Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Состояние микроциркуляции в пиальных сосудах крысы при действии лазерного излучения и экзогенного оксида азота

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Состояние микроциркуляции в пиальных сосудах крысы при действии лазерного излучения и экзогенного оксида азота"

На правах рукописи

Рыжакин Сергей Михайлович

Состояние микроциркуляции в пиальных сосудах крысы при действии лазерного излучения и экзогенного оксида азота

03.00.13-физиология 14 00.02-анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2005

Работа выполнена на кафедре анатомии человека медицинского факультета Российского университета дружбы народов

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ,

академик МАН ВШ, доктор медицинских наук, профессор В.И. Козлов

Официальные оппоненты' - доктор биологических наук, профессор

В.И. Торшин - доктор медицинских наук, профессор A.B. Чукбар

Ведущая организация- Институт возрастной физиологии Российской

академии образования

Защита состоится «_»_ 2005 года в_часов на

заседании диссертационного совета Д 212.203.10 при Российском университете дружбы народов по адресу. 117198, Москва, ул Миклухо-Маклая, д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу 117198, Москва, ул Миклухо-Маклая, д 6

Автореферат разослан «_»_2005г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 212.203 10, доктор медицинских наук, профессор

Н В Ермакова

йъ-Ьчхь

(2.301 1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.

Актуальность исследования определяется тем, что микроциркуляторное русло является той частью сердечно-сосудистой системы, в которой в конечном итоге реализуется ее основная функция - обеспечение транскапиллярного обмена и реакции на воздействие факторов внешней и внутренней среды (В В Куприянов с соавт, 1975; Э.С.Мач с соавт, 2004) Благодаря изучению структурных основ путей микроциркуляции разработано представление о микрососудистом модуле как анатомической основе структурно-функциональных элементов разных органов (В И Козлов с соавт. 1994; В.В Банин, 2000). В свете этих исследований чрезвычайно важным представляется изучение анатомо-физиологических особенностей путей микроциркуляции крови в головном мозге, в частности в системе пиальных сосудов, непосредственно обеспечивающих васкуляризацию коры мозга.

Известно, что в современной клинической практике все большее применение находят быстро совершенствующиеся методы прижизненного изучения микроциркуляции крови В их число входят методы Т\/-микроскопии, позволяющие не только выявить анатомо-физиологические характеристики микроциркуляторного русла, но и установить причинно-следственные связи между его конструкцией и интенсивностью потока крови в микрососудах (А В Покровский, 2004).

В настоящее время, в клинической практике, все шире используется низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ) особенно в инфракрасном (ИК) диапазоне, о чем свидетельствуют материалы международных научных конференций по лазерной медицине, регулярно проводимые ГНЦ лазерной медицины (Москва, 2000, 2002, 2004) В качестве одного из механизмов биостимулирующего влияния НИЛИ на биоткани рассматривается его активирующее воздействие на тканевый кровоток (В И Козлов с соавт, 1993; О.АТерман, 1995, НА Данченко, 2001). Однако до конца остается неясным вопрос о допустимых дозах НИЛИ, особенно применительно к мозговому кровообращению Ранее отмечалось, что под влиянием воздействия НИЛИ в ИК -диапазоне увеличение кровенаполнения пиальных микрососудов и нарастание в них скорости движения крови происходит в результате дилатации сосудов прекапиллярного звена в микроциркуляторном русле (Ф Б Литвин, 2002), однако механизм этого феномена не был раскрыт. В литературе крайне немногочисленны сообщения о прижизненной идентификации эффекта лазерного воздействия на различные звенья системы микроциркуляции крови и особенно доза-зависимых реакциях микрососудов на воздействие НИЛИ.

В последние годы высказывается мнение о возможной роли эндогенного оксида азота и ЫО-синтетазы в дилатации неповрежденных микрососудов (АБШехтер, 1998; Е К Кречина, 2000; Г И Клебанов, 2002; Ю А Владимиров, 2003). В этой связи актуальным для исследования становится вопрос о возможном участии молекулы N0 в механизме воздействия НИЛИ на микрососуды Применение оксида азота для лечения сосудистой и нервной патологии осуществляется путем введения различных нитросоединений, которые, подвергаются процессам метаболизма в организме, выделяют молекулы оксида азота или индукторов ЫО-синтетазы, усиливающих синтез эндогенного оксида азота (С В Грачев, 2001) Вместе с тем, в 1997 г группой специалистов ММА им И М Сеченова, МГТУ им. Н Э Баумана и МНИОН им П А Герцена был открыт неизвестный ранее феномен выраженной стимуляции заживления ран воздействием воздушно-плазменного п(1Т(ЖУ оксида азота. Новый метод N0-

терапии основан на использовании экзогенного воздушного потока N0, реализованного в приборе «Плазон», с помощью которого осуществляется локальное воздействие экзогенным оксидом азота необходимой концентрации непосредственно на пораженные участки тканей или органов. Экспериментально установлено, что оксид азота, генерируемый плазмохимическим способом из атмосферного воздуха, нормализует микроциркуляцию, оказывает антибактериальное действие, купирует инфекцию и воспаление (С В Грачев с соавт , 2001) Большинство авторов (D.J Smith et al., 1991, J P Bulgrin, 1995; А В Шехтер, с соавт , 2001, А В. Гаврильчак, 2001, A D Diwan et al., 2001) объясняют нормализацию микроциркуляции под влиянием NO- терапии регуляцией тонуса сосудов, а также антиагрегантным и антикоагулянтным характером воздействия NO на ткани, что улучшает сосудисто-тканевую трофику Тем не менее значение оксида азота в регуляции мозгового кровообращения, в настоящее время изучено не достаточно

Цель работы. Цель настоящего исследования состояла в прижизненном изучении микроциркуляции крови в сосудах мягкой мозговой оболочки головного мозга крысы при воздействии на них низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) и экзогенного оксида азота

Для достижения поставленной цели решали следующие задачи:

1 Изучить состояние микроциркуляции в пиальных сосудах головного мозга белой крысы в условиях острого опыта с помощью биомикроскопии и компьютерной телевидеометрии

2 Изучить состояние микроциркуляции в пиальных сосудах головного мозга крысы с помощью лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) и сопоставить результаты амплитудно-частотного анализа ЛДФ-грамм с данными биомикроскопической оценки пиальных микрососудов

3 Изучить в условиях острого опыта влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на состояние микроциркуляции в пиальных сосудах

4 Изучить в условиях острого опыта влияние экзогенного оксида азота на состояние микроциркуляции в пиальных сосудах крысы

Научная новизна исследования. Новым в работе является комплексное изучение структурной организации микроциркуляторного русла и состояния кровотока в микрососудах мягкой мозговой оболочки крысы, выполненное с помощью компьютерной TV-микроскопии и ЛДФ-графической регистрации состояния микроциркуляции крови, что позволило впервые показать зависимость показателей ЛДФ-метрии от структурной композиции микроциркуляторного русла

Впервые дана гемодинамическая оценка состояния кровотока в сосудах мягкой мозговой оболочки с помощью ЛДФ-метрии и установлены параметры амплитудно-частотного спектра ЛДФ-грамм, характеризующие состояние различных механизмов регуляции микроциркуляции в пиальных сосудах Выявлено, что активный механизм модуляций колебаний кровотока в сосудах мягкой мозговой оболочки обусловлен преимущественно вазомоторной активностью сосудов прекапиллярного звена.

Установлено, что воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на сосуды мягкой оболочки головного мозга крысы дозой 3,0 Дж/см2 и 6,0 Дж/см2 оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, которое проявляется в повышении кровотока на фоне снижения сосудистого тонуса, усиления флаксмоций и повышения вазомоторной активности Наиболее

чувствительными к лазерному воздействию в терапевтических дозах являются прекортикальные артериолы и посткортикальные венулы

Впервые дана оценка доза-зависимого влияния экзогенного оксида азота на систему микроциркуляции в сосудах мягкой мозговой оболочки. Показано, что доза (время экспозиции) 30, 40 и 50 с оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, а доза с продолжительностью экспозиции 60 с оказывает угнетающее влияние, что проявляется в снижении показателей микроциркуляции, ослаблении флаксмоций и уменьшении вазомоторной активности

Теоретическая и практическая значимость исследования. Данные об особенностях состояния микроциркуляции крови в сосудах мягкой мозговой оболочки, полученные с помощью компьютерной Т\/-микроскопии и ЛДФ-метрии, имеют важное практическое и теоретическое значение для понимания механизма модуляций тканевого кровотока.

Сведения о доза-зависимом влиянии низкоинтенсивного лазерного воздействия на систему микроциркуляции в сосудах мягкой мозговой оболочки представляют важность исследования для врачей, специализирующихся в области лазерной терапии, особенно в плане поиска оптимальных условий лазерной стимуляции микроциркуляции.

Установлено, что в основе патогенетического механизма стимуляции микроциркуляции при лазерном облучении и воздействии экзогенного оксида азота лежит дилатация микрососудов и активация вазомоторного ритма модуляций тканевого кровотока

Наиболее чувствительными к лазерному облучению и воздействию экзогенного оксида азота в терапевтических дозах являются прекортикальные артериолы и посткортикальные венулы. Превышение порога допустимых доз экзогенного оксида азота при времени экспозиции 60 с ведет к угнетению микроциркуляции, ослаблению флаксмоций и уменьшению вазомоторной активности микрососудов.

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на XI Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2003), на III всероссийской с международным участием школе - конференции по физиологии кровообращения (Москва, 2004) и Всероссийской научной конференции « Микроциркуляция в клинической практике» (Москва, 2004)

Публикации

По теме диссертации опубликованы 9 научных работ, в том числе 4 статьи в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, 3 глав, включая «Обзор литературы», «Материал и методы исследования», «Результаты исследования и их обсуждение», а также заключения и выводов. Иллюстративный материал представлен 41 рисунком, (25 микрофотографии), 22 таблицами. Указатель литературы содержит 102 отечественных и 28 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Методика биомикроскопии сосудов микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки белой крысы. Опыты по прижизненной микроскопии сосудов мягкой мозговой оболочки проводились с помощью методики биомикроскопии, разработанной В И Козловым и Ф.БЛитвиным (1971) Работа выполнена на белых крысах линии Вистар Все животные были половозрелыми, в возрасте от 10 до 16 недель. Исследования на животных проводились с соблюдением требований Приказов Минздрава СССР №472 от 13 11 84 г «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» и №48 от 23 01.85 г «О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных» Проведение исследований разрешено этической комиссией РУДН (протокол № 55 от 2005 г)

Подопытное животное наркотизировали внутримышечным введением раствора тиопентала натрия из расчета 3-5 мг препарата на 100 г массы тела Общим во всех сериях экспериментов явилось получение «открытого окна» в черепе, через которое вели микроскопическое наблюдение за микрососудами Крысу укладывали на специальный столик В области крыши черепа скальпелем удаляли кожу и волосяной покров, затем с помощью модифицированного копьевидного скальпеля удаляли участок теменной кости с правой стороны черепной коробки Голову оперированной крысы фиксировали в переоборудованном для этих целей стереотаксисе СЭЖ-3 Операционное поле покрывали тонким слоем вазелинового масла при температуре 37°С, а обогрев тела животного производили с помощью бытовой настольной лампы, температуру окружающей среды контролировали термометром.

Наблюдение и регистрацию состояния микрососудов мягкой мозговой оболочки крысы осуществляли с помощью микроскопа МБС-2, на котором была укреплена оригинальная телевидеометрическая установка, соединенная с компьютером С помощью специальной переходной втулки телекамера JVC (ТК 1280 Е) соединялась с одним из окуляров МБС-2 Изображение микрососудов передавалось на монитор компьютера для визуального контроля Отдельные фазы наблюдений за микрососудами фиксировались в виде фотоотпечатков на видеопринтере. Для этих целей использовался видеопринтер «SONY» (CWP-МЗЕ).

Для морфометрической обработки данных биомикроскопии сигнал с телекамеры передавался на компьютер Pentium II , на котором в реальном масштабе времени велась оптическая регистрация состояния микрососудов Для морфометрической обработки изображения использовалась программа «Image Tools 2 00», разработанная в 1996 г в Техасском университете (США)

Методика лазерной допллеровской флоуметрии (ЛДФ). В целях изучения функциональных особенностей микроциркуляции и ее изменений был использован метод ЛДФ, позволяющий оценить состояние- тканевого кровотока и выявить признаки изменения микроциркуляции под влиянием различных факторов ЛДФ осуществляли лазерным анализатором кровотока «ЛАКК-01» (производство НПП «Лазма», Россия) с лазерным источником излучения на длине волны 0,63 мкм Регистрируемый при ЛДФ сигнал характеризует кровоток в микрососудах в объеме 1-1,5 мм3 ткани Лазерный анализатор «ЛАКК-01» был соединен с компьютером Pentium II На экран монитора выводилась кривая записи ЛДФ-граммы в реальном масштабе времени Все записи ЛДФ-грамм сохранялись в базе данных и при необходимости переносились на бумажный носитель В качестве датчика в анализаторе кровотока ЛАКК - 01 применялся световой зонд,

выполненный из трех моноволокон Одно волокно используется для доставки лазерного излучения от прибора к исследуемой ткани, два других волокна являются приемными для рассеянного и отраженного тканью лазерного излучения

ЛДФ-метрию в пиальных сосудах проводили у наркотизированных крыс в условиях острого опыта при вскрытой полости черепа Регистрацию показателей микроциркуляции в контроле осуществляли в течение 5 минут

Результаты ЛДФ-тестирования регистрировали в относительных перфузионных единицах - перф ед, которые отражают степень перфузии, преимущественно эритроцитарной фракцией, единицы объема ткани за единицу времени (G.Nilsson,1980; В И. Козлов, 1998) и позволяют проследить ее динамику при реакции кровотока на различные воздействия.

В аппарате ЛАКК-01 предусмотрено автоматическое изменение следующих статистических характеристик микроциркуляции: параметр микроциркуляции (ПМ), который отражает степень перфузии тканей кровью; среднее квадратичное отклонение - СКО, характеризующее величину колеблемости потока крови, так называемого флакса; коэффициент вариации - Kv, отражающий степень вариабельности данного показателя в конкретной экспериментальной ситуации, вычисляемый по формуле Kv = СКО/ПМ-ЮО.

Важным этапом ЛДФ-метрии является амплитудно-частотный анализ (АЧС) гемодинамических ритмов колебаний тканевого кровотока. АЧС-анализ производился с помощью специальной компьютерной программы В результате спектрального разложения ЛДФ-граммы на гармонические составляющие физиологических колебаний тканевого кровотока появляется возможность судить о состоянии механизмов, участвующих в регуляции тканевой гемодинамики. Программное обеспечение основывается на спектральном разложении ЛДФ-граммы с использованием математического аппарата Фурье Амплитуда каждой гармоники равна вкладу гармоничного процесса данной частоты в ЛДФ-грамму.

При амплитудно-частотном анализе ЛДФ-граммы, вычислялись: частота (F) и амплитуда (А) очень низкочастотных (Avlf), вазомоторных (Alf), дыхательных (Auf) и пульсовых волн (Acf). Эти показатели дают возможность косвенно судить о таких важных гемодинамических характеристиках, как ■ сосудистый тонус и внутрисосудистое сопротивление (В И Козлов, 1998) Индекс модуляции флаксмоций (ИФМ) определяется из соотношения ритмов колебаний тканевого кровотока: ИФМ=Ац7Анр+Аср.

Соотношение разных ритмических составляющих в амплитудно-частотном спектре оценивали по их вкладу, выраженному в % в общую мощность спектра За мощностью спектра принимают его суммарную мощность во всех исследованных частотных диапазонах (VLF, LF, HF и CF). Так, вклад в мощность спектра низкочастотных ритмических составляющих оценивается: (Alf)2 /(Alf2 + Avlf2 +Ahf2 + Acf2 )'100 Аналогичным образом мы оценивали вклад в мощность спектра других ритмических составляющих.

Методика воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на кровоток в пиальных сосудах. В качестве источника лазерного излучения использовался отечественный Аппарат лазерной терапии - АЛТ «Мустанг-2000» Он относится к полупроводниковым лазерным четырехканальным аппаратам, с блокировкой режимов действия и комбинированным измерителем мощности излучателя АЛТ «Мустанг-2000» излучает в диапазоне длин волн 0,63-0,89 мкм в импульсном и непрерывном режимах- частота и мощность излучения, а также время воздействия подбирались

в зависимости от дозы воздействия Аппарат «Мустанг 2000» разрешен к применению Комиссией по новой медицинской технике при Минздраве РФ

Применялась методика дистантного воздействия на открытые сосуды мягкой мозговой оболочки белой крысы Облучение проводилось с расстояния 2-3 мм в течение 30 секунд и 1 минуты, при частоте 3000 Гц и мощности в импульсе 10 Вт Это составило дозы воздействия, равные 3 Дж/см2 и 6 Дж/см2 соответственно

Методика воздействия экзогенного оксида азота на микрососуды мягкой мозговой оболочки. Воздействие экзогенным оксидом азота на микрососуды осуществлялось аппаратом «Плазон», разработанным в МГТУ им Н Э Баумана В основу действия медицинского воздушно-капельного аппарата «Плазон» положено воздействие на ткани организма потока воздушной плазмы, содержащей молекулы оксида азота

Режим работы аппарата обеспечивается установкой на аппарате специального манипулятора и выбором необходимого расхода воздуха (500, 1000, 1500 л/мин) Дозировка воздействия экзогенным оксидом азота зависит от параметров потока воздушной плазмы (мощности и времени воздействия) На самом приборе можно менять лишь объем расхода воздуха, тем самым меняя содержание оксида азота в плазме В данном эксперименте мы работали с максимальным содержанием оксида азота в воздушном потоке (1500 л/мин), так как эта доза чаще всего применяется в медицинской практике, и изменяли лишь время экспозиции Время экспозиции и регистрации были выбраны экспериментальным путем и составили 30, 40, 50 и 60 секунд

Статистическая обработка данных. Для первичной математической обработки компьютерных оптических изображений применялся базовый статистический пакет в программе Image - Tools (США) В процессе математической обработки полученных первичных данных использовали общепринятые методы вариационной статистики (вычисление средней арифметической величины изучаемых показателей, определение среднего квадратического отклонения и ошибки средней). Значимость различий выявляли с помощью t - критерия Стьюдента при уровне значимости Р = 95%

Материал исследования. В общей сложности нами было поставлено 133 опытов на животных. Все животные подразделялись на три группы"

I группа - контрольная (45 крыс) На животных данной группы изучались морфологические особенности микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки в норме, а также производилось телевидеометрическое и ЛДФ-графическое определение состояния микроциркуляции

II группа - животные (48 крыс), подвергнутые воздействию низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) Данная группа подвергалась воздействию НИЛИ различной дозы Проведено две серии эксперимента серия 1с дозой воздействия 3 Дж/см2, и серия 2- с дозой воздействия 6 Дж/см2 В каждой серии исследовали 24 животных, в том числе 12 - методом компьютерной TV-микроскопии и 12 - методом ЛДФ

III группу составили животные (40 крыс), подвергнутые воздействию экзогенного оксида азота В первой серии экспериментов животных подвергали обдуванию в течении 30 с; во 2 - й серии - 40 с; в 3 - й серии - 50 с; в 4 - й - 60 с Регистрация морфофункциональных изменений в системе микроциркуляции, производилось посредством компьютерной TV-микроскопии и ЛДФ-метрии

Распределение материала в зависимости от методов исследования и способов воздействия на систему микроциркуляции представлено в табл 1

Таблица 1

Распределение животных по экспериментальным группам и методам исследования

Группы экспериментальных Методы исследования

животных Компьютерная IV- ЛДФ

микроскопия

Контрольная группа 20 25

Влияние НИЛИ

Серия 1 - доза ЗДж\см 12 12

Серия 2 - доза 6 Дж\см2 12 12

Влияние экзогенного N0

Серия 1 - доза 30 с 5 5

Серия 2 - доза 40 с 5 5

Серия 3 - доза 50 с 5 5

Серия 4 - доза 60 с 5 5

ИТОГО 64 69

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Строение микроциркуляторного русла и состояние кровотока в микрососудах мягкой мозговой оболочки белой крысы

Микроциркуляторное русло мягкой мозговой оболочки взрослой крысы имеет густопетлистый тип строения, пространственно ориентированный относительно борозд и извилин коры мозга. Такая конструкция образуется путем сложного переплетения древовидных ветвлений сосудов артериолярного звена и многочисленных анастомозов между ними Как правило, артерии и артериолы мягкой мозговой оболочки не сопровождаются венами и венулами соответствующих порядков ветвления

В исследуемой теменно-височной области преимущественным направлением хода артериол является лобно-затылочное, а венулярные сосуды ориентированы в височно-теменном направлении На наш взгляд, это обусловлено топологическими особенностями залегания крупных сосудов бассейна притока и оттока Сосуды микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки обычно залегают в два слоя. Непосредственно к поверхности полушарий головного мозга прилегают венулы, а над ними располагаются сосуды артериолярного звена

Органоспецифичность микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки состоит в том, что оно преимущественно представлено артериолами и венулами разного диаметра. Данные биомикроскопии свидетельствуют о том, что сосудистая сеть мягкой мозговой оболочки крысы представляет собой пространственно упорядоченный комплекс артериолярных и венозных сосудов, структурно и функционально связанных с формированием капиллярного русла в коре мозга Капилляры мягкой мозговой оболочки не участвуют в образовании анатомической связи между артериолярным и венулярным отделами

микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки. Эта связь осуществляется опосредованно - исключительно через капиллярное звено, расположенное в толще коры мозга

Обычно в микроциркуляторном русле мягкой мозговой оболочки прослеживаются артериолы двух - трех порядков ветвления Артериолы первого порядка (Al) - наиболее крупные сосуды Их диаметр варьирует от

39.2 до 51,1 мкм, в среднем составляет 45,2±6,0 мкм При своем разветвлении они дают артериолы второго порядка (All), диаметр которых варьирует от 28,5 до 36,1 мкм, в среднем составляет 31,9+2,5 мкм Третий порядок ветвления артериол наблюдается не всегда Артериолы III (AHI) порядка рассматриваются нами как прекортикальные Их диаметр варьирует от 26,8 до 28,1 мкм, составляя в среднем 25,1+1,9 мкм, протяженность их не превышает 60 мкм.

Венулярное звено пиальной оболочки включает собирательные венулы, по которым кровь оттекает в венулы II порядка, соответствующие артериям II порядка Диаметр колеблется от 40,1 до 58,5 мкм, в- среднем составляет 51,2+6,9 мкм Обычно венулы второго порядка широко анастомозируют между собой, образуя многочисленные венуло-венулярные анастомозы Из венул И порядка кровь оттекает в венулы I порядка Диаметр последних варьирует от

65.3 до 73,9 мкм в среднем составляет 69,8+4,2 мкм Далее кровь собирается в вены, по которым она оттекает в венозные синусы твердой мозговой оболочки.

Кровоток в микрососудах мягкой мозговой оболочки контрольной группы характеризуется относительно высокой скоростью, и сравнительно гомогенной структурой В сосудах артериолярного звена отчетливо выявляется осевой ток эритроцитов и пристеночная плазматическая зона. Особенностью гемодинамики является выраженная лабильность направленности потока движущейся крови в области артериолярных и венулярных анастомозов. Для капиллярного звена характерно чередование быстрого гомогенного кровотока с медленным зернистым током крови, а в отдельных случаях - толчкообразное движение эритроцитов Область анастомоза характеризуется наиболее высокой лабильностью кровотока Именно в силу этого их следует рассматривать, как зоны выравнивания условий гемодинамики для разных участков коры мозга

Прекортикальные артериолы и посткортикальные венулы мягкой мозговой оболочки, ориентированные перпендикулярно по отношению к поверхности мозга, формируют нисходящие (артериолярные) и восходящие (венозные) потоки крови Такая пространственная ориентация потоков эритроцитов в ткани мозга в наибольшей мере адекватна для допплеровского флоуметрического изучения кровотока

Конфигурация ЛДФ-граммы мягкой мозговой оболочки достаточно сложна Среднее значение параметра микроциркуляции составило

23,0±4,1 перф ед Индивидуальные различия в уровне регистрируемого показателя микроциркуляции (ПМ) сравнительно высоки и могут достигать 20 -25% Эти различия, видимо, определяются анатомическими различиями в локальной композиции микрососудистых сетей Как показывают наши наблюдения, наиболее высокие показатели ПМ в пределах 27 - 28 перф ед были зарегистрированы в тех областях, где наблюдалось наибольшее количество прекортикальных сосудов, обеспечивающих питание коры мозга

Несмотря на различия в показателях ПМ, уровень среднего квадратического отклонения (СКО) в случаях ЛДФ-грамм с высокими и низкими ПМ достоверно не отличался (СКО - 0,83 ± 0,06 перф ед и 0,85 ± 0,07 перф ед соответственно) Коэффициент вариации (Kv) - 3,16 ± 0,14% Это подтверждает то положение, что

регуляторные механизмы модуляции кровотока в различных локусах пиальной системы отличаются определенной консервативностью и не зависят существенно от пространственной конфигурации микрососудов

Фундаментальной особенностью микроциркуляции является ее постоянная изменчивость, как во времени, так и в пространстве, что проявляется в спонтанных флюктуациях тканевого кровотока Высокая временная изменчивость микроциркуляции и связанная с ней колеблемость кровотока по сути своей есть объективная характеристика уровня жизнедеятельности тканей Ритмические колебания кровотока и их изменения позволяют получить информацию об определенных соотношениях различных механизмов, определяющих состояние микроциркуляции. В результате спектрального разложения ЛДФ-граммы на гармонические составляющие колебаний тканевого кровотока появляется возможность дифференцирования различных ритмических составляющих флаксмоций Каждая ритмическая компонента при спектральном анализе ЛДФ-граммы характеризуется двумя параметрами- частотой - Р и амплитудой - А Представленные в амплитудно-частотном спектре ЛДФ-граммы колебания укладываются в диапазоне частот от 0,05 до 2 Гц Среди колебаний тканевого кровотока физиологически значимыми следует рассматривать так называемые низкочастотные, высокочастотные и пульсовые флаксмоции Для крысы границы интервалов частот этих колебаний отличаются от таковых для человека Согласно нашим данным для мягкой мозговой оболочки белой крысы низкочастотные колебания кровотока (1_Р ) лежат в диапазоне от 4 до 10 кол /мин (0,05 - 0,15 Гц) Они обусловлены спонтанными сокращениями гладкомышечных клеток в стенке артериол (так называемых вазомоторов), вызывающих периодические изменения их диаметра.

Среди низкочастотных колебаний нами также выделяются еще колебания с очень низкой частотой (\/1_Р) менее 0,03 Гц (1 колебание за 1-2 мин). \ZLF-колебания характеризуют влияние гуморально-метаболических факторов на состояние микроциркуляции Как показали В И.Козлов с соавт (2001), эти колебания тканевого кровотока связаны с периодическими сокращениями эндотелиоцитов, обусловленные сокращением их цитоскелета, которое было описано МадЬейа (1964) Согласно данным 5сИтк1-5с1топЬет е1 а1 (1997), колебания тканевого кровотока с частотой 0,01 - 0,03 Гц имеют миогенную природу

Флаксмоции в высокочастотном диапазоне (НР) - от 60 до 90 кол /мин (1 -1,5 Гц) у белой крысы обусловлены периодическими изменениями давления в венозном отделе сосудистого русла, вызываемыми дыхательными экскурсиями Эти колебания принято рассматривать как пассивный' механизм модуляции микроциркуляции в отличие от активного механизма вазомоций Вместе с тем не исключено, что НР-колебания тканевого кровотока, связанные с дыхательным ритмом, отражают опосредованные (через изменения сокращений сердца) влияния парасимпатического звена регуляции на состояние тканевого кровотока (В.И Козлов с соавт , 2001).

Пульсовые волны (СР) у крысы регистрируются в диапазоне частот от 180 до 200 кол/мин (3 - 3,3 Гц) Они отличаются малой амплитудой колебаний и обусловленные перепадами внутрисосудистого давления, которые в большей или меньшей степени синхронизованы с кардиоритмом. Пульсовые колебания кровотока в микрососудах характеризуют тот гемодинамический механизм, который обусловливает течение в них крови. Как полагают В И.Козлов с соавт. (2000), его следует рассматривать как основной, базовый механизм движения эритроцитов по микрососудам Он во многом связан с влиянием автономной нервной системы на регуляцию сердечно-сосудистой системы, в том числе и микроциркуляции

Как показывают полученные данные, наиболее высокой амплитудой характеризуются самые медленные колебания (VLF), регистрируемые в диапазоне менее 0,03 Гц (1 колебание за 1 - 2 мин), она составляет в среднем 0,65 ± 0,04 перф. ед Также высока амплитуда вазомоторных LF-колебаний тканевого кровотока - в диапазоне от 0,05 до 0,15 Гц ( 4 - 10 кол./мин). Амплитуда высокочастотных ритмических составляющих ЛДФ-граммы в высокочастотном диапазоне (HF) от 1 до 1,5 Гц (60 - 90 кол/мин) Пульсовые волны (CF-ритм), регистрируемые у крысы в диапазоне частот от 180 до 200 кол /мин (3 - 3,3 Гц), также характеризуются низкой амплитудой, составляющей в среднем - 0,19 ± 0,02 перф ед Согласно полученным данным, в мягкой мозговой оболочке крысы вклад VLF-колебаний в общую мощность спектра АЧС составляет 49,4%, LF-колебаний -39,1 %, HF-колебаний - 6,9 %, CF-колебаний - 4,6 %

Следует отметить, что в тех участках микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки, которые соответствовали местам наибольшего сосредоточения прекортикальных сосудов и которые характеризовались высокими показателями ПМ, наблюдались иные соотношения между ритмическими составляющими колебаний тканевого кровотока. В этих участках микроциркуляторного русла преобладающим был вазомоторный ритм, его вклад в общую мощность спектра АЧС достигал 59,9%. Эти данные хорошо согласуются с тем фактом, что именно в прекортикальных артериолах наиболее хорошо выражены прекапиллярные сфинктеры, задающие ритм модуляции капиллярного кровотока в коре мозга

Соотношение активных модуляций тканевого кровотока, обусловленных миогенным и нейрогенным механизмами, и дополнительных парасимпатических влияний на него рассчитывали как индекс флаксмоций (ИФМ) Расчет этого показателя состояния микроциркуляции в мягкой мозговой оболочке крысы показал, что он в среднем составляет 0,85 ± 0,03

Таким образом, ЛДФ-метрия позволила выявить нормативные параметры микроциркуляции в мягкой мозговой оболочке крысы Разные отделы микроциркуляторного руса имеют разный уровень перфузии кровью, что связано с наибольшей функциональной активностью прекортикальных сосудов

Воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения на микроциркуляцию в мягкой мозговой оболочке

Как известно, микроциркуляторная система тонко реагирует на различные воздействия внешней среды. Во многих случаях изменения микроциркуляции сопряжены с морфо-функциональными преобразованиями тех параметров микрососудов, которые определяют режим трансорганной гемодинамики В связи с этим целью данного раздела исследования явилось изучение перестройки микроциркуляции в пиальных сосудах под воздействием низкоинтенсивного лазерного излучения.

Воздействие НИЛИ дозой 3,0 Дж/см2 Как показывают данные морфометрии, после воздействия НИЛИ дозой 3,0 Дж/см2 увеличение диаметра прекортикальных артериол по сравнению с исходным состоянием составляет 25,9% , к 5 - й мин (табл 2)

Применение ЛДФ-метрии позволило четко зафиксировать активацию тканевого кровотока после воздействия НИЛИ Активация кровотока как по показателю ПМ, так и по CKO наблюдается сразу же после воздействия НИЛИ на пиальные сосуды (табл 3) Однако максимум реакции микрососудов приходится на 5 мин после воздействия НИЛИ

и

Таблица 2

Изменения диаметра пиальных микрососудов после воздействия НИЛИ дозой 3,0 Дж/см2 (М ± т, мкм)

11осле воздействия НИЛИ

Отдел микроциркуляторного русла Исхолнос состояние 5 мин Изменения в % от исходного состояния 10 мин Изменения в %от исходного состояния

Артериола I порядка 45,2 ±6,1 47,3 ± 4,2 +4,6 48,5 + 4,1 +7,3

Артериола Ппорядка 31,9 ±2,5 35,9 ± 1,8 +12,5 37,1 ± 1,7 + 16,3

Прекортикальная артериола 23,1 ± 1,8 29,1 ± 1,4 +25,9 31,8 ± 1,5 +37,6

Пос гкортикальная венула Венула II порядка 28,6+ 1,3 51,2± 1,9 31,1 ± 1,1 53,1 ± 1,6 +8,7 +3,7 32,7 ± 1,4 55,1 ± 1,4 +14,3 +7,6

Венула I порядка 69,8 ± 4,6 71,3 ±3,1 +2,1 74,1 + 3,6 +6,1

Применение амплитудно-частотного анализа ритмических составляющих флаксмоций позволило установить, что при воздействии НИЛИ изменяются соотношения между низкочастотными ритмами (ЬЯ), характеризующими активный механизм микроциркуляции - вазомоции, и теми ритмами, которые характеризуют повышение парасимпатических влияний- высокочастотным (НР) и сердечным (СР) ритмами Это хорошо прослеживается по динамике ИФМ, который на 5-ой мин возрастает на 85,1% Активация механизмов регуляции микроциркуляции после воздействия НИЛИ и сохранении этой активности на протяжении 10 минут после воздействия преимущественно связано с ростом амплитуды низкочастотных колебаний (1_Р и У1_Р), характеризующих вазомоторный компонент регуляции микроциркуляции.

Таблица 3

Показатели ЛДФ сосудах мягкой мозговой оболочки крысы после воздействия НИЛИ дозой 3,0 Дж/см2 (М ± т)

Время регистрации Параметр микроциркуляции, ПМ, перф.ед Уровень флакса,СКО, перф ед ИФМ, уел ед

Исходные показатели 21,3 ± 1,3 0,54 ±0,11 0,67 ±0,31

Сразу после воздействия 22,2 + 1,6 0,58 ±0,13 0 97 ± 0,15

Прирост показателя*, % +4,2 +7,4 +44,8

Через 5 мин 24,1 ± 1,4 0,91 ±0,16 1,24 ±0,06

Прирос 1 показателя, % +13,1 +68,5 +85,1

Через 10 мин 26,8 ± 1,9 0,74 + 0,24 1,27 ±0,04

Прирост показателя, % +25,8 +37,0 +89,5

* Прирост показателей указан к исходному уровню

Воздействие НИЛИ дозой 6,0 Дж/см2. При действии большей дозы НИЛИ пиальные микрососуды также подвергаются дилатации, достигая максимальных значений к 5-ой минуте Наиболее отчетливо дилатация выражена в области прекортикальных артериол (табл 4) Как показывают данные морфометрии увеличение диаметра прекортикальных артериол по сравнению с исходным состоянием составляет 25,5% Реакция более крупных артериол (I и II порядков ветвления) менее выражена, их диаметр превышает исходный уровень на 6,3 и 18,3% (соответственно) Дилатация сосудов венулярного звена происходит в меньшей степени.

В табл 5 представлены изменения средних значений показателей микроциркуляции в пиальных сосудах после воздействия на них НИЛИ дозой 6,0 Дж/см2 Показатель тканевой перфузии (ПМ) имеет тенденцию постепенного возрастания после воздействия, что хорошо согласуется с динамикой дилатации микрососудов в регистрируемой области мягкой мозговой оболочки Наибольший прирост показателя СКО наблюдается к 5-ой мин, после воздействия НИЛИ После 5-ой мин идет его постепенное возвращение к исходному уровню

Данные АЧС-анализа показали, что на протяжении всего эксперимента с воздействием НИЛИ дозой 6,0 Дж/см2 в ЛДФ-граммах сохраняется преобладающее влияние низкочастотных составляющих колебаний тканевого кровотока

Таблица 4

Изменения диаметра пиальных микрососудов после воздействия НИЛИ дозой 6,0 Дж/см2 (М + т, мкм)

Отдел микроциркуляторного русла

Артериола I порядка

Артериола Ппорядка

Прекортикальная артериола

Посткортикальная венула

Венула И порядка Венула 1 порядка

Исходное _

состояние 5 мин

43,9 + 4,1 46,7 ±4,1 28,9 ±2,4 34,2 ±1,7 22,7 ± 1,7 28,5 ±1,1

После воздействия НИЛИ Изменения 10 мин

в % от исходного состояния

+6,3 46,4 ± 3,6 +18,3 35,9 ± 1,4 +25,5 27,4 ±1,6

Изменения в % от

ИСХ0ДН01о

состояния +5,6 +24,2 +20,7

28,9 ± 1,7 50,2 ± 1,8 67,8 + 4,1

30,4 ± 1,1 52,8 ± 1,4 70,1 ±2,8

+5,1 +5,2 +3,4

31,1 ± 1,6 52,5 ± 1,2 72,0 ±3,1

Таблица 5

Средние показатели тканевого кровотока после воздействия НИЛИ дозой

6,0 Дж/см2 (М±т)

Время регистрации Параметр микроциркуляции, ПМ, перф.ед. Уровень флакса,СКО, перф.ед ИФМ, усл.ед.

Исходные показатели 25,8 ± 1,4 0,64 ± 0,71 0,75 + 0,31

Сразу после во ¡действия 29,1 ± 1,8 1,14 ±0,91 0,8 ± 0,25

Прирост показателя*, % +12,8 +78,1 +6,7

Через 5 мин 32,0 ± 1,4 1,17 ±0,44 1,05 ±0,07

Прирост показателя, % +24,0 +82,8 +40,0

Через 10 мин 33,1 + 1,1 1,05 + 0,31 1,08 ±0,06

Прирост показателя, % +28,3 +64,1 +44,0

* Прирост показателей указан к исходному уровню

90

3,0 Дж/см2 6,0 ДжГсм2

Рис 1 Прирост показателей микроциркуляции на 5 мин в % к исходному уровню при разных дозах воздействия НИЛИ * - достоверные изменения при Р = 95%

На рис 1 сопоставлены изменения структурных и функциональных показателей в системе пиальных микрососудов при разных дозах воздействия НИЛИ На нем отчетливо видно, что воздействие НИЛИ на Микроциркуляцию в пиальных сосудах имеет доза - зависимый характер Стимулирующее влияние НИЛИ на пиальные микрососуды, проявляющееся в повышении кровотока (ПМ) и усилении флаксомоций (СКО), при дозе 6,0 Дж/см2 выше, чем при дозе 3,0 Дж/см2 Вместе с тем, следует отметить, что при дозе 6,0 Дж/см2 имеет место большее

напряжение регуляторных механизмов, о чем свидетельствует менее высокий прирост показателя ИФМ, который характеризует низкочастотный вазомоторный компонент флаксмоций Это имеет важное практическое значение, так как превышение порога терапевтической эффективности НИЛИ ведет к напряжению в регуляторных механизмах в системе микроциркуляции крови

Таким образом, в ходе исследования состояния микроциркуляции в мягкой мозговой оболочке крысы при воздействии НИЛИ выявлено, что наиболее чувствительными к лазерному воздействию являются самые мелкие микрососуды (прекортикальные артериолы и посткортикальные венулы) Повышение уровня микроциркуляции при воздействии НИЛИ происходит в первую очередь за счет активизации именно вазомоторных механизмов в прекортикальных артериолах на фоне снижения их сосудистого тонуса и общего внутрисосудистого сопротивления в бассейне пиальных сосудов.

Реакция пиальных микрососудов на воздействие экзогенного оксида азота

При изучении реакции пиальных микрососудов на воздействие экзогенного оксида азота были использованы четыре дозы, определяемые продолжительностью обдува: 30, 40, 50 и 60 секунд.

состояние

Рис 2 Изменения диаметра пиальных микрососудов на 5 и 10 минуте после воздействия оксидом азота в течение 30 секунд А1-артериола I порядка: АИ-артериола 2 порядка; ПкА- прекортикальная артериола, ПкВ- посткортикальная венула, В1-венула I порядка, ВИ-венула II порядка

При воздействии оксида азота в течение 30 с диаметр пиальных микрососудов постепенно увеличивается за счет их дилатации К 10-ой минуте он достигает максимальных значений Дилатация наиболее отчетливо выражена в области прекортикальных артериол (рис 2) Как показывают данные морфометрии, увеличение диаметра прекортикальных артериол по сравнению с исходным состоянием составляет 37,0% Реакция артериол I и II порядков менее выражена их диаметр превышает исходный уровень на 4,0 и 7,0% (соответственно) За счет интенсификации транскортикального потока крови усиливается и ее отток по пиальным сосудам Так, диаметр посткортикальных венул увеличивается к 10 минуте после воздействия оксида азота на 14,0% по

сравнению с исходным уровнем Реакция более крупных венул (венул II и I порядков) менее выражена и не превышает 8,0 и 6,0%, соответственно

В табл 6 представлены изменения средних значений показателей микроциркуляции в пиальных сосудах после воздействия на них оксидом азота Показатель тканевой перфузии (ПМ) имеет тенденцию постепенного возрастания после воздействия, что хорошо согласуется с динамикой дилатации микрососудов в регистрируемой области пиальных микрососудов Сразу же после обдува ПМ возрастает на 7,6%; к 5 мин -на 12,1%; а к 10 мин - на 35,3% Наибольший прирост показателя СКО наблюдается к 10-ой минуте после воздействия оксида азота ИФМ, отражающий соотношение низко- и высокочастотных колебаний в ЛДФ-грамме, возрастает сразу после обдува и сохраняется на повышенном уровне на 5 мин после воздействия, свидетельствуя о преобладании вазомоторных колебательных ритмов в ЛДФ-грамме Однако к 10 мин, ИМФ понижается ниже исходного уровня, что свидетельствует о напряжении регуляторных механизмов в системе микроциркуляции

Таблица 6

Показатели кровотока в сосудах мягкой мозговой оболочки крысы в ходе реакции на воздействие оксидом азота в течение 30 секунд (М±т)

Время регистрации Параметр микроциркуляции, ПМ, перф.ед. Уровень флакса,СКО, перф.ед. ИФМ, услед

Исходные показатели 19,8 ±5,3 0,49 ±0,6 0,58 ±0,14

Сразу после воздействия 21,3 ± 1,7 0,54 ± 0,07 0,97 ±0,16

Прирост показателя*, % +7,6 +10,2 +67,2

Через 5 мин 22,2 ± 1,1 0,58 ±0,11 0,66 ±0,12

Прирост показателя, % +12,1 118,4 +13,8

Через 10 мин 26,8 ± 1,3 0,74 ±0,16 0,54 ± 0,09

Прирост показателя, % +35,3 +51,0 -6,9

* Прирост показателей указан к исходному уровню

Интенсификация транскортикального потока крови и усиление ее оттока по пиальным микрососудам наблюдались при всех опробованных дозах воздействия экзогенного оксида азота При этом, дилатация микрососудов и усиление кровотока носило доза-зависимый характер Сравнение реакции наиболее чувствительных к воздействию экзогенного оксида азота прекортикальных артериол и посткортикальных венул на 5 мин воздействия, а также других показателей микроциркуляции представлено на рис 3 На нем отчетливо прослеживается, что наиболее выраженная реакция в системе пиальных микрососудов наблюдается при дозе воздействия продолжительностью 50 с На 5-ой мин после воздействия оксидом азота в течение 50 с тканевой кровоток возрастает до 30,5 перф ед, что на 48,8% превышает исходный уровень Уровень колеблемости тканевого кровотока (СКО) к 5-ой мин возрастает по сравнению с исходным уровнем на 88,7% Применение анализа амплитудно-частотного спектра колебаний, выявляемых при ЛДФ-графии, показало, что столь

существенное усиление уровня флакса обусловлено увеличением вклада вазомоторных компонентов в модуляцию тканевого кровотока

При экспозиции экзогенного оксида азота в течение 60 с несмотря на незначительную дилатацию пре- и посткортикальных микрососудов имеет место существенное понижение показателей микроциркуляции Особенно это заметно по динамике индекса флаксмоций ИФМ (рис. 4) 60-минутная экспозиция экзогенного оксида азота приводит к резкому падению ИМФ на 29,4% по сравнению с исходным уровнем. Это угнетение микроциркуляции в пиальных сосудах обусловлено подавлением вазомоторного ритма и возрастанием роли высокочастотных модуляций тканевого кровотока, особенно в области пульсовых колебаний.

90 80 -

70 -

Рис. 3. Изменения параметров микрососудов и показателей микроциркуляции в пиальных сосудах на 5 мин после воздействия разных доз экзогенного оксида азота в процентном отношении к исходному уровню * - достоверные изменения при Р = 95%.

Рис 4 Изменения индекса флаксмоций ИФМ на 5 мин после воздействия разных доз экзогенного оксида азота на пиальные сосуды в процентном отношении к исходному уровню.

Таким образом, исследование влияния экзогенного оксида азота на микроциркуляцию в сосудах мягкой мозговой оболочки крысы показало, что он оказывает стимулирующее воздействие на микрососуды. Это проявляется в активации тканевого кровотока и дилатации микрососудов, особенно четко выраженной в зоне прекортикальных артериол и посткортикальных венул Эффект стимуляции тканевого кровотока носит доза-зависимый характер. Превышение терапевтической дозы при обдуве микрососудов потоком N0 в течение 60 с ведет к угнетению микроциркуляции По своим проявлениям эффект стимуляции тканевого кровотока при воздействии экзогенного оксида азота сопоставим с таковым при облучении микрососудов НИТ1И в терапевтических зонах В основе патогенетического механизма стимуляции микроциркуляции лежит дилатация микрососудов и активация вазомоторного механизма модуляции тканевого кровотока

Проведенное изучение микроциркуляции в сосудах мягкой мозговой оболочки крысы показало, что для ЛДФ-метрии кровотока в мягкой мозговой оболочке и поверхностных слоях коры мозга важное значение имеет пространственная ориентация направления основных потоков крови по отношению к поверхности мозга, относительно которой фиксируется оптический зонд флоуметра Полученные данные по архитектонике микрососудов в мягкой мозговой оболочке крысы свидетельствуют о том, что в ней микрососуды, а соответственно и потоки, ориентированы параллельно поверхности мозга В прекортикальных артериолах и посткортикальных венулах потоки эритроцитов ориентированы перпендикулярно по отношению к поверхности мозга

Амплитудно-частотный анализ ЛДФ-грамм позволяет судить о частотных составляющих допплерограммы, которая представляет собой сложную кривую с многочисленными накладывающимися друг на друга ритмами колебаний тканевого кровотока, или флаксмоций По результатам АЧС-анализа получены данные о частоте и амплитуде всех ритмических компонентов ЛДФ-сигнала Доминирующим ритмом в мягкой мозговой оболочке крысы является вазомоторный ритм

ВЫВОДЫ:

1. Сосудистая сеть мягкой оболочки головного мозга крыс представляет собой пространственно упорядоченный в структурном и гемодинамическом отношении комплекс микрососудов артериолярного и венулярного звеньев, взаимосвязь между ними осуществляется опосредованно, через капилляры микроциркуляторного русла поверхностных слоев коры мозга Является доступным объектом изучения микроциркуляции в прижизненных условиях

2 Компьютерная 7\/-микроскопия дает объективную информацию о состоянии микроциркуляции в пиальных сосудах головного мозга и позволяет количественно охарактеризовать протяженность различных звеньев микроциркуляторного русла, плотность расположения микрососудов, интенсивность кровенаполнения микрососудов, а также интенсивность кровотока в них

3 Лазерная допплеровская флоуметрия (ЛДФ) отражает не только уровень перфузии тканей кровью, который для мягкой оболочки головного мозга половозрелой крысы составляет ПМ = 23,9 ± 0,6 перф ед , СКО = 0,83 ± 0,06 перфед, Ку = 3,33 ± 0,14%, но также характеризует ритмические составляющие колебаний кровотока, среди которых доминируют вазомоторные

4 Воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения на сосуды мягкой оболочки головного мозга крысы дозой 3,0 Дж/см2 и 6,0 Дж/см2 оказывает стимулирующее влияние на микроциркупяцию, которое проявляется в повышении кровотока на фоне снижения сосудистого тонуса, усиления флаксмоций и повышения вазомоторной активности

5 Наиболее чувствительными к лазерному воздействию в терапевтических дозах являются прекортикальные артериолы и посткортикальные венулы

6. Воздействие экзогенного оксида азота на сосуды мягкой оболочки головного мозга с дозой (временем экспозиции) 30, 40, 50 секунд оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, которое проявляется в повышении уровня кровотока, усилении флаксмоций и повышении вазомоторной активности.

7 Воздействие экзогенного оксида азота на сосуды мягкой оболочки головного мозга с продолжительностью экспозиции 60 секунд оказывает угнетающее влияние, что проявляется в уменьшении параметра микроциркуляции, ослаблении флаксмоций и уменьшении вазомоторной активности.

8 В основе патогенетического механизма стимуляции микроциркуляции при лазерном облучении и воздействии экзогенного оксида азота лежит дилатация микрососудов и активация вазомоторного ритма модуляций тканевого кровотока.

Список публикаций по теме диссертации

1 Козлов В И , Гурова О А , Азизов Г А , Сабанцева Е Г , Литвин Ф Б , Морозов М.В , Рыжакин С М Лазерная допплеровская флаксметри в оценке состояния микроциркуляции крови // Тез. научно-практической конф «Методы исследования регионарного кровообращения и микроциркуляции в клинике » -СПб,2004 - С.71 - 72

2 Козлов В И , Гурова О А , Азизов Г А , Сабанцева Е Г .Литвин Ф Б , Морозов М В, Рыжакин С М Биоритмические составляющие' ЛДФ- сигнала и их значение в оценке состояния микроциркуляции // Материалы III всероссийской с международным участием школы - конференции по физиологии кровообращения - М , 2004. - С 38-39

3. Рыжакин С М Влияние оксида азота на состояние микроциркуляции в пиальных сосудах // Материалы III Всероссийской с международным участием школы - конференции по физиологии кровообращения - Москва, 2004 - С 94.

4 Козлов В И , Литвин Ф Б , Рыжакин С М. Спонтанные ритмы кожного кровотока при окклюзии плеча и пальца здорового человека // Материалы III Всероссийского симпозиума «Применение лазерной допплеровской флоуметрии в медицинской практике» - М , 2000 - С 35 - 37.

5 Литвин Ф Б , Рыжакин С М Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на систему микроциркуляции мягкой мозговой оболочки головного мозга крыс // Материалы XI международного симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации» - М , 2003 - С 320 -321

6 Козлов В И , Литвин Ф Б., Рыжакин С М Влияние излучения гелий- неонового лазера на сосуды микроциркуляторного русла мягкой оболочки головного мозга // Лазерная медицина, 2002 - Т 2, вып 2 -

С 22-24

7 Козлов ВИ, Азизов ГА, Сабанцева Е Г .Литвин ФБ, Рыжакин СМ Расстройства тканевого кровотока, их патогенез и классификация // Материалы II Всероссийской научной конференции «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии». - М., 2005 - С 153 -154

8 Козлов В.И , Азизов Г А , Ибрагим Р X , Литвин Ф Б , Морозов М В , Сабанцева Е Г, Станишевская Т И , Рыжакин С М Индивидуально-типологические особенности микроциркуляции у человека // Регионарное кровообращение и микроциркуляция, 2005 - № 2 - С. 77 - 78

9. Рыжакин С М Стимуляция микроциркуляции крови в системе пиальных сосудов низкоинтенсивным лазерным излучением // Ангиология и сосудистая хирургия, 2004 -Т 10,-С 45

РЫЖАКИН СЕРГЕЙ МИХАЙЛОВИЧ (РОССИЯ)

«Состояние микроциркуляции в пиальных сосудах крысы при действии лазерного излучения и экзогенного оксида азота»

В работе приведены результаты исследований особенностей реакции микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки головного мозга крысы на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения и экзогенного оксида азота Установлено, что воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на сосуды мягкой оболочки головного мозга крысы дозой 3,0 Дж/см2 и 6,0 Дж/смг оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, которое проявляется в повышении кровотока на фоне снижения сосудистого тонуса, усиления флаксмоций и повышения вазомоторной активности Впервые дана оценка доза-зависимого влияния экзогенного оксида азота на систему микроциркуляции в сосудах мягкой мозговой оболочки Показано, что доза (время экспозиции) 30, 40 и 50 с оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, а доза с продолжительностью экспозиции 60 с оказывает угнетающее влияние, что проявляется в снижении показателей микроциркуляции, ослаблении флаксмоций и уменьшении вазомоторной активности

Sergey Mikhaylovich Ryzhakin (Russian Federation)

"THE STATUS OF MICROCIRCULATION IN RAT PIAL VESSELS UNDER THE INFLUENCE OF LASER EMISSION AND EXOGENOUS NITRIC OXIDE"

The results of the research of the distinctive features of the reaction of rat's pia microcirculatory channels on the influence of low intensity laser therapy and exogenous nitric oxide are presented at the essay. It is determined that the influence of cold laser therapy (CLT) on pial vessels in the intensities of 3 0 and 6 0 joule per square centimeter exerts stimulating influence on microcirculation, which appears in the increase of bloodstream at the background of vascular tone decrease, flaxmotion reinforcement and promotion of vasomotor activity. The dose-dependent influence of exogenous nitric oxide on microcirculatory system of pial vessels was estimated for the first time It is shown that doses (exposure time) of 30, 40 and 50 seconds can stimulate microcirculation, and the dose of 60 seconds causes suppressive action That is manifested in the decrease of microcirculatory figures, flaxmotion relaxation and diminution of vasomotor activity.

Отпечатано в ООО «Аведа» 117342, Москва, ул. Введенского, д.8, тел. 332-50-94.

Подписано в печать 23.09.2005 г. Формат 60x90 1/16. Тираж 100 экз. 1.0 п.л. Бумага New SvetoCopy.

3166 is

РНБ Русский фонд

2006-4 12901

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рыжакин, Сергей Михайлович

Введение

Глава I. Обзор литературы

1.1. Формирование и структурно-функциональные особенности микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки.

1.2. Применение лазерной допплеровской флоуметрии при исследовании микроциркуляции.

1.3. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на микроциркуляцию крови.

1.4. Влияние экзогенного оксида азота на микроциркуляцию.

Глава II. Материалы и методы исследования

2.1. Организация исследования. Материал исследования.

2.2. Методика биомикроскопии сосудов микроциркуляторного русла мягкой мозговой оболочки белой крысы.

2.3. Методика лазерной допплеровской флоуметрии для оценки состояния микроциркуляции в пиальных сосудах.

2.4. Методика воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения на кровоток в пиальных сосудах мягкой мозговой оболочки.

2.5. Методика воздействия экзогенного оксида азота на микроциркуляторное русло мягкой мозговой оболочки.

2.6. Статистическая обработка результатов исследования.

Глава III. Результаты собственных исследований

3.1. Строение микроциркуляторного русла и состояние кровотока в микрососудах мягкой мозговой оболочки белой крысы.

3.2. Состояние микроциркуляции в мягкой мозговой оболочке крысы по данным лазерной допплеровской флоуметрии.

3.3. Воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения на микроциркуляцию в мягкой мозговой оболочке крысы.

3.3.1. Воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения дозой 3,0 Дж/см.

3.3.2. Воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения дозой 6,0 Дж/см

3.4. Реакция системы микроциркуляции мягкой мозговой оболочки крысы на воздействие экзогенного оксида азота.

3.4.1. Воздействие оксидом азота, время экспозиции

30 секунд.

3.4.2. Воздействие оксидом азота, время экспозиции

40 секунд.

3.4.3. Воздействие оксидом азота, время экспозиции

50 секунд.

3.4.4. Воздействие оксидом азота, время экспозиции

60 секунд.

Глава IV. Обсуждение полученных результатов.

Выводы.

Указатель литературы.

Список сокращений

НИЛИ - низкоинтенсивное лазерное излучение N0 - оксид азота

ЛДФ - лазерная допплеровская флоуметрия ПМ - показатель микроциркуляции ИМ - индекс микроциркуляции

СКО (а) - среднее квадратичное отклонение ПМ, уровень «флакса» ИФМ - индекс эффективности флаксмоций Kv - коэффициент вариации * АЧС - амплитудно-частотный спектр

VLF - очень низкочастотные колебания

LF - низкочастотные колебания

HF - высокочастотные колебания

CF - сердечные колебания

JIAKK-01 - лазерный анализатор кровотока

ПкВ - посткортикальная венула

BI - венула I порядка

СВ - собирательная венула

AI - артериола I порядка

АН - артериола II порядка

AIII - артериола III порядка

ПкА - прекортикальная артериола

AAA - артериоло-артериолярный анастомоз

ВВА - венуло-венулярный анастомоз

Введение Диссертация по биологии, на тему "Состояние микроциркуляции в пиальных сосудах крысы при действии лазерного излучения и экзогенного оксида азота"

Актуальность. В последнее время проблемы исследования микроциркуляции занимают одно из ведущих мест в медицинской практике. Актуальность исследования микроциркуляции крови определяется тем, что микроциркуляторное русло является той частью сердечно-сосудистой системы, в которой в конечном итоге реализуется ее основная функция - обеспечение транскапиллярного обмена и реакции на воздействие факторов внешней и внутренней среды (В.В. Куприянов с соавтр., 1975; Э.С. Мач с соавтр., 2004). Благодаря изучению структурных основ путей микроциркуляции разработано представление о микрососудистом модуле как анатомической основе структурно-функциональных элементов разных органов (В.И. Козлов с соавтр. 1994; В.В. Банин, 2000). В свете этих исследований чрезвычайно важным представляется изучение анатомо-физиологических особенностей путей микроциркуляции крови в головном мозге, в частности в системе пиальных сосудов, непосредственно обеспечивающих васкуляризацию коры мозга.

Известно, что в современной клинической практике все большее применения находят быстро совершенствующиеся методы прижизненного изучения микроциркуляции крови. В их число входят методы TV-микроскопии, позволяющие не только выявить анатомо-физиологические характеристики микроциркуляторного русла, но и установить причинно-следственные связи между его конструкцией и интенсивностью потока крови в микрососудах (А.В. Покровский, 2004).

В настоящее время, особенно в. «инфракрасном (ИК) диапазоне», все более широкое использование в клинической практике получает также низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ), о чем свидетельствуют материалы международных научных конференций по лазерной медицине, регулярно проводимые ГНЦ лазерной медицины (Москва, 2000, 2002, 2004). В качестве одного из механизмов биостимулирующего влияния

НИЛИ на биоткани рассматривается его активирующее воздействие на тканевый кровоток (В.И. Козлов и соавт., 1993; О.А. Терман, 1995; Н.А.

Данченко, 2001). Однако до конца остается неясным вопрос о допустимых дозах НИЛИ, особенно применительно к мозговому кровообращению. Ранее отмечалось, что под влиянием воздействия НИЛИ в РЖ - диапазоне увеличение кровенаполнения пиальных микрососудов и нарастание в них скорости движения крови происходит в результате дилатации сосудов прекапиллярного звена в микроциркуляторном русле (Ф.Б. Литвин, 1987), однако механизм этого феномена не был раскрыт. В литературе крайне немногочисленны сообщения о прижизненной идентификации эффекта лазерного воздействия на различные звенья системы микроциркуляции крови и особенно доза-зависимых реакциях микрососудов на воздействие НИЛИ.

В последние годы высказывается мнение о возможной роли эндогенного оксида азота и NO-синтетазы в дилатации неповрежденных микрососудов (А.Б. Шехтер, 1998; Е.К. Кречина, 2000; Г.И. Клебанов, 2002; Ю.А. Владимиров, 2003).

Актуальным для исследования остается вопрос о возможном участии в механизме воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения на микрососуды NO-синтетазы.

Экзогенный оксид азота (NO) рассматривается в настоящее время как новая сигнальная молекула, играющая роль универсального регулятора многих физиологических процессов в организме и являющаяся посредником между низкоинтенсивным лазерным излучением и сосудами (А.Б. Шехтер, 1998; Е.К. Кречина, 2000). Установлено, что при воздействии экзогенного оксида азота на сосуды микроциркуляторного русла, происходит разнонаправленная реакция микрососудов. В одних случаях NO понижает уровень кровотока с дальнейшим восстановлением до нормы, в других повышает уровень кровотока с постепенным возращением к норме. Механизмы воздействия оксида азота на микроциркуляцию в тканях, требуют дальнейшего исследования (А.Б. Шехтер, 1998; Е.К. Кречина, 2000; В.Т. Ивашкин, О.М Драпкина, 2001).

Использование лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) позволяет исследовать реакцию микрососудов и проводить мониторинг микроциркуляции в мягкой мозговой оболочке экспериментальных животных.

Метод лазерной допплеровской флоуметрии основывается на оптическом зондировании тканей монохроматическим сигналом (обычно в красной области спектра) и анализе частотного спектра отраженного от движущихся эритроцитов сигнала. Отраженное от статических компонентов ткани лазерное излучение не изменяет своей частоты, а отраженное от подвижных частиц (эритроцитов) - имеет допплеровское смещение частоты относительно зондируемого сигнала. Переменная составляющая отраженного сигнала, пропорциональная мощности спектра доплеровского смещения, определяется двумя факторами: концентрацией эритроцитов в зондируемом объеме и их скоростью. Регистрируемый при ЛДФ сигнал характеризует кровоток в микрососудах в объеме 1-1,5 мм ткани. Развитие этого метода показало, что наиболее существенным является не столько измерение скорости движения эритроцитов, сколько временной изменчивости потока эритроцитов. Ритмические колебания кровотока и их изменения позволяют получить информацию об определенных соотношениях различных механизмов, определяющих состояние микроциркуляции.

По мнению ряда авторов (Т. Tenland et.al. 1983; U. Hoffman e.a., 1990; A. Bollinger e.a., 1993; В.И. Козлов, 2000), ЛДФ в большей мере характеризует периодические изменения (колебания) перфузии тканей кровью, которые могут протекать с разной частотой и амплитудой. Как оказалось, кровоток на микроциркуляторном уровне не является абсолютно стабильным феноменом, а подвержен временным и пространственным вариациям. Колебания кровотока, называемые еще осцилляциями или флаксмоциями (flux motion), периодически происходят в тканях, отражая важнейшую характеристику процесса их жизнедеятельности: изменчивость и приспособляемость кровотока к постоянно меняющимся условиям гемодинамики и потребностям тканей в перфузии их кровью. Частота и амплитуда осцилляций кровотока в каждый данный момент времени вариабельны, что и отражает ЛДФ-грамма. Вариабельность ритмических характеристик флаксмоций зависит от многих факторов индивидуальной изменчивости кровотока (Tenland е.а., 1983; Fagrell, 1994), оптических свойств тканей (Bonner е.а., 1981), а также состояния пре- и посткапиллярного сопротивления (В .И. Козлов с соавтр., 1998).

Созданный в России диагностический прибор - лазерный анализатор капиллярного кровотока (ЛАКК-01)- позволяет с достаточной точностью определять неинвазивным способом уровень микроциркуляции и оценивать степень ее нарушения в тканях (В .И. Козлов, 1997).

Цель работы. Цель настоящего исследования состояла в прижизненном изучении микроциркуляции крови в сосудах мягкой мозговой оболочки головного мозга крысы при воздействии на них низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) и экзогенного оксида азота.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить состояние микроциркуляции в пиальных сосудах головного мозга белой крысы в условиях острого опыта с помощью биомикроскопии и компьютерной телевидеометрии

2. Изучить состояние микроциркуляции в пиальных сосудах головного мозга крысы с помощью лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) и сопоставить результаты амплитудно-частотного анализа ЛДФ-грамм с данными биомикроскопической оценки пиальных микрососудов.

3. Изучить в условиях острого опыта влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на состояние микроциркуляции в пиальных сосудах.

4. Изучить в условиях острого опыта влияние экзогенного оксида азота на состояние микроциркуляции в пиальных сосудах крысы.

Научная новизна исследования. Новым в работе является комплексное изучение структурной организации микроциркуляторного русла и состояния кровотока в микрососудах мягкой мозговой оболочки крысы, выполненное с помощью компьютерной TV-микроскопии и ЛДФ-графической регистрации состояния микроциркуляции крови, что позволило впервые показать зависимость показателей ЛДФ-метрии от структурной композиции микроциркуляторного русла.

Впервые дана гемодинамическая оценка состояния кровотока в сосудах мягкой мозговой оболочки с помощью ЛДФ-метрии и установлены параметры амплитудно-частотного спектра ЛДФ-грамм, характеризующие состояние различных механизмов регуляции микроциркуляции в пиальных сосудах. Выявлено, что активный механизм модуляций колебаний кровотока сосудах мягкой мозговой оболочки обусловлен преимущественно вазомоторной активностью сосудов прекапиллярного звена.

Установлено, что воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на сосуды мягкой оболочки головного мозга крысы дозой 3,0 Дж/см и 6,0 Дж/см оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, которое проявляется в повышении кровотока на фоне снижения сосудистого тонуса, усиления флаксмоций и повышения вазомоторной активности. Наиболее чувствительными к лазерному воздействию в терапетических дозах являются прекортикальные артериолы и посткортикальные венулы.

Впервые дана оценка доза-зависимой влияния экзогенного оксида азота на систему микроциркуляции в сосудах мягкой мозговой оболочки.

Показано, что доза (время экспозиции) 30, 40 и 50 с оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, а доза с продолжительностью экспозиции 60 с оказывает угнетающее влияние, что проявляется в снижении показателей микроциркуляции, ослаблении флаксмоций и уменьшении вазомоторной активности.

Научная и практическая значимость исследования

Данные об особенностях состояния микроциркуляции крови в сосудах мягкой мозговой оболочки, полученные с помощью компьютерной TV-микроскопии и ЛДФ-метрии, имеют важное практическое и теоретическое значение для понимания механизма модуляций тканевого кровотока.

Данные о доза-зависимом влиянии низкоинтенсивного лазерного воздействия на систему микроциркуляции в сосудах мягкой мозговой оболочки представляет непосредственный интерес для врачей, специализирующихся в области лазерной терапии, особенно в плане поиска оптимальных условий лазерной стимуляции микроциркуляции.

Установлено, что в основе патогенетического механизма стимуляции микроциркуляции при лазерном облучении и воздействии экзогенного оксида азота лежит дилатация микрососудов и активация вазомоторного ритма модуляций тканевого кровотока.

Наиболее чувствительными к лазерному облучению и воздействию экзогенного оксида азота в терапетических дозах являются прекортикальные артериолы и посткортикальные венулы. Превышение порога допустимых доз при времи экспозиции 60 с экзогенного оксида азота ведет к угнетению микроциркуляции, ослаблению флаксмоций и уменьшению вазомоторной активности микрососудов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Рыжакин, Сергей Михайлович

Выводы

Сосудистая сеть мягкой оболочки головного мозга крыс представляет собой пространственно упорядоченный в структурном и гемодинамическом отношении комплекс микрососудов артериолярного и венулярного звеньев, взаимосвязь между ними осуществляется опосредованно, через капилляры микроциркуляторного русла поверхностных слоев коры мозга. Является доступным объектом изучения микроциркуляции в прижизненных условиях.

Компьютерная TV-микроскопия дает объективную информацию о состоянии микроциркуляции в пиальных сосудах головного мозга и позволяет количественно охарактеризовать протяженность различных звеньев микроциркуляторного русла, плотность расположения микрососудов, интенсивность кровенаполнения микрососудов, а также интенсивность кровотока в них.

Лазерная допплеровская флоуметрия (ЛДФ) отражает не только уровень перфузии тканей кройью, который для мягкой оболочки головного мозга половозрелой крысы составляет ПМ = 23,9 ± 0,6 перф.ед., СКО = 0,83 ± 0,06 перф.ед., Kv = 3,33 ± 0,14%, но также характеризует ритмические составляющие колебаний кровотока, среди которых доминируют вазомоторные.

Воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения на сосуды мягкой оболочки головного мозга крысы дозой 3,0 Дж/см и 6,0 Дж/см оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, которое проявляется в повышении кровотока на фоне снижения сосудистого тонуса, усиления флаксмоций и повышения вазомоторной активности.

Наиболее чувствительными к лазерному воздействию в терапевтических дозах являются прекортикальные артериолы и посткортикальные венулы.

Воздействие экзогенного оксида азота на сосуды мягкой оболочки головного мозга с дозой (временем экспозиции) 30, 40, 50 секунд оказывает стимулирующее влияние на микроциркуляцию, которое проявляется в повышении уровня кровотока, усилении флаксмоций и повышении вазомоторной активности.

Воздействие экзогенного оксида азота на сосуды мягкой оболочки головного мозга с продолжительностью экспозиции 60 секунд оказывает угнетающее влияние, что проявляется в уменьшении параметра микроциркуляции, ослаблении флаксмоций и уменьшении вазомоторной активности.

В основе патогенетического механизма стимуляции микроциркуляции при лазерном облучении и воздействии экзогенного оксида азота лежит дилатация микрососудов и активация вазомоторного ритма модуляций тканевого кровотока.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рыжакин, Сергей Михайлович, Москва

1. Александров М.П., Зайцев В.П., Логинова Н.К. Сосудистые реакции на действие света гелий-неонового лазера // Средства и методы квантовой электроники в медицине. Саратов, 1976. - С. 136-138.

2. Архипович А.А. Микроваскуляризационная система твердой оболочки головного мозга: Автореф. дис., докт.мед.наук. Киев, 1973. - 45 с.

3. Барамидзе Д. Г. Роль шальной артериальной системы в регулировании микроциркуляции в коре головного мозга: Автореф. дис., докт.биол.наук. -Тбилиси, 1985. -38 с.

4. Барамидзе Д.Г., Мчедлишвили Г.И. Расположение и реакция гладомышечных волокон в стенках артерий коры головного мозга // Болл. экспериментальной биологии и медицины. 1970. -Т. 70, № 2. - С. 110112.

5. Барамидзе Д.Г., Мчедлишвили Г.И. Функционирование микроваскулярных механизмов в системе шальных артерий // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1975. - Т. 61. № 10. - С. 149-150.

6. Барон М.А., Майорова Н.А. Функциональная стереоморфология мозговых оболочек. М.: Медицина, 1982. - 352 с.

7. Беков Д.Б. Атлас венозной системы головного мозга. М.: Медицина, 1965.-359 С.

8. Беков Д.Б., Михайлов С.С. Атлас артерий и вен головного мозга человека. М.: Медицина, 1979. - 288 с.

9. Беков Д.Б., Нехворовский А.И. Архитектура собственных вен коры головного мозга человека // Архив анат., гистол. и эмбриол. 1971. - Т. 60, №5.-С. 57-65.

10. Безруков Т.М., Захидов Х.З., Ачилов А.Т. Возрастные данные о строении средней мозговой артерии у человека // Тез. Докл. 56-й научн. конф. (секция анатомов, гистологов и эмбриологов). Самарканд, 1970. -С. 30-38.

11. Буйлин В.А., Москвин С.В. Низкоинтенсивные лазеры в терапии различных заболеваний. М.: ТОО «Фирма - Техника», 2001. - 176 с.

12. Ванин А.Ф. Оксид азота универсальный регулятор биологических процессов // Материалы научно-практ. конф. - М., 2004. - С. 22-27.

13. Вартанян Л.В. Особенности строения сосудисто-капиллярного русла слуховой коры в онтогенезе и некоторые изменения сосудов, при слуховой галлюцинации // Журн. экспериментальной и клинической медицины. -1978.-№1. с. 89-94.

14. Волин М.С., Дэвидсон К.А., Камински П.М. Механизмы передачи сигнала оксидант-оксид азота в сосудистой ткани // Биохимия. -1998.-Т. 63, вып. 7.-С. 958-965.

15. Гамалея Н.Ф. Лазеры в эксперименте и клинике. М.: Медицина, 1972. - 232 с.

16. Герасимов Б.И. Вены свода черепа и лица. Экстракраниальные вены как пути венозного оттока из полости черепа // Функциональная и прикладная анатомия вен центральной нервной системы. Оренбург, 1975. -С. 78-86.

17. Гиндзе Б. К. Артериальная система головного мозга человека и животных. Часть I. М.: Медгиз, 1947. - С 39.

18. Грачев С.В. NO-терапия новое направление в медицине. Взгляд в будущее // Материалы научно-практ. конф. М., 2001. - С. 19-22.

19. Гурова О. А. Морфофункциональная перестройка микрососудов конъюнктивы глазного яблока у человека на отдельных этапах постнатального периода онтогенеза // Архив анат. гистол. и эмбриол. -1986.-Т. 90, №2.-С. 77-83.

20. Жукова Т.П., Пурин В.Р. Динамика изменений мозга, возникающих под влиянием асфиксии плода и новорожденного животного в эксперименте // Вопросы материнства и детства. 1972. -№ 8.1. С. 19-23.

21. Жукова Т.П., Пурин В.Р. Некоторые особенности структуры сосудистой сети на поверхности полушарий мозга человека во второй половине внутриутробного и раннем постнатальном периоде развития // Архив анат. гистол. и эмбриол. 1978. - Т. 75, № 7. - С. 51-59.

22. Зозуля Г.Г. К вопросу о развитии сосудистой системы мозга плода человека // Сборник научный работ по анатомии кровеносной системы. -Волгоград, 1964. Ч. 2. - С. 394-396.

23. Ивашкин В.Т. Оксид азота в регуляции активности функциональных систем // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колонопроктол. 2000.- Т. 10., №4.-С. 16-21.

24. Илларионов В.Е. Основы лазерной терапии. М: - Издательство 1992. -123 с.

25. Каган И.И. Анастомозы глубоких вен с другими частями внутричерепного венозного русла // Функциональная и возрастная прикладная анатомия вен центральной нервной системы. Оренбург, 1975. - С. 33-36.

26. К анализу некоторых сторон механизма воздействия излучения гелий-неонового лазера /С.М.Зубкова, З.А.Соколова, В.И.Попов, И.Б.Лапрун // Вопросы курортологии, физиологии и лечебной физкультуры. 1983. - № 6. - С. 25-29.

27. Капустина Е.В. Развитие артериальной сети в мягкой мозговой оболочке головного мозга полушарий головного мозга плода человека во второй половине внутриутробной жизни // Педиатрия. 1952. № 2. - С. 3038.

28. Капустина Е.В. Развитие венозной сети в мягкой мозговой оболочке животных в первые две недели внеутробной жизни // Вопросы морфологии. М., 1953. - Ч. 2. - С. 227-236.

29. Карабаева С.И., Артыгалиева Д.М., Голубых Л.Г. Состояние сосудов головного мозга и некоторых эндокринных желез при действии гелийнеонового лазера // Сосудистые заболевания мозга. Алма-Ата, 1984. - С. 179-182.

30. Кисляков Ю.Я. Математическое моделирование кровообращения и газообмена в мозге. Л.: Наука, 1975. - 131 с.

31. Кисляков Ю.Я., Лучаков Ю.И. Математическое моделирование динамики транспорта инертных газов в системе микроциркуляции //Биофизика. 1985. - Т.ЗО, Вып. I. - С. 137-140.

32. Кистанова Е.К. Морфофункциональное становление микроциркуляторной системы белой крысы в процессе полового созревания : Автореф. дис. канд.биол.наук. М., 1985. - 20 с.

33. Клосовский Б.Н. Развитие капилляров мозга. М.: Медгиз, 1949. -552с.

34. Клосовский Б.Н. Циркуляция крови в мозгу. М.: Медгиз, 1951.- 372 с.

35. Клосовский Б.Н., Космарская Е.Н. Деятельное и тормозное состояниемозга. М.: Медгиз, 1961. - 412 с.

36. Козлов В.И. Некоторые морфологические особенности эндотелия сосудов микроциркуляторного русла // Архив анат. гистол. и эмбриол.1971.-Т. 60,№5.-С. 46-56.

37. Козлов В.И. Экспериментально-морфологическое изучение микроциркуляции крови и структурной организации путей кровотока по данным витальной микроскопии: Автореф. дис. . докт.мед. наук. М.,1972.-35 с.

38. Козлов В.И. Модульная организация микроциркуляторной системы // Вопросы кибернетики. Научный совет АН СССР по комплексной программе "Кибернетика". 1977. Вып. 36. - С. 106-111.

39. Козлов В.И. Морфофункциональные преобразования в системе микроциркуляции на разных этапах онтогенеза // Физиология человека. -1983.-Т. 9,№ 1.-С. 43-49.

40. Козлов В.И. Организация путей микроциркуляторного кровотока // Физиология кровообращения. Физиология сосудистой системы. Под ред. Б.И.Ткаченко. Л.: Наука, 1984. - С. 178-212.

41. Козлов В.И. Гистофизиологическая микросистема как элемент структурной иерархии организма// Архив анат., гистол. и эмбриол. 1985. -Т. 88, №4.-С. 87-95.

42. Козлов В.И., Аносов И.П., Миронов А.А. Становление структурно-функциональных единиц микроциркуляторного русла мышц в потнатальном периоде онтогенеза у белой крысы // Архив анат., гистол. и эмбриол. 1986. - Т. 91, № 12. - С. 43-53.

43. Козлов В.И., Васильев Н.Д., Искакова Ж.Д. Морфометрическая характеристика микроциркуляторного русла скелетной мышцы в условиях рабочей гиперемии // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. 1979. - Т. 65, W- 6. - С. 846-854.

44. Козлов В.И., Кистанова Е.К. Концентрация эритроцитов в сосудах микроциркуляторного русла брыжейки белой крысы // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1984. - Т.70, №.II. - С. 1527-1533.

45. Козлов В.И., Куликов В.В., Тихомиров А.Н. Итоги и перспективы изучения морфологических основ гемомикроциркуляции // Архив анатом., гистол. и эмбриол. 1987. - Т. 42, № 5. - С. 5-19.

46. Козлов В.И., Тупицын И.О. Микроциркуляция при мышечной деятельности. М.: Физкультура и спорт 1982. - 120 с.

47. Козлов В.И., Тупицын И.О., Гурова О.А. Взаимосвязь мозговой гемодинамики и конъюнктивалъной микроциркуляции в онтогенезе у детей школьного возрастах/Физиология человека. 1987. -Т. 13, № 2. —1. С. 229-240.

48. Козлов В.И., Буйлин В.А., Самойлов Н.Г., Марков И.И. Основы лазерной физио- и рефлексотерапии. Самара - Киев, 1993 .- С. 9.

49. Козлов В.И., Мельман Е.Л., Шутка Б.В., Нейко Е.М. Гистофизиология капилляров// СПб: Наука, 1994.- С. 139-143.

50. Козлов В.И., Терман О.А. Лазерная допплеровская флоуметрия в диагностике микроциркуляторных- нарушений в терапевтической стоматологии //Применение ЛДФ в медицинской практике. М.- 2002

51. Константиновский Г.А. Возрастные изменения сосудов мягкой оболочки головного мозга человека // Физиология и патология сердечнососудистой системы в клинике и эксперименте. Киев, 1958. - С. 348-357.

52. Космарская Е.Н. Влияние вестибулярных раздражений на митотическое деление клеток наружного зернистого слоя коры мозжечка у котят и щенят // Архив анат., гистол. и эмбриол. -1961. Т. 41. № 7. - С. 4853. '

53. Крюк А.С. Мостовников В.А., Хохлов И.В. Терапевтическая эффективность низкоинтенсивного лазерного излучения. Минск: Издательство, 1986 - 286 с.

54. Куприянов В.В. Пути микроциркуляции. — Кишинев: Издательство 1969.-260 с.

55. Куприянов В.В. Система микроциркуляции и микроциркуляторное русло // Архив анат.,гистол. и эмбриол. 1971. - Т. 60, № 3. - С. 14-24.

56. Куприянов В.В. Микроциркуляторное русло / М.: Медицина, 1975. -214 с.

57. Куприянов В.В., Козлов В.И. Организация микроциркуляторного русла и некоторые особенности гемодинамики // Вестник АМН СССР. 1971. -№ 2. - С. 58-67.

58. Ломакин А.В. Развитие сосудисто-капиллярной сети двигательных центров мозга человека у млекопитающих: Автореф. дис. . канд.мед.наук. Владивосток, 1981. - 23 с.

59. Литвин Ф.Б. Морфофункциональная перестройка микроциркуляторного русла и особенности микроциркуляции крови в мягкой оболочке головного мозга белой крысы в постнатальном онтогенезе: Дис. кан.биол.наук.— Москва, 1987.— 201с.

60. Литвин Ф.Б. Влияние излучения гелий- неонового лазера на сосуды микроциркуляторного русла мягкой оболочки головного мозга // Лазерная медицина 2002, Т. 6; вып. 2 - С. 22 - 24.

61. Мач Э.С. Значение функциональных тестов в оценке нарушения микроциркуляции при некоторых заболеваниях // Применение лазерной допплеровской флоуметрии в медицинской практике. Материалы II Всероссийского симпозиума.-М., - 1998.- С. 14-16.

62. Михайлов С.С. Изменения венозных и капиллярных сетей твердой мозговой оболочки и головного мозга при венозном застое и опухолях // Сборник науч. рудов Кирг.мед.ин-та, 1972. Т.81. - С. 44-45.

63. Михайлов С.С., Каган И.И. Основные итоги изучения и закономерности анатомического строения вен центральной нервной системы // Функциональная и прикладная анатомия вен центральной нервной системы. Оренбург, 1975. - С. 5-20. •

64. Мозговой кровоток и метаболизм мозга при восстановлении после временного прекращения кровоснабжения /А.М.Гурвич, Э.М. Николаенко, С.М.Блинков, А.Л.Валанчюте // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. -1975.-Т. 61,№ 10.-С. 1542-1547.

65. Москаленко Ю.Е. Функциональная устойчивость системы мозгового кровобращения // Физиол. журн. им. И.М.Сеченова. 1978. - Т. 64, № 5. -С. 589-597.

66. Москаленко Ю.Е. Кровоснабжение головного мозга // Физиология кровообращения. Физиология сосудистой системы / Под ред.

67. Б.И. Ткаченко. Л.: Наука, 1984. - Гл. II. - С. 352-381.

68. Москаленко Ю.Е. Реактивность мозговых сосудов: Физиологические основы, информационная значимость, критерии оценки // Физиол. журн. СССР им.Сеченова. 1986. - Т. 72, № 8. - С. 67-69.

69. Мотавкин П.А., Ломакин А.В., Черток В.М. Капилляры головного мозга. Владивосток, 1983. - 138 с.

70. Мотавкин П.А., Черток В.М. Гистофизиология сосудистых механизмов мозгового кровообращения. М.: Медицина, 1980. - 200 с.

71. Мчедлишвили Г.И. Функция сосудистых механизмов головного мозга. -Л.: Наука, 1968.-203 с.

72. Мчедлишвили Г.И. Общие закономерности функционирования артериальной системы головного мозга // Механизмы деятельности головного мозга. Тбилиси, 1975. - С, 461-468.

73. Мчедлишвили Г.И. Спазм артерий головного мозга. Тбилиси: Издательство - 181 с.

74. Мчедлишвили Г.И. Механизмы регулирования мозгового кровообращения // Успехи физиологических наук. 1980. - Т. 2, № 4. - С. 326.

75. Мчедлишвили Г.И. Изучение сосудистых эффектов ключевая проблема нормальной и патологической физиологии кровообращения // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. - 1981. - Т. 27, № 5. - С. 603-606.

76. Мчедлишвили Г.И. Особенности.и изменения местного гематокрита // Вестник АМН СССР. 1982. - № 7. - С. 87-95.

77. Мчедлишвили Г.И., Барамидзе Д.Г. Функциональное состояние прекортикальных артерий при экспериментальной гипо- и гипертензии // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1971. - Т. 72, № 10. - С. 14-16.

78. Мчедлишвили Г.И., Барамидзе Д.Г. Прекортикальные артерии микроваскулярный механизм, регулирующий приток крови в кору головного мозга // Регионарное и системное кровообращение. Л., 1978. -С. 68-77.

79. Мчедлишвили Г.И., Баралидзе-Д. Г. Физиологические механизмы регулирования микроциркуляции в коре головного мозга // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. 1984. - Т. 70, № И. - С. 1473-1481.

80. Мчедлишвили Г.И., Барамидзе Д.Г., Горделадзе З.Т. Распространение дилататорных реакций по системе пиальных артерий примикроаппликации стрихнина к поверхности головного мозга // Физиол. журн. СССР им.Сеченова. 1984. - Т. 70, № 5. - С. 667-672.

81. Мчедлишвили Г.И., Куридзе Н.Т. Структурно-функциональные единицы в пиальной микроваскулярной системе // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1984. - Т. 98, № 12. - С. 756-759.

82. Мчедлишвили Г.И., Мамисашвили В. А. Статистические и динамические характеристики факторов, определяющих гидравлическое сопротивление в системе пиальных артерий // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1974. - Т. 77, № 4. - С. 11-14.

83. Мчедлишвили Г.И., Мамисашвили В.А., Варазашвили М.Н. Биологическая модель для исследования реологических свойств крови вмикрососудах // Патол. физиол. и эксперим. терапия. -1985. Вып. 6. - С. 75-76.

84. Мчедлишвили Г.И., Николайшвили А.С., Антия Р.В. Исследование микроциркуляции коры головного мозга во время ишемии и в постишемическом периоде // Патологическая физиология. -1977. № I. - С. 24-28.

85. Остапченко В.И. Некоторые показатели микроциркуляторного русла головного мозга лабораторных животных // Профилактика, диагностика илечение заболеваний человека. Кемерово, 1981.- С. 70-71.

86. Петрин С.А., Толстых Д.Н., Усманов Д.Н. Влияние NO-терапии на заживление гнойных ран // Материалы научно-практ. конф. М., 2001. — С. 85 - 88.

87. Петренко А.Г. Сравнительная характеристика капиллярного русла коры височной доли большого мозга и сосцевидных тел гипоталамуса человека в возрастном аспекте // Архив анат., гистол. и эмбриол. 1986. - Т. 91, № 8. -С. 10-13.

88. Северина И.С. Растворимая гуанилатциклаза а молекулярном механизме физиологических эффектов оксида азота // Биохимия. — 1998. — Т. 63. вып. 7.-С. 939-947.

89. Семенова JI.K. О топографо-анатомичееком распределении сосудов центральных областей головного мозга человека в возрастном аспекте // Известия АПН РСФСР. 1954. - Вып. 60. - С. 25-48.

90. Солошенко JI.B. Кровеносные сосуды мягкой оболочки головного мозга человека в пренатальном периоде морфогенеза. : Автореф. дис. . канд.мед.наук. Киев, 1980. - 26 с.

91. Ткаченко Б.И. Движение крови по венам // Физиология кровообращения. Физиология сосудистой системы / Под ред. Б.И.Ткаченко. Л.: Наука, 1984. - Гл. 7. - С. 234-281.

92. Турыгин В.В. Морфология кровеносных сосудов обонятельного мозга. -Челябинск: Изд-во1974. 131 с.

93. Толстых П.И. Комбинированное воздействие оксида азота и фотодинамической терапии гнойных ран у больных сахарным диабетом // Материалы научно-практ. конф. -М., 200г. С. 107 - 108.

94. Турыгин В.В. Некоторые аспекты структурной организации гемомикроциркуляторного русла мягкой оболочки полушарий большого мозга человека // Морфология сосудистой системы в норме и эксперименте. — Челябинск: Издательство 1985. С. 4-18.

95. Удовиченко В.И., Штыхно Ю.М. Микроциркуляция и напряжение кислорода в коре головного мозга крыс при геморрагическом шоке // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1982. - Т. 93, № 4. - С. 8-9.

96. Чирикова Е.Г. Применение экзогенного оксида азота в комплексном лечении трофических язв сосудистой этиологии // Материалы научно-практ. конф.-М., 2001. С. 93-98.

97. Чернух A.M. Биомикроскопия микроциркуляторного русла в эксперименте возможности, ограничения, перспективы // Вестник АМН СССР. - 1982.-№7.-С. 3-10.

98. Чернух A.M. и др. Микроциркуляция /А.М.Чернух, П.Н.Александров, О.В.Алексеев. М.: Медицина, 1975. - 472 с.

99. Черток В.М. Возрастные изменения капилляров головного мозга человека (гистохимическое исследование) // Архив анат., гистол. и эмбриол. 1985. - Т. 88. - № 2. - С. 28-35.

100. Черток В.М., Пиголкин Ю.И., Мотавкин П.А. Холинэргическая и адренэргическая иннервация внутримозговых артерий человека в онтогенезе // Архив анат., гистол. и эмбриол. 1983. -Т. 84, № 2. - С. 22-29.

101. Чеснокова Н.Б. Влияние оксида азота в газовом потоке на заживление ран роговицы глаза в эксперименте // Материалы научно-практ. конф. М., -С. 124-126.

102. Шехтер А.Б. Применение экзогенного оксида азота в медицине: медико-биологические основы, клинико-морфологические аспекты, механизмы, проблемы и перспективы // Материалы научно-практ. конф. -М.,- С. 27-35.

103. Щелкунов С.И. О закономерностях развития кровеносных сосудов в онтогенезе // Всесоюзная научная конференция по возрастной морфологии. Тез.докл., ч. I. Самарканд, 1971. - С. I70-I7I.

104. Baez S. Microcirculation // Ann. Rev. Physiol. 1977. - Vol. 39. - P. 391415.

105. Bar T. Morphometric evaluation of capillaries in different laminae of rat cerebral cortex by automatic image analysis: changes during development and aging // Adv. Neirol. 1978. - Vol. 20. - P. 1-9.

106. Bar T. The vascular system of the cerebral cortex // Adv. in Anatomy. Embriology and cell biology. 1980. - Vol. 59. P. 63.

107. Beckman J.S., Chen J. Oxidative chemistry of peroxynitrite// Methods Enzymol. 1994, - Vol. 233. - P. 229-240.

108. Bonner R., Nossal R. Model for laser Doppler measurements of blood flow in tissue. //Appl.Optics, 1981.-Vol.20, No.l2.-p.2097-2107.

109. Burke L., Rodin R.A. , CerulloL.J., Brown J.T. Thermal effects of the Nd: VAQ and carbon dioxide lasers on the central nervous system // Lasers Surg, and Med. 1985. - Vol. 5, No 1 . - P. 67-71.

110. Bollinger A., Hoffmann U., Seifert H. Flux motion in peripheral ishemia.//Vasomotion and flow modulation in the microcirculation.-Basel, Karger, 1989.-p.87-92.

111. Bollinger A., Yanar A., Hoffmann U., Franzeck U. Is high-frequency flux motion due to respiration or to vasomotion activity .//Vasomotion and flow motion.-Prog. Appl.Microcircul.-Basel, Karger.-1993.-v.20.-p.52-58.

112. Bongard 0., Fargell B. Variations in laser Doppler flux and flow motion pattern in the dorsal skin of the human foot.// Microvasc.Res.-1990.-v.39,-p.212-222.

113. Calderhead R.C., Low-energy laser therapy: controversies and new research findings // Laser Surg. Med. 1988.-VoL9.-p. 1-5.

114. Delmos L., Delmos A. Voies et centers nerveux. Introd, anaomophysiologique ала neurologie. -2 fed. Mosson, Paris, 1948.

115. Fargell B. Problems using laser Doppler on the skin in clinical practice.//Laser Doppler.-London, Los Angeles, Nicosia.-Med-Orion publish. Co., 1994, p. 49-54.

116. Furchgott R.W. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine // Nature. 1980. - Vol. 228. - P. 550565.

117. Harnarine-Singh D., Hyde J.B. Post-natal growth of the arterial net in the human cerebral pia mater // Nature. -1970. Vol. 225,.No 3. - P. 86-87.

118. Hoffman U., Yanar A., Franzeck U., Edwards I., Bollinger A. The frequency histogram new method for the evaluation of laser Doppler flux motion. Microvasc. Res., 1990, v.40, p.293-301.

119. Holloway G., Watkins D. Laser Doppler measurement of cutaneous blood flow.//J.Invest.Derm.-1977.-vol.69.,p.3 06-3 09.

120. Laserthes G. Vescularisation et circulation cerebral Paris, 1961.

121. Lassen N.A. Measurement of cerebral blood flow and metabolism in man // Clin. Sci. 1982. - Vol. 62. - P. 567-572.

122. Lemmingson W. Hemodynamic changes following the photocoagu-lation of retinal vien branches in the cat // VIII Conference on microcirculation. Abstracts,de Touguet, 1976. P. 4.

123. Palmer R.M.G. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor //Nature. 1987/ - Vol. 327. -Р/ 351-366.

124. Nelson E., Rennels M. Neuromuscular contacts in intracrani-al arteries of the cat // Sience. 1970. - Vol. 167, No 6.- P. 302-305.

125. Nilsson G., Tenland Т., Oberg P. Evaluation of a laser Doppler flowmeter for measurement of tissue blood flow./JIEEE Trans. Bio- Med. Eng.-1980.- Vol.27.-p.597-604.

126. Oshiro Т., Calderhead R. Low level laser therapy: a practical introduction.-Chichester, New York, John Willy and Sons, 1988.-125 p.

127. Teller R., Martens T. Experimental retinal vascular lesions produced by the laser // Invest. Ophtalmol. 1966. -Vol. 5, No 3. - P. 324-325.

128. Tenland Т., Salerud E., Nilsson G., Oberg P. Spatial and temporal variations in human skin blood flow.//J.Microcircul. Clin. A.Exp., 1983, v.2, p.81-90.

129. Yoshida Y., Ikuta F. Three-dimensional architecture of cerebralmicrovessels with a scanning electron microscope: a cerebrovascular casting method for fetal and adult rats // J.Cereb. Blood Flow and Metab. 1984. - Vol. 4, No 2. -P. 290-296.

130. Yoon., Ling Wong S., Ya Chan. Stimulating effect of the low dose laser -A new hypothesis//Acta Anat.-1987.-Vol. 112.-p. 131-136.

131. Wanger E.M., Traystman R.J. Cerebrovascular transmural pressure and autoregulation // Ann. Biomed. Eng. 1985. • Vol. 13. - No 3-4. - P. 311-320.

132. Zweifach B.W. Functional behavior of the microcirculation. -Springfield,1.linois, 1961.- 149 P.