Фармакотоксикологические свойства синтетического феромона 9-ОДК, ее композиции и их применение в животноводстве

Белов, Андрей Евгеньевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Фармакотоксикологические свойства синтетического феромона 9-ОДК, ее композиции и их применение в животноводстве
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармакотоксикологические свойства синтетического феромона 9-ОДК, ее композиции и их применение в животноводстве"

На правах рукописи 0050488Ю

БЕЛОВ АНДРЕЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ

ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СИНТЕТИЧЕСКОГО ФЕРОМОНА 9-ОДК, ЕЕ КОМПОЗИЦИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ

06.02.03 — ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

2 ЯНВ ¿013

Казань 2013

005048810

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

Исмагилова Асия Фахретдиновиа

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор, зав.

лабораторией иммунологии Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности Хисматуллина Наиля Анваровна

доктор ветеринарных наук, профессор, зав. кафедрой зоогигиены Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана Софронов Владимир Георгиевич

доктор биологических наук, заведующая отделом животноводства ГНУ «Татарский научно-исследовательский институт агрономии и почвоведения РАСХН» Ежкова Асия Мазетдиновна

Ведущее учреждение: ФГБОУ ВПО «Чувашская государственная

сельскохозяйственная академия».

Защита состоится «_»_2013 года в 10.00 часов на

заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, г.Казань, Научный Городок - 2, ФГБУ «ФЦГРБ-ВНИВИ»),

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦГРБ-ВНИВИ» (г.Казань).

Автореферат разослан « »__2012 г. и размещен на

официальном сайте ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» \vww-vnivi.ru и на официальном сайте ВАК РФ www.vak2.ed.gov.ru.

Ученый секретарь диссертационного совета

Ст^Ьтпда1-^ Степанов В.И.

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние годы наблюдается рост числа заболеваний, в патогенезе которых ведущую роль играет нарушение иммунного статуса организма. Несмотря на интенсивное развитие иммунофармакологии, определение иммунотропной активности у многих лекарственных веществ и химических соединений, выбор иммуномодулирующих средств остается весьма ограниченным.

Развитию иммунных дефицитов у животных способствует множество факторов, тесно взаимосвязанных друг с другом, ведущее значение среди которых приобрели гериатрические заболевания, атипичные формы патологии желудочно-кишечного тракта и дыхательной системы, заболевания органов воспроизводства, а также различные факторы окружающей среды, условий кормления и содержания животных. Большинство подобных заболеваний связано с накоплением в организме животных продуктов недоокисленного обмена веществ как результат нарушения функционирования отдельных органов и систем; остатков пестицидов как результат загрязнения внешней среды отходами промышленных производств, а также накоплением в растениях различных ядохимикатов при неправильных агрохимических мероприятиях и несоблюдении сроков регламентации использования естественных и искусственных сенокосов. Накопление токсинов в организме животных также может быть связано с паразитарными и инфекционными агентами, выделяющими в процессе своей жизнедеятельности метаболиты, вредные для организма-хозяина. В свою очередь органная кумуляция токсических веществ приводит к повышенной восприимчивости животных к заболеваниям другой этиологии с отягощающими последствиями, которые зачастую невозможно устранить без предварительного выведения ядовитых веществ. С другой стороны, процесс выведения токсинов из организма животных, особенно солей тяжелых металлов и некоторых других^ проблематичен в связи с их высокой миграционной активностью в органах и тканях, ä также кумуляцией в так называемых органах-«мишенях» (Антипов В.А., 2002; Дорожкин В.И., 2003, Шабунин C.B. с соавт., 2006; Слободяник В.И., 2007; Иванов A.B., 2009; Папуниди К.Х., 2012; Смирнов A.M., 2012).

В связи с изложенным большую актуальность в современной ветеринарии и животноводстве принимают аспекты создания новых лекарственных средств, улучшающих течение перекисного окисления липидов, защищающих органные системы животных от воздействия токсинов эндо- и экзогенного характера, а также участвующих в их выведении из организма животных

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изыскание новых лекарственных средств, обладающих низкой токсичностью, противовоспалительным, антимикробным, иммуностимулирующим свойствами.

В соответствии с поставленными целями решались следующие задачи:

1. Изучить токсико-фармакологические свойства 9-ОДК: острую и хроническую токсичность для белых крыс; эмбриотоксические и тератогенные свойства; противовоспалительную активность; местно-раздражающие, аллергирующие и антибактериальные свойства; влияние на минеральный состав и органический матрикс костной ткани при остеоиндукции;

2. Изучить влияние 9-ОДК на феномены клеточного и гуморального иммуногенеза при инфекционной иммуносупрессии;

3. Изучить иммуномодулирующую активность и лечебные свойства 9-ОДК при заболеваниях телят и поросят (диспепсия и бронхопневмония);

4. Изучить влияние 9-ОДК на иммунный статус, репродуктивную функцию хряков-производителей и свиноматок;

5. Изучить влияние 9-ОДК на состояние обмена веществ, иммунного статуса, продуктивность цыплят и кур, а также" на химический состав и пищевую ценность получаемой от них продукции;

6. Изучить влияние нового производного пиримидина на гематологические, биохимические показатели и иммунную систему кур;

7. Обосновать лечебно-профилактические свойства 9-ОДК и новой композиции ДППОМУ+А+9-ОДК при остром гнойно-катаральном эндометрите у коров;

8. Оценить эффективность применения 9-ОДК в форме 0,3%-ной мази при лечении мастита у коров для получения молока высокого санитарного качества.

Научная новизна работы. Проведен сравнительный анализ влияния синтетически полученного многофункционального феромона матки медоносной пчейы (9-оксо-2-Е-деценовая кислота) на иммунный статус и состояние обмена веществ у продуктивных животных.

Впервые изучены токсико-фармакологические свойства 9-ОДК, влияние его на феномены клеточного и гуморального иммуногенеза при инфекционной иммуносупрессии, индуцированной 81.1урЫтигшт, иммуномодулирующая активность и лечебные свойства 9-ОДК при диспепсии,, бронхопневмонии телят и поросят; маститах у коров; на иммунный статус и репродуктивную функцию хряков-производителей и свиноматок; на состояние обмена веществ; иммунный статус, ............4

продуктивность цыплят-бройлеров и кур, а также на химический состав и пищевую ценность получаемой от них продукции.

Впервые установлена высокая эффективность применения 9-ОДК в составе новой композиции при лечении гнойно-катарального эндометрита у коров, а также для повышения иммунного статуса сельскохозяйственных животных и птиц. Определены дозы и схемы их применения для повышения продуктивного здоровья животных и птиц.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. Результаты проведенных исследований позволили предложить иммуномодулятор 9-ОДК для повышения общей резистентности организма животных и птиц; композицию ДППОМУ+А+9-ОДК для лечения катарально-гнойных эндометритов у коров; 0,3%-ную мазь 9-ОДК для лечения маститов у коров. Результаты производственных опытов внедрены на Федеральном уровне:

1. Методические рекомендации производству «Применение полного синтетического аналога компонентов маточного вещества и маточного молочка - 9-ОДК в ветеринарной медицине» (утверждены ученым советом ВНИНВСГЭ и секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология отделения ветеринарной медицины «Россельхозакадемии» (протокол №3/2 от 05.06.2010);

2. Методические рекомендации «Применение полного синтетического аналога компонентов «маточного вещества» и «маточного молочка» -9-ОДК для повышения резистентности поросят и репродуктивных качеств свиней» (утверждены Первым заместителем генерального директора РУП «Научно-производственный центр национальной Академии наук Беларуси по животноводству» 11 июня 2012 года).

3. Методические рекомендации производству «Применение 9-ОДК в животноводстве» (утверждены НТС МСХ Российской Федерации (протокол заседания секции ветеринарии НТС Минсельхоза от 8.11.2012 РФ №39);

4. Методические рекомендации производству «Применение 9-ОДК при выращивании цыплят и ее влияние на питательность и санитарные качества мяса кур» (протокол заседания секции ветеринарии НТС Минсельхоза от 8.11.2012 РФ № 39).

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе факультетов ветеринарной медицины ВУЗов Министерства сельского хозяйства РФ по фармакологии, токсикологии, ветеринарно-санитарной экспертизе, акушерству, гинекологии и биотехнике размножения, внутренним незаразным болезням, дисциплинам специализации «Ветеринарная фармация», что подтверждается департаментом научно-

технологической политики и образования Министерства сельского хозяйства РФ (Справка № 13-03-3/1502 от 03.10.2012 г).

По материалам исследований изданы две монографии. Автор награжден серебряной медалью и дипломом XI Российской агропромышленный выставки «Золотая осень - 2009» за инновационную разработку высокоэффективного лекарственного препарата «Дипиперидин» для птицеводства, а так же бронзовой медалью и дипломом XIV Российской агропромышленный выставки «Золотая осень - 2012» за инновационную разработку высокоэффективного лекарственного препарата «Апимаг» марки «Апимил» на основе синтетического аналога феромона пчел — 9-ОДК.

Апробация работы. Основные материалы, изложенные в диссертационной работе, доложены, обсуждены и одобрены на: Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000); Региональной научно-производственной конференции, посвященной 70-летию Башкирского ГАУ (Уфа, 2000); международных и всероссийских научных конференциях (Санкт-Петербург, 2005, 2006, 2011; Ижевск, 2007; Уфа, 2007, 2008; 2010, 2011; Троицк, 2010; Казань, 2009; Краснодар, 2011; Москва, 2011; на II и III съездах ветеринарных фармакологов и токсикологов Российской Федерации (Казань, 2009; Санкт-Петербург, 2011),

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 38 научных работ, в том числе 14 статей в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, 2 монографии, 4 методических рекомендаций.

Основные положения, выноснмые на защиту:

- Фармакологический спектр действия 9-ОДК;

- Механизм иммуномодулирующего действия 9-ОДК;

- Влияние 9-ОДК на резистентность организма к возбудителям экспериментальной инфекции;

- Возможность применения 9-ОДК для лечения заболеваний молодняка;

- Возможность применения 9-ОДК в составе новой композиции для лечения акушерско-гинеколошческой патологии у продуктивных коров;

- Возможность применения 9-ОДК для улучшения здоровья и продуктивности животных и птиц.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 246 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка

литературы включающего 301 источник, в том числе 92 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 45 таблицами, 32 рисунками.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследования

Работа выполнена на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» в 2000-2012 гг. в соответствии с планом научно-исследовательских работ университета (№№ государственной регистрации 01200950324 и 01201058603). Научно-производственные опыты проводили в условиях птицефабрики и в сельскохозяйственных предприятиях Республики Башкортостан.

В экспериментах использовали животных: 150 мышей линии СВА и C57BI, 444 беспородных белых мышей и 334 белые крысы, 104 головы крупного рогатого скота черно-пестрой породы, 68 голов свиней крупной белой породы различного возраста и пола, 116 голов цыплят и кур-бройлеров кросса «Родонит». Особенности отдельных методик изложены в соответствующих разделах диссертации.

Лабораторные животные содержались в виварии в пластмассовых клетках по 10 особей при температуре 17-20°С на стандартном пищевом рационе со свободным доступом к воде.

В качестве объекта для патологоморфологического изучения служили внутренние органы поросят и кур, из которых готовили гистологические срезы по схеме Г.А.Меркулова (1969), окраску проводили гематоксилином Майера и эозином.

Определение количества форменных элементов крови (эритроциты и лейкоциты) осуществляли с помощью счетчика форменных элементов крови PS-5. Биохимические показатели крови (гемоглобин, билирубин, глюкозу, общий белок, неорганический фосфор, общий кальций, общие липиды, АлАТ, АсАТ, альдолазу, пировиноградную кислоту, щелочную и кислую фосфатазу, холестерин общий) определяли с помощью полуавтоматического биохимического анализатора Stat Fax 1904 Plus и наборов реактивов VITAL DIAGNOSTICS SPB. Определение уровня белковых фракций крови (альбуминов, a-, ß- и у-глобулинов) осуществляли нефелометрическим методом с использованием фотоколориметра спектрометрического ПЭ-5300В. Содержание гормонов (кортизол, тестостерон, прогестерон, эстрадиол, трийодтиронин, тироксин) в сыворотке крови определяли иммуноферментным (ИФА) методом (Кондрахин И.П., Архипов A.B., Левченко В.И., 2004).

Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли методом, основанном на свойстве сыворотки крови оказывать бактериостатическое действие на микроорганизмы. В качестве тест-микробов использовали суточную культуру Staphylococcus aureus, штамм № 209 (Емельяненко П.А.,1987).

Оценку фагоцитарной активности проводили по методу Клечикова Л.З. (1967).

Аминокислотный состав мяса тушек птицы определяли по методике тонкослойной жидкостной хроматографии согласно ГОСТу 13496.22-90 2.5.43, а содержание калия и натрия на пламенном фотометре PFC-4, определение содержания кальция в мышечной ткани проводилось по методике И.Ю.Вичева и Каракашева; магния - по цветной реакции с титановым желтым по Кункелю,, Пирсону, Швейгкру в модификации И.В. Петрухина; железа - путем исследования золы, полученной при озолении мяса, по Сенделу в модификации С.Г. Кузнева; фосфора — согласно ГОСТ 9794-74 (Кондрахин И.П. с соавт., 1985).

Количество антителообразующих клеток определяли с помощью метода локального гемолиза в жидкой фазе, предложенного Jerne и Nordin (1963), в модификации Conningham (1965).

Индукцию реакции ПЧЗТ осуществляли по методу Р.Н. Lagrange et al. (1974). Активность макрофагов оценивали по способности к фагоцитозу микросфер латекса по методу И.С Фрейдлина и соавт. (1976,1977) в модификации Л.Я Эберта и соавт. (1983). Латекс-индуцированную шоминолзависимаую хемшпоминесценцию воспроизводили для оценки; функционального состояния перитонеальных макрофагов (Зурочка А.В. и соавт., 1989).

С целью анализа влияния изучаемых веществ на антибактериальную резистентность использована в опытах на мышах экспериментальная инфекция, воспроизведенная с помощью штамма S.typhimurium №82, полученного из государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л.А. Тарасевича.

Статистическую обработку цифровых данных проводили с использованием стандартного пакета статистической обработки данных . прикладной программы MS Excel®, включающую подсчет средних величин (М), средней ошибки (т), среднеквадратических отклонений выборки (5), степень достоверности по Стьюденту (Стрелков Р.Б., 1996).

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Синтез новых производных пиримидина и определение их острой токсичности

С::нтез трех новых производных пиримидинов проведен в институте органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук д.х.н. ¡Кривоноговым В.п] под руководством академика РАН Толстикова Г.А. _Таблица 1 - Острая токсичность новых производных пиримидина_

Лабораторный шифр Химическая формула Название соединения ьо50, г/кг

55-98 он ^^ 1,3 -бис(2' -гидрокси-3' -шшеридинопропил)-метилурацил 4,8±0,2

22-97 0 \г ОН II /Л/уч 11 Ме 11 1 ^Ме ОН 1,3-бис(2-гидрокси-3-диметиламинопропил)-6-метилурацил 1,05±0,2

23-97 ФС: он 1,3 -бис(3 -диэтиламино-2-гидроксипропил)-6-метилурацил 0,84±0,09

Острая токсичность новых производных пиримидина определена на 90 белых беспородных мышах обоего пола массой 18-20 граммов при однократном введении в желудок.

Острая токсичность изучаемых соединений колебалась от 0,84 г/кг до 4,8 г/кг (Таблица 1).

При изучении острой токсичности новых производных пиримидина выявлено, что ЛД50 1,3-бис-(2'-гидрокси-3'-пиперидинопропил)-метилурацил (ДППОМУ) составила 4,8^0,2 г/кг. При сравнительном изучении токсичности трех производных пиримидина (ДППОМУ, 1,3-бис(2-гидрокси-3-диметиламинопропил)-6-метилурацил и 1,3-бис(3-диэтиламино-2-гидроксипропил)-б-метилурацил) показано, что наибольшей токсичностью

обладает 1,3-бис(3-диэтиламино-2-гидроксигфопил)-6-метилурацил - 0,84 г/кг, а минимальной - ДППОМУ (4,8±0,2 г/кг).

Таким образом, показано, что ДППОМУ наименее токсичен среди всех изученных производных пиримидина и по уровню токсичности относится к IV классу опасности (ГОСТ 12.1.00-7-76).

3.2 Синтез и острая токсичность 9-гидрокси-2Е-деценовой кислоты

В составе «царственного вещества» медоносной пчелы (Apis mellifera L.) идентифицирована 9-оксо-2Е-деценовая кислота (1), которая регулирует жизнедеятельность и поведение пчелиной семьи (Лебедева В.А. с соавт., 1984). Известен целый ряд синтезов этого соединения (Пятнова Ю.Б. с соавт., 1969, Одиноков В.Н. с соавт., 2001), причем большинство из них трудоемко и требует дорогих исходных материалов.

Синтез 9-ОДК проведен под руководством доктора химических наук, профессора института органической химии Уфимского научного центра РАН Ишмуратова Г.Ю. Практически синтез данного соединения осуществлен, исходя' из доступной олеиновой кислоты. Метод основан на селективно протекающих превращениях метилового эфира 9,9-диметоксинонановой кислоты — продукта озонолиза-восстановления кислоты 2 с последующим кислым метанолизом.

Окислением последней реагентом Джонса получен целевой продукт с общим выходом 16% в расчете на исходное соединение.

ИК-спектры записывали на приборе UR — 20 в тонком слое. Спектры ЯМР получали на спектрометре «BRUKER AM - 300» CDCI3. За внутренний стандарт принято значение сигналов хлороформа. Хроматографический анализ проводили на приборе «Chrom - 5», газ-носитель - гелий. Производительность озонатора - 33 ммоля ОЗ/ч. Данные анализа всех соединений отвечали вычисленным.

Для получения 9-ОДК к реагенту Джонса, полученному из 2,9 г (26,9 ммоля) Сг03> 2,3 мл H2S04 и 14 мл Н20, при перемешивании добавляли 2,45 г (13,2 ммоля) оксикислоты 8. Реакционную массу перемешивали 1 час при 50°, охлаждали и экстрагировали Et20(4x50 мл), затем промывали насыщенным раствором NaCl, сушили MgS04 и упаривали. Получили 2,06 г (85%) оксокислоты 2, t. пл. 54-55°С (рис. 1). Параметры ИК- и ПМР -спектров практически идентичны описанным ранее Захаркиным Л.И. и соавт. (1981) и Пятновым Ю.Б. с соавт. (1979).

он

0^(СН2);С02Н Л (СН2)7СОгН —

ОД, ОАс Вг

л (Сн2)7согн (CH2)e лсогн -ьи

он о

—- X (сн2)3 А' со2н -UAvw^

Рис. 1 - Схема синтеза 9-ОДК (Реагенты: а. ОЗ /СН2С12 - МеОН; b. Me2S; с.

MeOH/TsOH; d. KOH/EtOH; е. HCl; f. MeMgl; g. Ac20/Py; h. SOCl2; i. Br2; j.

МеОН; k. CaCo; 1. KOH/MeOH-HzO; m. Н2СЮ4 )

Определение острой токсичности 9-ОДК проводили на 72 белых беспородных мышах обоего пола с живой массой 18-20 г, разделенных на 6 групп, по 12 голов в каждой. Препарат вводили внутрижелудочно в виде водной суспензии в дозах: 1-й группе 0,9 г/кг; 2-й - 12,0 г/кг; 3-й - 14,0 г/кг, 4-й - 16,0 г/кг; 5-й - 19,0 г/кг; 6-й - 20,0 г/кг. Определение острой токсичности для крыс проведено на 42 белых беспородных животных обоего пола с живой массой 180-200 г, разделенных на 6 опытных групп и одну контрольную, по 6 голов в каждой. Препарат вводили внутрижелудочно В виде водной суспензии в дозах: 1-й группе - 12,0 г/кг; 2-й - 14,0 г/кг; 3-й -16,0 г/кг; 4-й - 18,0 г/кг; 5-й - 20,0 г/кг; 6-й - 22,0 г/кг. Крысам контрольной группы внутрижелудочно вводили равный объем воды, использованной для приготовления суспензии. При определении параметров острой токсичности также проведены исследования на 36 цыплятах кросса «Родонит» 10-и дневного возраста. Цыплят распределили на 5 опытных групп и одну контрольную, по 6 голов в каждой. Испытуемые дозы 9-ОДК при введении цыплятам составили: 1-й группе - 10,0 г/кг; 2-й - 12,0 г/кг; 3-й - 15,0 г/кг; 4-й - 18,0 г/кг; 5-й - 21,0 г/кг. Цыплятам контрольной группы вводили равный объем воды, использованной для приготовления суспензии.

. При определении параметров острой токсичности нами было установлено, что 9-ОДК при назначении внутрь, согласно ГОСТ 12.1.00-7-76, относится к 4 классу опасности (малотоксичные вещества) (табл. 2).

Таблица 2 - Параметры острой токсичности 9-оксо-2Е-деценовой кислоты

Вид животного Доза 9-оксо2Е-деценовой кислоты, г/кг

LDo LD16 LD30 LD84 LD]oo

Белые мыши 9,00 11,30 13,0±0,92 16,20 20,00

Белые крысы 12,00 14,58 16,5±0,88 19,68 22,00

Цыплята 10,00 12,20 15,2±0,51 17,40 21,00

Данные проведенных исследований свидетельствуют о незначительной токсичности для лабораторных животных и цыплят. Так, среднесмертельная доза при введении внутрь по методу Кербера составила: для мышей — 13,0±0,92 г/кг;для крыс- 16,5±0,88 г/кг; для цыплят - 15,2±0,51 г/кг.

Клиника острого отравления при введении внутрь мышам, крысам и цыплятам была сходной и проявлялась уменьшением подвижности, возбуждением дыхания, боковым положением, угнетением рефлексов. Подопытные животные погибали при явлениях асфиксии в течение первых трех суток с момента затравки.

Опыты по изучению хронической токсичности проводили на 100 белых беспородных крысах, разделенных на две группы (опытную и контрольную). Животные содержались раздельно. Подопытные животные получали внутрь 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг в течение 4 месяцев. Контрольные животные получали дистиллированную воду.

До начала исследований, а также на 30, 60, 90 и 120 сут исследований у животных контрольной и опытной групп фиксировали изменения живой массы тела, проводили исследование периферической крови (эритроциты, гемоглобин, лейкоциты, лейкоцитарная формула, тромбоциты, время свертывания крови). В конце опыта животных убивали декапитацией, извлекали и взвешивали внутренние органы.

При длительном, назначении (в течение 4-х месяцев) 9-ОДК крысам в дозе 0,3 мг/кг внутрь их поведение не отличалось от поведения крыс контрольной группы и соответствовало данному виду животных. Животные : опытной группы при этом быстрее прибавляла массу тела.

У крыс, получавших внутрь 9-ОДК, количество эритроцитов в крови существенно не изменилось, и имеющиеся колебания были недостоверными. Однако у контрольных животных на 30 и 90 сут наблюдалось уменьшение количества эршроцитов (Р<0,05). Уровень гемоглобина у животных, получавших 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг, снижался как в опытной, так и контрольной группе, но в контрольной группе это снижение было более отчетливым (в опыте на 21,4% в контр на 18,1%). Количество лейкоцитов у животных в опытной и контрольной группах увеличивалось на -28% к 30-ым сут исследований. В опытной группе крыс, получавших 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг за период наблюдения, уменьшалось относительное количество палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов, а также отмечено небольшое увеличение лимфоцитов. Подобные изменения обнаружены и в контрольной группе. Отмеченные колебания в морфологическом составе крови крыс опытной и контрольной групп нами связываются с возрастными изменениями.

Количество тромбоцитов в опытной группе не изменялось, а в контрольной группе на 30-й день наблюдалось увеличение количества тромбоцитов (Р<0,05).

Все вновь внедряемые в медицину и ветеринарию соединения подлежат оценке с позиции возможного раздражающего или повреждающего действия на кожу и развитие контактного неаллергического дерматита.

Нашими исследованиями установлено, что однократная аппликация 0,3%-ной мази 9-ОДК на кожу мышей и крыс не вызвала гиперемию.

После инсталляции 0,3%-ного раствора 9-ОДК на конъюнктиву глаза нами было отмечено непродолжительное беспокойство животных, незначительное слезотечение в течение 1-2 ч, слабая степень гиперемии конъюнктивы.

Через 1-2 ч отмеченная гиперемия век и признаки раздражения слизистой оболочки постепенно исчезали.

3.3 Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия 9-ОДК

Известно, что лекарственные вещества могут оказывать влияние на плод тремя путями: действуя на организм матери, плаценту и непосредственно на плод.

У крыс, получавших 9-оксо-2Е-деценовую кислоту в трех дозах: 0,3 мг/кг, 0,5 мг/кг и 0,7 мг/кг, показатель гибели эмбрионов в период, предшествующий имплантации оплодотворенной яйцеклетки, был равен таковому у контрольных самок (опыт: б,54±1,9; б,27±1,4; 6,22±2,1; контроль -б,53±2,2). Показатель постимплантационной гибели соответственно равен в опыте: 7,2±1,8; 7,4±2,3; 7,14±2,4 и контроле - 7,3±1,9.

Как у подопытных, так и контрольных животных гибель наступала после имплантации (в матке были обнаружены плаценты). Средняя масса плаценты в опытных и контрольных группах была одинаковой (опыт -600,0±0,5 мг, контроль - 600,0±0,5 мг).

Плоды крыс получавших изучаемый препарат, не отличались от контрольных по массе и кранио - каудальному размеру.

При изучении состояния костной системы, измеряли участки окостенения. Трубчатые кости измеряли по продольной оси, лопатку - медио - латерально вдоль лопаточного гребня, центры окостенения костей таза - по цефало-каудальной оси, нижнюю челюсть от переднего резца до суставного отростка, теменную кость - по медио - латеральной оси. При осмотре плодов аномалий внутренних органов, дефектов развития скелета, не обнаружено.

Таким образом, проведенными исследованиями установлено, что 9-ОДК в максимальной дозе в течение всей беременности не обладала эмбриотоксическим и тератогенным действием.

О постнатальном развитии потомства судили по массе, показателям физического развития и по поведенческим реакциям. Крысят взвешивали один раз в неделю до двухмесячного возраста.

Нами установлено, что угнетение и снижение двигательной активности у крысят при применении 9-ОДК не возникает. На течение й продолжительность беременности препарат также не оказывал влияния. У опытных самок беременность продолжалась 22,0+0,4, а контрольных - 23 сут Не было отмечено разницы в численности помета крыс, получавших 9-оксо-2Е-деценовую кислоту. У крысят опытных и контрольных групп не наблюдалось различий по показателям общего развития, у тех и у других животных уши открывались на 3 сут жизни, а с 8 сут крысята начинали обрастать шерстью, между 17-18 сут у них открывались глаза. Масса крысят, матери которых получали изучаемое соединение, не отличалась от массы контрольных животных.

Таким образом, 9-оксо-2Е-деценовая кислота, при введении крысам в течение всей беременности не оказывала влияния на постнатальное развитие потомства. Физическое развитие подопытных крысят не отличалось от развития контрольных животных.

3.4 Влияние 9-ОДК на формирование инфекционной иммуносупрессии

При оценке действия на иммунитет биологических активных соединений в эксперименте возникает вопрос о влиянии их на синтез антител, являющихся одним из основных форм иммунологического реагирования на антигенное воздействие (Р.В.Петров, 1982; Б.С Утешев, 1984).

Результаты опытов представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Влияние 9-ОДК на антителообразование у белых мышей, зараженных Б. 1урЫтигшт

Группы животных Доза, мг/кг ЯСК, *10 кариоцитов АОК, "10 спленоцитов %к контролю Количество АОК на селезёнку

Контрольные мыши - 105,9 ±9,6 381,3 ±14,9* 100 4830,00-±3510,0

Инфицированные - 111,0 ±8,3 105,28 ±8,39** 27,61 11601,0 ±94,00*

Инфициро-ванные+9-ОДК 0,3 109,0 ±9,8 226,19 ±9,11* 59,32 23969,3 ±1120,0*

Инфициро-ванные+9-ОДК 0,4 109,1 ±9,9 226,49 ±10,1* 52,40 23839,38 ±1080,0*

Инфицированные +ДППОМУ 50 - 207,73 ±8,14* 54,48 19195,6 ±994,0*

Примечание: *Р < 0,05 при п=6; ** - обратные значения титров антител.

Из данных таблицы 3 видно, что применение 9-ОДК в дозе 0,3мг/кг сопровождалось значительной стимуляцией гуморального иммунного ответа, что проявлялось приростом антителообразующих клеток, рассчитанных на один м.чллион спленоцитов, в среднем в 2,15 раза по сравнению с группой белых мышей, инфицированных в. 1урЫтипит, но не получавших 9-ОДК.

При исследовании влияния 9-ОДК на гуморальный иммунный ответ у мышей, зараженных сальмонеллезной инфекцией, получены данные, свидетельствующие о положительном влиянии 9-ОДК на биосинтез антител. Среднее число АОК в селезенке мышей увеличилось на 110%. Результаты проведенных опытов подтверждают обоснованность иммуннотропного действия 9-ОДК, который преимущественно влияет на клеточные иммунные феномены.

При определении уровня антител-гемагглютининов в сыворотке крови нами 'получены данные, свидетельствующие о высоком стимулирующем действии 9-ОДК по сравнению с пиримидином ДППОМУ. Так титры антител-гемагглютининов в сыворотке крови инфицированных белых мышей составили 2,4±0,14; при введении 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг - 1о§2 4,0±0,21; при введении 9-ОДК в дозе 0,4 мг/кг - 1о§2 4,0±0,22; при введении ДППОМУ в дозе 50 мг/кг - 1о§2 3,0±0,16; у контрольных животных - 7,1±0,11.

Установлено, что инфекционный процесс уменьшает процент активно фагоцитирующих клеток и снижает захватывающую способность перитонеальных макрофагов. Например, отмечается уменьшение активности и интенсивности фагоцитоза в среднем на 45% и 37% соответственно по сравнению с контролем. Однако в группе мышей, зараженных 8. ТурЫтипит и получавших 9-ОДК, отмечены существенные изменения в способности к поглощению латексных частиц КПЭ.

При применении 9-ОДК в двух различных дозах показано, что активность фагоцитоза увеличилось в среднем в 1,61 раза, а фагоцитарные число в 2 раза по сравнению с группой инфицированных мышей.

Число НСТ-положительных клеток при введении 9-ОДК достоверно повышается по отношению к числу активно фагоцитирующих клеток в группе зараженных мышей в среднем в 1,61 раза. В этой же серии опытов также изменялось значение индивидуальной хемилюминесценции макрофагов частицами латекса диаметром 1,7 мм.

Нами установлено достоверное увеличение количества импульсов в минуту, что для животных, получавших 9-ОДК составило 541,0±29,0 по сравнению с группой инфицированных мышей 381,0±24,0.

Таким образом, анализируя данные проведенных опытов, можно отметить активирующее влияние 9-ОДК, проявляющееся выраженной стимуляцией биосинтиза антител, активацией функционального состояния перитонеальных макрофагов и повышением реакции повышенной

чувствительности замедленного типа. Иммуномодулирующий эффект 9-ОДК проявляется при нарушении иммунобиологического статуса организма при сальмонеллезной инфекции.

3.5 Антимикробная активность 9-ОДК при экспериментальной инфекции

При проведении исследований нами было установлено, что при стафилококковой инфекции на третьи сутки после заражения в группе животных, получавших 9-ОДК в дозе 0,3-0,4 мг/кг, выживаемость составила 90% (Р<0,05). При применении мастааэрозоля выживаемость составила 65%. На 10-й день после заражения в группе, получавшей исследуемое соединение, выживаемость сохранилась на уровне 90%, а в группе, получавшей мастааэрозоль, — составила 35%. Средняя продолжительность жизни при применении исследуемого соединения составила 18,2±0,2 суток (Рис. 2).

В контрольной группе на 3-й сутки выжило только 2 мыши, а на 10 сут погибли все животные.

В следующей серии экспериментов проведено сравнение эффективности изучаемого соединения для лечения экспериментальной инфекции, вызываемой синегнойной палочкой. На 10-й сут после заражения в группе животных, получавших 9-ОДК, выживаемость составила 75%, средняя продолжительность жизни - 15,1±0,6 суток. В группе животных, получавшей мастааэрозоль, средняя продолжительность жизни составила 3,0±0,2 суток.

В третьей серии опытов на 10-й день после заражения протеем в группе животных, получавшей 9-ОДК, выживаемость составила 65%, а в группе животных леченных мастааэрозолем выжило — 15%. Средняя продолжительность жизни составила 2,5±0,5 сут (Р<0,05).

В четвертой серии опытов при экспериментальном заражении возбудителями кишечной палочки в группе животных, получавших 9-ОДК, на третий день после заражения выжило 75-80% животных (в зависимости от применяемой дозы), средняя продолжительность жизни составила 16,8±0,4 сут В контрольной группе на 10-е сут погибли все животные.

Э 9-ОДК (ОД мг/кг) ЕЗ 9-0 ДК (03 мг/кг) И 9-ОДК (0,4 мг/кг) В Мастааэрозоль Ш Контроль

Рис. 2 - Влияние 9-ОДК и мастааэрозоля на среднюю продолжительность жизни белых мышей при экспериментальной инфекции

3.6 Изучение противовоспалительной активности 9-ОДК

В современной ветеринарной практике широко используется обширный спектр противовоспалительных средств, в основном представленный стероидами. Однако эти препараты имеют непродолжительный эффект, и вскоре наступает резистентность к этим средствам, что требует изыскания новых высокоэффективных лекарственных средств, обладающих противовоспалительной активностью и пролонгированным действием.

В связи с этим нами были проведены исследования, направленные на изучение противовоспалительных свойств 9-ОДК, ортофена, ДППОМУ в различных дозах. Для решения поставленной задачи нами было сформировано, по принципу аналогов, 25 групп белых мышей по 7 животных в каждой (по принципу аналогов).

Подопытные мыши каждой из сформированных групп получали испытуемые вещества в пределах изучаемых доз и подвергались 1 индуцированию воспалительного отека лапок одним из флагогенов (каррагенин, формалин, нитрат серебра, яичный белок и дрожжи).

Наибольшей противовоспалительной активностью из всех исследуемых соединений обладает 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг. Так, угнетение воспалительного отека при применении 9-ОДК в указанной дозе достоверно | выше (Р<0,05) по сравнению с ортофеном в рекомендуемой дозе 8мг/кг; при каррагениновом воспалении в 3,34 раза (процент угнетения воспаления

Контроль О Ортофен ЧО 1 О Б 1 О Наименование препарата

1 о со Р р Доза, мг/кг

66,53 ±0,29 49,21 ±0,18* 55,53 ±0,34 ££ чо V) * 39,69 ±0,17* %увеличения воспалительного отека Дрожжевое воспаление

■ 1. 26,00 ±0,11 16,54 ±0,11 38,00 ±0,2 40,4 ±0,17 %уменыпения воспалительного отека по сравнению с контролем

56,54 ±0,48 32,3 ±0,15* 40,43 ±0,35* 18,00 1 ±0,15* %увеличения воспалительного отека СП 1 О О я

1 42,91 ±0,20 28,51 ±0,25 Я §5 к %уменыпения воспалительного отека по сравнению с контролем о а е п о 1 и о

52,60 ±0,19 36,51 ±0,18* 46,31 ±0,33* 33,93 ±0,20* 31,61 ±0,05* % увеличения воспалительного отека № и о >3 И 1 в а в о 0 1 в

1 31,23 ±0,16 11,97 ±0,09 35,6 ±0,19 40,0 ±0,05 %уменыпения воспалительного отека по сравнению с контролем ГО В § о го и о о I 1

н- « О '-л Ъо 21,40 ±0,15* н- о ы "н- Р4 "(О * 20,36 ±0,17 18,60 ±0,15* % увеличения воспалительного отека © а о о та е к а 2 Р> 5 9

1 н- £ о © к> ">— -О 00. Я У г;® 43,13 ±0,33 и- о ОО и) 1— 1Л %уменынения воспалительного отека по сравнению с контролем Й И § § О

43,06 ±0,33 34,2 ±0,06* 36,21 ±0,39* 34,16 ±0,12 31,7 ±0,09* % увеличения воспалительного отека £ 03 Я о ш 8 3 ё й

1 20,62 ±0,04 15,96 ±0,19 20,8 ±0,06 26,46 ±0,08 %уменыпения воспалительного отека по сравнению с контролем £5 3 »в Я в - й о а>

8. оч

и К В (а

£ О

а о а

о §

п> !э и1 И

ё Е

а И

ЧО 1

40,0±0,05 и 11,97±0,09 соответственно); при формалиновом воспалении в 1,78 раза (процент угнетения воспаления 48,15±0,03 и 27,0±0,16 соответственно); при аргентонитратном воспалении в 1,66 раза (процент угнетения 26,46±0,08 и 15,96±0,19 соответственно); при дрожжевом воспалении в 2,44 раза (процент угнетения 40,4±0,17 и 16,54±0,11 соответственно); при белковом в 2,37 раза (процент угнетения 66,7±0,87 и 28,51±0,25 соответственно) - таблицы 4.

Следует отметить, что при увеличении дозы 9-ОДК до 0,5мг/кг увеличение противовоспалительной активности нами не отмечено. 9-ОДК как антифлогстик отличается от других противовоспалительных средств. В механизме его противовоспалительного действия значительно выражена стимуляция коры надпочечника, усиление процессов репаративной регенерации и иммунитета. Одновременно ослабляя экссудацию, 9-ОДК значительно подавляет альтернативно-некротические изменения в тканях.

3.7 Влияние 9-ОДК на состав костной ткани

Влияние 9-ОДК на остеоиндуктивную активность костной ткани изучали путем введения подопытным животным в различных дозах и последующего извлечения и исследования состава костной ткани.

В начале опыта процент содержания фосфора, кальция и других показателей во всех группах был одинаков. Через 7 дней у животных второй группы костная ткань отличается по составу от костной ткани контрольных, а также опытных групп. Применение вольтарена вызывает деминерализацию костной ткани (табл. 5).

Таблица 5 - Влияние 9-ОДК на состав костной ткани

Группы животных Доза, мг\кг Р, % Са, % Са+Р, % 1 Са+Р, % от интактной Са/Р Органический магрикс,% МК/ОМ

Вольтарен 8 10,6 ±0,4* 22,1 ±0,6* 32,7 ±0,6 89,84 ±2,81 2,08 ±0,01 25,0 ±1,61* 1,31 ±0,01*

9-ОДК 0,2 11,9 ±0,2 24,5 ±0,3 36,4 ±0,4 100,0 ±1,18 2,06 ±0,01 20,9 ±0,20 1,74 ±0,09

9-ОДК 0,3 11,9 ±0,2 24,3 ±0,4 36,2 ±0,6 99,45 ±1,2 2,04 ±0,01 20,8 ±Г,30 1,74 ±0,09

Контроль 12,0 1 ±0,1 24,4 ±0,4 36,4 ±0,5 - - 21,0 ±1,30 . 1,73 ±0,09

Примечание: * - Р < 0,05

На втором этапе изучена остеоиндуктивная активность костной ткани животных, получавших противовоспалительные препараты. Результаты опьгга представлены в таблице 6.

Нами установлено, что костная ткань животных, получавших вольтарен в дозе 8 мг/кг, обладает низкой остеоиндуктивной активностью.

Таблица 6 - Влияние 9-ОДК на остеоиндуктивную активность костной ткани

Группы ясивотны X Доза, мг/кг Масса трансплантанта, % Р,°/о Са,% Са+Р, %от интакгной Органиче ский матрице,% СаФ МК/ОМ

Вольтаре н 8 27,8 ±2,31* 2,6 ±0,42* 3,92 ±0,61* 19,94 ±0,61* 40,1 ±1,52* 1,51 ±0,04* 0,16 ±0,01*

9-ОДК 0,2 45,6 ±1,80 6,41 ±0,31 12,0 ±0,30 50,58 ±1,20 36,6 ±1,11 1,87 ±0,02 0,50 ±0,02

9-ОДК 0,3 45,4 ±1,90 6,42 ±0,29 12,1 ±0,29 51,16 ±1,21 36,6 ±1,10 1,88 ±0,01 0,51 ±0,02

Контроль - 45,5 ±1,80 6,4 ±0,30 12,1 ±0,30 50,82 ±1,21 6,5 ±1,10 1,89 ±0,02 0,51 ±0,02

Примечание: МК/МО - отношение массы минерального компонента к массе органического компонента; * - Р < 0,05

По всем изучаемым нами показателям новообразованная кость животных, получавших вольтарен, достоверно отличается от показателя контрольных, а также опытных групп, получавших 9-ОДК в различных дозах. Кость имеет вдвое меньшую массу, является менее зрелой (содержит мало минеральных компонентов, большое количество органического матрикса, имеет низкий Са/Р-коэффициент). Полученные результаты свидетельствуют, что действие вольтарена и 9-ОДК на состав и остеоиндуктивную активность костной ткани имеет существенные различия. Вольтарен широко применяется в ветеринарии и медицине для лечения воспалительных заболеваний опорно-двигательной системы, действие его обусловлено ингибированием циклооксигеназы. Благодаря этому вольтарен препятствует образованию простагландинов.

В последние годы широко обсуждаются такие уникальные свойства простагландинов, как участие их в большом перечне физиологических реакций организма на изменение условий внешней среды и внутреннего гомеостаза. В частности они ответственны за появление отеков и болей в месте воспаления. 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг опосредованно через выработку лейкотриенов увеличивает синтез остеоиндуктивных белков в костной ткани.

3.8 Эффективность лечения 9-ОДК телят и поросят, больных острой формой бронхопневмонии

Эффективность применения 9-ОДК при лечении острой бронхопневмонии изучена на 12 телятах черно-пестрой породы, распределенных в 2 группы (опытная и контрольная) по 6 голов в каждой, и на 12 поросятах крупной белой породы, также распределенных на 2 группы (опытная и контрольная) по 6 голов в каждой.

При клиническом осмотре телят и поросят отмечали повышение температуры тела до 41°С, угнетение, отказ от корма, учащенное дыхание с сухим кашлем, гиперемию слизистой носовой полости и конъюнктивит. У некоторых животных на 4-5 день болезни появились гнойные истечения из носа.

В схему лечения бронхопневмонии у телят и поросят входило внутримышечное инъецирование макролида тилозин в рекомендуемой дозе 0,5 мл/10 кг живой массы два раза в день с интервалом 12 часов. Заместительную витаминотерапию осуществляли внутримышечным введением масляного раствора тетравита. Поросятам и телятам опытных групп помимо стандартного лечения внутрь с кормом назначали 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг один раз в день до полного выздоровления.

Таблица 7 - Влияние 9-ОДК на показатели перекисного окисления липидов и витаминов больных телят (п=12)_

Срок исследования после введения 9-ОДК, сут Опыт Контроль

Малоновый диальдегид, нм/мл

Исходные данные 3,57±0,32 3,66±0Д7

Через 10 2,96±0,16 3,60±0,19

Через 20 2,62±0,18 3,60±0,17

Активность глутатионредуктазы (ГР). мкМ/л. мин

Исходные данные 130,0±11,2 119,8±7,00

Через 10 141,1±11,7 120,0±6,80

Через 20 145,1±11,8 119,0±б,32

Активность глутатионпероксидазы (ГП), мкМ/л, мин

Исходные данные 9,41±0,7б 9,2б±0,4б

Через 10 9,62±0,75 9,21±0,49

Через 20 9,бб±0,81 9,22±0,61

Активность каталазы, мМ/л, мин

Исходные данные 29,7±0,67 30,9±0,6

Через 10- 31,0±0,46 30,1±0,8

Через 20 33,1±0,91* 30,2±0,8

Каротин, мг%

Исходные данные 681,0±57,9 700,0±39,8

Через 10 721,0±55,1 721,0±39,9

Через 20 751,0±55,2* 730,0±41,1

Витамин А, мкг%

Исходные данные 72,5±3,91 66,6±4,9

Через 10 75,2±3,61 68,3±5,4

Через 20 87,1±3,21* 70,0±5,4

Витамин Е, мкг%

Исходные данные 2,11±0,06 1,61±0,13

Через 10 2,82±0,05* 1,б5±0,15

Через 20 3,22±0,06* 1,б7±0,14

Примечание: * Р < 0,05

В результате проведенных исследований установлено, что в динамике воздействия 9-ОДК у телят, больных острой формой бронхопневмонии, через 10 сут с начала опыта количество малонового диальдегида в крови уменьшилось на 17,8%, а через 20 сут на 26,61% (табл. 7). Так, у телят в опытной группе выздоровление наступало на 8-9 сут, в то время как у контрольных - на 12-13 сутки.

По-видимому, применение 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг тормозит процессы разрушения биомембран и функциональную активность белков-ферментов. Поэтому функционирующие в организме животных механизмы антиоксидантной защиты играют исключительно важную роль в поддержании гомеостаза.

Регуляция переокисления липидов осуществляется каталазой, пероксидазой, глутатионпероксидазой и глутатионтрансферазой. Центральное место в неферментативном звене антиоксидантной системы организма занимают токоферолы, значительно меньше каротин и витамин А.

Повышение уровня витаминов Е, А, каротина, глутатионпероксидазы, каталазы после применения 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг свидетельствует - о благоприятном действии изучаемого соединения на обменные процессы.

При проведении исследований нами было установлено, что у телят, больных бронхопневмонией, нарушается ферментативно-обменный процесс в лейкоцитах периферической крови с одновременным понижением лизоцимной активности (в контрольной группе 7,46±0,32мкг/мл; в опытной группе до лечения 1,64±0,06мкг/мл; через 7 сут после лечения 18,71±0,76мкг/мл), а также бактерицидной активности (в контрольной группе до лечения 48,10±1,98%; через 7 сут после лечения равен 71,3±2,98%). Произошедшие изменения, по-видимому, являются важным звеном в патогенезе бронхопневмонии.

Следует отметить, что применение 9-ОДК оказало положительное влияние на клеточные и гуморальные показатели неспецифической резистентности у больных бронхопневмонией телят, что способствовало сокращению сроков лечения.

Установлено, что у контрольных телят в крови содержалось 4,27±0,35 мкг/мл гистамина, а у телят опытной группы средняя концентрация в крови в 4 раза превышала показатели контрольных и составляла 14,0±1,02 мкг/мл.

Высокое содержание гистамина регистрировали во время осложнений и приступов болезни. После лечения через 5 сут в крови телят концентрация гистамина достигала 7,02±0,81 мкг/мл. Вероятно, гистамин в крови увеличивается за счет его выброса тучными клетками. Через 7 сут после лечения содержание серотонина в крови подопытных телят колебалось от 4,33±0,29 мкг/мл. Отношение гистамина и серотонина составило 0,52.

Анализом результатов ежедневного взвешивания выявлено положительное влияние 9-ОДК, включенного в состав фармакотерапии бронхопневмонии, на прирост живой массы у телят. Так, в опытной группе сшшение прироста живой массы наблюдалось только на протяжении с первого по 4 сут исследований с последующим увеличением интенсивности прироста в сравнении со здоровыми телятами. Тогда как в контрольной группе отмечалась более выраженная потеря живой массы тела в первые 4 сут лечения и более затяжное восстановление интенсивности роста вплоть до 8-9 суг исследований. . . .

Фактический прирост живой , массы в опытной группе за время исследований составил 4,68±0,12 кг, что в ~3 раза больше в сравнении с первой опытной. группой, фактический прирост живой массы в которой составил лишь 1,56±0,05 кг.

В начале опыта (до лечения) содержание общего белка в сыворотке крови поросят находилось на уровне 7,1±0,бб г%, альбуминов - 29,7±2,32%, а-глобулинов - 22,8±1,2%, (3-глобулинов - 22,5±1,31%, у- глобулинов -25,0±1,29, билирубина - 5,31±0,32%, щелочного резерва - 36,5±3,00 об % С02. Скорость оседания эритроцитов составляла 13,0±1,21 мм/час.

На 5-ый день опыта в крови поросят количество общего белка повысилось до 7,82г %, альбуминов до 39,6±3,26%, резервная щелочность до 48,7±1,26 об % СОг, а процент глобулинов снизился: а-глобулипы до 20,3±1,50%, р-глобулины до 19,1±1,66%, у-глобулины до 21,0±1,29%, снизилась СОЭ до 9,21±0,70 мм/час.

На 7-ой день опыта количество общего белка повысилось до 8,11±0,73 г%, альбуминов до 46,6±3,23%, резервная щелочность до 50,0±3,00 % об С02, а количество глобулинов снизилось: а-глобулины до 16,65±1,51%, Р-глобулины до 18,19=1,23%, у-глобулины до 18,5б±1,22%, СОЭ до б,23±0,60 мм/час.

Таким образом, применение 9-ОДК оказало положительное влияние на клеточные и гуморальные показатели неспецифической резистентности у больных бронхопневмонией животных. Установленные изменения содержания серотонина и гистамина свидетельствуют о том, что организм отвечает совокупностью приспособительных реакций. Можно с уверенностью утверждать, что применение 9-ОДК активизирует биохимические реакции, направленные на координацию использования энергетических ресурсов, являясь предвестником благоприятного исхода болезни за счет активизации обмена веществ.

Общее положительное влияние 9-ОДК при лечении бронхопневмонии также способствует значительному сохранению продуктивности животных.

3.9 Влияние 9-ОДК на показатели крови поросят, больных диспепсией

Производственные опыты по изучению влияния 9-ОДК на показатели 1фови при диспепсии поросят проводились в условиях ГУСП совхоза «Шемяк» Уфимского района Республики Башкортостан. После индивидуального взвешивания было сформировано 2 группы поросят крупной белой породы в возрасте 10 сут (опытная и контрольная). Причиной возникновения диспепсии в большинстве случаев служили кормление маточного поголовья и молодняка недоброкачественными кормами и низкий иммунный статус новорожденного молодняка.

Поросятам' опытной группы вводили препарат 9-ОДК в дозе 0,3мг/кг. В течение 30 сут за животными обеих групп вели клинические наблюдения в течение (1°, пульс, частота сердечных сокращений), а также учитывали сохранность, прирост живой массы. В начале опыта, на 10-е, 30-е сут после введения препарата проводили исследование проб крови. В крови определяли количество лейкоцитов, эритроцитов, уровень гемоглобина, содержание глюкозы, активность гликопротеазы (ГП), а в сыворотке крови — содержание общего белка мочевины, билирубиноаспартат- и аланинаминотрансфераз (АсАТ и АлАТ). Прирост живой массы тела определяли путем индивидуального взвешивания в начале, середине - 10-е сут, и конце опыта -.на 30-е сутки.

Клинические признаки диспепсии у поросят, отобранных для проведения опытов," характеризовались угнетением общего состояния, залеживанием, учащением частоты акта дефекации. Каловые массы разжиженные, светло-желтого цвета. Общая температура тела не выходила за пределы физиологической нормы и составляла 39,1±0,2 °С. Частота пульса и дыхания составляли 100±5 ударов в минуту и 40±2 в минуту соответственно.

При проведении лечебных мероприятий поросятам всех групп внутрь назначали терраветин в дозе 50 мг/кг два раза в день с водой. Внутримышечно в области средней трети шеи, один раз в три дня вводили масляный раствор тетравита в дозе 1 мл/гол. Поросятам опытной группы помимо указанного внутрь, один раз в день назначали 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг с водой.

Полное выздоровление поросят в опытной, группе происходило на 3-4 дни лечения, тогда как в контрольной группе средняя продолжительность заболевания составила 7-10 дней и у двух поросят простая диспепсия перешла в токсическую форму.

В результате исследований, нами установлено, что 9-ОДК оказывает положительное влияние на показатели крови у поросят опытной группы при лечении диспепсии. На 10-е сут лечения гематологические и биохимические показатели крови восстанавливались до физиологически допустимых

пределов. Так, количество белка увеличилось на 46,6% по сравнению с исходными данными; содержание гликопротеидов увеличилось на 44% по сравнению с исходными данными. Увеличилось содержание сахара на 111%; содержание общих липидов на 172,5%; содержание холестерина на 47%; а содержание билирубина снизилось на 77,6% по сравнению с исходными показателями (табл. 8).

Таблица 8 - Биохимические показатели сыворотки крови у больных диспепсией поросят до и после применения 9 - ОДК _

Показатель В начале опыта На 10 день опыта На 30 день опыта

контрольная опытная контрольная опытная контрольная опытная

Общий белок, г/л 55,9±4,32 55,89±4,33 60,6±5,02 81,95±6,00* 61,9±6,00 82,1±5,99

Гяикопротеиды, мг% 375,6±19,1 375,8±20,0 389,0±33,0 541,30±30,0* 401,0±32,1 545,4±5,00*

Глюкоза, ммоль /л . 2,02±0,16 2,00±0,18 2,75±0,3 4,22±0,33* 2,81 ±0,33 4,23±0,35*

Пировиноград-ная кислота, мкмоль/л 50,7±4,99 51,0±5,00 99,0±12,00 139,0±10,9* 99,8±12,1 139,1±11,0*

Общие липиды, г/л 2,11±0,12 2,10±0,30 2,90±0,05 3,88±0,36* 2,93±0,0б Ч,01±0,11*

Холестерин, ммоль/л 1,62±0,07 1,бЗ±0,08 1,68±0,19 2,40±0,23* 1,69±0,22 2;45±0,22*

Билирубин, мкмоль/л 13,7±1,02 13,8±1,03 5,01±0,51 3,09±0,21* 5,2±0,61 2,75±0Д2*

АЛТ, Мкмояь/л/мин 1,25±0,12 1,2б±0,13 0,68±0,04' 0,50±0,40* 0,70±0,02 0,42±0,21*

АСТ, Мкмолъ/л/мин 1,40±0,08 1,40±0,09 1,10±0,08 0,64±0,04* 1,12±0,07 0,50±0,03*

АДГ, ед.акт 849,0±4 3,4 850,0±43,5 691,0±30,0 349,5±2 9,9* 592,0±32,1 322±8,00*

Альдолаза, ед. 21,05±3,59 21,06±3,60 16,01 ±0,99 6,00±0,56* 16,0±0,98 5,33±0,11*

ИФ, мг% 18,45±0,60 18,51±0,66 12,0±1,22 8,03±0,04* 11,9±1,23 8,00±0,05*

Примечание: * - Р < 0,05

В результате исследований, нами установлено, что 9-ОДК оказывает положительное влияние на показатели крови у поросят опытной группы при лечении диспепсии. На 10-е сут лечения гематологические и биохимические показатели крови' восстанавливались до физиологически допустимых пределов. Так, количество белка увеличилось на 46,6% по сравнению с

исходными данными; содержание гликопротеидов увеличилось на 44% по сравнению с исходными данными. Увеличилось содержание сахара на 111%; содержание общих липидов на 172,5%; содержание холестерина на 47%; а содержание билирубина снизилось на 77,6% "по сравнению с исходными показателями (табл. 8).

У животных контрольной группы нормализация биохимических показателей происходила менее интенсивно по сравнению с опытной группой, что и указывает на более медленное восстановление функции печени, метаболизма углеводов, липидов и протеинов.

С целью изучения влияния 9-ОДК на органы желудочно-кишечного тракта поросят нами были сформированы 2 группы животных по 10 - в каждой. Животные опытной группы получали с кормом 9-ОДК в дозе 0,3мг/кг, контрольную группу животных лечили общепринятым методом, который применяется в хозяйстве.

При гистологических исследованиях нами установлено, что эпителиальный слой слизистой желудка у опытных животных, получавших 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг, образован однослойным призматическим эпителием. На поверхности слизистой имеются призматические клетки эпителия, ядра в которых расположены в основании, цитоплазма богата слизистыми включениями. Собственный слой слизистой оболочки представлен рыхлой соединительной тканью с примесью ретикулярной. В различных отделах желудка различаются три вида желудочных желез: собственные железы желудка, пилорические и кардинальные. Многочисленные железы расположены в области тела и дна желудка. По строению они представляют собой простые неразветвленные или слабо разветвленные трубчатые структуры. Вокруг желез имеются нежные переплетения волокон, содержащие гладкие мышечные клетки, которые инфильтрированы лейкоцитами. Пилорические железы, зоны перехода желудка в двенадцатиперстную кишку отличаются от собственных желез более редким расположением, более выраженным разветвлением и более широким просветом.

Слизистая оболочка больных животных покрыта тягучей, стекловидной слизью, в которой присутствуют мутноватые хлопья, состоящие из эпителиальных клеток и лейкоцитов. Слизистая оболочка разрыхленная, набухшая и гиперемирована, имеются участки кровоизлияния и эрозии.

При осмотре желудка контрольных (больных животных) отмечалась ярко выраженная дистрофия эпителия с гиперсекрецией слизи, которая прилегала к серозно-клеточному экссудату, покрывая измененную, тусклую и отечную поверхность слизистой оболочки в виде сероватых наложений.

Таким образом, в результате проведенных опытов установлено, что выраженных патоморфологических изменений в желудке у свиней опытной

группы не обнаружено, кроме отдельных лимфоцитарных скоплений в слизистой оболочке дна желудка. Такие же узелки обнаружены в шшорической части желудка, что является результатом иммунологической реакции.

3.10 Влияние 9-ОДЕ на иммунный статус и продуктивность свиноматок

Опыт по изучению эффективности 9-ОДК и его влияния на морфологические и иммунологические параметры крови проводили в совхозе «Шемяк» Уфимского района на свиноматках крупной белой породы. - Нами было сформировано три группы животных по 4 головы в каждой. Свиноматки I опытной группы за 50 сут до опороса с кормом получали 9-ОДК из расчета 0,3 мг/кг. Животные II опытной группы за 50 сут до опороса получали с кормом 9-ОДК из расчета 0,2 мг/кг. Свиноматки контрольной группы оставались интакгными. Кровь для исследования брали за 30 и 50 сут до опороса, а затем - после опороса на 7 и 21 сутки.

В начале опыта изученные показатели у свиноматок опытных и контрольной групп имели небольшие отклонения. Установлены достоверное увеличение количества эритроцитов у животных первой опытной группы за 30 суток до опороса (6,41±0,31 против 6,67±0,32), а так же на 7 сут после опороса (6,41±0,31 против 6,80±0,19). Увеличение компонентов эритроцитов в крови животных второй опытной группы отметилось на 7 сут после опороса (6,37±0,32 против 7,20±0,21). Количество гемоглобина у свиноматок первой опытной группы за 50 сут до опороса составило 106,0±1,40 г/л, а через 7 сут после опороса 120,0±1,91 г/л, что указывает на положительное влияние изучаемого препарата.

Применение супоросным свиноматкам 9-ОДК активизировало фагоцитарную активность нешрофилов крови. Установлено, что у свиноматок первой опытной группы за 30 сут до опороса фагоцитарная активность была выше на 13,39%. На 7 сут после опороса фагоцитарная активность составила 47,51±2,15%, а в начале опыта 40,33±1,93%. Фагоцитарный индекс нейтрофилов у животных первой и второй группы значительно превышал контрольные значения.

Увеличение активности внутриклеточных ферментов обуславливает повышение проницаемости мембран. При лизисе эритроцитов происходит повышение уровня ферментов. В обмене аминокислот участвуют ферменты аланинаминотранфераза и аспартатаминотрансфераза.

При изучении ферментов переаминирования активность АСТ и АЛТ находились в пределах физиологической нормы. Щелочная фосфатаза участвует в реакциях обмена ионов фосфорной кислоты и общего кальция. У животных, которые получали 9-ОДК (I и II опытной группы), отмечено достоверное снижение количества общих липидов крови. Через 30 сут после

опороса у свиней первой опытной группы наблюдалось снижение количества общего кальция на 2,42% и на 1,41% количества неорганического фосфора.

Применение 9-ОДК оказало стимулирующее влияние на рост и развитие поросят. Живая масса поросят при отъеме в 60 суток была выше на 12,90%. Сохранность поросят в опытных группах была выше и составляла в I опытной группе 96,5% , во П опытной группе - 96,6%, в контрольной группе -88,1%.

3.11 Влияние 9-ОДК на качество спермы хряков

Для изучения влияния 9-ОДК на воспроизводительную функцию хряков нами были сформированы 4 группы животных по 4 головы в каждой. Животные первой, второй и третьей групп с кормом получали 9-ОДК из расчета 0,1; 0,2; 0,3 мг/кг соответственно в течение 7 сут, а животные четвертой группы служили контролем. Все хряки опытных и контрольной групп были подобраны по принципу аналогов (с одинаковой кровностью, живой массой тела, половой нагрузкой и содержащихся на одинаковых рационах кормления).

Исследование спермы проводили макро- и микроскопически, а также с использованием общепринятых биохимических и биологических методов.

При исследовании спермы животных опытных и контрольной групп как в начале опыта, так и в конце не отмечалось каких-либо патологий. Так, сперма животных при макроскопическом исследовании имела молочно-белый с сероватым оттенком цвет со специфическим запахом и водянистую консистенцию, напоминающую молоко. Наличие загрязненности, хлопьев, патологического окрашивания и посторонних запахов спермы нами не установлено. Дальнейшие исследования продолжали определением объема эякулята.

На основании проведенных исследований нами установлено, что средний объем эякулята, полученного за одно семяизвержение, в начале опыта во всех группах был примерно одинаков и составил 240,0±10,1 — 242,0±17,0 мл.

В конце опыта (через 7 сут) нами было установлено увеличение объема эякулята в опытных группах. Наибольшее увеличение было зарегистрировано в третьей опытной группе, животные которой получали 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг. Так, объем эякулята в этой группе составил 274,9±6,00 (Р<0,05), что больше по сравнению с контролем на 32,80 мл (13,5%) и больше по сравнению с тем же показателем, полученным в этой группе до назначения 9-ОДК.

До применения 9-ОДК концентрация сперматозоидов в сперме хряков всех опытных групп была примерно одинаковой и составляла в 1 мл 0,2580,275 млрд., что соответствует средней густоте. После применении 9-ОДК во всех опытных группах отмечалось недостоверное увеличение концентрации

сперматозоидов в 1 мл (Р>0,05). Однако, учитывая прямую зависимость между объемом эякулята и концентрацией в нем сперматозоидов, отмечены существенные изменения. Так, с учетом объема эякулята, получаемого от хряков в начале исследований, весь эякулят содержал 62,37-66,55 млрд. сперматозоидов, а через 7 сут после применения 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг (III группа) - 74,22 млрд.

Достоверное увеличение общего количества сперматозоидов во всем объеме эякулята было установлено в 1 и 2 опытных группах (Р<0,05), однако эти показатели были несколько ниже, чем в третьей опытной группе. Следует отметить, что увеличение дозы 9-ОДК (0,4 мг/кг и 0,5 мг/кг) не привело к достоверному увеличению общего количества сперматозоидов по сравнению с дозой 9-ОДК на уровне 0,3 мг/кг.

Среди сперматозоидов в эякуляте всех видов животных всегда имеется более или менее значительное количество патологических форм, от наличия которых может существенно измениться их оплодотворяющая способность.

Для определения процента подобных форм сперматозоидов мы производили их подсчет в мазках, окрашенных азур-эозином.

При подсчете патологических и незрелых форм сперматозоидов нами было установлено, что во всех группах в начале опыта, а также в контрольной группе по окончании опьгта в эякуляте хряков-производителей присутствовали сперматозоиды с закрученными хвостиками, что указывало на недостаток электролитов в жидкой среде эякулята. Нами также отмечалось наличие сперматозоидов с утолщенной соединительной частью, что указывало на нарушение спермиогенеза. Содержание патологических форм сперматозоидов находилось в пределах 11,92±0,12-14,10±0,11%, а количество незрелых форм не превышало 8,59±0,33%. Таким образом, общая активность спермотазоидов хряков контрольной и всех опытных групп колебалась в пределах от 7,85±0,03 до 8,97±0,06 баллов.

При исследовании мазков спермы хряков опытных групп после 7-суточного применения 9-ОДК в трех дозах нами было установлено достоверное уменьшение процента как патологических, так и незрелых форм сперматозоидов.

Так, в первой опытной группе количество патологических форм сперматозоидов снизилось по сравнению с началом опыта на 4,11%, а количество незрелых форм сперматозоидов на 1, 45%. Во второй и третьей опытных группах те же показатели снизились соответственно на 4,75% и 5,27%, тогда как в контроле эти показатели остались практически на неизменном уровне (Р<0,05). Кроме того, учитывая понижение количества патологических и незрелых форм сперматозоидов в опытных группах, значительно повысилась их активность с наибольшим значением 8,97±0,06

баллов (Р<0,05) в третьей группе, животные которой получали в течение 7 сут 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг.

Необходимо отметить тот факт, что в опытных группах, где применялась 9-ОДК в различных дозах, патологические формы сперматозоидов в основном были представлены гигантскими и карликовыми формами, а содержание клеток плоского, переходного эпителия семенных канальцев, форменных элементов крови и гиалиновых включений во всех случаях было единичным и незначительным. Однако в сперме контрольной группы патологические формы сперматозоидов, как и в начале опыта, были представлены сперматозоидами с утолщенной соединительной частью и с закрученными хвостиками.

В опытных группах, где животным задавалась 9-ОДК в различных дозах, заметно изменился электролитный состав эякулята. На фоне повышения рН увеличилось содержание калия и хлорида натрия, основных элементов, необходимых для поддержания нормального осмотического давления и обеспечения двигательной активности сперматозоидов. Наиболее качественные изменения электролитного состава спермы отмечены в третьей труппе, где рН стала более щелочной на 0,10 Н*, а содержание калия и ЫаС1 увеличилось на 15,11 мг% (6,34%) и 3,9 мг% (0,82%) соответственно по сравнению со значениями, полученными в начале опыта. Для более полной характеристики качества спермы нами был определен абсолютный показатель выживаемости сперматозоидов (продолжительность их жизни) в неразбавленном виде.

В начале опыта показатели активности сперматозоидов находились на уровне 7,85±0,03 - 7,89±0,16 баллов, а выживаемость сперматозоидов до уровня, при котором возможно использование спермы до оплодотворения (минимум 7 баллов), составляло 36 часов с момента окончания эякуляции. Однако по истечении 7 суток, в течение которых хряки опытных групп получали 9-ОДК, срок выживаемости сперматозоидов значительно увеличился.

Так, в первой опытной группе сперма сохраняла активность на уровне 7 баллов до 60 часов, во второй и третьих группах - до 72 часов, тогда как в контрольной группе активность сперматозоидов к 48 часам после эякуляции составляла всего 5,44±0,57 баллов.+

Для оценки влияния 9-ОДК на воспроизводительные свойства хряков была поставлена биологическая проба, направленная на определение оплодотворяющей способности сперматозоидов. С этой целью хряков опытных и контрольной групп по истечении 7 сут случали со здоровыми ремонтными свиноматками с последующей регистрацией наступления их супоросности.

Оплодотворяющая способность сперматозоидов в начале опыта находилась на уровне 64,3±2,2 - 66,8±1,9%. В опытных группах, после 7-дневного применения 9-ОДК в дозах 0,1; 0,2; 0,3 мг/кг, оплодотворяющая способность сперматозоидов значительно выросла. Так, в первой опытной группе оплодотворяемость составила 71,12±2,4%, во второй 74,33±0,85%, а в третьей - 7б,85±1,7%.

Применение 9-ОДК оказывает стимулирующее влияние на рост и развитие поросят. Живая масса поросят при отъеме в 60 суток была выше на 12,90%, а масса гнезда на 32,1%. Сохранность поросят в опытных группах была выше и составляла в I опытной группе 96,5% , во П опытной группе 96,6%, в контрольной группе 88,1 %.

9-ОДК, задаваемый хрякам в дозах 0,1; 0,2; 0,3 мг/кг в составе стандартного рациона в течение 7 сут, повышает количественные и качественные показатели спермопродукции, позволяя получить доброкачественную, свободную от посторонних примесей сперму, содержащую достаточное количество живых, устойчивых во внешней среде • сперматозоидов, способных принять активное участие в оплодотворении. 3.12 Коррекция иммунитета птиц с применением 9-ОДК Исследования проведены на 30-ти суточных цыплятах, которым в рацион вводили 9-ОДК в разных дозах (0,2 и 0,3 мг/кг). Гематологические исследования проводились с использованием автоматического гематологического анализатора Abacus (Junior 5 Vet) с использованием реактивов Abacus. Биохимиечские исследования крови проводили с использованием программируемого полуавтоматического биохимического анализатора крови StatFax 1904+ с использованием реагентов Vital Diagnostics. Иммунологические исследования крови проводили согласно стандартным методам исследований.

Проведенные опыты показали, что применение 9-ОДК в двух дозах в течение 7 дней не меняет картину периферической крови. Следует отметить, что 9-ОДК вызывает незначительное увеличение количества лейкоцитов, что можно объяснить положительным влиянием препарата на клетки «белой крови». Соотношения клеток лейкоформулы достоверно не отличаются от значении контрольной группы и исходных показателей. Повышение дозы 9-ОДК также не влияет на показатели лейкоформулы, и не наблюдается появление патологических включений в клетках крови и изменение их формы.

По нашему мнению, это свидетельствует о достаточной широте терапевтического действия и аддитивном влиянии 9-ОДК и отсутстпии отрицательного влияния на белый росток костного мозга.

Следует отметить, что содержание макроэлементов и микроэлементов повышается в крови опытных групп птиц: меди на 31,9%, цинка - на 26,9%, кальция - на 27,1%, фосфора на 37,9%, белка на 29,7%.

В результате проведенных исследований установлено повышение лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки. Некоторые исследователи отмечают, что с возрастом уровень лизоцимной активности сыворотки крови снижается вследствие рассасывания желточного мешка. В дальнейшем показатель повышается за счет собственного синтеза.

Количество лизосомально-катионных белков у цыплят при применении 9-ОДК изменялось на протяжении всего опыта. Так в возрасте 5 сут у опытных цыплят ЛКБ был выше на 2,04 %, в возрасте 40 сут - на 5,5 %.

Огромная роль в защите организма от ксенобиотиков принадлежит Т- и В- лимфоцитам. 9-ОДК способствует увеличению количества иммунокомпетентных клеток. Например, наблюдалось достоверное повышение относительного и абсолютного количества Т-лимфоцитов у птиц опытной группы.

Количество Т-лимфоцитов у контрольных цыплят в возрасте 30 сут составило 18,1±0,75х109л. В 40 сут 18,6 ± 0,73хЮ9л , в 50 сут 18,3±0,8х109 л; у опытных цыплят соответственно 28,5±2,00х109л; 28,5±3,02хЮ9 л; 28,6±2,92х109л (Р<0,05).

9-ОДК оказала положительное влияние также на показатели В-лимфоцитов. Общее количество В-лимфоцитов у опытных цыплят в возрасте 30 сут составило 38,2±3,0хЮ9л; в 40 сут - 38,3±2,92х109л; в 50 сут - 39,0±2,95хЮ9л; а в контрольной группе в возрасте 30 сут- 23,1±1,50хЮ9л, в 40 сут -26,8±2,10x109л; в 50 сут-25,1±2,02*109л.

Таким образом, назначение 9-ОДК цыплятам не вызывает значительных изменений относительного состава белой крови при улучшении качественных показателей биохимического и иммунологического статуса.

3.13 Влияние 9-ОДК на структуру печени птиц

Гистологические исследования показали, что у кур опытной группы, получавших 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг, структура печени соответствует норме. Гепатоциты имеют ядра овальной и округлой формы. При электронной микроскопии кариоплазма имела два-три ядрышка высокой электронной плотности. Цитоплазма была умеренно плотной. В центральной части клетки располагаются многочисленные митохондрии, окруженные гранулярной эндоплазмотической сетью. В цитоплазме гепатоцитов отметили наличие больших рибосом, а в митохондриях четко просматривались кристы. Ядра гепатоцитов имели большое количество рибонуклеопротеидных гранул, что свидетельствовало об интенсивном синтезе белка. Ядерные поры гепатоцитов были широкими, частыми.

Паренхима печени состояла из мелких однородных гепатоцитов с восстановленными тинкториальными свойствами. Цитоплазма была окрашена в ровный розовый цвет. Гепатоциты составляли типичные печеночные балочные структуры. Синусоидные капилляры выстланы веретенообразными клетками, в просвете которых хорошо просматривались клетки Купфера. Области центральных вен и портальных протоков соответствовали норме.

При окраске амидочерным 10 В в цитоплазме гепатоцитов уровень белка характеризовался слабой выраженностью (+). Отмеченные типичные особенности строения печени свидетельствуют о том, что применение 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг не. обладает повреждающим влиянием на печень. Орган имел нормальное строение, соответствующее возрасту опытных кур.

Таким образом, изучение гистологической структуры печени птиц свидетельствовало о повышении уровня обменных процессов при применении 9-ОДК в рекомендуемой дозе.

3.14 Влияние 9 - ОДК на химический состав и пищевую ценность мяса кур -

Постановка "биологической пробы является: вспомогательным тестом для определения токсического действия 9-ОДК на организм и позволяет определить качество реализуемого мяса и установление сроков пригодности к употреблению в пищу людям. Степень свежести мяса птицы устанавливали органолептическим исследованием и с помощью микроскопического и химического анализов.

Установлено, что при применении 9-ОДК в мышечной ткани увеличилось содержание белка, а содержание жира снизилось на 24,1%. Добавление 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг в рацион цыплят способствует улучшению биохимического состава мяса благодаря накоплению в органах и тканях макро- и микроэлементов. Наблюдается тенденция к повышению содержания натрия, калия, кальция, магния, фосфора и железа в мышечной ткани. Например, содержания железа в начале опыта 0,97±0,01 мг, а в конце опыта 1,39±0,05 мг, соответственно натрия 65,3±4,9 мг, 71,7± 6,21; калия 200,3±9,89 мг и 239,5 ± 16,1 мг; кальция 11,9±0,03 мг и 16,6±0,81 мг; магния 16,9 ± 0,24 мг и 16,8 ±0,9 мг; фосфор 149,1 ± 1,82 и 161,2 ± 9,16 мг. В среднем в мясе птиц соотношение между водой и сухим остатком должно в норме составлять 3:1. В мясе опытных кур это соотношение составило 3,05:1, что в технологическом плане наиболее благоприятно для мяса птицы, а в контрольной группе это составило 2,82:1. Величина рН мяса после суточного созревания в опытных пробах не отличались от контроля, и составила 5,75,8.

Реакция на аммиак и соли аммония, как в опытных, так и в контрольных образцах показала, что вытяжка из мясного фарша кур через

24 ч и 5 сут хранения приобретала зеленовато-желтый цвет и сохраняла прозрачность при добавления реактива Несслера, что соответствует высокому санитарному качеству продукта. Количество летучих жирных кислот в пробах мяса кур получавших 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг и контрольной птицы через одни хранения составило 3,9-4,3 КОН, а через 5 сут 4,5 мг КОН (норме 4,5 КОН).

Моноаминомонокарбоновые кислоты (глицин, аланин, валин, метионин, лейцин) в мясе птицы, в рацион которых была добавлена 9-ОДК повысилась от 103,9% - до 150,4% к контролю. Полноценность белков мяса принято оценивать по отношению в них аминокислот - триптофана и оксипролина. Соотношение триптофана и оксипролина в мясе контрольных кур - 9,69, а в мясе птицы, получавшей 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг, это соотношение составило 10,81. Это свидетельствует о том, что 9-ОДК благотворно влияет на белково-качественный показатель мяса.

Степень безвредности мяса кур получавших 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг, устанавливали путем нормативного вскармливания белым беспородным крысам и котятам. Белым крысам мясо скармливали в дозе 5г, котятам в дозе 50г на одну голову в сутки. Биологическая проба, проведенная на крысах и котятах, не выявила признаков отравления и нарушения общего состояния животных. Патологоанатомическое вскрытие крыс и котят, убитых через 10, 15, 20 сут после начала скармливания мяса кур, показало отсутствие изменения в органах и тканях.

3.15 Лечебная эффективность композиции

ДППОМУ+АМПИОКС+9-ОДК при остром гиойно-катаральиом эндометрите

Одной из групп заболеваний, требующих особого внимания, являются широко распространенные у коров и других видов животных послеродовые эндометриты, на долю которых приходится 15-40% от общего числа внутренних незаразных болезней. Послеродовые эндометриты способствуют развитию других заболеваний, нередко приводящих к бесплодию продуктивных животных и даже к их выбраковке. Несмотря на достаточно большой спектр лекарственных препаратов, предлагаемых для применения в ветеринарной акушерско-шнекологической практике, многие из них имеют ряд достаточно существенных недостатков: высокая токсичность, низкая терапевтическая эффективность, неудобство применения рекомендуемых лекарственных форм, высокая стоимость курса лечения. Кроме этого, некоторые из этих препаратов обладают побочными эффектами, нередко снижают качество молока у лактирующих коров.

Для проведения клинических исследований по определению терапевтической эффективности композиции ДППОМУ+А+9-ОДК нами были изготовлены внутриматочные суппозитории на глицериново-

желатиновой основе. При изготовлении руководствовались Государственной Российской Федерации (XII), статьей «Суппозиторий» (1990).

После клинического исследования животных с признаками катарально-гнойного эндометрита объединили в группы по принципу аналогов. Из 32 больных коров сформировали 3 группы для проведения исследований по определению терапевтической эффективности композиции ДППОМУ+А+9-ОДК.

Лечение эндометритов у коров всех групп проводили с учетом триады воздействия по Заянчковскому И.Ф. (промывание матки раствором фурациллина, стимуляция сократительной способности миометрия по средствам инъекций раствора окситоцина, витаминотерапия тетрамагом). На фоне общепринятой терапии коровам первой группы внутриматочно, один раз в день вводили по одной свече композиции ДППОМУ+А+9-ОДК с содержанием 0,75 г действующего вещества в каждый рог; коровам второй группы - по одной свече композиции ДППОМУ+А+9-ОДК с содержанием 1,5 г действующего вещества в каждый рог матки; коровам контрольной группы - фуразолидоновые свечи, с содержанием 1 г действующего вещества в каждый рог матки.

После применения композиции ДППОМУ+А+9-ОДК в форме внутриматочных свечей отмечается увеличение количества белка сыворотки крови на 10,1% и 19,0% по сравнению с показателями до лечения. Установлено увеличение фагоцитарного индекса в 1,72 и 2,32 раза соответственно.

В сыворотке опытных животных содержание В-глобулинов равномерно увеличивалась с 9,51± 0,45 г/л на 7-е сут лечения и составило 11,17± 0,63 г/л, а на 15-е сут составило 12,9 ± 0,26 г/л. Такая же тенденция отмечена со стороны глобулинов и альбуминов; в начале опыта содержание глобулинов составило 42,00 ± 0,41 г/л, к 15-и сут - 55,2±0,42 г/л, альбуминов в начале опыта - 27,9±0,1 г/л, к 15-м сут-29,1 ±0,3 г/л.

Сопоставляя вышеописанное, можно предположить, что активизация защитно-приспособленных реакций организма больных коров, которым внутриматочно назначали свечи с композицией ДППОМУ+А+9-ОДК, выражавшаяся в увеличении соотношения глобулиновых фракций, связана с регуляторной и белоксинтезирующей функцией печени.

Нами отмечено стимулирующее влияние композиции ДППОМУ+А+9 -ОДЬС в виде внутриматочных свечей на синтез и метаболизм кортикостероидов в надпочечниках коров в сторону увеличения кортизола на 7,14% (с 17,91± 0,45 нг/мл до 21,29± 0,59 нг/мл) через 7 сут после лечения, с последующим восстановлением до фоновых показателей к 30-м сут опыта.

Содержание прогестерона в сыворотке крови опытных коров также имело тенденцию к повышению при одновременном снижении концентрации

эстрадиола и тестостерона. Так, в опытной группе ДППОМУ+А+9-ОДК, где применяли композицию в 2-х дозах (0,75 и 1,5 мг/кг), концентрация тестостерона и эстрадиола через 7 сут снизилась на 26,90% (с 3,12 ±0,11 нг/мл до 2,29±0,11 нг/мл) и на 71% (с 153,3±2,94 нг/мл до 44,5 ± 1,78 нг/мл), а к 30 суткам исследования концентрация тестостерона понизилась до 1,12 ± 0,08 нг/мл, (на 64,1%), а также экстрадиола до 33,97±1,91 нг/мл (на 89%) соответственно.

Следует отметить, что концентрация прогестерона у животных после лечения увеличилась с 0,960 ±0,038 нг/мл до 4,98 ± 0,16 нг/мл (в 5 раз).

О терапевтической эффективности применяемой схемы лечения катарально-гнойного эндометрита у коров судили по сроку выздоровления, времени проявления первой стадии возбуждения полового цикла, длительности сервис-периода, индексу осеменения и оплодотворяемости. Для этого сформировали 2 опытные и 1 контрольную группы.

Эффективность применения композиции ДППОМУ+А+9-ОДК в форме внутриматочных свечей при лечении катарально-гнойного эндометрита у коров составила 97,15%,тогда как в контроле эффективность составила 19,92%. Следует отметить, что отмечено более значительное снижение длительности сервис-периода на 20-21 день по сравнению с контрольными животными, что указывает на сравнительно быстрое выздоровление опытных : коров (срок выздоровления - 7,80±0,5 дня), а у контрольных срок выздоровления -17,0±0,85.

Индекс осеменения и процент оплодотворяемости, характеризующие восстановление репродуктивной функции полового аппарата коров, отличались от контрольной группы, указывая на большую терапевтическую эффективность. Например, в опытной группе индекс осеменения составил 1,75±0,09,что достоверно больше контроля в 1,5 раза (2,45±0,06).

Процент оплодотворяемости в опытной группе составил 89,1%,что ниже на 3,22% по сравнению с фоновыми показателями.

Таким образом, применение композиции ДППОМУ+А+9-ОДК в схеме лечения послеродового катарально-гнойного эндометрита способствует более быстрому выздоровлению больных животных. Препарат положительно повлиял на морфологические и биохимические показатели крови, а также на гормональный статус животных.

Проведенные расчеты экономической эффективности лечения послеродового катарально-гнойного эндометрита с применением внутриматочных свечей композиции ДППОМУ+А+9-ОДК, содержащих 0,75 г активного вещества, указывают обоснованность применения. Экономический эффект на 1 рубль затрат составил 17,05 руб., а применение свечей фуразолидона -1,15 рубля на 1 рубль затрат.

3.16 Оценка эффективности применения 9-ОДК при лечении мастита у коров с целью получения молока высокого санитарного качества

Производственные испытания эффективности применения мази с 9-ОДК для профилактики и лечения мастита у коров проведены на ферме ГУСГ1 ПЗ «Туймазинский» Туймазинского района Республики Башкортостан. Опыты проведены на 60 субклинически больных коровах черно-пестрой породы, по 15 животных в каждой группе. Перед применением исследуемых препаратов производилась подготовка вымени ж-ивотных:

- обмывали кожу молочной железы теплой водой;

- насухо вытирали вымя полотенцем или сушильной тряпкой;.

- сдаивали одну-две струйки молока из сосков.

Животных первой группы лечили мастааэрозолем согласно предлагаемой инструкции, вторую группу животных - 0,3% мазью 9-оксо-2Е-деценовой кислоты, третью группу - эритромицином в установленных дозах, четвертая группа служила контролем. Были проведены 4 серии опытов (по 2 - в апреле-мае и в ноябре-декабре).

В начале опыта уровень содержания жира по сравнению с исходными данными увеличился с 3,1±0,005 до 3,3±0,005%; плотность с 1,011±0,001 до 1,030±0,002, а бактериальная обсемененность снизилась — с 1530,0±96,0 до 480,6±7,6 тыс. м.к/мл; количество соматических клеток - с 990,0±54,0 до 360,0±32,0 тыс. м.к/мл; кислотность - с 23,9±0,51 до 16,0±0,4. У животных контрольной группы показатели качества не изменились на протяжении всего опыта.

4 ВЫВОДЫ

1. Разработан новый, практичный метод синтеза 9-оксо-2Е-деценовой кислоты, основанный на селективно протекающих превращениях метилового эфира 9,9-диметоксинонановой кислоты с последующим кислым метанолизом.

2. 9-ОДК относится к IV классу опасности согласно ГОСТ 12.1.00.-7-76, не вызывает интоксикации животных при длительном (четырехмесячном) введении внутрь в дозе 0,3 мг/кг, эмбриотоксического и тератогенного действия; не обладает раздражающим, повреждающим действием на кожу и не вызывает развития контактного неаллергического дерматита, гиперемии и признаков раздражения слизистой оболочки глаз.

3. Механизм противовоспалительного действия 9-ОДК связан со стимуляцией коры надпочечника, усилением репаративной регенерации и иммунитета; опосредованно, через выработку лейкотрианов, увеличивает

синтез остеоиндуктивных белков в костной ткани и положительно влияет на минеральный и органический матрикс костной ткани при остеоиндукции.

4. Антибактериальный эффект 9-ОДК при экспериментальных инфекциях, вызванных стафилококком, синегнойной палочкой, протеем, кишечной палочкой, может быть следствием стимуляции активности моноцитарно-фагоцитирующей системы и антитоксическим действием. Применение 9-ОДК значительно увеличивало продолжительность, жизни белых мышей (65-90%) по сравнению с препаратом сравнения (15-35%);

5. 9-ОДК в дозе 0,3мг/кг оказывает иммунокорригирующее действие, проявляющееся выраженной стимуляцией биосинтеза антител-гемагглютининов в 2 раза выше в сравнении с контролем и в 1,5 раз выше в сравнении с применением ДППОМУ в дозе 50 мг/кг, а также активизирует функциональное состояние перитонеальных макрофагов, повышает реакцию ПЧЗТ. Иммуностимулирующий эффект 9-ОДК проявляется также при нарушении иммунобиологического статуса организма при инфекционной иммуносупрессии.

6. 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг оказывает положительное влияние на клеточные и гуморальные показатели неспецифической резистентности у телят и поросят, больных бронхопневмонией и диспепсией; активизирует биохимические реакции, направленные на координацию использования. энергетических ресурсов, являясь предвестником благоприятного исхода болезней молодняка за счет активизации обмена веществ. Фактический прирост живой массы телят, больных бронхопневмонией, при применении 9 -ОДК в течение 10 дней, составил 4,68±0,12 кг, в то время как в опытной группе составил лишь 1,56±0,05 кг. Так же применение 9-ОДК сокращало сроки лечения простой диспепсии поросят на 3-4 суток и предотвращала переход в токсическую форму.

7. Применение супоросным свиноматкам 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг в течение 7 сут улучшает гематологические, биохимические, иммунологические показатели, а также показатели минерального обмена крови животных. Препарат оказывает стимулирующее влияние на рост и развитие поросят. Живая масса поросят при отъеме в 60 сут была выше на 12,90%. 9-ОДК задаваемый хрякам в дозе 0,3 мг/кг в составе стандартного рациона в течение 7 сут, повышает количественные и качественные показатели спермопродукции, позволяет получить доброкачественную, свободную от посторонних примесей сперму, содержащую достаточное количество живых, устойчивых во внешней среде сперматозоидов, способных принять активное участие в оплодотворении.

8. Проведен скрининг 3 новых производных пиримидина. Наиболее эффективным и малотоксичным иммуномодулятором является ДППОМУ — 1,3-бис(2-гидрокси-3-диметиламинопропил)-6-метилурацил.

9. Применение 9-ОДК цыплятам в дозе 0,3 мг/кг в течение 7 сут не вызывает значительных изменений лейкограммы, положительно влияет на биохимический, иммунологический статус, а также на минеральный состав крови.

10. Изучение гистологической структуры печени птиц свидетельствуют о повышенном уровне обмена процессов при применении 9-ОДК в дозе 0,3 мг/кг. Рекомендуемый препарат приводит к улучшению товарных качеств мяса птицы (увеличению макро-, микроэлементов и аминокислот), а мясо кур, убитых через 7 сут после последнего применения, является безвредным, на что указывает постановка биологической пробы, проведенная на белых беспородных крысах и котятах.

11. Композиция ДППОМУ+А+9-ОДК в форме внутриматочных свечей приводит к активизации защитно-приспособительных реакций организма больных острым катарально-гнойным эндометритом коров, выражающейся в увеличении соотношения глобулиновых фракций в сыворотке крови, что характеризует выраженное усиление регенеративных процессов. Композиция ДППОМУ+А+9-ОДК оказывает стимулирующее влияние на синтез и метаболизм кортикостероидов в надпочечниках у коров; стимулирует синтез прогестерона и угнетает синтез тестостерона и эстрадиола. Длительность сервис-периода снижается при применении препарата на 20-21 день (срок выздоровления составляет 7,80±0,5 дня, а у контрольных 17,0±0,85 дней). Процент оплодотворяемости в опытной группе составил 89,1%, что лишь на 3,22% ниже в сравнении со здоровыми животными.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. На основании проведенных исследований ветеринарной практике и животноводству рекомендуется:

иммуномодулятор 9-ОДК для коррекции иммунитета сельскохозяйственных животных и птиц в дозе 0,3 мг/кг внутрь с водой 1 раз в сутки в течение 7 дней;

- для лечения острых форм бронхопневмонии у телят и поросят, а таюке для лечения диспепсии у поросят в дозе 0,3 мг/кг внутрь с водой 1 раз в сутки до клинического выздоровления;

- 0,3%-ная мазь 9-ОДК для лечения маститов у коров и получения от них молока высокого санитарного качества (путем растирания пораженных долей вымени 2 раза в день);

композиция ДППОМУ+А+9-ОДК в форме внутриматочных свечей, содержащих 0,75 г активного вещества для лечения острых гнойно-катаральных эндометритов (по 1 свече в каждый рог матки 1 раз в сутки до полного выздоровления);

2. На основании полученных результатов исследований разработаны и внедрены в практику 4 методические рекомендации, которые используются при чтении лекций студентам и слушателям курсов повышения квалификации на факультетах ветеринарной медицины ВУЗов Министерства сельского хозяйства РФ по фармакологии, токсикологии, ветеринарно-санитарной экспертизе, акушерству, гинекологии и биотехнике размножения, внутренним незаразным болезням, а также по дисциплинам специализации — ветеринарная фармация.

6 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи, опубликованные в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ

1. Белов, А.Е. Синтез и фармакологическая активность новых производных ациклонуклеозидов /А.Е. Белов, В.П. Кривоногов, Г.Г. Козлова [и др:] //Химико-фармацевтический журнал. — 2002. —Т.36. —№1. - С.8-11

2. Белов, А.Е. Антимикробный препарат для лечения субклинического мастита коров /А.Е. Белов, Г.Ю. Ишмуратова, А.Ф. Исмагилова [и др.] //Вестник РАСХН. М., 2004. - №2. - С. 65-66.

3. Белов, А.Е. Антидотная активность компонентов маточного вещества и маточного молока /А.Е. Белов, Н.М. Ишмуратова, Г.Ю. Ишмуратов [и др.]//Пчеловодство. М., 2007.-№5.-С.56-57.

4. Белов, А.Е. Антидотные свойства компонентов маточного вещества и молока медоносных пчел /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, Г.Ю. Ишмуратов //Вестник РАСХН. М., 2007. -№2. - С.84-85.

5. Белов, А.Е. Применение 9-ОДК при лечении телят, больных острой формой бронхопневмонии /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Ветеринарный врач. Казань, 2009. - №5. - С. 46-47.

6. Белов, А.Е. Влияние синтетического аналога компонента маточного вещества 9 - ОДК на показатели крови животных /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, Г.Ю. Ишмуратов //Труды кубанского государственного аграрного университета. Краснодар, 2009. -№1. — С. 241-243.

7. Белов, А.Е. Влияние синтетического аналога маточного вещества медоносных пчел (9-ОДК) на антиоксидантный статус телят, больных острой формой бронхопневмонии /А.Е.Белов, А.Ф. Исмагилова //Вестник Башкирского государственного аграрного университета. Уфа, 2011. - №2. -С. 22-24.

8. Белов, А.Е. Эффективность 9-оксо-2Е-деценовой кислоты для лечения мастита у коров и получение молока высокого санитарного качества //А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Вестник Башкирского государственного аграрного университета. Уфа, 2012. - №2. - С.20-22.

9. Белов, А.Е. Влияние 9-ОДК на иммунный статус и продуктивность свиноматок /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Ученые записки Витебской государственной академии ветеринарной медицины. //Белорусия, Витебск, 2012. - Т.47. - Вып.2. - Ч. П. - С. 15-16.

10. Белов, А.Е. Влияние синтетического препарата 9-ОДК на качество спермы хряков /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины. Казань, 2012. -Т. 210.-С. 81-87.

11. Белов, А.Е. Результаты доклинических исследований синтетического

- аналога «Маточного вещества» и «Маточного молока» пчел - 9-ОДК

/А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины. Казань, 2012. -Т. 210.-С. 23-27.

12. Белов, А.Е. Изучение антибактериальных и местно-раздражшоших свойств синтетического аналога «Маточного вещества» и «Маточного молока»-9 /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. М., 2012. -№1.- С. 88-90.

13. Белов А.Е. Изучение отдаленных токсических последствий 9-ОДК на организм животных, химический состав и пищевую ценность мяса птицы /А.Е. Белов //Вестник Башкирского государственного аграрного университета. Уфа, 2012. - № 3. - С. 20-23.

14. Белов, А.Е. Коррекция иммунитета птиц синтетическим аналогом «маточного молочка» и «маточного вещества» пчел - 9-ОДК //А.Е. Белов, А.Ф. Исмашлова //Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины. Казань, 2012. - Т. 211. - С. 263-269.

Монографии и методические рекомендации

1. Белов, А.Е. Применение производных пиримидина в ветеринарии: монография /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, Р.В. Гилемханов - Уфа: Министерство печати и массовой информации Республики Башкортостан, 2001.-С. 132.

2. Белов, А.Е. Применение 9-ОДК в животноводстве и птицеводстве:монография /А.Е. Белов - Уфа: Башкирский ГАУ, 2012. - 156 с.

3. Применение полного синтетического аналога Компонентов маточного вещества и маточного молочка - 9-ОДК в ветеринарной медицине: методические рекомендации /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова. -М.: РАСХН, 2010. - 15 с.

4. Применение 9-ОДК в животноводстве: методические рекомендации /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова. -М.: Минсельхоз РФ, 2012. - 21 с.

5. Применение 9-ОДК при выращивании цыплят и ее влияние на питательность и санитарные качества мяса кур: методические рекомендации /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова. -М.: Минсельхоз РФ, 2012. -28 с.

6. Применение полного синтетического аналога компонентов «маточного вещества» и «маточного молочка» - 9-ОДК для повышения резистентности поросят и репродуктивных качеств свиней: методические рекомендации /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова. - Минск: РУП Научно-производственный центр национальной Академии наук Беларуси по животноводству, 2012. - 28 с.

Публикации в других изданиях

1. Белов, А.Е. Антибактериальные свойства комплекса дипепиридино-диоксипропилметилурацил с левомицетином и амшюксом /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, О.А.Запровальная, [и др.] //Труды VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2000. - С. 474.

2. Белов, А. Е. Стимуляция неспецифический факторов иммунитета кур новыми производными пиримидина /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, В.П. Кривоногов //Материалы региональной научно-производственной конференции посвященной 70-летию Башкирского ГАУ «Методы повышения продуктивных и защитных функций организма животных в Республике Башкортостан». - Уфа, Башкирский ГАУ. - 2000. - С. 80-81.

3. Белов, А.Е. Влияние производных деценовой кислоты на рост и развитие потомства крыс /А.Е. Белов //Материалы XVII Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». - С. Петербург, С-Пб ГАВМ. - 2005 - С. 142-143.

4. Белов, А.Е. Противоядные свойства компонентов «Маточного вещества» и маточного молока медоносных пчел /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, Г.Ю. Ишмуратов [и др.] //Пчеловодство и апитерапия. — 2005. - №3. — С. 36-37.

5. 5. Belov, A. Unknown properties of queen substance of Apis mellifera /А. Belov, A Ismagilova, G. Tolsticov [et al.J /ЯП European congress on social insects «Proceedings». - St. Petersburg, Euro IUSSI. - 2005. - P. 149.

6. Белов, A.E. Антидотная эффективность 9-оксо- 2Е-деценовой кислоты (9-ОДК) при хроническом травлении гербицидом 2,4-Д - компонентов «Маточного вещества» и «Маточного молока» медоносных пчел /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Материалы XVIII Международной научно-практической конференции «Новые фармакологический средства в ветеринарии». - С. Петербург, С-Пб ГАВМ. - 2006. - С. 125-126.

7. Белов, А.Е. Влияние производных деценовой кислоты на рост и развитие потомства животных /А.Е. Белов //Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития инновационной деятельности в агропромышленном производстве».

- Уфа, Башкирский ГАУ. - 2007. - 4.II. - С.168-169.

8. Белов, А.Е. Антидотная активность 9-оксо- и 10-гидрокси-2Е-деценовых кислот — компонентов «Маточного вещества» и «Маточного молока» медоносных пчел /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, Г.Ю. Ишмуратов //Апидология и пчеловодство. - Ижевск. - 2007. - Вып. 2. - С. 69-71.

9. Белов, А.Е. Эффективность применения производных деценовой кислоты при хроническом отравлении пестицидами /А.Е. Белов //Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием в рамках XVIII Международной специализированной выставки «АгроКомплекс-2008» «Интеграция аграрной науки в производство: состояние, проблемы и пути решения».

- Уфа, Башкирский ГАУ. - 2008. - С.17-19.

10. Инструкция по применению 9-оксо-2Е-деценовой кислоты в ветеринарии. Утверждена Управлением ветеринарии Республики Башкортостан. — Уфа, 2008. - 6 с.

П.Белов, А.Е., Местно-раздражающие свойства 9-ОДК. /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, Г.Ю. Ишмуратов //Материалы второго съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии». - Казань, ФЦТиРБЖ-ВНИВИ. - 2009. - С.209-211.

12. Белов, А. Е. Эффективность лечения телят и поросят, больных острой фермой бронхопневмонии, синтетическим аналогом маточного вещества медоносных пчел (9-ОДК) /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Вестник Башкирского ГАУ.-2010. -№4. -С.21-24.

13. Белов, А.Е. Изыскание способов коррекции при отравлениях пестицидами /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, Г.Ю. Ишмуратов //Материалы всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития АПК» в рамках XX Международной специализированной выставки «Агрокомплекс-2011». - Уфа: Башкирский ГАУ, 2010. 4.2. - С. 163-165.

14. Белов, А.Е. Влияние 9- ОДК на структуру желудка поросят /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Материалы Международной научно-производственной конференции «Совершенствование и внедрение современных технологий получения и переработки продукции животноводства». - Троицк: ФГОУ ВПО Уральская ГАВМ, 2010. - С.29-32

15. Белов, А.Е. Влияние 9-ОДК на гематологические показатели белых крыс при длительном применении /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова

//Материалы всероссийской научно-практической конференции «Особенности развития агропромышленного комплекса на современном этапе» в рамках XXI Международной специализированной выставки «Агрокомплекс-2011». - Уфа: Башкирский ГАУ, 2011. 4.1. - С. 62-64.

16. Белов, А.Е. Влияние 9 -ОДК на состав костной ткани /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Материалы III Съезда фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации». - С. Петербур: С-Пб ГАВМ, 2011. - 'С. 49-51.

17. Белов, А.Е. Антимикробная активность 9-ОДК-синтетического аналога «Маточного вещества» и «Маточного молока» пчел /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова //Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» посвященной 65-летшо ветеринарной науки Кубани. - Краснодар: Кубанский ГАУ, 2011.-С.29-30.

18. Белов А.Е. Фармакологические свойства синтетического аналога «Маточного молока и маточного вещества» пчел — 9-ОДК /А.Е. Белов, А.Ф. Исмагилова, A.A. Шарипов //Материалы 17-ой Всероссийской научно-методической конференция по патологической анатомии животных «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных». - Москва: ФГОУ ВПО «Московская ГАВМ», 2011. - С. 181-184

Подписано к печати /2. J2. Заказ ¿У Тираж /ÜO Бумага офсетная

Формат 60x84/16 Усл. печ.п.2.0 Печать RISO

Цент информационных технологий КГАВМ 4200074, Казань, Сибирский тракт, 35

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Белов, Андрей Евгеньевич, Уфа

ФГБОУ ВПО «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

БЕЛОВ АНДРЕЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук

На правах рукописи

05201350601

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Исмагилова А.Ф.

Уфа-2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 4

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10

2.1 Современные представления о фармакодинамике основных

групп иммуностимуляторов 10

2.2 Иммуностимуляторы растительного происхождения 14

2.3 Синтетические иммунотропные лекарственные препараты 30

2.4 Биологическая роль производных пиримидина и

их применение в медицине и ветеринарии 49

2.5 Биологическая роль активных компонентов маточного

вещества медоносных пчел 54

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 58

3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 58

3.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 71

3.2.1 Синтез новых производных пиримидина и определение

их острой токсичности 71

3.2.2 Синтез 9-гидрокси-2Е-деценовой кислоты (9-ОДК) 73

3.2.3 Исследование острой и хронической токсичности 9-ОДК 75

3.2.4 Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств 9-ОДК 81 3.2.4.1 Влияние 9-ОДК на постнатальное развитие потомства 86

3.2.5 Влияние 9-ОДК на формирование инфекционной иммуносупрессии 88

3.2.6 Антимикробная активность 9-ОДК при экспериментальной инфекции и кожно-резорбтивное действие 94

3.2.7 Изучение противовоспалительной активности 9-ОДК 98

3.2.8 Влияние 9-ОДК на состав костной ткани 101

3.2.9 Эффективность лечения телят и поросят, больных острой

формой бронхопневмонии с применением 9-ОДК 104

3.2.10 Эффективность 9-ОДК при лечении поросят, больных диспепсией

3.2.11 Влияние 9-ОДК на иммунный статус и продуктивность свиноматок

3.2.12 Влияние 9-ОДК на качество спермы хряков

3.2.13 Коррекция иммунитета птиц с применением 9-ОДК

3.2.14 Влияние 9-ОДК на химический состав и пищевую ценность мяса кур

3.2.15 Лечебно- профилактическая эффективность композиции ДППОМУ+Ампиокс+9-ОДК при остром гнойно-катаральном эндометрите

3.2.15.1 Технология изготовления суппозиториев с новой композицией ДППОМУ+Ампиокс+9-ОДК

3.2.15.2 Показатели микрофлоры матки коров при остром, гнойно-катаральном эндометрите и лечебная эффективность композиции ДППОМУ+Ампиокс+9-ОДК

3.2.16 Оценка эффективности применения 9-ОДК при лечении мастита у коров с целью получения молока высокого санитарного качества

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

5 ВЫВОДЫ

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8 ПРИЛОЖЕНИЯ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

животных, особенно солей тяжелых металлов и некоторых других, проблематичен в связи с их высокой миграционной активностью в органах и тканях, а также кумуляцией в так называемых органах-«мишенях» (Антипов В.А., 2002; Дорожкин В.И., 2003, Шабунин C.B. с соавт., 2006; Слободяник В.И., 2007; Иванов A.B., 2009; Папуниди К.Х., 2012; Смирнов A.M., 2012).

В соответствии с поставленными целями решались следующие задачи:

4. Изучить влияние 9-ОДК на иммунный статус, репродуктивную функцию хряков-производителей и свиноматок;

5. Изучить влияние 9-ОДК на состояние обмена веществ, иммунного статуса, продуктивность цыплят и кур, а также на химический состав и пищевую ценность получаемой от них продукции;

Научная новизна работы. Проведен сравнительный анализ влияния синтетически полученного многофункционального феромона матки медоносной пчелы (9-оксо-2-Е-деценовая кислота) на иммунный статус и состояние обмена веществ у продуктивных животных.

Впервые изучены токсико-фармакологические свойства 9-ОДК, влияние его на феномены клеточного и гуморального иммуногенеза при инфекционной иммуносупрессии, индуцированной БиурЫтипит, иммуномодулирующая активность и лечебные свойства 9-ОДК при диспепсии, бронхопневмонии телят и поросят; маститах у коров; на иммунный статус и репродуктивную функцию хряков-производителей и свиноматок; на состояние обмена веществ; иммунный статус, продуктивность цыплят-бройлеров и кур, а также на химический состав и пищевую ценность получаемой от них продукции.

животных и птиц. Определены дозы и схемы их применения для повышения продуктивного здоровья животных и птиц.

3. Методические рекомендации производству «Применение 9-ОДК в животноводстве» (утверждены на заседании секции ветеринарии НТС Минсельхоза Российской Федерации (протокол № 39 от 8 ноября 2012г.);

4. Методические рекомендации производству «Применение 9-ОДК при выращивании цыплят и ее влияние на питательность и санитарные качества мяса кур» (утверждены на заседании секции ветеринарии НТС

Минсельхоза Российской Федерации (протокол № 39 от 8 ноября 2012г.).

Апробация работы. Основные материалы, изложенные в диссертационной работе, доложены, обсуждены и одобрены на: Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000); Региональной научно-производственной конференции, посвященной 70-летию Башкирского ГАУ (Уфа, 2000); международных и всероссийских научных конференциях (Санкт-Петербург, 2005, 2006, 2011; Ижевск, 2007; Уфа, 2007, 2008, 2010, 2011; Троицк, 2010; Казань, 2009; Краснодар, 2011; Москва, 2011; на II и III съездах ветеринарных фармакологов и токсикологов Российской Федерации (Казань, 2009; Санкт-Петербург, 2011).

Основные положения, выносимые на защиту:

- Фармакологический спектр действия 9-ОДК;

- Механизм иммуномодулирующего действия 9-ОДК;

- Влияние 9-ОДК на резистентность организма к возбудителям экспериментальной инфекции;

- Возможность применения 9-ОДК для лечения заболеваний молодняка;

- Возможность применения 9-ОДК в составе новой композиции для лечения акушерско-гинекологической патологии у продуктивных коров;

- Возможность применения 9-ОДК для улучшения здоровья и продуктивности животных и птиц.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 249 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений.

Работа содержит 45 таблиц, иллюстрирована 32 рисунками. Список литературы включает 301 источников, в том числе 92 зарубежных авторов.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Современные представления о фармакодинамике основных групп иммуностимуляторов

Патология, в развитии которой важное место занимает снижение иммунобиологического статуса, получила название иммунодефицитных состояний. Иммунодефицит как нарушение иммунологической реактивности, обуславливается выпадением одного или нескольких компонентов иммунного аппарата или тесно взаимодействующих с ним неспецифических факторов (системы комплемента, системы мононукле-арных фагоцитов). Такие состояния могут иметь наследственную основу (первичные иммунодефициты), а также формироваться во внутриутробном или постнатальном периодах жизни под влиянием различных неблагоприятных факторов (Seligman М., 1980; Вельтишев Ю.Е. и др., 1984; Calabi F., 1987; Дреслер К., 1988; Придыбайло А.Д., 1991; Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е., 1996; Долгих В.Т., 2000).

Первичные иммунодефициты образуются в результате генетических нарушений в развитии и созревании клеток иммунной системы. Клинически они проявляются повышенной чувствительностью к различным инфекционным заболеваниям бактериальной, вирусной или паразитарной природы (Gao J. et al., 1995). Преобладание тех или иных инфекций связано с преимущественной недостаточностью либо клеточного, либо гуморального звеньев иммунной системы, либо их комбинированным поражением. При гуморальном иммунодефиците обычно наблюдается повышенная чувствительность к бактериальным инфекциям. Дефициты в клеточной иммунной системе являются результатом повторных или персистентных грибковых, вирусных и протозой-

ных болезней (Jerne N.K. et al., 1963; Петров Р.В. и др., 1970, 1987; Галактионов В.Г., 2000; Хаитов Р.М. и др., 2000; Knop J. et al., 2008).

Первичные иммунодефициты животных также возникают в результате лежащих в их основе дефектов Т- или В-клеток, а также ней-трофилов, влияющих на их абсолютное число и функциональную активность в защитной системе организма. Это сцепленный с X-хромосомой комбинированный иммунодефицит собак породы бассет-хаунд, характеризующийся лимфопенией, поражением Т- и В-клеток, в результате чего не реализуется гуморальный и клеточный иммунодефицит арабских жеребят, при этом наблюдается полное отсутствие зрелых Т- и В-лимфоцитов; агаммаглобулинемия лошадей характеризуется полным отсутствием В-лимфоцитов при нормальном количестве Т-клеток; селективный Jg G-дефицит регистрируется у красного датского скота; Т-клеточный дефицит - у чёрно-пёстрого датского скота; болезнь Чедик-Хичаши - аутосомно-рецессивный дефект, при котором поражаются все клетки, содержащие цитоплазматические гранулы, встречается у алеутских норок, кошек, голубых и серебристых лис, китов, ге-рефордского скота; спонтанный аутоиммунный тиреоидит кур (Блюгер А.Ф. и др., 1980; Buskley R., 1983; Беклемишев Н.Ю., 1986; Фёдоров Ю.Н., 1981, 1996, 2003, 2005; Rojas-Espinosa О. et al., 1994; Бережная М.Н., 1998; Безбородое Н.В., 2006).

Вторичные иммунодефициты имеют более широкое распространение по сравнению с первичными. Вторичные (приобретённые) иммунодефициты возникают под действием бактерий, вирусов, гельминтов, при воздействии на организм ионизирующей радиации, химических ксенобиотиков, стресс-факторов, являются результатом неполноценного кормления, нарушения условий содержания животных и т.д. При этом возникают поражения центральных и периферических органов иммунной системы (Paul P.S., 1979; Anderson R.E., 1976; Trautwein G.,

1985; Плященко С.И. и др., 1987; Paul W.E., 1999; Исмагилова А.Ф., Ба-зекин Г.В.,2001; Шушарин А.Д., Шкуратова И.А., 2004).

В промышленном животноводстве создаются благоприятные условия для пассажа патогенных и условно-патогенных микроорганизмов из-за высокой плотности поголовья, неоднородности его иммунологического статуса, оптимальных условий среды обитания для возбудителей. Это приводит к возникновению инфекционных болезней, сопровождающихся состоянием иммунодефицита (Bielefeldt-Ohmann Н., 1987; Briggs R.E., 1988; Урбан В.П., Найманов И.Л., 1994; Шахов А.Г., 2003; Прудников С.И. и др., 2004).

В механизме развития вторичных иммунодефицитных состояний значительное место отводится стрессу. На организм сельскохозяйственных животных постоянно воздействуют различные стресс-факторы внешней среды. Такими неблагоприятными факторами могут стать нарушения температурно-влажностного режима в помещениях, смена рациона и уровня кормления, технологические приёмы, при проведении которых недостаточно учитываются биологические особенности животных, осуществление некоторых ветеринарно-зоотехнических мероприятий (взвешивание, кастрация, мечение, каудотомия, отъём поросят и т. д.) (Aumaitre. А., 1973; Cole D.J., 1975; Ковальчук Л.В. и др., 1984; Self H.L., 1985; Больш

Информация о работе

Белов, Андрей Евгеньевич
доктора биологических наук
Уфа, 2013
ВАК 06.02.03

Диссертация

Фармакотоксикологические свойства синтетического феромона 9-ОДК, ее композиции и их применение в животноводстве - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы