Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Интегральный подход к оценке функционирования физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе
ВАК РФ 03.00.13, Физиология
Автореферат диссертации по теме "Интегральный подход к оценке функционирования физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе"
Направахрукописи
Степанова Ирина Петровна
ИНТЕГРАЛЬНЫЙ ПОДХОД К ОЦЕНКЕ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ СИСТЕМ ДЕТОКСИКАЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ
03.00.13 - физиология 03.00.04-биохимия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
Новосибирск - 2004
Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет»
Научные консультанты:
доктор медицинских наук,
профессор Патюков Александр Георгиевич
доктор медицинских наук,
профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор
доктор биологических наук, профессор
доктор биологических наук
Дыгало Николай Николаевич
Короткевич Ольга Сергеевна Аликин Юрий Серафимович
Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Тюменская государственная сельскохозяйственная академия».
Защита диссертации состоится « 21 » декабря 2004 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.048.04 при ФГОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет» по адресу: 630039, г. Новосибирск, ул. Добролюбова, 160.
Сдиссертациейможно ознакомиться в библиотеке Новосибирского государственного аграрногоуниверситета
Автореферат разослан «_» ноября 2004 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент
СП. Князев
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность исследования
Значительные стрессовые нагрузки в современных условиях на организм сельскохозяйственных животных, в том числе крупного рогатого скота, могут понижать эффективность системы естественной детоксикации и, в свою очередь, устойчивость организма к влиянию токсикантов. Поэтому для сохранения продуктивного здоровья животных необходим постоянный контроль над функционированием системы детоксикации с учетом возрастных и других факторов. Кроме того, сведения об особенностях ее деятельности в зависимости от возраста и физиологического состояния следует учитывать при организации системы адаптационных мероприятий по ветеринарной защите здоровья животных.
В настоящее время для оценки системы детоксикации организма крупного рогатого скота используют в основном метаболические показатели, характеризующие функциональное состояние печени и почек, однако они не всегда обладают высокой диагностической надежностью. Совершенствованию этой оценки препятствует недостаточная изученность метаболических реакций, обеспечивающих детоксикацию, с помощью современных биохимических методов (с учетом возраста и физиологического состояния).
К универсальной биологической системе детоксикации относится антиокси-дантная система (АОС), для характеристики которой в последнее время все шире используется метод биохемилюминесценции [ЮА. Владимиров, А.И. Арчаков, 1972; Н.К. Зенков и др., 2001; Т.Д. Журавлева и др., 2003]. Однако с его помощью у крупного рогатого скота в физиологических условиях не изучались возрастные изменения и особенности свободнорадикальных реакций при разных физиологических состояниях. Малочисленными являются сведения о показателях биохемилюминесценции крови животных при патологических состояниях [P.P. Фархутдинов и др., 2000].
Интегральный показатель на основе данных о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) считается универсальным биохимическим маркером, отражающим уровень патологического метаболизма, а, следовательно, и деятельность системы детоксикации [М.Я. Малахова, 1995; Е.В. Карякина, СВ. Белова, 2004]. Но в литературе отсутствуют сведения об уровне ВНСММ и об его соотношении с состоянием свободнорадикальных процессов в крови крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях.
Недостаточно сведений о взаимосвязи интенсивности свободнорадикаль-ных реакций с процессами катаболизма белков и энергетическим состоянием клетки при острой химической интоксикации.
Конъюгирование ксенобиотика с альбуминами является первым безопасным и эффективным механизмом детоксикации при окислении веществ в печени [И.Е. Ковалев, Н.В. Шипулина, 1996]. В то же время практически отсутствуют сведения об эффективной концентрации (ЭКА) и связывающей способности сывороточных альбуминов (ССА) у крупного рогатого скота разного возраста в норме и при патологии.
3 *ОС. НАЦИОНАЛЬНА!
I в*миогекА
! ■
Одним из интегральных показателей функционирования системы детокси-кации животных является сорбционная способность эритроцитов (ССЭ). Однако данных об этом показателе у крупного рогатого скота в физиологических условиях в постнатальном онтогенезе до сих пор не имеется. Недостаточно сведений о сорбционной способности эритроцитов животных при патологических состояниях [Н.Б. Никулина, В.М. Аксенова, 2003].
Это показывает необходимость в разработке нового более совершенного методологически обоснованного подхода к оценке функционирования системы детоксикации организма крупного рогатого скота.
Цель исследования
Разработка интегрального подхода к оценке функционирования системы детоксикации организма крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе для совершенствования в современных условиях адаптационной стратегии защиты здоровья и продуктивности животных.
Задачи исследования:
1. Обосновать методологию использования интегрального подхода к оценке функционирования системы детоксикации организма крупного рогатого скота.
2. Дать интегральную оценку интенсивности свободнорадикальных процессов крови крупного рогатого скота в физиологических условиях и при метаболических нарушениях. Разработать интегральный показатель сбалансированности реакций свободнорадикального окисления биомолекул и состояния антиоксидантной системы для характеристики системы детоксикации организма животных.
3. Установить степень сопряжения интенсивности процессов свободнора-дикального окисления и активности антиоксидантной защиты с уровнем соединений низкой и средней молекулярной массы крови крупного рогатого скота в физиологических условиях и при сдвигах в обмене веществ.
4. Разработать интегральные индексы для характеристики системы детоксикации организма крупного рогатого скота на основе данных о содержании ВНСММ крови в физиологических условиях и при метаболических нарушениях.
5. Охарактеризовать эффективную концентрацию и связывающую способность сывороточных альбуминов крупного рогатого скота в физиологических условиях и при сдвигах в обмене веществ и оценить эффективность использования этих показателей для характеристики системы детоксикации организма животных.
6. Разработать интегральные показатели для оценки функционирования системы детоксикации организма крупного рогатого скота на основе данных о содержании ВНСММ и альбуминовых показателях крови.
7. Оценить сорбционную способность эритроцитов крови крупного рогатого скота в норме и при сдвигах в метаболизме; на основании этих данных установить целесообразность использования этого интегрального показателя для характеристики функциональной системы детоксикации организма животных.
8. Охарактеризовать функционирование про- и антиоксидантных систем, процессы катаболизма белков и энергетическое состояние клетки в эксперименте при острой ацетальдегидной интоксикации.
Научная новизна
С помощью интегрального подхода расширены представления о функционировании в физиологических условиях антиоксидантной системы организма крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе. Впервые показано, что интегральные показатели сыворотки крови, характеризующие интенсивность процессов свободнорадикального окисления и состояние антиоксидантной системы, стабилизируются к 2- и 6-месячному возрасту телок соответственно. У коров в наиболее напряженные для организма физиологические периоды процессы пероксидации протекают на стационарном и низком уровне, а активность антирадикальной защиты усиливается.
Впервые получены сведения об уровне веществ низкой и средней молекулярной массы у клинически здорового крупного рогатого скота с учетом возраста и физиологического состояния. Установлено, что содержание этих веществ в плазме и эритроцитах крови телок стабилизируется к 1- и 6-месячному возрасту соответственно. В крови коров в периоды заключительного этапа су-хостойности и новотельности содержание молекул низкой и средней молекулярной массы снижается.
Впервые установлена взаимосвязь интенсивности протекания свободнора-дикальных реакций с уровнем веществ низкой и средней молекулярной массы в крови животных в физиологических условиях и при метаболических нарушениях. При активации свободнорадикальных процессов усиливается образование этих веществ и сорбция их эритроцитами крови. При состоянии окислительного стресса наблюдается повышенное содержание соединений низкой и средней молекулярной массы в плазме и эритроцитах крови.
Выявлены особенности реакций конъюгирования естественных метаболитов с альбуминами сыворотки крови у крупного рогатого скота в физиологических условиях. Впервые показано, что эффективная концентрация и связывающая способность этих белков практически не изменяется у телок разного возраста так же, как и у коров при разных физиологических состояниях. Установлено снижение эффективной концентрации и нарушение связывающей функции альбуминов при нарушенном метаболизме.
Впервые обнаружены возрастные изменения показателя сорбционной способности эритроцитов крови клинически здорового крупного рогатого скота. Показано, что его числовые значения с 1-месячного возраста телок находятся практически на постоянном уровне. Сорбционная способность эритроцитов крови коров практически не изменяется при разных физиологических состояниях. При состоянии окислительного стресса значения этого показателя увеличиваются.
Получены новые данные о сопряжении свободнорадикальных реакций с процессами катаболизма белков и энергетическим состоянием клетки в норме и при острой интоксикации ацетальдегидом.
Методологически обоснована целесообразность и доказана в исследованиях эффективность использования нового интегрального подхода к оценке функциональной системы детоксикации организма крупного рогатого скота. Интегральный подход разработан на основе показателей крови, характеризующих интенсивность процессов свободнорадикального окисления, состояние антиок-сидантной системы, содержание веществ низкой и средней молекулярной массы в плазме и эритроцитах, эффективную концентрацию и связывающую способность альбуминов.
Практическая значимость
Результаты исследований используются в лабораторной диагностике для оценки функционирования системы детоксикации организмов человека и животных. Имеется патент «Способ оценки эндотоксикоза организма». Поданы заявки на изобретения: № 2003122548, приоритет от 18.07.2003 («Способ диагностики эндотоксикоза организма»); № 2003111900, приоритет от 12.09.2003 («Способ диагностики эндотоксикоза у коров с острым гнойно-катаральным эндометритом»), № 2004100926, приоритет от 09.01.2004 («Способ диагностики степени интоксикации организма»).
Коэффициент сбалансированности, представляющий собой отношение показателей состояния антиоксидантной системы и интенсивности процессов пе-роксидации, является объективным критерием оценки антиоксидантного статуса и рекомендуется для своевременного выявления оксидативного стресса в организме животных.
Интегральные индексы на основе данных о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы крови крупного рогатого скота позволяют оценить баланс между активностью протеазной и антипротеазной систем.
Эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов сыворотки крови крупного рогатого скота являются важными методами диагностики сдвигов в обмене веществ.
Разработанные интегральные индексы на основе изучения баланса между накоплением веществ низкой и средней молекулярной массы в крови и сорбцией этих соединений эритроцитами и альбуминов крови позволяют выявлять уровень патологического обмена.
Модифицированный в работе спектрофотометрический метод определения сывороточных альбуминов крупного рогатого скота является точным, воспроизводимым, экспрессным и может быть широко использован в ветеринарной лабораторной диагностике.
Новые данные, полученные с помощью интегрального подхода к оценке функционирования системы детоксикации крупного рогатого скота, могут послужить методологической основой для обоснования эффективной стратегии ветеринарной защиты сохранения здоровья животных и повышения продуктивности.
Результаты исследований используются в лекционных курсах, лаборатор-но-практических занятиях по физиологии и биохимии на кафедрах нормальной и патологической физиологии, химии ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»; физиологии, биохимии и химии ФГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия»; биологии ФГОУ ВПО «Омский государственный педагогический университет», физиологии и биохимии животных
ФГОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет». Они отражены в учебном пособии для студентов, рекомендованном Учебно-методическим объединением вузов РФ по образованию в области зоотехнии и ветеринарии (Практикум по биохимии печени и почек / И.П. Степанова [и др.]. - Омск: ИВМ ОмГАУ, 2003. - 108 с).
Основные положения, выносимые на защиту
1. Интегральные характеристики крови, отражающие функционирование естественной системы детоксикации организма крупного рогатого скота - интенсивность свободнорадикальных процессов и состояние антиоксидантной системы, содержание веществ низкой и средней молекулярной массы, эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов, и сорбционная способность эритроцитов, изменяются в постнатальном онтогенезе и зависят от физиологического состояния животных.
2. Свободнорадикальные реакции, протекающие в крови крупного рогатого скота, сопряжены с процессами образования и связывания веществ низкой и средней молекулярной массы.
3. Интегральный подход к оценке функционирования физиологической системы детоксикации крупного рогатого скота, заключающийся в комплексном использовании показателей крови: свободнорадикального окисления, состояния антиоксидантной системы, содержания веществ низкой и средней молекулярной массы и альбуминов, является методологически обоснованным и эффективным.
Адекватное усиление функционирования физиологических систем деток-сикации можно выявить по интенсификации реакций свободнорадикального окисления. О неадекватном его усилении позволяет судить значительная активация в крови свободнорадикальных процессов, истощение антиоксидантной системы, повышение содержания веществ низкой и средней молекулярной массы, изменение сорбционной емкости эритроцитов, снижение эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов.
Апробация работы
Основные результаты представлены на XVIII съезде Российского физиологического общества (Казань, 2002), на IV съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002), II Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000) и других Всероссийских научных и научно-практических конференциях и симпозиумах.
Объём и структура диссертации
Диссертация изложена на 324 страницах печатного текста, содержит 82 таблицы, 76 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, изложения материалов и методов исследования, 8 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и приложения. Библиографический список включает 270 источников, в том числе 142 на русском языке.
Публикации. Материал, представленный в диссертации, отражен в 42 публикациях, включая монографию и 6 статей в ведущих научных изданиях и журналах, Перечень которых утвержден ВАК Минобразования России. Всего автором опубликовано 67 печатных работ.
Материалы и методы исследования
Диссертационная работа является самостоятельным разделом научных исследований по темам кафедр нормальной и патологической физиологии «Видовая и возрастная характеристика физиологических функций и нейрогумораль-ной регуляции висцеральных систем животных и птиц» (№ Гос. регистрации 01.200.103074) и химии «Изучение биохимических механизмов развития и разработка методов диагностики и способов коррекции токсикозов у животных в условиях экосистемы Омской области» (№ Гос. регистрации 01.200.202505), входящих в научно-исследовательскую программу ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет».
Исследования выполнялись на крупном рогатом скоте красной степной породы в ряде хозяйств Омской области. Схема проведения исследований представлена на рис. 1.
Рис. 1. Схема проведения исследований 8
В первой серии исследований изучалась группа клинически здоровых телок в разные возрастные периоды (по n = 15) и коров в возрасте 3-4 лет с аналогичными показателями массы, молочной продуктивности (средней) и количеством лактации (2-3) при разных физиологических состояниях (по n = 30). Продолжительность сухостойного периода составляла 60, раздоя - 100 суток после отела. Кроме того, обследовалась группа животных с клиническими признаками сдвигов в обмене веществ. У телок наблюдались отставание в росте, снижение массы тела, потеря шерстного покрова в области живота и шеи и т.д. Группа коров делилась на две подгруппы (по n = 10): с 1-й (слабой) и 2-й (явной) степенью выраженности метаболических нарушений (названия - условные). Животные 1-й подгруппы было характеризовались снижением молочной продуктивности, 2-й - снижением массы тела, потерей шерстного покрова в области живота и шеи и т.д.
Вторая серия исследований проводилась на группах-аналогах крупного рогатого скота по 15 голов в каждой. Общепринятые биохимические показатели сыворотки крови: общий белок, мочевина, креатинин, общий билирубин, ас-партатаминотрансфераза (АсАТ), аланинаминотрансфераза (АлАТ), тимоловаю реакция определялись унифицированными методами с помощью наборов реактивов фирмы «Клини-Тест» (Россия).
Сорбционная способность эритроцитов крови оценивалась по методу А.А. То-гойбаева и др. (1988), основанного на фотометрии плотности окраски комплекса эритроцитов с красителем метиленовым синим. Общая концентрация альбуминов (ОКА) определялась с помощью метода, основанного на фотометрии плотности окраски комплекса альбуминов с красителем бромкрезоловым пурпурным [И.П. Степанова и др., 2003]. Оценка связывающей способности альбуминов проводилась по методу, основанному на фотометрии плотности окраски комплекса альбуминов с красителем конго-ротом [B.C. Камышников, 2003]. Содержание ВНСММ определялось по методу М.Я. Малаховой (1989), принцип которого состоит в осаждении белков плазмы крови и эритроцитов раствором трихлоруксусной кислоты с последующей регистрацией спектра водного раствора супернатантов в ультрафиолетовой области с помощью спектрофотометра СФ-46. Уровень ВНСММ оценивался по площади фигуры (S), ограниченной спектральной кривой и осью абсцисс в диапазоне длин волн 238-298 нм. Площадь рассчитывалась по формуле:
где D - оптическая плотность (ед.); 4 - шаг измерения.
Свободнорадикальные процессы изучались методом железоиндуцированной биохемилюминесценции с помощью биохемилюминометра БХЛ-06М [Ю.А. Владимиров, 1972]. Интенсивность реакций свободнорадикального окисления оценивалась по светосумме вспышки хемилюминесценции сыворотки крови за 30 с (показатель СРО), а активность антиоксидантной системы - относительными единицами тангенса угла наклона кинетической кривой хемилюминесценции (показатель АОС).
Эффективность разработанных в работе показателей функционирования системы детоксикации изучалась на коровах с послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом. По степени выраженности интоксикации животные делились на 3 группы. В 1-ю (n = 18) и 2-ю (n = 16) группы входили коровы в компенсированном состоянии без угрозы и с угрозой развития сепсиса соответственно (ус-
ловно - 1-й 2-я степень эндотоксикоза). Третью группу (п = 5) составляли животные с развившимся сепсисом и недостаточностью какой-либо одной или нескольких функциональных систем (условно - 3-я степень эндотоксикоза). Контрольную группу составляли животные 3-4-х лет в послеродовой (3-15 суток после отела) период (п = 25) с аналогичными показателями массы и молочной продуктивности, у которых значения биохимических показателей находились в пределах физиологической нормы.
Исследования проводились в зимний стойловый период. Животные получали одинаковый по структуре и питательности рацион, соответствующий нормам кормления.
Экспериментальные исследования выполнялись на половозрелых крысах-самцах линии Вистар массой 260-300 г. Животные содержались в обычных условиях вивария, регламентируемых приказом МЗ СССР № 1179 от 10.10.1983 г. Опыты проводились в соответствии с приказами МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г. и № 701 от 27.07.1978 г. об обеспечении принципов гуманного обращения с животными. Схема эксперимента приведена на рис. 2.
Рис.2. Схема проведения эксперимента
Животным 1-й группы однократно перорально вводился уксусный альдегид в дозе (п = 49). Контролем служила 2-я группа крыс, получавшая вместо альдегида воду (п = 15). Влияние ацетальдегида изучалось в суточной динамике.
Интенсивность свободнорадикальных процессов и содержание ВНСММ крови изучались вышеперечисленными методами. Кроме того, регрессионному анализу подвергались данные обмена адениловых нуклеотидов и сопряженных с ним показателей, полученные в идентичных условиях эксперимента канд. биол. наук, доцентом Л.М. Дмитриевой в лаборатории кафедры биохимии ФГУ ВПО «Омская государственная медицинская академия».
Нуклеотидный фонд тканей печени и крови исследовался методом ионообменной хроматографии. Идентификация нуклеотидов проводилась по их положению на профиле элюции [И.Д. Головацкий, А.Я. Красневич. 1970], определением спектральных характеристик в кислой, щелочной средах и после бро-мирования [Т.В. Венкстерн, А.А. Баев, 1967]. Активность ксантиноксидазы определялась по методу Е.Г. Дячиной (1973), содержание мочевой кислоты - по методу И.И. Никитиной (1972). По данным хроматографического анализа рассчитывался энергетический заряд системы ATP-ADP-AMP [D.E. Atkinson, 1968].
Статистическая обработка данных проводилась с использованием критериев Стьюдента и Фишера, для выявления сопряжённости признаков применялся коэффициент линейной корреляции Пирсона. Нормальность распределения проверялась с помощью критерия соответствия
Часть исследований проводилась совместно с соискателями автора - доцентом кафедры химии И.В. Коневой и ст. преподавателем кафедры химии ОмГАУ В.В. Мугак.
Результаты исследований
Полученные результаты показали, что рутинные биохимические показатели крови животных, характеризующие функциональное состояние печени и почек, не способны выявлять адекватное усиление, а обнаруживают уже неадекватное усиление работы системы детоксикации, но и то лишь при локализации первичного патологического очага в печени или почках. Во всех остальных случаях увеличение их значений свидетельствует о развитии печеночно-почечной недостаточности, возникающей при дисфункции органов системы де-токсикации.
Интегральный подход к оценке функционирования системы детоксикации крупного рогатого скота разработан на основе комплекса метаболических показателей крови, отражающих ее деятельность, а именно показателей реакций свободнорадикального окисления и состояния антирадикальной защиты, содержания веществ низкой и средней молекулярной массы плазмы и эритроцитов, эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов, сорбционной способности эритроцитов.
Состояние свободнорадикальных реакций крови
Развитие стрессового состояния в организме животных в раннем постна-тальном онтогенезе, сопряженное с осуществлением специфических адаптивных реакций, связанных с различиями в кислородных режимах и метаболизме плода и новорожденного, приводит к существенному изменению в течение сво-боднорадикальных реакций. Установлено, что самая низкая антиоксидантная ак-
тивность сыворотки крови характерна для новорожденных телок, к их одномесячному возрасту она увеличивается, в 1-3-месячном возрасте - практически не изменяется, с 3 до 6 месяцев - вновь повышается, а в последующем остается на постоянном уровне, характерном для взрослых животных (рис. 3).
Рис. 3. Значения показателя АОС сыворотки крови клинически здоровых телок Примечание: здесь и далее *, **, *** — достоверность различий по сравнению с контролем (соответственно р < 0,05; р < 0,01; р < 0,001). Контроль -1 месяц.
Постепенное повышение мощности системы АОС к 6-месячному возрасту, по-видимому, связано с алиментарными факторами
У животных в период родов, когда компенсаторно-адаптационные механизмы материнского и плодового организмов находятся в состоянии максимального напряжения, при котором, в частности, в крови материнского организма существенно возрастает парциальное давление кислорода и увеличивается интенсивность обмена липидов, достоверно изменяется функционирование антиоксидантной системы. В сыворотке крови у здоровых коров в период раздоя (контроль) показатель АОС равен 0,21 ± 0,02 ед.; его значения в периоды начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности увеличиваются до 0,25 ± 0,02; 0,25 ± 0,01 и 0,25 ± 0,03 ед. (р < 0,05); при этом показатель СРО практически не изменяется и принимает значения 16,65 ± 0,83; 14,51 ± 2,41; 15,07 ± 2,10 и 17,69 ± 0,56 ед. (р > 0,05) соответственно.
2*15 1 2 3 в 9 12 18 24 суг. мес. мес. мес. и ее. мес. мес. мес. мес.
В то же время, интенсивность процессов свободноради-кального окисления устанавливается на относительно низком стациионарном уровне, характерном для клинически здоровых взрослых животных, к 2-месячному возрасту, что указывает на согласованное взаимодействие всех звеньев системы АОС, то есть на завершение в последней адаптивных реакций (рис. 4).
2-15 1 2 3 6 9 12 18 24
Рис. 4. Значения показателя СРО сыворотки крови здоровых телок Примечание: контроль - 1 месяц.
По-видимому, протекание реакций свободнорадикального окисления на низком стационарном уровне, обеспечивающим нормальное течение метаболических процессов, обусловлено адаптивными изменениями в системе АОС.
У животных с клиническими признаками метаболических нарушений выявлена интенсификация реакций свободнорадикального окисления при одновременном снижении антиоксидантной активности сыворотки крови (рис. 5).
Рис. 5. Значения показателей СРО, АОС и КБ у животных при метаболических нарушениях
Полученные результаты показывают, что соотношение функционирования про- и антиоксидантной систем в организме животных по разным причинам может меняться. Они подтверждают тот факт, что интенсивность окислительных процессов в организме является не только регуляторным механизмом направленности обменных процессов, но и начальным звеном в развитии органной патологии [М.Ю. Рецкий и др., 2001]. Несостоятельность АОС на фоне усиления интенсивности пероксидации приводит к развитию оксидативного стресса, что, возможно, является одной из возможных причин клинических проявлений метаболических нарушений.
Необходимо отметить, что повышение значений показателей СРО и АОС относительно референтных величин (с учетом возраста и физиологического состояния), свидетельствующих, прежде всего об активации свободнорадикаль-ных реакций липидов, может быть связано как с нарушением липидного обмена (гипо-, гипер-, дислипопротеинемии) в организме, так и с воспалительным процессом или инфекционным заболеванием. Поэтому при выявленном дисбалансе интенсивности свободнорадикальных реакций липидов и состояния АОС необходимо определить содержание общих липидов сыворотки крови для исключения липидных нарушений. При нормальной концентрации общих липидов следует провести общий анализ крови для подтверждения наличия воспалительного процесса. С целью выявления конкретного воспалительного можно провести, например, ряд определений ферментов, активность которых меняется более дифференцированно. Так, активность щелочной фосфатазы изменяется при за-
о Егя(иа
телки контроль
телки коровы коровы коровы контроль 1 степень 2 степень
В этом случае линейная взаимосвязь между значениями показателей СРО и АОС практически отсутствует. В группе 12-месячных телок коэффициент Пирсона равен 0,20 ед., в группах коров со слабо и явно выраженными признаками сдвигах в обмене веществ -соответственно 0,28 и -0,16 ед. (р > 0,05).
болеваниях печени и костной патологии, а-амилазы или липазы - при панкреатите и т.д.
Понижение значений показателей СРО и АОС относительно референтных величин (с учетом возраста и физиологического состояния) свидетельствует либо об анемии, либо о наличии злокачественного образования.
Для повышения чувствительности метода биохемилюминесценции разработан и изучен коэффициент сбалансированности свободнорадикальных процессов (КБ, ед.), который является отношением показателей АОС (ед.) и СРО (ед.) и рассчитывается по формуле:
где 100-эмпирический коэффициент.
Коэффициент сбалансированности в группах животных в возрасте: 2-15 суток, 1, 2, 3, 6, 9, 12, 18, 24 месяцев принимает значения: 0,95 ± 0,10; 1,18 ± 0,12; 1,09 ± 0,15; 1,10 ± 0,13; 1,30 ± 0,10; 1,34 ± 0,14; 1,39 ± 0,18; 1,32 ± 0,15; 1,38 ± 0,14 ед. соответственно. Следует отметить, что КБ у новорожденных телок ниже, чем у животных других возрастных групп (р < 0,05).
Значения КБ коров и в периоды: раздоя (контроль), начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности соответственно равны: 1,26 ± 0,05; 1,67 ± 0,06; 1,68 ± 0,17; 1,41 ±0,13 ед., причем они достоверно увеличиваются в период сухостойности (р < 0,001).
Выявлено, что у животных с клиническими признаками нарушенного обмена веществ значения КБ достоверно ниже по сравнению с контролем, причем, чем сильнее выражены метаболические нарушения, тем выше степень изменения показателя (рис. 5). Вероятно, величина КБ меньшая единицы, свидетельствует о состоянии оксидативного стресса в организме.
Эффективность показателей биохемилюминесценции крови определяется высокой чувствительностью на наличие предпатологического состояния. Если их значения находятся в диапазоне значений нормы, можно однозначно говорить об отсутствии в этом организме патологии или предпатологического состояния, что невозможно на одном анализе ни при каких других формах обследования.
Таким образом, полученные результаты показывают, что интегральные показатели свободнорадикальных реакций позволяют своевременно выявлять адекватное усиление функционирования системы детоксикации.
Соотношение интенсивности свободнорадикальных процессов с содержанием веществ низкой и средней молекулярной массы крови
Содержание ВНСММ признано универсальным биохимическим маркером,
отражающим уровень патологического метаболизма, а, следовательно, и деятельность системы детоксикации. В группу ВНСММ входит более 200 соединений с молекулярной массой 500-5000 Д, способных к ультрафиолетовому поглощению света в диапазоне длин волн 238-310 нм. Это вещества в основном белковой и углеводной природы с разной биологической активностью. В физиологических условиях содержание ВНСММ в крови поддерживается на стационарном достаточно низком уровне, причем 95% ВНСММ удаляются главным образом путем гломерулярной фильтрации. При метаболических нарушениях той или иной степени выраженности, сопровождающих самые различные, этиологически и патогенетически нетождественные состояния, в жидкостях и тканях организма в нефизиологических концентрациях накапливаются продукты нормального и нарушенного метаболизма, в том числе и с низкой и средней молекулярной массой. Показано, что при сохранении нормального уровня гло-мерулярной фильтрации повышение содержания ВНСММ в крови связано с дисбалансом между активностью протеазной и антипротеазной систем.
При анализе профилей спектрограмм крови здоровых животных обнаружено, что они имеют вид параболы рис. 6. В диапазоне длин волн 238-246 нм, спектрограммы имеют нулевые, а начиная с 250 нм равномерно восходящие значения оптической плотности с максимумами светопоглощения соответственно для плазмы и эритроцитов крови при 274 ± 8 и 286 ± 4 нм. Необходимо отметить, что в группе новорожденных телок максимум поглощения эритроцитов резко сдвинут в коротковолновую область.
В ходе адаптации организма к условиям окружающей среды в крови существенно изменяется содержания ВНСММ. В плазме самый высокий уровень этих молекул наблюдается у новорожденных телок, начиная же с 1-месячного возраста, он устанавливается на стационарном уровне характерном для взрослых животных (рис. 7). В эритроцитах максимальная концентрация ВНСММ также характерна для новорожденных животных, к 1-месячному возрасту она
Рис. 6. Спектрограммы плазмы (1) и эритроцитов (2) крови здоровых коров в период раздоя
Рис. 7. Содержание ВНСММ плазмы и эритроцитов крови здоровых телок
снижается и остается неизменной до 3-х месяцев жизни, к 6-ти месяцам - повышается и стабилизируется.
Высокий уровень ВНСММ в крови новорожденных животных, возможно, обусловлен, образованием стресс-белков Hsp70 - компонентов пула ВНСММ, что является неспецифическим звеном адаптации. Кроме того, по мере развития организма в крови изменяется содержание многочисленных низкомолекулярных и среднемолекулярных азотистых веществ, в частности, нуклеоти-дов, нуклеозидов, мочевой кислоты, креатина, креатинина, мочевины, аминокислот, олигопептидов и т.д. Стабилизация содержания ВНСММ к 6-месячному возрасту свидетельствует о завершении адаптации.
У здоровых коров при наиболее напряженных физиологических состояниях, повышенная потребность организма в таких важнейших соединениях как NAD , NADP , рибозо-5-фосфат, глутатион, необходимых для процессов синтеза и детоксикации, приводит к снижению содержания ВНСММ. Уровень ВНСММ плазмы и эритроцитов крови коров в периоды раздоя (контроль) и начального этапа сухостойности практически не различается: в 1-м случае он равен 5,10 ± 0,82 и 15,26 ± 1,25, а во 2-м -4,83 ± 0,60 и 13,84 ± 1,64 ед. В период заключительного этапа сухостойности он снижается до 3,33 ± 0,47 и 6,76 ± 0,93 (р < 0.001), в период новотельности - до 4,38 ± 0.46 (р > 0,05) и 8,92 ± 0,71 ед. (р < 0,001) соответственно.
Спектрограммы крови крупного рогатого скота с клиническими признаками нарушенного обмена веществ имеют иной, чем в норме, характер. У животных со слабо выраженными признаками на спектрограммах эритроцитов в основном наблюдается повышение, а плазмы крови, напротив, снижение значений оптической плотности
3 ВНСММплаэмы I ВНСММэротроцигов
■ики
телки кокгрогь
коровы 1 степень
Рис. 8. Содержание ВНСММ и значения ИКИ у животных при метаболических нарушениях
зоне длин волн 238-246 нм,
при длинах волн, соответствующих максимумам светопо-глощения. В то время как у коров с явно выраженными признаками отмечается более высокое расположение спектрограмм плазмы и эритроцитов крови в целом, смещение максимумов поглощения УФ-лучей от нормальных величин.
кРоме того, появляются отличные от нуля значения оптической плотности в диапа-в котором регистрируются продукты распада 16
коровы 2 степень
клеток микробной природы, ксенобиотики и т.д.
Характер изменений уровня ВНСММ в зависимости от степени сдвигов в обмене веществ является разнонаправленным, что свидетельствует о возможности использования этих данных для контроля над метаболическим статусом животных. У животных со слабо выраженными признаками нарушенного метаболизма в плазме он снижается, а эритроцитов повышается (рис. 8). В группе животных с явно выраженными признаками он увеличивается и в плазме, и в эритроцитах.
Предполагается, что незначительное увеличение уровня ВНСММ имеет компенсаторное значение. Возможно, это происходит за счет усиления синтеза цито-мединов (молекулярная масса 1-10 кД) и коротких регуляторных пептидов. Результаты исследований последних лет не вызывают сомнений, что у нервной, эндокринной и иммунной систем, ответственных за поддержание гомеостаза, имеется единый механизм химической регуляции, ключевыми звеньями которого являются продукция и секреция регуляторных пептидов [А.М. Земсков и др., 2003]. Пептидные гормоны, низкомолекулярные полипептиды, цитокины и цитомедины осуществляют аутокринную, эндокринную, нейрокринную и паракринную сигнальную передачу информации. Эти клеточные медиаторы, вырабатываемые клетками в различных органах и тканях, играя роль информационных молекул, определяют основные параметры формирования компенсаторно-приспособительных реакций организма на стрессорное воздействие и нарушение гомеостатического баланса.
Например, в результате цитомединовой регуляции в клетках повышается активность репаративных процессов, направленных на восстановление клеточного гомеостаза и снижается скорость накопления патологических изменений (повреждение DNA, мутации, злокачественная трансформация и т.д.) [В.Х. Ха-винсон и др., 2002]. В то же время сверхвысокие концентрации этих физиологически активных веществ могут оказывать дезорганизующее воздействие на различные функциональные системы организма. Считается, что нарушение цито-мединовой регуляции может служить одной из причин развития ряда заболеваний, инволюции органов и тканей [D.L. Andrew, 1998].
Для повышения чувствительности метода определения ВНСММ разработан интегральный критерий интоксикации (ИКИ, ед.), который представляет собой отношение уровней ВНСММ плазмы и эритроцитов (1) и рассчитывается по формуле:
ИКИ = S'^a3Mbl (3)
Значения ИКИ у здоровых телок от 2-15 суток до 1 месяца повышаются, затем до 3 месяцев - находятся на постоянном уровне, к 6-месячному возрасту вновь снижаются и в последующем колеблются в пределах, соответствующим взрослым животным. У здоровых коров ИКИ возрастает при наиболее напряженных физиологических состояниях (табл. 1).
У животных с признаками сдвигов в обмене веществ изменения ИКИ носят разнонаправленный характер (рис. 8). Поскольку в начальной стадии развития метаболических нарушений содержание ВНСММ в плазме снижается, а ко-
личество ВНСММ, адсорбированное на эритроцитах, напротив, повышается, значения ИКИ снижаются. По мере усиления отклонений в обмене веществ происходит полное насыщение поверхности эритроцитов молекулами низкой и средней молекулярной массы, следствием чего является повышение содержания ВНСММ в плазме, а, следовательно, и значений ИКИ.
В совокупности, полученные результаты показали, что с повышением уровня сдвигов в обмене веществ усиливается дисбаланс в деятельности про- и антиоксидантной систем, вызывающий состояние оксидативного стресса, следствием которого является увеличение содержания ВНСММ в крови.
У телок и коров со слабо выраженными признаками метаболических нарушений установлена условно-вероятная положительная взаимосвязь уровня ВНСММ эритроцитов с показателем СРО, при этом коэффициент Пирсона соответственно равен 0,54 и 0,52 (р > 0,05). У коров с явно выраженными признаками выявлена вероятная корреляция изучаемых показателей, как в плазме, так и в эритроцитах, коэффициент Пирсона соответственно равен 0,81 и 0,85 (р < 0,01). В группе телок наблюдается вероятная или условно-вероятная взаимосвязь уровня ВНСММ плазмы и эритроцитов с показателем АОС, значения коэффициента корреляции соответственно равны 0,76 (р < 0,01) и 0,59 (р > 0,05). В то же время в группах коров со слабо и явно выраженными признаками нарушенного метаболизма взаимосвязи между содержанием ВНСММ и состоянием АОС не обнаружено: коэффициент Пирсона уровня ВНСММ в плазме с показателем АОС равен 0,05 и -0,02, а в эритроцитах - 0,22 и 0,21 (р > 0,05) соответственно.
Таким образом, значительная активация в крови процессов свободоради-кального окисления, снижение антиокислительной активности при одновременном повышении уровня ВНСММ свидетельствует об усилении функционирования системы детоксикации.
Интегральные индексы крови
Для повышения воспроизводимости метода определения ВНСММ предложены и изучены интегральные индексы плазмы (ИИПЛАЗМЫ, ед.) и эритроцитов (ИИэр, ед.) крови животных. Они представляют собой площади фигур, ограниченных спектральной кривой и осью абсцисс в диапазонах длин волн, соответствующих максимумам светопоглощения. Эти индексы отражают содержание веществ, поглощающих УФ-лучи в выбранных диапазонах длин волн, и рассчитываются по формулам:
ИИ
плазмы
(4)
ИИэр. = 4-Ю(282_294),
где Б - оптическая плотность, ед.; 4 - шаг измерения.
Для новорожденных животных рассчитывается по формуле:
ИИ
эр., нов,
(254-266)
(6)
Значения интегральных индексов крови клинически здоровых телок представлены в табл. 1. Примечательно, что у новорожденных животных их значения выше, чем у одномесячных. Стабилизация ИИплазмы и ИИэр. происходит к 1-и 6-месячному возрасту соответственно.
Таблица 1
Интегральные индексы крови здоровых телок (X ± в«!)
У здоровых коров значения индексов изменяются при наиболее напряженных физиологических состояниях, причем, максимальные отличия приходятся на заключительный этап сухостойного периода (табл. 2).
Таблица 2
Интегральные индексы крови здоровых коров
Группа
коров 3 1 Г-1 О, й и
я ы Я с и К К 5 5 К с о К К О К ч К " о 5 о Я Я 1 Я Я £ГГ>
раздой (контроль) 0,33 ± 2,29 ± 5,08 ± 0,13 ± 0,36 ± 0,44 ± 034 +
0,05 0,28 0,87 0,02 0,04 0,04 0,08
начальный этап 0,35 ± 2,30 ± 4,98 ± 0,12 ± 0,30 ± 037± 036 ±
сухостойности 0,04 0,26 0,43 0,01 0,03 0,05 0,05
заключительный этап 0,48 ± 1,45 ± 3,04+ 0,08 ± 0,21 + 0,57+ 0,51 ±
сухостойности 0,05** 0,29*** 0,71 *** 0,02*** 0,04** 0,09* 0,08*
новшепьность 0,49+ 2,03 ± 3,29+ 0,10+ 0ДЗ± 0,44+ 0,43+
0,06** 0,42 0,63*** 0,01* 0,06* 0,06 0,09
Значения ИИплазмы У животных в зависимости от уровня патологического обмена могут либо снижаться, либо повышаться, а значения ИИэр - увеличиваться относительно нормы (рис. 9).
Рис. 9. Значения интегральных индексов крови у животных при метаболических нарушений
При сопоставлении уровня ВНСММ и значений интегральных индексов крови у животных с признаками обменных отклонений в основном обнаружен практически одинаковый характер их изменений относительно нормы. Так, в объединенных группах телок и коров коэффициент Пирсона между ВНСММплазмы и ИИплазмы принимает значения 0,68 и 96 (р < 0,001), а между ВНСММэр и ИИэр - 0,62 (р < 0,01) и 68 (р < 0,001) соответственно.
С целью сокращения временных затрат на проведение анализов изучены экспрессные интегральные индексы плазмы (ЭИИгшазмы) и эритроцитов (ЭИИэр), представляющие собой оптическую плотность супернатантов при максимумах светопоглощения, которые рассчитываются по формулам:
^^И плазмы ^274
(7)
(8)
где D - оптическая плотность раствора, ед.
Для новорожденных животных ЭИИэр рассчитывается по формуле:
ЭИИэр „„, =DJi2 (9)
У здоровых телок разного возраста и коров при разных физиологических состояниях значения ЭИИплазмы в основном соответствуют ИИплазмьь а значения значения ЭИИэр - ИИэр (табл. 2).
В группах животных с проявлениями обменных отклонений также выявлен однотипный характер изменений экспрессных и соответствующих им инте-
гральных индексов крови. В объединенной группе телок коэффициент Пирсона пар: ИИплазмы_ЭИИплазмы и ИИэр-ЭИИэр соответственно равен 0,91 и 0,97, в группе коров - 0,93 и 0, 97 (р < 0,001). Это свидетельствуют, что экспрессные индексы крови быть использованы для контроля над состоянием биохимического профиля при массовой диспансеризации животных. В то же время они не позволяют выявлять в организме больных животных степень метаболических сдвигов с целью подбора патогенетически обоснованных методов терапии и контроля над их эффективностью.
Для выявления уровня патологического обмена веществ предложен и изучен относительный интегральный индекс (ИИотн> ед.), который представляет собой отношение интегральных индексов плазмы (5) и эритроцитов (6 или 7) и рассчитывается по формуле:
_ ^ плазмы (10)
Значения относительного индекса у клинически здоровых телок представлены в табл. 1. Его значения повышаются к 1 месяцу, в возрастном диапазоне от 1 до 3 месяцев находятся на постоянном уровне, к 6-месячному возрасту вновь снижаются, а в последующем стабилизируются. У коров они достоверно увеличиваются в период заключительного этапа сухостойности, а в период но-вотельности возвращаются к норме.
У животных с клиническими признаками метаболических нарушений динамика ИИогн в зависимости от уровня патологического обмена имеет разнонаправленный характер (рис. 9).
Для уменьшения временных затрат на выполнение анализов предложен и изучен относительный экспрессный индекс (ЭИИош, ед.), который представляет собой отношение экспрессных интегральных индексов плазмы (8) и эритроцитов (9 или 10). Он рассчитывается по формуле:
эии^ = Э™™ЮМЫ (И)
Значения ЭИИотн в группах клинически здоровых животных представлены в табл. 1 и 2, их данных которых видно, что характер изменения значений ЭИИотн такой же, как и ИИотн В группах крупного рогатого скота с проявлениями сдвигов в обмене веществ характер изменения относительно нормы также практически идентичен динамике что подтверждается наличием между ними вероятной корреляции. Так, в объединенной группе телок коэффициент Пирсона равен 0,98, а в группе коров - 0,92 (р < 0,001) соответственно. Результаты показывают возможность использования ЭИИотн для диагностики уровня патологического обмена.
21
В целом интегральный метод оценки метаболического статуса крупного рогатого скота, а, следовательно, и функционирования естественной системы детоксикации, основанный на спектрофотометрическом определении содержания ВНСММ, является хорошо воспроизводимым, простым и повышает биохимическую информативность при сокращении числа общепринятых анализов крови. Разработанные показатели следует использовать для разных целей. Для контроля над состоянием здоровья животных следует применять интегральные индексы (4,5,6). При массовой диспансеризации крупного рогатого скота предпочтительны экспрессные индексы (7,8,9). В случае выявления метаболических нарушений необходимо применять более чувствительные тесты - ЭИИотн (11) или ИИотн (Ю),илиИКИ(4).
Альбуминовые показатели сыворотки крови
В физиологических условиях эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов сыворотки крови - важные показатели функционирования системы детоксикации у телок в онтогенезе остаются на одном уровне (рис. 10). Причем, эффективное содержание этих белков практически соответствует общему.
2*15 1 3 6 9 12 18 24 сут. мес. мес. мес. мес. мес. мес. мес.
Рис. 10. Альбуминовые показатели сыворотки крови клинически здоровых телок Примечание: контроль-1 месяц.
При анализе альбуминовых показателей здоровых коров в периоды раздоя, начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности выявлено, что их значения практически не изменяются. При этом эффективная концентрация альбуминов равна 26,86 ± 2,57; 26,50 ± 2,30; 23,71 ± 2,34 и 25,27 ± 2,44; общая - 29,06 ± 2,39; 28,70 ± 2,20; 25,77 ± 2,37 и 27,31 ±2,18 г/л; связывающая способность - 92,35 ± 8,80; 92,58 ± 8,99; 92,50 ± 9,86 и 92,36 ± 9,60 % соответственно.
контроль мес контроль мес контроль мес контроль 1 степень 2 степень
Рис 11. Общая и эффективная концентрации и значения связывающей способности альбуминов сыворотки крови животных при метаболических нарушений
У животных с проявлениями сдвигов в метаболизме эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов снижаются относительно нормы, в то время как их общее количество имеет лишь тенденцию к изменению (рис.11).
Следует отметить, что степень изменения первых показателей является практически одинаковой. Так, в объединенной группе телок коэффициент Пирсона пар: ЭКА-ССА, ЭКА-ОКА и ССА-ОКА принимает значения 0,73 (р < 0,001), 0,45 (р < 0,05) и 0,38 (р > 0,05); в группе коров - 0, 92 (р < 0,001), 0,46 (р < 0,05) и 0,28 (р > 0,05) соответственно.
Таким образом, эффективная концентрация альбуминов и их связывающую способность, обладающие более высокой диагностической надежностью, чем общая концентрация этих белков, могут использоваться в качестве дополнительного теста для диагностики функционирования системы детоксикации, а также для контроля над эффективностью проводимой терапии.
Интегральные критерии крови
Спектрофотометрические методы позволяют оценить содержание только водорастворимых ВНСММ, и не характеризуют содержание гидрофобных молекул, в том числе токсичных олигопептидов. Вместе с тем, последние способны быстро связываться с клеточными мембранами и внутриклеточными белками и модифицировать их структуру, результатом чего является повышение мембранной проницаемости и ингибирование активности ряда ферментов. Гидрофобные пептиды находятся в плазме практически полностью в связанном состоянии в виде комплексов с альбуминами и липопротеинами низкой плотности. В связи с чем, сорбцию гидрофобных ВНСММ макромолекулами альбуминов можно рассматривать как важный механизм детоксикации организма, обеспечивающий многократное снижение свободной концентрации токсинов и их доставку в печень для последующей элиминации. Особое значение этот ме-
ханизм имеет для токсинов низкой и средней молекулярной массы, так как на эти соединения не срабатывает иммунная система организма.
Исходя из изложенного выше, были предложены и изучены интегральные показатели на основе уровня ВНСММ и ОКА крови. Интегральный показатель плазмы (ИП, ед.) представляет собой отношение интегрального индекса плазмы (5) и общей концентрации альбуминов сыворотки крови (г/л) и рассчитывается по формуле:
ИП.ИИоГГ.,00 (12)
В физиологических условиях значения ИП плазмы телок разного возраста между собой практически не различаются (рис. 12).
2-15 1 3 6 9 12 18 24 сут мес мес мес мес мес мес мес
Рис. 12. Значения интегральных показателей клинически здоровых телок Примечание: контроль - 1 месяц.
У коров в периоды: раздоя (контроль) и начального этапа сухостойности значения интегрального показателя - практически одинаковые (соответственно равны 8,20 ± 0,88; 8,53 ± 1,30), в период заключительного этапа сухостойности они снижаются до 5,65 ± 1,21ед. (р < 0,001), а в период новотельности приближаются к норме (равны 7,45 ± 1,44).
У животных с признаками нарушенного метаболизма ИП в зависимости от степени выраженности обменных нарушений либо снижается, либо возрастает относительно нормы (рис. 13), то есть позволяет выявить уровень патологического обмена.
К недостаткам ИП можно отнести то, что он не учитывает один из важных механизмов детоксикации ВНСММ - сорбцию этих молекул эритроцитами. Поэтому предложен и изучен интегральный критерий (ИК, ед.) крови, который представляет собой отношение ИИПЛАЗМЫ (5) и произведения двух показателей (6 или 7) и ОКА (г/л). Он рассчитывается по формуле:
В физиологических условиях значения ИК новорожденных телок - минимальные, к 1 месяцу они возрастают, к 6 месяцам вновь снижаются и стабилизируются (рис. 12). У здоровых коров в периоды: раздоя (контроль), начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности ИК соответственно равен: 1,70 ± 0,21; 1,63 ± 0,19; 2,19 ± 0,37 (р < 0,05) и 1,70 ± 0,31 ед. Из этих данных видно, что он снижается в период заключительного этапа сухостойности.
Интегральный критерий, также как и ИП, позволяет установить уровень патологического обмена, поскольку характер изменения его значений зависит от степени метаболических нарушений (рис. 13).
Для уменьшения временных затрат на проведение анализа предложен и изучен экспрессный интегральный критерий (ЭИК, ед.), который представляет собой отношение ЭИИплазмы (8) и произведения двух показателей ЭИИ(р 9 или 10) и ОКА (г/л). Он рассчитывается по формуле:
ЭИК = эииМ^КА'100' (14)
В физиологических условиях ЭИК таток в возрастном диапазоне от 2-15 суток до 1 месяца увеличиватся, затем до 3 месяцев практически не изменяется, к 6 месяцам вновь снижается и стабилизируется.
У коров ЭИК увеличивается непосредственно перед отелом, а после отела возвращается к норме. Этот критерий в периоды: раздоя (контроль), начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности соответственно принимает значения: 1,24 ± 0,14; 1,42 ±0,19; 1,81± 0,32 (р< 0,05) и 1,51± 0,25 ед.
В группах животных с клиническими проявлениями обменных отклонений характер изменения ЭИК относительно нормы практически идентичен динамике ИК (рис. 13), что подтверждается наличием между ними сильной положительной корреляции. Так, в объединенной группе телок коэффициент Пирсона пары ИК-ЭИК принимает значение 0,99, а в группе коров - 96(р < 0,001).
При сравнении эффективности биохимических показателей крови, позволяющих выявлять в организме уровень патологического обмена, таких как ИКИ (4), ИИотн (И), ЭИИотн (12), ИП (13), ИК (14) и ЭИК (15), установлено, что они обладают одинаковой диагностической значимостью. Поэтому с учетом экономической эффективности при массовой диспансеризации животных следует использовать ЭИИОтн
Перспективным, на наш взгляд, может стать использование показателей, основанных на изучении баланса между накоплением в крови и связыванием молекул низкой и средней молекулярной массы, в том числе и токсических, с целью оценки эффективности проводимой терапии при целом ряде заболеваний, сопровождающихся эндотоксикозом.
9 400
контроль контроль контроль контроль 1 степень 2 стелень
Рис. 13. Показатели ИП, ИК и ЭИК крови животных при метаболических нарушений
Так, изучена эффективность критерия интоксикации (КИ, ед.) у коров с послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом, сопровождающимся эндотоксикозом с разной степенью выраженности. Этот критерий учитывает содержание ВНСММ плазмы и эритроцитов крови (1), общую концентрацию альбуминов плазмы (ОКА, г/л) и рассчитывается по формуле:
(15)
где 100-эмпирический коэффициент.
Значения площадей усредненных спектрограмм плазмы и эритроцитов клинически здоровых коров в период новотельности соответственно равны 2,36 и 8,22 ед. В начальной стадии эндогенной интоксикации они повышаются соответственно до 10,5 и 17,3 (р < 0,001) ед. Во второй стадии наблюдается дальнейшее увеличение содержания ВНСММ, как в плазме, так и в эритроцитах крови до 19,0 и 25,7 ед. (р < 0,001) соответственно. В третьей стадии эндо-токсикоза происходит значительное повышение уровня этих молекул в плазме до 25,0 (р < 0,001), в то время как в эритроцитах крови он практически остается неизменным (27,8 ед.).
Концентрация альбуминов в плазме крови здоровых коров в период новотель-ности равна 28,8 ± 3,2 г/л (контроль). При 1-, 2- и 3-й стадии эндотоксикоза она снижается до 25,1 ± 2,9 (р > 0,05); 21,5 ± 2,3 (р < 0,05) и 19,4 ± 1,6 г/л (р < 0,05) соответственно.
Значения КИ в норме составляют от 0,5 до 2,0 ед. Величина КИ от 2,1 до 3,0 соответствует первой степени эндотоксикоза, от 3,1 до 4,5 - второй, от 4,6 до 6,0 -третьей степени, свыше 6,0 ед. - четвертой степени эндотоксикоза.
Необходимо подчеркнуть, что в ходе развития интоксикации образуются токсичные пептиды, способные угнетать тканевое дыхание, разобщать окисле-
ние и фосфорилирование, активировать пероксидное окисление липидов; инги-бировать ряд ферментов и т.д. [З.А. Туликова, 1983, 1990]. В результате их биологического воздействия наблюдаются пониженная толерантность к бактериальной и вирусной инфекции, недостаточность клеточного и гуморального иммунитета, ухудшение нервно-мышечной проводимости и т.д. Поэтому высокий уровень ВНСММ при низкой концентрации альбуминов крови больных животных обусловливают назначение в комплексе традиционной терапии таких средств как энтеросорбенты.
Значительно повышает чувствительность метода оценки функционирования системы детоксикации введение интегрального индекса интоксикации (ИИИ, ед.), который учитывает интенсивность свободнорадикальных процессов, состояние антиоксидантной системы и баланс между накоплением и связыванием в крови веществ низкой и средней молекулярной массы. Этот индекс рассчитывается по формуле:
где СРО - показатель свободнорадикального окисления сыворотки крови, ед.;
АОС - показатель антиоксидантной системы сыворотки крови, ед.;
- содержание веществ низкой и средней молекулярной массы плазмы крови, ед.;
- содержание веществ низкой и средней молекулярной массы эритроцитов крови, ед.;
ОКА - эффективная концентрация альбуминов сыворотки крови, г/л;
- соответственно значения показателей СРО, АОС, ЭКА в норме.
В норме ИИИ равен 1,0 ± 0,3 ед. Превышение этих значений свидетельствует о сдвигах в обмене веществ.
Таким образом, установить уровень патологического обмена (независимо от этиологических и нозологических особенностей болезни) с целью подбора патогенетически обоснованных методов терапии и контроля над их эффективностью помогут ИП (12), ИК (13), ЭИК (14) и КИ (15). Самым же объективным критерием оценки функционирования физиологических систем детоксикации животных является ИИИ (16).
Показатель сорбционной способность эритроцитов крови
В результате исследований выявлена зависимость сорбционной способности эритроцитов от возраста животных и физиологического состояния. В физиологических условиях самые высокие значения показателя ССЭ характерны для новорожденным телок (44,48 ±2,17 %), причем они достоверно выше, чем у одномесячных животных (р < 0,05). К 1-месячному возрасту телок буферная емкость эритроцитов снижается, к 6-и месяцам незначительно увеличивается, а
в последующем практически не изменяется. Показатель ССЭ у 1-, 3-, 6-, 9-, 12-, 18-, 24-месячных животных принимает соответственно значения: 37,44 ± 3,00; 40,20 ± 1,70; 41,28 ± 1,98; 41,79 ± 3,64; 42,44 ± 3,76; 42,31 ± 4,11; 42,09 ±4,12 %.
У клинически здоровых коров в периоды раздоя, начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности показатель ССЭ находится практически на постоянном уровне и принимает соответственно значения 42,52 ± 1,58; 41,67 ± 1,88; 40,78 ± 3,06; 40,49 ± 3,25 % (р > 0,05).
При анализе сорбционной способности эритроцитов крови телок с признаками метаболических нарушений в возрасте 6,9, 12 месяцев, а также у коров со слабо выраженными признаками обменных отклонений установлено, что она незначительно повышается соответственно до 45,39 ± 3,19; 46,67 ± 3,70; 47,03 ± 1,76; 38,97 ± 3,84 (р > 0,05), у коров с явно выраженными отклонениями - увеличивается достоверно до 52,44 ± 5,02 % (р < 0,01).
В связи с тем, что буферную емкость эритроцитов помимо ССЭ характеризует интегральный индекс эритроцитов (6), числовые значения этих показателей были подвергнуты корреляционному анализу. При этом между значениями ССЭ и ИИЭр в основном обнаружено наличие вероятной положительной взаимосвязи. Так, в объединенной группе телок коэффициент Пирсона равен 0,67, а в группе коров - 0,89 (р < 0,001).
Таким образом, полученные результаты показали, что определение буферной емкости эритроцитов с помощью показателя ССЭ является нецелесообразным, поскольку его можно заменить ИИэр.
Метаболические реакции при ацетальдегидной интоксикации
Для изучения взаимосвязи интенсивности процессов пероксидации с состоянием системы АОС, уровнем ВНСММ и энергетическим состоянием клетки при острой химической интоксикации с целью разработки интегрального подхода к оценке функционирования системы детоксикации и подбора патогенетически обоснованных методов коррекции возникающих нарушений проведен эксперимент на крысах
В качестве токсического агента выбран ацетальдегид - естественный метаболит, который в высоких концентрациях вызывает активацию свободноради-кальных реакций и нарушает некоторые механизмы антиоксидантной защиты [L Feihman, С. Lieber, 1999, М. Takahashi et al., 1994]. При современной нагрузке на любую живую систему токсикантов экзогенного происхождения, в том числе уксусного альдегида, присутствующего в некоторых кормах и биодобавках [В.А. Виноградов, М.Н. Кириллов, 2003], компоненты, формирующие обезвреживающую систему клетки, могут давать сбой. В этом случае образующийся в тканях ацетальдегид может послужить источником свободных радикалов и, как следствие, причиной свободнорадикальной патологии.
Рис. 14. Интегральные показатели крови крыс после введения ацетальдегида
Установлено, что в первые 6 часов после ацетальдегидной интоксикации в крови активируются реакции свободнорадикального окисления, мобилизуется антирадикальная защита и повышается содержание ВНСММ; начиная с 12 часов, эти процессы нормализуются (рис. 14).Причем между изучаемыми показателями в динамике эксперимента существует вероятная или условно-вероятная взаимосвязь (гср0-аос = 0,88; р < 0,001; гВнсмм плазмы-внсмм эр= 0,86 р < 0,001; Гсро-внсмм плазмы = 0,47, р > 0,05; Гсро-вмсмм эр = 0,49, р > 0,05; гА. ос-внсмм плазмы = 0,49, р > 0,05; гАос- внсмм эр = 0,49, р > 0,05).
Изучение энергетики клетки выявило выраженные изменения в уровне свободных пуриновых нуклеотидов в печени, особенно в первые 6 часов эксперимента (рис. 16). Показано, что снижение концентрации АТР в определенные сроки сопровождается повышением уровней AMP и ADP, причем ADP - в меньшей степени, и наоборот, повышение содержания основного макроэрга -снижением концентрации моно- и дифосфатов (Гдтр.лмр = —0,65, р > 0,05;
В то же время энергетический заряд системы AMP-ADP-ATP, характеризующий интенсивность реакций, связанных с потреблением энергии, на протяжении первых 6 часов эксперимента, ниже контрольных величин (рис. 16), что, очевидно, вызвано расходованием макроэргического соединения на процессы детоксикации ацетальдегида.
Следует отметить однонаправленный характер изменения значений энергетического заряда с содержанием АТР (гиряа.Атр = 0,89, р < 0,01) и разнонаправленный -с концентрациями ADP и AMP (г^^лср = -0,73, р < 0,05; г^д-аир = -0,90, р<0,01).
0ч 0,5ч 1ч 2ч 4ч 6ч 12ч 24ч
Рис. 16. Динамика концентраций ATP, ADP, AMP и значений энергетического заряда печени крыс после введения ацетальдегида
В эксперименте, особенно в первые часы, выявлены существенные изменения каталитической функции ксантиноксидазы сыворотки крови, принимающей участие в окислении ксантина и гипоксантина молекулярным кисло -родом, и содержания продукта, получаемого в результате этой реакции - мочевой кислоты. Причем между значениями этих показателей имеет место условно-вероятная корреляция (г = 0,54, р > 0,05). Активность ксантиноксидазы и концентрация мочевой кислоты повышаются уже через 0,5 часа после введения ацетальдегида (рис. 17). Через час активность фермента снижается, в то время как содержание мочевой кислоты поддерживается на том же уровне. Через 2 часа наблюдается увеличение значений обоих показателей, причем, более значительное - активности ксантиноксидазы. В последующие периоды исследования достоверных изменений каталитической функции ксантинокси-дазы сравнению с контрольными цифрами не обнаруживается. Однако изменение уровня мочевой кислоты продолжает носить фазовый характер.
На основании экспериментальных данных концепция токсического действия ацетальдегида представляется в следующем виде. Ключевым звеном в происходящих нарушениях, вызванных введением уксусного альдегида, является гиперпродукция активных форм кислорода, что наблюдается уже через полчаса после начала эксперимента. Накопление свободных радикалов происходит несколькими путями. Во-первых, они образуются при окислении ацетальдегида как в результате минорной реакции, катализируемой аль-
i
Ж
J ксантинокседаза
| мочевая кислота
1 120 ! 100
ииии
Рис. 17. Динамика активности ксантинокси-дазы и содержания мочевой кислоты сыворотки крови после введения ацетальдегида
дегидоксидазой, так и с помощью цитохром-Р-450-зависимых монооксигеназ. Во-вторых, источником АФК является ксантиноксидаза, принимающая участие в превращениях уксусного альдегида. В ходе чрезмерной активации свободно-радикальных реакций образуется огромное количество реакционноспособных интермедиатов кислорода, с которой антирадикальная защита «справляется», вероятно, не в полной мере, о чем свидетельствуют показатели СРО и АОС через 4-6 часов после введения токсического агента. Разобщение функционирования про- и антиоксидантных систем приводит к состоянию оксидативного стресса, который, в частности, характеризуется нарушением функционирования протеазной и антипротеазной систем. При этом в крови накапливаются продукты нормального и извращенного метаболизма с низкой и средней молекулярной массой, что подтверждается высокими значениями показателей ВНСММ плазмы и эритроцитов через 4-6 часов с начала эксперимента.
Синдром оксидативного стресса выражается и в усилении процессов пе-роксидации биомолекул с нарушением структуры и функций мембран и мем-браносвязанных ферментных систем, в частности митохондрий. Это, в свою очередь, вызывает разобщение процессов окислительного фосфорилирования, результатом чего является снижение концентрации основного макроэрга, что наблюдается на протяжении всех сроков эксперимента.
Поскольку нарушается основной путь наработки АТР, в гепатоцитах интенсифицируются гликолитические процессы, о чем косвенно свидетельствуют данные о снижении энергетического заряда адениловой системы при неизменной сумме этих нуклеотидов.
Однако, наряду с положительным эффектом, связанным с процессами субстратного фосфорилирования, гликолиз имеет и отрицательное значение, поскольку в организме накапливается большое количество молочной кислоты. Следствием высокой концентрации в клетке лактата могут быть два негативных эффекта: с одной стороны - развитие ацидоза, с другой - агрегация тромбоцитов и отек мозга.
Для нейтрализации молочной кислоты необходимо большое количество компонентов, обладающих основными свойствами, одним из источников которых является AMP. При сдвиге рН в кислую сторону, по-видимому, активируется АМР-дезаминаза, которая расщепляет AMP до IMP и аммиака. Последний нейтрализует молочную кислоту, а повышение концентрации IMP индуцирует ксантиноксидазу, которая способствует превращению IMP в гипоксантин и мочевую кислоту. Вероятно, именно этим механизмом можно объяснить высокую мощность ксантиноксидазы в эксперименте.
При этом уровень мочевой кислоты не всегда повышается в те же сроки, что, очевидно, связано с тем, что гипоксантин может быть использован на процессы синтеза нуклеотидов de novo. Незначительное повышение концентрации мочевой кислоты в первые часы после воздействия токсического агента, в свою
очередь, можно расценивать как позитивный факт, так как это соединение обладает антиоксидантными свойствами.
Следует отметить, что чрезмерное повышение мощности ксантиноксидазы может играть и отрицательную роль, а именно индуцировать развитие патологии за счет генерации АФК (супероксидного радикала и пероксида водорода). Кроме того, повышение активности этого энзима способствует индукции фос-фодиэстеразы. Действия последней проявляется в разрушении сАМР, который наряду с другими функциями является и стабилизатором лизосомальных мембран [П.П. Лактионов с соавт., 1999]. Изменение уровня сАМР также может быть вызвано уменьшением активности аденилатциклазы, образующей сАМР из АТР. Поскольку активность аденилатциклазы регулируется содержанием GTP и АТР, то значительное снижение концентрация АТР на протяжении всего эксперимента, очевидно, способствует падению активности аденилатциклазы, а, следовательно, и уровня сАМР.
Таким образом, активация свободнорадикальных процессов в крови при острой химической интоксикации приводит к повышению уровня ВНСММ и нарушению энергетического состояния клетки. Эти выводы подтверждают обоснованность использования интегрального подхода к оценке функционирования системы деток-сикации животных и могут быть использованы при подборе патогенетически обоснованных методов коррекции возникающих нарушений.
В целом полученные результаты свидетельствуют, что разработанный подход к оценке деятельности системы детоксикации организма крупного рогатого скота является методологически обоснованным и эффективным. По интенсификации процессов свободнорадикального окисления можно выявить адекватное усиление функционирования системы детоксикации. Истощение буферной емкости антиоксидантной системы, повышение уровня ВНСММ, снижение эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов, изменение сорбционной способности эритроцитов крови указывает на неадекватное его усиление. Значительно повышает чувствительность диагностики функционирования системы детоксикации организма животных использование интегральных критериев, включающих вышеперечисленные показатели и рассчитываемых по формулам. При наличии нарушений интегральные показатели должны использоваться с показателями, дифференцированно отражающих определенную патологию.
Новые данные о функционировании системы детоксикации крупного рогатого скота, могут послужить методологической основой для обоснования эффективной стратегии ветеринарной защиты сохранения здоровья животных и повышения продуктивности.
Доказано, что при контакте организма с повреждающим фактором значительной интенсивности или длительности (токсикант, радиация, патогенный микроорганизм) может развиться стрессовая дезадаптация, приводящая к констатируемой нозологически дифференцированной патологии. Регулируя моле-
кулярно-биохимические, структурно-функциональные и физиологические процессы, происходящие при стрессовой дезадаптации, наряду со снижением интенсивности действия неблагоприятных факторов, можно не допустить возникновения болезни [А.Г. Шахов и др., 2001].
Одним из звеньев профилактики болезней в современных практически полностью стрессогенных технологиях получения, выращивания и использования продуктивных животных, в качестве обязательного, является введение биологически активных веществ, обладающих антиоксидантными свойствами. Согласно нашим исследованиям, дозы антиоксидантов должны быть более высокими в рационах молодняка до 6 месяцев, поскольку состояние антирадикальной защиты стабилизируется только к этому возрасту. Коровы при наиболее напряженных физиологических состояниях (сухостойности и новотельности), сопровождающихся мобилизацией антиоксидантной системы, также нуждаются в повышенных концентрациях антиоксидантов.
Список использованных сокращений
АОС - антиоксидантная система АФК - активные формы кислорода
ВНСММ - вещества низкой и средней молекулярной массы
ОКА - общая концентрация альбуминов
ПОЛ - пероксидное окисление липидов
СРО - свободнорадикальное окисление
ССА - связывающая способность альбуминов
ССЭ - сорбционная способность эритроцитов
ЭКА -эффективная концентрация альбуминов
AMP - аденозин-5'-монофосфат
ADP - аденозин-5'-дифосфат
АТР - аденозин-5'-трифосфат
1. В физиологических условиях интегральные показатели интенсивности процессов свободнорадикального окисления (СРО) и состояния антиоксидантной системы (АОС) сыворотки крови телок стабилизируются к 2- и 6-месячному возрасту соответственно. У коров показатель СРО практически не изменяется при разных физиологических состояниях, в то время как АОС увеличивается в периоды сухостойности и новотельности. У животных с клиническими признаками метаболических нарушений показатель СРО повышается, а АОС, напротив, снижается.
2. В физиологических условиях коэффициент сбалансированности (КБ) сыворотки крови телок стабилизируется к 1-месячному возрасту. У коров его значения повышаются в период сухостойности. У животных с клиническими проявлениями патологического обмена веществ КБ снижается.
ВЫВОДЫ
3. В физиологических условиях содержание веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) плазмы и эритроцитов (1) крови телок стабилизируется к 1- и 6-месячному возрасту соответственно. У коров уровень ВНСММ плазмы крови снижается в период заключительного этапа сухостой-ности, а эритроцитов - в периоды заключительного этапа сухостойности и но-вотельности. У животных со слабо выраженными клиническими признаками метаболических сдвигов содержание ВНСММ плазмы крови снижается, а с явно выраженными признаками, напротив, увеличивается; содержание ВНСММ, адсорбированное на эритроцитах, в обоих случаях возрастает.
4. В крови крупного рогатого скота с клиническими проявлениями отклонений в обмене веществ существует взаимосвязь между активацией реакций свободнорадикального окисления, снижением антиоксидантной защиты и изменением содержания ВНСММ.
5. Между содержанием ВНСММ и соответствующими значениями интегральных индексов плазмы (4) и эритроцитов крови (5) у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях имеется высокая степень линейной положительной корреляции.
6. В физиологических условиях интегральный критерий интоксикации (ИКИ) и относительный интегральный индекс (ИИОтн) крови телок стабилизируются к 6-месячному возрасту. У коров их значения повышаются в периоды заключительного этапа сухостойности и новотельности. У животных со слабо выраженными клиническими проявлениями отклонений в обмене веществ ИКИ и ИИотн снижаются, ас явно выраженными, напротив, повышаются.
7. В физиологических условиях интегральный показатель (ИП) у телок разного возраста практически не изменяется, а интегральный критерий (ИК) стабилизируется к 6-месячному возрасту. У коров их значения снижаются в период заключительного этапа сухостойности. У животных со слабо выраженными клиническими признаками нарушенного метаболизма ИП и ИК снижаются, а с явно выраженными, напротив, повышаются.
8. Характер изменения интегральных критериев крови в парах: ИИплазмы
(4)- ЭИИщшмы (7), ИИэр (5)-ЭИИЭР <8),ИИ0тн (10)- ЭИИ0тн (П),ИК(13)
- ЭИК (14) у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях является практически идентичным.
9. Между значениями показателя сорбционной способности эритроцитов крови и ИИэр (5) у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях в основном имеет место линейная положительная корреляция.
10. В физиологических условиях эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов сыворотки крови телок разного возраста и коров при разных физиологических состояниях находятся практически на постоянном уровне. У животных с клиническими признаками патологического обмена веществ эти показатели снижаются.
11. В физиологических условиях значения критерия интоксикации (15) и индекса интоксикации (16) у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе практически не изменяются, у животных с клиническими проявлениями сдвигов в обмене веществ - повышаются.
12. Экспериментальные исследования на крысах выявили, что однократное пероральное введение ацетальдегида в дозе вызывает интенсификацию свободнорадикальных процессов, усиление активности антиоксидантной защиты и нарушение баланса между накоплением и связыванием ВНСММ в крови.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Результаты исследований могут быть использованы при написании соответствующих разделов и справочных руководств по физиологии и биохимии, в учебном процессе при подготовке биологов, зооинженеров и ветеринарных врачей.
2. Выявленные особенности функционирования про- и антиоксидантных систем сыворотки крови крупного рогатого скота являются нормой и могут быть использованы: при составлении рационов (дозы антиоксидантов должны быть более высокими в рационах молодняка, а также у коров при состояниях сухостойности и новотельности), для контроля над состоянием антиоксидант-ного статуса и выявления оксидативного стресса в организме животных с целью решения вопроса о применении системной антиоксидантной терапии.
3. Данные о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы, эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов, значениях интегральных индексов крови крупного рогатого скота являются нормой и могут использоваться для контроля над состоянием метаболического статуса животных и эффективностью проводимой терапии при болезнях различной этиологии.
4. Экспресс-метод определения альбуминов сыворотки крови может использоваться в лабораторных и производственных исследованиях, и при массовой диспансеризации крупного рогатого скота.
5. Полученные значения интегральных показателей крови могут использоваться в лабораторных и производственных исследованиях породных и индивидуальных особенностей функционирования физиологических систем деток-сикации организма крупного рогатого скота.
СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Степанова, И.П. Экспресс-метод определения этанола и ацетальдегида в биосредах / И.П. Степанова, В.Н. Ельцова, И.И. Медведовская // Вклад молодых ученых и специалистов в ускорение научно-технического прогресса отрасли: материалы науч.-практ. конф. - Омск, 1988. - С. 94-95.
2. Степанова, И.П. Сравнительный анализ эффективности гемосорбентов по отношению к уремическим токсинам средней молекулярной массы / И.П. Степанова и [др.] // Деп. во ВНИИМИ 25.08.93. - № 23590. - 4 с.
3. Токсины средней и высокой молекулярной массы и выведение их при гемо-сорбции / Л.Н. Юдина, И.П. Степанова, О.В. Атавина, А.Г. Бондарева // Деп. во ВНИИМИ 25.08.93. - № 23589. - 5 с.
4. Степанова, И.П. Структурные аспекты физиологической активности полипептидов средней молекулярной массы / И.П. Степанова // Актуальные проблемы инфекционных паразитарных и незаразных болезней домашних животных и меры борьбы с ними: материалы юбил. науч.-произв. конф. сотрудников и аспирантов ИВМ ОмГАУ: - Омск, 1998. - С. 288-292.
5. Сравнительный анализ интегральных критериев эндотоксикоза / И.П. Степанова, В.Е. Высокогорский, А.Г. Патюков //Диагностика, профилактика и лечение заразных и незаразных болезней, вопросы токсикологии, анатомии животных и птиц: материалы науч.-произв. конф. сотрудников и аспирантов ИВМ ОмГАУ. -Омск, 1999.-С. 205-208.
6. Степанова, И.П. Математическое моделирование при разработке интегральных индексов эндотоксикоза / И.П. Степанова и [др.] // Теоретические и клинические аспекты неотложных состояний: материалы межрегион, науч. конф.-Омск, 1999.-С. 38-41.
7. Степанова, И.П. Использование конформационного анализа пептидов в биологических исследованиях / И.П. Степанова, О.В. Атавина // Функциональные аспекты соматической патологии: материалы межрегиональной науч. конф. -Омск, 2000.-С. 67-68.
8. Биохимические индексы эндотоксикоза / Степанова И.П. и [др.] // Функциональные аспекты соматической патологии: материалы межрегиональной науч. конф. - Омск, 2000. - С. 63-66.
9. Степанова, И.П. Диагностическая ценность определения ВНСММ в плазме крови и эритроцитах коров / И.П. Степанова, Л.М. Дмитриева, В.И. Зайнчковский // Зоотехния.- 2001.-№ 12.-С.14-15.
10. Степанова, И.П. Биохимические интегральные индексы эндотоксикоза / И.П. Степанова, В.Е. Высокогорский, О.В. Атавина // Омский научный вестник. - 2002. - Приложение к 21 вып. - С. 91-95.
11. Степанова, И.П. Интегральная оценка метаболического статуса крупного рогатого скота / И.П. Степанова, Л.М. Дмитриева // Достижения ветери-
нарной медицины XXI веку: материалы международной науч. конф., посвященной 40-летию ИВМ АГАУ. - Барнаул, 2002. - С. 179-180.
12. Степанова, И.П. Спектрофотометрическое исследование крови крупного рогатого скота / Степанова И.П. и [др.] // Вестник Омского ун-та - 2002. -№4.-С. 53-57.
13. Пат. 2190851 РФ, МКИ 7 00Ш33/52. Способ диагностики степени эн-дотоксикоза / И.П. Степанова, В.Е. Высоко горский, А.Г. Патюков, О.В. Атави-на, О.В. Корпачева (РФ). № 200104614/14(004676); Заявл. 19.10.01; Опубл. 10.10.02, Бюл.№ 28.- 6 с.
14. Степанова, И.П. Взаимосвязь процессов пероксидного окисления липидов и антиоксидантной защиты с уровнем веществ низкой и средней молекулярной массы у крыс при ацетальдегидной интоксикации / И.П. Степанова, И.В. Конева, Л.М.Дмитриева//Омский научный вестник. - 2003.-№3.-С. 155-158.
\5.Мугак, В.В. Оценка сорбционной способности эритроцитов крови крупного рогатого скота / В.В. Мугак, И.П. Степанова, В.Д. Пьянов // Омский научный вестник. - 2003.-№ 3. - С. 160-162.
16. Степанова, И.П. Интегральный метод диагностики метаболических нарушений у коров / И.П. Степанова, И.В. Власова, Л.М. Дмитриева // Сельскохозяйственная биология. - 2003. -№ 4. - С. 9-13.
17. Степанова, И.П. Корреляции процессов пероксидного окисления ли-пидов и антиоксидантной защиты с содержанием веществ низкой и средней молекулярной массы / И.П. Степанова, В.В. Мугак, И.В. Конева // Вестник Омского ун-та, посвящ. 85-летию ИВМ ОмГАУ. - 2003. - № 4. - С. 70-73.
18. Степанова, И.П. Интегральная оценка обмена веществ у коров / И.П. Степанова, И.В. Власова, Л.М. Дмитриева // Зоотехния. - 2003. - № 10. - С. 10-11.
19. Степанова, И.П. Состояние процессов свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной системы у телок / И.П. Степанова, И.В. Конева, А.Я. Рябиков//Омский научный вестник.-2003.-№3.-С. 150-152.
20. Степанова, И.П. Биохимические показатели крови крыс при ацеталь-дегидной интоксикации / И.П. Степанова // Естественные науки в ОмГАУ. Современное состояние и перспективы развития: материалы науч.-практ. конф. сотрудников ОмГАУ. - Омск: Изд-во ФГОУ ВПО «ОмГАУ». - 2004. - С 85-93.
21. Степанова, И.П. Интегральные показатели обмена веществ у крупного рогатого скота / И.П. Степанова // Мясная индустрия. - 2004. - № 4. - С. 56-59.
22. Степанова, И.П. Корреляция процессов пероксидного окисления ли-пидов и антиоксидантной системы с содержанием веществ низкой и средней молекулярной массы при ацетальдегидной интоксикации / И.П. Степанова, И.В. Конева, Л.М. Дмитриева // Вестник Омского аграрного ун-та. - 2004. - № 2. -С. 30-33.
23. Степанова, И.П. Метод определения эндогенной интоксикации у коров / И.П. Степанова // Естественные науки в ОмГАУ. Современное состояние и перспективы развития: материалы науч.-практ. конф. сотрудников ОмГАУ. -Омск: Изд-во ФГОУ ВПО «ОмГАУ». - 2004. - С 78-85.
24. Степанова, И.П. Метод диагностики эндогенной интоксикации / И.П. Степанова // Вестник Омского аграрного ун-та. - 2004. - № 2. - С. 30-33.
25. Степанова, ИЛ. Состояние свободнорадикального окисления и анти-оксидантной системы у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе / И.П. Степанова // Вестник Омского аграрного ун-та. - 2004. - № 2. - С. 28-30.
26. Степанова, ИЛ. Экспресс-метод определения альбуминов сыворотки крови / И.П. Степанова, И.В. Власова, В.В. Мугак // Зоотехния. - 2004. -№7.-С. 31-32.
27. Степанова, ИЛ. Биохимические аспекты интоксикации: монография / И.П. Степанова, Л.М. Дмитриева. - Омск: Изд-во ИВМ ОмГАУ, 2004. - 152 с, (тираж 500 экз.).
28. Степанова, ИЛ. Биохимический метод диагностики эндогенной интоксикации у коров / И.П. Степанова, Л.М. Дмитриева, В.И. Зайнчковский // Ветеринария. -2004. - № 7. - С. 35-39.
Рег. № 105. Сдано в набор 29.10.04. Подписано в печать 02.11.04. Печать оперативная. Бум. офсетная. Формат 60x84 1/16.
Гарнитура «Times New Romen» Усл.-печ. л. 2,0. Уч.-изд. л. 2,0. Тираж 100 экз. Заказ 176.
Типография издательства ИВМ ОмГАУ, 644007, Омск, Октябрьская, 92
Р2бвб 7
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Степанова, Ирина Петровна
ф Введение.
1. Обзор литературы
1.1. Общие аспекты адаптации организма и системы де токсикации ксенобиотиков.
1.1.1. Стресс-системы и стресс-лимитирующие реакции.
1.1.2. Метаболизм и детоксикация ксенобиотиков.
1.2. Развитие химической патологии и апоптоз.
1.2.1. Первичные токсины и клеточные медиаторы.
1.2.2. Основные про- и антиапоптические белки. Механизм развития апоптоза.
1.3. Классификация токсинов и лабораторная диагности ' ка интоксикации.
2. Собственные исследования.
2.1. Материалы и методы исследования.
2.2. Обоснование методологии использования интегрального подхода к оценке функционирования физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота.
2.3 Показатели свободнорадикальных реакций крови крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях.
2.4 Корреляция показателей свободнорадикального окисления и антирадикальной защиты с уровнем веществ низкой и средней молекулярной массы крови крупного рогатого скота.
2.5 Интегральные индексы функционирования физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота на основе данных о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы крови.
2.6 Связывающая способность сывороточных альбуминов как критерий функционирования физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота.
2.7 Интегральные показатели функционирования физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота на основе данных о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы, общей концентрации аль буминов и показателей свободнорадикальных реакций крови.
2.8 Сорбционная способность эритроцитов как инте- 210 тральная характеристика функционирования физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота
2.9 Метаболические реакции при ацетальдегидной интоксикации.
3. Обсуждение результатов.
Выводы.
Практические предложения.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Интегральный подход к оценке функционирования физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе"
Значительные стрессовые нагрузки в современных условиях на организм сельскохозяйственных животных, в том числе крупного рогатого скота, могут понижать эффективность системы естественной деток-сикации и, в свою очередь, устойчивость организма к влиянию тосикан-тов. Поэтому для сохранения продуктивного здоровья животных необходим постоянный контроль над функционированием системы детокси-кации с учетом возрастных и других факторов. Кроме того, сведения об особенностях ее деятельности в зависимости от возраста и физиологического состояния следует учитывать при организации системы адаптационных мероприятий по ветеринарной защите здоровья животных.
В настоящее время для оценки системы детоксикации крупного рогатого скота в основном используют метаболические показатели, характеризующие функциональное состояние печени и почек, однако они не всегда обладают высокой диагностической надежностью. Совершенствованию этой оценки препятствует недостаточная изученность метаболических реакций, обеспечивающих детоксикацию, с помощью современных биохимических методов (с учетом возраста и физиологического состояния).
К универсальной системе детоксикации относится антиоксидант-ная система (АОС). В последние годы для оценки свободнорадикальных процессов тест-объекта все шире используется метод биохемилюминес-ценции [21, 27]. Однако у крупного рогатого скота с помощью этого метода в физиологических условиях не изучались возрастные изменения и особенности этих реакций при разных физиологических состояниях. Малочисленными являются сведения о показателях биохемилюминес-ценции крови животных при патологических состояниях [134].
Интегральный показатель на основе данных о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) считается универсальным биохимическим маркером, отражающим уровень патологического метаболизма, а, следовательно, и деятельность системы детоксикации [48, 69]. Но в литературе отсутствуют сведения об уровне ВНСММ и о его соотношении с состоянием свободнорадикальных процессов в крови крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях.
Недостаточно сведений о взаимосвязи интенсивности свободнорадикальных реакций с процессами катаболизма белков и энергетическим состоянием клетки при острой химической интоксикации.
Конъюгирование ксенобиотика с альбуминами является первым безопасным и эффективным механизмом детоксикации при окислении веществ в печени [53]. В то же время практически отсутствуют сведения об эффективной концентрации (ЭКА) и связывающей"способности сывороточных альбуминов (ССА) у крупного рогатого скота разного возраста в норме и при патологии.
Одним из интегральных показателей функционирования системы детоксикации животных является сорбционная способность эритроцитов г
ССЭ). Однако данных об этом показателе у крупного рогатого скота в физиологических условиях в постнатальном онтогенезе до сих пор не имеется. Недостаточно сведений о сорбционной способности эритроцитов животных при патологических состояниях [78].
Это показывает необходимость в разработке нового более совершенного методологически обоснованного подхода к оценке функционирования системы детоксикации крупного рогатого скота.
Цель исследования
Разработка интегрального подхода к оценке функционирования системы детоксикации организма крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе для совершенствования в современных условиях адаптационной стратегии защиты здоровья и продуктивности животных.
Задачи исследования:
1. Обосновать методологию использования интегрального подхода к оценке функционирования системы детоксикации организма крупного рогатого скота.
2. Дать интегральную оценку интенсивности свободноради-кальных процессов крови крупного рогатого скота в физиологических условиях и при метаболических нарушениях. Разработать интегральный показатель сбалансированности реакций свободнорадикального окисления биомолекул и состояния антирадикальной системы для характеристики системы детоксикации организма животных.
3. Установить степень сопряжения интенсивности процессов свободнорадикального окисления и активности антиоксидантной защиты с уровнем соединений низкой и средней молекулярной массы крови крупного рогатого скота в физиологических условиях и при сдвигах в обмене веществ.
4. Разработать интегральные индексы для характеристики системы детоксикации организма крупного рогатого скота на основе данных о содержании ВНСММ крови в физиологических условиях и при метаболических нарушениях.
5. Охарактеризовать эффективную концентрацию и связывающую способность сывороточных альбуминов крупного рогатого скота в физиологических условиях и при сдвигах в обмене веществ и оценить эффективность использования этих показателей для характеристики системы детоксикации организма животных.
6. Разработать интегральные показатели для оценки функционирования системы детоксикации организма крупного рогатого скота на основе данных о содержании ВНСММ и альбуминовых показателях крови.
7. Оценить сорбционную способность эритроцитов крови крупного рогатого скота в норме и при сдвигах в метаболизме; на основании этих данных установить целесообразность использования интегрального показателя ССЭ для характеристики функциональной системы деток-сикации организма животных.
8. Охарактеризовать функционирование про- и антиоксидант-ных систем, процессы катаболизма белков и энергетическое состояние клетки в эксперименте при острой ацетальдегидной интоксикации.
Научная новизна
С помощью интегрального подхода расширены представления о функционировании в физиологических условиях антиоксидантной системы крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе. Впервые показано, что интегральные показатели сыворотки крови, характеризующие интенсивность свободнорадикальных процессов и состояние антиоксидантной системы, стабилизируются к 2- и 6-месячному возрасту телок соответственно. У коров в наиболее напряженные для организма физиологические периоды процессы пероксидации протекают на стационарном и низком уровне, а активность антирадикальной защиты усиливается.
Впервые получены сведения об уровне веществ низкой и средней молекулярной массы у клинически здорового крупного рогатого скота с учетом возраста и физиологического состояния. Установлено, что содержание этих веществ в плазме и эритроцитах крови телок стабилизируется к 1-й 6-месячному возрасту соответственно. В крови коров в периоды заключительного этапа сухостойности и новотельности содержание молекул низкой и средней молекулярной массы снижается.
Впервые установлена взаимосвязь интенсивности протекания свободнорадикальных реакций с уровнем веществ низкой и средней молекулярной массы в крови животных в физиологических условиях и при метаболических нарушениях. При активации свободнорадикальных процессов усиливается образование этих веществ и сорбция их эритроцитами крови. При состоянии окислительного стресса наблюдается повышенное содержание соединений низкой и средней молекулярной массы в плазме и эритроцитах крови.
Выявлены особенности реакций конъюгирования естественных метаболитов с альбуминами сыворотки крови у крупного рогатого скота в физиологических условиях. Впервые показано, что эффективная концентрация и связывающая способность этих белков практически не изменяется у телок разного возраста так же, как и у коров при разных физиологических состояниях. Установлено снижение эффективной концентрации и нарушение связывающей функции альбуминов при нарушенном метаболизме.
Обнаружены возрастные изменения показателя сорбционной способности эритроцитов у клинически здорового крупного рогатого скота. Впервые показано, что его числовые значения с 1-месячного возраста телок находятся практически на постоянном уровне. Сорбционная способность эритроцитов коров практически не изменяется при разных физиологических состояниях. При состоянии окислительного стресса значения этого показателя увеличиваются.
Получены новые данные о сопряжении свободнорадикальных реакций с процессами катаболизма белков и энергетическим состоянием клетки в норме и при острой интоксикации ацетальдегидом.
Методологически обоснована целесообразность и доказана в исследованиях эффективность использования нового интегрального подхода к оценке функциональной системы детоксикации крупного рогатого скота. Интегральный подход разработан на основе показателей крови, характеризующих интенсивность свободнорадикальных процессов, состояние антиоксидантной системы, содержание веществ низкой и средней молекулярной массы в плазме и эритроцитах, эффективную концентрацию и связывающую способность альбуминов.
Адекватное усиление функционирования физиологических систем детоксикации можно выявить по интенсификации реакций свободнора-дикального окисления. О неадекватном их усилении позволяет судить значительная активация в крови свободнорадикальных процессов, истощение антиоксидантной системы, повышенное содержание веществ низкой и средней молекулярной массы в плазме, снижение сорбционной емкости эритроцитов, эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов.
Практическая значимость
Результаты исследований используются в лабораторной диагностике для оценки функционирования системы детоксикации организмов человека и животных. Имеется патент «Способ оценки эндотоксикоза организма». Поданы заявки на изобретения: № 2003122548, приоритет от 18.07.2003 («Способ диагностики эндотоксикоза организма»); № 2003111900, приоритет от 12.09.2003 («Способ диагностики эндотоксикоза у коров с острым гнойно-катаральным эндометритом»), № 2004100926, приоритет от 09.01.2004 («Способ диагностики степени интоксикации организма»).
Коэффициент сбалансированности, представляющий собой отношение показателей состояния антиоксидантной системы и интенсивности процессов пероксидации, является объективным критерием оценки антиоксидантного статуса и рекомендуется для своевременного выявления оксидативного стресса в организме животных.
Интегральные индексы на основе данных о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы крови крупного рогатого скота позволяют оценить соотношение между активностью протеазной и ан-типротеазной систем.
Эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов сыворотки крови крупного рогатого скота являются важными методами диагностики сдвигов в обмене веществ.
Разработанные интегральные индексы на основе изучения баланса между накоплением веществ низкой и средней молекулярной массы в крови и сорбцией этих соединений эритроцитами и альбуминов крови позволяют выявлять уровень патологического обмена.
Модифицированный в работе спектрофотометрический метод определения сывороточных альбуминов крупного рогатого скота является точным, воспроизводимым, экспрессным и может быть широко использован в ветеринарной лабораторной диагностике.
Новые данные, полученные с помощью интегрального подхода к оценке функционирования системы детоксикации крупного рогатого скота, могут послужить методологической основой для обоснования эффективной стратегии ветеринарной защиты сохранения здоровья животных и повышения продуктивности.
Результаты исследований используются в лекционных курсах, ла-бораторно-практических занятиях по физиологии и биохимии на кафедрах нормальной и патологической физиологии, химии ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»; физиологии, биохимии и химии ФГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия»; биологии ФГОУ ВПО «Омский государственный педагогический университет»; физиологии и биохимии животных ФГОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет». Они отражены в учебном пособии для студентов, рекомендованном Учебно-методическим объединением вузов РФ по образованию в области зоотехнии и ветеринарии (Практикум по биохимии печени и почек / И.П. Степанова [и др.]. — Омск: ИВМ ОмГАУ, 2003 .- 108 е.).
Основные положения, выносимые на защиту
1. Интегральные характеристики крови, отражающие функционирование естественной системы детоксикации организма крупного рогатого скота — интенсивность свободнорадикальных процессов и состояние ан-тиоксидантной системы, содержание веществ низкой и средней молекулярной массы, эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов, и сорбционная способность эритроцитов, изменяются в по-стнатальном онтогенезе и зависят от физиологического состояния животных.
2. Свободнорадикальные реакции, протекающие в крови крупного рогатого скота, сопряжены с процессами образования и связывания веществ низкой и средней молекулярной массы.
3. Интегральный подход к оценке функционирования физиологической системы детоксикации крупного рогатого скота, заключающийся в комплексном использовании показателей крови: свободнорадикального окисления, состояния антиоксидантной системы, содержания веществ низкой и средней молекулярной массы и альбуминов, является методологически обоснованным и эффективным.
Адекватное усиление функционирования физиологических систем детоксикации можно выявить по интенсификации реакций свободнорадикального окисления. О неадекватном его усилении позволяет судить значительная активация в крови свободнорадикальных процессов, истощение антиоксидантной системы, повышение содержания веществ низкой и средней молекулярной массы, изменение сорбционной емкости эритроцитов, снижение эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов.
Апробация работы
Основные результаты представлены на XVIII съезде Российского физиологического общества (Казань, 2002), на 1Усъезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002), на II Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000) и других Всероссийских научных и научно-практических конференциях и симпозиумах.
Объём и структура диссертации
Диссертация изложена на 324 страницах печатного текста, содержит 82 таблицы, 76 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, изложения материалов и методов исследования, 8 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и приложения. Библиографический список включает 270 источников, в том числе 142 на русском языке.
Заключение Диссертация по теме "Физиология", Степанова, Ирина Петровна
выводы
1. В физиологических условиях интегральные показатели интенсивности процессов свободнорадикального окисления (СРО) и состояния антиоксидантной системы (АОС) сыворотки крови телок стабилизируются к 2- и 6-месячному возрасту соответственно. У коров показатель СРО практически не изменяется при разных физиологических состояниях, в то время как АОС увеличивается в периоды сухостойности и новотельности. У животных с клиническими признаками метаболических нарушений показатель СРО повышается, а АОС, напротив, снижается.
2. В физиологических условиях коэффициент сбалансированности (КБ) сыворотки крови телок стабилизируется к 1-месячному возрасту. У коров его значения повышаются в период сухостойности. У животных с клиническими проявлениями патологического обмена веществ КБ снижается.
3. В физиологических условиях содержание веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) плазмы и эритроцитов (1) крови телок стабилизируется к 1- и 6-месячному возрасту соответственно. У коров уровень ВНСММ плазмы крови снижается в период заключительного этапа сухостойности, а эритроцитов — в периоды заключительного этапа сухостойности и новотельности. У животных со слабо выраженными клиническими признаками метаболических сдвигов содержание ВНСММ плазмы крови снижается, а с явно выраженными признаками, напротив, увеличивается; содержание ВНСММ, адсорбированное на эритроцитах, в обоих случаях возрастает.
4. В крови крупного рогатого скота с клиническими проявлениями отклонений в обмене веществ существует взаимосвязь между активацией реакций свободнорадикального окисления, снижением антиоксидантной защиты и изменением содержания ВНСММ.
5. Между содержанием ВНСММ и соответствующими значениями интегральных индексов плазмы (5) и эритроцитов крови (6) у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях имеется высокая степень линейной положительной корреляции.
6. В физиологических условиях интегральный критерий интоксикации (ИКИ) и относительный интегральный индекс (ИИ0тн.) крови телок стабилизируются к 6-месячному возрасту. У коров их значения повышаются в периоды заключительного этапа сухостойности и новотель-ности. У животных со слабо выраженными клиническими проявлениями отклонений в обмене веществ ИКИ и ИИ0тн. снижаются, а с явно выраженными проявлениями, напротив, повышаются.
7. В физиологических условиях интегральный показатель (ИП) у телок разного возраста практически не изменяется, а интегральный критерий (ИК) стабилизируется к 6-месячному возрасту. У коров их значения снижаются в период заключительного этапа сухостойности. У животных со слабо выраженными клиническими признаками нарушенного метаболизма ИП и ИК снижаются, а с явно выраженными признаками, напротив, повышаются.
8. Характер изменения интегральных критериев крови в парах: ИИпллзмы (5) - ЭИИплазмы (8), ИИЭР. (6) - ЭИИЭР. (9), ИИ0Тн. (11) -ЭИИотн. (12), ИК (14) — ЭИК (15) у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях является практически идентичным.
9. Между значениями показателя сорбционной способности эритроцитов и ИИЭр. (6) у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях в основном имеет место линейная положительная корреляция.
10. В физиологических условиях эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов сыворотки крови телок разного возраста и коров при разных физиологических состояниях находятся практически на постоянном уровне. У животных с клиническими признаками патологического обмена веществ эти показатели снижаются.
11. В физиологических условиях значения критерия интоксикации (16) и индекса интоксикации (17) у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе практически не изменяются, у животных с клиническими проявлениями сдвигов в обмене веществ повышаются.
12. Экспериментальные исследования на крысах выявили, что однократное пероральное введение ацетальдегида в дозе 1/2 LD5o вызывает интенсификацию свободнорадикальных процессов, усиление активности антиоксидантной защиты и нарушение баланса между накоплением и связыванием ВНСММ в крови.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Результаты исследований интегральных показателей крови, отражающих функционирование физиологических систем детоксикации крупного рогатого скота (интенсивности свободнорадикального окисления и состояния антиоксидантной системы, содержания веществ низкой и средней молекулярной массы плазмы и эритроцитов, эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов, сорбционной способности эритроцитов) в постнатальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях могут быть использованы при написании соответствующих разделов и справочных руководств, в учебном процессе для чтения лекций и проведения практических занятий по физиологии и биохимии на биологических, зооинженерных и ветеринарных факультетах высших учебных заведений.
3. Выявленные особенности функционирования про- и антиокси-дантных систем сыворотки крови крупного рогатого скота являются нормой и могут быть использованы: при составлении рационов, для контроля над содержанием антиоксидантов в рационах, для выявления ок-сидативного стресса в организме животных с целью решения вопроса о применении системной антиоксидантной терапии.
4. Данные о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы, эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов, значениях интегральных индексов крови крупного рогатого скота являются нормой и могут использоваться для контроля над состоянием метаболического статуса животных и эффективностью проводимой терапии при болезнях различной этиологии.
6. Экспресс-метод определения альбуминов сыворотки крови может использоваться в лабораторных и производственных исследованиях и при массовой диспансеризации крупного рогатого скота.
7. Полученные значения интегральных показателей крови могут использоваться в лабораторных и производственных исследованиях породных и индивидуальных особенностей функционирования физиологических систем детоксикации организма крупного рогатого скота.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Степанова, Ирина Петровна, Новосибирск
1. А.С. 1409931 СССР, МКИ 4 G01N33/48 Способ диагностики тяжести течения пищевой токсикоинфекции / М.А. Андрейчин, Г.П. Китай, Я.В. Корбыло (СССР). №3995209/28 - 14; Заявл. 24.12.85; опубл. 15.07.88. Бюл. № 26. - 4 с.
2. Абрамченко, В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве / В.В. Абрамченко. СПб.: ДЕАН, 2002. - 400 с.
3. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / Г.В. Родоман и др. М.: Геотар, 1998. - 335 с.
4. Анохин, П.К. Узловые вопросы теории функциональной системы / П.К. Анохин М.: Наука, 1980. - 196 с.
5. Арутюнян, А.В. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма / А.В. Арутюнян, Е.Е. Дубинина, Е.Е. Зыбина. СПб.: ИКФ «Фолиант», 2000. - 104 с.
6. Ассоциативное участие различных систем организма в развитии патологии / A.M. Земсков и др. // Успехи соврем, биологии. 2003. - Т. 123, №2.-С. 138-146.
7. Балинер, Л.М. Биолюминесцентное определение жизнеспособных клеток в лиофилизированных вакцинах / В.Г. Балинер // Ветеринария. — 2002.-№9.-С. 22-27.
8. Барабой, В.А. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Галонин. Л.: Наука, 1991. - С. 17-19.
9. Баранников, В Д. Действие некоторых стресс-факторов на организм телят / В.Д. Баранников, И.А.Федянина // Ветеринария. 1997. - № 11.-С.48 - 50.
10. Барханов, М.И. Возрастные особенности системы циклических нук-леотидов у детей / М.И. Барханов // Клин. лаб. диагностика. 1995. - № З.-С. 20-21.
11. Белушкина, Н.Н. Апоптоз в патогенезе заболеваний. Биохимические основы патологических процессов / Н.Н. Белушкина, Е.Ю. Москалева, С.Е. Северин. М.: Медицина, 2000. - 304 с.
12. Биологическое обоснование потребности ремонтных телок в селене при травяном типе кормления / В.А Кокорев и др. // С.-х. биология. — 2002.- №6.-С. 85-95.
13. Биохимические основы патологических процессов: учеб. пособие / Под ред. Е.С. Северина. М.: Медицина, 2000. - 304 с.
14. Брюне, Б. Апоптическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации и антогонистические сигнальные пути / Б. Брюне, К. Сандау, фон А. Кнетен // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 7. - С. 966-975.
15. Ванин, А.Ф. Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективы исследований / А.Ф. Ванин // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 7. - С. 867-869.
16. Величковский, Б.Т. Свободнорадикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды / Б.Т. Величковский // Вест. РАМН. 2001. - № 6. - С. 45-52.
17. Венкстерн, Т.В. Спектры поглощения минорных компонентов и некоторых олигонуклеотидов рибонуклеиновых кислот / Т.В. Венкстерн, А.А. Баев М.: Наука, 1967. - 79 с.
18. Винк, Д. А. Значение химических свойств оксида азота для леченияионкологических заболеваний / Д.А. Винк, И. Водовоз, Дж. А. Кук. // Биохимия. 1998. - Т. 63. - Вып. 7. - С. 948-957.
19. Виноградов, А.Ю. Свободнорадикальные процессы и продукты азотистого катаболизма в крови при гипоксии и гипероксии: автореф. дис. . канд. биол. наук / А.Ю. Виноградов. Р.-на-Дону, 1995. - 16 с.
20. Виноградов, В.А. Кормовые дрожжи-белотин в рационе коров / В.А. Виноградов, М.Н. Кириллов // Молочное и мясное скотоводство. — 2003. № 1. - С. 19-22.
21. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, О.А. Азизова, А.И. Деев // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика: бюл. ВИНИТИ.- 1991. Т. 29. - С. 85-88.
22. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестн. РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-51.
23. Влияние мексидола и его структурных компонентов на содержание углеводородов и перекисное окисление липидов при остром стрессе / Т.А.Девяткина и др. // Вопросы мед. химии. 1999. - № 3. - С. 63-67.
24. Влияние пирувата, треонина и фосфоэтаноламина на обмен эндогенного ацетальдегида у крыс с токсическим поражением печени / П.С. Пронько и др. // Вопросы мед. химии. 2002. - Т. 48, № 3. - С. 278-285.
25. Внутриклеточный окислительный процесс и апоптоз / Н.К. Зенков и др. // Успехи соврем, биологии. 1999. - Т. 119, № 5. - С. 440-450.
26. Возрастные особенности свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной защиты в эритроцитах здоровых людей / Т.Д. Журавлева и др. // Клин. лаб. диагностика 2003. — № 8. - С.17-18.
27. Волчегорский, И.А. «Средние молекулы» как эндогенные модуляторы стресса / И.А. Волчегорский, Ю.К. Костин // Патол. физиология. 1994. - № 4.-С. 23-26.
28. Габриелян, Р.Э. Особенности обмена веществ у коров в зависимости от физиологического состояния / Р.Э. Габриелян // Зоотехния. 2001. — № 7. - С.21—23.
29. Габриэлям Н.И., Опыт использования показателя средних молекул в крови для диагностики нефрологических заболеваний у детей / В.И. Липатова // Лаб. дело. 1984. - № 3. - С. 138-140.
30. Гильмиярова, Ф.Н. Ключевые механизмы повреждения и адаптации в организме при многофакторном влиянии экотоксикантов / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская // Вопросы мед. химии. 1996. - Т. 42, вып. 4. - С. 344-347.
31. Гипотеза средних молекул в практике клинической нефрологии / Н.И. Габриэлян и др. // Терапевт, арх. 1983. - № 6. - С. — 76-78.
32. Голиков, С.Н. Общие механизмы токсического действия / С.Н. Голиков, А.А. Тиунов. Л.: Медицина, 1986. - 280 с.
33. Головацкий, ИД. Нуклеотидный фонд и некоторые стороны обмена эндогенных нуклеотидов сердечной в мышце / И.Д. Головацкий, А.Я. Красневич // Биохимия. 1970. -Т.35. -№ 2. - С.296-302.
34. Гуревич, К.Г. Оксид азота: биосинтез, механизмы действия, функции / К.Г. Гуревич, Н.Л. Шимановский // Вопросы биол. мед. и фармацевт, химии.-2000.-№ 4.-С. 16-22.
35. Давтян, Т.К. О взаимодействии иммунного и адаптивного ответов / Т.К. Давтян, Л.А. Аванесян // Успехи соврем, биологии 2001. - Т. 121, № 3. - С. 275-286.
36. Дадали, В.А. Биохимические механизмы детоксицирующего и онко-протекторного действия микронутриентов, растительных индолов и изо-тиоцианатов / В.А. Дадали, Т.Т. Березов // Вопросы биол. мед. и фармацевт. химии. 1998. - № 4. - С. 44-52.
37. Динамика накопления и связывания продуктов эндогенной интоксикации при распространенном перитоните в ранний послеоперационный период / Г.В. Пахомова и др. // Вест, интенсив, терапии 2003. - № 1. -С. 34-36.
38. Дубинина, Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса / Е.Е. Дубинина // Вопросы мед. химии. 2001. — Т. 47, № 6. -С. 561-581.
39. Дячина, Е.Г. Активность ксантиноксидазы в сыворотке крови у больных с хирургическими заболеваниями печени, желчевыводящих путей и другими заболеваниями / Е.Г. Дячина // Лаб. дело. 1973. - № 11. - С. 647-649.
40. Зоров, Д. Б. Митохондриальный транспорт нуклеиновых кислот. Участие бензодиазепинового рецептора / Д.Б. Зоров // Биохимия. — 1996. -Т. 61, вып. 7.-С. 1320-1327.
41. Илюха, В. А. Антиоксидантные ферменты в физиологических адапта-циях млекопитающих (сравнительно-видовой, онтогенетический и прикладной аспекты): автореф. дис. . д-ра биол. наук / В.А. Илюха. — Сыктывкар, 2004. 34 с.
42. Иммунная реактивность как фактор регуляции гомеостаза организма / A.M. Земсков и др. // Успехи соврем, биологии. 1999. - Том 119, № 2. -С. 99-114.
43. Казаков, И.В. Уремические токсины средней молекулярной массы и выведение их при гемофильтрации / И.В. Казаков, B.C. Тимохов // Урология и нефрология. 1991. - № 1. — С. 67-73.
44. Камышников, B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика: справочник. Т. 1: справочник / B.C. Камышников. Минск: Интер-прессервис, 2003 - 365 с.
45. Кармалиев, Р.Х. Биохимические процессы при свободнорадикальном окислении и антиоксидантной защите. Профилактика окислительного стресса у животных / Р.Х. Кармалиев // С.-х. биология. 2002. — № 2. — С. 19-28.
46. Карякина, Е.В., Молекулы средней массы как интегральный показатель метаболических нарушений (обзор литературы) / Е.В. Карякина, С.Б. Белова // Клин. лаб. диагностика. 2004. - № 3. - С. 3-8.
47. Кишкун, А. А. Значение средних молекул в оценке уровня эндогенной интоксикации (обзор) / А.А. Кишкун, А.С. Кудинова // Воен.-мед. журнал. 1990. - № 2. - С. 41-44.
48. Клебанов, Г.И. Антиоксидантные свойства производных 3-оксипирина: мексидола, эмоксипина и проксипина / Г.И. Клебанов и др. // Вопросы мед. химии. 2001. — № 3. - С.47-54.
49. Клинико-лабораторная диагностика эндотоксикозов / Т.Ф. Соколова и др. Омск: Изд-во Омской картографической фабрики, 1999. - 22 с.
50. Коблеков, В.А. Индикаторы суперсемейства цитохрома Р-450. как промоторы канцерогенеза (обзор) / В.А. Коблеков // Биохимия. 1998. — Т. 63. - Вып. 8. - С. 1043-1058.
51. Ковалев, И.Е. Ковалентное связывание ксенобиотиков с белками организма как механизм адаптации / И.Е. Ковалев, Н.В. Шипулина // Хим.-фармацевт. журнал. -1996. Т. 30. -№ 11. - С. 312.
52. Кондрашова, М.Н. Гормоноподобное действие янтарной кислоты / М.Н. Кондрашова // Вопросы биол. мед. и фармацевт, химии. 2002. — №1.-С. 7-12.
53. Копылова, Т.Н. Процессы перекисного окисления липидов и анти-окислтительная система печени крыс при остром и хроничесом отравлении / Т.Н. Копылова // С-х. биология. 2000. - № 4. - С.74-77.
54. Корнеев, А.А. Молекулярные механизмы формирования адаптивных реакций дыхательной цепи / А.А. Корнеев, И.А. Комиссарова // Успехи соврем, биологии. 1994. - Т. 114, вып. 4. - С. 467-474.
55. Корнеев, А.А. О биологическом значении ацетальдегида как клеточного регулятора дыхательной цепи митохондрий / А.А. Корнеев, И.А. Комиссарова// Успехи соврем, биологии. 1994. - Т. 114, вып. 2. - С. 212-220.
56. Корнякова, В.В. Перспективы использования антиоксидантов в клинике / В.В. Корнякова // Вест. ОмГАУ. 1999. - № 1. - С. 26-28.
57. Кузъменко, Д.И. Оценка резерва липидов сыворотки крови для пере-кисного окисления в динамике окислительного стресса у крыс / Д.И. Кузьменко, Б.И. Лаптев // Вопросы мед. химии. 1999. - № 1. - С. 1621.
58. Лактионов, П.П. Исследование фармакокинетики и стабильности в крови in vivo фосфодиэфирных и модифицированных производных оли-гонуклеотидов / П.П. Лактионов, А.В. Брыксин, Е.Ю. Рыкова // Вопросы мед. химии. -1999. Т. 45, вып. 3. - С. 206-214.
59. Панкин, В.З. Окислительный стресс: биохимические и патофизиологические аспекты / В.З. Ланкин, Н.К. Зенков. — М.: Наука / Интерпериодика, 2001.- 342 с.
60. Лебенгарц, Я.З. Возрастные особенности иммунологической реактивности и обмена веществ крупного рогатого скота / Я.З. Лебенгарц // С.-х. биология 1994. -№ 6. - С. 66-67.
61. Леонтьев, Л.Б. Методический подход к профилактике окислительного стресса / Л.Б. Леонтьев // Актуальные проблемы молодняка в современных условиях: материалы Международной практ. конф. 23-25 сентября 2002. Воронеж, 2002. - С. 377-378.
62. Лопухин Ю.М. Конформационные изменения молекулы альбмина: новый тип реакции на патологический процесс / Ю.М. Лопухин, Г.Е.
63. Добрецов, Ю.А. Грызунов // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2000. Т. 130, № 7. - С. 4-9.
64. Лю, Б.Н. Кислородно-перекисная концепция апоптоза и возможные варианты его механизма / Б.Н. Лю // Успехи соврем, биологии. 2001. -Том 121, № 5. - С.488 -501.
65. Лю, Б.Н. Митохондрии и кислородно-перекисный механизм старения / Б.Н. Лю // Успехи соврем, биологии. 2002. - Т. 122, № 4. - С. 376389.
66. Лю, Б.Н. Пероксигеназные процессы и лейкозогенез / Б.Н. Лю // Успехи соврем, биологии. 2003. - Т. 123, № 2. - С. 147-160.
67. Маеда, X. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении и раке / X. Маеда, Т. Акаике // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 7. -С. 1007-1009.
68. Малахова, М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации / М.Я. Малахова. СПб.: МАЛО, 1995. - 35 с.
69. Малышев, И.Ю. Стресс, адаптация и оксид азота / И.Ю. Малышев, Е.Б. Манухина // Биохимия. -1998. Т. 63, вып. 7. - С. 992-1006.
70. Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы). Справочник / Под ред. А.И. Карпищенко. СПб.: Интермедика, 1997. — 304 с.
71. Меерсон, Ф.З. Адаптациннная медицина. Концепция долговременной адаптации / Ф.З. Меерсон. М., 1993. - 375 с.
72. Меерсон, Ф.З. Адаптация организма к стрессовым ситуациям и предупреждение стрессорных повреждений / Ф.З. Меерсон, Г.С. Сухих, Л.С. Каткова // Вест. АМН СССР. 1984. - № 4. - С. 45-51.
73. Меерсон, Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика / Ф.З. Меерсон. — М.: Наука, 1981.-278 с.
74. Никитина, И.И. К вопросу о методе определения мочевой кислоты в крови и моче / И.И. Никитина // Лаб. дело. 1972. - № 12. - С. 746-748.
75. Никулина, Н.Б. Функциональная активность эритроцитов телят при бронхопневмонии / Н.Б. Никулина, В.М. Аксенова // Ветеринария. -2003.-№ 12.-С.39-41
76. Оболенский, С.В. Лабораторная диагностика интоксикаций в практике интенсивной терапии / С.В. Оболенский, М.Я. Малахова. СПб.: Изд-во СПб ин-та усовершенствования врачей, 1991. - 16 с.
77. Омский сапропель как лечебное средство и сырье / В.И. Зайнчковский и др. // Промышленно-экономическое развитие Западно-Сибирского региона на базе местного природного органического сырья: материалы науч.-практ. конф. Омск. - 2000. - С 48-52.
78. Островский, Ю.М. Биологический компонент в генезисе алкоголизма / Ю.М. Островский, В.И. Сатановская, М.Н. Садовник. Минск: Наука и техника, 1986. - 65 с.
79. Оценка интоксикации организма по нарушению баланса между накоплением и связыванием токсинов в плазме крови / В.Б. Гаврилов и др. // Клин. лаб. диагностика. 1999. — № 2. - С. 13-17.
80. Пат. 2190851 РФ, МПК 7 G01N33/52. Способ диагностики степени эндотоксикоза / И.П. Степанова, В.Е. Высокогорский, А.Г. Патюков, О.В. Атавина, О.В. Корпачева. № 200104614/14(004676) ; заявл. 19.10.01 ; опубл. 10.10.02, Бюл. № 28. - 5 с.
81. Пат. 2029953 РФ, МПК 6 G01N33/52. Способ диагностики токсической нефропатии / Т.З. Сейсембеков, JI.E. Муравлёва, Е.А. Алимбаев, Б.К. Айтпаев, В.Б. Молотов-Лучанский. № 5006632/14 ; заявл. 03.06.91 ; опубл. 27.02.95, Бюл. № 6. - 3 с.
82. Пат. 2169369 РФ, МПК 7 G01N33/48. Способ оценки тяжести эндотоксикоза у ожоговых больных / А.А. Попов, Е.А. Попова, С.И. Ростовцев. № 99103185/14 ; заявл. 10.12.2000 ; опубл. 20.06.2001, Бюл. № 6. -3 с.
83. Пат. 2180119 РФ, МПК 7 G01N33/68. Способ ранней диагностики сепсиса у новорожденных / В.В. Эстрин, Е.А. Ефанова, М.Г. Пухтин-ская. № 98122954/14 ; заявл. 27.09.2000 ; опубл. 27.02.2002, Бюл. № 2. -4 с.
84. Пат. 2222014 РФ, МГЖ 7 G01N33/48. Способ прогнозирования развития послеоперационных осложнений / В.П. Арсютов, И.В. Мадя-нов, А.А. Вазанов. № 2002115493/15 ; заявл. 10.06.2002 ; опубл. 20.01.2004, Бюл. № 1.-5 с.
85. Пат. 2158929 РФ, МПК 7 G01N33/68. Рефрактометрический способ диагностики эндогенной интоксикации у детей / Н.Н. Кузнецов, С.А. Скопинов, Г.А. Вершинина, Т.Б. Аболина. № 98104781/14 ; заявл. 04.03.98; опубл. 10.11.2000, Бюл. № 11. - 4 с.
86. Пероксидное окисление липидов и система антиоксидантной защиты в период ранней постнатальной адаптации телят / М.И. Рецкий и др. // С.-х. биология 2004. - № 2. - С. 56-61.
87. Пирузян, Л.А. Прогностический фактор риска развития патологических процессов, основанный на полиморфизме ферментов метаболизма ксенобиотиков / JI.A. Пирузян, В.А. Суханова, А.Н. Саприн // Физиология человека. 2000. - Т. 26, № 2. - С. 115-123.
88. Плотников Н.Ю., Герцог Г.Е., Кулинский В.И. Обратимое снижение чувствительности а2 и Pi-адреноактивных систем при интенсивном хо-лодовом стрессе у крыс / Н.Ю. Плотников, Г.Е. Герцог, В.И. Кулинский // Патол. физиология. 1987. - № 6. - С. 42-45.
89. Полетаев, А.Б. Регуляторная метасистема (иммунонейроэндокринная регуляция гомеостаза) / А.Б. Полетаев, С.Г. Морозов, И.Е. Ковалев. — М.: Медицина, 2002. 168 с.
90. Практикум по биохимии печени и почек: учеб. пособие / И.П. Степанова и др.. Омск: Изд-во ИВМ ОмГАУ, 2003. - 108 с.
91. Природные антиоксиданты как гепатопротекторы / Н.Д. Бунятян и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1999. -№ 2. - С.64-67.
92. Рецкий, М.И. Изменения антиоксидантной системы у животных после рождения / М.И. Рецкий // Доклады XVIII съезда физиологического общества им. И.П. Павлова. Казань, 2001. - С. 209.
93. Рецкий, М.И. Система антиоксидантной защиты у животных при стрессе и его фармакологической регуляции: дисс. . д-ра. биол. наук / М.И. Рецкий.-Воронеж, 1997.-39 с.
94. Родионова, Т.Н. Обмен веществ и мясная продуктивность молодняка крупного рогатого скота под влиянием селена / Т.Н. Родионова, М.Н. Панфилова // С.-х. биология. 2003. - С. 108-109.
95. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных болезней / А.П. Шепелев и др. // Вопросы мед. химии. — 2000. Т. 46, вып. 2. - С. 110-116.
96. Сапа, А. Лейкотриены: липидные биоэффекторы воспалительных реакций / А. Сапа, С. Зарина. М. Болла // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 1. — С. 101-110.
97. Саркисов, Д.С. Очерки истории общей патологии / Д.С. Саркисов. — М.: Медицина, 1994.-271 с.
98. Северина, И.С. Растворимая гуанилатциклаза в молекулярном механизме физиологических эффектов оксида азота / И.С. Северина // Биохимия. — 1998. Т. 63, вып. 7. - С. 939-947.
99. Селъе, Г. Очерки об адаптационном синдроме / Г. Селье. М.: Мед-гиз, 1960.-254 с.
100. Серая, И.П. Современные представления о биологической роли оксида азота / И.П. Серая, Я.Р. Нарциссов // Успехи соврем, биологии. — 2002. Т. 122, № 3. - С. 249-258.
101. Сидоров, И.В. Активные Формы кислорода в окислительных процессах у животных и защитная регуляторная роль биооксидантов / И.В. Сидоров, Н.А. Костромитинов // С.-х. биология. 2003. - № 6. - С. 3-14.
102. Сидоров, И.В. Роль биооксидантов в обменных процессах в организме животных / И.В. Сидоров, Н.А. Костромитинов, Е.М. Уколова // Ветеринария 2003. - № 12. - С. 42-46.
103. Симбирцев, С.А. Патофизиологические аспекты эндогенных интоксикаций / С.А. Симбирцев, Н.А. Беляков // Эндогенные интоксикации: тез. междунар. симп. СПб., 1994. - С. 5-9.
104. Синицкая, Н.С. Роль пептидов в свободнорадикальном окислении и старении организма / Н.С. Синицкая, В.X. Хавинсон // Успехи соврем, биологии. 2002. - Т. 122, № 6. - С. 557-568.
105. Скулачев, В.П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций / В.П. Скулачев // Биохимия. 1998. - Т.63, вып. 12.-С. 1691-1694.
106. Скулачев, В.П. Кислород и явления запрограммированой смерти / В.П. Скулачев. М.: Изд-во ИБМХ РАМН, 2000. - 50 с.
107. Современные аспекты патогенеза эндотоксинового шока / И.И. Сала-хов и др. // Успехи совр. биологии. 1998. — Т. 118, вып. 1. - С. 33-47.
108. Способ диагностики эндогенной интоксикации / А.А. Тогойбаев и др. // Лаб. дело.- 1988. № 9. - С. 22- 25.
109. Степанова, И.П. Биохимические аспекты интоксикации: монография / И.П. Степанова, Л.М. Дмитриева. Омск: ИВМ ОмГАУ, 2004. - 152 с.
110. Судаков, К.В. Общая теория функциональных систем организма / К.В. Судаков.-СПб., 2001.-354 с.
111. Тейлор, Б. С. Индуцибельная синтаза оксида азота в печени: регуляция и функции / Б.С. Тейлор, JI.X. Апарсон, Т.Б. Биллиар // Биохимия. — 1998. Т. 63, вып. 7. - С. 905-923.
112. Титов, В.Н. Альбумин, транспорт насыщенных жирных кислот и метаболический стресс-синдром (обзор литературы) / В.Н. Титов // Клин. лаб. диагностика. — 1999. — № 4. С. 3-11.
113. Тиунов, Л. А. Биохимические механизмы адаптации и компенсации нарушенных функций при действии на организм химических веществ / JI.A. Тиунов // Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций. М.: Медицина, 1998. - С. 366-3 81.
114. Тиунов, Л.А. Механизмы естественной детоксикации и антиоксидантной защиты / JI.A. Тиунов //Вест. РАМН. 1995. -№ 3. - С. 9-12.
115. Тупикова, З.А. Влияние средних молекул, выделенных из сыворотки крови обоженных пациентов, на состояние процессов перекисного окисления липидов в тканях животных / З.А. Тупикова, В.К. Осипович // Вопросы мед. химии. 1990. - № 3. - С. 24-26.
116. Тупикова, З.А. Среднемолекулярные уремические токсины (обзор литературы) / З.А. Тупикова // Вопросы мед. химии. 1983. - № 1. -С. 2-10.
117. Тутельян, В.А. Физиологическая роль коротких пептидов в питании /
118. B.А. Тутельян, В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин // Бюл. эксперим. биологии и медицины.-2003.-Т. 135, № 1.-С. 4-10.
119. Уманский, С.Г. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы /
120. C.Г. Уманский // Молекулярная биология. 1996. - Т. 30, вып. 3. — С. 487-502.
121. Уша, Б.В. Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней животных: учебники и учеб. пособия для высш. учеб. заведений / Б.В. Уша, И.М. Беляков, Р.П. Пушкарев. М.: КолосС, 2003. - 487с.
122. Фармакологическая активность лазина / В.И. Левицкий и др. // Ветеринария. 1998. - № 10. - С. 41-43.
123. Федоров, НА. Циклические нуклеогиды и их аналоги в медицине / НА. Федоров, МГ. Радоловацкий, ГЕ.Цехович.-М Медицина, 1990.-176 с.
124. Филимонов, В.И. Руководство по общей и клинической физиологии / В Л Филимонов.- М: Медицинское информационное агенсгво.- 2002.- 347 с.
125. Функциональное состояние митохондрий в период ранней ожоговой токсемии и при воздействии среднемолекулярных пептидов / В.Е. Ряби-нин и др. // Вопросы мед. химии. 1984. - № 3. - С. 113-116.
126. Хавинсон, ВХ. Пептидная регуляция при старении / В.Х. Хавинсон // Вест. РАМН.-2001.-№ 12.-С. 15-21.
127. Хавинсон, ВХ. Пептидэргическая регуляция гомеостаза / В.Х. Хавинсон, И.М. Кветной, И.П. Ашмарин // Успехи соврем, биологии. 2002. - Т. 122, №2.-С. 190-203.
128. Хочачка, П. Биохимическая адаптация / П. Хочачка, Дж. Сомеро; пер. с англ. М.: Мир, 1988. - 568 с.
129. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих / В.П. Реутов и др. М.: Наука, 1998. - 156 с.
130. Шакиров, Д.Ф. Состояние системы пероксидного окисления липидов в организме экспериментальных животных после воздействия циклических углеводородов / Д.Ф. Шакиров, Д.А. Еникеев // Патол. физиология и эксперим. медицина. 2003. - № 1. - С. 26-28.
131. Эколого-адаптпационная стратегия защиты здоровья и продуктивности животных в современных условиях / Под ред. А.Г. Шахова. — Воронеж: Воронеж, гос. ун-т, 2001. 207 с.
132. Юдин, М.Ф. Этология крупного рогатого скота / М.Ф. Юдин, Н.Г. Фенченко, В.Н. Лазаренко. Троицк, 2001. - 165 с.
133. Яковлев, М.Ю. «Эндотоксиновая агрессия» как предболезнь или универсальный фактор патогенеза заболеваний человека и животных / М.Ю. Яковлев // Успехи соврем, биологии. 2003. - Т. 123, № 1. - С. 31-40.
134. Яринин, А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / А.А. Яринин // Иммунология. 1998. — № 2. — С. 9-13.
135. Яровая, Г.А. Калликреин-кининовая система: новые факты и концепции (обзор) / Г.А. Яровая // Вопросы мед. химии. 2001. — Т. 47, № 1.-С. 20-42.
136. Alexander, S. Stress in the racing horse: coping or not coping / S. Alexander, C. Irvine // J. Equine Sci. -1998. Vol. 9. - № 3. - P. 77-81.
137. Allan, R.M. Proteolysis of isolated mitochondria by myocardial ly-zosomal enzymes / R.M. Allan, E. Welman // J. Biochem. 1980. - Vol. 90.-№ 1.-P. 139-144.
138. Andrew, D.L. Chemokines chemotactic cytocines that mediate inflammation / D.L. Andrew // N. Engl, J. Med. - 1998. - Vol. 338. - № 7. - P. 436445.
139. Aortic crosstransplantation between young and old rats: effect upon the heat shock protein 70 stress response / R. Udelsman et al. // J. Gerontol. 1995. — Vol. 50.-P. 187-192.
140. Apoptosis signalling by death receptors / K. Schulze-Osthoff et al. I I Eur J. Biochem. 1998. - Vol. 254. - P. 439^159.
141. Atkinson, D.E. The energy charge of the adenylate pool as a regulatory parameter. Interaction with feedback modifiers / D.E. Atkinson // Biochem. — 1968. Vol. 7. - P. 4030-4034.
142. Babcock, G. Oxigen activation and the conservation of energy in cell respiration / G. Babcock, M. Wilstrom // Nature. 1992. - Vol. 356. - P. 301-309.
143. Babior, R.E. The participation of coenzyme Q in free radical production and antioxidation / B.M. Babior // Free Radic. Biol. Med. 1990. - Vol. 6. -P. 545-565.
144. Babior, R.E. The respiratoiy burst oxidase / R.E. Babior // Trends Biochem. Sci. 1987. - Vol. 12. - P. 241-243.
145. Badr, K.F. Novel mediators of sepsis-associated renal failure / K.F. Badr // Semin nephrol. 1994. - Vol. 14. - P. 3-7.
146. Bcl-2 inhibits the mitochondrial release of an apoptogenic protease / S.A. Susin et al. // J. Exp. Med. 1996. - Vol. 184. - P. 1331-1342.
147. Bentler, E. Erythrocyte glutathione synthetase deficiency leads not only to glutathione, but also to glutathione-s-transferase deficiency / E. Bentler, T. Gelbart, C. Pegelow // J. Clin. Invest. 1986. - Vol. 77. - P. 38-41.
148. Berglund, B. Blood levels of leukocyte, glucose, urea, creatinina, calcium. Inorganic phosphorus and maguesium in dairy heifers from three months of age to calving zbl. / B. Berglund // Veter. Med.1983. Vol. 30. - № 1. - P. 59-71.
149. Beyer, R.E. The participation of coenzyme Q in free radical production and antioxidation / R.E. Beyer // Free Radic. Biol. Med. 1990. - Vol. 6. - P. 545-565.
150. Bid induces the oligomerization and insertion of Bax into the outer mitochondrial memdrane / R. Eskes et al. // Mol. Cell Biol. 2000. - Vol. 20. - P. 929
151. Bid, a Bcl2 interactiong protein, mediates cytochrome с release from mitochondria in response to activation of cell surface death receptors / K. Luo et al. // Cell. 1998. - Vol. 94. — P. 481-490.
152. Biochemical and clinical aspects of acute phase proteins / M. Morimutsi et al. // J. Vet. Med. Asoc. 1995. - Vol. 39. - P. 173-177.
153. Boiteux, A. Design of glycolysis / A. Boiteux, B. Hess // Phil. Trans. Roy. Soc.-1981.-Vol. 293.-P. 5-22.
154. Bootman, M.D. The elemental principles of calcium signaling / M.D.
155. Bootman // Cell. 1995. - Vol. 83. - P. 675-678.
156. Bowles, J.T. Shattered: Medawar s test tubes and their enduring legacy of chaos / J.T. Bowles // Med. Hypotheses. 1998. - Vol. 51. - P. 179-221.
157. Bowles, J.T. The evolution of aging: a new approach to an old problem of biology / J.T. Bowles // Med. Hypotheses. 2000. - Vol. 54. - P. 326-339.
158. Breibart, R.E. Alternative splicing: a ubiquitous mechanism for thegeneration of multiple protein isoforms from single genes / R.E. Breibart, A. Andreadis, B. Nadal-Ginard // Am. Rev. Biochem. 1987. - Vol. 56. - P. 467-495.
159. Changes in serum concetntration of uric acid and allantoin due to exhaustive tretadmill exercise / N. Ishida et al. // J. Equine Sci. 1995. -Vol. 10. -№ 2. - P. 45-48.
160. Characterization of vasoactive intestinal peptide receptors in canine livermembranes / T. Kiso et al. // Biochem. Pharmacol. 1994. - Vol. 47. - P. 241-245.
161. Chronological changes in the superoxide-scavenging ability of the plasma of mares and foals at delivery / N. Ishida et al. // J. Equine Sci. — 1995. Vol. 8. — №4.-P. 109-111.
162. Cleavage of BID by caspase-8 mediates the mitochondrial damage in the Fas pathway of apoptosis / K. Li et al. // Cell. 1998. - Vol. 94. - P. 491501. .
163. Cytochrome с activation of CPP32-like proteolysis plays a critical role in Xenopus cell-free apoptosis system / R.M. Kluck et al. // EMBO J. 1997. - Vol. 16. - P. 4639-4649.
164. Cytochrome с dificiency causes embryonic lethality and attenuates stress-induced apoptosis / K. Li et al. // Cell. 2000. - Vol. 101. - P. 389-399.
165. Cytochrome с release and apoptosis induced by mitochondrial targeting of nuclear receptor TR3 / K. Li et al. // Science. 2000. - Vol. 289. - P. 1159-1164.
166. Erythrocyte glutathione S-transterase deficiency and hemolytic anemia / E. Bentler et al,. // Blood. 1988. - Vol. 47. - P. 73-77.
167. Estabrook, RW. The remarkable P450s: a historical review of these versatile hemoprotein catalysts / R.W. Estabrook // J. FASEB. 1996. - Vol. 10. - P. 202204.
168. Feihman, L. Ethanol and lipid metabolism / L. Feihman, C. Lieber // Am. J. Clin. Nutr. 1999. - Vol. 70. - P. 791-792.
169. Fenton, M.J. LPS-binding proteins and receptors / M.J. Fenton, D.T. Gelonbock // J. Leukocyte Biol. -1998. Vol. 64. -P. 25-32.
170. Francis, G. High density lipoproteinoxidation: in vitro susceptibility and potential in vivo consequences / G. Francis // Biochim. Biophys. Acta. -2000.-Vol. 1483.-P. 217-235.
171. Fricke, R.F. Cardiac adenylate cyclase: kinetics of synergiste by guanosine-5-triphosphate (GTP-and Glucagon) / R.F. Fricke, S.F. Queener, C.M. Clark // J. Mol. and Cell.Cardiol. -1980. Vol. 12. -№ 6. -P. 595-608.
172. Fridovich, L. Superoxide radical and superoxide dismutase / L. Fridovich // Am. Rev. Biochem. -1994. Vol. 64. - P. 97-112.
173. Frohlich, K.U. Apoptosis in yeast a monocellular organism exhibits altruistic behaviour / K.U. Frohlich, F. Madeo // FEBS Lett. - 2000. - Vol. 473.-P. 6-9.
174. Goligorsky, M.S. Pathogenetic role of Arg-Gly-Asp-recognizing integrins in acute renal failure / M.S. Goligorsky, G.F. Dibona // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1993.-Vol. 90.-P. 5700-5704.
175. Goto, I. The Relationship between reduced glutathion level and glutathion S-transferase activity in sheep erythrocytes /1. Goto, Y. Maede, N. Agar // J. Vet. Res. 1992. - Vol. 40. - № 2,3. - P. 99-104.
176. Guzkicwicz, A. Levels of ASAT patane ALAT aldolase and phosphatase in blood serum of some breeds and crosses of cattle // A. Guzkicwicz, J. Bombowski // Genet. Pol. 1991. - Vol. 42. - № 4. - P. 503-515.
177. Hajgar, D. Lipoprotein trafficking in vascular cells. Molecular Trojan horses and cellular saboteurs / D. Hajgar, M. Haberland // J. Biol. Chem. 1997. - Vol. 272.-P. 22975-22978.
178. Halliwell, В. Free radical in the brain. Aging, neurological and mental disorders / B. Halliwell // Berlin., N.Y., London. 1992. - P. 21^0.
179. Harris, E. Regulation of antioxidant enzymes / E. Harris // J. FASEB. 1992.-Vol. 6. - P. 2675-2683.
180. Hayasaki, Y. Generation of oxygen radicals in long-evans cinnamon rats with hereditary hepatitis and hepatocelluar carcinomas / Y. Hayasaki // Jpn. J. Vet. Res. -1996. Vol. 44. - № 1. - P. 62-65.
181. Haynes, W.G. The endothelin family of peptides: local hormones with diverse roles in health and disease / W.G. Haynes, DJ. Webb // Clin. Chem. 1991. -Vol. 84.-P. 485-500.
182. Heat-shock protein 70 inhibits apoptosis by preventing recruitment of procas-pase-9 to the Apaf-1 apoptosome / H.M. Beer et al. // Nature Cell Biol. 2000. -Vol. 2.-P. 469-775.
183. Higuchi, M. Inhibition of mitochondrial respiratory chain complex by TNF result in cytochrome с release, membrane permeability transition, and apoptosis / M. Higuchi, R.J. Proske, E.T.H. Yeh // Oncogene. 1998. - Vol. 17.'-P. 2515-2524.
184. Ide J. Effect of dietary condition upon serum and milk urea nitrogen in cows I. Serum and milk-urea nitrogen as effected by protein intake / J. Ide // Japan J. Veter. Sci. 1986. - Vol. 48. - № 6. - P. 321-327.
185. Identification of DLABLO, a mammalian protein thatpromotes apoptosis by binding to and antagonizing JAP proteins / A.M. Verhagen et al. // Cell. 2000. - Vol. 102. - P. 43-53.
186. Imamoto, Y. Purification and characterization of form of cytochrom P-450 from bear liver microsomes / Y. Imamoto, M. Masuda, A. Kazusada // Bio-chem. Pharmacol. 1995. - Vol. 49. - P. 965-970.
187. Induction of apoptic program in cell-free extracts: requirement for dATP and cytochrom с / X. Liu et al. // Cell. 1998. - Vol. 86. - P. 147-157.
188. Induction of apoptosis by phosphatidylserine / K. Uchida et al. // J. Biochem. (Tokyo). 1998. - Vol. 123. - P. 1073-1078.
189. Inikai, N. Pifferences in the lipid peroxides and the substances with super-oxide-scavending activities in sera between hot-bred (thoroughbred) and cold-bred (cross-bred) horses / N. Inikai // J. Vet. Res. 1995. - Vol. 43. - № 1. - P. 64-67.
190. Janero, D.R. Malondialdehyde and thiobarbituric acid-reactivity as diagnostic indices of lipid peroxidation and peroxidative tissue injury / D.R. Janero // Free Rad. Biol. Med. 1990. - Vol. 9. - P. 515-540.
191. Jessup, W. Oxidized lipoprotein and nitric oxide / W. Jessup // Curr. Opin. Lipidol. 1996. - Vol. 7. - P. 274-280.
192. Jialal, L. Lowdenssity lipoprotein oxidadation, antioxidants and atheroschero-sis a clinical biochemical perspective / L. Jialal, D. Devaraj // Clin. Chem. — 1996. -Vol. 42.-P. 498-506.
193. Kapahi, P. Positive correlation between mammalian life span and cellular resistance to stress / P. Kapahi, M.E. Boulton, T.B.L. Kirkwood // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol. 26. - P. 495-500.
194. Kasai, E. Mechanism of oxidaitive damage and species difference in erytrocytes oxidized by sodium n-propylthiosulfate, cansative agent of onion induced hemolytic anemia / E. Kasai // J. Vet. Res. 1996. - Vol. 44. — № 1. - P. 37-47.
195. Katori, M. Preventive role of renal kallikrein-kinin system in the early phase of hypertension and development of new antihypertensive drugs / M. Katori // Dev. Pharmacol. 1998. - Vol. 44. - P. 147-222.
196. Kaur, H. Action of biologically-relevant oxidizing species upon uric acid. Identification of uric acid oxidation products / H. Kaur, B. Halliwell // Chem.-Biol. Interact 1990. - Vol. 73. - P. 235-247.
197. Kimura, K. Endotoxin modulates arachidonic acid induced glukogenolysis in the perfused rat liver / K. Kimura, M. Moriyama, M. Nishisako // Horm. Metab. Res. — 1998. Vol. 30. - P. 178-181.
198. Kimura, K. Modulation of platelet activating factor-induced glycogenoly-sis in the perfused rat liver after administration of endotoxin vivo / K. Kimura, M. Moriyama, M. Nishisako // J. Biochem. 1998. - Vol. 123. - P. 142-149.
199. Kiss, L. Stimulation of adenylate cyclase by ATP / L. Kiss // Biochem. Soc. Trans. 1981. - Vol. 9. - № 2. - P. 358.
200. Klosterhalfen, B. Septic shock / B. Klosterhalfen, R.S. Bhardaj // Gen. Pharmac. 1998. - Vol. 31. - P. 25-32.
201. Knopp, R. Drug therapy: Drugt reatment of lipid disorders / R. Rnopp I I N. Engl. J. Med. 1999. - Vol. 341. - P. 498-511.
202. Koomans, H.A. The importance of plasma protein for blood volume and blood pressure homeostasis / H.A. Koomans, B. Braam // Kidney int. — 1986. -Vol. 30.-№5.- P. 730-735.
203. Korshunov, S.S. High protonic potential actuates a mechanism of production of reactive oxygen species in mitochondria / S.S. Korshunov, V.P. Skula-chev, A.A. Starkov // FEBS Lett. 1997. - Vol. 416. - P. 15-18.
204. Kowald, A. Accumulation of defective mitochondria through delayed degradation of damaged organelles and its possible role in the ageing of postmitotic and dividing cells / A. Kowald, T.B. Kirkwood // J. Theor. Biol. -2000. Vol. 202. - P. 145-160.
205. Kowald, A. The mitochondrial theory of: do damaged mitochondria accumulate by delayed degradation? / A. Kowald // Exp. Gerontol. 1999. - Vol. 34.-P. 605-612.
206. Lane, D.P. Cancer. P53, guardian of the genome / D.P. Lane // Nature. -1992.-Vol. 358.-P. 15-16.
207. Libby, P. Molekular bases of the acut coronary sundromes / P. Libby // Circulaition. 1995. - Vol. 91. - P. 2844-2850.'
208. Lipid peroxidation and antioxidant of sera in new born calves / O. Inanami et al. // Mag. Res. Med. 1995. - Vol. 6. - P. 249-251.
209. Maschewsky, W. MCS Chemophobie oder chemishes trauma / W. Maschewsky // Alergologie. - 1999. - Vol. 22. - № 12. - P. 699-708.
210. Mechanism of decrease in levels of hepatic p 450 isozymes induced by intracerebral endotoxin: independence from sympathetic nervous and adrenocortical systems / Y. Shimamoto et al. // Arch. Toxical. 1999. - Vol. 73. - P. 41-49.
211. Mechanism of hemolysis of canine erythrocytes induced by L-sorbose / I. Goto et al. // J. Vet. Res. 1994. - Vol. 55. - P. 291-294.
212. Mechanisms of dieas: antioxidants and atherosclerotic heart disease / M. Piaz et al. // N. Engl. J. Med. 1997. - Vol. 37. - P. 408-416.
213. Mellish, C.E. Multiple chemical of universal condition / C.E. Mellish // Nutr. And Environ. Med. - 2001. - Vol. 11. - № 1. - P. 63-67.
214. Mitochondrial release of caspase-2 and -9 during the apoptotic process / S.A. Susin et al. // J. Exp. Med. -1999. Vol. 189. -P. 381-393.
215. Molecular characterization of mitochondrial apoptosis-inducing factor / S.A. Susin et al. //Nature. 1999. - Vol. 397. - P. 441-446.
216. Monteith, G.R. The plasma membrane calcium pump — a physiological perspective on its regulation / G.R. Monteith, B.D. Roufogalis // Cell Calcium. 1998. -Vol. 18. - P. 459-470.
217. Morihiko, H. Oxidative effects of sodium n-propylthiosulfate, the causative agent of onion-induced hemolytic anemia in dogs / H. Morihiko // J. Vet. Res. 1995. -Vol. 43.-№1.-P. 29-30.
218. Negative regulation of the Apaf-1 apoptosome by Hsp70 / A. Saleh and et al. // Nature Cell Biol. 2000. - Vol. 2. - P. 476-483.
219. Nitric oxide dissociates lipid oxidation from apoptosis and phosphatidyl-serine externalization during oxidative stress / J.P. Fabisiak et al. // Biochemistry. 2000. - Vol. 39. - P. 127-138.
220. Okabe, J. Some biochemical and biophysical characteristics of canine and bovine erythrocytes / J. Okabe // J. Vet. Res. 1995. - Vol. 43. - № 1. - P. 31-32.
221. Oxidation of a critical thiol residue of the adenine nucleotide translocator enforces Bcl-2-independent permeability transition pore opening and apoptosis / P. Constantini et al. // Oncogene. 2000. - Vol. 19. - P. 307-314.
222. Oxidativ signalling pathway for externalization of plasma membrane phos-phatidylserine during apoptosis / V.E. Kagan et al. // FEBS Lett. 2000. -Vol. 477.-P. 1-7.
223. Oxygen stress: a regulator of apoptosis in yeast / F. Madeo et al. // J. Cell Biol. 1999. - Vol. 145. - P. 757-767.
224. Oxygenation of biomembranes by mammalian lipoxygenases: the role ubiquinone / K. Schnurr et al. // Free Radic. Biol. Med. 1996. - Vol. 20. -P. 11-21.
225. P53 induces apoptosis by caspase activation through mitochondrial cytochrome с release / M. Schuler et al. // Biol Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 7337-7342.
226. Parrillo, J.E. Pathogenetic mechanisms of septic shock / J.E. Parrillo // N. Engl. J. Med. 1993. - Vol. 329. - № 19. - P. 14711477.
227. Pataoxonas inhibits high-density lipoprotein oxidation and preserver its function. A poosible peroxidative role for peroxidase / M. Aviram et al. // J. Clin. Invest. 1998.-Vol. 100.-P. 1581-1590.
228. Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome с from mitochondria blocked / J. Yang et al. // Science. 1997. - Vol. 275. - P. 1129-1132.
229. Prevention of lymphocyte cell death in sepsis improves survival in mice / R.S. Hotchkinss et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96. - P. 1454114546.
230. Prognosis in intraabdominal infections / A. Pacelli et al. // Arch. Surg. -1996.-Vol. 131, №6.-P. 641-645.
231. Random versus selective membrane phospholipid oxidation in apoptosis: role of phosphatidyl serine / J.P. Fabisiak et al. // Biochemistry. 1998. -Vol. 37.-P. 13781-13790.
232. Role of Hsp70 in regulation of stress-kinase JNK: implications in apoptosis and aging / V.L. Gabai et al. // FEBS Lett. 1998. - Vol. 438. - P. 14.
233. Rose, RC. Biology of free radical scavengers: an evaluation of ascorbate / RC. Rose, AM. Bode//J. FASEB. -1993. Vol. 7. -P. 1135-1142.
234. Rusting, RL. Why do we age / R.L. Rusting // Sci. Amer. -1992. Vol. 267. -№6.-P. 130-141.
235. Scavenging activity of superoxide anion in cultured rat hepatocytes / K. Ito et al. // Transplant. Proc. 1994. - Vol. 26. - P. 10599-10606.
236. Shimamoto, Y. Alttration of liver drug metabolism by intracerebroventricu-lar administration of lipopolysaceharide / Y. Shimamoto // J. Vet. Res. — 1995. Vol. 43. - № 1. - P. 67-72.
237. Shimizu, S. Bcl-2 family proteins regulate the release of apoptogenetic cyto-chrom с by the mitochondrial channel VDAC / S. Shimizu, M. Narita, Y. Tsuji-moto // Nature. 1999. - Vol. 399. - P. 483^87.
238. Silerct, S. De novo lipogenesis, lipid dinetics and whole-body lipid balans in humans after acut alcohol consumption / S. Silerct, R. Neese, M. Hellerstein // American J. Clin. Nutr. 1999. - Vol. 70. - P. 928-936.
239. Sjodin, B. Biochemical mechanisms for oxygen free radical formation during exercise / B. Sjodin, Y.H. Westing, F.S. Apple // Sports Med. 1990. - Vol. 10. -P. 236-254.
240. Skulachev, VP. Cytochrome с in apoptotic and antioxidant cascades / V.P. Skulachev // FEBS Lett. 1998. - Vol. 423. - P. 275-280.
241. Skulachev, V.P. Mitochondria in the programmed death phenomena; a principle of biology: «It is better to die than to be wrong» / V.P. Skulachev // IUBMB Life. 2000. - Vol. 49. - P. 365-372.
242. Skulachev, V.P. Mitochondrial physiology and pathology; consept of programmed death of organelles, cells and organisms / V.P. Skulachev // Mol. Aspects of Medicine. 1999. - Vol. 20. - P. 139-184.
243. Skulachev, V.P. Role of uncoupled and non-coupled oxidathions in maintenance of safely low levels of oxygen and its one-electron reductants / V.P. Skulachev // Quart. Rev. Biophys. 1996. - Vol. 29. - P. 169-202.L
244. Skulachev, V.P. The p66 protein: a mediator of the programmed death of organism? / V.P. Skulachev // IUBMB Life. 2000. - Vol. 49. - P. 177-180.
245. Skulachev, V.P. Uncoupling: new approaches to an old problem of bioenerget-ics / V.P. Skulachev // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1363. - P. 100124.
246. Skulachev, V.P. Why are mitochondria involved in apoptosis? Permeability transition pores and apoptosis as selective mechanisms to eliminate superoxide-producing mitochondria and cell / V.P. Skulachev // FEBS Lett. 1996. - Vol. 397.-P. 7-10.
247. Smac, a mitochondrial protein that promotes cytochrome c-dependent caspase activation by eliminating IAP inhibition / C. Du et al. // Cell. —2000. -Vol. 102.-P. 33-42.
248. Snyder, S.H. Biological roles and mechanism of action of nitric oxide / S.H. Snyder, D.S. Brendt // Sci. Amer. 1992. - Vol. 266. - № 5. - P. 28-35.
249. Snyder, S.H. Nitric oxide: a physiologic messendger molecule / S.H. Snyder, D.S. Brendt // Am. Rev. Biochem. -1994. Vol. 63. - P. 175-195.
250. Splitter, G. Cytokines: communication molecules that influence the process of disease / G. Splitter // J. Vet. Res. 1997. - Vol. 45. - № 1. - P. 3-8.
251. Takiguchi, M. Mechanism of free radical-induced oxidetive injury and activation of signal transduction in rat liver membrane with acut hepatitis-spektroscopic observation / M. Takiguchi // J. Vet. Res. 2000. - Vol. 48. -№1.- P. 50-51.
252. Talor, D.L. Oxidative metabolism, apoptosis and perinatal brain injury / D.L. Talor, A.D. Edwards, H. Mehmet // Brain Pathology. 1999. - Vol. 9. -P. 93-117.
253. The antioxidant functions of cytochrome с / S.S. Korshunov et al. // FEBS Lett. 1999. - Vol. 462. - P. 192-198.
254. The regulation of glycolasis in human erythrocytes. The dependence of the glycolytic fiux on the ATP concentration / F.I. Ataulakhanov et al. // Eur. J. Biochem. 1981.-Vol. 115. -№ 2. -P. 359-365.
255. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation ofapoptosis/R.M. Kluck et al. // Science.-1997.- Vol. 275.-P. 1132-1136.
256. Thornberry, N.A. Caspases: enemies within / N.A. Thornberry, Y. Lazeb-nik // Science. 1998. - Vol. 281. - P. 1312-1316.
257. Uddin, S. Dietary antioxidants protection against oxidative stress / S. Uddin, S. Ahmad // Biochem. Education. 1995. - Vol. 23. - P. 2-15.
258. Wu, G. Phagocyte-induced lipid peroxidation of entravenous first emulsions and counteractive effect of vitamin E / G. Wu, C. Jarstrand, J. Norden-strom // Nutrition. 1999. - Vol. 15. - P. 359-364.
259. Yamashita, K. Bioassay for interleukin-1, interleukin-6, and tumor necrosis factor-like activities in canine sera / K. Yamashita // J. Vet. Med. Sci. — 1994. — Vol. 56.-P. 103-107.
260. Zglinicki, T. Accumulation of single-strand breaks is the major cause of telomeres shortening in human fibroblasts. / T. Zglinicki, R.Pilger, N. Sitte // Free Radic. Biol. Med. -2000. Vol. 28. - P. 64- 74.
261. Zogan, E.F. Factors influencing the quantity and quality of colostrums in the cow / E.F. Zogan // Vet.Sci.Communs. 1988. - Vol. 32. -№ 1. - P. 3946.
262. Zorov, D.B. Voltage activation of heart inner mitochondrial membrane chanels / D.B. Zorov, K.W. Kinally, H. Tedesci // J. Bioenerg. Biomembr. — 1992.-Vol. 24.-P. 119-124.
263. Zou, H. An APAF-1-cytochrome с multimeric complex is a functional apopto-some that activates procaspase-9 / H. Zou, X. Li, X. Wang // J. Biol. Chem. — 1999. — Vol. 274.-P. 11549-15556.
-
Степанова, Ирина Петровна
-
доктора биологических наук
-
Новосибирск, 2004
-
ВАК 03.00.13
- Функциональная активность, возможности и роль гистаминергической системы у крупного рогатого скота в постнатальном периоде онтогенеза
- Становление естественной резистентности телят в раннем постнатальном онтогенезе и влияние на нее биологически активных добавок
- Характеристика антиоксидантной системы и содержание стресс-гормонов крови крупного рогатого скота в связи с возрастом и физиологическим состоянием
- Иммунно- и цитогенетические аспекты использования маркирующих систем крови в скотоводстве
- Состояние свободнорадикальных процессов и содержание веществ низкой и средней молекулярной массы у крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе
