Иммуноферментный метод диагностики токсокароза собак, сероэпизоотологический мониторинг и терапия

Солопов, Павел Аркадьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммуноферментный метод диагностики токсокароза собак, сероэпизоотологический мониторинг и терапия
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Иммуноферментный метод диагностики токсокароза собак, сероэпизоотологический мониторинг и терапия"

На правах рукописи

СОЛОПОВ Павел Аркадьевич

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ГОКСОКАРОЗА СОБАК, СЕРОЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ И ТЕРАПИЯ

03.00.19 — паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 2С09

003486402

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии, микробиологии и паразитологии ФГОУ ВПО «Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Новак Михаил Дмитриевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Горохов Владимир Васильевич

кандидат ветеринарных наук, доцент Есаулова Наталья Валерьевна

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии»

Защита состоится « ,> ^^а^/АЛ 2009 г. в ч. на заседании - -- -

совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.011.01 при ГНУ «Всероссийский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина» (117218, Москва, Б. Черемушкинская, 28).

Автореферат опубликован на официальном сайте ВИГИС http://wvvw.gnavigis.nxt.ru « 2009 г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « ноября 2009 г.

а/. „

Ученый секретарь диссертационного совета В.К. Бережко

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Токсокароз распространен среди плотоядных животных во многих странах мира.

В различных регионах Российской Федерации токсокарами инвазированы от 8,5 до 75 % собак (Ф.Л. Радун, 1973, С.Д. Клочков, 1995, Ю.Э. Мысливец и др., 1998, А .Я. Лысенко и др., 1999, А.Н. Шинкаренко, 1999, Т.Г. Козырева, 1999, А.Н. Воличев, 2000, С.И. Калюжный, 2000, Н.В. Есаулова, М.Ш. Акбаев, 2001, В.Б. Игнатьева, 2001, И.М. Зубарева, 2001, A.B. Жабров, 2002, Н.С. Беспалова, 2003).

Высокая напряженность эпизоотического процесса является следствием длительного носительства личинок Toxocara canis и трансплацентарной передачей их во второй половине беременности (Л.Е. Верета, О.Г. Малышкова, 1984).

Токсокароз - зооантропоноз. Зараженные собаки представляют эпидемическую опасность. Патологические изменения в тканях и органах людей, вызванные личинками токсокар, известны под названием синдрома «larva migrans» (Г.А. Котельников, 1984, Ю.А. Березанцев, В.В. Кривенко, 1986).

Установлено, что личинки токсокар при миграции проникают в капилляры легких, затем в большой круг кровообращения, центральную нервную систему, обусловливая патологию головного мозга, глаз (К.И. Скрябин, A.M. Петров, 1964; Л.С. Ходасевич и др., 1998). Заболевание протекает с рецидивами и длительными ремиссиями.

В Болгарии зарегистрировано 723 больных с мигрирующими личинками токсокар. Описан случай менингита, индуцированный Toxocara canis (R. Jeleva et al., 1998).

В России и за рубежом для сероэпидемиологического обследования на токсокароз предложен иммуноферментный метод и другие иммунодиагностиче-ские тесты. Антитела к личинкам токсокар обнаруживают в сыворотках крови людей при помощи тест систем ИФА «Тиаскар» (НПО «Вектор бест», г. Новосибирск).

До настоящего времени недостаточно изучены особенности эпизоотологии, динамика антител при спонтанном и экспериментальном ларвальном ток-сокарозе собак, эффективность антигельминтных препаратов против личиночных стадий Toxocara canis.

В отечественной ветеринарной практике не применяются методы иммунодиагностики «larva migrans» при токсокарозе плотоядных животных.

Высоко активными антигенами, обладающими достаточной специфичностью при иммунодиагностике ларвального тОксокароза, являются экскреторно-секреторные продукты личинок 2 и 3 стадий токсокар (D.H. Savigny, 1975; К. Maisumura et al, 1983).

В работах отечественных и иностранных исследователей подчеркивается трудность, длительность и невысокая эффективность лечения синдрома «larva migrans» у человека и животных (Н. Тумальская, 1997, А.Н. Воличев, 2000, S, Coman et al., 2000). . i

Эффективность новых комплексных антигельминтных препаратов отечественного производства, в состав которых входят авермектины, недостаточно изучена при ларвальном токсокарозе. Актуальным для ветеринарной практики является научное обоснование профилактических мероприятий при токсокарозе собак, включающих диагностические исследования и дегельминтизации перед беременностью.

Цель и задачи исследований.

Цель: Изучить распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Рязани, разработать параметры культивирования личинок токсокар и получения антигенов для иммуноферментного анализа, установить терапевтическую эффективность препаратов «Барс спот-он», «Пирадек» при «larva migrans» Toxocara canis и против половозрелых нематод

Задачи:

1. Изучить распространение, возрастные и сезонные аспекты эпизоотологии токсокароза собак в г. Рязани.

2. Разработать параметры культивирования яиц и получения экскреторно-секреторных антигенов личиночных стадий Toxocara canis.

3. Установить активность и специфичность экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии Toxocara canis и чувствительность ИФА при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак.

4. С помощью ИФА выяснить динамику антител к мигрирующим личинкам токсокар в опыте на спонтанно и экспериментально зараженных собаках.

5. Определить терапевтическую эффективность антигельминтных препаратов «Барс спот-он» и «Пирадек» при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак в период «larva migrans» Toxocara canis, а также против половозрелых гельминтов.

Научная новизна работы. Впервые изучено распространение токсокароза среди собак в г. Рязани. Установлены возрастные и сезонные аспекты эпизоотологии токсокароза, динамика эпизоотического процесса по годам. Разработаны параметры культивирования яиц и личинок токсокар и получения экскреторно-секреторных антигенов. Выяснены активность, специфичность экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии токсокар в ИФА с иммунными кроличьими сыворотками. В опытах на щенках, спонтанно и экспериментально зараженных яйцами токсокар, установлена чувствительность ИФА. Изучена динамика антител к личинкам Toxocara canis при спонтанном и экспериментальном токсокарозе, а также после дегельминтизации.

Впервые при экспериментальном токсокарозе в период «larva migrans» испытан с положительным эффектом комплексный препарат «Барс спот - он» и определена высокая эффективность антигельминтика «Пирадек» против кишечных форм токсокар разного возраста, овоцидная активность,.

Теоретическая и практическая значимость. Подробно (по дням) изучены процессы бластогенеза яиц и гистогенеза личинок Toxocara canis, а также продолжительность жизни личинок второй стадии in vitro при оптимальных условиях культивирования.

Результаты изучения эпизоотологии токсокароза собак, разработанные параметры культивирования яиц и личинок Toxocara canis и приготовления экскреторно-секреторных антигенов имеют большое значение для совершенствования диагностики и оптимизации профилактических мероприятий.

Разработанные экскреторно-секреторные антигены (ESAgTox) рекомендуется использовать в иммуноферментном анализе при диагностике токсокароза плотоядных животных. Иммунодиагностический тест с ESAgTox антигеном личинок токсокар может применяться для выявления специфических антител к мигрирующим и инкапсулированным личинкам Toxocara canis у собак до наступления беременности.

Результаты испытания препаратов «Барс спот - он» и «Пирадек» (производство ООО «Ветзащита») с целью профилактики токсокароза следует включить в схему комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при паразитарных болезнях собак.

Результаты испытаний комплексного препарата «Барс спот -он» включены в инструкцию по применению. Регистрационный номер ПВР-2-3.7/01973 (утверждено Россельхознадзором 18.06.2007 г.).

На защиту выносятся следующие положения:

1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Рязани.

2. Разработка параметров культивирования яиц и личинок Toxocara canis.

3. Приготовление экскреторно-секреторных антигенов личинок токсокар с целью использования в иммуноферментном анализе при диагностике токсокароза в период «larva migrans».

4. Активность и специфичность экскреторно-секреторных антигенов личинок Toxocara canis при тестировании с иммунными сыворотками. Чувствительность иммуноферментного анализа при диагностике экспериментального и спонтанного токсокароза собак.

5. Терапевтическая эффективность препарата «Барс спот -он» при спонтанном и экспериментальном токсокарозе в период «larva migrans» и антигельмин-тика «Пирадек» против кишечных форм токсокар. Контроль эффективности ан-тигельминтного препарата «Барс спот - он» с помощью иммуноферментного анализа (ИФА).

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на следующих конференциях и конгрессах:

1. Научно-практическая конференция «Инновации молодых ученых и специалистов - национальному проекту «Развитие АПК» (Рязань, РГСХА, 2006);

2. Научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, ВИГИС, 2009);

3. Международная научная конференции молодых ученых (Киров, ВГСХА, 2008).

4. Московский международный ветеринарный конгресс (Москва, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе одна в центральном издании, рекомендованном ВАК РФ для публикации материалов кандидатских диссертаций.

Личный вклад соискателя. Автором самостоятельно проведены копро-овоскопические, культуральные, ларвоскопические и серологические исследования (ИФА) на токсокароз и другие гельминтозы собак и кошек, установлена терапевтическая эффективность двух антигельминтных препаратов «Барс спот-он» и «Пирадек», выполнен анализ полученных результатов. Научный руководитель, профессор, доктор биологических наук Новак М.Д. оказывал научно-методическую, консультативную помощь в проведении исследований и анализе результатов.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы и 4 главы результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Библиографический список представлен 194 источниками, из них отечественных - 100, иностранных - 94. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 21 рисунком.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и методы исследований

Работа выполнена в 2006 - 2009 гг. на кафедре эпизоотологии, микробиологии и паразитологии ФГОУ ВПО «Рязанский государственный агротехноло-гический университет имени П.А. Костычева».

Кроме того, научно-производственные и экспериментальные исследования проведены в Рязанской областной ветеринарной лаборатории, в ГУ Рязанской городской ветеринарной станции, в Муниципальном предприятии «Лайка», в ветеринарных клиниках «Багира» и «Зоодоктор», в кинологическом центре «Возрождение».

Проведены копроовоскопические, культуральные, ларвоскопические и серологические исследования на токсокароз и другие гельминтозы собак и кошек.

Всего исследовано 215 проб фекалий собак в возрасте от двух недель до 12 лет, 28 кошек - 1 мес. - 9 лет из разных административных районов г. Рязани. Выполнены патологоанатомические вскрытия собак - 32, кошек - 4.

Проведено три опыта по изучению диагностической ценности иммунофер-ментного анализа и терапевтической эффективности антигельминтных препаратов «Барс спот-он» и «Пирадек» на 23 щенках 1-3 мес. возраста.

Кроме того, при экспериментальном изучении токсокароза собак (период «larva migrans») с помощью иммуноферментного анализа исследовано 48 щенков 1,5-5 мес. возраста. На спонтанную зараженность личинками Toxocara са-nis проведен скрининг в ИФА сывороток крови от 89 собак разного возраста.

Копроовоскопические исследования по Фюллеборну и Дарлингу выполнены в соответствии с общепринятыми методиками. Контроль освобождения личинок токсокар из яиц после культивирования проводили по Берману-Орлову с

микроскопией суспензии. Интенсивность инвазии (как относительный показатель) устанавливали при помощи счетной камеры Мигачевой и Котельникова.

Постановку иммуноферментного анализа осуществляли на полистироловых планшетах, разделенных на стрипы. Антигены до рабочей концентрации (1:50 - 1:100) растворяли в фосфатном буферном растворе. Для адсорбции экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии Toxocara canis (ESAg-Тох) использовали буферный раствор, состоящий из 150 птМ NaCl + 8 шМ К2НРО4+ 2 шМ КН2РО4. Этот же фосфатно-солевой буферный раствор только с добавлением 0,05-0,1 % твина-20 (ФСБТ) применяли для разбавления конъюга-та и проб сывороток крови.

Клинические и серологические исследования выполняли до начала эксперимента и затем каждые 7 дней.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Распространение токсокароза в г. Рязани

2.2.1.1. Динамика эпизоотического процесса при токсокарозе собак в 2006-2009 гг.

В период с 2006 по 2009 гг. при копроовоскопических исследованиях собак в г. Рязани токсокароз установлен в 8,3±4,7 % - 34,5±4,6 % случаев. Зараженность собак 1,5-4,5 мее. возраста составила в 2006 г. - 8.3±4,7 %, в 2007 г. -12,2±1,2 %, в 2008 г. - 14,3±3,6 %, в 2009 г. - 34,5±4,6 % (рис. 1).

За четырехлетний период установлено значительное увеличение уровня инвазии при токсокарозе собак городской популяции. По данным копроовоскопических исследований экстенсивность инвазии в среднем за четыре года составляет 17,3±0,7 %.

2006 г. 2007 г. 2008 г. 2009 г.

Рис. 1. Динамика токсокароза собак в городе Рязани по годам (2006 - 2009).

2.2.1.2. Сезонные и возрастные аспекты эпизоотологии токсокароза собак

Сезонную динамику зараженности собак токсокарами изучали на основании копроовоскопических исследований в зимний, весенний, летний и осенний периоды.

Уровень инвазии в течение года значительно варьировал, а динамика эпизоотического процесса соответствовала известным закономерностям соморегу-ляции паразитарных систем. В летние месяцы и осенью экстенсивность инвазии максимальна - 26,5±2,3 % и 18,7±2,7 % соответственно. В зимний период показатели зараженности токсокарами относительно невысокие - 4,4±4,1 %. Весной наблюдается новый подъем инвазии до 9,8±2,9 %.

Повышение экстенсивности инвазии при токсокарозе в конце весны и летом объясняется увеличением численности молодых собак (1-5 мес.), которые являются основными источниками возбудителя. Большое значение в распространении болезни, сохранении инвазионных свойств яиц Toxocara canis имеют благоприятные условия окружающей среды в весенне-летний период (оптимальная температура и влажность).

При изучении зараженности собак разного возраста половозрелыми токсокарами, кроме показателей экстенсивности инвазии, учитывали интенсивность, подсчитывая количества яиц в 1 г. фекалий при помощи счетной камеры Мига-чевой и Котельникова. Исследованных собак разделили на пять возрастных групп: 1 - 1-2,5 мес., 2 - 3-5 мес., 3-6 мес., 4 - 7-10 мес., 5 - старше одного года. Установили, что. с возрастом животных зараженность половозрелыми токсокарами уменьшается, а собаки 7-10 мес. и старше одного года преимущественно свободны от имаго Toxocara canis (рис. 2).

1-2.5 мес.

3-5 мес.

6 мес.

Рис. 2. Динамика зараженности токсокарами собак различных возрастных групп в 2007 - 2008 гг.

Гельминтологические исследования в динамике (2007 - 2008 гг.) позволили обнаружить яйца Toxocara canis у 26,6 ± 6,9 % (4 из 15), 34,8 ± 7,3 % (8 из 23) собак 1-2,5 мес., 31,6 ± 7,2 % (6 из 19), 33,3 ± 7,3 % (7 из 21) - 3-5 мес. и у 7,1 ± 1,9 %(1 из 14)-6 мес.

С 2007 по 2008 гг. установлено повышение уровня зараженности Toxocara canis щенков 1-2,5 мес. возраста на 8,0 ± 0,6 % и 3-5-мес. - на 1,7 ± 0,1 %. Низкий уровень инвазии наблюдается среди собак 6 мес. возраста, а животные 7-10 мес. и старше одного года свободны от половозрелых токсокар.

Токсокароз среди собак в возрастной группе старше одного года отмечен в 2009 году у двух кормящих животных, ЭИ= 5,7 ± 0,7 % (2 из 35).

Установлены более высокие показатели интенсивность инвазии токсокара-ми у щенков в возрасте 1-2,5 мес. - 350-850 яиц в 1 г фекалий и 3-5 мес. - 450670. У собак 6 мес. возраста интенсивность инвазии относительно невысокая -30-80.

Результаты исследований показывают, что на протяжении периода с 2006 по 2009 гг.сохраняется тенденция увеличения зараженности собак токсокарами.

Повышение интенсивности эпизоотического процесса при токсокарозе плотоядных животных обусловлено возрастанием численности популяции безнадзорных собак и кошек в городе Рязани.

Отрицательные результаты исследований на токсокароз собак 7-10 мес. возраста и старше одного года подтверждают формирование у взрослых животных напряженного нестерильного иммунитета, обусловленного клеточными и гуморальными факторами, которые первоначально индуцируются экскреторно-секреторными антигенами личинок Toxocara canis, мигрирующими в тканях. Случаи имагинального токсокароза у взрослых собак, в т.ч. беременных, являются следствием снижения иммунного статуса животных и иммунодефицит-ными состояниями различной этиологии.

Высокий уровень зараженности токсокарами щенков в возрасте 1-5 мес. является следствием онтогенетически не сформировавшегося конституционного иммунитета. У молодых собак отсутствует приобретенный специфический иммунитет.

При достаточно частых суперинвазиях постепенное накопление личинок Toxocara canis в тканях молодых собак, наряду с их физиологической зрелостью и сформировавшимся иммунным статусом способствует постепенной элиминации половозрелых гельминтов из кишечника.

2.2.2. Культивирование яиц и личинок Toxocara canis с целью получения экскреторно-секреторных антигенов

Суспензию яиц Toxocara canis выдерживали в помещении лаборатории при средней суточной температуре +22°С, относительной влажности воздуха 85 % и естественном освещении.

Культивирование яиц токсокар выполняли в среде, содержащей 1 % глю-тамина, и для контроля — в физиологическом растворе.

Наблюдение за жизнедеятельностью личинок второй стадии токсокар осуществляли через каждые 48 часов.

Через одни сутки после начала культивирования в глютамин содержащей среде в 15 из 100 яиц отмечен бластогенез. С одной стороны бластомера видно просветление. Через трое суток в бластомерах 9 из 100 яиц образовалась перетяжка в центре, а в двух яйцах бластомеры поделились на два. Через семь суток по два бластомера установлено у 27,3 % яиц в препарате, а у 9 % их число достигало 4-5. На 11 день бластогенез наблюдался у 50 % яиц. В 16,7 % случаев число бластомеров составляло 8-10. К 17 дню их количество у большинства яиц достигло 16, а на 19 сутки у 26 % яиц отмечен переход к гистогенезу. Формирование личинок началось на 21 день, что установили по контурам клеточной массы. В это же время общее число развивающихся яиц достигло 98 %, оставшиеся 2 % яиц разрушились. Спустя еще трое суток, т.е. на 24 день в 3 % случаев личинки полностью сформировались и проявляли двигательную активность внутри яиц.

Через 30 суток с начала опыта 31 % яиц содержал жизнеспособные личинки первой стадии. Такое несинхронное развитие яиц и личинок связано с тем, что не все яйца, находящиеся в матке нематоды одинаково зрелые.

При снижении температуры в помещении и солнечной активности развитие личинок существенно замедляется.

На 38 сутки опыта суспензия содержала 92 % инвазионных яиц.

При культивировании в физиологическом растворе по истечении десяти суток с начала опыта 97,5 % яиц разрушилось.

В основном опыте осадок, содержащий инвазионные яйца токсокар, отстояли в течение 12 часов, надосадок удалили при помощи пипетки. К осадку добавили искусственный желудочный сок, состоящий из панкреатина, свиной желчи и 1 % соляной кислоты. Обработку яиц токсокар искусственным желудочным соком проводили в термостате при температуре 37,5°С в течение 8-10 часов. После освобождения личинок нематод из яйцевых оболочек их отделяли от жидкости путем центрифугирования при 2500 об./мин. в течение 15 мин. и проводили дальнейшее культивирование в вышеуказанной среде. При микроскопическом исследовании после центрифугирования в осадке содержались подвижные личинки токсокар второй стадии. Личинки нематод в пробирках с глютаминовой средой с целью получения экскреторно-секреторных антигенов содержали при температуре 37-38°С (в термостате) на протяжении одной недели. К концу этого времени личинки нематод проявляли слабую жизнедеятельность. Через семь суток суспензию, содержащую личинок токсокар второй стадии с экскреторно-секреторными антигенами, профильтровали через капрон и отцентрифугировали при 3000g 45 мин., надосадок (общий экскреторно-секреторный антиген) собрали в пластиковые контейнеры «Ependorf» объемом по 5 мл. Всего получено 50 мл экскреторно-секреторного антигена личинок Toxocara canis.

2.2.3. Разработка иммунореагентов для иммуноферментного анализа и применение в диагностике «larva migrans» при токсокарозе собак

2.2.3.1. Приготовление экскреторно-секреторного антигена из личинок второй стадии Toxocara canis

Высоко эффективными антигенами, используемыми в иммунодиагностике гельминтозов, являются экскреторно-секреторные (ESAg). Такие антигены можно получать в большом количестве, а методы их препаративного выделения не трудоемки.

Полученный экскреторно-секреторный антиген размораживали и методом высаливания выделяли из него белковые компоненты. К растворенным в фос-фатно-солевом буферном растворе белковым фракциям добавляли равный объем насыщенного раствора сульфата аммония и оставляли в холодильнике при 4°С до следующего дня. Осадок, содержащий белковые компоненты, отделяли центрифугированием при 2000 об/мин. 20 минут и разбавляли в небольшом количестве стерильной дистиллированной воды. Для освобождения от сульфата аммония раствор белков диализовали против физиологического раствора хлорида натрия при 4°С в холодильнике. Наличие или отсутствие ионов сульфата аммония в жидкости проверяли по реакции на сульфаты с использованием хлористого или азотнокислого бария. После диализа полученный очищенный раствор - экскреторно-секреторный антиген личинок Toxocara canis (ESAgTox) помещали в пробирки «Ependorf» и хранили в морозильной камере при -6-8°С. С помощью спектрофотометра СФ-144 определяли содержание белка в 1 мл раствора. В разных сериях антигенов концентрация белка ESAgTox варьировала от 70 до 95 мкг/мл.

Получение соматического антигена из личинок второй стадии Toxocara cam's.

Личинки токсокар измельчали в ступке с мелким стеклом, с добавлением фосфатно-солевого буферного раствора рН=7,2-7,4. Полученную суспензию центрифугировали в течение 30 минут при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость отделяли и проводили выделение из нее белковых компонентов насыщенным раствором сульфата аммония (см. описание методики выше). Полученный соматический антиген личинок второй стадии токсокар (SomAgTox) помещали в пробирки «Ependorf» и хранили при -6 -8°С до применения.

Параметры очистки экскреторно-секреторных и соматических антигенов личинок второй стадии Toxocara canis

Супернатант (надосадочную жидкость) после первоначального определения концентрации белка с помощью спектрофотометра СФ-144 использовали для фракционирования ESAgTox и SomAgTox антигенов личинок токсокар.

Растворы, содержащие белки (экскреторно-секреторный и соматический антигены личинок второй стадии Toxocara canis), фракционировали на сефадек-се G-200. Для элюции белковых фракций использовали фосфатный (рН=7,2-7,4), карбонатно-бикарбонатный (рН=8,7-9,0) и ацетатный (рН=6,0-6,2) буферные растворы. Элюцию и отбор белковых фракций выполняли с интервалами 5-

7 минут. Для фракционирования каждого из антигенов подготовлено по две стеклянные колонки длиной 12 см и диаметром 2,5 см.

Всего получено семь фракций экскреторно-секреторных и четыре - соматических антигенов Toxocara canis. При изучении концентрации белка с помощью спектрофотометра СФ-144 в каждой из выделенных фракций ESAgTox и SomAgTox, установлено максимальное содержание пептидов во второй, пятой (65 и 140 мкг/мл) и в третьей фракциях (46 мкг/мл) соответственно. Получение пятой фракции экскреторно-секреторного антигена осуществляли через 25-27 минут с начала элюции, а третьей фракции соматического антигена - через 1517 минут.

2.2.3.2. Иммунизация кроликов и получение специфических иммунных сывороток к экскреторно-секреторным антигенам личинок токсокар

Иммунизацию кроликов выполняли с использованием экскреторно-секреторного антигена ESAgTox токсокар с концентрацией белка 140 мкг/мл. Всего иммунизировано 3 кролика.

После хранения в морозильной камере экскреторно-секреторный антиген токсокар центрифугировали при 3000 g 45 мин.

Антиген ESAgTox Toxocara canis в равном объеме с неполным адъювантом Фрейнда (ланолин + вазелиновое масло) вводили кроликам парентерально по следующей схеме: первый день - 1,2 мл подкожно в шесть участков брюшной стенки (по 0,2 мл), 14-15 дни - 1 мл внутримышечно, дробно, в область поверхностных лимфатических узлов (без адъюванта), взятие крови из вены уха и полное обескровливание проводили через 8-12 дней после внутримышечного введения антигена. Скрининг иммунных сывороток кроликов с очищенными фракциями экскреторно-секреторных ESAgTox и соматических SomAgTox антигенов в иммуноферментном анализе показал высокий уровень специфических антител к Toxocara canis -от 1:1280 - 1:2560 до 1:5120 - 1:10240 и от 1:400 - 1:800 до 1600 соответственно.

2.2.3.3. Изучение активности и специфичности экскреторно-секреторных и соматических антигенов личинок второй стадии токсокар в ИФА

В качестве материала для экспериментальных исследований использовали сыворотки крови щенков, инвазированных токсокарами в экспериментальных и естественных условиях (титры антител в ИФА - 1:1280 - 1:5120). Отрицательным и положительным контролями служили сыворотки из набора «Тиаскар» НПО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) для исследования на токсокароз в иммуноферментном анализе.

Изучение полученных белковых фракций антигенов токсокар с иммунными сыворотками кроликов, иммунизированных экскреторно-секреторным антигеном, показало наиболее высокую активность пятой фракции ESAgTox (титр ИФА в гомологичной системе 1:10240) и относительно невысокую активность третьей фракции SomAgTox (титр в ИФА - 1:1600).

Разведения антигенов ESAgTox и ESAgTox токсокар

Рис. 3. Активность и рабочий титр экскреторно-секреторного и соматического антигенов (ESAgTox и SomAgTox) токсокар в ИФА

При исследовании сывороток крови от спонтанно зараженных токсокарами щенков с очищенными фракциями ESAgTox (Toxocara canis) в ИФА определили высокий уровень специфических антител, характерный для ларвального ток-сокароза — 1:1280-1:5120. Применение фракций SomAgTox с теми же сыворотками крови щенков в ИФА показало положительный результат в низких титрах - 1:400-1:600. Полученные результаты подтверждают высокую активность разработанных на основе ESAgTox антигенных препаратов токсокар.

Данные рисунка 3 подтверждают высокую иммунологическую активность экскреторно-секреторного антигена ESAgTox с иммунными сыворотками. Оптимальное рабочее разведение экскреторно-секреторного антигена личинок второй стадии Toxocara canis для иммуноферментного анализа 1:50.

Соматические антигены SomAgTox обладают более слабой активностью по сравнению с экскреторно-секреторными в ИФА. Рабочее разведение соматического антигена, используемое для сенсибилизации полистирола в ИФА -1:20.

Специфичность экскреторно-секреторных и соматических антигенов Toxocara canis изучали в иммуноферментном анализе, используя следующие имму-нореагенты: 1. антигены Toxocara canis (ESAgTox и SomAgTox), Toxascaris leonina (ESAgToxasc), Ascaris suum (ESAgAsc); 2. позитивные сыворотки крови от собак, спонтанно зараженных токсокарами и токсаскарисами (титры антител в ИФА - 1:800 - 1:5120 и 1:320 - 1:1280 соответственно); 3. иммунные кроличьи сыворотки к экскреторно-секреторному антигену ESAgTox токсокар (титр в

ИФА - 1:2560 - 1:10240); 4. отрицательные на токсокароз и токсаскариоз сыворотки крови собак; 5. фосфатно-солевой буферный раствор (рН=7,2-7,4).

Наиболее высокие показатели специфичности установлены при изучении пятой фракции экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии токсокар (с содержанием белка 140 мг/мл). Соматические антигены токсокар (с содержанием белка 46 мг/мл) показали низкую специфичность при слабой активности с сыворотками крови от спонтанно инвазированных токсокарами собак.

Для выяснения диагностического титра иммуноферментного анализа при токсокарозе собак выполнили контрольный скрининг антигенов разных видов аскаридат. Антигены Toxocara canis (ESAgTox), Toxascaris Jeonína (ESAgToxasc), Ascaris suum (ESAgAsc) выбраны для изучения специфичности экскреторно-секреторных и соматических антигенов по причине присутствия у них общих антигенных детерминант. Родственные антигены оказывают влияние на специфичность антигенных диагностических препаратов в ИФА при токсокарозе.

Результаты исследований в ИФА с вышеуказанными контролями показывают, что иммунные сыворотки к Toxocara canis (раб. титр 1:5120 - 1:10240) с экскреторно-секреторными антигенами (ESAgTox) положительны в максимальных титрах. При использовании соматических антигенов личинок токсокар (SomAgTox) установлена более низкая специфичность (1:400 и 1:800 в ИФА). При испытании экскреторно-секреторного антигена токсокар ESAgTox + иммунная сыворотка к ESAgToxasc в ИФА — 1:50, а при постановке метода в противоположном варианте ESAgToxasc +иммунная сыворотка к ESAgTox - 1:100.

Скрининг экскреторно-секреторного антигена ESAgTox + иммунная сыворотка к ESAgAsc в ИФА позволил подтвердить положительный результат в титре 1:40, в противоположном варианте ESAgAsc + иммунная сыворотка к ESAgTox - 0.

При испытании соматических антигенов Toxocara canis и Toxascaris leonina в гетерологичной системе выяснена их низкая специфичность: SomAgTox + позитивная сыворотка к ESAgToxasc в ИФА - 1:200, SomAgToxasc + позитивная сыворотка к ESAgTox в ИФА - 1:100.

При оценке отрицательных контролей (негативные на токсокароз и токсаскариоз сыворотки собак, фосфатно-солевой буферный раствор и др.) во всех разведениях установлен отрицательный результат.

Учитывая полученные результаты по изучению специфичности иммуно-реагентов (ESAgTox) Toxocara canis в ИФА, установленные перекрестные иммунологические реакции между токсокарами, токсаскарисами плотоядных животных и аскаридами свиней в разведениях до 1:100, диагностическим титром метода при токсокарозе следует считать - 1:200, т.е. в два раза выше порогового. При использовании установленного диагностического титра чувствительность иммуноферментного анализа не снижается. Соматические антигены токсокар по причине низкой специфичности в ИФА применять не рекомендуется.

В результате массивной смешанной инвазии нематодами и цестодами (Di-pylidium caninum) и иммунодепрессии у щенков могут регистрироваться отрицательные результаты исследований в иммунодиагностических тестах. В таких случаях перед повторными исследованиями в группе подозреваемых в заболевании животных применяют эффективные иммуномодуляторы, сочетая курс лечения с оптимизацией рациона и условий содержания.

2.2.3.4. Определение чувствительности ИФА и диагностической эффективности полученных иммунореагентов при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак

Изучение чувствительности и информативности иммуноферментного анализа при токсокарозе собак проводили на основании сопоставления результатов серологического и копроовоскопического исследований семи щенных собак 2-8 лет. Сроки беременности животных составляли 35-45 дней.

При помощи ИФА антитела к личинкам токсокар выявлены у всех 7 щенных собак в титрах 1:1600 - 1:3200, а копроовоскопическим флотационным методом яйца токсокар не обнаружены. Результаты исследований подтверждают, что у собак старше двух лет токсокары до половозрелой стадии не развиваются, а присутствуют в инкапсулированной форме или «larva migrans» (мигрирующие личинки) во внутренних органах.

Для объективного представления об эффективности серологической диагностики проведено сопоставление результатов ИФА и копроовоскопического исследования на токсокароз щенков 1,5-3 мес. возраста, рожденных от серопо-зитивных на токсокароз собак. При серологическом исследовании сывороток крови 24 щенков на 21, 28 и 35 дни жизни получены положительные результаты. У этих же животных при копроовоскопическом исследовании обнаружены яйца токсокар (530-1150 в 1 г фекалий). Результаты серологических исследований представлены в таблице 2. Полученные данные подтверждают более высокую активность антигенного диагностического препарата для ИФА на основе экскреторно-секреторных компонентов. Высокий уровень антител в крови щенных собак, по видимому, объясняется циркуляцией во второй половине беременности хорионического гормона в большой концентрации, что способствует разрушению оболочек капсул, освобождению личинок токсокар и их миграции. В этот период уровень антител в ИФА варьирует от 1:1600 до 1:3200. Антитела к экскреторно-секреторным антигенам ESAgTox у щенков, зараженных половозрелыми токсокарами, обнаружены в ИФА в титрах 1:800 — 1:1600, 1:3200.

Минимальные титры специфических антител к токсокарам установлены в ИФА при исследовании сывороток крови взрослых собак и рожденных от них щенков с SomAgTox - 1:400 - 1:800 и 1:200 - 1:400, 1:800 - 1:1600 соответственно.

Таблица 1

Результаты исследования с помощью иммуноферментного анализа с ESAgTox и 5отА§Тох антигенами токсокар щенных собак и рожденных __от них щенков в возрасте 21-35 дней_

Возрастная Иссле- Титры антител

группа довано ИФА

ESAgTox SomAgTox

антиген антиген

Щенные 1:1600-1:3200 1:400-1:800

собаки 7

2-8 лет

Щенки 1:800-1600, 1:200-1:400,

21,25, 35 дн. 24 1:1600,1:3200 1:800, 1:1600

На основании полученных результатов можно оценить чувствительность иммуноферментного анализа с ESAgTox антигеном при токсокарозе собак как высокую. При исследовании всех образцов сыворотки крови от взрослых собак и щенков, инвазированных личиночными и половозрелыми стадиями Toxocara canis, получены положительные результаты ИФА в разведениях сывороток, превышающих диагностический титр. Несмотря на более низкую специфичность соматического антигена токсокар (SomAgTox), чувствительность ИФА оказалась удовлетворительной (уровни специфических антител в разведениях сывороток зараженных животных превышают диагностический титр).

При изучении диагностической эффективности иммуноферментного анализа с ESAgTox в эксперименте на щенках, зараженных разными дозами яиц Toxocara canis, установлена также высокая чувствительность (100 %) и информативность. Подопытные животные исследованы при помощи ИФА с ESAgTox до начала опыта и в динамике после заражения.

С 4 по 24 дни после экспериментального заражения инвазионными яйцами Toxocara canis (от 50 до 200 на животное) у подопытных щенков наблюдается увеличение уровня специфических антител к экскреторно-секреторным антигенам ESAgTox. Антителогенез обусловлен стимуляцией антигенами личинок третьей стадии токсокар клеточно-гуморальных факторов иммунитета, макрофаг - Т-В - клеточным взаимодействием и формированием клонов антитело-продуцирующих плазматических клеток.

Уменьшение титров антител в ИФА в сыворотках крови подопытных собак на 28 день после заражения обусловлено гибелью половозрелых токсокар, их личинок и элиминацией антигенов из тканей животных в результате воздействия антигельминтного препарата «Барс спот-он» (дегельминтизация на 14 день после заражения).

2.2.3.5. Динамика антител к мигрирующим личинкам Toxocara canis при экспериментальном и спонтанном токсокарозе собак

Изучение динамики антител к Toxocara canis в ИФА при экспериментальном заражении 8 щенков 2,5-3 мес. инвазионными яйцами токсокар (от 50 до 200) показало повышение уровня специфических антител на 14,25 и 32 дни инвазии до 1:800, 1:2560 и 1:6400 соответственно (таблица 2). В последующие дни после заражения титры антител к экскреторно-секреторным антигенам личинок токсокар у подопытных животных оставались на уровне 1:800 - 1:1600.

Таблица 2

Динамика титров антител к личинкам Toxocara canis в ИФА с экскреторно-секреторным антигеном при экспериментальном токсокарозе собак 2,5-3 мес.

Группы До заражения 14 день после заражения 25 день после заражения 32 день после заражения

Разведения сыворотки крови в иммуноферментном анализе

Опытная 1:50-1:100 1:800 - 1:1600 1:1600 - 1:3200 1:3200 - 1:6400

Контрольная 1:50 1:50 1:50 1:50

Из 48 спонтанно зараженных токсокарами собак, исследованных в ИФА, серопозитивными оказались 45 - 93,7 %. Исследования проведены в летний сезон (июнь - июль), т.е. в период миграции личинок («larva migrans») в тканях плотоядных животных. Во всех случаях при однократном исследовании щенков 1,5-3 мес. возраста уровень титров антител к ESAgTox в ИФА составлял в среднем от 1:800 до 1:3200, практически соответствовал таковому у экспериментально зараженных животных.

2.2.4. Эффективность антгельминтных препаратов при токсокарозе собак

2.2.4.1. Антигельминтная эффективность препарата «Барс спот - он» при экспериментальном токсокарозе собак и динамика антител к личинкам Toxocara canis после дегельминтизации

Препарат «Барс спот-он» испытан на 8 экспериментально зараженных инвазионными яйцами токсокар щенках 1,5-2,5 мес. возраста. Собак перед началом опыта обработали антигельминтным препаратом «Фебтал» в рекомендуемой дозе. Схема опыта №1 представлена в главе «Материал и методы» диссертации. После дегельминтизации собак на 14 день после заражения контроль уровня антител к ESAgTox в ИФА показал снижение его на 28, 32 и 37 дни после заражения. Таким образом, личинки третьей стадии токсокар постепенно разрушались на 14-19 дни после дегельминтизации с одновременной быстрой элиминацией их экскреторно-секреторных антигенов из тканей. У четырех контрольных недегельминтизированных щенков уровень титров специфических

антител в ИФА оставался высоким на протяжении всего опыта - 1:1600 -1:3200. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3

Эффективность препарата «Барс спот-он» при токсокарозе собак, экспериментально и спонтанно зараженных инвазионными яйцами токсокар

Группы животных Кол-во животных Число инвази- рованных до обработки ЭИ, % Число животных, освободившихся от гельминтов ЭЭ, %

Щенки 1,52,5 мес. 8 8 100 снижение уровня антител у 8 100

Контр, гр. 4 4 100 1:1600- 1:3200 у4 0

Щенки 2,54 мес. 48 29 60,4±8,7 29 100

Контр, гр. 8 8 100 0 -

В Рязанской городской ветеринарной станции и трех ветеринарных клиниках г. Рязани проведены исследования по изучению эффективности противопа-разитарного препарата «Барс спот-он» (ивермектин + празиквантел).

Испытания выполнены в летний и осенний сезоны года на собаках и кошках, зараженных гельминтами и паразитическими членистоногими. Собраны подробные анамнестические данные о животных.

Препарат «Барс спот-он» применяли в соответствии с инструкцией, разработанной сотрудниками ООО «Ветзащита» (г. Москва). Эффективность устанавливали по результатам клинического осмотра и лабораторных исследований зараженных и обработанных препаратом собак и кошек.

«Барс спот-он» наносили в область затылочно-атлантного сочленения или между лопатками в рекомендуемой дозе (1 пипетка на 2-5 кг массы тела), тщательно втирали с целью быстрой резорбции.

Копроовоскопические исследования 29 спонтанно зараженных токсокара-ми беспородных щенков 2,5-4 мес. показали, что на 7-8 дни после дегельминтизации животные полностью освободились от половозрелых токсокар. В фекалиях щенков на 2-3 дни после обработки обнаружено от 3 до 10 половозрелых особей Toxocara canis. У контрольных недегельминтизированных 8 щенков в течение опыта и после его завершения в фекалиях обнаружены яйца токсокар. При применении препарата «Барс спот-он» 7 котятам 2-5 мес. половозрелые токсокары обнаружены в фекалиях трех котят на 3 и 4 дни после дегельминтизации. Исследования животных после дегельминтизации проводили так же, как и при токсокарозе собак.

По результатам наблюдений и исследований выяснена 100 % эффективность препарата «Барс спот-он» при имагинальном токсокарозе собак и кошек..

Кроме того, на 5 безнадзорных собаках 2-7 лет выполнен опыт по изучению эффективности «Барс-спот он» при токсаскариозе. После нанесения препарата в область холки у двух собак на второй день в фекалиях обнаружено несколько экземпляров нематоды Toxascaris leonina.

Таким образом, экстенсэффективность препарата «Барс спот-он» при има-гинальном токсокарозе в двух опытах составляет 100 %.

У подопытных собак и кошек при применении препарата «Барс спот - он» в рекомендуемых дозах какие-либо симптомы, характеризующие интоксикацию и нарушение функций кожи, центральной нервной системы и сердечнососудистой системы не отмечены.

2.2.4.2. Антигельминтная эффективность препарата «Пирадек» (суспензия) при спонтанном токсокарозе собак

Испытание эффективности препарата «Пирадек» (пирантел + иммуномо-дулятор) против половозрелых токсокар, а также изучение его овоцидного действия проводили на спонтанно зараженных токсокарами щенках 1,5 мес. возраста. Всего дегельминтизаровали 15 спонтанно зараженных щенков. Отмечено быстрое нематодоцидное воздействие препарата. Токсокары обнаружены в фекалиях всех 15 дегельминтизированных щенков через 6-9 часов после дегельминтизации (ЭЭ=100 %).

Половозрелых самок токсокар, полученных через 6 часов после дегельминтизации суспензией «Пирадек», вскрывали в условиях лаборатории и выделяли из матки яйца. В последующем суспензию яиц токсокар культивировали в среде, содержащей глютамин. Спустя один месяц из 265 яиц только в трех сформировались инвазионные личинки, в 12 установлен неполный бластогенез (3-8 бластомеров в конце срока культивирования) и две деформированные, не проявляющие двигательной активности личинки. Результаты опыта подтверждают высокий овоцидный эффект препарата «Пирадек» при имагинальном токсокарозе. Спустя 25 дней после дегельминтизации в фекалиях собак вновь обнаружили яйца токсокар, что свидетельствует об отсутствии ларвоцидного действия препарата «Пирадек».

Окончательно результаты дегельминтизации препаратом «Пирадек» устанавливали через две недели на основании копроовоскопических исследований. Яйца токсокар не обнаружены ни у одного животного из опытной группы. Контрольные недегельминтизированные животные - аналоги (5) оказались инвази-рованы половозрелыми токсокарами на протяжении всего опыта и после его завершения. Таким образом, экстенсэффективность препарата «Пирадек» при токсокарозе собак составляет 100 %.

2.2.5. Динамика антител к Toxocara canis в иммуноферментном анализе после дегельминтизации экспериментально зараженных собак

С помощью иммуноферментного анализа изучали динамику титров антител к личинкам токсокар в сыворотках крови собак, спонтанно и эксперимен-'

тально зараженных инвазионными яйцами Toxocara canis, до и после дегель-минтизиции препаратом «Барс спот-он» (схема опыта №1). ИФА выполняли с экскреторно-секреторными и соматическими антигенами личинок второй стадии токсокар. До проведения опыта у спонтанно зараженных токсокарами щенков в ИФА установили титры специфических антител от 1:400 до 1:1600. После заражения собак инвазионными яйцами токсокар на 7-14 дни отмечено увеличение титров антител к токсокарам в ИФА с ESAgTox - 1:800 и 1:1600 - 1:3200, а с SomAgTox - 1:400 - 1:800. На 14 день после дегельминтизации наблюдается снижение уровня антител к Toxocara canis до 1:200 - 1:400, а на 21 день после дегельминтизации результат ИФА оказался отрицательным (таблица 4).

Таблица 4

Динамика титров антител к Toxocara canis у экспериментально зараженных собак, дегельминтизированных препаратом «Барс спот-он»

Сроки исследования Титры антител в ИФА

Экскреторно-секреторный антиген личинок второй стадии токсокар (ESAgTox) Соматический антиген личинок второй стадии токсокар (SomAgTox)

До заражения яйцами токсокар и дегельминтизации 1:400-1:1600 1:100-1:1200

на 7-14 дни эксперимента 1:1600-1:3200 1:400 - 1:800

на 14 день после дегельминтизации 1:200-1:400 0-1:100

на 21 день после дегельминтизации 0 0

Полученные результаты подтверждают возможность и перспективность использования иммуноферментного анализа для диагностики токсокароза собак и контроля эффективности дегельминтизации.

ВЫВОДЫ

1. Токсокароз зарегистрирован в г. Рязани в среднем у 17,3±0,7 % собак. Зараженность собак 1,5-4,5 мес. возраста составила в 2006 г. - 8,3±4,7 %, в 2007 г. - 12,2±1,2 %, в 2008 г. - 14,3±3,6 %, в 2009 г. - 34,5±4,6 %.

2. При гельминтологических исследованиях в динамике (2007 - 2008 гг.) яйца Toxocara canis обнаружены у 26,6 ±4,5 %, 34,8 ±3,8 % собак 1-2,5 мес., 31,6 ±4,1 %, 33,3 ±3,9 % - 3-5 мес. и у 7,1 ±4,3 % (1 из 14) - 6 мес. В течение двух лет установлено повышение уровня зараженности Toxocara canis щенков 1-2,5 мес. возраста на 8 ± 2,1 % и 3-5-мес. - на 1,7 ±0,6 %. Низкий уровень инвазии наблюдается среди собак 6 мес. возраста, а животные 7-10 мес. и старше одного года свободны от половозрелых токсокар

3. Сезонная динамика токсокароза характеризуется повышением интенсивности эпизоотического процесса в теплый период года. В летние месяцы и осенью экстенсивность инвазии максимальна - 26,5±2,3 % и 18,7±2,7 % соответственно. В зимний сезон показатели зараженности токсокарами относительно невысокие - 4,4±0,5 %. Весной наблюдается новый подъем инвазии до 9,8±2,9 %.

4. При экспериментальном токсокарозе собак (дозы заражения от 50 до 150-200 яиц Toxocara canis) установлены следующие симптомы: в первые три дня после заражения, каких-либо симптомов, свойственных для токсокароза не выявлено. С 13 дня опыта отмечены беспокойство, угнетение, тусклый и взъерошенный шерстный покров, анемичность слизистых оболочек, учащение пульса и дыхания, ослабление тонов сердца, частый сухой кашель, болезненная реакция при пальпации грудной клетки и брюшной стенки, диарея, в двух случаях - нарушение координации движения. К 15-17 дн. - снижение упитанности и истощение. Зараженные щенки отставали в росте и развитии от контрольных животных.

5. Оптимальные параметры культивирования яиц Toxocara canis: температура - 23-25°С, влажность 82-85 %. Завершение формирования личинок и проявление активности наблюдается через 25-30 дн. при культивировании яиц, выделенных из матки токсокар, в 1 % растворе глютамина с добавлением стрептомицина и нистатина.

6. Скрининг в иммуноферментном анализе позволил установить наиболее оптимальные показатели активности и специфичности экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии токсокар (титр антител - 1:6400 с иммунной кроличьей сывороткой) и соматических личиночных антигенов (титр антител - 1:640-1:1280). Специфичность ESAgTox- 96,5 %.

7. В опытах на спонтанно и экспериментально зараженных инвазионными яйцами токсокар щенках подтверждена высокая чувствительность ИФА с экс-

креторно-секреторными антигенами - 92-95 %, максимальный титр с иммунными кроличьими сыворотками против ESAgTox- 1:10400.

8. После дегельминтизации собак, спонтанно и экспериментально зараженных яйцами токсокар, титры антител к ESAgTox постепенно снижаются и на 15-18 дни после дегельминтизации составляют - 1:1280, а на 30 день - 1:640.

9. Экстенсэффективность антигельминтных препаратов «Барс спот - он» и «Пирадек» при спонтанном и экспериментальном ларвальном и имагинальном токсокарозе собак составляет 100 %.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработаны параметры культивирования яиц Toxocara canis и получения экскреторно-секреторных антигенов из личинок токсокар второй стадии для иммуноферментного анализа (ИФА).

ИФА следует применять для обнаружения у собак до наступления беременности антител к мигрирующим и инкапсулированным в тканях личинкам Toxocara canis.

При положительных результатах ИФА на токсокароз собак следует де-гельминтизировать препаратами «Барс спот - он» и «Пирадек». Эффективность дегельминтизации контролировать по снижению уровня антител к личинкам Toxocara canis и серонегативным результатам исследования на токсокароз через 15-30 дней после дегельминтизации.

Результаты испытаний антигельминтного препарата «Барс спот - он» включены в инструкцию по применению. Регистрационный номер ПВР-2-3.7/01973 (утверждено Россельхознадзором 18.06.2009 г.).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Солопов П.А. О перспективах разработки антигенов Toxocara canis для сероэпизоотологического мониторинга (ИФА) на токсокароз: Материалы меж-дунар. науч.-практ. конф. - Рязанская ГСХА. - Рязань. - 2006.- Инновации молодых ученых и специалистов - национальному проекту «Развитие АПК». - С. 408-410.

2. Солопов П.А. Распространение и особенности эпизоотологии токсокаро-за плотоядных в г. Рязани: Материалы Международной студенческой научной конференции «Знания молодых - новому веку». - Вятская ГСХА. - Киров. -2008. - С. 162-163.

3. Новак М.Д., Солопов П.А. Иммуноферментный анализ и реакция непрямой гемагглютинации для диагностики имагинального и ларвального токсока-

роза собак: Материалы докладов науч. конф./ Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. - Вып. 10. -М., 2009. - С. 286-287.

4. Новак М.Д., Солопов П.А. Эффективность препаратов «Барс-Форте» и «Барс» при гельминтозах, акарозах и энтомозах плотоядных животных: Материалы докладов науч. конф. / Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. - Вып. 10. - М., 2009. - С. 287-289.

5. Новак М.Д., Солопов П.А. Изучение эффективности препаратов «Барс спот-сн» и «Барс» ошейник при гельминтозах, инфестациях собак и кошек: Труды 17 Московского Международного ветеринарного конгресса. - М., 2009. -С. 19.

6. Солопов П.А. Распространение токсокароза в г. Рязани, иммунодиагностика и терапия // Российский паразитологический журнал. - М., 2009. - №4, С. 56-59.

Бумага офсетная. Гарнитура Times. Печать ризографнческая. Усл. печ. л. 1,5. Тираж 100. Заказ №322 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Рязанский государственный агротехкологический университет имени П.А. Костычева» 390044 г. Рязань, ул. Костычева, 1 Отпечатано в издательстве РГАТУ

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Солопов, Павел Аркадьевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 4 ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза плотоядных животных.

1.2. Патогенез при токсокарозе.

1.3. Методы иммунодиагностики токсокароза плотоядных животных и человека.

1.4. Применение современных антигельминтных препаратов при токсокарозе плотоядных животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследований.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Распространение токсокароза в г. Рязани.

2.2.1.1. Динамика эпизоотического процесса при токсокарозе собак в 20062009 г.г.

2.2.1.2. Сезонные и возрастные и аспекты эпизоотологии токсокароза собак

2.2.2. Симптомы токсокароза при спонтанном и экспериментальном заражении.

2.2.3. Результаты патологоанатомического исследования при спонтанном и экспериментальном токсокарозе.

2.2.4. Культивирование яиц и личинок Toxocara canis с целью получения экскреторно-секреторных антигенов.

2.2.5. Разработка иммунореагентов для иммуноферментного анализа и применение в диагностике «larva migrans» при токсокарозе собак.

2.2.5.1. Приготовление экскреторно-секреторного антигена из личинок второй стадии Toxocara canis.

2.2.5.2. Иммунизация кроликов и получение специфических иммунных сывороток к экскреторно-секреторным антигенам личинок токсокар.

2.2.5.3. Изучение активности и специфичности экскреторно-секреторных и соматических антигенов личинок токсокар в ИФА.

2.2.5.4. Определение чувствительности ИФА и диагностической эффективности полученных иммунореагентов при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак.

2.2.5.5. Динамика антител к мигрирующим личинкам Toxocara canis при экспериментальном и спонтанном токсокарозе собак.

2.2.6. Эффективность антигельминтных препаратов при токсокарозе собак

2.2.6.1. Антигельминтная эффективность препарата «Барс спот-он» при экспериментальном токсокарозе собак и динамика антител к личинкам Toxocara canis после дегельминтизации.

2.2.6.2. Антигельминтная эффективность препарата «Пирадек» (суспензия) при спонтанном токсокарозе собак.

2.2.7. Динамика антител к Toxocara canis в иммуноферментном анализе после дегельминтизации экспериментально зараженных собак.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммуноферментный метод диагностики токсокароза собак, сероэпизоотологический мониторинг и терапия"

Токсокароз распространен среди плотоядных животных во многих странах мира.

В крупных городах наблюдается непрерывный рост численности собак и кошек. Плотоядные животные контаминируют окружающую среду яйцами токсо-кар. Механизмы передачи возбудителя токсокароза (алиментарный инвазионными яйцами, при каннибализме - личинками второй стадии, трансплацентарный, трансмаммарный).

В различных регионах Российской Федерации токсокароз установлен у 8,575% собак (Ф.Л. Радун, 1973, С.Д. Клочков, 1995, Ю.Э. Мысливец и др., 1998, А.Я. Лысенко и др., 1999, А.Н. Шинкаренко, 1999, Т.Г. Козырева, 1999, А.Н. Во-личев, 2000, С.И. Калюжный, 2000, Н.В. Есаулова, М.Ш. Акбаев, 2001, В.Б. Игнатьева, 2001, И.М. Зубарева, 2001, А.В. Жабров, 2002, Н.С. Беспалова, 2003).

Щенки в возрасте от рождения до 30 дней заражены токсокарами на 90-100%. Высокая напряженность эпизоотического процесса является следствием пожизненного носительства личинок Toxocara canis и трансплацентарной передачей их во второй половине беременности (Л.Е. Верета, О.Г. Малышкова, 1984).

Токсокароз - зооангропоноз. Зараженные собаки представляют эпидемическую опасность. Патологические изменения в тканях и органах людей, вызванные личинками токсокар, известны под названием синдрома «larva migrans» (Г.А. Котельников, 1984, Ю.А. Березанцев, В.В. Кривенко, 1986).

Установлено, что личинки токсокар при миграции проникают в капилляры легких, затем в большой круг кровообращения, центральную нервную систему, обусловливая патологические процессы в головном мозге (К.И. Скрябин, A.M. Петров, 1964).

Известны две формы токсокароза человека: висцеральный и глазной. Заболевание протекает с рецидивами и длительными ремиссиями (Л.С. Ходасевич и др., 1998).

В России и за рубежом для сероэпидемиологического обследования на токсокароз предложен иммуноферментный метод и другие иммунодиагностические тесты. Антитела к личинкам токсокар обнаруживают в сыворотках крови людей при помощи тест систем для ИФА «Тиаскар» (НПО «Вектор бест», г. Новосибирск).

До настоящего времени недостаточно изучены особенности эпизоотологии, патогенез ларвального токсокароза собак, патоморфологические изменения в тканях, продолжительность персистенции и сохранения инвазионных свойств личинок токсокар у взрослых плотоядных.

За рубежом с 70 гг. прошлого столетия применяются различные диагностические тесты для выявления ларвального токсокароза.

В отечественной ветеринарной практике отсутствуют эффективные методы иммунодиагностики «larva migrans» при токсокарозе плотоядных.

В качестве источника антигена при иммунодиагностике ларвального токсокароза можно использовать взрослые особи Toxocara canis (С.С. Huntley et al., 1963, E.I. Jeska, 1967, R.F. Collins et al., 1975), личинки второй и третьей стадий (J.N. Annen et al., 1975), экскреторно-секреторные продукты личинок (D.H. Savig-ny, 1975, К. Matsumura et al., 1983).

Актуальным для ветеринарной практики является научное обоснование комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе собак в питомниках служебного собаководства и в кинологических Центрах, включающих диагностические исследования и дегельминтизации сук перед наступлением беременности.

Цель и задачи исследований.

Задачи:

1. Изучить распространение, возрастные и сезонные аспекты эпизоотологии токсокароза собак в г. Рязани.

5. Определить терапевтическую эффективность антигельминтных препаратов «Барс спот-он» и «Пирадек» при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак при «larva migrans» Toxocara canis.

Научная новизна работы. Впервые изучено распространение токсокароза среди собак в г. Рязани. Установлены возрастные и сезонные аспекты эпизоотологии токсокароза, динамика эпизоотического процесса по годам. Составлена схема паразитарной системы «Toxocara canis — плотоядные семейства Canidae». Разработаны параметры культивирования яиц и личинок токсокар и получения экскреторно-секреторных антигенов. Выяснены активность, специфичность экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии токсокар в ИФА с иммунными кроличьими и другими сыворотками. В опыте на щенках, спонтанно и экспериментально зараженных яйцами токсокар, установлена чувствительность ИФА. Изучена динамика антител к личинкам Toxocara canis при спонтанном и экспериментальном токсокарозе, а также после дегельминтизации.

Теоретическая и практическая значимость. Подробно (по часам и дням) изучены процессы бластогенеза яиц и гистогенеза личинок Toxocara canis, а также продолжительность жизни личинок второй стадии in vitro при оптимальных условиях культивирования.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Рязани.

2. Разработка параметров культивирования яиц и личинок Toxocara canis.

5. Терапевтическая эффективность препарата «Барс спот -он» при спонтанном и экспериментальном токсокарозе в период «larva migrans» и антигельминти8 ка «Пирадек» против кишечных форм токсокар разного возраста. Контроль эффективности антигельминтного препарата «Барс спот - он» с помощью иммуно-ферментного анализа (ИФА).

Пути реализации. Результаты исследований можно включить в схему научно-обоснованных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе плотоядных животных и в учебно-методическую литературу для ветеринарных специалистов и студентов факультетов ветеринарной медицины вузов.

2. Научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, ВИГИС, 2008, 2009);

3. Международная научная конференции молодых ученых (Киров, ВГСХА, 2008).

4. Московский международный ветеринарный конгресс (Москва, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано шесть научных работ, в том числе одна в издании, рекомендованном ВАК Российской Федерации для публикации материалов по кандидатским диссертациям.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы и 4 главы результатов исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Библиографический список представлен 194 источниками, из них отечественных - 100, иностранных — 94. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 21 рисунком.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Солопов, Павел Аркадьевич

выводы

1. Токсокароз зарегистрирован в г. Рязани в среднем у 17,3±0,7 % собак. Зараженность собак 1,5-4,5 мес. возраста составила в 2006 г. - 8,3±4,7 %, в 2007 г.

- 12,2±1,2 %, в 2008 г. - 14,3±3,6 %, в 2009 г. - 34,5±4,6 %.

3. Сезонная динамика токсокароза характеризуется повышением интенсивности эпизоотического процесса в теплый период года. В летние месяцы и осенью экстенсивность инвазии максимальна - 26,5±2,3 % и 18,7±2,7 % соответственно. В зимний сезон показатели зараженности токсокарами относительно невысокие -4,4±0,5 %. Весной наблюдается новый подъем инвазии до 9,8±2,9 %.

4. При экспериментальном токсокарозе собак (дозы заражения от 50 до 150200 яиц Toxocara canis) установлены следующие симптомы: в первые три дня после заражения, каких-либо симптомов, свойственных для токсокароза не выявлено. С 13 дня опыта отмечены беспокойство, угнетение, тусклый и взъерошенный шерстный покров, анемичность слизистых оболочек, учащение пульса и дыхания, ослабление тонов сердца, частый сухой кашель, болезненная реакция при пальпации грудной клетки и брюшной стенки, диарея, в двух случаях - нарушение координации движения. К 15-17 дн. - снижение упитанности и истощение. Зараженные щенки отставали в росте и развитии от контрольных животных.

5. Оптимальные параметры культивирования яиц Toxocara canis: температура

- 23-25°С, влажность 82-85 %. Завершение формирования личинок и проявление активности наблюдается через 25-30 дн. при культивировании яиц, выделенных из матки токсокар, в 1 % растворе глютамина с добавлением стрептомицина и нистатина.

6. Скрининг в иммуноферментном анализе позволил установить наиболее оптимальные показатели активности и специфичности экскреторно-секреторных ан/ тигенов личинок второй стадии токсокар (титр антител - 1:6400 с иммунной кроличьей сывороткой) и соматических личиночных антигенов (титр антител - 1:6401:1280). Специфичность ESAgTox - 96,5 %.

7. В опытах на спонтанно и экспериментально зараженных инвазионными яйцами токсокар щенках подтверждена высокая чувствительность ИФА с экскреторно-секреторными антигенами - 92-95 %, максимальный титр с иммунными кроличьими сыворотками против ESAgTox — 1:10400.

8. После дегельминтизации собак, спонтанно и экспериментально зараженных яйцами токсокар, титры антител к ESAgTox постепенно снижаются и на 1518 дни после дегельминтизации составляют — 1:1280, а на 30 день - 1:640.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработаны параметры культивирования яиц Toxocara canis и получения экскреторно-секреторных антигенов из личинок токсокар второй стадии для им-муноферментного анализа (ИФА).

При положительных результатах ИФА на токсокароз собак следует дегель-минтизировать препаратами «Барс спот - он» и «Пирадек». Эффективность дегельминтизации контролировать по снижению уровня антител к личинкам Toxocara canis и серонегативным результатам исследования на токсокароз через 15-30 дней после дегельминтизации.

3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Наиболее распространенными гельминтами собак в Центральном районе Российской Федерации являются токсокары. Нематоды Toxocara canis представляют эпидемическое значение, так как вызывают синдром «larva migrans» у человека.

Гельминтологические исследования в условиях города Рязани позволили обнаружить токсокар в среднем у 17,3 % собак.

Значительное увеличение интенсивности эпизоотического процесса при токсокарозе объясняется возрастанием численности популяции безнадзорных собак и невыполнением плановых дегельминтизаций плотоядных животных при содержании в питомниках, кинологических центрах, квартирах и домах.

В различных административных районах г. Рязани собаки инвазированы токсокарами примерно в одинаковой степени (ЭИ=12-15 %).

Результаты исследований показывают, что на протяжении 2006 - 2009 гг. сохраняется тенденция увеличения зараженности собак токсокарами. Так, в 2006 г. половозрелыми токсокарами инвазировано 8,3 % щенков, в 2007 г. - 12,2 %, в 2008 г. - 14,3 %, в 2009 г. - 34,5 %.

Сезонная динамика эпизоотического процесса при токсокарозе собак имеет закономерный характер. В летние месяцы и осенью экстенсивность инвазии максимальна - 26,5 % и 18,7 % соответственно. В зимний период показатели зараженности токсокарами относительно невысокие - 4,4 %. Весной наблюдается новый подъем инвазии до 9,8 %.

Повышение экстенсивности инвазии при токсокарозе в конце весны и летом объясняется увеличением численности молодых собак (1-5 мес.), которые являются основными источниками возбудителя. Большое значение в распространении возбудителя болезни, сохранении инвазионных свойств яиц Toxocara canis имеют благоприятные условия окружающей среды в весенне-летний период (оптимальная температура и влажность).

При изучении возрастных аспектов эпизоотологии токсокароза установлено, что с возрастом животных зараженность половозрелыми токсокарами уменьшается, а собаки 7-10 мес. и старше одного года преимущественно свободны от имаго Toxocara canis. При копроовоскопических исследованиях в 2007 - 2008 гг. яйца Toxocara canis обнаружены у 26,6 - 34,8 % щенков 1-2,5 мес., 31,6 - 33,3 % - 3-5 мес. и у 7 % - 6 мес. В эти годы наблюдалось увеличение зараженности Toxocara canis щенков 1-2,5 мес. возраста на 8 %, 3-5-мес. - на 1,7 %. Собаки 7-10 мес. и старше одного года не инвазированы половозрелыми токсокарами.

Высокие показатели интенсивности инвазии при имагинальном токсокарозе у щенков 1-2,5 мес. (350-850 яиц в 1 г фекалий) и 3-5 мес. (450-670) обусловлены трансплацентарной и трансмаммарной передачей личинок Toxocara canis и онтогенетически не сформировавшимся иммунитетом. Кроме того, у молодых собак отсутствует приобретенный специфический иммунитет.

При достаточно частых суперинвазиях постепенное накопление личинок Toxocara canis в тканях молодых собак, наряду с их физиологической зрелостью и сформировавшимся иммунитетом способствует постепенной элиминации половозрелых гельминтов из кишечника.

Относительно невысокие показатели интенсивности инвазии (30-80 яиц в 1 г фекалий).у собак 6 мес. возраста свидетельствуют о формировании у взрослых собак при токсокарозе напряженного нестерильного иммунитета, первоначально индуцируемого экскреторно-секреторными антигенами личинок Toxocara canis. Личинки токсокар в большом количестве присутствуют в различных тканях многократно зараженных животных в возрасте одного года и старше.

Случаи имагинального токсокароза у взрослых собак, в т.ч. щенных связаны с понижением иммунного статуса животных в во второй половине беременности и с вероятными иммунодефицитными состояниями различной этиологии.

При спонтанном токсокарозе погибают преимущественно щенки от 20 дней до 2,5 мес.

В опыте на щенках 1,5-2 мес., зараженных инвазионными яйцами токсокар, выяснена высокая патогенность циркулирующего в популяции собак г. Рязани изолята Toxocara canis.

С 13-17 дн. после заражения отмечены беспокойство, угнетение, тусклый и взъерошенный шерстный покров, анемичность слизистых оболочек, учащение пульса и дыхания, ослабление тонов сердца, частый сухой кашель, болезненная реакция при пальпации грудной клетки и брюшной стенки, диарея, в двух случаях - нарушение координации движения. Зараженные щенки заметно отставали по массе тела от контрольных животных (к 27 дню опыта - в среднем в два раза по сравнению с контролем).

При патологоанатомическом исследовании установлена жировая дистрофия печени с выраженными небольшими очагами некроза, очаговая геморрагическая пневмония с участками эмфиземы и ателектаза, катарально-геморрагический энтерит.

В тонком отделе кишечника щенков обнаружено от 5-8 до 18 токсокар различного размера. У двух щенков отмечена инвагинация кишечника.

Симптомы болезни, а также характерные патологические изменения в органах экспериментально зараженных Toxocara canis щенков подтверждают сенсибилизирующее и токсическое воздействие метаболитов, экскреторно-секреторных продуктов мигрирующих личинок токсокар.

Большое значение в комплексе профилактических и оздоровительных мероприятий имеет диагностика ларвального токсокароза плотоядных животных. Наиболее эффективны иммунологические методы диагностики, позволяющие обнаруживать в сыворотке крови антигены личинок токсокар, антитела к ним, а также циркулирующие иммунные комплексы.

С целью получения антигенов для иммунодиагностических тестов модифицирован метод культивирования личинок токсокар и усовершенствован способ выделения экскреторно-секреторных антигенов. Культивирование яиц токсокар выполняли в среде, содержащей 1 % глютамина, а для контроля - в физиологическом растворе. Экскреторно-секреторные антигены получали из культуральной жидкости через 5-7 дней после выхода личинок токсокар из яйцевых оболочек.

На основе ESAgTox и SomAgTox личинок второй стадии Toxocara canis разработаны иммунореагенты для серологического метода диагностики - иммуно-ферментного анализа (ИФА). При изучении специфичности полученных диагностических препаратов установлен диагностический титр для ИФА — 1:200.

На основании тестирования сывороток крови от 12 экспериментально и 48 спонтанно зараженных Toxocara canis щенков, а также при контроле трех серий собственных антигенных препаратов установлены высокая активность и оптимальные показатели специфичности экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии токсокар.

С 4 по 24 дни после экспериментального заражения щенков инвазионными яйцами Toxocara canis наблюдается увеличение уровня специфических антител к ESAgTox. Антителогенез обусловлен стимуляцией антигенами личинок третьей стадии токсокар клеточно-гуморальных факторов иммунитета, макрофаг — Т — В-клеточным взаимодействием и формированием клонов антителопродуцирующих плазматических клеток.

Результаты изучения специфичности, чувствительности и информативности ИФА при экспериментальном и спонтанном токсокарозе собак по общепринятой схеме позволили определить диагностическую эффективность метода.

Высокий уровень антител к Toxocara canis у щенных собак и трансплацентарная передача возбудителя связаны с влиянием циркулирующего в крови хо-рионического гормона, способствующего разрушению капсул, освобождению и активной миграции личинок токсокар.

Изучение терапевтических свойств препаратов «Барс спот-он» и «Пирадек» показало, что антгельминтные препараты в разработанных дозах при однократной обработке зараженных токсокарами собак показывают 100 % эффективность против половозрелых нематод.

На седьмой день после дегельминтизации вышеуказанными антигельминт-ными препаратами в фекалиях животных всех подопытных групп яйца Toxocara canis не обнаружены.

Изучение динамики титров антител в иммуноферментном анализе у щенков, экспериментально зараженных и дегельминтизированных препаратами «Барс спот-он» и «Пирадек» позволило установить уменьшение титров специфических антител в сыворотках крови на 28 день после заражения, что обусловлено гибелью половозрелых токсокар, их личинок и элиминацией антигенов из тканей животных (дегельминтизация на 14 день после заражения).

Полученные данные подтверждают возможность и перспективность использования иммуноферментного анализа для диагностики ларвального токсокароза собак и контроля эффективности дегельминтизации.

Токсокароз - относительно новая проблема практического здравоохранения. Решение ее в большой степени зависит от целенаправленной совместной работы медицинской и ветеринарной служб, а также внедрения в практику новых методов диагностики, лечения и профилактики.

Материалы по изучению эпизоотологии токсокароза собак, разработке антигенных препаратов для иммунодиагностических тестов, а также результаты испытания антигельминтных препаратов, обладающих ларвоцидным и овоцидным действием, могут использоваться в комплексе лечебно-профилактических и оздоровительных мероприятий в питомниках служебного собаководства, кинологических центрах, в административных жилых районах городов сотрудниками управлений ветеринарии и Центра Госсанэпиднадзора.

Важным является проведение семинаров и бесед с владельцами собак, обеспечение гельминтологической грамотности.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Солопов, Павел Аркадьевич, Рязань

1. Абдыбекова, A.M. Факторы, влияющие на зараженность плотоядных семейства Canidae / A.M. Абдыбекова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2006. - С. 9-12.

2. Алтухов Н.М. Патоморфологические изменения в почках собак при токсокарозе / Н.М. Алтухов, Н.С. Беспалова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. -2005.-С. 30-32.

3. Архипов, И.А. Особенности применения и дозирования антигельминти-ков на разных видах животных / И.А. Архипов// Труды ВИГИС. М. - 2002. - Т. 38.-С. 19-36.

4. Бекиш, Л.Э. Новые подходы к лечению висцерального токсокароза / Л.Э. Бекиш // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. — М. 2005. - С. 50-52.

5. Бекиш, Л.Э. Пораженность детского населения висцеральным токсокаро-зом в Беларуси / Л.Э. Бекиш // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2009. - С. 3437.

6. Бекиш, Л.Э. Содержание витамина С в плазме крови у больных при лечении висцерального токсокароза / Л.Э. Бекиш // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. -М.-2006.-С. 51-53.

7. Бекиш, Л.Э. Способ комбинированного лечения токсокароза, включающего специфическую, патогенетическую и антиоксидантную терапию /Л.Э. Бекиш // Инструкция по применению. Утв. МЗ РБ 7.07.2004 г. Per. № 30-0304. -Минск. 2004. - 8 с.

8. Бене, Ф. Обзор антгельминтных средств, применяемых у плотоядных / Ф. Бене // Ветеринария. 1999. - № 5-6. - С. 4-9.

9. Берестов, В.А. Инвазионные болезни / В.А. Берестов // Научные основы звероводства. Л.: Наука, 1985. - С. 388-391.

10. Беспалова, Н.С. Этиопатогенетическая терапия гельминтозов (на примере токсокароза собак) / Н.С. Беспалова // Автореф. дис. . докт. вет. наук. Н. Новгород, 2003. - 52 с.

11. Беюл, Е.К. Дисбактериозы кишечника / Е.К. Беюл, И.Б. Куваева // Клиническая медицина. 1986. — 11. - С. 37-44.

12. Борзунов, Е.Н. Эпизоотология токсокароза собак городской и сельской популяции в условиях Нижегородской области и усовершенствование мер борьбы с ним / Е.Н. Борзунов // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Иваново, 2002. - 24 с.

13. Бурей, М.Л. Инвазированность собак ассоциацией возбудителей гельминтов / М.Л. Бурей, Н.Н. Тэлэмбуца // Профилактика паразитарных болезней животных: Сборник научных статей. Кишинев. - 1985. - С. 78-80.

14. Васильева, Е.Г. Иммунологические аспекты токсокароза / Е.Г. Васильева, Ф.М. Соколина // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. — М. 2009. - С. 90-91.

15. Власенко, Ю.И. Гельминтофауна домашних и диких плотоядных Краснодарского края / Ю.И. Власенко // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2006. - С. 93-95.

16. Волгина, И.С. Паразитозы домашних плотоядных в условиях г. Воронежа / И.С. Волгина, С.П. Талонов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2009. — С. 93-95.

17. Воличев, А.Н. Эколого-эпизоотологические аспекты профилактики основных паразитозов домашних плотоядных в условиях мегаполиса Москвы / А.Н. Воличев // Автореф. дис. . канд. вет. наук. М. - 2000. — 20 с.

18. Волков, Ф.А. Противопаразитарные средства: Справочник / Волков Ф.А., Апалькин В.А., Волков К.Ф. Новосибирск. - 1996. - 75 с.

19. Гаджиев, И.Г. Гельминтофауна собак в равнинном поясе Дагестана / И.Г. Гаджиев // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2009. - С. 105-107.

20. Гаджиев, И.Г. К фауне гельминтов лисицы в Дагестане / И.Г. Гаджиев, A.M. Атаев // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2008. - С. 128-129.

21. Галат, В.Ф. Ассоциативные болезни собак в г. Киеве / В.Ф. Галат, О.А. Бейдик // Материалы IV съезда паразитоценологов Украины. — 1996. С. 37-38.

22. Галимова, В.З. Гельминтофауна пушных зверей в Республике Башкортостан / В.З. Галимова, Т.П. Котова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2008. - С. 132-134.

23. Гламаздин, И.Г. Токсокароз собак — проблема практической ветеринарии / И.Г. Гламаздин, С.В. Петру шина // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2006. - С. 102-104.

24. Даугалиева, Э.Х. Иммунитет при гельминтозах / Э.Х. Даугалиева // Труды ВИГИС. 2000. - Т. 36. - С. 27-49.

25. Даугалиева, Э.Х. Особенности реактивности при гельминтозах и ее роль в системе паразит-хозяин / Э.Х. Даугалиева // Вестник с.-х. наук. 1984. - № 1. — С. 128-135.

26. Ермаков, A.M. Иммунопатологические реакции при паразитоценозах / A.M. Ермаков, А.И. Бутенков // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2008 б. - С. 188-190.

27. Есаулова, Н.В. Гельминтофауна домашних и диких плотоядных в условиях центральной зоны Нечерноземья и усовершенствование мер борьбы с основными гельминтозами / Н.В. Есаулова // Автореф. дис. . канд. вет. наук. — М. -2002.- 17 с.

28. Есаулова, Н.В. Гельминтофауна собак и кошек в условиях г. Москвы и Московской области / Н.В. Есаулова, М.Ш. Акбаев // Материалы Х-го международного ветеринарного конгресса. 2001. - С. 235-236.

29. Жабров А.В. Гельминтозы собак на урбанизированных территориях Среднего Поволжья (эпизоотология и меры борьбы) /А.В. Жабров // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Нижний Новгород. - 2002. - 21 с.

30. Жданова, О.Б. Эпизоотология и особенности патогенеза при токсокарозе и токсаскариозе у клеточных песцов / О.Б. Жданова // Труды ВИГИС. 2004. - Т. 40.-С. 98-104.

31. Желева, Р.Ц. Оценка эффективности реакции непрямой гемагглютина-ции с антигеном аскарид и токсокар при диагностике симптомокомплекса «larva migrans» у человека / Р.Ц. Желева // Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1976-№ 2.- С. 160-165.

32. Желева, Р.Ц. Сравнительное изучение активности и специфичности антигенов Т. canis и A. suum в реакции непрямой гемагглютинации / Р.Ц. Желева // Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1975 а. - № 4. - С. 455-460.

33. Желева, Р.Ц. Сравнительное исследование антигенной структуры Toxocara canis (Werner, 1782) Ascaris suum (Goes, 1782) в реакции иммунодиффузии и иммуноэлектрофорезе / Р.Ц. Желева // Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1975 б. - № 3. - С. 239-298.

34. Заболеваемость протозоозами и гельминтозами населения Российской Федерации в 2006-2007 гг.// Информационный сборник статистических и аналитических материалов. М. - 2008.

35. Зубарева, И.М. Основные гельминтозы домашних плотоядных в крупных городах (на примере г. Новосибирска) / И.М. Зубарева // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Новосибирск, 2001. — 22 с.

36. Зубов, А.В. Паразито-хозяинные отношения при токсокарозно-изоспорозной инвазии собак / А.В. Зубов, Е.Н. Борзунов, И.А. Архипов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2008. - С. 212-214.

37. Зурмийски, П. Изучение распространения Toxocara canis среди собак и опыт лечения токсокароза фенбендазолом / П. Зурмийски // Ветер, сб. 1983. — Т. 81.-№ 12.-С. 21-25.

38. Иванченко, А.Г. Эпидемиологическое значение гельминтов собак в Волгоградской области / А.Г. Иванченко, С.А. Веденеев // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. -М.-2005.-С. 136-138.

39. Игнатьева, В.Б. Изучение гельминтофауны собак в Башкортостане / В.Б. Игнатьева // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. -М. -2001. С. 101-102.

40. Игнашенкова, Г.В. Биохимическое изучение антигенной структуры T.canis / Г.В. Игнашенкова // Дисс. . канд. биол. наук. М. - 1985. - 174 с.

41. Калюжный, С.И. Кишечные паразитозы собак и меры борьбы при мик-стинвазии (токсокароз + цистоизоспороз) у щенков / С.И. Калюжный // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Саратов. - 2000. - 22 с.

42. Карасев, Н.Ф. Гельминты и гельминтозы собак г. Витебска / Н.Ф. Кара-сев, Т.Г. Никулин, А.Е. Янченко //Труды Ленинградского вет. ин-та. 1986. -Вып. 48.-С. 101-104.

43. Кармалиев, Р.С. Гельминтофауна желудочно-кишечного тракта собак в Западно-Казахстанской области и эффективность средств терапии / Р.С. Кармалиев, Л.П. Головкина // Труды ВИГИС. 2004. - Т. 40. - С. 111-115.

44. Кеннеди, К. Экологическая паразитология / К. Кеннеди. М.: Мир, 1978. -230 с.

45. Клименко, В.В. Объективные факторы, ограничивающие диагностическую эффективность паразитарных антигенов, и пути их преодоления /В.В. Клименко // Труды ВИГИС. 2004. - Т. 40. - С. 116-124.

46. Клочков, С.Д. Основные гельминтозы городской популяции собак, их санитарно-эпидемиологическое значение и меры борьбы с ними / С.Д. Клочков // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Саратов. - 1995. — 18 с.

47. Козырева, Т.Г. Эколого-эпидемиологические основы профилактики токсокароза в Дальневосточном регионе России / Т.Г. Козырева // Автореф. дис. . канд. вет. наук. — М. 1999. - 18 с.

48. Коколова, JI.M. Распространение и экология гельминтозов общих для человека и животных в Якутии / J1.M. Коколова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. -М,-2005.-С. 168-169.

49. Кравченко, И.А. Применение абиктина при паразитозах плотоядных животных / И.А. Кравченко // Труды ВИГИС. 2004. - Т. 40. - С. 139-147.

50. Леутская, З.К. Некоторые аспекты иммунитета при гельминтозах / З.К. Леутская. М.: Наука, 1990. - 210 с.

51. Лысенко, А .Я. Токсокароз: Учеб. пособие / А.Я. Лысенко, Т.Н. Константинова, Т.Н. Авдюхина. М. - 1999. - 40 с.

52. Масленникова, О.В. Гельминтофауна хищных млекопитающих (Canidae, Ursidae, Felidae) Кировской области / О.В. Масленникова, А.И. Колеватова// Труды ВИГИС. 2004. - Т. 40. - С. 190-199.

53. Москалик, Р.С. Гельминты и дрожжеподобные грибы у служебных собак г. Кишинева / Р.С. Москалик, К.В. Бакулов // Паразиты теплокровных животных Молдавии. Кишинев. - 1976. - С. 23-27.

54. Мысливец, Ю.Э. Токсокароз в Кузбассе / Ю.Э. Мысливец, Ю.В. Цветова, Г.В. Цветова // Новости "Вектор-Бест". 1998. - № 8. - С. 3.

55. Пешков, Р.А. К вопросу о паразитофауне собак и кошек мегаполиса Москвы / Р.А. Пешков // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2006. - С. 300-303.

56. Пешков, Р.А. Контаминация почвы яйцами гельминтов в мегаполисе Москвы / Р.А. Пешков, М.В. Гузеева // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2008. -С. 376-378.

57. Подушкина, М.А. Токсаскаридоз собак и голубых песцов разработка профилактических мероприятий / М.А. Подушкина // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Уфа. - 2000. - 22 с.

58. Пузенко, С.В. Зараженность плотоядных животных гельминтами в зависимости от способа их содержания /С.В. Пузенко // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. -М.-2009.-С. 306-308.

59. Радун, Ф.Л. Вопросы эпизоотологии и профилактики токсокароза собак, песцов и серебристо-черных лисиц в условиях Московской области / Ф.Л. Радун // Автореф. дис. . канд. вет. наук. -М. 1973. - 18 с.

60. Ратникова, И.Н. Иммунобиологические показатели при токсокарозе собак и методы его коррекции / И.Н. Ратникова // Автореф. дис. . канд. вет. наук. — Нижний Новгород. 2002. - 20 с.

61. Романенко, Н.А. Санитарная паразитология и перспективы ее развития / Н.А. Романенко, И.К. Падченко // X конференция Украинского общества паразитологов: материалы конференции. Киев. - 1986. - Ч. 2. - С. 166.

62. Санитарно-эпидемиологические требования к качеству почвы. — Сан-ПиН 2.1.7.1287-03.

63. Слепнев, Н.К. К изучению гельминтофауны собак в некоторых зонах Белоруссии / Н.К. Слепнев // Труды Белорусского НИВИ. 1974. - Т. 12. - С. 122125.

64. Степанчук, Н.А. Гельминтозы кошек Волгоградской области, имеющие эпидемиологическое значение / Н.А. Степанчук // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. -М.-2009.- С. 382-385.

65. Терзийски, А. Сравнительные исследования миграции некоторых аска-ридат / А. Терзийски //Изв. Центр, хелминтол. лаб. Бълг. АН. 1972. - 15. — С. 199-207.

66. Усенбаев, А.Е. Эпидемическая ситуация по токсокарозу в г. Тараз (Казахстан) / А.Е. Усенбаев, A.M. Кыздарбеков // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. — М. -2008.-С. 482-484.

67. Чебышев, Н.В. Гельминтозы: органно-системные процессы в их патогенезе и лечении / Н.В. Чебышев, Ю.К. Богоявленский, Е.А. Гришина. М.: Медицина, 1998.-240 с.

68. Шахбиев, Х.Х. Гельминтофауна у плотоядных в Чеченской Республике / Х.Х. Шахбиев // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2008. - С. 519-521.

69. Шемякова, С.А. Эффективность пирадека (суспензии) при нематодозах собак и кошек / С.А. Шемякова, Э.А. Кузнецова, Д.В. Гришин // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции ВИГИС. М. - 2005. - С. 402-403.

70. Шинкаренко А.Н. Гельминтофауна и меры борьбы с основными парази-тозами собак в г. Волгограде / А.Н. Шинкаренко // Автореф. дис. . канд. вет. наук. Иваново. - 1999. — 19 с.

71. ЮО.Юркив, В.А. Микроэкологические и иммунные нарушения при нематодозах в зонах экологической нагрузки / В.А. Юркив, Э.Х. Даугалиева, В.И. Покровский, Р.К. Рамазанов. Уфа: Изд-во Башкирского университета, 1999.-С. 184-187.

72. Abou-Elsha, A.U. Prevalence of some zoonotic parasites in dog Faecal Deposits in Ismailia City / A.U. Abou-Elsha, A.A. Abdel-Hal // Assiut. Vet. Med. J. 1995.- V. 33. № 66, July. - P. 119-126.

73. Aljeboori, T.I. Infections with T. canis baboons. I. Antibody, white-cell and serum-protein responses following infection / T.I. Aljeboori, M.H. Ivey, H. Stout // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1970. - 13. - 2. - P. 249-254.

74. Annen, J.H. Eine einfache methode sur Gewinung von Toxocara canis antigen fur die inderekte immunofluoreszent Technilc / J.H. Annen, J. Eclcert, U. Hess // Acta trop. 1975. - 32. - 1. - S. 37-47.

75. Ares-Mazas, M.E. Epidemiologica de los enteroparasitismos en perros de Ga-licia / M.E. Ares-Mazas, M.C. Sela-Herez, M.S. Arias-Fernandes // Rev. Iber. Parasitol.- 1987.-47 (4).-P. 335-339.

76. Baufine-Dicroeq, H. Diagnostic par la reaction d'immunofluorescence du syndrome de "Larva viscerale migrans" / H. Baufine-Dicroeq, P. Cousineau, B. Beau-vais, M. Lariviere // Bull. Soc. Pathol. Exot. - 1973. - 66. - 6. - P. 746-751.

77. Beaver, P.C. Larva-migrans / P.C. Beaver //Exper. parasitol. 1956. - 5.- 6. -P. 587-621.

78. Beaver, P.C. Chronic eosinophilia due to visceral larva migrans: report of three cases / P.C. Beaver et al. // Pediatrics. 1952. - Vol. 9. - P. 7-19.

79. Cafasso, O.T. Canine enteroparasites in sector of Bahia Blanca, Argentina / O.T. Cafasso, S.H. Garcia, M.I. Prat, B. Santamaria //Parasitologia al Dia. 1996. - V. 20. -№3/4. -P. 144-146.

80. Chancovic, M. Helminthes of dogs, directly endangering, the Health of humans and domestic animals in some regions of Bosnia — Hercegovina / M. Chancovic, B. Tabacobic, S. Esko //Veterinaria. 1986. - 36. - 2. - P. 153-159.

81. Chiejina, S.N. Canine toxocariasis and the associated environmental contamination of urban areas in eastern Nigeria / S.N. Chiejina, Т.О. Elcwe //Vet. Parasitol. -1986. V.22, N1/2. P. 157-161.

82. Clark, J.N. Efficacy of ivermectin and pyrantel pamoate in a chewable formulation against heartworm hookworm and ascarid infection in dogs / J.N. Clark, R.E. Plue, D.H. Wallach, S.L. Longhofer // Am. J. Vet. Res. 1992. - 53. - P. 517-520.

83. Collins, R.F. Specificity and sensitivity of skin test reactions to extracts of Toxocara canis and Ascaris suum. I. Skin tests done on infected guinea pigs / R.F. Collins, M.H. Ivey // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1975 a. - 24, 3. - P. 455-459.

84. Collins, R.F. Specificity and sensitivity of skin test reactions to extracts of T. canis and A. suum. II. Homologous PCA test with sera from infected guinea pigs / R.F. Collins, M.H. Ivey // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1975 b. - 24, 3. - P. 460-464.

85. Coman, S. Aspects of the prevalence and treatment of endoparasitic infections in dogs / S. Coman, V. Doana, A. Milu // Revista Romana de Med. Vet. 2000. - V. 10,-№4.-P. 407-412.

86. Garcia, Conde L. Epidemiological studies on toxocariasis and visceral larva migrans in zone of western Spain / Conde L. Garcia, Muro A. Alvares, F.S. Martin // Annals of Tropical Medicine and Parasitology. 1989. - V. 83. - № 6. - P. 615-620.

87. Cotteleer, C. Helminthes et protozoaires intestinaux parasites du chien en Bel-gique Cas particulier des Eucoccidia / C. Cotteleer, L. Fameree // Schweiz. Arch. Tier-heilk. 1980. - 122. - P. 519-526.

88. Cypess, R.H. Larva-specific antibodies in patients with visceral larva migrans / R.H. Cypess, M.M. Karol, J.L. Zidian, L.T. Glickman // J. Infect. Diseases. 1977. -135, 4.-P. 633-640.

89. Dada, B.J.O. Prevalence of Toxocara spp. in some public grounds and highway areas in Kansas / B.J.O. Dada, W.D. Lindsqust // J. Helmintol. 1979. - 53. - P. 145-146.

90. Diconza, J.J. Toxocara canis: some characteristics of larvae precipitating antibodies in rat serum / J.J. Diconza // Int. J. Parasitol. 1972. - 2, № 4. - P. 471-479.

91. Fernando, S.T. Immunological response of rabbits to Toxocara canis infection / S.T. Fernando //Parasitology. 1968. - 58. - P. 91-103.

92. Folc, E. Prevalence of intestinal helminthoses in dogs and cats / E. Fok, C. Ta-kats, B. Smidova, S. Kecskementhy, M. Karakas // Parasitologia Hungarica. 1988. -V. 21.-P. 53-69.

93. Galvin, T.J. Experimental Toxocara canis infections in chickens and pigeons / T.J. Galvin // J. Parasitol. 50 (1). - 1964. - P. 124-127.

94. Georgieva, D.A. Studies on the parasitic fauna in stray dogs in the Stara Zago-ra region / D.A. Georgieva, A.I. Ivanov, P.N. Prelesov // Bulgarian J. Vet. Med. 1999. -V. 2.-№2/3.-P. 121-124.

95. Gothe, R. Artenspektrum und Difllshanfigkeit von Endoparasiten bei Mutter-hundinnen und ihren Welpen in Suddentschland / R. Gothe, I. Reichler // Tierarzlt. Prax. 1990.- 18.-P. 61-64.

96. Greve, J.H. Prevalence of Intestinal Parasites in Jowa dogs — A comparison between 1965-68 and 1988 / J.H. Greve, S.E. O'Brien // Jowa State Univer. Vet. -1988.-V. 51.-№ l.-P. 24-25.

97. Hoeppli, R. Die durch Ascarislarven bei experimenteller infection im Tierkor-per bewirkten anatomischen Veranderungen / R. Hoeppli // Virchows Arch, pathol. Anat. und Physiol. Bd. 1923. - 244. - S. 159-182.

98. Huismans, H. Uber das solitargranulom bei okularer Toxocara canis infection / H. Huismans // Ophthalmologica (Basel). 1977. - 174, 1. - P. 10-13.

99. Huntley, C.C. Visceral larvae migrans syndrome: clinical, characteristics / C.C. Huntley, H.C. Costas, A. Lyerly // Pediatrics. 1965. - 36 (4). - P. 523-536.

100. Huntley, C.C. Gel diffusion studies with Toxocara and Ascaris extracts / C.C. Huntley, A. Moreland // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1963. - 12. - P. 204-208.

101. Jalayer, T. Pathology, hematology and serology of V.L.M. in rabbits / T. Jalayer//Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 1969.-63, 1. - P. 17-21.

102. Jeslca, E.L. Antigenic analysis of metazoan parasite Toxocara canis / E.L. Jeslca //Amer. J. Trop. Med. Hyg. 1967. - 16 (3). - P. 315-320.

103. Jeska, E.L. Purification and immunochemical analysis of genus specific cuti-cular antigen of T. canis / E.L. Jeska // J. Parasitol. 1969. - 55 (5). - P. 465-471.

104. Jung, R.C. Relationship of clinical features to immunologic reactions of visceral larvae migrans / R.C. Jung, G. Pacheko // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1958. - V. 7. -№ 2. - P. 256.

105. Jungmann, R. Zur parasitaren intestinal fauna bei Hund und Katze wit einem speziellen Beitrag zur Giardia infection / R. Jungmann, T. Hiepe, C. Scheffler // Mh. Vet. Med. - 1986.-41.-P. 309-311.

106. Jurasek, K. Results of the Laboratory Examination of parasitoses in the Animals of Mozambique / K. Jurasek // Folia veter. 1986. - 30, 1. - P. 103-109.

107. Karell, I. Larva migrans lentis /1. Karell, M. Peleska, M. Uhlikova, J. Huber // Ophthalmologica (Basel). 1977.- 171, 1,-P. 14-19.

108. Katic-Radivojevic, S. Fauna crevnih helminata pasa lutalica u baru Jokolnim mestima / S. Katic-Radivojevic, J. Popovic // Veterinarski glasnik. 1992. - Vol. 46. -№ 11-12.-P. 681-685.

109. Lamina, J. Immunodiagnostic durck den Hundespulwurm Toxocara canis (Werner, 1782) hervogerufener larva migrans visceralis infectionen / J. Lamina // Dt. Med. Wschr. 1974. - 99, 20. - P. 1070-1073.

110. Lamina, J. Immunological demonstrations of a visceral larvae migrans infection. Results of animal experiments. The microprecipitation test on the living larvae / /103

111. J. Lamina // Zentbl. Bact. Parasit. Kdl. Abt. J. Orig, 1970. - 215 (3). - P. 386-397.

112. Lapart, W. Serological and hematological investigation in the course of experimental T. canis infections in laboratory mice / W. Lapart, Z. Przyjatkowski // Acad, pol. Sci. Ser. Sci. biol. 1976. - 24, № 5. p. 293-298.

113. Lapier, J. Le syndrome de «Larva migrans visceral». A propos treize observations cher l'adulte / J. Lapier, C. Holler // Presse. med. 1971. - 79, 48. - P. 2163-2166.

114. Le Riche, P.D. Parasites of dogs in Kabul, Afghanistan / P.D. Le Riche et al. // British Veterinary Journal. 1988. - Vol. 144, 4. - P. 370-373.

115. Leitao, J.L. Four parasitic anthropozoonoses affecting dogs in Portugal: leishmaniasis, toxoplasmosis, echinococcosis and toxocariasis / J.L. Leitao, J.A. Cruz Silva // Anais da Escola Superior de Med. Vet. Lisboa, 1970. - V. 12. - P.7-36.

116. Lepogev, O. Helminti digestinog trakta pasa sa podrucia valieva / O. Lepogev, R. Markovic // Veterinarski glasnik. 1983. - Vol. 33. - № 4. p. 291-296.

117. Luty, T. Prevalence of species of Toxocara in dogs, cats and red foxes from the Poznanregion, Poland/T. Luty //J. Helminthol. 2001. - Vol. 75. -№ 2. -P. 153-156.

118. Maqbool, A.S. Prevalence and chemotherapy of toxocariasis in the dog in Fai-salabad (Punjab), Pakistan / A.S. Maqbool, S.H. Raza, C.S. Hayat, M. Shafiq // Vet. ar-hiv. 1998. - V. 68. - № 4. - P. 121-125.

119. Matsumura, K. Evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay for detecting antibodies to Toxocara canis in dogs / K. Matsumura, Endo Ryiyi // Jpn. J. Vet. Sci. 1983. - 45 (5). - P. 683-685.

120. Mendoza, Y.C. Estudio comparativo des las parasitosis entericas en eas dife-rentes razas de perros diagnosticados en el Departamento de Parasitologia / Y.C. Mendoza, E.R. Callejas, A.A. Hernandez, J.L. Lopez // Vet. Мех. 1993. - 24 (4). - P. 335337.

121. Mizgajska, H. Toxocariasis in dogs and contamination of soil with Toxocara spp. eggs in Poznan region / H. Mizgajska, T. Luty // Przeglad Epidemiologiczny. -1998. V. 52. - № 4. - P. 441-446.

122. Nichols, R.L. The etiology of visceral larva migrans: Diagnostic morphology of infective second-stage Toxocara larvae / R.L. Nichols // J. Parasitol. — 1956. — Vol. 42.-P. 349-362.

123. Owergaaw, P. A. Aspects of Toxocara epidemiology: human toxocarosis / P. A. Owergaauw // Crit. Rev. Microbiol. 1997. - Vol. 23. -№ 3. - P. 215-231.

124. Owergaauw, P.A. Aspects of Toxocara epidemiology: toxocarosis in dogs and cats / P. A. Owergaauw // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1998. - Vol. 59. - № 3. - P. 233-251.

125. Prunaux, O. Helmintoses canines a l'ile de la Reunion: bilan des resultats du laboratoire veterinaire departamintal de 1987 a 1990 / O. Prunaux, A. Guignard // Revue Med. Vet. 1991.- 142, 10.-P. 757-760.

126. Rao, S.S. Epizootiological studies toxocarosis in dogs / S.S. Rao, C. Suryana-rayana // Indian Vet. J. 1996. - V. 73. - № 2. - P. 214-216.

127. Ridley, R.K. The efficacy of pyrantel pamoate against ascarids and hook105worms in cats / R.K. Ridley, K.S. Terhune, D.E. Granstrom // Vet. Res. Commun. -1991.-Vol. 15. — № 1.-P. 37-44.

128. Robinson, R.D. A survey of intestinal helminthes of well-cared for dogs in Jamaica, and their potential public health significance / R.D. Robinson, D.L. Thompson, J.F. Lindo // J. Helmintol. - 1989. - 63. - P. 32-38.

129. Rodriguez-Ozorio, M. Parasitismo por helmintos en el perro (canis famillaris) L'Enla provincia de Grenada / M. Rodriguez-Ozorio, M. Jllescas-Gomez et al. // Revis-ta Iberica de parasitologia. 1989. - V. 49, 1. - P. 3-9.

130. Ruitenberg, E.J. The enzyme-linked immunosorbent assay and it's application to parasitic infections / E.J. Ruitenberg, F. van Knappen // J. Infect. Dis. 1977. - 136, suppl. - P. 267-272.

131. Savigny, D.H. In vitro maintenance of T. canis larvae and a simple method for the production of Toxocara ES antigen for use in serodiagnostic test for visceral larvae migrans/D.H. Savigny//J. Parasitol. 1975. - V. 61.- №4. -P. 781-782.

132. Savigny, D.H. Toxocara larva migrans: the use of larvae secretory antigens in hemagglutination and soluble antigen fluorescent antibody tests / D.H. Savigny, I.R. Ti-zard // Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 1977. - V. 71. - № 6. - P. 501-507.

133. Schantz, P.M. Toxocara larva migrans now / P.M. Schantz // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1989. -№ 4. - P. 21-34.

134. Schawalder, P. Klinich diagnostich Asperte des Parasitenbefales bein Hund / P. Schawalder // Schweiz. Arch. Tierheilk. - 1976. - 118. - P. 249-255.

135. Sharma, P. Broad-spectrum anthelminthics against intestinal helminthiases / P. Sharma // Trop. Gastroenterol. 1983. - Vol. 4. - № 3. - P. 137-154.

136. Shastri, U. V. Occurrence of parasitic infections in dogs in and around Parbha-ni City / U.V. Shastri // Indian J. of Animal Health. 1991. - June. - P. 1-5.

137. Smith, H.V. A paper radioimmunosorbent test (PRIST) for the detection of larva-specific antibodies to Toxocara canis in human sera / H.V. Smith, R. Quinn, R.G. Bruce, R.W.A. Girdwood // J. of Immunological Methods. 1980. - 37. - P. 47-55.

138. Stefancikova, A. Status and prognosis of the incidence of helminthic zoonoses in Slovakia / A. Stefancikova, P. Dubinsky // Helminthologia. 1995. - V. 32. - № 4. -P. 247-250.

139. Stevenson, P. Toxocara infection in pigs. The use of indirect fluorescent antibody tests and in vitro larval precipitate test detecting specific antibodies / P. Stevenson,

140. D.E. Jacobs // J. Helminth. 1974. - 51, № 2. - P. 149-154.

141. Stroczynska-Sikorska, M. Toxocariasis / M. Stroczynska-Sikorska, T. Klapec,

142. E. Galinska // Medycyna Ogalna. 1997. - V. 32. - № 1. - P. 74-79.

143. Surgan, M.H. A survey of canine toxocariasis and toxocaral soil contamination in Essex County, New Jersey / M.H. Surgan, K.B. Colgan, S.I. Kennett, J.V. Paff-mann // Amer. J. of Public Health. 1980. - V. 70.-№ 11.-P. 1207-1208.

144. Taric, I. An improved hemagglutination technique for detecting antibody against Toxocara canis /1. Taric, T.I. Aljeboori, M.N. Ivey // Am. J. Trop. Med. Hyg. -1970.- 13, 2.-P. 244-248.

145. Todorov, P. On the diagnosis of larva migrans visceralis (Toxocariasis) / P. Todorov, D.P. Stoyanov // Trudy Nauchno-Issled. Inst. Epidem. Microbiolog. 1966. -11.-P. 205-210.

146. Uhlikova, M. The ocular form of larval toxocariasis in the Czech Republic / M. Uhlikova, J. Hubner, M. Leissova // Cesk. Slov. Ophthalmol. 2002. - Vol. 58. - № 2.-P. 75-83.

147. Umar, A. Efficacy of levamisole, mebendazole and pyrantel pamoate against natural infection of Toxocara canis in dogs / A. Umar, M.S. Rabbani, M.A. Mian, K. Saeed//Pakistan Vet. J. 1986. -№ 6. - P. 127-128.

148. Umedu, N. Study of intestinal helmints of dogs in Calabara, Nigeria / N. Umedu, A. Hogan // Archivo veterinario italiano. 1989. - V. 40. — P. 2.

149. Vadav, A.K. Helminths of Public Significance in domestic animals of Megha-lava / A.K. Vadav, V. Tandon // Indian J. of Animal Health. 1989. - December. - P. 169-172.

150. Valladares, B. Estadio epidemiologico del parasitism intestinal del Pervo (canis familiaris), eu La Isla Tenerife / B. Valladares, H. Gigon, R. Lopez-Roman // Rev. Iber. Parasitol. 1985. - 40 (1). - P. 41-48.

151. Vanparijs, O. Helminthes and protozoan parasites in dogs and cats in Belgium / O. Vanparijs, L. Hermans // Vet. Parasitol. 1991. - Vol. 38. - № 1. - P. 67-73.

152. Viens, P. A modified immunofluorescent antibody technique for the serodiag-nosis of Human Toxocaral larva-migrans / P. Viens, H. Strykowski, B. Richards, S. So-ney //Canadian J. Publ. Meth. 1975. - 66, № 3. - P. 237-240.

153. Visco, R.J. Effect of Age and Sex on the Prevalence of Intestinal Parasitism in Dogs / R.J. Visco, P.M. Corwin, L.A. Selby // JAVMA. 1977. - V. 170. - № 8, April 15.-P. 835-837.

154. Wilder, H.C. Nematode endophthalmitis / H.C. Wilder // Trans. Am. Acad. Ophthalmol. Otolaryngol. 1950. - Vol. 55. - P. 99-109.

155. Wiserman, R.A. Toxocariasis in Britain revealed by skin sensitivity tests / R.A. Wiserman, A.W. Woodruff// Brit. Med. J. 1968. -№ 1. - P. 677-678.

156. Woodruff, A.W. Toxocariasis as public health problem / A.W. Woodruff // Environmental Health. 1976. - № 84. - P. 29-31.

157. Zyngier, F.R. Ascariasis and Toxocariasis / F.R. Zyngier // Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo. - 1976. -№ 4. - P. 251-257.

Информация о работе

Солопов, Павел Аркадьевич
кандидата ветеринарных наук
Рязань, 2009
ВАК 03.00.19

Диссертация

Иммуноферментный метод диагностики токсокароза собак, сероэпизоотологический мониторинг и терапия - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы