Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Антиконвульсантные и нейротоксические эффекты при комплексной патогенетической терапии судорожного синдрома в эксперименте

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Антиконвульсантные и нейротоксические эффекты при комплексной патогенетической терапии судорожного синдрома в эксперименте"

РГб од

1 о ЛПР 1935

На прзБ5л рукописи

Абросимов Игорь Юрьевич

лятхоятгльсдатвнЕ и яейротошяесяие ззмкга ■ яря комплексно:! ялгогенепяесзсой терши судорожного «гядгаи в зхепшвшнтЕ

03.СО. 13 - флзиология неюбе-кл /i ливохшк

Автореферат диссертации ва соискание ученой степени кандидата биологических наук

москва - 1995

Работа выполнена в лаборатории биохимик Научно-иссдедо-■ ватедьского института общей патологии и " патофизиологии Российской АМН.

Научные р у'к оводитеди:

доктор биологических наук, профессор Р,'Н. ГЛЕБОВ

кандидат биологических наук - " М,Н. КАРПОВА

О ф и ц и а л.ъ вне о и п он е н т ы:. -

доктор биологических наук, профэссор В. А. САФОНОВ

доктор медицинских наук, профессор Р.У. ОСТРОВСКАЯ

Ведущее учреждение: Российский государственный медицинский Университет

. Залита диссертации состоится и^^иЛ 1995 года в -часов на заседании Диссертационного совета Д.001.03.01 при Научно-исследовательской институте общей патологии и па-'"4-тофизиологии Российской АМН (125315, Москва, Балтийская ул., 8)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Автореферат разослан им^^-д 1995 года

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат медицинских наук

Л.Н. Скуратовская

05ЦДЯ ХАРАКТЕР! лГПЖА РАКЛИ

Актуальность проблемы. Эпилепсия, согласно определения экспертов ВС8 (Женева, 1S80), является хронический заболеванием головного мозга человека, характеризующееся повторная припадками, которые возникают в результате чрезмерных нейронных разрядов и сопроваддавтся разнообразными клиническими я параклиническими симпгагачи. По статистическим даннш, частота заболевания эпилепсией е общей популяции варьирует от 0,4 до 4 на 1000 человек населения (Delgado-Escueta et al., 1986; Tsuboi, 1S88). Широкая распространенность. хронически-прогредиентное течение забшева-гт?:, которое сопргггожяается определенными психоэмоциональными и .. ьзталяектуалышма изменениями, делают проблему лечения эпилепсии не только ьгэднцинской, но и ванной социальной проблемой.

Несмотря на улучшение диагностики, реализации дифференцированного подхода к терапии различных форм эпилепсии и постоянное пополнение арсенала рраяа новыми антиэпилептичесгаыи препаратами, все ецэ остается большая категория больных (около 25%), резистентных к фармакотерапии (В.А.Карлов, 1990; Schmidt, Morselli, 1285). Наряду с этим, для. успешного проведения лечения часто требуется назначать большие терапевтические дозы препаратов, которые при длительной применении почти у 602 больных способствуют развитию многочисленных побочных эффектов и осложнений (В.А.Карлов, 1990). Поэтому разработка новых элективных иетодоз лечения эпилепсии является одной из актуальных проблем, имекщгк большое медицинское и социальное аначение.

Сдгаы из наиболее перспективных подходов а лечении эпилепсии может авкться комплексное применение препаратов в соответствии с принципом комплексной, патогенетической терапии (КПТ), который был обоснован и разработан Г.Н.Крыжановсгаш (1980-1S91) на различных-моделях невропатологических синдромов, характеразущихся гиперак-тивностыз систем.

Принцип КПТ 'закшчается в сочетанноы воздействии препаратами на базисные механизмы эпклептогенеза. Как известно, в основе эпи-лептизации нейронов > лежат нарушение баланса между тормозными и возбуждаюгтими процессами в пользу преобладания процессов возбуждения. Такая ситуация возникает как в результате нарушения тор-моаных ГАМКергических механизмов, связанных с входом в нейрон СГ или ослабления выхода К+, так и чрезмерного усиления входа Са2+ и Na'*' (Г.н. Крыжаповсгай, 1980, 19s0, 1991). Теким образом, КПТ эпилепсии должна быть направлена на усиление .тормозных мехаг

низыов, т.е. увеличение входа И" и выхода К+, а также на ослабление возбуждающих механизмов, т.е. обеспечивать блокаду входа Са2+ и Ма+. Такое комплексное воздействие на урштерные механизмы эпилептизации нейронов, как следует из принципа КПГ, может значительно усилить противосудорожное действие препаратов, снизить их терапевтические дозы и уменьшить риск возникновения побочных эффектов. • \

Пель и задачи исследования. Дель исследования заключалась в экспериментальной разработке нового подхода к лечения эпилепсии по принципу КПТ в виде воздействия различными прстивосудорожнкми препаратами ка основные механизмы эпилептогенеза.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Определить.противосудордашую эффективность и нейротоксич-ность препаратов, ингибирувдих гшерактквздиа нейронов, связанную с входом Са2*, при их раздельном и сочетаином применении с вычислением терапевтического индекса.

2. Определить противосудоражную эффективность и нейротоксич-ность антиэаилептических препаратов, усиливающих ГАМКергичёское торможение, при их раздельном и сочетанном применении с вычислением терапевтического индекса.

3. Определить противссудорскную эффективность и нейрото:-личность при' сочетанноы применении препаратов, действующих на разные ' механизмы эпилептогенеза, с вычислением терапевтического индекса.

4. Провести сравнительный анализ эффективности и нейроток-сичности исследованных препаратов прй их совместном применении в различных по составу комбинациях.

Новизна исследований. В результате исследования экспериментально разработана КПТ судорожного синдрома-в виде сочетанного воздействия препаратов на основные трштерные механизмы эпилептогенеза.

Показана целесообразность включения блокаторов Са-каналов в комплексную патогенетическую терапии судорожного синдрома.

В работе впервые проведен сравнительный анализ противосудо-рахной эффективности и нейротоксичности антаэпилептических препаг ратов и антагонистов кальция при их сочетанноы _ применении в. 44 комбинациях.

Показано, что при совместном применении производных 1,4-ДГПа риодипина и нифедипина с антиэпилептическими лекарственными пре-

паратами потенцирование их противосудорожных эффектов сопровождается аддитивны!.! характером нейротоксического действия.

Теоретическая и практическая значимость результатов. Полученные результаты исследования подтверждают теоретические положения, лежащие в основе принципа КПТ. В частности, на модели судорожного синдрома показано, что комплексное воздействие препаратами на основные механизмы эпилептогеяеза в виде усиления тормозных ГАМКергических механизмов и . ослабления возбуждающих процессов, связанных с входом в нейрон Са2+ и На+, является более эффективным, чем воздействие только на один из этих механизмов. Наряду с этим показано, что совместное применение антиэпилептических препаратов и антагонистов кальция (риодипина и МК-801) приводит к более значительному потенцированию их противосудорожной эффективности по сравнению с сочетании применением только антиэпилептических препаратов.

• Особую теоретическую и практическую значимость имеют результаты, полученные в отношении аддитивного характера нейротоксичес-кого действия антагонистов кальция (риодипина и нифедипина) при их сочетанном применении с актизпилептическими лекарственными средствами.

Исследование характера противосудорсяного и нейротоксическо-' го действия препаратов в № различных комбинациях позволило определить наиболее оптимальные по составу комбинации препаратов; В этих комбинациях в значительно большей степени усиливаются проти-восудорожше, чем вейротоксические эффекты препаратов, что в конечном счете приводит к более высокому терапевтическому индексу комбинации по сравнении с терапевтическим индексом входящих в нее препаратов. ^ ,

• ^ Разработанная КПТ открывает новые возможности для лечения эпилепсии. Преимущество КПТ заключается в применении малых доз препаратов и уменьшении вероятности возникновения побочных эффек-йта и осложнений. Полученные на модели судорожного синдрома результат» иогут быть полезными не только для лечения эпилепсии, но и для разработки КПТ других заболеваний ВДС. характеризующихся гиперактивностью систем.

Положения, выносимые на защиту. '

1. Комплекснаяч патогенетическая терапия судорожного синдрома, заключающаяся в сочетанном воздействии препаратами на базис-

ные механизмы эпилептогенеза в виде усиления тормозного ГАМКерги-чесшго контроля и блокады Са-, Иа-токов, обеспечивает потенцирование противосудсрсашойэффективности каждого из применяемых препаратов при значительном уменьшении их доз и высокий тералевги-! ческий индеда комбинаций. -

2. Разработанный метод комплексной патогенетической терапии, ' который ""позволяет значительно уменьшить дозы препаратов и полу-

| чить высокий, терапевтический индекс комбинаций, моает быть реко-

| ыендовав для клинического применения с целью создания эффективной

терапии эпилепсии.

| Апробация работа. Бо теме диссертации опубликовано 8 печат-

I ных работ. Материала диссертации доложены на конференции, посвя-

! ценной 70-летию со дня, рождения академика Г-Н. Крыжановского

; - (Москва, 1992), научной конференции по проекту "йшемические пов-

реждения и наиболее распространенные заболевания мозга: механизмы и методы коррекции" (Москва, . 1993), симпозиуме "Физиолого-биохимические основы жизнедеятельности мозга" (Санкт-Петербург^ 1994), 2-ом Международном конгрессе по патофизиологии (Киото, 1994).

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литература, описания материалов ц методов исследования, ре. . зультатов .экспериментальной работы, их .обсуждения и.выводов. Ра-., бота изложена на 163 страницах машинописного текста. Диссертация • иллюстрирована 8 рисунками и 43 таблицами. Библиография содержит " 253 источника, из них 226 иностранных.

НАТЕРШЫ И ШОДУ КССЛЕДОШБШ ' Исследования проведены на 3000 белых беспородных мышах самцах массой 18-24 г. Животных содержали в обычных условиях вивария на стандартном пищевой рационе.

Противосудорожную эффективность препаратов и их комбинаций оценивали по тесту максимального электрошока. Тестирующий ток от злектростиыулятора ЗНС-01 (Львов), подавали через ушные электроды, которые представляли собой два легких зажима типа "крокодил" с плоскими посеребренный пластинами площадью 0,5 см2. Параметры переменного тока (однофазные прямоугольные импульсы) подбирали с" таким расчетом, -чтобы у всех животных электрошок вызывал чони-' ко-клонические судороги с максимальной экстензией задних конечностей, но при этом не приводил к гибели всех животных. Такт! об-■ разом были установлены параметр! тока, которые использовались на

протяжении всей экспериментальной работы: 60 Гц. 40 мА, длительность импульса 200 мкс, длительность периода раздражения 400-500 MC.

Показателем эффективности препаратов как при раздельном, так и при сочетанием их применении являлась доза, предупреждающая возникновение тонических экстевзорных судорог задних конечностей у 50Z животных - ЭД50. значение кЬторой определяли общепринятым истодом Litchfield и Wílcoxon (1949), используя компьютерную программу (Kan Pul Fung. 1989). Комбинации препаратов исследовали при одинаково« соотношении их доз относительно Щ50 .препаратов при раздельной применении (изозффективные дозы).

Анатиз и последующую опенку характера прставосудорсашого действия препаратов в комбинациях проводили с использованием изо-бологргфического метода Lóeme, (1953) в модификации Ю.И. Лисункина (1961) и метода, основанного на определении фрзкцгоншх эффектов- ' ных доз (ФЗД). т.е; отношения мелзду ЭД50 препарата в комбинации с другим веществом и его ЭД50 при-раздельном применении (Elison et al., 1954; Kerry et al., 1975). Значение индекса ФЗД комбинации (сумма ФЗД препаратов в комбинации) указывало на характер действия препаратоз: если индекс меньше 0,7 - синергизм типа потенцирования; больше 0,7» но меньше 1,3 - аддитивный: больше 1,3 - антагонистический. Последний метод анализа был .использован при сравнительной оценке противосудорожной эффективности 2-х и 3-х • компонентных комбинаций. С згой.целью вычисляли фракционную суммарную эффективную дозу (5СЗД) двух препаратов в ЗгХ кшпонентной комбинации (отношение суммы ЗД50 двух препаратов в 3-х компонент-вой комбинации к суше ЗД50 этих же препаратов в 2-х компонентной комбинации). Индекс ФЭД 3-х компонентной комбинации определяли, как сумму ЗСЗй двух препаратов и ФЗД третьего препарата. Считали, что если индекс ФЗД больше 0,7» но меньше 1.3 - эффективность 3-х компонентной комбинации достоверно не отличалась от эффективности 2-х компонентной комбинации; если индекс меньше 0.7 - усиливалась при добавлении третьего препарата (потенцирование); если индекс больше 1,3 - уменьшалась при добавлении третьего препарата (антагонизм) . •

Нейротоксичвость препаратов при раздельном и сочетанном применении определяли используя "rotorod test" (Duntas, Mlya, 1957). Для этого проводили предварительное тестирование, проверяя спо- '

- б -

J

собность животных удерживаться на вращающемся стержне диаметром 2,5 см со скоростью 6 об/мин в течение 10 мин. животных, ве прошедших этот тест, в дальнейшем в эксперимент не включали. О наличии токсичности судили после первого падения животного в течение периода тестирования.

Показателем нейротоксичности препаратов как при раздельном, так и при сочетавши их применении являлась доза, вызывавшая у 50Z животных нейротоксический эффект - ТД50. значение которой определяли общепринятым методом Litchfield и Wllcoxon (1949), используя компьютерную программу • (Кат Pul Fung, 1989). Нейротоксич-ность комбинации препаратов исследовали при одинаковом соотношении их доз относительно ЭД50 препаратов при раздельном применении.

Анализ и последующую оценку характера нейротокеического действия препаратов проводили с использованием метода, основанного на определении индекса фракционных токсических доз (индекса ФТД) (Ellson et al., 1954; Kerry et al., 1975).

Оценку эффективности препаратов и их комбинаций осуществляли на основе вычисления терапевтического индекса (ТИ) как отношения Tfeo/afeo-

. Препараты и их введение. Все препараты вводили per os с таким- расчетом isa основании литературных данных),.. чтобы к началу . эксперимента пик их активности совпадал: вальпроат натрия ("Sanofi", Франция) за 30 мин до электрошока; карбамазешга, диазепаы (Relanium, "Polfa"). феназепам, этосуксимид ("Suxilep", "Jenafarm"), верапзшл (Финоптин, "Orion", Финляндия) и МК-801 - за 1 час; ИОС-1.1212 (2,6-диметил-3,5-бис-(2'-пропоксиэтоксикарбо-нил)-4- (2' '-д?4|торыетоксифенил)-1,4-дигидропирид1ш) и глуталирон - динатриевая соль (2-2,б-диыетил-3,5- диэтоксикарбонил-1,4-ди-гвдропиридил-4-карбоксаыидо) глутаровой кислоты, синтезированные в Институте органического синтеза АН Латвии, риодитщ (Форидон, Латвия), нифедипин ("Sigma", США), флунаризин н дмлтиазем ("Sigma", США) - за 1,5 часа; фенобарбитал и бензонал - за 3 часа; ди-фенин - за 4 часа.

В случае многокомпонентных комбинаций (свыше 4-х препаратов). некоторые препараты смёшивзяи в одном объеме растворителя и вводили до начала эксперимента: этосуксимид и МК-801 - за 1 час; диазепаы и риодшин - за 1,25 часа; фенобарбитал и дифения - за

3,5 часа: Вальпроат натрия, зтосуксимид и ¡Ж-801 растворяли в физиологическом растворе, остальные препараты в 52 растворе твина 80. Общий объем вводимой'жидкости не превынал 0,2 ма при раздельном и 0,4 мл при сочетанном введении. Контрольным животным в аналогичных условиях опыта вводили растворители - фазиологический раствор и/или раствор твина 80.

результаты И ОБСУЖДЕНИЕ

г. эздашшность сочетанного применения препаратов,

ИНГИБИРУЩЙХ КАШЩЙ-ЗАЕКСИШЙ ЗШШПТОГЕНЕЗ' . Исследование эффективности различных антагонистов кальция, а также препаратов из группы 1,4-ДГПов, не обладающих этими свойствам, показало, что прогивосудорожным действием на судороги, - вызванные максимальным электрошоком, обладали Слокаторы потенци-4 алзависиных Са-каналов риодишн, нифэдипин (производные 1,4-ДГПа) и фяунаризин (производное дифеншпгаперагша), блокатор рецепто-рупрзвляемых Са-каналов' МК-801, а также ИОС-1.1212 (производное 1,4-ДГПа).. который не является антагонистом кальция. Егокаторы потенциалзависимых Са-каналов вераламил (производное фенилалкила-мива), дилтиазем (производное бензотиааепнна) и глутапирон (производное 1,4-ДГПа) ,• не обладающий свойствами автагонрста.кальция, в данных условиях опыта оказались неэффективны.

Выявленные различия в способности блокаторов штенциалзависимых Са-каналов предотвращать электрошоковые судороги, по-видимому, связаны с тем, что препараты иа разных фармакологических групп имеют различные участки связывания: фенилалкжламины и бен-зотиазепины связываются с участками, локализованными внутри кана-, ла, в то время как дифениллиперазины и 1,4-ДГПы - с участками на его внешней стороне (Glossmann et al., 1982. '1985; Hosey, Laz-dunski, 1988). В этой связи, Meyer с соавторами (1986) выдвинули предположение, что препараты, относящиеся к 1,4-ДГПам и дифенид-липераззшам, связываясь с внешней стороны канала, обеспечивают более эффективное блокирование Са-тока и обладают наибольшей лро-тивосудоражной эффективностью по сравнению с блокаторами, дейс-• твугащими изнутри канала. Вместе с тем показано, что дилтиазем (1,5 и 5 мг/кг, внутрибрюшшшо) повышает порог элекзрошковых судорог (Czuczwar et al1990). Поэтому в дальнейших опытах дилтиазем использовали в дозе 5 мг/кг.

■ Изоболографический анадшз противосудорсокного действия препаратов, относящихся к одной фармакологической группе показал, •что при сочетанном применении 1,4-ДГПов риодипина,. бюкатора Са-каналов, и J50C-1.1212 ; не обладающего этими свойствами имел место аддитивный характер действия: ЗД50 препаратов.можно было уменьшить приблизительно в 2 раза (табл.1). Бри сочетанном применении блокаторов Са-каналов риодипина и нифедипина было обнаружено потенцирование "противосудорожной эффективности (ЭД50 кавдого препарата можно было уменьшить в 3,6 раза) и аддитивный характер нейротоксического действия (значение . индекса ФТД в интервале 0,7-1,3).

Исследование эффективности сочетанного применения блокаторов потенциалзавистмых Са-каналов из разных групп показало, что в комбинации нифедшшна с флунаризином (дифешшшперазш) характер противосудоражного действия был аддитивный (см. табл.1). Дилтиа-зем (бензотиазепин), в примененной дозе, потенцировал противосу-дорожные эффекта нифедипина (1,4-ДТП): ЭД50 нифедипина можно было уменьшить в 5 раз. Обнаруженное потенцирование дилтиаземом противосудорожной эффективности нифедипина согласуется с представлением о существовании положительного аллостерического регулирования дилтиаземом мест связывания нифедипина. Показано, что блокаторы потенциалзависимых Са-каналов, имеющие' различные"специфические участки связывания с Са-каналом, способны модулировать связывание друг друга: бевзотиазепины положительно аллюстерически регулируют связывание 1,4-ДГПов, а фенилалкиламины и дифенилпиперазины - отрицательно (DePover et al., 1982; Boles et al., 1984). Вместе с тем известно, что дидгиазем проявляет ингибирующее действие в отношении микросомальной ферментативной системы печени (Rentai, 1985) и при сочетанном применении с нифедипином мажет вызывать замедление его метаболизма и увеличение концентрации в плазме (Tateishi et al., 1989). Можно предположить, что обнаруженное пя-тшфатное уменьшение ЗД50 нифедшшна в комбинации, было обусловлено как фариакодинамическим, так и фармакокинетическим взаимодействием его с дилтиаземом.

Изоболографический анализ эффективности сочетанного применения блокаторов потенциалзависимых и рецепторуправляемых Са-каналов показал, что в комбинациях риодипина с МК-801, а также нифедипина с МК-801 происходило потенцирование противосудорожной зф-

Таблица 1.

Эффективность сочетакного применения антагонистов кальция и КОС-1.1212

1 1 Состав |комбинации 1 1 I Уменьшение ЗД50 В комбинации в п раз индекс <Щ ТА препарата 1 та | комбинации!

1 1РЩИШШ 1МК-801 45.4 1.10 2.7 1.2 41.0

1 " ¡веддшшн " ¡йОС-1.1212 2.2 — — 1

1 - 1 "" | НКФЕДИШН ]МК-801 1 6.3 >» 1.19 1.8 1.2 5.4 |

1 1НИФЕДИЗИН (РИОДИПЙН 3.6 0.87 1.8 2.7 3.3 1

1 | НКЕДО1ИН [ФЛУКАР153ИН ■ 1.9 — — 1

1 IНЙФЕДОПИН _ 1ДШГГИАЗЕМ I (5 мг/кг) » ' 4.9 ... . 1

фективноста препаратов: Sfflso каждого препарата в комбинациях можно было уменывить в 45 и 6 раз, соответственно (табл.1).

Анализ характера нейротоксическото действия препаратов с использованием индекса ФТД показал, что в комбинациях МК-801 как с риодилином, так и с нифедипином имел место аддитивный характер действия (табл.1). Потенцирование противосудоролшой эффективности и аддитивный характер нейротоксическото действия 4 в комбинациях МК-801 с риодяпином и нифедишшом привели к более высокому ТИ комбинации, чем Гй каждого препарата, входящего в комбинацию (табл.1). Наиболее высокий ТИ комбинации быд достигнут при сочетанием применении МК-801 с риодилином - 41. Полученные результаты согласуются с данными о потенцировании противосудоршшой эффективности при сочетанном применении МК-801 с 1,4-ДГПоы нимодили-ном, з опытах с коразол-индуцированными судорогами у мышей (O'Neill. Böiger, 1989).

Анализируя результаты исследования эффективности сочетанного применения различных блокаторов Ca-каналов можно прийти к выводу, что совместное применение препаратов, блокирующих потенциал зависимые и рецепторупраЕляемые Ca-каналы (риодипина с МК-801 и нифе-дшмна с МК-801). а такге действующих на разные участки потенциал зависимых .Са-каналов (иифедидина.с дадтиаземом). более . эффек-. тивно. чем препаратов, конкурирующих за места своего связывания, как это имеет место при сочетанном применении 1,4-ДГПов (риодипина с ИОС-1.1212 и риодипина с нифедилином).

Таким образом, сочетаннсе применение препаратов, ингибирузо-щих гилерактивадаю нейронов, связанную с входом Са2+, позволяет значительно уменьшить дозы препаратов и достигнуть высокого ТИ.

2. зиектйвность сочетанного применения препдрат0в.

УСИЛИВАЭДЙХ ТОРМОЗНЫЕ ГАЖергические МЕХАНИЗМЫ Важную роль в эпилевютенезе играет нарушение иди недостаточность тормозных ГАМКергических процессов (Г.Н.Крыжановскии. 1990; Roberts. '1380; Enna. 1Q81; Meldrra, 1982). Известно, что ГАМК, бензодиазешшы и барбитураты способны аллостерически регулировать связывание друг друга на уровне ГАЖд-рецепторного комплекса (Г.Н.Крыкановский, 1991; Study, Barker, 1981; MacDonald et al., 1986). В результате такого взаимодействия происходит значительное усиление активности всего комплекса и увеличение входа

Gl" в нейрон. Поэтому, на следующем этапе наших исследований определяли эффективность сочетанного применения препаратов, усиливающих тормозные ГАМКергические механизмы, в частности: барбитуратов, пролонгирующих открытое состояние Cl-каналоз (Olsen, 1982; Akalke et al., 1985), бензодиазешшов. увеличивающих частоту их открытия (Study, Barker, 1982; MacDonald et al.. 1986) и вальпро-ата натрия, повышающего уровень гамк в мозге (Loscher, 1985).

Изоболографический анализ характера лротивосудорожного действия фенобарбитала, диазепама и вальпроата нэ,трия в 2-х компонентных комбинациях в разных сочетаниях показал, что во'всех случаях совместного применения происходило потенцирование противосу-дорожного действия. ЭД50 препаратов в комбинациях вальпроат нат-рия+диазепам, вальпроат натрия+фенобарбитал и фенобарбитал+диазе-пам можно было уменьшить в 7,1; 12,2 и 14,5 раз, соответственно (табл. 2). В 3-х компонентной комбинации, состоящей из фенобарбитала, диазепама и вальпроата натрия, ЭД50 каждого препарата можно было уменьшить в 26,3 раза. Сравнительный анализ противосудорож-кой эффективности 3-х и различных 2-х компонентных комбинаций показал, что возможность более значительного уменьшения ЭД50 препаратов в 3-х компонентной комбинации по сравнению с 2-х компонентными комбинациями обусловлена потенцирующим взаимодействием между •"всеми тремя" препаратами: ' " • '* "

Анализ лрогявосудорсиной эффективности сочетанного применения двух препаратоз. относящихся к одному классу, с помощью изо-болографического метода показал, что в комбинации двух бензодиа-зепинов - диазепама с феназепамом, а также барбитуратов - фенобарбитала с бензоналом, шел место аддитивный характер действия: ЭД5о препаратов можно было уменьшить приблизительно в 2 раза.

Определение характера нейротоксического действия препаратов в 2-х компонентных комбинациях с использованием индекса ФТД показал, что потенцирование нейротоксичности происходило при сочетан-ном применении фенобарбитала с вальпроатом натрия и фенобарбитала с-диазэпамом. тогда как в комбинации вальпроата натрия с диазепа-мом наблюдали аддитивный характер действия (табл.2). Потенцирование нейротоксических эффектов происходило и в 3-х. компонентной комбинации. Сравнительный анализ нейротоксических эффектов различных* 2-х и 3-х компонентных комбинаций свидетельствовал о том, что добавление фенобарбитала во всех случаях приводило к потенци-

Таблица 2.

Эффективность сочетакного применения препаратов, усиливающих тормозные ГАЫКергичесзше механизмы

1 ......Г"" ■ ■ --" "1 1 Состав 1 Уменьшение ■ индекс та 1 ТИ 1

1 комбинации ; S05O В ОТД препарата комбинации1

1 комбинации

1 i в п раз

¡ 1ФЕНСЕАЯБИТАЛ 14.5 0.38 4.6 4.4 1

¡ДКАЗЕПШ 0.9

1 1ВАЛШР0АТ 12.2 0.30 1.2 3.4 1

) ФЕНОБАРБИТАЛ i 4.6

¡ВАЛШРОАТ 7.1 0.88 1.2 3.2 i

1Д!1АЗЕПАУ 0.9

1 ..... (ДОЗЕПАЫ - 2.5 — — i

ФЕНАЗЕПАМ

1 ¡ФЕНОБАРБИТАЛ 2.1 — — 1

¡БЕНЗОНАЛ I

1 1ВАЛШР0АТ 1.2 i i

1ФЕНОЕАЯЕИТАЛ 26.3 о.ю 4.6 6.2 1

(ДИАЗШАМ 1.., .. — _____ _ ..- 1 0.9 i -,.- , i '

рованию нейротоксического действия препаратов.

Тй комбинаций был выше по сравнению с ТИ каждого препарата, входящего в комбинации, при сочетанном применении вальпроата натрия с диазепамом (потенцирование противосудорожной эффективности сопровождалось аддитивным , характером нейротоксического действия препаратов), а также .в комбинации вальлроат натрия+диазепам+фено-барбитал (потенцирование противосудорожной эффективности более значительное, чем усиление нейротоксичности препаратов). Бри сочетанном применении фенобарбитала с диазепамом и фенобарбитала с ■вальпроатом натрия усиление противосудорсошого и нейротоксического действия препаратов-происходило в одинаковой степени, в результате чего ТИ этих комбинаций был несколько ниже ТИ фенобарбитала (см. табл.2).

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что сочетанвое применение препаратов, действую- 4 щих на разные звенья тормозного ГАМКергического контроля, позволяет значительно уменьшить дозы препаратов и получить высокий ТИ комбинации.

3. ЭФФЕКТИВНОСТЬ СОЧЕТАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ.

ДЕЙСТВУХЩХ НА РАЗИНЕ МЕХАНИЗМЫ ЭПЮЕПТОГЕНЕЗА Сочетанное применение антиэпилептических препаратов'. "Исследование противосудорожной эффективности различных сочетаний антиэпилептических препаратов в виде 2-х компонентных комбинаций показало, что во всех случаях имел место синергизм действия типа потенцирования (табл.3). Наибольшее потенцирование противосудорожной эффективности обнаружено в комбинациях дифенина с фенобарбиталом и дифенина с диазепамом: ЭДбо каждого препарата в комби- .. нации можно было уменьшить в 8.6 и 8.0 раз, соответственно. В других ' комбинациях степень потенцирования была примерно одинаковой и ЭД5о препаратов можно было уменьшить в 4-6 раз.

Определение характера нейротоксического действия антиэпилептических препаратов показало, что при их совместном применении имеют место все три типа действия (табл.3): антагонистический - в комбинации этосукеимида с вальпроатом натрия: аддитивный - в комбинациях диазепйма с дифенином. дйазепама с этосуксимидом и дифенина с фенобарбиталом; потенцирующий - в комбинациях дифенина с вальпроатом натрия, дифенина с этосуксимидом и зтосуксимида с фе-

Таблица 3.

Эффективность сочетанного применения аятизпилепти-• ческих препаратов

1 I Состав 1 комбинации 1 I i ■ Уменьшение эдБО в комбинации в п раа индекс ФТД та препарата 1 ти 1 комбинации!

i i 1ЛКФЕШ1Н (ВАЛКПГОДТ i 4.1 0.62 3.7 1.2 2.3 1

1 ¡ДЙФЕНКН 1ДИДЗЕПАМ 1 8.1 0.75 3.7 0.9 4.5 !

1 1ДИШШ ! ФЕНОБАРБИТАЛ i 8.6 0.80 3.7 4.6 14.3 !

1 ¡ЗТССУКСИМВД IBAÍHIFOAT 1 - 6-4. 1.56 ; 1.2 5.5 . J

1 (ЗТОСУКСШЩ-í ДКАЗЕПАМ 1 5.3 0.89 1.1 0.9 2.4 i

1 (ЗТОСУКСИЩД |ЕЕН£ЕАРВПАЛ i 8.1 0.56 1.1 , 4.6 3.8 1

1 (этосукшад 1БЕК30НАЛ 1 3.8 — 1

1 1ДЙФЕНИН |зтосуксиад' 1 5.2 0.57 3.7 1.1 2.4 ! 1 (

нобарбиталом.

Тй комбинаций был выше, чем та препаратов при раздельном применении в тех комбинациях, в которых характер нейротоксическо-го действия был не потенцирующим, а аддитивным или антагонистическим: в комбинациях дифенина с фенобарбиталом, дифенина с диа-зепамом, этосуксимвда с вальпроагом натрия, этосуксимвда с диазе-памом (табл.3).

Сочетанное применение антиэпилептических препаратов с антагонистами кальция в двухкомпонентных комбинациях. Определение характера противссудорсшюго действия при сочетанном применении вальпроата натрия с различными антагонистам кальция и ИОС-1.1212 показало, что во: всех комбинациях имело место потенцирование про-тивосудорожных эффектов препаратов, степень которого зависела от характера комбинации. Наибольшее потенцирование выявлено при сочетанном применении вальпроата натрия с блокатором потенциалзави-симых Са-каналоз риодипином и блокатором рецепторуправляемых Са-каналов МК-801: ЭД50 каждого препарата в комбинациях можно было уменьшить в 30,3 и 26,3 раза, соответственно. Значительно меньшее усиление противосудорожной эффективности обнаружено в комбинациях■вальпроата натрия с, нифедипином, вальпроата натрия с флунаризином и вальпроата натрия с ИОС-1.1212: ЭД50 каждого препарата в этих комбинациях можно было уменьшить в 2,8; 3,6 и 2,6 раза, соответственно).

Исследование противосудорожной эффективности сочетанного применения антэгшегшшестк препаратов с риодипином показало, что во всех комбинациях происходило потенцирование иротивосудо-рожных эффектор, степень которого зависела от состава комбинации (табл.4). Наибольшее потенцирование выявлено при сочетанном при- • мевении вальпроата натрия с риодипином, наименьшее - в комбинации фенобарбитала с риодипином:" ЗД50 каждого препарата в этих комбинациях можно было уменьшить в 30,3 и 4,8 раза, соответственно. По степени усиления эффективности препаратов в комбинациях с риодипином, антиэпилептические препараты можно, расположить в следующем порядке: вальпроат натрия > диазепам У карбамазепин > дифенин » этосуксимид > фенобарбитал.

При сочетанном применении злтзпимепттеских препаратов с нифедипином также обнаружено потенцирование противосудорожной эффективности. Однако степень потенцирования во всех комбинациях

Таблица 4.

Эффективность сочетанного применения антиэпилептических препаратов с антагонистами кальция в 2-х компонентных комбинациях

Состав комбинации Уменьшение ajfeû в комбинации в л раз индекс ®1Д - ти ПрС'ПарЭЯй Ш комбинации

РйОДИШН ВАЛЬПРОАТ 30.3 1.00 2.7 1.2 26.8 '

рвдюин ДШЕОАЫ- 15.4 0.73 2.7 0.9 7.4

РИГЩИПЙН ФЕНОБАРБИТАЛ 4.8 0.70 2.7 4.6 5.7

ВВДШйН КАРЕАМАЗЕПИН "10.0 0.72 2.7 4.8 12.4

РйСШйШШ дажнин 7.8 1.19 П П ( 3.7 14.5

РйОДИПИН ЭТОСУКСКШД 7.0 0.85 2.7 1.1 4.5

шадиш ВАЛЬПРОАТ 3.9 0.70 1.8 X.Z 1.6

НИВДШИН ДИАЗЕПАМ 4.0 1.02 1.8 0:9 • 2.5

НИФЕЦИПЙН ФЕНОБАРБИТАЛ 4.6 0.72 1.8 4.6 4.3

МК-801 ВАЛЬПРОАТ 26.3 0.62 1.2 1.2 9.6

МК-801 ДЙАЗЕПАЫ 5.1 — — —

МК-801 ФЕНОБАРН/ГГАЛ 4.2 — — —

МК-801 ЗТОСУКСИМЙД 5.3 0.45 1.2 . 1.1 1.3

была примерно одинаковой: ЭД50 препаратов в комбинациях можно бы-, ло уменьшить в 3.9-4,6 раза (табл.4).

Анализ нейрстоксичесгаго действия с использованием индекса ФТД показал, что при сочетанном применении антиэпилептических препаратов с риодилином и нифедипином во всех комбинациях имел-место аддитивный характер нейротоксического действия.

Изсболографический анализ противосудоролшой эффективности при сочетанном применении автиэтиептческих препаратов с МК-801 показал, что во всех комбинациях имел место синергизм действия типа'потенцирования (табл.4). Наибольшее потенцирование обнаружено при сочетанном применении вальпроата натрия с МК-801: ЭД50 препаратов можно было уменьшить в 26,3 раза. В комбинациях фенобарбитала, диазепама и этосуксимйда с МК-801 степень потенцирования существенно не отличалась и ЭД50 каждого препарата можно было> уменьшить в 4,2; 5.1 и 5.3 раза, соответственно.

Анализ характера нейротоксического действия с использованием индекса ФТД показал, что при сочетанном применении вальпроата натрия с МК-801 и зтосукскмида с МК-801 происходило потенцирование нейротоксических эффектов.

Оценка эффективности комплексного применения антизпилепти-ческих препаратов с антагонистами кальция, проведенная на основе вычисления ТИ комбинаций, показала, что наиболее высокие ТИ комбинаций были получены при сочетанном применении вальпроата ' натрия, дифенина и карбамазепина с риодилином: 26,8; 14,4 и 12,4, ■■соответственно. Высокие ТИ этих комбинаций обусловлены значительным потенцированием противосудорожных эффектов и аддитивны?л характером нейротоксического действия препаратов.' В других комбинациях ТИ также выше, чем ТИ каждого препарата, входящего в комбинацию, за исключением сочетанного применения этосукскмида с МК-801, вальпроата натрия с нифедипином и фенобарбитала с нифедипином.

Таким образом, исследование противосудорожных и нейротоксических эффектов при сочетанном применении препаратов, действующих на разные механизмы эпилептогенеза показало, что во всех исследуемых 2-х компонентных комбинациях происходило потенцирование про-тивосудорсиных эффектов. Однако, только при сочетанном применении антиэпилептических препаратов с антагонистами кальция можно было в наибольшей степени уменьшить ЭД50 препаратов и получить значи-

тельно более высокий ТИ комбинаций по сравнению с различными сочетаниями антиэпилептических препаратов. К положительным свойствам риодипина и нифедипина относится аддитивный характер нейро-токсического действия при их совместном применении с антизпклеп-тическими препаратами.

Сочетазное применение антизпилептических препаратов с антагонистами кальция в многокомпонентных комбинациях. Анализ проти-восудорожной эффективности препаратов с использованием индекса <ЮД показал, что во всех 3-х компонентных комбинациях шел место синергизм действия типа потенцирования (табл.5). Наибольшее потенцирование выявлено в комбинациях вальпроат натрия+МК-801+рио-дипин и вальпроат натрия+зтосуксимид+риодипин: ЗД50 каждого препарата можно было уменьшить в 91 и 83,3 раза, соответственно; наименьшее - в комбинации вальпроат натрия+фенобарбитал+риодипин: ЭД50 препаратов можно было уменьшить в 8.3 раза.

Сравнительный анализ противосудорокной эффективности 3-х и различных 2-х компонентных комбинаций свидетельствовал о том, что увеличение эффективности 3-х компонентных комбинаций вальпроат натрия+МК-801+риодкпин. вальпроат натрия+этосуксилщ+риодкшн и фенобарбитал+диазепам+риодипин обусловлено потенцирующим взаимодействием между всеми тремя препаратами. Однако, 3-х компонентные комбинации вальпроат натрия+фенобарбитал+риодипин и вальпроат катрия+диазепам+риодшшн оказались' менее эффективными, чем 2-х компонентная комбинация вальпроат натрия+риодшшн: ЭД50 каждого препарата в 3-х компонентных комбинациях можно было уменьшить в 8.3 и 16.4 раза, соответственно, тогда как в 2-х компонентной - в 30,3 раза. Уменьшение эффективности в этих 3-х компонентных комбинациях могло быть обусловлено антагонистическим действием фенобарбитала и диазепама в комбинации вальпроата натрия с риодипи-ном. Обнаруженный антагонистический эффект в наибольшей степени проявлялся при сочетанием применении фенобарбитала с ваиьпраатсм натрия и риодгашном. Поэтому, в дополнительной серии экспериментов исследовали влияние различных доз фенобарбитала на противосу-дорожну» эффективность сочетанного применения вальпроата натрия с риодипином. которые применяли в дозах, соответствующих ЭД50 при их совместном применении в 2-х компонентной комбинации. Результаты этого эксперимента показали, что при применении фенобарбитала в дозе 1,44 мг/кг, которая сама по себе; не сказывала противосудо-

Таблица 5.

Эффективность сочетавного применения антиэпилептических . препаратов и антагонистов кальция• з 3-х компонентных комбинациях

1 | Состав Уменьшение индекс 1 | И " ........ ■ 1 та |

| комбинации ЭД50 £ ФТД (препарата комбинации|

! комбинации

1 1 в п раз

1 ¡ВАЛЬПРОАТ | 1.2

(ФЕНОБАРБИТАЛ 8.3 0.74 | 4.8 4.7 1

¡РВДИЕИН 1 1 г» п I Сф* {

1 |ВАЛЫРОАТ | 1.2

1ДИАЗЕПАМ 16.4 0.70 | 0.9 5.1 |

¡ваддкпин 1 1 о г» ] !

I |ВАЛЬПРОАТ .

| ЗТОСУКСИМИД 83.3 0.84 1 1-1 33. б |

¡ДЮДИШН ¡- 2.7

1 ¡ВАЛЬПРОАТ • - | 1.2

¡МК-801 91.0 0.41 | 1.2 18.5 |

|РЙОДЙПИН 1 | 2.7 1

1 |ФЕНОБАРБИТАЛ | 4.6

¡ДИАЗЕПАМ 37.0 0.46 1 0.9 10.2 |

1РИ0ДИШН 1 .......... | 2.7 1 •

рожного действия, эффективность комбинации снижалась по сравнению с 2-х компонентной комбинацией вальпроата натрия с риодипином и усиливалась - при увеличении дозы фенобарбитала. Антагонистический эффект фенобарбитала может быть обусловлен тем, что, помимо действия на ЦНС, он индуцирует микросомальную ферментативную систему печени, что приводит к ускорению метаболизма вальпроата натрия и уменьшению его концентрации в мозге ({?еипапеп et а1., 1280; Каре1алоу1с е1 а1.. 1881). Другим объяснением антагонистического эффекта - фенобарбитала, а. возможно, и диазепама могут слузамъ данные, что в малых дозах ■ некоторые ГАМК-позитивные препараты оказывают активирующее действие на ЦНС.. которое проявляется в де-синхронизации ЭКоГ, усилении двигательной активности животных и усилении судорожного действия конвульсантов (Г.М. Ыолодавкин и др., 1989).

- Исследование характера нейротоксического действия препаратов в 3-х компонентных комбинациях показало, что потенцирование ней-ротоксических эффектов происходило только в комбинациях вальпроат натрия+МК-801+риодшш и фенобарбктал+диазепаы+риодипин. В других комбинациях имел место аддитивный характер действия препаратов.

Сравнительный анализ нейротоксических эффектов различных 2-х и 3-х компонентных -комбинаций свидетельствовал об аддитивном характере нейротоксического действия .риодшшна во всех 3-х компонентных комбинациях за "исключением комбинации вальпроат нат-рия+Фгнобарбитал+риодшшн. в которой при добавлении риодшшна ТД50 вальпроата натрия и фенобарбитала увеличивались в 2 раза, что косвенно свидетельствует о его антагонистическом действии.

Исследование влияния различных доз риодшшна на нейротокси-ческие и противосудорсяшые эффекты комбинации вальпроата натрия с фенобарбиталом показало, что применение риодипина в небольшой дозе 5,7 мг/кг, которая сама по себе не вызывала нейротоксйческие эффекты, позволило уменьшить нейротоксическое действие комбинации, не снижая при этом ее противосудорожной эффективности. Добавление к комбинат® вальпроата натрия с фенобарбиталом более. высоких доз риодшшна (23.0 и 34,5 мг/кг) приводило к увеличению, количества животных с нейротоксическим эффектом. Результаты этого исследования подтвердили предположение об антагонистическом действии небольших доз рйсщипина в отношении нейротоксических эффектов комбинации вальпроата натрия с фенобарбиталом.

Оценка эффективности пяти 3-х компонентных комбинации, проведенная на основании вычисления ТИ, показала, что в комбинациях валъпроат патрш+зтсх^ссттд+риодмпин и фенобарбитал+диазепам+ри-одипин можно было получить более высокий ТИ по сравнению с 2-х компонентными комбинациями, состоящими из тех же препаратов: 33,6-и 10,2, соответственно (табл. 5). ТИ других комбинаций был значительно меньше, чем ТИ комбинации валъпроат натрия+риодипин (26,8).

Исследование противосудорожной эффективности и нейротоксич-ности антюпилептических препаратов и антагонистов кальция при их сочетанием применении в 4-х, 6-ти и 7-ми компонентных-комбинациях показало, что с увеличением количества препаратов в комбинация потенцировались как противосудорожные, таК'И нейротоксические эффекты (табл. 6). Исключение составила 4-х компонентная комбинация валъпроат. натрия+диазепал+этосуксимид+риодипин, в которой все препараты имели аддитивный характер нейротоксического действия. Следует отметить, что такой же характер нейротоксического действия был выявлен и при сочетанном применении этих препаратов в различных 2-х и 3-х компонентных комбинациях, за исключением антагонистического действия в комбинации вальпроата^натрия с это-суксимидом. В результате аддитивного характера нейротоксического действия-и потенцирования -противосудорожных" эффектов препаратов в комбинации валъпроат натрия+диазепам+этосуксимид+риодштин (ЭД50 каждого препарата можно было уменьшить в 178,6 раза), был получен самый высокий ТИ - 46,2 (табл.6).

Увеличение количества препаратов в комбинации путем добавления фенобарбитала и дифенина к комбинации валъпроат натрия+диазе-пам+зтосуксимид+риодипин не приводило к увеличения противосудорожной эффективности препаратов, но вызывало усиление их нейро-токсяческих эффектов. В результате ТИ б-ти компонентной комбинации был значительно ниже, чем ТИ комбинации без фенобарбитала и дифенина - 8 и 46,2, соответственно (табл.6). Тем не менее, ТИ б-ти компонентной комбинации был выше, чем ТИ каждого препарата в отдельности. Наибольшее потенцирование противосудорожных эффектов обнаружено при добавлении МК-801 к 6-ти компонентной комбинации: ЭД50 каждого препарата можно было уменьшить в 616 раз. Однако, МК-801 не только потенцировал противосудорожные эффекты препаратов, но еще в большей степени усиливал их нейротоксическое действие, поэтому ТИ 7-ми компонентной комбинации оказался ниже, чем

Таблица 6.

Эффективность сочетанного применения 'антиэпилептических препаратов и антагонистов кальция в некоторых многокомпонентных комбинациях .

1. | Состав Уменьшение индекс та та |

| комбинации ЭД50 в мл препарата комбинации)

1 комбинации

i в п раз

1 1валыр0ат 1.2

1яеш6ареитал 32-3 0.27 4.6 4 5.1" |

1лиазепаы 0.9

1РИ0ДИШШ 2.7

1валыр0ат 1.2

1 этосукшщ 178.6 0.84 1.1 46.2 I

1диазепаи 0.9

|риодошн 1 2.7

1 1валызр0ат 1.2

| фенобарбитал 4.6

1лиазепаы 91.0 0.33 0.9 8.0 i

¡риодйшн 2.7 ' 4 |

1дифенин 3.7

|этосуксзавд 1 1.1

] 1валыр0ат 1.2

(фенобарбитал 4.6

1диазепам 0.9

[РИОДШЙН 616.0 0.0086 2.7 1-1 1

дашвм 3.7

| ЗТОСУЮШД 1.1

1мк-801 1.2

1 ,_ .1 С 1

ТИ некоторых препаратов, входящих в комбинацию.

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о целесообразности применения КПТ в виде сочетанного воздействия препаратов с целенаправленным действием на основные механизмы зпилептогенеза. Преимущество разработанного метода заключается прежде всего в возможности применения малых доз антиэпилептических средств и достаточно высоком ТИ при относительно низком потенцировании нейротоксических эффектов, что позволяет надеяться на отсутствие побочных эффектов, связанных с использованием больших доз при длительной монотерапии. Все это позволяет реко- • меядовать метод КПТ для клинического применения.

ВЫВОДЫ

1. Подавление гиперактивации нейронов, связанной с входом Са2+," путем сочетанного применения разных антагонистов кальция, позволяет уменьшить дозы препаратов при увеличении терапевтического индекса их комбинаций.

2. Подавление гиперактивации нейронов путем сочетанного применения препаратов, усиливающих тормозные ГАМКергические процессы, позволяет значительно уменьшить дозы препаратов при увеличении терапевтического индекса ихкомбинаций.

3. ^Комплексное воздействие препаратами на базисные механизмы зпилептогенеза, путем усиления тормозных ГАМКергических процессов и 'ингибирования поступления ионов Са2+ и Ма+ в нейрон, позволяет значительно уменьшить дозы препаратов при увеличении терапевтического индекса их комбинаций.

4. Положительным свойством блокаторов потенциалзависимых Са-каналов из класса 1,4-дигидропиридинов нифедилина и риодипина при их сочетанном применении с антиэтшептическими препаратами является потенцирование противосудорожных эффектов и аддитивный характер нейротоксического действия, что приводит к увеличению терапевтического индекса их комбинаций,. _ -

5. Включение антагонистов кальция в комплексную патогенетическую тернию судорожного синдрома значительно увеличивает эффективность комбинаций препаратов.

6. Разработанный принципиально новый метод подавления эпилептической активности в виде комплексной патогенетической терапии. заключающейся в целенаправленном воздействии препаратами на

. ■ - 24 -

сановные механизмы эпилептогенеза, открывает новые возможности для эффективного лечения эпилепсии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Антиэпилептические эффекты вальпроата натрия и антагониста кальция риодипина при их сочетанием применении на модели фокальной пеницилдин-индуцированной эпилептической активности. // Вол. эксперим. биол. имел. -1992. -N.10. -С.369-370. Соавт.: Г.Н. Крыжановский, М.Н. Карпова, Е.Ы. Абрамова.

2. Антиэпилептические эффекты вальпроата натрия и антагониста кальция риодипина при их сочетанном применении на модели генерализованных коразол-индуцированных судорог. // Вол. эксперим. биол. и мед. -1992. -N.10. -С.216-218..Соавт.: Г.Н. Крыжановский, М.Н. Карпова, О.Ю. Панков. Е.М. Абрамова.

3. Противосудоражная активность вальпроата Na и некоторых антагонистов Са при их сочетанием применении у мышей. // Еюл. эксперим. биол. и мед. -1993. .-N-3. -С.231-233. Соавт.: Г.Н. Кры-жановский, V..H. Карпова, М.В. Калинина.

4. Влияние вальпроата На. фенобарбитала и диазепама при их сочетанном применении на судороги, вызванные электрошоком у мышей. -//Вол. эксперим. биол. и мед. -1993. -N.3. -С.238-240. Соавт.: Г.Н. Крыжановский, М.Н. Карпова.

5. Противосудорсжная активность производного 1.4-дигвдропн-ридина риодипина и других антиконвульсантов при их сочетанном" применении. // Вол. эксперим. биол. и мед. -1993. -К.?. -С.15-17. Соавт.: Г.Н. Крыжановский. М.Н. Карпова.

. 6. Противосудорспшые и нейротокскческие эффекты различных комбинации фенобарбитала, диазепама. вальпроата натрия и 1.4-ди-гидропиркдина риодипина // Еюл. эксперим. биол. и мед. -1994. -П.7. -С. 14-16. Соавт.: Г.Н. Крыжановский, М.Н. Карпова.

7. Complex pathogenic therapy: combined action on epileptic mechanisms // The Intemat. Symp/ "Physiological and Biochemical basis of brain activity", June 22-24, St.Petersburg. 1994.; -P.76. Coauthor: M.N. Karpova.

8. Combined action of Ca-antagonists and anticonvulsants with different target-point mechanisms^in suppression of epileptic activity.// Pathophysiology - 1994. -V.l. -Suppl. Additional abstracts of 2nd International Congress of Pathophysiology, Kyoto, November 19-24, 1994. -P.100. Coauthor: M.N. Karpova