Изучение антигенных детерминант тиреоглобулина человека и животных с помощью моноклональных антител

Пиневич, Агния Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение антигенных детерминант тиреоглобулина человека и животных с помощью моноклональных антител
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Изучение антигенных детерминант тиреоглобулина человека и животных с помощью моноклональных антител"

003056068

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЙРУ/

ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННЫХ ДЕТЕРМИНАНТ ТИРЕОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология 14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

На правах рукописи

ПИНЕВИЧ Агния Александровна

Санкт-Петербург 2007

003056068

Работа выполнена на кафедре цитологии и гистологии Санкт-Петербургского Государственного университета и в лаборатории гибридомной технологии Федерального Государственного Учреждения Центральный Научно-исследовательский Рентгено-Радиологический Институт Федерального Агентства по Здравоохранению и Социальному Развитию (ФГУ ЦНИРРИ ФАЗСР РФ)

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Климович Владимир Борисович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Самойлова Кира Александровна

доктор биологических наук, профессор Полевщиков Александр Витальевич

Ведущее учреждение: ГОУВПО Санкт-Петербургский

Государственный Медицинский Университет им. акад. И.П. Павлова ФАЗСР РФ

Защита состоится " / " ^ХСОиЯ^- 2007 г. в ^У часов на заседании Диссертационного совета Д.212.232.12 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Санкт-Петербургском Государственном университете по адресу: 199034 Санкт-Петербург, Университетская наб. 7/9, СПбГУ, биолого-почвенный факультет, кафедра генетики и селекции, аудитория 1.

С диссертацией можно ознакомиться в центральной библиотеке Санкт-Петербургского Государственного университета

Автореферат разослан ОЛО-ртО— 2007 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат биологических наук

Л.А. Мамон

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Тиреоглобулин (ТГ) - йодированный гликопротеин с молекулярной массой 660 кДа, синтезируемый клетками фолликулярного эпителия щитовидной железы (Dunn, 1970; Vali et al., 2000). Он является предшественником тиреоидных гормонов, играющих ведущую роль в регуляции развития, дифференцировки и метаболизма тканей и органов позвоночных животных (Dumont et al., 2003).

Молекулы ТГ человека и ряда млекопитающих представляют собой димеры, построенные из идентичных полипептидных цепей длиной 2760-2770 аминокислотных остатков (Malthiery, Lissitzky, 1987). В составе цепей обнаружены повторяющиеся последовательности, образующие домены трех типов. Гомология аминокислотных последовательностей ТГ животных разных видов достигает 70-80% (Caturegli et al., 1997; Ramos et al., 2002). Следствием структурного подобия является перекрестное взаимодействие антител, полученных против ТГ одного из видов животных, с ТГ других видов (Stylos, Rose, 1968; Bresler et al., 1990). Определенным участкам первичной структуры ТГ свойственна также высокая степень гомологии с другими известными белками, в том числе ацетилхолинэстеразой (АХЭ) (Takagi et al., 1991).

После синтеза полипептидных цепей ТГ молекулы претерпевают множественные посттрансляционные модификации (присоединение углеводных, сульфатных, фосфатных групп и атомов йода) и транслокации (экспорт из тиреоцитов, включение в состав коллоида, импорт в тиреоциты и трансцитоз), взаимодействуя при этом с рядом рецепторов, транспортных белков и ферментов. Участки молекулы ТГ, обеспечивающие эти взаимодействия, до сих пор не идентифицированы.

Одним из подходов к выявлению функциональных сайтов ТГ является изучение его антигенных детерминант (эпитопов) с помощью моноклональных антител (МКАТ). Главное преимущество МКАТ состоит в том, что они распознают отдельные эпитопы (участки поверхности) антигенов. Эти участки могут находиться вблизи функциональных сайтов молекулы или топографически совпадать с ними, что позволяет исследовать связи между структурой и функциями молекул и проводить детальное картирование их антигенных детерминант (Абелев, Карамова, 1996).

Панели МКАТ против ТГ человека и животных получены в нескольких лабораториях (Zanetti et al., 1983; Kodama et al., 1984; Kondo, Kondo, 1984; Sikorska et al., 1986; Chan et al., 1987;.De Baets et al., 1987; Heilig et al., 1987; Ruf et al., 1987; Bresler et al., 1990; Saboori et al., 1994; 1998; Erregragui et al., 1997). Число антител, включенных в такие панели, обычно не превышает двадцати. Все эти МКАТ созданы на основе иммунных лимфоцитов мышей линии BALB/c (H-2d), следовательно, спектр распознаваемых ими эпитопов ТГ ограничен репертуаром иммунного ответа мышей указанной линии.

В лаборатории гибридомиой технологии ЦНИРРИ создана уникальная панель из 52 МКАТ против ТГ человека. Основное отличие этой панели от описанных ранее состоит в том, что донорами иммунных лимфоцитов при получении гибридом служили мыши линии БЛЛ, отличающиеся от ВАЬВ/с главным локусом гистосовместимости (Н-2к) и репертуаром иммунного ответа. Очевидно, полученная совокупность МКАТ распознает иной спектр антигенных детерминант ТГ и требует специального изучения.

Цель и задачи исследования. Цель работы состояла в изучении свойств МКАТ и исследовании природы распознаваемых ими антигенных детерминант ТГ у представителей разных таксонов позвоночных животных.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Охарактеризовать полученные МКАТ по антиген-связывающей активности и изотипической принадлежности.

2. Изучить перекрестную реактивность МКАТ с ТГ животных разных видов и установить, какие из эпитопов ТГ человека являются видоспецифическими, а какие - эволюционно консервативными.

3. Исследовать взаимодействие МКАТ с тиреодными гормонами и АХЭ.

4. Исследовать эпитопную специфичность МКАТ.

5. Классифицировать распознаваемые МКАТ антигенные детерминанты ТГ человека по их зависимости от конформации молекулы.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Панель из 52 МКАТ позволяет выявить на молекуле ТГ человека 41 эпитоп, 15 из которых являются линейными, остальные 26 - конформационно зависимыми.

2. Распознаваемые МКАТ эпитопы не относятся к числу гормоногенных.

3. На молекуле ТГ человека, наряду с видоспецифическими эпитопами, выявлены эволюционно консервативные антигенные детерминанты, представленные также на ТГ млекопитающих, птиц и амфибий.

4. На молекуле ТГ человека выявлены эпитопы, общие с АХЭ, что указывает на их локализацию в С-концевой части молекулы ТГ.

5. Видоспецифические эпитопы ТГ человека являются конформационно зависимыми. Все линейные эпитопы молекулы ТГ человека относятся к числу эволюционно консервативных.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что на молекуле ТГ человека присутствуют более 40 антигенных детерминант, выявляемых МКАТ.

Показано, что структура и состав антигенных детерминант ТГ может различаться у близкородственных видов млекопитающих и быть сходной у животных, относящихся к разным таксономическим группам.

Впервые с помощью МКАТ исследованы антигенные детерминанты молекул ТГ птиц и амфибий; показано, что состав эпитопов ТГ амфибий существенно отличается от такового у млекопитающих.

Впервые для анализа эпитопной специфичности МКАТ против ТГ применен сравнительно-биологический подход, основанный на сопоставлении групп взаимного ингибирования МКАТ и спектров эпитопов ТГ животных разных видов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Выявление линейных эпитопов молекулы ТГ позволяет в дальнейшем идентифицировать образующие их последовательности аминокислотных остатков и, таким образом, картировать ряд антигенных детерминант ТГ человека и животных.

Данные о топографической удаленности эпитопов ТГ являются основанием для отбора МКАТ при конструировании двухдетерминантных систем детекции и количественного определения ТГ человека и животных.

Найдены оптимальные условия для выявления ТГ на препаратах ткани щитовидной железы иммуногистохимическими методами.

МКАТ, распознающие эпитопы ТГ животных, могут использоваться в экспериментальных и сравнительно-биологических исследованиях развития, структуры и функции щитовидной железы млекопитающих, птиц и амфибий.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на XII Международном Совещании по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2001), Пироговской студенческой научной конференции-2002 (Москва, 2002), VI, VII, IX и X Всероссийских научных форумах с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2002, 2003, 2005, 2006), Международной научно-практической школе-конференции "Цитокины. Воспаление. Иммунитет" (Санкт-Петербург, 2002), 6-ой (Пущино, 2002) и 7-ой (Москва, 2005) Школах Джона Хамфри по иммунологии, 5-ом Конгрессе "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии" (Москва, 2002), научно-практической конференции "Современные технологии в клинической медицине" (Санкт-Петербург, 2003), 1-ом съезде Общества клеточной биологии (Санкт-Петербург, 2003), III Съезде иммунологов России (Екатеринбург, 2004) и Школе DAAD "Current Trends in Comparative Immunology. The Interface Between Immunology and Medicine" (Санкт-Петербург, 2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 17 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работы состоит из введения; обзора литературы; экспериментальной части, включающей методы и результаты исследования; обсуждения; выводов; списка литературы, состоящего из 303 источников; приложения. Работа изложена на 142 страницах и содержит 23 рисунка и 19 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Животные. В работе были использованы инбредные мыши поддерживаемых в лаборатории линий BALB/c и SJL/J, а также межлинейные гибриды Fl(SJL/JxBALB/c).

Антигены. Были использованы коммерческие препараты ТГ человека (Алкор), быка и свиньи (Sigma), АХЭ из эритроцитов быка (Sigma), трийодтиронина (ТЗ) и тироксина (Т4) (Fluka). Препараты ТГ человека, крысы и курицы были получены из гомогенатов щитовидных желез методом солевой экстракции с последующим осаждением сульфатом аммония. ТГ человека и крысы подвергали дополнительно очистке методом гель-фильтрации (Saboori et al., 1994). Препараты ТГ подвергали денатурации путем восстановления дисульфидных связей 0,01% 1,4-дитиотреитолом (ДТТ) с последующим алкилированием или путем нагревания до 90-100°С в течение 5 мин.

Антитела. В работе использованы 52 МКАТ против ТГ человека, ранее полученные в лаборатории (Климович и др., 1998; 2000). Штаммы гибридомных клеток прививали мышам Fl(SJL/JxBALB/c) для получения асцитных жидкостей. МКАТ из асцитных жидкостей осаждали сульфатом аммония.

МКАТ конъюгировали с пероксидазой из корня хрена (ПХ) методом периодатного окисления (Nakane, Kawaoi, 1974). Присоединение изотиоцианата флуоресцеина (ФИТЦ) к МКАТ выполняли в соответствии с описанным методом (Джонсон, 1991).

Для выявления связывания немеченых МКАТ с ТГ использовали полученные в лаборатории аффинно очищенные кроличьи антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с ПХ, и козьи антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные со щелочной фосфатазой (Sigma).

Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА). Специфичность МКАТ в отношении эпитопов ТГ человека и перекрестную реактивность МКАТ с ТЗ и Т4 исследовали методом конкурентного ИФА. Способность МКАТ взаимодействовать с нативными и подвергнутыми денатурации ТГ человека и животных, а также перекрестную реактивность МКАТ с АХЭ изучали методом непрямого твердофазного ИФА (Кэтти, Райкундалиа, 1991). Изотопическую принадлежность МКАТ против ТГ определяли с помощью иммуноферментной тест-системы, предназначенной для идентификации субклассов иммуноглобулинов мыши (Calbiochem).

Образцы ткани щитовидной железы человека (п=10), собаки (п=8), кошки (п=9), крысы (п=10), мыши (п=14), кролика (п=2), курицы (п=3), голубя (п=1) и лягушки (п=4) фиксировали в 10%-ном водном формалине, заливали в парапласт и готовили срезы толщиной 3-5 мкм. Для контроля сохранности гистологической структуры щитовидной железы срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Иммуногистохимическое исследование. Взаимодействие МКАТ с ТГ на срезах ткани щитовидной железы человека и животных изучали методом прямой иммунофлуоресценции при помощи МКАТ, меченных ФИТЦ, и непрямым иммуногистохимическим методом при помощи немеченых МКАТ против ТГ и меченных щелочной фосфатазой антител против иммуноглобулинов мышей.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Характеристика препаратов МКАТ против ТГ.

Определение изотипической принадлежности показало, что преобладали МКАТ изотипа (43 из 52); наиболее часто встречались ^01 (п=20) и ^02а (п=16) антитела. Помимо этого были выявлены МКАТ субизотипа 1§02Ь (п=7) и изотипа 1дМ (п=9). Титры МКАТ в сульфатных фракциях варьировали от 4/105 до 6/108. Доля препаратов с низкими значениями титров составляла 15%.

2. Изучение перекрестной реактивности МКАТ с ТЗ, Т4 и АХЭ.

Свободные тиреоидные гормоны (ТЗ и Т4) ни в одном случае не ингибировали связывание МКАТ с ТГ. Из этого следует, что ни одно из изученных МКАТ не направлено к гормоногенным участкам молекулы ТГ.

Способность перекрестно реагировать с АХЭ была выявлена у пяти МКАТ. Поскольку участок молекулы ТГ, гомологичный АХЭ, локализован на С-концевом участке полипептидной цепи, вероятнее всего, эпитопы, связывающие эти МКАТ, находятся в указанной области.

3. Изучение перекрестной реактивности МКАТ с ТГ животных.

Взаимодействие МКАТ с препаратами иммобилизованных на твердой фазе ТГ человека, быка, свиньи, крысы и курицы было изучено методом непрямого ИФА. На рисунке 1 в качестве иллюстрации приведена часть полученных данных. Было установлено, что 14 МКАТ взаимодействуют только с ТГ человека, 10 МКАТ реагируют со всеми образцами ТГ, а 28 МКАТ распознают ТГ человека и животных одного или более видов.

Второй подход к изучению перекрестной реактивности МКАТ состоял в

иммуногистохимическом и иммунофлуоресцентном выявлении ТГ на срезах тканей щитовидных желез животных разных видов. Были исследованы

образцы тканей человека, млекопитающих пяти видов, птиц двух видов и одного вида амфибий. Примеры иммуногистохимического выявления ТГ в ткани щитовидной железы человека (МКАТ 504) и животных (МКАТ 1209)

представлены на рисунке 2.

2,5 :

№

II)! IB1 2F2 4D9 5F.f> 51-5 5NG 8ВУ 8E12 12G9

□ ТГ человека □ ТГ быкд GTT свиньи

Ш ТГ крысы OTT курицы

Рис. 1. Взаимодействие МКАТ с ТГ чело зека и животных.

[ [о оси абсцисс - код МКАТ против ТГ.

По оси ординат - значения оптической плотности при 492 им.

ИммуноШстохимическое исследование показало, что только несколько МКАТ не обладают перекрестной реактивностью с ТГ животных, т.е. выявляют видосгтеиифические эпитопы ТГ человека. Ряд распознаваемых МКАТ антигенных детерминант, которые на основании результатов ИФА могли бы быть отнесены к категории специфичных для ТГ человека, при расширении спектра изучаемых объектов оказались представленными и на ТГ животных одного или нескольких видов, т. е. эволюционно консервативными. Взаимодействие МКАТ с ТГ разных видов животных на срезах щитовидных желез имело сходный характер.

Рис. 2. Иммуногистохимическое выявление ТГ в ткани щитовидной железы человека (А), кошки (Ь), голубя (В) и лягушки (Г) (200*). МКАТ взаимодействуют с ТГ. локализованным п коллоиде фолликулов щитовидной железы и цитоплазме тиреоцитов. Желтые стрелки указывают на коллоид, красные — Fia тиреоциты.

В таблице 1 приведены данные, суммирующие результаты изучения перекрестной реактивности МКАТ методами ИФА и иммуногистохимического исследования.

Таблица 1. Количество эпитопов, выявляемых МКАТ, на ТГ человека и животных.

Тиреоглобулин Число эпитопов, общих с тиреоглобулинои

Человека Быка Свиньи Собаки Кошки Крысы Мыши Кролика Курицы Голубя | Лягушки

Человека 52 26 24 23 24 25 28 31 18 10 4

Быка 26 19 14 16 20 20 22 14 9 4

Свиньи 24 17 17 15 19 20 13 9 4

Собаки 23 20 12 15 17 9 4 3

Кошки 24 12 14 18 12 5 3

Крысы :25 23 19 12 8 4

Мыши 28 22 13 9 4

Кролика 31 13 9 4

Курицы 18 8 4

Голубя 10 2

Лягушки 4

Для антигенных детерминант ТГ разных видов животных характерны две основные особенности. С одной стороны, у животных близкородственных видов спектр распознаваемых МКАТ эпитопов неодинаков. Так, на высокогомологичных молекулах ТГ крысы и мыши идентифицированы 25 и 28 эпитопов соответственно, общими из которых являются 23. С другой стороны, состав антигенных детерминант ТГ животных, относящихся к разным таксономическим группам, может быть сходным. Например, ТГ кролика и быка несут 22 общие антигенные детерминанты. Следовательно, высокая степень гомологии аминокислотных последовательностей ТГ не полностью определяет состав антигенных детерминант соответствующих белков.

На ТГ лягушки были идентифицированы всего 4 эпитопа, общие с ТГ большинства исследованных видов млекопитающих и птиц. Это указывает на то, что структура и состав антигенных детерминант ТГ амфибий существенно отличаются от таковых у млекопитающих и птиц.

4. Исследование эиитоипой специфичности МКАТ.

При исследовании эпитопной направленности МКАТ было установлено, что 20 из них ингибировали связывание с антигеном только одноименных меченых реагентов, из чего следует, что эти МКАТ распознают отдельные пространственно изолированные эпитопы на молекуле ТГ человека (табл. 2).

Остальные 32 МКАТ были объединены в 14 групп взаимного ангибиров&ния связывания, в которых каждое из немеченых антител (шгибйровало взаимодействие двух и болей меченых МКАТ с антигеном (табл. 3 4).

Таблица 2. МКАТ, распознающие топографически изолированные эпитопы Т1 человека.

Коды на гнвных МКАТ Коды меченых МКАТ

1П0 3 < < 2С12 V. (Ч 2С9 а 4СЗ 5011 Ы 1 Г: V, С V» ю г. «й $1 а \в 6Е7 7Р12 а х о* а ос ы X о и> ж

11 10

1С(

1X1

2Л4

2С12

2Р5

ЮЧ

4111

4СЗ

5011

5£6

5С5

51М6

6112

6Е7

7Е12

ВВ1

8В9

8Е11

8Н0

Ингибирование немечеными антителами связывания меченых МКАТ с ТГ человека.

5. Анализ специфичности МКАТ в группах взаимного ингибировання.

Способность одних МКАТ конкурировать с другими за связывание с антигеном может указывать либо на совпадение их эпитопных специфичностей, либо на топографическую близость распознаваемых ими эпитопов на молекуле антигена. Для анализа состава групп взаимного ингибиро вания обычно используют природные, синтетические или рекомбинантные фрагменты антигена, которые позволяют уточнить эпитопную направленность МКАТ. В случае ТГ такой подход трудно применить, поскольку структура многих эпитопов зависит от конформации и при фрагментировании молекулы утрачивается.

Е} настоящей работе для анализа состава групп взаимного ингибирования был применен подход, основанный на сопоставлении способности МКАТ конкурировать с другими за связывание с антигеном и их перекрестной реактивности с ТГ животных разных видов.

Таблица 3, Группы взаимного ингибирования и встречаемость связывающих МКАТ эпитопов на ТГ человека и животных разных видов.___

К иды катнвных МКАТ Коды меченых МКАТ

00 < 10В2 о- а -ч- 4Т4 5F3 M о 00 m LL, 1Л Ov ь 1Г| sa S M чС 1 ir, гч Ы » tr, О fi 4В12 5A4 oc Z ■o 8C4 5G4

1А8 1 ■ -, ,, ■

10В2

41)9 2

4Т4

5F3 3

кг;2

5F5

5F9

1В1 4

21Ï1 . 5

5А6

8KI2

ÎG5 6 •J'.ÏV

4В12

5Л4 7

й^-'Щ:''

SC4 ï- ;ï;i| "■':'

5G4

Взаимодействие МКАТ с гиреоглобулннами

Человека + + + + + 4 + + + + + + + + + + + +

Быка + + + + + + + + + + + + +

Свнньн + + +■ + 4 + + + + + + + + +

Собаки + + + + + + + + + +

Кош ки + + + + + + + + + + +

Крысы + + + + + + + + + +

M ышн + + + + + + + + + + + + + +

Кролика 4 + + + + + + + + + + + + + + +

Курицы * + + +

Голубя + +

Лягушки + +

Цифрами обозначены номера групп взаимного ингибирования. I Ннгибкрование немечеными антителами связывания меченых МКАТ с Т1" человека. рП ] 1рисутствие эпитета, распознаваемого МКАТ, ira TI ' животного.

Из данных, приведенных в таблице 3, следует, что МКАТ, составляющие группы 2 и 4-6, в пределах каждой группы взаимно ингибируют друг друга, но различаются по видовой специфичности. Это свидетельствует о том, что ингибнрующие друг друга МКАТ направлены против топографически сближенных, по различных антигенных детерминант. В го же время антитела групп 1, 3 и 7 также взаимно ингибнруют друг друга в пределах групп, но часть МКАТ совпадает по видовой специфичности, а часть различается. Следовательно, группа I содержит два различных эпитопа - 1 А8( ЮВ2) и 41».

Таблица 4. Группы взаимного ингибирования МКАТ с идентичной эпитопной специфичностью.___

Коды нагнвных МКАТ Калы меченых МКА'Г

1В10 1Л О г- ь. «V -г ос 1СП ЗВ7 и. 12С9 00 << ГЦ £ £1 <*> 7 АЗ ж> и 10А11

1В10 8 ВШЙ

705

1Е7 9

8А9

ЮМ 10

ЗВ7 л;

2К2 И

12С9

ЗА8 12

5Р12

ЗК11 < 1 13

7 АЗ

5в8 14

10 АН

Взаимодействие МКАТ с гиреоглоб длинами

Человека + + + + + + + + + + + + +

Бы ка + + + +

Свиньи + + + +

Собаки + + + +

Кишки + + + +

Крысы + + + + + + +

Мыши + + + + + + + +

Кролика 4 + + + + +

Курицы + + + + + +

Голубя + + + +

Лягушки + +

Цифрами обозначены номера групп взаимного ми гиб про пиния.

Ингибировзййе немечецыми антителами связывания меченых МКАТ с ТГ человека, | + | Присутствие 'шитопа, распознаваемого МКАТ, на Т1 животного.

Аналогичным образом, группа 3 состоит из четырех близко расположенных эпитопов - 4Т4, 5РЗ(802), 5Б5 и 5Р9, а группа 7 из двух эпитопов - 5А4(6Н8, 8С4) и 504. Итого, МКАТ, составляющие группы взаимного ингибирования 1-7, распознают четырнадцать эпитопов, сосредоточенных на удаленных друг от друга или частично перекрывающихся участках поверхности антигена.

Данные, приведенные в таблице 4, свидетельствуют о том, что МКАТ в пределах каждой группы взаимного ингибирования обладают одинаковой видовой специфичностью, т.е. распознаваемые ими эпитопы представлены на ТГ животных одних видов и отсутствуют у других. Следовательно, каждая группа состоит из МКАТ, обладающих идентичной эпитопной специфичностью.

Таким образом, исследование эпитопной специфичности и перекрестной реактивности МКАТ позволило установить, что среди 52 изученных МКАТ 34 распознают 27 топографически изолированных эпитопов на молекуле ТГ, а 18 МКАТ направлены к 14 эпитопам, образующим группы пространственно сближенных антигенных детерминант. Суммарно совокупность изученных МКАТ распознает на молекуле ТГ человека 41 эпитоп.

Полученные данные подтверждают гипотезу (11иГ й а1., 1987), согласно которой на молекуле ТГ может присутствовать более 40 антигенных детерминант.

6. Выявление линейных и конформационно зависимых эпитопов ТГ.

При обработке антигенов денатурирующими агентами МКАТ, направленные против конформационно зависимых детерминант, полностью или частично утрачивают способность связываться со специфическими эпитопами за счет изменения их конфигурации. Линейные антигенные детерминанты выявляются как на нативном, так и на денатурированном ТГ человека (Ыагкаг е1 а1., 1992; БаЬооп й а1., 1994).

В исследовании было использовано 41 МКАТ, каждое из которых направлено к отдельному эпитопу молекулы ТГ человека. Взаимодействие МКАТ с ТГ, подвергнутым термоденатурации или восстановлению дисульфидных связей, изменялось сходным образом. В результате среди распознаваемых МКАТ эпитопов были идентифицированы 26 конформационно зависимых и 15 линейных антигенных детерминант. Ряд линейных эпитопов на денатурированном ТГ связывал МКАТ сильнее, чем при использовании нативного антигена. Вероятно, сродство МКАТ к данным эпитопам увеличивается за счет изменения конформации молекулы ТГ в ходе денатурации.

Совокупность данных о принадлежности связывающих МКАТ эпитопов к линейным или конформационно зависимым и об их встречаемости на ТГ животных разных видов позволила подразделить антигенные детерминанты ТГ человека на 4 категории (табл. 5-8). Первая из них (табл. 5) объединяет

эпитопы, специфичные для ТГ человека. Все они оказались конформационно зависимыми, ни один из них не был выявлен на АХЭ.

Таблица 5. Эпитопы, видоспецифичные для ТГ человека.

Природа эпитопа Код МКАТ/эпитопа

ШО 2X1 ЗА8,5Р12 5Ш1 6Е7 8Е11

Конформационный + + + + + + +

Линейный - - - - - - -

Ко второй категории (табл. 6) относятся эволюционно консервативные эпитопы, представленные на ТГ человека и млекопитающих. Некоторые из этих эпитопов характерны лишь для нескольких видов животных, другие представлены на ТГ всех или большинства изученных видов млекопитающих. Ни одна из входящих в эту категорию антигенных детерминант не обнаружена на молекуле АХЭ. Можно предположить, что антигенные детерминанты этой категории возникли относительно недавно, поскольку они не обнаружены на ТГ птиц и амфибий.

Таблица 6. Эволюционно консервативные эпитопы ТГ млекопитающих.

Тиреоглобулины Код МКАТ/эпитопа

Конфо рмационные эпитопы Линейные эпитопы

1С11,ЗВ7 4В1 5в5 1В10, 7в5 1В1 2А4 4Т4 8П0 5РЗ, 8в2 2В1 5Е6 1в1 5в4 5С8,10А11 Зв5 5А4,6Н8,8С4 4В12 409

Человека + + + + + + + + + + + + + + + + + +

Быка + + + + + + + + +

Свиньи + + + + + +

Собаки + + + + + + + + + +

Кошки + + + + + + + + +

Крысы + + + + + + + + +

Мыши + + + + + + + + +

Кролика + + + + + + + + + + + +

1 + 1 Присутствие эпитопа, распознаваемого МКАТ, на антигене.

Антигенные детерминанты, отнесенные к третьей категории (табл. 7), очевидно, следует рассматривать как филогенетически более консервативные, чем эпитопы второй категории, поскольку они обнаружены на ТГ птиц, а также животных, относящихся к разным отрядам млекопитающих. В их число входят и эпитопы, общие для ТГ и АХЭ.

Как следует из данных, представленных в таблицах 6 и 7, в число эпитопов второй и третьей категории, наряду с конформационными, входят также линейные антигенные детерминанты. Это позволяет в дальнейшем

соотнести распознаваемые МКАТ антигенные участки с образующими их аминокислотными последовательностями молекул ТГ человека и животных.

Таблица 7. Эволюционно консервативные эпитопы ТГ млекопитающих и птиц.

Код МКАТ/эпитопа

Конформационные ЭПИТОПЫ Линейные эпитопы

Антигены < с- 1Г, чо Оч п N п са о Оч < гч о\

** и. Ь < и о м и. ^ и СО Ш

ь г» 1Л <Г1 т ГЦ чс во С Ь ГЦ во во

г»)

ТГ человека + + + + + + + + + + + + +

ТГ быка + + + + + + + + + +

ТГ свиньи + + + + + + + + +

ТГ собаки + + + + + +

ТГ кошки + + + + + + + +

ТГ крысы + + + + + + + +

ТГ мыши + + + + + + + + +

ТГ кролика + + + + + + + + +

ТГ курицы + + + + + + + + + + + +

ТГ голубя + + + + + +

АХЭ + + + +

| + | Присутствие эпитопа, распознаваемого МКАТ, на антигене.

Наконец, все антигенные детеминанты четвертой категории (табл. 8) -филогенетически наиболее консервативные эпитопы, представленные на ТГ трех исследованных классов позвоночных животных, оказались конформационно зависимыми.

Таблица 8. Общие эпитопы ТГ млекопитающих, птиц и амфибий.

Тпреоглобулины Код МКАТ/эпитопа

Конформационные эпитопы

5Р9 8Е12 \Ю9,2¥2

Человека + + +

Быка + + +

Свиньи + + +

Собаки + +

Кошки + +

Крысы + + +

Мыши + + +

Кролика + + +

Курицы + + +

Голубя +

Лягушки + + +

| + | Присутствие эпитопа, распознаваемого МКАТ, на антигене.

Вероятно, консервативные эпитопы категорий 3 и 4 связаны с выполнением каких-то важных функций молекулы ТГ. В пользу такого предположения свидетельствуют два обстоятельства. Часть эпитопов, входящих в состав категории 3, представлена на АХЭ, в то время как ни одна из детерминант категорий 1 и 2 таким свойством не обладает. Все выявляемые изученными МКАТ линейные антигенные детерминанты относятся к числу эволюционно консервативных. Следовательно, консервативность молекулы ТГ распространяется на ее первичную структуру, не зависящую от конформации, что хорошо согласуется с данными, полученными другими авторами (Mercken et al., 1985; Malthiery, Lissitzky, 1987; Carayanniotis, Rao, 1997; Caturegli et al., 1997; Rose, Burek, 2000; Vali et al., 2000). В то же время, среди эволюционно консервативных детерминант присутствуют и конформационно зависимые эпитопы. Таким образом, можно сделать окончательный вывод, что консервативность молекулы ТГ распространяется не только на аминокислотную последовательность, но и на конформационные структуры.

ВЫВОДЫ

1. В составе панели из 52 моноклональных антител против тиреоглобулина человека обнаружены 20 реагентов, распознающих топографически изолированные эпитопы. Остальные 32 антитела образуют 14 групп взаимного ингибирования связывания с антигеном.

2. На молекуле тиреоглобулина человека с помощью изученной панели моноклональных антител идентифицирована 41 антигенная детерминанта.

3. Эпитопы, распознаваемые 15 моноклональными антителами, сохраняются на молекулах денатурированного антигена и, следовательно, являются линейными. Остальные 26 эпитопов являются конформационно зависимыми.

4. Семь антигенных детерминант тиреоглобулина человека не обнаружены на тиреоглобулинах позвоночных животных изученных классов и могут рассматриваться как видоспецифические. Все эти эпитопы относятся к числу конформационных.

5. Тридцать четыре эпитопа являются эволюционно консервативными, т.к. представлены на тиреоглобулинах человека и животных одного или нескольких видов. К ним относятся все линейные и часть конформационных детерминант тиреоглобулина.

6. Три конформационно зависимых эпитопа (5F9, 8Е12 и 12G9) эволюционно наиболее консервативны. Они обнаружены на тиреоглобулинах позвоночных животных всех изученных классов.

7. Перекрестная реактивность четырех МКАТ с ацетилхолинэстеразой позволяет предполагать, что распознаваемые ими эпитопы локализованы в С-терминальной области молекулы тиреоглобулина человека.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пимевнч А.А., Руденко И.Я., Климович В.Б., Залмовер Е.А. Иммуногистохимическое изучение экспрессии консервативных и неконсервативных эпитопов тиреоглобулина // Сборник трудов Международной конференции "XII Международное Совещание и V Школа по эволюционной физиологии", Санкт-Петербург, 19-25 ноября 2001 г. С. 116.

2. Пиневич А.А., Руденко И.Я., Львова О.А., Климович В.Б., Залмовер Е.А., Романчишен А.Ф. Иммуногистохимическое исследование нормальной и злокачественных тканей щитовидной железы при помощи моноклональных антител против тиреоглобулина // Цитокины и воспаление (Материалы международной научно-практической школы-конференции "Цитокины. Воспаление. Иммунитет", Санкт-Петербург, 23-26 июня 2002 г.). Т. 1. № 2. С. 80-81.

3. Pinevich А.А., Rudenko I.Y., Lvova О.А., and Klimovich V.B. Immunohistochemical study of animal and human thyroglobulin in normal tissue and in pathology // Abstracts of the 6-th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology "Molecular Basis of the Immune Response", Pushchino, September 15-22, 2002. P. 102-103.

4. Пиневич A.A., Руденко И.Я., Львова O.A., Климович В.Б. Иммунофлуоресцентное выявление тиреоглобулина (ТГ) при различных заболеваниях щитовидной железы (1ЦЖ) // Сборник трудов 5-го Конгресса "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии", Москва, 12-14 ноября 2002 г. Т. II. С. 111.

5. Пиневич А.А., Руденко И.Я., Львова О.А., Климович В.Б. Иммуногистохимическое изучение тиреоглобулина при патологии щитовидной железы // Материалы научно-практической конференции "Современные технологии в клинической медицине", Санкт-Петербург, 7-8 октября 2003 г. С. 42.

6. Пиневич А.А., Руденко И.Я., Львова О.А., Климович В.Б. Изучение антигенной структуры тиреоглобулинов (ТГ) позвоночных животных // Русский журнал иммунологии (Russian Journal of Immunology) (Тезисы III съезда иммунологов России, Екатеринбург, 31 мая-4 июня 2004 г.). Т. 9. № 1. С. 64.

7. Пиневич А.А., Руденко И.Я., Львова О.А., Климович В.Б. Изучение тиреоглобулина (ТГ) в метастатических опухолях рака щитовидной железы // Русский журнал иммунологии (Russian Journal of Immunology) (Тезисы III съезда иммунологов России, Екатеринбург, 31 мая-4 июня 2004 г.). Т. 9. № 1. С. 64.

8. Pinevich А.А. The study of antigenic structure of thyroglobulin in the representatives of various taxa of vertebrates // Abstracts of DAAD Summer School on Current Trends In Comparative Immunology, St. Petersburg, May 22-June 5, 2005. P. 24.

9. Pinevich A.A., Rudenko I.Y., Shashkova O.A., and Klimovich V.B. The nature of thyroglobulin epitopes recognized by monoclonal antibodies (Mab) // Abstracts of the 7-th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology "The Interface Between Immunology and Medicine", Moscow, September 5-9, 2005. P. 38.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ В ИЗДАНИЯХ, РЕКОМЕНДОВАННЫХ ВАК

10. Пиневич А.А. Иммуногистохимическое изучение тиреоглобулина при нарушении функции щитовидной железы // Вестник Российского Государственного Медицинского Университета (Материалы Пироговской студенческой научной конференции-2002, Москва, 21 марта 2002 г.). № 1 (22). С. 146.

11. Пиневич А.А., Руденко И.Я., Львова О.А., Климович В.Б. Изучение экспрессии консервативных и неконсервативных эпитопов тиреоглобулина в норме и при патологии щитовидной железы // Медицинская иммунология (Материалы шестой Всероссийской

научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2002", Санкт-Петербург, 20-23 мая 2002 г.). Т. 4. № 2. С. 210-211.

12. Пинсвич A.A., Руденко И.Я., Львова O.A., Климович В.Б. Исследование экспрессии консервативных и неконсервативных эпитопов тиреоглобулина при помощи моноклональных антител // Медицинская иммунология (Материалы VII Всероссийского научного форума с международным участием имени академика В.И.Иоффе "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге", Санкт-Петербург, 23-26 июня 2003 г.). Т. 5. № 3-4. С. 212-213.

13. Пиневич A.A., Руденко И.Я., Львова O.A., Климович В.Б. Исследование экспрессии эволюционно консервативных и видоспецифических эпитопов тиреоглобулина в норме и при патологии щитовидной железы // Цитология (Тезисы докладов и сообщений, представленные на 1-й съезд Общества Клеточной Биологии, Санкт-Петербург, 14-16 октября 2003 г.). Т. 45. № 9. С. 910-911.

14. Пиневич A.A., Руденко И.Я., Львова O.A., Климович В.Б. Эволюционно консервативные и видоспецифические антигенные детерминанты тиреоглобулинов млекопитающих // Журнал Эволюционной Биохимии и Физиологии. Т. 41. № 5. С. 414420.

15. Шашкова O.A., Руденко И.Я., Пиневич A.A., Волкова А.Р., Дора С.В., Климович В.Б. Исследование аутоантител к тиреоглобулину при лечении аутоиммунного тиреоидита L-тироксином // Медицинская Иммунология. Т. 7. № 5-6. С. 511-516.

16. Пиневич A.A., Руденко И.Я., Шашкова O.A., Климович В.Б. Изучение антигенной структуры тиреоглобулина у представителей разных таксонов позвоночных животных // Медицинская иммунология (Материалы IX Всероссийского научного форума с международным участием имени академика В.И.Иоффе "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге. Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии", Санкт-Петербург, 23-26 мая 2005 г.). Т. 7. № 2-3. С. 119-120.

17. Пиневич A.A., Руденко И.Я., Шашкова O.A., Климович В.Б. Характеристика антигенных детерминант тиреоглобулинов позвоночных животных при помощи моноклональных антител // Медицинская иммунология (Материалы X Всероссийского научного форума с международным участием имени академика В.И.Иоффе "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге. Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии", Санкт-Петербург, 29 мая-1 июня 2006 г.). Т. 8. № 2-3. С. 167.

Лицензия ЛР №020593 от 07.08.97

Подписано в печать 05.03.2007. Формат 60x84/16. Печать цифровая. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100. Заказ 1344Ь.

Отпечатано с готового оригинал-макета, предоставленного автором, в Цифровом типографском центре Издательства Политехнического университета. 195251, Санкт-Петербург, Политехническая ул., 29. Тел.:550-40-14 Тел./факс: 297-57-76

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пиневич, Агния Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ТИРЕОГЛОБУЛИН: СТРУКТУРА,

БИОСИНТЕЗ, ЭВОЛЮЦИЯ.

1.1. Тиреоглобулин - предшественник тиреоидных гормонов: структура и биосннтсз.

1.1.1. Выделение, очистка и физико-химические свойства ТГ.

1.1.2. Геи ТГ и его экспрессия.

1.1.3. Структура молекулы ТГ.И

1.1.3.1. Аминокислотный состав и первичная структура молекулы.

1.1.3.2. Углеводная часть молекулы.

1.1.3.3. Сульфатные и фосфатные группы.

1.1.3.4. Содержание йода; йодированные аминокислоты.

1.1.3.5. Трехмерная структура молекулы.

1.1.4. Биосинтез и превращения ТГ.

1.1.4.1. Синтез белковой части ТГ.

1.1.4.2. Посттрансляционные модификации и созревание ТГ.

1.1.4.3. Йодирование ТГ и образование йодтиронинов.

1.1.4.4. Компактизация и хранение ТГ.

1.1.4.5. Импорт ТГ в тиреоциты.

1.1.4.6. Протеолиз ТГ и образование тиреоидных гормонов.:.

1.1.4.7. Контроль образования тиреоидных гормонов; механизмы обратной регуляции.

1.2. Структура ТГ животных и его эволюционное происхождение.

1.2.1. Структура ТГ животных.

1.2.2. Гомология ТГ с другими белками и эволюционное происхождение

1.3. ТГ как антиген.

1.3.1. Получение МКАТ против ТГ.

1.3.2. Изучение эпитопов ТГ человека и животных при помощи МКАТ.

1.3.2.1. Эволюционно консервативные и видоспецифические антигенные детерминанты молекулы ТГ.

1.3.2.2. Йодирование ТГ и его влияние на иммуногенность; выявление гормоногенных участков молекулы ТГ при помощи МКАТ.

1.3.2.3. Конформационные и линейные антигенные детерминанты молекулы

1.3.2.4. Картирование линейных эпитопов молекулы ТГ.

1.3.3. Иммуногистохимическое исследование ТГ человека и животных.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Реагенты.

2.2. Животные.

2.3. Антигены.

2.3.1. Денатурация ТГ.

2.4. Антитела и их производные.

2.5. Методы твердофазного иммуноферментного анализа.

2.5.1. Характеристика препаратов МКАТ против ТГ.

2.5.2. Исследование перекрестной реактивности МКАТ.

2.5.2.1. Исследование перекрестной реактивности МКАТ с ТЗ и Т4.

2.5.2.2. Исследование перекрестной реактивности МКАТ с АХЭ.

2.5.2.3. Исследование перекрестной реактивности МКАТ с ТГ животных.

2.5.3. Изучение конформационно зависимых и линейных эпитопов ТГ.

2.6. Иммуногистохимическое исследование.

2.6.1. Образцы ткани.

2.6.2. Контроли специфичности иммуногистохимического окрашивания.

2.6.3. Иммуногистохимическое выявление ТГ.

2.7. Статистический анализ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Характеристика препаратов МКАТ против ТГ.

3.1.1. Определение титров МКАТ против ТГ.

3.1.2. Изотипирование МКАТ.

3.2. Изучение перекрестной реактивности МКАТ с ТЗ, Т4 и АХЭ.

3.3. Исследование эпитоппой специфичности МКАТ.

3.4. Изучение перекрестной реактивности МКАТ с ТГ животных.

3.4.1. Изучение перекрестной реактивности МКАТ методом ИФА.

3.4.2. Иммуногистохимическое изучение ТГ с помощью МКАТ.

3.4.2.1. Изучение возможности применения МКАТ в иммуногистохимических исследованиях.

3.4.2.2. Контроли специфичности иммуногистохимического окрашивания.

3.4.2.3. Изучение перекрестной активности МКАТ иммуногистохимическими методами.

3.5. Анализ специфичности МКАТ в группах взаимного ингибировапия.

3.6. Эволюционно консервативные и видоспецифические эпитопы

ТГ животных.

3.7. Выявление конформационно зависимых и линейных эпитопов 95 ТГ.

3.7.1. Выявление конформационно зависимых и линейных эпитопов ТГ человека путем восстановления дисульфидных связей молекулы.

3.7.2. Выявление конформационно зависимых и линейных эпитопов ТГ человека путем температурной денатурации молекулы.

3.7.3. Выявление конформационно зависимых и линейных эпитопов ТГ животных.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение антигенных детерминант тиреоглобулина человека и животных с помощью моноклональных антител"

Актуальность проблемы

Тиреоглобулин (ТГ) - йодированный гликопротеин с молекулярной массой 660 кДа, синтезируемый клетками фолликулярного эпителия щитовидной железы [Dunn, 1970; Vali et al., 2000]. Он является предшественником тиреоидных гормонов, играющих ведущую роль в регуляции развития, диффереицировки и метаболизма тканей и органов позвоночных животных [Dumont et al., 2003].

Молекулы ТГ человека и ряда млекопитающих животных представляют собой димеры, построенные из идентичных полипептидных цепей длиной 2760-2770 аминокислотных остатков [Malthiery, Lissitzky, 1987]. В составе цепей обнаружены повторяющиеся последовательности, образующие домены трех типов. Гомология аминокислотных последовательностей ТГ животных разных видов достигает 70-80% [Caturegli et al., 1997; Ramos et al., 2002]. Следствием структурного подобия является перекрестное взаимодействие антител, полученных против ТГ одного из видов животных с ТГ других видов [Stylos, Rose, 1968; Bresler et al., 1990а]. Определенным участкам первичной структуры ТГ свойственна также высокая степень гомологии с другими известными белками, в том числе ацетилхолипэстеразой (АХЭ) [Takagi et al., 1991].

После синтеза полипептидных цепей молекулы ТГ претерпевают множественные посттрансляционные модификации (присоединение углеводных, сульфатных, фосфатных групп и атомов йода) и транслокации (экспорт из тиреоцитов, включение в состав коллоида, импорт в тиреоциты и трансцитоз), взаимодействуя при этом с рядом рецепторов, транспортных белков и ферментов. Участки молекулы ТГ, обеспечивающие эти взаимодействия, до сих пор пе идентифицированы.

Панели МКАТ против ТГ человека и животных получены в нескольких лабораториях. Число антител, включенных в такие панели, обычно не превышает двадцати [Piechaczyk et al, 1985; 1987; Sikorska, 1986; Heilig et al., 1987; Ruf et al., 1987; Bouanani et al., 1989; 1991; 1992; Bresler et al, 1990a;b; Saboori et al, 1994a;b;c; 1998a;b;

Erregragui et al., 1997]. Все эти МКАТ созданы на основе иммунных лимфоцитов мышей линии BALB/c (H-2d), следовательно, спектр распознаваемых ими эпитопов ТГ ограничен репертуаром иммунного ответа мышей указанной линии.

В лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ создана уникальная панель из 52 МКАТ против ТГ человека. Основное отличие этой панели от описанных ранее состоит в том, что донорами иммунных лимфоцитов при получении гибридом служили мыши линии SJL/J, отличающиеся от BALB/c главным локусом гистосовместимости (H-2s) и репертуаром иммунного ответа. Очевидно, полученная совокупность МКАТ распознает иной спектр антигенных детерминант ТГ и требует специального изучения.

Цель и задачи исследования

Цель работы состояла в изучении свойств МКАТ и исследовании природы распознаваемых ими антигенных детерминант ТГ у представителей разных таксонов позвоночных животных.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Охарактеризовать полученные МКАТ по антиген-связывающей активности и изотопической принадлежности.

2. Изучить перекрестную реактивность МКАТ с ТГ животных разных видов и установить, какие из эпитопов ТГ человека являются видоспецифическими, а какие -эволюционно консервативными.

3. Исследовать взаимодействие МКАТ с тиреодными гормонами и АХЭ.

4. Исследовать эпитопнуго специфичность МКАТ.

Основные положения, выносимые па защиту

2. Распознаваемые МКАТ эпитопы не относятся к числу гормоногенных.

5. Видоспецифические эпитопы ТГ человека являются конформациоиио зависимыми. Все линейные эпитопы молекулы ТГ человека относятся к числу эволюционно консервативных.

Научная новизна работы

Впервые установлено, что на молекуле ТГ человека присутствуют более 40 антигенных детерминант, выявляемых МКАТ.

Теоретическая и практическая значимость работы

Выявление линейных эпитопов молекулы ТГ позволяет в дальнейшем идентифицировать образующие их последовательности аминокислотных остатков и, таким образом, картировать ряд антигенных детерминант ТГ человека и животных.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на XII Международном Совещании по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2001), Пироговской студенческой научной конференции - 2002 (Москва, 2002), VI, VII, IX и X Всероссийских научных форумах с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург,

2002, 2003, 2005, 2006), международной научно-практической школе-конференции "Цитокины. Воспаление. Иммунитет" (Санкт-Петербург, 2002), 6-й (Пущино, 2002) и 7-й (Москва, 2005) Школах Джона Хамфри по иммунологии, 5-ом Конгрессе "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии" (Москва, 2002), научно-практической конференции "Современные технологии в клинической медицине" (Санкт-Петербург, 2003), 1-ом съезде Общества клеточной биологии (Санкт-Петербург, 2003), III съезде иммунологов России (Екатеринбург, 2004) и Школе DAAD "Current Trends in Comparative Immunology. The Interface Between Immunology and Medicine" (Санкт-Петербург, 2005).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 17 работ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работы состоит из введения; обзора литературы; экспериментальной части, включающей методы и результаты исследования; обсуждения; выводов; списка литературы, состоящего из 303 источников и приложения. Работа изложена на 142 страницах и содержит 23 рисунка и 19 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Пиневич, Агния Александровна

выводы

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пиневич, Агния Александровна, Санкт-Петербург

1. Абелев Г.И. и Карамова Э.Р. Автоматика на пленках: противоточный изотахофорез и иммуноэлектрохроматография. 1996. - Т.61. - С. 1984-1994.

2. Березин В.А., Гербильский Л.В. и Корниловская И.Н. Тиреоглобулин// Пробл. эндокринол. 1993. - Т.39. - С.54-59.

3. Волчков В.А. Краткое практическое руководство по биометрии для врачей. Издание 2-ое. С-Пб, 2004. 60с.

4. Джонсон Дж. Методы иммунофлуоресценции. В кн.: Антитела. Т.2. Ред. Кэтти Д. М.: Мир, 1991. С.268-300.

5. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б. и Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментпого анализа. М.: Высшая школа, 1991. 288с.

6. Климович В.Б., Руденко И.Я. и Грязева И.В. Моноклональные антитела против тиреоглобулина человека: исследование специфичности// Биотехнология. 1998. -С.51-56.

7. Климович В.Б., Руденко И.Я., Василевский Д.И. и Львова О.А. Изотипический состав и эпитопная специфичность аутоантител против тиреоглобулина// Медицинская иммунология. 2000. - Т.2. - С.377-383.

8. Климович В.Б., Самойлович М.П., Грязева И.В. и др. Моноклональные антитела на основе репертуара иммунного ответа мышей линии SJL/J// Медицинская иммунология. -1999.-Т.1.-С.47-58.

9. Кэтти Д. и Райкундалиа Ч. Иммунодиффузия в геле, иммуноэлектрофорез и методы иммунохимического окрашивания. В кн.: Антитела. Т.1. Ред. Кэтти Д. М.: Мир, 1991а. С. 197-237.

10. Кэтти Д. и Райкундалиа Ч. Иммунофермептпый анализ (ИФА). В кн.: Антитела. Т.2. Ред. Кэтти Д. М.: Мир, 1991b. С.152-238.

11. Милстейн Ц. Моноклональные антитела. В кн.: Молекулы и клетки. Выпуск седьмой. Ред. Георгиев Г.П. М.: Мир, 1982. С.24-40.

12. Allander S.V., Larsson С., Ehrenborg Е. et al. Characterization of the chromosomal gene and identification of a functional promoter for human insulin-like growth factor binding protein-5//J. Biol. Chem.- 1994.-Vol.269. -P.10891-10898.

13. Alliel P.M., Perin J.P., Jolles P. and Bonnet F.J. Testican, a multidomain testicular proteoglycan resembling modulators of cell social behaviour// Eur. J. Biochem. 1993. -Vol.214. -P.347-350.

14. Alvino C.G., Acquaviva A.M.M., Catanzano A.M.M. and Tassi V. Evidence that thyroglobulin has an associated protein kinase activity correlated with the presence of an adenosine triphosphate binding site// Endocrinology. 1995. - Vol.136. - P.3179-3185.

15. Arima T. and Spiro R.G. Studies of the carbohydrate units of thyroglobulin. Structure of the mannose-N-acetylglucosamine unit (unit A) of the human and calf proteins// J. Biol. Chem. -1972. Vol.247. - P.1836-1848.

16. Arima Т., Spiro MJ. and Spiro R.J. Studies on the carbohydrate units of exp Tg: evaluation of their micro-heterogeneity in the human and calf proteins// J. Biol. Chem. 1972. -Vol.247.-P. 1825-1835.

17. Arvan P., Kim P.S., Kuliawat R. et al. Intracellular protein transport to the thyrocyte plasma membrane: potential implications for thyroid physiology// Thyroid. 1997. - Vol.7. - P.89-105.

18. Baas F., Bikker H., Geurts van Kessel A. et al. The human thyroglobulin gene: a polymorphic marker localized distal to c-myc on chromosome 8 band q24// Hum. Genet. -1985.-Vol.69.-P.138-145.

19. Baryshev M., Sargsyan E. and Mkrtchian S. Erp29 is an essential endoplasmic reticulum factor regulating secretion of thyroglobulin// Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. -Vol.340.-P.617-624.

20. Bastiani P., Papandreou M.J., Blanck O. et al. On the relationship between completion of jV-acetyllactosamine oligosaccharide units and iodine content of thyroglobulin: a reinvestigation// Endocrinology. 1995. - Vol.136. - P.4204-4209.

21. Baumeister F.A.M. and Herzog V. Sulfation of thyroglobulin: a ubiquitos modification in vertebrates// Cell. Tis. Res. 1988. - Vol.252. - P.349-358.

22. Bedin C., Ropars A., Mignon-Godefroy K. and Charreire J. Molecular heterogeneity of antigen- or idiotype-induced anti-thyroglobulin monoclonal antibodies// Clin. Exp. Immunol. 1995. - Vol.100. - P.463-469.

23. Bellet D., Schlumberger M., Bidart J.M. et al. Production and in vitro utilization of monoclonal antibodies to human thyroglobulin// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1983. -Vol.56.-P.530-533.

24. Berg G. and Bjorkman U. The structure and properties of 27S and larger iodoproteins in the thyroid gland// Biochim. Biophys. Acta. 1975. - Vol.405. - P.l 1-22.

25. Berg G. and Ekholm R. Electron microscopy of low iodinated thyroglobulin molecule// Biochim. Biophys. Acta. 1975. - Vol.386. -P.422-431.

26. Berg V., Vassart G. and Christophe D. Identification of a thyroid-specific and cAMP-responsive enhancer in the upstream sequences of the human thyroglobulin promoter// Biochim. Biophys. Acta. 1996. - Vol.307. - P.35-38.

27. Berge-Lefranc J.-L., Cartouzou G., Mattei M.-G. et al. Localization of the thyroglobulin gene by in situ hybridization to human chromosomes// Hum. Genet. 1985. - Vol.69. - P.28-31.

28. Berndorfer U., Wilms H. and Herzog V. Multimerization of thyroglobulin (TG) during extracellular storage: isolation of highly cross-linked TG from human thyroids// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1996. - Vol.81. - P.1918-1926.

29. Bertaux F., Ыоё1 M., Lasmoles F. and Fragu P. Identification of the exon structure and four alternative transcripts of the thyroglobulin-encoding gene// Gene. 1995. - Vol.156. -P.297-301.

30. Bertaux F., Noel M., Malthiery Y. and Fragu P. Demonstration of a heterogeneous transcription pattern of thyroglobulin mRNA in human thyroid tissues// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. - Vol.178. - P.586-592.

31. Bjorkman U. and Ekholm R. Effect of tunicamycin on thyroglobulin secretion// Eur. J. Biochem. 1982. - Vol.125. - P.585-591.

32. Bouanani M., Hanin V., Bastide M. and Pau B. New antigenic cluster on human thyroglobulin defined by an expanded panel of monoclonal antibodies// Immunol. Lett. -1992.-Vol.32.-P.259-264.

33. Bouanani M., Piechaczyk M., Pau В. et al. Significance of the recognition of certain antigenic regions on the human thyroglobulin molecule by natural autoantibodies from healthy subjects// J. Immunol.- 1989.-Vol.143.-P.1129-1132.

34. Bouchilloux S., Ferrand M., Gregoire J. and Chabaud O. Localization in smooth microsomes from sheep thyroid of both a galactosyltransferase and an N-acetylhexosaminyltransferase// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1969. - Vol.37. - P.538-544.

35. Bresler H.S., Burek C.L. and Rose N.R. Autoantigenic determinants on human thyroglobulin. I. Determinant specificities of murine monoclonal antibodies// Clin. Immunol. Immunopathol. 1990a. - Vol.54. - P.64-75.

36. Brisson A., Marchelidon J. and Lachiver F. Comparative studies on the amino acid composition of thyroglobulins from various lower and higher vertebrates: phylogenetic aspect// Сотр. Biochem. Physiol. (Part B). -1974. Vol.49. - P.51-63.

37. Brocas H., Christophe D., Pohl V. and Vassart G. Cloning of human thyroglobulin complementary DNA// FEBS Lett. 1982. - Vol.137. - P. 189-192.

38. Cahnmann H.J., Pommier J. and Nunez J. Spatial requirement for coupling of iodotyrosine residues to form thyroid hormone// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. - Vol.74. - P.5333-5335.

39. Carayanniotis G. and Rao V.P. Searching for pathogenic epitopes in thyroglobulin: parameters and caveats// Immunol. Today. 1997. - Vol.l8. - P.83-88.

40. Caturegli P., Mariotti S., Kuppers R.C. et al. Epitopes on thyroglobulin: a study of patients with thyroid disease// Autoimmunity. 1994. - Vol.18. - P.41-49.

41. Caturegli P., Vidalain P.O., Vali M. et al. Cloning and characterization of murine thyroglobulin cDNA// Clin. Immunol. Immunopathol. 1997. - Vol.85. - P.221-226.

42. Chan C.T., Byfield P.G., Callus M. et al. Structural differences around hormonogenic sites on thyroglobulins from different species detected by monoclonal antibodies// Eur. J. Biochem. 1986. - Vol. 159. - P.563-567.

43. Chan C.T.J., Byfield P.G.H., Himsworth R.L. and Shepherd P. Human autoantibodies to thyroglobulin are directed towards a restricted number of human specific epitopes// Clin. Exp. Immunol. 1987.-Vol.70.-P.516-523.

44. Cheftel С. and Bouchilloux S. Glycoprotein biosynthesis in sheep thyroid slices incubated with radioactive glucosamine and leucine. I. Polysomes, microsomes and postmicrosomal fraction//Biochim. Biophys. Acta. 1968. - Vol.170. - P. 15-28.

45. Cheftel C., Bouchilloux S. and Chabaud O. Glycoprotein biosynthesis in sheep thyroid slices incubated with radioactive glucosamine and leucine. II. A study of microsomal sub fractions// Biochim. Biophys. Acta. 1968. - Vol.170. -P.29^4.

46. Chronopoulou E., Michalak T.I. and Carayanniotis G. Autoreactive IgG elicited in mice by the non-dominant but pathogenic thyroglobulin peptide (2495-2511): implications for thyroid autoimmunity// Clin. Exp. Immunol. 1994. - Vol.98. - P.89-94.

47. Clark P.M. and Beckett G. Can we measure serum thyroglobulin?// Ann. Clin. Biochem. -2002.-Vol.39.-P. 196-202.

48. Consiglio E., Acquaviva A.M., Formisano S. et al. Characterization of phosphate residues on thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1987. - Vol.262. - P. 10304-10314.

49. Consiglio E., Salvatore G., Rail J.E. and Kohn L.D. Thyroglobulin interactions with thyroid plasma membranes. The existence of specific receptors and their potential role// J. Biol. Chem. 1979. - Vol.254. - P.5065-5076.

50. Curcio F., Ambesi-Impiombato F.S., Perrella G. and Coon H.G. Long-term culture and functional characterization of follicular cells from adult normal human thyroids// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol.91. -P.9004-9008.

51. Dai G., Levy O., Carrasco N. Cloning and characterization of the thyroid iodide transporter// Nature. 1996. - Vol.379. - P.458^60.

52. Dai Y., Carayanniotis K.A., Eliades P. et al. Enhancing or suppressive effects of antibodies on processing of a pathogenic T cell epitope in thyroglobulin// J. Immunol. 1999. -Vol.162.-P.6987-6992.

53. Dai Y.D., Rao V.P. and Carayanniotis G. Enhanced iodination of thyroglobulin facilitates processing and presentation of a cryptic pathogenic peptide// J. Immunol. 2002. - Vol.168. -P.5907-5911.

54. De Baets M.H., Theunissen R., Кок K. et al. Monoclonal antibodies to human thyroglobulin as probes for thyroglobulin structure// Endocrinology. 1987. - Vol.120. - P.l 104-1 111.

55. De Crombrugghe В., Pitt-Rivers R. and Edelhoch H. The properties of thyroglobulin. XI. The reduction of the disulfide bonds// J. Biol. Chem. 1966. - Vol.241. - P.2766-2773.

56. De Felice M. and Di Lauro R. Thyroid development and its disorders: genetics and molecular mechanisms// Endocrine Rev. 2004. - Vol.25. - P.722-746.

57. De Micco C., Kopp F., Vassko V. and Grino M. In situ hybridization and immunohistochemistry study of thyroid peroxidase expression in thyroid tumors// Thyroid. -2000.-Vol.10.-P.109-115.

58. De Micco C., Ruf J., Chrestian M.-A. et al. Immunohistochemical study of thyroid peroxidase in normal, hyperplastic, and neoplastic human thyroid tissues// Cancer. 1991. -Vol.67.-P.3036-3041.

59. Deme D., Pommier J. and Nunez J. Specificity of thyroid hormone synthesis. The role of thyroid peroxidase// Biochim. Biophys. Acta. 1978. - Vol.540. - P.73-82.

60. Derrien Y., Michel R. and Roche J. Recherches sur la preparation et les proprietes de la thyroglobuline pure ■ I// Biochim. Biophys. Acta. 1948. - Vol.2. - P.454-470.

61. Derrien Y., Michel R., Pedersen K.O. and Roche J. Recherches sur la preparation et sur les proprietes de la thyroglobuline pure. II// Biochim. Biophys. Acta. 1949. - Vol.3. - P.436-441.

62. Deshpande V. and Venkatesh S.G. Thyroglobulin, the prothyroid hormone: chemistry, synthesis and degradation// Biochim. Biophys. Acta. 1999. - Vol.1430. -P.157-178.

63. Deshpande V. Buffalo thyroglobulin// Сотр. Biochem. Physiol. (Part B). 1991. - Vol.100. -P.217-221.

64. Deshpande V., Venkatesh S.G., Narita T. and Majid M.A. Purification and characterization of camel thyroglobulin// Сотр. Biochem. Physiol. (Part B). 1997. - Vol.118. - P.751-755.

65. Di Jeso В. and Gentile F. TSH-induced galactose incorporation at the NH2-terminus of thyroglobulin secreted by FRTL-5 cells// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. -Vol.189. -P.1624-1630.

66. Di Lauro R., Damante G., De Felice M. et al. Molecular events in the differentiation of the thyroid gland// J. Endocrinol. Invest. 1995. - Vol.18. - P.l 17-119.

67. Dohan 0., de la Vieja A. and Carrasco N. Molecular study of the sodium-iodide symporter (NIS): a new field in thyroidology// ТЕМ. 2000. - Vol.ll.- P.99-105.

68. Donda A., Javaux F., Van Renterghem P. et al. Human, bovine, canine and rat thyroglobulin promoter sequences display species-specific differences in an in vitro study// Mol. Cell Endocrinol. 1993. - Vol.90. - P.R23-R26.

69. Donda A., Vassart G. and Christophe D. Isolation and characterization of the canine thyroglobulin gene promoter region// Biochim. Biophys. Acta. 1991. - Vol.1090. - P.235-237.

70. Druetta L., Bornet H., Sassolas G. and Rousset B. Identification of thyroid hormone residues on serum thyroglobulin: a clue to the source of circulating thyroglobulin in thyroid diseases// Eur. J. Endocrinol. 1999. - Vol.140. -P.457-467.

71. Dumont J.E., Corvilain B. and Maenhaut C. The phylogeny, ontogeny, anatomy and regulation of the iodine metabolizing thyroid, http://www.thyroidmanager.org, 2003. P. 1-76.

72. Dunn A.D. and Dunn J.T. Cysteine proteinases from human thyroids and their actions on thyroglobulin// Endocrinology. 1988. - Vol.123. - P.1089-1097.

73. Dunn A.D. and Dunn J.T. Thyroglobulin degradation by thyroidal proteases: action of purified cathepsin D// Endocrinology. 1982. - Vol.111. -P.280-289.

74. Dunn A.D., Corsi C.M., Myers H.E. and Dunn J.T. Tyrosine 130 is an important outer ring donor for thyroxine formation in thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1998. - Vol.273. -P.25223-25229.

75. Dunn J.T. and Dunn A.D. The importance of thyroglobulin structure for thyroid hormone biosynthesis// Biochimie. 1999. - Vol.81. - P.505-509.

76. Dunn J.T. The amino acid neighbors of thyroxine in thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1970. -Vol.245.-P.5954-5961.

77. Dunn J.T. Thyroglobulin retrieval and the endocytotic pathway. In: The Thyroid: a Fundamental and Clinical Text. Edited by Braverman L.E. and Utiger R.D. Philadelphia: Lippincott-Raven, 1996a. P.81-84.

78. Dunn J.T. Thyroglobulin: chemistry and biosynthesis. In: The Thyroid: a Fundamental and Clinical Text. Edited by Braverman L.E. and Utiger R.D. Philadelphia: Lippincott-Raven, 1996b. P.85-95.

79. Dunn J.T., Anderson P.C., Fox J.W. et al. The sites of thyroid hormone formation in rabbit thyroglobulin//J. Biol. Chem.- 1987.-Vol.262.-P. 16948-16952.

80. Durand J., Malthiery Y., Chabaud 0. and Lissitzky S. L'extremite C-terminale de la thyroglobuline ovine present de fortes homologies interspecifiques// C. R. Seances. Soc. Biol. Fil. (Paris). 1987. - Vol. 181. -P.25 8-266.

81. Edelhoch H. and Lippoldt R.E. The properties of thyroglobulin. II. The effects of sodium dodecyl sulfate//J. Biol. Chem. 1960.-Vol.235.-P. 1335-1340.

82. Edelhoch H. and Metzger H. The properties of thyroglobulin. V. The properties of denatured thyroglobulin//J. Am. Chem. Soc. 1961. - Vol.83. -P.1428-1435.

83. Edelhoch H. The properties of thyroglobulin. I. The effects of alkali// J. Biol. Chem. 1960. - Vol.235.-P.1326-1334.

84. Edelhoch H., Perlman P.L. and Wilchek M. Tyrosine fluorescence in proteins// Ann. NY Acad. Sci. 1969. - Vol.158. - P.391-409.

85. El Hassani R.A., Estienne V., Blanchin S. et al. Antigenicity and immunogenicity of the C-terminal peptide ofhuman thyroglobulin//Peptides. -2004. Vol.25. -P.1021-1029.

86. Erregragui K., Prato S., Miquelis R. et al. Antigenic mapping of human thyroglobulin. Topographic relationship between antigenic regions and functional domains// Eur. J. Biochem. 1997. - Vol.244. - P.801-809.

87. Everett L.A., Glaser В., Beck J.C. et al. Pendred syndrome is caused by mutations in a putative sulphate transporter gene (PDS)// Nat. Genet. 1997. - Vol.17. - P.411-422.

88. Fassler C.A., Dunn J.T., Anderson P.C. et al. Thyrotropin alters the utilization of thyroglobulin's hormonogenic sites// J. Biol. Chem. 1988. - Vol.263. - P.17366-17371.

89. Feldman J.D., Vazques J.J. and Kurtz S.M. Maturation of the rat fetal thyroid// J. Biophys. Biochem. Cytol. 1961. - Vol.11. - P.365-383.

90. Fenouillet E., Fayet G., Hovsepian S. et al. Immunochemical evidence for a role of complex carbohydrate chains in thyroglobulin antigenicity// J. Biol. Chem. 1986. -Vol.261.-P.15153-15158.

91. Filetti S., Bidart J.-M., Arturi F. et al. Sodium/iodide symporter: a key transport system in thyroid cancer cell metabolism// Eur. J. Endocrinol. 1999. - Vol.141. - P.443-457.

92. Friedrichs В., Tepel C., Reinheckel T. et al. Thyroid functions of mouse cathepsins В, K, and L// J. Clin. Invest. 2003. - Vol. 111. - P. 1733-1745.

93. Gaillard O. La thyroglobuline// Immunoanal. Biol. Spec. 2000. - Vol.15. - P.14-18.

94. Galesa K., Pain R., Jongsma M.A. et al. Structural characterization of thyroglobulin type-1 domains of equistatin// FEBS Lett. 2003. - Vol.539. - P.120-124.

95. Gavaret J.-M., Cahnmann H J. and Nunez J. Thyroid hormone synthesis in thyroglobulin. The mechanism of the coupling reaction// J. Biol. Chem. 1981. - Vol.256. - P.9167-9173.

96. Gavaret J.-M., Nunez J. and Cahnmann H.J. Formation of dehydroalanine residues during thyroid hormone synthesis in thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1980. - Vol.255. - P.5281-5285.

97. Gentile F., Conte M. and Formisano S. Thyroglobulin as an autoantigen: what can we learn about immunopathogenicity from the correlation of antigenic properties with protein structure?// Immunology. 2004. - Vol.112. - P. 13-25.

98. Gentile F., Ferranti P., Mamone G. et al. Identification of hormonogenic tyrosines in fragment 1218-1591 of bovine thyroglobulin by mass spectrometry. Hormonogenic acceptor Tyr-1291 and donor Tyr-1375// J. Biol. Chem. 1997. - Vol.272. - P.639-646.

99. Gentile F., Palumbo G. and Salvatore G. The origin of the electrophoretic doublet of thyroglobulin// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. - Vol. 186. - P. 1185-1191.

100. Giraud A., Siffroi S., Lanet J. and Franc J.-L. Binding and internalization of thyroglobulin: selectivity, pH dependence, and lack of tissue specificity// Endocrinology. -1997. Vol.138. - P.2325-2332.

101. Gleason S.L., Gearhart P., Rose N.R. and Kuppers R.C. Autoantibodies to thyroglobulin are encoded by diverse V-gene segments and recognize restricted epitopes// J. Immunol. -1990. Vol.l45. - P. 1768-1775.

102. Gmeiner B.M. and Seelos C.C. Tyrosine phosphorylation blocks tyrosine free radical formation and hence the hormonogenic iodination// Free Radic. Biol. Med. 1996. - Vol.21. -P.349-351.

103. Haeberli A., Salvatore G., Edelhoch H. and Rail J.E. Relationship between iodination and the polypeptide chain composition of thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1975. - Vol.250. -№19.-P.7836-7841.

104. Hanham C.A., Chapman A.J., Sheppard M.C. et al. Glycosylation of human thyroglobulin and characterization by lectin affinity electrophoresis// Biochim. Biophys. Acta. 1986. - Vol.884. - P.158-165.

105. Henry M., Malthiery Y., Zanelli E. and Charvet B. Epitope mapping of human thyroglobulin// J. Immunol. 1990. - Vol.l45. - P.3692-3698.

106. Henry M., Zanelli E., Piechaczyk M. et al. A major human thyroglobulin epitope defined with monoclonal antibodies is mainly recognized by human autoantibodies// Eur. J. Immunol. 1992. - Vol.22. - P.315-319.

107. Herzog V. Transcytosis in thyroid cells// J. Cell Biol. 1983. - Vol.97. - P.607-617.

108. Hitzel C., Kanzler H., Konig A. et al. Thyroglobulin type-I-like domains in invariant chain fusion proteins mediate resistance to cathepsin L digestion// FEBS Lett. 2000. -Vol.485.-P.67-70.

109. Hjalm G., Murray E., Crumley G. et al. Cloning and sequencing of human gp330, a Ca2+-binding receptor with potential intracellular signaling properties// Eur. J. Biochem. 1996. -Vol.239.-P.132-137.

110. Hopp T.P. and Woods K.R. Prediction of protein antigenic determinants from amino acid sequences// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1981. Vol.78. - №6. - P.3824-3828.

111. Hoshino T. and Ui N. Comparative studies on the properties of thyroglobulins from various animal species// Endocrinol. Jpn. 1970. - Vol.17. - P.521-533.

112. Huang S.S., Cerullo M.A., Huang F.W. and Huang J.S. Activated thyroglobulin possesses transforming growth factor-/? activity// J. Biol. Chem. 1998. - Vol.273. -P.26036-26041.

113. Ikekita M., Yajima H., Murata T. et al. Carbohydrate analysis of porcine thyroglobulin isoforms with different iodine contents// Biochim. Biophys. Acta. 1997. - Vol.1336. -P.557-565.

114. Ingbar S.H., Askonas B.A. and Work T.S. Observations concerning the heterogeneity of ovine thyroglobulin// Endocrinology. 1959. - Vol.64. - P. 110-122.

115. Jaume J.С., Guo J., Pauls D.L. et al. Evidence for genetic transmission of thyroid peroxidase autoantibody eptopic "fingerprints"// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999. -Vol.84.-P.1424-1431.

116. Kameda Y. and Ikeda A. Immunochemical and immunohistochemical studies on the 27 S iodoprotein of dog thyroid with reference to thyroglobulin-like reaction of the parafollicular cells// Biochim. Biophys. Acta. 1979. - Vol.577. - P.241-247.

117. Kawaoi A. Early stages of synthesis of thyroglobulin (Tg), thyroxine (T4), and triiodothyronine (T3) in fetal rat thyroid. An immunoelectron microscopic study// J. Histochem. Cytochem. 1987. - Vol.35. - P.l 137-1142.

118. Kazuo Y., Tsutomo Т., Tatsuro I. and Toshiaki 0. The structure of carbohydrate unit В of porcine thyroglobulin// Biochem. J. 1981. - Vol.195. - P.701-713.

119. Kim P.S. and Arvan P. Endocrinopathies in the family of endoplasmic reticulum (ER) storage diseases: disorders of protein trafficking and the role of ER molecular chaperones// Endocrine Rev. 1998. - Vol.19. -P.173-202.

120. Kim P.S. and Arvan P. Folding and assembly of newly synthesized thyroglobulin occurs in a pre-Golgi compartment// J. Biol. Chem. 1991. - Vol.266. - P. 12412-12418.

121. Kim P.S., Dunn J.T. and Kaiser D.L. Similar hormone-rich peptides from thyroglobulins of five vertebrate classes// Endocrinology. 1984. - Vol.114. - P.369-374.

122. Klein M., Gestmann I., Bemdorfer U. et al. The thioredoxin boxes of thyroglobulin: possible implications for intermolecular disulfide bond formation in the follicle lumen// Biol. Chem. 2000. - Vol.381. - P.593-601.

123. Kodama K., Sikorska H., Bayly R. et al. Use of monoclonal antibodies to investigate a possible role of thyroglobulin in the pathogenesis of Graves' ophthalmopathy// J, Clin. Endocrinol. Metab. 1984. - Vol.59. - P.67-73.

124. Kohler G. and Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity// Nature. 1975. - Vol.256. - P.495-497.

125. Kohler G. and Milstein C. Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion// Eur. J. Immunol. 1976. - Vol.6. - P.511-519.

126. Kohn L.D. Editorial: thyroglobulin a new cyclic adenosine monophosphate-dependent protein kinase?// Endocrinology. - 1995. - Vol.136. -P.3177-3178.

127. Kohn L.D., Suzuki К., Nakazato M. et al. Effects of thyroglobulin and pendrin on iodide flux through the thyrocyte// TRENDS Endocrinol. Metab. 2001. - Vol.12. - P.10-15.

128. Kohno Y., Naito N., Hiyama Y. et al. Thyroglobulin and thyroid peroxidase share common eptitopes recognized by autoanibodies in patients with chronic autoimmune thyroiditis// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1988. - Vol.67. - №5. - P.899-907.

129. Kondo E. and Kondo Y. Monoclonal antibodies to hog thyroglobulin recognizing disulfide dependent conformational structures// Mol. Immunol. 1984. - Vol.21. - P.581-588.

130. Kostrouch Z., Bernier-Valentin F., Munari-Silem T. et al. Thyroglobulin molecules internalized by thyrocytes are sorted in early endosomes and partially recycled back to the follicular lumen// Endocrinology. 1993. - Vol.132. - P.2645-2653.

131. Kostrouch Z., Munari-Silem Y., Rajas F. et al. Thyroglobulin internalized by thyrocytes passes through early and late endosomes// Endocrinology. 1991. - Vol.129. - P.2202-2211.

132. Kotani Т., Maeda M., Ohtaki S. et al. Analyses of the specificity of mouse monoclonal antibodies to syngeneic and allogeneic thyroglobulins// Clin. Immunol. Immunopathol. -1985.-Vol.34.-P.147-157.

133. Kurata A., Ohta K., Mine M. et al. Monoclonal antihuman thyroglobulin antibodies// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1984. - Vol.59. - P.573-579.

134. Lamas L., Anderson P.C., Fox J.W. and Dunn J.T. Consensus sequence for early iodination and hormonogenesis in human thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1989. - Vol.264. -P.13541-13545.

135. Lamas L., Taurog A., Salvatore G. and Edelhoch H. Preferential synthesis of thyroxine from early iodinated tyrosyl residues in thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1974. - Vol.249. -P.2732-2737.

136. Larsen P.R. and Berry M.J. Nutritional and hormonal regulation of thyroid hormone deiodinases// Annu. Rev. Nutr. 1995. - Vol.15. - P.323-352.

137. Lau S.K., Luthringer D.J. and Eisen R.N. Thyroid transcription factor-1: a review// Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. 2002. - Vol. 10. - P.97-102.

138. Ledent С., Parmentier M. and Vassart G. Tissue-specific expression and methylation of a thyroglobulin-chloramphenicol acetyltransferase fusion gene in transgenic mice// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol.87. - P.6176-6180.

139. Lemansky P. and Herzog V. Endocytosis of thyroglobulin is not mediated by mannose-6-phosphate receptors in thyrocytes. Evidence for low-affinity-binding sites operating in the uptake of thyroglobulin// Eur. J. Biochem. 1992. - Vol.209. - P.l 11-119.

140. Lenarcic B. and Bevec T. Thyropins new structurally related proteinase inhibitors// Biol. Chem. - 1998. - Vol.379. - P.l05-111.

141. Lenarcic B. and Turk V. Thyroglobulin type-1 domains in equistatin inhibit both papain-like cysteine proteinases and cathepsin D// J. Biol. Chem. 1999. - Vol.274. - P.563-566.

142. Lenarcic В., Krishnan G., Borukhovich R. et al. Saxiphilin, a saxitoxin-binding protein with two thyroglobulin type 1 domains, is an inhibitor of papain-like cysteine proteinases// J. Biol. Chem. -2000. Vol.275. - P. 15572-15577.

143. Lenarcic В., Ritonja A., Strukelj B. et al. Equistatin, a new inhibitor of cysteine proteinases from Actinia equina, is structurally related to thyroglobulin type-1 domain// J. Biol. Chem. 1997.-Vol.272.-P.13899-13903.

144. Leonardi A., Acquaviva R., Marinaccio M. et al. Presence of dityrosine bridges in thyroglobulin and their relationship with iodination// Biochem. Biophys. Res. Commun. -1994. Vol.202. - P.38-43.

145. Lisi S., Pinchera A., McCluskey R.T. et al. Binding of heparin to human thyroglobulin (Tg) involves multiple binding sites including a region corresponding to a binding site of rat Tg// Eur. J. Endocrinol. 2002. - Vol.146. - P.591-602.

146. Lundgren S., Carling Т., Hjalm G. et al. Tissue distribution of human gp330/megalin, a putative Ca2+-sensing protein// J. Histochem. Cytochem. 1997. - Vol.45. - P.383-392.

147. Mallet В., Lejeune P.J., Baudry N. et al. N-Glycans modulate in vivo and in vitro thyroid hormone synthesis. Study at the N-terminal domain of thyroglobulin// J. Biol. Chem. 1995. - Vol.270.-P.29881-29888.

148. Malthiery Y. and Lissitzky S. Primary structure of human thyroglobulin deduced from the sequence of its 8448-base complimentary DNA// Eur. J. Biochem. 1987. - Vol.165. -P.491-498.

149. Malthiery Y., Marriq C., Berge-Lefranc J.-L. et al. Thyroglobulin structure and function: recent advances// Biochimie. 1989. - Vol.71. - P. 195-210.

150. Mann K., Deutzmann R., Aumailley M. et al. Amino acid sequence of mouse nidogen, a multidomain basement membrane protein with binding activity for laminin, collagen IV and cells// EMBO J. 1989. - Vol.8. - P.65-72.

151. Marino M., Chiovato L., Mitsiades N. et al. Circulating thyroglobulin transcytosed by thyroid cells is complexed with secretory components of its endocytic receptor megalin// J. Clin. Endocrinol. Metab. 2000a. - Vol.85. - P.3458-3467.

152. Marino M., Freidlander J.A., McCluskey R.T. and Andrews D. Identification of a heparin-binding region of rat thyroglobulin involved in megalin binding// J. Biol. Chem. -1999. Vol.274. - P.30377-30386.

153. Marino M., Lisi S., Pinchera A. et al. Targeting of thyroglobulin to transcytosis following megalin-mediated endocytosis: evidence for a preferential pH-independent pathway// J. Endocrinol. Invest. 2003. - Vol.26. - P.222-229.

154. Marino M., Zheng G., Chiovato L. et al. Role of megalin (gp330) in transcytosis of thyroglobulin by thyroid cells. A novel function in the control of thyroid hormone release// J. Biol. Chem. 2000b. - Vol.275. - P.7125-7137.

155. Marino M. and McCluskey R.T. Role of thyroglobulin endocytic pathways in the control of thyroid hormone release// Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2000. - Vol.279. - P.C1295-C1306.

156. Marriq C., Lejeune P.-J., Venot M. and Vinet L. Hormone formation in the isolated fragment 1-171 of human thyroglobulin involves the couple tyrosine 5 and tyrosine 130// Mol. Cell Endocrinol. 1991. - Vol.81. - P. 155-164.

157. Marriq C., Lejeune P.-J., Venot M. and Vinet L. Hormone synthesis in human thyroglobulin: possible cleavage of the polypeptide chain at the tyrosine donor site// FEBS. -1989. Vol.242. - P.414-418.

158. Marriq C., Rolland M. and Lissitzky S. Polypeptide chains of 19-S thyroglobulin from several mammalian species and of porcine 27-S iodoprotein// Eur. J. Biochem. 1977. -Vol.79.-P. 143-149.

159. Martin-Belmonte F., Alonso M.A., Zhang X. and Arvan P. Thyroglobulin is selected as lumenal protein cargo for apical transport via detergent-resistant membranes in epithelial cells// J. Biol. Chem. 2000. - Vol.275. - P.41074^1081.

160. Mascia A., Nitsch L., Di Lauro R. and Zannini M. Hormonal control of the transcription factor Pax8 and its role in the regulation of thyroglobulin gene expression in thyroid cells// J. Endocrinol. 2002. - Vol.172. - P. 163-176.

161. Mason J.T. and O'Leary T. Effects of formaldehyde fixation on protein secondary structure: a calorimetric and infrared spectroscopic investigation// J. Histochem. Cytochem. -1991.-Vol.39.-P.225-229.

162. Maurizis J.-C., Marriq C., Michelot J. et al. Thyroid peroxidase-induced thyroid hormone synthesis in relation to thyroglobulin structure// FEBS Lett. 1979. - Vol.102. - P.82-86.

163. Maurizis J.-C., Marriq C., Rolland M. and Lissitzky S. Thyroid hormone synthesis and reactivity of hormone-forming tyrosine residues of thyroglobulin// FEBS Lett. 1981. -Vol.132.-P.29-32.

164. Mendive F.M., Rivolta C.M., Moya C.M. et al. Genomic organization of the human thyroglobulin gene: the complete intron-exon structure// Eur. J. Endocrinol. 2001. -Vol.145.-P.485-496.

165. Mercken L., Massaer M., Simons M.-J. et al. Identification of hormonogenic domains in the carboxyl terminal region of bovine thyroglobulin// Biochem. Biophys. Res. Commun. -1984.- Vol.125. -P.961-966.

166. Mercken L., Simons M.-J. and Vassart G. The 5'-end of bovine thyroglobulin mRNA encodes a hormonogenic peptide// FEBS Lett. 1982. - Vol.149. - P.285-287.

167. Mercken L., Simons M.-J., Brocas H. and Vassart G. Alternative splicing may be responsible for heterogeneity of thyroglobulin structure// Biochimie. 1989. - Vol.71. -P.223-226.

168. Mercken L., Simons M.J., Swillens S. et al. Primary structure of bovine thyroglobulin deduced from the sequence of its 8,431-base complementary DNA// Nature. 1985. -Vol.316.-P.647-651.

169. Miquelis R., Courageot J., Jack A. et al. Intracellular routing of GlcNAc-bearing molecules in thyrocytes: selective recycling through the Golgi apparatus// J. Cell Biol. -1993.-Vol.123.-P.1695-1706.

170. Molina F., Pau B. and Granier C. The PGK epitope of human thyroglobulin: a molecular marker of alternatively spliced thyroglobulin molecules?// Lett. Peptide Sci. 1997. - Vol.4. -P.201-205.

171. Montero C. The antigen-antibody reaction in immunohistochemistry// J. Histochem. Cytochem. 2003. - Vol.51. - P. 1-4.

172. Montuori N., Pacifico F., Mellone S. et al. The rat asialoglycoprotein receptor binds the amino-terminal domain of thyroglobulin// Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. -Vol.268. -P.42-46.

173. Morabito M.A. and Moczydlowski E. Molecular cloning of bullfrog saxiphilin: a unique relative of the transferrin family that binds saxitoxin// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. -Vol.91.-P.2478-2482.

174. Morabito M.A. and Moczydlowski E. Molecular cloning of bullfrog saxiphilin: a unique relative of the transferrin family that binds saxitoxin. Corrections// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - Vol.92. - P.6651.

175. Mori N., Itoh N. and Salvaterra P.M. Evolutionary origin of cholinergic macromolecules and thyroglobulin//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987.-Vol.84.-P.2813-2817.

176. Mostov K.E. and Simister N.E. Transcytosis// Cell. 1985. - Vol.43. - P.389-390.

177. Moya C.M., Mendive F.M., Rivolta C.M. et al. Genomic organization of the 5' region of the human thyroglobulin gene// Eur. J. Endocrinol. 2000. - Vol.143. - P.789-798.

178. Muresan Z. and Arvan P. Thyroglobulin transport along the secretory pathway. Investigation of the role of molecular chaperone, GRP94, in protein export from the endoplasmic reticulum// J. Biol. Chem. 1997. - Vol.272. - P.26095-26102.

179. Musti A.M., Avvedimento V.E., Polistina C. et al. The complete sequence of the rat thyroglobulin gene// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - Vol.83. - P.323-327.

180. Nakane P.R. and Kawaoi A. Peroxidase labeled antibody. A new method of conjugation// J. Histochem. Cytochem. 1974. - Vol.22. - P. 1084-1091.

181. Narkar A.A., Shah D.H., Yadav J. et al. Monoclonal antibodies to human thyroglobulin: evaluation of immunoreactivity// Hybridoma. 1992. - Vol.11. - P.808-813.

182. Nlend M.-C., Cauvi D., Venot N. and Chabaud O. Sulfated tyrosines of thyroglobulin are involved in thyroid hormone synthesis// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999a. -Vol.262.-P. 193-197.

183. Nlend M.-C., Cauvi D., Venot N. et al. Thyrotropin regulates tyrosine sulfation of thyroglobulin// Eur. J. Endocrinol. 1999b. - Vol.141. - P.61-69.

184. Ofverholm T. and Ericson L.E. Intralumenal iodination of thyroglobulin// Endocrinology. 1984.-Vol.l 14.-P.827-835.

185. Olin P., Ekholm R., Almquist S. Biosynthesis of thyroglobulin related to the ultrastructure of the human fetal thyroid gland// Endocrinology. 1970. - Vol.87. - P.1000-1014.

186. Paiement J. and Leblond C.P. Localization of thyroglobulin antigenicity in rat thyroid sections using antibodies labeled with peroxidase or 125I-radioiodine// J. Cell Biol. 1977. -Vol.74.-P.992-1015.

187. Palumbo G. and Ambrosio G. The effects of iodination on the polypeptide heterogeneity of thyroglobulin// Biochim. Biophys. Acta. 1982. - Vol.707. - P.98-104.

188. Paron I., Scaloni A., Pines A. et al. Nuclear localization of Galectin-3 in transformed thyroid cells: a role in transcriptional regulation// Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003.- Vol.302.-P.545-553.

189. Piechaczyk M., Chardes Т., Cot M.C. et al. Production and characterization of monoclonal antibodies against human thyroglobulin// Hybridoma. 1985. - Vol.4. - P.361-367.

190. Pollock R.R., Teillaud J.-L. and Scharff M.D. Monoclonal antibodies: a powerful tool for selecting and analyzing mutations in antigens and antibodies// Ann. Rev. Microbiol. 1984.- Vol.38. -P.389^117.

191. Prentice L., Kiso Y., Fukuma N. et al. Monoclonal thyroglobulin autoantibodies: variable region analysis and epitope recognition// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. - Vol.80. -P.977-986,

192. Raboudi N., Julian J., Rohde L.H. and Carson D.D. Identification of cell-surface heparin/heparan sulfate-binding proteins of a human uterine epithelial cell line (RL95)// J. Biol. Chem. 1992. - Vol.267. - P.l 1930-11939.

193. Ramos A.M., Helm J.M., Zhang Y.D., et al. Linkage and physical mapping of the porcine thyroglobulin (TG) gene// Anim. Genet. 2002. - Vol.33. - P.224-248.

194. Ring P.K. and Johanson V. Immunoelectron microscopic demonstration of thyroglobulin and thyroid hormones in rat thyroid gland// J. Histochem. Cytochem. 1987. - Vol.35. -P. 1095-1104.

195. Roche J. and Michel R. Natural and artificial iodoproteins// Adv. Protein Chem. 1951.- Vol.6.-P.253-297.

196. Roe M.T., Anderson P.C., Dunn A.D. and Dunn J.T. The hormonogenic sites of turtle thyroglobulin and their homology with those of mammals// Endocrinology. 1989. -Vol.124.-P. 1327-1332.

197. Roitt I.M., Campbell P.N. and Doniach D. The nature of the thyroid autoantibodies present in patients with Hashimoto's thyroiditis (lymphadenoid goitre)// Biochem. J. 1958.- Vol.69. -P.248-254.

198. Ronin С., Fenouillet E., Hovsepian E. et al. Regulation of thyroglobulin glycosylation. A comparative study of the thyroglobulin from porcine thyroid glands and follicles in serum-free culture// J. Biol. Chem. -1986. Vol.261. - P.7287-7293.

199. Rose G.D. and Roy S. Hydrophobic basis of packing in globular proteins// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. - Vol.77. -№8. - P.4643-4647.

200. Rose N.R. and Burek C.L. Autoantibodies to thyroglobulin in health and disease// Appl. Bochem. Biotechnol. 2000. - Vol.83. - P.245-254.

201. Rose N.R., Bonita R. and Burek C.L. Iodine: an environmental trigger of thyroiditis// Autoimmunity Rev. 2002. - Vol.1. - P.97-103.

202. Rousset B. Endocytosis of thyroglobulin: steps towards an integrated view of a complex phenomenon// www.hotthyroidology.com. 2002. - №4.

203. Rousset B.A. and Dunn J.T. Thyroid hormone synthesis and secretion. In: The thyroid and its diseases, http://www.thyroidmanager.org-2003. P.l-40.

204. Royaux I.E., Suzuki K., Mori A. et al. Pendrin, the protein encoded by the Pendred syndrome gene (PDS), is an apical porter of iodide in the thyroid and is regulated by thyroglobulin in FRTL-5 cells// Endocrinology. 2000. - Vol. 141. - P.839-845.

205. Saber-Lichtenberg Y., Brix K., Schmitz A. et al. Covalent cross-linking of secreted bovine thyroglobulin by transglutaminase// FASEB J. 2000. - Vol.14. - P.l005-1014.

206. Saboori A.M., Burek C.L., Rose N.R. et al. Tryptic peptides of human thyroglobulin: I. Immunoreactivity with murine monoclonal antibodies// Clin. Exp. Immunol. 1994b. -Vol.98.-P.454-458.

207. Saboori A.M., Caturegli P., Rose N.R. et al. Tryptic peptides of human thyroglobulin: II. Immunoreactivity with sera form patients with thyroid diseases// Clin. Exp. Immunol. -1994c.-Vol.98.-P.459-463.

208. Saboori A.M., Rose N.R. and Burek C.L. Iodination of human thyroglobulin (Tg) alters its immunoreactivity. II. Fine specificity of a monoclonal antibody that recognizes iodinated Tg// Clin. Exp. Immunol. 1998b. - Vol.113. - P.303-308.

209. Saboori A.M., Rose N.R., Bresler H.S. et al. Iodination of human thyroglobulin (Tg) alters its immunoreactivity. I. Iodination alters multiple epitopes of human TgII Clin. Exp. Immunol. 1998a. - Vol.113. - P.297-302.

210. Saboori A.M., Rose N.R., Kuppers R.C. et al. Immunoreactivity of multiple molecular forms of human thyroglobulin// Clin. Immunol. Immunopathol. 1994a. - Vol.72. - P.121-128.

211. Saboori A.M., Rose N.R., Yuhasz S.C. et al. Peptides of human thyroglobulin reactive with sera of patients with autoimmune thyroid disease// J. Immunol. 1999. - Vol.163. -P.6244-6250.

212. Salvatore G., Salvatore M., Cahnmann H.J. and Robbins J. Separation of thyroidal iodoproteins and purification of thyroglobulin by gel filtration and density gradient centrifugation// J. Biol. Chem. 1964. - Vol.239. - P.3267-3274.

213. Salvatore G., Vecchio G., Salvatore M. et al. 27S thyroid iodoprotein. Isolation and properties// J. Biol. Chem. 1965. - Vol.240. - P.2935-2943.

214. Scheel G. and Herzog V. Mannose 6-phosphate receptor in porcine thyroid follicle cells. Localization and possible implications for the intracellular transport of thyroglobulin// Eur. J. Cell. Biol. 1989. - Vol.49. - P.140-148.

215. Schneider A.B., Bornet H. and Edelhoch H. Properties of thyroglobulin. XX. The biosynthesis of thyroglobulin. Effect of temperature on subunit species// J. Biol. Chem. -1970. Vol.245. - P.2672-2678.

216. Schneider P.B. Thyroidal iodine heterogeneity: "last come first served" system of iodine turnover// Endocrinology. 1964. - Vol.74. -P.973-980.

217. Schumacher M., Champs S., Maulet Y. et al. Primary structure of Torpedo californica acetylcholinesterase deduced from its cDNA sequence// Nature. 1986. - Vol.319. - P.407-409.

218. Seed R.W. and Golberg I.H. Biosynthesis of thyroglobulin. II. Role of subunits, iodination, and ribonucleic acid synthesis// J. Biol. Chem. 1965, - Vol.240. - P.764-773.

219. Sela M. Antigenicity: Some molecular aspects// Science. 1969. - Vol.166. - P. 13651374.

220. Seljelid R., Reith A. and Nakken K.F. The early phase of endocytosis in rat thyroid follicle cells// Lab. Ivest. 1970. - Vol.23. - P.595-605.

221. Shi S.-R., Cote R.J. and Taylor C.R. Antigen retrieval immunohistochemistry: past, present, and future// J. Histochem. Cytochem. 1997. - Vol.45. -P.327-343.

222. Sikorska H.M. Anti-thyroglobulin anti-idiotypic antibodies in sera of patients with Hashimoto's thyroiditis and Graves' disease// J. Immunol. 1986. - Vol.137. - P.3786-3795.

223. Sorimachi K. and Ui N. Comparison of the iodoamino acid distribution of thyroglobulins obtained from various animal species// Gen. Сотр. Endocrinol. 1974. - Vol.24. - P.38-43.

224. Spiro M.J. Studies on the protein portion of thyroglobulin. Amino acid compositions and terminal amino acids of several thyroglobulins// J. Biol. Chem. 1970. - Vol.245. - P.5820-5826.

225. Spiro R.G. and Bhoyroo V.D. Occurrence of a-D-galactosyl residues in the thyroglobulins from several species. Localization in the saccharide chains of the complex carbohydrate units// J. Biol. Chem. 1984. - Vol.259. - P.9858-9866.

226. Spiro R.G. and Spiro M.J. Glycoprotein biosynthesis: studies on thyroglobulin. Characterization of a particulate precursor and radioisotope incorporation by thyroid slices and particle systems//J. Biol. Chem. 1966. - Vol.241. -P.1271-1282.

227. Spiro R.G. and Spiro M.J. The carbohydrate composition of the thyroglobulins from several species//J. Biol. Chem. 1965. - Vol.240. -P.997-1001.

228. Spitzweg C., Heufelder A.E. and Morris J.C. Thyroid iodide transport// Thyroid. 2000. - Vol.10.-P.321-330.

229. Stylos W.A. and Rose N.R. Rabbit thyroid autoantibody produced by intravenous injections of papain-treated rabbir thyroid extract// Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1968. -Vol.127.-P.784-786.

230. Sugawa H., Smith E., Imura H. and Mori T. A thyroid cancer specific monoclonal antibody which recognizes cryptic epitope(s) of human thyroglobulin// Mol. Cell Endocrinol. 1993.- Vol.93. -P.207-211.

231. Sundick R.S., Herdegen D.M., Brown T.R. and Bagchi N. The incorporation of dietary iodine into thyroglobulin increases its immunogenicity// Endocrinology. 1987. - Vol.120. -P.2078-2084.

232. Suzuki K., Lavaroni S., Mori A. et al. Autoregulation of thyroid-specific gene transcription by thyroglobulin// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol.95. - P.8251-8256.

233. Suzuki K., Mori A., Saito J. et al. Follicular thyroglobulin suppresses iodide uptake by suppressing expression of the sodium/iodide symporter gene// Endocrinology. 1999. -Vol.140. - P.5422-5430.

234. Suzuki K., Nakazato M., Ulianich L. et al. Thyroglobulin autoregulation of thyroid-specific gene expression and follicular function// Rev. Endocrinol. Metab. Disord. 2000. -Vol.1. -P.217-224.

235. Suzuki S., Gorbman A., Rolland M. et al. Thyroglobulins of cyclostomes and an elasmobranch// Gen. Сотр. Endocrinol. 1975. - Vol.26. - P.59-69.

236. Swillens S., Ludgate M., Mercken L. et al. Analysis of sequence and structure homologies between thyroglobulin and acetylcholinesterase: possible functional and clinical significance// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1986. - Vol.137. - P.142-148.

237. Takagi Y., Omura T. and Go M. Evolutionary origin of thyroglobulin by duplication of esterase gene// FEBS. 1991. - Vol.282. - P.17-22.

238. Tang H., Bedin C., Texier B. and Charreire J. Autoantibody specific for a thyroglobulin epitope including experimental autoimmune thyroiditis or its anti-idiotype correlates with the disease// Eur. J. Immunol. 1990. - Vol.20. - P. 1535-1539.

239. Taniguchi K., Shutoh Y. and Mikami S. Immunohistochemical studies on the development of endocrine cells in the thyroid and parathyroid glands in the golden hamster// Nippon. Juigaku. Zasshi. 1990. - Vol.52. - P. 19-27.

240. Taurog A. Thyroid peroxidase and thyroxine biosynthesis// Recent Prog. Horm. Res. -1970.-Vol.26.-P. 189-247.

241. Tepel C., Bromme D., Herzog V. and Brix K. Cathepsin К in thyroid epithelial cells: sequence, localization and possible function in extracellular proteolysis of thyroglobulin// J. Cell Sci. 2000. - Vol. 113. - P.4487-4498.

242. Tokuyama Т., Yoshinara M., Rawitch A.B. and Taurog A. Degradation of thyroglobulin with purified thyroid lysosomes. Preferential release of iodoamino acids// Endocrinology. -1987.-Vol.121.-P.714-721.

243. Tomer Y. Anti-thyroglobulin autoantibodies in autoimmune thyroid diseases: cross-reactive or pathogenic?// Clin. Immunol. Immunopathol. 1997. - Vol.82. - P.3-11.

244. Torresani J., Gorbman A., Lachiver F. and Lissitzky S. Immunological cross-reactivity between thyroglobulins of mammals and reptiles// Gen. Сотр. Endocrinol. 1973. - Vol.21. -P.530-535.

245. Toyoda N., Nishikawa M., Mori Y. et al. Identification of a 27-kilodalton protein with the properties of Type I Iodothyronine 5'-deiodinase in human thyroid gland// J. Clin. Endocrinol. Metab. 1992. - Vol.74. - P.533-538.

246. Turmo C., Santisteban P., De la Vieja A. et al. Evidence for the importance of the disulfide bonds and SH groups of thyroglobulin on thyroid hormonogenesis// Endocrinologia. 1994. - Vol.41. - P.8-12.

247. Twarog F.J. and Rose N.R. The production of thyroid autoantibodies in mice// J. Immunol. 1968. - Vol.101.-P.242-250.

248. Ui N., Lippoldt R.E. and Edelhoch H. Acid-induced conformational change in hog thyroglobulin// Arch. Biochem. Biophys. 1974. - Vol.164. - P.202-209.

249. Ulianich L., Suzuki K., Mori A. et al. Follicular thyroglobulin (TG) suppression of thyroid-restricted genes involves the apical membrane asialoglycoprotein receptor and TG phosphorylation// J. Biol. Chem. 1999. - Vol.274. - P.25099-25107.

250. Van den Hove M.F., Couvreur M., de Visscher M. and Salvatore G. A new mechanism for the reabsorption of thyroid iodoproteins: selective fluid pinocytosis// Eur. J. Biochem. -1982. Vol. 122. - P.415-422.

251. Van der Walt B. and Van Jaarsveld P. Bovine 37S iodoprotein: isolation and characterization// Arch. Biochem. Biophys. 1972. - Vol.150. - P.786-791.

252. Van Herle A.J., Vassart G. and Dumont J.E. Control of thyroglobulin synthesis and secretion (first of two parts)// New Engl. J. Med. 1979a. - Vol.301. - P.239-249.

253. Van Zyl A., Theron C.N. and Van der Walt B. The use of agarose for the preparation of pure 19S thyroglobulin// Biochim. Biophys. Acta. 1969. - Vol.188. - P.337-339.

254. Vassart G. and Dumont J.E. Identification of polysomes synthesizing thyroglobulin// Eur. J. Biochem. 1973. - Vol.32. - P.322-330.

255. Vassart G., Bacolla A., Brocas H. et al. Structure, expression and regulation of the thyroglobulin gene// Mol. Cell Endocrinol. 1985. - Vol.40. - P.89-97.

256. Vassart G., Verstreken L. and Dinsart C. Molecular weight of thyroglobulin 33S messenger RNA as determined by polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of formamide// FEBS Lett. 1977. - Vol.79. - P. 15-18.

257. Venkatesh S.G. and Desphande V. A comparative review of the structure and biosynthesis of thyroglobulin// Сотр. Biochem. Physiol. Part C. 1999. - Vol.122. - P.13-20.

258. Verschueren C.P., Selman P.J., de Vijlder J.J.M. and Mol J.A. Characterization of and radioimmunoassay for canine thyroglobulin// Domest. Anim. Endocrinol. 1991. - Vol.8. -P.509-519.

259. Villa M., Durand-Gorde J.-M., Carayon P. and Ruf J. Idiotypic study of a bispecific thyroglobulin and thyroperoxidase monoclonal antibody// J. Autoimmunity. 1996. - Vol.9. - P.653-660.

260. Virion A., Courtin E., Deme D. et al. Spectral characteristics and catalytic properties of thyroid peroxidase-H202 compounds in the iodination and coupling reactions// Arch. Biochem. Biophys. 1985. - Vol.242. - P.41-47.

261. Weetman A.P. and De Groot L.J. Autoimmunity to the thyroid gland last. In: The thyroid and its diseases, http://www.thyroidmanager.org, 2003. P.l-78.

262. Werner M., von Wasielewski R. and Komminoth P. Antigen retrieval, signal amplification and intensification in immunohistochemistry// Histochem. Cell Biol. 1996. -Vol.105. -P.253-260.

263. Wilson M., Hitchcock K.R. and DeLellis R.A. Immunohistochemical localization of thyroid hormone in rat thyroid gland// J. Histochem. Cytochem. 1978. - Vol.26. - P.l 1211124.

264. Wolff J. A miss for NIS?// Thyroid. 2002. - Vol.12. - P.295-297.

265. Xiao S., Dorris M.L., Rawitch A.B. and Taurog A. Selectivity in tyrosyl iodination sites in human thyroglobulin//Arch. Biochem. Biophys. 1996. - Vol.334. - P.284-294.

266. Xiao S., Pollock H.G., Taurog A. and Rawitch A.B. Characterization of hormonogenic sites in an N-terminal, cyanogen bromide fragment of human thyroglobulin// Arch. Biochem. Biophys. 1995. - Vol.320. - P.96-105.

267. Yamashita M. and Konagaya S. A novel cysteine protease inhibitor of the egg of chum salmon, containing a cysteine-rich thyroglobulin-like motif// J. Biol. Chem. 1996. -Vol.271.-P.1282-1284.

268. Yamazaki K., Yamada E., Kanaji Y. et al. Genes regulated by thyrotropin and iodide in cultured human thyroid follicles: analysis by cDNA microarray// Thyroid. 2003. - Vol.13. -P.149-158.

269. Yang S.-X., Pollock H.G. and Rawitch A.B. Glycosylation in human thyroglobulin: location of the N-linked oligosaccharide units and comparison with bovine thyroglobulin// Arch. Biochem. Biophys. 1996. - Vol.327. - P.61-70.

270. Yoshida A., Taniguchi S., Hisatome I. et al. Pendrin is an iodide-specific apical porter responsible for iodide efflux from thyroid cells// J. Clin. Endocrinol. Metab. 2002. -Vol.87.-P.2256-3361.

271. Zanetti M., De Baets M. and Rogers J. High degree of idiotypic cross-reactivity among murine monoclonal antibodies to thyroglobulin// J. Immunol. 1983. - Vol. 131. - P.2452-2457.1. БЛАГОДАРНОСТИ

272. Автор благодарен всем преподавателям и сотрудникам кафедры цитологии и гистологии Санкт-Петербургского Государственного Университета за доброе отношение и знания, переданные ему во время обучения в бакалавриате, магистратуре и аспирантуре.

Информация о работе

Пиневич, Агния Александровна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2007
ВАК 03.00.25

Диссертация

Изучение антигенных детерминант тиреоглобулина человека и животных с помощью моноклональных антител - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы