Взаимодействие комплемента с иммуноглобулинами G и конформационные изменения компонента C3 при неопластических процессах

Князева, Ольга Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Взаимодействие комплемента с иммуноглобулинами G и конформационные изменения компонента C3 при неопластических процессах
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Взаимодействие комплемента с иммуноглобулинами G и конформационные изменения компонента C3 при неопластических процессах"

На правах рукописи

Князева Ольга Александровна

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕМЕНТА

С ИММУНОГЛОБУЛИНАМИ С И КОНФОРМАЦИОИНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОМПОНЕНТА СЗ ПРИ НЕОПЛ\СТ ИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ

03.00.04 - Биохимия 03 00.02 - Биофизика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

□03 168369

Пущнио - 2008

003168369

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН, Уфа

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Камилов Феликс Хусаинович

доктор биологических наук, профессор Вахитов Венер Абсатарович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Маевский Евгений Ильич

доктор биологических наук, профессор Башкатов Сергей Александрович

доктор медицинских наук, профессор Далин Михаил Викторович

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», Москва

Защита диссертации состоится 5 июня 2008 года в 14 00 часов на заседании Диссертационного Совета Д 002 038 01 при Институте биофизики клетки РАН по адресу 142290 г Пущино Московской области, ул Институтская, д 3

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института биофизики клетки РАН г Пущино

Автореферат разослан « //» апреля 2008 г

Ученый секретарь Диссертационного совер кандидат биологических наук

ТИ Смолихина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность работы. Неопластические процессы развиваются благодаря способности опухолевых клеток к «ускользанию» от иммунного надзора Причины данного феномена пока до конца не понятны, хотя для его объяснения имеется множество концепций В настоящее время считается, что существует большое разнообразие механизмов ухода неопластических клеток из-под иммунологического контроля Выяснение этих механизмов является одним из наиболее актуальных направлений современной биологии и медицины

При развитии злокачественных новообразований у больных обнаруживаются нарушения иммунитета, затрагивающие практически все его звенья Существенную роль при этом играют опухолевые маркеры, сывороточные антитела, белки системы комплемента [Йегер Л и др , 1990, Барышников А Ю, 2003, Абелев Г И , 2004, Никулин Б А , 2007]

Антитела, большая часть которых приходится на класс являются ключевыми макромолекулами приобретенного иммунитета, так как они отвечают за распознавание чужеродных агентов и запускают иммунные реакции организма Вместе с тем иммунный ответ инициируется и усиливается различными фрагментами компонентов системы комплемента, которая среди систем гуморального звена врожденного иммунитета обладает наиболее сложным и многогранным действием

Начальным этапом классического пути активации комплемента является присоединение к комплексу антиген-антитело С^ - субкомпонента первого фактора комплемента Компонент СЗ, участвующий во всех путях активации комплемента и являющийся одним из центральных белков защитной системы человека, выступает в качестве связующего звена между врожденным и приобретенным иммунитетом [БаИи А е1 а1,2001, Хт-ре1 Уи е1 а1, 2004]

тителами и комплементом Выявление этих закономерностей позволяет по-новому подойти к оценке патогенеза болезни и приблизить к разгадке феномена иммунной резистентности новообразований

В силу выше изложенного, именно эти три молекулы были выбраны нами для исследований взаимодействия комплемента (СЦ) с иммуноглобулинами (^в) и конформационных изменений в процессе спонтанного гидролиза (СЗ) при неопластических процессах

Цель исследования: выяснить биохимические механизмы взаимодействия врожденного и приобретенного иммунитета на примере ключевых белков субкомпонента комплемента СЦ и иммуноглобулина в, а также конформационных изменений компонента комплемента СЗ в процессе спонтанного гидролиза при неопластических состояниях

Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи:

1 Сравнить константы взаимодействия между субкомпонентом комплемента СЦ и 1§0 при неопластических состояниях (хроническом лимфолейкозе, ходжкинских и неходжкинских лимфомах, раке молочной железы) и в норме

2 Провести сравнительный анализ аффинности моноклональных антител к различным антигенным детерминантам больных хроническим лимфолей-козом и здоровых доноров

3 Сравнить количество СЦ связывающихся с больных хроническим лимфолейкозом и здоровых доноров

4 Оценить на модели ^О-фосфатидилхолин влияние лигандирования на комплементфиксирующую функцию и аффинность моноклональных антител к его различным антигенным детерминантам

5 Оценить влияние при изучаемых заболеваниях на альтернативный путь активации комплемента

6 Оценить закономерности конформационных изменений СЗ компонента комплемента в процессе спонтанного гидролиза при инкубации сыворотки и плазмы крови больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком

молочной железы, а также «группы онкологического риска»

7 Исследовать взаимосвязь между уровнем конформационной формы СЗ компонента - СЗ(Н20) и опухольассоциированного антигена СА-125 у больных раком яичников до и после проведения курса химиотерапии

8 Изучить конформационные изменения СЗ компонента у больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы на фоне программы химиотерапии

9 Оценить влияние на конформационные изменения СЗ компонента им-муномодулирующих средств эфирных масел Lavandula vera, Salvia sclaria и глюконатов Зс1-металлов

Научная новизна работы.

Впервые проведен анализ аффинности моноклональных антител к различным антигенным детерминантам IgG больных хроническим лимфолейко-зом Впервые проведен сравнительный анализ констант диссоциации комплекса Clq-IgG до и после взаимодействия его с фосфатидилхолином и аффинности моноклональных антител к различным антигенным детерминантам IgG после его лигандирования

Впервые охарактеризованы конформационные изменения СЗ компонента комплемента в процессе его спонтанного гидролиза в сыворотке и плазме крови больных хроническим лимфолейкозом, ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы, «группы онкологического риска» по раку молочной железы Впервые выявлена зависимость между изменением уровня конформационной формы СЗ компонента комплемента СЗ(Н20) и содержанием опухолевого маркера СА-125 в плазме крови больных раком яичников до и после проведения курса химиотерапии Впервые охарактеризованы конформационные изменения СЗ компонента под действием химиотерапии и иммуномоду-лирующих средств (эфирных масел Lavandula vera, Salvia sclaria и глюконатов Зс1-металлов)

Получены новые штаммы гибридом, продуцирующие моноклональные

антитела к различным антигенным детерминантам иммуноглобулинов человека, пептиду мелитгину и опухольассоциированному антигену СА-125

Впервые обосновываются биохимические причины изменений взаимодействия СЦ с и конформационных изменений компонента СЗ в процессе его спонтанного гидролиза при неопластических состояниях Научно-практическая значимость

Данные о взаимодействии СЦ субкомпонента комплемента с и конформационных изменениях СЗ компонента в сыворотке крови больных при неопластических процессах и состояниях онкологического риска имеют большое значение для понимания молекулярных механизмов патогенеза заболеваний, для улучшения диагностики, прогноза и эффективности лечения

Полученные в работе моноклональные антитела (Патенты РФ от 19931994, №№ 2002803, 2003679, 2003680, 2003681, 2003682, 2003683, 2003684, 2003685, 2003686, 2003687, 2008350, 2010856) могут быть применены для различных биохимических, биофизических, иммунологических, клинических исследований, создания диагностических тест-систем и лечебных препаратов

Полученные результаты исследования могут помочь дальнейшему развитию и использованию научно-обоснованных методов борьбы со злокачественными заболеваниями. Результаты работы могут быть использованы в учебном процессе курсов биологической химии, биофизики, иммунологии и онкологии образовательных учреждений высшего медицинского образования и последипломной подготовки врачей

Основные положения, выносимые на защиту:

1 При неопластических процессах хроническом лимфолейкозе, ход-жкинских и неходжкинских лимфомах, раке молочной железы происходит ослабление силы связывания между субкомпонентом комплемента СЦ и иммуноглобулином в, выражающееся в увеличении константы диссоциации комплекса СЦ-1§0

2 Причиной снижения комплементфиксирующей функции при не-

опластических процессах является взаимодействие с Fc-фрагментами IgG метаболитов деструкции неопластических и других клеток - лигандов пептидной и липидной природы, проявляющих свойства катионов

3 При неопластических процессах белок СЗ претерпевает модификаци-онные изменения, проявляющиеся в процессе его спонтанного гидролиза, обусловленные появлением в сыворотке крови большего (по сравнению со здоровыми донорами) количества нуклеофилов, способствующих его конформаци-онному переходу в форму СЗ(Н20)

4 Изменение уровня конформационной формы СЗ компонента - СЗ(Н20) в плазме крови больных раком яичников после курса химиотерапии коррелирует со снижением концентрации опухольассоциированного антигена С А-125

5 Под действием химиотерапии в процессе инкубации плазмы крови больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы наблюдается снижение уровня конформационной формы СЗ(Н20) в зависимости от числа курсов химиотерапии, которое отражает положительную динамику лечения

6 Иммуномодулирующие средства (эфирные масла Lavandula vera, Salvia sclaria и глюконаты 3<1-металлов) оказывает корригирующее и стабилизирующее влияние на изменение уровня СЗ(Н20)

Личное участие автора в получении научных результатов заключается в разработке идеи работы, в постановке и проведении экспериментов, в статистической обработке и интерпретации полученных результатов

Внедрение результатов работы. Полученные в диссертационной работе моноклональные антитела внедрены в научно-исследовательскую деятельность кафедры биохимии и лаборатории биотехнологии Крымского государственного медицинского университета им С И Георгиевского, лаборатории молекулярной биологии и нанобиотехнологии Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН, отдела биофизики Института биохимии им А В Пал-ладина НАН Украины Результаты диссертации внедрены в учебный процесс и

научную деятельность кафедры биологической и биоорганической химии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава» и в практику работы отделения общей онкологии Башкирского Республиканского клинического онкологического диспансера.

Апробация работы: Материалы диссертации были доложены на республиканской конференции «Современные проблемы естествознания на стыке наук» (Уфа, 1998), 4-ой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» (Санкт-Петербург, 1999), XIX Всероссийском Чугуевском совещании по химии комплексных соединений (Иваново, 1999), Международном экологическом конгрессе «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» (Санкт-Петербург, 2000), Международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск, 2000), Международной научно-практической школе-конференции "Цитокины Воспаление Иммунитет" (Санкт-Петербург, 2002), III съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002), научно-практической конференции «Перспективные разработки науки и техники» (Белгород, 2004), IV Международной научно-практической конференции «Динамика научных исследований - 2005» (Днепропетровск, 2005), Межвузовской научно-технической конференции «Актуальные проблемы технических, естественных и гуманитарных наук» (Уфа, 2006), Международной научно-практической конференции «Современные направления теоретических и прикладных исследований» (Одесса, 2006), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной биохимии» (Киров, 2007), VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке, концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007), VI Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2007)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 43 научные работы, из них 10 в рекомендуемых ВАК РФ журналах, 4 в центральной печати,

12 патентов РФ

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 288 страницах компьютерного текста, включает 24 таблицы и 57 рисунков Состоит из следующих разделов «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты собственных исследований и их обсуждение» (6 глав), «Заключение», «Выводы», «Список литературы», включающий 184 отечественных и 278 иностранных источников

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В исследованиях были использованы сыворотки крови сходных по возрасту и полу больных при неопластических состояниях хронический лимфо-лейкоз (ХЛЛ) - 20 человек (с более 3 лет протекающей опухолевой формой ХЛЛ, при которой происходит диффузный рост опухоли в костном мозге), ходжкинские лимфомы (ХЛ) во II-IV стадии - 76, неходжкинские лимфомы (НХЛ) во II-1V стадии - 85, рак молочной железы (РМЖ) в I-IV стадии - 103, рак яичников (РЯ) в III стадии - 28, «группы онкологического риска» по раку молочной железы с диагнозом фиброаденома (ФА) - 9 человек, диффузная мастопатия (ДМП) - 27, узловая мастопатия (УМП) - 10 и клинически здоровых доноров (контроль) - 37, а также смеси сывороток от разных доноров с пулом 50 Больные ХЛЛ находились на лечении в отделении гематологии городской клинической больницы №13 г Уфы Все другие - в Башкирском Республиканском клиническом онкологическом диспансере г Уфы Кровь здоровых людей получали на станциях переливания крови при этих клиниках У больных с новообразованиями диагноз был подтвержден гистологическими исследованиями опухолевой ткани, анализами крови, изучением пунктатов костного мозга и иммунологической маркерной характеристики лимфоцитов периферической крови (ХЛЛ)

Использовались чистые препараты IgG человека, выделенные методом

ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-Трисакриле М ("LKB", Швеция) в 0,025М трис-HCl буфере, содержащим I М NaCI, рН 8,8, из сыворотки крови больных XJIJI, XJI, НХЛ, РМЖ, здоровых доноров и смеси сывороток от 50 доноров (в каждой группе п=10) Чистоту полученных IgG определяли с помощью диск-электрофореза в 7,5%-ном полиакриламидном геле по стандартной методике в системе буферных растворов, рН 8,3-8,8

Для решения поставленных в нашей работе задач необходимо было создать моноклональные антитела (МКАТ) к иммуноглобулинам человека, пептиду из яда пчелы - мелиттину и опухольассоциированному антигену СА-125, которые были получены с помощью гибридомной технологии. Гибридизацию проводили путем слияния 108 клеток селезенки мыши линии BALB/c, иммунизированной соответствующим антигеном, с 4><107 клеток миеломы Sp 2/0 Agl4 в присутствии 50%-ного раствора полиэтиленгликоля с молекулярной массой 4000 ("Merck", Германия) Клетки культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10-20% фетальной бычьей сыворотки и раствора ГАТ (гипоксантин, аминоптерин, тимидин) в первые 3 недели Через 7-10 суток после гибридизации проводили анализ культурапьной жидкости на наличие МКАТ методом непрямого ИФА Позитивные клоны клонировали методом лимитирующего разведения Наиболее продуктивный клон вводили в массовую культуру путем культивирования in vitro и in vivo На всех стадиях получения гибридом клетки в фетальной бычьей сыворотке с добавлением 10%-ного диметилсульфоксида замораживали в жидким азоте МКАТ выделяли из асцитической жидкости мышей путем осаждения в 17,5% растворе сернокислого аммония с последующей ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-трисакриле М

Таким образом, были получены МКАТ к IgG человека А5В8, 2G11, JI2H2, H11G5, 2F11, 2Н11, к IgAX. - 3E11G8, ^-легким цепям иммуноглобулинов - Е5, х,-тяжелым цепям иммуноглобулинов - ЗН2, к (Рс)5ц ВЗ, к lgM(% + Fc5 ц) 1А4, В2, В5, мелиттину (пептиду из яда пчелы) M2F9, опухольассоциированному антигену рака яичников СА-125 С2, D5, Е7, F4, G5

В экспериментах были также использованы МКАТ к СЗ, C3H20 (Н11СЗ, G10), полученные и любезно предоставленные нам в Государственном научном центре РФ ГосНИИ особо чистых биопрепаратов и МКАТ к IgG человека (5ЕЗ, 5F2, 3D3 и 4D6) - в Центральном научно-исследовательском рентгенорадиоло-гическом институте МЗ РФ (Санкт-Петербург)

В работе использовались различные виды иммуноферментного анализа (ИФА) непрямой, конкурентный, «сэндвич», перйодатный метод конъюгации МКАТ, методы реакции связывания комплемента (РСК), двойной радиальной иммунодиффузии, определения общей (СН50) и по альтернативному пути (АРН50) гемолитической активности комплемента.

Статистическую обработку результатов проводили методом вариационной статистики в программе Microsoft Office Exeel 2003 Достоверность различий между группами оценивали в соответствии с критерием Стьюдента Построение графиков и расчет констант производили, используя программу MATLAB 6 5

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Взаимодействие комплемента с IgG при неопластических состояниях

Исследование взаимодействия комплемента с IgG по классическому пути проводили путем определения констант диссоциации (Kd) комплекса Clq-IgG больных ХЛЛ, ХЛ, НХЛ и РМЖ по разработанной нами методике [Ефетов К А и др , 1994], являющейся модификацией метода [Козлов Л В и др, 1983, Тэтин СЮ и др, 1985] и предназначенной для сравнительной оценки величин Kd между собой

Изменение активности Clq прослеживалось в ИФА по конкуренции за связывание с ним двух IgG исследуемых IgG человека и моноклональных IgG мыши, конъюгированных с пероксидазой Необходимым условием данного метода являлось взаимодействие обоих IgG с Clq и отсутствие взаимодействия между собой, поэтому были использованы полученные нами МКАТ M2F9 про-

тив пептида мелиттииа Во избежание увеличения фиксации комплемента вследствие агрегации, препараты IgG перед постановкой эксперимента центрифугировали при 15 ООО g в течение 60 минут

Долю молекул Clq (Z), связавшихся с МКАТ, определяли по формуле Z = In (Е] - Е2)/(Е] - Е0), где Е] - экстинкция в контроле с PBS, Е2 - экстинкция в контроле с BSA, Ео - экстинкция, регистрируемая в опыте

Величина Z зависела от концентрации исследуемого IgG согласно уравнению 1/Zi = C/Zo 1/Kd + 1/Zo, где Zi - доля молекул Clq, связавшихся с МКАТ в присутствии IgG, Z0 - доля молекул Clq, связавшихся с МКАТ в отсутствие IgG, Kd - константа диссоциации комплекса IgG-Clq, С - концентрация исследуемого IgG в моль/л Построив график зависимости 1/Zi от С, получали в точке пересечения прямой с осью абсцисс значение, равное Kd с противоположным знаком На рисунке 1 в качестве примера продемонстрировано графическое определение Kd [Clq-IgG] больных- XJIJI - 1, XJI - 2, НХЛ - 3, РМЖ - 4, а также здорового донора принятого за контроль - 5 Значения Kd с противоположными знаками находятся в точках пересечения прямых с осью абсцисс Для IgG XJIJI (1) величина Kd составила 15,5 10"7 M, IgG XJI (2) -7,2-Ю-7M, IgG НХЛ (3) - 6,9 10"7 M, IgG РМЖ (4) - 3,5 10"7M, IgG донора (5) -1,5'10'7M

Таким образом, для каждой исследуемой группы (п=10) были получены следующие значения Kd доноры - (1,91±0,42) 10'7 M, XJIJI - (13,16 ± 3,29) 10"7 M (р < 0,01), ХЛ - (6,68±1,22) 10"7 M (р < 0,01), НХЛ - (5,76±1,25) 10"7 M (р < 0,02), РМЖ - (3,88±0,7)-10"? M (р < 0,05) И на основании этого сделан вывод, что при данных неопластических состояниях происходит ослабление силы связывания между Clq и IgG, выражающееся в увеличении Kd

Рис.1. Определение Кс1 комплекса С1я-1§С больных: ХЛЛ (1), ХЛ (2), НХЛ (3), РМЖ (4) и здорового донора (5).

Следующим этапом работы было выяснение причины снижения компле-ментфиксирующей функции 1^0 при неопластических процессах. С этой целью было проведено исследование аффинности МКАТ к различным антигенным детерминантам доноров и больных ХЛЛ, т.к. при этом заболевании взаимодействие С^ с 1§С оказалось наиболее слабым. Определение аффинности осуществляли путем определения Кс1 комплекса 1§С-МКАТ в конкурентном ИФА, являющимся модификацией метода [Тгщие1 В. е,Х а1., 1985].

Таблица 1 Константы диссоциации (Кс1) специфических моноклональных антител (МКАТ) к различным антигенным детерминантам больных хроническим лимфолейкозом (1§Охлл) и

здоровых доноров (1§Сдон)

Вид ДО Штамм МКАТ

А5В8 2С11 Л2Н2 Н1Ш5 2Н11 2Р11 Е5 ЗН2 5ЕЗ 5Р2 ЗБЗ 4Э6

ДОдон(п =10) 3,21± 0,35 3,68± 0,41 4,71± 0,53 3,61± 0,38 2,82± 0,27 3,24± 0,39 3,57± 0,48 2,39± 0,27 3,62± 0,39 3,81± 0,43 3,56± 0,37 3,47± 0,31

1§Охлл (п=10) 4,74± М2 ** 3,37± 0,34 4,5 8± 0,46 3,41± 0,35 2,96± 0,37 4,85± 0,42 ** 3,49± 0,51 2,55± 0,31 3,59± 0,35 3,73± 0,44 4,99± 0,46 * 4,82± 0,36 **

Примечание В сравнении с доноров * -р < 0,05, ** -р < 0,02.

Все приведенные значения К<1 следует умножать на 10"8

Расчет Kd проводили, исходя из уравнения Ао/(Ао - А) = 1 + Kd/a, где а -концентрация вносимого вместе с антителом антигена в моль/л, Ао - экстинк-ция при а = О, А — экстинкция, регистрируемая в опыте Строя зависимость Ао/(Ао - А) от 1/а, получали прямую, тангенс угла наклона которой равен Kd

В таблице 1 представлены величины Kd комплекса MKAT-IgG, характеризующие аффинность МКАТ Их специфичность такова А5В8 специфичны к антигенной детерминанте всех подклассов кроме IgG2,2G11 - к антигенной детерминанте всех подклассов кроме IgG2, 2G11 - к антигенной детерминанте хинджа всех подклассов кроме IgG3, J12H2 - к антигенной детерминанте хинд-жа всех подклассов кроме IgG4, H11G5 и2Н11 - к антигенной детерминанте хинджа всех подклассов, a 2F11 - к антигенной детерминанте, повторяющейся на Fab и Fc фрагментах IgG, Е5 - к антигенной детерминанте, расположенной на Х-легких цепях, а ЗН2 — на /_-легких цепях МКАТ 5ЕЗ и 5F2 взаимодействовали с антигенными детерминантами IgG, расположенными в области хинджа, a 3D3 и 4D6 - с антигенными детерминантами IgG, расположенными в области Fc-фрагмента

Таким образом, было показано, что при ХЛЛ происходит увеличение Kd (т е снижение аффинности) МКАТ к антигенным детерминтам, расположенным лишь в области Fc фрагмента IgG (примерно на 30%) И на основании полученных результатов предложена гипотеза о стерическом «экранировании» центра связывания Clq с IgG образующимися вследствие повышенной деструкции опухолевых и окружающих опухоль клеток метаболитами - лигандами

Известно, что при взаимодействии белка с лигандом возможно два типа связывания. 1 - когда конформация белка не меняется и константа связывания остается постоянной, 2 — когда первая связывающая молекула лиганда увеличивает сродство белка к следующему лиганду, открывая новые центры связывания В таком случае, метаболит - лиганд (L), соединяясь с IgG, открывает на нем дополнительные центры связывания другому лиганду - Clq Так как IgG-мономер больше двух центров связывания с Clq иметь не может, то для более

наглядного сравнения количества СЦ, присоединяющегося к нужно, чтобы молекулы находились в ассоциированном состоянии, при котором количество центров связывания резко возрастает При взаимодействии таких с СЦ могут образовываться различные комплексы ^в-Ь-СЦп, 1§С-Ь-С1цп+], 1§0-Ь-С^„+2 и т.д При отсутствии связывания с лигандом количество СЦ в комплексе с будет меньше, и такой комплекс будет выглядеть, например, как ^й-СЦп-ь К«1 подобных комплексов будут изменяться под влиянием стохастических факторов, то есть, чем больше лигандов связывается с тем больше диссоциация Если процесс диссоциации образующихся комплексов выразить в форме следующих реакций

то значения констант расположатся в следующем порядке Кс14 > Кс13 > Кс12 > Кс^ Соответственно, количество С^ в этих комплексах будет уменьшаться таким образом. ^0-Ь-С1я„+2 > ^0-Ь-С1яп+1 > ^С-Ь-С1ч„ > ^С-С^

Следовательно, если наше предположение о том, что при неопластических процессах подвергается лигандированию продуктами деструкции опухолевых клеток, верно, то наряду с ослаблением взаимодействия между СЦ и больных должно возрастать количество СЦ, связывающихся с ассоциированными Поэтому была проведена количественная оценка доли С1я, взаимодействующих с больных ХЛЛ и здоровых лиц, находящихся в ассоциированном состоянии, с помощью метода РСК (реакции связывания комплемента) и ИФА

По РСК с сенсибилизированными рецепторами эритроцитов барана (ЕА) в присутствии можно косвенно судить о количестве С1я, связавшихся с исследуемыми Например, если наблюдается полный гемолиз ЕА, значит, взаимодействия с не произошло, отсутствие гемолиза, наоборот, означает

1ЕО-С1Ч„.1->1ЕС-С1Чп.2 + С1Я ^О-Ь-СЦп ДО-СЦ,,., + С1Ч 1ёО-Ь-С1Чп+1 180-Ь-С1Чп + С1Ч 1ЕС-Ь-С1Чп+2 1яО-Ь-С1Чп+1 + С1Ч

(Ы,) (К<а2) (ка3)

(Ксад,

полное взаимодействие С1ц с Разная степень задержки гемолиза свидетельствует о различном количестве СЦ, связанных с Определение РСК в присутствии больных ХЛЛ и здоровых доноров показало, что фиксация комплемента молекулами больных ХЛЛ в 0,6 М растворе сахарозы, способствующей их ассоциации, происходит на 20-40% сильнее, чем здоровых лиц (р < 0,05 - р < 0,001) При этом Кс1 комплекса СЦ-ДО больных ХЛЛ были значительно ниже, чем здоровых доноров, что свидетельствовало о большем взаимодействии при патологии и с другими лигандами

Кроме того, с помощью МКАТ методом ИФА было показано, что ассоциированные на полистироловом планшете ^О при ХЛЛ связывают С1ц в 4,86,7 раз больше чем в контроле

Таким образом, полученные результаты указывают на то, что при неопластических процессах происходит большее, чем в норме связывание с лигандами

Возможность взаимодействия с различными низкомолекулярными факторами показана многими авторами [Завьялов В П, 1984, Троицкий Г В и др, 1991] Продемонстрирована способность присоединять липидные и пептидные компоненты (фосфатидилхолин, мелитгин), что приводит к ослаблению антигенсвязывающей функции антител [Ефетов К А и др, 1993, Ефетов К А и др, 2001] Однако не было выяснено, вызывает ли подобное взаимодействие изменения комплементфиксирующей функции

Следует отметить, что обе молекулы (фосфатидилхолин и мелитгин) имеют сходную структуру гидрофобный «хвост», который у мелитгина сформирован преимущественно двадцатью гидрофобными аминокислотными остатками, и гидрофильную «головку», состоящую из шести положительно заряженных аминокислот у мелитгина, а также обладают свойствами поликатиона При злокачественном росте клеток, сопровождающемся усиленной деградацией неопластических и других окружающих опухоль клеток, в кровяном русле циркулируют различные метаболиты - лиганды, имеющие в своем составе катионные

компоненты, которые, подобно мелитгину и фосфатидилхолину, способны к взаимодействию с Fc-фрагментами IgG Поэтому для подтверждения заключения о том, что при неопластических процессах происходит большее, чем в норме связывание IgG с лигандами, мы включили изучение влияния взаимодействия фосфатидилхолина, как модельного лиганда (одного из основных компонентов клеточных мембран), с IgG здоровых доноров на константу диссоциации комплекса Clq-IgG

В результате было обнаружено, что лигандирование IgG фосфатидилхо-лином вызывает увеличение Kd [Clq-IgG] примерно в 10 раз с 1,6 10'7 M до 16,8 10"7 M Наряду с этим было также показано, что происходит снижение аффинности МКАТ к антигенным детерминтам в области Fc-фрагмента IgG, связанного с фосфатидилхолином (примерно на 30%)

На основании полученных результатов был сделан вывод, что снижение комплементфиксирующей функции IgG при неопластических процессах может происходить за счет взаимодействия с лигандами, количество которых при неопластических состояниях увеличивается вследствие повышенной деструкции опухолевых и окружающих опухоль клеток

Локализация центра связывания для Clq в области СН2 домена молекулы IgG была показана достаточно давно [Emanuel Е J et al, 1982], но при этом имеются и другие точки зрения Так, существует мнение о наличии связывания Clq с IgG в области Сн3 домена IgG [Painter R H et al, 1981] Хотя и показано [Duncan A R et al, 1988], что для связывания Clq обязательным условием является последовательность .-Glu318-X-Lys320-Y-Lys322-. Н-цепи IgG и разработан синтетический пептид, моделирующий участок связывания IgG на Clq [Baumann MA et al, 1990], есть информация о локализции Clq-связывающего центра в другой области Н-цепи IgG 231-238 [Morgan A et al, 1995], а также о том, что в иммуноглобулине, связывающем комплемент, указанный сайт является нефункционирующим [Idusogie Е.Е et al, 2000]

Исходя из выше перечисленного, мы посчитали целесообразным уточ-

нить локализацию центра связывания молекул СЦ и исходя из взаимодействия с фосфатидилхолином.

Так как для эффективного взаимодействия с положительно заряженной гидрофильной «головкой» фосфатидилхолина этот сайт должен обладать отрицательным зарядом и гидрофобным карманом для гидрофобного «хвоста» молекулы, и известно, что этим условиям хорошо удовлетворяет полость в молекуле между двумя Сн2-доменами, представленная преимущественно радикалами гидрофобных аминокислот и содержащая два углеводных компонента, на концах которых находятся отрицательно заряженные остатки нейраминовой кислоты, то было сделано предположение о локализации сайта взаимодействия С1я с между двумя Сц2-доменами

На следующем этапе работы была проведена оценка гемолитической активности комплемента по альтернативному пути (АРН50) в сыворотках крови больных ХЛЛ, ХЛ, НХЛ, РМЖ и здоровых доноров и исследование влияния на уровень АРН50 в донорской сыворотке больных данных нозологий и здоровых лиц А также были определены концентрации некоторых компонентов комплемента и их производных С1ц, СЗ, СЗ(Н20), СЗа и С4 в плазме крови перечисленных групп больных и доноров В результате было показано, что отличия по величине АРН50 в исследуемых группах отсутствуют, а концентрации показателей при всех нозологических формах заболеваний находятся в пределах нормы Лишь при РМЖ наблюдалось снижение количества СЗ и его кон-формационной формы СЗ(Н20) (примерно в 2,6 раза), а также подобное увеличение уровня фрагмента СЗа

Изменения уровня АРН50 в донорской сыворотке в присутствии больных ХЛЛ, ХЛ, НХЛ, РМЖ и здоровых доноров, оказались статистически не различимыми (рис 2), что свидетельствовало о необходимости более углубленного изучения компонентов данного пути активации

Рис 2 Определение гемолитической активности альтернативного пути (АРН50) в сыворотке крови здоровых людей в присутствии больных ХЛЛ (1), ХЛ (2), НХЛ (3), РМЖ (4) и донора (5)

Конформационные изменения СЗ компонента комплемента в процессе его спонтанного гидролиза при неопластических процессах и состояниях «онкологического риска»

При развитии заболевания белки претерпевают постсинтетическую модификацию, начальной стадией которой обычно является их конформационный переход (локальное или общее изменение конформации белка, в результате чего он переходит в другое - стабильное или метастабильное состояние) Для выявления самого факта модификации белка существуют различные методы, в числе которых может быть использован также их гидролиз [Троицкий Г В, 1991] В этом плане спонтанный гидролиз СЗ представляет особый интерес, т к позволяет выявить самые начальные, скрытые изменения в его конформации в

максимально приближенном к естественному состоянии Поскольку СЗ занимает центральное положение в системе комплемента и является связующим звеном между врожденным и приобретенным иммунитетом, изучение его конфор-мационных изменений при неопластических процессах может приблизить к пониманию причин «ускользания» опухолевых клеток из-под иммунного надзора

Структурной особенностью СЗ компонента является наличие необычной тиоэфирной связи в а-цепи, формирующейся в течение посттрансляционной модификации между тиольной группой цистеина и аминогруппой глутамина в пределах последовательности С1у-Су5988-С1у-С1и-С1п"'-А5п Эта последовательность обычно скрыта в гидрофобном окружении нативной молекулы и недоступна действию воды Однако благодаря конформационной подвижности глобулярный белок СЗ находится в динамическом равновесии нативной и обратимо «развернутой» формы, в которой обнаженная тиоэфирная связь может быть подвергнута нуклеофильной атаке водой и любым растворенным в воде нукпеофилом и гидролизоваться В результате образуется конформационная форма СЗ(НгО), инициирующая активацию комплемента по альтернативному пути

Определение уровня СЗ компонента системы комплемента и его конформационной формы СЗ(Н20) мы проводили в процессе инкубации сыворотки и плазмы венозной крови больных во НА-ША стадиях заболевания ХЛ (п=12), НХЛ (п=16) и РМЖ (п=15) в сравнении с контрольной группой клинически здоровых доноров (п=12) Каждую пробу крови разделяли на две части без ЭДТА и с добавлением 0,1 М раствора ЭДТА (рН 7,4) в соотношении 4 1 (добавление ЭДТА, хелатирующего Са2+, М§2+ и другие катионы, блокирует переход фибриногена в нерастворимый фибрин, а также переводит ферменты в формы, не способные проявлять свою активность, что приводит к инактивации и системы комплемента) Затем сыворотку и плазму отделяли центрифугированием при 1700 g, инкубировали при 37°С в течение 1,5, 3, 5, 7, 9, 11, 24 часов, замораживали и хранили при -70°С Размораживание проб проводили одновре-

менно, непосредственно перед постановкой эксперимента Уровень СЗ и СЗ(Н20) определяли методом ИФА с помощью специфических МКАТ [Тяготин Ю В. и др , 2002] В качестве нижних антител использовали мышиные анти СЗ МКАТ - HI 1СЗ. Для определения СЗ сверху наносили кроличьи анти СЗ поли-клональные антитела, а для СЗ(Н20) - мышиные МКАТ G10, взаимодействующие с антигенной детерминантой, экспонированной лишь на СЗ(Н20)

В результате было показано, что в процессе спонтанного гидролиза СЗ при инкубации сыворотки и плазмы крови больных XJI, HXJI, РМЖ происходят изменения уровня СЗ(Н20), отличающиеся от таковых у здоровых лиц и характеризующееся для каждой нозологии своей индивидуальностью Общим для всех групп больных было то, что через определенный промежуток времени происходило возрастание уровня СЗ(Н20) в норме отсутствующее (рис 3-4)

Из данных таблиц 2-3 видно, что уровень СЗ, как и СЗ(Н20), при XJI и НХЛ через 1,5 часа инкубации сыворотки/плазмы не отличался от контроля На протяжении всех последующих замеров концентрация СЗ в сыворотке крови больных ХЛ оставалась выше контрольного уровня через 3, 5, 11, 24 часа (р < 0,001), через 7 и 9 часов (р < 0,01) В плазме, как и в сыворотке, у больных ХЛ его уровень постоянно превышал контроль У больных НХЛ картина была сходной, за исключением 7 часов в сыворотке (без изменений) и 9 часов в плазме (снижение, р < 0,01)

Концентрация СЗ(Н20) в сыворотке крови больных ХЛ через 3, 5 и 7 часов превышала контроль (р < 0,001), а через 24 часа становилась ниже (р < 0,001) У больных НХЛ уровень СЗ(Н20) в сыворотке крови также в течение первых 7 часов инкубации почти не менялся, оставаясь в пределах от 10,07±0,65 мкг/л до 9,92±0,57 мкг/л При этом его содержание в сыворотке здоровых лиц существенно снижалось уже к 3 часу наблюдений (р < 0,001)

1,5 3 5 7 9 11 24 Время инкубации, ч

Рис 3 Уровень СЗ(Н20) в процессе инкубации сыворотки крови больных ХЛ (2), НХЛ (3) и РМЖ (4) в сравнении с контролем (1)

1,5 3 5 7 9 11 24 Время инкубации, ч

Рис 4 Уровень СЗ(Н20) в процессе инкубации плазмы крови больных ХЛ (2), НХЛ (3) и РМЖ (4) в сравнении с контролем (1)

Таблица 2 Уровень СЗ и СЗ(Н20) при инкубации сыворотки крови больных ходжкинскими (ХЛ), неходжкинскими лимфомами (НХЛ) и раком молочной железы (РМЖ) в сравнении со здоровыми донорами

(контроль)

Группа СЗ, м кг/мл СЗ(Н20), мкг/мл

обследо- Время инкубации плазмы, ч

ванных 1,5 3 5 7 9 11 24 1,5 3 5 7 9 11 24

Контроль (п=12) 1303 ±44,2 1052 ±40,3 725 ±42 1297 ±62 998 ±41,8 1148 ±72,3 748 ±43 10,09 ±0,68 6,02 ±0,25 4,31 ±0,32 5,92 ±0,34 6,32 ±0,31 5,48 ±0,3 и ±0,07

ХЛ (п=12) 1448 ±773 1640 ±85 * А* 1225 ±74,2 *** 1746 ±107 ** 1450 ±103 ** 2020 ±118 *** 1198 ±64,5 *** 9,92 ±0,66 9,95 ±0,67 *** 9,98 ±0,56 *** 9,93 ±0,47 *** 5,94 ±0,43 6,05 ±0,34 0,62 ±0,03 ***

НХЛ (п—16) 1447 ±95,8 2080 ±139 *** 1225 ±71,6 *** 1150 ±41,7 1280 ±66,7 ** 2175 ±126 *** 1410 ±64 *** 10,07 ±0,65 10,05 ±0,57 *** 9,92 ±0,57 *** 9,95 ±0,43 *** 5,88" ±0,37 9,93 ±0,5 *** 1,03 ±0,11

РМЖ (п=15) 2450± 107,2 *★* 495± 32,1 *** 950± 54,9 ** 1150± 71,1 1080± 65,6 1525± 106,5* 470± 23,3 3,8± 0,27 *** 5,5± 0,29 5,0± 0,25 6,0± 0,34 6,3± 0,34 10,0± 0,63 *** 0,87± 0,03 ***

Примечание В сравнении с контролем * - р < 0,02, ** - р < 0,01, *** - р < 0,001

Таблица 3 Уровень СЗ и СЗ(Н20) при инкубации плазмы крови больных ходжкинскими (ХЛ), неходжкинскими лимфомами (НХЛ) и раком молочной железы (РМЖ) в сравнении со здоровыми донорами

(контроль)

Группа СЗ, м кг/мл СЗ(Н20), мкг/мл

обследо- Время инкубации плазмы, ч

ванных 1,5 3 5 1 9 11 24 1,5 3 5 7 9 11 24

Конт- 1024 625 524 648 676 897 518 10,06 ±0,4 4,43 4,05 43 3,96 4,12 3,23

роль (п=12) ±49 ±42,2 ±283 ±31,8 ±43,2 ±52,8 ±24 ±0,27 ±0,25 ±0,21 ±0,28 ±0,29 ±0,16

ХЛ (п=12) 874 ±62,5 1049 ±68,5 *** 1342 ±65,5 *** 1343 ±64,5 *** 1075 ±70,8 *** 1345 ±72,3 *** 963 ±67,7 *** 9,97 ±0,55 9,89 ±0,52 *** 7,48 ±0,27 *** 7,52 ±0,51 *** 9,86 ±0,91 *** 5,92 ±0,45 А* 5,11 ±03 ★**

НХЛ (п=16) 952 ±46,5 1396 ±81,7 *** 1050 ±60,5 *** 1250 ±97,1 *** 475 ±25,5 ** 1197 ±57,7 ** 800 ±50,3 *** 10,04 ±0,59 3,9 ±0,21 9,96 ±0,52 *** 5,89 ±0,45 ** 9,92 ±0,75 *** 5,5 ±0,34 ** 4,9 ±032 ***

РМЖ (п=15) 675± 365± 375± 495± 570± 620± 470± 3,9± 4,1± 43± 4,1± 3,9± 43± 5,0±

42,4 *** 20,8 *** 13,5 *** 28,8 ** 33,5' 38,3 ** 183 0,28 *** 0,22 0,28 0,24 0,18 0,24 0,17 **

Примечание В сравнении с контролем * -р<0,02, ** -р<0,01, ***-р< 0,001

Через 24 часа уровень СЗ(Н20) в сыворотке резко снижался, как в норме, так и при патологии

В плазме результаты были более стабильными при ХЛ уровень СЗ(Н20) на протяжении всего времени наблюдений, за исключением 1,5 часов, оставался выше контрольного При НХЛ через 1,5 и 3 часа инкубации концентрация СЗ(Н20) практически не отличалась от контроля, но затем становилась выше к 5 часу примерно в 2,5 раза (р < 0,001), к 7 часу снижалась (р < 0,01) и вновь поднималась к 9 часу, превышая контроль более чем в 2,5 раза (р < 0,001) С 11 часов уровень СЗ(Н20) падал, оставаясь выше контрольного (р < 0,01), и еще более снижаясь к 24 часам (р < 0,001)

При РМЖ через 1,5 часа инкубации сыворотки и плазмы наблюдалось существенное снижение по сравнению с контролем содержания, как СЗ(Н20), так и СЗ (р < 0,01) При дальнейшей инкубации плазмы, уровень СЗ оставался ниже, чем в контроле, а в сыворотке его уровень постоянно колебался, принимая значения то выше через 1,5 (р < 0,001), 5 (р < 0,01) и 11 часов (р < 0,02), то ниже через 3 и 24 часа (р < 0,001), то приближалась к контрольному через 7 и 9 часов Снижение уровня СЗ(Н20) в плазме относительно контроля (почти в 2,6 раза, р < 0,001) наблюдалось лишь через 1,5 часа В дальнейшем (через 3, 5, 7, 9, 11 часов) его уровень практически не отличался от контрольного и только к 24 часам становился выше примерно в 1,5 раза (р < 0,01) В сыворотке уровень СЗ(Н20) менялся более существенно его снижение по сравнению с контролем наблюдалось через 1,5 и 24 часа инкубации (р < 0,001), значительное повышение - через 11 часов (р < 0,001) Через 3, 5, 7 и 9 часов отличия были статистически неразличимыми

На основании полученных результатов было сделано предположение, что наблюдаемый в сыворотке эффект связан с повышенной активностью протео-литических ферментов при неопластических процессах [Тяготин Ю В и др, 2002], под действием которых может происходить и гидролиз СЗ [Бельтюков П П, 2000] Однако, при инкубации плазмы, полученной с помощью ЭДТА -

классического ингибитора протеаз, уровень СЗ(Н20) также возрастал 1,2 1

. 0,8

ел

О °>6 £

С 0,4

0,2 -0

1,5

5 7 9 11 Время инкубации, ч

Рис 5 Изменение [СЗ(Н;0)/СЗ] 100% в процессе инкубации сыворотки крови больных ХЛ (2), НХЛ (3) и РМЖ (4) в сравнении с контролем (1)

1,5 3 5 7 9 11 24 Время инкубации, ч

Рис 6 Изменение [СЗ(Н20)/СЗ] 100% в процессе инкубации плазмы больных ХЛ (2), НХЛ (3) и РМЖ (4) в сравнении с контролем (1)

Следует заметить, что в отличие от ХЛ и НХЛ, при РМЖ повышение

уровня СЗ(Н20) наблюдалось лишь к 24 часам, что, видимо, связано со значительной ролью в образовании конформационной формы СЗ(Н20) при данном заболевании протеолитических ферментов

Нами было показано, что [СЗ(Н20)/СЗ] 100% находится в пределах нормы во всех группах, независимо от заболевания Отличия по этому показателю относительно друг друга и контроля выявлялись также лишь в характере этих изменений при инкубации сыворотки и плазмы (рис 5-6), что с одной стороны указывало на влияние опухолевых клеток на конформацию СЗ, своеобразие которого определялось спецификой патологического процесса С другой стороны, значительное повышение данного показателя при патологии относительно контроля через определенный промежуток времени в плазме с ЭДТА, явно свидетельствовало об изменениях конформации белка

Как всякая белковая молекула, СЗ в сыворотке крови под влиянием движения других молекул находится в форме шарообразного клубка, т к при этом поверхностная энергия будет минимальной Двр = пДСгп (где ДСт - изменение свободной энергии Гиббса мономера - одного аминокислотного остатка, Двр - всей молекулы - полимера) При образовании глобулы ее устойчивость определяется формулой ДСт = ДНш - ТДБт (где ДН - энтальпийный, ДБ - энтропийный факторы) Значение энтропийного члена ДБ рассчитывается исходя из свободы вращения внутри молекулы полипептида ДБш = Шп(£т,) (где ш, -число возможных конформеров) Т е число конформеров здесь может быть самым разнообразным Группы, образующие антигенную детерминанту на СЗ(Н20), могут принадлежать разным участкам полипептидной цепи и возникать в результате свертывания белка в уникальную структуру, удерживаемую сравнительно слабыми связями, которые легко могут быть разорваны. В таких

условиях доступность антигенной детерминанты для МКАТ будет зависеть от конформационных переходов белка, происходящих под влиянием различных факторов, в данном случае, нуклеофилов, что, видимо, и является причиной резких колебаний уровня СЗ(Н20)

Рис. 7 Изменение уровня СЗ(Н20) в процессе инкубации сыворотки крови больных «группы онкологического риска» с диффузной (ДМП) - 1, узловой мастопатией (УМП) - 2 и фиброаденомой (ФА) - 3 в сравнении с контролем - 4 и раком молочной железы (РМЖ) - 5

1,5 3 5 7 9 11 24 Время инкубации, ч

выдвинуто предположение, что белок СЗ при неопластических процессах претерпевает модификационные изменения, вызванные появлением в крови большего (по сравнению со здоровыми донорами) количества нуклеофилов, которые, открывают тиоэфирную связь для специфических МКАТ, взаимодействующих с антигенной детерминантой, экспонированной лишь на СЗ(Н20)

Исследование конформационных изменений СЗ у больных «группы онкологического риска» по молочной железе с диагнозом диффузная мастопатия (ДМП), узловая мастопатия (УМП) и фиброаденома (ФА) показало, что уровень СЗ(Н20) в процессе инкубации сыворотки и плазмы крови имеет статистически значимые отличия от такового у больных РМЖ и здоровых лиц Наиболее выраженными эти отличия были в сыворотке крови (рис 7), но в отличие от РМЖ и других неопластических состояний, у больных ДМП, УМП и ФА резкого повышения уровня СЗ(Н20) не наблюдалось И данный факт является дополнительным свидетельством в пользу нашего предположения

Возникновение неопластических клеток и их пролиферация вызывает активацию системы иммунного надзора, проявляющуюся в многочисленных реакциях организма, в том числе, появлении в крови опухолевых антигенов, концентрация которых коррелирует с прогрессированием опухолевого процесса В связи с этим возникает вопрос, существует ли взаимосвязь между содержанием данных маркеров и СЗ(Н20)9

Для ответа на поставленный вопрос в качестве такого маркера был избран опухольассоциированный антиген рака яичников СА-125 Этот антиген является гликопротеином с молекулярной массой 200 кДа, экспрессируется на поверхности опухолевых клеток и может быть определен в периферической крови методом ИФА с помощью МКАТ Чувствительность диагностики рака яичников (РЯ) с использованием опухолевого маркера СА-125 составляет 86,2% -95,5% [Чиссов В И и др , 2000]

С помощью полученных нами МКАТ было обнаружено (табл 4), что по-

еле проведения полного курса индукционной химиотерапии по программе СР (цитостатин в дозе 75 мг/м2 в 1 день, циклофосфамид 600-750 мг/м21 день; интервал между курсами - 3 недели, количество курсов 4-6) пациенткам с РЯ в III стадии (п=28) содержание маркера у них в плазме снижалось на 30-70% от исходного уровня и определялось в интервале от 313 до 440 МЕ/мл (р < 0,05, г = 0,942) При этом концентрация СЗ(Н20) до химиотерапии через 9 часов инкубации плазмы (время было выбрано на основании предварительных экспериментов) измерялась в пределах от 2,49 до 4,33 мкг/мл, после - от 0,97 до 1,51 мкг/мл (р < 0,01, г = 0,963) Т е после курса химиотерапии происходило существенное снижение концентрации в плазме крови больных РЯ как СА-125 (примерно в 2 раза), так и СЗ(Н20) (примерно в 2,7 раза) Таблица 4 Концентрация СА-125 и СЗ(Н20) в плазме крови больных раком

яичников (РЯ) до и после полного курса химиотерапии (XT)

Группа Число СА-125, СЗ(Н20),

обследо- наблю- МЕ/мл мкг/мл

ванных дений ч/з9 ч

РЯ до XT 28 750±105 3,41±0,92

РЯ 28 375162 1,2410,27

после XT р< 0,05, г=0,942 р< 0,01,1=0,963

На основании полученных результатов было сделано заключение, что изменение уровня конформационной формы СЗ(Н20) в процессе инкубации плазмы больных РЯ находится в прямой зависимости от содержания опухолевого маркера СА-125, вследствие чего может служить оценочным критерием эффективности лечения

Конформационные изменения СЗ под влиянием химиотерапии и им-муномодулирующих средств: эфирных масел Lavandula vera, Salvia sclana и глюконатов 3(1-метяллов Важным компонентом лечения больных XJI, HXJI, РМЖ является адью-

вантная полихимиотерапия (ПХТ), направленная на подавление скрытых субклинических проявлений ракового заболевания Поэтому следующим этапом нашей работы было исследование влияния программы полихимиотерапии (ПХТ) на конформационные изменения СЗ компонента, что необходимо для дальнейших поисков вариантов адекватной иммунокоррекции

В исследование были включены 54 больных ХЛ (ИА-1У), которым проводилась индукционная терапия с интервалом в 2 недели, по схемам I линии СУРР и АВУЭ СУРР циклофосфан 600 мг/м2 в/в в 1, 8 дни, винбластин 6 мг/м2 в/в в 1, 8 дни, прокарбазин 100 мг/м2 ро в 1, 14 дни, преднизалон 40 мг/м2 р о в 1, 14 дни, перерыв между циклами 2 недели АВУЭ доксорубицин 25 мг/м2 в/в в 1, 14 дни, блеомицин 10 мг/м2 в/в в 1, 14 дни, винбластин 6 мг/м2 в/в в 1, 14 дни, ДТИК 375 мг/м2 в/в в 1,14 дни 59 больных НХЛ (НА- IV), которым проводилась индукционная терапия с интервалом в 4 недели по схемам I линии СЬНОР адриабластин 40 мг/м2 в/в 1 день, винкристин в/в 1,4 мг/м2 в/в 1 день, циклофосфан 1200 мг/м2 в/в, преднизалон 60 мг/м2 внутрь 63 больных РМЖ (ПА- IV), которым проводилась комбинированная терапия с интервалом в 4 недели по схеме СМР: циклофосфан 100 мг/м2 внутрь с 1 по 14 день, метот-рексат 40 мг/м2 в/в 1 и 8 день, фторурацил 600 мг/м2 в/в в 1 и 8 дни

Венозную кровь забирали на ОД М раствор ЭДТА (рН 7,4) и инкубировали в течение 5, 7, 9 часов при +37° С, замораживали пробы при -20° С Выбор времени инкубации был определен, исходя из ранее полученных результатов, но, к сожалению, по техническим причинам мы не смогли выдержать тот же режим хранения, какой был в предыдущих экспериментах

Уровень показателей определяли в плазме по завершении каждого из курсов ПХТ, общее число которых составляло шесть для ХЛ, НХЛ и пять для РМЖ

* 5 сГ4

ГО

2 1 О

5 7 9

Время инкубации, ч

Рис 8 Изменение уровня СЗ(Н20) в плазме больных раком молочной железы после курсов полихимиотерапии (ПХТ) 1 - до ПХТ, 2 - после 1 курса, 3 -после 2 курсов, 4 - после 3 курсов, 5 - после 4 курсов, 6 - после 5 курсов

В результате было показано, что изменения уровня СЗ(Н20) в плазме крови больных ХЛ, НХЛ и РМЖ под влиянием ПХТ определяются числом курсов и временем инкубации плазмы Увеличение числа курсов ПХТ вызывало дальнейшее снижение концентрации СЗ(Н20), что отражало положительную динамику лечения Так, для больных ХЛ снижение уровня СЗ(Н20) через 7 и 9 часов инкубации относительно нелеченного контроля, коррелирующее с положительным действием лечения, наблюдалось после пяти и шести курсов ПХТ, у больных НХЛ - через 7 часов после шести курсов У больных РМЖ проведение цикловой ПХТ приводило к значительному снижению уровня СЗ(Н20) через 5, 7 и 9 часов инкубации плазмы после всех курсов терапии за исключением 5 часов второго курса (рис. 8), что также коррелировало с положительной динамикой лечения.

Таким образом, полученные результаты, дают основание рассматривать конформационный переход СЗ, как одну из защитных реакций иммунного надзора, характеризующую направленность изменений резистентности организма на интенсивность опухолевого роста

Большое значение для лечения неопластических процессов представляют вещества, которые наряду с иммуномодулирующими свойствами обладают противоопухолевой активностью К таким веществам относятся эфирные масла Lavandula vera, Salvia sclaria (лаванды, шалфея) [Леонова, НС, 2001, Сюрин С А , 2006] и соединения Зс1-металлов (двухвалентных металлов Mn, Fe, Со, Си и Zn) с глюконовой кислотой [Конкина ИГ и др , 2002, 2006,2007] Результаты исследований конформационных изменений СЗ дают основание для использования данного показателя в качестве оценочного критерия эффективности воздействия лекарственных средств Кроме того, в литературе имеется указание на то, что снижение содержания СЗ компонента коррелирует с другими иммунными нарушениями, которые сопровождают онкологические заболевания [Борисова A M и др, 1999]

Нами была проведена серия экспериментов, включавших исследования противоопухолевой активности эфирных масел Lavandula vera - Salvia sclaria в режиме ароматерапии (APT) и композиции глюконатов Зс1-металлов в физиологических концентрациях (МЭЛ) in vivo - на линейных мышах BALB/c с привитой миеломой Sp 2/0 Agi4 (n=40, APT, n=24, МЭЛ) и влияния их на изменение уровня СЗ(НгО) в процессе инкубации сыворотки крови больных РМЖ (I-IIa), ДМП и практически здоровых женщин (n=30, APT, п=15, МЭЛ), а также лиц длительно (более 10 лет) работающих в химической лаборатории с вредными условиями труда (n=10, APT)

Для проведения APT эфирные масла Lavandula vera и Salvia sclaria (производства НПО «Крымроза») в соотношении 2 1 распылялись с парами воды при температуре 75-85° С, создавая концентрацию в воздухе помещения 3-6

мг/м3 Экспозиция одного сеанса составляла 40 минут, весь курс представлял собой 10-12 процедур в течение 2 недель ежедневно с перерывом на выходные дни МЭЛ в рабочей концентрации 0,4 мг/мл вводили перорально ежедневно, начиная с 1-го дня после прививки опухолевых клеток Период наблюдения в обоих экспериментах составлял 30 суток, критериями активности являлись торможение развития асцита (ТРА) и увеличение продолжительности жизни животных (УПЖ)

В результате было показано ингибирующее влияние APT и МЭЛ на рост опухолевых клеток Sp 2/0 Agl4, выражающееся в торможении развития асцита у мышей BALB/c на 54,5 % и 65,5% относительно контрольной группы (р < 0,05) и увеличении продолжительности жизни животных на 26,5 % и 21,2% (р < 0,05) соответственно

Кроме того, было установлено цитотоксическое действие глюконатов данных Зё-металлов на клетки мышиной миеломы Sp2/0 Agl4 и эритролейке-мические клетки К562 человека

Определение уровня СЗ компонента и его конформационной формы СЗ(Н20) проводили методом ИФА с помощью специфических МКАТ Н11СЗ и G10 в одновременно размороженной сыворотке крови, которую предварительно инкубировали при +37°С в течение 1,5,3, 5, 7, 9,11 и 24 часов

Обнаружено, что после курса APT во всех наблюдаемых группах в процессе инкубации сыворотки крови, происходило выравнивание уровня СЗ(Н20) Особенно интересным на наш взгляд явилось то, что наблюдаемое ранее у больных РМЖ резкое возрастание уровня СЗ(Н20) через 11 часов, после курса APT исчезало, а при ДМП отличия с контролем полностью нивелировались (рис 9) Подобные конформационные изменения СЗ происходили также после действия композиции глюконатов Зс1-металлов

12 i

10 1

2 -

1,5 3 5 7 9 11 24 Время инкубации, ч

Рис 9 Изменение уровня СЗ(Н20) в сыворотке крови больных РМЖ, ДМП и здоровых лиц (контроль) до и после проведения курса APT 1 - контроль до APT, 2 - после APT, 3 - ДМП до APT, 4 -после APT, 5 - РМЖ до APT, 6 - после APT

В следующем эксперименте было проведено исследование изменений уровня СЗ и СЗ(Н20) после курса APT в сыворотке крови лиц длительно работающих в химической лаборатории с вредными условиями труда и имеющих патологические отклонения различного характера Показано, что после курса APT наблюдалось сглаживание изменений уровня СЗ(Н20), который практически не снижался через 29 часов инкубации сыворотки, несмотря на отсутствие в ней ЭДТА, а в некоторых случаях даже имел тенденцию к повышению (рис 10) При этом уровень СЗ оставался выше на протяжении всего периода наблюдений

Учитывая то, что снижение содержания СЗ коррелирует с другими иммунными нарушениями, сопутствующим онкологическим заболеваниям, повышение уровня СЗ и коррекция профиля его конформационных изменений в

процессе инкубации сыворотки крови может свидетельствовать о благоприятном и корригирующем влиянии эфирных масел Lavandula vera - Salvia solaría в режиме APT и композиции глюконатов Зс1-металлов на иммунную систему в целом

0,8 -

0,6 -

гч

0,2 -0 -

1,5 3 5 7 9 11 24 29 Время инкубации, ч

Ри

с 10 Изменение уровня СЗ(Н20) в сыворотке крови пациентки Дю, длительно работающей в химической лаборатории с вредными условиями труда до (1) и после (2) проведения курса APT

Заключение

связывания С1я с ^О (примерно в 10 раз) и снижение аффинности МКАТ к антигенным детерминтам в области Рс-фрагмента ^О (примерно на 30%) На основании всего перечисленного делается заключение, что ослабление компле-ментфиксирующей функции происходит благодаря взаимодействию с Рс-фрагментами лигандов с катионными компонентами — метаболитами деструкции опухолевых клеток и тканей При этом сайт взаимодействия С1я с локализован, вероятно, между двумя Сн2-доменами

Изменения уровня гемолитической активности комплемента по альтернативному пути (АРН50) в сыворотках крови больных ХЛЛ, ХЛ, НХЛ, РМЖ, а также в донорской сыворотке в присутствии иммуноглобулинов в указанных нозологии и здоровых доноров, статистически не различимы, что явилось причиной для более углубленного изучения конформационных изменений центрального компонента данного пути - СЗ

В процессе спонтанного гидролиза СЗ при неопластических состояниях (ХЛ, НХЛ и РМЖ) происходят изменения его уровня, отличающиеся от таковых у здоровых лиц, характеризующиеся для каждой нозологии своей индивидуальностью и статистически значимым повышением уровня конформацион-ной формы СЗ(Н20) через определенный промежуток времени Предполагается, что одной из причин данных изменений является постсинтетическая модификация СЗ, вызванная появлением в крови большего (по сравнению со здоровыми донорами) количества нуклеофилов, способствующих конформационному переходу СЗ в форму СЗ(Н20), которая становится доступной специфическим моноклональным антителам, взаимодействующим с антигенной детерминан-той, экспонированной лишь на СЗ(Н20) Существенный вклад в образование СЗ(Н20), особенно при РМЖ, вносят также протеолитические ферменты, количество которых при неопластических процессах увеличивается

У больных, составляющих группу «онкологического риска» по РМЖ (ДМП, УМП и ФА) резкого возрастания уровня СЗ(Н20) не происходит, что подтверждает выдвинутое нами предположение

Снижение уровня конформационной формы СЗ(Н20) в процессе инкубации плазмы крови больных раком яичников после проведения курса химиотерапии коррелирует с содержанием опухолевого маркера СА-125, что может служить дополнительным оценочным критерием эффективности лечения злокачественных заболеваний

Под действием полихимиотерапии при инкубации плазмы больных XJ1, HXJI и РМЖ наблюдается снижение уровня СЗ(НгО) в зависимости от времени инкубации и числа курсов ПХТ, коррелирующее с положительной динамикой лечения

Воздействие иммуномодулирующих средств (эфирных масел Lavandula vera, Salvia sclaria и глюконатов Зс1-металлов) наряду с противоопухолевой активностью оказывает корригирующее влияние на изменение уровня конформационной формы СЗ(НгО) в процессе инкубации сыворотки крови

ВЫВОДЫ

1 При неопластических состояниях (хронический лимфолейкоз, ход-жкинские и неходжкинские лимфомы, рак молочной железы) происходит статистически значимое снижение константы взаимодействия между ведущими звеньями врожденного и приобретенного иммунитета- субкомпонентом комплемента С lq и иммуноглобулином G (IgG)

2 Аффинность специфических моноклональных антител снижена (примерно на 30%) к антигенным детерминантам, расположенным в области Fc-фрагмента IgG больных хроническим лимфолейкозом по сравнению с IgG здоровых доноров

3 После лигандирования IgG фосфатидилхолином константа взаимодействия его с Clq становится на порядок ниже, и одновременно снижается аффинность моноклональных антител к антигенным детерминантам Fc-фрагмента модифицированного таким образом IgG.

4. Ослабление силы взаимодействия между Clq и IgG при неопластиче-

ских процессах является следствием постгрансляционной модификации IgG ли-гандами-катионами пептидной и липидной природы - продуктами деструкции неопластических клеток и окружающих их тканей

5 Воздействие IgG при неопластических состояниях (хронический лим-фолейкоз, ходжкинские, неходжкинские лимфомы, рак молочной железы) и здоровых доноров на уровень гемолитической активности комплемента по альтернативному пути является статистически неразличимым

6 В процессе спонтанного гидролиза СЗ компонента при инкубации сыворотки и плазмы больных при неопластических состояниях (ходжкинские и неходжкинские лимфомы, рак молочной железы) происходит изменение уровня СЗ(Н20), характеризующееся для каждой нозологии своей индивидуальностью и превышением контрольного уровня через определенный промежуток времени вследствие модификационных изменений конформации белка, под действием увеличенного количества нукпеофилов

7 Снижение уровня конформационной формы СЗ(Н20) при инкубации плазмы крови больных раком яичников после курса химиотерапии коррелирует с содержанием опухольассоциированного маркера СА-125, что может служить дополнительным оценочным критерием эффективности лечения злокачественных новообразований и дает основание рассматривать конформационный переход СЗ, как одну из защитных реакций иммунного надзора, характеризующую направленность изменений резистентности организма на интенсивность опухолевого роста

8 Под действием химиотерапии в процессе инкубации плазмы крови больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы наблюдаются изменения концентрации СЗ(Н20) в зависимости от курсов химиотерапии, увеличение числа которых вызывает дальнейшее снижение его уровня, коррелирующее с положительной динамикой лечения

9 Под действием иммуномодулирующих средств (эфирных масел Lavandula vera, Salvia sclaria и глюконатов 3(1-металлов) происходит коррекция

профиля спонтанного гидролиза компонента СЗ, что может свидетельствовать о благоприятном влиянии данных средств на иммунную систему

Список основных публикации по теме диссертации Статьи в журналах, рекомендуемых ВАК

1 Ефетов К.А , Князева О А Использование моноклональных антител к иммуноглобулинам человека в реакциях иммунопреципитации // Иммунология -1994 -№ 2 -С 57-58

2 Князева О А . Сакаева Д Д, Тяготин Ю В Конформационные изменения СЗ компонента комплемента при хранении крови больных лимфогранулематозом и здоровых людей // Вопросы онкологии - 2000 - Т 46, № 1 - С 58-60

3 Сакаева Д Д , Князева О А Конформационные изменения СЗ компонента комплемента у больных ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами под влиянием цикловой полихимиотерапии // Иммунология - 2002 - № 5 - С 296-298

4. Князева О А . Сакаева Д Д СЗ-компонент комплемента в процессе хранения сыворотки крови больных неходжкинскими лимфомами // Цитокины и воспаление. - 2002 -Т 1,№2 - С 10

5 Сакаева Д Д, Князева О А Влияние полихимиотерапии на конформационные изменения СЗ компонента комплемента при лимфогранулематозе // Гематология и трансфузиология - 2002 - Т 47, № 4 - С 28-30

6 Сакаева Д Д, Князева О А Изменения СЗ компонента комплемента под влиянием полихимиотерапии у больных раком молочной железы // Иммунология -2002 -№ З.-С 172-174

7 Конкина И Г, Иванов С П, Князева О А. Давыдова В А, Васильева Е В , Карачурина Л М, Зарудий Ф А , Ионова И А, Гайфутдинова Р К, Му-ринов Ю И Физико-химические свойства и фармакологическая активность глюконатов Мп (II), Бе (II), Со (II), Си (II) и Ъа. (II) // Химико-фармацевтический

журнал-2002 -Т 36, №1 _с 18-21

8 Князева О А . Камилов Ф X Особенности взаимодействия субкомпонента комплемента С 1ц с при неопластических процессах // Иммунология -2007 -№4 -С 231-233

9 Князева О А. Сакаева Д Д, Камилов Ф X Особенности конформа-ционных изменений СЗ компонента комплемента в процессе его спонтанного гидролиза при неопластических процессах // Иммунология - 2007 - № 5 - С 268-272.

10 Князева О А . Сакаева ДД, Камилов ФХ, Вахитов В А Взаимосвязь между изменением под действием химиотерапии уровня СЗ(Н20) комплемента и опухолеассоциированного антигена СА-125 в плазме крови больных раком яичников // Вопросы онкологии - 2007 - Т 46, № 6. - С. 696-698

Статьи в прочих изданиях

11 Ефетов К А , Князева О А Использование моноклональных антител для определения комплементфиксирующей активности иммуноглобулинов в человека в норме и при хроническом лимфолейкозе // Украинский биохимический журнал -1994. -Т 66, №6 - С 106-111

12 Князева О А . Вахитов В А Исследование молекулярных механизмов снижения комплементфиксирующей фиксации ^О при хроническом лимфолейкозе с помощью моноклональных антител Современные проблемы естествознания на стыке наук Сб статей -Уфа, 1998 - Т 2 -С 120-122

13 Князева О А , Сакаева Д Д Влияние аэрофитотерапии на альтернативный путь комплемента Труды Четвертой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» В 3-х томах С Петербург, 1999, Т 3 - С 411

14 Конкина И Г, Князева О А Физико-химические характеристики и иммуномодулирующие свойства соединений 3<1 - элементов с глюконовой кислотой XIX Всероссийское Чугуевское совещание по химии комплексных со-

единений-Тезисы докладов Иваново, 1999 -С 302

15 Конкина И Г, Князева О А , Иванов С.П, Гайфутдинова Р.К, Му-ринов Ю И Биологическая активность комплексного препарата глюконатов 3d-металлов Материалы международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности", - Томск, 2000 -С 166-167

16. Князева О А . Конкина И Г , Хапфин Р М Иммуномодулирующее действие эфирных масел лекарственных растений Материалы международного экологического конгресса «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» С Петербург, 2000 - С 357

17. Конкина И.Г, Князева О А Комплексная методика психологической разгрузки. Материалы международного экологического конгресса «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» С Петербург, 2000 - С 329

18 Князева О А , Конкина И Г, Хакимова Р X К вопросу о механизмах иммуностимулирующего действия эфирных масел Lavandula vera и Salvia solaria Материалы международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности", - Томск, 2000 - С 163-164

19 Сакаева Д Д, Князева О А Изменение СЗ компонента комплемента под влиянием полихимиотерапии у больных с неходжкинскими лимфомами / ГЦМБ - М, 2000 - Деп в ГЦМБ 01 11 00, Д 26613.

20 Князева О А . Сакаева Д Д, Хакимова Р X Катаболизм СЗ компонента комплемента при хранении сыворотки крови больных предопухолевыми заболеваниями и раком молочной железы Материалы III съезда биохимического общества Санкт-Петербург, 2002 - С 175

21 Sakajeva, D D, Knvazeva О А . Sigajev N I Influo de kombimta kemioterapio al komplemento //Medicma internacia revuo. - Umversala Medicina Esperanto-Asocio -Krakov,2002 - Vol 20a, 1(78) -P 29-37

22 Князева О A . Сакаева ДД Исследование катабализма СЗ компо-

нента комплемента в процессе искусственного старения сыворотки крови больных неходжкинскими лимфомами Материалы научно-практической конференции «Перспективные разработки науки и техники» Т 6 Медицина - Белгород Руснаучкнига, Днепропетровск Наука и образование, 2004 - С 25-28

23 Князева О А Конформационные изменения СЗ компонента комплемента при хранении сыворотки крови больных раком молочной железы Материалы IV международной научно-практической конференции «Динамика научных исследований - 2005» Т29 Медицина - Днепропетровск Наука и образование, 2005 -С 16-18

24 Конкина И Г, Князева О А . Ищенко А М, Муринов Ю И Влияние биометаллов и их лигандного окружения на ингибирование роста онко-клеток "in vitro" Материалы Межвузовской научно-технической конференции «Актуальные проблемы технических, естественных и гуманитарных наук» Уфа, 2006 -С 203-205

25 Конкина И Г, Князева О А . Ищенко А М, Муринов Ю И. Исследование цитотоксического действия координационных соединений биометаллов "in vitro" Сборник научных трудов по материалам международной научно-практической конференции «Современные направления теоретических и прикладных исследований» Одесса,2006 -С 41-43

26 Князева OA Конформационные изменения СЗ компонента комплемента при инкубации плазмы крови больных раком молочной железы и «группы онкологического риска» // Вятский медицинский вестник - 2007 - № 4 -С 54-56

27 Князева О А Оценка комплементфиксирующей функции IgG при неопластических процессах Научные труды VIII международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» Москва, 2007 -С. 307

28 Конкина И Г, Князева О А. Ищенко А М , Попова И Ю, Муринов Ю И Физиологическая активность координационных соединений 3d-

элементов Сборник научных трудов по материалам VI Всероссийского научного семинара «Химия и медицина» Уфа, 2007 -С 61-62

Патенты

29 Патент РФ № 2002803, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08 Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L , используемый для получения моноклональных антител к IgGl,3,4 человека / К А Ефетов, СЮ Тэтин. О А Князева -Опубл 15 1193 Бюл 1993, №41-42

30 Патент РФ № 2003679, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08 Штамм гибридных культивируемых клеток Mus musculus L, используемый для получения моноклональных антител к IgG 1,2,3 человека / К А Ефетов, С Ю Тэтин, О А Князева. Г В Троицкий. - Опубл 30 11 93 Бюл 1993, №43-44

31 Патент РФ № 2003680, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08 Штамм гибридных культивируемых клеток Mus musculus L, используемый для получения преципитирующих моноклональных антител к IgM человека / К А Ефетов, СЮ Тэтин. О А Князева. Г В Троицкий - Опубл 30 11 93 Бюл 1993, № 43-44

32 Патент РФ № 2003681, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08 Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L, используемый для получения моноклональных антител к х-цепям IgG человека / О А Князева. К А Ефетов, С Ю Тэтин, Г В Троицкий - Опубл 30 11 93 Бюл 1993, № 4344

33 Патент РФ № 2003682, МКИ5 С 12 N 5/00 Штамм гибридных культивируемых клеток Mus musculus L - продуцент моноклональных антител к 1-легким цепям иммуноглобулинов человека / К А Ефетов, О А Князева. С Ю Тэтин, Г В Троицкий -Опубл 30 11 93 Бюл 1993, №43-44.

34 Патент РФ № 2003683, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08 Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L - продуцент моноклональных антител к мелиттину из яда пчелы (Apis melhfera L ) / О А Князева. К А Ефетов, С Ю Тэтин - Опубл 30 11 93 Бюл 1993, №43-44

35. Патент РФ № 2003684, МКИ5 С 12 N 5/00 Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L - продуцент моноклональных антител к (Рс)5ц-фрагменту IgM человека / К А Ефетов, С Ю Тэтин, О А Князева -Опубл 30 11 93 Бюл 1993, №43-44

36 Патент РФ № 2003685, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08 Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L - продуцент моноклональных антител к IgM человека / К А Ефетов, С Ю Тэтин, О А Князева, Г.В Троицкий -Опубл 30 11 93 Бюл 1993,№43-44

37 Патент РФ N 2003686, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 N 5/16 Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L - продуцент моноклональных антител к IgG человека / О А Князева. К А Ефетов, С Ю Тэтин, Г В Троицкий -Опубл 30 11 93 Бюл 1993, №43-44

38 Патент РФ № 2003687, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/00 Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L , используемый для получения моноклональных антител к IgM человека / К А Ефетов, С Ю Тэтин. О А Князева - Опубл 30 11 93 Бюл 1993, №43-44

39 Патент РФ № 2008350, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08 Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L , используемый для получения моноклональных антител к IgG человек а /К А Ефетов, С Ю Тэтин, ОА_Князева_ - Опубл 28 02 94 Бюл 1994, №4

40 Патент РФ № 2010856, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08 Штамм гибридных культивируемых клеток Mus musculus L., используемый для получения преципитирующих моноклональных антител к IgG человека / О А Князева. К А Ефетов, СЮ Тэтин, Г В Троицкий - Опубл 15 04 94. Бюл 1994, № 7

Князева Ольга Александровна

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕМЕНТА

С ИММУНОГЛОБУЛИНАМИ в И КОНФОРМАЦИОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОМПОНЕНТА СЗ ПРИ НЕОПЛАСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ

03.00 04 - Биохимия 03 00 02 - Биофизика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Лицензия № 0177 от 10 06 1996 г Подписано в печать 07 04 2008 г Бумага офсетная Отпечатано на ризографе Формат 60x84 1/16 Уел-печ листов 1,5 Уч-издл 1,7 Тираж 1 экз Заказ № 189

450000, г Уфа, ул Ленина, 3, ГОУ ВПО «Башгосмедуниверситет Росздрава»

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Князева, Ольга Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.:.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Иммунитет в защите организма от злокачественных опухолей.

1.2. Иммуноглобулины.

1.3. при неопластических процессах.

1.4. Система комплемента.

1.5. Комплемент при неопластических процессах.

1.6. Взаимодействие системы комплемента с ^О.58'

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы.

2.2. Методы.

2.2.1. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови человека.

2.2.2. Диск-электрофорез.

2.2.3. Определение концентрации белков.

2.2.4. Гибридомная технология.

2.2.5. Подсчет числа жизнеспособных клеток.

2.2.6. Метод двойной радиальной иммунодиффузии (Оухтерлони).

2.2.7. Получение конъюгатов моноклональных антител.

2.2.8. Иммуноферментный анализ.

2.2.9. Определение констант диссоциации комплекса СЦ-^О.

2.2.10. Реакция связывания комплемента с в присутствии эритроцитов барана.

2.2.11. Определение общей гемолитической активности комплемента (СН50).

2.2.12. Определение гемолитической активности комплемента по альтернативному пути (АРН50) в присутствии кроличьих эритроцитов.

2.2.13. Определение влияния на АРН50.

2.2.14. Оценка противоопухолевого эффекта по увеличению продолжительности жизни.

2.2.15. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 3. Получение моноклональных антител.

3.1. Получение моноклональных антител к иммуноглобулинам человека и мелиттину.

3.2. Получение моноклональных антител к опухольассоциированному антигену СА-125.

ГЛАВА 4. Взаимодействие С1ц субкомпонента комплемента с больных хроническим лимфолейкозом, ходжкинскими, неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы.

4.1. Определение констант диссоциации комплексов СЦ-

§0 больных хроническим лимфолейкозом, ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы.

4.2. Определение аффинности моноклональных антител к различным антигенным детерминантам больных хроническим лимфолейкозом в сравнении со здоровыми донорами.

4.3. Определение реакции связывания комплемента и констант диссоциации 1^0 больных хроническим лимфолейкозом и здоровых доноров с С 1ц в присутствии сахарозы.

4.4. Определение взаимодействующих с ^С больных хроническим лимфолейкозом и ^О здоровых доноров.

4.5. Определение константы диссоциации комплекса С1д с лигандированным фосфатидилхолином и аффинности моноклональных антител к различным антигенным детерминантам данного

ГЛАВА 5. Активность альтернативного пути комплемента и влияние на него больных хроническим лимфолейкозом, ходжкинскими, неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы.

5.1. Оценка альтернативного пути в сыворотке крови больных хроническим лимфолейкозом, ходжкинскими, неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы и здоровых доноров.

5.2. Определение содержания С 1ц, СЗ, СЗа, СЗ(Н20) и С4 в сыворотке крови больных ходжкинскими, неходжкинскими лимфомами и раком молочной железы.

5.3. Исследование влияния 1^0 больных хроническим лимфолейкозом, ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы и здоровых лиц на альтернативный путь активации комплемента.

5.4. Исследование влияния на спонтанный гидролиз компонента СЗ при инкубации сыворотки крови больных хроническим лимфолейкозом.

ГЛАВА 6. Конформационные изменения СЗ компонента комплемента в процессе его спонтанного гидролиза при неопластических процессах и состояниях «онкологического риска».

6.1. Конформационные изменения СЗ в процессе его спонтанного гидролиза при ходжкинских лимфомах.

6.2. Конформационные изменения СЗ в процессе его спонтанного гидролиза при неходжкинских лимфомах.

6.3. Конформационные изменения СЗ в процессе его спонтанного гидролиза при раке молочной железы.

6.4. Конформационные изменения СЗ в процессе его спонтанного гидролиза у больных «группы онкологического риска» по раку молочной железы.

6.5. Исследование корреляции между уровнем СЗ(НгО) и концентрацией опухолевого маркера — антигена СА-125 у больных раком яичников.

ГЛАВА 7. Конформационные изменения СЗ в плазме крови больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы под влиянием химиотерапии.

7.1. Конформационные изменения СЗ в плазме крови больных с ходжкинскими лимфомами под влиянием химиотерапии.

7.2. Конформационные изменения СЗ в плазме крови больных с неходжкинскими лимфомами под влиянием химиотерапии.

7.3. Конформационные изменения СЗ в плазме крови больных раком молочной железы под влиянием химиотерапии.

ГЛАВА 8. Конформационные изменения СЗ под влиянием иммуномодули-рующих средств: эфирных масел Lavandula vera, Salvia solaria и глюконатов Зс1-металлов. Изучение их противоопухолевых свойств.

8.1. Исследование противоопухолевой активности эфирных масел Lavandula vera и Salvia solaria in vivo.

8.2. Влияние эфирных масел Lavandula vera и Salvia solaria на изменение уровня СЗ(НгО) в процессе инкубации сыворотки крови.

8.3. Исследование цитотоксического, противоопухолевого и иммуномодулирующего действия глюконатов 3<1-металлов.

8.4. Влияние глюконатов Зс1-металлов на изменение уровня

СЗ(Н20) в процессе инкубации сыворотки крови.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Взаимодействие комплемента с иммуноглобулинами G и конформационные изменения компонента C3 при неопластических процессах"

Актуальность темы

Неопластические процессы развиваются благодаря способности опухолевых клеток к «ускользанию» от иммунного надзора. Причины данного феномена пока до конца не понятны, хотя для его объяснения имеется множество концепций.

В настоящее время считается, что существует большое разнообразие механизмов «ускользания» опухолевых клеток от иммунологического контроля. Выяснение этих механизмов является одним из наиболее актуальных направлений современной биологии и медицины.

При развитии злокачественных новообразований у больных обнаруживаются нарушения иммунитета, затрагивающие практически все его звенья. От функционального состояния иммунной системы в значительной степени« зависит интенсивность развития, роста и метастазирования опухоли, длительность ремиссии, ряд клинических проявлений и эффективность защиты, организма от злокачественных опухолей в целом. Спонтанные ремиссии, появление метастазов лишь после удаления первичной опухоли или обнаружения опухолевых клеток указывают на активное состояние противоопухолевого иммунитета [Иегер Л. и др., 1990; Барышников А.Ю., 2003; Абелев Г.И., 2004; Никулин Б.А., 2007]. Существенную роль при этом играют опухолевые маркеры, сывороточные антитела, белки системы комплемента.

Комплемент и антитела относятся к двум различным системам иммунной защиты организма: врожденному (неспецифическому) и приобретенному (специфическому/адаптивному), отличающимся и одновременно дополняющим друг друга, существующим в очень тесной взаимосвязи.

Иммуноглобулины, большая часть которых приходится на класс являются ключевыми макромолекулами приобретенного иммунитета, так как они отвечают за распознавание чужеродных агентов и запускают иммунные реакции организма. Вместе с тем иммунный ответ инициируется и усиливается различными фрагментами компонентов системы комплемента, которая среди систем гуморального звена врожденного иммунитета обладает наиболее сложным и многогранным действием.

Комплемент в последнее время все больше рассматривается как важнейший регулятор адаптивного иммунитета, играющий существенную роль в патогенезе многих заболеваний, в том числе, неопластических, а также механизмах иммунологической толерантности. Начальным этапом классического пути активации комплемента является присоединение к комплексу антиген-антитело С1ц - субкомпонента первого фактора комплемента. Компонент СЗ, участвующий во всех путях активации комплемента и являющийся одним из центральных белков защитной системы человека, выступает в качестве связующего звена между врожденным и приобретенным иммунитетом [8а1ш А. еИ а1., 2001; Хт-ре1 Уи ег а1., 2004].

При патологии может происходить постсинтетическая модификация белков, вызванная не генетическими, а другими причинами, что было продемонстрировано еще Г.В. Троицким на примере альбумина [Троицкий Г.В., 1991]. Модификации, затрагивающие центральные звенья иммунитета, являются наиболее опасными. При этом особый интерес представляют не денату-рационные процессы, а тонкие конформационные переходы, не сопровождающиеся нарушением нативной структуры белка. Удобной моделью для таких исследований является спонтанный гидролиз компонента СЗ, в процессе которого происходит конформационная перестройка молекулы, обнажается тиоэфирная связь в а-цепи и образуется конформационная форма СЗ(Н20), инициирующая альтернативный путь активации системы комплемента.

В основе нарушения механизмов реализации противоопухолевой защиты организма может лежать изменение характера взаимоотношений между различными системами иммунитета и их составляющими, в том числе между антителами и комплементом. Выявление этих закономерностей позволяет по-новому подойти к оценке патогенеза болезни и приблизить к разгадке феномена иммунной резистентности новообразований.

В силу выше изложенного, именно эти три молекулы были выбраны нами для исследований взаимодействия комплемента (СЦ) с иммуноглобулинами (1^0) и конформационных изменений в процессе спонтанного гидролиза (СЗ) при неопластических процессах, которые способны приблизить к разгадке феномена иммунной резистентности новообразований.

Цель исследования:

Выяснить биохимические механизмы взаимодействия врожденного и приобретенного иммунитета на примере ключевых белков: субкомпонента комплемента СЦ и иммуноглобулина О, а также конформационных изменений компонента комплемента СЗ в процессе спонтанного гидролиза при неопластических состояниях.

Задачи исследования:

1. Сравнить константы взаимодействия между субкомпонентом комплемента СЦ и при неопластических состояниях (хроническом лимфо-лейкозе, ходжкинских и неходжкинских лимфомах, раке молочной железы) и в норме.

2. Провести сравнительный анализ аффинности моноклональных антител к различным антигенным детерминантам больных хроническим лимфолейкозом и здоровых доноров.

3. Сравнить количество СЦ связывающихся с больных хроническим лимфолейкозом и здоровых доноров.

4. Оценить на модели ^О-фосфатидилхолин влияние лигандирования на комплементфиксирующую функцию IgG и аффинность моноклональных антител к его различным антигенным детерминантам.

5. Оценить влияние IgG при изучаемых заболеваниях на альтернативный путь активации комплемента.

6. Оценить закономерности конформационных изменений СЗ компонента комплемента в процессе спонтанного гидролиза при инкубации сыворотки и плазмы крови больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфо-мами, раком молочной железы, а также «группы онкологического риска».

7. Исследовать взаимосвязь между уровнем конформационной формы СЗ компонента - СЗ(НгО) и опухольассоциированного антигена СА-125 у больных раком яичников до и после проведения курса химиотерапии.

8. Изучить конформационные изменения СЗ компонента у больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы на фоне программы химиотерапии.

9. Оценить влияние на конформационные изменения СЗ компонента иммуномодулирующих средств: эфирных масел Lavandula vera, Salvia solaria и глюконатов 3(1-металлов.

Научная новизна работы

1. Впервые проведен анализ аффинности моноклональных антител к различным антигенным детерминантам IgG больных хроническим лимфо-лейкозом.

2. Впервые проведен сравнительный анализ констант диссоциации комплекса Clq-IgG до и после взаимодействия его с фосфатидилхолином и аффинности моноклональных антител к различным антигенным детерминантам IgG после его лигандирования.

3. Впервые охарактеризованы конформационные изменения СЗ компонента комплемента в процессе его спонтанного гидролиза при инкубации сыворотки и плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом, с ход-жкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы, «группы онкологического риска» по раку молочной железы.

4. Впервые выявлена зависимость между изменением уровня конфор-мационной формы СЗ компонента комплемента СЗ(Н20) и содержанием опухолевого маркера СА-125 в плазме крови больных раком яичников до и после проведения курса химиотерапии.

5. Впервые охарактеризованы конформационные изменения СЗ компонента под действием химиотерапии и иммуномодулирующих средств (эфирных масел Lavandula vera, Salvia solaria и глюконатов Зё-металлов).

6. Получены новые штаммы гибридом, продуцирующие моноклональ-ные антитела к различным антигенным детерминантам иммуноглобулинов человека, пептиду мелиттину и опухольассоциированному антигену СА-125.

7. Впервые обосновываются биохимические причины изменений взаимодействия Clq с IgG и конформационных изменений компонента СЗ в процессе его спонтанного гидролиза при неопластических состояниях.

Научно-практическая значимость

Данные о взаимодействии Clq субкомпонента комплемента с IgG и конформационных изменениях СЗ компонента в сыворотке крови больных при неопластических процессах и состояниях онкологического риска имеют большое значение для понимания молекулярных механизмов патогенеза заболеваний, для улучшения диагностики, прогноза и эффективности лечения.

Полученные в работе моноклональные антитела (Патенты РФ от 19931994, №№: 2002803, 2003679, 2003680, 2003681, 2003682, 2003683, 2003684, 2003685, 2003686, 2003687, 2008350, 2010856) могут быть применены для различных биохимических, биофизических, иммунологических, клинических исследований, создания диагностических тест-систем и лечебных препаратов.

Полученные результаты исследования могут помочь дальнейшему развитию и использованию научно-обоснованных методов борьбы со злокачественными заболеваниями.

Результаты работы могут быть использованы в учебном процессе курсов биологической химии, биофизики, иммунологии, онкологии образовательных учреждений высшего медицинского образования и последипломной подготовки врачей.

Основные положения, выносимые на защиту

1. При неопластических процессах: хроническом лимфолейкозе, ход-жкинских и неходжкинских лимфомах, раке молочной железы происходит ослабление силы связывания между субкомпонентом комплемента С1 я и иммуноглобулином в, выражающееся в увеличении константы диссоциации комплекса СЦ-^в.

2. Причиной снижения комплементфиксирующей функции при неопластических процессах является взаимодействие с Рс-фрагментами 1§0 метаболитов деструкции неопластических и других клеток - лигандов пептидной и липидной природы, проявляющих свойства катионов.

3. При неопластических процессах белок СЗ претерпевает модифика-ционные изменения, проявляющиеся в процессе его спонтанного гидролиза, обусловленные появлением в сыворотке крови большего (по сравнению со здоровыми донорами) количества нуклеофилов, способствующих его кон-формационному переходу в форму СЗ(Н20).

4. Изменение уровня конформационной формы СЗ компонента -СЗ(Н20) в плазме крови больных раком яичников после курса химиотерапии коррелирует со снижением концентрации опухольассоциированного антигена СА-125.

5. Под действием химиотерапии в процессе инкубации плазмы крови больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы наблюдается снижение уровня конформационной формы СЗ(НгО) в зависимости от числа курсов химиотерапии, которое отражает положительную динамику лечения.

6. Иммуномодулирующие средства (эфирные масла Lavandula vera, Salvia sclaria и глюконаты Зс1-металлов) оказывают корригирующее и стабилизирующее влияние на изменение уровня СЗ(Н20).

Апробация диссертации

Материалы диссертации были доложены на республиканской конференции «Современные проблемы естествознания на стыке наук» (Уфа, 1998), 4-ой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» (Санкт-Петербург, 1999), XIX Всероссийском Чугуевском совещании по химии комплексных соединений (Иваново, 1999), Международном экологическом конгрессе «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» (Санкт-Петербург, 2000), Международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск, 2000), Международной научно-практической школе-конференции "Цитокины. Воспаление. Иммунитет" (Санкт-Петербург, 2002), III съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002), научно-практической конференции «Перспективные разработки науки и техники» (Белгород, 2004), IV Международной научно-практической конференции «Динамика научных исследований - 2005» (Днепропетровск, 2005), Межвузовской научно-технической конференции «Актуальные проблемы технических, естественных и гуманитарных наук» (Уфа, 2006), Международной научно-практической конференции «Современные направления теоретических и прикладных исследований» (Одесса, 2006), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной биохимии» (Киров, 2007), VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007), VI Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2007).

Внедрение результатов работы

Полученные в диссертационной работе моноклональные антитела внедрены в научно-исследовательскую деятельность кафедры биохимии и лаборатории биотехнологии Крымского государственного медицинского университета им. С.И. Георгиевского, лаборатории молекулярной биологии и нано-биотехнологии Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН, отдела биофизики Института биохимии им. A.B. Палладина HAH Украины. Результаты диссертации внедрены в учебный процесс и научную деятельность кафедры биологической и биоорганической химии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава» и в практику работы отделения общей онкологии Башкирского Республиканского клинического онкологического диспансера.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Князева, Ольга Александровна

выводы

1. При неопластических состояниях (хронический лимфолейкоз, ход-жкинские и неходжкинские лимфомы, рак молочной железы) происходит статистически значимое снижение константы взаимодействия между ведущими звеньями врожденного и приобретенного иммунитета: субкомпонентом комплемента С1я и иммуноглобулином О (1§0).

2. Аффинность специфических моноклональных антител снижена (примерно на 30%) к антигенным детерминантам, расположенным в области Рс-фрагмента больных хроническим лимфолейкозом по сравнению с 1§0 здоровых доноров.

3. После лигандирования ^О фосфатидилхолином константа взаимодействия его с С1я становится на порядок ниже, и одновременно снижается аффинность моноклональных антител к антигенным детерминантам Рс-фрагмента модифицированного таким образом

4. Ослабление силы взаимодействия хмежду С1я и 1^,0 при неопластических процессах является следствием посттрансляционной модификации лигандами-катионами пептидной и липидной природы — продуктами деструкции неопластических клеток и окружающих их тканей.

5. Воздействие при неопластических состояниях (хронический лимфолейкоз, ходжкинские, неходжкинские лимфомы, рак молочной железы) и здоровых доноров на уровень гемолитической активности комплемента по альтернативному пути является статистически неразличимым.

6. В процессе спонтанного гидролиза СЗ компонента при инкубации сыворотки и плазмы больных при неопластических состояниях (ходжкинские и неходжкинские лимфомы, рак молочной железы) происходит изменение уровня СЗ(НгО), характеризующееся для каждой нозологии своей индивидуальностью и превышением контрольного уровня через определенный промежуток времени вследствие модификационных изменений конформации белка под действием увеличенного количества нуклеофилов.

7. Снижение уровня конформационной формы СЗ(Н20) при инкубации плазмы крови больных раком яичников после курса химиотерапии коррелирует с содержанием опухольассоциированного маркера СА-125, что может служить дополнительным оценочным критерием эффективности лечения злокачественных новообразований и дает основание рассматривать конфор-мационный переход СЗ, как одну из защитных реакций иммунного надзора, характеризующую направленность изменений резистентности организма на интенсивность опухолевого роста.

8. Под действием химиотерапии в процессе инкубации плазмы крови больных с ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, раком молочной железы наблюдаются изменения концентрации СЗ(Н20) в зависимости от курсов химиотерапии, увеличение числа которых вызывает дальнейшее снижение его уровня, коррелирующее с положительной динамикой лечения.

9. Под действием иммуномодулирующих средств (эфирных масел Lavandula vera, Salvia solaria и глюконатов 3<1-металлов) происходит коррекция профиля спонтанного гидролиза компонента СЗ, что может свидетельствовать о благоприятном влиянии данных средств на иммунную систему.

ГЛАВА 9. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Неопластические процессы развиваются благодаря способности опухолевых клеток к «ускользанию» от иммунного надзора. Причины данного феномена пока до конца не выяснены, хотя для его объяснения имеется множество концепций. В настоящее время считается, что существует большое разнообразие механизмов ухода неопластических клеток из-под иммунологического контроля. Исследование этих механизмов является одним из наиболее актуальных направлений современной биологии и медицины.

При развитии злокачественных новообразований у больных обнаруживаются нарушения иммунитета, затрагивающие практически все его звенья. Существенную роль при этом играют опухолевые маркеры, сывороточные антитела, белки системы комплемента [Иегер Л. и др., 1990; Барышников А.Ю., 2003; Абелев Г.И., 2004; Никулин Б.А., 2007].

Антитела, большая часть которых приходится на класс являются ключевыми макромолекулами приобретенного иммунитета, так как они отвечают за распознавание чужеродных агентов и запускают иммунные реакции организма. Вместе с тем иммунный ответ инициируется и усиливается различными фрагментами компонентов системы комплемента, которая среди систем гуморального звена врожденного иммунитета обладает наиболее сложным и многогранным действием.

Начальным этапом классического пути активации комплемента является присоединение к комплексу антиген-антитело СЦ - субкомпонента первого фактора комплемента. Компонент СЗ, участвующий во всех путях активации комплемента и являющийся одним из центральных белков защитной системы человека, выступает в качестве связующего звена между врожденным и приобретенным иммунитетом [БаЬи А. & а1., 2001; Хт-ре1 Уи й а!., 2004].

В основе нарушения механизмов реализации противоопухолевой защиты организма могут лежать изменения в характере взаимоотношений между различными системами иммунитета и их составляющими, в том числе между антителами и комплементом.

Выяснение причин подобных дефектов во взаимодействии между ведущими звеньями врожденного и приобретенного иммунитета - СЦ и 1^0, а также конформационных изменений СЗ компонента при неопластических состояниях являются важнейшими задачами, решение которых способно приблизить к пониманию механизмов «ускользания» опухолевых клеток от иммунологического контроля.

При исследовании взаимодействия комплемента с 1§0 по классическому пути, было обнаружено, что при неопластических состояниях: хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ), ходжкинских лимфомах (ХЛ), неходжкинских. лимфомах (НХЛ) и раке молочной железы (РМЖ) происходит ослабление силы связывания меж,ду иС^ (субкомпонентом первого фактора комплемента), выражающееся в увеличении константы диссоциации (К<1). Среди данных нозологий наиболее слабым взаимодействием с СЦ обладали ^О больных ХЛЛ, для которых Кё составила (13,16 ± 3,29)-10" М. Для остальных групп заболеваний эта величина имела также повышенные значения: для больных ХЛ - (6,68± 1,22)-10"7М, больных НХЛ - (5,76±1,25)-10"7М, больных РМЖ - (3,88±0,7)'10"?М. При этом для здоровых доноров, принятых за контроль, Кё составляла (1,91±0,42)-10~7 М: в сравнении с ХЛЛ и ХЛ - р < 0,01; НХЛ - р < 0,02, РМЖ - р < 0,05.

Для выяснения причины снижения комплементфиксирующей функции при неопластических процессах, было проведено исследование аффинности полученных с помощью гибридомной технологии моноклональных антител (МКАТ) к различным антигенным детерминантам ^О больных ХЛЛ и доноров. В результате было обнаружено, что при ХЛЛ происходит снижение аффинности (выражающееся в увеличении Кс1) МКАТ к антигенным детерминантам, расположенным лишь в области Бс фрагмента (примерно на 30%).

На основании полученных данных, была предложена гипотеза о стери-ческом «экранировании» центра связывания СЦ с ^О, взаимодействующими с ним лигандами - метаболитами, образующимися вследствие повышенной деструкции опухолевых клеток и окружающей опухоль среды.

Для ее доказательства мы исходили из того, что при взаимодействии с лигандом первая связывающая молекула лиганда увеличивает сродство белка к следующему лиганду - С1я, открывая новые центры связывания. Так как ^О-мономер больше двух центров связывания с СЦ иметь не может, то для более наглядного сравнивания количества СЦ, присоединяющегося к 1§0, нужно было, чтобы молекулы находились в ассоциированном состоянии, при котором количество центров связывания резко возрастает. В этом случае при взаимодействии с СЦ могут образовываться различные комплексы: ^в-Ь-СЦп, 1§С-Ь-С1 яп+ь 1§0-Ь-С1яп+2, ^в-Ь-С 1 цп+з и т.д. При отсутствии связывания с лигандом количество СЦ в комплексе с ^О будет меньше, и такой комплекс будет выглядеть, например, как Кс1 подобных комплексов будут изменяться под влиянием стохастических факторов, то есть, чем больше лигандов связывается с тем больше диссоциация образовавшегося комплекса. Если процесс диссоциации образующихся комплексов выразить в форме следующих реакций:

180-С1<ы -> 1ёО-С1Чп.2 + СЦ (Кё,)

1Ео-ь-сц„ -» 1ео-С1Яп.! + СЦ (ка2)

1ёо-ь-сцп+1 -> ^с-ь-сЦп + сц (ка3)

1ёо-ь-с1яп+2 1ёо-ь-С1яп+1 + сц (ка4)

1ёо-ь-сцп+з -> ^с-ь-с1Чп+2 + С1я (ка5), то значения констант расположатся в следующем порядке: Кё5 > КсЦ > Кё3 > Кс12 > Кс1]. При этом количество С 1ц в комплексах будет уменьшаться таким образом: ^О-Ь-СЦп+з > ^О-Ь-СЦп+г > 1£С-Ь-С1яп+1 > ^в-Ь-СЦп > ДО

СЦп-ь

Следовательно, если наше предположение о том, что при неопластических процессах подвергается лигандированию продуктами деструкции опухолевых клеток, верно, то наряду с ослаблением взаимодействия между С1я и больных должно возрастать количество С 1ц, связывающихся с ассоциированными Поэтому была проведена количественная оценка доли С1я, взаимодействующих с больных ХЛЛ и здоровых лиц, находящихся в ассоциированном состоянии, с помощью метода РСК (реакции связывания комплемента) и ИФА.

Определение РСК в присутствии больных ХЛЛ и здоровых доноров показало, что фиксация комплемента молекулами больных ХЛЛ в 0,6 М растворе сахарозы, способствующей их ассоциации, происходит на 2040% сильнее, чем ^О здоровых лиц (р < 0,05 - р < 0,001), при этом К<1 комплекса С1я-1§0 больных ХЛЛ были значительно выше, чем у здоровых доноров. Кроме того, с помощью МКАТ в ИФА было показано, что ассоциированные на полистироловом планшете при ХЛЛ связывают СЦ в 4,8-6,7 раз больше чем в контроле.

Т.е. полученные результаты указывают на то, что при неопластических процессах происходит большее, чем в норме связывание ^О с лигандами.

Способность взаимодействия липидных и пептидных компонентов с Бс-фрагментом были показаны ранее на примере фосфатидилхолина и мелиттина (пептида из яда пчелы) [Ефетов К.А. и др., 1993; 2001]. Обе молекулы имеют сходную структуру (гидрофобный «хвост», который у мелиттина сформирован преимущественно двадцатью гидрофобными аминокислотными остатками, и гидрофильную «головку», состоящую из шести положительно заряженных аминокислот у мелиттина) и обладают свойствами поликатиона. При злокачественном росте клеток, сопровождающемся усиленной деградацией неопластических и других окружающих опухоль клеток, в кровяном русле циркулируют различные метаболиты - лиганды, имеющие в своем составе катионные компоненты, которые, подобно мелиттину и фосфа-тидилхолину, способны к взаимодействию с Fc-фрагментами IgG. Поэтому для подтверждения нашего заключения, мы включили изучение влияния взаимодействия фосфатидилхолина, как модельного лиганда (одного из основных компонентов клеточных мембран), с IgG здоровых доноров на константу диссоциации комплекса Clq-IgG.

В результате было обнаружено, что лигандирование IgG фосфатидил-холином вызывает увеличение Kd [Clq-IgG] примерно в 10 раз: с 1,6-10"7 М до 16,8-10"7 М. Наряду с этим было также показано, что происходит снижение аффинности МКАТ к антигенным детерминтам в области Fc-фрагмента IgG, связанного с фосфатидилхолином (примерно на 30%).

На основании полученных данных был сделан вывод, что снижение комплементфиксирующей функции IgG при неопластических процессах может происходить за счет взаимодействия с лигандами, количество которых при неопластических состояниях увеличивается вследствие повышенной деструкции опухолевых и окружающих опухоль клеток.

Локализация сайта связывания для Clq в области СН2 домена молекулы IgG показана достаточно давно [Emanuel Е. J. et al., 1982], но при этом имеется множество других, противоречащих друг другу мнений. Поэтому мы посчитали целесообразным уточнить локализацию центра связывания этих макромолекул, исходя из взаимодействия IgG с фосфатидилхолином.

Для эффективного взаимодействия с положительно заряженной гидрофильной «головкой» фосфатидилхолина этот сайт должен был обладать отрицательным зарядом и гидрофобным карманом для гидрофобного «хвоста» молекулы. Известно, что этим условиям хорошо удовлетворяет полость в молекуле IgG между двумя Сц2-доменами, представленная преимущественно радикалами гидрофобных аминокислот и содержащая два углеводных компонента, на концах которых находятся отрицательно заряженные остатки нейраминовой кислоты. Поэтому было сделано предположение о локализации сайта взаимодействия СЦ с между двумя Сн2-доменами ^О.

На следующем этапе работы была проведена оценка гемолитической активности комплемента по альтернативному пути (АРН50) в сыворотках крови больных ХЛЛ, ХЛ, НХЛ, РМЖ и здоровых доноров, а также исследование влияния больных указанных нозологий и здоровых лиц на уровень АРН50 в донорской сыворотке. В результате было показано, что отличия по величине АРН50 между группами отсутствуют, а изменения уровня АРН50 в донорской сыворотке в присутствии 1§0 больных и здоровых доноров статистически не различимы, что свидетельствовало о необходимости более углубленного изучения компонентов данного пути активации и явилось причиной исследований конформационных изменений СЗ.

При развитии заболевания белки претерпевают постсинтетическую модификацию, начальной стадией которой обычно является их конформацион-ный переход (локальное или общее изменение конформации белка, в результате чего он переходит в другое - стабильное или метастабильное состояние). Для выявления самого факта модификации белка существуют различные методы, в числе которых может быть использован также их гидролиз [Троицкий Г.В., 1991]. В этом плане спонтанный гидролиз СЗ представляет особый интерес, т.к. позволяет выявить самые начальные, скрытые изменения в его конформации в максимально приближенном к естественному состоянии.

Структурной особенностью СЗ компонента является наличие необычной тиоэфирной связи в а-цепи, формирующейся в течение посттрансляционной модификации между тиольной группой цистеина и аминогруппой глу-тамина в пределах последовательности: 01у-Суз988-01у-01и-01п991-Азп [Таек В.Р. е! а1., 1980]. Эта последовательность обычно скрыта в гидрофобном окружении нативной молекулы и недоступна действию воды. Однако благодаря конформационной подвижности глобулярный белок СЗ находится в динамическом равновесии нативной и обратимо «развернутой» формы, в которой обнаженная тиоэфирная связь может быть подвергнута нуклеофильной атаке водой и любым растворенным в воде нуклеофилом и гидролизоваться. В результате образуется конформацнонная форма СЗ(Н20), инициирующая активацию комплемента по альтернативному пути [Sahu A. et al., 2001].

В результате наших исследований было показано, что в процессе спонтанного гидролиза СЗ при инкубации сыворотки крови данных заболеваний происходит изменение уровня СЗ(Н20), отличающееся от такового у здоровых лиц и характеризующееся для каждой нозологии своей индивидуальностью. Общим для всех групп больных было то, что через определенный промежуток времени происходило возрастание уровня СЗ(Н20) в норме отсутствующее.

На основании полученных результатов было сделано предположение, что данное явление связано с повышенной активностью протеолитических ферментов при неопластических процессах [Акбашева О.Е и др., 1999; Тяго-тин Ю.В. и др., 2002; Amiquet J.A. et al. 1999], под действием которых может также происходить гидролиз СЗ [Бельтюков ПЛ./2000]. Однако, при инкубации плазмы, полученной с помощью ЭДТА - классического ингибитора протеаз [Одинцова Е.С. и др., 2006; Никандров В.Н. и др., 2007], разница между патологией и нормой была еще более выраженной. Поэтому наблюдаемый эффект одним усилением активации протеолитической системы объяснить было не возможно.

Спонтанный гидролиз тиоэфирной связи нативного СЗ происходит постоянно, по литературным данным в нормальной сыворотке крови количество СЗ(Н20) составляет 0,06-2,5% от общего уровня СЗ [Andreev S. et al., 1990; Рыбакова Л.П. и др., 1996; Тяготин Ю.В. и др., 2002]. Нами было показано, что данный показатель находится в пределах нормы во всех группах, независимо от заболевания. Отличия между величиной СЗ(Н20)/С3 • 100% относительно друг друга и контроля выявлялись также лишь в характере этих изменений при инкубации сыворотки и плазмы, что с одной стороны указывало на влияние опухолевых клеток на конформацию СЗ, своеобразие которого определяется спецификой патологического процесса. С другой стороны, значительное превышение данного показателя при патологии через определенный промежуток времени в плазме с ЭДТА явно свидетельствовало об изменениях конформации белка.

Как всякая белковая молекула, СЗ в сыворотке крови под влиянием движения других молекул находится в форме шарообразного клубка, т.к. при этом поверхностная энергия будет минимальной: Двр = пАвт (где ДОт -изменение свободной энергии Гиббса мономера - одного аминокислотного остатка, Авр - всей молекулы - полимера). При образовании глобулы ее устойчивость определяется формулой: ДОт = ДНт — ТДБт (где АН - энталь-пийный, Д8 — энтропийный факторы). Значение энтропийного члена ДБ рассчитывается исходя из свободы вращения внутри молекулы полипептида: ДЭт = Шп(Хгш) (где гш - число возможных конформеров), т.е. число кон-формеров здесь может быть самым разнообразным. Группы, образующие антигенную детерминанту на СЗ(Н20), могут принадлежать разным участкам полипептидной цепи и возникать в результате свертывания белка в уникальную структуру, удерживаемую сравнительно слабыми связями, которые легко могут быть разорваны. В таких условиях доступность антигенной детерминанты зависит от конформационных переходов белка, происходящих под влиянием различных факторов, в данном случае, нуклеофилов, что, видимо, и является причиной резких колебаний уровня СЗ(Н20).

Как уже отмечалось, злокачественный рост клеток сопровождается появлением в крови дополнительного количества различных метаболитов, в том числе и нуклеофилов, атакующих тиоэфирную связь, тем самым, способствуя конформационному переходу СЗ в СЗ(Н20), который, в данном случае можно рассматривать, как первый этап постсинтетической модификации белка. Поэтому было выдвинуто предположение, что белок СЗ при неопластических процессах претерпевает модификационные изменения, вызванные появлением в крови большего (по сравнению со здоровыми донорами) количества нуклеофилов, которые, открывают тиоэфирную связь для специфических МКАТ, взаимодействующих с антигенной детерминантой, экспонированной лишь на СЗ(Н20).

Исследование конформационных изменений СЗ у больных «группы онкологического риска» по молочной железе с диагнозом: диффузная мастопатия (ДМП), узловая мастопатия (УМП) и фиброаденома (ФА) показало, что уровень СЗ(Н20) в процессе инкубации сыворотки и плазмы крови имеет статистически значимые отличия от такового у больных РМЖ и здоровых лиц. Наиболее выраженными эти отличия были в сыворотке крови, но в отличие от РМЖ и других неопластических состояний (ХЛЛ, ХЛ, НХЛ), у больных ДМП, УМП и ФА резкого повышения уровня СЗ(Н20) не наблюдалось. И данный факт является также дополнительным свидетельством в пользу нашего предположения.

Возникновение неопластических клеток и их пролиферация вызывает активацию системы иммунного надзора, проявляющуюся в многочисленных реакциях организма, в том числе, появлении в крови опухолевых антигенов, концентрация которых коррелирует с прогрессированием опухолевого процесса. В связи с этим возникает вопрос, существует ли взаимосвязь между содержанием данных маркеров и СЗ(Н20)?

Для ответа на поставленный вопрос в качестве такого маркера был избран опухольассоциированный антиген рака яичников СА-125.

С помощью полученных нами МКАТ было обнаружено, что после проведения полного курса индукционной химиотерапии пациенткам с раком яичников (РЯ) в III стадии происходило существенное снижение концентрации в плазме крови больных РЯ как СА-125 (примерно в 2 раза), так и СЗ(Н20) (примерно в 2,7 раза). И на основании этих данных был сделан вывод, что изменение уровня конформационной формы СЗ(Н20) в процессе инкубации плазмы больных РЯ находится в прямой зависимости от содержания опухолевого маркера СА-125, вследствие чего может служить оценочным критерием эффективности лечения.

Поэтому следующим этапом нашей работы было исследование влияния программы полихимиотерапии (ПХТ) на конформационные изменения СЗ компонента, что необходимо для дальнейших поисков вариантов адекватной иммунокоррекции.

В результате было показано, что изменения уровня СЗ и СЗ(Н20) в плазме крови больных XJI, HXJI и РМЖ под влиянием ПХТ определяются числом курсов и временем инкубации плазмы. Увеличение числа курсов ПХТ вызывало дальнейшее снижение концентрации СЗ(Н20), что коррелировало с положительной динамикой лечения. Для больных XJI снижение уровня СЗ(Н20) относительно нелеченного контроля, коррелирующее с положительным действием лечения, наблюдалось после пяти и шести курсов ПХТ, у больных HXJ1 - после шести. У больных РМЖ проведение цикловой ПХТ приводило к значительному снижению уровня СЗ(Н20) через 5, 7 и 9 часов инкубации плазмы после всех курсов терапии за исключением 5 часов второго курса, что также коррелировало с положительной динамикой лечения.

В совокупности полученные данные дают основание рассматривать конформационный переход СЗ, как одну из защитных реакций иммунного надзора, характеризующую направленность изменений резистентности организма на интенсивность опухолевого роста.

Большое значение для лечения неопластических процессов представляют вещества, которые наряду с иммуномодулирующими свойствами обладают противоопухолевой активностью. К таким веществам относятся эфирные масла Lavandula vera, Salvia solaria (лаванды настоящей, шалфея мускатного) [Леонова, Н.С., 2001; Сюрин С.А., 2006] и соединения ЗсЬметаллов (двухвалентных металлов Mn, Fe, Со, Си и Zn) с глюконовой кислотой [Конкина И.Г. и др., 2002; 2006; 2007]. Результаты исследований конформацион-ных изменений СЗ дают основание для использования данного показателя в качестве оценочного критерия эффективности воздействия этих лекарственных средств. Поэтому была проведена серия экспериментов, включавших исследования противоопухолевой активности эфирных масел Lavandula vera, Salvia solaria в режиме ароматерапии (APT) и композиции глюконатов 3 d-металлов (МЭЛ) in vivo - на линейных мышах BALB/c с привитой миеломой Sp 2/0 Agí4 и влияния их на изменение уровня СЗ(Н20) в процессе инкубации сыворотки крови больных РМЖ (I-IIa), ДМП и практически здоровых женщин.

В результате было показано ингибирующее влияние APT и МЭЛ на рост опухолевых клеток Sp 2/0 Agí4, выражающееся в торможении развития асцита у мышей BALB/c на 54,5 % и 65,5% относительно контрольной группы (р < 0,05) и увеличении продолжительности жизни животных на 26,5 % и 21,2% (р < 0,05) соответственно.

Кроме того, было доказано цитотоксическое действие глюконатов данных Зd-мeтaллoв на клетки мышиной миеломы Sp2/0 Agí4 и эритролейкеми-ческие клетки К562 человека.

Было обнаружено, что после курса APT и приема МЭЛ во всех наблюдаемых группах в процессе инкубации сыворотки крови, происходило выравнивание и большей частью повышение уровня СЗ(Н20). Особенно интересным на наш взгляд явилось то, что наблюдаемое у нелеченных больных РМЖ резкое возрастание уровня СЗ(Н20) через 11 часов, после курса APT и МЭЛ исчезало, а при ДМП отличия с контролем полностью нивелировались.

После курса APT в сыворотке крови лиц длительно работающих в химической лаборатории с вредными условиями труда и имеющих патологические отклонения различного характера наблюдалась коррекция изменений уровня СЗ(Н20) в процессе спонтанного гидролиза СЗ, который практически не снижался через 29 часов инкубации сыворотки, несмотря на отсутствие в ней ЭДТА, а в некоторых случаях даже имел тенденцию к повышению. При этом уровень СЗ оставался выше на протяжении всего периода наблюдений.

На основании полученных результатов, а также учитывая то, что снижение содержания СЗ коррелирует с другими иммунными нарушениями, сопутствующим онкологическим заболеваниям [Борисова A.M. и др., 1999], было сделано заключение о благоприятном и корригирующем влиянии эфирных масел Lavandula vera - Salvia sclaria в режиме APT и композиции глюко-натов Зс1-металлов на иммунную систему в целом. sjs sjc

Таким образом, наши исследования по изучению взаимоотношений между ключевыми представителями систем врожденного и приобретенного иммунитета указывают на то, что при неопластических процессах происходит ослабление силы взаимодействия между субкомпонентом Clq и IgG; снижение аффинности специфических моноклональных антител (примерно на 30%) к антигенным детерминантам, расположенным лишь в области Fc фрагмента IgG. Увеличивается количество Clq, связанных с IgG в ассоциированном состоянии. После взаимодействия IgG с фосфатидилхолином происходит ослабление силы связывания Clq с IgG (примерно в 10 раз) и снижение аффинности МКАТ к антигенным детерминтам в области Fc-фрагмента IgG (примерно на 30%). На основании всего перечисленного делается заключение, что ослабление комплементфиксирующей функции IgG происходит благодаря взаимодействию с Fc-фрагментами IgG лигандов с катионными компонентами - метаболитами деструкции опухолевых клеток и тканей. При этом сайт взаимодействия Clq с IgG локализован, вероятно, между двумя Сн2-доменами IgG.

Изменения уровня гемолитической активности комплемента по альтернативному пути (АРН50) в сыворотках крови больных XJIJI, XJI, НХЛ, РМЖ, а также в донорской сыворотке в присутствии иммуноглобулинов G указанных нозологий и здоровых доноров, статистически не различимы, что явилось причиной для более углубленного изучения конформационных изменений центрального компонента данного пути - СЗ.

В процессе спонтанного гидролиза СЗ при неопластических состояниях (ХЛ, НХЛ и РМЖ) происходят изменения его уровня, отличающиеся от таковых у здоровых лиц, характеризующиеся для каждой нозологии своей индивидуальностью и статистически значимым повышением уровня конформа-ционной формы СЗ(Н20) через определенный промежуток времени. Предполагается, что одной из причин данных изменений является постсинтетическая модификация СЗ, вызванная появлением в крови большего (по сравнению со здоровыми донорами) количества нуклеофилов, способствующих конформационному переходу СЗ в форму СЗ(Н20), которая становится доступной специфическим моноклональным антителам, взаимодействующим с антигенной детерминантой, экспонированной лишь на СЗ(Н20). Существенный вклад в образование СЗ(Н20), особенно при РМЖ, вносят также протео-литические ферменты, количество которых при неопластических процессах увеличивается.

У больных, составляющих группу «онкологического риска» по РМЖ (ДМП, У МП и ФА) резкого возрастания уровня СЗ(Н20) не происходит, что подтверждает выдвинутое нами предположение.

Под действием полихимиотерапии при инкубации плазмы больных ХЛ, НХЛ и РМЖ наблюдается снижение уровня СЗ(Н20) в зависимости от времени инкубации и числа курсов ПХТ, коррелирующее с положительной динамикой лечения.

Воздействие иммуномодулирующих средств (эфирных масел Lavandula vera, Salvia solaria и глюконатов Зё-металлов) наряду с противоопухолевой активностью оказывает корригирующее влияние на изменение уровня конформационной формы СЗ(Н20) в процессе инкубации сыворотки крови.

В совокупности все полученные данные указывают на то, что одной из причин «ускользания» опухолевых клеток из-под иммунного надзора является посттрансляционная модификация белков иммунной системы, в частности, IgG и СЗ, вследствие их взаимодействия с продуктами деструкции неопластических клеток.

Автор выражает благодарность своим научным консультантам: Феликсу Хусаиновичу Камилову и Венеру Абсатаровичу Вахитову за консультации в обсуждении результатов.

Мы также благодарны заведующему лабораторией Государственного научного центра РФ ГосНИИ особо чистых биопрепаратов (Санкт-Петербург) A.M. Ищенко за предоставление нам очищенного препарата Clq, моноклональных антител Н11СЗ, G10 и иммуноферментных тест-наборов для определения концентрации компонентов комплемента: «ИФА-СЗ», «ИФА-СЗа», «ИФА-СЗ(Н20)», «ИФА-С4», «ИФА-СЗ»; заведующему лабораторией Центрального научно-исследовательского рентгенорадиологического института МЗ РФ (Санкт-Петербург) за предоставление моноклональных антител ЕЗ, 5F2, 3D3 и 4D6.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Князева, Ольга Александровна, Уфа

1. Абелев, Г.И. Иммунология опухолей человека / Г.И. Абелев // Канцерогенез. Под ред. Д. Г. Заридзе. М.: Медицина, 2004. - С. 474-482.

2. Агеев, А.К. Инфекционные осложнения лейкозов и других опухолей кроветворной системы / А.К. Агеев // Арх. патологии. 1983. — Т. 45, вып. 7.-С. 13-20.

3. Адамян, А.Т. Типологический анализ реакций системы иммунитета у больных раком молочной железы и здоровых / А.Т. Адамян, Е.С. Смольянинов, Н.В. Васильев // Иммунология. 1989. - №5. - С.56-59.

4. Акбашева, O.E. Активность протеолитических ферментов и их ингибиторов в плазме крови мышей при опухолевом росте / O.E. Акбашева, Г.А. Суханова // Бюл. экспер. биол. 1999. - Т. 128, №7. - С. 69-72.

5. Андреева, Н.Е. Иммуноглобулинопатии. / Н.Е. Андреева, Е.В. Чернохвостова М.: Медицина, 1985. - 240 с.

6. Андрианов, И.Г. Функциональная активность естественных киллеров и макрофагов у больных при опухолях молочной железы / И.Г. Андрианов, С.М. Воронов, А.Н. Добкин // Вопросы онкологии. 1988. -Т.34, №12. - С.1455-1460.

7. Антитела: Методы: В 2 кн. / Под ред. Кэтти Д. — М.: Мир, 1991. -Кн.2. — 384 с.

8. Бакиров Б.А. Иммунологические и генетические маркеры хронического лимфолейкоза: автореф. дис. . канд. мед. наук. Уфа, 2004. -22 с.

9. Балдуева, И.А. Система дендритных клеток и ее роль в регуляции функциональной активности Т и B-лимфоцитов человека / И.А. Балдуева, В.М. Моисеенко, К.П. Хансон // Вопросы онкологии. 1999. - Т.45, №5. - С. 473-483.

10. Барышников, А.Ю. Взаимоотношение опухоли и иммунной системы организма / А.Ю. Барышников // Практическая онкология. — 2003. — Т.4, №3. С.127-130.

11. Бем, Э. Иммунодиффузия / Э. Бем // Иммунологические методы. Под ред. Г. Фримеля. М.: Медицина, 1987. - С. 73-88.

12. Бережная, Н.М. Эозинофилы, базофилы и иммуноглобулин Е в противоопухолевой защите / Н.М. Бережная, В.Ф. Чехун, Р.И. Сепиашвили // Аллергология и иммунология. 2005. - Т. 6, №1. - С. 38-49.

13. Бережная, Н.М. Проблемы онкоиммунологии Электрон, ресурс. / Н.М. Бережная. 2007. - http // www.medaform.ru/^aTa обращения: 15 окт.].

14. Бергольц, В.М. Иммунология и иммунотерапия лейкоза / В.М. Бергольц, Н.С. Кисляк, B.C. Еремеев. -М.: Медицина, 1978. 408 с.

15. Борисова, A.M. Старение и иммунитет / A.M. Борисова, Л.Д. Серова // Актуальные пробл. геронтол. / Рос. НИИ геронтол. 1999. — С. 30.

16. Вавилова, JI.M. Система комплемента, механизмы активации и регуляции, значение в биологии и медицине / JI.M. Вавилова, Т.В. Голосова // Итоги науки и техники. Серия «Иммунология», Т.24. М. .'ВИНИТИ, 1990. -160 с.

17. Варламова, Е.Ю. Основные представления о структуре, биосинтезе и генетике иммуноглобулинов человека / Е.Ю. Варламова // Клиническая онкогематология: Руководство для врачей. М.: Медицина, 2001.-С. 86-91.

18. Вацпаров, И. Диспротеинемии / И. Вацпаров, М. Иомтов, С. Савов и др. // Диспротеинемии. София, 1978. - С. 85-232.

19. Велик, JI.B. Белки сыворотки крови у больных хлл / Л.В. Велик // Морфология, биохимия и клиника лейкозов. — Рига: Зинатие, 1974. С. 109119.

20. Виха, Г.В. Секреторный иммуноглобулин А маркер стресса и неблагоприятных факторов внешней среды / Г.В. Виха // Инвестиции в экологию - шаг в будущее: тез. Междунар. экологического форума. - М., 2001.-С. 138-140.

21. Волкова, М.А. Хронический лимфолейкоз / М.А. Волкова // Клиническая онкогематология. Под ред. М.А. Волковой. М.: Медицина, 2001.-С. 376-392.

22. Гевондян, Н.М. В IgGl человека в норме обнаружены четыре свободных остатка цистеина / Н.М. Гевондян, A.M. Волынская, B.C. Гевондян // Биохимия. 2006. - Т. 71, № 3. - С. 353-360.

23. Генералов, И.И. Каталитическая активность фракций поликлональных IgG человека / И.И. Генералов // Иммунология. 2005. -№5.-С. 282-287.

24. Георгиев, Г.П. Молекулярно-генетические механизмы прогрессии опухолей / Г.П. Георгиев // Соросовский Образовательный журнал. 2000. - № 11. - С. 2-7.

25. Герштейн, Е.С. Биологические маркеры рака молочной железы: методологические аспекты и клинические рекомендации / Е.С. Герштейн, Н.Е. Кушлинский // Маммология. 2005. - № 1. - С. 65-69.

26. Головизин, М.В. Вмешательство раковых клеток в процессы созревания и селекции Т-лимфоцитов как фактор опухолевой прогрессии / М.В. Головизин // Иммунология. 2001. - №6. - С. 4-10.

27. Грабар, П. Иммуноэлектрофоретический анализ / П. Грабар, П. Буртэн -М.: Иностр. лит., 1963. 212 с.

28. Гриневич, A.C. Структурно-функциональные особенности углеводов иммуноглобулинов в норме и при патологии / A.C. Гриневич, И.В. Андреев, А.И. Мартынов // Иммунология. 1994. - № 3. - С. 10-15.

29. Гущин, И.С. Физиология иммуноглобулина Е (IgE) / И.С. Гущин // Аллергология и иммунология. 2000. - Т. 1, № 1. — С. 76-87.

30. Диланян, Э.Р. Синтез и противоопухолевая активность новых бистиосемикарбазонов метилглиоксаля глюкозона и их медных комплексов / Э.Р. Диланян, Т.Р. Овсепян, Г.М. Степанян // Хим.-фарм. журн. 2000.1. Т.34, №8. С. 16-17.

31. Динамика иммунологических показателей у онкологических больных Электрон, ресурс. / E.H. Куслаев, В.И. Поляков, М.Б. Баслаева [и др.]. 2006. - http // www.medband.ru/ [Дата обращения: 18 дек. 2007].

32. Довгань, И.А. Частота и характер инфекционных осложнений у больных неходжкинскими лимфомами / И.А. Довгань, A.A. Новик, В.Б. Антонов и др. // Актуальные проблемы клинической онкологии: тез. научно-практич. конф.-М., 1995.-С. 105-106.

33. Дьюри, В.Г. Множественная миелома и родственные моноклональные гаммапатии. Последние достижения / В.Г. Дьюри // Современная гематология и онкология. М.: Медицина, 1987. - С. 244-290.

34. Ефетов, К.А. Конформационный переход в иммуноглобулине при взаимодействии с амфифильными соединениями / К.А. Ефетов, Г.В. Троицкий // Докл. АН Украины. Математика, естествознание, технические науки. 1993. -№ 1. - С. 89- 93.

35. Ефетов, К.А. Использование моноклональных антител для определения комплементфиксирующей активности иммуноглобулинов G человека в норме и при хроническом лимфолейкозе / К.А. Ефетов, O.A. Князева // Укр. биохим. журн. 1994. - Т.66, № 6. - С. 106-111.

36. Ефетов, К.А. Исследование иммуноглобулинов в норме и при патологии с помощью моноклональных антител и спектральных методов: автореф. дис. . д-ра биол. наук. Киев, 1994. - 36 с.

37. Ефетов, К.А. Агрегация иммуноглобулинов человека в норме и при злокачественной опухоли желудка / К.А. Ефетов, A.B. Арутюнян // Биофизика. 1995. - Т. 40, вып. 1. - С. 54-59.

38. Ефетов, К.А. Изменение антигенсвязывающей функции антител в присутствии мелиттина из яда пчелы {Apis mellifera L.) / К.А. Ефетов, H.B. Ширяев // Таврический медико-биологический вестник. Т. 4, № 1-2. С. 108114.

39. Завьялов, В.П. Регуляторные функции антител в иммуногенезе /

40. B.П. Завьялов // Молекулярная биология. Киев: Наук.думка, 1984. — С. 7078.

41. Звергова, A.C. Изучение некоторых факторов гуморального иммунитета у больных лимфопролиферативными заболеваниями / A.C. Звергова, О.Д. Воскобойник, З.Н. Бабий и др. // Онкология. Киев, 1978. — вып. 11.-С. 96-101.

42. Зеленова, О.В. Болезнь Ходжкина: предполагаемые причины и иммунологические аспекты / О.В. Зеленова, H.A. Терентьева, Е.Г. Зеленова Электрон, ресурс. 2007. - // www.medicum.nnow.ru/ [Дата обращения: 20 ноября].

43. Значение сывороточных иммуноглобулинов классов М, G, А и субклассов IgG при остром лимфобластном лейкозе у детей / М.В. Белевцев, Л.Г. Боркакевич, С.Е. Буглова и др. // Иммунология. 2003. - Т. 24, № 3. —1. C. 149-153.

44. Иванов, А.П. Особенности гидрофобной структуры иммуноглобулина G, характерного для злокачественного роста / А.П. Иванов, В.П. Короткоручко, Е.И. Чернявский // Укр. биохим. журн. 1980. - Т. 52, № З.-С. 345-352.

45. Иммунологические параметры и уровень продукции цитокинов у больных с пролиферативными заболеваниями и раком молочной железы / H.H. Бабышкина, М.Н. Стахеева, Е.М. Слонимская и др. // Цитокины и воспаление. 2006. - Т. 5, № 1. - С. 37-43.

46. Ингибирование связывания активированного С4Ь-компонента комплемента с мишенью / Л.В. Козлов, В.М. Лахтин, Т.Г. Скороходова и др. // Биоорганическая химия. 2000. - Т. 26, № 11. — С. 817-824.

47. Ингибиторные рецепторы лимфоцитов и их роль в противоопухолевом иммунитете / И.Р. Закеева, А.Е. Бережной, Н.В. Гнучев и др. // Вопросы онкологии. 2007. - Т.53, № 2. - С. 140-149.

48. Ищенко, A.M. Анафилотоксины комплемента, природа и биологическая активность / A.M. Ищенко, C.B. Андреев //Расстройства клеточного эффекторного звена иммунного гомеостаза в развивающемся организме. JL, 1987. - С. 3-13.

49. Касаткина, Т.Б. Этика экспериментальных исследований животных в космической биологии и медицине / Т.Б. Касаткина, A.C. Капланский // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2000. - № 2. - С. 17-21.

50. Климович, В.Б. Моноклональные антитела против иммуноглобулинов человека: автореф. дис. . д-ра мед. наук. Санкт-Петербург, 1996. - 36 с.

51. Климович, В.Б. Иммуноглобулин A (IgA) и его рецепторы / В.Б. Климович, М.П. Самойлович // Мед. Иммунология. 2006. - Т.8, № 4. - С. 483-500.

52. Клиническая иммунология и аллергология: В 3 Т. / JI. Йегер, Г. Амброзиус, Р. Байер и др. М.: Медицина, 1990. - Т. 1. - 528 с.

53. Князева, O.A. Изучение свойств иммуноглобулинов человека с помощью мышиных моноклональных антител: автореф. дис. . канд. биол. наук.-Уфа, 1994.-20 с.

54. Князева, O.A. Конформационные изменения СЗ компонентакомплемента при хранении крови больных лимфогранулематозом и здоровых людей / O.A. Князева, Д.Д. Сакаева, Ю.В. Тяготин // Вопросы онкологии. 2000. - Т. 46, №1. - С.58-60.

55. Князева, O.A. СЗ-компонент комплемента в процессе хранения сыворотки крови больных неходжкинскими лимфомами / O.A. Князева, Д.Д. Сакаева // Цитокины и воспаление. 2002. - Т. 1, № 2. - С. 10.

56. Князева, O.A. Катаболизм СЗ компонента комплемента при хранении сыворотки крови больных предопухолевыми заболеваниями и раком молочной железы / O.A. Князева, Д.Д. Сакаева, Р.Х. Хакимова // III съезд биохимического общества. СПб, 2002. - С. 175.

57. Князева, O.A. Особенности взаимодействия субкомпонента комплемента Clq с IgG при неопластических процессах / O.A. Князева, Ф.Х. Камилов // Иммунология. 2007. - № 4. - С. 231-233.

58. Князева, O.A. Особенности конформационных изменений СЗ компонента комплемента в процессе его спонтанного гидролиза при неопластических процессах / O.A. Князева, Д.Д. Сакаева, Ф.Х. Камилов // Иммунология. 2007. - № 5. - С. 268-272.

59. Козлов, JI.B. Белки системы комплемента: активация и регуляция / Л.В. Козлов // Иммунология. 1997. - № 2. - С. 8-13.

60. Козлов, Л.В. Комплемент и болезни / Л.В. Козлов // Вопр. мед. химии. 2000. - Т.46, № 5. - С. 484-485.

61. Колобов, A.A. Конформационный анализ и гемолитическая активность фрагмента 285-292 иммуноглобулина G и его аналогов / A.A. Колобов, Н.И. Колодкин, Л.В. Олейникова и др. // Биоорганическая химия.- 1994. Т. 20, № 6. - С. 617-626.

62. Комплементфиксирующая активность иммуноглобулина G в растворах этиленгликоля / С.Ю. Тэтин, К.А. Ефетов, Г.В. Троицкий и др. // Биоорган, химия.- 1985.-Т. 11, №8. -С. 1068-1073.

63. Кондратьев, В.Б. Неходжкинские лимфомы у взрослых / В.Б. Кондратьев // С.-Петербургские врачебные ведомости. 1996. - № 1(15). - С. 67-81.

64. Косик, О.Г. Физико-химические свойства иммуноглобулина Г из сыворотки крови тиреоидэктомированных кроликов / О.Г. Косик, Г.В. Троицкий, В.Г. Павлюк и др. // Вопросы мед. химии. 1978. - Т.6. - С. 827832.

65. Кочетов, Г. А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высш. шк., 1971.-С. 310-311.

66. Кудрин, A.B. Микроэлементы в иммунологии и онкологии / A.B. Кудрин, O.A. Громова. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 544 с.

67. Кудрявцев, И.В. Эволюция каскада комплемента: ранние этапы / И.В. Кудрявцев, A.B. Полевщиков // Цитокины и воспаление. 2005. - Т. 4, № 1.-С. 11-21.

68. Кузнецова, J1.H. Участие системы комплемента в регуляции организма человека / JI.H. Кузнецова // Аспирант и соискатель. 2003. - №2. -С. 219-221.

69. Кузник, Б.И. Иммуногенез, гомеостаз и неспецифическая резистентность организма / Б.И. Кузник, Н.В. Васильев, Н.М. Цибиков. М.: Медицина, 1989. - 320 с.

70. Кульберг, А .Я. Молекулярная биология. М.: Высш. шк., 1985. —287с.

71. Кульберг, А.Я. Сывороточный IgG как ингибитор лектинов: новый подход к изучению функционального взаимодействия факторов естественного и приобретенного иммунитета / А.Я. Кульберг, Ю.Б. Беркун //

72. Иммунология. 1998. - № 1. - С. 7-10.

73. Культура животных клеток. Методы. Под ред. Р. Фрешни. М.: Мир, 1989.-334 с.

74. Лакин, Г.Ф. Биометрия: Учебное пособие для биологических специальностей вузов. М.: Высш.шк., 1990. - 352 с.

75. Лебедева Т.В. Углеводные компоненты иммуноглобулина G: роль в связывании Clq компонента комплемента: автореф.дис. . канд. мед. наук. Москва , 1995. - 20 с.

76. Леонова, Н.С. Система иммунитета и влияние на нее биологически активных веществ растений / Н.С. Леонова // Новая Аптека. 2001.-№2. С. 5-10.

77. Летягин, В.П. Сравнительная оценка активности адъювантных методов лечения больных местно-распространенным раком молочной железы / В.П. Летягин, М.В. Шомова, Н.П. Чхиквадзе // Маммология. 1995. -№ 1. - С.49-52.

78. Ложкина, A.M. Участие системы комплемента в регуляции гомеостаза / A.M. Ложкина // Успехи совр. биол. 1987. - Т. 104, № 1. - С. 36-54.

79. Лорие, Ю.Ю. Опухолевая прогрессия и вопросы биологии лимфогранулематоза. / Ю.Ю. Лорие // Тер. Архив. 2000. - № 7. - С. 76-80.

80. Ляпис, М.А. Иммунотерапия рака молочной железы: Обзор иностр.лит. / М.А. Ляпис // Вопросы онкологии. 1983. - Т. 29, № 8. - С.68-74.

81. Мазуров, В.И. Клинико-морфологическая характеристиканеходжкинских злокачественных лимфом / В.И. Мазуров, В.Б. Антонов, A.A. Новик и др. // Врачебное дело. 1992. - № 3. - С. 38-40.

82. Мазуров, В.И. Инфекционные осложнения у больных злокачественными неходжкинскими лимфомами / В.И. Мазуров, В.Б. Антонов, A.A. Новик // Злокачественные лимфомы: Диагностика, клиника, лечение: тез. гор. онкол. конф. С.-Петербург. — СПб., 2001. С.22-23.

83. Мартынова, В.А. Состояние системы комплемента при инфекционных и неопластических процессах / В.А. Мартынова, Т.В. Голосова // Лабораторное дело. 1989. - № 2. - С. 4-9.

84. Матвеев, А.Б. Ритмы митотической активности иммунокомпонентных популяций в условиях применения цитостатиков Г

85. A.Б. Матвеев, O.E. Красовский, Д.Е. Дубинина // Человек и лекарство: тез. 4 Рос.Нац.конгресса. М., 1997. - С.274.

86. Матвеева, H.A. Аномальность поведения в монослоях иммуноглобулинов М злокачественного происхождения / H.A. Матвеева,

87. B.А. Алешкин, Л.В. Часовникова, Д.В. и др. // Биополимеры и клетка. -1989.-Т. 5, №2.-С. 89-93.

88. Маурер, Г. Диск-электрофорез. Теория и практика электрофореза в полиакриламидном геле. М.: Мир, 1971. - С. 55-71.

89. Машковский, М.Д. Лекарственные средства Электрон.ресурс. / М.Д. Машковский. 2007. Доступно из URL: http://www.haiboria.ru/2006/12/25/. [Дата обращения: 5 декабря].

90. Медведев H.H. Линейные мыши. Л.: Медицина, 1964. - 180с.

91. Меньшиков, И.В. Математическая модель идиотипической сети / И.В. Меньшиков, В.В. Иванов, В.П. Бовин // Иммунология. 2004. - Т. 25, №5, С. 275-279.

92. Механизм активации комплемента человека иммуностимуляторами из клеточных стенок бактерий / JI.B. Козлов, A.A. Зинченко, JI.C. Соляков и др. // Биоорганическая химия. 1983. - Т.9, N 8. - С.1047-1055.

93. Моисеенко, В.М. Возможности вакцинотерапии меланомы кожи /

94. B.М. Моисеенко // Практ. онкол. 2001. - Т. 4., № 8. - С. 58-64.

95. Моисеенко, В.М. Возможности активной специфической иммунотерапии на основе аллогенных вакцин для лечения злокачественных новообразований / В.М. Моисеенко, А.Б. Данилова, Н.В. Тюкавина // Вопросы онкологии. 2006. - Т. 52, № 3. - С. 258-274.

96. Молчанов, O.E. Современные тенденции применения препаратов рекомбинантного интерлейкина-2 в онкологии. / O.E. Молчанов, М.И. Карелин, Г.М. Жаринов // Цитокины и воспаление. 2002. - Т. 1, № 3. - С. 38-47.

97. Навашин, С.М. Вопросы иммуномодуляции на 27-й межотраслевой конференции по антимикробным агентам и химиотерапии /

98. C.М. Навашин, A.B. Никитин // Антибиотики и химиотерапия. 1989. - Т. 34, №4. - С.313-314.

99. Найзабекова, С.Ш. Некоторые новые подходы адъювантной полихимиотерапии в комплексном лечении рака молочной железы: автореф. дис. . канд. мед. наук. Бишкек, 1992. - 16 с.

100. Нарушения в системе иммунитета при доброкачественных изменениях и раке молочной железы / H.A. Деревнина, Е.Б. Полевая, Т.К. Бескова и др. // Вопросы онкологии. 1989. - Т. 35, №7. - С. 810-815.

101. Невинный, Г.А. Природные каталитически активные антитела (абзимы) в норме и при патологии. Обзор / Г.А. Невинный, Т.Г. Канышкова,

102. B.Н. Бунева // Биохимия. 2000. - Т. 65, №11.- С. 1473-1487.

103. Незлин, P.C. Структура и биосинтез антител. М.: Наука, 1972.312 с.

104. Незлин, P.C. Сегментальная подвижность СООН-концевого фрагмента тяжелых пептидных цепей иммуноглобулина G в растворе / P.C. Незлин, А.Е. Арутюнян, В.П. Тимофеев // Биофизика. 1985. - Т. 30, вып. 1. -С. 161-162.

105. Неспецифические изменения системы комплемента при неопластических процессах / Ю.В. Тяготин, Л.П. Рыбакова, Г.З. Голота, A.M. Ищенко // Вопросы онкологии. 2002. - Т. 48, № 2. - С. 206-210.

106. Никулин, Б.А. Оценка и коррекция иммунного статуса. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 376 с.

107. Ниссен, К. Патофизиология апластической анемии / К. Ниссен // Гематология и трасфузиология. 1993. - № 1. - С. 7-11.

108. Одинаковый характер различий между нормальными и миеломными IgG мыши человека методом монослоев / Л.В. Часовникова, В.В. Лаврентьев, В.А. Алешкин и др. // Бюл. экспер. биол. и мед. 1984. -Т. 98, № 7. - С. 63-65.

109. Окулов, В.И. Применение спектрофотометрии в ультрафиолете для исследования белков / В.И. Окулов // Успехи биол. химии. 1971. - Т. 12, №3.- С. 28-62.

110. Особенности взаимодействия человеческого сывороточного у-глобулина с катионами цинка / С.Б. Чекнев, Е.Е. Бабаева, У.А. Воробьева, Е.А. Денисова // Бюл. экспер. биол. и мед. 2005. - Т. 140, № 8. - С. 177-180.

111. Патент РФ № 2003680, МКИ5 С 12 N 5/00, С 12 Р 21/08. Штамм гибридных культивируемых клеток Mus musculus L., используемый для получения преципитирующих моноклональных антител к IgM человека /

112. К.А. Ефетов, С.Ю. Тэтин, O.A. Князева, Г.В. Троицкий. Опубл. 30.11.93. Бюл. 1993, №43-44.

113. Патент РФ № 2003684, МКИ5 С 12 N 5/00. Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L. продуцент моноклональных антител к (Fc)5 ц-фрагменту IgM человека / К.А. Ефетов, С.Ю. Тэтин, O.A. Князева. - Опубл. 30.11.93. Бюл. 1993, № 43-44.

114. Першин, Т.Н. Методы экспериментальной химиотерапии. — М.: Медгиз, 1971. С. 171-184.

115. Пигаревский, В.Е. Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов. JL, 1988.-С. 3-11.

116. Поддубная, И.В. Новые направления в терапии неходжкинских лимфом / И.В. Поддубная // Современные тенденции развития лекарств терапии опухолей: тез. 1-ой Российской онкологической конференции. М., 1997.-С. 41-45.

117. Поддубная, И.В. Современные тенденции в терапии неходжкинских лимфом низкой степени злокачественности / И.В. Поддубная //Современные тенденции развития лекарств терапии опухолей: тез. 2-ой Российской онкологической конференции. М., 1998. - С. 106-107.

118. Полак, Д. Введение в иммуноцитохимию: Современные методы и проблемы / Д. Полак, С. Ван Норден. М.: Мир, 1987. - 74 с.

119. Поликлональная иммунологическая толерантность, полученная в результате сочетанных инъекций неспецифических активаторов иммуногенеза и циклофосфамида / Л.И. Фонталин, Т.К. Кондратьева, М.А. Туманян и др. // Иммунология. 1984. - № 5. - С. 18-22.

120. Полокайнен, А.П. Аппарат для электрофореза в пластинчатом геле / А.П. Полокайнен, В.А. Евлокимова // Лабораторное дело. 1982. - № 5.-С. 294-296.

121. Пресс, Е.М. Иммуноглобулины / Е.М. Пресс, P.P. Портер // Гликопротеины. М.: Мир, 1969. - С. 100-117.

122. Протеолитическая активность IgG антител из крови больных синдромом приобретенного иммунодефицита человека / Е.С. Одинцова, М.А. Харитонова, А.Г. Барановский и др. // Биохимия. 2006. - Т.71, № 3. - С. 320-332.

123. Проценко, Б.А. Состав, конформация и свойства субмолекулярных структур иммуноглобулина G, характерного для злокачественного роста / Б.А. Проценко // Молекулярная генетика и биофизика. Киев, 1981. -№ 6. -С. 113-118.

124. Растворимые изоформы рецептора интерферона I типа т антиинтерфероновые антитела как регуляторы действия экзогенного и эндогенного интерферона / A.B. Караулов, Е.О. Рубальский, С.С. Афанасьев и др. // Иммунология. 2007. - Т.28, № 4. - С. 240-243.

125. Родионов, Н.Т. Физико-химические свойства и аминокислотный состав папаиновых фрагментов иммуноглобулинов G из крови коров, больных лейкозом / Н.Т. Родионов, Е.Ф. Мегедь // Укр. биохим. журн. 1981. -Т. 53, №3.-С. 28-32.

126. Романова, А.Ф. О сочетании лейкоза и рака / А.Ф. Романова, В.И. Клименко // Онкология Киев, 1978. - вып. 11. - С. 102-106.

127. Рукавицын, O.A. Роль иммунотерапии в лечении больных заболеваниями крови / O.A. Рукавицын // Вопросы онкологии. 2002. - Т. 48. -С. 186-192.

128. Румянцев, А.Г. Клиническая иммуногематология / А.Г. Румянцев // Иммунология и иммунопатология детского возраста. М., 1996. - С. 281317.

129. Рыбакова, JI.П. Модификация компонентов комплемента под действием катионных белков лейкоцитов доноров и больных лейкозами / Л.П. Рыбакова, Ю.В. Тяготин, C.B. Гончарова и др. // Вопросы мед. химии -1993. -№ 5. -С. 38-41.

130. Рыбакова, Л.П. Содержание компонентов комплемента в плазме онкогематологических больных при недостаточности гемопоэза / Л.П. Рыбакова, Ю.В. Тяготин, A.A. Ганапиев // Вопросы онкологии. 1996. - Т. 42, № 2. - С. 63-67.

131. Рыбка, А.Г. Иммунологическая оценка режимов адъювантной полихимиотерапии рака молочной железы (экспериментально-клинические исследования): автореф. дисс. . канд. мед. наук. 1984.-25 с.

132. Савран В.Р. Индивидуализация адъювантной пилихимиотерапии у онкологических больных: атореф. дис. . канд.мед.наук. 1991. - С. 32.

133. Сакаева, Д.Д., Князева, O.A. Изменение СЗ компонентакомплемента под влиянием полихимиотерапии у больных с неходжкинскими Iлимфомами / ГЦМБ. М., 2000. - Деп. в ГЦМБ 01.11.00; Д 26613.

134. Сакаева, Д.Д. Влияние полихимиотерапии на конформационные изменения СЗ компонента комплемента при лимфогранулематозе / Д.Д. Сакаева, O.A. Князева // Гематология и трансфузиология. 2002. - Т. 47, № 4.-С. 28-30.

135. Сакаева, Д.Д. Изменения СЗ компонента комплемента под влиянием полихимиотерапии у больных раком молочной железы / Д.Д. Сакаева, O.A. Князева // Иммунология. 2002. - № 3. - С. 172-174.

136. Сакаева, Д.Д. Конформационные изменения СЗ компонента комплемента у больных ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами под влиянием цикловой полихимиотерапии / Д.Д. Сакаева, O.A. Князева // Иммунология. 2002. - № 5. - С. 296-298.

137. Связывание и активация первого компонента комплемента человека на искусственных матрицах / Л.В. Козлов, М.Н. Сизой, A.A.

138. Зинченко и др. // Биоорганическая химия. 1984. - Т. 10, № 12. - С. 16291638.

139. Сенько, JI.H. Физико-химические и иммунохимические особенности тяжелых цепей иммуноглобулина G, характерного для злокачественного роста / JI.H. Сенько, В.А. Проценко, В.П. Короткоручко // Укр. биохим. журн. 1982. - Т. 54, № 3. - С. 243-248.

140. Сергеева, Н.С. Использование опухолеассоциированных маркеров для диагностики и контроля за эффективностью терапии у больных с распространенным раком яичников. Пособие для врачей. М., 2002. - 23 с.

141. Синтез и исследование противоопухолевой активности макрогетероциклических соединений и их металлокомплексов / М.К. Исляйкин, Е.А. Данилова, Е.В. Кудрик и др. // Хим.-фарм. журн. 1997. -Т. 31, №8. -С. 19-22.

142. Содержание сывороточных цитокинов у онкологических больных при иммуно- и полихимиотерапии с применением альфа-фетопротеина человека / С.Ю. Родионов, В.А. Черешнев, Е.Г. Орлова и др. // Цитокины и воспаление. 2007. - Т. 6, № 3. - С. 36-39.

143. Строение и свойства протеиназ системы комплемента / JÏ.B. Галебская, И.Г. Щербак, П.П. Бельтюков, Е.В. Рюмина // Укр. биохим. журн. 1990. - Т.62, № 6. - С. 3-15.

144. Сучков, C.B. Каталитические антитела и их значение для практической медицины /C.B. Сучков // Альманах клинической медицины — 2003. -№ 6. С.387-391.

145. Теоретические и экспериментальные исследования конформациишарнирных» участков в подклассе иммуноглобулинов G человека / А.И. Денисюк, В.М. Тищенко, В.М. Абралов, В.П. Завьялов // Молекулярная биология.-1983.-Т. 17, вып. 6.-С. 1262-1271.

146. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.П. Осипова, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова. М.: Высш.шк. - 1991. - 288 с.

147. Троицкий, Г.В. Применение "расширенного" уравнения Моффита для оценки конформации белков. Доказательства в пользу широкой распространенности среди белков ^-структур / Г.В. Троицкий // Биофизика. — 1965. Т. 10, вып. 5. - С. 895-901.

148. Троицкий, Г.В. Дефектные белки: постсинтетическая модификация. Киев: Наук. Думка, 1991. - 232 с.

149. Уманский, Ю.А., Пинчук В.Г. Лимфоциты и опухолевый рост. / Ю.А. Уманский, В.Г. Пинчук. Киев: Наук, думка, 1982. - 256 с.

150. Устойчивость конформации иммуноглобулинов G при хроническом лимфолейкозе / К.А. Ефетов, С.Ю. Тэтин, Г.В. Троицкий, В.З. Шидей // Докл.АН УССР. Сер. Б. 1985. - № 8. - С. 68-71.

151. Файклоу, Ф.Дж. Клональное и стволовое происхождение клеток крови / Ф.Дж. Файклоу //Современная гематология и онкогематология М.: Медицина, 1983.-С. 12-54.

152. Физико-химические свойства и фармакологическая активность глюконатов Mn (II), Fe (II), Со (II), Си (И) и Zn (II) / И.Г. Конкина, С.П. Иванов, О.А. Князева и др. // Хим.-фарм. журн. 2002. - Т.36, №1. - С.18-21.

153. Физиологическая активность координационных соединений 3 d-элементов / И.Г. Конкина, О.А. Князева, A.M. Ищенко и др. // Химия и медицина: тез. VI Всероссийского научного семинара. Уфа, 2007. - С. 6162.

154. Фосфолипидный состав различных участков пораженного органа при раке легкого / Б.С. Хышиктуев, Ю.Р. Агапова, И.В. Жилин, В.Н. Иванов

155. Вопросы мед. химии. 1999. - № 4. С.

156. Фридлянская, И.И. Получение моноклональных антител (гибридомная технология) / И.И. Фридлянская // Методы культивирования клеток. Л.: Наука, 1988. - С. 194-205.

157. Хронический лимфолейкоз / Ф.Э. Файнштейн, И.Ш. Зедгинидзе, A.M. Полянская, Г.И. Козинец. Тбилиси: Сабчота Сакартвело, 1976. - 240 с.

158. Дудаева, A.A. Криоконсервация культивированных клеток животных / A.A. Цуцаева, Т.Ф. Петренко // Методы культивирования клеток. -Л.: Наука, 1988. С. 63-69.

159. Человеческий сывороточный у-глобулин связывает катионы меди / Е.Е. Бабаева, У.А. Воробьева, М.С. Жаркова, С.Б. Чекнев // Бюл. экспер. биол. и мед. 2006. Т. 141, № 1. - С. 59-62.

160. Червонобаб, Ю.В. Лимфогранулематоз (принципы диагностики и лечения) / Ю.В. Червонобаб //Материалы Европейской школы по онкологии: М, 1995.-С. 2-17.

161. Чиссов, В.И. Первично-множественные злокачественные опухоли: Руководство для врачей. / В.И. Чиссов, А.Х. Трахтенберг. М.: Медицина, 2000. - 336 с.

162. Шварцбурд, П.М. Хроническое воспаление повышает риск развития эпителиальных новообразований, индуцируя предраковое микроокружение: анализ механизмов дисрегуляции / П.М. Шварцбурд // Вопросы онкологии. Т. 52, № 2. - С. 137-144.

163. Ширяев, Н.В. Особенности взаимодействия некоторых белков млекопитающих с мелиттином и липофорином: автореф. дис. . канд. биол. наук. Симферополь , 2002. - 17 с.

164. Ширяев, Н.В. Эволюционное прошлое IgG млекопитающих в свете современных знаний о структуре и функционировании данной белковой молекулы / Н.В. Ширяев // Иммунология. 2006. - № 1. - С. 58-60.

165. Штельцнер, А. Реакция связывания комплемента / А. Штельцнер // Иммунологические методы. Под ред. Г. Фримеля. М.: Медицина, 1987. -С. 73-88.

166. Ярилин, А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 608с.

167. Abel, С.А. The carbohydrat content of fragments and polypeptide chains of human y-G-globulin myeloma proteins of different heavy chain subclasses / C.A. Abel, H.L. Spigelberg, H.M. Grey // Biochemistry. 1968. -Vol. 7, №4.-P. 1271-1278.

168. Abrahamsson, J. Immunoglobulin levels and lymphocyte response to mitogenic stimulation in children with malignant disease during treatment and follow-up / J. Abrahamsson, I. Marky, L. Mellander // Acta Paediatr. 1995. -Vol. 84, №2.-P. 177-182.

169. Acquired deficiency in CI-inhibitor associated antibodies, hemolytic anemia, and complement turnover / J.B. Wasserfallen, P. Spaeth, L. Guillou et al. // J. Allergy. Clin. Immunol. 1995. - Vol. 95(Ptl). - P. 124-131.

170. Activation of complement by an IgG molecule without a genetic hinge / O.H. Brekke, Т.Е. Michaelsen, R. Sandin, I. Sandlie // Nature. 1993. - Vol. 363, №6430.-P. 628-630.

171. Activation of the alternate complement pathway by human immunoglobulins / M.M. Frank, T.A. Gaither, F. Adkinson et al. // J. Immunol. -1976.-Vol. 116.-P. 1733.

172. Aggregation of IgG in vivo. 2. Physicochemical properties of the isolated protein / S. Kochwa, E. Smith, M. Brownell, L.R. Wasserman // Biochemistry. 1966. - Vol. 5, № 1. - P. 277-285.

173. A highly immunogenetic tumor transfected with a murinetransforming growth factor type beta 1 cDNA escapes immune surveillance / G. Torre-Amione, R.D. Beauchamp, H. Koeppen et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol. 87. - P. 1486-1490.

174. Akagaki, Y. Activation of the alternative complement pathway by the immune precipitate formed with F(ab')2 fragment of human IgG antibody / Y. Akagaki, S. Inai // Mol. Immunol. 1983. - Vol. 20, № 11. - P. 1221-1226.

175. Allotypic markers of human immunoglobulin / H.H. Fudenberg, J.R.L. Pink, A.-C. Wang, S.D. Douglas // Basic Immunogenetics, 2d ed., New York : Oxford University Press. 1978. - P.57-76.

176. Amino acid sequence of the first constant region domain and the hinge region of the heavy chain of human IgD / F.W. Putnam, N. Takahashi, D. Tetaert et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1981. - Vol. 78. - P.6168-6172.

177. Amylolytic activity and catalytic properties of IgM and IgG antibodies from patients with systemic lupus erithematosus / K. Neustroev, D. Ivanen, A. Kulminskaya et al. // Human Antibodies. 2003.,- Vol. 12. - P. 31-34.

178. A new mouse myeloma cell line that had lost immunoglobulin expression but permits the construction of antibody secreting hybrid cell lines / Y.F. Kearney, A. Radbruch, B. Liesegang, K. Rajewsky // J. Immunol. 1979. -Vol. 123. -P.1548-1550.

179. A second serine protease associated with mannan-binding lectin that activates complement / S. Thiel, T. Vorup-Jensen, C.M. Stover et al. // Nature. -1997.-Vol. 386.-P. 506-510.

180. An IgM Waldenctrom with specificity against phosphorylcholine / W. Riesen, S. Rudikoff, R. Oriol, M. Potter // Biochemistry. 1975. - Vol. 14. - P. 1052-1057.

181. Antigen-binding sites dominate the surface properties of IgG antibodies / Ch. Wingren, U.B. Nansson, C.G.M. Magnusson, M. Ohlin // Mol. Immunol. 1995. - Vol. 32, № 11. - P. 819-827.

182. Arlaud, G.J. Functional model of the human CI complex / G.J.

183. Arlaud, G.C. Maurice, J.A. Gagnon // Immunol. Today. 1987. - Vol. 8, № 4. - P. 106-111.

184. Assignment of the structural gene for the third component of complement to chromosome 19 / A.S. Whitehead, E. Solomon, S. Chambers et al.. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1982. - Vol. 79. - P. 5021-5025.

185. Association of childhood leukaemia with factors related to the immune system / J. Schuz, U. Kaletsch, R. Meinert R. et al. // Br. J. Cancer. -1999. Vol. 80, № 3-4. - P. 585-590.

186. Attanasio, R. Structural correlates of immunoglobulin variable region antigenic determinants / R. Attanasio, R.C. Kennedy // Bull.Inst. Pasteur. 1992. -Vol. 90, №3.-P. 165-174.

187. A Tumor-expressed Inhibitor of the Early but not Late Complement Lytic Pathway Enhances Tumor Growth in a Rat Model of Human Breast Cancer 1 / T.A. Caragine, N. Okada, A.B. Frey, S. Tomlinson // Cancer research. 2002. -Vol. 62. - P. 1110-1115.

188. Autologous bone marrow transplantation as consolidation therapy for non-Hodgkin's lymphoma patients with poor prognostic features / J. Baro, C. Richard, J. Calavia et al. // Bone Marrow Transplant. 1991. - Vol.8, № 4. - P. 283-289.

189. Azemar, M. Die adjuvante Therapie des Mammakarzinoms / M. Azemar // Klinikarzt. 1996. - Vol. 25, № 7. - P. 229-235.

190. Bajorath, J. Conformational similarity and systematic displacement of complementarity determining region loops in high resolution antibody X-ray structures / J. Bajorath, L. Harris, J. Novotny // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270, №38.-P. 22081-22084.

191. Balkwill F. Mantovani Inflammation and cancer: back to Virhov? // Lancet. 2001. - Vol. 357. - P. 539-545.

192. Barski, G. "Hybrid" type cells in combined cultures of two different mammalian cell stains / G. Barski, S. Sorieul, F. Cornefert // J. Natl. Cancer Inst.1961.-Vol. 26.-P. 1269.

193. Baumann, M.A. An immune complex selective affinity matrix utilizing a synthetic peptide / M.A. Baumann, B.E. Anderson // J. Biol. Chem. -1990.-Vol. 265, №30.-P. 18414-18422.

194. Bennich, H. Structure and function of human immunoglobulin E / H. Bennich, S.G.O. Johansson // Adv. Immunol. 1971. - Vol. 13. - P. 1-55.

195. Berinstein, N. Overview of therapeutic vaccination approaches for cancer / N. Berinstein // Semin. Oncol. 2003. - Vol. 3. - P. 1-8.

196. Bissel, M.J. Context, tissue plasticity, and cancer: Are tumor stem cells also regulated by the microenvironment? / M.J. Bissel, M.A. Labarge // Cancer Cell. 2005. - Vol. 7. - P. 17-23.

197. Boyd, P.N. The effect of the removal of sialic acid, galactose and total carbohydrate on the functional activity of Campath-IH / P.N. Boyd, A.C. Lines, A.K. Patel // Mol. Immunol. 1995. - Vol. 32, № 17-18. - P. 1311-1318.

198. Brekke, O.H. The structural requirements for complement activation by IgG: does it hinge on the hinge? / O.H. Brekke, T.E. Michaelsen, I. Sandlie // Immunol. Today. 1995. - Vol. 16, № 2. - P. 85-90.

199. Burton, D.R. The localization of effector sites in immunoglobulin G / D.R. Burton, R.A. Dwek, J. Novotny // Proc. EMBO Workshop "Protein Conform. Immunol. Signal."(Portovenere, October 1981). New York, London. - 1983. - P. 73-78.

200. Burton, D.R. Immunoglobulin G: functional sites / D.R. Burton // Mol. Immunol. 1985. - Vol. 22, № 3. - P. 161-206.

201. Burton, D.R. Antibody: the flexible adaptor molecule / D.R. Burton // Trends Biochem. Sci. 1990. - Vol. 15, № 2. - P. 64-69.

202. Burton, D.R. Human antibody effector function / D.R. Burton, J.M. Woof// Adv. Immunol. 1992. - Vol. 51. - P. 1-84.

203. Byrne, H.A. The use of weighted scores with the functional assessement of Cancer therapy (FCT) seals / H.A. Byrne // J. Psychosoc. Oncol.1995. Vol. 13, № 4. - P.57-77.

204. Clq binding and activation of the complement classical pathway by Klebsiella pneumoniae outer membrane proteins / S. Alberti, G. Marques, S. Camprubi et al. // Infect Immun. 1993. - Vol. 61. - P. 852-860.

205. C3 binds covalently to the Cy3 domain of IgG immune aggregates during complement activation by the alternative pathway / L.C. Anton, J.M. Alcolea, P. Sanchez-Corral et al. // Biochem. J. 1989. - Vol. 257, № 3. - P. 831-838.

206. C5 convertase of the alternative complement pathway: covalent linkage between two C3b molecules within the trimolecular complex enzyme / T. Kinoshita, Y. Takata, H. Kozono et al. // J. Immunol. 1988. - Vol. 141. - P. 3895-3901.

207. Cannon, B.B. Cell-mediated immune responses-prognostic indicators of sorvival from breast cancer / B.B. Cannon, Z.R. Pomeratz // Int. J. Cancer. -1989. Vol. 44, № 6. - P. 995-999.

208. Capra, J.D. Hypervariable regions, idiotypy and the antibody combining site / J.D. Capra, J.M. Kehoe // Adv. Immunol. 1975. - Vol. 20. - P. 1-40.

209. Carroll, M.C. The role of complement and complement receptors in induction and regulation of immunity / M.C. Carroll // Annu Rev Immunol. -1998.-Vol. 16.-P. 545-568.

210. Catabolism of the murine IgGl molecule: evidence that both Ch2-Ch3 domain interfaces are required for persistence of IgGl in the circulation of mice / J.K. Kim, M.F. Tsen, V. Ghetie, E.S. Ward // Scand. J. Immunol. 1994. - Vol. 40,№4.-P. 457-465.

211. Nepomuceno, A.H., Henschen-Edman, W.H. Burgess, A.J. Tenner // Immunity. — 1999.-Vol. 6.-P. 119-129.

212. Chacko, S. Structural studies of human autoantibodies. Crystal structure of a thyroid peroxidase autoantibody Fab / S. Chacko, E.A. Padlan // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271, № 21. - P. 12191-12198.

213. Chimeric mouse human IgG3 antibodies with an IgG4-like hinge region induce complement-mediated lysis more effeciently than IgG3 with normal hinge / L. Norderhang, O.H. Brekke, B. Bremnes et al. // Eur. J. Immunol. -1991. Vol. 21, № 10. - P. 2379-2384.

214. Complement factor H or a related protein is a marker for transitional cell cancer of the bladder / R.J. Kinders, T. Jones, R. Root et al. // Clin. Cancer Res. 1998. - Vol. 4. - P. 2511 -2520.

215. Complement receptor 1/CD35 is a receptor for mannan-binding lectin /1. Ghiran I., S.F. Barbashov, L.B. Klickstein et al. // J. Exp Med. 2000. - Vol. 192.-P. 1797-1808.

216. Control of the complement system / M.K. Liszewski, T.C. Farries, D.M. Lublin et al. // Adv Immunol. 1996. - Vol. 61. - P. 201-283.

217. Correlation between cytotoxic and suppressor activities of human pulmonary macrophages / J.C.D. Hengst, J. Kan-Mtcell, R.A. Kempf et al. // Cancer Res. 1985. - Vol. 45. - P.459-463.

218. Corthesy, B. Roundtrip Ticket for Secretory IgA: Role in Mucosal Homeostasis? / B. Corthesy // J. Immunol. 2007. Vol. 178, №1. - P. 27-32.

219. Crystal structures of an antibody to a peptide and its complex with peptide antigen at 2.8 A / R.L. Stanfield, T.M. Fieser, R.A. Lerner, I.A. Wilson // Science. 1990. - Vol. 248, № 4956. - P. 712-719.

220. Cultivated H-RS cells are resistant to CD95L-mediated apoptosis despite expression of wild-type CD95 / D. Re, A. Hofmann, J. Wolf, et al. // Exp. Hematol. 2000. - Vol. 28, № 3. - P. 348-351.

221. Davidson, R.L. Improved techniques for induction of mammalian cell hybridisation by polyethylene glycol / R.L. Davidson, P.S. Gerald // Somat. Genet. -1976.-Vol. 2-P. 165.

222. Davis, A.E.I. Structural characterization of factor I mediated cleavage of the third component of complement / A.E.I. Davis, R.A. Harrison // Biochemistry. 1982. - Vol. 21. - P. 5745-5749.

223. De Bruijn, M.H.L. Human complement component C3: cDNA coding sequence and derived primary structure / M.H.L. De Bruijn, G.H. Fey // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. - Vol. 82. - P. 708-712.

224. Decay-Accelerating Factor Must Bind Both Components of the Complement Alternative Pathway C3 Convertase to Mediate Efficient Decay / C.L. Harris, D.M. Pettigrew, S.M. Lea, B.P. Morgan // J. Immunol. 2007 - Vol. 178, № 1. - P. 352-359.

225. Delineation of the amino acid residues inVved in transcytosis and catabolism of mouse IgGl / C. Medesan, D. Matesoi, C. Radu et al. // J. Immunol. 1997. - Vol. 158, № 5. - P. 2211-2217.

226. Determination of C3 and C3a in human plasma with monoclonal anti-C3 antibodies / S. Andreev, Yu. Tjagotin, A. Troflmov et al. // Abstracts, 3 rd Eur. Meet. Compl. Hum. Dis. Complement and inflammation, Karger. 1990 -Vol. 7, № 3. — P.128.

227. DNA binds and activates complement via residues 14-26 of thehuman Clq A chain / H. Jiang, B. Cooper, F.A. Robey, H. Gewurz // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 25597-25601.

228. Duncan, A.R. The binding site for Clq on IgG / A.R. Duncan, G. Winter//Nature. 1988. - Vol. 332, № 6166. - P. 738-740.

229. Dynamical structure of the hinge region of immunoglobulin G as studied by 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy / H. Kim, Ch. Matsunaga, A. Yoshino et al. // J. Mol. Biol. 1994. - Vol. 236, № 1. - P. 300-309.

230. Ebeling P. The complement system has associations also with glucose metabolism / P. Ebeling // Eur. J. Clin. Invest. 2000. - Vol. 30, №2. - P. 180.

231. Effect of immunoglobulin variable region structure on C3b and C4b deposition / K. White, F.M. Barton, St. Foundling, F.J. Waxman // Mol. Immunol.- 1996. Vol. 33, № 9. - P. 759-768.

232. Effector functions of a mouse IgG that lack the entire CH1 domain / R. Mizutani, T. Igarashi, T. Tanaka et al. // J. Immunol. 1993. - Vol. 150, № 1. -P. 131-138.

233. Egwang, T. The role of complement in the induction and regulation of immune responses / T. Egwang, A. Befus // J. Immunol. 1984. Vol. 51. - P. 207224.

234. Engineered Antibodies with Increased Activity to Recruit Complement / E.E. Idusogie, P.Y. Wong, L.G. Presta et al. // J. Immunol. 2001. -Vol. 166.-P. 2571-2575.

235. Enhancement of lectin pathway haemolysis by immunoglobulins / C. Suankratay, Y. Zhang, D. Jones et al. // Clin. Exper. Immunol. 1999. - Vol. 117, № 3. - P. 435-441.

236. Evidence for presence of an internal thiolester bond in third component of human complement / B.F. Tack, R.A. Harrison, J. Janatova et al. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1980. - Vol. 77. - P. 5764-5768.

237. Evidence that the hinge region plays a role in mantaining serum levels of the murine IgGl molecule / J.K. Kim, M.F. Tsen, V. Ghetie, E.S. Ward // Mol. Immunol. 1995. - Vol. 32, № 7. - P. 467-475.

238. Fazekas, S. Production of monoclonal antibodies: Strategy and tactics / S. Fazekas, S. Groth, D. Scheidegger // J. Immunol. Meth. 1980. - Vol. 35. - P: 1-24.

239. Fernandy, L.A. Immunoglobulin secretory function of B cells from-untreated patients with chronic lymphocytic leukemia and hypogammaglobulinemia: role of T cells / L.A. Fernandy, J.M. Macsween, G.R. Langley //Blood. 1982. - Vol. 62, № 4. - P. 767-774.

240. Ferreira, L.A.F. Isolation and properties of a T-kininogenase from bovine erythrocyte membranes / L.A.F. Ferreira, M. Bergamasco, O.B. Henriques // J. Protein. Chem. 1994. - Vol. 13, № 6. - P. 547-552.

241. Formation of complement subcomponent Clq immunoglobulin G complex / E.J. Emanuel, A.D. Brampton, D.R. Burton, R.A. Dwek // Biochem. J. -1982. - Vol. 205, № 2. - P. 361-372.

242. Forssman, J. Die Herstellung hochwertiger spezifischer schafhamolysine ohne Verwendung von Schafblut ein Beitrag zur Lehre von heterologer antikorper Bildung / J. Forssman // Biochem. Zeitschrift. 1911.1. Vol. 37. -P.78-101.

243. Foss, H.D. Hodgkin lymphoma. Classification and pathogenesis / H.D. Foss, H. Marafioti, H. Stein // Pathologe. 2000. - Vol. 21, № 2. - P. 113123.

244. Fox, P.C. Enhancing the frequency of antigen-specific hybridomas / P.C. Fox, E.H. Berenstein, R.P. Siraganian // Eur. J. Immunol. 1981. - Vol. 11.-P.431.

245. Frangione, B. Structural studies of immunoglobulin G / B. Frangione, C. Milstein, J.R.L. Pink // Nature. 1969. - Vol. 221. - P. 145-148.

246. Fu, S.M. Similar idiotypic specificity for the membrane IgD and IgM of human B lymphocytes / S.M Fu, R.J. Winchester, H.G. Kunkel // J. Immunol. -1975. Vol. 114. - P. 250-252.

247. Fu, S.M. Differentiation of leukemic cells in chronic lymphocytic leukemia / S.M. Fu // J. Cell. Biochem. 1982. - Suppl. № 6. - P. 5.

248. Functional affinity constants of subfragments of IgG for Clq / R.H. Painter, D.B. Foster, B. Gardner, N.C. Hughes-Jones // Hopper-Seyler's Z. Physiol. Chem. 1981. - Vol. 362, № 1. - P. 23.

249. Functional affinity constants of subfragments of immunoglobulin G for Clq / R.H. Painter, D.B. Foster, B. Gardner, N.C. Hughes-Jones // Mol. Immunol.-1982.-Vol. 19, № 1.-P. 127-131.

250. Gelter, M.L. A simple method for polyethylene glycolpromoted hybridization of mouse myeloma cells / M.L. Gelter, D.H. Margulies, M.D. Scharff // Somat. Genet. 1977. - Vol. 2. - P. 231.

251. Generation of three different fragments of bound C3 with purified factor I or serum. I. Requirements for factor H vs CR1 cofactor activity / G.D.

252. Ross, J.D. Lambris, J.A. Cain, S.L. Newman S.L. // J. Immunol. 1982. - Vol. 129.-P. 2051-2060.

253. Genetic marker of the gamma-A2 subgroup of gamma-A immunoglobulins / H.C. Kunkel, W.K. Smith, F.G. Joslin et al. // Nature. 1969. -Vol. 223.-P. 1247-1248.

254. Genetically engeneered immunoglobulins reveal structural features controlling segmental flexibility / W.P. Schneider, T.G. Wensel, L. Stryer, V.T. Oi // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1988. - Vol. 85, № 8. - P. 2509-2513.

255. Genomic organization of human complement component C3 / K.Y. Fong, M. Botto, M.J. Walport, A.K. So // Genomics. 1990. - Vol. 7. - P. 579586.

256. Glycosylation of human IgG-Fc: influences on structure revealed by differential scanning micro-calorimetry / R. Ghirlando, J. Lund, M. Goodall, R. Jefferis // Immunol. Lett. 1999. - Vol. 68, № 1. - P. 47-52.

257. Guddat, L.W. Local and transmitted conformational changes on complexation of an anti-sweetener Fab / L.W. Guddat, L. Shan L., J.M. Anchin // J. Mol. Biol. 1994. - Vol. 236, № 1. - P. 247-274.

258. Gutman, G.A. Genetic and structural studies on rat kappa chain allotypes / G.A. Gutman // Transplant. Proc. 1981. - Vol. 13 - P. 1483-1488.

259. Haba, S. In vitro inverstigation of factors influencing IgE synthesis / S. Haba, A. Nisonoff// J. Immonol.-Meth. 1996. - Vol. 198, № 2. - P. 133-143.

260. Haberman, E. Bee and wasp venoms / E. Haberman // Science. -1972. Vol. 177, № 4046. - P. 314-322.

261. Hack, C.E. Demonstration in human plasma of a form of C3 that has the conformation of "C3b- like C3" / C.E. Hack, J. Paardekooper, F. van Milligen // J. Immunol. 1990. - Vol. 144. - P. 4249-4255.

262. Harris, L.J. Comparison of the conformations of two intact monoclonal antibodies with hinges / L.J. Harris, S.B. Larson, E. Skaletsky, A. McPherson A. // Immunol. Rev. 1998. - Vol. 163. - P. 35-43.

263. Harris, C.L. Tailoring anti-complement therapeutics / C.L. Harris, D.A. Fraser, B.P. Morgan // Biochem. Soc. Trans. 2002. - Vol. 30, № 6. - P. 1019-1026.

264. H chain C domains influence the strength of binding of IgG for streptococcal group A carbohydrate / LJ.N. Cooper, J.C. Schimenti, D.D. Glass, N.S. Greenspan//J. Immunol. 1991. - Vol. 146, № 8. - P. 2659-2663.

265. Head and neck lymphomas associated with human immunodeficiency virus infection / A. Carbone, E. Vaccher, L. Barzan et al. //Archives of Otolaryngology Head and Neck Surgery. - 1995. - Vol. 121, № 2. - P. 210-218.

266. Heyman, B. Feedback regulation by IgG antibodies / B. Heyman // Immunol. Lett.-2003.-Vol. 88, №2.-P. 157-161.

267. Hilschmann, N. Amino acid sequence studies with Bence Jones proteins / N. Hilschmann, L.C. Craig // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1965. - Vol. 53.-P. 1403-1409.

268. Horgan, C. Studies on antigen binding by intact and hinge-deleted chimeric antibodies / C. Horgan, K. Brown, S.H. Pincus // J. Immunol. 1993. -Vol. 150, № 12. - P. 5400-5407.

269. Hughes-Jones, N.C. The rate of activation of CI failture to correlate with Clq binding / N.C. Hughes-Jones // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. -1981. Vol. 362, № 1. - P. 25-26.

270. Hui, K. Festenstein H. Rejection of transplantable AKR leukemia cells following MHC DNA-mediated cell transformation / K. Hui, F. Grosveld // Nature. 1984.-Vol. 311. - P. 750-752.

271. Human ClqRp is identical with CD93 and the mNI-11 antigen but does not bind Clq / E.P. McGreal, N. Ikewaki, H. Akatsu et al. // J. Immunol.2002. Vol. 168. - P. 5222-5232.

272. Human constant regions influence the antibody binding characteristics of mouse-human chimeric IgG subclasses / N. Mccloskey, M.V. Turner, P. Steffner et al. // J. Immunol. 1996. - Vol. 88, № 2. - P. 169-173.

273. Human FcyRI and FcyRII interaction with distinct but overlapping sites on human IgG / J. Lung, G. Winter, P.T. Jones et al. // J. Immunol. 1991. -Vol. 147, № 8. - P. 2657-2662.

274. Human leukocyte Clq receptor binds other soluble proteins with collagen domains / R. Malhotra, S. Thiel, K.B. Reid, R.B. Sim // J. Exp Med. -1990.-Vol. 172.-P. 955-959.

275. Human secretory immunoglobulin A may contribute to biofilm formation in the gut / R.R. Bollinger, M.L. Everett, D. Palestrant D. et al. // J. Immunol. 2003. - Vol. 109, № 4. - P. 580-587.

276. Hymes, J.A. Immunoglobulin carbohydrate requirement for formation of an IgG-IgG complex / J.A. Hymes, G.L. Mullinax, F. Mullinax // J. Biol. Chem. 1979. - Vol. 254, № 9. - P. 3148-3151.

277. Identification of the mouse IgG3 receptor: Implications for antibody effector function at the interface between innate and adaptive immunity / A.L. Gavin, N. Barnes, H.M. Dijstelbloem, P.M. Hogarth // J. Immunol. 1998. - Vol. 160,№ l.-P. 20-23.

278. Immunoglobulin class and subclass concentration after treatment of childhood leukemia / V.H. Kristinsson, J.R. Kristinsson, G.K. Jonmundsson et al. //Ibid.-2001.-Vol. 11, №1. P. 83-90.

279. Immunohistochemistry of complement response on human renal cell carcinoma biopsies / T. Magyarlaki, S. Mosolits, F. Baranyay, I. Buzogany // J. Tumori. 1996. - Vol. 82. - P. 473-479.

280. Inal, J.M. Complement C2 bypass mechanism involving the C3-convertase C4bBb / J.M. Inal, A. Laich, S. Miot // J. Immunol. 2007. - Vol. 178, № l.-P. 16-53.

281. Influence of the hinge region on complement activation, Clq binding, and segmental flexibility in chimeric human immunoglobulins / L.K. Tan, R.J. Shopes, V.T. Oi, S.L. Morrison // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol. 87, № l.-P. 162-166.

282. Inhibition of complement-mediated immune hemolysis by peptides derived from the constant domain of immunoglobulin / T. Kojima, C.A. Del Carpio, H. Tajiri et al. // Transplantation. 1999. - Vol. 67, № 4. p. 637-638.

283. Interaction of Clq and mannan-binding lectin (MBL) with Clr, Cls, MBL-associated serine proteases 1 and 2, and the MBL-associated protein MApl9 / S. Thiel, S.V. Petersen, T. Vorup-Jensen et al. // J. Immunol. 2000. - Vol. 165, №2.-P. 878-887.

284. Interaction of Clq and the collectins with the potential receptors calreticulin (cClqR/collectin receptor) and megalin / R.B. Sim, S.K. Moestrup, G.R. Stuart et al. // Immunobiology. 1998. - Vol. 199. - P. 208-224.

285. Intramolecular signaling upon complexation / L.W. Guddat, L. Shan, Z.Ch. Fan et al. // FASEB J. 1995. - Vol. 9, № 1. - P. 101-106.

286. Investigation of the interaction between the class I MHC-related Fc receptor and its immunoglobulin G ligand / M. Raghavan, M.Y. Chen, L.N. Gastinel, P.J. Bjorkman // Immunity. 1994. - Vol. 1, № 4. - P. 303-315.

287. In vitro characterization of five humanized OKT 3 effector function variant antibodies / D. Xu, M.L. Alegre, S.S. Varga et al. // Cell Immunol. -2000.-Vol. 200, № l.-P. 16-26.

288. Isotype choice for chimeric antibodies affects binding properties / M.M. Morelock, R. Rothlein, S.M. Bright et al. // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269, № 17.-P. 13048-13055.

289. Jack, D.L. Mannosebinding lectin: Targeting the microbial world for complement attack and opsonophagocytosis / D.L. Jack, N.J. Klein, M.W. Turner // J. Immunol. Rev. 2001. - Vol. 180. - P. 86-99.

290. Janssen, C. Stage-related correlations between immunoglobulins and complement components in preoperative sera from patients with gastric carcinoma

291. C. Janssen, O. Fonder, R. Matre //Europ. J. Cancer. Clin. Oncol. 1983. - Vol. . 19.-P. 1601-1605.

292. Jelezarova, E. C3b2-IgG complexes retain dimeric C3 fragments at all levels of inactivation / E. Jelezarova, A. Luginbuehl, H.U. Lutz // J. Biol. Chem. -2003.-Vol. 278.-P. 51806-51812.

293. Joshua, D.E. Myeloma. Biology and manadement / Eds. J.S.-Malpas,' X D.E. Bergsagel, R.A. Kyle. Oxford, 1995. - P. 30-49.

294. Junghans, R.P. The protection receptor for IgG catabolismos: the p2-microglobulin-containing neonatal intestinal transport receptor / R.P. Junghans, C.L. Anderson // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93, № 11. - P. 55125516.

295. Kiffer, F. Die Bedeutung von Mineralstoffen und Spurenelementen in der Immunologie / F. Kiffer // Z. Onkol. 1989. - Vol. 21, № 6. - P. 164-169.

296. Kim, Y.U. Covalent binding of C3b to C4b within the classical complement pathway C5 convertase: determination of amino acid residues inVved-in ester linkage formation / Y.U. Kim // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 4171-4176.

297. Kjellgren, K. Perioperative adjuvant chemotherapy in breast cancer. The Scandinavian Adjuvant Chemotherapy Study I / K. Kjellgren, R. NissenMeyer, T. Norin // Acta oncol. 1989. - Vol. 28, № 6. - P.899-901.

298. Klimo, P. Combination chemotherapy based on early introduction of seven effective drugs for advanced Hodgkin's disease / P. Klimo, J.M. Connors // Clin. Oncol. 1985.-Vol. 3.-P. 1174-1182.

299. Kochland, M.E. Structure and function of the J chain / M.E. Kochland // Adv. Immunol. 1975. - Vol. 20. - P.41-69.

300. Köhler, G. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity / G. Köhler, C. Milstein // Nature. 1975. - Vol. 256, № 55. -P.495-497.

301. Köhler, G. Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion / G. Köhler, C. Milstein // Eur. J. Immunol. 1976. -Vol. 6.-P. 511-519.

302. Lake, D.F. Natural and induced human antibody response to cancer / D.F. Lake, W.C. Huynh, E.M. Hersh // Cancer Invest. 2000. - Vol. 18. - P. 480489.

303. Lambris, J.D. The chemistry and biology of C3, C4, and C5. / J.D. Lambris, A. Sahu, R. Wetsel // The human complement system in health and disease. New York: Marcel Dekker Inc., 1998. - P. 83-118.

304. Law, S.K.A. The internal Müllerthioester and the covalent binding properties of the complement proteins C3 and C4 / S.K.A. Law, A.W. Dodds // Protein Sei. 1997. - Vol. 6. - P. 263-274.

305. Lee, J.P. Complement binding properties of two peptides from C2 region of human IgGl / J.P. Lee, R.H. Painter // Mol. Immunol. 1980. - Vol. 17, №9.-P. 1152-1162.

306. Leibson, P.J. The regulation of lymphocyte activation by inhibitory receptors / P.J. Leibson // Curr. Opin. Immunol. 2004. - Vol. 16, № 3. - P. 328336.

307. Lerner, R.A. At the crossroad of chemistry and inmunology: catalytic antibodies. / R.A. Lerner, S.J. Benkovic, P.G. Schultz // Science. — 1991. Vol. 252, № 5006.-P.659-667.

308. Les complications infectieuses des hemopathies lymphoides / Brossard G., Pellegrin J.L., Barbeau P. et al. // Sem. hop. Paris. 1991. - Vol. 67, №35.-P. 1555-1560.

309. Light chain rations and concentracions of immunoglobulins G, A and M in childhood common acute lymphoblastic leukemia / A. Haraldlsson, G.A. de Vaan, W.J. van Dijk et al. // Pediatr. Hematol. Oncol. 1994. - Vol. 11, № 1. -P. 83-90.

310. Lin, L.C. Primary structure of the Fc region of human immunoglobulin D: Implications for evutionary origin and biological function / L.C. Lin, F.W. Putman // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1981. - Vol. 78. - P. 504508.

311. Localization of the binding site for the human high-affinity Fc receptor on IgG / A.R. Duncan, J.M. Woof, L.J. Partridge et al. // Nature. 1988. - Vol. 332, №6164.-P. 563-564.

312. Lukas, T.J. Inhibition of Cl-mediated immune hemolysis by . monomeric and dimeric peptides from the second constant domain of human immunoglobulin G / T.J. Lukas, H. Munoz, B.W. Erickson // J. Immunol. 1981. -Vol. 127, №6.-P. 2555-2560.

313. Lysis via the lectin pathway of complement activation: minireview and lectin pathway enhancement of endotoxin-initiated hemolysis / Y. Zhang, C. Suankratay, X.H. Zhang et al. // Immunopharmacology. 1999. - Vol. 42, № 1-3.-P. 81-90.

314. Mage, R. The phenotypic expression of rabbit immuniglobulins: A model of complex regulated gene expression and cellular differentiation / R. Mage // Contemp. Top. Mol. Immunol. 1981. - Vol.8. - P. 89-112.

315. Mantis, N.J. Oligosaccharide side chains on human secretory IgA serve as receptors for ricin / N.J. Mantis, S.A. Farrant, S. Mehta // J. Immunol. -2004. Vol. 172. - № 11. - P. 6838-6845.

316. Mapping of the Clq binding site on rituxan, a chimeric antibody witha human IgGl Fc / E.E. Idusogie, L.G. Presta, H. Gazzano-Santoro et al. // J. Immunol. 2000. - Vol. 164, № 8. - P. 4178-4184.

317. Mapping the site on human IgG for binding of the MHC class I-related receptor, FcRn / J.K. Kim, M. Firan, C.G. Radu et al. // Eur. J. Immunol. -1999. Vol. 29, № 9. - P. 2819-2825.

318. Margulies, D.H. Somatic cell hybridisation of mouse myeloma cells / D.H. Margulies, W.M. Kuehl, M.D. Scharff// Cell. 1976. - Vol.8. - P.405-415.

319. MASP-3 and its association with distinct complexes of the mannan-binding lectin complement activation pathway / M.R. Dahl, S. Thiel, M. Matsushita et al. // Immunity. 2001. - Vol. 15. - P. 127-135.

320. Matre, R. Fc receptors in human placenta / R. Matre, O. Tonder, C. Endersen // Scand. J. Immunol. 1975. - Vol. 4. - P. 741-745.

321. Matsushita, M. Activation of the classical complement pathway by mannose-binding protein in association with a novel C1 s-like serine protease / M. Matsushita, T. Fujita // J. Exp Med. 1992. - Vol. 176. - P. 1497- 1502.

322. Mayer, M.M. Complement and complement-fixation in experimental immunochemistry / M.M. Mayer // Ed. E.A. Kabat, M.M. Mayer, 2nd edition. -Springfield: Thomas, 1961. P. 589-591.

323. Mayer, M.M. Complement: historical perspective and some current issues / M.M. Mayer // Complement. 1984. - Vol. 1. - P. 2-26.

324. Measurements of the true affinity constant in solution of antigen-antibody complexes by enzyme-linked immunosorbent assay / B. Friguet, A.F. Chaffotte, L. Djavadi-Ohaniance, M.E. Goldberg // J. Immunol. Meth. 1985. -Vol. 77.-P. 305-319.

325. Medicus, R.G. Role of human factor I and C3b receptor in the cleavage of surface-bound C3b / R.G. Medicus, J. Melamed, M.A. Arnaout M.A. // Eur. J. Immunol. 1983. - Vol. 13. - P. 465-470.

326. Melanoma cell expression of Fas (Apo-l/CD95) ligand: implications for tumor immune escape / M. Hahne, D. Rimoldi, M. Schroter et al. // Science.1996.-Vol. 274.-P. 1363-1366.

327. Metzger, H. Effect of antigen binding on the propertiesof antibody / H. Metzger // Adv. Immunol. 1974. - Vol. 18. - P. 169-207.

328. Michaelson, T.E. Primary structure of the "hinge" region of human IgG3 / T.E. Michaelson, B. Frangione, E.C. Franklin // J. Biol. Chem. 1977. -Vol. 252.-P. 883-889.

329. Minta, J.O. Kinetic studies on the fragmentation of the third componentn complement (C3) by trypsin / J.O. Minta, D. Man, H.Z. Movat // J. Immunol. 1977-Vol. 118.-P. 2192-2198.

330. Morgenfeld, M. Combination chemotherapy for advanced Hodgkin's disease / M. Morgenfeld, A. Pavlovsky, M. Isola, N. Somoza // XIV Int. Congr. Hematol.-Abstracts, Proc. Sao Paolo, 1972. - P. 578.

331. Motohara, K. Immunomodulatory end system complement / K. Motohara, K. Haruk // Meth. Find Exp. Clin. Pharmacol. 1996. - Vol. 8, № 2. -P. 67-72.

332. Multiple individual and cross-specific idiotypes 13 levan-binding myeloma proteins of BALB/c mice / R. Lieberman, M. Potter, W.J. Humphrey et al. // J. Exp. Med. 1975. - Vol. 142. - P.106.

333. Natvig, J.B. Human immunoglobulins: Classes, subclasses, genetic variants, and idiotypes / J.B. Natvig, H.G. Kunkel // dman Immunol. 1973. -Vol. 16.-P. 1-59.

334. Nauta, A.J. A regulatory role for complement in innate immunity and autoimmunity / A.J. Nauta, A. Roos, M.R. Daha // Arch Allegiy Immunol. 2004. -Vol. 134.-P. 310-323.

335. Nisonoff, A. Allotypes of rabbit, human, and mouse immunoglobulins

336. A. Nisonoff, J.E. Hopper, S.B. Spring // The Antibody Molecule. New York : Acad. Press., 1975. - P.346-406.

337. Nonaka, M. Phylogeny of the complement system / M. Nonaka // The human complement system in health and disease. New York: Marcel Dekker Inc., 1998.-P. 203-215.

338. Nose, M. Leanderson Th. Substitution of asparagine with aspartic acid in the Fc portion of mouse antibodies reduces their capacity for Clq binding / M. Nose//Eur. J. Immunol.-1989.-Vol. 19, № 11.-P. 2179-2181.

339. Ogata, R.T. Sequence of the gene for murine complement component C4 / R.T. Ogata, P.A. Rosa, N.E. Zepf// J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 16565-16572.

340. O'Connell J., Bennett M.W., O'Sullivan G.C. et al. The Fas counterattack: cancer as a site of immune privilege // Immunol. Today. 1999. -Vol. 20.-P. 46-56.

341. Okada, M. Role for the third constant domain of the IgG H chain in • activation of complement in the presence of CI inhibitor / M. Okada, S. Utsumi // J. Immunol. 1989.-Vol. 142, № l.-P. 195-201.

342. Oligosaccharide-protein interactions in IgG can modulate recognition by Fcy receptors / J. Lund, N. Takahashi, J.D. Pound et al. // FASEB J. 1995. -Vol. 9, № l.-P. 115-119.

343. Pangburn, M.K., C3b deposition during activation of the alternative complement pathway and the effect of deposition on the activating surface / M.K. Pangburn, R.D. Schreiber, H.J. Müller-Eberhard // J Immunol. 1983. - Vol. 131. -P. 1930-1935.

344. Pangburn, M.K. Structure and function of complement C5 convertaseenzymes / M.K. Pangburn, N. Rawal // Biochem. Soc. Trans. 2002. - Vol. 30, № 6.-P. 1006-1010.

345. Pasqualini, R.S. Cell-mediated immunity in breast cancer patient in relation to clinical stager / R.S. Pasqualini, L.C. Conesa, M. Lynch // Cell. Mol. Biol. 1981.-Vol. 27. -P.551-556.

346. Pepys, M.B. Role of complement in induction of antibody production in vivo. Effect of cobra factor and other C3-reactive agents on thymus-dependent and thymus-independent antibody responses / M.B. Pepys // J. Exp Med. 1974. -Vol. 140.-P. 126-145.

347. Persistent complement activation on tumor cell in breast cancer / F. Niculescu, H. Rus, M. Retegan et al. // J. Pathol. 1992. - Vol. 140. - P. 10391043.

348. Podack, E.R. Membrane attack by complement / E.R. Podack, J. Tschopp // Mol. Immunol. 1984. - Vol. 21. - P. 589-603.

349. Podack, E.R. Molecular composition of the tubular structure of the membrane attack complex of complement / E.R. Podack // J. Biol. Chem. 1984. -Vol. 259.-P. 8641-8647.

350. Poljak, R.J. X-ray diffraction studies of immunoglobulins / R.J. Poljak // Adv. Immunol. 1975. - Vol. 21. - P. 1-33.

351. Polyclonal catalytic antibodies / E.L. Ostler, M. Resmini, K. Brocklehurst, G. Gallacher // J. Immunol. Meth. 2002. - Vol. 269, №1-2. - P. 111-124.

352. Polymenis, M. Critical binding site amino acids of anti-Z-DNA single chain Fv molecules: Role of heavy and light chain CDR3 and relationship to autoantibody activity / M. Polymenis, D. Stollar // J. Immunol. 1994. - Vol. 152,11. P. 5318-5329.

353. Porter, R.R. The hydrolysis of rabbit -globulin and antibodies with crystalline papain / R.R. Porter // Biochem. J. 1959. - Vol. 73, № 1. - P. 119126.

354. Potter, M. Immunoglobulin producing tumors and myeloma proteins of mice /M. Potter//Physiol. Rev. - 1972. - Vol. 5. - P. 631.

355. Prasad, A.S. Zink an overview / A.S. Prasad // Nutrition. 1995. -Vol. 11.-P. 93-99.

356. Production and characterization of cytotoxic Thy-1 antibody-secreting hybrid cell lines. Detection of T cell subsets / P. Lake, E.A. Clarke, M. Khorshidi, G.H. Sunshine // Eur. J. Immunol. 1979. - Vol. 9. - P.875.

357. Proteinase activity in invasive cancer of the breast correlation with tumor progression / L. Benitez-Bribiesca, G. Martinez, M.T. Ruiz et al. // Arch. Med. Res. 1995. - Vol. 26. - P. 163-168.

358. Rapp, H.J. Mechanism of immune hemolysis: recognition of two steps in the conversion of EAC0l,4,2 to E* / H.J. Rapp // Science. 1958. - Vol. 127. -P. 234-236.

359. Reid, K.B.M. The proteolytic activation systems of complement / K.B.M. Reid, R.R. Porter//Ann. Rev. Biochem. 1981. - V.50. -P.433-464.

360. Reid, M.M. Serum immunoglobulins in acute lymphoblastic leukaemia / M.M. Reid // Arch. Dis. Child. 1990. - Vol. 65, №12. - P. 1379

361. Refined structure of an intact IgG2a monoclonal antibody / L.J. Harris, S.B. Larson, K.W. Hasel, A. McPherson A. // Biochemistry. 1997. - Vol. 36, №7.-P. 1581-1597.

362. Reilly, B.D. Analysis of human C4A and C4B binding to a immune complex in serum / B.D. Reilly // Clin. Exp. Immunol. 1999. - Vol. 117, № 1. -P. 12-18.

363. Release of calreticulin from neutrophils may alter Clq-mediated immune functions / U. Kishore, R.D. Sontheimer, K.N. Sastry et al. // Biochem. J. 1997. - Vol. 322, Pt. 2. - P. 543-550.

364. Restifo N.P. Cancer vaccines: basic principles. General concepts and preclinical studies / Principles and practice of the biologic therapy of cancer / N.P. Restifo // S.A. Rosebberg Ed. Philadelphia: Lippincott Williams&Wilkins, 2000. -P. 571-583.

365. Role of blocking antibody in disseminated gonococcal infection / J. A. Mccutchan, D. Katzenstein, D. Norquist et al. // J. Immunol. 1978. - Vol. 121, №5.-P. 1884-1888. r.

366. Role of complement in the immune response / Feldbush T., Hobbs M., Severson C. et al. // Fed. Proc. 1984. - Vol. 43. - P. 2548-2552.

367. Rotational allomerism and divergent evution of domains in immunoglobulin light chains / A.B. Edmundson, K.R. Ely, E.E. Abola et al. //Biochemistry. 1975. - Vol. 14. - P. 3953-3961.

368. Sahu, A. Specificity of the thioester-containing reactive site of human C3 and its significance to complement activation / A. Sahu, T.R. Kozel, M.K. Pangburn // J. Biochem. 1994. - Vol. 302. - P. 429-436.

369. Sahu, A. Covalent attachment of human complement C3 to IgG. Identification of the amino acid residue involved in ester linkage formation / A. Sahu, M.K. Pangburn // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269. - P. 28997-29002.

370. Sahu, A. Complement inhibitors: a resurgent concept in antiinflammatory therapeutics / A. Sahu, J.D. Lambris // Immunopharmacology. — 2000.-Vol. 49.-P. 133-148.

371. Sahu, A. Structure and biology of complement protein C3, a connecting link between innate and acquired immunity / A. Sahu, J.D. Lambris // J. Immunol. 2001. - Vol. 180. - P. 35-48.

372. Sakajeva, D.D. Influo de kombinita kemioterapio al komplemento / D.D. Sakajeva, O.A. Knyazeva, N.I. Sigajev //Medicina internacia revuo. — Universala Medicina Esperanto Asocio. - Krakov, 2002. - Vol. 20a, 1(78). - P. 29-37.

373. Schenkein, H.A. The role of immunoglobulins in alternative pathway activation by zymosan / H.A. Schenkein, S. Ruddy // J. Immunol. 1981. - Vol. 126.-P. 7-10.

374. Schulamn, M. A better line for making hybridomas secreting specific antibodies / M. Schulamn, C.D. Wilde, G. Kôhler // Nature. 1978. - Vol. 276. -P. 269-270.

375. Schultz, P.G. Catalytic antibodies / P.G. Schultz, R.A. Lerner, S.J. Benkovic // Chem. Eng. News. 1990. - Vol. 68, № 22. - P. 26-40.

376. Sea urchin coelomocytes specifically express a homologue of the complement component C3 / W.Z. Al-Sharif, J.O. Sunyer, J.D. Lambris, L.C. Smith // J. Immunol. 1997. - Vol. 160. - P. 2983-2997.

377. Secreted chondroitin sulfate proteoglycan of human B cell lines binds to the complement protein Clq and inhibits complex formation of Cl / M. Kirschfink, L. Blasé, S. Engelmann, R. Schwartz-Albiez // J. Immunol. 1997. -Vol. 158, №3.-P. 1324-1331.

378. Sedlacek, H.H. Vaccination for treatment of tumors: a criticalcomment / H.H. Sedlacek // Crit. Rev. Oncogenesis. 1994. - Vol. 5. - P. 555587.

379. Segmental flexibility and complement fixation of genetically engineered chimeric human, rabbit and mouse antibodies / J.L. Dangl, T.G. Wensel, Sh.L. Morrison et al. // EMBO J. 1988. - Vol. 7, № 7. - P. 1989-1994.

380. Serkowitz, K.A. Pneumocystis carinii pneumonia amoung patients with neoplastic disease / K.A. Serkowitz // Semin. Respir. Infect. 1992. - Vol. 7, №2.-P. 114-121.

381. Serum CI-esterase inhibitor an essential and independent prognosticator of gastric carcinoma / C.W. Janssen, R.T. Lie, H. Maartman-moe et al. // Brit. J. Cancer. 1989. - Vol. 60. - P. 589-591.

382. Serum proteolytic activities and antiproteases in human colorectal carcinoma / J.A. Amiquet, J. Jumener, J.L Monreal. et al. // J. Physiol. Biochem. -1998.-Vol. 54.-P. 9-13.

383. Seya, T. Heat-induced thiol-disulfide interchange reaction on the third component of human complement / T. Seya, S. Nagasawa // J. Biochem. (Tokyo). 1988.-Vol. 103.-P. 792-796.

384. Silverton, E.W. Three-dimensional structure of an intact human immunoglobulin / E.W. Silverton, M.A. Navia, D.R. Davies // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1977. - Vol. 74. - P. 5140-5144.

385. Some biological activities associated with Fc and pFc' subfragments of immunoglobulin G / M.W. Turner, D.R. Stanworth, D.E. Normausell, H.H. Bennich // Biochem et Biophys. Acta. 1969. - Vol. 188, № 2. - P. 265-271.

386. StatSoft. Электронный учебник Электрон. ресурс. // http://www.statsoft.ru/home/portal/default.asp/ [Дата обращения: 28 июня 2007].

387. Structural aspects of the human C5-gene intron/exon organization, 50-flanking region features, and characterization of two truncated cDNA clones / D.F. Carney, D.L. Haviland, D. Noack et al. // J. Biol. Chem. - 1991. - Vol. 266. -P. 18786-18791.

388. Structural basis of the interaction between IgG and Fcy receptors / K. Kato, C. Sautes-Fridman, W. Yamada et alj // J. Mol. Biol. - 2000. - Vol. 295, № 2.-P. 213-224.

389. Structural motifs inVved in human IgG antibody effector functions / J. Greenwood, M. Clark, H. Waldmann // Eur. J. Immunol. 1993. - Vol. 23, № 5. -P. 1098-1104.

390. Structure and function of immunoglobulin domains. V.Binding of immunoglobulin G and fragments to placental membrane preparations / T. McNabb, T.Y. Koh, K.J. Dorrington, R.H. Painter // J. Immunol. 1976. - Vol. 117. -P.882-888.

391. Tanimoto, K. Granulocyte collagenase and cathepsin B in patients with cancer of digestive organs / K. Tanimoto, J. Muravaki, C. Hirayama // Gastroenterol. Jpn. 1984. - Vol. 19. - P. 537-542.

392. Tao, M.-H. Studies of aglycosylated chimeric mouse-human IgG: Role of carbohydrate in the structure and effector functions mediated by the human IgG constant region / M.-H. Tao, Sh.L. Morrison // J. Immunol. 1989. - Vol. 143, №8.-P. 2595-2601.

393. Tao, M.-H. Structural features of human immunoglobulin G that determine isotype-specific differences in complement activation / M.-H. Tao, R.I.F. Smith, Sh.L. Morrison // J. Exp. Med. 1993. - Vol. 178, № 2. - P. 661667.

394. Taylor Ph. The complement system / Ph. Taylor, M. Botto, M. Walport // Curr. Biol. 1998. - Vol. 8, № 8. - P. 259-261.

395. The 3.2-A crystal structure of the human IgGl Fc fragment FcyRIII complex / P. Sondermann, R. Huber, V. Oosthuizen, U. Jacob // Nature. - 2000. -Vol. 406, № 6793. - P. 267-273.

396. The Clq binding site on IgG / D.R. Burton, J. Bojd, A.D. Brampton et al. // Hopper-Seyler's Z. Physiol. Chem. 1981. - Vol. 362, № 1. - P. 23-24.

397. The covalent binding reaction of complement component C3 / M.

398. Gadjeva, A.W. Dodds, A. Taniguchi-Sidle et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 161, №2.-P. 985-990.

399. The covalent structure of an entire G immunoglobulin molecule / G.M. Edelman, B.A. Cunningham, W.E. Gall et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1969.-Vol. 63. - P.78-85.

400. The Fas counterattack: cancer as a site of immune privilege / O'Connell J., Bennett M.W., O'Sullivan G.C. et al. // Immunol. Today. 1999. -Vol. 20.-P. 46-56.

401. The gene sequence and some properties of protein H: A novel IgG-binding protein / H. Gomi, T. Hozumi, Sh. Hattori et al. // J. Immunol. 1990. -Vol. 144, № 10. - P. 4046-4052.

402. The hinge as a spacer contributes to covalent assembly and is required for function of IgG / M.J. Coloma, K.R. Trinh, L.A. Wims, Sh.L. Morrison // J. Immunol. 1997.-Vol. 158, №2. -P. 733-740.

403. The IgG Fc receptor family / J.E. Gessner, H. Heiken, A. Tamm, R.E. Schmidt // Ann. Hematol. 1998. - Vol. 76, № 6. - P. 231-248.

404. The influence of the hinge region length in binding of human IgG to human Fcy receptors / S. Redpath, T.E. Michaelsen, I. Sandlie, M.R. Clark // Hum. Immunol. 1998.-Vol. 59, № 11.-P. 720-727.

405. The N-terminal end of the Cr2 domain of chimeric human IgGl anti-HLA-DR is necessary for Clq, FcyRI and FcyRIII binding / A. Morgan, N.D. Jones, A.M. Nesbitt et al. // J. Immunol. 1995. - Vol. 86, № 2. - P. 319-324.

406. The role of complement in inflammation and adaptive immunity / R. Barrington, M. Zhang, M. Fischer, M.C. Carroll // Immunol Rev. 2001. - Vol. 180.-P. 5-15.

407. The systemic lupus erythematosus (SLE) disease autoantigen-calreticulin can inhibit Clq association with immune complexes / U. Kishore, R.D. Sontheimer, K.N. Sastry et al. // Clin. Exp. Immunol. 1997. - Vol. 108, № 2. -P. 181-190.

408. Torano, A. Complete amino acid sequence of the 7a 02 heavy chain of a human IgA2 immunoglobulin of the A2m (2) allotype / A. Torano, F.W. Putnam // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1978. - Vol. 75. - P.966-969.

409. Trowbridge, I.S. Interspecies spleen-myeloma hybrid producing monoclonal antibody against lymphocyte surface glycoprotein, T 200 / I.S. Trowbridge // J. Exp. Med. 1978. - Vol. 148. - P.313.

410. Tschopp, J. Molecular weight of poly(C9). 12 to 18 C9 molecules form the transmembrane channel of complement / J. Tschopp, A. Engel, E.R. Podack // J. Biol. Chem. 1984. - Vol. 259. - P. 8641-8647.

411. Tseng, Y. The human complement CI complex has a picomolar dissociation constant at room temperature / Y. Tseng, P. Zavodszky, V.N. Schumaker // J. Immunol. 1997. - Vol. 158, № 2. - P. 937-944.

412. Tumor-specific deposition of immunoglobulin G and complement in papillary thyroid carcinoma / S.D. Lucas, A. Karlsson-Parra, B. Nilsson et al. // J. Hum. Pathol. 1996. - Vol. 27. - P. 1329-1335.

413. Two lineages of mannose-binding lectin-associated serine protease (MASP) in vertebrates / Y. Endo, M. Takahashi, M. Nakao et al. // J. Immunol. -1998.-Vol. 161, №9.-P. 4924-4930.

414. Ultracentrifiige studies of the binding of different subclasses to the Clq subunit of the first component of complement / V.N. Schumaker, M.A. Calcott, H.L. Spiegeberg, H.J. Muller-Eberhard // Biochemistry. 1976. - Vol. 15, №23.-P. 5175-5181.

415. Van Noorden, S. Immunocytochemistry today : Techniques and practice / S. Van Noorden, J.M. Polak // Immunocytochemistry. Practcal application in pathology and biology. Bristol etc.: Wright. - 1983. - P. 11-42.

416. Vik, D.P. Structural features of the human C3-gene intron/exon organization, transcriptional start site, and promoter region sequence / D.P. Vik // Biochemistry. - 1991. - Vol. 30. - P. 1080-1085.

417. Vitetta, E.S. Immunoglobulin receptors revisited / E.S. Vitetta, J.W. Uhr // Sciece. - 1975. - Vol. 189. - P. 964-969.

418. Wang, C.Y. Lymphoma associated with hyman immunodeficiency virus infection / C.Y. Wang, J.L. Snow, W.P.D. Su // Mayo. Clinic Proceedings. -1995. Vol. 70, № 7. - P. 665-672.

419. Weigert, M. The genetic control of antibody variable regions in the mouse / M. Weigert, R. Riblet // Immunopathol. Semin : Springer. - 1978. - Vol. 1.-P. 133-169. ;

420. Weiss, V. Functional model of subcomponent CI of human complement / V. Weiss, C. Fauser, J. Engel // J. Mol. Biol. 1986. - Vol. 189, № 3. P.-573-581.

421. Welch, J.C. Immunoglobulin concentrations in untreated lymphoblastic leukemia / J.C. Welch, L.S. Lilleyman // Pediatr. Hematol. Oncol. -1995.-Vol. 12.-P. 545-548.

422. Weyergraf, A. Short synthetic C3a analog peptides: Activation profile of human eosinophils in comparison to the native complement component C3a / A. Weyergraf, H. Petering, J. Kiihl // J. Allergy and Clin. Immunol. 2000. - Vol. 105, №1, Pt 2.-P. 249.

423. White, K.D. Ig N-glycan orientation can influence interactions with the complement system / K.D. White, R.D. Cummings, F.J. Waxman // J. Immunol.- 1997.-Vol. 158, № l.-P. 426-435.

424. Wortzel, R.D. Multiple tumorspecific antigens expressed on a singletumour cell / R.D. Wortzel, C. Philipps, H. Schreiber // Nature. 1983. - Vol. 304. -P. 165-167.

425. Wright, A. Effect of altered CH2-associated carbohydrate structure on the functional properties and in vivo fate of chimeric mouse-human immunoglobulin G1 / A. Wright, Sh.L. Morrison // J. Exp. Med. 1994. - Vol. 180, №3.-P. 1087-1096.

426. Wiirzner, R. Modulation of complement membrane attack by local C7 synthesis / R. Wiirzner // Clin, and Exp. Immunol. 2000. - Vol. 121, № 1. - P. 810.

427. Xin-pei, Yu. Mianyixue zazhi / Yu Xin-pei, Ch. Zheng-liang // J. Immunol. 2004. - Vol. 20, № 6. - P. 483-486.

428. Xu, Y., Oomen R., Klein M.H. Residue at position 331 in the IgGl and IgG4 CH2 domains contributes to their differential ability to bind and activate- complement / Y. Xu, R. Oomen, M.H. Klein // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269, №5.-P. 3469-3474.

429. Ziccardi, R.J. The first component of human complement (CI): Activation and control / R.J. Ziccardi // Springer-Semin. Immunopathol. 1983. -Vol. 6, №2/3.-P. 213-230.

Информация о работе

Князева, Ольга Александровна
доктора биологических наук
Уфа, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Взаимодействие комплемента с иммуноглобулинами G и конформационные изменения компонента C3 при неопластических процессах - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Взаимодействие комплемента с иммуноглобулинами G и конформационные изменения компонента C3 при неопластических процессах - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы