Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности развития эпилептического статуса и способов его купирования у крыс разного возраста на литий-пилокарпиновой модели

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности развития эпилептического статуса и способов его купирования у крыс разного возраста на литий-пилокарпиновой модели"

На правах рукописи

¿Щг/'

РЕДКОЗУБОВА Ольга Михайловна

ОСОБЕННОСТИ РАЗВИТИЯ ЭПИЛЕПТИЧЕСКОГО СТАТУСА И СПОСОБОВ ЕГО КУПИРОВАНИЯ У КРЫС РАЗНОГО ВОЗРАСТА НА ЛИТИЙ-ПИЛОКАРПИНОВОЙ МОДЕЛИ

03 00 13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

003 1ТТ2 11

Москва - 2007

003177211

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных биологического факультета Московского государственного университета им М В Ломоносова (заведующий кафедрой - профессор А А Каменский)

Научные руководители

доктор биологических наук, профессор

|Чепурнов Сергей Александрович)

кандидат биологических наук, доцент Чепурнова Нина Евгеньевна

Официальные оппоненты

доктор биологических наук, профессор

института психологии им Л С Выготского Российского Государственного Гуманитарного Университета,

Титов Сергей Алексеевич

кандидат биологических наук, доцент психологического факультета Государственного университета -Высшей школы экономики, Лихачев Юрий Валентинович

Ведущая организация

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН

ученого совета 5!Я?/ ______>гического факультета МГУ им М В Ломоносова по

адресу 119992, Москва, Ленинские горы, д 1, корп 12, МГУ, биологический факультет, аудитория М-1

Защита состоится

в 15 часов 30 минут на заседании диссертационного

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ

Автореферат разослан у/¿¿¿хг<?/>-2 ¿/¿ХЖ

Ученый секретарь

диссертационного совета, доктор биологических наук

Б А Умарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. По имеющимся данным, 2-4% всего населения страдают эпилепсией Наиболее драматичным состоянием в эпилептологии является эпилептический статус

Эпилептический статус - состояние, при котором эпилептические припадки столь часты и продолжительны, что формируется стабильно и качественно иное эпилептическое состояние При эпистатусе каждый последующий припадок возникает раньше, чем больной полностью вышел из предыдущего приступа, т е у него остаются выраженные нарушения сознания, гемодинамики, дыхания, гомеостаза [Карлов, 1990] Эпилептический статус - это состояние, требующее немедленной рациональной терапии, направленной на восстановление и стабилизацию функций организма [Vming, Freeman, 1985] Несмотря на современный арсенал антиэпилептических препаратов (АЭП), 10-15% больных эпилепсией являются медикаментозно резистентными, судорожный эпилептический статус нередко возникает при острых поражениях (черепно-мозговая травма) и заболеваниях головного мозга (инсульт, нейроинфекции, опухоли и др ), сильно отягощая прогноз, наконец, как указывают S Knake и соавт [1999], существующие препараты первой линии контролируют эпилептический статус только у 20-80% больных Несмотря на современные достижения в лечении эпилептического статуса, имеют место рефрактерные случаи, не поддающиеся адекватной терапии Кроме того, современные препараты, применяющиеся для купирования эпилептического статуса, обладают побочными эффектами, такими как седативный, угнетение кардиоваскулярной и респираторной деятельности [Карлов, 2001] Поэтому целесообразно продолжение активного поиска новых способов лечения, новых антиэпилептических препаратов

Одной из таких попыток является разработка препарата сакрицин на основе алициклических карбоновых кислот [Саакян, 1996, Асанова с соавт, 1995, Chepurnov et al ,1998] Препарат обладает малой токсичностью и эффективен против аудиогенных судорог у крыс линии КМ, увеличивает порог ПТЗ-индуцированных судорог [Могими, 1997] и, как недавно показано, подавляет пик-волновую активность на Со2+ модели эпилепсии [Гончаров с соавт , 2000] Он оказывает свое действие через холинергическую систему мозга, участие которой в эпилептогенезе человека исследовано недостаточно [Сергиенко с соавт, 1979, Laird et al, 1986] Потенциальные возможности препарата до конца не раскрыты

Актуальной представляется и оценка центральных функций регуляторных нейропептидов как агентов, потенциально участвующих в контроле судорожной активности мозга Тиролиберин [Чепурнов, 2002] нашел применение в неврологии, в терапии эписиндромов, клинике детской эпилепсии Лабораторные и клинические исследования показали особое нейроанатомическое распределение и нейрохимическую роль для тиролиберина в модуляции судорожных приступов [Kubek, Garg, 2002, Crespi et al, 1986, Kerwin, Pycock, 1979, Yarbrough, 1976]

В настоящее время паральдегид используется в значительной степени для немедленного вмешательства при лечении эпилепсии Паральдегид подавляет судороги и у взрослых, и у детей [Shorvon , 1994] Введение паральдегида не предотвращает функционального ухудшения и развития эпилепсии в более позднем возрасте [Kubova , 2000, Kubova, 2004]

В настоящее время активно развививается поиск митопротекторов как потенциальных нейропротекторов, поиск препаратов и веществ, направленных на уменьшение последствий окислительного стресса, нарушений на биохимическом уровне и гибели нейронов вследствие эпилептического статуса Появляется все больше данных, свидетельствующих о необратимых изменениях в структуре митохондриальных ферментов вследствие продолжительного эпилептического статуса (ХяЬЬв , 2006], что, в свою очередь, ведет к гибели нейронов

Цели и задачи исследования. Целью работы было исследование формирования эпилептического статуса развивающегося и взрослого мозга беспородных белых крыс и крыс линии Вистар на экспериментальной литий-пилокарпиновой модели и способов его торможения

В связи с поставленной целью решались следующие конкретные задачи

1 Определить ЭЭГ-характеристики и поведенческие особенности развития и протекания эпилептического статуса у крысят в возрасте 12 и 25 дней и взрослых крыс в возрасте 90 дней

2 Оценить эффективность и дозо-зависимость действия нового отечественного противосудорожного препарата - сакрицина на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса у белых беспородных крыс

3 Определить особенности поведения (по тесту «приподнятый крестообразный лабиринт») белых беспородных крыс, перенесших эпистатус и возможность его изменения с помощью противосудорожной терапии сакрицином

4 Определить дозо-зависимость эффектов нейропептида - тиролиберина на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса у крыс линии Вистар

5 Сравнить эффекты паральдегида на моторные судороги, смертность, краткосрочные и долгосрочные последствия эпилептического статуса в двух возрастных группах крыс -12-ти и 25-ти дней

6 Оценить функциональное состояние (активность дыхательной цепи, мембранный потенциал и кальциевую емкость) митохондрий, выделенных из головного мозга крыс, перенесших литий-пилокарпиновый эпилептический статус

Научная новизна и практическая значимость полученных результатов. В работе впервые выявлены возрастные особенности развития и протекания эпистатуса В связи с разной подготовленностью, зрелостью медиаторных систем у крыс разного возраста, ответные реакции эпилептизированного тем или иным методом мозга могут быть неодинаковыми при применении противоэпилептических препаратов, поэтому важно иметь представление о развитии судорожного припадка

Последствия эпилептического статуса выражаются в значительных нарушениях работы всех систем организма Длительный некупирующийся эпистатус приводит к утяжелению прогноза для больного Однако даже относительно позднее купирование может модулировать отставленные эффекты эпилептического статуса Удалось показать, что паральдегид, введенный в целях купирования судорог, дозозависимо модулирует отставленные эффекты и последствия эпилептического статуса

Эпистатус вызывает тяжелые моторные судороги, которые с помощью ультрамалых доз нейропептида тиролиберин купировать не удалось Но кратковременное торможение, вызываемое тиролиберином, может помочь в лечении эпистатуса при сочетании с другими противосудорожными препаратами

Известно, что все противоэпилептические препараты участвуют в нейромедиаторных процессах и модулируют таким образом работу мозга Одной из целей данной работы было - изучить возможное действие нового противоэпилептического средства - сакрицина на литий-пилокарпиновой модели Было выявлено купирующее действие сакрицина, выражающееся в увеличении длительности периодов интериктального торможения Сакрицин в больших дозах вызывал не только противосудорожное, но и миорелаксантное действие Объединение миорелаксантных и противосудорожных свойств сакрицина может оказаться важным показателем при терапии судорожных состояний

Впервые была показана возможность купировать эпистатус при помощи гиперкапнии

Изменение энергетических процессов в митохондриях нейронов является одной из причин инициации и самоподдержания эпилептического статуса В настоящее время активно исследуется роль митохондрий в развитии нейродегенерации в результате эпилептического статуса Были показаны процессы активации Са-зависимой деполяризации митохондрий, увеличение митохондриальной проницаемости после длительных судорог

Понимание механизмов торможения эпилептического статуса, полученных на модели, может быть применено в клинике височной эпилепсии, особенно в отношении нейрохимических механизмов купирования эпилептических приступов

Положения, выносимые на защиту.

1 Особенности развития и протекания судорожного припадка, его последствия у крыс зависят от возраста и уровня развития медиаторных и адаптивных систем головного мозга

2 Сакрицин (соль полициклической поликарбоновой кислоты) оказывает противосудорожное и миорелаксантное действие на крыс в состоянии эпистатуса Паральдегид оказывает модулирующее воздействие на развивающийся мозг

3 Тиролиберин в ультрамалых дозах значительно понижает тяжесть моторного судорожного припадка

4 Во время эпилептического статуса может происходить активация Са-зависимой деполяризации, увеличение митохондриальной проницаемости

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на Международной Студенческой Конференции по фундаментальным наукам «Ломоносов-2000» в Москве, XVIII Съезде физиологического Общества им И П Павлова (2001) в Казани, Международном Конгрессе по нейрогипофизарным гормонам в Бордо, Франция (2001), XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» в Москве (2004), VI Европейском Конгрессе по эпилептологии в Вене, Австрия (2004), XVIII Конференции Польской Эпилептической Ассоциации по эпилепсии в Варшаве, Польша (2004), 9 Междисциплинарная Конференция «Стресс и поведение» в Санкт-Петербурге (2005), 15-ом Съезде Европейского Нейропептидного Клуба в Риге, Латвия (2005), 26-ом Международном Конгрессе по эпилепсии в Париже, Франция (2005), X Научной Конференции молодых ученых в Москве (2006), 9-ом Международном Симпозиуме по гинзенозидам в Теджоне, Корея (2006), XX Съезде Физиологического общества им И П Павлова в Москве (2007)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 печатных работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых журналах

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы (296 ссылок, в том числе 253 - зарубежные работы) Диссертация содержит 200 страниц машинописного текста, в том числе - 39 рисунков и 6 таблиц

Работа поддержана грантом РФФИ 320-612 (2006-2008), грантом NF 6474-3 Министерства здравоохранения Чешской Республики, исследовательским проектом AVOZ 501 1922, грантом РФФИ 00-04-48809а (2000-2001), грантом РФФИ 02-04-48449а (2002-2003)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объект исследования. Работа выполнена на 53 крысах-самцах линии Вистар возраста 3-4 месяцев, 78 крысятах линии Вистар возраста 12 дней, 77 крысятах линии Вистар возраста 25 дней и 115 беспородных белых крысах-самцах возраста 3-4 месяца Крысы содержались в виварии в стандартных условиях Все эксперименты проводили согласно «Правилам с использованием экспериментальных животных» (приказ Минвуза от 13 11 84 г №724)

Используемые препараты. Лития хлорид (LiCl, фирмы Acrus) вводили в концентрации 1,5 мМ в объеме 2 мл стерильного физиологического раствора на кг веса за сутки до введения пилокарпина.

Пилокарпина гидрохлорид (Pilocarpmum hydrohlonde, фирмы Acrus) вводили в дозе 40 мг/кг в объеме 2 мл стерильного физиологического раствора

Сакрицин (Na+ соль поликарбоновой кислоты, ООО "Сакримед") вводили в дозах 35, 70, 140, 400 мг/кг в объеме 3 мл стерильного физиологического раствора. Крысам контрольных групп вводили стерильный физиологический раствор в объеме из расчета на массу крысы

Тиролиберин вводили в концентрациях Ю'\ 10'9 и Ю"12 М в растворе стерильной дистиллированной воды в объеме 20 мкл

Для купирования судорог использовали паральдегид (параацетальдегид, тример ацетальдегида, Paraldehyde, фирмы Acrus) в концентрации 0,6 мл/кг 10%-го раствора.

Для изучения действия краткосрочных и отставленных эффектов паральдегида использовали 2 различные дозы 10%-го раствора 0,07 и 0,3 мл/кг у 12-тидневных крысят и 0,3 и 0,6 мл/кг у 25-дневных крысят

Для изучения влияния СОг на моторные судороги, инициированные литий-пилокарпином, применяли ингаляционный способ с использованием эксикатора

В качестве наркоза использовали кетамин (Pharmaceuticals, Cambridge) в дозе 100 мг/кг, ксилазин (Pharmaceuticals, Cambridge) - в дозе 20 мг/кг, эфир

Литий-пилокарпиновая модель эпилептического статуса. Взрослых животных оперировали за 7 дней до введения хемоконвульсанта пилокарпина (использовали крыс линии Вистар, п=9) для регистрации ЭЭГ Вживляли электроды в лобную кору головного мозга и гиппокамп по общепринятой методике в стандартном стереотаксическом приборе [Буреш и др, 1991] с использованием кетамина с ксилазином или эфира в качестве наркоза Использовали монополярные электроды из серебряных проволочек с лаковой изоляцией диаметром около 250 мкм и с расстоянием между кончиками 0 5 мм Их фиксировали к кости черепа цемент-фосфатом «Dyracryl» Через 7 дней после операции у взрослых крыс регистрировали ЭЭГ с помощью многоканальной усилительной системы с

компьютерным анализом ЭЭГ и видеомониторингом (Каминский, 2000) Все опыты проводили в одно и то же время суток

Спустя 1 неделю взрослым крысам вводили 2мл 1лС1 в дозе 127 мг/кг внутрибрюшинно Спустя 24 ч после инъекции 1дС), крыс подсоединяли к переходному устройству, записывали фоновую ЭЭГ в течение 10-15 мин, затем вводили пилокарпин, отмечали время начала эпистатуса Эпистатус наблюдали в течение 2 ч, после чего купировали судорожную активность паральдегидом в дозе 0,6 мл/кг (схема 1) После проделанного эксперимента крыс наблюдали в течение 3 дней

Операция по вживлению гиппокамлапькых и кортикальных электродов

7 дней |

127 мг/кг внутрибрюшинно

24 часа |

Р|1осафяпе 40 мг/кг ЭЭГ видеомоииторинг

Схема 1

Протокол эксперимента с регистрацией ЭЭГ взрослых крыс и использованием литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса.

2 часа

РагаЮеЬуйе 0 6 мл/кг

Для оценки тяжести судорог пользовались шкалой Мареша

Для регистрации ЭЭГ крысятам (линии Вистар) в возрасте 12 и 25 дней за сутки до операции вводили 1лС1 в дозе 127 мг/кг в объеме 2мл внутрибрюшинно На следующий день под эфирным наркозом электроды вживляли в лобную кору и гиппокамп Через 3 ч записывали фоновую ЭЭГ в течение 10-15 мин, затем вводили пилокарпин в дозе 40 мг/кг в объеме 2 мл Отмечали время начала эпистатуса и регистрировали судорожную активность в течение 2 ч, после чего судороги купировали паральдегидом в дозе 0,3 мл/кг Эксперименты с исследованием возможности купирования эпистатуса сакрицином проводили в двух вариантах В первом спустя 1 неделю после операции инициировали эпистатус по стандартной методике. Регистрировали фоновую ЭЭГ в течение 10-15 мин до введения пилокарпина, отмечали время начала эпистатуса После 1 ч судорог крысам опытной группы вводили тестируемый препарат в дозе 400 мг/кг, через 60 мин после этого еще раз вводили сакрицин в дозе 400 мг/кг и через 60 мин делали третью инъекцию сакрицина в дозе 400 мг/кг После завершения эксперимента крысам контрольной группы внутрибрюшинно вводили паральдегид для купирования судорог в дозе 0,6 мл/кг После проделанного эксперимента крыс наблюдали в течение 3 дней

Во втором варианте эпистатус провоцировали по стандартной методике За 40 мин до введения хемоконвульсанта, препарат сакрицина вводили в дозах 35, 70, 140, 400 мг/кг в объеме 3 мл физраствора В ряде опытов второе введение сакрицина в дозе 400 мг/кг проводили одновременно с введением пилокарпина (40 мг/кг в объеме 2 мл)

Для фармакоанализа нейропептида тиролиберина эпистатус инициировали стандартным методом у взрослых крыс линии Вистар За 15 мин до введения хемоконвульсанта крысам вводили интраназально тиролиберин в концентрациях 103, 10"9 и 10"12 М в растворе дистиллированной воды После 1-го введения тиролиберина, его

вводили повторно одновременно с введением пилокарпина Спустя 2 ч судороги купировали введением паральдегида в дозе 0,6 мл/кг

Для изучения действия паральдегида на краткосрочные и отставленные эффекты эпилептического статуса, использовали 2 различные дозы 0,07 и 0,3 мл/кг у 12-тидневных крысят и 0,3 и 0,6 мл/кг у 25-дневных крысят Эпистатус был инициирован стандартным способом у самцов линии Вистар на 12-ый день постнатального развития или 25-ый день.

Исследование поведения. Крестообразный приподнятый лабиринт (КПП) За 5 мин тестирования оценивали 1) латентный период, 2) число и продолжительность выходов (всеми четырьмя лапами) на открытые лучи, 3) число "выглядываний" (выход двумя лапами), 4) число выходов на закрытые лучи, 5) суммарное время пребывания крысы на открытых лучах, 6) число стоек с опорой на стенки закрытых лучей, 7) время замираний, 8) число умываний, 9) суммарное время умываний, 10) количество дефекаций Удерживание на бруске, рота-род, водный лабиринт Морриса. Исследовано поведение крысят 2-х возрастных групп, перенесших эпистатус на 12 и 25 дни постнатального развития Тесты выполнялись на 3, 6,13,26, и на 56 дни после эпистатуса Тестирование в водном лабиринте проводили спустя 3 месяца после эпистатуса. Каждая крыса получала одну учебную сессию (8 попыток) в день в течение 5 дней последовательно

Анализ ЭЭГ. Для получения спектрального анализа ЭЭГ использовали пакет программ Mon-EEG-a и Mon-EEG-r (Каминский, 2000) Для отдельных участков зарегистрированной ЭЭГ вычисляли мощность разрядов

Выделение митохондрий из головного мозга крыс проводили по стандартной методике дифференциального центрифугирования с использованием 0,02% дигитонина для высвобождения митохондрий из синантосом [Rosental et al, 1987]

Определение белка в препарате митохондрий с помощью микробиуретового метода. Количественное определение белка проводили по стандартной методике с помощью микробиуретового метода [Gornall, 1949]

Регистрация активности дыхания митохондрий проводилась полярографически по поглощению кислорода суспензией митохондрий (0,1мг белка в ячейке) с использованием оксиграфа Oroboros (Австрия) при 30°С

Измерение мембранного потенциала митохондрий проводилось спектрофотометрически с использованием потенциал-зависимого индикатора сафранина А в кювете спектрофотометра Beckman DU 640 при 25°С и постоянном перемешивании [Бачурин и др, 2007] Анализ полученных данных проводили с помощью графика зависимости разности изменения светопоглощения при 524 и 554 нМ от времени

Измерение кальциевой емкости митохондрий проводили в КС1 буфере, содержащем глутамат и малат (5 мМ) как субстраты дыхания и 200 мкМ АДФ, с использованием металлохромного индикатора арсеназо III [Scarpa et al, 1978] и дробным добавлением к суспензии митохондрий аликвот кальция (6,25 мкМ в минимальном объеме) каждые две минуты в течении 20-30 минут

Статистическая обработка результатов. Статистический анализ полученных результатов во всех сериях проводили по U-критерию Манна-Уитни, а также по t-критерию Стъюдента Данные при исследовании поведения в водном лабиринте оценивали с использованием точного метода Фишера, различия внутри группы оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA)

Данные представлены в форме среднее ± ст ошибка (means ± SEM) Уровень значимости во всех опытах принимали при р<0 05

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Развитие моторных судорог у крыс разного возраста в условиях литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса.

В первой части работы исследовали особенности развития эпистатуса у крыс разного возраста у крысят линии Вистар в возрасте 12 дней (п=45) (что соответствует младенческому возрасту человека), у 25-дневных крысят, когда созревают почти все медиаторные системы и у крыс в возрасте 90 дней (п=14) (что соответствует взрослому состоянию) У взрослых крыс через 1-2 мин после введения пилокарпина наблюдалось сильное слюно- и слезотечение, «жевание», беспокойство животное бегало по клетке, периодически становилось на задние лапки Еще через 3-7 мин наблюдался постоянно повторяющийся «рефлекс» расчесывания задними лапками спины Наблюдалась усиленная дефекация и уринации Развитие эпистатуса начинается с мелкой дрожи всего тела, «кивания» головой, что соответствует судорожной активности 2 балла по шкале Мареша. Затем наступает быстрый переход к третьей стадии, которая развивается в судорожную активность, оцениваемую по шкале Мареша 4 балла Эта стадия может продолжаться от нескольких секунд до нескольких минут

У 78,3% животных судороги четвертой стадии могут сменяться более слабыми судорожными пароксизмами третьей стадии Позднее у крыс могут возобновляются сильные судороги Такая периодичность судорожной активности может совершаться в виде несколько циклов У 24% животных после четвертой стадии может развиваться пятая, которая характеризуется тяжелыми тонико-клоническими судорогами с потерей позы Нередко наблюдались случаи так называемого «встряхивания мокрой собаки»

У 12-тидневных крысят судороги проявлялись, главным образом, в подергиваниях лицевых мышц, «жевательных» движениях, «кивании» головы, клонических судорогах передних конечностей, плавательных движениях и повышенном тонусе хвостовых мышц У крысят, по-видимому, в силу незавершённости формирования защитных стволовых тормозных механизмов часто за клонической стадией возникал тонический компонент припадка - выгибание спины У 25-тидневных крысят судороги проявлялись в виде клонический судорог передних конечностей и мышц головы Конвульсии характеризовались большей интенсивностью, нежели у 12-дневных крысят, наблюдалась 4 стадия

По мере созревания противоэпилептической защиты у крыс линии Вистар, латентный период наступления эпилептического статуса увеличивался, и были получены следующие результаты у 12-дневных крысят ЛП составил 14 6±6 мин, у 25-дневных - 24 8±12 7 мин, у 90-дневных - 31 1 ± 10 0 мин (рис 1) Достоверные различия выявлены для групп 12-ти и 25-дневных крыс (р<0,05), а также для групп 12-ти и 90-дневных крыс (р<0,001) Полученные результаты объясняются повышенной судорожной готовностью мозга вследствие незрелости медиаторных систем в 12-тидневном возрасте, а также недостаточной зрелостью противоэпилепгических защитных механизмов

¥

35 30 25

статуса, вызванного пилокарпином в дозе 40 мг/кг, по мере созревания структур головного мозга у крыс линии Вистар

Рис 1 Изменение ЛП эпилептического

1

1 20 -S 15

*-р<0,05 - отличие 12-ти и 25-дневных ¥-р<0,001 - отличие 12-ти и 90-дневных

ю

5

0

12-дневные 25-дневные 90-дневные возраст

Судорожную готовность головного мозга оценивали по количеству крыс с развившимся эпилептическим статусом Оказалось, что у 12-дневных крысят линии Вистар судорожный порог ниже, чем у 25-дневных и 90-дневных, а у 25-дневных, в свою очередь, - ниже, чем у 90-дневных В группе 12-дневных 95 4% крысят оказались восприимчивы к введению литий-пилокарпина, в группе 25-дневных - 80%, а в группе 90-дневных - 64 3% (рис 2) Для первых двух недель развития крысенка постсинаптическое действие ГАМК на ГАМКл-репептор проявляется в виде деполяризации, и только спустя 2 недели деполяризация сменяется гиперполяризацией в большинстве структур мозга, в том числе непосредственно вовлечённых в патогенез судорог - гиппокампе и миндалине По литературным данным возможным клеточным механизмом гиперполяризации является начало экспрессии мембранного К+/СГ ко-транстпортера, обеспечивающего трансмембранный градиент ионов С1- [Rivera, 99]

Способность адаптивных и защитных систем мозга противостоять эпилептическому статусу оценивали по проценту смертности крыс после двухчасового эпистатуса, купированного паральдегидом У 25-дневных крысят высок процент смертности - 16 3% У 12-дневных крысят процент летальных исходов невелик - 2 2% (рис 2) Взрослые особи эпилептический статус переносят более тяжело, чем 12-ти и 25-дневные крысята - 21 4% случаев с летальным исходом после купирования эпистатуса паральдегидом

□ статус % «смертность %

^ЛА

%

Рис 2 Проявление ЭС после введения пилокарпина (число крыс в %) в зависимости от возраста и смертность в результате 2-х часового эпистатуса у крыс линии Вистар

12-дневные 25-дневные 90-дневные

возраст дни

Эпилептический статус, перенесенный в раннем возрасте, часто ассоциируется со значительными повреждениями мозга [8а$аг, ОхЬигу, 1987], а также увеличивающимся риском развития эпилепсии и повреждением когнитивных функций [А1сагс11, СЬетое, 1970] Есть данные, что области таламуса наиболее уязвимы во время эпилептического статуса, вызванного литий-пилокарпином, что показано на 12-дневных крысятах линии Вистар [КиЬоуа е1 а1, 2001] Однако остается непонятным, почему, вызывая такие разрушения в созревающем мозге, смертность от ЭС остается низкой по сравнению со взрослыми животными, поскольку противоэпилептическая защита в раннем возрасте также остается несовершенной

У крыс линии Вистар в различных возрастных группах (12 дней, п=4, 25 дней, п=4, 90 дней, п=4) исследовали характерные особенности ЭЭГ при развитии эпилептического статуса после введения литий-пилокарпина У 12-ти и 25-дневных крысят в период 2 стадии в ЭЭГ происходило увеличение амплитуды разрядов в 2 раза в коре и в 4 раза - в гиппокампе Гиппокампальный статус мог начаться в левом гиппокампе, или в правом, или в обоих синхронно (рис 3 А,В)

В отличие от крысят, у взрослых животных вторая стадия характеризуется незначительным и непостоянным увеличением амплитуды разрядов во всех областях синхронно - и в коре, и в гиппокампе

Третья стадия, характеризующаяся как стабильное самоподдерживающееся судорожное состояние, не переходящее в четвертую стадию, на ЭЭГ отражается как постоянный, непрерывный разряд следующих друг за другом с большой частотой спайков (15-20 имп/с), характеризующихся большой амплитудой (до 550 мкВ) Характерной особенностью разряда является правильный, четкий, однообразный рисунок совершенно упорядоченных спайков

Однако у взрослых животных со зрелой системой противоэпилептической защиты нередко можно было наблюдать подавления электрографических коррелятов судорожных пароксизмов путем замещения высокоамплитудной активности низкоамплитудным ритмом, что наблюдалось в коре и гиппокампе синхронно Низкоамплитудный ритм мог продолжаться 0,5-1,5сек с интервалами от 10-14 сек в течение 2 ч записи Можно проследить динамику судорожных приступов, которые развиваются сначала в

Рис ЗА

ЭЭГ у 12-дневных крысят Начало эпистатуса в обоих гиппокампах

Рис ЗВ

ЭЭГ у 25-дневных крысят Начало эпистатуса в правом гиппокампе

гиппокампе, а затем в коре У 12-ти дневных крысят первоначально судорожная активность развивается в гиппокампе и только через 10-20 сек она появляется в коре У 25-ти дневных крысят эпилептическая активность в коре появляется позже на 5-6 мин

У грызунов первые 2 недели жизни являются критическими для окончательного созревания многих нейромедиаторных систем ГАМК-ергической, АВП-ергической, глутаматергической и др Следовательно, в разные сроки после рождения по-разному складываются взаимоотношения между теми медиаторными системами, которые обеспечивают или повышение судорожной готовности мозга или, напротив, антиэпилептические защитные механизмы В связи с разной подготовленностью, зрелостью медиаторных систем у крыс разного возраста, ответные реакции эпилептизированного тем или иным методом мозга могут быть неодинаковыми при применении противоэпилептических средств Для описания полученных результатов, касающихся эффектов исследуемых препаратов на судорожную активность, важно иметь представление представление о развитии судорожного припадка

2. Эффекты паральдегида на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса у молодых крыс.

Последствия эпилептического статуса определяются большим количеством различных факторов Среди них те факторы, которые лежат в этиологии заболевания, возраст, продолжительность эпилептического статуса, являются самыми важными Не менее важны системные осложнения - гипоксия, нарушения в сердечно-сосудистой системе

В настоящее время паральдегид используется в значительной степени для немедленного вмешательства при лечении эпилепсии Паральдегид подавляет судороги и у взрослых, и у детей [БЬогуоп, 1994] Даже относительно позднее купирование судорог может модулировать отставленные эффекты эпилептического статуса Для изучения этой возможности были проведены следующие эксперименты сравнили эффекты двух различных доз паральдегида на моторные судороги, смертность, краткосрочные и долгосрочные эффекты эпилептического статуса, на поведенческие реакции в двух возрастных группах крыс - 12-ти и 25-ти дней Обе дозы паральдегида, используемые в данных экспериментах, ранее были тестированы на животных, и было выявлено, что обе они подавляют судорожные пароксизмы

Эпилептический статус был инициирован у белых самцов линии Вистар на 12-ый день постнатального развития (п=29) или 25-ый день (п=30) Использовались 2 различные дозы 0,07 и 0,3 мл/кг у 12-дневных крысят и 0,3 и 0,6 мл/кг у 25-дневных крысят Дозы были выбраны согласно эффектам, оказываемым паральдегидом на моторную активность крыс Паральдегид вводили однократно, спустя 2 часа после начала эпилептического статуса Масса тела измерялась ежедневно в течение 1 недели после эпилептического статуса, и после того, на 13, 26, и спустя 56 дней после эпилептического статуса Вычисляли относительную массу тела [вес тела во время измерения/масса тела на 12-ый или 25 день постнатального развития х 100 %]

Влияние введения паральдегида на развитие литий-пилокарпинового эпилептического статуса, смертность и массу тела у 12-ти и 25-тидневных крысят

У 100% крысят развивался эпилептический статус, который длился до введения паральдегида 2 ч Паральдегид в обеих тестируемых дозах - 0,07 и 0,3 мл/кг у 12-тидневных крысят заметно уменьшал тяжесть судорожных припадков Не было обнаружено различий в подавлении судорог 2-мя различными дозами- 0,07 и 0,3 мл/кг

12

Также не было выявлен о отличий в смертности ] 2-тидневных животных Относительная масса тела крысят, эпистатус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,3 мл/кг, была значительно ниже чем у крысят контрольной группы, на протяжении 7 дней после статуса (р<0,001). Относительная масса тела у крысят, эпистатус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,07 мл/кг, была значительно ниже чем у крысят контрольной группы, на протяжении 13 дней после эпилептического статуса (р<0,05) (рис. 4).

У 25-гидневных крысят после введения паральдегида, судороги быстро купировались. В течение последующих 24 часов после купирования эпистатуса наблюдались единичные клонические судороги (3-4 стадия) у крысят, эпистатус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,3 мл/кг. У крысят, эпистатус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,6 мл/кг, наблюдались двигательные автоматизмы - «жевание», «встряхивание мокрой собаки».

600 -(

► — контроль

К-парольдегид 0,3 мл/кг г— гюральдегидО.б м«/кг

25-дневные крысята

7 13 26 56

дни после эпистатуса

1200

5 1000

800

600

400

200

— 0 — контроль --0--параяьдсгид0.07 мл/«г

- А паральдегид 0,3 /М/иг

12-дневные крысята

1 2 3 4 5 6 7 13 26 56

дни после эпистатуса

Рис. 4. Изменение массы тела 12-ти и 25-дневных крысят после купирования эпистатуса различными дозами паральдегида. Вес тела в 12 и 25 дней взят за 100%. р<0,05:

о - низкая доза по сравнению с контролем + - высокая доза по сравнению с контролем х - низкая доза по сравнению с высокой.

Смертность крысят была одинакова в обеих группах. Сравнение относительных масс тела (рис. 4) показало, что крысята, эпистатус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,6 мл/кг, достигли величин относительных масс тела контрольной группы уже спустя 3 дня после эпилептического статуса. В то же время у крысят, эпистатус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,3 мл/кг, относительная масса тела была значительно ниже, чем у крысят контрольной группы на протяжении недели после эпистатуса (р<0,05).

Влияние паральдегида на отставленные эффекты литий-пилокарпинового эпилептического статуса у 12-тидневных и 25-тидневных крысят.

В нашу задачу входило исследование влияния паральдегида, который купирует эпистатус, на отставленные проявления нарушений когнитивных функций и моторной активности у крысят разного возраста. На крысятах в возрасте 12 дней провели тестирование на двигательную активность. Исследовали способность крысят ухватываться за брусок задними лапами и время, проведенное на бруске. Не было выявлено отличий по этим показателям у крыс опытной группы, которым вводили паральдегид в 2-х дозах - 0,07 мл/кг и 0,3 мл/кг во время эпистатуса, и крысами контрольной групп в любой из дней тестирования после эпилептического статуса. В тесте рота-род, спустя 56 дней после эпилептического статуса, крысята, перенесшие статус, находились на стержне более короткое время (90±21 сек при введении паральдегида в дозе 0,07 мл/кг и 86±13 сек при введении паральдегида в дозе 0,3 мл/кг) по сравнению с крысами контрольной группы (154±11 сек, р=0,02). Различий между крысятами, перенесшими эпистатус, купированный паральдегидом в дозах - 0,3 и 0,07 мл/кг, обнаружено не было.

13 26 56

□ паральдегид 0.07 мл/н г ■ паральдегид 0.3 мл/кг

12-днеоные крысята

дни после эпистатуса

□ контроль

О паральдегид 0,3 мл/кг ■ паральдегид 0,6 ил/кг

25-днезиые крысята

дни после эпистатуса

Рис. 5. Изменение времени нахождения на вращающемся стержне 12-ти и 25-дневных крысят после эпистатуса, купированного различньми дозами паральдегида.

р<0,05: о - низкая доза по сравнению с контролем + - высокая доза по сравнению с контролем

У 25-тидневных крысят спустя 3 дня после эпистатуса, 5 из 9 животных (56%, р=0,029), эпистатус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,3 мл/кг, не могли быть тестированы на двигательную активность в результате сохранившейся повышенной возбудимости. Все контрольные животные и крысы, получавшие паральдегид в дозе 0,6 мл/кг были способны к тестированию. За этим исключением, не было обнаружено никаких различий в латентных периодах нахождения на брусе или стержне в рота-род-

14

тесте между крысами контрольной группы и крысами, перенесших эпистатус (рис.5). В тесте рота-род время, проведенное на стержне, было меньше у крыс обеих групп, перенесших эпистатус в 12-дневном возрасте, на 26 и 56 дни тестирования после статуса, по сравнению с контролем. Это связано скорее с повышением тревожности, изменением эмоционального статуса [КиЬоуа, 2004], чем с прямыми нарушениями в двигательной активности, поскольку не наблюдалось никаких отклонений в других тестах на двигательную активность.

Нарушения когнитивной функции выявили у крысят при исследовании поведения в водном лабиринте Морриса (рис 6).

I

□ контроль

О пара/1 ьдегид

0,07 мл/кг ■ парзльдегид 0,3 мл/кг

12-тидиееные крысята

I

III

О парэльдегидО.З

мл/кг ■ парзльдегид 0,6 мл/кг

25-тидневные крысята

Рис. 6. Прохождение водного лабиринта Морриса 12-ти и 25-дневными крысятами, спустя 3 месяца после эпистатуса, купированного различными дозами паральдегида. р<0,05: о - низкая доза по сравнению с контролем + - высокая доза по сравнению с контролем х - низкая доза по сравнению с высокой.

* - отличие между первым и последующими тестами в каждой группе.

Эксперимент проводили спустя 3 месяца после эпилептического статуса. У 12-тидневных крысят, эпистатус которых был купирован более низкой дозой паральдегида 0,07 мл /кг, время поиска платформы уменьшилось только на 3-ий день тестирования. Крысята, статус которых был купирован более высокой дозой паральдегида, ориентировались в лабиринте так же хорошо, как и крысята контрольной группы и время пребывания в лабиринте снизилось на 2-ой день тестирования (по сравнению с первым) (р

<0,01) В первый день тестирования число неудачных попыток был выше у крыс, перенесших эпистатус, купированный паральдегидом в обеих дозах (4,0±0,6 для крыс с введением паральдегида в дозе 0,07 мл/кг и 3,8±0,5 для крыс с введением паральдегида в дозе 0,3 мл/кг), по сравнению с крысами контрольной группы (2,1±0,1, р=0,003) Животные, перенесшие эпистатус в 25-тидневном возрасте, купированный любой дозой паральдегида, нуждались в более длительном времени нахождения платформы по сравнению с крысами контрольной группы (р <0,01) Начиная с 4-го дня тестирования, крысы, перенесшие эпистатус, купированный низкой дозой паральдегида, проводили в лабиринте более длительное время по сравнению с животными, статус которых был купирован более высокой дозой (р <0,05)

По сравнению с первым днем тестирования время пребывания в лабиринте у контрольных животных и крыс, статус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,6 мл/кг, значительно сократилось на второй день тестирования Уменьшения времени поиска платформы в лабиринте не происходило ни в один из дней тестирования у животных, эпистатус которых был купирован паральдегидом в дозе 0,3 мл/кг В целом, животные обеих групп, перенесших эпистатус, менее удачно проходили данный тест по сравнению с крысами контрольной группы (р <0,05) У 25-дневных животных существенно ухудшается прохождение лабиринта Морриса по сравнению с 12-дневными крысятами Различия в нарушениях когнитивных функций могут быть связаны с продолжением повреждающего действия эпилептического статуса на нейроны головного мозга вследствие того, что низкие дозы паральдегида не очень эффективно купируют эпистатус, и его проявления могут наблюдаться на ЭЭГ впоследствии [1ли, 1994]

3. Ппотивосудорожные эффекты нового препарата «сакрицина» на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса

В данной серии экспериментов были использованы взрослые беспородные крысы (п=27) В первой серии экспериментов сакрицин вводили дважды - за 40 мин до введения пилокарпина и одновременно с пилокарпином в дозе 400 мг/кг (п=9) Во второй серии сакрицин вводили однократно - за 40 мин до введения пилокарпина в дозе 400 мг/кг (п=9) Двукратное введение сакрицина в дозе 400 мг/кг практически полностью снимало развитие эпистатуса Сакрицин в данной дозе оказывал сильное миорелаксантное действие Однократное введение сакрицина в дозе 400 мг/кг частично купирует развитие эпистатуса, судороги развиваются лишь у 33% крыс При этом миорелаксантные свойства сакрицина выражены слабее У крыс с развившимся эпистатусом латентный период его наступления по сравнению с контролем увеличен, хотя в меньшей степени по сравнению с двукратным введением сакрицина (62, 43 и 102 мин для опытных, 32±2 мин для контрольной группы соответственно) По остальным показателям тяжесть судорог не отличалась от контрольной группы

В третьей серии экспериментов были также использованы взрослые беспородные крысы (п=42) Сакрицин вводили дважды - за 40 мин до введения пилокарпина и одновременно с пилокарпином в дозах 35 мг/кг (п=11), 70 мг/кг (п=11), 140 мг/кг (п=9) Не наблюдалось снижения мышечного тонуса, вялость и меньшая подвижность, как после введения сакрицина в больших дозах Развитие эпистатуса шло по той же схеме, что и у крыс контрольной группы, но судороги протекали легче Существенно понижается суммарное время четвертой стадии по сравнению с контролем Количество пятых стадий не отличается у крыс контрольной и опытной групп Сакрицин в низких дозах не влияет

16

на латентный период развития эпилептического статуса, не влияет и на процент крыс, у которых развитился эпистатус Однако сакрицин в малых дозах снижает смертность крыс, перенесших 2-х часовой эпилептический статус (0% опытных по сравнению с 27,3% контрольными)

Сакрицин обладает различными механизмами действия общим противосудорожным эффектом, выражающимся в уменьшении времени реализации генерализованной активности в корково-таламических кругах [Ашмарин и др, 2003], через холинергическую систему мозга [Сергиенко с соавт, 1979, Laird et al, 1986], за счет вовлечения сакрицином бета-адренорецепторов, эффекты сакрицина объясняются также блокированием межполушарного переноса судорожной активности [Молодавкин и Воронина, 1997, 2002], что оказывает влияние на торможение эпилептических разрядов лобной коры на фоне развившегося ЭС Возможные механизмы реализации действия сакрицина могут быть связаны с бензодиазепиновым сайтом ГАМКд - рецептора, а также с гистамииергической системой [Ашмарин и др , 2003] Объединение миорелаксантных и противосудорожных свойств сакрицина может оказаться важным показателем при терапии судорожных состояний

Влияние однократного введения сакрицина в дозе 400 мг/кг за 40 минут до эпилептического статуса на тревожность крыс в тесте "приподнятый крестообразный лабиринт"

Проведено сравнение поведения трех групп беспородных крыс в ПКЛ (п=32) В одной группе исследовали интактных крыс, в другой - крыс, перенесших эпистатус и в третьей -исследовали поведение крыс, получавших при развитии эпистатуса сакрицин в дозе 400 мг/кг (однократное введение за 40 мин до введения пилокарпина) Хотя не получено достоверных отличий, наблюдается тенденция к увеличению времени затаивания и латентного периода начала движения у крыс, перенесших ЭС Это можно объяснить очень низкой активностью крыс после ЭС У крыс контрольной группы время груминга увеличено, эти крысы предпочитают оставаться на закрытых лучах в отличие от послестатусных крыс Количество падений также преобладает у крыс, перенесших ЭС Полученные данные свидетельствуют о нарушениях двигательной активности после 2-х часового ЭС Крысы, получившие сакрицин в дозе 400 мг/кг за 40 мин до введения пилокарпина, легче восстанавливались после перенесенного ЭС Это проявлялось в меньшем ЛП пребывания на ПКЛ (2±2 сек для крыс опытной группы по сравнению с 10 7±3 сек для крыс контрольной группы, р<0 05, Манна-Уитни) Установлено также, что время затаивания для крыс, получавших сакрицин, гораздо меньше, чем для крыс контрольной группы (45±18 сек и 78±27 сек соответственно, р<0 05, Манна-Уитни) По остальным параметрам достоверных отличий не наблюдалось, однако можно сделать вывод, что сакрицин может оказывать не только противосудорожное и миорелаксантное действие, но и в некотором качестве и нейропротективное действие, поскольку уровень активности у крыс опытной группы был немного выше по сравнению с контрольной группой

Влияние введения сакрицина в дозе 400 мг/кг на фоне развившегося эпилептического статуса при ЭЭГ-регистрации на литий-пилокарпиновой модели ЭС

В данной серии опытов исследовали влияние сакрицина на ЭЭГ, которую регистрировали у крыс во время развития литий-пилокарпинового эпистатуса Спустя 1 неделю после операции по вживлению электродов, инициировали эпистатус и наблюдали

его развитие в течение 1 часа. После этого вводили сакрицин в дозе 400 мг/кг 3 раза с интервалом 40 мин. Вследствие миорелаксирукяцего действия сакрицина, после первого же его введения резко снижался мышечный тонус и крысы лежали почти неподвижно. Эпилептическая активность при этом в ЭЭГ сохранялась, а моторная судорога была выражена только в виде сокращения отдельных групп мышц. После последнего введения наблюдали практически полное прекращение электроэнцефалографического выражения эпистатуса, а также прекращение моторных судорог. После каждого следующего введения сакрицина наблюдали замещение высокоамплитудной и высокочастотной эпилептической активности интериктальным торможением. По мере введения препарата с каждым разом длительность этих замещений возрастала, а амплитуда разрядов уменьшалась (рис. 7). Получили достоверные отличия по величине амплитуд спайков в разрядах в норме и в разные периоды развития эпистатуса.

ц ^^к^___——— '

____________^гхАфщ^_____.—Л

_| 0.2 тУ

Рис. 7.

А - ЭЭГ крысы после 2-ой инъекции | сакрицина в дозе 400 мг/кг: постепенное £ увеличение длительности и частоты интериктальных периодов.

В - ЭЭГ во время эпилептического статуса одной крысы (верхняя запись, кора) и ЭЭГ второй крысы после 1-ой инъекции сакрицина в дозе 400 мг/кг.

Сакрицин в дозе 400 мг/кг влияет на снижение амплитуды разрядов, инициированных ЭС, а в результате 3-х кратного введения в дозе 400 мг/кг с интервалом 40 минут полностью купирует развитие ЭС. Для того, чтобы показать, что амплитуда разрядов в ходе ЭС снижается не спонтанно, а в результате действия сакрицина, была проведена регистрация ЭЭГ у крыс контрольной группы (п=4). В течение 4 часов записи не наблюдалось снижение амплитуды и также не отмечалось длительное и частое замещение высокоамплитудной и высокочастотной ЭЭГ, характерной для ЭС, нормальной, низкоамплитудной.

На основании полученных данных можно утверждать, что эпистатус, индуцированный с помощью пилокарпина, затрагивает не только холинергическую, но и другие системы мозга, включая их в самоподдерживающийся ЭС.

4. Эффекты нейропептида тиролиберин на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса.

В данной серии экспериментов были использованы взрослые крысы линии Вистар (п=30). Проводили 3 серии опытов. Тиролиберин (ТРГ) вводили дважды - за 15 мин до введения пилокарпина и одновременно с пилокарпином интраназально в концентрациях 10"3 М (п=!0), 10"9 М (п=10), 10"'2 М (п=5) в растворе стерильной дистиллированной воды. Отмечали время начала статуса. Спустя 2 часа судороги купировали введением паральдегида объемом 0,6 мл/кг. ТРГ во всех сериях экспериментов укорачивал латентный период развития ЭС (35,3 мин для крыс контрольной группы, 21 мин для 10"3 М; 15 мин -10"9 М; 17 мин -10"12 М (р<0.05, и-критерий Манна-Уитни).

Рис.8 Динамика течения эпистатуса после двукратного интраназального введения

крысам линии Вистар тиролиберина за 15 мин до введения пилокарпина и вместе с пилокарпином * - р<0.05

Припадок под действием ТРГ начинается более резко и быстро (рис. 8). ТРГ в концентрации 10"3 М не снижает тяжесть судорог по сравнению с контролем. Например, длительность четвертых стадий после введения ТРГ была 3,6±3,18 мин, а у крыс контрольной группы - 2,3±3,4 мин, количествово 4-х стадий увеличивается (8,9±2,2 по сравнению с контролем 4,2±2,9, р<0.05), увеличичвается кол-во 5-х стадий (6,7±2,3 и 0,5±0,6 соответственно). ТРГ в концентрации 10'9 М не увеличивает суммарной длительности и количествава приступов 4 и 5 стадий по сравнению с контролем. ТРГ в концентрации 10"12 М вызывает следующий эффект: через 40 мин после его аппликации развивается торможение, а еще через 40 мин статус возобновляется. По-видимому, развивающийся эпистатус оказался настолько тяжелым в отношении моторных и электрофизиологических проявлений судорог, что с помощью тиролиберина купировать его не удалось. Полученные данные указывают на то, что кратковременное торможение, вызываемое тиролиберином, может помочь в лечении эпистатуса при сочетании с другими противосудорожными препаратами.

5. Эффекты продолжительного эпилептического статуса на митохондрии головного мозга крыс на литий-нилокарпиновой модели.

Изменение энергетических процессов в нейронах и их митохондриях является одной из причин инициации и самоподдержания эпилептического статуса [О^ЬЬэ е1 а!., 2006]. Роль митохондрий в развитии нейродегенерации в результате эпилептического статуса, в настоящее время активно исследуется. Во время судорожных припадков стремительно

-control

-10-3 М -0-10-9М -&-10-12М !

О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110120130140150160

возрастает скорость окислительного метаболизма Активация митохондриальных процессов имеет жизненно важное значение, так как внутриклеточных запасов и гликолитической продукции высокоэнергетичных фосфатов хватает только на 1-2 мин потребления fSiesjo et al, 1992] В процессе эпистатуса также важное значение имеет активация дыхания митохондрий для поддержания энергетического баланса, однако это связано с выработкой большого количества свободных радикалов, к которым митохондрии мозга достаточно чувствительны Таким образом, повреждаются другие важные для нервных клеток функции митохондрий, как, например, процесс активного накопления и связывания Са2+ Обладая способностью аккумулировать чрезвычайно высокие концентрации Са2+ (до 30 мМ), митохондрии могут играть защитную или буферную роль при различных физиологических процессах, связанных с ростом внутриклеточного кальция При определённых условиях повышение концентрации Са2+ вызывает специфический процесс появления проницаемости внутренней мембраны митохондрий (mitochondrial permeability transition) в результате открытия особых белковых пор во внутренней мембране митохондрий, представляющих собой сложный многобелковый комплекс Индукция открытия этих сложных образований приводит к запуску процесса гибели нейронов головного мозга в большинстве случаев

Эпилептический статус был инициирован у белых беспородных самцов (п=16) стандартным способом Статус длился 2 ч, после чего крыс декапитировали и выделяли митохондрии из головного мозга крыс Определяли кальциевую ёмкость митохондрий путем дробного добавления к суспензии митохондрий аликвот кальция (6,25 мкМ в минимальном объеме) каждые две минуты в течении 20-30 мин В результате у крыс с низкой тяжестью протекания эпистатуса (без 5 стадии и с малым количеством 4 стадий), никакой разницы с контролем не обнаружено У крыс с тяжелым статусом обнаружена стимуляция процесса Са2+-зависимой деполяризации, а также снижена Са2+ емкость митохондрий, что говорит об увеличении чувствительности митохондрий к индукторам запуска апоптоза, и это может объяснить повышенную гибель клеток во время судорог (рис 9)

Д- опыт

О 5 10 15

Рис 9 Изменение кальциевой емкости митохондрий,

выделенных из головного мозга крыс с большей тяжестью судорог

Кроме того, Са2+-зависимая деполяризация может приводить к разобщению окислительного фосфорилирования, накоплению свободных радикалов [Schuchmann, 1999] В присутствии АТР и ADP Са2+, поступая внутрь митохондрий, легко переходит в связанное с фосфатом соединение [Knstian, 2007], поэтому происходит активное накопление Са2+ Поскольку эпистатус сопряжен со значительными энергетическими затратами, количество АТР и ADP существенно уменьшается, соответственно снижается и Са2+ емкость митохондрий

Активность дыхания митохондрий регистрировали полярографически по поглощению кислорода суспензией митохондрий (0,1мг белка в ячейке) с использованием оксиграфа Известно, что митохондрии обеспечивают связь и координацию между функциональной необходимостью энергетических затрат клетки и возможностью их обеспечения, увеличением скорости окислительного фосфорилирования, показательным критерием которого является дыхательный контроль [Chance, Wilhams, 1956] Поскольку при длительных судорогах энергетические затраты нервных клеток многократно возрастают, а с другой стороны имеют место гипоксические проявления и острая нехватка кислорода, можно было бы ожидать изменения в активности различных ферментативных систем митохондрий Обзор литературных данных показал разнонаправленность влияния судорожных припадков на ферментативную активность митохондрий, выделенных из головного мозга после эпистатуса, в зависимости от модели (и соответственно, механизма инициации судорог) и тяжести судорог Поэтому было решено исследовать активность дыхания митохондрий и на литий-пилокарпиновой модели

В результате экспериментов на литий-пилокарпиновой модели получилось, что активность дыхания митохондрий мозга у контрольных крыс и крыс, перенесших 2-х часовой эпилептический статус, независимо от тяжести статуса, не изменяется ни в присутствии субстратов комплекса I, ни в присутствии субстратов комплекса II Дыхательный контроль у контрольных и опытных крыс достоверно не различается

Таким образом, можно предположить, что к необратимым последствиям нейродегенерации приводят только наиболее тяжелые продолжительные формы эпилептического статуса, инициированного литий-пилокарпином у крыс

6. Исследование возможности позднего купирования судорог СО; на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса.

В данной серии экспериментов исследовали влияние СОг с целью облегчения тяжести судорожного припадка, инициированного литий-пилокарпином Были использованы взрослые беспородные крысы (п=12) Эпилептический статус провоцировался по обычной схеме Спустя 2 ч после развития эпистатуса, крыс помещали в плотно закрытый эксикатор Баллон с углекислым газом сообщался с эксикатором через иглу диаметром 3 мм Газ подавался внутрь в течение 30 сек под постоянным давлением, тремя порциями Скорость подачи газа была отрегулирована экспериментально и достигала значения 8 л/мин на максимуме При этом концентрация газа в эксикаторе максимально была равна 60% Через 30 сек после подачи газа, крысу извлекали из эксикатора и продолжали наблюдение в течение 2-х ч В результате при такой постепенной подаче СОг у крыс не развивалось гипервозбуждения, напротив, они постепенно засыпали Тяжесть судорог снижалась у 100% крыс, у 75% крыс статус купировался полностью, у 25% наблюдалось его подавление до 1-2 стадии Выживаемость составила 100% Однако не были проведены параллельные ЭЭГ-исследования, поэтому нельзя исключить наличие эпилептиформных

21

паттернов в отражении эпилептической активности на ЭЭГ В течение последующих 2-х дней вели наблюдения за крысами У 2-х крыс из 12-ти наблюдались периодические клонические спазмы мускулатуры конечностей, иногда развивающиеся до 3 стадии

Противосудорожное действие гиперкапнии, по-видимому, состоит в усилении тонического влияния углекислоты на ретикулярные активирующие системы, которые, в свою очередь, подавляют активность синхронизирующих аппаратов подкорки Углекислый газ легко проникает через гематоэнцефалический барьер [Ош^сИ, 2001], что оказывает немедленное действие при судорогах. Нередко при судорогах и после ЭС мозговое кровообращение нарушено, что оказывает неблагоприятное действие на нейроны головного мозга. СО2 является мощным вазодилататором, увеличивая мозговой кровоток

Выводы

1 На модели литий-пилокарпинового эпилептического статуса выявлены возрастные особенности в развитии судорожного припадка у крыс По мере взросления, на 12, 25, 90 дни после рождения, достоверно увеличивается латентный период (более чем в два раза) наступления судорожного припадка Тяжесть моторного припадка и характеристики судорожной активности в ЭЭГ в исследованные возрастные периоды не изменялись Смертность от эпистатуса была наименьшей (2%) у 12-ти дневных крысят

2 Формирование эпилептического статуса у крысят в возрасте 12 и 25 дней всегда начинается в гиппокампе одного из полушарий мозга, только спустя 3-5 мин эпилептическая активность распространяется на неокортекс У взрослых крыс развитие эпилептического статуса начинается генерализованно о непрерывных пик-волновых разрядов, регистрируемых одновременно в гиппокампе и коре

3 Внутрибрюшинное введение препарата сакрицин (соль полициклической поликарбоновой кислоты) оказывает противосудорожное действие на крыс в состоянии эпистатуса В ЭЭГ регистрируются короткие периоды интериктального торможения, при увеличении дозы сакрицина время интериктального торможения удлиняется, в результате чего достигается полное прекращение судорог

4 Противосудорожный эффект сакрицина сопровождается ярко выраженным миорелаксантным действием, что снимает тяжесть моторного судорожного припадка вплоть до глубокой мышечной атонии Тормозное действие малых доз сакрицина на эпилептический статус особенно четко проявляется в предотвращении летального исхода

5 Интраназальное введение тиролиберина в концентрации 10"3 М оказывает провоцирующее действие на развитие эпистатуса, но применение тиролиберина в ультрамалой концентрации 10"12 М вызывает значительное (с 5-ой до 2-ой стадии) снижение тяжести моторного судорожного припадка эпистатуса

6 Внутрибрюшинное введение паральдегида в дозах 0,3 мл/кг и 0,6 мл/кг купирует эпилептический статус у 12-тидневных и 25-дневных крысят соответственно, а также оказывает модулирующее воздействие на развивающийся мозг

7 С помощью 30-секундной гиперкапнии, достигаемой помещением крысы в атмосферу со сверхвысоким содержанием СО2, эпилептический статус купировался у 75% крыс, у 25% наблюдалось его подавление до 1-2 стадии

8 На литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса прежде всего может происходить активация Са2+-зависимой деполяризации, увеличение митохондриальной проницаемости мембран, и не наблюдается изменения в интенсивности дыхания митохондрий, выделенных из головного мозга крыс

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Гончаров О Б, Мелехов М Г, Артюхова М В, Ретинская (Редкозубова) О.М Противосудорожная защитная система мозга и ее модификация нейропептидами и карбоновыми кислотами // Тезисы Международной Студенческой Конференции по фундаментальным наукам «Ломоносов-2000», с 405,2000

2 Чепурнова Н Е , Клюева Ю А , ван Луителаар Ж, Коэнен А, Пономаренко А А, Артюхова М В , Ретинская (Редкозубова) О.М., Чепурнов С А Судорожная готовность мозга крыс линии WAG/Rij в раннем онтогенезе // XVIII Съезд физиологического Общества им И П Павлова Тез докл Казань 25-28 сентября 2001 С 263

3 Chepumova N Е, Ponomarenko А А, Retinskaya (Redkozubova) О М, Chepurnov S A Arginme vasopressin in cascade mechanisms of febrile convulsions modulation by PACAPb // World Congress on Neurohypophysial hormones Bordeaux 8-12 September 2001 PI-10

4 Kubova H, Retinskaya (Redkozubova) O, Dmga R, Mares P Effects of lamotngine on status epilepticus in immature rats // Epilepsia 44 Suppl 9 220, 2003

5 Чепурнов С A , Чепурнова H E, Редкозубова О М., Тарасова Н В , Саакян С А, Серков К А, Аристов А В, Гиневский Д А Экспериментальный эпилептический статус у крыс - блокада моторной и судорожной активности сакрицином // XI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Москва 19-23 апреля 2004

6 О.М Redkozubova, A A Ponomarenko, S A Chepurnov, N Е Chepumova, S A Saakyan, Е L J М van Luytelaar PyTOgenal and hyperthermia induced neonatal febrile convulsions of WAG/Ry rats pups // VI European Congress on Epileptology/ Wienna, May 30- June 3, 2004

7 Redkozubova O.M , Goncharov О В , Abbasova К R, Chepumova N E , Chepurnov S A Thyroliberin intranasal application m rats with hthium-pilocarpme epileptical status // European Neuropeptide Club 15th Annual Meeting, May 19-21,2005, Riga, Latvia

8 S A Chepurnov, N E Chepumova, O.M. Redkozubova, S A Saakyan. Neuropeptides in experimental status epilepticus - the thyroliberin efficacy // XVIII th Conference on Epilepsy of the Polish Society of Epileptology Warsaw, May 20-22,2004

9 A A Ponomarenko, O.M. Redkozubova, N E Chepumova, S A Chepurnov, E L J M van Luytelaar Neonatal febrile convulsions of WAG/Rij rats pups - the models of pyrogen and hyperthermia induced seizures // ХУШ th Conference on Epilepsy of the Polish Society of Epileptology Warsaw, May 20-22, 2004

10 SA Chepurnov, NE Chepumova, OM. Redkozubova, Marco de Curtis, Laura Uva Status epilepticus - the role of cholinergic mechanisms // Психофармакология и биологическая наркология, т 5, №2, с 897-898, 2005

11 Чепурнов С А , Чепурнова Н Е , Редкозубова О.М., Саакян С A Status epilepticus - новые механизмы и пути торможения (литий-пилокарпиновая модель) // Успехи физиологических наук, 2005, том 36, №1, с 68-84

12 С А Чепурнов, Н Е Чепурнова, О.М.Редкозубоаа, С А Саакян Status epilepticus - новые механизмы и пути торможения (литий-пилокарпиновая модель) // 9 Междисциплинарная Конференция «Стресс и поведение», 2005

13 N Е Chepumova, О М Redkozubova, N V Tarasova, К R Abbasova, S A Chepurnov Neuropephde m experimental status epilepticus thyroliberin efficacy // VI European Congress on Epileptology/ Wienna, May 30-Iune 3,2004

14 Chepumova N E, De Curtis M, Uva L, Chepurnov S A, Redkozubova O.M., Goncharov О В Status epilepticus in rat and Guinea pig (hthium-pilocarpme and PTZ models // 26111 Intern Epilepsy Congress Pans 28 August-1 September 2005 (abs PI 186)//Epilepsia Vol 46 Suppl 6 P364

15 Kubova H, Rejchrtova J, Redkozubova O, Mares P Outcome of status epilepticus m immature rats vanes according to the paraldehyde treatment // Epilepsia 2005,46 Suppl 5 38-42

16 О.М. Редкозубова, А А Мирина, ДА Чепурнова, А А Правдухина, А А Дубина Структурные изменения мозга крысы, выявляемые с помощью магнитно-резонансной томографии, при пилокарпиновом эпилептическом статусе.// Москва, X Научная Конференция молодых ученых 11-12 октября 2006, с 43

17 Chepurnov S А, Chepumova N Е , Jin-Kyn Park, Redkozubova О.М., Pravdukhina A A , Abbasova К R , Buzmova E V , Minna A A , Chepumova D A , Dubma A A , Pirogov U A, de Curtis M, and

Uva L The inhibition of epileptogenesis during status epilepticus by ginsenosides of korean red ginseng and ginseng cell culture (dan 25) // Advances in ginseng research 2006 - proceedings of the 9th International Symposium on giseng - the Korean Society of ginseng, September 25-28, 2006, geumsan, Korea

18 Редкозубова O.M, Мирина A A, Чепурнова Д A, Сулейманова E M, Дубина А А Магнитно-резонансная томография мозга молодых и старых крыс последствия литий-пилокарпинового статуса // XX Съезд Физиологического общества им И П Павлова, Москва, 7 июня 2007

19 Chepumov S А, Chepurnova N Е, Jin-Kyn Park, Redkozubova О.М., Pravdukhina A A, Abbasova К R, Buzmova E V, Minna A A, Chepurnova D A, Dubina A A, Pirogov U A, de Curtis M, and Uva L The inhibition of epileptogenesis during status epilepticus by ginsenosides of korean red ginseng and ginseng cell culture (dan 25) //J Ginseng Res, vol 31, №3,159-174(2007)

Заказ № 345. Объем 1 п.л Тираж 100 Ж1.

Отпечатано в ООО «Пегроруш». I. Москва, ул. Палнха-2а, тел. 250-92-06 «ту«\роч1а1ог ги

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Редкозубова, Ольга Михайловна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Эпилептический статус: этиология, условия развития.

1.1. Характеристика эпилептического статуса как особого состояния.

1.2. Многообразие типов эпилептического статуса.

1.3. Эпилептический статус при эпилепсии.

1.4. Симптоматический эпилептический статус при органических заболеваниях мозга.

1.5. Симптоматический эпилептический статус при острых и хронических интоксикациях.

Патологические механизмы инициации и повреждающего воздействия эпилептического статуса.

2.1. Процессы, способствующие стабилизации и поддержанию судорожных пароксизмов.

2.2. Процессы с противосудорожной направленностью.

Экспериментальные модели эпилептического статуса.

3.1. Развитие эпилептического статуса при ПТЗ-вызванных судорогах.

3.2 Эпилептический статус, спровоцированный пенициллином, пикротоксином, бикукулнном.

3.3. Электрическая стимуляция головного мозга.

3.4. Эпилептический статус, спровоцированный флюротилом, морфином, кокаином.

3.5. Каипатпая модель эпилептического статуса.

3.6. Пилокарпиновая модель эпилептического статуса.

3.7. Модифицированные пилокарпиновые модели эпилептического статуса.

Клиническая картина судорожного эпилептического статуса.

Современные подходы н методы лечения эпилептического статуса.

Возрастные и половые особенности эпилептического статуса.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Вещества и дозы.

2. Литий - пилокарпиновая экспериментальная модель эпилептического статуса.

3. Стереотаксическое вживление электродов с последующей регистрацией электрической активности мозга.

4. Методика исследования поведения. Крестообразный приподнятый лабиринт (КПЛ.)

5. Методика титрования тиролиберина.

6. Спектральный анализ ЭЭГ.

7. Методика исследования поведения: удерживание на бруске.

8. Методика исследования поведения: ротарод.

9. Методика исследования поведения: водный лабиринт Морриса.

10. Выделение митохондрий из головного мозга крыс.

11. Определение белка в препарате митохондрий с помощью микробиуретового метода.

12. Регистрация активности дыхания митохондрий, выделенных из головного мозга крыс.

13. Измерение мембранного потенциала митохондрий, выделенных из головного мозга крыс.

14. Измерение кальциевой емкости митохондрий, выделенных из головного мозга крыс.

15. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 1. Развитие моторных судорог у крыс в онтогенезе па лнтий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса.

1.1 Развитие эпилептического статуса крыс линии Вистар, индуцированного литий-пилокарпином, в онтогенезе. Поведенческие особенности.

1.2 Развитие судорог крыс в онтогенезе при использовании литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса. Особенности ЭЭГ.

1.3 Исследование возможности позднего купирования судорог С02 на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса.

Глава 2 Противосудорожные эффекты нового препарата «сакрицина» на литнй-пилокарпнповоп модели эпилептического статуса.

2.1 Влияние высоких доз сакрицина на развитие эпилептического статуса.

2.2 Влияние низких доз сакрицина на развитие эпилептического статуса.

2.3 Влияние однократного введения сакрицина в дозе 400 мг/кг за 40 минут до эпилептического статуса на тревожность крыс в тесте "приподнятый крестообразный лабиринт".

2.4 Влияние введения сакрицина в дозе 400 мг/кг на фоне развившегося эпистатуса при ЭЭГ-регистрации на литий-пилокарпиновой модели ЭС.

Глава 3. Эффекты нейропептида тпролнберпн на лнтий-пнлокарпиновой модели эпилептического статуса.

Глава 4. Эффекты паральдегнда па литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса у молодых крыс.

4.1 Влияние введения паральдегида на развитие литий-пилокарпинового эпилептического статуса, смертность и массу тела у 12-дневных крысят.

4.2 Влияние паральдегида на развитие литий-пилокарпинового эпилептического статуса, смертность и массу тела у 25-дневных крысят.

4.3 Влияние паральдегида на отставленные эффекты литий-пилокарпинового эпилептического статуса у 12-дневных и 25-дневных крысят.

Глава 5. Эффекты продолжительного эпилептического статуса на митохондрии головного мозга крыс на литий-пилокарпиновой модели.

5.1. Исследование процесса скачка проницаемости митохондрий, выделенных из головного мозга крыс после продолжительного эпилептического статуса.

5.2. Регистрация активности дыхания митохондрий, выделенных из головного мозга крыс после продолжительного эпилептического статуса.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности развития эпилептического статуса и способов его купирования у крыс разного возраста на литий-пилокарпиновой модели"

По имеющимся данным, 2-4% всего населения страдают эпилепсией. Наиболее драматичным состоянием в эпилептологии является эпилептический статус.

Эпилептический статус - состояние, при котором эпилептические припадки столь часты и/или продолжительны, что формируется стабильно и качественно иное эпилептическое состояние. При эпистатусе каждый последующий припадок возникает раньше, чем больной полностью вышел из предыдущего приступа, т.е. у него остаются выраженные нарушения сознания, гемодинамики, дыхания, гомеостаза [Карлов, 1990].

Актуальность исследования эпистатуса определяется следующим рядом факторов:

• существует большая вероятность его развития как при различных поражениях и заболеваниях мозга, так и при разных формах эпилепсии;

• при судорожных формах эпилептического статуса катастрофически быстро нарастает тяжесть состояния больных, системы жизнеобеспечения организма расстроены, что выражается в значительном повышении числа летальных исходов;

Летальность, составлявшую в 60-е годы при судорожном эпилептическом статусе 20-25% (умирал каждый 4-5-й больной), в настоящее время удалось снизить примерно в 3 раза [Карлов, 2003]. Тем не менее, проблема эпилептического статуса не теряет своей остроты. Эпилептический статус -это состояние, требующее немедленной рациональной терапии, направленной на восстановление и стабилизацию функций организма [Vining, Freeman, 1985]. Несмотря на современный арсенал антиэпилептических препаратов (АЭП), 10-15% больных эпилепсией являются медикаментозно резистентными; судорожный эпилептический статус нередко возникает при острых поражениях (черепно-мозговая травма) и заболеваниях головного мозга (инсульт, нейроинфекции, опухоли и др.), сильно отягощая прогноз; наконец, как указывают S. Knake и соавт. [Knake S., 1999], существующие препараты первой линии контролируют эпилептический статус только у 20-80% больных. Несмотря на современные достижения в лечении эпилептического статуса, имеют место рефрактерные случаи, не поддающиеся адекватной терапии. Кроме того, современные АЭП, применяющиеся для купирования эпилептического статуса, обладают побочными эффектами, такими как седативный, угнетение кардиоваскулярной и респираторной деятельности [Карлов, 2001]. Учитывая, что судорожный эпистатус практически во всех случаях сопровождается угнетением сознания (сопор, кома), дыхания, гемоциркуляции, и отсутствие АЭП, лишенных указанных побочных отрицательных свойств, целесообразно продолжение активного поиска новых способов лечения, новых антиэпилептических препаратов.

Одной из таких попыток является разработка препарата сакрицин на основе алициклических карбоновых кислот [Саакян, 1996; Асанова с соавт., 1995; Chepurnov et а1.,1998]. Препарат обладает малой токсичностью и эффективен против аудиогенных судорог у крыс линии КМ, увеличивает порог ПТЗ-индуцированных судорог [Могими, 1997] и, как недавно показано, подавляет пик-волновую активность на Со2+ модели эпилепсии [Гончаров с соавт., 2000]. Он оказывает свое действие через холинергическую систему мозга, участие которой в эпилептогенезе человека исследовано недостаточно [Сергиенко с соавт., 1979; Laird et al., 1986]. Потенциальные возможности препарата до конца не раскрыты.

Актуальной представляется и оценка центральных функций регуляторных нейропептидов как агентов, потенциально участвующих в контроле судорожной активности мозга. Тиролиберин [Чепурнов, 2002] нашел применение в неврологии, в терапии эписиндромов, клинике детской эпилепсии. Лабораторные и клинические исследования показали особое нейроанатомическое распределение и нейрохимическую роль для тиролиберина в модуляции судорожных приступов [Kubek, Garg, 2002; Crespi et al., 1986; Kerwin, Pycock, 1979; Yarbrough, 1976]. Накапливается все больше фактов, говорящих об участии тиролиберина в процессах нейродегенерации и его роли в нейрохимических процессах судорожного статуса [Bajorek et al., 1984].

В настоящее время паральдегид используется в значительной степени для немедленного вмешательства при лечении эпилепсии. Паральдегид подавляет судороги и у взрослых, и у детей [Shorvon , 1994]. Введение паральдегида не предотвращает функционального ухудшения и развития эпилепсии в более позднем возрасте [Kubova , 2000; Kubova, 2004]. Однако даже относительно позднее купирование может модулировать отставленные эффекты эпилептического статуса. К тому же паральдегид не оказывает влияния на дыхательный центр в отличие от бензодиазепинов или барбитуратов [The Status Epilepticus Working Party, 2000; Lance WJ., 1994].

В настоящее время активно развививается поиск митопротекторов как потенциальных нейропротекторов, поиск препаратов и веществ, направленных на уменьшение последствий окислительного стресса, нарушений на. биохимическом уровне и гибели нейронов вследствие эпилептического статуса. Появляется все больше данных, свидетельствующих о необратимых изменениях в структуре митохондриальных ферментов вследствие продолжительного эпилептического статуса [Gibbs , 2006], что, в свою очередь, ведет к гибели нейронов.

Несмотря на внедрение новых поколений противоэпилептических средств (тиагабин, вигабатрин, сабрил и т.д.), все они не обладают большими перспективами в будущем для лечения и предупреждения эпилептического г статуса. К сожалению, остаются надежными только ургентные способы введения диазепама, барбитуратов и наркоза совместно с миорелаксантами.

Целью работы было:

Исследование формирования эпилептического статуса развивающегося и взрослого мозга беспородных белых крыс и крыс линии Вистар на -^кспершйёнтальной литий-пилокарпиновой модели и способов его торможения.

Для достижения поставленной цели в работе решались следующие задачи:

1. Определить ЭЭГ-характеристики и поведенческие особенности развития и протекания эпилептического статуса у крысят в возрасте 12 и 25 дней и взрослых крыс в возрасте 90 дней.

2. Оценить эффективность и дозо-зависимость действия нового отечественного противосудорожного препарата - сакрицина на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса у белых беспородных крыс.

3. Определить особенности поведения (по тесту «приподнятый крестообразный лабиринт») белых беспородных крыс, перенесших эпистатус и возможность его изменения с помощью противосудорожной терапии сакрицином.

4. Определить дозо-зависимость эффектов нейропептида - тиролиберина на литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса у крыс линии Вистар.

5. Сравнить эффекты паральдегида на моторные судороги, смертность, краткосрочные и долгосрочные последствия эпилептического статуса в двух возрастных группах крыс - 12-ти и 25-ти дней.

6. Оценить функциональное состояние (активность дыхательной цепи, мембранный потенциал и кальциевую емкость) митохондрий, выделенных из головного мозга крыс, перенесших литий-пилокарпиновый эпилептический статус.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Эпилептический статус: этиология, условия развития.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Редкозубова, Ольга Михайловна

Выводы

1. На модели литий-пилокарпинового эпилептического статуса выявлены возрастные особенности в развитии судорожного припадка у крыс. По мере взросления, на 12, 25, 90 дни после рождения, достоверно увеличивается латентный период (более чем в два раза) наступления судорожного припадка. Тяжесть моторного припадка и характеристики судорожной активности в ЭЭГ в исследованные возрастные периоды не изменялись. Смертность от эпистатуса была наименьшей (2%) у 12-ти дневных крысят.

2. Формирование эпилептического статуса у крысят в возрасте 12 и 25 дней всегда начинается в гиппокампе одного из полушарий мозга, только спустя 3-5 мин эпилептическая активность распространяется на неокортекс. У взрослых крыс развитие эпилептического статуса начинается генерализованно с непрерывных пик-волновых разрядов, регистрируемых одновременно в гиппокампе и коре.

3. Внутрибрюшинное введение препарата сакрицин (соль полициклической поликарбоновой кислоты) оказывает противосудорожное действие на крыс в состоянии эпистатуса. В ЭЭГ регистрируются короткие периоды интериктального торможения, при увеличении дозы сакрицина время интериктального торможения удлиняется, в результате чего достигается полное прекращение судорог.

4. Противосудорожный эффект сакрицина сопровождается ярко выраженным миорелаксантным действием, что снимает тяжесть моторного судорожного припадка вплоть до глубокой мышечной атонии. Тормозное действие малых доз сакрицина на эпилептический статус особенно четко проявляется в предотвращении летального исхода.

5. Интраназальное введение тиролиберина в концентрации 10~3 М оказывает провоцирующее действие на развитие эпистатуса, но применение тиролиберина в ультрамалой концентрации 10"i2M вызывает значительное (с 5-ой до 2-ой фазы) снижение тяжести моторного судорожного припадка эпистатуса.

6. Внутрибрюшинное введение паральдегида в дозах 0,3 мл/кг и 0,6 мл/кг купирует эпилептический статус у 12-тидневных и 25-дневных крысят соответственно, а также оказывает модулирующее воздействие на развивающийся мозг.

7. С помощью 30-секундной гиперкапнии, достигаемой помещением крысы в атмосферу со сверхвысоким содержанием СОг, эпилептический статус купировался у 75% крыс, у 25% наблюдалось его подавление до 1-2 стадии.

8. На литий-пилокарпиновой модели эпилептического статуса прежде всего может происходить активация Са2+-зависимой деполяризации, увеличение митохондриальной проницаемости, и не наблюдается изменения в интенсивности дыхания митохондрий, выделенных из головного мозга крыс.

Заключение.

Ключевым моментом эпилептического статуса, инициируемого пилокарпином, является связывание пилокарпина - агониста мускариновых рецепторов - с Ml-рецептором группы мускариновых холинорецепторов постсинаптической мембраны. Участие мускариновых рецепторов доказано опытами с нокаутными мышами [Hamilton, 1997], у которых невозможно вызвать эпистатус введением пилокарпина. Источником развития гипервозбудимости становится зубчатая извилина гиппокампа [Turski, 1983]. Литий-пилокарпиновая модель чрезвычайно удобна для тестирования различных противосудорожных препаратов [Tsuji, Akamatsu, 2001], однако механизм инициации судорог до конца остается неясным.

Применение противоэпилептичеких препаратов рассматривается не только в аспекте купирования эпилептического статуса, проявления его электрических процессов в коре и гиппокампе, но и с целью предотвращения последствий эпистатуса - дегенерации нейронов. В связи с этим идет поиск митопротекторов как потенциальных нейропротекторов, поиск препаратов и веществ, направленных на уменьшение последствий окислительного стресса, нарушений на биохимическом уровне и гибели нейронов вследствие эпистатуса. Удалось показать, что на литий-пилокарпиновой модели только тяжелые продолжительные формы судорог оказывают значительные апоптотические процессы, начинающиеся с изменения митохондриальной проницаемости.

Литий-пилокарпиновая модель уникальна, поскольку патологический процесс судорог имеет тенденцию быстро становиться самоподдерживающимся. Тормозные механизмы быстро истощаются, наблюдаются неадекватные изменения в экспрессии нейропептидов, очень быстро снижается концентрация тормозных нейропептидов [Chen et al, 2007]. На этой модели удалось продемонстрировать облегчающее влияние на судороги ультрамалых доз тиролиберина.

Литий-пилокарпиновая модель включает ряд физиологических нарушений в лимбических структурах мозга. В гиппокампе отчетливо проявляется гибель клеток, дисперсия клеток зубчатой извилины, супра- и интрагранулярный спроутинг мшистых афферентов. Нередко проявляются спонтанные возвратные приступы судорог. Все это наблюдается и в клинике при височной эпилепсии у человека. Поэтому понимание механизмов торможения эпилептического статуса, полученных на модели, может быть применено в клинике височной эпилепсии, особенно в отношении нейрохимических механизмов купирования эпилептических приступов.

В настоящее время известно, что такие препараты, как атропин, диазепам, фенитоин, карбамазепин, фенобарбитал, паральдегид способны предотвращать эпилептический статус, инициированный литий-пилокарпином [Morrisett,1987]. Однако они оказываются бездейственными, когда речь идет об уже развившемся эпилептическом статусе, и не способны купировать судороги, даже если они вводятся через 35 мин от начала эпилептического статуса. В клинических условиях остаются надежными только ургентные способы: наркоз, введение диазепама и барбитуратов совместно с миорелаксантами. В случае литий-пилокарпинового эпилептического статуса купирующим веществом остается паральдегид. Нам удалось продемонстрировать, что сакрицин обладает и противосудорожным, и миорелаксантным действием, что может играть положительную роль при лечении, т.к. по литературным данным в первую очередь при эпистатусе страдает дыхательная система и важно снять спазмы дыхательной мускулатуры. Впервые была показана возможность купировать эпилептический статус у крыс при помощи гиперкапнии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Редкозубова, Ольга Михайловна, Москва

1. Аббасова К.Р. Коррекция нейропептидами судорожных состояний взрослого и развивающегося мозга (роль тиролиберина и галанина в регуляции судорожной активности). // Автореф. канд. дис. М., 1997, 26 с.

2. Александровский Ю.А. Роль транквилизаторов в лечении пограничных психических расстройств. // Психиатрия и психофармакотерапия, 2003, Т5, №3, с 94-96.

3. Аишарин И.П., Стукалов П.В., Ещепко Н.Д. и др. Биохимия мозга // СПб.: Издательство С.-Петербургского университета, 1999, 328с.

4. Ашмарин И.П., Кулаичев А.П., Чепурпов С.А. Каскадные однонаправленные регуляторные процессы, осуществляемые короткоживущими пептидами (тиролиберин) // Физиол. журн., СССР, 1988, т. 75, №5, с. 627-632.

5. Ашмарин И.П., Гаврюшов В.Ю., Иониди В.Ю., Ефимов М.С., Дуленков А.Б., Чепурнова Н.Е., Чепурнов С.А. Тиролиберин нормализует мозговое кровообращение и рОг у новорояеденных// Доклады АН СССР, 1990, т. 312, №1, с. 241-244.

6. Ашмарин И.П., Каразеева Е.П., Лелекова Т.В. К вопросу о развитии проблемы эффективности сверхмалых доз биологически активных соединений // Рос. Хим. Журн. 1999, т. 53, №5, с. 21-28, 1999.

7. Бачурин С.О., Дубова Л.Г., Киреева Е.Г., Шевцова Е.Ф. Патент № 2005138847 (2007.06.20). Способ определения влияния соединений на процесс скачка митохондриальной проницаемости и мембранный потенциал митохондрий.

8. Блейхер В.М., Крук И. В. Толковый словарь психиатрических терминов. // Воронеж: изд-во НПО «МОДЭК», 1995.

9. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д. П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. // М.: Высшая школа, 1991, с. 399.

10. Власова И.Г., Чепурнова Н.Е., Чепурнов С.А., Ашмарин И.П. Об антигипоксических свойствах тиролиберина // Физиол. Человека, 1994, т. 20, №6, с. 118-123.

11. Гехт А.Б. Современные стандарты ведения больных эпилепсией и основные принципы лечения. // Consilium medicum, 2000, Т2, №2, http://www.consilium-medicum.com/media/consilium/n02/70.shtml.

12. Зенков JI.P. Взаимодействие противоэпилептических лекарств. // Неврологический журнал, №2,1999, с.З.

13. Зенков JI.P. Клиническая эпилептология. // М: ООО «Медицинское информационное агенство», 2002 416 с: ил.

14. Инюшкин А.Н., Меркулова Н.А., Чепурнов С.А. Комплекс пре-Бетцингера участвует в реализации эффектов ТРГ на дыхание // Рос. Физиол. Журн, 1998, т.84, №4, с.285-292.

15. Калимуллипа Л.Б, Бикбаев А.Ф., Карпова А.В Чепуриова Н.Е.,Саакян С.А., Чепурнов С.А. Пириформная кора и кортикальное ядро миндалины в эпилептогенезе-роль ростро-каудального градиента // Успехи физиол наук. 2000, Том 31, № 4, с.62-72

16. Карлов В.А., Андреева О.В. Примеиение инъекционного Депакина при лечении эпилептического статуса. // РМЖ, Том 9, №20,2001, http://www.rmj.ru/articles1418.htm.

17. Карлов В.А., Гпездицкий В.В. Префронтальная кора и эпилептогенез. // III Восточноевропейская конференция «Эпилепсия и клиническая нейрофизиология». Украина, Крым, Гурзуф, 2000. С. 18.

18. Карлов В.А. К клинической характеристике и патогенезу эпилептического статуса // В кн.: Актуальные проблемы эпилепсии. -М., 1967. С. 117-119.

19. Карлов В. А. Эпилепсия. // М.Медицина 1990.

20. Карлов В.А. Судорожный эпистатус // Москва, 2003.

21. Крыжановский Г.Н. Общая патофизиология нервной системы // Патофизиология под ред. П.Ф. Литвицкого, М.: Медицина, 1997.

22. Кулаичев А.П. Компьютерная электрофизиология (в клинической и исследовательской практике). // Информатика и компьютеры, М. 1997,1998, 1999, Изд-во МГУ, М.2002.

23. Кулаичев А.П., Каплан А.Я. Системы компьютерного анализа биоэлектрических сигналов // Мир ПК (персональных компьютеров). 1994, №8, с. 132-137.

24. Лелекова Т.В., Саижиева Л.Ц. Роль адренорецепторов в механизме действия тиролиберина на лимфатические сосуды. Рос. физиол журн. им. И.М.Сеченова. 2004.Т.90. № 1, с. 32-39.

25. Лобова JI. П. Особенности клиники и течения эпилептических синдромов при внутримозговых опухолях височной области. // Актуальные проблемы эпилепсии. Труды Государственного НИИ психиатрии МЗ РСФСР. 1967, №47. - С. 92-99.

26. Могими А. Влияние алициклических карбоновых кислот и эндотелипа на генерализованные припадки и генетически обусловленные абсансы у крыс. // Автореф. Канд. Дис. М., МГУ, 1997, с 26.

27. Молодавкин Г.М., Воронина Т.А., Островская Р.У. Элект рофизиологический и нейрофармакологический анализ взаимодействия систем возбуждения и торможения в коре больших полушарий мозга крыс // Фармакология и токсикология- 1997, Том 123-124, 9,315.

28. Окуджава В.М. Основные нейрофизиологические механизмы эпилептической активности. //—• Тбилиси: Гантлеба, 1969, с 226.

29. Пенфилд У, Эриксон Т. Эпилепсия и мозговая локализация. // М.: Медгиз, 1949, с 452.

30. Пенфилд У. Джаспер Г. Эпилепсия и функциональная анатомия головного мозга человека. // М.: Наука, 1958 (англ, изд.: Boston, 1954).

31. Петров В. С. Электронно-микроскопические, биохимические и электрофизиологические исследования при некоторых формах клинической и экспериментальной эпилепсии. // Материалы к объединенной конференции нейрохирургов. Д., 1964. — С. 47—48.

32. Сараджишвили П.М., Геладзе Т. //. Эпилепсия. М.: Медицина, 1977.

33. Сараджишвши П.М. О клинической классификации эпилептических припадков // Эпилепсия. 1970. - №2. - С. 72-78.

34. Сергиенко Н.Г., Гонзалес-Кеведо А., Гонзалес Н., Симон-и-Кинрон Л., Марин Г. Роль ацетилхолин-холинэстеразной системы в развитии эпилепсии. // Ж. Невропатол. Психиатр. 1979, Т.74 (4), с. 698-704.

35. Степанова Т.С., Грачев К.В., Шустин В.А. Электроэнцефалография и субкортикальная стимуляция при хирургическом лечении эпилепсии. Хирургическое лечение эпилепсии. //—Тбилиси, 1985.-С. 139-141.

36. Чепурнов С.А., Чепурнова Н.Е. Нейробиологические основы эпилептогенеза развивающегося мозга. // Успехи физиол. наук, 1997. T.28. №3. С. 3-53.

37. Чепурнов С.А., Чепурпова Н.Е., Аббаова К.Р., Гончаров О.Б. Нейропептид тиролиберин эндогенная противосудорожная защита мозга. // Успехи физиол наук, 2002, тЗЗ, №1, с 29-39.

38. Шпрах В.В., Синьков А.В., Синькова Г.М. Церебральные нарушения ритма и проводимости сердца у больных эпилепсией // Журн. неврол. и психиатр. 2000. - Т. 100. -№9. - С. 16-20.

39. Шурыгин И.А. Оксибутират натрия: недокументированные свойства препарата (о чем молчит Машковский), 2002, http://www.intermedika.ru/book/Reanimation/natrii.htm

40. Adin J, Arteaga R, Herranz JL, et al. The use of intravenous valproate. // Rev Neurol 1999;29:744-53

41. Aggarwal P, Wall JP. Lidocaine in refractory status epilepticus: a forgotten drug in the emergency department. // Am JEmerg Med 1993; 11:243-4

42. Aicardi J, Chevrie JJ Convulsive status epilepticus in infants and children: a study of 239 cases. //Epilepsia, 1970,11:187-197.

43. Aicardi J, Chevrie JJ Consequences of status epilepticus in infants and children. // Adv Neurol. 1983;34:115-25.

44. Alfonso /., Perea L., Paez J-C. et al. Intravenous valproic acid dose in neonates // Epilepsia. -1999.-Vol.40 (Suppl. 7).-P. 143.

45. Alvares L„ Dunoyer C„ Gilman J. et al. Safety and dose/level relationship in rapid intravenous loading of valproic acid in children under age 12 years // Epilepsia. 1999. - Vol. 40 (Suppl. 7).-P. 143.

46. Avoli M, Hwa G, Louvel J, Kurcewicz I, Pumain R, Lacaille JC. Functional and pharmacological properties of GABA-mediated inhibition in the human neocortex. // Can J Physiol Pharmacol. 1997 May;75(5):526-34.

47. Babb TL, Leite JP, Mathern GW, Pretorius JK. Kainic acid induced hippocampal seizures in rats: comparison of acute and chronic seizures using intrahippocampal versus systemic injection. // Ital J Neurol Sci 1995; 16: 139-144.

48. Bajorek J.G., Lee R.J., Lomax P. Neuropeptides: a role as endogenous mediators or modulators of epileptic phenomena. //Ann. Neurol., 1984,16, 31-38.

49. Bashkatova VG, Mikoian VD, Kosacheva ES, Kubrina LN, Vanin AF, Raevskii KS. Direct determination of nitric oxide in rat brain during various types of seizures using ESR. // Dokl AkadNauk. 1996 May;348(l):l 19-21.

50. Behrmann, D.L., Bresnahan, J.C., Beattie, M.S. Modeling of acute spinal cord injury in the rat: neuroprotection and enhanced recovery with methylprednisolone, U-74006F and YM14673. // Exp. Neurol., 1994,126, 61-75.

51. Ben-Ari Y. Seizures Beget Seizures: The Quest for GABA as a Key Player. // Crit Rev Neurobiol. 2006; 18(1-2): 135-44.

52. Ben-Ari Y, Lagowska J, Tremblay E, Le Gal La Salle G. A new model of focal status epilepticus: intra-amygdaloid application of kainic acid elicits repetitive secondarily generalized convulsive seizures. //Brain Res. 1979 Mar 9;163(l):176-9.

53. Bernhard GC, Bohm E, Hojeberg S. A new treatment of status epilepticus: intravenous injections of a local anaesthetic (Iidocaine). II Arch Neurol Psychiatry 1955;74:208-14

54. Biagini G, Avoli M, Marcinkiewicz J, Marcinkiewicz M. Brain-derived neurotrophic factor superinduction parallels anti-epileptic-neuroprotective treatment in the pilocarpine epilepsy model. // J Neurochem. 2001 Mar;76(6): 1814-22

55. Bierman CW, Williams PV. Therapeutic monitoring of theophylline. Rationale and current status.Clin Pharmacokinet. 1989 Dec;17(6):377-84.

56. Bleck TP. Management approaches to prolonged seizures and status epilepticus. // Epilepsia 1999;40 (suppl l):S59-63

57. Bleck TP. Therapy for status epilepticus. // Clin Neuropharmacol. 1983;6(4):255-69.

58. Bonvallet M., Dell P. Reflections on the mechanism of the action of hyperventilation upon the EEC // Electroenceph. Clin. Neurophysiol. 1956. - Vol. 8. - P. 170-177.

59. Borlongan, C.V., Stahl, C.E., Redei, E., Wang, Y. Prepro-thyrotropinreleasing hormone 178— 199 exerts partial protection against cerebral ischemia in adult rats. Neuroreport, 1999,10, 35013505.

60. Brandt С, Potschka H, Loscher W, Ebert U. N-methyl-D-aspartate receptor blockade after status epilepticus protects against limbic brain damage but not against epilepsy in the kainate model of temporal lobe epilepsy. // Neuroscience. 2003; 118(3):727-40

61. Browning RA. Role of the brain-stem reticular formation in tonic-clonic seizures: lesion and pharmacological studies. // Fed Proc. 1985 May;44(8):2425-31.

62. Brownstein M.J., Palkovits M., Saavedra J.M., Bassiri R.M., Utiger R.D. Thyrotropin releasing hormone in specific nuclei of rat brain. // Science, 1974,185, 267-269.

63. Bruni J. Treatment of status epilepticus in adults. // Can Med Assoc J. 1983 Mar l;128(5):531-3.

64. Bschor T, Lewitzka U, Pfennig A, Bauer M. Twenty-five years of lithium augmentation. // Nervenarzt. 2007 Apr 26.

65. Buterbaugh GG, Hudson GM. Estradiol replacement to female rats facilitates dorsal hippocampal but not ventral hippocampal kindled seizure acquisition. // Exp Neurol 1991; 111: 55-64

66. Cain DP, Corcoran ME. Intracerebral beta-endorphin, met-enkephalin and morphine: kindling of seizures and handling-induced potentiation of epileptiform effects. // Life Sci. 1984 Jun 18;34(25):2535-42.

67. Cavalheiro E.A., de Feo M.R., Mecarelli 0, Ricci GF. Intracortical and intrahippocampal injections of kainic acid in developing rats. An electrographic study. // Electroenceph clin Neurophysiol 1983; 56: 480-486.

68. Cavalheiro EA, Silva DF, Turski WA, Calderazzo-Filho LS, Bortolotto ZA, Turski L. The succeptibility of rats to pilocarpine-induced seizures is age-dependent. // Develop Brain Res 1987; 37:43-58.

69. Cha BH, Silveira DC, Liu X, Ни Y, Holmes GL. Effect of topiramate following recurrent and prolonged seizures during early development. // Epilepsy Res. 2002 Oct;51(3):217-32.

70. Chance, В., Williams, G.R., The respiratory chain and oxidative phosphorylation. // Adv. Enzymol., 1956,17, 65-134.

71. Chen JW, Naylor DE, Wasterlain CG. Advances in the pathophysiology of status epilepticus. // Acta Neurol Scand. 2007 Apr;l 15(4):7-15.

72. Cherubini E, de Feo MR, Mecarelli O, Ricci GF. Behavioral and electrographic patterns induced by systemic administration of kainic acid in developing rats. // Develop Brain Res 1983; 9: 69-77.

73. Chepurnov S.A., Saakjan S.A., Chepurnova N.E., Kritckaja I.I. Sacricin New Antiepileptic Drug. / Abstracts of III - European Congress on Epileptology. Warsaw, 1998.

74. Chepournova N.E., Kossova G. V., Abbasova K, Prahlad Chandra Kumar C., Chepurnov S.A. andAshmarin I.P. Thyrotropin-releasing hormone (TRH) in ultra low doses decreases severity of seizures in rats. // Neuropeptides, 1994 261, 52.

75. Chuang YC, Chang AY, Lin JW, Hsu SP, Chan SH Mitochondrial dysfunction and ultrastructural damage in the hippocampus during kainic acid-induced status epilepticus in the rat. // Epilepsia. 2004 0ct;45(10): 1202-9

76. Clifford D.B., Onley J. W., Berz A.M. et al. Ketamine, phencyclidine and MK — 801 protect against kainic acid — induced seizure — related brain damage // Epilepsia. 1990. - Vol. 31. - P. 382-390.

77. Committee on Safety of Medicines/Medicines Control Agency. Fosphenytoin sodium (Pro-Epanutin): serious arrhythmias and hypotension. // Current Problems in Pharmacovigilance 2000;26:1.

78. Coulter D.A. Chronic alteration in the limbic system after status epilepticus // Epilepsia. -1999 (Suppl. 1).-P. 23-33.

79. Crandall JE, Caviness Jr VS. Axon strata of the cerebral wall in embryonic mice. // Brain Res, 1984a, 316:185-195.

80. Crandall JE, Caviness Jr. VS Thalamocortical connections in newborn mice. // J Comp Neurol, 1984b 228:542-556.

81. De Giorgio CM, Altman K, Hamilton-Byrd E, et al. Lidocaine in refractory status epilepticus: confirmation of efficacy with continuous EEG monitoring. // Epilepsia 1992;33:913-16.

82. Delgado-Escueta AV, Fong CY. Status epilepticus: recent trends and prospects. // Neurologia 1997; 12 (suppl 6):62-73.

83. De Lorenzo R.J., Pellock J.M., Towne A.R., Boggs J.G. Epidemiology of status epilepticus // J. Clin. Neurophys. 1995. — Vol. 12. -P. 316-325.

84. Depaulis A, Snead ОС 3rd, Marescaux C, Vergnes M. Suppressive effects of intranigral injection of muscimol in three models of generalized non-convulsive epilepsy induced by chemical agents. // Brain Res. 1989 Sep 25;498(l):64-72.

85. Dingledine R, Borges K, Bowie D, Traynelis SF. The glutamate receptor ion channels. // Pharmacol Rev. 1999Mar;51(l):7-61.

86. Doheny H.C., Ratnaraj N. Whittington M.A., Jefferys J.G.R., Patsalos P.N. Blood and cerebrospinal fluid pharmacokinetics of the novel anticonvulsant levetiracetam (ucb L059) in the rat. // Epilepsy Research, 1999, 34, pp. 161-168.

87. Druga R, Kubova H, Mares P. Degenerative neuronal changes in the rat thalamus induced by status epilepticus at different developmental stages. // Epilepsy Res 2005; 63: 43-65.

88. Dube C, Boyet S, Marescaux C, Nehlig A Progressive metabolic changes underlying the chronic reorganization of brain circuits during 3598 // J. Neurosci., 2000a, May 15, 2001, 2/(10):3593-3599.

89. Dube C, Chen K, Eghbal-Ahmadi M, Brunson K, Soltesz I, Baram TZ. Prolonged febrile seizures in the immature rat model enhance hippocampal excitability long term. // Ann Neurol 2000b, 47:336 -344.

90. Dulla CG, Dobelis P, Pearson T, Frenguelli BG, Staley KJ, Masino SA. Adenosine and ATP link PC02 to cortical excitability via pH. // Neuron. 2005 Dec 22;48(6):1011-23.

91. Engel J Jr. Inhibitory mechanisms of epileptic seizure generation. // In Fahn s, Hallett M, Liiders HO, Marsden CD. Advances in neurology. Vol. 67. Philadelphia Lippincott-Raven Publishers: 1995.

92. Epstein M.H., O'Conner J.S.- Destructive effect of prolonger stasus epilepticus // J. Neurol. Neurosurg. Psychiat. 1966. - Vol. 29. -P. 251-260.

93. Fariello R.G., Coldon G.T., Smith G.G., Reyes P.P. Potentiation of kainic acid epileptogenicity and sparing from neuronal damage by NMDA receptor antagonist // Epilepsy Res. 1989.-Vol.3.-P. 206-213.

94. Fariello R., Smith M.C. Valproate: mechanisms of action. // In: Levy R. Mattson R., Meldrum В., Penry J.K., Dreifuss F.E. eds. Antiepileptic drugs. 3-rd ed. New York, NY: Raven Press; 1989: 567-75.

95. Freitas RM, Sousa FC, Viana GS, Fonteles MM. Acetylcholinesterase activities in hippocampus, frontal cortex and striatum of Wistar rats after pilocarpine-induced status epilepticus. //Neurosci Lett. 2006 May 15;399(l-2):76-8. Epub 2006 Feb 14.

96. Fujikawa D.G., Itabash H.H., Wu A. et al. Status epilepticus -induced neuronal loss in human without systemic complications or epilepsy // Epilepsia. 2000. - Vol. 41. - P. 981-991.

97. Fujikawa DG Prolonged seizures and cellular injury: understanding the connection. // Epilepsy Behav. 2005 Dec;7 Suppl 3:S3-11. Epub 2005 Nov 8.

98. Galvin GM, Jelinek GA. Midazolam: an effective intravenous agent for seizure control. // Arch Emerg Med 1987;4:169-72

99. Garr RE, Appleton RE, Robson WJ, Molyneux EM. Children presenting with convulsions (including status epilepticus) to a paediatric accident and emergency department: an audit of a treatment protocol. // Dev Med Child Neurol. 1999 Jan;41(l):44-7.

100. Gasior M, Ungard JT, Witkin JM. Preclinical evaluation of newly approved and potential antiepileptic drugs against cocaine-induced seizures. // J Pharmacol Exp Ther. 1999 Sep;290(3):l 148-56.

101. Gastaut H., Fischer-Williams M. The physiopathology of epileptic seizures. // Handbook of Physiology. V. I. Neurophysiology. Washington, 1959. P. 329-370.

102. Gershengorn MC. Mechanism of signal transduction by TRH. // Ann N Y Acad Sci. 1989;553:191-6.

103. GibbsJE, Walker MC, CockHR. Levetiracetam: antiepileptic properties and protective effects on mitochondrial dysfunction in experimental status epilepticus. // Epilepsia. 2006 Mar;47(3):469-78.

104. Gingrich MB, Traynelis SF Serine proteases and brain damage is there a link? // Trends Neurosci. 2000 Sep;23(9):399-407. Comment in: Trends Neurosci. 2001 Jan;24(l):8-9.

105. Giorgi FS, Ferrucci M, Lazzeri G, Pizzanelli C, Lenzi P, Alessandrl MG, Murri L, Fornai F. A damage to locus coeruleus neurons converts sporadic seizures into self-sustaining limbic status epilepticus. // Eur J Neurosci. 2003 Jun;17(12):2593-601.

106. Goodkin HP, Liu X, Holmes GL. Diazepam terminates brief but not prolonged seizures in young, naive rats. // Epilepsia. 2003 Aug;44(8):l 109-12.

107. Gordon I.J.,. NisbetH.I.A and Jones E.S. Status epilepticus treated with a muscle relaxant: the first success // Q J Med 2000; 93: 837-838

108. Gornall A.G., Bardavill C.J., Maxims D. Detemination of serum proteins by means of the biuret reaction. // J.B.C. 1949,177, 751-766.

109. Graham CA and Gordon MWG. Status epilepticus in accident and emergency: a difficult case. // Emerg Med J 2001; 18:492-493

110. Graves NM. Pharmacokinetics and interactions of antiepileptic drugs. // Am J Hosp Pharm 1993;50 (suppl 5):S23-9.

111. Griffith HR, Johnson GE. The use of curare in general anaesthesia, // Anesthesiologyl942; 3:418-20

112. Groenewegen HJ. Organization of the afferent connections of the mediodorsal thalamic nucleus in the rat, related to the mediodorsal-prefrontal topography. // Neuroscience. 1988 Feb;24(2):379-431.

113. Gunderson VM, Dubach M, Szot P, Born DE, Wenzel HJ, Maravilla KR, Zierath DK, Robbins CA, Schwartzkroin PA. Development of a model of status epilepticus in pigtailed macaque infant monkeys. // Dev Neurosci. 1999 Nov;21(3-5):352-64.

114. Hamani C, Mello LE. Spontaneous recurrent seizures and neuropathology in the chronic phase of the pilocarpine and picrotoxin model epilepsy. //Neurol Res. 2002 Mar;24(2): 199-209.

115. Hamani C, Mello LE. Status epilepticus induced by pilocarpine and picrotoxin. // Epilepsy Res. 1997 Jul;28(l):73-82.

116. Hamilton S.E., Loose M.D., Qi M. et al. Disruption of the Ml receptor gene ablates muscarinic receptor-depending M current regulation and seizures activity in mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 13311-13316.

117. Harrigan T, Peredery 0, Persinger M. Radial maze learning deficits and mediodorsal thalamic damage in context of multifocal seizureinduced brain lesions. // Behav Neurosci 1991 105:482-486.

118. Heafield MTE. Managing status epilepticus. // BMJ 2000;320:953-4

119. Hegarty JE, Dundee JW. Sequelae after the intravenous injection of three benzodiazepines -diazepam, lorazepam and flunitrazepam. // BMJ 1977;2:1384-5

120. Herman ST. Epilepsy after brain insult: targeting epileptogenesis. // Neurology. 2002 Nov 12;59(9 Suppl 5):S21-6.

121. Herman ST. Single Unprovoked Seizures. // Curr Treat Options Neurol. 2004 May;6(3):243-255.

122. Holmes GL. Seizure-induced neuronal injury: animal data. // Neurology. 2002 Nov 12;59 (9 Suppl 5):S3-6.

123. Holtkamp M, Meierkord H Anticonvulsant, antiepileptogenic, and antiictogenic pharmacostrategies. // Cell Mol Life Sci. 2007 Aug; 64(15):2023-41.

124. Honchar M.P., Olney J.W., Sherman W.R. Systemic cholinergic agents induce seizures and brain damage in lithium-treated rats. // Science, 1983 Apr 15;220(4594):323-5.

125. Hort J, Brozek G, Komarek V, Langmeier M, Mares P Interstrain differences in cognitive functions in rats in relation to status epilepticus. // Behav Brain Res 2000 112:77- 83.

126. Houser CR, Esclapez M. Downregulation of the alpha5 subunit of the GABA(A) receptor in the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy. // Hippocampus. 2003;13(5):633-45.

127. Jacono JJ, Robertson JM, The effects of estrogen, progesterone, and ionized calcium on seizures during the menstrual cycle of epileptic women. // Epilepsia 1987; 28: 571-7.

128. Jaworska-Feil L., Turchan J., Przewtocka В., Budziszewska В., Les'kiewicz M., Lason W. Effects of pentylenetetrazole-induced kindling on the thyrotropin-releasing hormone biosynthesis and receptors in rat brain. // Neuroscience, 1999a 90, 695-704.

129. Jensen FE, Wang C, Stafstrom CE, Liu Z, Geary C, Stevens MC. Acute and chronic increases in excitability in rat hippocampal slices after perinatal hypoxia in vivo. // J Neurophysiol 1998; 79: 73-81.

130. Jones DM, Esmaeil N, Maren S, Macdonald RL. Characterization of pharmacoresistance to benzodiazepines in the rat Li-pilocarpine model of status epilepticus. // Epilepsy Res. 2002 Aug;50(3):301-12.

131. Jope R.S., Morrisett R.A., Snead O.C. Characterization of lithium potentiation of pilocarpine-induced status epilepticus in rats. // Experimental Neurology 1986, 91,471-480.

132. Kalivas P.W., Stanley D. and Prange A.J.Jr. Interaction between thyrotropin-releasing hormone and the mesolimbic dopamine system. // Neuropharmacology, 1987 26, 33-38.

133. Kaplan P.W. Status epilepticus in a medical emergency: need for rapidly-effective intravenous antiepileptic drug // Clinical. Electroencepgalography. 1999. - Vol. 30 (Suppl. 1). -P. 1-4.

134. Kapur J, Macdonald RL. Rapid seizure-induced reduction of benzodiazepine and Zn2+ sensitivity of hippocampal dentate granule cell GABAA receptors. // J Neurosci. 1997 Oct l;17(19):7532-40.

135. Karlov V.A. Cause of death patiens with epilepsy in status epilepticus // Epilepsia. 1998. -Vol. 39 (Suppl. 9). - P. 32-33.

136. Kerwin R.W., Pycock C.J. Thyrotropin releasing hormone stimulates release of 3H.-dopamine from slices of rat nucleus acccumbens in vitro. // Br. J. Pharmacol., 1979 67,323-326.

137. Khazanov VA, Zimina ТА, Saratikov AS. Succinate oxidation by rat brain mitochondria in experimental convulsions. // Biull Eksp Biol Med. 1986 Jan;101(l):35-8

138. Korotkova TM, Haas HL, Brown RE Histamine excites GABAergic cells in the rat substantia nigra and ventral tegmental area in vitro. // Neurosci Lett. 2002 Mar 8;320(3):133-6.

139. Knake S., Vescovi M., Hamer H.H. et al. Intravenous sodium valproate in the treatment of status epilepticus. // American Epilepsy Society 53-rd Annual Meeting, Orlando, Florida, 3-9 December 1999 Epilepsia, 1999; 40, suppl.7: 150.

140. Kreider M.S., Wolfinger B.L., Winokur A. Systemic administration of kainic acid produces elevations in TRH in cat central nervous system. // Regul. Pept., 1990 28, 83-93.

141. Krettek JE, Price JL The cortical projections of the mediodorsal nucleus and adjacent thalamic nuclei in the rat // J Comp Neurol. 1977 Jan 15;171(2):157-91.

142. Kristian T, Pivovarova NB, Fiskum G, Andrews SB Calcium-induced precipitate formation in brain mitochondria: composition, calcium capacity, and retention. // J Neurochem. 2007 Aug;102(4):1346-56

143. Kubek MJ, Garg BP. Thyrotropin-releasing hormone in the treatment of intractable epilepsy. // Pediatr Neurol. 2002 Jan;26(l):9-17.

144. Kubek M.J., Knoblach S.M., Sharif N.A., Burt D.R., Buterbaugh G.G., Fuson K.S. Thyrotropin-releasing hormone gene expression and receptors are differentially modified in limbic foci by seizures. // Ann. Neurol., 1993 33, 70-76.

145. Kubova H, Druga R, Lukasiuk К Suchomelova L, Haugvicova R, Jirmanova I, Pitkanen A. Status Epilepticus Causes Necrotic Damage in the Mediodorsal Nucleus of the Thalamus in Immature Rats. // The Journal of Neuroscience, May 15,2001,27(10):3593-3599.

146. Kubova H, Druga R, Haugvicova R, Suchomelova L, Pitkanen A. Dynamic changes of status epilepticus-induced neuronal degeneration in the mediodorsal nucleus of the thalamus during postnatal development of the rat. // Epilepsia 2002; 43 (Suppl.5): 54-60.

147. Kubova H, Mares P, Suchomelova L, Brozek G, Druga R, Pitkanen A. Status epilepticus in immature rats causes neuronal death, epileptogenesis, and behavioral impairment. // Eur J Neurosci 2004; 19: 3255-3265

148. Kubova H, Mares P, Suchomelova L, et al. Status epilepticus in immature rats leads to behavioral and cognitive impairment and epileptogenesis. // Eur J Neurosci 2004;19:3255-65.

149. Kubova H, Haugvicova R, Suchomelova L, Mares P. Does status epilepticus influence the motor development of immature rats? // Epilepsia. 2000;41 Suppl 6:S64-9.

150. Ma J, Zhang GY. Lithium reduced N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2A tyrosine phosphorylation and its interactions with Src and Fyn mediated by PSD-95 in rat hippocampus following cerebral ischemia. //Neurosci Lett. 2003 Sep 18;348(3): 185-9.

151. Marchi N, Oby E, Batra A, Uva L, De Curtis M, Hernandez N, Van Boxel-Dezaire A, Najm I, Janigro D. In Vivo and In Vitro Effects of Pilocarpine: Relevance to Ictogenesis. // Epilepsia. 2007 Jul 20.

152. Margineanu D.G., Wulfert E. Inhibition by levetiracetam of a non-GABA A receptor-associated epileptiform effect of bicuculline in rat hippocampus. // J. Pharmacol., 1997, 122, 1146-1150.

153. Marini C, Guerrini R. The role of the nicotinic acetylcholine receptors in sleep-related epilepsy. Biochem Pharmacol. 2007 Oct 15;74(8): 1308-14. Epub 2007 Jun 23.

154. Mathern GW LeiteJP Pretorius JK et al Children with severe epilepsy: Evidence of hippocampal neurons losses and abbeant mossy fiber sprouting during postnatal granule cellmigration and differentiation \\ Dev Brain Res 1994 V 78 p 70-80.

155. Mazarati A, Wasterlain CG. Anticonvulsant effects of four neuropeptides in the rat hippocampus during self-sustaining status epilepticus. // Neurosci Lett. 2002 Oct 11;331(2):123-7.

156. Medalia A, Merriam A, Barnett J, Lipton R. Neuropsychological sequelae of partial complex status epilepticus. // Arch Clin Neuropsychol. 1988;3(4):303-11.

157. Meehan SM, Schechter MD. Cocaethylene-induced kindling of seizure effects: cross-specificity with cocaine. // Pharmacol Biochem Behav. 1996 Jun;54(2):491-4.

158. Meldrum В., BrierleyJ. Prolonged status epilepticus in primates: ischemic cell change and its relation to ictal physiological events // Arch. Neurol. 1973. - Vol. 28. - P. 10-17.

159. Milatovic D, Gupta RC, Dettbarn WD Involvement of nitric oxide in kainic acid-induced excitotoxicity in rat brain. // Brain Res. 2002 Dec 13;957(2):330-7.

160. Miller JW, Hall CM, Holland KD, Ferrendelli JA. Identification of a median thalamic system regulating seizures and arousal. // Epilepsia. 1989 Jul-Aug;30(4):493-500

161. Miller JW, Ferrendelli JA. The central medial nucleus: thalamic site of seizure regulation. // Brain Res. 1990 Feb 5;508(2):297-300.

162. Minciacchi D, Granato A. Developmental remodeling of thalamic projections to the frontal cortex in rats. // In: Cellular thalamic mechanisms (Bentivoglio M, Spreafico R, eds), 1988. Amsterdam: Elsevier, pp 502-516.

163. Mizrahi EM. Acute and chronic effect of seizures in the developing brain: lesson from clinical experience // Epilepsia. 1999. - Vol. 40 (Suppl. 1). - P. 42-50.

164. Modrow HE, Holloway FA. Drug discrimination and cross generalization between two methylxanthines. // Pharmacol Biochem Behav. 1985 Sep;23(3):425-9.

165. Morley J.E. Extrahypothalamic thyrotropin releasing hormone (TRH) — its distribution and its functions. // Life Sci, 1979. 25,1539-1550.

166. Morris HH 3rd. Current treatment of status epilepticus. // J Fam Pract. 1981 Dec;13(7):987-91.

167. Morrisett RA, Jope RS, Snead ОС 3rd. Effects of drugs on the initiation and maintenance of status epilepticus induced by administration of pilocarpine to lithium-pretreated rats. // Exp Neurol. 1987 Jul;97(l): 193-200.

168. Nehlig A, Dube C, Koning E. Status epilepticus induced by lithium-pilocarpine in the immature rat does not change the long-term susceptibility to seizures. // Epilepsy Res. 2002 Sep;51(l-2):189-97.

169. Nehlig A, Pereira de Vasconcelos A. The model of pentylenetetrazol-induced status epilepticus in the immature rat: shortand long-term effects. // Epilepsy Res, 1996,26:93-103.

170. Net M., Ho R. Т., Sperlimgire R. EKG abnormalities during partial seizures in refractory epilepsy // Epilepsia. 2000. — Vol. 41. -P. 542-548.

171. Niquet J, Liu H, Wasterlain CG. Programmed neuronal necrosis and status epilepticus. // Epilepsia. 2005;46 Suppl 5:43-8.

172. Noda, Y., Furukawa, K., Kohayakawa, H., Oka, M. Effects of RGH-2202 on behavioral deficits after focal cerebral ischemia in rats. // Pharmacol. Biochem. Behav, 1995. 52, 695-699.

173. Noe KH, Manno EM. Mechanisms underlying status epilepticus. // Drugs Today (Bare). 2005 Apr;41(4):257-66

174. Noyer M, Gillard M, Matagne A, Henichart JP, Wulfert E. The novel antiepileptic drug levetiracetam (ucb L059) appears to act via a specific binding site in CNS membranes. // Eur J Pharmacol. 1995 Nov 14;286(2): 137-46.

175. Ogawa N. Hirose Y„ Mori A., Kajita S., Sato M. Involvement of thyrotropin-releasing hormone (TRH) neural system of the brain in pentylenetetrazol-induced seizures. // Regul. Pept, 1985.12,249-256.

176. Osonoe K, Mori N, Ohno E, Kumashiro H. Effects of thyrotropin-releasing hormone (TRH) on status epilepticus in rats. // No To Shinkei. 1991 Mar;43(3):247-54.

177. Osorio I, Reed RC, Peltzer JN. Refractory idiopathic absence status epilepticus: A probable paradoxical effect of phenytoin and carbamazepine. // Epilepsia. 2000 Jul;41(7):887-94.

178. Oztas B. The influence of nifedipine on blood-brain barrier permeability during bicuculline-induced seizures. // Int J Neurosci. 1999 Aug;99(l-4):105-12.

179. Passata D.M., Tudorache В., Matci M. Cerebral dysfunction reveald by EEG mapping in the shizoform epileptic psychosis // Rom. J. Neurol. Psychiatry. -1991. Vol. 29. - P. 81-98.

180. Perez-Cruz C, Rocha L. Kainic acid modifies mu-receptor binding in young, adult, and elderly rat brain. // Cell Mol Neurobiol. 2002 Dec;22(5-6):741-53.

181. Peterson CJ, Vinayak S, Pazos A, Gale K. A rodent model of focally evoked self-sustaining status epilepticus. // Eur J Pharmacol. 1992 Oct 6;221(l):151-5.

182. Pitkanen A, Nissinen J, Nairismagi J, Lukasiuk K, Grohn OH, Miettinen R, Kauppinen R. Progression of neuronal damage after status epilepticus and during spontaneous seizures in a rat model of temporal lobe epilepsy. // Prog Brain Res. 2002;135:67-83.

183. Pizzi, M., Boroni, F., Benarese, M., Moraitis, C., Memo, M., Spano, P. Neuroprotective effect of thyrotropin-releasing hormone against excitatory amino acid-induced cell death in hippocampal slices. // Eur. J. Pharmacol, 1999. 370,133-137.

184. Przewtocka В., Labuz D., Mika J., Lipkowski A., van Luijtelaar G., Coenen A., Lason W. Protective effects of TRH and its analogues in chemical and genetic models of seizures. // Pol. J. Pharmacol, 1997. 49, 373-378.

185. Rafiq A, Gong QZ, Lyeth BG, DeLorenzo RJ, Coulter DA. Induction of prolonged electrographic seizures in vitro has a defined threshold and is all or none: implications for diagnosis of status epilepticus. // Epilepsia. 2003 Aug;44(8):1034-41.

186. Ray JP, Price JL. The organization of the thalamocortical connections of the mediodorsal thalamic nucleus in the rat, related to the ventral forebrain-prefrontal cortex topography // J Comp Neurol. 1992 Sep 8;323(2):167-97.

187. Reibel S, Andre V, Chassagnon S, et al. Neuroprotective effects of chronic estradiol benzoate treatment on hippocampal cell loss induced by status epilepticus in the female rat. // Neurosci Lett 2000; 281: 79-82.

188. Rekling JC. Interaction between thyrotropin-releasing hormone (TRH) and NMDA-receptor-mediated responses in hypoglossal motoneurones. // Brain Res. 1992 Apr 24;578(l-2):289-96.

189. Renaud LP, Blume HW, Pittman QJ, Lamour Y, Tan AT. Thyrotropin-releasing hormone selectively depresses glutamate excitation of cerebral cortical neurons. // Science. 1979 Sep 21 ;205(4412): 1275-7.

190. Rhee JS, Jin YE, Akaike N. Developmental changes of GABA(A) receptor-chloride channels in rat Meynert neurons. // Brain Res. 1998 Jan l;779(l-2):9-16.

191. Ribacoba R, Salas-Puig J, Gonzalez C, Astudillo A. Characteristics of status epilepticus in MELAS. Analysis of four cases., // Neurologia. 2006 Jan-Feb;21(l):l-11.

192. Rivera С., Voipio J., Payne J.A. et al. The K+/C1- co-transporter KCC2 renders GABA hyperpolarizing during neuronal maturation // Lett, to Nature. 1999. V. 397. P. 251-255.

193. Rocha L, Maidment NT. Opioid peptide release in the rat hippocampus after kainic acid-induced status epilepticus. // Hippocampus. 2003;13(4):472-80.

194. Rosenow F., Arzimanoglou A., Baulac M. Recent developments in treatment of Status epilepticus: A review // Epileptic disorders. 2002. -Vol. 4 (Suppl. 2). - P. 41-49.

195. Rosenthal, R.E., Hamud, F., Fiskum, G., Varghese, P.J. and Sharpe, S. Cerebral ischemia and reperfusion: prevention of brain mitochondrial injury by lidoflazine. // J. Cereb. Blood Flow Metab., 7 (1987) 752-758.

196. RothnerAD, Erenberg G. Status epilepticus. // Pediatr Clin North Am. 1980 Aug;27(3):593-602.

197. RungeJW. Emergency treatment of status epilepticus. // Neurology 1996;46 (suppl l):S20-3.

198. Rutecki PA, Yang. Ictal epileptiform activity in the CA3 region of hippocampal slices produced by pilocarpine. //J Neurophysiol. 1998 Jun;79(6):3019-29.

199. Saakian S.A., Kritskaya I.I. New anticonvulsant drugs. W01997RU00350 19971105, 14-051999.

200. Sagar HJ, Oxbury JM. Hippocampal neuron loss in temporal lobe epilepsy: correlation with early childhood convulsions. // Ann Neurol, 1987, 22:334 -340.

201. Sakai S., Baba H, Sato M., Wada J.A. Effect of DN-1417 on photosensitivity and cortically kindled seizure in Senegalese baboons, Papio papio. // Epilepsia, 1991, 32,16-21.

202. Sankar R, Shin DH, Liu, H, Mazarati A, Pereira de Vasconcelos A, Wasterlain CG. Patterns of status epilepticus-induced neuronal injury during development and long-term consequences. // J Neurosci, 1998,18:8382- 8393.

203. Sankar R, Shin DH, Wasterlain CG. Serum neuron-specific enolase is a marker for neuronal damage following status epilepticus in the rat. // Epilepsy Res 1997; 28: 129-136.

204. Sankar R, Wasterlain CG, Sperber ES Seizures-induced changes in the immature brain./ Brain development and epilepsy.// Eds Ph Swartzkrionn , S Moshe, J Noebels, J Swann. NY: Oxford Univ Press 1995 p 268-288,

205. Sawada H, Ibi M, Kihara T, et al. Estradiol protects mesencephalic dopaminergic neurons from oxidative stress-induced neuronal death. // J Neurosci Res 1998; 54: 707-19.

206. Scantlebury MH, Heida JG, Hasson HJ, Veliskova J, Velisek L, Galanopoulou AS, Moshe SL Age-dependent consequences of status epilepticus: animal models. // Epilepsia. 2007; 48 Suppl 2:75-82.

207. Scarpa, A., Brinley, F.J., Tiffert, Т., Dubyak, G.R., Metallochromic indicators of ionized calcium. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1978. 307, 86-112.

208. Schaffner AE, Behar T, Nadi S, Smallwood V, Barker JL. Quantitative analysis of transient GAB A expression in embryonic and early postnatal rat spinal cord neurons. // Brain Res Dev Brain Res. 1993 Apr 16;72(2):265-76.

209. Scharfman HE, Goodman JH, Rigoulot MA, Berger RE, Walling SG, Mercurio TC, Stormes K, Maclusky NJ. Seizure susceptibility in intact and ovariectomized female rats treated with the convulsant pilocarpine. // Exp Neurol. 2005 Nov;196(l):73-86.

210. Scharfman Helen E, Sollas Anne L., Smith Karen L, Jackson Meyer В., Goodman Jeffrey H. Structural and functional asymmetry in the normal and epileptic rat dentate gyrus // Wiley InterScience, 2002, V 454, Issue 4, P 424-439

211. Schechter MD, Meehan SM. Serotonergic mediation of cocaine seizures in mice. // Pharmacol Biochem Behav. 1995 Jun-Jul;51(2-3):313-6.

212. Schindler CK, Shinoda S, Simon RP, Henshall DC. Subcellular distribution of Bcl-2 family proteins and 14-3-3 within the hippocampus during seizure-induced neuronal death in the rat. Neurosci Lett. 2004 Feb 19;356(3): 163-6.

213. Schuchtnann S, Buchheim K, Meierkord H, Heinemann JJ. A relative energy failure is associated with low-Mg2+ but not with 4-aminopyridine induced seizure-like events in entorhinal cortex. // J Neurophysiol. 1999 Jan;81(l):399-403.

214. Schuchmann S, Schmitz D, Rivera C, Vanhatalo S, Salmen B, Mackie K, Sipila ST, Voipio J, Kaila K. Experimental febrile seizures are precipitated by a hyperthermia-induced respiratory alkalosis. // Nat Med. 2006 Jul;12(7):817-23.

215. Schwartz-Giblin S, Korotzer A, Pfaff DW. Steroid hormone effects on picrotoxin-induced seizures in female and male rats. // Brain Res 1989; 476: 240-7.

216. Scott RC, Besag FMC, Neville BGR. Buccal midazolam and rectal diazepam for treatment of prolonged seizures in childhood and adolescence: a randomised trial. // Lancet 1999;353:623-6.

217. Seegers JJ, Potschka H, Loscher W. Transient increase of P-glycoprotein expression in endothelium and parenchyma of limbic brain regions in the kainate model of temporal lobe epilepsy. // Epilepsy Res. 2002 Oct;51(3):257-68.

218. Seress L, Ribak CE. The development of GABAergic neurons in the rat hippocampal formation. An immunocytochemical study. // Brain Res Dev Brain Res. 1988 Dec 1;44(2):197-209.

219. Setkowicz Z, Klak K, Janeczko K. Long-term Changes in Postnatal Susceptibility to Pilocarpine-induced Seizures in Rats Exposed to Gamma Radiation at Different Stages of Prenatal Development. //Epilepsia. 2003 C>ct;44(10):1267-73.

220. Shaner DM, McCurdy SA, Herring MO, et al. Treatment of status epilepticus: a prospective comparison of diazepam and phenytoin versus phenobarbitol and optional phenytoin. // Neurology 1988;38:202-7.

221. Shorvon SD. Status epilepticus—its clinical features and treatment in children and adults. // Cambridge University Press, 1994:175-292.

222. Shorvon S. The management of status epilepticus // In: «Epilepsy». A.Hopkins et al. (Eds) Second edition. London, 1995. - P. 331-354.

223. Sinha S, Naritoku DK. Intravenous valproate is well tolerated in unstable patients with status epilepticus. // Neurology 2000; 55:722-4.

224. Skinner MH. Adverse reactions and interactions with theophylline. // Drug Saf. 1990 Jul-Aug;5(4):275-85.

225. Slovitor R.S. Status epilepticus induced neuronal injury and network reorganization // Epilepsia. - 1999. - Vol. 40 (Suppl. 1).- P. 34-39.

226. Snead ОС 3rd. Pharmacological models of generalized absence seizures in rodents. // J Neural Transm Suppl. 1992;35:7-19.

227. Sorel L, Mechler L, Harmant J. Comparative trial of intravenous lorazepam and clonazepam in status epilepticus. // Clin Ther 1981;4:326-36.

228. Sperber EF Sutula TP Moshe SL Synaptic sprouting following kndled seizures in ages related // Epilepsia 1990, V 31 p 633-637.

229. Sperber EF, Haas KZ, Stanton PK, Moshe SL. Resistance of the immature hippocampus to seizure-induced synaptic reorganization. // Dev Brain Res 1991; 60: 88-93.

230. Stringer JL, Erden F. In the hippocampus in vivo, nitric oxide does not appear to function as an endogenous antiepileptic agent.Exp Brain Res. 1995;105(3):391-401.

231. Sullivan JE, Dlugos DJ. Idiopathic Generalized Epilepsy. // Curr Treat Options Neurol. 2004 May;6(3):231-242.

232. Suchomelov'a L, Kubov'a H, Haugvicov'a R,et al. Are acute changes after status epilepticus in immature rats persistent? Physiol Res 2002;51:185-92.

233. Takeuchi Y, Takano T, Abe J, Takikita S, Ohno M. Thyrotropin-releasing hormone: role in the treatment of West syndrome and related epileptic encephalopathies. // Brain Dev. 2001 Nov;23(7):662-7.

234. The Status Epilepticus Working Party. The treatment of convulsive status epilepticus in children. // Arch Dis Child 2000;83:415-419

235. Toung TK, Hum PD, Traystman RJ, et al. Estrogen decreases infarct size after temporary focal ischemia in a genetic model of type 1 diabetes mellitus. // Stroke 2000; 31: 2701-6.

236. Towne AR, DeLorenzo RJ. Use of intramuscular midazolam for status epilepticus. // J Emerg Med 1999;17:323-8

237. Treiman DM. Pharmacokinetics and clinical use of benzodiazepines in the management of status epilepticus. // Epilepsia 1989;30 (suppl 2):S4-10

238. Treiman DM. Status epilepticus. In: Laidlaw J, Richens A, Chadwick D, eds. // A Textbook of Epilepsy, 4th edn. Edinburgh, Churchill Livingstone, 1993:205-20

239. Treiman DM. Status Epilepticus. // Baillieres Clin Neurol 1996;5:821-39.

240. Tsenov G, Mares P. Depression and/or potentiation of cortical responses after status epilepticus in immature rats. // Physiol Res. 2006 Aug 22.

241. Tsuji S, Akamatsu N. Treatment of status epilepticus // Rinsho Shinkeigaku. 2001 Dec;41(12):1097-9.

242. Turski WA, Cavalheiro EA, Schwartz M, Czuczwar SJ, Kleinrok Z, Turski L. Limbic seizures produced by pilocarpine in rats: behavioral, electroencephalographic and neuropathological study. Behav Brain Res 1983 32:778 -782.

243. Turski WA, Czuczwar SJ, Kleinrok Z, Schwarz M, Turski L. Intraamygdaloid morphine produces seizures and brain damage in rats. // Life Sci. 1983;33 Suppl 1:615-8.

244. Uthman BM, Wilder BJ, Ramsay RE. Intramuscular use of fosphenytoin: an overview. // Neurology 1996;46 (supp l):S24-8

245. Valente SG, Naffah-Mazzacoratti MG, Pereira M, Silva I, Santos NF, Baracat EC, Cavalheiro EA, Amado D. Castration in female rats modifies the development of the pilocarpine model of epilepsy//Epilepsy Res. 2002 May;49(3):181-8.

246. Veena S. Kasture, V К Deshmukh, С. T. Chopde Anxiolytic and anticonvulsive activity of Sesbania grandiflora leaves in experimental animals // Wiley InterScience, 2000, V 16, Issue 5, P 455-460

247. VelisekL, Veliskova J Estrogen treatment protects GABA(B) inhibition in the dentate gyrus of female rats after kainic acid-induced status epilepticus. // Epilepsia. 2002;43 Suppl 5:146-51.

248. Veliskova J, Velisek L, Galanopoulou AS, et al. Neuropro-tective effects of estrogens on hippocampal cells in adult female rats after status epilepticus. // Epilepsia 2000; 41: S30-5.

249. Vergnes M, Marescaux С Cortical and thalamic lesions in rats with genetic absence epilepsy. // J Neural Transm Suppl. 1992;35:71-83.

250. Vezzani A, Moneta D, Richichi C, Aliprandi M, Burrows SJ, Ravizza T, Perego C, De Simoni MG. Functional role of inflammatory cytokines and antiinflammatory molecules in seizures and epileptogenesis. //Epilepsia. 2002;43 Suppl 5:30-5.

251. ViningEP, Freeman JM. Status epilepticus. // Pediatr Ann. 1985 Nov; 14(11):764-5, 768-70.

252. Walker MC, Tong X, Brown S, et al. Comparison of single and repeated dose pharmacokinetics of diazepam. // Epilepsia 1998;39:283-9.

253. Wasterlain CG, Niquet J, Thompson KW, Baldwin R, Liu H, Sankar R, Mazarati AM, Naylor D, Katsumori H, Suchomelova L, Shirasaka Y Seizure-induced neuronal death in the immature brain. // Prog Brain Res. 2002;135:335-53.

254. Woolley CS, Weiland NG, McEwen BS, et al. Estradiol increases the sensitivity of hippocampal CA1 pyramidal cells to NMDA receptor-mediated synaptic input: correlation with dendritic spine density. // J Neurosci 1997; 17: 1848-59.

255. Woolley CS, Schwartzkroin PA. Hormonal effects on the brain. // Epilepsia 1998; 39: S2-8.

256. White JR, Santos CS. Intravenous valproate associated with significant hypotension in the treatment of status epilepticus. // J Child Neurol 1999;14:822-3

257. Whitty С, Taylor M. Treatment of status epilepticus. // Lancet 1949;ii :591—4.

258. Winstanley PA, Newton CR, Pasvol G, et al. Prophylactic phenobarbitone in young children with severe falciparum malaria: pharmacokinetics and clinical effects. // Br J Clin Pharm 1992;33:149-154.

259. Yarbrough G.G. TRH potentiates excitatory actions of acetylcholine in cerebral cortical neurons. //Nature, 1976, 263, 523-524.

260. Yatsugi S., Yamamoto M. Anticonvulsive properties of YM-14673, a new TRH analogue, in amygdaloid-kindled rats. //Pharmacol. Biochem. Behav, 1991. 38, 669-672.

261. Yoshida M., Izumi K., Nakanishi T. Effects of thyrotropin releasing hormone (TRH) on glutamate-induced seizures in rats. // Tohoku J. Exp. Med, 1987. 152, 311-317.

262. Zahn C. Catamenial epilepsy: clinical aspects. //Neurology 1999; 53: S34-7.

263. Ziylan YZ, Lefauconnier JM, Ates N, Bernard G, Bourre JM Age-dependent alteration in regional cerebrovascular permeability during drug-induced epilepsy. // Mech Ageing Dev. 1992 Mar l;62(3):319-27.

264. Zhong J, Petroff OA, Prichard JW, Gore JC. Barbiturate-reversible reduction of water diffusion coefficient in flurothyl-induced status epilepticus in rats. // Magn Reson Med. 1995 Feb;33(2):253-6.

265. Перечень использованных сокращений.

266. BDNF Brain-derived neurotrophic factor -фактор роста нервных клеток

267. ERK extracellular signal-regulated kinase - внеклеточная сигнал регулируемая киназа

268. PIA L-фенилизопропиладенозин

269. NMDA N-methyl d-aspartate рецептор

270. PBN N- терт-бутил-альфа-фенилнитрон

271. PGP P-glycoprotein - многофункциональный переносчик Р-гликопротеинаrTMS rapid transcranial magnetic stimulation - транскраниальная магнитная стимуляция

272. SWD spike-wave discharges - спайк-волновые разряды

273. АМРА alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionate1. АМФ аденозинмонофосфат1. АТФ аденозинтрифосфат

274. АЭП антиэпилептические препараты

275. ГАМК у-аминомасляная кислота

276. ГОМК у-оксимасляная кислота

277. ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

278. КПП крестообразный приподнятый лабиринт1. ЛП латентный период

279. MPT mitochondrial permeability transition - резкое повышение внутренней мембраны митохондрий

280. ПД постнатальный день развития (крысенка) ПТЗ - пентилентетразол

281. ТРГ тиреотропин-рилизинг-гормон, тиролиберин

282. ЦНС центральная нервная система

283. ЭДТА этилендиаминтетраацетиловая кислота1. ЭКГ электрокардиограмма

284. ЭС, эпистатус эпилептический статус1. ЭЭГ электроэнцефалограмма