Защитные клеточные и тканевые реакции у семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза

Минченок, Елена Евгеньевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Защитные клеточные и тканевые реакции у семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза
ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Защитные клеточные и тканевые реакции у семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза"

На правах рукописи

Минченок Елена Евгеньевна

ЗАЩИТНЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ И ТКАНЕВЫЕ РЕАКЦИИ У СЕМГИ И ГОРБУШИ НА РАННИХ СТАДИЯХ ОНТОГЕНЕЗА

Специальность 03 00 10 - Ихтиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2007

003059069

Работа выполнена на кафедре биоэкологии Мурманского государственного технического университета

Научный руководитель

доктор биологических наук Журавлева Нонна Георгиевна

Официальные оппоненты

Ведущая организация:

доктор биологических паук, профессор

Виноградов Владимир Константинович

доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Привезенцев Юрий Алексеевич

Полярный научно-

исследовательский институт

морского рыбного хозяйства и океанографии им Н М Книповича (ПИНРО)

2007 года в 11 часов на

Защита диссертации состоится заседании специализированного диссертационного совета Д 307 003 01 при Всероссийском научно-исследовательском институте пресноводного рыбного хозяйства (ВНИИПРХ) по адресу 141821, поселок Рыбное, Дмитровский район, Московская область, ВНИИПРХ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института пресноводного рыбного хозяйства

Автореферат разослан «_» / е 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

М Н Белобородова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В последние годы в связи с развитием биотехнологий рыборазведения, уменьшением рыбных запасов в водоемах, а также с усилением воздействия человека на водную среду возрос интерес к изучению биологических механизмов защитных реакций у рыб Формирование защитных систем организма, обеспечивающих выживание рыб, происходит в течение ранних периодов онтогенеза, поэтому именно этим периодам должно быть уделено особое внимание (Лукьяненко, 1971).

В основе успешных работ по искусственному воспроизводству многих ценных в промысловом отношении рыб лежат точные сведения об эколого-физиологических особенностях разводимых организмов (Zapata, 1983) Существует значительное число обзоров и монографий о роли механизмов врожденного и приобретенного иммунитета у рыб (Лукьяненко, 1971, 1989, Микряков, 1984, Грищенко, Рудиков, 1985; Вихман, 1994, Киташова, 2002, Ellis, 1977, Ingram, 1980, Zapata, 1980, 1983; Fange, 1986, Press, Evensen, 1999, Asbakk, 2001)

Несмотря на значительное количество исследований в области иммунобиологии рыб, в литературе встречается мало сведений о становлении и развитии защитно-приспособительных реакций у рыб на ранних стадиях онтогенеза.

На рыбоводных предприятиях наблюдаются случаи, когда даже малозаметное несоответствие экологических условий биологическим потребностям личинок приводит к тому, что происходит их массовая гибель без видимых на то причин (Казаков, 1982) Для промышленного рыбоводства особое значение имеют данные об устойчивости рыб к действию различных повреждающих факторов, в частности таких, как сапрофитная и патогенная микрофлора, а также лечебных препаратов, применяемых для борьбы с болезнетворными грибами и бактериями. Знание механизмов становления защитных реакций у рыб необходимо для практики рыборазведения (Журавлева, 2005, Zhuravleva, Minchenok, 2005).

Иммунная система как система защиты организма от любого чужеродного воздействия является чрезвычайно чувствительной к токсическому действию химических веществ В связи с ростом техногенной нагрузки на водную среду параметры иммунной резистентности рыб могут использоваться как показатели загрязнения воды в водоемах (Киташова, 2002) Оценка параметров иммунной системы морских и пресноводных рыб позволяет получить достоверную информацию о состоянии животных в естественных условиях обитания, о качестве среды, проводить биологический мониторинг водных экосистем

Цель и задачи работы. Цель работы - изучение особенностей развития защитных клеточных и тканевых реакций семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза (эмбрионы, предличинки и личинки, сеголетки и годовики).

Реализация данной цели потребовала решения следующих задач

1. Выявить особенности иммунологических реакций эмбрионов семги, горбуши,

2 Проанализировать динамику развития клеточных и тканевых защитных реакций предличинок и личинок семги и горбуши,

3 Продемонстрировать основные тенденции развития клеточной и тканевой реактивности сеголетков и годовиков семги, горбуши,

4 Выявить особенности действия лечебно-профилактических средств, используемых в рыбоводной практике, на предличинок и личинок семги и горбуши;

5. Сравнить иммунологическую реактивность семги и горбуши в онтогенезе

Основные положения и результаты, выносимые на защиту

1 На основе уникального метода обнаружения антибиотической активности тканей в очаге повреждения выявлена динамика изменения активности антимикробных субстанций в очаге воспаления у семги и горбуши на разных стадиях онтогенеза Установлено, что в первые дни после нанесения травмы в ходе формирования воспалительной реакции около инородного тела активность антибиотических субстанций возрастает, а затем резко снижается

2 Клеточная и тканевая реактивность семги и горбуши после действия одних и тех же повреждающих факторов существенно меняется на разных этапах онтогенеза Защитная реактивность эмбрионов семги и горбуши определяется антибиотической активностью желтка, перивителлиновой жидкости и зародышевых тканей У предличинок и личинок семги и горбуши идег формирование комплекса воспалительных явлений с одновременным замедлением темпов регенерационных процессов У сеголетков и годовиков семги и горбуши комплекс воспалительных процессов сформирован Воспалительная реакция локализована.

Научная новизна работы. Впервые выявлены основные тенденции динамики развития клеточных и тканевых реакций семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза при применении оригинальной методики, позволяющей в одном и том же эксперименте дать как характеристику защитных реакций и регенерационных процессов в районе повреждения, так и гуморальных факторов (антибиотическая активность) иммунной системы рыб. Установлена главная особенность реактивности эмбриональных тканей - отмирание клеточных элементов, непосредственно соприкасающихся с повреждающим агентом Инородное тело не вызывает волны повреждения тканей, как у молоди У предличинок горбуши и семги фагоцитарные реакции осуществляются клеточными элементами эпителиального регенерата и единичными клетками крови, эндотелия и рыхлой соединительной ткани Лейкоциты появляются на поздних этапах воспаления

и не образуют лейкоцитарного вала У сеголетков и годовиков семги комплекс воспалительных процессов сформирован. Темпы регенерационных явлений снижены Регенерация поврежденных тканей становится этапом, завершающим воспаление

Практическая значимость работы. Результаты работы по динамике онтогенетической изменчивости защитных реакций у семги и горбуши послужат решению практических задач, таких как промышленное лососеводство, в частности, для повышения выживаемости молоди рыб и разработки лечебно-профилактических мероприятий при их товарном выращивании и в условиях разведения на рыбоводных заводах

Знание закономерностей функционирования иммунной системы проходных рыб при воздействии на них биотических и абиотических факторов среды могут служить основой при разработке вопросов управления устойчивостью рыб к инфекционным и инвазионным болезням Результаты исследований используются в МГТУ в курсах лекций и на практических занятиях по дисциплине «ихтиология»

Личный вклад автора: Участие в проведении экспериментов, сборе и обработке гистологических материалов в период 2001-2007 г.г. Автором лично проведен анализ и обобщение материалов по клеточной и тканевой иммунологической реактивности у семги и горбуши Опыты на тихоокеанской горбуше были проведены Н Г Журавлевой и переданы автору для гистологического анализа

Апробация работы. Основные материалы работы докладывались и обсуждались на следующих международных научно-практических конференциях и симпозиумах

Международная научно-техническая конференция «Наука и образование» в 2003,2004, 2005,2006 и 2007 гт, г. Мурманск; Международный симпозиум «Химия и биология морских организмов», 2003г., о Крит, Греция,

П Международная научно-практическая конференция «Образование и наука - без границ», 2005г, (Днепропетровск (Украина) - Белгород (Россия),

Ш Международная научно-практическая конференция «Научный потенциал мира», 2006г., г. Днепропетровск (Украина).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе статья в издании, рекомендованном ВАК РФ, одна работа опубликована в международном рецензируемом журнале

Объем и структура работы. Работа состоит из введения, четырех глав, обсуждения, выводов и списка литературы Общий объем работы 211 страниц, она проиллюстрирована 63 рисунками, включая 49 цветных и черно-белых микрофотографий, и 4 таблицами Список литературы состоит из 195 наименований, в том числе 69 - иностранных авторов.

Благодарности. Автор выражает признательность и искреннюю благодарность заведующей кафедрой биоэкологии МГТУ, доктору

ОН*. Л lí «.¿^ мI i. jldVK. Журавлевой Нонне Георгиевне за постоянную помощь и руководство научной работой Низкий поклон и светлая память Е. В Праздникову, чьи научные идеи стали основой этой работы Особая признательность за помощь в организации и проведении экспериментов директору рыбоводного завода «Лесной» (Сахалинская обл) Князевой Кармен Александровне, рыбоводам Кандалакшского экспериментального лососевого завода (Мурманская обл) и доценту Н. А Пахомовой за поддержку и высказанные замечания

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность работы, сформулирована цель и поставлены задачи, показана научная новизна и практическая значимость исследования.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В работе приведен анализ литературных данных отечественных и зарубежных авторов по защитно-приспособительным реакциям, возникающим у рыб при повреждающем действии среды, «барьерная» функция кожных покровов, развитие воспалительной реакции, фагоцитоз, врожденные гуморальные факторы иммунитета, кл-точная и тканевая реактивность

Приведены данные о роли лимфоцитов, плазматических клеток, макрофаюв, гранулоцитов в становлении и развитии иммунных реакций у рыб Описана сезонная и онтогенетическая функциональная активность иммунной системы рыб

Содержатся сведения о роли природных и техногенных факторов среды, различных кормовых добавок, лекарственных препаратов в регулировании иммунореактивности рыб

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Материалом для исследования служили атлантический лосось Salmo salar (L) и горбуша Oncorhynchus gorbusha (Walb) на ранних стадиях онтогенеза эмбрионы на стадии пигментации глаз, предличинки и личинки, сеголетки и годовики

Сведения о проведенных сериях опьпов, а также количестве использованного в эксперименте материала и анализе гистологических срезов приведены в таблице 1

Экспериментальные работы проводили на Кандалакшском, Умбском и Тайбольском рыбоводных заводах Мурманской области (рис 1) и на рыбозаводе «Лесной» Сахалинской области (рис 2)

Исследование антибиотических свойств перивителлиновой жидкости и желтка в икринках с развивающимися эмбрионами проводили по той же схеме, что и в случае изучения антибиотических свойств тканей молоди

Таблица 1

Объем экспериментального материала и содержание работ, проведенных в 2001-2007 гт

№ п/ Характеристика опыта эмбрионы пгг предличинки пгг ЛИЧИНКИ пгг сеголетки шт ГОДОВИКИ шт

п «3 в горбуша а «в в !

1 4 1 и о о Ю & 1 £ S 8 1

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 и 12

1 Изучение антибиотической активности тканей 432 214 199 207 161 148 28 32 15 21

2 Введение простерилизовавных стеклянных (пирехсовых) микроигл с кармином 158 440* Ш 126

3 Действие электрического тока 144 260 54 108 - - - - - - - -

4 Введение простерилизованной хлопчатобумажной нити с кармином 123 328 435 282 382 205 209 ш 356 122 312 26 215 32 242 15 212 41 310

5 Введение простерилизованной хлопчатобумажной нити с кармином (содержание в темноте) 24 312 12 248

6 Введение простерилизованной хлопчатобумажной нити с кармином (освещенность, 500 лк) 26 152 20 310

7 Введение простерилизованной хлопчатобумажной нити с кармином, инфицированной Bacillus subtilis 167 215 213 112 210 120 28 109 48 269 22 312 45 299

8 Введение простерилизованной хлопчатобумажной пяти с кармином объектам, предв обр -малахитовой зеленью - - 358 120 385 115 260 290 280 150 - - - -

- формалином - - 255 175 286 120 220 212 150 90 -• - - -

- пенициллином - - 322 115 321 111 250 340 310 160 - - - -

9 Введение простерилизованной хлопчатобумажной нити с кармином, инфицированной микроорганизмами от погибших эмбрионов 112 95 12Q 150

* в знаменателе - количество гистологических срезов

Простерилизованную хлопчатобумажную нить продевали через оболочку икринки Нить извлекали из икринки через различные промежутки

Рис 1 Карта-схема отбора проб на Рис 2 Карта-схема отбора

рыбоводных предприятиях проб на о Сахалин

Мурманской области

времени (5 мин., 1, 3, 6, 12, 24 часа) после введения и помещали в чашку Петри на поверхность агара с предварительно засеянными культурами бактерий (Micrococcus lysodeicticus, Sarcina lutea, Mycobacterium album, Salmonella pullorum, Staphylococcus aureus) Чашки Петри помещали в термостат и инкубировали при 30°С

Повреждение эмбрионам наносилось в область формирующегося хвостового стебля Личинкам семги и горбуши под кожу хвостового стебля при помощи сосудистых игл вводили простерилизованные хлопчатобумажные нити Для выявления демонстративного фагоцитоза каждую нить пропитывали взвесью кармина Стерилизацию проводили в сушильном шкафу при температуре 180° в течение 20 минут Перед введением в ткани нити смачивали в стерильном физиологическом растворе. Нити вводили иглодержателем через все ткани в дорзо-вентральном направлении в одни и те же анатомо-топографические зоны хвостового стебля (рис 3) При «септическом» повреждении использовали простерилизованные нити, инфицированные суточной и 5-суточной культурой сенной палочки Bacillus subtilis, а также взвесью микроорганизмов, взятых от погибших в инкубационном аппарате эмбрионов. В экспериментах на эмбрионах и личинках рыб (в связи с малыми размерами объектов) в качестве инородного тела использовали тонкие стеклянные (пирексовые) микроиглы диаметром от 0,05 до 0,1 мм Введение стеклянных микроигл в ткани эмбрионов и личинок проводили под

Рис 3 Область нанесения травмы у предличинки горбуши

контролем бинокулярной луны. В опытах по действию электрического тока были использованы икринки семги на стадии пигментации глаз, каждую икринку помещали между электродами, через которые пропускали переменный ток 1=10мА в течение 20-22 секунд. Материал фиксировали через 5 минут, 1, 3, 6, 12 часов, 1, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30 суток после операции. В качестве фиксатора использовали жидкость Буэна, 10% нейтральный формалин, абсолютный спирт, смесь Ценкера, Для приготовления гистологических препаратов использовали общепринятые методики (Ромене, 1953; Роскин, Левинсон, 1957), Математическую обработку материалов проводили с использованием общепринятых статистических методов (Терентьева, Ростова, 1977). Различия считали достоверным при превышении 95% уровня значимости.

Глава 3. ЗАЩИТНЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ И ТКАНЕВЫЕ РЕАКЦИИ У

СЕМГИ

3.1. Защитные реакции у эмбрионов семги

3.1.1. Антибиотическая активность зародышевых жидкостей

Защитные свойства у эмбрионов семги зависят от антибиотической активности желтка, пери вителлинов ой жидкости, зародышевых тканей, а также от формообразовательных процессов, наступающих при повреждении.

Характерно, что на более ранних этапах эмбрионального развития до появления кровеносной системы антимикробная активность эмбриональных жидкостей выражена более отчетливо.

3.1.2. Клеточные и тканевые реакции

Через 5 минут после травмы по краю раны наблюдаются единичные поврежденные клетки с пикнотическими ядрами, дезинтегрированные клетки эпидермиса (рис.4).

Рис.4. Ткани эмбриона семги через 5 минут после операции. 1 - эпидермис, 2 -раневой канал. Триоксигемате ин Гашена. Увел.: об. 45х, ок. Юх.

Отмечается обособление отдельных клеток в незародышевой эктодермы и мезенхимы, смещение некоторых ядер перибласта в глубокие участки желтка.

Через 1 сутки в эктодерм алы 1ЫХ клетках зародыша усиливается набухание и слущиэание поверхностных клеток. Вблизи раневого канала поверхностные плоские клетки эктодермы приобретаю)' грушевидную форму и выступают над поверхностью эпителия (рис. 5).

Через 10 суток около раневого какала нет скоплений фагоцитов, как в тканях эмбриона, так и во внезародышевых тканях. Местами слой перибласта под эмбрионом отсутствует, и эмбриональные ткани прямо соприкасаются с желтком.

Рис. 5. Ткади эмбриона семги через 1 сутки после операции. Обособленные отдельные клетки внезародышевой эктодермы. Окраска по Маллори. Увел.: об 100х, ок. 10х.

Разрушенные участки перибласта не восстанавливаются. В то же время во внезародышевой эктодерме, в тканях зародыша постоянно наблюдаются митозы.

3.1.3. Клеточные и тканевые реакции у эмбрионов семги при действии электрического тока

В первые часы опыта у эмбрионов семга ядра поврежденных клеток вытягиваются по направлению действия тока. Заметно накопление тканевой жидкости между эктодермой и подлежащими тканями, ведущее к отслаиванию эктодермального слоя.

Через 12 часов наблюдается распад ДНК ядер в эмбриональных и во внезародышевых тканях, в ядрах перибласта. Видны участки отслоившейся эктодермы зародыша и эктодермального слоя бластодиска, расположенного на желтке (рис, 6).

Рис. 6. Эмбрион ссмги через 12 часов после опыта. Отслаивание

эктодермального слоя. Общая картина эмбриона. Окраска по Маллори. Увел.: об. 11х, ок. 10х,

В очаге повреждения происходит слущивание единичных эктодермальных клеток. Ядра перибласта вытягиваются и увеличиваются в размерах. Лизис и распад тканей хвостового стебля не сопровождаются появлением фагоцитов или других блуждающих клеток. На границе с отмирающими элементами хвостового стебля в мало поврежденных мезодерм альных клетках встречаются митозы. Заметно накопление жидкости в тканях эмбриона и во внеэмбриональных образованиях.

Заживление повреждения у эмбрионов семги осуществляется без

существенного участия клепок фагоцитов. Поврежденные и

неклеточные структуры быстро дшируются благодаря действию ферментов, выделяемых разрушенными клетками.

3.2. Защитные реакции у предличинок я личинок семги 3.2.1. Реакция тканей хвостового стебля на введение стерильного инородного тела

У пред личинок и личинок семги в первые минуты после травмы в раневом канапе видны разрушенные мышечные волокна, небольшое количество эритроцитов. Встречаются единичные полиморфноядерные лейкоциты и лимфоциты с большим количеством РНК в цитоплазме (рис. 7).

Рис. 7. Ткани предличинки семги через 5 минуг после операции. Экстравазаты в области раневого канала. 1 - эритроциты, 2 — пиронинофил ьны й лейкоцит, 3 — разрушенные мышечный волокна. Пироннн - метиловый зеленый. "Увел.: об. 100х, ок.10х.

Мышечные волокна в области рапсвого канала отечны. В поврежденных поперечно-полосатых мышцах отмечены гранулы гликогена. Клетки баз ал ьн ого слоя многослойного плоского эпителия содержат большое количество цитоплазм этической РНК, Единичные отмирающие эпителиальные клетки накапливают в цитоплазме гранулы кармина.

Через 12 часов эпителий, пограничный с раневым каналом, утолщен, имеет эктоплазматические выросты на поверхности. Отдельные группы росткового слоя эпителиальньос клеток содержат в цитоплазме мелкие гранулы РНК. В раневом канал] е видны эритроциты без следов дегенеративных изменений. Среди излившихся клеток крови заметны единичные лимфоциты и полиморфноядерные лейкоциты. Эпителиальные клетки росткового слоя фагоцитируют зерна кармина, детрит. Необходимо отметить, что через 12 часов в выходных участках раневого канала обнаруживаются единичные микроорганизмы, проникающие из воды.

Чере{ двое суток отмечается появление крупных эпителиальных клеток с многочисленными гранулами кармина, обрывками детрита, захваченными микроорганизмами.

Спустя 7-10 суток эпителий в области инородного тела утолщен и разрыхлен. В участки эпителия, лишенные базальной мембраны, проникают кровеносные капилляры. В центре раневого канала находятся фагоциты, дезинтегрированные клетки, эпителиальный синцитий. Вся эта масса клеток прорастает капиллярами, новообразованными поперечно-полосаты ми

мышечными волокнами

Динамика клеточного состава крови в раневом канале у предличинок семги представлена в таблице 2

Таблица 2

Качественная характеристика клеточного состава крови

Время с момента повреждения эритроциты лейкоциты полибласты

лимфоциты полиморфноядерные лейкоциты моноциты

1 2 3 4 5 6

5 минут + ед ед - -

1 час +++ ед ед - -

3 часа ++ ед ед - -

6 часов ++ ед ед - -

12 часов + ед ед - -

1 сутки + ед ед - -

3 суток ед + ед - -

7-10 суток ед +++ ++ + +

15-20 суток ед +++ ++ - ед

28-30 суток ед +++ + - -

Условные обозначения - отсутствие клеток, ед единичные клетки, + группа клеток, ++ клеточные скопления, +++ крупные клеточные скопления

По данным таблицы 2 отчетливо видно, что «пик» воспаления у предличинок приходится на 7-10 сутки после нанесения травмы

Таким образом, у предличинок и личинок все большее значение в депонировании и обезвреживании микроорганизмов начинают приобретать специализированные клетки соединительной ткани и клетки крови. 3.2.2. Защитные клеточные и тканевые реакции у предличинок и личинок семги, обработанных на стадии пигментации глаз растворами малахитовой зелени, формалином и пенициллином

Отчетливо видно, что уже в первые сутки после повреждения смещение эпителия в раневой канал идет более медленно, чем у предличинок, предварительно не обработанных малахитовой зеленью и формалином Элиминативная функция эпителия снижена Часть детрита лежит свободно в раневом канале Среди эпителиальных клеток нередко наблюдаются дегенерирующие элементы

Следовательно, использование малахитовой зелени и формалина тормозит элиминативную и регенеративную функцию эпителия, имеющую в защитных тканевых реакциях зародышей большое значение

В опытах с предличинками семги, предварительно обработанных растворами пенициллина, отмечено повышение ее жизнеспособности

Через 6-12 часов после начала опыта выявлено значительное количество эпителиальных клеток, богатых гранулами цитоплазматической РНК Врастание эпителия вглубь раневого канала шло весьма интенсивно

Обнаруживался активный фагоцитоз эпителиальными клетками детрита и кармина.

Спустя сутки большая часть раневого канала занята сместившимся многослойным пластом эпителия. Детрит и зерна кармина элиминированы эпителиальными клетками.

Одной из особенностей течения ранних этапов воспаления у предличинок семги после предварительной обработки икры пенициллином является то, что в раневом канале до 1 - 2 суток нет микроорганизмов, что связано с быстро протекающими процессами смещения эпителия в раневой канал.

Таким образом, пенициллин в значительно большей степени снижает гибель икры и не оказывает заметного повреждающего действия на развитие икры семги, повышает жизнеспособность предличинок и личинок.

3.3. Защитные клеточные и тканевые реакции у сеголетков и годовиков

семги

3.3.1. Реакция тканей хвостового стебля на введение простермлизованно! о инородного тела

Приведены данные по строению кутиса у интактных особей этого возраста в норме.

У семги в этом возрасте многослойный плоский эпителий состоит из 57 эпителиальных слоев, среди которых в 1-2 ряда располагаются слизистые клетки {рис. 8).

Рис. 8. Годовик семги. Срез эпителия хвостового стебля, 1 - базальньш слой эпителиальных клеток; 2 - ядра поверхностных эпителиальных клеток; 3 слизистые клетки. ШИК-реакция. Триоксигсматеин Ганэена. Увел.: об. 100х, ок.1 Ох.

Между соединительной тканью и эпителием встречаются крупные пигментные клетки (рис.9). В эпителиальных клетках реакция Фельгеиа выявляет скопления ДНК по периферии ядерной оболочки Обычно ядрышко РНК окружено тонким ободком ДНК.

У сеголетков и годовиков семги через 5 минут после повреждения в раневом канале наблюдаются излившаяся кровь, волокна нитки с гранулами кармина, обрывки поврежденных поперечно-полосатых мышц и единичные эпителиальные клетки. К поверхности эритроцитов «прилипают» гранулы кармина.

Рис. 9, Годовик семги. Срез кожи хвостового стебля. 1 - многослойный плоский эпителий, 2 - пигментная клетка, 3 - ШИК - положительные субстанции в соединительной ткани, подстилающей многослойный плоский эпителий. 111И К-реакпия. Триоксигематеин Гам зела Увел.: об.ЮОх, ок. Шх.

В тех случаях, когда в артерию или вену хвостового стебля попадают гранулы кармина, они отмечаются в цитоплазме единичных сегментоядерных лейкоцитов. Поврежденные поперечно-полосатые мышечные волокна утолщены.

Ядра многослойного плоского эпителия кожи около инородного тела увеличены в размерах. На поверхности эпителия имеется узкая кайма слизи. Вблизи раневого канала количество слизистых клеток уменьшено. Пигментные клетки в раневом канале разрушаются.

Через 1 нас после повреждения в эпителиальных слоях раневого канала видны крупные слизистые клетки с большим количеством секрета (рис. 10).

Рис. 10. Годовик семги. Многослойный плоский эпителий через 1 час после введения стерильной нитки с кармином. ШИК-реакция. Триоксигематеин Ганзена. Увел,: об.ЮОх, ок. 10х.

Встречаются клетки с цитоплазмой, окрашивающейся в розоватые тона Шифф-йодной кислотой, и гранулами пигмента в цитоплазме. На расстоянии около 1 см от раневого капала встречаются единичные эпителиальные клетки с большим количеством РНК в цитоплазме.

Уже в первые 3 часа после операции между эпителием и закладкой чешуи, в рыхлой соединительной ткани, отмечается значительное накопление тканевой жидкости под эпителием.

Через 12 часов после повреждения по краю раны эпителий утолщается как за счет отечности эпителиального слоя, так и за счет увеличения количества эпителиальных слоев. В эпителии видны многочисленные митозы. Много отмирающих эпителиальных клеток. Около поверхности некоторых эпителиальных клеток находятся гранулы кармина, однако в цитоплазме кармина пет. В многослойном плоском эпителии встречаются единичные лейкоциты с дольчатыми ядрами, лимфоциты. Интенсивность

окраски Шифф-йодиой кислотой соединительной ткани и раневого канала усиливается Особенно многочисленны подиморфноядерные лейкоциты в отечной жидкости между закладкой чешуи и подстилающей соединительной тканью с гранулами мукополисахаридов в цитоплазме Около разрушающихся мышц встречаются полиморфноядерные лейкоциты, участвующие в лизисе мышечных волокон

В первые сутки наблюдается утолщение, и перемещение эпителия кожи в раневой канал Появляются эпителиальные фагоциты

Фагоцитоз зерен кармина и детрита единичными лейкоцитами крови у молоди отмечается через трое суток Обнаруживаются небольшие группы микроорганизмов Наблюдается интенсивный рост фагоцитов, относящихся к полиморфноядерным лейкоцитам

Через 7 суток фагоцитоз зерен кармина эпителиальными клетками, наблюдается реже, чем в ранние сроки наблюдения В очаге воспаления видны многочисленные полиморфноядерные лейкоциты, часть из которых фагоцитирует гранулы кармина, детрит Встречаются крупные фагоциты -клетки с ядром бобовидной формы и мелкими ядрышками В раневом канале видны эритроциты с пикнотическими ядрами, редко - лимфоциты

Спустя 10 суток после повреждения эпителий образует многослойный бугорок и по раневому каналу проникает глубоко в ткани хвостового стебля Во всех участках эпителия видны единичные полиморфноядерные лейкоциты и лимфоциты В глубине раневого канала эпителиальный регенерат обрастает инородное тело так, что полиморфноядерные лейкоциты и другие элементы, фагоцитирующие детрит и кармин, остаются между эпителием и подлежащими тканями Около нити с кармином много гифов грибов, глубже в раневом канале видны лишь единичные микроорганизмы Следовательно, эпителиальная «защита» оказывается на 10-сутки развития воспаления эффективной.

Необходимо отметить, что сравнительно с соответствующими процессами, протекающими у предличинок, у сеголетков и годовиков семги эпителий меньше участвует в элиминации инородных частиц

Спустя 20-30 суток в центральных участках раневого канала около волокон нитки находится эпителиальный регенерат Вокруг эпителиальной «капсулы», внутри которой находятся волокна нитки, располагается клеточный вал из полибластов, полиморфноядерных лейкоцитов и лимфоцитов Имеются незрелые и зрелые формы плазматических клеток В области повреждения формирующаяся чешуя утолщена

Таким образом, эпителий, клетки соединительной ткани и крови у молоди семги успешно задерживают продвижение грибов и бактерий в организм У молоди семги воспалительная реакция оказывается более локализованной, чем у предличинок

3.3.2. Реакция тканей хвостового стебля на введение инфицированного инородного тела

После введения в ткани сеголетков и годовиков семги сенной палочки уже через 1 час отмечается отслаивание поверхностных клеток от

эпителиального пласта. Количество эритроцитов в раневом канале не увеличивается, что связано с резким сокращением мышц хвостового стебля. Тела сенной палочки проникают по межтканевым щелям на небольшое расстояние от раневого канала. В это же время отмечаются единичные эпителиальные фагоциты с телами сенной палочки в вакуолях цитоплазмы.

Через 6 - 12 часов после введения инородного тела наблюдается незначительное смещение эпителия. Единичные микроорганизмы в раневом канале незначительно набухают и перестают окрашиваться, другие на границе с поврежденными тканями образуют мелкие, хорошо окрашивающиеся гранулы - споры. Введение микроорганизмов вызывает большую отечность рыхлой соединительной ткани. Бациллы чаще разрушаются в тех участках, где имеются внесосудистые эритроциты. Отмечается торможение врастания эпителиального регенерата в раневой канал. Разрушение сенной палочки на ранних этапах воспаления происходит вне цитоплазмы клеток.

По истечении 5 суток в многослойном эпителии на границе с раневым каналом видны эпителиальные фагоциты с кармином, детритом и иногда с телами бацилл в цитоплазме, В цитоплазме единичных лолиморфноядерных лейкоцитов встречаются фагоцитированные бациллы. Около поврежденных мышц рыхлая соединительная ткань отечна и инфильтрирована клетками крови.

Через 15-20 суток не наблюдается существенных отличий от защитных явлений после введения простершшзованного инородного тела, за исключением незначительного торможения регенеративных процессов и большего количества фагоцитов в раневом канале. Вокруг инородного тела находятся не только многочисленные лимфоциты, но и полиморфноядерные лейкоциты, полибласты, фибробласты и единичные плазматические клетки.

Спустя 3 месяца эпителиальный регенерат полностью выстилает раневой канал, и в раневом канале между эпителием и соединительной тканью формируется базальная мембрана (рис. 11).

Таким образом, в этой серии опытов усиливается отслаивание поверхностных клеток от эпителиального пласта. Уменьшается участие эпителиального регенерата в элиминации инородных частиц. В защитных реакциях участвуют ШИК-положительные вещества, частично

гие клеточные элементы.

Рис. 11. Годовик семги спустя 3 месяца после операции. 5-ти суточная культура сенной палочки. Базальная мембрана около эпителиального регенерата. Окраска по Маллори. Увел.: об.45х, ок, 10х.

3.3.3. Реакция тканей хвостового стебля на введение стерильного инородного тела (содержание в темноте)

У сеголетков и годовиков семги через 3 часа после повреждения эпителий около рапы несколько тоньше, чем в норме. На поверхности эпителия много слизи. Находящаяся в раневом канале жидкость, а также прослойки рьшюй соединительной ткани дают слабо метахроматическую окраску после обработки толуидиновым синим и слабо ШИК-положительную реакцию.

Спустя 1 сутки после начала опыта эпителий вблизи инородного тела утолщен. Среди поврежденных мышц встречаются экстравазаты с эритроцитами на разных стадиях разрушения и единичными лимфощггами. Сохраняется гиперемия кровеносных сосудов вблизи раневого канала. Около закладки чешуи иногда отмечаются единичные пол им ор фноядерны е лейкоциты, В экссудате видны ШИК-положительные гранулы.

Через 3-5 суток поврежденные поперечно-полосатые мышечные волокна располагаются более рыхло вследствие накопления отечной жидкости (рис. 12). Отмечаются первые следы врастания эпителия в раневой канал. Повышается количество РНК в цитоплазме эпителиальных клеток. Встречаются единичные эпителиальные клетки и полиморфно ядерные лейкоциты, фагоцитирующие 1ранулы кармина. В экссудатах около закладки чешуи увеличивается количество полимофноядерных лейкоцитов.

Ряс, 12. Годовик семги спустя 3 суток после операции. 1 - мышечные волокна, 2 - дезинтегрированные эпителиальные клетки. Содержание в темноте. Триоксигематеин Гашена. Увел.: об. 100х, ок. 10х.

При содержании сеголетков и годовиков семги в темноте воспалительные явления протекают медленнее, чем в обычных условиях рыбоводного завода. В первые сутки после повреждения экстравазаты наблюдаются реже, в очаге повреждения процессы выселения блуждающих клеток идут медленнее. Несколько тормозятся процессы фагоцитоза инородных частиц и детрита. Однако уже через 3-5 суток после начала опыта реактивность тканей молоди семги, содержавшейся в темноте, не отличается от той, которая наблюдается при содержании в обычных условиях.

3.3.4. Реакция тканей хвостового стебля на введение стерильного инородного гела (содержание »а свету, 500лк)

Через 3 часа после повреждения у сеголетков и годовиков ссмги в области вхождения нитки в эпителий видны дистрофически измененные эпителиальные клетки. Увеличена отечность эпителия. Чаще видны

блуждаю;.л¿точные элементы. Б раневом канале, сравнительно с опытами предыдущей серии, несколько меньше крови. Поперечно-полосатые мышцы около раневого канала дольше сохраняются в сокращённом состоянии. В полости около закладки чешуи виден экссудат с мелкими ШИК-положительными гранулами,-в то время как при содержании в темноте экссудат появляется позже. На ранних этапах воспаления (до 5 суток) тормозятся элиминативные и регенеративные функции эпителия (рис. 13) и усиливается участие клеток крови а воспалительной реакции.

Рис. 13. Годовик семги спустя 5 суток после операции. Содержание на свету. Край эпителия без врастания в раневой канал. Шифф-йодная кислота. Увел.: об.ЮОх, ок 10х.

При содержании сеголетков и годовиков семги в освещенных аквариумах воспалительные явления, развиваются быстрее, чем у молоди, содержащейся в темноте. Регенеративные явления тормозятся. В раневом канале малочисленны эпителиальные фагоциты, но много полиморф но ядерных лейкоцитов.

Изменение соотношения отдельных компонентов воспалительного процесса ведет в ряде случаев к общему снижению реактивности молоди рыб и проникновению микроорганизмов в раневой канал.

Глава 4. ЗАЩИТНЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ И ТКАНЕВЫЕ РЕАКЦИИ У

ГОРБУШИ

4.1. Клеточные и тканевые реакции у эмбрионов горбуши

Как уже упоминалось выше в главе «Материалы и методы», опыты были проведены на эмбрионах, предличинках и личинках горбуши, обитающей в нативном ареале (о. Сахалин), а также опыты на эмбрионах, предличинках и личинках горбуши, интродуцированной в Белое и Баренцево моря. Следует отметить, что защитные реакции у тихоокеанской и интродуцированной горбуши на ранних стадиях онтогенеза сходны. Однако в нативном ареале у предличинох и личинок горбуши механизмы иммунологической резистентности более четко выражены, воспалительные реакции и регенерация тканей протекают в ускоренном темпе.

Кроме того, следует подчеркнугь, что фагоцитарные и воспалительные явления, возникающие у эмбрионов горбуши при повреждении сходны с аналогичными процессами у эмбрионов семги.

4.2. Защитные реакции у предличинок горбуши

4.2.1. Фагоцитарные и воспалительные реакции при введении стерильного инородного тела

Защитные реакции у предличинок и личинок семги и горбуши имеют много общего и мы не будем подробно останавливаться на этом. Однако отмечено, что у горбуши интенсивнее происходит сдавливание поперечнополосатых мышц в первые минуты после травмы (рис. 14).

Рис, 14. Ткани личинки горбуши через 5 минут после операции. 1 - ранеаой канал, 2 - гранулы кармина, 3 -клетки крови, 4 - поврежденные поперечнополосатые мышечные волокна. Окраска по Маллори. Увел.: об. 45х, ок. 10х.

4.2.2. Фагоцитарные и воспалительные реакции при введении инфицированного инородного тела

Депонирование инородных частиц у предличинок горбуши при введении «инфицированного» инородного тела оказывается несовершенным: зерна кармина и сенная палочка проникают по межтканевым щелям. Отграничение инородных частиц и микроорганизмов осуществляется главным образом за счет эпителиального регенерата, хотя к фагоцитозу способны и альтерированиые соединительные элементы, и лейкоциты крови.

По прошествии 7-15 суток у предличинок горбуши наступает лейкоцитарная инфильтрация тканей в очаге повреждения.

4.2.3. Фагоцитарные и воспалительные реакции при введении инородного тела, инфицированного микроорганизмами от погибших эмбрионов

В этой серии проведенных опытов у предличинок и личинок горбуши обнаруживается не только замедление сокращения поперечно-полосатых мышечных волокон по краю раневого канала, но и разрушение стенок кровеносных сосудов, появление экстравазатов,

В первые сутки в раневом канале сапролэткия гибнет, и интенсивно развиваются бактерии.

На поздних этапах (7 - 30 сутки) воспаление протекает сходно с тем, что описано при «асептическом» воспалении. Наблюдается изменение состава клеточных элементов крови, и более раннее выселение лейкоцитарных элементов в раневой канал. Следовательно, у предличинок и личинок горбуши наиболее реактивной структурой, так же как и при «асептическом» воспалении, оказывается регенерирующий эпителий. Воспалительная реакция проявляется на более ранних сроках опыта.

4.2.4. Фагоцитарные и воспалительные реакции у нредличинок горбуши, предварительно обработанных малахитовой зеленью, при введении инородного тела, инфицированного микроорганизмами от погибших эмбрионов

В первые часы после начала опыта несколько увеличивается, сравнительно с предыдущей серией экспериментов, количество некротизированных и дезинтегрированных тканевых элементов по краю раневого канала, особенно в эпителии

По прошествии двенадцати часов в раневом канале заметны единичные лейкоциты, причем общее количество внесосудистых лейкоцитов больше, чем в других сериях опытов

Обработка предличинок горбуши малахитовой зеленью вызывает отчетливое подавление защитной реактивности зародышей Тормозится элиминативная функция эпителия, чю ведет к инфицированию зародышей и во многих случаях к их гибели Необходимо отметить и изменение состава клеточных элементов крови, а также более раннее выселение и накопление лейкоцитарных элементов в раневом канале

4.3. Защитные реакции у сеголетков и годовиков горбуши Развитие воспалительных, фагоцитарных и регенеративных процессов у сеголетков и годовиков горбуши идентичны тем, которые были описаны у семги Однако выявлены и отличия

У личинок и молоди горбуши все большее значение в депонировании и обезвреживании микроорганизмов приобретают специализированные клетки соединительной ткани и клетки крови У годовиков горбуши воспалительная реакция сформирована Первые следы перемещения многослойного эпителия в раневой канал отмечаются через сутки после повреждения С этим моментом совпадает и появление эпителиальных фагоцитов

Фагоцитоз зерен кармина и детрита единичными лейкоцитами в крови у молоди отмечается через трое суток

На поздних сроках воспаления (через 10-15 суток) у молоди горбуши имеется типичный лейкоцитарный вал, и эпителиальный регенерат растет по краю лейкоцитарного слоя

Дальнейшее развитие фагоцитарных и воспалительных реакций у сеголетков и годовиков горбуши происходит аналогично реакциям, прослеженным у семги

ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты экспериментов по изучению антибиотической активности эмбрионов семги и горбуши показали, что перивителлиновая жидкость и жидкая часть желтка содержат антимикробные субстанции Полученные данные хорошо согласуются с результатами опытов по изучению антибактериальной активности икры сиганов 5 гоясеясепя и 5 guítatus (ШяаяЬцпа У й а1, 2001)

В тканях развивающихся эмбрионов семги и юрбуши постоянно

наблюдаются фагоцитарные явления, связанные с перемещением запасного питательного вещества - желтка из желточного мешка в закладки органов зародыша При повреждении эти физиологически обусловленные фагоцитарные явления усиливаются

Введение стерильного инородного тела в хвостовой стебель предлшинок и личинок семги вызывает разрушение мышечных элементов и отечность тканей, окружающих раневой канал Через сутки после повреждения отек уменьшается Аналогичные реакции наблюдаются и у предличинок горбуши Депонирование и обезвреживание инородных частиц осуществляется посредством изменения тканей (воспалительный отек, набухание соединительно-тканных структур, фибринообразование) Механическое отграничение повреждающего агента обеспечивается уже в первые часы после травмы перемещением в раневой канал эпителиального слоя кожи. Процессы регенерации нарастают до 15 суток после травмирования и сопровождаются интенсивным размножением базальных клеток эпителия

При введении предличинкам инородного тела, «инфицированного» суточной культурой сенной палочки Bacillus subttlis в области «септического» воспаления наиболее реактивной структурой, так же как и при «асептическом» воспалении, оказывается регенерирующий эпителий. В этой серии опытов у предличинок семги и горбуши ускоряются процессы выселения лейкоцитов, и накопления их в области раневого канала

У сеголетков и годовиков семги и горбуши уже в первые минуты около раневого канала выявляется зона поврежденных клеточных элементов, в которых резко уменьшается количество ядерной и цитоплазматической РНК В процессе развития воспалительного процесса эпителий, особенно его базальные слои, секретирует вещество, содержащее мукополисахариды, которое тормозит развитие микроорганизмов.

В отличие от предличинок у сеголетков и годовиков повреждение поперечно-полосатых мышц в одном участке обычно не ведет к гибели всего мышечного сегмента Таким образом, у сеголетков и годовиков семги и горбуши воспалительная реакция оказывается более локализованной, чем у предличинок. Появление в раневом канале живых тел сенной палочки уменьшает участие эпителиального регенерата в элиминации инородных частиц В элиминации инородного тела (сенной палочки) участвуют ШИК-положительные вещества, частично эпителиальный регенерат и другие клеточные элементы

При содержании подопытных сеголетков и годовиков семги в темноте воспалительные явления протекают медленнее, чем при содержании в обычных условиях рыбоводного завода Однако уже через 3-5 суток после повреждения реактивность тканей молоди семги, содержавшейся в темноте, не отличается от реакций, которые наблюдаются при содержании в обычных условиях. Содержание в освещенных аквариумах сеголетков и годовиков семги вызывает в первые сутки после повреждения заметные отклонения в ходе воспалительных процессов. В первые часы после операции усиливается

ряд ломх ьн^псь вс^паиепия тек, гиперемия кровеносных сосудов Торможение элиминативной и регенеративной функций эпителия на ранних этапах воспаления ведет к снижению реактивности

Предварительная кратковременная обработка икры семги и горбуши на стадии пигментации глаз пенициллином усиливает элиминативную функцию эпителиальной ткани предличинок. Использование же малахитовой зелени и формалина отчетливо тормозит элиминативную и регенеративную функцию эпителия, имеющую в защитных тканевых и клеточных реакциях зародышей большое значение. Следовательно, ряд применяемых рыбоводами препаратов, губительно действующих на грибы и бактерии, далеко не безвреден для эмбрионов и личинок семги и горбуши. Полученные данные согласуются с имеющимися в литературе сведениями об опасности применения в рыбоводной практике малахитовой зелени (Казаков, 1982) Использование любых веществ, в том числе и антибиотиков, в практике рыборазведения должно основываться и на сравнительно-иммунологических исследованиях с учетом качественного своеобразия защитных реакций на разных стадиях онтогенеза.

Анализируя полученные материалы необходимо отметить, что тканевая реактивность семги и горбуши после действия одних и тех же повреждающих факторов существенно меняется на разных этапах онтогенеза

ВЫВОДЫ

1. Защитная реактивность эмбрионов семги и горбуши определяется антибиотической активностью желтка, перивителлиновой жидкости и зародышевых тканей Заживление обусловлено быстро протекающими регенеративными процессами

Электрический ток вызывает отмирание большого комплекса взаимосвязанных структур Реактивность эмбриональных тканей при этом та же, что и после механических повреждений.

2 У предличинок и личинок семги и горбуши идет формирование комплекса воспалительных явлений с одновременным замедлением темпов регенерационных процессов Регенерационные явления становятся этапом, завершающим реакцию организма на повреждение Фагоцитарные реакции осуществляются при помощи клеточных элементов эпителиального регенерата, единичных клеток крови, эндотелия и рыхлой соединительной ткани

3. После введения инородного тела, «инфицированного» сенной палочкой, у предличинок и личинок ускоряются процессы выселения и накопления лейкоцитов в области раневого канала Наиболее реактивной структурой, так же как и при «асептическом» воспалении, оказывается регенерирующий эпителий. При «септическом» повреждении явления иммунологической защиты протекают более интенсивно

4 У сеголетков и годовиков семги и горбуши комплекс воспалительных процессов сформирован Воспалительная реакция локализована Повреждение поперечно-полосатых мышц в одном участке обычно не ведет к гибели всего мышечного сегмента, как это происходит у предличинок В зависимости от введенного инородного тела меняется скорость образования лейкоцитарного вала Происходит замедление регенерационных процессов в области повреждения в сравнении с ранними стадиями онтогенеза Отчетливо обнаруживается бактериостатическое и бактерицидное действие экссудата в раневом канале

5 У сеголетков и годовиков семги повышается устойчивость к действию повреждения при содержании их в темноте. На ранних этапах воспаления снижается интенсивность воспалительных явлений, дистрофических и некротических изменений тканей, а на поздних этапах усиливаются регенеративные явления, ускоряется элиминация детрита и микроорганизмов

При содержании на свету у сеголетков и годовиков семги усиливаются воспалительные процессы, значительны отек тканей, гиперемия кровеносных сосудов, ускоряются процессы отмирания поврежденных структур мышечных волокон. Торможение элиминативной и регенеративной функций эпителия на ранних этапах воспаления ведет к снижению реактивности тканей

6 Иммунологическая реактивность у семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза имеет сходный характер. Однако выявлено, что у предличинок семги травма вызывает более распространенное повреждение мышечных тканей, менее четко выражена зона локально сократившихся мышц около раневого канала, обнаруживается более широкая зона отечных тканей.

7 Предварительная обработка икры растворами малахитовой зелени и формалина снижает элиминативную функцию эпителия у предличинок семги и горбуши Происходит отчетливое подавление защитной реактивности у предличинок

Напротив предварительная обработка икры раствором пенициллина стимулирует у предличинок семги и горбуши процессы перемещения эпителиального пласта в раневой канал и усиливает фагоцитарную активность клеток эпителия

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Минченок Е.Е., Журавлева НГ Влияние различной освещенности на течение защитных морфогенетических процессов в тимусе годовиков // "Наука и образование - 2003" ■ Изд-во МГТУ, Мурманск, 2003. С. 55-57

2 Минченок Е.Е., Журавлева Н Г Защитные реакции в раннем онтогенезе семги и горбуши // Тезисы докладов международной научно-технической конференции МГТУ "Наука и образование - 2003" : Изд-во МГТУ, Мурманск, 2003 С 57-59

3 Zhuravleva, N G, Minchenok E.E. Protective reactions in the early oncogenesis of Salmon and Humpback Salmon // International Simposium "Chemistry and biology of manne organisms". "Program and Book of abstracts" September, 21-26 - 2003 Kolimpary, Crete, Greece P 12.

4 Минченок E.E., Журавлева Н.Г Защитные реакции в раннем онтогенезе семги и горбуши // Материалы международной научно-технической конференции МГТУ "Наука и образование - 2004" Изд-во МГТУ, Мурманск, 2004. С 145-148

5 Минченок Е.Е., Журавлева Н Г Защитные реакции у эмбрионов, предличинок и личинок горбуши // Материалы международной научно-технической конференции МГТУ "Наука и образование - 2004" Изд-во МГТУ, Мурманск, 2004 С 148-152

6 Zhuravleva, NG., Minchenok Е.Е. Immunological reactions m the early onthogenesis of Atlantic salmon and humpback salmon // Phytochemistry Reviews 2005 №3. P.431-439

7 Минченок E.E., Журавлева H Г Морфологические перестройки в раннем онтогенезе горбуши // Материалы международной научно-технической конференции МГТУ "Наука и образование - 2005" Изд-во МГТУ, Мурманск, 2005. С. 19-22.

8 Минченок Е.Е., Журавлева Н Г Морфогенетические процессы и защитные явления в тимусе сеголеток семги // Материалы международной научно-технической конференции МГТУ "Наука и образование - 2005" Изд-во МГТУ, Мурманск, 2005. С 23-26

9 Минченок Е.Е. Защитные реакции, возникающие у эмбрионов семги в ответ на действие электрического тока // Matenaly П Migdzynarodowej naukowe-praktycznej konferencji «Wyksztaícenie I nauka bez grame -2005» Tom 2. Nauk biologicznych, ^veterinaria - Przemyál- Sp Zoo "Nauka I studia" 2005 С 35-38.

10 Минченок E.E. Журавлева H Г Защитные реакции у молоди семги в ответ на введение стерильного инородного тела // Материалы международной научно-технической конференции - г Мурманск, МГТУ (4-12 апреля 2006г.) - электрон. НТЦ «Информрегистр» 0320501517 св 7081 от 28 И 05г ). С 696-699

11.Минченок Е.Е. Журавлева Н Г. Некоторые иммунологические реакции у молоди семги // Материалы международной научно-технической конференции - г Мурманск, МГТУ (4-12 апреля 2006г) - электрон. НТЦ «Информрегистр» 0320501517 св 7081 от 28.11 05г) С 700-703

12 Минченок Е.Е. Журавлева Н.Г Некоторые защитные явления у молоди семги и горбуши//Вестник МГТУ 2006. Т 9. №5 С 771-779

13 Минченок Е.Е. Морфологическая характеристика тимуса в раннем онтогенезе семги (Salmo salar L.) // Матершш Ш М1жнародно1 науково-практичноГ конференци «Науковий потенщал св1ту - 2006» Дншропетровськ- Наука I оевпа, 2006 Т 8 С 13-15

Подписано в печать 24 04 07 Отпечатано ООО "Ростсервис" Мурманск, пр Кольский, 69 Формат 60x84,1/16, бумага офс, Печать офс , уч изд л 1,1 Печ л 1,3 Тираж 100 экз Заказ №168

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Минченок, Елена Евгеньевна

Введение

Глава 1. Литературный обзор

1.1. Защитные реакции, возникающие у рыб в ответ на 10 повреждающее действие среды

1.1.1. Кожные и слизистые барьеры

1.1.2. Фагоцитарные и воспалительные реакции

1.1.3. Гуморальные факторы иммунитета у рыб

1.1.3.1. Антитела

1.1.3.2. Комплемент

1.1.3.3. Лизоцим

1.1.4. Реактивность и регенерация тканей '

1.2. Становление и развитие иммунных реакций в фило- и 44 онтогенезе

1.3. Влияние экологических факторов на иммунитет рыб

1.3.1. Влияние природных факторов

1.3.2. Влияние техногенных факторов

1.3.3. Влияние корма и кормовых добавок

1.3.4. Влияние лекарственных препаратов

Глава 2. Материал и методы

2.1. Биология и экология атлантического лосося Salmo salar (L.)

2.2. Биология и экология горбуши Oncorhynchus gorbusha 79 (Walb).

2.3. Методы

Глава 3. Защитные клеточные и тканевые реакции у семги

3.1. Защитные реакции у эмбрионов семги

3.1.1. Антибиотическая активность зародышевых жидкостей

3.1.2. Клеточные и тканевые реакции

3.1.3. Клеточные и тканевые реакции у эмбрионов семги при 101 действии электрического тока

3.2. Защитные реакции у предличинок и личинок семги

3.2.1. Реакция тканей хвостового стебля на введение стерильного инородного тела

3.2.2. Защитные клеточные и тканевые реакции у предличинок и личинок семги, обработанных на стадии пигментации глаз растворами малахитовой зелени, формалином и пенициллином

3.3. Защитные клеточные и тканевые реакции у сеголетков и годовиков семги

3.3.1. Реакция тканей хвостового стебля на введение простерилизованного инородного тела

3.3.2. Реакция тканей хвостового стебля на введение инфицированного инородного тела

3.3.3. Реакция тканей хвостового стебля на введение стерильного инородного тела (содержание в темноте)

3.3.4. Реакция тканей хвостового стебля на введение стерильного инородного тела (содержание на свету, 500лк)

Глава 4. Защитные клеточные и тканевые реакции у горбуши

4.1. Клеточные и тканевые реакции у эмбрионов горбуши

4.2. Защитные реакции у предличинок горбуши

4.2.1. Фагоцитарные и воспалительные реакции при введении стерильного инородного тела

4.2.2. Фагоцитарные и воспалительные реакции при введении инфицированного инородного тела

4.2.4. Фагоцитарные и воспалительные реакции у предличинок горбуши, предварительно обработанных малахитовой зеленью, при введении инородного тела, инфицированного микроорганизмами от погибших эмбрионов

4.3. Защитные реакции у сеголетков и годовиков горбуши

Обсуждение

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Защитные клеточные и тканевые реакции у семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза"

В последние годы в связи с развитием биотехнологий рыборазведения, уменьшением рыбных запасов в водоемах, а также с усилением воздействия человека на водную среду возрос интерес к изучению биологических механизмов защитных реакций у рыб. Формирование защитных систем организма, обеспечивающих выживание рыб, происходит в течение ранних периодов онтогенеза, поэтому именно этим периодам должно быть уделено особое внимание. Необходимость изучения различных защитных явлений, включающих в себя изучение механизмов, обеспечивающих выживание и устойчивость к действию ряда неблагоприятных факторов среды в период эмбрионального и личиночного развития, когда наблюдается наибольшая гибель организмов, особенно остро стоит перед практикой рыборазведения.

Первые работы по изучению иммунобиологической реактивности некоторых позвоночных животных были проведены одним из основоположников современной иммунологии И.И. Мечниковым (1883, 1913, 1947, 1950). У рыб были отмечены фагоцитарные и воспалительные явления, описаны регенеративные процессы (Лукьяненко, 1989). Относительно способности рыб вырабатывать антитела получены довольно противоречивые данные. Получены факты об антибиотической активности тканей у рыб (Лукьяненко, 1989).

Особенно многочисленны работы, посвященные формированию клеточных элементов крови и их изменению при действии ряда неблагоприятных факторов среды (Серпунин, 2000; Лапирова, Заботкина, 2002; Киташова и др., 2003; Press, Evensen, 1999).

Выделяют три филогенетических уровня эволюции иммунной системы: квазиимунное распознавание, гуморальный и клеточный иммунитет (Hildemann, Reddy, 1973). Факторы защиты от субстанций, несущих чужеродную информацию, разделяют на специфические и неспецифические (врожденные). Соотношение этих защитных реакций у животных разных систематических групп неодинаково (Siwicki, Anderson, 1993).

Неспецифические факторы защиты охватывают определенные барьеры и механизмы защиты (Studnicka et al., 1993). Вместе с тем эти же клеточные и гуморальные факторы иммунитета играют важнейшую роль не только при первичном столкновении с чужеродными антигенными раздражителями, но и при повторном столкновении с ними, т.е. в приобретенном, или специфическом иммунитете.

К защитным реакциям, возникающим у рыб, относятся воспаление, в очаге которого задерживаются и разрушаются микробы и другие болезнетворные агенты, довольно быстрое у рыб заживление травматических повреждений, ран, регенерация, гипертрофия и гиперплазия (Лукьяненко, 1989).

В основе успешных работ по искусственному воспроизводству многих ценных в промысловом отношении рыб лежат точные сведения об эколого-физиологических особенностях разводимых организмов (Zapata, 1983). Существует значительное число обзоров и монографий о роли механизмов врожденного и приобретенного иммунитета у рыб (Микряков, 1984; Грищенко, Рудиков, 1985; Вихман, 1994; Киташова, 2002; Ellis, 1977; Ingram, 1980; Zapata, 1980, 1983; Fange, 1986; Alexander, 1992; Dalmo et al., 1997; Press, Evensen, 1999; Asbakk, 2001).

У рыб имеются все необходимые для иммунного ответа элементы, присущие высшим позвоночным, однако среда обитания определяет характерные особенности иммунитета водных животных (Кондратьева и др., 2001). Несмотря на принципиальное сходство иммунных систем рыб и высших позвоночных, система рыб более лабильна и в ней интенсивнее функционируют врожденные механизмы, обеспечивающие немедленное, но более непродолжительное реагирование на внешнее воздействие.

На рыбоводных предприятиях наблюдаются случаи, когда даже малозаметное несоответствие экологических условий биологическим потребностям личинок приводит к тому, что происходит их массовая гибель без видимых на то причин (Казаков, 1982). Для промышленного рыбоводства особое значение имеют данные об устойчивости рыб к действию различных повреждающих факторов, в частности таких, как сапрофитная и патогенная микрофлора, а также лечебных препаратов, применяемых для борьбы с болезнетворными грибами и бактериями. Знание механизмов становления защитных реакций у рыб необходимо для практики рыборазведения (Журавлева, 2005; Zhuravleva, Minchenok, 2005).

Иммунная система как система защиты организма от любого чужеродного воздействия является чрезвычайно чувствительной к токсическому действию химических веществ. В связи с ростом техногенной нагрузки на водную среду параметры иммунной резистентности рыб могут использоваться как показатели загрязнения воды в водоемах (Киташова, 2002). Оценка параметров иммунной системы морских и пресноводных рыб позволяет получить достоверную информацию о состоянии животных в естественных условиях обитания, о качестве среды, проводить биологический мониторинг водных экосистем (Валедская, 2000).

Таким образом, исследование показателей иммунной системы рыб не только представляет материал для выявления эволюционных связей между различными группами животных, но и служит для решения практических задач по эффективному промышленному разведению рыб, экологическому мониторингу и прогнозу изменений экологической обстановки водоемов.

Реализация данной цели потребовала решения следующих задач:

1. Выявить особенности иммунологических реакций эмбрионов семги, горбуши;

2. Проанализировать динамику развития клеточных и тканевых защитных реакций предличинок и личинок семги и горбуши;

3. Продемонстрировать основные тенденции развития клеточной и тканевой реактивности сеголетков и годовиков семги, горбуши;

4. Выявить особенности действия лечебно-профилактических средств, используемых в рыбоводной практике, на предличинок и личинок семги и горбуши;

5. Сравнить иммунологическую реактивность семги и горбуши в онтогенезе.

Научная новизна работы. Впервые выявлены основные тенденции динамики развития клеточных и тканевых реакций семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза при применении оригинальной методики, позволяющей в одном и том же эксперименте дать как характеристику защитных реакций и регенерационных процессов в районе повреждения, так и гуморальных факторов (антибиотическая активность) иммунной системы рыб. Установлена главная особенность реактивности эмбриональных тканей - отмирание клеточных элементов, непосредственно соприкасающихся с повреждающим агентом. Инородное тело не вызывает волны повреждения тканей, как у молоди. У предличинок горбуши и семги фагоцитарные реакции осуществляются клеточными элементами эпителиального регенерата и единичными клетками крови, эндотелия и рыхлой соединительной ткани. Лейкоциты появляются на поздних этапах воспаления и не образуют лейкоцитарного вала. У сеголетков и годовиков семги комплекс воспалительных процессов сформирован. Темпы регенерационных явлений снижены. Регенерация поврежденных тканей становится этапом, завершающим воспаление.

Объем и структура работы. Работа состоит из введения, четырех глав, обсуждения, выводов и списка литературы. Общий объем работы 211 страниц, она проиллюстрирована 63 рисунками, включая 49 цветных и черно-белых микрофотографий, и 4 таблицами. Список литературы состоит из 195 наименований, в том числе 69 - иностранных авторов.

Благодарности. Автор выражает признательность и искреннюю благодарность заведующей кафедрой биоэкологии-: МГТУ, доктору биологических наук Журавлевой Нонне Георгиевне за постоянную помощь и руководство научной работой. Низкий, поклон и светлая память Е. В. Праздникову, чьи научные идеи стали основой этой работы. Особая признательность за помощь в организации и проведении экспериментов директору рыбоводного завода- «Лесной» • (Сахалинская ! обл.) > Князевой Кармен Александровне, "рыбоводам^ Кандалакшского экспериментального лососевого завода (Мурманская обл.) и доценту Н. А. Пахомовой за поддержку и высказанные замечания.

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Минченок, Елена Евгеньевна

выводы

1. Защитная реактивность эмбрионов семги и горбуши определяется антибиотической активностью желтка, перивителлиновой жидкости и зародышевых тканей. Заживление обусловлено быстро протекающими регенеративными процессами.

Электрический ток вызывает отмирание большого комплекса взаимосвязанных структур. Реактивность эмбриональных тканей при этом та же, что и после механических повреждений.

2. У предличинок и личинок семги и горбуши идет формирование комплекса воспалительных явлений с одновременным замедлением темпов регенерационных процессов. Регенерационные явления становятся этапом, завершающим реакцию организма на повреждение. Фагоцитарные реакции осуществляются при помощи клеточных элементов эпителиального регенерата, единичных клеток крови, эндотелия и рыхлой соединительной ткани.

3. После введения инородного тела, «инфицированного» сенной палочкой, у предличинок и личинок ускоряются процессы выселения и накопления лейкоцитов в области раневого канала. Наиболее реактивной структурой, так же как и при «асептическом» воспалении, оказывается регенерирующий эпителий. При «септическом» повреждении явления иммунологической защиты протекают более интенсивно.

4. У сеголетков и годовиков семги и горбуши комплекс воспалительных процессов сформирован. Воспалительная реакция локализована. Повреждение поперечно-полосатых мышц в одном участке обычно не ведет к гибели всего мышечного сегмента, как это происходит у предличинок. В зависимости от введенного инородного тела меняется скорость образования лейкоцитарного вала. Происходит замедление регенерационных процессов в области повреждения в сравнении с ранними стадиями онтогенеза. Отчетливо обнаруживается бактериостатическое и бактерицидное действие экссудата в раневом канале.

5. У сеголетков и годовиков семги повышается устойчивость к действию повреждения при содержании их в темноте. На ранних этапах воспаления снижается интенсивность воспалительных явлений, дистрофических и некротических изменений тканей, а на поздних этапах усиливаются регенеративные явления, ускоряется элиминация детрита и микроорганизмов.

6. Иммунологическая реактивность у семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза имеет сходный характер. Однако выявлено, что у предличинок семги травма вызывает более распространенное повреждение мышечных тканей, менее четко выражена зона локально сократившихся мышц около раневого канала, обнаруживается более широкая зона отечных тканей.

7. Предварительная обработка икры растворами малахитовой зелени и формалина снижает элиминативную функцию эпителия у предличинок семги и горбуши. Происходит отчетливое подавление защитной реактивности у предличинок.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Минченок, Елена Евгеньевна, Москва

1. Азбелев, В.В. Материалы по акклиматизации горбуши в бассейне Баренцева и Белого морей / В.В. Азбелев, А.А. Яковенко // Тр. ПИНРО. Вып. 15.- 1963.-С.7-26.

2. Андреева, A.M. Становление органов иммунной системы леща Abramis brama (L.) в раннем онтогенезе / A.M. Кондратьева, Е.А. Заботкина // Биология внутренних вод.- 2001.- №2.- С.107-110.

3. Анисимова, И.М. Ихтиология: учебник для вузов / И.М. Анисимова, В.В. Лавровский. -М.: Агропромиздат, 1991.- 182с.

4. Арипов, У.А. Клеточные основы иммунного ответа и иммунодепрессия / У.А. Арипов, Д.Л. Арустамов, P.M. Хаитов // Т., Медицина. 1976. - 198с.

5. Бакштанский, Э.Л. Особенности популяции горбуши в связи с ее акклиматизацией в Северной Атлантике / Э.Л. Бакштанский // Акклиматизация рыб и беспозвоночных в водоемах СССР.- М, 1968,- С.46-49.

6. Балабанова, Л.В. Хроническое действие нафталина и дихлофоса на иммунокомпетентные клетки мозамбикской тиляпии Oreochromis mossambicus Peters / Л.В. Балабанова, В.М. Степанова// Биология внутренних вод. 2000. - №4. - С.146-155.

7. Балабанова, JI. В. Ультраструктура клеток иммунной системы карпа Cyprinus carpio L. В норме и при иммунизации / JI.B. Балабанова, Е.А. Заботкина // Цитология. М., 1988. - №6. - С. 657-661.

8. Балахнин, И.А. Активация неспецифических факторов защиты рыб углеводами / И.А. Балахнин, В.И. Лукьяненко // Доклады АН СССР. 1991. -Т. 318. -С.1254-1256.

9. Бауер, О.Н. Ихтиопатология. М.: Пищевая промышленность, 1997. -С. 39-53.

10. Белова, А.В. Реактивность тимуса и крови молоди сёмги при газовой болезни / А.В. Белова // Биология развития морских организмов: сб.науч.тр. / Мурманский морской биол. ин-т.- Апатиты, 1972. С.85-96.

11. Берг, Л.С. Материалы по биологии семги /Л.С. Берг // Известия ВНИОРХа.- 1935.- Т.20.- С. 1-113.

12. Берг, Л.С. Рыбы пресных вод СССР и сопредельных стран. 4.1. М-Л.: АН СССР, 1948.-466с.

13. Бернет, Ф. Клеточная иммунология. М.: Мир, 1971.- 542 с.

14. Бойд, Ф. Основы иммунологии. М.: Мир, 1969. - 647с.

15. Быкова, А.А. Фагоцитоз и иммунитет / А.А. Быкова // Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума, посвященного 100-летию создания И.И. Мечниковым фагоцитарной теории иммунитета. М., 1983. - С. 39-40.

16. Валедская, О.М. Иммунопатологические аспекты опухолевого роста у рыб / О.М. Валедская // Каспийский Плавучий Ун-т. 2000. - № 1. - С. 124125.

17. Вихман, А. А. Экологическая иммунология рыб на современном этапе. / А. А. Вихман // Успехи современной биологии, М., 1983. - Т. 95. - вып. 1. -С. 130-137.

18. Вихман, А.А. Иммунофизиологический статус рыб объектов аквакультуры: автореф. дис. докт.биол.наук. -М., 1994. -48с.

19. Воронин, Е.С. Иммунология / Е.С. Воронин, A.M. Петров, М.М. Серых, Д.А. Девришов // под ред. Е.С. Воронина. -М.: Колос-Пресс, 2002. 408с.

20. Восилене, М.З. Воздействие факторов различной природы на физиологический статус у радужной форели Parasalmo Mykiss / М.З. Восилене, Н.Е. Лебедева, Т.В. Головкина // Вопр. Ихтиологии. 1999. - Т.39. - №2. - С.241-246.

21. Галактионов, В.Г. Очерки эволюционной иммунологии. М.: Наука, 1995.-256с.

22. Галактионов, В.Г. Иммунология. -М.: Изд-во МГУ, 1998. -480с.

23. Галактионов, В.Г. Иммунология.- М.: Академия.- 2004,- 453с.

24. Головин, П. П. Основные заболевания семги на лососевых рыбзаводах и методы борьбы с ними. Петрозаводск, 2002. - 78с.

25. Головина, Н. А. Ихтиопатология: учебник для студентов вузов. / Н. А. Головина, О. Н. Бауер. М.: Мир, 2003. - 448с.

26. Гревати, А.Д. Электронно-микроскопическое исследование клеток крови и кроветворных органов зеркального карпа: автореф. канд. дисс. М., 1991.

27. Грищенко, Л.И. Проблемы патологии и иммунитета при инфекционных болезнях рыб / Л.И. Грищенко, Н.И. Рудиков // Итоги науки и техники ВИНИТИ. Сер. Ихтиология.- 1985.- М.: ВИНИТИ.- Т.1.- С.190-211.

28. Грищенко, Л. И. Болезни рыб и основы рыбоводства: учеб. для студентов вузов / Л.И. Грищенко, М. Ш. Акбаев, Г. В. Васильков. М.: Колос, 1999.-455 с.

29. Дьюкор, Э. Клеточные взаимодействия в развитии животных. Под ред. д-ра биол. наук Т.А. Детлаф. М.: Мир. 1978. - 330с.

30. Житенева, Л.Д. Атлас нормальных и патологически измененных клеток крови рыб / Л.Д. Житенева, Т.Г. Полтавцева, О.А. Рудницкая.- Ростов н/Д: Кн. Изд-во, 1989.-112с.

31. Журавлева, Н.Г. Опытно-промышленные работы в области лососеводства / Н.Г. Журавлева // Ихтиофауна малых рек и озер Восточного Мурмана: биология, экология, ресурсы. Апатиты: Изд. Кольского научного центра РАН, 2005. -С.186-189.

32. Заботкина, Е.А. Влияние тяжелых металлов • на иммунофизиологический статус рыб / Е.А. Заботкина, Т.Б. Лапирова // Успехи современной биологии. 2003.- Т.123.- №4.- С.401-408.

33. Заварзин, А.А. Очерки эволюционной гистологии крови и соединительной ткани. М.-Л.: Медгиз, 1945. - вып.1,2.

34. Зелинский, Ю.П. Структура и дифференциация популяций и форм атлантического лосося: -Л.: Наука, 1985. 128с.

35. Золотова, Т.Е. Экспериментальное исследование кроветворения у рыб: Автореф. дис. канд. биол. наук.- М., 1989.

36. Иванова, Н.Т. Атлас клеток крови рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность. -1983.

37. Исаева, Н.М. Преспективные способы оздоравливания рыб в аквакультуре: обзор / Н.М. Исаева, И.И. Козиненко, И.А. Балахнин // Вопр. Ихтиологии.-1992.- Т.32.- С.140-147.

38. Исаева, Н.М. Иммуномодулирующее действие бактерий (их продуктов) на рыб / Н.М. Исаева, И.И. Козиненко // Вопр. Ихтиологии.-1999.- Т.39.- №4.-С.527-534.

39. Казаков, Р.В. Биологические основы разведения атлантического лосося. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 144с.

40. Казаков, Р.В. Атлантический лосось в пресноводных водоемах Европы: терминология и таксономический статус / Р.В. Казаков // Сб. науч. тр. ГосНИОРХ. Вып. 304. 1992. - С. 125-145.

41. Казаков, Р.В. Популяционный фонд атлантического лосося в России / Р.В. Казаков, А.Е. Веселов // В кн.: Атлантический лосось. СПб, 1998. -С.383-395.

42. Калашников, Г.Н. Состав крови рыб / Г.Н. Калашников // Уч. зап. МГУ. Сер. Гидробиология. -1939. Вып. 33.

43. Калюжин, С.М. Атлантический лосось Белого моря: проблемы воспроизводства и эксплуатации. Петрозаводск: "ПетроПресс", 2003. -264с.

44. Карпевич, А.Ф. Теория и практика акклиматизации водных организмов. -М.: Пищ. пром-сть, 1975. 432с.

45. Карпевич, А.Ф. Акклиматизация и культивирование лососевых рыб -интродуцентов / А.Ф. Карпевич, B.C. Агапов, Г.М. Магомедов. М.: ВНИРО, 1991.-209с.

46. Киташова, А.А. Реакции врожденного и приобретенного иммунитета у рыб в естественных и экспериментальных условиях: дис. . канд. биол. наук: 03.00.10,14.00.36. -М., 2002. 186с.

47. Козиненко, И.И. Гуморальные факторы неспецифической защиты рыб / И.И. Козиненко, Н.М. Исаева, И.А. Балахнин // Вопросы ихтиологии. 1999. - Т.39. - №3. - С.З94-400.

48. Кондратьева, И.А. Современные представления об иммунной системе рыб. 1. Организация иммунной системы рыб / И.А. Кондратьева, А.А. Киташова, М.А. Ланге // Вест. Моск. Ун-та. Сер. 16, Биология.- 2001.- №4.-С. 11-20.

49. Кондратьева, И.А. Современные представления об иммунной системе рыб. 2. Функционирование и регуляция иммунной системы рыб / И.А. Кондратьева, А.А. Киташова // Иммунология. 2002. - №2. - С.97-101.

50. Копылов, Г.В. Горбуша Европейского Севера / Г.В. Копылов // Рыбовод, и рыболов.- 2000. №1. - С. 19.

51. Костылев, Ю.В. О сезонных формах атлантического лосося / Ю.В. Костылев // Атлантический лосось: биология, охрана и воспроизводство: тез. докл. междунар. конф.: Петрозаводск, 4-8 сентября 2000г. - Петрозаводск, 2000.- С.29.

52. Кудерский, Л.А. О происхождении озерного лосося / В кн.: Рыбохозяйственное изучение внутренних водоемов. Л., 1977. - №19. - С. 34 -39.

53. Кузьмин, О.Г. Семга Salmo salar р. Умбы (естественное и искусственное воспроизводство) / О.Г. Кузьмин, М.Я. Яковенко, И. Л. Щуров, Ю.А. Шустов, С.Е. Маслов // Петрозаводск, 1989. 44с.

54. Купер, Э. Сравнительная иммунология. М.: Мир, 1980.- 422с.

55. Ланге, М.А. Морфологическое и авторадиографическое исследование кроветворных органов личинок ручьевой миноги (Lampetra planeri) разного возраста / М.А. Ланге, Н.В. Потапина, Н.Г. Хрущов // Журн. общ. биол. -1990.-№51.-С. 796-808.

56. Лиознер, Л.Д. Основные проблемы учения о регенерации. М.: Наука, 1975.- 103с.

57. Лиознер, Л.Д. Регенерационные процессы и их изучение в СССР / Л.Д. Лиознер, А.Г. Бабаева, И.В. Маркелова // Изд-во Моск. Ун-та. 1990. - 108с.

58. Лобунцов, К.А. Влияние возраста на антителообразовательную способность рыб / К.А. Лобунцов // Бюл. ВИЭВ. 1975. - Вып.20. - С. 24-28.

59. Лукьяненко, В. И. Иммунобиология рыб. М., 1971. - 364 с.

60. Лукьяненко, В.И. Иммунобиология рыб: врожденный иммунитет. Монограф.- М.: Агропромиздат, 1989.- 271с.

61. Маянский, А. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д. Н. Маянский Новосибирск, 1983. - 256с.

62. Мельникова, М.Н. Биология семги р. Варзуги / М.Н. Мельникова // Известия ВНИОРХа. 1959. - Т.48. - С.80-94.

63. Мельникова, М.Н. Семга Терского берега Белого моря / М.Н. Мельникова // Рыбы Мурманской области. Мурманск, 1966. - С. 152-168.

64. Мельникова, М.Н. Значение гидрологических особенностей рек для воспроизводства семги / М.Н. Мельникова // Сборник научных трудов ГосНИОРХа. Вып. 141. 1979. - С.90-99.

65. Методические указания по определению уровня естественной резистентности и оценке иммунного статуса рыб / ИБВВ РАН и ВНИИПРХ,-25.11.99г.- № 13-4-2/1795.

66. Мечников, И.И. Исследования о мезодермальных фагоцитах некоторых позвоночных животных / И.И. Мечников // Русская медицина. 1883. - №1.

67. Мечников, И.И. Учение о фагоцитах и его экспериментальные основы / И.И. Мечников // Собрание сочинений: Изд. АН СССР.- 1913.- Т.7.- С. 420501.

68. Мечников, И.И. Лекции по сравнительной патологии воспаления. М.: Медгиз, 1947.

69. Мечников, И.И. Исследования о внутриклеточном пищеварении у беспозвоночных. М. - Л.: Медгиз, 1950.

70. Микряков, В. Р. Актуальные вопросы иммунологии рыб. Труды Ин-та биологии внутренних вод, 1978. - Вып.23(35). - С. 116-133.

71. Микряков, В.Р. Закономерности функционирования иммунной системы пресноводных рыб: автореф. дис. . докт. биол. наук: 03.00.10, 14.00.36.- М., 1984.-38с.

72. Микряков, В.Р. Закономерности формирования приобретенного иммунитета у рыб. Рыбинск, 1991. - 153с.

73. Микряков, В.Р. Реакция иммунной системы рыб на загрязнение воды токсикантами и закисление среды / В.Р. Микряков, Л.В. Балабанова, Е.А. Заботкина, Т.Б. Лапирова, А.В. Попов, Силкина Н.И.- М.: Наука, 2001.- 126с.

74. Мирзоева, Л. М. Болезни гидробионтов в аквакультуре. ВНИРХ, 2003. - №1.- С. 34-36.

75. Михайлова, И.Г. И.И. Мечников и современные биологические исследования процессов воспаления / И.Г. Михайлова, Е.В. Праздников //

76. Биология развития процессов воспаления: сб.науч.тр. / Кольский филиал АН СССР.-Апатиты, 1972.- С. 48-84.

77. Михайлова, JI.M. Основные результаты исследования состояния клеток крови Salmo trutta L. на фоне токсических воздействий / JI.M. Михайлова // Юж.- рос. вестн. геол., геогр. и глобал. энергии. 2004. - № 1. - С. 90-92.

78. Мовэт, Г.З. Воспаление, иммунитет и гиперчувствительность. М.: Медицина, 1975. - 560с.

79. Наконечная, М.Н. Освоение теплых вод энергетических объектов для интенсификации рыбоводства / М.Н. Наконечная, А.П. Руденко, М.И. Жибловская // Республ. науч. конф.: Киев, 1980.- Киев, 1981.- С. 423-425.

80. Нестеров, В.Д. Поведение молоди атлантического лосося Salmo salar L. в период покатной миграции : Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1985. -24с.

81. Никольский, Г.В. Экология рыб.- М.: Высшая школа, 1974.- 376с.

82. Нусенбаум, JI.M. Исследование покатной молоди семги / JI.M. Нусенбаум // Рыбное хоз-во.- 1953.- №9. С.21-25.

83. Павлов, Д.С. Дневное распределение рыб в реке, по данным подводных наблюдений / Д.С. Павлов, А.Д. Мочек, С.Н. Капустин // Вопросы ихтиологии. -1981. Т.21. - Вып. 1. - С. 177-180.

84. Пономарев, В.И. Характеристика процессов экзотрофии у молоди семги Salmo salar бассейна реки Печоры / В.И. Пономарев, В.Н. Шубина, М.И. Черезова // Вопросы ихтиологии. 1998. - Т.38. - №5. - С.641-649.

85. Попова, Н.А. К характеристике иммунного статуса рыб Новосибирского водохранилища / Н.А. Попова, П.А. Попов // Сибирский экологический журнал.- 2000.- №2.- С. 187-194.

86. Пучков, Н.Ф. Физиология рыб: учеб. пособие для институтов рыбной промышленности / Н.Ф. Пучков. М.: Пищепромиздат, 1954. - 370с.

87. Реддин, Д.Г. Особенности морского периода жизни атлантического лосося / В кн.: Атлантический лосось. СПб, 1998. - С. 266-287.

88. Ройт, А. Иммунология /А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. М.:Мир, 2000. - 592с.

89. Ромейс, Б. Микроскопическая техника. М. - JL, 1953. - 717 с.

90. Роскин, Г.И. Микроскопическая техника / Г.И. Роскин, Л.Б. Левинсон. -М., 1957.-469с.

91. Румянцев, Е. А. Фауна паразитов благородных лососей Salmo salar / Е.А.Румянцев, Б.С. Шульман // Атлантический лосось: биология, охрана и воспроизводство: тез. докл. междунар. конф.: Петрозаводск, 4-8 сентября 2000г. Петрозаводск, 2000. - 36 с.

92. Силкин, Н.Ф. Сезонные изменения белков сыворотки крови- леща Рыбинского водохранилища // Биология внутр. вод. Информ. бюл. Л., 1977. - №34. - С. 28-30.

93. Силкин, Н.Ф. Сезонные изменения неспецифических факторов гуморального иммунитета и их взаимосвязь с физиологическими показателями и зараженностью половозрелых рыб. Борок: Ин-т биологии внутр. вод АН СССР, 1989. - 114с.

94. Скворцов, А.К. О строении селезенки костистых рыб / А.К. Скворцов // ДАН СССР. 1947. - Вып. 58. - С. 1159-1162.

95. Смирнов, А.И. Биология, размножение и развитое тихоокеанских лососей. -М.: МГУ, 1975. 33с.

96. Смирнов, Ю.А. Лосось Онежского озера.-Л.: Наука, 1971.- 143с. Смирнов, Ю.А. Пресноводный лосось.- Л.: Наука, 1979.- 156с. Смит, Л.С. Введение в физиологию рыб.- М.: Агропромиздат. 1986.166с.

97. Соколов, В.И. Цитология, гистология, эмбриология: учебн. для ВУЗов / В.И. Соколов, Е.И. Чумасов. -М.: «КолосС», 2004. -351с.

98. Справочник по физиологии рыб / Под ред. канд. биол. наук А.А. Яржомбека. М.: Агропромиздат, 1986. - 192 с.

99. Субботкина, Т. А. Содержание лизоцима в органах и сыворотке крови у различных видов рыб р. Волги / Т. А. Субботкина, М. Ф. Субботкин // Ж. эволюц. биохимии и физиол., 2003. №5. - С. 430-437.

100. Суворов, Е.К. Основы ихтиологии. М.: Советская наука, 1948. - 580с. Суркова, Е.И. Акклиматизация горбуши и кеты в бассейне Баренцева и Белого морей / Е.И. Суркова // Рыбы Мурманской области. - Мурманск, 1966.- С. 294-321.

101. Сюрин, В.Н. Ветеринарная вирусология / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина.-М.: Колос, 1984.- С. 161-172.

102. Терентьев, П.В. Практикум по биометрии / П.В. Терентьев, Н.С. Ростова-Л., 1977.- 152 с.

103. Токин, Б.П. Иммунитет зародышей.- Л.: Изд-во ЛГУ, 1955. Флоренсов, В.А. Очерки эволюционной иммуноморфологии / В.А. Флоренсов, И.М. Пестова // Иркутск: изд-во Иркутского ун-та. 1990. - 248с.

104. Фонталин, JI.H. Проблема происхождения иммунной системы позвоночных животных / JI.H. Фонталин // Иммунология. 1988. - №3. - С.5-20.

105. Фонталин, JI.H. Происхождение антигенраспознающей иммунной системы позвоночных. Молекулярно-биологические и иммунологические аспекты / JI.H. Фонталин // Иммунология. 1998. - №5. - С.33-44.

106. Фролов, К.В. Динамика числа эритроцитов в крови карпов, выращиваемых в различных условиях / К.В. Фролов // Естеств. науки и экол. -2001.-№6.-С. 217-220.

107. Хрущов, Н.Г. Характеристика клеток эритроидного ростка у зеркального карпа (перспективы использования при оценке физиологического состояния рыб) / Н.Г. Хрущов, М.А. Ланге, Т.Е. Золотова, А.В. Бессонов // Изв. РАН. Сер. биол. 1. 1993.- С. 83-87.

108. Ченцов, Б.В. Об антибиотической активности крови личинок горбуши / Б.В. Ченцов // Воспроизводство и акклиматизация лососевых в Баренцевом и Белом морях. Москва-Ленинград.: Наука, 1966. - С. 187-188.

109. Шарова, Ю.Н. Экологические проблемы северных регионов и пути их решения / Ю.Н. Шарова, А.А. Лукин // Материалы международной конференции: Апатиты, 31 августа 3 сентября, 2004. - Апатиты, 2004. - С. 87-89.

110. Шатуновский, М. И. Экологические закономерности обмена веществ морских рыб. М.: Наука, 1980. - 366с.

111. Ярилин, А.А. Основы иммунологии. -М.: Медицина, 1999. 608с.

112. Anders, Е. Lysozimactivitat bei Regenbogenforellen in Abhangigkeit von Alter und Gesundhaitszustand der Fieshe / E. Anders // Physiologie, Biologie und Parasitologic von Nutzfischen. Willhelm Piek - Universitet, Rostok, - 1981. -P.61-69.

113. Alexander, J.B. Noncellular nonspecific defense mechanisms of fish / J.B. Alexander, G.A. Ingram // Ann. Rev. Fish Dis. 1992.- V.2. - P. 249-279.

114. Asbakk, K. Elimination of foreign material by epidermal malpighian cells during wound healing in fish skin / K. Asbakk // J. Fish Biol. 2001. - V.58. -№4,- P. 953-966.

115. Beasley, A.R. Interferon production in cold-blooded vertebrates / A.R. Beasley, M.M. Sigel // In vitro. 1967. - V.3. - p. 154-165.

116. Bigaj, J. Limphoid organs of Gasterosteus aculeatus / J. Bigaj, J. Dulak, B. Plytykz // J. Fish Biol. 1987. - №31. - P. 233-234.

117. Bly, J.E. Temperature and teleost immune functions / J.E. Bly, L.W. Clem // Fish Shellfish Immunol.- V.2.- P. 159-172.

118. Brubacher, J.L. Constitutive and LPS-induced gene expression in a macrophage-like cell line from the rainbow trout {Oncorhynchus mykiss) / J.L. Brubacher, C.J. Secombes, J. Zou, N.C. Bols // Dev. Сотр. Immunol. 2000. -№24. - P. 565-574.

119. Buchmann, K. Effects of formalin treatment on epithelial structure and mucous cell densities in rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), skin / K. Buchmann, J. Bresciani, C. Jappe // J. Fish Diseases. 2004. - V.27. - № 2.- P. 99104.

120. Calderwood, W.L. Salmon hatching and Salmon migrations: 1-95. London, 1931.-95p.

121. Dalmo, R. A. Non-specific defence mechanisms in fish, with particular reference to the reticuloendothelial system (RES) / R. A. Dalmo, K. Ingebrigtsen, J. Bogwald // Journal of Fish Diseases. 1997. № 20. - P. 241-273.

122. Danie, D.S. Species profiles: Life history and environmental requirements of coastal fish and invertebrates (North America) Atlantic salmon / D. S. Danie, J.G.

123. Trial, J.G. Staley // US Fish Wildl. Serv. FWS/OBS-82/11.22. Us Army Corps of Engineers, TREL-82-4,1984. 19p.

124. Dumer, M. Effects des pesticides et des metall lourds sur le systeme immunitatae de la carpe Cyprinus carpio / M. Dumer //Ichtyol. act. 1991. - №14. -P. 9-12.

125. Edward, J. Lamarck's signature. How retrogenes are changing Darwin's natural selection paradigm / Edward J. Steele, Robyn A. Lindley, Robert V. Blanden // Allen & Unwin. 1998. - P.36-39.

126. Guri, E. Vaccination of Atlantic salmon {Salmo salar L.) before and during smoltification: effects on smoltification and immunological protection / Guri Eggset, Atle Mortensen, Solveig Loken // Aquaculture. 1999. - №2. - P. 101-112.

127. Ellis, A.E. The leucocytes of fish: a review / A.E. Ellis // J. Fish Biol. -1977.-№11.-P. 435-491.

128. Esteban, M. A. Factors influencing phagocytic response of macrophages from the sea bass (Dicentrarchus labrax L.): An ultrastructural and quantitative study / M. Angeles Esteban, Jos'le Meseguer // Anat. Rec. 1997. - 248. - № 4. -P. 533-541.

129. Estepa, A. Susceptibility of trout kidney macrophages to viral haemorrhagic septicemia virus / A. Estepa, D. Frias, J.M. Coll // Viral Immunolo.- 1992. -№5. -P. 283-292.

130. Fange, R. Lymphoid organs in sturgeons (Acipenseridae) / R. Fange // Vet. Immunol. Immunopathol. 1986. - №12. - P. 153-161.

131. Findlay, V.I. The immunomodulatory effects of levamisole on the nonspecific immune system of Atlantic salmon, Salmo salar L. / V.I. Findlay, B.L. Munday // J. Fish Diseases. 2000. - V. 23. - № 6. - P. 369-378.

132. Fock, W.L. Roles of an endogenous serum lectin in the immune protection of the blue gourami, Trichogaster trichopterus (Pallus) against Aeromonas hydrophilia / W.L. Fock, C.L. Chen, T.J. Lam, Y.M. Sin // Fish Shellfish Immunol.- 2001.-№11.-P. 101-103.

133. Galabov, A.S. Interferonogenesis and phylogenesis / A.S. Galabov // Bull. Inst. Pasteur. N.Y. 1973. - V.71. - P. 233-247.

134. Hani, S. M. Ultraviolet В irradiation modulates the immune system of fish (Rutilus rutilus). II. Blood / M. Salo Hani, E. Jokine Ilmari, Markkula S. Eveliina, M. Aaltonen Tuula // Photochem. and Photobiol. 2000. - V.71. - № 1. - P. 65-70.

135. Jean-Yves, S. Epidermal-dermal and cell-interactions during fish scale regeneration: immunofluorescence and ТЕМ studies / Sire Jean-Yves, Boulekbache Habib, Joly Claire // Biol. Cell. 1990. - V.68.- №2.- P. 147-158.

136. MacCrimmon, H.R. World distribution of Atlantic salmon Salmo salar / H.R. MacCrimmon, B.U. Gots // J. Fish. Res. Board Canad. 1979. - Vol. 36,- №4. - P. 422-457.

137. Mann, K. Untersuchung uber die austechude Bauchwassersucht des Karpfens. Serologische Untersuhung befallenen Karpfen / K. Mann // Z. Fischer. -1939. Bd. 37. - №1-3. - P. 101-127.

138. Manning, M. J. Fish immunology / M.J. Manning, M.F. Tatner.- London.: Acad. Press, 1985.-374 p.

139. Marriott, R. A. Effects of electric shocking on fertility of mature pink salmon / R.A. Marriott // Progressive Fish-Culturist. 1973. - №35. - P. 191-194.

140. Matsuyama, T. Kinetics of defense activities of inflammatory neutrophils in carp and red sea bream / Matsuyama Tomonasa, Iida Takaji, Kurokura Hisashi // Fish Pathol. 1999. - V.34. - № 3. - P. 133-137.

141. Nagashima, Y. Antibacterial factors in skin mucus of rabbitfishes / Y. Nagashima, A. Sendo, K. Shimakura, K. Shiomi, T. Kobayashi, T. Fujii // J. Fish Biol. 2001. - V.58.- № 6. - P. 1765.

142. Park Sung Woo. Изменения нейтрофилов почек японского угря после внутрибрюшинного введения формалином убитых кишечных палочек в качестве раздражителя / Park Sung-Woo, Wakabayashi Hisatsugu // Гебе кэнюо = Fish Pathol. - 1989. - V.24. - №4.- P. 233-239.

143. Payne, R.H. Geographic variation in the Atlantic salmon / R.H. Payne, A.R. Child, A. Forrest//Nature.-1971. Vol. 231.- P. 250-252.

144. Press C. McL. The morphology of the immune system in teleost fishes / C. McL. Press, O.Evensen // Fish & Shellfish Immunology. 1999. - №9. - P. 309 -318.

145. Rombout, J.H.W.M. The gut-associated lymphoid tissue (GALT) of carp (Cyprinus carpio L.): an immunocytochemical study / J.H.W.M. Rombout, J.J. Taverne-Thiele, M.I. Villena // Develop. Сотр. Immunol.- 1993.- V. 17. P. 5566.

146. Scapigliati, G. Immunoglobulin levels in the teleost sea bass Dicentrarchus labrax (L.) in relation to age, season, and water oxygenation / G. Scapigliati, D. Scalia, A. Marras, S. Meloni, M. Mazzini // Aquaculture. 1999. - V.174. - P. 207-212.

147. Scott, W.B. Freshwater fishes of Canada / W.B. Scott, E.J. Crossman // Bull. Fish. Res. Board Canad. 1973. - №184. - 966p.

148. Sigel, N.M. Natural immunity of marine fisches /N.M. Sigel, W.S., Russell, J.A. Jensen, A.R. Beesley // Bull. Off. Int. Epiz. 1968. - Vol. 69, № 6-8. - P.31-37.

149. Smitt, F.A. Kritisk forteckning ofver de i Riksmuseum befintliga Salmonider / F.A. Smitt, K. Svenska // Vetensk. akad. handl. 1886. - Bd. 21. - №8. - S.l-290.

150. Stosik, M. Phagocytic and bactericidal activity of blood thrombocytes in carps (Cyprinus carpio) / M. Stosik, W. Deptula, M. Travnicek, K. Baldy-Chudzik // Vet. med. 2002. - V. 47. - № 1. - P. 21-25.

151. Studnicka, M. Nonspecific defence barriers and mechanisms in fish / M. Studnicka, A.K. Siwicki, K. Kazun // Fish diseases diagnosis and preventious methods. Olsztyn: Widawnictwo IRS. - 1993. - P.105-111.

152. Sunyer, J.O. Complement diversity: a mechanism for generating immune diversity? / J.O. Sunyer, I.K. Zarkadis, J.D. Lambris // Immunol. Today.- №19. -1998.-P. 519-523.

153. Tatner, M.F. The migration of labelled thymocytes to the peripheral lymphoid organs in the rainbow trout, Salmo gairdneri Richardson / M.F. Tatner // Develop. Сотр. Immunol. 1985. - №9. - P. 85-91.

154. Tatner, M.F. The ontogeny of humoral immunity in rainbow trout, Salmo gairdneri / M.F. Tatner // Vet. Immunol. Immunopathol. 1986. - №12. - P. 93105.

155. Wang, W. Влияние природного стресса на иммунную систему рыб / Wang Wen-bo, Li Ai-hua // Shuichan xuebao = J. Fish. China. 2002. - V. 26. -№ 4. - C. 368-374. - кит.: рез. англ.

156. Wtasow, Т. Effect of two different diets on thymus morphology in larval coregonids / Teresa Wtasow, Konrad Dabrowski, Pawel Poczyraynski // Acta Acad. agr. ac techn. olsten. Prot. aquarum et pise. 1996. - № 22. - C. 59-64.

157. Wyffels, J. T. In vivo exposure of clearnose skates, Raja eglanteria, to ionizing X-radiation: acute effects on the thymus / Jennifer T. Wyffels, Cathy J.

158. Walsh, Carl A. Luer, Ashby B. Bodine // Developmental & Comparative Immunology.- 2005.- V.29.- №4,- P. 315-331.

159. Zapata, A. Ultrastructure of Elasmobranch lymphoid tissue. I. Thymus and spleen / A. Zapata // Dev. Сотр. Immunol. 1980. - №4. - P. 459-472.

160. Zapata, A. Phylogeny of the fish immune system / A. Zapata // Bull, de L. Inst. Pasteur. 1983. - Vol. 81. - P.165-186.

161. Zhuravleva, N.G. Immunological reactions in the early onthogenesis of Atlantic salmon and humpback salmon / N.G. Zhuravleva, E.E. Minchenok // Phytochemistry Reviews. 2005. - №3. - P. 431-439.

Информация о работе

Минченок, Елена Евгеньевна
кандидата биологических наук
Москва, 2007
ВАК 03.00.10

Диссертация

Защитные клеточные и тканевые реакции у семги и горбуши на ранних стадиях онтогенеза - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы