Влияние фракций сапропеля с антиоксидантными свойствами на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толернтность к тромбину (экспериментальное исследование)

Созонюк, Александр Данилович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние фракций сапропеля с антиоксидантными свойствами на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толернтность к тромбину (экспериментальное исследование)
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние фракций сапропеля с антиоксидантными свойствами на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толернтность к тромбину (экспериментальное исследование)"

На правах рукописи

Созонюк Александр Данилович

ВЛИЯНИЕ ФРАКЦИЙ САПРОПЕЛЯ С АНТИОКСИДАНТНЫМИ СВОЙСТВАМИ НА НЕПРЕРЫВНОЕ ВНУТРИСОСУДИСТОЕ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ

(экспериментальное исследование)

03.01.04-Биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа-2012

005017601

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Сулкарнаева Гульнур Ахмеровна Официальные оппоненты:

Заведующий кафедрой лабораторной диагностики Института последипломного образования ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, доктор медицинских наук, профессор Гильманов Александр Жанович

Заведующий кафедрой биохимии ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, доктор медицинских наук, профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич

Ведущая организация

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет» Минздравсоцразвития России

Защита состоится ........ 2012 г в часов на заседании диссерта-

ционного совета Д 208.006.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионально образования «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития Российской Федерации» по адресу:

г. Уфа, ул. Ленина, 3.

С авторефератом можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития Российской Федерации г. Уфа, ул. Ленина, 3.

Автореферат разослан года

Ученый секретарь Диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Мирсаева Г.Х.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Анализируя литературу последних лет мы обратили внимание на экстракт из сапропелевых грязей, из которых выделены ингибиторы свертывания, влияющие на плазменный и тромбоцитарный гемостаз (О.А.Русакова, 1993; И.Э.Полле и др., 2001). Показано, что в сапропеле (сырье доступном и недорогом) содержатся эффекторы свертывания крови, которые могут быть выделены как индивидуальные беспримесные продукты. Торможение ими гемокоагуляции реализуется преимущественно на уровне коагуляционных превращений фибриногена (ФГ) и агрегации тромбоцитов (АДФ- и адреналининдуцируемую). Особенно важным нам показалось то, что эти эффекторы при внутримышечном и интраперитонеальном введении лабораторным животным малотоксичны, и отличаются широким терапевтическим диапазоном действия [Е.А. Чирятьев и др., 2008; Э.А.Ортенберг и др., 2008; А.Е.Бушин и др., 2008].

В последние десятилетия особый интерес [А.Ш.Бышевский, 1984; А.Ш.Бышевский и др., 2003; А.И.Бродер, 2004; Г.А. Сулкарнаева, 2004], представляет характер влияния антикоагулянтов на скорость непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) - процесс медленно протекающий, а при ускорении разнообразными воздействиями, перерастающий в диссеменированное внутрисосуди-стое свертывание крови (ДВСК), сопровождающее многие патологические состояния [З.С.Баркаган, 1998; И.Н.Бокарев, 2002]. Вместе с тем влияние антикоагулянтов из сапропелей, перспективных с позиций медицинской практики, на НВСК и способность организма противостоять ускоренному образованию тромбина - ключевого энзима гемостаза - не изучено. Именно появление тромбина инициирует (через накопление активных форм ФГ) неферментативный этап образования нестбильного или растворимого фибрина. Тромбин же через активацию ф.ХШ обеспечивает переход расстворимого фибрина,, в фибрин нерасстоворимый. [А.С.Шитикова, 2000; Л.П.Папаян, 2003].

Интерес к оценке интенсивности НВСК, протекающего в условиях здоровья с малой скоростью [Д.М.Зубаиров, 1976, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 1984, 2003], обусловлен тем, что при экстремальных воздействиях сдвиги уровня маркеров НВСК позволяют различать наклонность к гипер - и гипокоагуляции [А.П.Момот, 1990; И.Н.Бокарев, 2002; М.К.Умутбаева, 2005]. Кроме того, показано, как соотносятся уровень маркеров НВСК и толерантность к тромбину (ТкТР), что и позволило оценивать её неинвазивным приёмом. Это важно потому, что ранее известные способы оценки ТкТР требуют парентерального введения тромбина, что в клинике недопустимо.

Поставив перед собой задачу, получить данные о перспективности использования антикоагулянтов из сапропеля в коррекции гиперкоагулемических состояний (т.е. выяснить их влияние на устойчивость организма к воздействиям, вызывающим ги-пертромбинемию), мы сформулировали цель представленной работы.

Цель исследования - оценить влияние очищенных фракий экстракта сапропеля на интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину в физиологических условиях и после воздействий, изменяющих интенсивность НВСК в эксперименте. Задачи исследования

1. Выделить эффекторы гемокоагуляции из сапропеля, влияющие преимущественно на неферментативную фазу фибринообразования.

2. Изучить их влияние в нетоксичных дозах на свертывающую активность крови, плазменный уровень маркеров НВСК и толерантность к тромбину (ТкТР).

3. Изучить влияние фракций экстракта сапропеля на свертывающую активность крови, НВСК и ТкТР, используя модели, характеризующиеся гипер- и гипокоагулемиче-скими сдвигами,

4. Изучить изменения НВСК и ТкТР при введении экстракта сапропеля у животных.

5. В эксперименте сравнить влияние эффекторов из сапропеля на толерантность к тромбину.

Научная новизна. Установлено, что сочетание, двух фракций из экстракта сапропеля, содержащих олигопептиды с противосвертывающей активностью, при внутривенном однократном введении дозазависимо снижает на 24 ч коагулопотенциал (замедление НВСК и рост ТкТР).

Впервые найдено, что эти эффекты дозазависимы и, прогрессируя в первые часы после однократного введения, постепенно ослабляются, сохраняясь достоверно выраженными в течение 12 часов (р < 0,05).

Обнаружено, что снижение коагулопотенциала олигопептидами более выражено при гиперкоакуляции, спровоцированной разными по природе и механизмам воздействиями (глубокий эфирный наркоз, экзогенная адреналинемия, кровопотеря, интенсивная физическая нагрузка, введение прооксидантов), а также усугубляет гипокоа-гулемию, вызываемую угнетением липидпероксидации (ЛПО) факторами, объединенными лишь тем, что они вызывают снижение уровня липидпероксидов, скорости индуцированной оксидации и удлиняют период индукции (гипотиреоз, введение разных соединений с антиоксидантными свойствами).

Впервые установлено, что при повторных введениях этих олигопептидов (интервал - 12 ч) их эффекты на гемостаз выше вызванных первой инъекцией на 10-12% (р < 0,05).

Впервые найдено, что при разнообразных по этиологии гипер- и гипокоагулеми-ях, введение исследуемых олигопептидов снижает скорость НВСК и повышает ТкТР.

Впервые установлено, что при их введении ТкТР, отражающая готовность системы гемостаза к ответу на изменения скорости тромбиногенеза, тесно отрицательно ассоциирована с интенсивностью НВСК, и что теснота этой связи не зависит от степени изменения коагулопотенциала (значения rs при изменениях коагулопотенциала

колеблется от-0,83 до -0,91). Это подтверждает возможность использования неин-вазивного метода оценки ТкТР в изучении регуляции неферментативного этапа фиб-ринообразования (можно использовать его и при изучении ингибиторов самосборки фибрина).

Практическая ценность. Апробирован способ получения суммы антикоагулянтов, действующих на уровне неферментативного этапа свертывания крови, из недорогого сырья, запасы которого практически неограничены. Уточнены механизмы действия суммы исследуемых олигопептидов как антикоагулянта. Учитывая, что эти эффекторы ограничивают плазменные и тромбоцитарные компоненты гемостаза in vivo и in vitro, и не обладают острой и хронической токсичностью в эксперименте, как показано ранее [Е.А.Чирятьев и др., 2000; А.Е.Бушин и др., 2008 а, б, в], следует расширить их углубленное изучение, в том числе их токсикологический аспект. Полученные данные могут использовать научные учреждения, изучающие молекулярные механизмы регуляции неферментативного этапа свертывания крови.

Основные положения, вынесенные на защиту

1. Сумма двух фракций из экстракта сапропеля, включающих олигопептиды с противосвертывающей активностью, при внутривенном однократном введении доза-зависимо снижает на 24 ч интенсивность НВСК, ограничивая скорость тромби-ногенеза, что сопровождается увеличением способности организма адекватно реагировать на гипертромбинемию - т.е. ростом ТкТР.

2. Эффекты суммы исследуемых олигопептидов дозазависимы и нарастают в первые часы после однократного введения, постепенно ослабляясь к к 12-му часу.

3. Снижение коагулопотенциала при введении этих олигопептидов заметнее на фоне гиперкоагуляции, вызванной разными по природе и механизмам воздействиями (глубокий эфирный наркоз, экзогенная адреналинемия, кровопотеря, интенсивная физическая нагрузка, введение прооксидантов). На фоне гипокоагулемии, вызванной угнетением НПО (гипотиреоз, введение разных соединений с антиоксидантными свойствами), олигопептиды снижают уровень липидпероксидов, скорость индуцированной оксидации и удлиняют период индукции.

4. При повторных введениях эти олигопептидов (интервал 12 ч) их эффекты на гемостаз воспроизводятся, превышая вызванные 1-й инъекцией не более, чем на 1012% (р < 0,05).

5. При экспериментальных ситуациях (разных по этиологии гипо- или гиперкоа-гулемиях) введение исследуемых олигопептидов из сапропеля замедляет НВСК и повышает ТкТР, тесно и отрицательно ассоциирующуюся с НВСК - теснота связи не зависит от степени изменения коагулопотенциала. 6. Неинвазивный метод определения ТкТР может использоваться при изучении регуляции неферментативного этапа фибринообразования.

Апробация. Результаты работы были доложены и обсуждены на россйской конференции "Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохими", посвещен-ной 80 - летию со дня рождения P.M. Лившица (Челябинск, 2009 г.); Всероссийской конференции " Разработка, исследования и маркетинг новой фармацевтической продукции. (Пятигорск, 2010); 45-й всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых (Тюмень, 2011); Всероссийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине " Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диогностика в аспекте модернизации научных исследований" (Омск, 2011); на совместном заседании кафедр биохимии, гигиены с основами экологии, фармакогнозии, технологии лекарств с курсом ботаники, аналитической и органической химии с курсом токсикологии (Тюмень, 2012)

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 8 научных статьях, включая 3 работы в изданиях, рекомендованные ВАК Минобразования России.

Личное участие автора. Проведение экспериментов, обработка и интерпретация экспериментальных данных, а также подготовка к публикации основных результатов исследования по диссертационной работе и их апробация выполнялись лично автором или при его непосредственном участи.

Связь с планами научно-исследовательских работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздравсоцраз-вития России. Номер государственной регистрации 01.200964768.

Объем и структура работы. Материалы исследования, включая указатель литературы, изложены на 134 страницах машинописного текста. В работе содержатся 21 рисунок и 15 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (76 российских и 160 зарубежных источников), главы, содержащей 5 подразделов, где изложены результаты собственных исследований, заключение и выводы.

Содержание работы

Материалы и методы исследования. Из сапрофеля озера Большой Тараскуль (Тюменская обл.) выделены два олигопептида по методу, предложенному Е.А. Чирятье-вым (1989). Объединенная фракция сапропеля, содержащая оба олигопептида, отличалась малой токсичностью (IV группа) при парентеральном введении (крысы и мыши). Полученный продукт не отличался от ранее описанного [Е.А.Чирятьев и др., 1989, 2008; А.Е.Бушин, 2006, 2009].

Изучив хроматографический профиль полученного и очищенного нами продукта из сапропеля (гель-фильтрация), мы нашли, что он содержит две фракции с активностью ингибитора самосборки (ИС), как это было показано и ранее: полученная нами хроматограмма активной фракции сапропеля и хроматограмма такой же фракции, полученной ранее [А.Е.Бушин, 2009], подтвердили это. То же подтвердили одинаковые объемы выхода из колонки максимальных количеств ИС 1-й и 2-й фракции, а

также его близкая антикоагулянтная активность (на массу очищенной от гуминовых кислот смеси обеих фракций).

Выбор животных. Опыты провели на нелинейных белых крысах-самцах (390 особей, 168±13 г и 200±15 г.) Объем быстро отбираемой пробы (до 35-40 мл/кг массы тела) достаточен для изучения намеченного комплекса тестов, и обеспечивает соблюдение гемостазиологических требований к взятию крови. Важно и то, что есть данные о примерных дозировках факторов, которые мы использовали для провокации гипо- и гиперкогулемии [В.П.Балуда и др., 1980; З.С.Баркаган, 1998].

Все опыты включали контрольную группу (интактные животные), исключая случаи с коротким интервалом между сериями (общая контрольная группа). Кровь брали у наркотизированных крыс (диэтиловый эфир) силиконированным шприцом из обнаженной овальным разрезом яремной вены (стабилизатор 3,8% р-р цитрата натрия, 1:9). Рану закрывали кожным швом (кетгут).

Оценивали ТкТР через 0.5 ч после внутривенной инъекции тромбина, в дозе, предусмотренной методом, описанным ниже. Для оценки НВСК определяли продукты, уровень которых позволяет судить об интенсивности внутрисосудистого взаимодействия тромбин-фибриноген, отражающей скорость НВСК: содержание ПДФ (маркера коагуляционной активности или компенсаторной активации фибринолиза, определяли по описанию [А.Ш.Бышевский и др., 1991]; содержание D-димеров (мкг/мл эквивалентов ФГ) - маркеров коагуляционной активности [Н.К.Зяблицкая 2003; de De P.Moerloose, F.Boehlen, 2003] - определяли, используя набор «D-dimer test» (Roche); содержание растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ) - определяли количественным вариантом фенантролиновым тестом [А.П.Момот и др., 1999]; концентрацию в плазме ФГ. Для оценки свертываюшей активности крови определяли АВР и тромбиновое время (ТВ) [Г.Н.Детинкина и др. 1984]; общую коагу-ляционную активность тромбоцитов (ОКАТ) [А.Ш.Бышевский и др., 1996]; ТкТР -определяли согласно описанию к патенту [А.Ш.Бышевский и др., 2003]. Метод основан на оценке степени изменения фибриногенемии после внутривенной инъекции стандартной дозы тромбина интактным и подвергающимся воздействиям крыс. Схема определения ТкТР: раствор тромбина (активность - 24 с) ввести в яремную вену фиксированной на станке крысы. Пробу крови взять через 30 мин (0.9 мл в шприц с 0.1 мл 3.8% раствора тринатрийцитрата). Определить содержание коагулируемого тромбином ФГ для установления степени сдвига фибриногенемии - меры ТкТР животного. Содержание ФГ определяли спектрофотометрически, устанавливая содержание ФГ по калибровочной кривой.

Результат рассчитывали по формуле, учитывающей концентрацию ФГ в плазме крови интактных крыс (исходный уровень) и концентрацию ФГ после введения тромбина (остаточная концентрация): D = {1- [(Ск - Со): Ск]} х 100, где где D - остаточная концентрация ФГ, (%), Ск - концентрация у крыс, которым тромбин не

вводили и воздействиям не подвергали (исходный уровень); Со - концентрация ФГ у крыс, которым ввели тромбин после изучающегося воздействия (остаточная концентрация). Остаточную концентрацию (D) у крыс, которым тромбин ввели, принимали за 100-процентную величину ТкТР, и устанавливали степень изменения (в %) ТкТР при конкретном воздействии по формуле: Х% = (Do : Dk)x100, где X - ТкТР в %, Do - остаточная концентрация ФГ (в %) у крыс подопытной группы, Dk - остаточная концентрация ФГ (в %) у группы крыс, не подвергавшейся изучаемому воздействию (контрольная группа). Результат расчета (ТкТР, %) позволяет судить о направлении и степени влияния изучаемых воздействий на ТкТР, т.е. на способность организма животного отвечать на тромбообразование.

Мономерный фибрин (МФ) получали, используя модификацию [Е.А. Чирятьев, 1990]. Концентрацию МФ определяли на спектрофотометре. (Т.П. Угарова, В.А. Бе-лицер, 1978). Скорость самосборки фибрина определяли в системе, содержащей 0,5 мл 0,075 М боратного буфера с pH 7,6, 0,1 мл исследуемого экстракта и 0,1 мл раствора МФ. В контроле заменяли экстракт равным объемом растворителя. Противо-свертывающую активность фракций экстракта оценивали по их влиянию на взаимодействие тромбин-ФГ и на время аутополимеризации МФ in vitro [Е.А. Чирятьев, 1990]). Результаты выражали значениями эффективности торможения 0) по формуле: i = 1 - Vo/Vk, где Vo и Vk - скорость реакции в опыте и контроле соответственно. При необходимости содержание антикоагулянтов во фракциях выражали в единицах активности (ЕА), принимая за 1 ЕА количество эффектора, активность которого (i) равна 0,3.

Статистическая обработка результатов. Статистическую обработку данных, проводили с помощью медикобиологической программы Biostat 4.03 [С.А.Гланц, 1998]. Использовали метод вариационной статистики для малых рядов наблюдений, вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (ш) и среднеквадратическое отклонение (о). Сопоставляя интенсивные показатели, использовали альтернативное варьирования, определяя те же статистические величины. Достоверность отличий оценивали, вычисляя доверительный коэффициент Стъюдента (t) и степень вероятности (р). Взаимосвязи переменных оценивали методом ранговой корреляции Спирмена, рассчитывая коэффициенты Rs. Различия рассматривали как достоверные при степени вероятности ниже 0.05 (р < 0,05). Графический анализ выполняли в системе Microsoft Graf, используя приложение MS Word 2003. Корректность трендов, оценивали по значению коэффициентов аппроксимации (R2).

Чтобы установить тип кооперации эффектов двух воздействий, результаты опытов подвергали математической обработке, позволяющей различать в их суммарном действии наличие синергизма, антагонизма или суммации. Для этого использовали уравнение М.Диксона и Э.Уэбба, [1966], которое может иметь знак (=, < , >), сое-

диняющий его обе части: I. \ы = (¡1 + Ь) - Oi х ¡2); И. ¡ьг < (Ь + ¡2) - (i, х i2); III. ii,2 > (i, + i2) - (i, x ¡2), где ii парциальный эффект одного фактора, i2 - парциальный эффект второго фактора, i1>2 эффект, установленный при одновременном воздействии обеими факторами. Значение i (эффективность воздействии) рассчитывали как частное от деления показателя эффекта, выраженного в виде интенсивной величины в опыте, на такую же величину в контроле, вычитая частное от единицы. Результат, отвечающий уравнению I - признак суммации, уравнению II - антагонизма и уравнению III - синергизма.

В работе использованы следующие коммерческие препараты и реагенты: тромбин и ФГ бычьей крови, тромбопластин (кадаверный лиофилизированный), кефалин, набор «D-dimer test" фирмы «Roche», каолин (легкая фракция), димефосфон (г.Казань), соли, основания и кислоты, - х.ч., этанол медицинский (после двукратной перегонки), реагенты 1-й, 2-й, 3-й и 5-й фирмы («Технология-стандарт») РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Гемостатические сдвиги у крыс после выхода из глубокого наркоза (без предварительного введения ИСПП и с его введением) иллюстрирует рисунок 1.

Рис.1. Степень отклонения (в % от контроля АВР, ТВ, маркеров НВСК и ТкТР после выхода крыс из наркоза (без введения ИСПП и с его введением).

При введении ИСПП ускорены ТВ, АВР и НВСК (рост уровня всех маркеров, особенно D-димеров), и значительно снижена ТкТР. Достоверно снижен уровень ФГ, рост коагулопотенциала достиг той степени, когда ускоряется потребление ФГ, что и ранее находили при эфирном наркозе [С.Л.Галян и др., 2004]. Здесь, видимо, развитие гипокоагулемии - следствие потребления ФГ из-за первичной гиперкоагуляции. Это же находили и при других и стрессвоздействиях [В.Г.Соловьев, 1997; А.Э.Шабанов и др., 1999].

У крыс, которым вводили ИСПП, КП, напротив, уменьшился: удлинены АВР, ТВ и уровень маркеров НВСК в плазме, а ТкТР снизилась примерно в 2 раза. Следовательно, введение ИСПП животным с заметно повышенным после наркоза КП, огра-

□ АВР DTB РФГ РПДФ ЕЗРКМФ ПР-Д В ТкТР |

80 -| 60 ■ 40 •

Контроль

Опыт

ничило гиперкоагуляционные сдвиги.

Сходные данные получили и в опытах, где рост КП стимулировали введением адреналина - факт известный и неоднократно подтвержденный [В.П.Балуда, 1958, 1981; Е.М.Шаповалова, 2010]. В наших опытах контрольным крысам вводили 0,85% раствор ЫаС1, а подопытным - ИСГТП (ЗОмг/кг). Через 3 ч (на высоте действия ИСПП) вводили адреналин, отбирая пробы крови одновременно у контрольных и подопытных крыс.

У контрольных крыс введение адреналина сократило АВР и ТВ, снизило уровень ФГ (рис.2). Следовательно, адреналин повысил КП до степени, сопровождающейся ускоренным потреблением ФГ, как это было и после наркоза. Повышены в плазме контрольных крыс и уровни всех маркеров НВСК, а ТкТР снизилась.

И рост коагулопотенциала и ускорение НВСК, и снижение ТкТР после введения адреналина выражены менее заметно, чем после выхода наркоза. Отношение КП/ТкТР - величина, отличающаяся постоянством при многих по этиологии гипо- и гиперкоагуляционных состояниях. [Г.А. Сулкарнева, 2006; Е.М.Шаповалова и др., 2007]. Это соотношение, если КП выражен (как в наших опытах) уровнем плазменных маркеров НВСК, позволяет прогнозировать падение толерантности к тромбину, которая, и снизилась в обсуждаемом эксперименте.

D АВР 0 ТВ □ ФГ а ПДФ 0РКМФ □ D-д ЕТкТР

I г £ Е у

Контроль Опыт

Рис. 2. Степень отклонений (в % от контроля) АВР, ТВ, маркеров НВСК и ТкТР после введения адреналина (30 мкг/кг, внутримышечно)

Это наблюдение, неоднократно описанное, и послужило основанием для суждения о ТкТР по уровню в плазме крови ПДФ и фибрина (они и являются соединениями, которые считают маркерами НВСК) [A.Sh.Byshevsky е.а., 2008, 2010; В.А. Поля- [ кова и др., 2010]. Введение ИСПП крысам, получившим адреналин, как и в опытах с гиперкоагуяционным состоянием, вызванным наркозом, существенно ограничило сдвиги в гемостазе.

Как вид воздействий, ускоряющих тромбиногенез (следовательно, и повышение | КП), мы использовали модель эндогенной тромбинемии, вызываемой кровопотерей (известно, что при извлечении крови растет КП [В.Г.Соловьев, 1997; М.К.Умубаева, 2005; Р.Г.Алборов, 2006]). На рис. 3 видно, что через 6 ч после кровопотери растет свертываемость крови (укорочение АВР и ТВ). Степень гиперкоагуляции здесь была

такой, что ускорилось потребление ФГ, как и при вышерассмотренных моделях. Этому соответствовало ускорение НВСК (прирост уровня ПДФ, РКМФ и Б-димеров, а также и снижение ТкТР, более выразительное, чем в предыдущих опытах).

О АВР О ТВ йФГ йПДФ И РКМФ DD-д В ТкТР

100 -50 ■ О -■50 --100 -

Контроль

Опыт

Рис. 3. Степень отклонений (в % от контроля) АВР, ТВ, уровня маркеров НВСК и ТкТР через 6 ч после кровопотери (~25% от ОЦК).

Далее, мы провели опыты, применив ещё один способ вызывания гиперкоагуляции - воздействие, ускоряющее липидпероксидацию (ЛПО). Здесь гиперкоа-гулемию моделировали введением свинца (его введение ускоряет ЛПО [И.А.Мухачева и др.,1992; А.Ш.Бышевский и др., 2004; R.G.Alborov, 2004], следовательно и рост уровня липидпероксидов, сопровождающийся повышением КП [С.Н.Ельдецова,1990; А.Ю.Рудзевич и др., 2003] преимущественно за счет активации тромбоцитов [С.Л.Галян и др., 2005; В.А.Полякова и др., 2007]. Рисунок 4 демонстрирует результаты опыта, в котором крысам на фоне предварительного обогащении рациона ацетатом свинца вводили ИСПП.

□ АВР ИЗ ТВ ОФГ апдФ 1 РКМФ DD-д О ТкТР

і рП I

Е . І L

Контроль Опыт

Рис. 4. Степень отклонений (в % от величин у контрольных крыс) АВР, ТВ, маркеров НВСК и ТкТР у крыс, получавших 25 дней с рационом ацетат свинца (50 мг/кг ежедневно) под воздействием ИСПП.

Здесь видно, что введение свинца в контроле повысило КП: сократилось АРВ, ТВ и снизился уровень ФГ в крови ( как и на рис. 1-3). Как и при других моделированных нами гиперкоагулемиях вырос уровень всех маркеров НВСК и снизилась ТкТР,

а введение ИСПП все эти сдвиги ограничило. Следовательно, и в этом случае, т.е. при введении прооксиданта (свинца), вызывающего гиперкоагулемию через другие механизмы, выявлены сходные сдвиги: рост коагулопотенциала, ускорение НВСК и снижение ТкТР. Мы разместили в одной системе координат степень отклонения каждого из показателей от контроля, сдвиги которого приняты за нуль.

IABP ITB 1ФГ 1ПДФ

I ЗР-Я

|—;--зкгр

° Линейный (АВР) —Линейный (ТВ) Линейный (ФГ) Линейный (ПДФ)

Рис. 5. Степень отклонения АВР, ТВ, маркеров НВСК и ТкТР у крыс, подвергавшихся наркозу, введению адреналина, кровопотере или введению свинца (в % от показателей у контрольных крыс). В поле рисунка расположены коэффициенты аппроксимации (Я2)

Линейный тренд показателя динамики сдвигов ТкТР в зависимости от степени ги-перкоагулемии отличается самым высоким значением коэффициента аппроксимации - К2 = 0,86 (рис.5).

Вместе с тем сдвиги ТкТР отрицательно ассоциированы с уровнем маркеров НВСК, Я2 которых колеблются в малых пределах и в небольшой мере удалены от единицы - величины, которая отражала бы стопроцентную зависимость ТкТР от увеличения интенсивности НВСК. Так же выглядят и результаты анализа степени сдвигов у крыс, которым после воздействий, вызывавших гиперкоагуляцию, вводили ИСПП (рис. 6).

Таким образом, анализ результатов эксперимента подтверждает, что при изменениях КП введением ИСПП, ограничивающим преимущественно самосборку фибрина (Е.А. Чирятьев 1990, выявляется отрицательная зависимость между сдвигами НВСК и ТкТР.

Следовательно, эта закономерность присуща не только состояниям гемостаза, смоделированным воздействием прокоагулянтов на 1-ю или 2-ю фазы свертывания [А.Ш.Бышевский и др., 2009; Р.Г.Алборов и др., 2009; М.Г.Галушко и др., 2009], но и воздействиями, меняющими скорость неферментативных превращений ФМ - самосборки растворимого фибрина. Причем в этом отношении эффект ИСПП из сапропеля, близок, и даже несколько выше аналогичного эффекта витаминов с анти-оксидантными свойствами, влияющими преимущественно на активность тромбоцитов

125 105 85 65 45

25 5

■15 -35 -55

Рис. 7. Отклонения (в % от величин в контроле) АВР, ТВ, уровня маркеров НВСК и ТкТР под воздействием ИСПП у крыс, получавших 15 дней ДМ с рационом (1,0

г/кг).

Оценив одновременное действие двух факторов приемом М.Диксона и Э.Уэбба, нашли, что эффекты ДМ и ИСПП на все определявшиеся показатели гемостаза потенцированы (величина эффекта отвечает формуле III - i,j2 > (ij + i2) - (ii x i2).

Далее, используя как фактор, вызывающий гипокоагулемию, тиреостатик 6-метидтиоурацил (6-МТУ) - его введение снижает КП за счет развития гипотиреоза [А.Ш.Бышевский, 1965; Р.Г.Алборов, О.Ф.Мысник, 2001; С.Г.Аптекарь, 2003], - нашли, что на фоне 6-МТУ введение ИСПП усугубляет гипокоагулемическиие сдвиги. Так, на рис. 8 видно, что введение крысам 6-МТУ снизило у них коагулопотенциал: удлинились АВР и ТВ, замедлилось НВСК, а ТкТР, напротив, возросла.

135 85 35 -1Б -65

Контроль Опыт

Рис. 8. Степень отклонений под воздействием ИСПП (в % от контроля) АВР, ТВ, маркеров НВСК и ТкТР у крыс, получавших 20 дней с рационом 6-МТУ (300 мг/кг).'

Введение ИСПП на этом фоне усилило все сдвиги примерно в той же мере, как его введение на фоне ДМ. Более того, как и в опытах с ДМ, ИСПП потенцировал действие 6-МТУ на все величины, (исключение - уровень ФГ), что установили приемом,М.Диксона и Э.Уэбба.

Таким образом, ИСПП ограничивает сдвиги, связанные с гиперкоагуляцией, и потенцирует изменения, наблюдаемые под влиянием воздействий, вызывающих гипо-коагулемические сдвиги. Важно и то, что как на фоне гиперкоагуляции, так и на фоне воздействий, снижающих КП, введение ИСПП сопровождается противоположно

равр атв офг опдф □ РКМФ ÖD-д И ТкТР

{ 1 (

Контроль Опыт

□ АВР □ ТВ □ ФГ □ ПДФ В РКМФ □ D-д И ТкТР

¡4. ■

[Е.М.Шаповалова и др., 2007; В.Г.Соловьев, и др., 2007; А.Ш.Бышевский, и др„ 2009].

R2 = 0,82:

0,65: . —S.2 =f 0,81:

— '¿Г °'74' R2 = 0,56 ;

:авр виаштв i i»r i шдф

КЫЩЭРКМФ '• • • "V". I ЧТкТР —— Линейный (АВР)

Линейный (ТВ) Линейный (ФГ) -• —»Линейный (ПДФ) ркмф

- - - Линейный (D-д) — - Линейный (ТкТР)

Рис. 6. Отклонения АВР, ТВ, маркеров НВСК и ТкТР у крыс, подвергавшихся наркозу, введению адреналина, кровопотере или введению свинца с последующим внутривенным введением ИСПП (в % от показателей у интактных крыс). (В поле рисунка расположены значения коэффициентов аппроксимации - R2).

Далее мы изучили эффекты ИСПП, вводившегося при воздействиях, снижающих КП. Гипокоагуляцию моделировали введением двух разных по механизму действия соединений. Одно из них - димефосфон (ДМ) - синтетический продукт со свойствами антиоксиданта - он тормозит ЛПО особенно в тромбоцитах [И.А.Дементьева и др., 1997; Г.А.Сулкарнаева и др., 2004]. Выполняя эксперимент с введением ДМ (1 г/кг - в такой дозе он снижает активность тромбоцитов [М.К.Умутбаева, 2003]) - мы моделировали снижение коашуляционной активности и сопоставили в эффект ИСПП на фоне ДМ и без него. Видно, что введение ДМ снижает КП (удлинение АВР и ТВ), замедляет НВСК (снижен уровень маркеров НВСК), при одновременном росте ТкТР и уровня ФГ. У крыс, которым за 3 ч до отбора проб ввели ИСПП эти сдвиги усилились. Особенно заметно снизился уровень маркеров НВСК и увеличилась ТкТР, а изменения достоверны не только к контролю, но к показателям у крыс, которым на фоне ДМ ввели ИСПП. Следовательно, действие ИСПП усилило эффект ДМ (или ДМ усилил эффект ИСПП?). Графики сдвига интересующих нас величин у этих крыс (рис. 7).

направленными сдвигами НВСК и ТкТР. Их отрицательная и тесная ассоциация подтверждена и с помощью ранговой корреляции по Спирмену - при сопоставлении сдвигов каждого из маркеров НВСК со сдвигами величин ТкТР значения г5 колебались от - 0,78 до - 0,89 по данным, полученным в опытах.

Естественно, представляло интерес рассмотреть экспериментально дозазависи-мость эффекта ИСПП на все изучающиеся показатели в условиях гиперкоагуляции. Принимая во внимание, что использовавшаяся нами в экспериментальных ситуациях доза ( 30 мг ИСПП на кг массы тела) достаточно эффективна, мы для определения дозазависимости, использовали эту дозу и дозы, составляющие 1/3 и 1/6 её часть (линейное изменение дозы). Результаты опытов представлены на рис. 9. Как и в других опытах эффект оценивали как (процент отклонения величин, наблюдаемых под воздействием определенной дозы ИСПП от контрольной величины). На графиках видно, что введение ИСПП в дозах 5, 10 и 30 мг/кг изменяло степень сдвигов АВР и ТВ у крыс, подвергшихся кровопотере: сдвиги показателей уменьшались линейно с повышением дозы. Следовательно, КП снижался пропорционально дозе (коэффициенты аппроксимации трендов (Я2) близки к единице - 0,99 и 0,98 соответственно.

Линейно же ограничивался вызванный кровопотерей прирост уровня всех маркеров НВСК (значения И2 для ПДФ, РКМФ и Б-димеров равны соответственно 0,88, 0,86 и 0,92). Следовательно, с увеличением дозы ИСПП, наряду с линейным снижением КП, также линейно уменьшается и скорость НВСК. В то же время ТкТР линейно (Я2 = 0,92) возрастает при повышении дозы ИСПП.

Анализ взаимосвязи каждого из определявшихся маркеров НВСК с определением г5, выявил следующее: с увеличением дозы ИСПП степень ограничения прироста содержания в плазме ПДФ, РКМФ и Б-димеров находится в обратной отрицательной связи с ТкТР. Связь эта достаточно тесная, особенно в паре Б-димеры-ТкТР - величина г5 при сопоставлении сдвигов этих двух величин равна 0,99, в то время как в других парах (ПДФ и ТкТР, РКМФ и ТкТР) она составила 0,88 и 0,91 соответственно.

Эти данные подкрепляют защищаемое в течение трёх-четырёх последних лет положение об отрицательной связи между интенсивностью НВСК и ТкТР [А.БЬ. ВузЬеУБку е.а,, 2008; А.Ш.Бышевский и др., 2011; М.Г.Галушко, С.Л.Галян, 2011 М.Г.Г'алушко, 2011].

Рис. 9. Зависимость степени и направления сдвигов (в % от показателей у крыс, которым ИСПП не вводили) АВР, ТВ, уровня маркеров НВСК и ТкТР у крыс при внутривенном введении разных доз ИСПП, осуществленном на фоне гиперкоагуле-мии, вызванной предварительной кровопотерей, составляющей ~ 25% ОЦК.

Далее, определив сдвиги тех же показателей через 0,5, 1 и 2 ч после введения эф-фекивной дозы ИСПП (30 мг/кг) интактным животным, мы получили возможность оценить динамику изменения эффекта ИСПП за время, прошедшее после его внутривенного введения. Как и ранее, графически анализировали интенсивные величины, т.е. степень отклонения цифровых выражений отдельного показателя от его значения у контрольных крыс, получавших 0,85% раствор NaCl (рис. 10).

I м1АВР

■ ■ ■ IТД

I , _1ФГ I 1ПД» СНГПЗ РКМФ I'.........~1В-д

— П Ть-ТР

------Линейный (АВР)

—Линейный {ТВ) ■ ■ - Линейный (ФГ)

— " Линейный (ПДФ)

— " Линейный (РКМФ) ■ ——Линейный (Р-ц)

—:-Линейный (ТкТР)

-35

Рис. 10. Сдвиги и направленность изменений АВР, ТВ, уровня маркеров НВСК и ТкТР (в % от контроля, где крысам вводили 085% ЫаС1) через 0,5, 1 и 2 ч у крыс при в/в введении ИСПП на фоне здоровья.

На рисунке видно, что характер трендов, отражающих зависимость степени сдвигов от времени, прошедшем после введения ИСПП, свидетельствует об их увеличении. Особенно удлинились АВР и ТВ. В значительной мере с увеличением интервала между инъекцией и отбором проб росла степень снижения плазменного уровня маркеров НВСК и повышалась ТкТР (все это по отношению к контрольной группе). Видно и то, что в интервале между 0,5 и 1,0 ч после введения ИСПП прирост эффектов выше, чем в интервале между двумя и тремя часами, где прирост эффекта ИСПП не так велик. Видно, что и после 6 ч по введении ИСПП гипокоагуля-ция усугубилась, но в меньшей мере, чем на более ранних этапах. Так как в способности организма противостоять угрозе тромбообразования особенно важна роль именно ТкТР мы провели дополнительный опыт, оценивая ТкТР через 3, 4, 6 и 8 ч по введении ИСПП. Оказалось (рис. 11), что с 8-го часа после введения ИСПП величина ТкТР снижается и постепенно кривая зависимости от времени приближается к абсциссе, уменьшаясь до сравнительно небольших величин. Через 13 ч по введении ИСПП величины ТкТР не отличается от контроля.

Динамику изменения НВСК и ТкТР при введении экстракта сапропеля мы исследовали, вводя ИСПП здоровым животным, не подвергавшимся каким-либо дополнительным воздействиям, и сопоставляли результаты с данными контрольных групп, где крысам вводили равный объем 0,85% р-ра ЫаС1. Из-за необходимости повторного отбора проб крови в этом опыте ограничились определением только ТкТР и одного из маркеров НВСК - уровня Б-димеров. Степень снижения величины всех основных маркеров НВСК по сути равноценна.

0,5 1 2 3 4 6 8 9 10 11 12 13

Рис. 11. График зависимости влияния ИСПП на ТкТР от времени после введения, увеличенного до 12 ч. Абсцисса - время после введения, ордината - степень изменения ТкТР в процентах относительно к контрольному значению.

Как следует из графика рис. 12, при повторном введении ИСПП лишь достоверно возросла (относительно контроля) степень сдвига уровня О-димеров. При введениях ИСПП в 3-й, 4-й и 5-й раз сдвиги нарастали в виде тенденции, не подтверждающейся статистически. Малая величина коэффициента аппроксимации тренда (0,69) свидетельствует о слабо выраженной линейности этого небольшого прироста. Обсуждаемый эксперимент продлили, осуществляя введение ИСПП каждые 12 часов и отбирая пробы после 8, 12 и 16-й инъекций ингибитора. Результаты эксперимента (рис. 13) свидетельствуют, что и после большего числа инъекций степень сдвигов уровня О-димеров и ТкТР была несколько большей, чем после первой инъекции, а при последующих инъекциях сдвиги отличалась от найденных после первой из них не более, чем на 2-4% (р > 0,05).

О-д и- ИкТР — —Линейный (ТкТР) Линейный (О-д)

= 0,91

Кг = 0£2----' ' I..___ I ' I. ' |

Введение: I II III IV V

Рис. 12. Изменения уровня Б-димеров (Б-д) и ТкТР (в % от контроля) при повторном (пятикратном) введении ИСПП (отбор проб везде через 6 ч после введения). Абсцисса - порядковые номера повторных введений ИСПП, ордината - степень отклонения от контроля, в котором крысам вводили 0,85% р-р ИаС!.

Можно заметить, что графики рисунков 12 и 13 почти одинаковы и это позволяет считать, что ИСПП при введении с интервалом в 12 ч вызывает эффект на НВСК и ТкТР, найденный после 1-го введения

В2 = 0,95

66 45 • 26 б • Ш щ ш

15 • 35 ■ _С¿ р2 = п яа

Введение: І VIII XII XVI

I I

Рис. 13. Сдвиги уровня D-димеров (D-д) и ТкТР (в % от контроля) при 8-ми, 12-ти- и 16-кратном введении ИСПП (отбор проб - через 6 ч). Абсцисса - порядковые номера повторных введений, ордината - отклонения от контроля (вводили 0,85% р-р NaCl).

Кроме того, статистически недостоверная, но закономерно повторяющаяся тенденция увеличения эффекта, начиная с 3-го введения ИСПП, указывает на возможность сдерживать повторными инъекциями интенсивность НВСК на постоянно сниженном уровне, и сохранять высокое значение ТкТР по крайней мере в течение недели. Заметим, что здесь, как и в ранее рассмотренных ситуациях, интенсивность НВСК (по уровню D-димеров) и величина ТкТР обнаружили достаточно тесную отрицательную корреляцию - величина rs оказалось равной - 0,89.

Мы сопоставили действия ИСПП на ТкТР, устанавливаемую использованным нами неинвазивным способом, с результатами инвазивного способа её оценки, который не может применяться при обследовании человека (вводить даже низкие дозы тромбина внутривенно (вообще парентерально) недопустимо в связи с его способно-j стью уже в следовых количествах запускать механизмы аутоактивации тромбинооб-разования [Б.А.Кудряшов, 1975]. В этом опыте речь шла об оценке влияния ИСІТП на частоту выживания крыс, которым внутривенно вводили тромбин в токсичных дозах, вызывающих гибель животных вследствие развивающихся тромбозов [Б.А. Кудряшов, 1960; Л.В Михайлова, 1970; R.G.Alborov, 2004]. Отбор крыс здесь был более строгим: в опыт брали крыс, мало разнящихся по массе тела (175±6,7 г), а перед экспериментом две недели содержали в абсолютно одинаковых условиях (одно помещение, одинаково освещенные клетки, одинаковое питание и по-парное разделении на группы непосредственно перед опытами). Животных распределили на 3 группы: контроль (вводили 0,85% р-р NaCl, 0,5 мл/100 г), опыт 1-й (вводили тот же ' объем ИСПП (30 мг/кг в 0,85% р-ре NaCl, 0,5 мл/100 г), опыт 2-й (воздействия на і животных те же, что в опыте 1-м). Через 3 и 6 ч после инъекции ИСПП (т.е. в момент, когда его эффект максимален, с крысами опыта 1-го провели тромбиновую пробу (ввели внутривенно раствор тромбина активностью 17 с DL 50%) и учитывали число выживших в течение 24 ч. У животных опыта 2-го брали пробу крови (также через 3 и 6 ч по введении ИСПП), и определяли ТкТР неинвазивным приемом. Для

лучшего восприятия и анализа результатов приводим их графически (рис. 14). При обращении к рисунку, прежде всего, видим, что оба приема оценки ТкТР выявили её рост и через 3 и через 6 ч. При обоих приёмах величины ТкТР выше контроля и через 3 ч и через 6 ч после введения ИСГТП. Разница между результатами невелика: при инвазивном методе после 6 ч выживаемость повысилась с 45 до 51% (р < 0,05), по результатам уровень Э-димеров с 163 до 179% (р < 0,05). Это сравнительно небольшое увеличение ТкТР между третьим и четвертым часом после введения ИСПП согласуется с данными, представленными на рис. 12, согласно которым через 6 ч после введения ИСПП выявляется максимальное ограничение общей свертывающей активности крови (позднее эффект ингибитора имеет лишь статистически непод-тверждаемую тенденцию к усилению).

179%

1,5 1 0,5 __ ГІ

через 3 ч через 6 ч

Рис. 14. Толерантность к тромбину, установленная инвазивным (светлые столбцы) и неинвазивным (темные столбцы) при введении ИСПП. При инвазивном способе размерность ТкТР - процент выживших крыс, при неинвазивном - процент от величины ТкТР у интактных крыс.

Таким образом, неинвазивный метод определения ТкТР выявляет ту же направленность её изменений, как и инвазивный способ. Различие состоит лишь в том, что по данным инвазивного способа (по частоте выживания животных после введения тромбина в дозе БЬ^) ниже, чем по результатам оценки ТкТР неинвазивным приемом, основанном на оценке НВСК по уровню её маркеров (даже одного из них - В-димеров). Впрочем, этот феномен отмечен авторами неинвазивного способа в описании, прилагаемом к патенту [А.Ш.Бышевский и др., 2000]. Отметим, что один из авторов метода определения ТкТР [Р.Г.Алборов, 2006], использованного нами, также находил примерно такие же различия между результатами неинвазивного и инвазивного способов оценки ТкТР. Связано это, с нашей точки зрения, с тем, что частоту выживания крыс при внутривенном введении токсичных доз тромбина, учитывают в течение 24 ч. За это время крысы гибнут не только из-за низкой ТкТР, но в зависимости от тромбообразования в сосудистом русле. Другими словами - выживаемость зависит не только от антикоагулятного потенциала у особи, но и от индивидуальных особенностей кровоснабжения различных регионов.

Заключение. Источником ИСПП, взятого в одном из многих озер юга Тюменского региона, послужил продукт, включающий две фракции олигопептидов с противо-свертывающими свойствами, реализующимися главным образом на неферментатив-

ном этапе коагуляцнонных превращений ФГ. Исследованная нами суммарная фракция из экстракта сапропеля по способности вызывать гипокоагуляцию строго соответствуют данным, описанным Е.А.Чирятьев и др., 1998, 2008. Это, а также ранее установленная малая токсичность ИСПП при эффективных дозах и разных путях введения, позволили реализовать задачи, предусмотренные целью нашей работы. Основная из них - выяснить, как изменяются показатели состояния гемостаза (НВСК и ТкТР), позволяющие оценить готовность организма к адекватному ответу на воздействия, вызывающие гиперкоагуляцию, следовательно, и повышающие риск тромбо-образования. Началу исследований предшествовало изучение эффекта ИСПП в широком диапазоне доз (5, 10, 30, 50 мг/кг) на состояние КП в течение 1-36 часов после инъекции. Результаты этой части работы позволили осуществить выбор испытуемой в дальнейшем дозы и интервала между её введением и отбором проб крови для исследований.

При реализации следующих задач выяснилось, что ИСПП при внутривенном введении снижает общую свертывающую активность крови, проявляющуюся существенным удлинением АВР и ТВ, снижением уровня продуктов коагуляционного превращения ФГ, растворимых комплексов мономерного фибрина и D-димеров. Так как все эти продукты - следствие взаимодействия тромбина со своим специфическим субстратом (ФГ) убыль их уровня в плазме крови свидетельствует о замедлении непрерывно протекающего в кровотоке коагуляционного превращения ФГ, т.е. о замедлении НВСК. При выполнении очередной задачи выяснилось, что и в условиях гиперкоагулемии введение ИСПП уменьшает плазменный уровень тех же продуктов, т.е. замедляет ускоренное НВСК. Важно и то, что ИСПП вызывает этот эффект независимо от причины, обусловившей гиперкоагулемию. Введение ИСПП крысам с ги-покоагулемией, спровоцированной факторами, отличающимися по механизму действия на гемостаз, усугубляет сдвиги - сниженный у этих животных уровень маркеров НВСК, падает в ещё большей степени.

Эффекты ИСПП на гемостаз характеризуются дозазависимостью в физиологических условиях и на фоне гиперкоагуляции - ограничивают ускорение НВСК, гиперкоагуляции - усугубляют торможение процесса. Эффекты ИСПП отличаются по выраженности в зависимости от времени, прошедшего после введения продукта - в первые часы наблюдается нарастание эффекта, затем постепенное ослабление изменений. Во всех изученных ситуациях повышению уровня маркеров активации свертывания сопутствует снижение ТкТР, а в ситуациях, которые сопровождаются снижением уровня тех же маркеров, толерантность к тромбину возрастает.

Оказалось, что повторное введение ИСПП с интервалом в 12 ч позволяет поддерживать высокую тромбинорезистентность, хотя заметного роста эффекта ИСПП при повторном введении не происходит.

Полученные результаты, в целом, обосновывают целесообразность дальнейшего

доклинического исследования этих олигопептидов и сопропеля с целью создания на их базе нового эффективного и относительно доступного препарата - антикоагулянта, ограничивающего преимущественно неферментативный этап фибринообразова-ния.

ВЫВОДЫ

1. Сочетание двух фракций из экстракта сапропеля озера Большой Тараскуль, включающую два различающихся по молекулярной массе олигопептида (ИСПП), при введении в кровоток здоровым животным дозазависимо снижает свертывающую активность крови на протяжение 6 -24 часов после однократной инъекции с максимумом эффекта через 3-6 ч после введения.

2. Введение в кровоток ИСПП ограничивает рост КП, провоцируемого у животных разными по характеру воздействиями - эфирным наркозом, введением адреналина, кровопотерей, физической нагрузкой, ускорением ЛПО.

3.Введение в кровоток ИСПП усугубляет снижение коагуляционного потенциала.

4. Эффекты ИСПП дозазависимы, нарастают в первые часы после однократного введения и постепенно снижаясь, сохраняются в течение 12 ч (р <0,05).

5. При повторных введениях ИСПП с интервалом в 12 ч эффекты на гемостаз воспроизводятся, превышая вызванный первой инъекцией, не более, чем на 10-12% (разница между эффектом 1-го и 16-го введений достоверна - р<0,05).

6. Во всех ситуациях, сопровождающихся экспериментально спровоцированным сниже-нием или ростом коагуляционного, введение ИСПП ограничивает интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и увеличивает ТкТР.

7. Толерантность к тромбину, тесно и отрицательно ассоциирована с интенсивностью непрерывного внутрисосудистого свертывания крови; теснота связи не зависит от степени изменения коагулопотенциала (значение rs при разных величинах коагу-лопотенциала колеблется в небольших пределах от -0,83 до -0,91).

8. Как ингибитор неферментативной полимеризации фибрин-мономера, выделяемый из доступного и недорогого сырья, ИСПП, - перспективный объект дальнейших исследований.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Созонюк А.Д. Защитное действие экстракта сапропеля при экспериментальной тромбопластинемии /Созонюк А.Д., Ортенберг Э.А., Шаповалов П.Я., Русакова O.A., Чирятьев Е.А.// Медицинская наука и образование Урала. - 2009. - 4(60). - С.46-47.

2. Созонюк А.Д., Пептидные ингибиторы свертывания крови: биохимический и фармакологический аспекты /Калинин Е.П., Созонюк А.Д., Ортенберг Э.А., Шаповалов П.Я., Русакова O.A., Чирятьев Е.А.//Медицинская наука и образование Урала-20Ю.-2(62).-С.127-133.

3. Созонюк А.Д. Ингибиторы самосборки фибрина растительного происхождения.

/Бышевский А.Ш., Сулкарнаева Г.А., Чирятьев E.A., и др.//Медицинская наука и образование Урала.-2012.-С.11-15

4. Созонюк А.Д., Влияние антикоагулянтной фракции сапропеля на биоэлектрическую активность миокарда лабораторных животных /Созонюк А.Д., Ортенберг Э.А., Шаповалов П.Я., Русакова O.A., Чирятьев Е.А.// «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» Российская конф., посвященная 80-летию со для рождения Р.И. Лифшица, Челябинск. 5-8 октября 2009г. С.158-160.

5. Созонюк А.Д. Токсикологическая характеристика экстракта сапропеля при его субхроническом введении /Созонюк А .Д., Ортенберг Э.А., Шаповалов П.Я., Русакова O.A., Чирятьев Е.А.//«Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» Российская конф., посвященная 80-летию со для рождения Р.И. Лифшица, Челябинск. 5-8 октября 2009г. С.253-255.

6. Созонюк А.Д., Влияние экстракта сапропеля на некоторые жизненные функции лабораторных животных /Созанюк А.Д.// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. Тр. - Пятигорск. - 2010. -Вып.65. -С.507.

7. Созонюк А.Д. Природные Антикоагулянты из озерных иловых отложений /Чирятьев Е.А., Шаповалов П.Я. // Материалы 45-й Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых. - Тюмень. - 2011. - С.39-40.

8. Созонюк А.Д., Прокоагулянты Растительного Происхождения. Выделение и природа /Созонюк А.Д., Кашеев В.В.// Медицинская биохимия и клиническая лабораторная диагностика в аспекте модернизации системы научных исследований: материалы Всероссийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине. - 0мск.-2011. - С. 272-273.

Принятые сокращения

АВР Активированное время рекальцификации

ИС Ингибитор самосборки

ИСПП Ингибитор самосборки пептидной природы

ЛПО Липидпероксидация

нвск Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови

оцк Объем циркулирующей крови

ПДФ Продукты деградации фибрина

ТВ Тромбиновое время

ТкТР Толерантность к тромбину

ФГ Фибриноген

КП Коагуляционный потенцеиал

КА Коагуляционная активность

Созонюк Александр Данилович

(экспериментальное исследование) 03.01.04- биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Лицензия № 0177 от 10.06.96 г. Подписано к печати 18.04.2012 г. Отпечатано на ризографе с готового оригинал-макета, представленного авторами. Формат 60x84 'Аб- Усл.-печ. л. 1,5 Уч.-изд. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ №21.

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, ГБОУ ВПО БГМУ Минздравсоцразвития России

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Созонюк, Александр Данилович

1 .ВВЕДЕНИЕ.

2. НЕФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ЭТАП СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ 10 (Обзор литературы).

2.1.Фибриноге н.

2.2.Ингибиторы и активаторы превращений фибриногена.

3.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4.1. Получение коагулоактивной фракции сапропеля, её характеристика

4.2. Влияние экстракта из сапропеля, содержащего обе формы ингибитора самосборки пептидной природы, на общую свертывающую активность крови, на НВСК и ТкТР.

4.3. Влияние ИСПП из сапропеля на НВСК и ТкТР при состояниях, сопровождающихся ростом свертывающей активности крови.

4.4. Влияние ИСПП на НВСК и ТкТР в ситуациях, сопровождающихся снижением свертывающей активности крови.

4.4.1. Дозазависимость эффекта ИСПП на общую свертывающую активность крови, НВСК и ТкТР в условиях гиперкоагулемии, вызванной кровопотерей.

4.4.2. Влияние возрастающих доз ИСПП на общую свертывающую активность крови, НВСК и ТкТР на фоне введения

6-МТУ, как фактора, вызывающего гипокоагуляцию.

4.5. Динамика изменения АВР, ТВ, уровня маркеров НВСК и ТкТР в разные сроки после введения ИСПП интактным животным

4.6. Динамика изменения НВСК и ТкТР при повторном введении ИСПП.

4.7. Эффекты ИСПП на толерантность к тромбину, оцениваемую инвазивным и неинвазимным методами.

5. Обсуждение результатов и заключение

6. ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние фракций сапропеля с антиоксидантными свойствами на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толернтность к тромбину (экспериментальное исследование)"

Актуальность проблемы определена следующими основными положениями:

1. К настоящему времени устоялось представление о гемостазе, как о системе жизнеобеспечения высокоразвитых организмов: кровь - ткань, которая находится в жидком агрегатном состоянии, способна предупреждать крово-потери при повреждении сосудистого русла и ограничивать генерализацию свертывания за необходимые пределы [И.Н.Бокарев, 2000 а, б, в, 2002; Д.М.Зубаиров, 1961, 1976, 2000; Д.М.Зубаиров и др., 1989, 1999; Я.Р.А^аа1, 1982, 1992; Е.А. Ше, 1999].

2.Нарушения системы гемостаза ведут к развитию коагулопататий, ише-мических изменений в зонах, где чаще развиваются тромбозы. Эти нарушения - промежуточные звенья патогенеза заболеваний, обуславливаемых повреждением любого из компонентов системы гемостаза [З.С.Баркаган, 1998; Д.М.Зубаиров, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 2004; Н.А.Воробьева, 2005; В.Ф.Киричук и др., 2005; 8.Т.Ьаго1а е.а., 2003].

3. Независимо от причин, обусловивших тромботические осложнения, одним из средств их ограничения являются противосвертывающие вещества -их введение угнетает синтез прокоагулянтов (антибиотики, цитостатики и др,) или ограничивает пострибосомальное формирование прокоагулянтов (антивитамины К, нарушения пищеварения, заболевания печени и желчевы-водящих путей).

4. Антикоагулянты непрямого действия используются для инициации медленно развивающейся устойчивой гипокоагулемии. Однако медицинская практика нуждается часто и в быстром эффекте, создаваемом антикоагулянтами прямого действия. Среди них часто используют гепарин, эффект которого кратковременен (Б.А.Кудряшов, 1960, 196). Гепарин отличается свойством вызывать агрегацию тромбоцитов и тромбоцитопению (.ГАшеН, О.Оеу-кт, 1980; 1.У.Вог§ е.а., 1986); известны и явления гепаринорезистентности (З.С.Баркаган и др., 1982; 1988) и эффект бумеранга [Н.Могёоп е.а., 1981].

5. Среди антикоагулянтов прямого действия известны гирудин и гирудиноиды (Е.К.Чазов, К.М.Лакин, 1977; И.П.Баскова, 1986, 1991; И.П.Баскова и др., 1984), антитромбины (F.Markwardt, 1985; B.Kaiser, F.Markwardt, 1988). Ингибиторы агрегации тромбоцитов изменяют и другие параметры в организме (E.A.Jaffe, B.B.Weksler, 1979; V.Fuster, I-K.Jang, 1994).

Анализ литературы последних лет об антикоагулянтах, обратил наше внимание на экстракт из сапропелевых грязей - из него выделены ингибиторы гемокоагуляции, влияющие на плазменный и тромбоцитарный гемостаз (О.А.Русакова, 1993; И.Э.Полле и др., 2001). Показано, что в сапропеле (сырье доступном и недорогом) содержатся эффекторы свертывания крови, которые могут быть выделены как индивидуальные беспримесные продукты. Торможение гемокоагуляции этими эффекторами реализуется преимущественно на уровне коагуляционных превращений фибриногена (ФГ) и инги-бируют агрегацию тромбоцитов (АДФ- и адреналининдуцируемую). Особенно важно с нашей точки зрения то, что эти эффекторы при внутримышечном и интраперитонеальном введении лабораторным животным малотоксичны, и отличаются широким терапевтическим диапазоном действия [Е.А. Чи-рятьев и др., 2008; Э.А.Ортенберг и др., 2008; А.Е.Бушин и др., 2008 а, б, в].

С позиций общебиологических и физиологических, как установлено в последние десятилетия [А.Ш.Бышевский, 1984; А.Ш.Бышевский и др., 2003; А.И.Бродер, 2004; Г.А. Сулкарнаева, 2004], особый интерес представляет характер влияния антикоагулянтов на скорость непрерывного внутрисосуди-стого свертывания крови (НВСК) - процесс медленно протекающий, а будучи ускоренным разнообразными воздействиями, перерастает в диссемениро-ванное внутрисосудистое свертывание крови (ДВСК), сопровождающее многие патологические состояния [З.С.Баркаган, 1998; И.Н.Бокарев, 2000в, 2002]. Вместе с тем влияние этих эффекторов со свойствами антикоагулянтов, перспективных с позиций медицинской практики, на НВСК и на способность организма противостоять ускоренному образованию тромбина - ключевого энзима в гемостазе. Именно с его появлением инициируется (через накопление активных форм фибриногена) неферментативный этап образования нестабильного или растворимого фибрина (фибрин8). Тромбин же через активацию ф.ХШа обеспечивает переход фибрина5 в фибрин} [Д.М.Зубаиров, 2000; А.С.Шитикова, 2000; Л.П.Папаян, 2003].

Интерес к оценке интенсивности НВСК, протекающего в условиях здоровья с малой скоростью [Д.М.Зубаиров, 1976, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 1984, 2003а, в], обусловлен тем, что при экстремальных воздействиях изменения уровня маркеров НВСК позволяют отличать наклонность к гиперкоагуляции от наклонности к гипокоагуляции [А.П.Момот, 1990; И.Н.Бокарев, 2000 а, б, в, 2002; М.К.Умутбаева, 2003, 2005]. Кроме того, показано, как соотносятся уровень маркеров НВСК и толерантность к тромбину (ТкТР), что позволяет оценивать её неинвазивным приёмом. Это важно потому, что все ранее известные способы оценки ТкТР требуют парентерального введения этого энзима, что в клинике, естественно, недопустимо.

Поставив перед собой задачу (в качестве отдаленной перспективы) получить данные о возможности использовать антикоагулянты из сапропеля в коррекции гиперкоагулемических состояний (т.е. выяснить их влияние на устойчивость организма к воздействиям, вызывающим гипертромбинемию), мы сформулировали цель представляемой работы.

3. Изучить влияние фракций экстракта сапропеля на свертывающую активность крови, НВСК и ТкТР, используя модели, характеризующиеся гипер- и гипокоагулемическими сдвигами.

4. Изучить изменения НВСК и ТкТР при введении экстракта сапропеля у животных. 5. В эксперименте сравнить влияние эффекторов из сапропеля на толерантность к тромбину.

Научная новизна

1 .Установлено, что сочетание, двух фракций из экстракта сапропеля, содержащих олигопептиды с противосвертывающей активностью, при внутривенном однократном введении дозазависимо снижает на 24 ч коагулопотен-циал (замедление НВСК и рост ТкТР).

2.Впервые найдено, что эти эффекты дозазависимы и, прогрессируя в первые часы после однократного введения, постепенно ослабляются, сохраняясь достоверно выраженными в течение 12 часов (при ошибки достоверности р < 0.05).

3.Обнаружено, что снижение коагулопотенциала олигопептидами более выражено при гиперкоагуляции, спровоцированной разными по природе и механизмам воздействиями (глубокий эфирный наркоз, экзогенная адренали-немия, кровопотеря, интенсивная физическая нагрузка, введение проокси-дантов), а также усугубляет гипокоагулемию, вызываемую угнетением ли-пидпероксидации (ЛПО) факторами, объединенными лишь тем, что они вызывают снижение уровня липидпероксидов, скорости индуцированной оксидации и удлиняют период индукции (гипотиреоз, введение разных соединений с антиоксидантными свойствами).

4.Впервые установлено, что при повторных введениях этих олигопептидов (интервал - 12 ч) их эффекты на гемостаз выше вызванных первой инъекцией на 10-12% (при ошибки достоверности р < 0.05).

5.Впервые найдено, что при разнообразных по этиологии гипер- и гипокоа-гулемиях, введение исследуемых олигопептидов снижает скорость НВСК и повышает ТкТР.

6.Впервые установлено, что при их введении ТкТР, отражающая готовность системы гемостаза к ответу на изменения скорости тромбиногенеза, тесно отрицательно ассоциирована с интенсивностью НВСК, и что теснота этой связи не зависит от степени изменения коагулопотенциала (значения rs при изменениях коагулопотенциала колеблется от-0,83 до -0,91). Это подтверждает возможность использования неинвазивного метода оценки ТкТР в изучении регуляции неферментативного этапа фибринообразования (можно использовать его и при изучении ингибиторов самосборки фибрина).

7.В целом, показано, что исследуемые олигопептиды из сапропеля - весьма доступного сырья, - перспективный объект углубленных исследований, по завершении которых можно обращаться в Фармкомитет за разрешением испытаний его как антикоагулянта, ограничивающего преимущественно неферментативный этап фибринообразования.

Практическая ценность Апробирован способ получения суммы антикоагулянтов, действующих на уровне неферментативного этапа свертывания крови, из недорогого сырья, запасы которого практически неограничены. Уточнены механизмы действия суммы исследуемых олигопептидов как антикоагулянта. Учитывая, что эти эффекторы ограничивают плазменные и тромбоцитарные компоненты гемостаза in vivo и in vitro, и не обладают острой и хронической токсичностью в эксперименте, как показано ранее [Е.А.Чирятьев и др., 2000; А.Е.Бушин и др., 2008 а, б, в], следует расширить их углубленное изучение, в том числе их токсикологический аспект.

Полученные данные могут использовать научные учреждения, изучающие молекулярные механизмы регуляции неферментативного этапа свертывания крови.

Основные положения, вынесенные на защиту

1. Сумма двух фракций из экстракта сапропеля, включающих олигопептиды с противосвертывающей активностью, при внутривенном однократном введении дозазависимо снижает на 24 ч интенсивность НВСК, ограничивая скорость тромбиногенеза, что сопровождается увеличением способности организма адекватно реагировать на гипертромбинемию - т.е. ростом ТкТР.

3. Снижение коагулопотенциала при введении этих олигопептидов заметнее на фоне гиперкоагуляции, вызванной разными по природе и механизмам воздействиями (глубокий эфирный наркоз, экзогенная адреналинемия, кровопо-теря, интенсивная физическая нагрузка, введение прооксидантов). На фоне гипокоагулемии, вызванной угнетением ЛПО (гипотиреоз, введение разных соединений с антиоксидантными свойствами), олигопептиды снижают уровень липидпероксидов, скорость индуцированной оксидации и удлиняют период индукции.

4. При повторных введениях этих олигопептидов (интервал 12 ч) их эффекты на гемостаз воспроизводятся, превышая вызванные 1-ф инъекцией не более, чем на 10-12% (при ошибки достоверности р < 0.05).

5. При экспериментальных ситуациях (разных по этиологии гипо- или ги-перкоагулемиях) введение исследуемых олигопептидов из сапропеля замедляет НВСК и повышает ТкТР, тесно и отрицательно ассоциирующую с НВСК - теснота связи не зависит от степени изменения коагулопотенциала.

6. Неинвазивный метод определения ТкТР может использоваться при изучении регуляции неферментативного этапа фибринообразования. Апробация и публикации. Материалы работы опубликованы в журналах: «Медицинская наука и образование Урала». Основные материалы работы обсуждены на Всероссийских и международных конференциях: «На 45-й Всероссийской научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых - Тюмень, - 2011», «Актуальные проблемы теоретической, эксперементальной, клинической медицины и фармации», «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукцмии - Пятигорск, -2010», «На Всеросийской научно-практической конференции биохимиков и специалистов по лабораторной медицине - Омск, - 2011», в материалах научной конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии», Челябинск. - 2009.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 статей, из них 3 в журналах рекомендованных ВАК РФ для размещения материалов кандидатских диссертаций, 5 статей на Всероссийских конференциях с международным участием.

Внедрение в практику. Совместно с кафедрой биологической химии, фармакогнозии с курсом ботаники и кафедры гигиены с основами экологии ТюмГМА разработаны и внедрены для обучения студентов методические рекомендации, оформленные актами «Влияние фракции сапропеля с антиокси-дантной активностью на некоторые жизненные функции лабораторных животных (лабораторное исследование)».

Объем и структура работы. Материалы исследования, включая указатель литературы, изложены на 133 страницах машинописного текста. В работе содержатся 21 рисунок и 15 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (представленным 159 отечественными и 74 зарубежными авторами), главы (содержащей 5 подразделов), в которой изложены результаты собственных исследований, заключения и выводов.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Созонюк, Александр Данилович

выводы

1. Сочетание двух фракций из экстракта сапропеля озера Большой Тараскуль, включающую два различающихся по молекулярной массе олигопептида (ИСПП), при введении в кровоток здоровым животным дозозависимо снижает свертывающую активность крови на протяжение 6 -24 часов после однократной инъекции с максимумом эффекта через 3-6 ч после введения.

3.Введение в кровоток ИСПП усугубляет снижение коагуляционного потенциала. Эффекты ИСПП дозазависимы, нарастают в первые часы после однократного введения и постепенно снижаясь, сохраняются в течение 12 ч (при ошибке достоверности р < 0.05).

4. При повторных введениях ИСПП с интервалом в 12 ч эффекты на гемостаз воспроизводятся, превышая вызванный первой инъекцией, не более, чем на 24% (разница между эффектом 1-го и 16-го введений достоверна - при ошибке достоверности р < 0.05).

5. Во всех ситуациях, сопровождающихся экспериментально спровоцированным снижением или ростом коагуляционного, введение ИСПП ограничивает интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и увеличивает ТкТР.

6. Толерантность к тромбину, тесно и отрицательно ассоциирована с интенсивностью непрерывного внутрисосудистого свертывания крови; теснота связи не зависит от степени повышения коагулопотенциала (значение г5 при разных величинах коагулопотенциала колеблется в небольших пределах от -0,83 до -0,91).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Созонюк, Александр Данилович, Уфа

1. Алборов Р.Г. Витамин С (аскорбиновая кислота) и гемостаз / Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, В.В.Кондаков и др. // Медицинская наука и образование Урала. 20096. - 2/58. - С.143-146.

2. Алборов Р.Г. Гемостаз и перекисное окисление липидов при глубоком гипотиреозе, вызванном введением 6-метилтиуорацила (6-МТУ) / Р.Г.Алборов, О.Ф.Мысник // Научный вестник ТГМА. 2000. - 3. - С. 87-88.

3. Алборов Р.Г. Зависимость толерантности к тромбину от взаимодействия тромбин-фибриноген / Р.Г.Алборов //Аллергология и иммунология. -2004. т. 5.-3.-С. 500-501.

4. Алборов Р.Г. Клетки крови фактор связи между липопероксидацией и взаимодействием тромбин-фибриноген / Р.Г.Алборов // Экология человека.-2005,- 1.- С. 13-16.

5. Алборов Р.Г. Маркеры непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину при гипертромбинемии / Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, В.В.Кондаков и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2009а. - 2/58. - С.49-51

6. Алборов Р.Г. Роль клеток крови в связи между толерантностью к тромбину, содержанием в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген и липидпероксидацией: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Тюмень, 2006, 42 с.

7. Алборов Р.Г. Связь липидпероксидации и ВТФ в условиях эксперимента Глава в монографии. «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация». Москва: Медицина 2006. - 95 с 48-53

8. Андреенко Г. В. Антитромбин III и его роль в клинической патологии / Г. В.Андреенко, Л. Р.Полянцева, Л. В.Подирольская // Тер. Архив -1980. -2. С. 141-145.

9. Аптекарь И. А. Тромбоцитарное звено и постоянное внутрисосудистое свертывание крови при активации и угнетении липопероксидации: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Тюмень, 2003. 22 с.

10. Ю.Балуда В.П Влияние болевого раздражения на свертывание крови / В.П Балуда // Сб. Патол. физиол. и эксп. терапия. Куйбышев, 1951. - 1. -С. 41.

11. Балуда В.П. Влияние болевого раздражения на функциональное состояние свертывающей системы крови / Дисс. . к.м.н. Томск, 1958. 211 с.

12. Балуда В.П. Система гемостаза и гомеостаз / В.П.Балуда // В кн. Гомео-стаз. -М.: Медицина. 1981. - С. 461-490.

13. Балуда В.П. Суточный ритм колебаний показателей свертывающей системы крови у здоровых лиц / В.П.Балуда, В.А.Исабаева, И.А.Пономарева, А.С.Адамчик // Фрунзе: Илим. 1978. - 197 с

14. Балуда В.П., Балуда М.В., Деянов И.И., Тлепшуков И.К. Физиология системы гемостаза. М.: 1995. 243 с.

15. Балуда В.П., Баркаган З.С., Гольдберг Е.Д. и др. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. Томск. - 1980. - 310 с.

16. Баркаган З.С. Введение в клиническую гемостазиологию / З.С. Баркаган // М. :Ньюдиамед-АО. 1998. - 45 с.

17. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы / З.С.Баркаган М.: Медицина. 1988. - 528 с.

18. Баркаган З.С., Момот А.П. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза. Барнаул, 1998. С.83-84.

19. Баскова И.П. Биологически активные вещества, продуцируемые медицинской пиявкой (Н.т.) и механизмы их действия: Автореф. дисс. . докт. биол. наук. М., 1986. - 46 с.

20. Баскова И.П. Механизмы регуляции гемостаза и фибринолиза секретом слюнных желез медицинской пиявки. Биохимия животных и человека: Респуб. межведомственный, сб. науч. трудов /А.Н.Украины, 1991. -С. 28-39.

21. Баскова И.П. Секрет слюнных желез медицинской пиявки / И.П.Баскова, Ф.Миссельвид, Г.И.Никонов и др.// Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 1984. Т. 97, № 6. - С. 696-697.

22. Белицер В. А. Определение продуктов расщепления фибриногена и фибрина по их противосвертывающему действию / В. А. Белицер, Т. В. Ва- рецкая, С. М. Цинкаловская и др. // Укр. биох. журн. 1976. - 4. - С. 521-531.

23. Белицер В. А. Фибриноген и фибрин: строение молекул, самосборка волокон / В. А.Белицер, Т. В.Варецкая // Успехи совр. биол. 1975. - 80.- 1.-С. 5-21.

24. Белицер В. А. Фибриноген и фибрин: строение молекул, самосборка волокон / В. А.Белицер, Т. В.Варецкая // Успехи совр. биол. 1975. - 80.- 1.-С. 5-21.

25. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности / И.Н.Бокарев // Тромбоз, гемостаз и реология. - 20006. - С. 6-7.

26. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности // «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения / И.Н.Бокарев // М. -2000 а.-С. 47-52.

27. Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение внутренних болезней. Кровоточивость, или геморрагический синдром. Дифференциальная диагностика / И.Н.Бокарев // М. 2002. - 75 с.

28. Бокарев И.Н. Тромбозы, предтромботические состояния, тромбофилии и гиперкоагуляция / И.Н.Бокарев // Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения, 2000 в. С. 39-43.

29. Брод ер А.И. Интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину в зависимости от липопероксидации и антиок-сидантного потенциала: Автореф. дисс. . канд.мед.наук. Тюмень. -2004.-24 с.

30. Бушин А.Е. Антикоагулянтная активность фракций сапропеля. Механизм действия / А.Е.Бушин // Медицинская наука и образование Урала.- 2008а. 5(49). - С. 8-11.

31. Бушин А.Е. Антикоагулянтная активность фракций сапропеля. Механизм действия / А.Е.Бушин // Медицинская наука и образование Урала. 2008а. - 5(49). - С. 8-11.

32. Бушин А.Е. Пептидные ингибиторы плазменного и тромбоцитарного гемостаза / А.Е.Бушин, Е.А.Чирятьев, О.А.Русакова, П.Я.Шаповалов // Успехи Современного естествознания. 2008. - 2. - С. 80.

33. Бушин А.Е. Торможение пептидным ингибитором из сапропеля реакции тромбина с фибриногеном / А.Е.Бушин // Современные наукоемкие технологии. 20086. - 2. - С. 38.

34. Бушин А.Е. Эффекторы свертывания крови из сапропеля: влияние на плазменный, тромбоцитарный гемостаз и некоторые жизненные функции лабораторных животных: Автореф. дисс. . к.м.н. Тюмень, 2009.-21с.

35. Бышевский А.Ш. Влияние некоторых витаминов на уровень гуморальных агентов и функциональную активность физиологической противо-свертывающей системы: Автореф. дисс. . д-ра мед. наук.- Запорожье, 1965.- 35 с.

36. Бышевский А.Ш., Терсенов O.A. Биохимия для врача. Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994. 384 с.

37. Бышевский А.Ш. Влияние разных доз витамина С на толерантность к тромбину у несинтезирующих его животных / А.Ш.Бышевский, С.Л.Га-лян, Л.А.Васильев и др. // Медицинская наука и образование Урала. -2009. 2/58.-С.55-56

38. Бышевский А.Ш. Гемостаз при неразвивающейся беременности, влияние антиоксиданта селмевита /А.Ш.Бышевский, В.А.Полякова, М.Г.Галушко и др. // Успехи современного естествознания. 2008. - 5. - С.67.

39. Бышевский А. Ш. Ингибитор самосборки фибрина / А.Ш.Бышевский, Е.А.Чирятьев // Укр. биох. журн. 1983а. - 55. - 3. - С. 260-265.

40. Бышевский А. Ш. К механизму торможения самосборки фибрина тер-мостабилъным ингибитором сыворотки крови / А. Ш.Бышевский, Е. А.Чирятьев // Вопр. мед. химии. 19836. - 5. - С. 22-27.

41. Бышевский А.Ш. Метод определения антиплазмина в сыворотке крови / А.Ш.Бышевский, В. Мохнатов // Система свертывания крови и фиб-ринолиза. Киев: Здоровья. - 1969. - С. 220-221.

42. Бышевский А.Ш. Механизм взаимосвязи между гемостазом и ПОЛ / А.Ш.Бышевский, И.А. Аптекарь, Е.А.Тетерина и др.// Материалы 1-й Всероссийской научн. конф. «Клиническая гемостазиология в сердечно-сосудистой хирургии». -М., 2003а. С. 16.

43. Бышевский А.Ш. Неперывное внутрисосудистое свертывание крови и липопероксидация / А.Ш.Бышевский, М.К.Умутбаева, Р.Г.Алборов //

44. Гематол. и трансфузиол. 2004а. - 49. - 5. - С. 39-43.

45. Бышевский А. Ш. Новый противосвертывающий препарат фосфати-дилсерин / А. Ш.Бышевский, М. К.Чабанов // В кн.: Актуальные проблемы гемостаза. М.: Наука. 1981. - С. 410-416.

46. Бышевский А. Ш., Галян С. Л., Тажудинова С. И. Авторское свидетельство №1210094 на Способ определения продолжительности самосборки в плазме. Зарегистрирован в Госреестре изобретений в СССР 8.10.1985.

47. Бышевский А.Ш. О непрерывном осуществлении процесса свертывания крови /А.Ш.Бышевский // Гематол. и трансфузиол. 1984. - 7. -С. 36-40.

48. Бышевский А.Ш. Плазменное содержание индикаторов взаимодействия тромбин-фибриноген как показатель толерантности к тромбину / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Р.Г.Алборов и др. // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2005. - 1. - С. 40-46.

49. Бышевский А.Ш. Свертываемость крови при реакции напряжения. /А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников // Свердловск: Средне-Уральское книжное изд-во, 1986. 172 с.

50. Бышевский А.Ш. Связь гемостаза с перекисным окислением липидов /А.Ш.Бышевский, М.К.Умутбаева, Р.Г.Алборов // М.: Медицинская книга. 2003 в. - 95 с.

51. Бышевский А.Ш. Тромбопластин / А.Ш.Бышевский, Д.М.Зубаиров, О.А.Терсенов // Новосибирск: Издательство Новосибирского университета. 1993.- 180 с.

52. Бышевский А.Ш., Галян C.JL, Левен П.И., Терсенов O.A., Чирятьев Е.А. Регуляция коагуляционных превращений фибриногена // Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство, 1987. 206 с.

53. Бышевский А.Ш.Интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген, липидпероксидация и толерантность к тромбину при дефиците витамина С / А.Ш.Бышевский, Е.М.Шаповалова, А.Ю.Рудзевич / Гематология и трансфузиология 2008.Т.53. - 4. - С.41-46

54. Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Шаповалов П.Я., Шаповалова Е.М. // монография «Влияние важнейших витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание толерантность к тромбину». -Москва: Медицинская книга 2009. - 112 с

55. Бышевский А.Ш., Михайлова Л.В., Алборов Р.Г. и др. Способ определения толерантности животных к тромбину. Патент № 2219546, приоритет от 04.05.2000 Зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003.

56. Бышевский А.Ш., Михайлова Л.В., Алборов Р.Г. и др. Способ определения толерантности животных к тромбину / /А.Ш.Бышевский, // Патент № 2219546, приоритет от 04.05.2000, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003.

57. Бышевский А.Ш., Мухачева И.А., Шафер В.М. Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме. A.C. № 1659855. Публик. Бюлл № 24. 30.06. 1991.

58. Бышевский А.Ш., Соловьев В.Г., Селиванова И.В. Патент № 2061953 Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов. Бюлл. № 16. - 10. - 06. 1996.

59. Вакулин A.A. Роль эритроцитов и лейкоцитов в поддержании активности тромбоцитов в зависимости от состояния ПОЛ: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. Челябинск, 1998. 41 с

60. Веремеенко К. М. Изучение продуктов расщепления фибриногена в плазме крови при гиперфибринолизе / К. М. Веремеенко, Т. В. Варец-кая, О. И. Кизим, М. Г. Герасименко // Укр, биох. журн., 1976. 3. - С. 337-342.

61. Веремеенко К. М. Ферменты протеолиза и их ингибиторы в медицинской .практике. Киев: Здоровье. 1971.-216 с.

62. Веремеенко К. М. а2-Макроглобулин: структура, свойства и физиологическая роль / К. Н. Веремеенко, О.А.Семенова, А.И. Кизим, К.А. Лобунец // Укр. биох. журн. 1983. - 55. - 2. - С. 218-233.

63. Волков А.И. Влияние мепакрина, аспирина и дазоксибена на тромбоциты в зависимости от состояния липопероксидации в них / Волков А.И. // Тромбоз, гемостаз и реология, 2002а. 2. - С.55-57.

64. Галушко М.Г. Гемостаз и липопероксидация при гипертиреозе и тиреотоксикозе // Материалы 43-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». Тюмень. 2009. - С.27.

65. Галушко М.Г. Гемостаз при гипертиреозе и тиреотоксикоза / М.Г.Галушко, Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев и др. // Медицинская наука и образование Урала. 20096. - 2/58. - С. 147-150

66. Галян С.Л. Предупреждение и ограничение витаминами-антиокси-дантами нарушений гемостаза, вызываемых тромбинемией: Автореф. дисс. . докт.мед.наук. Челябинск. - 1993. - 44 с.

67. Галян С.Л. Роль клеток крови в липидпероксидации /С.Л.Галян, А.Ш.Бышевский, Р.Г.Алборов и др. // В сб. «Новая идеология в единстве фундаментальной науки и клинической медицины» Самара. 2005.-С. 380-384

68. Гланц С.А. Медикобиологическая статистика / С.А.Гланц // М.: Практика. 1998. - 112 с

69. Губаев А.Г. Фармакологические свойства антикоагулянта прямого действия из травы нонея темная // Дисс. канд. мед. наук. Тюмень, 1996. - 135 с.

70. Детинкина Г.Н. Предложения по унификации методов исследования системы гемостаза / Г.Н.Детинкина, И.М.Дынкина, Ж.Н.Торин, и др. // Лаб. дело. 1984а. - 3. - С. 140-143.

71. Детинкина Г.Н. Предложения по унификации методов исследования системы гемостаза / Г.Н.Детинкина, И.М.Дынкина, Ж.Н.Торин, и др. // Лаб. дело. 19846. - 4. - С. 225-232.

72. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. М.: Мир. 1966. - 816 с.

73. Ельдецова С.Н. Гемокоагуляционные сдвиги и активность свободнора-дикальных процессов в плазме, эритроцитах при экстремальных воз-дейстиях в эксперименте: Автореф. дисс. . канд. биол. наук Челябинск, 1990.-22 с.

74. Калинин Е.П. Получение прямых низкомолекулярных антикоагулянтов из сапропеля / Е.П.Калинин, О.А.Русакова, И.Э.Полле // Тез. докл. 2 окружной конф. мол. уч. ХМАО. Сургут, 2001. - С. 171-172.

75. Кордэ Н.В. Биостратификация и типология русских сапропелей. М.: Изд-во АН СССР. 1960. - 219 с.

76. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания. М: Медицина, 1975. - 488 с.

77. Кудряшов Б.А. Взаимодействие гепарина с фибрин-мономером и комплексом фибрин-мономер-фибриноген / Б.А.Кудряшов, Л.А.Ляпина, Е.А.Григорьева // Вопр. мед. хим. 1980. - 3. - С. 318-321.

78. Кудряшов Б.А. Проблемы свертывания крови и тромбообразования. М. 1960.

79. Кудряшов Б.А. Современное состояние учения об антисвертывающей системе крови / Б.А.Кудряшов // БЭБиМ. -1962. 12. - С.3-14.

80. Кудряшов Б.А. Физиологическая антисвертывающая системы и её значение. М., 1960.-312 с.

81. ЮО.Кудряшов Б.А. Эволюционно-приспособительная обусловленность явлений гемостаза и роль комплексных соединений гепарина в регуляции жидкого состояния крови в организме / Б.А.Кудряшов, Л.А.Ля-пина, 1973 // Вестник МГУ. 1973. - 4. - С. 3-25.

82. Кузник Б.И. Форменные элементы крови, сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз / Б.И.Кузник, В.П.Скипетров // М.: Медицина, 1974. 306 с.

83. Левен П.И. К механизму торможения самосборки фибрина фосфати-дилсерином / П.И.Левен, С.И.Тажудинова // Тез. докл. IV Всесоюзного симпозиума по биохимии липидов. Киев. - 1983. - С. 87-68.

84. ЮЗ.Луговской Э. В. Исследование механизма полимеризации фибрина с помощью нейтральных солей / Э. В.Луговской, В. А.Белицер //- Биохимия, 1971.-36. 1. - С. 129-135.

85. Юб.Маньяков В. Ф. Электронно-микроскопическое исследование самосборки фибрина / В. Ф.Маньяков, Т. В.Варецкая, В. А.Белицер //

86. Маркосян A.A. Онтогенез систему сывертывани крови. Л.: Наука. -1968.- 187 с.

87. Ю8.Мецлер Д. Биохимия /пер. с нем./ М.: Мир. 1980. - 1. - 407 с.

88. Ю9.Миркамалова Э. Г. Ингибиторный эффект продуктов расщепленияпротромбина плазмином по отношению к тромбину и ф. Ха / Э. Г.Мир-камалова, И. П.Баскова // ДАН СССР. 1978. - 239. - 4. - С. 977-979.

89. Ю.Миркамалова Э. Г. Продукты протеолиза бычьего протромбина адсор-бционно-иммобилизованным бычьим плазмином и их биохимическая и физиологическая роль: Автореф, дисс. . канд. биол. наук. М., 1978. 135 с.

90. И.Михайлова JT.B. Состояние системы свертывания крови при воздействии звука в эксперименте: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Запорожье, 1970.-С.21.

91. Мкртумян A.M. «Влияние компливита на гемооагуляционные сдвиги, перекисное окисление липидов, содержание молекул средней массы и свободных аминокислот при воздействии свинца»: Автореф.: дисс. к.м.н. Челябинск, 1994. 22 с.

92. ПЗ.Момот А.П. Разработка и клиническая апробация методов исследования производных фибриногена в плазме и сыворотке крови при ДВС-синдромах: Автореф. дисс. . канд .мед .н. / Новосибирск, 1990. 17 с.

93. Мухачева И. А. Взаимодействие фосфатидилсерина с фибрин-мономером / И.А. Мухачева, А. Ш.Бышевский // Биохимия. 1979. - 44. - 11. - С. 1944-1951.

94. Мухачева И.А. Изменения гемокоагуляции и содержание протопор-фирина у животных, получавших витамины при экспериментальной интоксикации / И.А.Мухачева, Е.Л.Рудзевич, А.М.Мкртумян // В кн. Обмен веществ в норме и патологии. Тюмень, 1992. - С. 64.

95. Папаян JI.П. Современное представление о механизме регуляции свертывания крови / Л.П.Папаян // Тромбоз, гемостаз и реология. -2003.-2 (14).-С. 7-11.

96. Полле И.Э. Новые прямые антикоагулянты растительного происхождения / И.Э.Полле, О.А.Русакова, В.Л.Кортусов // Мат. 2 междунар. на-уч.-практ. 2 конф. «Здоровье и образование в 21 веке». М., 2001. - С. 149.

97. Полле И.Э. Природа, свойства и механизм действия прямого антикоагулянта из травы окопника лекарственного: Автореф. дисс. . канд.биол.наук. Тюмень. - 2002. -21 с.

98. Радзевич И. М. Получение фибрин-мономера из нефракционироВан-ной плазмы крови / И. М.Радзевич, Е. Л.Ходорова // Укр. биох. журн. -1969.-4.-4.-С. 367-370.

99. Рудницкая Т.А. Частота, значимость и коррекция гипергомоцистеине-мии при сахарном диабете 2 типа: Автореферат дисс. . к.м.н. / Барнаул.-2003.-22 с.

100. Русакова O.A. Антикоагулянты растительного происхождения: природа и механизм действия: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Тюмень, 1993. -22 с.

101. Русакова O.A. Прямые низкомолекулярные антикоагулянты естественного происхождения. Природа и механизм действия: Автореф. дисс . д.б.н. Уфа. - 1999.-41 с.

102. Свинец. Всемирная организация здравоохранения. 1980. - 47 с.

103. Селиванова И.В. Роль тромбоцитов и эритроцитов в активации ПОЛ тромбином: Автореф. дисс. к.м.н.- Челябинск, 1994 -23 с.

104. Соловьев В.Г. Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки в регуляции тромбинемии: Автореф. дисс. . докт. мед. наук.-Челябинск, 1997. 44 с.

105. Сулкарнаева Г.А. Липопероксидация и гемостаз: взаимодействие и механизмы /Г.А.Сулкарнаева, П.Я.Шаповалов . Р.Г.Алборов и др. // Аллергология и иммунология. 2004. - 5. - 3. - С.501-502.

106. Тажудинова С.И. К тестированию тромбопластинемии / С.И.Тажу-динова // Некоторые вопросы экспериментальной и клинической гемо-коагуляции. Тюмень. - 1984. - С. 112-122.

107. Тажудинова С.И. Продолжительность самосборки фибрина при изменениях гемостатического потенциала: Автореф. . канд. биол. наук. -Челябинск. 1983. - 22 с.

108. Терсенов O.A. Противосвертывающий эффект фосфатидилсерина / О.А.Терсенов, М. К Чабанов // Вопр. мед. хим. 1981. - 5. - С. 619-623.

109. Терсенов О. А. Торможение процесса специфической активации протромбина фосфатидилсерином: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Челябинск. 1981. - 20 с.

110. Угарова Т.П., В.А.Белицер Исследование равновесной системы фибрин-фрагмент D-протектор // Укр. биохим. журн. 1978. - 3. - С. 357363.

111. Умутбаева М.К. Перекисное окисление липидов и антиоксидантный потенциал тромбоцитов как факторы, определяющие интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген: Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Тюмень. - 2005. - 45 с.

112. Федорова З.Д Некоторые коагулологические показатели, характеризующие особенности физиологического течения беременности у пер-вобеременных и повторнобеременных / З.Д.Федорова, М.А.Котов-щикова, В.П.Кривенко // Акуш. и гинек. 1991. - 9. - С.34-36.

113. Ходорова Е. JI. Исследования антитрипсин-а2-макроглобулина сыворотки крови / Е. Л.Ходорова, К. Н.Веремеенко, В. А.Белицер // Вопр. мед. хим. 1969.- 15.- 1.-С. 10-15.

114. Чазов Е.И., Лакин K.M. Антикоагулянты и фибринолитические средства. М.: Медицина, 1977.

115. Чирятьев Е. А., Умутбаева М. К. Авторское свидетельство. 1122695 (СССР) 1989. Способ получения ингибитора полимеризации фибрина.

116. Чирятьев Е.А. Защитное действие экстракта из сапропеля при экспериментальной тромбопластинемии / Е.А.Чирятьев, А.Е.Бушин, П.Я.Шаповалов, О.А.Русакова // Медицинская наука и образование Урала. 2008. - 3(53). - С. 185-187.

117. Чирятьев Е.А. Новый циркулирующий ингибитор самосборки фибрина: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Челябинск. 1983. - 22 с.

118. Чирятьев Е.А. Пептидные ингибиторы коагуляционного превращения фибриногена: Автореф. дисс. . докт. биол. наук. М., 1990. 44 с.

119. Чирятьев Е.А.Защитное действие экстракта из сапропеля при экспериментальной тромбопластинемии / Е.А.Чирятьев, А.Е.Бушин, П.Я.Шаповалов, О.А.Русакова // Медицинская наука и образование Урала.-2008.-3(53).-С. 185-187.

120. Шабанов Э. А. Влияние этинилэстрадиола и левоноргестрела на интенсивность внутрисосудистого свертывания крови и коагуляционную активность тромбоцитов: Автореф. дисс. . к.м.н. Пермь, 2000. 21 с.

121. Шаповалов П.Я Связь между липопероксидацией и постоянным внут-рисосудистым свертыванием крови / П.Я Шаповалов, И.А.Аптекарь, А.Ю. Рудзевич и др. // Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов (М.),2003. Приложение № 2. - С. 104.

122. Шаповалова Е.М. Гемостаз и обеспеченность организма витамином С / Бышевский А.Ш., Матаев С.И., Шаповалова Е.М., Рудзевич А.Ю. / Вопросы питания 2008. т.77. - 3.

123. Шаповалова Е.М. Перекисное окисление липидов и его роль в регуляции гемостаза //в монографии «О перспективах коррекции природными цеолитами гемостатических сдвигов». Ханты-Мансийск: Издательский центр Х-МГМИ, филиал ЮУНЦ РАМН, ТГМИ. - 2007а. -С.43-51

124. Шаповалова Е.М., Шаповалов П.Я., Ткаленко И.А. и др. Влияние на гемокоагуляцию донатора метальных групп витамина В15 (пангамата) // в монографии «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация». Москва: Медицина. - 2006. - С.51-55

125. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз / А.С.Шитикова // Санкт-Петербург. 2000. - 222 с.

126. Abildgaard U. Evidence that antithrombin IH is the mein phusiological inhibitor of coagulation enzymes / U.Abildgaard // Physiol. Ingib. Coagul. and Fibrinol. Proc. Round —Table Conf. Lenven. - 1978. - H. 31-31.

127. Alborov R.G.Blood cells in realization of communication between lipoper-oxidation and constant intravascular coagulation of the blood / R.G.Alborov

128. International congress on thrombosis, haemostsis, vascular pathology: St.Peterburg, 2004.-P. 5.

129. Ansell J. Heparin-induced thrombocytopenia and recurrent thromboembolism / Ansell J., Deykin D. // Amer. J. Hemat. 1980. - Vol. 8. - P. 325332.

130. Asch A.S., Barnwell J., Silverstein R.L., Nachman R.L. Isolation of the thrombospondin membrane receptor //J. Clin. Invest. 1987. - Vol. 79, N 4. -P. 1054-1061.

131. Barret A. J. The interaction of a2-mac- roglobulun with proteinases / A. J.Barret, P. M.Starkey // Biochem. J. 1973. - 133. - 4. - P. 709-724.

132. Barret A. J. The. electroforetically "slow" and "fast" forms of the a2-macroglobulin molecule / A. J.Barret, M.Brown, A.Sayers // Biochem. J. -1979. 181.-2.-P. 401-418.

133. Belitser W. A. On the model for the fibrinogen molecule concecutive stages of fibrin polimerization / W. A.Belitser, T. V.Varetskaja, V. Ph.Manjakov // Thromb. Res. 1973. - 2. - 6. - P. 567-578.

134. Bick R. L. Antithrombin III patterns in disseminated intravascular coagulation / R. L.Bick, M. D.Bick, L. D.Fekete // Amer. J. clin. Path. 1980. - 73. -4. - P. 577-583.

135. Blackburn M. N. The heparin binding site of At. Ill / M. N.Blackburn, C. C.Sibley // J. biol. chem. 1980. - 255. - 3. - P. 824-826.

136. Blomback B.The molecular structure of fibrinogen / B.Blomback, M.Blomback // Ann. N. Y, Acad. Sci. 1972. - 202. - 1. - P. 77-97.

137. Borg J.Y., Flecht B., Legendve M. e. a. Heparin and low molecular weight heparins-induced thrombocytopenias // Thromb. Res. 1986. - Suppl. 6. - P. 96.

138. Borsodi A. D. Isolation of antithrombin III from normal and aj-antitrypsindeficient plasma / A.D.Borsodi, R.A.Bradschaw // Thromb. and Haemost.- 1977.-38. -2. P. 475-485.

139. Byshevsky A.Sh. Antioxidant complex selmevit in hemostasis correction atsome uterine surgeries (report III) / A.Sh. Byshevsky, S.L. Galyan, M.G. Galushko e.a. // European journal of natural history. 2008. -3. - P.10-15.

140. Clemensen I. Inhibition of urokinase by complex formation with human AT III in absence and presence of heparin / I.Clemensen // Thromb. and haemost., 1978. 39. - 3. - P. 616-623.

141. De Moerloose P. Should neurologists measure D-dimer concentrations? / De P.Moerloose, F. Boehlen // Lancet Neurol. 2003. - 2. - P. 77.

142. Dennis S. Use of fragments of hirudin to investigate thrombin-hirudin interaction / S.Dennis, A.Wallace, J.Hofsteenge, S.Stone//Eur. J. Biochem. -1990.-V. 188. 1.-P. 61-66.

143. Doolittle R. F. Fibrinogen and fibrin / R. F.Doolittle //.—Ann. Rev. Bioch., 1984, v. 53, p. 195-229.:

144. Dunwiddie C. Antistasin, a leech-derived inhibitor of factor Xa. Kinetic analysis of enzyme inhibition and identification of the reactive site / C.Dunwiddie, N.Thornberry, H.Bull //J. Biol. Chem. 1989. - 264. - 28. -P. 16694-16699.

145. Esmon Ch. T. Protein C activation /Ch.T.Esmon, N.Esmon N. L.Esmon // Semin. Thromb. and Haemost. 1984. - 10. - 2. - P. 122-130.

146. Frenoy J. P. Studies on the structure of human a2-macroglobuIin. Analysis of the microgeterogencity by isoelectric focusing / J. P.Frenoy, R.Bourrilon

147. Bioch. et biophys. Acta. 1974. - 371. - 1. - P. 168-176.

148. Fuster V. Role of platelet-inhibitor agents in coronary artery disease / V.Fuster, I-K.Jang // In: Topol E.J., editor. Textbook of interventional cardiology. Philadelphia: W.B. Saunders; 1994. p. 3-22.

149. Ganrot P. G. Studies on serum protease inhibitors with special reference to a2-macroglobulin / P.G.Ganrot // Acta Univ. Lund. 1967. - 2. - 2. - P. 136.

150. Gawaz M.P. Blood Platelets / M.P.Gawaz // Stuttg.; New York: Time. -2001.- 190 p.

151. Gitei N. S. In vitro and in vivo correlation of clotting protease activity / N. S.Gitei, S.Wessler // Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A. 1977. - 74. - P. 30283032.

152. Griffin J. H. Studies of protein C in thromboembolic diseases / J. H. Griffin, A. Bzeaud, B. Evatt, D. Ivlosner /7 Ric. clin. et lab. 1984. - 14. - 3. - P. 469-473.

153. Hamburger N. Biochemie und Pathophysiologic' AT III / N.Hamburger // Folia angiol. 1982. - 83. - 30. - 31. - S. 284-287.

154. Haspel P. C. Studies of human plasma a2-macroglobu- lin —enzyme interaction/ P. C.Haspel //J. Exp. Med. 1973. - 138. - 3. - P 508.

155. Jaffe E.A. Vascular function in hemostasis / E.A. Jaffe // Hematology: New1. York.- 1999.- 131 p.

156. Kaiser B. Antithrombotic and haemorrhagic effects of the naturally occur-ing thrombin inhibitor hirudin / B.Kaiser, F.Markwardt / Folia Haemat. -1988.- 115.- 2.-P. 41-46.

157. Kobayashi N. Criteria for diagnosis of DIC based on the analysis of clinical and laboratiry in 345 DIC patients collected by the Research Committee on DIC in Jpan / N.Kobayashi, K.Maegawa, M. Takadae.a.e // Bibl. Haematol. 1987.-49.-P. 265-275.

158. Koopman J. Abnormal fibrinogen Ijmuiden and Nijmegen form die sulfide-linked fibrinogen-albumin complexes / J Koopman., F.Haverkate, J.Grimbergen e.a. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - 89. - 8. - P.3478-3482.

159. Laharrague P. Cantithrombin III / P.Laharrague, G Fillola „ F.Nguen, R.Birme //Rev. mea. Touluse. 1980. - 4. - P. 193-198.

160. Landano A. P. Studies on syntetic peptides that bing fibrinogen and prevent fibrin polimerization // A. P.Landano, R. F.Doolittle //- Biochemistry. -1980.- 19.- 5.-P. 1013-1019.

161. Landano A. P. Syntetic peptide de- rivates that bing fibrinogen and prevent the polimerization of fibrin monomers / A. P.Landano, R. F.Doolittle // Proc. Nat. Acad. Sci. USA -1978. 75. - 7. - P.3085-3089.

162. Landano A. Studies on syntetic peptides that bing fibrinogen and prevent fibrin polymerization / A.Laudano, R.Doolittle // Biochemistry. 1980. - № 5.-P. 1013-1019.

163. Laroia S.T. Endothelium and the lipid metabolism: the current understanding / S.T.Laroia, A.K.Ganti, A.T.Laroia e.a. // Int. J. Cardiol., 2003. 88. -P. 1-9.

164. Mac Gregor J. The heparin — accelerated neutralisation of- bovine X and thrombin by AT III / J.Mac Gregor, D.Lane, V.Kakkar // Biochim. et biophys. Acta. 1980. - 632. - 1. - P. 131-137.

165. Mannigh E. F. Protein C und S / E. F.Mannigh // Haemostoseologie. -1984.-4. P. 138-147.

166. Marlar R. A. Mechanism of action of human activated protein C, a thrombin dependent anticoagulant enzyme / R.A.Marlar, A.J.Kleiss, J.H.Griffin // Blood. 1982. - 59. - 5. - P. 1067-1072.

167. Marassi A. Postoperative changes of protein C, a recently described inhibitor of blood coagulation / A. Marassi, A. D'Angello, S. Vigano e. a. // Ric. clin. et. lab. 1984. - 14. - 3. - P. 485-490.

168. Markwardt F. Pharmacology of hirudin, one hundred years after the first report of the anticoagulant agent in medicinal leeches / F.Markwardt// Bio-med. Biochim. Acta. 1985.-44. 5. - P. 1007-1013.

169. Meinwald Y. C. Mechanism of action of thrombin on fibrinogen / Y. C. Meinwald, R. A. Martinelli e.a. // Biochemistry, 1980, v. .19, N 16, p. 3820—3825.

170. Nordon C. Thromboembolische und haemorrhagische Komplikationen einer Anticoagulantentherapie von Patient mit arteriallen Geffasserkrankun-gen / C.Nordon, H.Heien, Larish B., H.Schmidt e.a. // Dt. Gesundheitswesen. 1981. - 36. - 33. - S. 1361-1365.

171. Pastorova V. Anticoagulant and fibrinolytic effects of prolin-containing peptides // L.Pastorova, L.Liapina, Smolina T., I.Ashmarin // zv. Akad. Nauk. Ser. Biol. 1998. - 3. - P. 390-394.

172. Roberts R. C. Studies on the quaternary structure of human serum a2-macroglobulin / R.Roberts, C.W, A.Reisen., P.R.Hall // In: Bayer Symp. V "Proteinase Inhibitors". Berlin. - 1974. - P. 63-71.

173. Rosenberg R. Mechanism of antithrombin action and the structural basis of heparins anticoagulant function / R Rosenberg, G.Oosta e.a. // Chem. and Biol. Heparin, Proc. Int. Conf., Chapel Hill. New-York. - 1981. - P. 249269.

174. Rosing J. Effects of protein S and factor Xa on peptide bond cleavages during inactivation of factor Va and factor Va R 506 Q by activating protein C / J.Rosing, L.Hoekema, G.A.F.Nicolae // J.Biol.Chem. 1995. - 270. - P. 27852-27858.

175. Salvesen G. S. Covalent Binding of proteinases in their reaction with a2-macroglobylin / G. S.Salvesen, A. J.Barret // Biochem. J. 1980. - 187.-3. -P. 695-701.

176. Schwick H. G. Antoproteinasen des Humans Serums / H. G Schwick, N.Heimburger, H.Haupt // Z. ges. innere Med. 1966. - 27. - 7. - P. 193198.

177. Smith J.B. Prostaglandins and platelet aggregation / J.B.Smith// Ada Med.

178. Scand. 1981. - 210. - Suppl. 651. - P. 91-98.

179. Solfrupgensen L. Primary structure of a2-macroglobulin / L. Solfrupgen-sen, T. M. Sfepanik, P. Lombland e. a. // Thrombos. and Haemost. 1981. -46.- 1,- P. 87-92.

180. Solowau H. B. Heparin anticoagulant during cardio-pulmonary in an AT III deficient patient / H. B.Solowau, T. W.Christiansen // Amer. J. Pathol. -1980.- 73.-5.-P. 723-725.

181. Suzuki K. Aktivated protein С inhibitor / K.Suzuki // Ibid. P. 154—161.

182. Takahahara H. Purification and characterization of rat plasma antithrombin III / H.Takahahara, H.Sinohara // Biochim. Biophys. Acta. 1980. - 612. - 1. -P. 185-194.

183. Villanueva G. B. Refolding properties of AT-III / G.B.Villanueva, N.Allen // J. Biol. Chem. 1983. - 258. - 22. - P. 14048-14053.

184. Wada H. Hemostasis study before onset of disseminsted intravascular coagulation / H.Wada, K.Minamikawa, Y.Wakita e.a. // Am. J. Hematol. -1994.-43. P. 265-275.

185. Wada H. Increastd plasma solubilit fibrinin patients with dissiminated intravascular coagulation / H.Wada, Y.Wakita, T.Nakase e.a. // Am. J. Hematol., 1996. 51.-P. 255-260.

186. Wada H. Диагноз и лечение ДВС-синдрома / H.Wada, C.Esteban, H.Gabbaza e.a. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - 1. С. 16-22.

187. Walker F. J. Protein S and the regulation of activated protein С / F. J. Walker//Ibid. P. 131-138.

188. Wolf M. Antithrombin Milano, a new variant with monomeric dime- ric inactive antithrombin III / M.Wolf, C. Boger, A.Tropodi e. a. // Blood. 1985. -65.-2.-P. 496-500.

189. Zwaal R.F.A. Blood, membranes and haemostasis / R.F.A.Zwaal // Haemo-stasis. 1982. - 11.-P. 12-39.

190. Zwaal R.F.A. Platelet procoagulant activity and microvesickle formation. Its putative role in hemostasis and thrombosis / R.F.A.Zwaal// Biochym. Biophys. Acta. 1992.- 1188.- 1.-P. 1-8.1. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

191. АТ III антитромбин III ВР - время рекальцификации ВС - время самосборки фибрина Г - гепарин

192. ТкТР Толерантность к тромбину

193. РКМФ Растворимые комплексы мономерного фибрина

194. ПДФ Продукты деградации фибрина1. Ф. (фф.) Фактор (факторы)

195. ФАТ Фактор активации тромбоцитов

Информация о работе

Созонюк, Александр Данилович
кандидата медицинских наук
Уфа, 2012
ВАК 03.01.04

Диссертация

Влияние фракций сапропеля с антиоксидантными свойствами на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толернтность к тромбину (экспериментальное исследование) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы