Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА КУЛЬТУРЫ ТКАНИ ДЛЯ ОЗДОРОВЛЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ ОТ БАКТЕРИОЗОВ И ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ К НИМ

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА КУЛЬТУРЫ ТКАНИ ДЛЯ ОЗДОРОВЛЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ ОТ БАКТЕРИОЗОВ И ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ К НИМ"

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА Н ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ нмеин К. А. ТИМИРЯЗЕВА

На правах рукописи ЧЕРВОНЮК Галина Николаевна

УДК 635.21 :581.143.6

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА КУЛЬТУРЫ ТКАНИ ДЛЯ ОЗДОРОВЛЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ ОТ БАКТЕРИОЗОВ И ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ к ним

Фитопатология и защита растений — 06.01,11

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА— 1984

Работа выполнена в отделе защиты картофеля от болезней и вредителей Научно-исследовательского института картофельного хозяйства.

Научные руководители — доктор биологических наук, профессор Ю. И. Ш ней дер, доктор сельскохозяйственных наук Л. Н. Трофнмец,

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Проценко А. Е„ кандидат биологических наук, младший научный сотрудник Джалнлов Ф. С.-У.

Ведущее учреждение — Белорусский научно-исследовательский институт плодоводства, овощеводства и картофелеводства.

Защита состоится ..... 1984 г,

в «^¡С^гас. на заседании Специализированного совета К 120.35.03 в Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева.

Адрес: 127550, Москва И-550, ул. Тимирязевская, 49, Ученый совет ТСХА.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ^ТСХА.

Ученый секретарь Специализированного совета — доцент _ „

Н. К. Торянекая.

получено 17 тыс. оздоровленных исходных клубней, использованных в лаборатории первичного семеноводства ОПХ «Заворово» с целью получения семенного картофеля.

Оценено 59 сортов и гибридов картофеля на устойчивость к бактериозам разработанными методами оценкн, из них 12 с повышенной устойчивостью переданы отделу селекции НИИКХ для использования в качестве доноров устойчивости к бактериозам.

В лаборатории клеточной селекции НИИКХ для отбора устойчивых к кольцевой пшли клеточных клонов используется экзотоксин, выделенный из культуральной жидкости Cor. sepedón ¡cum.

Полученные патогенные штаммы возбудителя кольцевой гнили переданы в коллекцию фитопатогенных штаммов отдела защиты НИИКХ к используются при оценке селекционного материала на устойчивость. Штаммы 4811, 4824, 4835 переданы в лабораторию по производству диагностических сывороток. Приготовленная на их основе антибактериальная сыворотка к кольцевой гнили использовалась в системе НИИКХ и других научно-исследовательских учреждениях страны..

Апробация. Результаты исследований доложены на четвертом Всесоюзном совещании о состоянии и перспективах развития научных исследований но предотвращению резистентности у вредителей и возбудителей болезней к пестицидам и разработке эффективных мер борьбы с бактериальными болезнями (Ереван, 1980); на первой Всесоюзной конференции по иммунитету растений (Ленинград, 1981). Методики лабораторной оценки устойчивости картофеля к бактериозам на растениях in vitro рассмотрены и утверждены для практического использования в селекционном процессе на Координационном совещании по решению научно-технической проблемы 0.51.17 (Москва, январь, 1984).

Публикации, По теме исследований опубликовано четыре печатных работы. w

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 140 страницах машинописного текста, состоит из введения, пяти глав, выводов п практических предложений. Содержит 23 таблицы, 14 рисунков, 14 приложений. Список литературы включает 249 источников, в том числе 94 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В главе 1 — «Обзор литературы» — проанализированы основные результаты работ отечественных к зарубежных авторов по изучению возбудителей кольцевой гнили и черной нож-

kit, патогенеза болезней, источников ннфекшш и путей передачи, существующих способои оздоровления картофеля в первичном семеноводстве, природы устойчивости картофеля к бактериозам и методов ее оценки. На основании критического обзора литературы сформулированы задачи исследований.

Глава П. «Материал, общие методики и условия проведения исследований». Работу проводили в отделе защиты картофеля от болезней и вредителей НИИ картофельного хозяйства путем постановки лабораторных, вегетационных и полевых ОПЫТОВ.

Обследования посадок картофеля со сбором образцов проводили на полях ОПХ «Коренево», а пораженные клубни собирали в совхозах и колхозах Московской области при проведении клубневых анализов.

Получение чистых культур возбудителей бактериозов проводили по общепринятой методике (Бельтюкова и др., 1968).

Патогенные свойства бактерии вида Corynebacterium sepe-donicum изучались путем искусственного заражения клубней восприимчивых сортов лабораторным и полевым, методами, а у вида Pectobacterium phytophthorum — методом заражения ломтиков клубней (Шнейдер, 1968).

Идентификация выделенных возбудителей проводилась серологическим методом, а также путем изучения морфологических, культур ал ьных, физнолого-биохимическнх свойств с последующим определением их по специальной литературе (Бургвиц, 1935, 1936; Красильников, 1949; Elliott, 1951; Вег-gey, 1957, 1975; Мурзакова, 1966; Бактериальные болезни растений, под ред. В. П. Израильского, 1968),

Получение токсина, продуцируемого бактериями Cor, se-pedonicum, проводили по методике Стробела и Рея (Strobel, Rai. 1968).

Регенерация и зарядка ионообменных смол проводилась по общепринятым методикам (Миура, Хаяшн, 1970; Хори, 1970).

Внутреннюю зараженность тканей выявляли микробиологическим, серологическим н электронномикроскопнческнм методами (Бельтюкова и др., 1968; Шнейдер, Трофнмец, 1969).

Вычленение меристем, размножение регеиерантов черенкованием, пересадка в ночву проводилась по общепринятым методикам (Трофимец и др., 1976).

Устойчивость сортов картофеля к кольцевой гнили определялась полевым, к черной ножке — лабораторным методами (Шнейдер. 1970).

В главе III представлены данные по выделению в чистую культуру и изучению патогенных штаммов возбудителей черной ножки и кольцевой гнили.

Из 240 клубней и ростков, пораженных кольцевой гнилью,

выделено 175 штаммов возбудителя. Предварительная идентификация была проведена серологическим методом. При изучении патогенности полевым и лабораторным методами были отобраны для дальнейшей работы штаммы 4812, 4824, 4835 как наиболее патогенные. У 34-х штаммов изучены подробно морфологические, культуральные и физнолого-бнохимн-ческие свойства. Показана их принадлежность к виду Согупе-bocterium sepedonicum (SpiecUermatin et Kotthoff) Skaptasoti ei BurkhoUler.

Одним из факторов патогенеза при кольцевой гнили является выделяемый бактериями токсин. Экзотоксин получали по методике Стробела и Рея (1968). Выделенная многокомпонентная фракция представляет собой светлый кристаллический порошок без запаха, хорошо растворимый в воде. Для изучения действия токсина стебли растений в культуре in vitro срезали у основания и ставили в сосуды с раствором, погружая их на треть высоты. Исследовали концентрации 40, 20 и 10 мг/мл. Контролем служил раствор порошка, полученный по той же методике из жидкой питательной среды без выращивания бактерий. Работа проводилась на сортах, контрастных по устойчивости к кольцевой гнили: Смысловский — относительно устойчивый. Янтарный, Огонек — восприимчивые. Через четыре часа погруженные участки стеблей теряли тургор, диаметр стеблей уменьшался вдвое. Через сутки вся часть стебля, находящаяся в растворе токсина, имела обезвоженный вид. Верхушки растений увядали. В контроле растения остались без изменения. При исследовании концентрации токсина ниже 10 мг/мл эффект обезвоживания тканей отсутствовал. В расширенном опыте при использовании концентрации 10 мг/мл не было получено различий в скорости обезвоживания тканей стеблей в зависимости от устойчивости сортов.

В группе клеточной селекции НИИКХ с использованием выделенного токсина в искусственных средах для пассирования клеточных суспензий из клеточных клонов получено 96 ре-генерантов по сорту Ульяновский и 2 регенеранта по сорту Любимец.

Возбудителя черной ножки выделяли из пораженных клубней п стеблей. Из 16 образков выделено 7 штаммов бактерии, которые по комплексу признаков отнесены к виду Pcctobacterium phytophthorum (Appel) Waldce. Помимо этих штаммов в работе использовались коллекционные штаммы 34 н 3G84. При подробном изучении была получена характеристика, совпадающая с описанной другими исследователями,

В главе IV приведены данные по изучению распространения фитопатогенных бактерий по растению картофеля, выра-

щенном из Сольных клубней, и оздоровлению сортов и гибридов от бактериозов методом верхушечной меристемы.

На первом этапе было проведено изучение проникновения бактерий Cor. sepedonicum из клубней в образующиеся стебли в поле. В 1977 г. высадили 17 сортов и гибридов с сильным поражением кольцевой гнилью. У каждого из образцов зараженность стеблей исследовали анализом одного стебля от четырех кустов отдельно на 26 день после посадки. Для анализа вырезались участки длиной в 1 см с верхушки н у основания стеблей. Установлено наличие бактерий Cor. sepedonicum в верхушечной части у 76,5% образцов микробиологн-ским методом. В тех же стеблях серологический анализ участков у основания стеблей не показал наличия возбудителей.' По нашему мнению, это вызвано тем, что концентрация возбудителя кольцевой гнили в тканях стеблей в ранний период вегетации невелика. Вследствие этого серологический метод оказался неэффективным в связи с недостаточной чувствительностью.

В аналогичном опыте было высажено пять гибридов с сильным поражением кольцевой гнилью. Для анализа была взята общая средняя проба, состоящая из отрезков оснований стеблей в кусте при появлении первых всходов (через 17 дней после посадки) и в последующие два срока с промежутками в пять дней. Определение зараженности проводил» микробиологическим методом. Во всех исследуемых образ-, цах установлено наличие бактерий Cor. sepedonicum.

Следовательно, возбудитель кольцевой гнили из клубней, в сильной степени пораженных этим бактериозом, перемешается по стеблю по мерс его роста. Благодаря этим исследованиям показано, что невозможно полностью оздоровить материал от кольцевой гнили укоренением крупных верхушек растений картофеля. Поэтому были проведены дополнительные исследования с целью выявления зон растений картофеля, свободных от фптопатогенных бактерий.

Изучение передвижения бактерий в ростках (до 1,5 см длиной), образующихся на клубнях с сильным поражением кольцевой гнилью, проводилось следующим образом. Начиная от верхушки, ростки разрезали на диски толщиной в 1 мм. Зараженность отделенных участков изучали микробиологическим методом. В результате было установлено, что бактерии кольцевой гнили встречаются почти по всей длине ростков, за исключением 66,6% образцов, у которых верхушечная зона размером 1 мм была свободна от бактерий. Остальные образцы содержали возбудителя и в этой зоне.

Результаты подробных исследований зараженности зон верхушечных почек ростков размером до 1 мм представлены в таблице 1. 6

Таблица I

Наличие бактерий Cor. sepedonlcum в верхушечных почках ростков картофеля, сильно пораженного кольцевой гнилью

Размер вычлененных почек (мкм±25 мкм)

300 400 воо 600 700 800 000 1000

Вычленено но-

чек, штук 31 28 32 17 22 19 12 19

Из пил зараже- 1

но, штук 0 0 I 1 * •1 5

, % 0 0 3,1 5,9 9.1 5.3 33,3 26,3

Бактерии — возбудители кольцевой гнили не обнаруживаются в верхушечных почках размером 300 н 400-мкм. С увеличением размера вычлененных почек более указанных размеров зараженность их прогрессивно возрастает.

Следовательно, для оздоровления материала картофеля от кольцевой гнил» необходимо вычленять меристематиче-ские участки размером не более 400 мкм.

Нами проведены специальные исследования по комплексному оздоровлению различных сортов и гнбрндой, картофеля от вирусных и бактериальных болезней. Вычленение меристем проводили из ростков клубней с сильным поражением кольцевой гнилью (табл. 2).

Всего из ростков, отделенных от клубней 16 сортов и гибридов с кольцевой гнилью, вычленено 580 меристем размером от 50 до 300 мкм. Из них прижилось 33,8%. Процент

Таблица 2

Получение здоровых растений сортов и гибридов картофеля при вычленении меристем из ростков клубней с кольцевой гнилью

Сорт, гибрид з . п о 2 § & 8 % в £0 в- s Из них прижилось Образ«, валось проростков Из них содержат

штук % штук % бактерии вирусы

61—16 ....... 15 ъ 13,3 1 50 0 0

47—6 . ...... 29 17 58,6 2 12 0 50

47—17 ....... 46 9 19,5 3 33.3 0 33.3

Екатерининский . , 40 9 оо о 1 и 0 100

7160........ 80 36 45.0 3 8 0 33.3

45—1....... 60 23 38,3 1 4 0 0

124— II....... 100 48 48,0 3 6 0 33,3

прижившихся меристем для разных сортов и гибридов различается. Наибольшая выживаемость наблюдалась у меристем гибридов 47-6, 124-11, 7160.

Лишь часть прижившихся меристем (7,1%) образовала проростки, которые появились через 5—8 месяцев после вы-членення. Выход проростков зависит от сортовых особенностей. Полученные таким образом 14 регенерантов семи сортов и гибридов не содержали возбудителей бактериозов. Девять из них были свободны и от вирусной инфекции. Определение зараженности полученных линий проводили электрон-номнкроскопическим, серологическим и микробиологическим методами. Наиболее эффективным оказался метод электронного мнкроскопнровання. С его помощью было установлено наличие вирусов в тканях пяти регенерантов, которые не были выявлены другими методами.

Здоровые растения исследовались нами на зараженность в течение трех поколений с использованием мер, предотвращающих повторное заражение (высадка в вермикулит в теплице, дезинфекция тары, борьба с переносчиками). Присутствие бактерий Cor. sepedonicum изучалось микробиологическим методом. Исследовалась столонная часть клубней. В течение трех репродукций в тканях исследуемых образцов бактерии — возбудители кольцевой гнили отсутствовали.

Таким образом, установлено, что исходный материал, в сильной степени зараженный кольцевой гнилью, полностью оздоравлнвается вычленением меристем размером до 400 мкм с последующим размножением полученных регенерантов. В целях одновременного оздоровления от вирусов необходн-мо вычленять меристемы еще меньшего размера — 150— 200 мкм, что согласуется с данными других авторов.

Из числа оздоровленных перспективный гибрид 124-11 (сорт Кварц) размножен черенкованием в культуре in vitro. В тепличных условиях выращено 17 тыс. клубней. Материал передан в лабораторию первичного семеноводства ОПХ «Заворово» для получения элитного картофеля.

В главе V приведены результаты использования растений в культуре in vitro для оценки устойчивости к бактериозам.

Нами разработан ускоренный -метод оценки устойчивости картофеля к кольцевой гнили, который заключается в искусственном заражении растений, выращенных в культуре in vitro, суспензией чистых культур возбудителя через корешки, у которых предварительно отрезают кончики. Растения опускают в суспензию, полученную путем смыва чистой 4—5-су-точной культуры бактерий (смесь патогенных штаммов) на 10 минут. Оптимальная экспозиция установлена опытным путем. Концентрация бактерий в суспензии составляет 8

2 млрд/мл. Через надрезанные корешки бактерии попадают в сосудистую систему растении и инфнцируют их. У контрольных растений также подрезают корешки и выдерживают в стерильной поде. После этого растения* высаживают в горшочки с торфом. В первые несколько дней их накрывают стаканами для сохранения тургора. Растения подкармливают, увлажняют по мере высыхания почвы для более полного проявления симптомов поражения.

В зависимости от степени поражения, разных сортов симптомы болезни на растениях неодинаковы! Была предложена четырехбалльная оценка степени симптомов поражения.

0 — растение здоровое, симптомы поражения отсутствуют;

1 — слабое поражение, небольшое отставание в росте, слабый хлороз нижних листьев; . .

2— среднее поражение, значительное отставание в росте, хлороз нижних листьев, мелколистность;

3 —сильное поражение ,растение карликовое, мелколистное, увеличивается количество пазушных побегов, подсыхают верхушки, частично отмирают верхние части листовых пластинок.

По степени поражения образны были разделены на группы устойчивости: со средним баллом поражения до I —относительно устойчивые (ОУ), от 1 до 2 баллов — среднеустой-чнвые (СУ), свыше 2 баллов — неустойчивые (НУ).

Применение разработанного метода позволило оценить на устойчивость к кольцевой гнили 25 образцов картофеля. При этом заражали по 20 растений каждого образца, в контроле брали 10 растений. Через полтора месяца зараженность растений оценивалась по вышеуказанной шкале и подсчитывзл-ся средний балл по всем образцам.

Одновременно оценивалась устойчивость к данному заболеванию полевым методом путем учета количества пораженных клонов и клубней после искусственного заражения. При поражении клонов в образце до 25% он считался относительно устойчивым (балл поражения от 0 до 1), от 25 до 50% — среднеустойчивым (балл поражения от 1 до 2), свыше 50% — неустойчивым (балл поражения свыше 2), Результаты сравнительной оценки представлены в таблице 3,

Статистическими методами установлено, что между результатами оценки, полученными полевым и вновь разработанным методами, имеет место высокий коэффициент корреляции. Это даег основание использовать .метод заражения через корешки растений, выращенных в культуре in vitro, для оценки сортов и гибридов картофеля. При этом предлагаемый метод является более предпочтительным, так как на результаты оценки не оказывают влияние меняющиеся погодные условия периода вегетации. К тому же сроки оценки по

Таблица 3

Сравнительная оценка устойчивости сортов и гибридов картофеля ' • к.кольцевой гнили

Развитие болезни, балл

.Сорт, гибрид ; пол ев oil лабораторий* стмка устой-

метод вегеташюн-нын метод чивости

Столовый 19...... . . 0,10 0,7 ОУ

0,15 ' 0.1 ОУ

0,30 0.4 ОУ

0,91 0,7 ОУ

1.Ш 0.9 СУ

1,82 и СУ

• 131 (1) . ; : . . -. . . , . 1.88 1,6 СУ

569 ......... . . 1,92 1,5 СУ

Огонек . . . .-.;«.,. 2,05 2,3 НУ

2,23 2,4 НУ

2,41 2,5 НУ

Уральский рашшЙ . . . 2,71 2.9 НУ

г=0,93 г« « 0,43*

S ,= 0,077

4=12.6 toe = 2.1

-сравнению с полевым методом сокращаются с 1 года до 1,5 месяца. В дальнейшем отобранные устойчивые образцы можно дополнительно оценить в полевых условиях. При этом объем полевых работ существенно уменьшается.

Из числа изученных .25-ти сортообразцов относительно устойчивыми оказались сорта Столовый 19, Парус, Мажестик, -Гатчинский, гибриды 1530,' 45-1; снльнопоражаемыми сорта Уральский ранний,' Белорусский ранний, Резерв, Раменский, Люберецкий, Пламя; Огонек> Любимец и гибриды 314, 103-34, ■ Изучена также возможность использования растений картофеля в культуре in vitro для оценки устойчивости к черной -ножке. Была разработана следующая методика проведения заражения: растения из пробирок срезают у основания, ставят в воду к прикрывают прозрачными каркасами для поддержания повышенной влажности. Заражение стеблей проводится суспензией возбудителя уколом иглой шприца в середину стебля, причем в: месте укола оставляют каплю суспензии, из которой бактерии проникают внутрь стебля и вызывают заражение. Было установлено, что оптимальная концентрация бактерий , для -заражения—1 млрд/мл. На следующий день после заражения появляются признаки по раження-тканей в виде мацерации в месте укола, образования маслянистых пятен. Листья и черешки выше и ниже укола по стеблю могут-размягчаться и поникать, у сильно* восприимчивых, растений.зона:мацерацни может распрострат-

jo ;

питься по всему стеблю и привести к гибели образца. Оценка степени симптомов поражения проводилась по предложенной нами шкале:

0 — растение здоровое, без признаков поражения;

1 — слабое (до 5 мм) загнивание в месте укола;

2— загнивание стеблей в месте укола свыше 5 мм и образование маслянистых пятен на прилегающих 1—2 листьях;

3 — полное загнивание стебля и листьев.

Сравнительная оценка устойчивости стеблей в культуре ill vitro и вегетнрующих я поле приведена в таблице 4.

Таблица ■(

Сравнительная оценка устойчивости стеблей сортов картофеля к черной ножке

Развитие болезни, балл

Сорт стебли стебли Характеристика устой

в культуре чнпости

вогетирую- in vitro

ншх в поле

0,10 0,60 ОУ

Сафнр ............ 0,20 0.25 ОУ

0,25 0,45 ОУ

0.30 0.30 ОУ

Волна .......... 0.80 0,Î0 ОУ

Кварц.......... 1,30 1,10 СУ

Пр пек улье кий ранит!..... 1,35 1.40 СУ

1,35 1,60 СУ

Вятка........... 1.60 MO СУ

1,60 1.90 СУ

Домодедовский....... 1,80 1,65 СУ

2.10 2,40 НУ

г " 0,899 ги - 0,36

Sr " 0,103

tr = 8,73 tCj ■= 2,1

Оценивали по 20 стеблей каждого образца, в контроле брали по 10 стеблей. Всего оценили 34 сортообразиа. Оценка устойчивости образцов картофеля на растениях in vitro и срезанных в поле, показала хорошо совпадающие результаты. Получен высокий коэффициент корреляции оценок обоими методами, следовательно, метод заражения стеблей в культуре in vitro можно применять для определения устойчивости сортов картофеля.

При изучении устойчивости клубней тех же сортов методом заражения ломтиков выявлено, что 23,5% образцов имеют отличающиеся показатели устойчивости клубней н стеблей. Это согласуется с литературными данными (Шнейдер, 1972). Поэтому . для получения более объективной оценки

образцы, отобранные по признаку устойчивости стеблей в культуре in vitro, необходимо дополнительно оценивать по устойчивости клубней методом заражения ломтиков. Окончательную оценку следует; выставлять по низшей из них.

Такой подход позволил установить, что наиболее устойчивыми нз исследованных 34 сортообразцов являются сорта Маяк, Сафнр, Кордна, Смачный, Волна, гибрид 131(1). Неустойчивы сорта Новинка и Столовый 19.

Используя предложенный метод, работу по оценке можно проводить в любое время года. Помещая зараженные растения при массовых оценках в камеры искусственного климата, можно создать стабильные контролируемые условия при разных сериях заражения.' Это является залогом получения устойчивых результатов.; _

: ВЫВОДЫ

1. Выделено 182.патогенных изолята из 256 образцов клубней и растений с признаками кольцевой гнили и черной ножки. Морфологические, культура л ьные и физиолого-биохнмиче-ские свойства позволили отнести *34 Изолята к виду Cor, se-pedonicurn. Серологическим 'методо'м; идентифицированы 141 мзолят Cor. sepetlonicum н 7-лзолятов Pect, phytophtho-rum. Наиболее патогенные штаммы- использовали в работе, а также передали в коллекцию фитопатогенных штаммов отдела защиты НИИКХ для оценки селекционного материала it приготовления антибактериальной .сыворотки.

2. Выделен экзотоксин из культуральной жидкости Cor, sepetlonicum. Показана возможность его использования при отборе клеток каллусной ткани в клеточной селекции для создания устойчивых к кольцевой гнили форм.

3. Изучена динамика распространения возбудителя кольцевой гнили из пораженного клубня в растение картофеля. Доказано, что в этиолированных ростках, отделенных от клубней с кольцевой гнилью, остается свободной от бактериальных клеток верхушечная меристема размером не более 400 мкм, что необходимо учитывать при оздоровлении картофеля от бактериозов:

4; Установлено, что при выращивании в условиях теплицы в течение трех репродукций растения, полученные нз меристем размером менее 400 мкм, не содержали возбудителя кольцевой гнили.

- 5. Методом верхушечной меристемы оздоровлено от кольцевой гнили семь сортов и гибридов картофеля, из них шесть к тому же были свободны от вирусов. Получено 17 тыс. исходных клубней перспективного гибрида 124-11 (сорт Кварц), которые переданы в лабораторию первичного семеноводства 12 ' *

OtTX «Заворово» для получения здорового семенного'материала картофеля.

6. Разработан лабораторно-иегетацнонный метод оценки устойчивости картофеля к кольцевой гнили, основанный на искусственном заражении растений, выращенных in vitro, чистой культурой возбудителя. Применение этого метода позволяет дать оценку селекционного материала по признаку устойчивости в течение 1,5 месяца.

7. С применением разработанного метода оценено 25 сортов и гибридов и отобрано 6 образцов с повышенной устойчивостью к кольцевой гннлн, которые используются в селекционном процессе.

8. Разработан лабораторный метод оценки устойчивости картофеля к черной ножке, основанный на искусственном заражении растений, выращенных in vitro, чистой культурой возбудителя. Применение метода позволяет дать оценку устойчивости стеблей по этому признаку за 2—3 дня. У отобранных устойчивых образцов дополнительно оценивается устойчивость клубней методом заражения ломтиков. Окончательная оценка принимается равной низшей из двух.

9. С использованием разработанного метода оценено 34 сорта и гибрида и отобрано Г> сортообразцов с повышенной устойчивостью к черной ножке, которые используются в селекционном процессе.

Практические рекомендации

На основании проведенных исследований рекомендуются селекционным центрам и научно-исследовательским учреждениям по культуре картофеля;

— методика оздоровления картофеля от бактериозов, основанная на вычленении' меристем размером or 150 до 400 мкм;

— методика оценки селекционного материала картофеля йа устойчивость к кольцевой гнили, основанная на искусственном заражении растений с подрезанием корешков и погружением в бактериальную суспензию^

— методика оценки селекционного материала картофеля на устойчивость к черной ножке в культуре in vitro, основанная на искусственном заражении суспензией возбудителя уколом шприца в середину срезанных стеблей с нанесением капли бактериальной суспензии;

— сорта Столовый 19, Парус, Мажестик, Гатчинский, гибриды 1530, 45-1 как доноры устойчивости к кольцевой гннлн;

— сорта Смачный, Сафир, Кордиа, Маяк, Волна, гибрид 131 (1) как доноры устойчивости к черной ножке.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Червонкж Г, Н. Освобождение сортов и гибридов кар- , тофеля от кольцевой гнили методом апикальной меристемы. В сб.: Селекция и семеноводство картофеля. Научные труды НИИКХ, М„ 1979, вып.:33, с. 104—109.

2. Шнейдер Ю. И., ^¡ервонюк Г. И. Методы оценки картофеля в пробирочной культуре на устойчивость к бактериозам. В сб.; Состояние и перспективы развития научных исследований по предотвращению резистентности у вредителей и возбудителей к пестицидам и разработка эффективных мер борьбы с бактериальными болезнями. Тезисы докладов 4-го Всесоюзного совещания. М., 1980, с. 59—60.

3. Червонюк Г. Н., Трофнмец Л. Н„ Шнейдер Ю. И.'Освобождение сортов и гибридов от кольцевой гнили методом вычленения апикальных меристем. В сб.: Состояние и перспективы развития научных; исследований по предотвращению резистентности у вредителей и возбудителей болезней к пестицидам и разработка эффективных мер борьбы с бактериальными болезнями. Тезисы докладов 4-го Всесоюзного совещания. М., 1980, с. 70—71.' ,

4. Хромова Л, М;, Седннна Г. В., Бутенко Р. Г., Карманов С. Н., Яшина И, М.; Червонюк Г. Н. Использование методов культуры тканей для повышения устойчивости картофеля к патогенам. В сб.: Проблемы и пути повышения устойчивости растений к болезням н экстремальным условиям среды в связи с задачами 'селекции. Тезисы докладов I Всесоюзной конференции по иммунитету, ч. 4. М., 1981, с. 54—55.

(

Л G-1510 14/V—84 г. Объем 1 п." л. Заказ 1253. Тираж 100

Типография Московской <г,-х, академии им. К. Л. Тимирязева 127550* Москва И-550, Тимирязевская ул„ 44

Бесплатно.