механизмов констрикторных реакций большой подкожной вены на норадреналин. В данном исследовании был использован препарат большой подкожной вены, который позволил в аналитических условиях регистрировать показатели обеих функции вепозных сосудов, то есть резистивной (изменение сопротивлении кровотоку) и ёмкостной (изменение кровенаполнения венозного сосуда). Можно заключить, что взаимодействие кальций и эндотелнйзависимых механизмов возможно, но лишь в определённых условиях. Одним нз таких условий является очередность предъявления повреждающих факторов. На фоне нарушения функциональной полноценности эндотелия блокатор кальциевых каналов понижает величины констрикторных реакции подкожной вены. В то же время на фоне нарушения входа внеклеточного кальция в гладкомышечные клетки последующая химическая деэндотелнзация возвращает величины к прежним значениям, имевшим место в условиях относительной физиологической нормы. В последнем случае возврат величин реакций к прежнему уровню можно объяснить облегчением входа внеклеточного кальция в гладкомышечные клетки по предполагаемым новым каналам.

Констрикторные (норадреналин, ангпотензин Г1) реакции поверхностной вены задней конечности in vivo при действии антагониста каиьция ннфедипина до и после торможения выделения эндотелиальных факторов гемоглобином.

Проведенные исследования показали, что в условиях относительной физиологической нормы, норадреналин и ангпотензин II вызывали сокращение гладких мышц большой подкожной вены задней конечности кошки, что проявлялось в повышении перфузионного давления, при действии

норадренашша на 41+4 мм рт.ст. , а ангиотензнна - на 1б±5 мм рт.ст. После нарушения функциональной полноценности эндотелия венозной стенки в результате инфузин 1% раствора гемоглобина величины реакции возрастали в большей степени при действии норадреналшга, чем ангиотензнна П. Так норадреналин вызывал повышение перфузионного давления на 59+8 мм рт.ст., а ангиотензин на 27±7 мм рт.ст. от исходного уровня. Это увеличение также может быть объяснено снятием действия расслабляюгщгх факторов, выделяемых эндотелноцитами (Ando et al, 2006; Buluc, Demirel-Yilmaz, 2006). В условиях блокады входа внеклеточного кальция, то есть на фоне действия нифедшшна, констрикгорные реакции подкожной вены при действии норадренашша и ангиотензнна резко уменьшались по величине и составляли для норадреналина 29 + Змм рт.ст., а для аншотензина 8+3 мм рт. ст. Величины этих реакций были статистически достоверно меньше (при р<0,05) величин реакций полученных в экспериментах в условиях нарушения полноценности эндотелия вследствие инфузии 1% раствора гемоглобина. На основании полученных данных сделано заключение о том, что бяокатор кальциевых каналов нифедипин, так же как и верапамил вызывает понижение величин констрнкторных реакций большой подкожной вены независимо от нарушения функциональной полноценности венозных эндотелиоцнтов.

Следующим этапом нсследовангш было изменение очередности предъявления повреждающих факторов, то есть нарушение полноценности эндотелия производили на фоне действия блокатора входа внеклеточного кальция нифедшпша. В этой серии опытов в норме норадреналин и ангиотензин вызывали сокращение гладких мышц подкожной вены так же, как и в предыдущей cepmi опытов. При действии норадреналина повышение перфузионного давления составляло 48±5 мм рт.ст., а при действии ангиотензнна 16±3 мм рт.ст. После инфузии блокатора кальция нифедипина (1 мкг/мин) велщпгны реакций статистически достоверно (р<0,05) понижались,

при действии норадреналин составляли 24±3 мм рт.ст., а при действии аттютензпна 8±3 мм рт. ст. Как оказалось, деэндотелизации приводила к резкому увеличению величины констрикторных реакций, особенно это проявлялось в отношении норадреналина. В результате реакции составляли для норадреналнна 51±7мм рт.ст., а для ангиотензнна 25±5 мм рт.ст. Величины реакции на норадреналин статистически достоверно (р<0,05) были больше реакций полученных в условиях блокады кальциевых каналов .

На основании результатов экспериментов, сделано заключение о том, что несмотря на действие на гладкие мышцы обоих повреждающих факторов -блокатора кальциевых каналов и химической деэндотелизацнн происходило увеличение амплитуды сократительных реакций большой подкожной вены на норадреналнн и ангиотензнн, причем для норадреналина это увеличение было статистически достоверным (р<0,05). В целом следует отметить, что величины сократительных реакций вены в ответ на действие констрикторных стимулов, примененных в эксперименте, на фоне действия двух повреждающих факторов, вернулись к исходному уровню, имевшему место в условиях относительной фшполопгаеской нормы. Таким образом, в результате химической деэндотелизации гемоглобином блокада кальциевых каналов ннфедпшшом оказалось незначимой, поскольку величины констрикторные реакций вены значительно возросли. На основании полученных данных этот феномен можно объяснить открытием новых, независимых от ннфедишша также как и от верапамила, кальциевых каналов. Эту точку зрения разделяют авторы (Kiui A Dora et al, 1997; Jimenez et al, 2001) в исследованиях которых в опытах на сегментах аорты (Jimenez et al, 2001) и сегментах артериальных сосудов (Kim A Dora et al, 1997) имел место подобный феномен возврата величин констрикторных реакций к прежнему уровню после действия блокатора кальциевых каналов и последующей деэндотелизации. В представленном исследовании феномен был показан в опытах на большой

подкожной вене задней конечности кошки, то есть в максимальна приближенных условиях к экспериментам in vivo.

Констрпкторные (на норадреналин, ангнотензпн II) реакции глубоких вен задней конечности кошки при действии антагониста кальция нифедипина до и после торможения выделения эндотелпальных факторов этанолом .

Исследования показали, что ангнотензпн при введении в глубокие вены, минуя артериальные капилляры, вызывал, в отличие, от норадреналпна, двухфазные констрпкторные реакции венозных сосудов. Известно (Regoli, 1979), что точкой приложения действия ангиотензина в сосудах являются специфические ангиотензиновые рецепторы, среди которых выделяют несколько подтипов, физиологическое значение которых еще полностью не установлено (Tabrizchi, Pang, 1987). Также показано (Pals, Fulton, 1968J, что ангпотензин II оказывает возбуждающее влияние и на а-адренорецепторы. Можно полагать, что в нашем исследовании вторая фаза реакции глубоких вен икроножной мышцы, вызванных ангпотензпнном, была обусловлена его возбуждающим действием на а-адренорецепторы.

В проведенных исследованиях учитывали лишь первую фазу констрикторной реакции глубоких вен, которая является собственно ангиотензпновой. Средние величины этой реакции в серии эксперзгментов, в которых производили деэндотелнзацню с последующей инфузией блокатора кальциевых каналов нифедипина, составляли 23,5±3,1 мм рт.ст. После физико-химической деэндотелпзацип этанолом имела место тенденция к увеличению реакций (24,9±5,1 мм рт.ст.). Блокатор кальциевых каналов нпфедипин на фоне деэндотелизации также приводил лишь к небольшому снижению констрнкторных реакций на ангпотензин (перфузнонное давление понижалось до 22,3±5,1 мм рт.ст.). Наряду с этим норадреналпн в норме вызывал меньшие, по сравнению с ангаотензинном, по величине констрпкторные реакции глубоких вен, которые составляли 14,4±5,8 мм рт.ст. Деэндотелизация этанолом приводила к увеличению констрнкторных реакций венозных сосудов, которые

18

составляли по увеличению перфушонного давления 223±5,0 мм рт.ст. Аналопгчные данные были получены и в исследованиях на большой подкожной вене. Обнаруженное увеличение реакций объясняется снятием релаксирующих факторов (Медведева H.A., Шендеров С.М.,1989) венозных эндотелпоцптов на гладкие мышцы, что и приводило к увеличению констрикторных реакции на норадренашн. Антагонист кальция нифедппин вызывал резкое достоверное (р<0,05) понижение величин констрикторных реакций на норадреналпн, которые составляли 7,7±3,2 мм рт.ст. Сделано заключение, что ннфедишш блокировал поступление внеклеточного кальция к гладко мы га еч иы м элементам глубоких вен, что и приводило к выраженному уменьшению констрикторных реакций на норадреналпн этих сосудов.

В следующей серии экспериментов на глубоких венах икроножной мышцы изменили порядок предъявления повреждающих факторов, то есть на фоне действия блокатора кальциевых каналов нифедипина производили физико-химическую деэндотелизацию этанолом. В этих исследованиях в норме ангпотензии II вызывал увеличение перфузионного давления на 37,2±8,5 мм рт.ст. В условиях сохраненной функциональной полноценности венозного эндотелия в сосудах икроножной мышцы нпфеднпин приводил к снижению величины повышения перфузионного давления. Это понижение составляло 21,9±5,4 мм рт.ст. Последующая дгэндотелнзацпя в этой серии экспериментов приводила к еще большему понижению величин констрикторных реакций, прирост перфузионного давления составлял лишь 11,5±2,3 мм рт.ст. эта величина реакций достоверно (р<0,05) отличалась от исходного уровня бывшего до действия повреждающих факторов. На основании этих экспериментов сделано заключение о том, что два повреждающих фактора в очередности нпфедппин-этанол, вызывает резкое понижение величин констрикторных реакций глубоких венозных сосудов икроножной мышцы.

Аналогичные факты были получены и в исследованиях с норадреналином. В норме констрикторные реакции вен на норадреналпн составляли 17,4±1,7 мм

19

рт.ст., после блокады кальциевых канатов - 12,5±2,8, а после деэндотелизацпи прирост перфузионного давления, вызванный норадреналнном, составлял всего лишь 9,6±2,6 мм рт.ст.

На основании полученных результатов исследований на глубоких венах, в отличие от констрикторных реакций поверхностных вен задней конечности кошки феномен увеличение констрикторных реакций глубоких вен икроножной мышцы кошек в ответ на действие норадреналпна не был обнаружен. Можно заключить, что глубокие вены икроножной мышцы значительно отл1гчаются от поверхностных вен, по крайней мере, в отношении взаимодействия кальциевых и эндотелналъных механизмов в проявлении констрикторных реакции на норадреналин и анпштензин. Об этом также свидетельствуют результаты исследований, в которых алпютензпн в дозе 5 мкг вызывал двухфазную реакцию в отличие от поверхностных вен. Так в не следованиях (Tayo, Bevan, 1987) in vitro на сегментах аорты кролика, верхней мезентернальной и почечной артерий изучали зависимость сокращения и эндотелиального расслабление от наличия кальция в физиологическом растворе, омывающем сегменты сосудов. На основании проведенных исследовании авторы пришла к заключению о том, что выявленное взаимоотношение между кальциевыми п эндотелиальнымп механизмами зависит от органной принадлежности кровеносных сосудов.

В наших исследованиях эти различие были обнаружены в пределах одного органа, однако, следует отметить, что поверхностные и глубокие вены задней конечности кошек функционально отличаются, поскольку глубокие вены окружены каркасом скелетной мускулатуры, в отличие от поверхностной вены. Различия, обнаруженные в исследованиях, между кальциевыми п эндотелиальнымп факторами двух систем венозных сосудов скелетной мускулатуры ставят вопрос об определенной автономности проявления калыцшзависнмых и эндотелийзависпмых механизмов регуляции тонуса

венозных сосудов, которые зависят от органной специфичности и функциональной значимости венозных сосудов в организме млекопитающих.

В процессе работы получены ранее неизвестные факты о взаимоотношениях кальциевых и эндотелнальных механизмов в гуморальной регуляции венозных сосудов скелетной мускулатуры. Обнаруженные в работе экспериментальные факты и феномены, касающиеся кальциевых и эндотелнальных механизмов изменения реактивности венозных сосудов скелетной мускулатуры могут открыть новые путл поиска превентивных мероприятий и разработки лекарственных средств для коррекции нарушений реактивности периферических вен в результате повреждении венозных миоцитов и эндотелиоцитов

ВЫВОДЫ

1. Фнзико — химическая: деэндотелизация этанолом и химическая экзогенным гемоглобином приводит к увеличению констрпкторных реакций на норадреналнн и ангнотензин глубоких п подкожной вен задней конечности кошки, в результате блокады выделения венозными эндотелпоцитамн факторов расслабления.

2. Блокаторы кальциевых каналов верапашш и нпфедипин приводят к понижению констрпкторных реакций поверхностных и глубоких венозных сосудов задней конечности кошки независимо от функциональной полноценности венозных эндотелиоцитов.

3. Химическая деэндотелизация экзогенным гемоглобином ц физико-химическая этанолом приводит к возвращению констрпкторных реакций изолированной in situ большой подкожной вены задней конечности на норадреналнн и ангнотензин П к исходному уровню, который был до их понижения блокатором кальциевых каналов верапа милом или ннфедиппном.

4. Констрпкторные (норадреналнн, ангнотензин II) реакции поверхностной веиы задней конечности in vivo, также как и в исследованиях на изолированной большой пбдкожной вене, при действии антагониста кальция ннфеднпина понижаются, а при последующем торможении эндотелнальных факторов экзогенным гемоглобином возвращаются к исходному уровню и даже превышают его.

5. Реакции глубоких вен задней конечности кошки, вызванные норадреналпном и ангпотензинном П, при действии антагониста кальция нифедшшна понижаются, но после торможения выделения эндотелнальных факторов этанолом не возвращаются к исходному, до действия блокатора кальциевых каналов, уровню.

6. Феномен возвращения констристорных реакций к исходному уровню (имевшему место до действия блокагоров кальциевых каналов) имеет органную специфичность, то есть проявляется в опытах на подкожной вене задней конечности и не проявляется на глубоких.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пвящепко Т.Ю.. Кудряшов Ю.А. Кальций зависимые и эндотелпйзавпспмые механизмы констрнкторных реакций подкожной вены // Бюлл. Экспер. Бпол. и медицины. - 2009. - № 147(2). - С.127-129

2. Пвящепко Т.Ю.. Кудряшов Ю.А. Роль внеклеточного кальция и эндотелия в проявлении констрикторных реакций изолированной подкожной вены на яорадреналпн // Регионарное кровообр. в мнкроцнркуляцпя. — 2009. - Уи4(32). - С.65-69

3. Цвяшенко Т.Ю.. Кудряшов ЮА Резистивная н емкостная функция подкожной вены в условиях блокада кальциевых и эндотелиальных факторов // Тезисы XXI Съезда Физиолопгческого общества им. ИЛ. Павлова, 2010.С.663

4. Цвяшенко Т.Ю. Особенности констрикторных реакций на норадреналин и анпготензин глубоких и поверхностных вен икроножной мышцы И Санкт-Петербургскне научные чтения - 2009: Материалы Ш Международного молодежного меднютнского конгресса, 2-4 декабря 2009, С.326

5. Цвяшенко Т.Ю. Кальциевые и эндотелиальные механизмы гуморальной адренершческой регуляции резистнвной и ёмкостной функции юолированной подкожной вены // Санкт-Петербургские научные чтения - 2009: Материалы П1 Международного молодежного медицинского конгресса, 2-4 декабря 2009, С.317

6. Ивяшенко Т.Ю. Совместное влияние кальция н эндотелиальных факторов на проявление констрнкторных реакций подкожной вены // Материалы IV всероссийской с международным участием школы-конференции по физиологии кровообращения, 18-19 ноября 2008, С. 101

7. Цвяшенко Т.Ю. Соотношение кальциевых и эндотелиальных факторов в проявлении констрнкторных реакций подкожной вены // Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины: Материалы научно-практической конференции, 16-17 мая 2007 года, С.75-76

Подписано в печать «12» ноября 2010 г. Формат 60x84/16 Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,3. Тираж 100 экз. Заказ №_

Типография « Восстания -1» 191036, Санкт-Петербург, Восстания, 1.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Цвященко, Татьяна Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.ю

1.1 .Морфофункциональные особенности венозных сосудов.ю

1.2.Кальцийзависимые механизмы гуморальной регуляции резистивной и ёмкостной функции органных сосудов.

1.3 Эндотелиальные механизмы регуляции сосудистого тонуса.зо

1.4 Взаимовлияние кальцийзависимых и эндотелийзависимых механизмов регуляции тонуса кровеносных сосудов.

ГЛАВА 2. МЕТОДЫ1 ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 .Метод регистрации динамических изменений сопротивления кровотоку выделенной подкожной вены задней конечности кошек.

2.2.Метод регистрации динамических изменений сопротивления кровотоку большой подкожной вены (in vivo).

2.3 Метод регистрации изменений сопротивления глубоких вен задней конечности кошки.

ГЛАВА 3. ИЗМЕНЕНИЯ СОПРОТИВЛЕНИЯ КРОВОТОКУ И ЕМКОСТИ ИЗОЛИРОВАННОЙ БОЛЬШОЙ ПОДКОЖНОЙ ВЕНЫ ЗАДНЕЙ КОНЕЧНОСТИ В ОТВЕТ НА ДЕЙСТВИЕ НОРАДРЕНАЛИНА И/ИЛИ АНГИОТЕНЗИНА II ПРИ СОЧЕТАННОМ ВЛИЯНИИ ВЕРАПАМИЛА И ДЕЭНДОТЕЛ ИЗ АЦИИ (ЭТАНОЛОМ, ГЕМОГЛОБИНОМ).

ГЛАВА 4. ИЗМЕНЕНИЕ СОПРОТИВЛЕНИЯ КРОВОТОКУ И ЕМКОСТИ ИЗОЛИРОВАННОЙ БОЛЬШОЙ ПОДКОЖНОЙ ВЕНЫ НА НОР АДРЕНАЛИН ПРИ ИНФУЗИИ НИФЕДИПИНА И ПРИ ДЕЭНДОТЕЛИЗАЦИИ ЭТАНОЛОМ И/ИЛИ ГЕМОГЛОБИНОМ'.

ГЛАВА 5. КОНСТИКТОРНЫЕ (НОРАДРЕНАЛИН И АНГИОТЕНЗИН И) РЕАКЦИИ БОЛЬШОЙ ПОДКОЖНОЙ ВЕНЫ ЗАДНЕЙ КОНЕЧНОСТИ in vivo ПРИ ДЕЙСТВИИ АНТАГОНИСТА КАЛЬЦИЯ НИФЕДИПИНА ДО

И ПОСЛЕ ТОРМОЖЕНИЯ ВЫДЕЛЕНИЯ Э1ЩОТЕ Л ИА ЛЬНЫХ ФАКТОРОВ ГЕМОГЛОБИНОМ.

ГЛАВА 6. КОНСТРИКТОРНЫЕ (НОРАДРЕНАЛИН И АНГИОТЕНЗИН II) РЕАКЦИИ ГЛУБОКИХ ВЕН ЗАДНЕЙ КОНЕЧНОСТИ КОШКИ ПРИ ДЕЙСТВИИ АНТАГОНИСТА КАЛЬЦИЯ НИФЕДИПИНА ДО И ПОСЛЕ ТОРМОЖЕНИЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ

ФАКТОРОВ ЭТАНОЛОМ.

ОБСУЖДЕНИЕ, ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Кальцийзависимые и эндотелийзависимые механизмы гуморальных констрикторных реакций венозных сосудов скелетной мускулатуры"

Физиология венозного отдела сердечнососудистой системы имеет относительно небольшую историю. Согласно современным представлениям (Б.И. Ткаченко,1979; Б.И. Ткаченко, Ю.А. Кудряшов, A.B. Самойленко,2000), венозные сосуды предназначены для осуществления двух функций -емкостной и резистивной, первая из которых служит для обеспечения адекватного венозного возврата крови от органов к сердцу, а вторая — для поддержания гидростатического капиллярного давления, одного из показателей обменной функции микрососудов. Малоразработанным направлением исследований в физиологии органного кровообращения является изучение роли кальцийзависимых механизмов в регуляции активных реакций вен на гуморальные раздражители, в реализации резистивной и емкостной функций венозных сосудов. Ведущая роль ионов кальция в реализации как электро-, так и фармакомеханического сопряжения процессов возбуждения и сокращения в гладких мышцах сосудов была показана еще в 1968 г. В работе Somlyo ( Somlyo A.V., Somlyo А.Р., 1968). Вместе с тем большинство исследований, касающихся механизмов регуляции кальциевого обмена в сосудистых миоцитах, выполнено на артериальных сосудах (P.C. Орлов и др., 1971; Bayer -Symposium IX «Cardiovascular Effects of Dihydropyridine-Type Calcium Antagonists and Agonists», 1985; Kim A. Dora et al,2008). Сведения о венозных сосудах в указанных работах практически не представлены, хотя известно (Kudryashov et al, 1989; Torok et al, 1997), что сократительные реакции сегментов брыжеечных вен кролика в большей степени зависят от входа в миоциты ионов кальция, чем сегментов артерий. Многочисленные исследования механизмов транслокации ионов кальция в гладкомышечных клетках проводятся на сегментах крупных артериальных сосудов с использованием веществ, обладающих свойствами блокаторов кальциевых каналов, т.е. ограничивающих вход кальция в клетки и уменьшающих его внутриклеточную концентрацию (Fleckenstein, 1985).

Другим направлением интенсивно развиваемых исследований регуляции венозных сосудов, их реактивности к действию гуморальных стимулов является изучение роли венозного эндотелия. Это направление получило свое развитие начиная с 1980 года после публикации работы R. F. Furchgott и J. V. Zawadzki. Следует отметить, что исследование роли эндотелия в изменениях реактивности кровеносных сосудов к гуморальным воздействиям проводится как правило на сегментах крупных артериальных сосудов и aopTe(Ando Н et al,2006; Mandala et.al, 2007). А исследования на венозных сосудах единичны (Ma J et.al, 2006). В указанном плане проведение исследований на органных венозных сосудах является актуальным.

В настоящее время является актуальным изучение взаимодействия кальциевых и эндотелиальных механизмов, участвующих в изменении реактивности органных венозных сосудов. По данному вопросу имеются лишь единичные работы (Jimenez et.al, 2001) в которых, однако, отсутствует единое мнение по поводу этого взаимодействия. Отмечается, однако, заметное преобладание исследований в пользу наличия такого взаимодействия, вместе с тем и противоположная точка зрения остается значимой. Очевидно, что исследования в указанном плане должны быть направлены на выяснение условий и степени взаимодействия кальциевых и эндотелиальных факторов, зависимости этого взаимодействия и функциональной принадлежности сосудов, включая возможные различия в регуляции тонуса органных венозных сосудов. Большинство исследований, проведены на сегментах и полосках крупных артериальных сосудов и аорты, т.е. в жёстких биохимических условиях, позволяющих производить точный анализ полученных данных, но малорепрезентативны по сравнению с исследованиями в условиях, приближающихся к физиологическим, т.е. при перфузии венозных сосудов аутокровью животного с применением методов динамической регистрации изменений сопротивления кровотоку в венозных сосудах.

Цель исследования. Определение кальцийзависимых и эндотелийзависимых механизмов и их взаимодействия в гуморальной регуляции венозных сосудов скелетной мускулатуры в условиях перфузии аутокровыо животных.

Задачи исследования.

1. Изучить реакции изолированной большой подкожной вены задней конечности кошки в ответ на действие норадреналина и/или ангиотензина П при сочетанном влиянии верапамила и деэндотелизации (этанолом, гемоглобином).

2. Провести исследования сдвигов адренергической (норадреналин) реактивности изолированной подкожной вены при инфузии нифедипина и при деэндотелизации этанолом и гемоглобином

3. Охарактеризовать констрикторные (норадреналин, ангиотензин II) реакции поверхностной вены задней конечности in vivo при действии антагониста кальция нифедипина до и после торможения выделения эндотелиальных факторов гемоглобином.

4. Определить величину констрикторных (норадреналин, ангиотензин II) реакций глубоких вен задней конечности кошки при действии антагониста кальция нифедипина до и после торможения выделения эндотелиальных факторов этанолом.

Научная новизна. Впервые показано, что блокада выделения эндотелиальных факторов вызывает увеличение констрикторных реакций на норадреналин и ангиотензин глубоких и поверхностных вен задней конечности кошки.

Получены новые экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что блокаторы кальциевых каналов верапамил и нифедипин приводят к понижению констрикторных реакций поверхностных и глубоких венозных сосудов задней конечности кошки независимо от функциональной полноценности венозных эндотелиоцитов.

В исследованиях обнаружено, что феномен возвращения констрикторных реакций к исходному уровню (имевшему место до действия блокаторов кальциевых каналов) имеет органную специфичность, то есть имеет место на поверхностных венах задней конечности и не проявляется на глубоких.

Научно - практическая значимость работы. Полученные в процессе работы ранее неизвестные материалы о взаимоотношениях кальциевых и эндотелиальных механизмов в регуляции венозных сосудов скелетной мускулатуры относятся к фундаментальным физиологическим разработкам.

Обнаруженные в работе экспериментальные факты, касающиеся1 кальциевых и эндотелиальных механизмов- изменения реактивности венозных сосудов скелетной мускулатуры могут открыть новые пути поиска превентивных мероприятий и разработку лекарственных средств для коррекции нарушений реактивности периферических вен в результате повреждений венозных миоцитов и эндотелиоцитов.

Установленные в работе закономерности и механизмы регуляции венозного тонуса с участием кальциевых и эндотелиальных факторов при действии гуморальных стимулов и фармакологических средств на вены органов и тканей могут быть использованы в лекционных курсах в ВУЗах медико - биологического профиля, а также в соответствующих пособиях и руководствах.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Блокаторы кальциевых каналов верапамил и нифедипин приводят к понижению констрикторных реакций поверхностных и глубоких венозных сосудов задней конечности кошки независимо от функциональной полноценности венозных эндотелиоцитов.

2. Блокада выделения расслабляющих эндотелиальных факторов экзогенным гемоглобином и/или деэндотелизация этанолом увеличивает констрикторные реакции подкожной и глубоких вен задней конечности кошек на норадреналин и ангиотензин II.

3. Сочетанное влияние повреждающих факторов на венозные эндотелиоциты, то есть химической или физико-химической деэндотелизации на фоне действия антагонистов ^ кальция приводит к возвращению констрикторных реакций подкожной вены задней конечности к исходному уровню, имевшему место до применения» блокаторов кальциевых каналов. Этот феномен не проявляется на глубоких венах.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на заседании Отдела физиологии висцеральных систем НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН; на научно-практической конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (16-17 мая 2007 года г. Санкт-Петербург); на IV всероссийской с международным участием школе-конференции по физиологии кровообращения* (17-19 ноября 2008 г. Москва); на III Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения - 2009» (2-4 декабря 2009 года г. Санкт-Петербург).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 статьи в реферируемых журналах и тезисы 5 докладов.

Личный вклад автора в проведении исследования. Соискателем были проведены: анализ литературы по теме исследования, спланированы и проведены эксперименты, статистически обработаны полученные данные, написание статей и подготовка докладов на конференциях. Морфологические исследования были проведены совместно со с.н.с., к.б.н. Отдела общей и частной морфологии НИИЭМ СЗО РАМН Л.А. Федосихиной.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 168 источников. Работа изложена на 114 страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Цвященко, Татьяна Юрьевна

ВЫВОДЫ

1. Физико - химическая деэндотелизация этанолом и химическая экзогенным гемоглобином приводит к увеличению констрикторных реакций на норадреналин и ангиотензин глубоких и подкожной вен задней конечности кошки, в результате блокады выделения венозными эндотелиоцитами факторов расслабления.

2. Блокаторы кальциевых каналов верапамил и нифедипин приводят к понижению констрикторных реакций поверхностных и глубоких венозных сосудов задней конечности кошки независимо от функциональной полноценности венозных эндотелиоцитов.

3. Химическая деэндотелизация экзогенным гемоглобином и физико-химическая этанолом приводит к возвращению констрикторных реакций изолированной in situ большой подкожной вены задней конечности на норадреналин и ангиотензин II к исходному уровню, который был до их понижения блокатором кальциевых каналов верапамилом или нифедипином.

4. Констрикторные (норадреналин, ангиотензин II) реакции поверхностной вены задней конечности in vivo, также как и в исследованиях на изолированной большой подкожной вене, при действии антагониста кальция нифедипина понижаются, а при последующем торможении эндотелиальных факторов экзогенным гемоглобином возвращаются к исходному уровню и даже превышают его.

5. Реакции глубоких вен задней конечности кошки, вызванные норадреналином и ангиотензинном II, при действии антагониста кальция нифедипина понижаются, но после торможения выделения эндотелиальных факторов этанолом не возвращаются к исходному, до действия блокатора кальциевых каналов, уровню.

6. Феномен возвращения констрикторных реакций к исходному уровню (имевшему место до действия блокаторов кальциевых каналов) имеет органную специфичность, то есть проявляется в опытах на подкожной вене задней конечности и не проявляется на глубоких.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Цвященко, Татьяна Юрьевна, Санкт-Петербург

1. Бернштейн С.А. Дефицит кислорода и сосудистый тонус./ С.А. Бернштейн, М.И.Гуревич, А.И. Соловьев. Киев: Наукова думка, 1984. - 126 с.

2. Частная морфология сосудистого эндотелия. /Бобрик И.И и др.; под.ред. В.В. Куприянова, И.И. Бобрика, Я.Л. Караганова. Киев: Здоровь'я, 1986.- 146-182с.

3. Вальдман В.А. Венозное давление и венозный тонус./В.А. Вальдма. Л.: Медицина,1947. - 240с.

4. Вальдман В.А. Сосудистый тонус./ В.А.Вальдман.- Л.: Медицина, 1960.-326 с.

5. Банков Л.А. Особенности действия некоторых химических раздражителей на сосуды сопротивления и емкостные сосуды /Л.А. Банков //Физиол.Ж.СССР. 1968. - Т. 54, № 9. - С. 1066-1072

6. Власов Т.Д. Системные нарушения микроциркуляции как следствие органной постишемической реперфузии /Т.Д. Власов // Патофизиология микроциркуляции и гемостаза: сб.ст. / под ред.Н.Н.Петрищева. СПб: Изд-во СПбГму им.акад.И.П. Павлова,1998. -С.90-105

7. Габриэлян Э.С. Физиология и фармакология сосудистой стенки / Амроян Э.А., Акопов С.Э. ; Ереван.: Изд-во АН Армянской ССР, 1987. -313 с.

8. Гуревич B.C. Роль ионов кальция в развитии противосудорожного эффекта таурина /B.C. Гуревич, Е.И. Ткаченко, О.Г. Куликова // Бюлл. Эксперим.Биол. Мед. 1980. - 89 - С.418-420

9. Гуревич М.И. Гладкие мышцы сосудов // Руководство по физиологии. Физиология кровообращения. Физиология сосудистой системы / М.И. Гуревич, С.А. Бернштейн./ под.ред. Б.И. Ткаченко. Л., 1994. - гл.5. -С.141-176.

10. Дворецкий Д.П., Поленов С.А. Транскапиллярный обмен веществ // Руководство по физиологии. Физиология кровообращения: Физиология сосудистой системы /Д.П.Дворецкий, С.А. Поленов/Под.ред. Б.И. Ткаченко. — Л.,1994 гл.7. - С.212-218.

11. Дворецкий Д.П. Гемодинамическое сопряжение капиллярного, артериального и венозного давлений в сосудах скелетных мышц / Д.П. Дворецкий, Ю.А. Кудряшов, А.К. Савельев // Физиол.Ж. СССР. 1986. -Т.72, № 7. — С. 926-932

12. Интеграция сосудистых функций / Под ред Б.И.Ткаченко. -Л.Д984. —294 с.

13. Караганов Я.Л./ Я.Л. Караганов, A.A. Миронов, В.А. Миронов, И.Д.Сенатова // в кн.: Сосудистый эндотелий. — Киев: Здоровья, 1986

14. Механика кровообращения / Каро К. и др.. -М.: Мир, 1981. —386с.

15. Козлов В.И. Организация путей микроциркуляторного кровотока // Руководство по физиологии. Физиология кровообращения. Физиология сосудистой системы / В.И. Козлов / Под.ред. Б.И. Ткаченко. Л., 1994 - гл.7. -С.212-218

16. Кудряшов Ю.А. Периферические Механизмы адренергической регуляции емкостных сосудов: автореф.дисс. канд.мед.наук/ Кудряшов Юрий Анатольевич. Ленинград, 1978. - 23с.

17. Кудряшов Ю.А. Реакции артериальных и венозных сосудов скелетной мышцы на норадреналин после повреждения сосудистого эндотелия/Ю.А. Кудряшов, Л.В. Силин, Б.И. Ткаченко и др.авторы //Бюлл. эксп. биол. и мед. 1994. - №9. -С. 315-318.

18. Кудряшов Ю.А. Резистивная функция венозных сосудов и фильтрационно абсорбционные процессы в скелетной мышце /Ю.А. Кудряшов, Б.И. Ткаченко //Физиол. журн. СССР. -1987. - Т.73, № 6. - С. 783-789.

19. Кудряшов Ю.А. Метод регистрации динамических изменений посткапиллярного сопротивления и капиллярного давления в скелетной мышце // Физиол. журнал. СССР. -1988. -Т. 74, вып. 6. - С. 861 -885

20. Кудряшов Ю.А., Маковская В.А., Ткаченко Б.И. Влияние на фильтрационно-абсорбционные процессы в тонком кишечнике изменений кровотока, уровня его артериального и венозного давлений // Физиол.Ж.СССР. — 1993— №79 (7). С. 82-90

21. Кудряшов Ю.А. Резистивная функция венозных сосудов скелетной мышцы // Р. Физиол .Ж. -1998. № 84 (9. - С. 884-891

22. Кудряшов Ю.А., Ткаченко Б. И. Сравнительная характеристика реакций органных венозных сосудов на антигипотензивные и антигипертензивные препараты // Мед.Акад.журн. 2004. - Т.№4. - С.37- 44

23. Кудряшов Ю.А., Табаров М.С., Ткаченко Б.И. Влияние дофамина и нитропруссида натрия на миоциты органных артериальных и венозных сосудов в условиях гипоксии и гипотермии организма // Бюлл.экспер.биол. и мед. — 2002. — №7. — С.27-29

24. Куприянов В. В. Микроциркуляторное русло / В. В. Куприянов, Я. Л. Караганов, В. И. Козлов. М.: Медицина, 1975. - 214 с.

25. Куприянов В.В. Сосудистый эндотелий / В.В. Куприянов, И.И. Бобрик, Я.Л. Караганов // Киев: Здоров'я,- 1986.- 248 с.

26. Конради Г.П. О периферических механизмах поддержания сосудистого тонуса // Бюлл.Экспер. Биол. Мед. 1944. -№17(6). — С.41-44

27. Левтов В.А. Химическая регуляция местного кровообращения Текст. / В .А. Левтов. Л.: Наука, 1967. - 198 с.

28. Лупинская З.А. Эндотелий сосудов основной регулятор местного кровотока // Вестник КРСУ. - 2003. - № 7. - С. 26-35.

29. Мажбич Б.И. Осцилловазометрия артериальных сосудов конечностей./ Б.И. Мажбич. — Новосибирск: «Наука», 1990 — 152 с.

30. Медведева H.A., Шендеров С.М. Эндотелийзависимые реакции сосудов на вазоактивные вещества / Физиология человека и животных / Итоги науки и техники ВИНИТИ. 1989.- Т.38. -С. 3-26.

31. Медведева H.A., Медведев О.С. Фармакология эндотелийзависимых сосудистых реакций // Фармакология и токсилогия. — 1988. — С.92-107

32. Мелландер С. Влияние различных регуляторных систем и вазоактивных веществ на резистивную, обменную и емкостную функцию в скелетной мышце // Труды международного симпозиума по регуляции емкостных сосудов. — 1977. — С. 298-312

33. Оберг Б. Аспекты рефлекторной регуляции емкостных сосудов // Труды международного симпозиума по регуляции емкостных сосудов. -1977.- С.109-120

34. Орлов P.C. Механизмы расслабления гладких мышц сосудов // Актуальные вопросы физиологии кровообращения. — Симферополь: «Таврида», 1980.- С. 117-122

35. Орлов P.C. Механизмы активации сокращения гладкой мускулатуры мозговых сосудов / P.C. Орлов, А.Л. Азин, В.А. Бразговский, A.C. Игнатенко, ИЛ.Плеханов // Физиол.Ж. СССР. 1975. - №61(10). -С. 1458-65

36. Орлов Р.С.Влияние растяжения на сократительные ответы гладкой мускулатуры изолированной вены / P.C. Орлов, C.B. Попов // Физиол.Ж.СССР. 1977. - №67(2). - С.303-312

37. Руководство по физиологии. Физиология кровообращения: Регуляция.кровообращения /под ред. Б.И. Ткаченко. Л.: Наука, 1986. — 482 с.

38. Руководство по физиологии. Физиология кровообращения: Физиология сосудистой системы / под ред. Б.И. Ткаченко. — Л.: Наука, 1984. 528с.

39. Савицкий H.H. Механизмы венозного кровообращения // Физиол.СССР. 1936. - № 21(3). - С.455-460

40. Серебряков В.Н., Такеда К. Ангиотензин II ингибирует L-тип потенциал-управляемого Са2+ -тока в гладкомышечных клетках аорты крысы // Р.Физиол.Ж. 1999. - №85(7): - С.941-947 .

41. Тараненко В.М. Механизмы действия норадреналина и адреналина на гладкомышечные клетки кровеносных сосудов // Успехи физиологических наук. 1975. -№61(1). — С. 32-48

42. Теплов С.И: Гормональные факторы регуляции /С.И. Теплов // Руководство, по физиологии. Физиология кровообращения: Физиология сосудистой системы /под ред. Б.И. Ткаченко. Л.: Наука; 1984. — С.94-110

43. Ткаченко Б.И. Сопряженные функции органного сосудистого русла // Физиол.Ж.СССР. 1986: - № 72(9). - С.1161-1169

44. Ткаченко Б.И.Изучение емкостных сосудов / Б.И. Ткаченко, Г.В. Чернявская // Методы исследования кровообращения. Л.:б.и., 1976. — С.67

45. Ткаченко Б.И. Коэффициент капиллярной фильтрации в скелетных мышцах при изменении в них гидродинамики / Б.И. Ткаченко, Д.П. Дворецкий, Ю.А. Кудряшов, А.К.Савельев, В.А. Демидов, Г.Ф. Султанов // Физиол.Ж.СССР. 1982. -№ 68(2). - С.1666-1672

46. Ткаченко Б.И. Эффективность сочетанного действия вазодилататорных гуморальных стимулов на артериальные и венозные сосуды скелетной мышцы / Б.И. Ткаченко, С.А. Талаш, Ю.А. Кудряшов // Физиол.Ж.СССР. 1990. - №76(2). - С. 213-218

47. Ткаченко Б.И. Роль венозных сосудов в органной и системной гемодинамике / Б.И. Ткаченко, Ю.А. Кудряшов, А.В. Самойленко // Институт экспериментальной медицины на рубеже тысячелетий. Спб.: Наука, 2000. -С.112-129

48. Чернух A.M. Особенности венозного звена микроциркуляторной системы /A.M. Чернух // Труды международного симпозиума по регуляции емкостных сосудов. 1977. - С.19-35

49. Шаповалов А.Н. Термомеханические и механохимические свойства коллагена и немышечных компонентов сосудистого тонуса /А.Н. Шаповалов// Тезисы докладов VI Всесоюзной конференции по биохимии мышц / Тбилиси, 1989. С.256-258

50. Шаповалов А.Н. Влияние температуры на оптические и механические свойства гладких мышц / А.Н. Шаповалов, М.Ф.Шуба, В.И. Мирутенко // Доклады АН СССР. 1989 . - С.748-753

51. Шуба М.Ф. Физиология гладких мышц /М.Ф. Шуба, Н.Г. Кочемасова. — Киев.: «Наукова думка», 1988. 157с.

52. Шуба М.Ф. Механизмы возбуждения и сокращения гладких мышц мозговых сосудов /М.Ф. Шуба, Н.И. Гокина, А.В. Туровская. — Киев.: «Наукова думка», 1990. 196с.

53. Удельнов М.Г. О соотношении между вазомоторными реакциями на нервное воздействие и норадреналин / М.Г. Удельнов, В.П. Кулагина // Бюлл. Экспер. Биол. и Мед. 1970. - №69 (4). - С.11-21

54. Цирульников В.А. Взаимоотношение между основными показателями гемодинамики и периферическим сопротивлением отдельных сосудистых областей на введение норадреналин 7/ Физиол.Ж.СССР. — 1966. — №12(4). С.489-495

55. Adelstein R.S., Sellers J.R. Effects of calcium on vascular smooth muscle contraction //American Jornal of Cardiology. — 1987. — V. 59(3). P.4-10

56. Ahquist R.P. A study of adrenotropic receptors // Amer.J.Physiol. — 1948.-V. 153(3).-P. 586-600

57. Altura B.M. Chemical and humoral regulation of blood flow through precapillary sphincter // Microvasc.Res. 1971. - V. 3(4). — P.361-384

58. Angus J.A. Sympathetic vasoconstriction no control for — adrenoreceptors // TIPS. - 1982. - P. 64-465

59. Ando H., Nakanishi K., Shibata M., Hasegawa K. et al. Benidipin, a dihydropyridin-Ca channel blocker, increases the endothelial differentiation of endothelial cells in vitro //Hypernens Res. -2006.- Vol. 29 (12). -P. 1047-1054.

60. Ariens E.J. Classification of beta-adrenoreceptors //TIPS. -1981. V. 2(7).-P. 170-172

61. Arner M. Action of some vasidilatator on isolated human hand veins // Acta Physiologica Scandinavica. 1987. - V. 130(4). -P.671-677

62. Attinger E.O. Wall proprieties of veins.// IEEB Trans. Bio-Med.Eng. -1969. — V.16(4). -P.253-261

63. Azuma T., Hasegawa Distensibility of vein: from the architectural point of view.// Biorheology. 1973. - V. 10(3). - P. 469-479

64. Backer C.Hi Blood flow and volume distribution with elevated venous pressure.//Amer.J.Physiol. 1970. - V.218(3). - P.674-680

65. Bancroft F.W. Venomotor nerves to the hind limb.// Amer J.Physiol. -1989.-V. 1. — P.477-485

66. Bassenge E. Endothelial function in different organs./ZProgress, in Cardiovascular Diseases. 1996. - V.39(3). - P.209-28

67. Batova S., DeWever J., Godfraind T., Balligand JL. et ali The calcium channel blocker amlodipine promotes the unclamping of eNOS from« caveolin in endothelial cells // Cardovasc.Res.,-2006. Vol. -71 (3).- P. 478-485.

68. Benjamin N., Collier J.G., Webb DJ. Angiotensin. II augments sympathetically induced venoconstriction in man.// Clinocal Science. — 1988. V. 75(4). — P.337-40

69. Bolton T.B. Calcium metabolism in vascular smoth muscle.//British Medical Bulletin. .-1986. V. 42(4).- P.421-429

70. Buluc M., Demirel — Yilmaz E. Resveratrol decreases calcium sensitivity of vascular smooth muscle and enhances cytosolic calcium increase in endothelium // Vase. Pharmacol. -2006.- Vol. 44(4).- P. 231-237.

71. Cohen RA., Adachi T. Nitric-oxide- induced vasodilatation: regulation by physiologic s-glutathiolation and pathologic oxidation of the sarcoplasmic endoplasmic reticulum calcium ATPase // Trends Cardivasc.Med.-2006. -Vol. 16(4).-P. 109-114.

72. Cauvin C., Saida K., van Breemen C. Extracellular Ca dependence and diltiazem inhibition of contraction in rabbit conduit arteries and mesenteric resistance vessels.// Blood Vessels. 1984. - V. 21(1).- P.23-31

73. Cohen M.L., Wiley K.S.,Furst R.H. Effects of the ionofore A 23187 on contraction and dilatation of rat arteries and veins.// Proc. Soc. Exper. Biol, and Med. 1978. - V. 159(3). -P.353-358

74. Cohen D.M., Murphy R.A. Cellular thin filamentsprotein contents and force generation in porcine arteries and veins.// Circulation Research.-1984. -V.45(5). —P.661-665.

75. Cooper K.E. Functional aspects of the venous system in structure and function of the circulation volume. NY, Plenum, 1981.

76. Crelewski J.P., Botting R., Vane J. Mediators produced by the endothelial cell.//Hypertension. 1988. -V. 12. -P.530-548

77. Davies R.E. A molecular theory of contraction: Calcium dependent contractions with hydrogen bon formation, plus ATP-dependent extensions of part of the myosin-actin crossbriges.// Nature. — 1963. V.51.- P.217:529

78. Debbas G., Hoffman L., Landon E.J., Hurwitz L.Electron microscopic localization of calcium in vascular smooth muscle.//AnatomicalrRecord. — 1975. -V.182(4). — P.447-71

79. Devine C.E., Somlyo A.V., Somlyo A.P. Sarcoplasmatic reticulum-and excitation contracrion coupling in mammalian smooth-muscle.//J.Cell Biol. — 1972.-V. 52. -P.690-6991

80. Diana J.N., Shadur C.A. Effects of arterial* and venous pressure on capillary pressure and vascular volume.// Amer.J. Physiol*. 1973. — V.225. -P.627-650

81. Droogmans G., Raeymackers L., Castls R. Electro and pharmacomehcanical coupling in smooth muscle cells of rabbit ear artery.// J.Gen.Physiol. 1977. - V.70(2). - P. 129-148

82. Dong YY., Wu M.,Yim AP.,He GW. Effect of hypoxia-reoxygenation on endothelial function in cardiac micriveins //The Annals of Thoracic Surgery. -1996.- Vol.81. №5.-P.1708-1714

83. Ekelund U., Albert U., EdvinssonL., Mellander S. In-vivo effects of endothelin-1 and ETA receptor blockade on arterial, venous and capillary functions in skeletal muscule.//ActaPhys. Scandinavica. 1993. - V.148(3). -P.273-83

84. Ekelund: U. In vivo effects of endothelin-2, endothelin-3 and ETA receptor blockade on arterial, venous and capillary functions in cat skeletal muscle.// Acta Phys. Scandinavica. 1994. - V. 150(1). - P.47-56

85. Eliassen E., Folkow B., Hilton S., Oberg S. Isovolumetric capillary pressure and compliance characteristics of the interatitial fluid' space in skeletal muscle.// Acta Phys. Scandinavica. — 1973. -V. 87. -P.52-60

86. Fleckenstein A. Calcium antagonists and1 calcium agonists: Fundamental, criteria and classification. Bauer-Symp.IX, Cardiovascular effects of dyhydropyridine-type, Calcium agonists and antagonists.Springer-Verlag BerlinHeidelberg, 1985. -P.3-31

87. Folkow B., Neil E. Circuation. NY, London, Toronto, 1971. 236p.

88. Folkow B. Intravascular pressure as a factor regulating the tone of the small'vessels// Acta PhysioI.Scand.-1949.-Vol 17.№ 3.- P.289-G 10

89. Folkow B. Regulation of the peripheral circulation // Rit.Heart J.-1971.-Suppl.33- P.27-31

90. Franco-Obergon, A. Lopez-Barneo J. Low PO2 inhibits calcium channel activity in arterial smooth muscle cells.// AmerJ. Physiol. — 1996. — V. 271(6). -P.H2290-9

91. Freer R.J. Calcium* and angiotensin tachyphylaxos in rat uterine smooth muscle.// Amer.J. Physiol/ 1975. - V. 228(5). - P.1423-1430

92. Fujioka M. Lack of causal relationship between the vasodilatator effect of papaverine and cyclic AMP production in the dog basilar artery.//British J. of Pharmacol. 1984. - V.83. - P. 113-124

93. Furchgott R.F., Zawadzki J.V. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation, of arterial smooth muscle by acethylcholin//Nature. -1980.-Vol;298. -P. 373-376

94. Furchgott R.F., Carvalho M.H., Khan M.T., Matsunaga K. Evidence of endothelium-dependent vasodilatation of resistsnce vessels by acetylcholine.// Blood vessels. 1987. - V. 24. - P. 154-149

95. Geary G.G., Osol GL., Longo LD. Development affects in vitro vascular tone calcium sensitivity in ovine cerebral arteries // J. Physiol.-2004.-Vol.558 (3).-P. 883-896.

96. Golenhofen K. Proceedings: Electrical activity and calcium activation in vascular smooth muscle.// Arzneimittel- Forschung. 1975. - V. 25(10). -PI 666

97. Gokina N1., Goecks T. Upregulation of endothelial cells Ca signaling contributes to pregnancy-enhanced vasodilatation of rat uteroplacenal arteries // Am.J. Physiol. Heart Circ. Physiol. -2006.- Vol. 290 (5).- H124-135.

98. Grande P.O., Mellander S. Beta-adrenergic inhibitory interference with myogenic vascular reactivity during experimental intervention.// Acta Phys. Scandinavica. 1979. -V. 160(1). - P.87-89

99. Green H.D., Ottis K., Kitchen T. Automatic stimulation and blockade on canine spleniv inflow, outflow, and weight.// Amer.J. Physiol. — 1984. -P.351:13-24

100. Guimaraes S. Futher study of the adrenoreceptors of the saphenous vein of the dog: influence of factors which interfere with the concentration of agonists at the receptor level.// European J. of Pharmacology. — 1975. — V. 34(1). -P. 9-19

101. Harshorne D.J., Mrwa U. Regulation of smooth muscle actomyosin.// Bloodvessels. 1982. -V. 19(1). - P. 1-18

102. Hirata M., Mikewa T., Nonomura Y., Ebashi S. Ca2+ regulation in vascular smooth muscle.//J. Biochem. 1980. - V:87(2). - P.369-78

103. Hiromichi Takato, Kim A.Dora, Michaela M. Spitaler and Chris J. Garland. Spreading dilatation in rat mesenteric arteries associated with calcium-independ endothelial cell hyperpolarization // J.Physiol. -2004.- Vol.556 (3).-P.887-903.

104. Hughes A.D. Calcium channels in vascular smooth muscle cells //J. Vase. Res. 1995. - V.32(6). - P.353-70

105. Jayakody R.L., Kappagoda C.T., Senerathe M.P.J., Sreeharan N. Absence of effect of calcium antagonists on endothelium-dependent relaxation in rabbit aorta // Br. J. Pharmac.- 1987. -Vol. 91. -P.155-164

106. Jimenez A., Arriero MM., Lopez-Blaya A., Gonzalez- Fernandez F. et al. Regulation of endothelial nitric oxide synthase expression in the vascular wall and in mononuclear cells from hypercholesterolemic rabbits // Circ. -2001. -Vol. 104.- P. 1822-1831

107. Kim A. Dora, Nicola T. Gallagher, Alister McNeish and Christopher J. Garland. Modulation of endothelial cell KCa 3.1 channels during EDHF signaling in mesenteric resistance arteries // Circ.Res.- 2008. -Vol. 102. -P. 12471255.

108. Kim A. Dora, Doyle M.P., Duling B.R. Elevation of intracellular calcium in smooth muscle causes endothelial cell generation of NO on arterioles // Proc.Natl.Acad.Sci USA.- 1997. -Vol. 94.- P.6529-6534.

109. Kudryashov Yu.A., Torok J., Tkachenko B.I. Comprasion of the diltiazem effects on contraction of rabbit mesenteric artery and vein.// Physiol. Bohemoslov. 1989. - V.58. - P.371

110. Kunos G., Srentivanyi M. Evidence of existing unitary adrenergic receptor.//Nature. 1968. - V.218(5133). - P. 1077-1078

111. Lands A.M., Arnold A., McAuliff J.P., Laduena F.P., Brown T.G. The beta adrenergic receptors subtype.// Nature. 1967. - V. 214. - P.57-67,

112. Landis E.M., Pappenheimer J.R., Exchange of substances through the capillary walls./In: Handbook of physiology, BaltimoreiWilliams Wilking Co., 1963. - Vol.11, sect.2.-P.961-1034

113. Langer S.Z., Shepperson N.B. Recent development in vascular smooth muscle pharmacology:the post-synsptic alpha-2-adrenoreceptors.//TIPS. -1982. V.3(l 1). - P.441-444

114. Lefcowitz R.J., Hoffman B.B. New directions in adrenergic receptor research.//TIPS. 1980. - V. 1(13). - P.369-372

115. Lipe S., Moulds R.F. Comparison of the effects of endrallazine, hydralazine and verapamil on human isolated arteries and veins.// Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 1980. - V. 9(6). - P.613-20

116. Mandala M., Heppner TJ., Bonev AD., Nelson MT. Effect of endogenous nitric oxide on calcium sparks as targets for vasodilatation in rat cerebral artery //Nitric Oxide-. 2007. -Vol. 16.№ 1.- P. 104-109.

117. Mellader S. Comparative studies on the adrenergic neurohormonal of resistance and capacitance blood vessel pressure in cat.//Acta Physiol. Scand.-1960. —V.50(suppl. 176). -P. 1-98

118. Mellander S., Bjornberg J., Maspers M., Myrhage R. Method* for continuous recording of hydrostatic exchange vessel pressure in cat skeletal muscle.// Physiol. Scand. 1987. - V. 129(3). -P.325-35

119. Miller V.M., Reigel M.M., Hollier L.H., Vanhoutte P.M. Endothelium-dependent responses in autogenous femoral veins grafted into the arterial circulation of the dog.//J. of Clinical Investigation. 1987. - V.80(5). -P.1350-7

120. Movession M. Calcium physiology in smooth muscle //Progress in Cardiovascular Diseases. 1982 25(3):211-224

121. Nahorski S.R. Identification and significance of beta-adrenoreceptor subtypes //TIPS. 1981. -V. 2(4). - P.95-98

122. Nicoll P.A., Webb R.L. Vascular patterns and active vasomotion as determiners 3a flow through minute vessels // Angiology. 1955. - V. 6. - P.291-308

123. Noboru Toda, Tomio Okamura. Cerebral Vasodilators // Jpn. J. Pharmacol. 1998. - V.76. - P. 349-367

124. Oberg B. Overall cardiovascular regulation //Ann. Rev.,Physiol. -1976.- V. 38.-P.357-370

125. Orlov S.N., Aksenstev S.L., Pokudin N.L, Tremblay J., Hamet P. Na+/H+ echange in vascular smooth muscle cells is controlled by GTP-binding proteins.//Hypertension. 1998. - V. 3 l(lPt 2). - P.259-65

126. Olah M.E. , Rahwan R.G. Differential effects of calcium channel blockade and intracellular calcium antagonism on endothelium-dependent responses of the rat aorta to drugs // Pharmacology. -1988.- Vol. 37.-P 305-320

127. Oshima Tetsuya, Ryoji Ozono, Yoko Yano, Yukihito Higashi et.al. Beneficial effect of T-type calcium channel blockers on endothelial function in patients with essential hypertension // Hypertens res. -2005. -Vol. 28.- P. 889-894.

128. Owen N.E., Ridge K.M. Effects of angiotensine II on Na-K-Cl cotransport of vascular smooth muscle cells // J. Gen.Physiol. — 1988. — V.92.N6. -P.49a-50a

129. Pals D.T., Fulton R.W. Interrelationship between angiotensine and vascular alpha-adrenergic receptors //Amer.J. Physiol. — 1968. — V.214(3). -P.516-512

130. Pawolski J.R.,Chapnick B.M. Leukotriens C4 and D4 are potent endothelium dependent relaxing agents in canine splanchic venous capacitance vessels //Circulation Research. 1993. - V.73(2). - P. 395-404o j

131. Perusquia M., Villalon CM. Possible role of Ca channels in the vasodilating effect of beta dihydrotestosterone in rat aorta // Eur. J. Pharmacol.-1999.-Vol. 371.-P. 169-178

132. Regoli D. Receptors for angiotensin: A critical analyse.// Canadian J. of Physiol. And Pharmacology. 1979. - V. 57(2). - P. 129-139

133. Reid J.L. Alpha-adrenergic receptors and blood pressure control // Amer. J. of Cardiology. 1986. - V. 57(9). - P.6E-12E

134. Reuter H., Beeler G.W. Calcium current and activation of contraction in ventricular myocardium fibres // Science. — 1969.' — V. 162. — P.399-401

135. Rice A.J. Localisation of venoconstrictor responses.// J. Pharmac. Exp. Ther. 1966. - V.205(5 Pt 2). - P.H706-H710

136. Rowell L.B. Human cardiovascular control. NY: Oxford university press, 1993.-376 p.

137. Robinson B.F. Functional differences in blood vessels determined from studies with calcium channel blockers. Functional changes in forearm resistance vessels of men with primary hypertension // Amer. J. of Card. — 1985. — V. 55(3). — P.24B-29B

138. Samuelson U.E., Jernbeck J. Calcitonin generelatea peptide relax porcine arteries via one endothelium-dependent and one endothelium-independent mechanism//Acta Physiol. Scand. -1991. -Vol. 141.-P. 281-282.

139. Sankaralingam S., Desai KM., Wilson TW. Clofibrate acutely reverses sakine-induced endothelial dysfunction: role of calcium- activated potassium channels // Am.J.Hypertens. -2006.- Vol. 19(11). -P. 1167-73

140. Schuh K., Quaschning T., Knauer S., Hu K. et al. Regulation of vascular tone in animals overexpressing the sarcolemmal calcium pump // J.Biol.Chem. -2003. -Vol.278.,№ 42. -P. 41246-41252.

141. Sheperd J.T., Vanhoutte P.M. Veins and their control. London -Phyladelphia, Sannders Press, 1975. 386 p.

142. Somlyo A.V., Somlyo A.P. Electromechanical and pharmacomechanical coupling in vascular smooth muscle.// J. of Pharm. and Experimental Ther.-1968. V.159. -P.129-145

143. Sorop O., Bakker EM., Pistea A., Spaan JA. Et al. Calcium channel blockade prevents pressure-depend inward remodeling in isolated subendocardial resistance vessels // Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol. -2006.- Vol. 291 (3). -P.H1236-1245.

144. Stephens N.L.Smooth muscle contraction. NY, Basel:Marcel Dekker INC, 1984

145. Su C., Bevan J.A. Electrical and mechanical responses of pulmonary artery muscle to neural and chemical stimulation.// Bibl. Anat. — 1966. V.8. — P 25-6

146. Tabrizchi R., Pang C.C. Are angiotensin receptors in vascular smoothmuscle a homogeneous population? // European J. of Pharmacology. — 1987. — V. 142(3).-P.359-66

147. Teubl Margo, Klaus Groschner, Sepp D. Kohlwein, Bernd Mayer et.al. Na+/Ca2+ Exchange facilitates Ca2+ dependent activation of endothelial nitric - oxide synthase // J. Biol.Chem. 1999. Vol.274, №41. P. 29529-29535

148. Thayer S.A., Stein L., Fairhurst A.S. Endogenous modulator ofiLcalcium channels. (9 Internat. Congr. Pharmacol.,London).//Blood vessels. -1984. — V.19. -P.6

149. Thulesius 0., Biland., Gjores J.E., Berlin E. Uber die bedeuting von venosen a-and b-rezeptoren // Phleb. Und Proctol. 1980. - V.9(l). -P.15-18

150. Thulesius G.,Ugaily-Thulesius L., Neglen P., Shuhaiber H. The role of the endothelium in the control of venous tone: studies on isolated human veins //Clinical Physiology. 1988. - V. 8(4). - P.359-66

151. Tkachenko B.I.,Kudryashov Yu.A. Direct recording: of postcapillaiy resistance in cat; skeletal muscle:measurement in the presence of humoral stimul.Biomed.Sci.- 1991.- V.2(l). -P.33-37.

152. Vanhoutte P.M. Endothelium-dependent contractions, in arteries and veins // Blood vessels.-1987.-Vol. 24.-P. 141-144

153. Wang X., van Breemen C. Multiple mechanisms of activating Ca2+ entry in freshly isolated rabbit aortic endothelial cells // J.Vasc.Res. -1997. -Vol. 34(3).- P. 196-207. .

154. Warner T.D. Simultaneous perfusion, of rat isolated; superior mesenteric arterial and; venous beds: comparison' of their vasoconstrictor and vasodilatator responses to agonists // British J. of Pharmac. 1990. V.99(2): -P.427-433

155. Webb-Peploe M.M., Shepherd J.T. Beta-receptor mechanism in the superficial limb veins of the dog // J. of Clinical Investigation. 1969. - V. 48(3). — P.1328-1335