Бесплатный автореферат и диссертация по географии на тему

Биологическая активность чернозема типичного как показатель экологического состояния агроценоза в условиях лесостепи

ВАК РФ 11.00.11, Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов

Автореферат диссертации по теме "Биологическая активность чернозема типичного как показатель экологического состояния агроценоза в условиях лесостепи"

'Г! Г -О-

МИНЛСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕГАШШ

КУРСКИЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЙ ИНСТИТУТ ПМЕ1Ш ПРОФЕССОРА Л. И. ИВАНОВА

На -правах ТУ*-лпие'«

ПОСПЕЛОВ Сергей Викторович

УДК: 502. 7 + 631. 45 * 631 4<~.

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЧЕРНОЗЕМА ТИПИЧНОГО КАК ПОКАЗАТЕЛЬ ЭКОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ АГР0ЦЕН03А В УСЛОВИЯХ ЛЕСОСТЕПИ

Специальность: 1100.11—охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

КурсЕ-1994

\

Диссертационная работа выполнена а Полтавской и Курском сельскохозяйственных институтах

Научный руководитель: заслуженный деятель науки Российской Федерации доктор сельскохозяйственных наук, "профессо] В.Д.Муха .

Официальные оппоненты: действительный член РАСХН, доктор биологи

ческих наук, профессор А.П.Щербаков

доктор сельскохозяйственных каук. профессо В. Я. Подгорный

Еедугая организация: Московская сельскохозяйственная академия имен К.А.Тимирязева .

' № - • Защита состоится "27** апреля 1994 года, в / .часов на заседаю

специализированного совета К 120.25.01 при'Курском сельскохозяйственнс

институте имени профессора И.И.Иванова: 305034,г.Курск, ул.К.Маркса, '

С диссертацией можно ознакомиться в.библиотеке института.

■Автореферат разослан "_"__ . . ■ . 1994 г.

Ученый секретарь специализированного Совета,

кандидат сельскохозяйственных наук, _ у"

доцент /В.А.Клейменова

.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Повышение благосостояния и ' уровня обеспеченности .нации невозможно без стабильного наращивания производства сельскохозяйственной продукции. Достижение этой цели неразрывно связано с созданием рациональных агроэкосистем, и в частности, агропедоценозов [Муха, 1979,1332]. При этсм к/. главным элементом является почва, т.к. ее структура, обеспеченность питательными веществами, содержание гумуса во снегом определяют первичную продуктивность агроценоза.

При анализе агроэкосистем яредста&лие? бишюй интерес изучение реакции на определенные их нарушения, т.к. это связано с устойчивостью и сохранением функциональной интеграции системы [Кроссли, Хауз, Снайдер и др., 1S873.

Одним из показателей устойчивости агроценоза моггет служить уровень элективного плодородия почвы, который является интегральной оценкой деятельности человека СОда*>л, 1987, Щербаков и Т.Р-., 1987, 19923. Исходя из этого можно рассматривать бессменные иеговы как экологический фактор, яаруезгадкй устойчивое Сувкцкокгро' ч-ние агроценоза. •

Хотя опыт ведунах стран кира подтверждает реальность модели, где главным ректором является свецпализацкя предприятий на основе монокультуры в растениеводстве, они не всегда бывают стабильны, что в первую очередь проявляется в снижении уровня эффективного плодородия в бессменных посевах. При условии высокой культуры земледелия специализация оказалась . возможной только для кукурузы, р:-:з;, табака, картофеля, некоторых овощных культур [Егоров, 1972; Прянишников, 1976; Нарциссов, 1982.3.

Причины утомления и токсикоза почвы, долгое время исследуются' как у нас в стране, так и за рубежом. Тем не менее, природа этого явления изучена фрагментарно и недостаточно. Принято считать, что основная причина угнетения растений при бессменном их возделывании заключается в снижении плодородия почвы в результате протекания в ней сложных зколого-биохимических процессов, которые до настоящего времени изучены недостаточно [Гродаинский, Богдан, Головко и др.. 19793.

В этой сеязи установление закономерностей этих процессов несомненно является актуальным как с теоретической, так и с практической точек зрения, поскольку затрагиваются вопросы стабильности и регуляции агроэкосистем,.экологии почвы, взаимоотношений в системе "почва-растение" на биохимическом урпвне, урогайностз культур и плодородия почвы. Комплексный подход в изучена: указан-

ной проблемы позволит использовать биохимические показатели почвы для оценки экологического состояния агроценозов, биодиагностики почвоутомления и продуктивности, прогнозирования будущего урожая, а результаты исследований учитывать при оптимизации структуры севооборотов в Лесостепи.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Настояцая работа посвящена изучению биологической активности чернозема типичного при различном сельскохозяйственном использовании с целью выявления показателей экологического состояния агроцекоза и для биодиагностика: энолюцпм процессов почвенного плодородия.

При этом в задачу исследований входило:

1. Изучить динамику активности некоторых почвенных ферментов в услоеки агроценозов с возделыванием сельскохозяйственных культур в севообороте и бессменно.

2. Выяеить взаимосвязь Ферментативной активности с продуктивностью сельскохозяйственных культур.

3. Определить еозмохкость использования комплекса почвеппш: бзп-ментов для биодиагностики 'почвоутомления и экологического состояния агроиеноза.

4. Разработать критерии' оценю! эволюции процессов почвенного плодородия при возделывании сельскохозяйственных культур'2 севообороте и бессменно. '

н. Провести поиск специфических белковых соединений в почве и разработать методические подходи их выделения и оценки активности.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые в условиях Лесостепи изучена биологическая активность чернозема типичного в агроцекозах при выращивании сахарной свеклы, озимой пшеницы и кукурузы на зерно в севообороте и бессменно. На основании'комплексной оценен ферментативной активности почвы разработаны индексы почвоутомления для каждой из изучаемых культур, позволяющие судить об экологическом состоянии агроценоза, доказана их применимость для данной почвы.

Впервые в мировой практике из почеы выделены и идентифицированы белковые соединения класса гдикопротеинов - лектины. Разработаны методики их выделения и определения активности, показано их экологическое значение. Установлена взаимосвязь гемагглхзтинирующей активности почвы (ГААП) с уровнем эффективного, плодородия почвы. Предлагается использовать ГААП для оценки общей биологической активности почвы. I

Новизна исследований подтверждается шестью авторскими свидетельствами.

НА ЗАШТУ ВЫНОСИТСЯ:

1. Оценка биологической активности чернозема типичного мощного Лесостепи в агроценозах при выращивании сахарной свеклы, озимой пшеницы и кукурузы на зерно в севообороте и бессменно.

2. Ферментативная активность почвы как показатель экологического состояния агроценоза.

3. Методы выделения лектинов из почвы, определение их гемагглю-тинируицей активности.

ВОЗМОЖНОСТЬ ПРАКТИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ.Предлагаемый способ биологического тестирования может быть использован для оценки токсичности почв и аллелопатической активности соединений.

Разработанные индексы почвоутомления под сахарной свеклой, озимой пшеницей и кукурузой на зерно могут применяться при изучении биотических взаимодействий з агроценозах, конструировании полевых севооборотов для сельскохозяйственных предприятий с определенной специализацией и учитываться при составлении укороченных насыщенных севооборотов для фермерских хозяйств.

Методы выделения и очистки лектинов почвы могут быть использованы при изучении этих соединений в научных учреждениях.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.■ Материалы исследований были доложены на Всесоюзном научном совещании "Агрофитоценозы и экологические пути повышения их стабильности и продуктивности" [г.Ижевск, 1988 г.], 11-й международной конференции по лектинач "Interlec-ll" [г.Таллин, 1989г.], VIII Всесоюзном съезде почвоведов [Новосибирск, 1989], III съезде почвоведов и агрохимиков Украины [г.Львов, 1990 г.], конференции молодых ученых "Повышение роли молодых ученых' и специалистов в ускорении научно-технического прогресса" [г.Херсон, 1990 г.], VII Республиканской конференции "Аллелопатия - резерв и основа будущего земледелия" [г.Киев, 1990 г.], ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава Полтавского СХИ [г.Полтава, 1988, 1989, 1991-1993 гг.]

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, в т.ч. 6 авторских свидетельств на изобретения.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Объем диссертации 185 страниц машинописного текста, включает 32 таблицы и 22 рисунка. Она состоит из введения, 6 глав, выводов, списка использованной литературы ( 316 наименований, в том числе 86 иностранных авторов) и приложений. Основной текст диссертации изложен на 108 страницах.

- 4 -.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ОБЪЕКТОМ ИССЛЕДОВАНИЙ является чернозем типичный тяжело-суглинистый среднегумусный на карбонатном лессе. Содержание гумуса 4.92-5.682. гидролитическая кислотность 2,15-2,50 мг/зкв., сумма поглощенных оснований 33,70-36,35 мг/зкв.на 100 г почвы, рН водный колебался от 6.34 до 7,00, рН солевой -от 5,45 до 6,28, содержание легкогидролизуемого азота - 18.2-23,1, подвижного фосфора -11,3-13.5 и обменного кадия 12.5-14.1 мг/100.г почвы.

По физическим свойствам данная почва относится к группе наиболее благоприятных почв для возделывания сельскохозяйственных культур.

ПРОГРАММА И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ. Биологическая активность чернозема типичного изучалась в условиях стационара Полтавской областной сельскохозяйственной опытной станции им. Н.И.Вавилова на фонах с рааличным насыщением сельскохозяйственными культурами.

Схема опыта включала в себя девять вариантов: 1) многолетняя залежь; 2) бессменный посев сахарной свеклы [с 1974 г] 3) возделывание сахарной свеклу в севообороте с 202-ным насыщением; 4) возделывание сахарной свеклы в севообороте с ЗОХ-ным насыщением; 5) бессменный посев озимой пшеницы [с 1062 г]; 6) возделывание озимой пшеницы в севообороте с ЗОХ-ным насыщением; 7) возделывание озимой пшеницы в севообороте с 402-ньм насыщением; 8) бессменный посев кукурузы на зерно Сс 1962 гЗ; 9) возделывание кукурузы .на ,зерно в 10-польном севообороте.

Севообороты развернуты во времени и пространстве, повторность трехкратная, размещение систематическое. Площадь делянки 147 кв.м. Для соблюдения принципа единственного различия под каждую культуру вносились одинаковые - дозы органических и минеральных удобрений. Агротехника возделывания - рекомендованная для Данной зоны.

.Отбор почвенных образцов осуществлялся трижды за вегетационный период с помощью почвенного пробоотборника.

В опыте проводились следующие наблюдения, учеты и определения.

Содержание в почве гумуса - по Тюрину в. модификации Б.А.Никитина со спектрофотометричесяим окончанием [Никитин, 19733.

Активная и обменная кислотности, а также, активность ферментов полифенолоксидаэы, пероксидазы, каталазы, уреазы и инвертазы в почвенных образцах определялись по общепринятой методике [Методические указания по проведению исследований... Ч.II.Программа и методы исследований почв, 1983].:

Выделение и оценка активности агглютининов почвы проводилась по оригинальным.методикам, описанным в диссертации.

Определение количества хлорофилла и каротиноидоз проводились на спектрофотометре ."Specol-210" [Winter-mans, De Wots, 19551.

Токсичности почеы оценивалась модифшшрованным методом прямого биотестирования Нзйбауэра-Шнейдера [Гродзинский, Гродзинский, 1973], а также биотестом'на прорастание семян редиса по способу, который реализуется при помощи специального устройства, где семена тест-культуры прорастают на кассете с увлажненным поддоном. Разработка защищена авторским свидетельством К 1G30670 "Cnocoi А.М.Гродзинского для биологического тестирования".

Степень токсичности почвы яри возделнваи«; сельскохозяйственных культур в севообороте и бессменно проводилась по индексам почвоутомления , разработанным для трех изучаемых культур.

Полученные данные'обрабатывали методами дисперсионного, вор-реляционного анзлизов, по t-критерию Стьюдента [Доспехов, 10852, путевого анализа [Ли, 1978; Помогайбо, 19813 на ПЭВМ "Лскрз-1031".

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБОЩЕЩЕ

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ ПРИ РАаЕЧКОМ ' СЕЛЬСКОХОачЙСГЕЕКНС?? ИСЛО/ЪБСВАЕИИ

Анализ данных, jauDesao предосгавлеган:: ояыгкаЯ станцией к проведенных на>£1 опьяов, позволяет сделать вывод, что снижение зф-¿•«кживвсго плодородия чернэгека типичного в агрсцеяогах яри возделываний основных сельскохозяйственных ¡ультур сессмеп5Го свааакс с пищевыы режимом и физжо-химичесгсаш свойства® почз, а имеет причины йиохииического происховдения, что согл'.суег;сл с дашь л ряда исследователей [Gilles, 19373; Гродзинский, Унркип, Головко к др., 19893.

■В начальных стадиях исследован:® токсичность почта была оценена модифицированным методом Нзйбауэра-Шнейдера [Гродзинский, Гродзинский, 1973] и биотестом на прорастание семян редиса пс предложенной методике [Поспелов,Гродзинский, Самородов, 19Э1]. Порученные данные не позволяют с достаточной достоверностью, судить : наличии токсикоза в монокультуре.. Дальнейшие исследования с ¡¿л: посвящены изучению ферментативной активности почвы, поскольку сн^,. является весомым экологическим фактором, важнейшей характеристикой биогенвости почвы [Купревич, 1953], уровня ее 'окультуренноста,. плодородия [Муха, 1979].

На протяжении вегетационного периода изменения активности' ферментов зависели от культуры и срока отбора образцов (Табл.1)."

Подифенолоксидаза- фермент, отвечзтгдий за распад фенолькыг' соединений в почве и принишэдий непосредственное участие в про:

цеесах гумификации органического вещества, под озимой пшеницей снижал свою активность к. моменту уборки культуры; под сахарной сьеклой и кукурузой минимум активности отмечается в середине вегетационного периода. Подобной закономерностью характеризовалась и залежь, которая била введена в схему опыта в качестве эталона, как система со сбалансированным биохимическим уровнем, на что обращали внимание белорусские почвоведы [Щербакова, 1983].

Активность пероксидаьы,. другого окнслитслькс-восстсшогитель-його фермента, прикипающего участие в градафортап: органического вещества, под сахарной свечой и кукуру^сй была стабильно:,". во все сроки отбора. Под озимой пшеницей максимум а'отшюстк приходился на начало раашшга культуры, тогда как под аалежь;з пик исшлояв был осенью.

1. Динамика активности почвенных ферментов при разных способах во&дех«ъзшк культур ( среднее са 1.987... 1939 гг)

Изучае- С; .. Сахар; 72.П СВОКЛЗ- Озимая ' ппсчипг. ку г.фузз на

мые фер бо лежь зерно

менты ры

г - 'ТКП'УЧ

Бес- ТКГПГ-1 С""?* Еес- Типич Бе

смен- ный насы- смен- ный насы- смен-|кьй

ный сево- цб НпЯ пыи сево- !сеьс-

ПО С 81 обо- посев обо- по эев!обо-

рот рот ~ ¡рот

Иолифе- 1 3.30 5.77 4.12 3.93 10.27 8.26 8.93 4 .83 5.94

нолок- 2 2.83 3.55 2.90 2.95 4.77 3.93 4.35 3 .70 3.37

сидаза 3 6:51 5.СЗ 4.02 4.Со 3. 4Ь З.ОЭ 2.88 4 59 3.93

Перо- 1 1.51 2.94 2.32 2.70 4.73 5.51 5.04 г 04 2.46

ксида- 2 1.71 2.02 1.79 1.73 2.11 2.57 17 42 1.39

за 3 3.08 2.18 1.51 1.41 1.38 1.49 1.32 1 .37 1.91

Уреаза 1 18.28 20.42 15.67 15.06 20.81 17.54 18.02 15 85 13.82

2 21.08 20.12 13.44 14.35 22.69 15.04 16.65 16 13 14.76

3 17.84 20.84 13.67 13.86 20.77 16.54 18.'35 15 82 13.93

Ката- 1 8.5 3.4 6.2 6.8 4.9 5.5 5.1 6 9 8.4

лаза 2 13.1 5.4 7.6 6.9 5.6 6.9 5.4 8 7 8.4

3 10.9 6.1 6.8 6.6 8.8 10.3 10.1 9 0 9.3

Инвер- 1 48.75 28.36 30.18 31.24 33.07 27.53 32.73 30 56 34.53

таза 2 49.68 24.13 28.86 28.02 37.10 33.27 36.95 24 84 28.59

3 47.07 27.61 33.30 30.45 37.92 35.33 35.21 28.35 32.60 ......—_______ , .

Примечание. Здесь' и далее в таблицах и рисунках активность ферментов выражается в следующих единицах: Иолифенолоксидаза - мг пурпургаллина на 100 г почвы ; Пероксидаза - мг пурпургаллина на 100 г почвы; Уреаза - мг Шз на 1 т почвы; Каталаза - мл О на 1 г почвы эа 2 мин; Инвертаза - мг инвертированного- сахара на 1 г почвы ......

. Фермент уреаза, участвующий в трансформации азотсодержащих соединений, был стабилен по отборам под всеми изучаемыми культурами.

Каталитическая активность почвы, отражающая как протекание почвенных процессов, так и активность микрофлоры, была выше всего в летний период; исключение составила кукуруза, под которой активность плавно повышалась по срокам, отбора.

Один из ферментов, участвующих в трансформации углеводов -инвертаза, слабо изменяла свою активность на протяжении вегетационного периода под залежью и сахарной свеклой. Более динамично, с максимумом в весенний период, протекали процессы под озимой пшеницей. Обратная закономерность была характерна для почвы под кукурузой на зерно.

Представляло большой интерес изучить изменения ферментативной активности почвы при различном насыщении севооборота сахарной свеклой, включая монокультуру> поскольку она сильно реагирует на способ выращивания.

50-,

Е 48-

Д 46J

и

н 32

и 30-

ц 28-

ы 26 J

а 20-,

к 18-

т 16-

и 14-

в 12

н

0 8 1

Г» 6 -

т 4 -

и 2

34

ГррЯ

гГ

I

и

НСР 05 по годам исследований;

1987 0.27 0.13

1988 0.18 0.12

1989 0.42 0.23

III

0.68 0.64 1.53

IV

0.40 0.90 0.14

2.90 3.66 1.53

Рис.1. Ферментативная активность почзы под сахарной свеклой (среднее за годы исследований).

Условные обозначения: 1.Бессменный посев. 2.Типичный севооборот (207. насыщения). З.Севооборот с 3GX насыщением. 4. Залежь. I. Полифенолоксидаза; II. Пероксидаза-, III. Уреаза; IV. Каталааа; V. Инвертаза.

- 8 - .

Активность ферментов полифенолоксидаэы и пероксидазы при бессменном возделывании была выше б сравнении с севооборотом в 1.41 и 1.26 раза соответственно, что свидетельствует о более интенсивном протекании процессов гумификации и минерализации в почве под монокультурой (Ри~.1.). Ка 43Х выше был уровень уреааной активности в монокультуре корнеплодов. Такие биохимические сдвиги могут быть Еыэваны Сольиим количеством растительных остатков в почве после уборки. Активность указанных ферментов под естественной растительностью превышала севооборотные уровни з 1.12-1.33 раза, но была несколько шете по сравнения с монокультурой.

3 севообороте активность катадазы была в 1.32, а инзертазы -1.14 раза вьале бессменных посевов, однако не достигала уровней под залежью.

Увеличение доли сахарной свеклы в севообороте с 20 до 301 не привело к значительным изменениям биохимических процессов в почве. В среднем за 3 года отклонения от севооборота составили О.3-3.72 и

50-,

Е 48 н

Д 46-1 и

н 36-1

и 344

ц 32-* ы

а 20-

к 18-

т 16-

и -

в

н 10-1

0

с 8 •

т

и 6 -

4 -

2 -

31

I

II

НСР 05 по годам исследований:

1987 0.33 0.15

1988 0.13 0.26

1989 0.33 0.14

III

1.19 1.52 1.27

IV

1.00 1.40 0.18

2.57 2.63 0.93

Рис.2. Ферментативная активность почзы под озимой пшеницей (среднее за годы исследований).

.Условные обозначения: 1.Бессменный посев. 2.Типичный севооборот

насьзцения). 3.Севооборот с 40Х насыщением. 4. Залежь. Далее обозначения те же, что и к Рис.1.

были не существенными, что дает возможным увеличивать долю этой культуры в севообороте до 30%.

Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что все изучаемые ферменты реагируют на способ возделывания сахарной сЕеклы, причем их ответ является специфическим. Полифенолоксидаза, пе-рокеидаза и уреава в почве под бессменшаот посева),и повышают уровень активности в сравнении с севооборотом, а каталаза и инвертаза наоборот, понижают.

Другой культурой, которая в меньшей степени отрицательно реагирует на повторные посевы, является озимая пшеница. Активность почвенных энзимов менялась следующим образом.

Полифенолоксидазная активность под озимой пшеницей была выше при монокультуре в 1.21 раза (Рис.2.). Такая же закономерность характерна и для фермента уреазы (в 1.32 раза).

50п

Е 48-

Д 46-1

и

н 321

и 30-

ц 28-

ы 26-1

а .20-1

к 18-

т 16-

и 14

в

н 10-]

0 •

т 8 -

и

6 -

4 -

2 -

1 2 3

ЛЕ

I,

п

НСР 05 по годам исследований:

1987 0.12 0.12

1988 0.20 0.08

1989 0.22 0.09

III

0.28 0.83 1.18

IV

0.30 0.60 0.20

1,56 5.46 1.16

Рис.3. Ферментативная активность почвы под кукурузой на зерно (среднее за годы исследований).

Условные обозначения: 1.Бессменный посев. 2.Т::пич"ьй севооборот

3. Залежь.. Далее обозначения те ке, что и к Рис.1.

3

2

1

3

1

2

3

Во все годы исследований в севообороте активность лероксидазы была выше на 11-37%, а каталазы - на 15-30% по сравнению с бессменным посевом. Что касается инвертазной активность, то- различия между вариантами были существенны не во все годы опытов. Под залежью активность полифенолоксидазы, пероксидазы и уреазы были близки к севооборотным значениям и не превышали уровня монокультуры. Активность каталазы и инвертазы значительно, в 1,49 и 1,4? раза соответственно, превышали уровни севооборота.

Насыщение озимой пшеницей с 30 до 40%, обусловившее повторные Лосевы (.пшеница по пшенице) неоднозначно влияет на биологическую активность почвы и указывает на нецелесообразность таких повторных посевоз.

Таким образом, наиболее четко реагируют на бессменный посев !толи$енолоксидаза, уреаза и каталаза. Меньше определенности несет информация о персксидазной активности и наименее изменчива активность инвертазы.

Кукуруза - это одна из немногих культур, которую мокно возделывать несколько лет на одном и том же месте [Черномаз, Корольков, 1963; Бондарева, 1986; Ваникович, Бессонова, Подарь, 1986; РсЫег, 19883.При ее возделывании на зерно "в севообороте и бессменно колебания энзиматической активности по вариантам были . не . так значительны по сравнении с другими изучаемыми культурат (Рис.3).

Активность полифенолоксидазы значительно варьировала'по годам и в итоге достоверных различий мевду вариантами не б:ыо (Рие.З). . Пероксидазная активность почвы была в среднем в 1.19 раза больше в севообороте. Такая же закономерность отмечается и для инвертазы. Во все годы опытов активность уреазы была достоверно выше под бессменными посевами. Что касается каталитической активности, что различия были статистически недоказуемы. .

Под залежь» биохимические процессы протекали более интенсив-' но:* активность уреазы в среднем за три года была выше севооборота на 34%, каталазы - на 28%, инвертазы - на 52%.

Следовательно, при длительном повторном возделывании кукурузы наблюдаются изменения уреазной, пероксидазной и инвертазной активности.

Вышеизложенное позволяет сделать вывод, что в агроценозе .способ возделывания сельскохозяйственных культур в значительной мере влияет на биологическую активность почвы. Наиболее заметные отклонения от нормы, (севооборот) вносила монокультура сахарной свеклы. За ней по мере усиления толерантности' следует расположить озимую шзеяицу и кукурузу. Полученные данные дают возможность полагать, что ферментативная активность почвы может являться показа-

'елем не только биологической активности, но и экологического со-■ояния агроценоза, использована для диагностики почвоутомления.

БИОДИАШОСТИКА ПОЧВЕННОГО ПЛОДОРОДИЯ Доказано, что активность почвенных ферментов может быть пока-¡ателем почвенного плодородия СКупревич, 1951; Муха, 1979; ¡Пэрба-сов, Косолапова, 1988; Егиазарян, 1976],применяться для изучения Зиотических взаимодействий в агроценозах [Хазиев,1979], и тесно связана с различными физическими, химическими свойствами почвы, содержанием углерода, элементами питания и др. [ГаджиеЕа, Надиров, 1987; Яцевич, Павловская, 1988; Gispert, Arcara, 1988; Ловчий, Ефремова, Шимко, 1990]. Поэтому данный показатель был использован для биодиагностики почвоутомления, тем более,что многие исследователи выявили тесные корреляционные связи между урстл'шсстью и активностью ферментов, причем -на разных культурах и типах почв СХа-зкев, 1972; Котельников, 1986; Мереное, Фрунзе, 19S8; Павловская, Яцэеич, Бардакев, 1989 и др.].

3 научной литературе яри оценке динамики активности эвтзры . как правило анализируют ли» направленность изменения ферментативной активность, т.е. больше или меньне з севообороте по сравнению с бессменными посевами. Кроме того, все ферменты рассматриваются по отдельности без учета взаимосвязи медду ними. Поэтому было решено использовать следуший подход: на базе полученных в опытах данных с помощью математического аппарата выявить ферменты, максимально реагирующие на изменение биохимического состояния почвы при почвоутомлении и осуществить комплексную оценку этого явления.

На основании ежегодных данных полевых опытов был проведен корреляционный анализ взаимосвязи урожайности сахарной свеклы в севообороте и бессменно <? Ферментативной активностью почеы. Отрицательную связь с урожайностью (а значит - положительную с почвоутомлением) имели ферменты полифенолоксидаза, пероксидаза и уреаза. Положительную - каталаза и инвертаза. Из пяти было выбрано два, имешие наиболее высокие и стабильные коррелятивные связи и противоположную направленность: полифенолоксидаза (г- -0.734...-0.935) и каталаза (г- 0.525..., 0.908).

Используя их отношение, была получена формула, по которой предлагаем проводить оценку почвоутомления под сахарной свеклой, выращиваемой на черноземе типичном:

А пф

По--, где

А кат

- 12 -

По -индекс почвоутомления под сахарной свеклой;

А пф - активность полифенолоксидазы (мг пурпургаллина на 100 г

почвы);

А кат -активность каталазы (мл 0 на 1 г почвы за 2 мин)

Для озимой пшеницы отрицательной связью с урожайностью характеризовались ферменты полифенолоксидаза, уреаза и инвертаза. Пе-роксидаза и каталаза положительно коррелировали с продуктивностью культуры. Из пяти ферментов использовали два, с разной направленностью коррелятивных связей. Из ферментов,' имеющих отрицательный знак, наиболее стабильным была инвертаза: взаимосвязь с урожаем в 1987 г. составила - 0.868, 1988 г.- 0.850 и 1939 г.- 0.911. Каталаза имела высокие положительные связи: в 1987 г. г- 0.760; 1988 г г- 0.883; 1989 г.- г« 0.966. Используя эти ферменты, предлагаем проводить оценку почвоутомления под озимой пшеницей, выращиваемой на черноземе типичном-по соотношению величин их активности:

А ине

П пш - - , где

А кат

П пш - индекс почвоутомления под озимой пшеницей;

А инв - активность инвертазы (мг. инвертированного сахара на 1 I

почвы);

А кат -активность каталазы (мл О на 1 г почвы за 2 мин) -

Следующей, культурой, у которой были прослежены корредятиЕны< связи между активностью ферментов и урожайностью, была кукуруза, Из пяти ферментов каталаза, пероксидаза и инвертаза имели положи' тельные коэффициенты корреляции, уреаза - отрицательные, а полифенолоксидаза- как положительные, так и отрицательные значения.

Последний из указанных ферментов ввиду нестабильности ксполъ зовать было нельзя. Т.о. только уреаза представляла для нас инте рес ( К с урожайностью составляла -0.764.. .-0.887). Среди тре: ферментов с положительными связями были использованы ДБа: перокси даза (г- 0.923.. .0.942) и каталаза (г- 0.191. .'.0.918).

На основании данных ферментов предлагаем проводить диагности рование почвоутомления под кукурузой на зерно при выращивании е на черноземе типичном по следующему соотношению величин их актив ности:

А пер + А кат

Пк -- , где"

, А ур

Пк - индекс почвоутомления под кукурузой;

А пер - активность пероксидазы (мг пурпургаллина на 100 г почвы); А кат -активность каталазы (мл 0 на 1 г почвы за 2 мин); А ур -активность уреазы (мг Ш на 1 г почвы за 24 часа)

. Снижение почвенного плодородия в данном случае не представляется возможным характеризовать абсолютной величиной или конкретным числовым выражением, по которому можно судить о степени его проявления, т.к. величина активности ферментов лабильна и может меняться в широком диапазоне в зависимости от внешних факторов СХа-зиез,19721. Наиболее правильным с методической точки зрения является сравнение индексов з контрольном варианте (севооборот) с опытным - бессменным посевом культур и если различия статистически достоверны, делают вывод о наличии почвоутомления под изучаемой культурой. Основным критерием в таких опытах должен быть принцип единственного различия.

Статистическая оценка по t-критерию Стьюдента доказывает, что по отдельно взятым ферментам судить об изучаемом явлении достаточно сложно: различия между вариантам-i в некоторые сроки отборов были математически недоказуемы.

Индексная оценка, учитывая комплексный подход, позволяет с более высокой степенью достоверности диагностировать снижение почвенного плодородия в бессменных посевах с.-х. культур.

Все выйеизлояенЕое имеет как научную новизну, так и определенную ■ практическую ценность, что подтверждается выданными авторскими свидетельствами N 1704071 "Способ диагностики почвоутомления под сахарной свеклой", N 1704072 "Способ диагностики почвоутомления под озимой пшеницей", Н 1704073 "Способ диагностики почвоутомления под кукурузой". ■

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ БЕЛКОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ПОЧЕЫ, ИХ ЕЬШЕЛЕНИЕ И ОПЕНКА АКТИВНОСТИ

Анализ данных ферментативной активности указывает на специфичность их изменения в зависимости от культуры, способа ее зозде-лывания и фазы развития. Это позволило предположить, что в почве могут содержаться - иные соединения, обладающие высокой специфичностью. Известно, что таким свойством обладают вещества белковой природы - лектияы, которые обратимо и избирательно связывают углеводы, не вызьшая их химического превращения. Лектины взаимодействуют как со свободными моно- и олигосахаридами, так и с остатками углеводов'в составе гликопротеидов,. полисахаридов и ли-попротеидов. В наиболее простой форме взаимодействие проявляется в виде реакции агглютинации частиц и клеток, например, эритроцитов. Установлено наличие лектинов практически на всех уровнях организации органического мира CNeter, 1955; Луцик, Панасюк, Луцик, 1981 и др.], хотя значение их для организма окончательно не выяснено.

■Вместе с тем ссылок, касающихся наличия лектинов в почве, в

специальной литературе не обнаружено!Этому были посвящены дальнейшие исследования.•

Экстракция почвенных образцов традиционными методами была малоэффективной. После 2-х часовой экстракции навески почвы дистиллированной водой(1:10), подкиоленной водой (рН - 4.0) и 0.9% NaCl !Луцик, Панасюк, Луцик, 19813 фильтраты оценивались по активности реакции гемагглютинации. При этом реакция отсутствовала или была минимальной. Это свидетельствовало о. том, что лектины если и присутствуют в почве, то находятся преимущественно в связанном состоянии.

Поэтому для экстракции были использованы фосфатная буферная смесь (минеральный буфер) и фосфатно-цитратный буфер (оргаяо-мине-ральный буфер), которые готовились с тремя различными значениями рН, наиболее часто используемым для определения дектинов. Время экспозиции составляло 2 часа при комнатной температуре, в течение ночи при 4 град.С, а также 2 часа при 37 град.С + в течение ночи при 4 град.С [Луцик, Панасюк, Луцик, 1981; Boyd, Requera, 19493.

Выяснилось, что вытяжки агглютинировали эритроциты человека во всех изучаемых вариантах (Табл.2), причем использование орга-но-минерального буфера было более эффективно. Преимущество буфера Мак-Ильвейна доказывается и тем, что извлечение агглютининов происходило во всем диапазоне рН буфера - от 4.2 до 8.0.

С целью идентификации белковой природа агглютининов полученный выдерживали в термостате при 105.град.с в течение .3-х часов (Табл.3). Проведенная после этого.оценка в иммунологических план-

2. Гемагглютинирунцая активность экстрактов при извлечении буферньми смесями (в условных единицах)'

Объекты В а р и а н ты экс П О 3 и ц и-и

Буферы исследо- РН 2ч. при в течение 2ч.при 37град

комнаткой ночи при + в течение

вания • темпера- 4 град.С ночи при

туре 4 град.С

'¡Фосфат Пашня 6.0 5.0 6.5 10.0

ная 6.8 4.0 7.0 8.0

буфер- 7.4 4.5 5,5 10.0

ная Залежь 6.0. 4.0 15.5 - 13.5

смесь 6.8 4.5 6.0 10.0

7.4 5.5 7.5 9.5

Фосфат Пашня 6.0 4-8 20.5 22.0

но-щгг 6.8 3.0 16.0 13.5

ратная 7.4 5.5 11.0 12.0

буфер- Залежь 6.0 4.0 16.5 17.0

ная 6.8 3.5 10.5 9.0

смесь 7.4 4.0 8.0 .11.5

шетах показала снижение гемагглютинируюшей активности на 14-50% по сравнению с контролем.

Инкубация экстракта о протэолитическим ферментом fFronasp £) также шегасз понижение агглютювфушей способности вытяжки кг-19-55% fТабл.3).

Это убедительно доказывает бэт:о«ую тзп*зду земств, вызычта»-елх агглютинации эритроцитов.

Сдедукгам этапом было пыг.еле белков и? гквтректот понве^-з;'лс:-:алькы).гл метода«::. Дза гтег? бьгт тепаяьзвго'» способ "вуу-стулен-"атого пшсртоуперзтгряог© руаяогьвэго ir*:>,"j'ioi:i'prTгнг? [i-.w: Пагаевг?, ДЗгавк, 1931Г. Охлэ зленный TP '' rrci.C ркстрзкт почты пот-/п'с.тялгя до пЯ - Л.О 5 к HCl гг нзечЕплся голодным этетатс*' £СЖ-ной конечной ковценгравии по объему. После 2-х часового выдерживания в холодильнике при 4 град.С в осадок- выпадали темноокра-пелпыэ кс'.:п;::екты экстракта, что вероятнее всего сгилетедьствовп1:? о rvmuiGZL:: кислот ГСеПве, 1Э513. После певграйтиргвз-

Ж8 осадок' раетеэрялся « исходной растворе и использовался rrr анализа (£рькция А). Надо„адочкуу <<у,>:у,ость покселз'жв&ги 5 п до pH - 3.5-5.в и яобэвгагя квлкг:.« порциями охлдазеяннй эггчг.» (-£ град.С) до 7е%-в;й гх-пцгагредки из объему. ' Зта спврэдпк гг.с.- *

.0-:: vaccsoro c;.v.

-.тая выегтяа oSpasorsmfe с?,етх.~>гс -

кого осада, который был отделен центрифугированием. Суперп;та гздзаодолзя, а «ездр»? гастгорялся в дастрагенге (5сс.кгп-:п Т>).

3. Аггдлткнг.ру;:-цс-ч епесо5вэс?ь почвенных экстрам при воздействии рзйдичкых факторов (г> уел.ед)

Г.....— ....... Варианты опыта Экстракция 2ч.при комнатной том пературе- Выдерживание Зч при 1С5 град.С- % к контролю . Инкубация с проказой 24 часа

контроль опыт Z к контролю

' Залежь 10 8 80 16 12 75

Сахарная свекла

монокультура 14 12 86. 21 17 81

Сахарная свекла

севооборот 10 . 7 70 37 12 71

Озимая пшеница

монокультура 12 7 58 22 11 ПГ;

Озимая пшеница

севооборот 14 . 9 64 19 10 52

Кукуруза 12

монокультура VTJVt TFiXT я л 10 5 50 21 57

Г\у г\у ру оа севооборот 7 4 ' 57 22 10 45

Е а 22

Д к

и т 18

н и

и в 14

Ц н

ы 0 с 10

т 6

и Z

оси

A(II) ВСIII) ABCIV) Группы крови

Рио.4. Гемагглютинирующая. активность выделенных соединений почвы после этапов двухступенчатого зтаяолы-юго фракционирования-. А - первый этап: соединения, выпавшие в осадок при 20%-ном насыщении этанолом; Б - второй этап: соединения, выпавшие в осадок при 76%.-ном насыщении этанолом.

Обе полученные фракции были проверены на геыагглютинирущую активность с эритроцитами всех четырех групп крови человека в системе ABO. Установлено, что фршщия А, хотя и показала высокую активность (Pkq.4), ке проявила шпюкой специфичности. Можно предположить, что после первого этапа фракционирования в осадак выпали гуминоЕые кислоты, балластные белки к другие примеси, комплекс которых вызвал кеспе-цкфичоску® реакцию агглютинации. Высокую специфичность к AC1I) группе крови проявила фракция Б. Гемаггдпотинирую-sss активность при это;,! ярешзага остальные группы крови более чем Б 4 раза.

Известно, что лектики меняют свою■активность в зависимости от величины рН СГолынская, 1979]. Поэтому по предложению В.Л.Мухи при определении гемагглютинирукщей активности почвы учитывалась реакция почвенного раствора к выделение лектинов проводили буфером с соответствующей реакцией среды. Такой методически верный подход обеспечивает получение сравнимых показателей независимо от типа почвы, времени отбора и выращиваемой культуры. Из данных таблицы 4 видно, что при использовании буфера с постоянным значением рН не всегда можно сделать однозначные выводы об активности лектинов, т.к.. значения изменяются очень незначительно (2.0-3.5 ед.). Статистический анализ показывает, что извлечение буфером при рН., равной рН почвенной вытяжки,■является более достоверным..

Поскольку выделенные соединения вызывают агглютинацию эритроцитов, снижают активность при действии высоких температур и разрушаются при взаимодействии с протеолитическими ферментами, очищаются конвенциональными методами, специфичны к эритроцитам разни групп крови человека, значительно меняют свою активность в зависи

4. Генаггдютанирухщая активность почвенных вытяжек при экстракции буферным раствором при разной величине рН

Образцы почвы, взятые под: При извлечении буфером с рН-7.4 При экстракции буфером: - 0.05

с рН водной вытяжки Ъ факт. с рН солевой вытяжки tфaкт.

Залежью 2.0 9.0 . 10.90 9.0 10.90 4.60

Сахарной свеклой 2.0. 5.5 . 5.45 8.0 9.34 4.60

Озимой пшеницей 2.0 8.5 10.12 7.5 8.57 4.60

Кукурузой 3.5 11.0 11.68 11.5 12.46 4.60

мости от рН среды, можно с полным основанием классифицировать их как лектины.

Описанные методические подходы защищены авторскими свидетельствами N 1663540 "Способ выделения лектинов из почвы" и N 1707530 "Определение активности лектинов в почве".

Постоянный круговорот органического вещества в почве создает все условия для образования в ней определенного уровня гемагглюти- • нирувдей активности почвы (ГААП). Этот показатель включает в се<5я суммарную активность всех лектинов, находящихся з почве, независимо от их происхождения и индивидуальных характеристик и остается относительно постоянным на протяжении ротации севооборота.

5.Коэффициенты корреляции между продуктивностью с.-х.культур и уровнем ГААП при извлечения лектинов различными зкстрагентами

Условия экстракции 1987г. 1988Г. 1989Г. |

Сахарная свекла. -

рН буфера - водный рН почвы 0,790 . 0,869 0,987

рН буфера - солевой рН псчвы 0,687 0,888 0,991

Озимая пшеница

рН буфера - водный рН почвы -0,893 -0,929 -0,984

рН буфера - солевой рН почвы -0,881 -0,952 -0,981

Кукуруза 0,224 0,934

рН буфера - водный рН почвы 0,941

рН буфера - солевой рН почвы 0,934 0,271 0,885

Сформированный таким образом уровень лектинов в почве находится во взаимосвязи со многими важнейшими свойствами почвы, в . том числе эффективным плодородием, и является не только фактором, имеющим экологическое значение, но и объективным показателем суммарной биологической активности почвы. Доказательством этого могут служить выявленные коррелятивные отношения, между продуктивностью сельскохозяйственных культур в севообороте и ГААП при извлечении лектинов соответствующими буферами (Табл.5).

ВЫВОДЫ

1. Длительные повторные посевы отдельных сельскохозяйственных культур в условиях Лесостепи негативно сказываются на экологическом состоянии агроденоза и вызывают снижение.уровня эффективного плодородия почвы. При этом урожайность сахарной свеклы снижается в среднем на 28,5%, озимой пшеницы - на 28,3%, кукурузы на зерно - на 19,&7„

2. Снижение урожайности сельскохозяйственных культур в бессменных посевах не связано с ухудшением питательного режима, -агрохимических и агрофизических свойств почвы.

3. Биологическая активность почвы позволила оценить экологическое состояние агроценоза, что подтверждается тесной корреляционной зависимостью между уровнем эффективного плодородия и активностью ферментов полифенолоксидазы, пероксидазы, уреазы.каталазы и инвертазы.

4. Активность пяти изучаемых ферментов существенно изменяется в агроценозах в зависимости от способа воздедьшания сельскохозяйственных культур: амплитуда колебаний относительно возделывания в типичном севообороте при монокультуре достигает под сахарной свеклой- от -1,27 до +1,36 раз, озимой пшеницы - от -1,18 до +1,16, кукурузой на зерно от -1,10 до +1,12 раз.

5. На основании корреляционных связей■между активность» изучаемых ферментов и уровнем эффективного плодородия чернозема проведена комплексная оценка почвоутомления, разработаны методы определения и индексы почвоутомления. В частности, для сахарной свеклы индекс почвоутомления (Пс) расчитывается по формуле: Пс - Акт.по-лифенолокеидазы : Акт. каталазы. Для озимой пшеницы и кукурузы на зерно эти индексы определяются соответственно следующими отношениями: П пш - Акт. инвертазы : Акт. каталазы, Пк - (Акт.пероксидазы + Акт.каталазы): Акт. уреазы. Оценка почвоутомления позволяет судить об экологическом-состоянии агроценоза, способности почвы к самоочищений и созданию благоприятных жизненных условий в агроце-нозе, применяться для изучения в нем биотических взаимодействий.

5. Согласно экспериментальным данным и оценке почвоутомления, при отсутствии лимитирующих экологических факторов (главным образом -эдафических и орографических), считать допустимым насыщение •зерно-свекловичного севооборота сахарной свеклой до 30% и нецелесообразным применять повторные посевы озимой пшеницы (пшеница по пшенице).

7. Исследованиями выявлено содержание в почве белковых соединений специфической природы. Проявление гемагглктанативных

свойств, снижение активности при нагревании, разрушение под действием прогеоАитических ферментов, специфический ответ при взаимодействии с эритроцитами разных групп крови человека позволяют классифицировать их как лектины.

8. Эффективная первичная очистка гемагглатининов из почвы возможна только при экстракции их органо-кин<*рально£ буферной снозь» согласно предоженты параметрам с последующи« ниэкотемле-ратурнкм зтанольным фракционированием.

9. Уровень гемагглютинирукдей активное!:) почйу (ГА/Л) находится в значительной м-.Ы'.ап.'Остк от рН сре„ы. При определении ГЛАП »¿•обходимо учитывать реркцшэ почвенного раствора и г-ыделение лектинов провалить буфером с рН, равной активной или обменной кислотности почвы.

10. ГА/Л имеет определенное экологическое вдаченпз и являете;; облектиэйта пок&в&тлгем сударкой биологической екяшгеги пощзи.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

1. При возделывании сахарной свеклы , в плая>рнш условиях aj. черноземе тал«гасм в ' аерао-свеиовичком севообороте вогисйко его насыщение этой культурой до 30%.

2. В условиях во&д&швшш сахораой евииы, озимой пшенке,; к кучурхз» яа зерно на черноземе типичном при датирований насыщении севооборота втт-л культуре.»« рекомендуем' исиольеоезть рагр^Оотал-лке индексы почвоутомления, который для сахарной свеклы (По) расчитывается по формуле По - А лф. : .А кат...для оеимой пшенник (Л где) и кукурузы на зерно (Пк) соответственно - Л nu - А пне. : А кат.; Пк - (А пер. + А кат.)-: А ур.

3. В ¡сачестве объективного показателя общей биологической активности почвы рекомендуем использовать гемагглютинирующую. активность почвы.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Муха В.Д., Поспелов C.B. Влияние возделывания сахарной свеклы на ферментативную активность чернозема типичного. //Тезисы Всесоюзного совещания "Агрофитоценозы и экологические пути повышения их стабильности и продуктивности". -Ижевск, 1988,- С. 205-210.

2. Краснюк Й.М., Чапко-П.М...Гриб Н.И., Наталочка В.А., Муха В.Д.., Поспелов C.B. Влияние длительного применения удобрений на плодородие почвы и урожай культур в севообороте. //Тез. докладов V1ÎÎ Всесоюзного съезда почвоведов (1.4-18 августа 1989г., Новосибирск). -Кн. 3. - Новосибирск, 1989. - С.47.

3. Pospelov S.V., Mukha V.D. Soil Substances possessing agglutinating capacity. //11th International Lectin Conference: Book of Abstracts. Tartu, June 4-9, 1989 /Tartu University, Tartu, 1989, C. 59.

4.Поспелов C.B. Ферментативная активность чернозема типичного при возделывании озимой пкеницы бессменно 'и в севообороте.//Повышение роли молодых ученых и специалистов в ускорении научно-технического прогресса: Тез.докл.- Херсон, 1990.- С. 211-212.

5. Поспелов C.B., Муха В.Д., Райко А.П. Влияние насыщения севооборота сахарной свеклой на ее урожайность и ферментативную активность чернозема типичного. //Ill съезд почвоведов и агрохимиков Украинской ССР, 11-14 сентября 1990 г.: Тез. докл. /Харьков, 1990,- С. 151.

6. Способ А.М.Гродзинского для биологического тестирования: А.с. 1630570 СССР ÎÛK31 А 01 G 1/02/ Поспелов C.B.', Гродзиксгай A.M. Самородов В.Н.- N 4475010/15; Заявл.22.08.89., Опубл. 28.02.91., Вюл N 8.

7. Способ выделения лекткнов из почвы: А.с. 1563540 СССР МКИ S 01 N 33/24 /' Поспелов C.B. . Годшская E..JL, Самородов В.Н.-N 4697528/15; Заявл! 24.04.'8?., Опубл.; 15.p7.91..'¿ол.H 26.

8. Способ диагнбстики почвоутомления под сахарной свеклой: А.с. 1704071 СССР ШИ G 01 H 33/24/ .Муха В.Д.. Поспелов' C.B., Вовк Ю. П., Павленко Е.Г.- N 4707353/15; Заявл. 1Э.05.В2., Опубл. 07.01.92., Бш Ш. .

.9.' Способ диагностики почвоутомления под озимой пшеницей: А.с. 1704072 СССР МШ G 01 N. 33/24 / Муха В.Д., Поспелов С.В.-N 4707895/15; Заявл. 20.06.89. , Опубл.07.01.92., Бш. К 1.

10. Способ диагностики почвоутомления под кукурузой: А.с.1704073 СССР МКИ G 01 N 33/24 / .Муха В.Д., Поспелов C.B. -H 4710263/15; Заявл. 26.06.89., Опубл.-07.01.92., Бгал.К 1.

11. Способ определения активности . лег.тннов в почве; А.с.1707530 СССР МКИ G 01 N 33/24 /Поспелов C.B., Муха В.Д., Го-лынская Б.Л. .Самородов В.В.- N 4756390; Заявл.03.11.89., Опубл. 23.01 !92., Бюл-N 3.

12. Поспелов C.B. Влияние способа возделывания основны: сельскохозяйственных культур на ферментативную активность чернозе ма типичного. // Круговорот аллелспатически активных Ееществ ; биогеоценозах../Сб. научи.трудов. -Киев, Наукова думка. - 1992 - С.127-133.