Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Миксоболез толстолобиков (биология возбудителя, эпизоотология, профилактика)

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Миксоболез толстолобиков (биология возбудителя, эпизоотология, профилактика)"

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧШЫЮСадО^ТЕЛЬШЫ ИНСТИТУТ 03ЕШ0Г0 И РЕЧНОГО РЫШОГО ХОЗЯЙСТВА ■ • 0.1 (ГОСНИОРХ)

На правах рукописи УДК 597.554.3.:597-169:576.893.1

ЧЕПУРНАЯ Алевтина Григорьевна

ШКОЭВОЛЕЗ ТОЛСТОЛОБКОВ (ЕШОГИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ, ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ПРОФИЛАКТИКА)

Специальность 03.CO.IS - Паразитология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург,1994

Работа выполнена на кафедре рыбоводства Астраханского технического института рыбной промышленности и хозяйства (АТИРПиХ)

Научные руководители: доктор биологических наук,

профессор

1В.А.Мусселиус Г

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник

О.Н.Иачис

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор

О.Н.Бауер

кандидат биологических наук

Б.Н.Воронин

Идущее учреждение: Каспийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства

на заседании специализированного Совета К 117.03.01 при Государственном научно-исследовательском институте озерного и речного рыбного хозяйства по адресу: 199053, г.Санкт-Петербург, наб.Макарова, 26

С диссертацией мокно ознакомится в библиотеке ГосНИОРХ

Защита состоится

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат биологических наук

М.А.Дементьеве

ч И Е л Е Н И Е

Акт^альность^темы^ Одним из методов интенсификации рыбного хозяйства, способствующих повышению рыбопродуктивности водоёмов, является акклиматизация пенных видов рыб. Такими видами являются растительноядные рыбы дальневосточного комплекса, вселенные ь пруды и другие водоемы Европейской части России, а также в водоемы Украины, Казахстана, Узбекистана и других стран СНГ еще е 50-х годах.

Растительноядные рыбы - это рыбы низкого трофического уровня. Применение поликультуры растительноядных ркб позволяет утилизировать значительную часть первичной продукции, образующейся в водоемах, создавать выгодную в биоэнергетическом и хозяйственном отношении экосистему, в которой товарную продукцию получают у не на втором звене пищевой пели (.Виноградов, 15Ь5).

Однако вселение растительноядных рыб в водоемы России и других стран СНГ породило целый ряд проблем, связанных с тем, 1то вместе с рыбаки е новый ареал их обитания был загезен и целый ряд паразитов (Мусселиус,1973). к числу таких паразитов от-юсится и миксоспорея МухоЬо1из рау1оузки ( лсьгаегоу,1354), зпешфичный паразит набр белого Нурорь-ььагиииьгьуз тоН-и и пестрого Ах^в-ЫсЬ-Шуа поЬШв толстолобиков. 3 дер-зые десять лет после ингродукпии растительноядных рыб М.рау1оуа-:11 в прудовых хозяйствах Западной и Восточной Европы всгре-шлся в незначительных количествах и не имел существенного эли-¡оотического значения. За последние 40 лет этот паразит расседался в водоемах России, ¿¡енгрии, Чехословакии, Германии и дру-'их стран, располокенных в разных климатических зонах, где продлится культивирование толстолобиков и б некоторых прудовых озяйстиах стал вызывать гибель рыб (Сапокников,197'о и др.).

- "¿ -

ti KonL'e 70-х годов Ы.paviovskii был впервые зарегистрирс ван б Зональном рыбопитомнике Астраханской области и стал быстро распространяться по другим хозяйствам дельты ¿олги.

Однако, несмотря на сравнительно частую встречаемость этого паразита в рыбоводных хозяйствах страны, некоторые этапы егс низненного цикла прододкают оставаться малоизученны?.®, что затрудняет разработку мер профилактики и борьбы с вызываемым им миксоболезом.

ШЗЬ§0. Целью нашего исследования явились изучение биологии М. paviovskii и разработка мер профилактики болезни. При этом необходимо было решить следующие задачи:

- установить длительность кизненного никла паразита;

- выяснить пути заракения толстолобиков и определить инвазионные качества слор паразита в зависимости от сроков пребывания их во внешней среде;

- изучить сезонную и возрастную динамику зараженности толстолобиков этим паразитом;

- изучить изменчивость некоторых морфологических признака: паразита в зависимости от вида толстолобиков, сезона и локализации паразита;

- изучить влияние паразита на организм хозяина;

- разработать рекомендации по профилактике миксоболеза толстолобиков.

Н^чная^новизнгь. л результате проведенных исследований изучен жизненный шкл паразита, выяснены сроки и пути заражения толстолобиков, ¿первые установлено, что заракение паразито может происходить через жабры. Определено инвазионное качество спор; установлено, что споры могут сохранять кизнеспособность ь течение о месяцев. шервые выяснено, что водные беспозвоночные могут элшдинироьать споры М. paviovskii . Установлено, что

элигохета не являются промену точным хозяином ы.рауюувки , а

играют роль транспортного хозяина, впервые изучена изменчивость

/

некоторых морфологических признаков паразита к установлено, что появление аномальных спор происходит б результате ухудшения физиологического состояния рыбы, за счет несбалансированного питания и неблагоприятных условий среды обитания. Установлены летальные дозы зараженности паразитом для личинок и сеголетков толстолобиков. Впервые изучено действие едкого натра на споры М. рау-1оуб1С11 •

П£щстическое^значени§. Сведения по биологии паразита необходимы при опенке эпизоотической ситуации рыбоводных хозяйств. Половительный опыт применения едкого натра в качестве дезинфи-цируицего средства в борьбе с миксоболезом монет быть использовано на рыбоводных хозяйствах. На основании проведенных исследований разработана "¿ременная инструкция по диагностике и ликвидации миксоболеза толстолобиков", которая внедрена на Чаганском рыбопитомнике Ас траханры бакко лхо зс овза.

Ащ)дбацкя^аботы._ Основные полонения и результаты диссертационной работы долоЕены на IX всесоюзном совещании по паразитам и болезням рыб (Петрозаводск,1931), меялабораторных семинарах ихтилатологов ШМИПРХ, ГосНИОРХ и УкрНИИРХ (Ленинград, 1988; Рыбное,1989,1992), ежегодных конференциях профессорско-преподавательского состава АстрыбЯГУЗа (Астрахань,19«5-1992).

З^бликащи.. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

О^ем^и^с а^щсседтаики. Диссертация состоит из

введения, 7 глав, выводов, списка литературы и приложения. В рукой иск 209 страниц машинописного текста, ои таблиц, 4'и ри-зунков. Список литературы включает перечень 127 работ на русском и 64 работы на иностранных языках.

ГЛАВА I. СОСТОЯНИЕ ИЗУЧЕННОСТИ МИКСОС1ЮРЕЙ • (Обзор литературы)

В главе приводятся данные по биологии, экологии ыиксоспо-рей в свете последних работ отечественных и зарубежных авторов Особое внимание уделено изученности кизненного цикла ыиксоспо-рей и наиболее дискуссионному вопросу о путях заражения рыб ми соспореями. Приводятся литературные данные о наличии промекуто ного хозяина в цикле развития миксоспорей и о паразито-хозяин-ных взаимоотношениях. При анализе состояния изученности миксо-спореи М. рау1оУ8кИ у толстолобиков приводятся литературные д ные о распространении, особенностях локализации, биологии пара зита в разных климатических зонах. Отмечено, что биология ыикс спорей М.рау1оузк±± ранее была недостаточно изучена, что обусловило необходимость проведения исследований в этом направлени

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Материалом для настоящей работы послужили результаты иссл довавий, проведенных в 1984-1992 гг. в прудовых хозяйствах дел ты ¿олги. Экспериментальные исследования по изучению биологии, кизненного цикла миксоспореи, также по разработке мер профилак тики проведены на Чаганском рыбопитомнике. Основным объектом и следования служили белый и пестрый толстолобики.и их гибриды. Исследованию были подвергнуты все возрастные группы толстэлоби ков (от личинок до 6+) в течении всех сезонов года.

Сбор и обработка паразитологического материала проводилас по общепринятым методикам (Догель,1933; Еыховская-Павловская, 1ЭВ5; Мусселиус и др.,1983).

Методом полного и неполного паразитологического вскрытия было исследовано '¿ЬЬ7 экз.рыб. Проведено В серий экспериментов

в которых использовано 5000 экз.рыб Сот личинок до I+).

Для изучения жизненного цикла паразита толстолобиков (от личинок до годовиков) отсаживали в аквариумы, ъ инкубационные аппараты лЯШПРХ; кроме того опыты проводили в зимовальных прудах площадью 1,4 га, где после зимовки рыболосадочного материала (годовиков) споры миксослорей могли остаться на лоне пруда; для опытов использовали также пруды - нерестэвики площадью 0,25 га и прединъекнионные пруды площадью 0,01 га.

длительность опытов по изучению жизненного никла паразита составляла от 7 дней до 10,5 месяцев. Продолжительность опытов по изучению роли водных беспозвоночных в элиминации спор паразита, влиянию дезинфицирующих средств на споры составляла от нескольких минут до 1,5 - 2 месяцев.

Для наблюдения за характером распределения пист паразита на жабрах жаберную дугу разделили на три участка: основание жаберных лепестков; средняя часть; концы жаберных лепестков, для наблюдения за сроком соэреЕания паразита шсты разделили на три группы! "крупные", размером 300-500 мкм; "средние" - 200-300 мкм; "мелкие" - 100 - 200 мкм и менее.

При исследовании подсчитывали абсолютное количество аист на всех жаберных дугах с обеих сторон. Кроме того регистрировали количество лист на каждой жаберной дуге. С лелью нахождения snop паразита исследовали .кроме жабр другие органы: кишечник, зердле, селезенку, кожу, мышиы, кровь, почки.

Для изучения морфологии спор изготавливали глилерин-желати-ювые препараты (Донец,Шульман,1973). Для оценки достоверности зазличий размеров спор паразита в зависимости от сезона, топографии лист паразита использовали критерий Стьюдента (Ивантер, ;971; Лакин,1973). Статистическую обработку материала эсуществля-[и на 3 JA EC-IOob.

Для определения сроков развития и режима хранения спор в течении года листы шксоспорей после снятия с яабр сеголетков толстолобиков тщательно очищали от остатков жабр и собирали в от-стоенную и дистиллированную воду.

Заражение рыб проводили несколькими способами: подсаживали стерильных рыб к больным и выдерживали б течении нескольких месяцев; добавляли в акьариум взвесь свежих спор, собранных туг же с больных рыб; добавляли взвесь выдержанных спор ( от нескольких месяцев до 2 лет) в воду к стерильным рыбам; выдерживали зоопланктон в суспензии спор совместно в течении нескольких часов и после этого скармливали толстолобикам; добавляли олигохет, выдержанных в суспензии спор к стерильным толстолобикам, тем самым проверяя возможность наличия промежуточных хозяев в стадии развития М. рау!оуак11 ; добавляли олигохет, собранных с зараженного пруда; добавляли остатки жабр погибших после зимовки рыб, собранных с ложа пруда; добавляли грунт и воду из зараженного пруда; устанавливали в пруду садки со стерильными личинками. Об успешности заражения судили по результатам паразитологическэго исследования опытных рыб.

По ходу экспериментов проводили фиксацию опытных и контроль ных рыб в нейтральном 10 £-ном формалине для дальнейшей гистологической обработки по общепринятым методикам (Пирс,1965). В качестве фиксатора плазмодиальных стадий паразита использовали кид кость Карнуа и в 'дальнейшем окрашивали препараты по Фельгену.

Гематологические исследования выполнялись по общепринятым методикам (кусселиус и др.,19вЗ).

Экспериментально ь мккроаквариумах, а также в прудах площадью 1,4 га проводили выяснение действия едкого натра и гипохло-рита кальоия на споры Ы. рау1оузк11 , а также на олигохет, которые в ыассе скапливаются в илистых отложениях прудов.

Для выяснения сроков заранения 2-3-х дневных стерильных личинок толстолобиков после 2,5,7,13,15,20 дней содержания в зимовальном пруду, где ранее зимовали годовики и ежегодно наблюдалось 100 % заражение их М.рау1оузкИ после чего их переводили в аквариумы. Наблюдения за сроками заражения проводилось параллельно ежедневно на личинках из зимовального пруда (по 20 экз.) и из каждого аквариума (по 10 экз.).

Гидрохимические и гидробиологические исследования проводили по общепринятым методикам.

ГЛАВА 3. КРАТКАЯ ШЗШ-ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ, КЛИМАТИЧЕСКАЯ И ЭШ!ЗООТОЛОШЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЧАГАЕСКОГО РЫБОПИТОМНИКА.

Чаганский рыбопитомник распо ложен в 2 км запада ее с.Чаган и в 25 да юго-восточнее г.Астрахани, на берегу р.Старая Волга.

Климат в этом районе умеренно-континентальный с холодной зимой и жарким летом. Продолжительность безморозного периода составляет в среднем 250 дней, аегеташонный период со среднесуточной температурой выше 10° начинается с середины апреля и продолжается до октября, составляя 180 суток.

Рыбопитомник расположен на пойменных, луговых, суглинистых, глинистых и иловых почвах разной степени засоления. Общая дло-цадь прудов рыбопитомника 282,4 га, в котором выростные пруды ¡оставляют 218,5 га. Источником водоснабжения прудов является ¡.Старая Волга. Объектом выращивания являются карп, белый и гестрый толстолобик,белый амур. Рыбопитомник снабжает посадоч-шм материалом колхозы Астраханской области. Личинок карпа и >астительноядных рыб получают заводским методом. хЗ виду отсутст-1ия мальковых прудов, личинок растительноядных рыб подращивают

е течение двух недель ь зимовальных прудах, что является нарушением нормального биотехнического процесса. Молодь карпа выращивают без подраидаания.

Мощность рыбопитомника свыше II млн.годовиков в год, личинок карпа и растительноядных рыб - 150 млн.шт.

В период наших исследований температурные условия имели сходный характер. Так, в период подращивания растительноядных рыб температура воды в зимовальных прудах колебалась от 21,0°-

О о

26,2 и составляла в среднем 23,06 . Температура воды в выростных прудах характеризуется стабильным повышением в июле-август; до 27 - 29°и, как правило, пониаением температуры воды ниже 1В: к концу сентября.

Содержание растворенного в воде кислорода в зимовальных прудах при подравнивании растительноядных рыб изменялось от 4,5 до 9,3 мг/л, но в отдельных прудах, где развивались лептестерт кислород понижался до 2,6 от/л. В выростных прудах содержание в воде кислорода изменялось от 3,2 до 6,7 ыг/л и, как правило, при повышении температуры еоды в июле-августе выше 27°, содержание кислорода в воде кратковременно понижалось в отдельных прудах ниже 2 мг/л.

Вода во всех прудах характеризовалась слабощелочной-щелочной реакцией. Минерализация вода в прудах колебалась от 192,6593,0 мг/л. Таким образом в целом гидрохимический режим в прудах Чаганского рыбопитомника был близок к оптимальным параметрам и был благоприятен для выращивания молоди карпа и растител. ноядных рыб.

Фитопланктон в прудах разнообразен и представлен 54 видами. Доминируют зеленые водоросли - 29 видов (Зайцев, Колобова, 19сЗЬ). Зоопланктон представлен 53 видами (Киселева,198а). Об-

пая среднесезонная биомасса зоопланктона во всех исследуемых выростных прудах варьировала от 0,36-12,45 г/м^.

Главными представителями бентоса в выростных прудах были хирономиды, олигохеты, моллюски, ¿едущее место в бентосе занижают хирономиды - 26 видов (Зинченко,оайиев,15а?).

При подращивании личинок растительноядных рыб средняя Зиомасса зоопланктона колебалась от 0,23 - 11,1 г/}/*. Из бентос-дых организмов преобладали олигохеты из сем.тиМ.га^ае.

Паразитофауна карпа и растительноядных ркб представлена 37 видами. доминируют паразиты с прямым никло?.; развития: ресничные, моногенеи, паразитические рачки. Паразитофауна карпа 1редставлена 20 видаш;. Среда них доминируют ресничные и моногенеи р. Сасгу1с^гиз.

У белого амура зарегистрировано 17 видов. Потенциальную эпасность для белого амура представляют рачки р.Ъегпаеа и р. Ипе^азИиз.

У толстолобиков обоих видов обнаружено 17 видов паразитов. Цкрокое распространение у толстолобиков имеют миксоспореи ь:ухо-ю1из рауХоузкИ .особенно на первом году низни. За период •^следований вспышки миксоболеза у толстолобиков отмечены в [9Ь5, 19В6, 19Ь7 гг.

ГЛАсА 4. ДИНАМИКА ЗАРАЖЕНИЯ ТОЛСТОЛОБЖО^ и^АУЬОЧвКИ

Б главе дан анализ возрастной и сезонной динамики заражения толстолобиков миксоспореей ли рау1оузкИ , показаны лока-шзашя и развитие паразита на каберных дугах.

М.рау1оУ8кИ встречается у толстолобиков разного воз-эаста: от личинок до пятилетних особе»! (табл.1). Большая пред-

расположенность к заражению паразитом отмечена у молода этих рыб. У рыб старшего возраста Ы. рау1оузкИ встречается единичнс Особенно опасен паразит на первом году жизни. У личинок в начаг ный период заражения на стадии плазмэтошш при интенсивности ин ваззи 50 - 150 иист ка жаберную дугу гибель достигает 80-100 %

Таблица I.

возрастная динамика заражения толстолобика М. рау1оузкИ

Пестрый толстолобик

Белый толстолобик

возраст •___— И.И. Э.И.

Э.И. • и.и.

____________ __1__Ъ____^_экз.______:___ Jg___ ___:___экз.

100 1-500 100 1-400

Малыш 100 40-2000 100 10-1600

IG0 500-5840 70 50-2560

I" 100 200-2000 60 10-50

1+ 70 I0C-IB00 60 10-20

2+ - 3+ 60 10 - 35 - -

4+ 50 1-20 — —

- 6+

Пестрый толстолобик при выращивании в прудах более восприимчив к зарааевию М. paviovskii, чем белый толстолобик. Только на первом году жизни (август) процент заражения и интенсивность ин ва'зии у обоих толстолобиков бывает одинакова, а в дальнейшем, начиная со второго года, у белого толстолобика количество паразитов wi. paviovskii ка жабрах резко сокращается.

ii естественных условиях, когда адаптация ыкксоспорей проходит i. условиях нормальной физиологии хозяина, такой высокой зараженности tie наблюдалось. Так, у двухлеток - трехлеток

пестрого и белого толстолобиков, выловленных ь низоььях р.шл-ги (6 экз.) М.рау1оузкг! вообще не был зарегистрирован.

Анализ сезонной динамики заражения показывают, что личинки толстолобиков заражаются M.pavlovslcii в июне при температуре воды выше 21°/ Тер.23.06°/. ШерЕые установлено, что у личинок плазмодии паразита развиваются сначала в жаберных тычинках, а позднее в основании жаберных лепестков. По-видимому, когда каберный аппарат недостаточно развит, плазмодии паразита находят благоприятные условия для развития з местах ближе к жаберной артерии.

л

13 середине июля при средней температуре 26 у молоди толстолобиков, при средней длине дела пестрого толстолобика 7,5 см и массе 8,8 г и при средней длине белого толстолобика 6,9 см и массе 7,9 г начинается пропесс спорообразования. Опытным путем установлено, что процесс спорообразования ускоряется при повышении температуры. Развитие лист на жаберных лепестках происходит неравномерно, и основании жабервогэ лепестка формируются "крупные" листы, в средней части "средние", на конлах жаберных лепестков- "мелкие", впервые нами установлено, что рассеивание происходит не только за счет выхода отдельных спор в окружающую среду, но и отторжения целиком созревшей листы со зрелыми спорами в просвет между жаберными лепестками. Такое явление отмечено как в случаях высокой интенсивности заражения, так я при незначительной инвазии. У молоди пестрого толстолобика рассеивание спор происходит в третьей декаде июля - первой .декаде августа яри средней температуре 24,2°; у молоди белого толстолобика основное рассеивание происходит во второй-третьей декаде августа зри средней температуре 24°. У пестрого толстолобика заражение постоянное, но б течении вегетапионного периода наблюдается не

не менее двух цикоь зараженности, а у белого - один. Постепенное созревание спор происходит в зимний период; в марте при рас паленки льда начинается массовое созревание и рассеивание спор. Гибель молоди толстолобиков наблюдается на стадии плазмотомии и в период выделения цист наружу. Летальная доза для личинок 400-500 лист; для сеголетка и годовика - свыше 2000 цист.

цисты на жаберных дугах толстолобиков распределяются равномерно, но при высокой зараженности первая и четвертая поражаются сильнее.

ГЛАВА 5. БИОЛОГИЯ М. РАУЬОТЗКИ

В главе приводятся данные о сроках и путях заражения М. pavlov8kii , длительности жизненного цикла. Выявлено инвазионное качество спор е зависимости от сроков пребывания их во внешней среде.

Проследить Ереыя заражения толстолобиков в естественных и искусственных условиях сложно, поэтому в литературе имеются противоречивые данные. Каш этот вопрос решен ежедневным отловом личинок из зараженного пруда с последующим их выдерживание}/ в аквариумах и исследованием их через разное время на наличие паразита. В результате установлено, что личинки пестрого толстолобика заражаются на 6-7 день подращивания, на Ш-этапе личиночного периода в возрасте 9-10 суток, при средней массе 19,2 ыг, при РН воды 7,6 и растворенном в воде кислороде 8,3 ыг/л. Личинки белого толстолобика также заражаются на 6-7 день подращивания в возрасте У-10 суток, при средней массе И,9 мг, при РН воды 7,7 и растюренного ь воде кислорода 8 мг/л. В этот период ь каоерных тычинках и частично в основании жаберных лепестков на з'кстологических препаратах обнаружены 2-4 ядерные

плазмодии. Опытным путем установлено, что при разовой дозе заражения зараженность М.рау1оувкИ составила 30 экз. Отмечено, что интенсивность инвазии толстолобиков зависит от количества дней, проведенных в зараженном пруду, т.е при наличии инвазионного начала заражение происходит непрерывно. При разовой дозе заражения толстолобиков М.рау1спгвкИ стадия созревания и рассеивания спор происходит быстрее, чем в пруду, где заражение постоянное.

Опыты по контактному заражению стерильных личинок от зараженной молоди (годовиков толстолобиков), которые проводились в аквариумах в течении 4 месяиев, дали отрицательные результаты несмотря на то, что на дне аквариумов постоянно находили выделенные от больных рыб споры. 3 аквариумах были установлены аэраторы, которые позволяли держать уровень растворенного в воде кислорода не менее 6-В мг/л и поддерживать перемешивание воды, что создавала предпосылку заглатывания спор, поднимавшихся током воды со дна аквариума. Не отмечено заражение стерильных личинок, содержавшихся 2 часа в микроаквариумах со свекеьыделенными спорами с больных годовиков и последующим содержанием личинок в аквариумах со спорами в течении 4 месяиев. При исследовании экскрементов и кишечника личинок толстолобиков в период проведения опыта постоянно находили споры Ы. рау1оузк±1 без морфологических изменений.

Опыты по заражению стерильных личинок толстолобиков спорами, выдержанными в воде от I месяца до 2 лет, показали положительные результаты в опыте 15 - 1У серии, где присутствовал зоопланктон и споры были выдержаны в течении 4-х месяиев. На жабрах на 1э день у I экз.толстолобика были обнаружены единичные плазмодии. 6 других опытах этой серии отмечалась значительная гибель опытных рыб на Ь-кО сутки по неустановленным причинам, и

опыте IB со спорами, выдержанными в огстоенной воде при темпера' туре 5°, через 2 дня с начала опыта в кишечнике рыб были отмечены споры с невыстреленными стрекательными нитями, на жабрах в oi ласти жаберных тычинок 2 споры из 10 просмотренных были с выстр< ленными капсулами. Просмотр экскрементов рыб показал, что споры проходят через кишечный тракт без морфологических изменений, но на 12 день в экскрементах рыб среди нераскрытых спор появились отдельные створки. В этот же период исследования среди спор появились "парящие" образования размером в,7 ыкм. При этом у опытных рыб в основании жаберных лепестков были обнаружены плазмоди-альные стадии паразита. В дальнейшем наши наблюдения показали: как только среди спор появлялись "парящие" образования, у спор происходило выстреливание стрекательных нитей и раскрытие створок.

Опытным путем проведена попытка заразить стерильных личинок толстолобиков через грунт, воду, олигохет, зоопланктон, взятых из зимовальных прудов с инвазионным началом.

В опыте с зараженным грунтом, выдержанным около 2 месяцев без воды, на второй день у I экз.пестрого толстолобика из 5 исследовании х рыб на жабрах в районе жаберных тычинок встретились плазмодии с единичной зернистостью.

В опыте с влажным грунтом вместе с элигохетами, собранными со дна зимовального пруда, неблагополучного по миксоболезу, в течении 4-х месшев актиномиксиды ни в олигохетах ни в воде не были зарегистрированы, но у одного толстолобика на жабрах отмечены 2 экз. плазмодий паразита. В кишечнике олигохет постоянно находили споры паразита без деструктивных изменений, актиномиксиды не встречались, а опытах со стерильными элигохетами при добавлении спор, выдержанных 0,5 месяпа в отстоенной воде в те-

чении 3-х и 5-ти месяцев, акткномиксиды не были обнаружены.

а двух опытах при добавлении в аквариум воды из зимовального и выростного прудов, в одном случае заражение толстолобиков произошло.

Л опытах с зоопланктоном, собранным с зараженного пруда и внесенном в аквариум, получен отрицательный результат; также не произошло заражения толстолобиков б аквариуме, куда вносили стерильный зоопланктон, выдержанный со спорами К. рау1<уувки

длительность жизненного цикла паразита установлена при выдерживании стерильных личинок б зараженном пруду в течении 1-2 суток и дальнейшего наблюдения за ними в аквариуме. В период формирования иист ( в момент плазмотэмии) всегда отмечалась гибель рыб.

Личинки сначала плавают на поверхности, потом теряют координацию, постепенно опускаются на дно и погибают. Мы, считаем, что причиной гибели является токсикоз за счет продуктов обмена растущих плазмодий; потребление ими питательных веществ необходимых для роста личинок к гипоксии. Установлено, что стадия спорообразования у белого толстолобика начинается с 15-17 дня после заражения. Размер образующихся аист зависит от места их локализации на жаберном лепестке; так всегда в основании жаберных лепестков цисты крупнее и созревают раньше. Рост иист происходит с ростом жаберного аппарата и зависит от физиологического состояния рыб и обеспеченности их кормом. Так, например в прудах в апреле цисты без спор встречались только у мелких рыб. В аквариумах в виду того, что личинки в них плохо растут, теш роста иист снижается, накопление спор ь цистах в массовом количестве не наблюдается. Но длительность жизненного цикла паразита в аквариуме и в пруду совпадает. Отмечено, что отход личинок на стации спорообразования постепенно снижается. Коней жизненного инк-

ла мы определили по периоду рассеивания спор и началу снижения зараженности рыб, что соответствовало 25 дню от начала заражения. Единичные шсты и споры на жабрах отмечались на 4U день. Через 60 дней численность шст и единичных спор практически не меняется, то есть пропесс рассеивания растянут во Бремени. Исследование жизненного ликла у личинок белого толстолобика от второго тура позволяет сделать вывод, что сроки развития паразита являются идентичными первому, но интенсивность инвазии увеличивается в 3-5 раз.

Наблюдения за жизненным циклом паразита у личинок пестрого толстолобика позволяет установить, что массовая гибель личинок происходит ва 6-7 день после заражения, но процесс спорообразования начинаемся на 21-23 день с момента заражения. Процесс рассеивания происходит на 30 день. В экспериментальных условиях жизненный цикл у пестрого толстолобика был дольше на 5-7 дней, чем у белого толстолобика.

Для установления сроков выживаемости спор во внешней среде была проведена серия опытов, выделенные споры помещали в I % раствор ацетилсалициловой кислоты, дистиллированную воду и от-стоенную воду при температуре 5-6° и 20-25°; кроме того споры были подвергнута высушиванию в течении 6 месяцев и один год. 3 результате было установлено, что в растворе аспирина через сутки погибали на 50 %, а через месяц у 100 % спор произошли деструктивные изменения, ti дистиллированной воде споры погибали через месяц на 10 %, а через 3 месяца - 60 %. В огстоенной воде при низкой температуре (5-6°) до В месяцев споры имели нормальную морфологию и только на 9-ом месяце единично у спор началась экструзия нитей. При бысокой температуре С20-2ЬЭ) споры сохранялись хуже и через 4 месяиа появлялись единичные экземпляры с

ыстреленными нитями. Наблюдения показали, что большинство спор отстоенной воде сохраняются до В месянев. в дальнейшем инвази-нность постепенно падает, увеличивается количество выстреленных пор и к 12 месяпам споры в воде встречаются единично. Споры чень чувствительны к высыханию.

Экспериментально в пруду установлено, что споры после выде-ения я нахождения во внешней среде два с половиной месяца стано-ятся инвазионными. Однако, мы предполагаем, что этот срок может ыть короче, но провести исследования по уточнению этих данных ехнически не представлялось возможным. На выживание спор вероят-о влияют температура, содержание кислорода в воде, присутствие ■идробионтов и гнилостные процессы.

Нами установлено, что при содержании спор в открытых емкое-

л

ш с отстоенной водой при температуре 20-25 через 2 суток с. юмента сбора спор в воде появляются "парящие" звездчатые обра-ювания. Подобные же образования наблюдались на дне аквариумов, 'де имелись выделившиеся споры. Эти образования обнаруживались 5сегда, когда наблюдались раскрывшиеся створки спор. "Парящие" >бразования были размером 5,8 - 8,7 мкм, длина их с щупальцами [1,6 - 14,5 икм на глвдерин-желатиновых препаратах. В живом вида длина их со щупальцами не превышала 23 мкм. Количество ответвлений (щупалец) не превышало шесть. В отличие от гекса-актино-шкеидий по Эль-Матбоули и др.( Е1-Ыа1;Ъои11 ,1991) длина звезд-1атых образований, обнаруженных нами, меньше б 4 раза. Кроме этого з звездчатых формах имеются от 2 до 5 зернистых включений. )т амеб "дарящие" формы отличаются отсутствием подвижности и юстоянстбом формы. Мы предполагаем, что "парящие" образования шляются 2-х ядерными гаплоидными зародышами, выходящими из здор при раскрытии створок и внедряющимися в наберную ткань

толстолобиков.

ГЛАНА 6. ВЗАИМООТНОШЕНИЕ Л ПАРАЗИТАРНОЙ

СИСТЕМЕ ТОЛСТОЛОБ® - Ы. РАУХОУБКИ

В главе указывается, что паразитарная система толстолобик-М.рау1оузк11 является древней и эволшионно глубоко адаптированной на всех этапах жизненного цикла.

Морфология спор по нашим данным отличается от приведенных ранее описаний А.Х.Ахыерова (1954), С.С.Шульмана (1366) и други: авторов. Типичной формой споры является овальная, отсутствует ярко выраженная иодофильная вакуоль. Цисты овальной или сигарообразной формы и меньше по размерам. Созревание спор в цисте ни когда не достигает 100 % споры, выделившиеся из листы плохо рас свиваются. Средний размер спор: длина спор - 10,59 мкм; ширина-8,96 мкм, длина большей полярной капсулы - 5,2В мкм; длина мень шей полярной капсулы - 2,39 мкм; длина интеркалсулярного отроет ка - 1,91 мкм. При исследовании спор отмечено наличие ореола или "слизистого воротничка" в течении всех месяцев исследования от 10 до 40 %, но наибольший процент таких спор встречается в мелких листах и в экспериментальных условиях (до ВО %). По-видимому "слизистый воротничок" является адаптацией споры к небла гоприятным условиям: высыханию и перепадам температуры. В крупных листах споры морфологически не отличаются в зависимости от Бремени сбора, локализации, но отмечена климатическая изменчивость. Не установлено достоверных различий в морфологии спор у белого и пестрого толстолобика, у мелких и крупных рыб, но при ухудшении физиологического состояния хозяина, при проведении эк слеримента размеры спор уменьшаются. Наиболее стабильными признаками у спор являются расположение полярных капсул, а лабильны

ми длина и ширина спор.

При исследовании спор обнаружено аномальные споры и их количество увеличилось в опытных условиях при снижении растворенного в воде кислорода, затемнении аквариума. Они превалировали у пестрых толстолобиков и их было больше в мелких шстах. В сезонном аспекте аномальных спор было больше в апреле. Перечисленные факты позволяют нам предположить, что причиной появления аномальных спор является'ухудшение физиологического состояния рыо в результате отсутствия полноценных естественных кормов и неблагоприятных условий среды обитания в условиях лрудйв.

При разовом заражении хозяина не происходит одновременное созревание всех формирующихся лист, а происходит постепенное созревание; отторжение лист растянуто во времени, что позволяет исключить гибель хозяина в результате отторжения 70 % респираторного эпителия; тем самым поддерживается существование паразитарной системы. На этом факте мы сталкиваемся с процессом саморегулирования жизненного ликла паразита позволяющего ему выживать.

Нами установлено, что в опытах ряд водных беспозвоночных (коловратки, пиклопы, дафнии, ракушковые рачки, амебы) элиминируют споры М^ау1оузк11 ; в тоже время моллюски и олигохеты не являются элиминагорами спор, го есть через их пищеварительный тракт споры проходят транзитом.

Помимо наблюдений за элиминацией спор в опытах, получены данные б естественных условиях, позволяющие судить об этих про-лессах в рыбоводных прудах. Установлено, что при биомассе зоопланктона в пруду в среднем 9,28 г/и^ средняя зараженность рыб составила 15-30 лист на одну каберную дугу. При повторном использовании пруда, когда кормовая база была бедной: биомасса зооплан-

ктэна в среднем составила всего 0,2 г/м^; на одну жаберную дугу приходилось 100 и более шсг М.рауХоувкИ» то есть в первом случае имело место снижение зараженности за счет выедания зоопланктоном спор миксэспэреи. Низкая численность зоопланктона при повторном использовании пруда не могла сколь-либо заметно влиять на численность миксоспорей, в результате чего зараженность резко усилилась.

Обсуждая роль тубифишд как участник об цикла развития Ы. рау1оузк!1 на основании опытов по их искусственному заражению и получению отрицательного результата, нахождению не выстре ленных спор в просвете кишечника тубифишд и не измененных спо£ в экскрементах тубифишд мы считаем, что они играют роль транспортного хозяина, обеспечивающего подъем спор из глубины грунта на его поверхность.

Установлено, что паразит относится к группе теплолюбивых организмов и оптимальной температурой для его развития являются температура вода 21-27° С.

Снижение интенсивности обменных просессоЕ в организме рыб, связанное с понижением содержания кислорода в воде до 0,8 - 0,3 мг/л и голоданием, вызывало замедление сроков развития паразита и изменения в морфологии спор.

Установлено, что прямой ущерб в виде смертности при парази тировании М.рау1оуок11 У толстолобиков имеет место в личиночный период на стадии плазмотомии при интенсивности инвазии пара зита свыше 50 иист на жаберную дугу в возрасте 9-10 суток, у се голеток свыше 2000 шст на рыбу. Гибель рыб наблюдается также в весенний период при резком подъеме температуры, когда происхо дат одновременное отделение иист по всей длине жаберного лепестка. в случае постепенного подъема температуры такого явления

не отмечается.

По мере роста иист происходит сдавливание и уплотнение респираторного эпителия вплоть до его полного вытеснения и нарушается дыхательная функция, что ведет к снижению теша роста и резистентности рыб. У сильно зараженных рыб наблюдается снижение гемоглобина от 42,1 до 62,2 г/л и понижение числа эритроцитов до 1,38 млн/мкл.

ГЛАВА 7. ПУШ ПРОФИЛАКТИКИ ЫИКООВОЛЕЗА

Для разработки мер профилактики Еыяснено влияние условия подращивания на зараженность толстолобиков M.pavlovskii .Выяснено влияние осушения водоемов на паразита. Изысканы эффективные обеззараживающие средства.

Для профилактики :.шксоболеза толстолобиков рекомендуется: при отсутствии мальковых лрудоЕ допускается еозмокность использовать для подращивания личинок толстолобиков пруды, где содержалась рыба, не восприимчивая к данному заболеванию: следует тщательно высушивать ложе зараженных прудов более года; использовать в качестве дезинфектантов 2 % раствор едкого натра (каустическая сода), гипохлорит калышя из расчета 2,5 - 3,5 и/га,

хлорную известь 5-7 u/га. Применение негашенной извести из расо

чета 150-200 кг/га, хлорвой извести 1-3 г/м не дает положительного результата; проводить интродукшю дафний с иелью элиминации спор M.pavlovskii . Допускается вывоз личинки (2-3 дневной) с целью разведения, Еыращивание не восприимчивых к возбудителю рыб.

выводы

I. M.pavlovskii поражает в основном младшие возрастные группы белого и пестрого толстолобика. Паразит теплолюбивый,

оптимальная температура воды для развития +21 - 27° С; при температуре ниже 17° развитие замедляется, но не прекращается.

2. Заражение толстолобиков происходит в возрасте 9-10 су то: на 6-7 день подращивания личинок в прудах, и продолжается в период всего активного питания. Начало заражения совпадает с 26—о: стадией личиночного периода при средней массе пестрого толстолобика 19,2 мг, белпго толстолобика - 1В,9 кг.

3. У пестрого толстолобика заражение Ы.рау1оувк:ИДостоянное, но в течении вегетационного периода наблюдается не менее двух пиков зараженности, а у белого - один. Пестрый толстолобик более подвержен болезни, чем белый. На третьем году белый толст! лобик практически не заражается.

4. жизненный цикл паразита 25-30 дней. Появление иист со спорами у белого толстолобика наблюдается через 15-17 дней после заражения. У пестрого толстолобика этот процесс происходит на 5-7 дней позднее. Процесс рассеивания спор у толстолобиков растянут во времени, .выделение паразита ео внешнюю среду происходит не только спорами, но отделением от жаберной ткани целой цисты, причем этот способ не зависит от интенсивности поражения жабр паразитом.

Цисты М. рау1оувкИ на жаберных дугах толстолобиков распределяются равномерно, но при еысокой зараженности первая и четвертая жаберные дуги поражаются сильнее.

5. Споры М. Р^10''8^11 сохраняют жизнеспособность в течении Ь месяцев. Через год инвазионные свойства паразита в значительной степени теряются. Споры очень чувствительны к высыханию.

-6. При постановке опытов по заражению толстолобиков спорами к. рау1оуак!1 установлено, что споры не выстреливают в кишечнике рыб, а проходят транзитом. Один из путей заражения осуществляется в каберной полости, жаберных тычинках и жаберных

- 2а -

лепестках.

7. Водные беспозвоночные (амебы, коловратки, кладоиеры,ко-пеподы) элиминируют споры М. paviovskii . Олигохеты не являются промежуточным хозяином М. paviovskii , а играют роль транспортного хозяина.

В. Споры М. paviovskii овальной формы, а не шаровидной, как отмечалось при первоописанки. Интеркапсулярный отросток имеет меньшую длину, чем размеры приведенные при первоописанки. В цистах происходит неравномерное созревание спор; отмечено отсутствие в них хорошо выраженной иодофилъной вакуоли даже при иодировании спор и фазовэконтрастном исследовании.

9. Споры в зависимости от топографии цист отличаются размерами, имея тенденцию к их уменьшению в участках на концах жаберных лепестков. Зрелые споры в разные сезоны морфологически не имеют различий. Не отмечается существенных различий у спор из южных рыбоводных зон, которые отличаются размерами от спор из северных районов рыбоводства. Споры белого и пестрого толстолобика не отличаются размерами, если собраны в одно и тоже время; шсты одинаковой топографии. У крупных толстолобиков (Рср=47,3г) и мелких (Рср = 11,4 г) в прудах в морфологии спор достоверных различий не отмечено.

10. При содержании рыб в аквариумах резко возрастает количество аномальных спор; вероятно это положение можно использовать при опенке состояния рыб. У пестрого толстолобика на I году жизни атипичных спор встречается больше и их изменчивость многообразнее, чем у белого толстолобика. При неблагополучном кислородном режиме количество аномальных спор резко увеличивается. При хорошем насыщении воды кислородом, но при отсутствии полноценных естественных корызъ, также увеличивается количество аномальных спор.

11. При высокой интенсивности инвазии у М.рауХоувкИ отмечен процесс саморегулирования созревания спор, создающий возы ность выживания хозяина и сохранения паразита: выделение шст

и рассеивание спор происходит постепенно по мере их созревания; отделение иксг от жаберной ткани происходит при неполном созревании спор в писте.

12. Паразит хорошо приспособлен к хозяину к в основном оказывает механическое воздействие, уменьшая дыхательную поверхность жабр. Патогенное влияние ¿1. рау1оузк!3.на хозяина происходит на ранних стадиях развития толстолобиков. Летальная доза для личинок 400-500 иист, для сеголеток и годовиков свыше 2000 иист Заражение личинок Ы. ра*1оувк±1 в период подращивания сильно влияет на массу личинок, навеска личинок к концу подрагивания снижается в 5,8 раз. Повышенный отход рыбы наблвдается на стадии плазмогамии и в период выделения цист во внешнюю среду. У сильно зараженных сеголетков (свыше 2000 иист на рыбу) гемоглобин падает до 62,2 г/л, а у отдельных особей до 42,1 г/л, отмечается снижение эритроцитов до 1,38 млн/мкл. Гибель зараженных личинок в Еыростных прудах бывает значительной в первые дни посадки на выращивание, а выход толстолобиков в выростных прудах ниже нормы (40,5 % при плане 65 $).

13. Эффективными обеззараживающими средствами являются едкий натр, гилохлэрит кальция. Длительное'осушение прудов также губительно действует на споры паразита.

14. Полученные материалы по биологии М.рау1оузкИ легли в основу "временной инструкции по диагностике и ликвидации миксо-болеза толстолобиков", рассмотренной и одобренной Методическим Советом ¿ШИПРХа (протокол к 6 от 15 декабря 1589 г.) и внедренной на Чаганском рыбопитомнике.

СПИСОК РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чедурная А.Г. К изучению биологии Kvxobolus pavlovskii // Современное состояние и перспективы рационального использования

и охраны рыбного хозяйства в бассейне Азовского ыоря.хЗсесоюз. конф.Ростов-на-дону, ноябрь,1987.Тез.докл.-Ч.2.£«1.19Ь7.-С.116-117.

2. Чедурная А.Г.Ыиксоболез талстодобиков//Экспресс-инфэрма-шя/ ШИИТЭИРХ.Сер.Рыбохозяйственное использование внутренних водоемов.1987.-Был.5.-С.5-7.

3. Чепурная А.Г. Некоторые особенности биологии Mvxoboius pavlovskii у пестрого толстолобика//Сб.научн.трудов ШШПРХ. 1987.-Был.50.-С.75-79.

4. Чепурная А.Г. Миксоболез толстолобиков и роль гидробион-тов в элиминации и распространении возбудителя заболевания//Пу-ти повышения эффективности пресноводной аквакультуры.Сб.научн. трудов TCXA.I99I.-C.70-74.

5. friepurnaya A.G.3iology of Myxobolus pavlovskii (Achmerov, 1954) (Kyxosporea,Uyxobolidae) , bighead parasite.//Internat. Sympos."Problems of fish parasitology".Petrozavodsk.1991.-P. 16.

6. Чепурная А.Г. Роль водных беспозвоночных в элиминации спор Myxobolus pavlovskii (Achmerov ,IS54) (blyxosporea, Кухо-bolidae )// Сб.научн.трудов ШШПРХ.1991.-Бып.63.-С.56-62.

7. Чепурная А.Г.,Шкодин Н.В. Профилактика болезней рыб - резерв увеличения рыбопродуктивности прудов// Повышение рыбопродуктивности внутренних водоемов Астрах.обл.Научн.-практ.конф. Астрахань, октябрь.1992. Тез.докл.Астрахань.1992.-С.80-81.

В. Chepurnaya A.G.Role of aquatic invertrbrates in the eli-lination of spores of Myxobolus pavlovskii (Achmerov, 1954)(t.Iyxo-iporea.Myxobolidae), parasite of silver carp.//Ecological para-litology.1992.-V.N2.-P.15o-153.