ВЛИЯНИЕ ДЕФИЦИТА И ИЗБЫТКА ТОКОФЕРОЛА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

Кондаков, Владимир Вениаминович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
ВЛИЯНИЕ ДЕФИЦИТА И ИЗБЫТКА ТОКОФЕРОЛА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "ВЛИЯНИЕ ДЕФИЦИТА И ИЗБЫТКА ТОКОФЕРОЛА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)"

На правах рукописи

094604594

КОНДАКОВ Владимир Вениаминович

ВЛИЯНИЕ ДЕФИЦИТА И ИЗБЫТКА ТОКОФЕРОЛА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.01.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 О МАЙ 2910

Тюмень - 2010

004604594

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор медицинских наук Алборов Робинзон Григорьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Терехина Наталья Александровна

ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени Е.А. Вагнера Росздрава»

доктор медицинских наук Соловьев Владимир Георгиевич

БУ ВПО ХМАО-Югры «Ханты-Мансийский государственный медицинский институт»

Ведущая организация: ГОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Росздрава

Защита состоится «г/3 » 2010 г. в ^^'-Часов на заседа-

нии диссертационного совета Д 208.101.02 при ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава» по адресу: г. Тюмень, ул. Одесская, 54.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава»

Автореферат разослан « £7 » 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Анализ литературы последних десятилетий позволяет сформулировать некоторые положения, обоснованные результатами исследований, представленных значительным числом публикаций и касающихся темы, разрабатываемой нами.

1. Состояние системы гемостаза - одной из важнейших систем жизнеобеспечения - зависит от интенсивности свободнорадикальных процессов, в их числе процессов липидпероксидации [А.Ш.Бышевский и др., 2000, 2003, 2009; Г.А.Сулкарнаева, 2004, 2006; Р.Г.Алборов, 2004, 2006; A.Görlach е.а., 2003; K.Pawlak е.а. 2003; A.E.Goga е.а., 2009], и эта зависимость является двусторонней.

2. Антиоксиданты, в их числе и витаминной природы, ограничивают in vivo ли-пидпероксидацию (ЛПО), и поэтому замедляют непрерывное внутрисосудистое свертывание крови [А.Ш.Бышевский и др., 2008; С. Antoniades е.а., 2003;

A.V.Solov'eva, 2008]; введение прооксидантов, ускоряя ЛПО, сопровождается интенсификацией непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) [Е.А. Винокурова, 2006; Е.М.Шаповалова и др., 2008; N.Kaul е.а., 2008].

3. Влияние ЛПО на гемостаз предположительно реализуется за счет накопления в кровотоке первичных и вторичных липидпероксидов, усиленно продуцируемых клетками крови, особенно тромбоцитами и в меньшей степени эритроцитами и лейкоцитами [Р.Г.Алборов и др., 2005], антиоксиданты снижают активность тромбоцитов, ограничивая их способность к агрегации и к реакции высвобождения [Р.Г.Алборов, 2006; O.Hussein е.а., 2008]

4. Эритроциты, нейтрофилы и моноциты экспонированнные с тромбоцитами нормальной плазмы повышают их активность, что проявляется повышением способности кровяных пластинок к агрегации и к реакции высвобождения. При экзогенной гипертромбинемии на фоне повышенного антиоксидантного потенциала (АОП), вызванного введением витаминов-антиоксидантов, прирост способности эритроцитов и лейкоцитов активировать тромбоциты ограничивается [A.Sh.Bishevsky е.а., 2004; L.M.Bermejo е.а., 2007; G.Denas е.а., 2009].

5. Опубликованы работы, в которых рассмотрены данные литературы, посвященной влиянию витаминов на гемостаз [А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1991;

B.П.Мищенко и др., 2005; Q.Li е.а., 2009], при знакомстве с ними обращает на себя внимание следующее: а) изучались в этом плане преимущественно витамины А, В5, Bi2, Е и С, из них наиболее детально - витамины А и Е, причем особое внимание уделено токоферолу (ТФ), который является одним из важных природных антиокси-дантов, широко используемым в медицинской практике как компонент многих офи-цинальных поливитаминных препаратов; б) эффекты дефицита или дополнительного введения ТФ, как и других витаминов, на свертывание крови оценивали, определяя активность отдельных про- и антикоагулянтов в циркулирующей крови, что не позволило однозначно решить, вызывает назначение ТФ наклонность к активации гемостаза или снижает его активность [А.Ш.Бышевский, 1978,1991; Е.М.Шаповалова,

C.Л.Галян и др. 2008; F.Violi е.а., 2009]; в) экспериментаторы лишь в единичных случаях использовали сбалансированные по микро- и макронутриентам рационы питания, а в клинических исследованиях редко оценивали степень обеспеченности организма пациента витаминами, в том числе и теми, которые вводили в терапевтический комплекс. Все сказанное, особенно данные о роли тромбоцитов в существовании связи гемостаз-липидпероксидация, определило направление планируемого нами экспериментального исследования.

Цель исследования

Используя в экспериментах сбалансированный пищевой рацион, изучить механизм влияния дефицита и избытка токоферола на липидпероксидациго и коагулоак-тивность тромбоцитов, на интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину - показатели, интегрально характеризующие состояние гемостаза.

Задачи исследования

1. Изучить динамику изменений липидпероксидации в тромбоцитах, их коагуло-активности и плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови у крыс, содержащихся на Е-авитаминном рационе и рационе, включающем токоферол, в количестве, равном суточной потребности, 25,50 и 75% от неё.

2. Изучить динамику тех же величин при содержании крыс на рационе, включающем токоферол в количестве, эквивалентном его малым и средним лечебным дозам.

3. Изучить изменения липидпероксидации и антиоксидантного потенциала в тромбоцитах, моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах при содержании в рационе токоферола в количестве, превышающем суточную потребность.

4. Изучить интенсивность НВСК, коагулоактивностъ тромбоцитов и толерантность к тромбину после внутривенной инфузии крысам клеток крови, выделенных у крыс-доноров, неполучавших токоферол и получавших его в разных количествах

5. Изучить интенсивность НВСК, коагулоактивность тромбоцитов и толерантность к тромбину на моделях гипертромбинемии, создаваемых на фоне Е-авитаминного рациона и рациона с токоферолом.

Научная новизна

Впервые установлено, что отсутствие токоферола в рационе, сбалансированном по содержанию других нутриентов, ведет у крыс к ускорению перекисного окисления липидов и снижению антиоксидантного потенциала в тромбоцитах и в меньшей степени в моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах.

Показано, что внутривенное введение тромбоцитов крыс, которые получали Е-авитаминный рацион, увеличивает у крыс-реципиентов коагулоактивность тромбоцитов, ускоряет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и снижает толерантность к тромбину, а инфузия моноцитов, нейтрофилов и эритроцитов сопровождается теми же, но менее выраженными сдвигами. Впервые выявлена и охарактеризована зависимость степени изменений интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности животных к тромбину от антиоксидантного эффекта токоферола в его отсутствии, дефиците или избытке в питании. Установлено также, что отсутствие токоферола в рационе усугубляет гипертромбине-мию, связанное с нею ускорение непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и снижение толерантности к тромбину, вызываемое неодинаковыми по природе воздействиями (введение адреналина, тромбина, кровопотеря, сезонные сдвиги), а его избыток ослабляет эффекты гипертромбинемии.

Практическая значимость

Полученные результаты позволяют рекомендовать при заболеваниях, протекающих с наклонностью к гиперкоагуляции, осуществление контроля состояния тромбоцитарного звена гемостаза, уровня маркеров внутрисосудистого свертывания крови и обеспеченность токоферолом, что позволит оценить целесообразность включения токоферола в комплекс терапии при таких состоянии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Отсутствие токоферола в рационе, сбалансированном по остальным нутриен-там, ускоряет липидпероксидацию и снижает антиоксидантный потенциал в тромбоцитах, в меньшей мере в моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах, сопровождаясь ростом коагулоактивности тромбоцитов, ускорением непрерывного внутрисосуди-стого свертывания крови и снижением толерантности к тромбину.

2. Введение в рацион токоферола в количествах, составляющих часть суточной потребности, ослабляет эти сдвиги, а в количествах, эквивалентных лечебным дозам, замедляет липидпероксидацию, повышает антиоксидантную активность тромбоцитов, снижает их коагулоакгивность, замедляет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и нормализует толерантность к тромбину.

3. При внешних воздействиях, сопровождающихся ускоренным тромбиногене-зом, отсутствие токоферола в рационе усугубляет вызываемое тромбинемией повышение коагулоактивности тромбоцитов, ускорение непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и снижение толерантности к тромбину; на фоне токоферола в количестве эквивалентном минимальной лечебной дозе, сдвиги, обусловленные тромбинемией, ослабляются.

4. Изменения липидпероксидации, вызываемые отсутствием в рационе токоферола тесно положительно связаны с коагулоактивностью тромбоцитов и интенсивностью непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, тесно отрицательно ассоциированы с толерантностью к тромбину. Аналогичны эти связи и при избытке токоферола в рационе. Влияние токоферола на коагулоактивность тромбоцитов, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину реализуется в значительной мере за счет его антиоксидантных свойств.

Апробация и публикация

Результаты работы доложены на научной конференции Регионального отделения ВБО (Тюмень, 2007), на заседании Тюменского регионального отделения ВБО (2009), на 3-й международной научной конференции (Варадеро, Куба, 2008), на международной научной конференции (Москва, 2008), на Российской конф. «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009), на совместном заседании кафедр биохимии и гигиены с основами экологии ТГМА (2008) и опубликованы: в медико-биологических журналах — 9 статей; в виде двух глав в монографии «Влияние важнейших витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину». М.: Медицинская книга. - 2009 (всего 11 публикаций).

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 131 страницах машинописного текста, включает «Введение», «Обзор литературы», разделы «Материалы и методы исследований», «Результаты исследований», «Выводы» и список литературы (142 отечественны и 110 зарубежных источников).

Материалы и методы исследований

Подопытные животные. Эксперименты выполнены на нелинейных белых крысах (561 особь, масса тела 175±17 г и 200±15 г). Для крыс разработан рацион, сбалансированный по белкам, липидам, углеводам, минеральным веществам и витаминам [О.Я.Курципь, 1952; Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева, 1962], который широко апробирован, в том числе и в последние годы [А.В.Шидин и др., 2007; Е.М Шаповалова и др., 2007; А.Ш. Бышевский и др., 2008]. Известна суточная потребность крыс в ви-

таминах, в том числе и в токофероле - объекте исследований, работы по изучению гемостаза при разнообразных воздействиях выполнены преимущественно на лабораторных крысах, у которых легко отбирать пробы крови из обнаженной яремной вены в шприц со стабилизатором (за 0.5-1 мин до 40 мл/кг массы тела крови, не нарушая правил гемостазиологии [В.П.Балуда и др., 1980; З.С.Баркаган, 1998]). Учитывая наличие сезонных сдвигов гемостаза и его метеозависимость [В.П.Балуда и др., 1978; А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1986], в опыты включали контрольную группу. Кровь брали в шприц из обнаженной яремной вены у наркотизированных (диэтиловый эфир) крыс, фиксированных на препаровочном столике (стабилизатор -3,8% раствор цитрата натрия, 1:9 по объему). Рану закрывали кожным швом (кетгут). Для выделения клеток крови у четырёх крыс одной группы кровь пулировали, отбирая у отдельной особи 4 мл (стабилизатор - раствор гепарина - 0,1 мл на 1 мл крови, концентрация гепарина - 5 ООО ед./мл).

Толерантность к тромбину (ТкТР) оценивали согласно описания патента [А.Ш.Бышевский и др., 2003]. Маркеры непрерывного внутрисосудистого свертывания крови определяли в плазме: 1. Уровень продуктов деградации фибрина (ПДФ) -маркер коагуляцнонной активности или компенсаторной активации фибринолиза [Т.А.Рудницкая, 2003; Wada е.а., 1994] - определяли по описанию [А.Ш.Бышевский и др. [1991], 2. Содержание растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ) - показатель коагуляцнонной активности [С.Т.Ветриле и др. 2003; H.Wada е.а., 1996, 2003] - определяли в фенантролиновом тесте [А.П.Момот и др., 1999], 3. Содержание D-димеров - маркеры коагуляцнонной активности крови или компенсаторного фибринолиза [Е.Г.Соболева и др. 2003; Н.М.Воробьева, 2009; de Moerloose, F. Boehlen, 2003] - определяли с помощью латексной агглютинации с моноклональ-ными антителами (набор «D-dimer test», Roche), выражая результат в мкг/мл эквивалентов фибриногена, 4. Количество тромбоцитов определяли в периферической крови [З.С.Баркаган, А.П. Момот 1998], 5. Агрегацию тромбоцитов оценивали на агре-гометре "Биола", индуктор агрегации - АДФ в конечной концентрации 0,01 мг/мл [З.А Габбасов и др., 1989], 6. Спонтанную агрегацию определяли по Н.И.Тарасовой в описании [В.П.Балуда и др., 1980], приводя предварительно концентрацию тромбоцитов в плазме к 250 - 500 тыс. клеток в мкл (диапазон, корректный для работы на агрегометре), разбавляя исследуемую плазму гомологичной (1:2), предварительно обедненной тромбоцитами плазмой, 7. Содержание ф. Р3 оценивали по Rabiner и Groder в описании В.П.Балуда и др. [1980], 8. Содержание ф. Р4 в плазме определяли по действию прогретой и обедненной тромбоцитами плазмы на тромбин-гепариновое время свертывания плазмы [В.П.Балуда и др., 1980], 9. Общую коагулирующую активность тромбоцитов (ОКАТ) определяли по их способности изменять время свертывания плазмы в тесте АВР [А.Ш.Бышевский и др., 1996].

Липидпероксидацию (ЛПО) и антиоксидантный потенциал (АОП) оценивали по содержанию первичных и вторичных липидпероксидов - диеновых конъюгат (ДК) и продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), по периоду индукции (ПИ) и скорости окисления (СО). Липиды экстрагировали 100-кратным избытком смеси равных объемов гептана и изопропилового спирта. Содержание ДК устанавливали по оптической плотности гептановой фазы при X = 232 нм. Содержание ТБК определяли в том же экстракте флуорометрически [В.Н.Ушкалова и др., 1987,1997]. Интенсивность флуоресценции возбуждения оценивали с помощью флуориметра «Биан 130». В экстрактах определяли кинетические величины прямого инициированного окисления липидов молекулярным кислородом в присутствии инициатора

свободиорадикалыюго окисления (динитрилазобисизомасляная кислота). Период индукции (ПИ) выражали временем, затрачиваемым на поглощение исследуемой пробой 25 мм3 О2, а скорость окисления (СО) - углом наклона линейного участка кинетической кривой [С.Н.Ельдецова, 1990]. Выделяли и отмывали тромбоциты для опытов in vitro и для оценки ЛПО по описанию [А.Б.Самаль и др., 1990]. Цельные эритроциты для исследования в них ЛПО выделяли и отмывали по И.Я.Ашюшази [1977], нейтрофилы и моноциты выделяли в градиенте плотности, создаваемом с помощью фиколла и верографина [G.D.Ross, 1979, F.Pandolfi е. а., 1981], Экспозиция клеток с плазмой, использующейся для оценки АДФ-агрегации, составляла 30 мин. Для получения сопоставимых данных в пробу плазмы (2 мл) вносили клетки, взятые из 0,2 мл плазмы. Следовательно, определяя период индукции, содержание диеновых коныогат, ТБК-продуктов и других показателей, характеризующих оцениваемые величины в клетках данного вида у контрольных и подопытных групп, мы получали сопоставимые результаты.

Анализ результатов. Статистическую обработку результатов, имеющих числовое выражение, проводили с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [С.А.Гланц, 1998], используя метод вариационной статистики для малых рядов наблюдений, вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (т) и среднеквадратическое отклонение (о). Для оценки достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стъюдента (t) и степень вероятности (р). Сопоставляя интенсивные величины (выраженное в процентах отклонение от контрольной величины), использовали альтернативное варьирование, рассчитывая те же статистические показатели. Взаимосвязи переменных анализировали методом ранговой корреляции Спирмена. Различия рассматривали как достоверные при значениях степени вероятности < 0.05. Графический анализ данных проводили в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 2000), корректность аппроксимацион-ных графиков оценивали по величине коэффициентов аппроксимации (R2).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изменения ЛПО, АОП тромбоцитов и их коагулоактивности, плазменного уровня маркеров НВСК в отсутствии и при дефиците ТФ. Подопытные крысы 6 недель получали ежедневно с рационом ТФ в дозах, равных 25, 50 или 75% потребности, контроль получал ТФ в соответствии с потребностью, одна группа ТФ не получала (Е-авитаминный рацион). Пробы крови брали через 2,4 и 6 недель.

Из данных табл. 1 видно, что при Е-авитаминном питании изменяется через 4 недели часть, а через 6 - все показатели: растет уровень фф. РЗ и Р4, ОКАТ, спонтанной и АДФ-агрегации. К тем же срокам вырос уровень маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ и D-димеров) и упала толерантность к тромбину (ТкТР). Одновременно ускоряется в тромбоцитах ЛПО (рост уровня ДК и ТБК за 4, и заметнее за 6 недель) и снижается антиоксидантньш потенциал (АОП). Все сдвиги ограничиваются введением с рационом ТФ в количестве, равном 25 и 50%, и особенно 75% потребности. Вместе с тем, отличия, вызванные дефицитом ТФ, не исчезают полностью, особенно изменения ТкТР.

Изменения в тромбоцитах ЛПО, АОП, коагулоактивности, уровня в плазме маркеров НВСК и ТкТР при количестве токоферола, эквивалентном лечебным дозам. Крысы в течение 6 недель получали ежедневно с рационом ТФ соответственно суточной потребности, или в количествах, превышающих потребность в 4, 6 и 8 раз. Пробы брали через 2,4 и 6 недель.

Таблица 1. Влияние рациона без ТФ и с его дефицитом на уровень маркеров НВСК, коагулоактивиость тромбоцитов, НПО и АОП в них и ТкТР _

Показатели Контроль (крысы получали ТФ в дозе 1.5 мг/сут), п -15 Крысы получали ТФ в дозах, составляющих часть суточной потребности, % (п = 5 в группе)

0,0 25 50 75

Ф. Рз,% 88.411.0 86.9±1.3 90.4±1.2 99.011.3* 87.911.3 88.011.2 99.811.2 87.911.3 90.011.2 99.811.2 87.111.4 88.011.3 96.311.1

Ф. Рд, С 3.210.02 3.310.02 3.410.04 4.410.03* 3.4Ю.03 3.610.04* 3.810.03* 3.4Ю.03 3.610.04* 3.8Ю.03* З.ЗЮ.04 3.5+0.07* 3.610.04*

ПДФ, мг% 15.5±0.9 15.311.2 16.1±1.4 19.911.1* 15.211.0 16.811.3 19.111.1* 15.011.0 17.211.2 18.411.1* 15.411.0 16.511.2 18.111.5

РКМФ, мкг/мл 24.1±1.1 24.611.3 24.810.8 32.5Ю.8* 24.711.0 25.410.8 27.011.3* 24.0 ±1.0 25.110.8 26.011.0* 24.111.0 24.6Ю.8 25.011.3

Р-Д, мкг/мл 0.2210.008 0.2010.011 0.21Ю.009 0.2910.006* 0.2110.012 0.2010.011 0.2710.009* 0.22Ю.014 0.2110.013 0.2610.009* 0.2210.009 0.2310.012 0.2510.006*

ОКАТ, % 91.2±2.3 88.212.3 98.912.1* 11313.3* 88.912.4 96.312.0 100+3.3* 90.212.3 95.012.0 99.113.3* 89.212.3 93.512.3 97.0+3.1*

СА, % 5,5±0.08 5,910.08 6,910.04* 8,710.07* 5,410.07 6,110.04* 7,510.06* 5,910.08 6,ЗЮ.06* 7.0Ю.03* 6.0Ю.04 5,910.08 6,410.03*

АДФ-АГ, % 61.1±1.4 61.011.7 65.011.0 76.911.7* 60.011.9 64.111.1 75.611.3* 61.211.3 63.211.8 72.011.2* 60.811.4 63.511.0 68.010.9

ДК, А/мгЛП 0.05110.004 0.056+0.001 0.060Ю.002* 0.06710.001* 0.056Й.003 0.05810.003 0.06110.002* 0.055Ю.004 0.05610.003 0.05810.001* 0.05410.003 0.05510.004 0.05310.003

ТБК, ед7мг ЛП 0.7210.03 0.7210.03 0.7910.02* 0.8210.03* 0.70М.04 0.77Ю.01* 0.79Ю.02* 0.7110.03 0.7510.02* 0.7610.01* 0.7510.04 0.74Ю.02 0.7810.04

ПИ, мин/мл 45.6±1.2 45.011.5 40.211.4* 38.711.1* 46.711.8 44.111.4 39.711.2* 46.211.3 44.011.3 42.911.1* 45.712.1 45.911.3 41.611.7

СО, м3/мл/мин 0.77±0.05 0.74Ю.04 0.82Ю.02* 0.8810.03* 0.7310.05 0.74±0.04 0.8410.02* 0.7510.04 0.7910.03 0.8110.02 0.7610.05 0.7710.04 0.73+0.02*

ТкТР, % 100±2.7 93.411.5 83.111.4* 74.7±1.3* 97.111.7 89.711.3* 85.6±1.2* 97.011.9 88.411.5* 89.911.3* 98.311.9 91.911.0* 92.И1.1*

Обозначения: ПДФ - продукты деградации фибрина, РКМФ - растворимые комплексы мономерного фибрина, 1Э-Д - О-димеры; ОКАТ - общая коагуляционная активность тромбоцитов, СА - спонтанная агрегация, ДК - диеновые конъюгаты, ЯП - липопротеиды, ТБК - продукты, взаимодействующие с тиобарбитуровой кислотой, ПИ - период индукции, СО - скорость окисления, ТкТР - толерантность к тромбину; 1-я, 2-я и 3-я строки в столбцах 3, 4, 5 и 6 - пробы взяты соответственно через 2,4 и 6 недель; *- достоверные отличия от контроля.

Как видно из табл. 2, через 4 недели у крыс, получающих ТФ в 4-х кратной дозе, снижена коагулоактивиость тромбоцитов (упал уровень фф. РЗ и Р4, ОКАТ, замедлена спонтанная и АДФ-агрегация). Такая же степень снижения и через 6 недель от начала опыта. При введении 6-кратной дозы ТФ снижение коагулоактивности тромбоцитов наступает уже через 2 недели, усугубляется за 4, оставаясь таким через 6 недель. В целом степень сдвигов выше, чем при введении 4-кратной дозы ТФ. Уровень маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ и Б-димеров) также падает при 4-кратной и заметнее - при 6-кратной дозе ТФ. Отличий между степенью изменений НВСК при 6-

и 8-кратной дозе ТФ не обнаружено. Заметнее снижается интенсивность ЛПО (по уровню ДК и ТБК) при 4-хкратной дозе ТФ, и растет АОП (удлинение ПИ и уменьшение СО). При 6-кратной дозе ТФ сдвиги ещё значительнее. С увеличением дозы ТФ до 8-кратнон динамика замедления ЛПО и прироста АОП такая же, как и при 6-кратной дозе.

Таблица 2. Влияние рациона с ТФ в дозах, превышающих потребность в 4, 6 и 8 раз на уровень маркеров НВСК, коагулоактивность тромбоцитов, ЛПО и АОП в них и ТкТР

Показатели Контроль (получали ТФ в дозе 1.5 мг/сут), Крысы получали ТФ в дозах, превышающих потребность в:

п -15 4 раза 6 раз 8 раз

89.1±1.2 81.011.3* 78.011.3*

Ф. Р3,% 87.9±1.1 78.8±1.1* 77.311.1* 66.911.1*

69.3±1.6* 66.111.6* 61.011.6*

3.0±0.02* 2.610.03* 2.210.07*

Ф. Р4. С 3.310.01 2.8±0.03* 2.310.04* 2.0Ю.04*

1.710.02* 1.510.02* 1.510.07*

14.0±0.7* 12.711.1* 12.011.1*

ПДФ, мг% 15.3±0.8 13.4±1.1* 11.211.0* 10.811.0

12.0±0.7* 10.611.1* 9.8Ю.9*

РКМФ, м кг/мл 21.010.6* 20.010.7* 19.610.9*

23.9±1.0 19.911.2* 18.311.0* 17.911.5*

18.3±0.8* 15.010.6* 14.811.4*

о-д, м кт/мл 0.18±0.010* 0.17Ю.011* 0.1810.011*

0.20±0.006 0.17±0.011* 0.1510.012* 0.1410.012*

0.16+0.008* 0.1310.011* 0.1210.009*

87.0±2.4* 86.212.1* 85.712.1*

ОКАТ, % 90.1±2.4 84.0±2.0* 84.211.9* 83.812.2*

83.213.0* 78.313.1* 77.713.1*

5.2Ю.04* 4,610.06* 4,410.04*

СА, % 5,5±0.08 5,010.03* 3.9Ю.07* 3,610.05*

4,310.02* 3.110.04* 2.9Ю.04*

58.111.1* 56.011.2* 56.111.4*

АДФ-АГ, % 61.111.4 54.411.2* 51.111.6* 50.811.1*

49.911.4* 42.011.1* 41.410.9*

ДК, А/мг ЛП 0.045±0.003* 0.042Ю.001* 0.03710.003*

0.051±0.004 0.04110.002* 0.039Ю.003* 0.03410.003*

0.03610.002* 0.031Ю.002* 0.02610.002*

ТБК, ед./мг ЛП 0.61Ю.02* 0.6110.04* 0.5810.03*

0.72±0.03 0.5710.04* 0.5410.03* 0.5110.02*

0.51±0.03* 0.4610.03* 0.4210.02*

ПИ, мин/мл 45.6±1.2 47.611.1* 47.011.0* 54.911.0* 55.911.1* 57.8Ю.9* 60.011.3*

41.811.1* 60.111.2* 63.011.1*

3со, м /мл/мин 0.64Ю.04* 0.6110.03* 0.58Ю.03*

0.78±0.04 0.6010.04* 0.5810.02* 0.5110.04*

0.5210.03* 0.47Ю.03* 0.38Ю.05*

12012.4* 128±2.3* 13312.9*

ТкТР, % 10012.9 128±2.6* 135±2.6* 13813.1*

13711.8* 14511.9* 14811.7*

Обозначения: как к табл. 1; 1-я, 2-я и 3-я строки в столбцах 3,4 и 5 соответственно через 2,

4 и 6 недель

Толерантность к тромбину (ТкТР) увеличивается за 2 недели при введении 4-кратной дозы ТФ, заметнее за 4 и особенно за 6 недель. Высок прирост ТкТР и на всех этапах введения 6-кратной дозы ТФ. Увеличение дозы ТФ до 8-кратной не изменяет эффекта 6-кратной дозы. Введение ТФ в дозах, превышающих суточную по-

требность в 4 и в 6 раз, прогрессивно снижает коагулоактивность тромбоцитов, уменьшает интенсивность НВСК и ЛПО, способствуя росту антиоксидантного потенциала ТкТР. Повышение дозы до 8-кратной не изменяет эффекта.

Изменения ЛПО и АОП в клетках крови при введении токоферола в дозе, превышающей потребность в 6 раз (9 мг/сут). Выше показано, что отсутствие ТФ в рационе ускоряет ЛПО и снижает АОП, а избыток вызывает обратный эффект, что зависимость между ЛПО и НВСК положительна, а между АОП и НВСК - отрицательна, как это находили и в других ситуациях [ИЛ.Аптекарь, 2003]. Согласно задачам работы далее мы оценивали ЛПО и АОП при нагрузке ТФ не только в тромбоцитах, но и в других клетках крови, используя 6-кратную дозу ТФ - при её введении заметно меняются контролируемые нами величины, а дальнейшее увеличение дозы не усиливает эффектов (табл. 2). Данные табл. 3 (схема опыта - в графах таблицы) свидетельствуют, что интенсивность ЛПО в тромбоцитах сопоставима (по уровню липидпероксидов ДК и ТБК), но выше, чем в других клетках (напомним, что количество клеток, вносимых в пробу, получали из одинаковых объемов плазмы). При 6-кратной дозе ТФ снижается интенсивность ЛПО и в тромбоцитах, и в других клетках крови, но заметнее в тромбоцитах. Таким образом, клетки крови по способности реагировать на сдвиги интенсивности ЛПО располагаются так: тромбоциты > моноциты > пейтрофилы > эритроциты. Это же относится и к показателям АОП: степень удлинения ПИ после нагрузки ТФ максимальна в тромбоцитах, а СО минимальна.

Таблица 3. Изменения ЛПО и АОП в тромбоцитах, моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах (сверху вниз строки 1,2,3 и 4 соответственно) после четырехнедельного введения _ ТФ в 6-кратной относительно потребности дозе_

Показатели Контроль Крысы получали ТФ, 9 мг/сут

0.049±0.004 0.02010.0003 (59)*

ДК, 0.03210.003 0.01910.0002 (40)*

А/мгЛП 0.027±0.002 0.02210.0003 (1В)*

0.021 ±0.002 0.016+0.0004 (19)*

0.76±0.056 0.39±0.024 (68)*

ТБК, 0.54±0.004 0.3810.025 (29)*

ед./мг ЯП 0.33±0.003 0.28+0.006 (14)*

0.29±0.002 0.26+0.03 (11)*

48.5±2.3 67.2±1.3 (39)*

ПИ, мин/мл 48.512.3 46.4±2.1 59.311.4 (23)* 54.112.0 (17)*

47.3±2.0 51.011.8 (8)*

0.69±0.04 0.39+0.02 (43)*

СО, 0.64+0.03 0.5410.03 (16)*

мм3 в мин 0.61±0.04 0.51Ю.02 (16)*

0.63+0.05 0.56Ю.03 (11)*

Обозначения - как в табл. 1; в столбце 3 в скобках - отклонения от контроля (в %); * - достоверное отличие от контроля; число крыс на каждом этапе опытов равно 30, п = 6.

Установив это, в следующих опытах мы изучали сдвиги в гемостазе у крыс, которым вводили клетки, выделенные из плазмы крови животных, не получавших ТФ и у крыс, получавших ТФ в суточной потребности либо в избытке.

Коагулоактивность тромбоцитов и НВСК после внутривенного введения крысам клеток крови, выделенных у крыс, нсполучавших ТФ и получавших его. Для оценки изменений, возникающих после инфузии животным тромбоцитов, моноцитов, нейтрофилов или эритроцитов, в опыты взяли три группы крыс (по 24 особи). Крысы 1-й группы не получали ТФ, 2-й группы получали ТФ соответственно потребности, 3-й группы - в 4-кратной против потребности. Через 4 недели брали

пробы крови (4 мл/100 г массы тела). Отделяли плазму, пулировали и выделяли тромбоциты, моноциты, нейтрофилы и эритроциты. Ресуспелдировали клетки 0.14 М раствором №С1 в объеме, равном ХА от объема плазмы, взятой для их выделения. Суспензию клеток вводили в яремную вену интактным крысам (5 мл/кг массы тела). Контрольным крысам вводили тог же объем растворителя. Количество вводившихся клеток равнялось их содержанию в 0.5 мл плазмы. В пересчете на 1 кг массы тела крысы-реципиента это около 10 % общего объема крови, составляющего приблизительно 5% от массы тела. Контрольным крысам вводили такой же объем растворителя. Пробы после инфузии клеток брали через 30 мин. Из результатов опыта (табл. 4) видно, что через 30 мин после введения 0.14 М раствора №С1 (контроль) ни один из показателей не отличался от найденных у интактных крыс (табл. 2), следовательно, эти животные - корректная контрольная группа.

Таблица 4. Содержание маркеров НВСК в плазме через 30 мин после инфузии тромбоцитов, моноцитов, нейтрофилов или эритроцитов, взятых у крыс, которые не получали ТФ (1-я строка), получали ТФ в суточной потребности (2-я строка) и получали ТФ в 4-кратной дозе (3-я строка) в течеиие 4 недель, п - 6 на каждом этапе.

Показатели Контроль Вводили клетки крови, выделенные из плазмы крыс, не получавших токоферол в течение 4-х недель:

Тромбоциты моноциты нейтрофилы эритроциты

Рз, % 86.5±1.3 99.712.2* (19) 94.0±2.2* (14)* 96.8±2.2* (3)* 96.4±1.2* (14) 92.3±1.2* (7) 88.9±1.2*(3)х 91.011.1* (6) 89.0±1.3*(3)х 87.811.1* (2)х 89.312.3* (3) 88.111.3 87,811.1

Р4,С 3.2±0.04 3.8±0.02*(19) 3.7Й.01'(16)Х 3.5Ю.01*(9)Х 3.6±0.02* (12) ~3.5l0.02 (9) 3.4±0.02 (6) х 3.5±0.02*(9) 3.4Й.02*(6)Х З.ЗЮ.02 3.310.05* 3.210.05 3.310.05

ОКАТ, % 90.2±2.3 10912.4* (32)* 10112.4* (12)* 96.1±2.4* (7)х 10312.1* (7) 95.2±2.1*(5)х 94.2±2.1* (4)х 97.712.2*(9) 95.712.1*(7)х 93.312.0*(3)х 94.3±2.0*(4) 93.212.1 *(3)х 91.112.0х

СА,"/. 5,5±0.06 7,9±0.05* (44)* 6,5±0.02*(18)х 6,1±0.02*(11)х 7.0±0.04* (27) 6.3±0.03* (14)х 5.8±0.04* (5)х 5,9±0.02* (7) 5,810.02* (5)х 5,7±0.02*(4)х 5,810.02* (5) 5,710.02* (4) 5,610.02 (2)х

АДФ-АГ, % 61.2±1.5 97.1 ±1.4* (59) 90.1±1.2*(47)х 84.911.7* (39)х 77.211.2* (26) 70.0±1.2* (31) 66.311.4* (15)" 69.211.6" (13) 66.911.4* (10)х 64.111.3* (5)х 65.011.6* (6) 65.211.4* (6) 62.711.5 (3)*

ПДФ, мг% 17.2±1.0 24.8±0.4* (41) 23.2±0.3* (35)х 20.3±0.6*(18)х 19.5Ю.7* (13) 18.5Ю.7* (7) 17.9±0.7*(4)х 18.210.4* (6) 17.910.9 (4) 16.910.5 (0)х 18.111.2 17.810.9 16.911.1

РКМФ, мкг/мл 25.8±1.3 43.2±1.2* (65) 36.211.4*(38) 31.3±1.5*(27)х 29.911.2* (15) 28.911.2* (11)х 27.911.2* (8)х 26.911.1* (8) 26.611.1* (3)х 26.411.1 (2)х 26.5Ю.4 25.810.5 26.710.2

й-Д, мкг/мл 0.18Ю.004 0.29±0.014* (61) 0.23Ю.011* (27)х 0.20±0.010*(11)х 0.2310.007* (27) 0.2010.006* (11)х 0.1910.007* (6)х 0.2010.03* (11) 0.19Ю.021* (6)х 0.1910.033 (6) 0.1810.013 0.1910.024 0.1710.035

ТкТР, % 100±3.1 72.212.0* (28) 80.2±2.1*(20)х 87.2±2.0*(13)х 78.312.0* (22) 82.412.3* (18)х 90.212.0* (10)х 85.512.0* (15) 88.012.3* (12)х 93.112.1 (7)х 89.912.0* (11) 96.912.4 (ЗГ 98.912.4 (1)х

Обозначения - как в табл. 1; в скобках - сдвиг в % от контроля; * - достоверное отличие от контроля; х — достоверное отличие сдвига относительно величины в первой строке того же столбца.

У крыс, которым ввели взвесь тромбоцитов на фоне Е-авитамшшого рациона (3-й

столбец, 1-я строка), уровень ф. Р3 увеличился на 19%, у тех, которым ввели тромбо-

циты на фоне рациона, содержащего ТФ в дозе, равной потребности (3-й столбец, 2-я

строка), прирост уровня ф. Р3 - 14% (р < 0.05), у крыс, которые получали ТФ в 4-

кратной дозе (3-й столбец, 3-я строка) прирост составил только 3% (разница с дан-

ными 1-й 2-й строки достоверна). Примерно также отличается и прирост уровня ф. Р4, ОКАТ, спонтанной агрегации и АДФ-агрегации в отсутствии ТФ, при дозе ТФ,

равной потребности и при 4-кратной дозе. Сходны и сдвиги уровня маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ и О-димеров): максимальное увеличение после инфузии тромбоцитов на фоне Е-авитаминного рациона, меньшее - при инфузии на фоне дозы ТФ, равной потребности, и и ещё меньшее - на фоне ТФ в 4-кратной дозе.

У реципиентов, которым инфузировали моноциты, прирост показателей коагуло-активности тромбоцитов (фф. Р3 и Р4, ОКАТ, спонтанная и АДФ-агрегацня) и интенсивности НВСК (ПДФ, РКМФ и Б-димеры) был ниже, чем после инфузии тромбоцитов на фоне Е-авитаминного рациона, и рационов, содержавших ТФ в дозе, равной потребности и в дозе, превышающей её в 4 раза. Ещё менее выражены сдвиги всех величин у крыс, которым инфузировали взвесь нейтрофилов, хотя направленность и динамика изменений в зависимости от обеспеченности рациона витамином Е сохранялась. Сохранялась та же динамика всех величин и после инфузии эритроцитов, но степень сдвигов была заметно ниже, чем после инфузии нейтрофилов. Толерантность к тромбину после инфузии тромбоцитов от доноров, содержавшихся на Е-авитаминном рационе, снижается на 28%, от доноров, получавших ТФ в соответствии с потребностью - на 20%, и от доноров, получавших 4-кратный избыток ТФ - на 13%. Эффекты донорских моноцитов, нейтрофилов и эритроцитов на толерантность к тромбину менее выражены, как и их эффекты на коагулоактивность тромбоцитов и НВСК.

Таким образом, по интенсивности изменений, возникающих при инфузии клеток крови на фоне Е-авитаминоза, на фоне нормальной и избыточной обеспеченности ТФ, сохраняется ранее найденная картина: тромбоциты > моноциты > нейтро-филы > эритроциты.

Таким образом, инфузия тромбоцитов, моноцитов, нейтрофилов или эритроцитов сопровождается у реципиентов ростом коагулоактивности тромбоцитов, ускорением НВСК и снижением ТкТР, степень которого зависит от вида клеток и обеспеченности организма реципиентов витамином Е. Содержание маркеров НВСК и ТкТР при пшертромбинемии, моделируемой на фоне Е-авитаминного питания и питания рационом с токоферолом. Чтобы подтвердить или исключить влияние Е-авитаминного питания и введения ТФ на сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, интенсивности НВСК и ТкТР мы моделировали состояния, характеризующиеся гипертромбинеми-ей. Использованы разные по природе воздействия, обусловливающие рост общей свертываемости крови: инъекция тромбина, адреналина или кровопотеря. Известно, что эти воздействия повышают общую свертываемость крови, вызывают вторичную гипофибриногенемию, активацию фибринолиза, и другие сдвиги, свидетельствующие об ускоренном тромбиногенезе [В.Г.Соловьев, 1997; О.Ф.Мысник, 2001а, б; А.Ш.Бышевский и др., 2004, 2006; N. УататоЮ е.а., 1991]. В частности, показано [А.Ш.Бышевский и др., 2003], что введение тромбина (1 мл/кг, активность - 25 с по времени свертывания 0.2% раствора фибриногена) не вызывает гибели крыс, но ведет к гипофибриногенемии и другим признакам пшертромбинемии. В опытах использовали дозы тромбина, уменьшенные в 2, 3 и 4 раза, чтобы оценить эффекты ТФ при разных степенях тромбинемии. Поэтому вводили разбавленный в 2, 3 гаи 4 раза основной раствор тромбина, что позволило использовать одинаковый объем инъецируемого материала при введении уменьшающегося в 2, 3 и 4 раза количества тромбина (крысам контрольной группы - «слепой опыт» - вводили тот же объем растворителя - 0.14 М №С1). Результаты опытов, представленные в табл. 5, выявили следующее:

1) введение в вену разных количеств тромбина сопровождалось приростом коагуло-активности тромбоцитов, зависимым от дозы тромбина - чем меньше доза, тем меньше прирастает уровень фф. Р3 и Р4, ОКАТ, СА и АДФ-АГ;

2) уровень маркеров НВСК также прирастает после введения тромбина в степени, пропорциональной количеству введенного энзима;

3) ТкТР снижается в зависимости от дозы: больше доза - заметнее снижена толерантность к тромбину. Это подтверждает сдвиги, описанные выше: коагулоактив-ность тромбоцитов, НВСК и ТкТР зависят от степени тромбинемии, которая в данном случае устанавливается экспериментатором, следовательно, интенсивность сдвигов коагулоактивности тромбоцитов, НВСК и ТкТР позволяют ориентироваться в степени тромбинемии.

Таблица 5. Коагулоакгивность тромбоцитов, интенсивность НВСК и ТкТР у крыс через 30 _мин после инъекции в яремную вену разных доз тромбина_

Показатели Контроль (ввели 0.14М р-р ЫаС1), п = 12 Ввели разведения основного раствора тромбина, п = 7 в группе.

1:1 1:2 1:3

ф. Рз, % 90.3±2.0 157±2.5* 139±2.2* 118±2.3* 141±2.1* 129±2.3* 104±2.3* 118.0±2.2* 100±2.2* 98.0±2.2*

ф.Р<,с 3.1±0.02 4.9±0.03* 4.4±0.03* 4.1 ±0.03* 3.9±0.02* 3.7±0.02* 3.5±0.01* 3.6±0.03* 3.4±0.02* 3.3±0.01*

ОКАТ, % 89.8±2.0 156±2.5* 147±2.3* 124±2.3* 137 ±2.1* 128±2.0* 112±2.2* 124±2.1* 113±2.0* 96.9±2.2*

СА, % 5,1±0.03 7,9±0.04* 6,7±0.06* 6,3±0.03* 7,3±0.04* 6,3±0.03* 5,7±0.03* 6,0±0.02* 5,8±0.04* 5,2±0.03*

АДФ-АГ, % 60.0±1.3 98.2±1.5* 76.2±1.5* 71.2±1.5* 86.9±1.4* 68.2±1.5* 67.0±1.5* 79.1±1.6* 69.9±1.3* 65.2±1.5*

ПДФ, мг% 16.1±1.0 39.8±1.3* 32.4±1.6* 25.7±1.6* 31.1±1.4* 26.0±1.1* 20.1 ±1.0* 24.1±1.0* 19.2±1.0* 18.3±0.8*

РКМФ, мкг/мл 24.9±1.1 49.1±2.1* 46.1±2.0* 40.7±2.1* 37.1±1.3* 31.6±1.2* 29.2±1.2* 33.5±1.1" 29.8±0.7* 27.1±0.7*

И-Д, мкг/мл 0.18±0.04 0.56±0.02* 0.44 ±0.02* 0.31 ±0.02* 0.44 ±0.04* 0.38±0.03* 0.27±0.06* 0.31±0.02* 0.27±0.06* 0.23±0.01*

ТкТР, % 100±2.9 12.5±1.0* 29.7±1.7* 59.2±1.7* 34.5±.1.9* 51,5±.1.5* 76.5±.1.8* 59.7±1.9* 75.4±2.1* 81.6±3.0*

Примечание: в столбцах 3-5 строки 1-3 крысы, содержавшиеся на Е-авитаминном рационе, на рационе с ТФ в дозе, равной потребности и в 4-кратной дозе; *- достоверные отличия от контроля.

Кроме того, можно констатировать, что интенсивность сдвигов, вызванных инъекцией тромбина, максимальна, если энзим вводили крысам, получавшим рацион без ТФ. При введении тромбина крысам, получавшим ТФ в дозе, равной потребности, сдвиги менее выражены, и ещё слабее они выражены у животных, которые получали рацион с 4-хкратным количеством ТФ. Итак, гипертромбинемия, создаваемая введением в кровоток разных и не вызывающих гибели количеств тромбина, сопровождается пропорциональным дозе ростом коагулоактивности тромбоцитов, ускорением НВСК и снижением ТкТР. Степень изменений зависит от обеспеченности организма подопытных токоферолом - они максимальны при Е-авитаминном питании, уменьшены при содержании ТФ в дозе, равной суточной потребности и ограничены при

избытке ТФ в питании. Чтобы подтвердить или исключить выводы, к которым приводит анализ результатов этой серии опытов, мы использовали альтернативные приемы моделирования гипертромбинемии - введение адреналина и кровопотерю.

Адреналин - эффектор активации гемостаза [В.П.Балуда, 1995]. Взаимодействуя с адренорецепторами подтипа а2, адреналин снижает содержание цАМФ [C.RJones е.а., 1985] и проницаемость мембран для внеклеточных Са2+ [L.H.Block е. а., 1985], ингибирует аденилатциклазу. Сдвиги концентрации Са2+ в цитозоле изменяют активность протеинкиназы [S.Watson е. а., 1995], а следовательно и скорость фосфори-лирования и способность к агрегации [О.В.Галенко, Е.В.Платонов, 1996; L.H.Block е. а., 1985]. Не исключено и осуществление адреналининдуцируемой агрегации за счет стимуляции обмена Na+ и К+ через изменения концентрации инозитола [P.R.Tranter е. а., 1989]. Важно, что в том и другом случае активация тромбоцитов адреналином повышает гемостатический потенциал [M.P.Gawaz, I.Ott, 1996; M.P.Gawaz, 2001], обусловленный ускоренным тромбиногенезом.

Выбирая дозу адреналина и путь введения с учетом длительности влияния на свертываемость крови, мы исходили из данных В.П.Бабич [1972], подтвержденных недавно [М.К.Умутбаева, 2005; Р.Г.Алборов, 2006]. Опыт спланирован так: 1. Контроль - крысы содержались на полноценном рационе; 2. Подопытные группы 1-я, 2-я и 3-я - крысы в течение 4-х недель получали соответственно Е-авитаминный рацион, рацион с ТФ в дозе, равной потребности и в 4-кратной дозе. По прошествии 4-х недель крысам контрольной группы инъецировали подкожно 0.14 М раствор NaCl (1 мл/кг), крысам подопытных групп подкожно вводили раствор адреналина солянокислого (1.0 мл/кг), содержащий 30 мкг адреналина. Пробы брали через 30 мин.

Из данных табл. 6 следует, что введение адреналина привело на момент отбора проб у крыс всех групп к росту уровня фф. Р3 и Р4, ОКАТ, спонтанной и АДФ-агрегации, уровня маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ, D-димеров). Это свидетельствует об активации тромбиногенеза адреналином, вводимым подкожно, и согласуется с данными, согласно которым при той же дозе адреналина через 15 мин наблюдается тенденция, реализующаяся статистически после 30 мин [Р.Г.Алборов, 2006]. Направленность сдвигов, а также их зависимость от содержания ТФ в рационе совпадает с тем, что мы наблюдали при введении в кровоток тромбина.

Важно, что при содержании животных на Е-авитаминном рационе изменения максимальны, а их степень ниже при введении адреналина на фоне рациона с ТФ в количестве, равном потребности, и ещё ниже при 4-кратном избытке ТФ. Всё же мы провели дополнительно опыты, в которых как воздействие, вызывающее тромбине-мию, применили кровопотерю, основываясь на том, что при кровопотере 25 % общего объема крови растет гемостатический потенциал [В.Г.Соловьев, 1997; Р.Г.Алборов, 2006]. Сохранили схему рассмотренного выше эксперимента: контрольные и подопытные крысы в течение 4-х недель получали сбалансированный рацион (контроль - рацион с ТФ в соответствие с потребностью, 1-я подопытная группа - Е-авитаминный рацион, 2-я - рацион с ТФ в дозе, равной суточной потребности, и 3-я - с 4-кратной против потребности дозой ТФ). Через 4 недели вызывали у подопытных крыс кровопотерю: из яремной вены справа отбирали по 12.5 мл крови на кг массы тела - примерно 25-30 % от общего объема циркулирующей крови, - и через 1, 4 и 8 ч после этого брали пробы крови, чтобы проследить в динамике влияние кровопотери, как фактора стимулирующего свертываемость, на изучавшиеся показатели состояния гемостаза, и зависимость сдвигов во времени от обеспеченности организма токоферолом.

Таблица 6. Коагуляционная активность тромбоцитов, интенсивность НВСК и ТкТР у крыс через 30 мин после ииъекции в яремную вену адреиапина (30 мкг/кг)._

Контроль Через 30 мин после инъекции

Показатели (ввели 0.14 М р-р ЫаС1), адреналина (п = 7 на этапе)

п = 11

Рз,% 89.4±1.7 176±2.8*

87.9±1.8 13112.5*

88.7±1.7 10912.2*

Р«,С 3.5±0.02 6.410.04*

3.4±0.03 5.210.03*

3.6+0.04 4.510.04*

ОКАТ, % 92.012.1 17612.6*

13912.4*

11412.7*

СА, % 5,2±0.02 8,310.05*

7,110.06*

5,810.05*

АДФ-АГ, % 61.5±1.6 11111.9*

84.111.6*

75.011.4*

ПДФ, мг7. 16.0±1.3 34.911.8*

30.1+1.6*

26.211.1*

РКМФ, мкг/мл 24.5±1.0 53.912.1.*

43.912.3. *

34.812.0 *

Р-Д, мкг/мл 0.20±0.009 0.5210.007*

0.4310.004*

0.3210.006*

Толерантность к 100±3.1 14.810.9*

тромбину, % 39.911.7*

- 59.814.7*

Обозначения как в табл. 1; * - достоверные отличия от контроля; в столбцах 3, 4 и 5 строки 1-я, 2-я и 3-я - крысы получали соответственно Е-авитамшшый рацион, рацион с ТФ в дозе, равной потребности и в 4-кратной дозе.

Результаты представлены в табл. 7. Здесь видно, что через 1 ч после кровопотери повышается коагулоактивность тромбоцитов (прирост уровня фф. Р3 и Р4, увеличение ОКАТ, ускорение спонтанной и АДФ-агрегации), ускоряется НВСК (рост уровня ПДФ, РКМФ и О-димеров) и снижается ТкТР. Как и после введения тромбина или адреналина, максимальное увеличение всех величин наблюдается после кровопотери у крыс, получавших рацион без ТФ, менее заметное - после кровопотери у крыс, получавших ТФ в дозе, равной потребности, и минимальное - у крыс, получавших 4-кратный избыток ТФ. С увеличением интервала между кровопотерей и отбором пробы сохраняется, постепенно уменьшаясь, разница между контролем и подопытными группами. Отношение же между уровнем ТФ в рационе и степенью отличий от контроля остается постоянным: максимальный сдвиг на фоне Е-авитаминного питания, уменьшенный - на фоне рациона с ТФ в дозе, равной потребности, и наименьший -при 4-кратном содержании ТФ в рационе.

Не касаясь соотношений между коагулоактивностью тромбоцитов, НВСК и ТкТР в рассмотренной группе опытов, можно констатировать следующее: 1) гипертром-бинемия, вызываемая неодинаковыми по природе воздействиями, влечет за собой рост коагулоактивности тромбоцитов, ускорение внутрисосудистого свертывания и снижение ТкТР, т.е. изменения, которые указывают на развитие тромбофилической

тенденции; 2) степень этих изменений увеличивается в отсутствии ТФ в рационе, на котором содержали животных перед воздействиями, провоцирующими гипертром-бинемию, и ослабляется при увеличенном против потребности количестве ТФ в рационе. Возможно, дефицит ТФ в питании способствует развитию тромбофилической наклонности, а избыток ТФ повышает устойчивость к воздействиям, способным вызывать претромботическое состояние.

Завершая опыты по оценке зависимости эффектов гипертромбинемии на коагуло-активность тромбоцитов, интенсивность НВСК и ТкТР от токоферола, мы сопоставили данные об этих величинах в разные сезоны у крыс, получающих Е-авитаминный рацион и рационы с ТФ в дозе, равной потребности и с 4-кратной дозой. Целесообразность таких исследований определена сведениями о сезонных сдвигах гемостатического потенциала, повышенного зимой в сравнении с летом [В.П.Балуда и др., 1995; Б.И.Кузник и др., 1976, 1989; А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1986]. Сезонные изменения гемостаза мы рассматривали как природную модель изменений степени тромбинемии. В разные сезоны 2007 г (январь, март, июль и ноябрь) формировали по три группы крыс с одинаковой массой тела (175±12.5 г, самцы) и в течение 4-х недель (с 1- 3 числа по 20-30) содержали одну группу на рационе без ТФ, вторую - с ТФ в дозе, равной потребности, и третью с ТФ, в дозе, превышающей потребность в 4 раза. Пробы брали через 4 недели (табл. 8).

Отклонения от среднегодового значения зимой максимальны, летом минимальны, наибольшие сдвиги у крыс, рацион которых не содержал ТФ, менее выражены - у получавших ТФ в дозе, равной суточной потребности, и ещё ниже у получавших 4-х кратную дозу ТФ. В целом, сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, НВСК и ТкТР в разное время года зависят от обеспеченности рациона ТФ.

Отметим, что не было задачей наших исследований, но важно для экспериментаторов и клиницистов: во многих ситуациях найдено соответствие между сдвигами коагулоактивности тромбоцитов и НВСК с одной стороны и изменением ТкТР - с другой, а также то, что чем ниже уровень маркеров НВСК, тем выше ТкТР. В данном случае мы выявили эту связь в ситуациях, ранее не изученных.

Анализируя изменения липидпероксидации, коагулоактивности тромбоцитов, непрерывного внутрисосудистого свертывания крови у крыс, получавших Е-авитаминный рацион и рацион, включающий ТФ в количестве, равном потребности или составляющем 25, 50 и 75 % от неё, а также в дозах, превышающих потребность, мы нашли определенные зависимости, а оценивая графически динамику взаимосвязи переменных методом ранговой корреляции Спирмена, установили, что сдвиги всех показателей в зависимости от доз ТФ и длительности опытов близки к линейной (судя по коэффициенту аппроксимации линейных трендов).

Связь между ускорением ЛПО и снижением АОП тесная отрицательная (ге = -0.89), между ЛПО и коагулоактивностью тесная прямая (к = 0.86), между АОП и коагулоактивностью отрицательная (ге = -0.84). Толерантность к тромбину отрицательно, но не тесно ассоциирована с ЛПО (ге = - 0.67), НВСК ассоциирована тесно положительно с ЛПО (ге = 0.87), с коагулоактивностью тромбоцитов (ге = 0.74) и отрицательно - с АОП (ге = - 0.69). Те же зависимости сохраняются при недостаточном и избыточном введении ТФ.

Таблица 7. Коагуляционная активность тромбоцитов, интенсивность НВСК и ТкТР у крыс через 1,4, 8 ч после кровопотери

Показатели Контроль (ввели 0.14 М р-р NaCI), и = 12 Пробы взяты после кровопотери через: 1ч 4ч 8ч

ф. Рз,% 91.1±2.1 189±4.5* 158±2.2* 15412.5* 152±2.0* 138±2.2* 99.812.1* 129±2.4* 103.9±2.1* 94.112.9

Ф.Рд.С 3.3±0.01 5.3±0.02* 4.9±0.01* 4.0±0.03* 4.9Ю.03* 4.5±0.03* 3.6Ю.01* 4.3±.02* 4.1±.03* 3.5±.04

ОКАТ, % 90.8±2.3 149±2.5* 131±2.5* 104±2.3* 127±2.3* 102±2.5* 99.2±2.2* 120±2.0* 99.8±2.0* 93.1±2.4

CA, % 5,2±0.02 7,1±0.05* 6,6±0.04* 6.0Ю.02* 6.8±0.04* 6,1 ±0.02 5.9±0.04* 5.9±0.03* 5. 7±0.04* 5.4±0.04

АДФ-АГ, % 61./±1.5 103±1.9* 78.4И.8* 73.2±1.9* 81.0±1.6* 71.411.7* 67.0±1.5* 77.1±1.9* 66.911.2* 63.8И.7

ПДФ, мг% 15.8±1.1 66.1±1.7* 41.5±1.8* 25.4±1.6* 40.1 ±1.4* 36.0±1.1* 21.3±1.4* 26.4±1.5* 21.011.2* 17.111.6

РКМФ, мкг/мл 25.3±1.7 58.6±2.0* 47.3±2.4* 31.8±2.0* 39.7±1.1* 33.8±1.1* 29.8±1.0* 31.111.1* 28.411.2* 24.9+1.3

D-Д, мкг/мл 0.19±0.03 0.4810.04* 0.43±0.01* 0.28Й.0Г 0.38+0.03* 0.29±0.01* 0.25±0.04* 0.3210.04* 0.2610.03* 0.23+0.07

ТкТР, % 100±2.9 19.7±0.8* 31.8±1.7* 62.4±1.9* 24.9±.2.9* 44.8±.2.9* 78.4±.3.4* 45.71.2.6* 76.51.2.9* 92.81.3.9

Обозначения как к табл. 1; знак * - достоверность отличий относительно контроля. В столбцах 3, 4, 5 и 6 строки 1-я, 2-я и 3-я - крысы, содержавшиеся соответственно на Е-авитаминном рационе, на рационе с ТФ в дозе, равной потребности и в дозе 4-кратной против потребности (п = 7 в группе).

Это позволяет утверждать, что отсутствие в рационе ТФ ведет к ускорению ЛПО и к снижению АОП, что связано со снижением вклада ТФ в поддержание противо-окислительного потенциала [Е.А.Винокурова, 2006; Г.А.Сулкарнаева, 2006; H.B.Simon , 2009]. Рост интенсивности ЛПО и спад АОП сопровождается ростом коагулоактивности тромбоцитов, так как известно, что именно активация тромбоцитов инициирует ускоренное образование тромбина [Е.М.Шаповалова и др., 2007; В.Ф.Антюфьев и др., 2009; Т.А.Балакина и др. 2009], что ведет к интенсификации НВСК. Видимо, исключение из рациона питания ТФ - антиоксиданта, занимающего видное место среди других соединений с противоокислительными свойствами [Е.Б.Бурлакова, 1997; EA.Klein , 2009; J.A.Satia е.а., 2009] - может ускорить в тромбоцитах ЛПО, снизить их АОП и привести к росту коагулоактивности [Е.А.Винокурова, 2006; S.B.Patil е.а., 2008], ускоряя реакцию высвобождения.

Активация тромбиногенеза - процесса, побуждаемого активацией агрегации [A.C. Шитикова, 2000; И.В.Ральченко и др., 2001; В.Ф.Киричук и др., 2005] - вызывается в наших опытах выходом из тромбоцитов фф. Рз, Р4, ускоряющих тромбино-генез через фф.УШ и IX [Л.П. Папаян, 2003; A.O.Spiel е.а., 2009], а, следовательно, и ускорение взаимодействия тромбин-фибриноген.

Таблица 8. Изменения (в % от среднегодового значения, принятого за 100%) коагуля-

Показатели Среднегодовое значение Зима Весна Лето Осень

Рз,% 10010.1 127±2.4* 11011.5* 99.4±1.1 12011 .7* 10911.1* 97.811.6 11912.0* 10811.6* 96.912.3 12111.2* 11011.4* 94.811.5

Рч. С 100±0.2 13913.8* 12612.1* 99.3±3. 130.14.8* 10812.8* 10212.6 12413.1* 11112.2* 10313.0 12912.6* 11812.2* 99.012.4

ОКАТ. % 100±0.3 136±1.8* 126±1.7* 97.7±1.4 12311.5* 11311.4* 97.8.11.7 12113.1* 11311.9* 94.912.7 12613.1* 11611.9* 97.612.6

СА, % 100±0.1 13013.5* 11713.4' 96,1±3.2 12514.0* 11412.2* 89.814.3 11112.2* 10811.4* 9412.4* 11812.4 11113.0 10012.4*

АДФ-АГ, % ЮОЮЗ 14112.9* 12011.9* 93.611.9 13211.9* 11811.9* 99.712.3 12911.4* 11811.6* 10311.5 11912.6* 11211.9* 99.312.1

ПДФ, мг% 100Ю.5 15111.8* 13011.3* 10711.2* 14211.7* 13111.3* 10812.2 13711.4* 12111.2* 10111.6 15111.9* 12212.1* 10813.1

РКМФ, мкг/мл 100±0.4 13611.9* 12411.7* 10111.8' 12911.7* 12210.9* 10311.0* 12611.0* 11911.0* 94,911.3 12911.3* 11811.6* 98,711.1

D-Д, мкг/мл 100±0.4 14611.3* 12612.1* 10011.3* 13911.5* 12111.6* 10111.0* 12311.3* 11212.3* 92.712.0* 12811.4* 11711.2* 89.311.3*

ТкТР, % 10010.2 89.011.1* 95,811.0* 12911.6* 92,01.2.2* 1171.2.1* 1351.2.4* 95.71.2.2' 1241.1.8* 1411.3.2* 94.51.1.5* 1151.2.3* 1391.2.0

Обозначения как к табл. 1; в столбцах 3,4, 5,6 строки 1-я, 2-я и 3-я - крысы, содержавшиеся соответственно на Е-авитамшшом рационе, на рационе с ТФ в дозе, равной потребности и в дозе 4-кратной против потребности (п = 13 в группе); *- достоверные отличия относительно среднегодовых значений, для которых число п равно 52 (сумма всех определений за год).

Такая возможность подтверждается тем, что с увеличением количества ТФ в рационе все изменения в этой цепи, ведущей к ускорению тромбиногенеза, ослабевают, а в присутствии ТФ в количестве, близком к суточной потребности, уже не проявляются, по крайней мере, в первые шесть недель, хотя и не исключено, что они в малой мере могут появиться в более поздние сроки нахождения крыс на рационе с относительно небольшим дефицитом токоферола.

Анализ данных, полученных при изучении доз ТФ, эквивалентных лечебным 1 позволил увидеть, что после введения 4-кратной дозы ТФ замедляется в тромбоцитах ЛПО все заметнее по мере увеличения продолжительности введения, причем практически линейно (112 = 0.98). Одновременно снижается уровень маркеров НВСК и коагулоактивность тромбоцитов, а величина АОП, напротив, растет, хотя линейность её динамики менее выражена (Я2 далек от единицы). С увеличением дозы ТФ в 6 раз характер изменения всех этих величин остается таким же, хотя сдвиги усили-

1 К сожалению, нельзя назвать конкретные для каждого случая, и даже для групп заболеваний, более определенные лечебные дозы ТФ - они разнообразны даже при одинаковых видах патологии [В.П.Мшценко и др., 2005; A. Gagné е.а., 2009}, однако чаще других используются дозы, которые хотя и не учитывают степени обеспеченности организма больного ТФ, но превосходят потребность в нем в примерно названных пределах [A.Di Stilo е.а., 2009; P.Socha е.а., 2009].

ваются - значительнее уменьшаются уровни липидпероксидов, маркеров НВСК, коа-гулоактивность тромбоцитов и толерантность к тромбину. При 8-кратной дозе ТФ в основном повторились изменения, найденные при его 6-кратной дозе.

Существенно то, что избыток ТФ в рационе ведет к угнетению ЛПО и росту АОП тромбоцитов, сопровождающемуся снижением их коагулоактивностн, замедлением НВСК и ростом ТкТР — к сдвигам, противоположным тем, которые имеют место в отсутствии ТФ в рационе и которые ослабляются при содержании ТФ в рационе в количествах, не достигающих суточной потребности. Следовательно, ТФ проявляет себя сходно с антиоксидантами невитаминной природы, в частности, с димефосфо-ном, который является синергистом антиоксидантов, свойственных теплокровным [В.С.Шидин, 2007;А.Ш.Бышевский и др. 2008; М.Кашваг е.а., 2009].

В моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах также меняется интенсивность ЛПО, поэтому и они могли оказаться задействованными в изменениях свертываемости крови. Анализ данных, полученных при изучении ЛПО и АОП в этих клетках после введении ТФ (рис. 1), указывает: а) что концентрация ДК во всех видах клеток снизилась заметно, б) что сильнее всего реагировали на введение ТФ тромбоциты. Видимо, они и являются среди других клеток крови наиболее чувствительными к действию ТФ как антиоксиданта.

□дк отбк апи асо

Рис. 1. Отклонение в % от контрольного уровня индикаторов ЛПО и АОП в клетках крови после введения крысам в течение 4- недель токоферола в 4-х кратной дозе.

АОП изменился во всех видах клеток: удлинился ПИ и уменьшилась О, причем, степень отклонения этих величин от контроля снижается от тромбоцитов к эритроцитам. Следовательно, подтверждена обратная связь между ЛПО и АОП в тромбоцитах, и установлено, что этот тип связи между ЛПО и АОП характерен и для других клеток крови. Вместе с тем, неодинаковая чувствительность разных видов клеток крови к воздействию антиоксиданта косвенно подтверждает их неодинаковую чувствительность и к его дефициту. Это согласуется с наблюдениями, согласно которым из всех клеток крови реагируют на прооксидант ускорением ЛПО активнее других тромбоциты [Р.Г.Алборов, 2004].

В итоге можно с большой долей вероятности утверждать, что эффекты отсутствия или избытка ТФ на гемостаз реализуются через его антиоксидантные свойства, и что наиболее чувствительный субстрат, на уровне которого реализуется влияние ТФ на свертываемость - это один из компонентов системы гемостаза, который и до настоящего времени называют клеточным, упоминая, правда, что корректнее его сле-

дует именовать тромбоцитарным [А.С.Шитикова, 2000; Л.П. Папаян, 2003]. Справедливость такого суждения подтверждена и в наших опытах, задачей которых изучить интенсивность НВСК, коагулоактивность тромбоцитов и ТкТР после введения крысам в кровоток тромбоцитов, моноцитов, нейтрофилов или эритроцитов от крыс-доноров, содержавшихся на рационе без ТФ, с ТФ в суточной потребности или в 4-кратной дозе. Рассмотрение сдвигов у реципиентов, которым ввели тромбоциты, моноциты, нейтрофилы или эритроциты, позволило установить, что инфузия тромбоцитов от доноров, не получавших ТФ, вызвала у реципиентов значительный подъем коагулоактивности принадлежащих им тромбоцитов: уровни фф. Рз и Р4 увеличились на 19 и 19%, ОКАТ - на 32%, спонтанная агрегация и АДФ-агрегация - на 44 и 57%. В высокой степени возросла у них и интенсивность НВСК (уровень ПДФ, РКМФ и Б-димеров прирос на 41, 65 и 61% соответственно) и значительно снизилась толерантность к тромбину - на 28%.

После введения тромбоцитов от доноров, получавших ТФ в суточной потребности, все эти изменения заметно ниже (соответственно 14, 16, 12, 18, 43, 35, 38,27 и -20%). Ещё ниже сдвиги при введении тромбоцитов от крыс, которые получали 4-кратные количества ТФ - соответственно 3,9,7,11,39,18,27,11 и -13%. Сдвиги после введения моноцитов из крови доноров, не получавших витамина Е, таковы: прирост уровня фф. РЗ и Р4, ОКАТ, СА, АДФ-АГ, ПДФ, РКМФ, Б-димеров и убыль ТкТР (степень сдвигов в % от контроля равна для каждого из показателей соответственно 14, 12, 7, 27, 26, 6, 8,11 и -15); от доноров, получавших ТФ в соответствии с потребностью - 7, 9, 5, 14, 31, 4, 3, 6 и -12; от доноров, получавших ТФ в 4-кратной дозе - 3, 6,4, 5,15,0,2, 6 и -7%. У реципиентов, которым инфузировали нейтрофилы от доноров, неполучавших ТФ, те же величины ниже: 6, 9, 9, 7, 13, 6, 8. 11 и -15; ниже они и на фоне дозы, обеспечивающей суточную потребность (3, 6, 7, 5,10, 4, 3, 6 и -12%). Намного ниже изменения после инфузии клеток от крыс, получавших 4-кратную дозу ТФ (2, 2, 3,4, 5, 0,2, 6 и -7%). После введения эритроцитов сдвиги ещё менее заметны.

Таким образом, дефицит или отсутствие ТФ в питании сопровождается ускорением НВСК, ростом коагулоактивности тромбоцитов и снижением ТкТР, возникающим на фоне ускорения ЛПО и снижения АОП не только в тромбоцитах, но и в других клетках крови. Инфузия тромбоцитов интенсивнее, чем инфузия других клеток крови, изменяет коагулоактивность тромбоцитов, НВСК и толерантность к тромбину у реципиентов.

Следовательно, дефицит ТФ в питании ведет к ускорению ЛПО в клетках крови через активацию в первую очередь тромбоцитов — клеток, являющихся одним из компонентов системы гемостаза. Рост их коагулоактивности сопровождается ускорением НВСК и снижением толерантности к тромбину. Роль других клеток в этом менее значима, хотя и они способны высвобождать липидпероксиды в плазму, интенсивность ЛПО в которой, как это показано [Р.Г.Алборов, 2006], также положительно ассоциирована с НВСК. Подтверждается это тем, что избыток ТФ в питании ведет к противоположно направленным сдвигам коагулоактивности, НВСК и ТкТР при сохранении прежних ассоциативных связей. Справедливость этих предположений подтвердилась в опытах с моделированием гипертромбинемии и использованием её природной модели.

Сходство характера связей между ЛПО и коагулоактивностью тромбоцитов, коа-гулоактивностью тромбоцитов и НВСК ставят вопрос о том, какое из этих изменений первично (коагулоактивность тромбоцитов или НВСК). Принимая во внимание

то, что активация тромбоцитов при многих патологических состояниях инициирует ускоренный тромбиногенез и связанные с ним сдвига гиперкоагуляционного свойства [Г.А.Сулкарнаева, 2006; А.БЬ. ВуБЬеУБкн е.а., 2005], можно полагать, что и при Е-авитаминном питании среди найденных нами гемостатических сдвигов инициирующая роль принадлежит тромбоцитам. Эти клетки интенсивно реагируют па гипероксидацию [А.А.Вакулин, 1998; И.В.Ральченко, 1998; О.НивБет е.а., 2008], и поэтому есть основания говорить о такой последовательности событий:

воздействия, ускоряющие ЛПО и снижающие АОП

рост коагулоактивности тромбоцитов

ускорение тромбинобразования

интенсификация непрерывного внутрисосудистого свертывания крови

По нашим данным сдвиги ТкТР в отсутствии и при дефиците ТФ отрицательно связаны с ЛПО, коагулоактивностью тромбоцитов и НВСК. Низкая теснота этой связи (г, = 0.43) ожидаема - ТкТР зависит не только от состояния субкомпонентов системы гемостаза, но и от состояния других важнейших систем жизнеобеспечения [А.Ш.Бышевский и др., 1987; А.С.Шитикова, 2000; Л.П. Папаян, 2003, В.П.Мищенко, 2005], которые также испытывают влияние оксидативного стресса, чем бы он ни обусловливался. Поэтому мы не включили в вышеприведенную последовательность событий толерантность к тромбину, хотя она и нарушается при усиленном тромбиногенезе - предикторе ускорения НВСК.

ВЫВОДЫ

1. Исключите токоферола из рациона крыс, сбалансированного по содержащие других нутриентов, сопровождается повышением содержания первичных и вторичных липидпероксидов, снижением антиоксидантного потенциала в тромбоцитах и в меньшей степени в других клетках крови (моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах).

2. Внутривенное введение клеток, изолированных из крови крыс, содержавшихся на Е-авитаминном рационе, повышает у крыс-реципиентов коагулоактивность тромбоцитов, ускоряет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, и снижает толерантность к тромбину (максимальные сдвиги вызывает инфузия тромбоцитов, затем моноцитов, нейтрофилов и эритроцитов).

3. Введение в рацион токоферола в количествах, составляющих У>, Уг и У* суточной потребности, ограничивает изменения липидпероксидации и снижение антиоксидантного потенциала в тромбоцитах, вызываемые Е-авитаминным питанием.

4. Ускорение липидпероксидации и снижение антиоксидантного потенциала при содержании крыс на Е-авитаминном рационе сопровождается повышением коагулоактивности тромбоцитов, интенсификацией непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и снижением толерантности к тромбину - появлением признаков наклонности ктромбообразованию.

5. Отсутствие токоферола в рационе повышает общую свертывающую активность крови и снижает толерантность к тромбину в ситуациях, протекающих с ги-пертромбинемией (введение тромбина или адреналина, кровопотеря, активация свертывания крови в зимний период).

6. Введение токоферола в рацион в количествах, превышающих потребность в 4, 6 и 8 раз, угаетает липидпероксидацию и повышает антиоксидантный потенциал в

тромбоцитах, снижает их коагулоактивность и повышает толерантность к тромбину в физиологических условиях, а также при воздействиях, сопровождающихся ускоренным тромбинообразованием.

Практическое значение работы

Полученные нами данные позволяют рекомендовать при заболеваниях, которые сопровождаются наклонностью к гиперкоагуляции (рост общей свертывающей активности крови по значениям активированного времени рекальцификации, активированного частичного тромбопластинового времени и др.), проводить контроль состояния тромбоцитарного звена гемостаза, уровня маркеров внутрисосудистого свертывания крови, а также обеспеченности токоферолом. Полученные в этих случаях результаты позволят оценить целесообразность токоферолтерапии при таких состояниях.

Публикации по теме диссертации

1. Шаповалова Е.М. Эффекты кобаламина на липидпероксидацию, уровень маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину на фоне атерогенного рациона / Е.М. Шаповалова, И.В. Зверева, В.В. Кондаков //Матер. Конф. «Инновационные технологии в лекарственной терапии». Прага, 28-30 апреля 2008г. Академический журнал Западной Сибири. - 2008. - 3. - С.72-73.

2. Шаповалова Е.М. Витамины А, Е, С, В5 и Вц гемостаз и перекисное окисление ли-пидов (Е.М.Шаповалова, Л.А. Васильев, В.В.Копдаков и др. В кн. «Влияние важнейших витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину»). Москва: Медицинская книга. - 2009. - С.12-47.

3. Галушко М.Г. Интегральные показатели состояния гемостаза в зависимости от обеспеченности организма витаминами-антиоксидантами (М.Г. Галушко, Л.А. Васильев, В.В.Кондаков и др.) Там же. - С.48-82

4. Кондаков В.В. Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови после введения в вену тромбоцитов доноров, получавших про- и или антиоксидант / В.В.Кондаков // Матер. Российской конф. «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии». Челябинск: ЧГМА, Объединение биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири, ЮжноУральский научный центр РАМН. - 2009. - С. 120-121.

5. * Ал боров Р.Г. Маркеры непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину при гипетромбинемин / Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, В.В.Копдаков и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2009. - 2/58. - С.49-51.

6. *Бышевский А.Ш. Влияние разных доз витамина С на толерантность к тромбину у несинтезирующих его животных / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, В.В.Кондаков и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2009. - 2/58. - С.55-56.

7. *Алборов Р.Г. Витамин С (аскорбиновая кислота) и гемостаз / Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, В.В.Кондаков и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2009. -2/58. -С.143-146.

8. *Галушко М.Г. Гемостаз при гипертиреозе и тиреотоксикоза / М.Г.Галушко, Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, В.В.Кондаков и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2009. - 2/58. - С. 147-150.

9. Бышевский А.Ш. Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и липидперок-сидация в тромбоцитах / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, Л.А.Васильев,... В.В.Кондаков и др. II Матер. Российской конф. «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии». Челябинск: ЧГМА, Объединение биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири, Южно-Уральский научный центр РАМН. - 2009. - С.16-19.

10. Бышевский А.Ш. Толерантность к тромбину и уровень маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови в плазме / А.Ш.Бышевский, Л.А.Васильев, С.Л.Галян, ... В.В.Кондаков и др. И Матер. Российской конф. «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии». Челябинск: ЧГМА, Объединение биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири, Южно-Уральский научный центр РАМН. - 2009. - С.103-105.

11. ^Шаповалова Е.М. Витамины с антиоксидантными свойствами и гемостаз /Е.М.Шаповалова, А.Ш.Бышевский ... В.В.Копдаков и др. // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2009. - 2(25). - С. 109-1110._

* - публикации в рекомендованных ВАК изданиях

Использованные сокращения

АДФ-АГ - АДФ-индуцируемая агрегация

АОП - Антаоксидантный потенциал

ВТФ - Взаимодействие тромбин-фибриноген

D-Д - Б-димеры

ДК - Диеновые конъюгаты

ЛПНП - Липопротеиды низкой плотности

ЛПО - Липидпероксидация

НВСК - Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови

ПДФ - Продукты деградации фибрина

РКМФ - Растворимые фибринмономерные комплексы

со - Скорость окисления

ТБК - ТБК-продукты (продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой)

ТФ - Токоферол

ф.(фф-) - Фактор (факторы)

Кондаков Владимир Вениаминович

ВЛИЯНИЕ ДЕФИЦИТА И ИЗБЫТКА ТОКОФЕРОЛА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) 03.01.04 -БИОХИМИЯ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 12.03.2010 Формат 60x84/16. Печ. л. 1,0. Печать ризограф. Тираж 100. Зак. № 189.

Типография ООО «Печатник», лицензия ПД № 17-0027 Тюмень, ул. Республики, 148, кора. 1/2. Тел. (3452) 20-51-13, тел./факс (3452) 32-13-86

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Кондаков, Владимир Вениаминович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ВИТАМИН Е И ГЕМОСТАЗ (обзор литературы).

1.1. Токоферол и гемостаз.

1.2. О соотношении липидпероксидации и гемостаза в организме.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Изменения липидпероксидации антиоксидантного потенциала тромбоцитов, их коагулоактивности и плазменного уровня маркеров НВСК в отсутствии и при дефиците токоферола.

3.2. Изменения в тромбоцитах ЛПО, АОП, коагулоактивности, плазменного уровня маркеров НВСК и ТкТР при содержании токоферола в рационе в количестве, эквивалентном малым и средним лечебным дозам.

3.3. Динамика изменений ЛПО и АОП в клетках крови при введении токоферола в дозе, превышающей потребность в 6 раз (9 мг/сут).

3.4. Интенсивность НВСК и коагулоактивность тромбоцитов после внутривенного введения крысам клеток крови, выделенных у крыс, неполучавших токоферол и получавших его в разных количествах.

3.5. Содержание маркеров внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину при тромбинемии, моделируемой на фоне Е-авитаминного питания и питания рационом с токоферолом.

4. ОБСУЖДЕНИЕ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "ВЛИЯНИЕ ДЕФИЦИТА И ИЗБЫТКА ТОКОФЕРОЛА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)"

Актуальность. Анализ литературы последних десятилетий позволяет сформулировать ряд положений, которые обоснованы результатами исследований, опубликованных в значительном числе работ:

1. Состояние гемостаза - одной из важнейших систем жизнеобеспечения - зависит от интенсивности свободнорадикальных процессов, в частности, процессов липидпероксидации [А.Ш.Бышевский и др. 2000, 2003, 2004; Г.А.Сулкарнаева, 2006, 2007; Р.Г.Алборов, 2004 а, б, 2006; K.Pawlak е.а.2003; A.E.Goga е.а., 2009], и эта зависимость является двусторонней.

2. Антиоксиданты, в том числе и витамины, ограничивают in vivo интенсивность липидпероксидации, и в связи с этим замедляют непрерывное внутрисосудистое свертывание крови [Э.Н.Согрин, 2004 а, б, А.Ш.Бышевский и др., 2008 а; С. Antoniades е.а., 2003; A.V.Solov'eva, 2008], в то время как введение прооксидантов, ускоряет липидпероксидацию (ЛПО), что сопровождается интенсификацией непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) [С.Л.Галян, 1993; С.Л.Галян и др., 2003; , Е.А. Винокурова, 2003, 2006; П.Я.Шаповалов и др., 2005; Е.М.Шаповалова и др., 2008; N.Kaul е.а., 2008].

3. Влияние ЛПО на гемостаз реализуется предположительно за счет накопления в кровотоке первичных и вторичных липидпероксидов, усиленно продуцируемых клетками крови, особенно тромбоцитами и в меньшей степени эритроцитами и лейкоцитами [Р.Г.Алборов и др., 2005, Р.Г.Алборов, 2006]; антиоксиданты снижают активность тромбоцитов, ограничивая их способность к агрегации и к реакции высвобождения [Р.Г.Алборов, 2006; O.Hussein е.а., 2008]

4. Эритроциты, нейтрофилы и моноциты при экспозиции с тромбоцитами нормальной плазмы повышают их активность, что выражается увеличением способности кровяных пластинок к агрегации и к реакции высвобождения. По способности активировать тромбоциты на первом месте располагаются моноциты, затем эритроциты и нейтрофилы; эозинофилы и лимфоциты не активируют тромбоциты при экспозиции с ними. При экзогенной гипертромбинемии на фоне повышенного антиоксидантного потенциала, вызванного введением витаминов-антиоксидантов, прирост способности эритроцитов и лейкоцитов активировать тромбоциты ограничивается [Р.Г.Алборов, 2006; A.Sh.Bishevsky е.а., 2004; G.Denas е.а., 2009].

5. Опубликован ряд обзоров и монографий, в которых подвергнуты анализу результаты исследований влияния витаминов на гемостаз [А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1986; В.П.Мищенко и др., 2005; Q.Li е.а., 2009], при знакомстве с которыми обращает на себя внимание следующее: а) изучались в связи с гемостазом преимущественно витамины А, В5, В]2, Е и С, а из них наиболее детально витамины А и Б, причем особенно много внимания уделено токоферолу, который являясь одним из важных природных антиоксидантов широко используется в медицинской практике, будучи компонентом многих официнальных поливитаминных препаратов; б) эффекты дефицита или дополнительного введения токоферола, как и других витаминов, на свертывание крови оценивали, определяя активность отдельных про- и антикоагулянтов в циркулирующей крови, и это не позволило прийти к однозначным выводам относительного того, вызывает ли назначение токоферола наклонность к активации гемостаза или снижает свертывающую активности крови [А.Ш.Бышевский, 1978, 1991; В.П.Мищенко, 2005; Е.М.Шаповалова, С.Л.Галян и др., 2008а, б]. в) в экспериментальных работах лишь в отдельных случаях использовали сбалансированные по микро- и макронутриентам рационы питания, а в клинических исследованиях лишь изредка оценивали степень обеспеченности организма пациента витаминами, в том числе и теми, которые включались в терапевтический комплекс.

Все вышесказанное, особенно данные о роли тромбоцитов в существовании связи гемостаз-липидпероксидация, определило направление планируемого нами экспериментального исследования и его задачи.

Цель исследования

Используя в экспериментах сбалансированный пищевой рацион, изучить механизм влияния дефицита и избытка токоферола на липидпероксидацию и коагулоактивность тромбоцитов, на интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину - показатели, интегрально характеризующие состояние гемостаза.

Задачи исследования

1. Изучить динамику изменений липидпероксидации и коа-гулоактивности тромбоцитов, а также плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови у крыс, содержащихся на Е-авитаминном рационе и рационе, включающем токоферол, в количестве, равном 100, 25, 50 и 75% от суточной потребности.

4. Изучить интенсивность НВСК, коагулоактивность тромбоцитов и ТкТР после внутривенного введения крысам клеток крови, выделенных у крыс-доноров, неполучавших токоферол и получавших его в разных количествах

5. Изучить интенсивность НВСК, коагулоактивность тромбоцитов и ТкТР на моделях гипертромбинемии, создаваемых на фоне Е-авитаминного рациона и рациона с токоферолом.

Научная новизна

Впервые установлено, что отсутствие токоферола в сбалансированном по содержанию других нутриентов рационе, приводит у крыс к ускорению процессов перекисного окисления липидов и снижению антиоксидантного потенциала в тромбоцитах, в меньшей степени в моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах.

Впервые показано, что внутривенное введение тромбоцитов крыс-доноров, которые получали Е-авитаминный рацион, увеличивает у крыс-реципиентов коагулоактивность тромбоцитов, ускоряет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и снижает толерантность к тромбину, а инфузия моноцитов, нейтрофилов и эритроцитов сопровождается теми же, но менее выраженными сдвигами.

Впервые установлена прямая зависимость между степенью дефицита токоферола в питании и степенью ускорения процессов липидпероксидации, и обратная зависимость со степенью снижения антиоксидантного потенциала в тромбоцитах и в меньшей мере в других клетках крови.

Впервые выявлена и охарактеризована зависимость степени изменений интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантности животных к тромбину от антиоксидантного эффекта токоферола в его отсутствии, дефиците или избытке. Установлено также, что отсутствие токоферола в рационе усугубляет гипертромбинемию, связанное с нею ускорение непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и снижение толерантности к тромбину, вызываемые неодинаковыми по природе воздействиями (введение адреналина, тромбина, кровопотеря, сезонные сдвиги), а избыток токоферола ослабляет эффекты гипертромбинемии.

Практическая значимость

Полученные результаты позволяют рекомендовать при заболеваниях, протекающих с наклонностью к гиперкоагуляции, контролировать состояние тромбоцитарного звена гемостаза, уровня маркеров внутрисосудистого свертывания крови и обеспеченность токоферолом, что позволит оценить целесообразность его включения в терапевтический комплекс при таких состояниях.

Основные положения, выносимые на защиту:

Отсутствие токоферола в сбалансированном по остальным нутриентам рационе ведет к ускорению липидпероксидации и снижению антиоксидантного потенциала в тромбоцитах и в меньшей мере в моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах, сопровождаясь ростом коагулоактивности тромбоцитов, ускорением непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и снижением толерантности к тромбину.

Присутствие в рационе токоферола в количествах, составляющих часть суточной потребности, ослабляет эти сдвиги, а в количествах, эквивалентных лечебным дозам, вызывает замедление липидпероксидации и рост антиоксидантной активности тромбоцитов, снижает их коагулоактивность, замедляет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и нормализует толерантности к тромбину.

При внешних воздействиях, сопровождающихся ускоренным тромбинообразованием, отсутствие токоферола в рационе усугубляет вызываемое тромбинемией повышение коагулоактивности тромбоцитов, ускорение непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и снижение толерантности к тромбину; на фоне токоферола в количестве эквивалентном лечебной дозе, сдвиги, обусловленные тромбинемией, ослабляются.

Изменения липидпероксидации, вызываемые отсутствием в рационе токоферола находятся в тесной положительной связи с коагулоактивностью тромбоцитов, интенсивностью непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, и в тесной отрицательной связи с толерантностью к тромбину. Аналогичны эти связи и при избытке токоферола в рационе.

Влияние токоферола на коагулоактивность тромбоцитов, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину реализуются в значительной степени за счет его антиоксидантной способности как при снижении антиоксидантного потенциала клеток крови (преимущественно тромбоцитов) на фоне Е-авитаминного или Е-дефицитного питания, так и при увеличении антиоксидантного потенциала избытком токоферола.

Апробация и публикация

Результаты работы доложены на конференции Регионального отделения ВБО (Тюмень, 2007), на заседании Тюменского регионального отделения ВБО (2009), на 3-й международной конференции (Варадеро, Куба, 2008), на международной конференции (Москва, 2008), на Российской конф. «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009) и опубликованы: в медико-биологических журналах — 9 статей; в виде глав в монографии «Влияние важнейших витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину». М.: Медицинская книга. — 2009, (всего 11 публикаций).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Кондаков, Владимир Вениаминович

-101 -5. ВЫВОДЫ

1. Исключение токоферола из рациона крыс, сбалансированного по содержанию других нутриентов, сопровождается увеличением содержания первичных и вторичных липидпероксидов, снижением антиоксидантного потенциала в тромбоцитах и в меньшей степени в моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах.

2. Введение в вену клеток, изолированных из крови крыс, содержавшихся на Е-авитаминном рационе, повышает у крыс-реципиентов коагулоактивность тромбоцитов, ускоряет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, и снижает толерантность к тромбину (максимальные сдвиги вызывает инфузия тромбоцитов, затем моноцитов, нейтрофилов и эритроцитов).

3. Введение в рацион токоферола в количествах, составляющих Ул, Уг и Ул суточной потребности, ограничивает изменения липидпероксидации и снижение антиоксидантного потенциала в тромбоцитах, вызываемые Е-авитаминным питанием.

5. Отсутствие токоферола в рационе повышает общую свертывающую активность крови и снижает толерантность к тромбину в ситуациях, протекающих с гипертромбинемией (введение тромбина или адреналина, кровопотеря, активация свертывания крови в зимний период).

6. Введение токоферола в рацион в количествах, превышающих потребность в 4, 6 и 8 раз, угнетает липидпероксидацию и повышает антиоксидантный потенциал в тромбоцитах, снижает их коагулоактивность и повышает толерантность к тромбину в физиологических условиях, а также при воздействиях, сопровождающихся ускоренным тромбинообразованием.

Практическое значение работы

Полученные данные дают основания рекомендовать при заболеваниях, которые сопровождаются наклонностью к гиперкоагуляции (рост общей свертывающей активности крови по значениям активированного времени рекальцификации, активированного частичного тромбопластинового времени и др.), контролировать состояния тромбоцитарного звена гемостаза, уровня маркеров внутрисосудистого свертывания крови, а также обеспеченность токоферолом. Полученные в этих случаях результаты позволят оценить целесообразность токоферолтерапии при таких состояниях.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Кондаков, Владимир Вениаминович, Тюмень

1. Алборов Р.Г. Роль тромбоцитов в гемостазе /Р.Г. Алборов / Глава в монографии «Связь гемостаза с перекисным окислением липидов». М.: Медицинская книга. - 2003. - 95 с. - С. 15-26.

2. Алборов Р.Г. Влияние селмевита на мембраны и коагуляционную активность тромбоцитов у больных сахарным диабетом / Р.Г.Алборов // Сахарный диабет. 2004 а. - №3. - С. 38-40.

3. Алборов Р.Г. Клетки крови фактор связи липопероксидации и постоянного внутрисосудистого свертывания /Р.Г.Алборов // Успехи современного естествознания. — 2004 б. - №2. - С. 24-24.

4. Алборов Р.Г. Гемостаз и гипертиреоз /Р.Г.Алборов / Глава в монографии «Антиоксиданты в коррекции гемокоагуляционных сдвигов». М.: Медицинская книга. — 2004 в. — 80 с. С. 51-55.

5. Алборов Р.Г. Зависимость между антиоксидантными свойствами витаминов и их влиянием на толерантность к тромбину /Р.Г.Алборов, С.Л.Галян, С.В.Миневцев и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2005. - №3. - С.64-66.

6. Алборов Р.Г. Роль клеток крови в связи между толерантностью к тромбину, содержанием в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген и липидпероксидацией: Автореф. дис. . д.м.н. -Тюмень. 2006. 42 с.

7. Алексеева Е.А. Адренорецепторы тромбоцитов / Е.А.Алексеева, П.П. Голиков // Гематол. и трансфузиол. 1989. - №2. - С. 49-54.

8. Аптекарь И.А. Тромбоцитарное звено и постоянноевнутрисосудистое свертывание крови при активации и угнетении липопероксидации: Автореф. дис. . к.м.н. Тюмень, 2002. - 24 с.

9. Аптекарь И.А.Гемостаз при введении про- и антиоксиданта порознь и одновременно / И.А.Аптекарь // Научный вестник ТГМА. Материалы Международного симпозиума «Медицина и охрана здоровья». 2003. -№ 7-8 (21-22). - С.152.

10. П.Ашкинази И.Я Эритроцит и внутреннеетромбопластинообразование / И.Я.Ашкинази. JL: Наука, 1977. - 156 с.

11. Ашкинази И.Я. Анализ некоторых механизмов включения трамбопластинового фактора эритроцитов в процессе внутреннего тромбообразования / И.Я. Ашкинази/ Система свертывания крови и фибринолиз. Саратов, 1975. С. 133-134.

12. З.Бабич В.П. Активность антитромбинов II, III, IV, общая антитромбиновая активность сыворотки крови при некоторых экспериментальных ситуациях: Автореф. дис. . канд. биол. наук. -Курск, 1973.-21 с.

13. Баклаева Н.Б. Перекисное окисление липидов и гемостазио-логические сдвиги при операциях на матке: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Тюмень, 2005. — 25 с.

14. Балуда В.П. Суточный ритм колебаний показателейсвертываюшей системы крови у здоровых лиц / В.П.Балуда, В.А.Исабаева, И.А.Пономарева, А.С.Адамчик / Фрунзе: Илим. 1978. -197 с.

15. Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В.П. Балуда, З.С. Баркаган, Е.Д.Гольдберг и др. Томск, 1980.-310 с.

16. Балуда В.П. Система гемостаза и гомеостаз / В.П.Балуда / В кн. Гомеостаз. -М.: Медицина. 1981. - С. 461-490.

17. Балуда В.П. Физиология системы гемостаза /В.П.Балуда, М.В.Балуда, И.И.Деянов, И.К.Тлепшуков. М., 1995.-243 с.

18. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы / З.С.Баркаган. М.: Медицина. 1988. - 528 с.

19. Баркаган З.С. Введение в клиническую гемостазиологию / З.С. Баркаган. М.:Ныодиамед-АО, 1998 а. — 45 с.

20. Баркаган З.С. Основные методы лабораторной диагностики нарушений гемостаза /З.С.Баркаган, А.П.Момот / Барнаул: Алтайский Государственный медицинский университет. 1998 б. - 127 с.

21. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности // «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения/ И.Н. Бокарев. М., 2000 а. - С. 47-52.

22. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности / И.Н.Бокарев // Тромбоз, гемостаз и реология, 2000 б. — С. 6-7.

23. Бокарев И.Н. Тромбозы, предтромботические состояния, тром-бофилии и гиперкоагуляция / И.Н.Бокарев // Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения, 2000 в. С. 39-43.

24. Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение внутренних болезней. Кровоточивость, или геморрагический синдром. Дифференциальная диагностика / И.Н.Бокарев. М., 2002 75 с.

25. Бременер С.М. Витамины. / С.М.Бременер. М.: Медицина, 1966. -420 с.

26. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты: новые идеи и повторение пройденного /Е.Б.Бурлакова/ Междун. симп. «Биоантиоксидант» — Тюмень, 1997.-С.З-4.

27. Бышевский А.Ш. Влияние некоторых витаминов на уровень гуморальных агентов и функциональную активность физиологической противосвертывающей системы: Автореф. дисс. . д.м.н. — Львов, 1966. -35 с.

28. Бышевский А.Ш. Механизмы, предупреждающие внутрисосудистое свертывание крови / А.Ш.Бышевский // Матер. 1-й конф. по санологии. — Львов: Львовский мед. ин-т. 1967. - С. 167-174.

29. Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция / А.Ш.Бышевский. Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство. — 1978. — 124 с.

30. Бышевский А.Ш., Мухачева И.А., Шафер В.М. Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме. А.С. № 1659855. Публик. Бюлл № 24. 30.06. 1991.

31. Бышевский А.Ш. Патент № 2061953 Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов / А.Ш.Бышевский, В.Г.Соловьев, И.В.Селиванова // Бюлл. № 16. 10. -06. 1996.

32. Бышевский А.Ш., Кожевников В.Н. Свертываемость крови при реакции напряжения. Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство. — 1986. — 172 с.

33. Бышевский А.Ш. Регуляция коагуляционных превращений фибриногена / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, П.И.Левен и др. // Свердловск: Среднеуральское книжное издательство, 1987. -205 с

34. Бышевский А.Ш. Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш.Бышевский, Л.В.Михайлова, . Р.Г.Алборов и др. Патент № 2219546, приоритет от 04.05.2000, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003.

35. Бышевский А.Ш. Антиоксиданты в коррекции гемокоагуляционных сдвигов /А.Ш.Бышевский, М.К.Умутбаева, Р.Г.Алборов. М.: Медицинская книга, 2004. — 79 с.

36. Бышевский А.Ш. Коррекция селмевитом гемостатических сдвигов при некоторых хирургических вмешательствах / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, В.А.Полякова// Матер. 2-й Всеросс. конф. М.-2005.-С.11-11.

37. Бышевский А.Ш. Липидпероксидация, антиоксидантный потенциал и непрерывное внутрисосудистое свертывание крови при действии кобаламина /А.Ш Бышевский, Е.В.Забара, Е.В.Шаповалова и др. / Фундаментальные исследования. Заочн. электронная конф., 2008 а. 1.

38. Бышевский А.Ш. Неспецифическая коррекция изменений гемостаза при заболеваниях, протекающих с гиперкоагуляцией /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, И.В.Зверева и др. // Фундаментальные исследования. 2008 б. - №2. - С. 29-30.

39. Бышевский А.Ш. Эффект кобаламина на гемостаз при холестеролемии / А.Ш.Бышевский, И.В.Зверева, Е.В Забара и др. // Современные наукоёмкие технологии. №2. - 2008а. - С. 153-153.

40. Вакулин A.A. Роль эритроцитов и лейкоцитов в поддержании активности тромбоцитов в зависимости от состояния ПОЛ: Автореф. дис. докт. мед. наук. Челябинск, 1998. 41 с

41. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А Владимиров // Биофизика. 1987. - № 5. - С. 830-844.

42. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН. 1998. - №7. - С. 43-51.

43. Владимиров Ю.А. Образование свободных радикалов металлоферментами и апоптоз / Ю.А.Владимиров // Матер, междун. симпозиума «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки. — Тюмень, 2005.-С. 15.

44. Винокурова Е.А. Гемостаз и перекисное окисление липидов при операциях на матке /Е.А.Винокурова // Успехи современного естествознания. 2003. — №10. — С. 56.

45. Винокурова Е.А. Гемостаз при оперативных вмешательствах в гинекологической практике /Е.А.Винокурова. М.: Медицина, 2006.-91 с.

46. Воробьева Н.М. Повышение Д-димера в период лечения антикоагулянтами и рецидивы венозных тромбозов: есть ли связь?/ Н.М.Воробьева // Матер. IV Всероссийской конф. «Клиническая гемостазиология и гемореология . М.,2009. — С. 108-109.

47. Габбасов З.А. Новый высокочувствительный метод анализа агрегации тромбоцитов / З.А. Габбасов, Е.Г.Попов и др.// Лаб. дело. — 1989 а.-С. 15-18.

48. Габбасов З.А. Новый методический подход к исследованию агрегации тромбоцитов in vitro / З.А.Габбасов, Е.Г.Попов и др. // БЭБиМ, 1989 б. 10. - С.437-439.

49. Галенко О.В. Функциональные свойства тромбоцитов / О.В.Галенко, Е.В.Платонов / В кн. Тромбоциты. Тюмень, 1996. - С. 95-143.

50. Гланц С.А. Медикобиологическая статистика / С.А. Гланц. М.: Практика, 1998. 112 с.

51. Галян С. Л. Предупреждение и ограничение витаминами-антиоксидантами нарушений гемостаза, вызываемых тромбинемией: Автореф. дис. докт.мед.наук. Челябинск, 1993. - 44 с.

52. Галян С.Л. Влияние левоноргестрела на постоянное внутрисосудистое свертывание крови в зависимости от интенсивности липопероксидации / C.JL Галян, И.А.Аптекарь, Р.Г. Алборов и др. // Научный вестник ТГМА.- 2003. №2. - С. 31.

53. Гильманов А.Ж., Фазлыев М.М. Диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови (лекция) // Клин, лабор. диагностика. 2004. - № 4. - С. 25-32.

54. Грицюк А.И., Сопина М.В. Свертывающая и фибринолитическая системы крови у больных с выраженным атеросклерозом венечных артерий // Кардиология. 1970. - №10. - С. 9-16. \

55. Давыдов В.В. Особенности свободнорадикальных процессов в печени взрослых и старых крыс при стрессе / В.В. Давыдов, И.В. Захарченко, В.Г. Овсянников // Бюлл. экспер. биол. и мед. 2004. -№2.-С. 160-163.

56. Диксон М. Ферменты /М.Диксон, Э.Уэбб. М.: Мир, 1966. 816 с.

57. Дугиева М.З. Реабилитация гинекологических больных в раннем послеоперационном периоде с применением антиоксидантной терапии /М.З. Дугиева, Н.В. Стрижова, 3.3. Багдасарова // Вестник новых медицинский технологий. 2003. — С. 201-202.

58. Ельдецова С.Н. Гемокоагуляционные сдвиги и активность свободнорадикальных процессов в плазме, эритроцитах при экстремальных воздейстиях в эксперименте: Автореф. дис. . канд. биол. наук — Челябинск, 1990. — 22 с.

59. Каган В.Е. Повреждение мембран саркоплазматического ретикулума при перекисном окислении и его роль в развитии мышечной патологии / В.Е. Каган, Ю.В. Архипенко, В.А. Писарев и др. // Биофизика мембран. М.: Наука, 1981. - С. 88-95.

60. Кадочникова Г.Д. Исследование влияия антиоксидантов ряда фенолов, тиолов, аминов нафизико-хиические закономерности прекисного окисления моделей липидов возрастающей сложности: Автореф. дис. . д. м. н. Тюмень, 2002. 42 с.

61. Капралов A.A. Роль витамина Е в процессах функционирования клетки. Антиоксидантные и неантиоксидантные механизмы / A.A. Капралов, Г.В. Донченко, Г.В. Петрова // Успехи современной биологии 2003. - №6. - С. 573-589.

62. Кузник Б.И. Некоторые вопросы регуляции свертывания крови / Б.И.Кузник, Т.В.Савельева, С.В.Куликова и др. // Физиология человека. 1976.-№5.-С. 857-858.

63. Кузник Б.И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма / Б.И.Кузник, Н.В.Васильев, Н.Н.Цыбиков. М.: Медицина, 1989. 320 с.

64. Курцинь О.Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс / О.Я.Курцинь. М. Институт питания АМН ССР. 1952. - 5 с.

65. Лавров Б.А. Динамика распределения аскорбиновой кислоты в животном организме в связи с некоторыми факторами среды /Б.А.Лавров, Б.И.Яновская // Тез. докл. на 9-й научн. сессии института питания АМН СССР. М. - 1955. С.10-12.

66. Лавров Б.А. Содержание лимонной кислоты в крови у крыс придлительной даче больших доз витамина Д / Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева // Вопр. Питания. 1963. - №3. - С. 68-72.

67. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Ракита Д.Р. и др. Влияние сх-токоферола на супероксиддисмутазную и глутатионпероксидазную активность цитозоля и митохондрий печени мышей // Биохимия.1983.- 9.-С. 1555-1558.

68. Ланкин В.З. Механизмы нарушения ферментативой функциипроцессов СРО липидов в биомембранах при атерогенезе / В.З.Ланкин // Междун.симп. «Биоантиоксидант» Тюмень, 1997. — С. 51-53.

69. Марков Х.М. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия / Х.М.Марков // Патол. физиол. и эксп. терапия. 2005. - №4. - С. 5-9.

70. Момот А.П. Методика и клиническое значение паракоагуляционного фенантролинового теста / А.П.Момот,

71. B.А.Елыкомов, З.С.Баркаган Клин, лабор. диагностика. 1999. —№ 4.1. C. 17-20.

72. Мережинский М.Ф. Механизм действия и биологическая роль витаминов / М.Ф.Мережинский. Минск, 1959. 193 с.

73. Мищенко В.П. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и гемостаз / В.П.Мищенко, И.В.Мищенко, О.И.Цебржинский // Полтава: АССМИ. 2005. 159 с.

74. Мысник О.Ф.Гемостаз и перекисное окисление липидов у больных с тяжелой формой ДТЗ / О.Ф.Мысник // Матер, научн. конф. «Актуальные проблемы теоретической и прикладной медицины». -Ижевск, 2001 а. С. 125-127.

75. Мысник О.Ф.Зависимость гемостатических сдвигов при разных тиреоидных состояниях от интенсивности процессов перекисного окисления липидов: Автореф. дис. . к.б.н. Тюмень, 2001 б. 22 с.

76. Никитин Ю.И. Влияние витамина Е на липоиды и свертываемость крови у больных атеросклерозом /Ю.И. Никитин // Вопросы питания. — 1962 а. — №6. С. 22-26.

77. Никитин Ю.И. Патология кровообращения и дыхания / Ю.И. Никитин. Кемерово, 1962 6.-т. 1.-С. 130-134.

78. Папаян Л.П. Современное представление о механизме регуляции свертывания крови / Л.П. Папаян // Тромбоз, гемостаз и реология. -2003.-2 (14).-С. 7-11.

79. Предтеченская И.А. Увеличение количества фибриногена крови некоторыми витаминами / И.А.Предтеченская, А.Ф.Васюкова // Конф. Физиологов, биохимиков, фармакологов Западно-Сибирского объединения. Томск, 1961.-С. 194-195.

80. Предтеченская И.А. Влияние витаминов Р, С, Е и викасола на содержание фибриногена в крови здоровых кроликов / И.А.Предтеченская, А.Ф.Васюкова // Сб. научн. работ по клиническойбиохимии Красноярского мед. института. Красноярск, 1962. С. 103107.

81. Полякова В. А Фармакологическая реабилитация после медицинского аборта / В.А.Полякова, И.А.Карпова, Е.А.Винокурова и др. // International Journal on immunoreabilitatio. -2004. №6.- 1.- P. 110.

82. Ральченко С.А. Влияние поливитаминных комплексов на развитие диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови: Автореф. дис. . к.м.н. Тюмень, 1992. 24 с.

83. Ральченко И.В. Компливит в лечении больных с диабетической нефропатией / И.В.Ральченко, Н.В.Грачева // Тюменский медицинский журнал. 20016. - №2. - С. 29.

84. Рудницкая Т. А. Частота, значимость и коррекция гипергомоцистеинемии при сахарном диабете 2 типа: Автореферат дис. . к.м.н. Барнаул, 2003. 22 с.

85. Ругая А.Е. Влияние витамина Е на уровень общего холестерина и липопротеинов крови у больных атеросклерозом / А.Е.Ругая // Сб. научн. работ 2-й Рижской горбольницы. Рига, 1962. — №2.-С. 131-133.

86. Самаль А.Б. pH среды как фактор регуляции функциональных свойств тромбоцитов / А.Б.Самаль, С.Н.Черенкевич,

87. Н.Ф.Хмара // Гематол и трансфузиол. 1989. - 34. - №2. - С. 35-38.

88. Соболева Е.Г. Частота, клиническая значимость и маркеры ДВС-синдрома при инфекционном эндокардите у детей / Е.Г.Соболева, А.В.Чупрова, А.В.Соболева и др. // Тромбоз, гемостаз и реология. -2003.-№1.-С. 31-36.

89. Согрин Э.Н. Препарат селмевит для коррекции сдвигов гемостаза при аденомэктомии предстательной железы /Э.Н Согрин // Матер. Межрегиональной научно-практической конференции Уральского федерального округа. Тюмень, 2004 а. — С.70-71.

90. Согрин Э.Н. Гемостаз и липопероксидация при аденоме простаты /Э.Н.Согрин/ В кн. Перспективы развития амбулаторно-поликлинической помощи в Тюмени. Тюмень: Академия, 2004 б. -С. 48-49.

91. Солдатова Е.А. Коррекция антиоксидантами нарушений гемостаза при оперативном лечении миомы матки: Автореф. дисс. . к.м.н. Тюмень, 2006. 23 с.

92. Соловьев В.Г. Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки в регуляции тромбинемии: Автореф. дис. д. м. н. -Челябинск, 1997.- 44 с.

93. Соловьева A.B. Коррекция нарушений тромбоцитарного звена гемостаза витаминами-антиоксидантами и аспирином у беременных с поздним гестозом: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Уфа, 1999.-23 с.

94. Сулкарнаева Г.А. Нарушения гемостаза при операциях, выполняемых лапароскопическим доступом /Г.А.Сулкарнаева // Глава-116в кн. «Гемостаз при оперативных вмешательствах в гинекологическойпрактике. — М.: Медицинская книга.- 2006. С. 12-16.

95. Титов В.Н. Регуляция перекисного окисления in vivo как этапа воспаления. Олеиновая кислота, захватчики активных форм кислорода и антиоксиданты / В.Н.Титов, Д.Н.Лисицын // Клин, лабор. диагностика. 2005. - № 6. - С. 3-11.

96. Тюкавкина H.A. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки / H.A. Тюкавкина, И.А. Руленко, Ю.А. Колесник // Вопр. питания. 1996. - 2. - С. 33-38.

97. Умутбаева М.К. Интенсивность постоянного внутрисосудистого свертывания крови при модификации процессов липопероксидации /М.К.Умутбаева // Научн. вестник ТГМА (спец. выпуск «Бионтиоксиданты»), 2003 а. С.82-83.

98. Умутбаева М.К. Связь липопероксидации с гемостазом / М.К.Умутбаева / В кн. «Связь гемостаза с перекисным окислениемлипидов». М.: Медицинская книга, 2003 б. С. 41-50.

99. Умутбаева М.К. Перекисное окисления липидов и анти-оксидантный потенциал тромбоцитов как факторы, определяющие интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген: Автореф. дис. . докт. биол. наук. Тюмень, 2005. 45 с.

100. Ушкалова В.Н. Комплексный анализ липидов крови спектрофотометрическим, флуорометрическим и кинетическим методами / В.Н.Ушкалова, Н.В.Иоанидис З.М.Деева и др. // Лаб. дело. -1987. 6. - С. 446-460.

101. Ушкалова В.Н. Контроль перекисного окисления липидов /

102. B.Н. Ушкалова, Н.В. Иоанидис, Г.Д. Кадочникова и др.- Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та., 1993. 182 с.

103. Ушкалова В.Н. Свободнорадикальное окисление липидов в эксперименте и клинике. -. Тюмень: Изд-во ТГУ, 1997. - С. 5-21.

104. Феоктистов И. А. Влияние липопротеидов высокой плотности на Определение толерантности к тромбину .тром-бининдуцированную агрегацию тромбоцитов / И.А.Феоктистов,

105. C.А.Волокушев, Р.С.Карпов // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1991. -111.-№5.-С. 485-489.

106. Фермилен Ж. Ферстрате М. Тромбозы. М.: Медицина, 1986.-238 с.

107. Шаповалов П.Я. Связь между влиянием витаминов на гемостаз и их антиоксидантной активностью / П.Я.Шаповалов, Г.А.Сулкарнаева С.В.Миневцев и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2005. №3. - С. 11-13.

108. Шаповалов П.Я. Витамин РР: влияние на гемостаз /ПЯ.Шаповалов, Е.В.Забара, И.В.Зверева и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2008. -№3. - С. 189-192.

109. Шаповалова Е.М. Влияние витаминов А, Е, С, Р, вводимых порознь и одновременно, на внутрисосудистое свертывание крови / Е.М.Шаповалова, А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян и др. / Современные наукоемкие технологии.- 2007. №1. - С.24-25.

110. Шаповалова Е.М Эффект кобаламина на гемостаз при холестеролемии / Е.М Шаповалова, И.В.Зверева, А.Ш. Бышевский и др. / Химический анализ. Заочн. электронная конф. 2007. - 2.

111. Шаповалова Е.М. Витамины, липидпероксидация и гемостаз / Е.М.Шаповалова, С.Л.Галян и др. / Фундаментальные исследования. Заочн. электронная конф., 20086. 2

112. Шевлюкова Т.П. Морфофункциональные свойства тромбоцитов у беременных и родильниц с поздним гестозом / Т.П.Шевлюкова // Акуш. и гинекол. инфо. - М. - 2000 б. - 1. - С. 12

113. Шидин А.В. Влияние цианкобал амина на внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину /А.В.Шидин, Э.В. Багумян // Современные наукоёмкие технологии. -2007 а. №1. - С. 29.

114. Шидин B.C. Интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и липидпероксидация при введении витамина Е: Автореф. дисс. . канд. мед наук. Тюмень, 2007 б. 24 с.

115. Шилина Н.М. Антиоксидантный спектр сыворотки крови и его особенности у детей / Н.М. Шилина, А.Н. Котеров, С.Н. Зорин и др. // Бюллетень экспер. биол. и мед. 2004. - Т. 137. - № 2. - С. 210-214.

116. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз / А.С.Шитикова. СПб., 2000.-222 с

117. Antioxidants: not for prevention / No authors listed // Prescrire Int.-2009.-18(99).-P. 34.

118. Am. J. med. Sci. 1945. - 215. - P. 543-547.

119. Bonfiglioli D. Effect of sorbinicate on blood proteins and platelet aggregation in patients with coronary disease / Bonfiglioli, D.Som-mariva, L.Rovelli e.a. // Clin. Ter- 1984. 31 110. - 2. - P.l 11-118.

120. Bishevsky A.Sh. Antioxidant complex selmevit in hemostasis correction at some uterine surgeries / A.Sh.Bishevsky, S.L.Galyan, E.M.Shapovalova e.a./ European J. of natural history, 2008 a. 3. P. 10-15

121. Bishevsky A.Sh. Plasmatic level of thrombin-fibrinogen interaction markers is connected with lipid peroxidation in thrombocytes and erythrocytes / A.Sh.Bishevsky, S.L Galyan., E.M.Shapovalova, e.a./ European J. of natural history, 2008 b. 3. - P.62-66

122. Byshevskii A.Sh. Hemostatic disturbances after aorto-femoral and femoro-popliteal bypasses in patients with lower limbs obliterating atherosclerosis. / A.Sh. Byshevskii , S.L. Galian, K.V. Gorbatikov e.a. // Khirurgiia (Mosk). 2004. - (10). P.38-41.

123. Byshevskii A.Sh. The effect of a combined vitamin— antioxidants preparations on hemostasis in rats with experimental hyperperoxidation. / A.Sh. Byshevskii, S.L. Galian, I.V. Ral'chenko, e.a. // Eksp. Klin. Farmakol. 2005. - 68(3). - P.34-36.

124. Blinc A. Pharmacological prevention of atherothrombotic events in patients with peripheral arterial disease / A.Blinc, P.Poredos // Eur. J. Clin. Invest. 2007. - 37 (3). - P.157-164.

125. Block L.H. Adrenaline induced, calcium-dependet phosphorilation on proteins in human platelets /L.H.Block, H.Jaksche, P.Erne e.a. // J. Clin. Invest. 1985. - 75. - 5. - P. 1600-1607.

126. Bottiglioni E. Influença esplicata, delle vitamiina E sullattivita eparinica del plasma in vivo; studio clinico /E.Bottiglioni, C. Facchini // Clin. Terap. 1956. - 10. -5. - P. 571-561

127. Brox J.H. The effect of polinonsaturated fatty acids on endothelial cells and their production of proctacyclin, thromboxane and platelet inhibotory activity / J.H.Brox, A. Nordoy // Thromb. and Haemost. 1983. - 50. - 4. - P. 762-767.

128. BurkR.F. Selenoprotein metabolism and function: evidence for more than one function for selenoprotein P / R.F.Burk, K.E.Hill, A.K.Motley //Nutr. 2003. - 133(5 Suppl.l). - 1517S-1520S.

129. Burton G.W. Vitamin E: Application of the principles of phisical organic chemistry to the exploration of oils structure and function / G.W.Burton, K.U. Ingold // Ass. Chem. Res. 1986. - 195. - 7. - P. 194201.

130. Chen C.W. Total cardiovascular risk profile of Taiwanese vegetarians /C.W.Chen, Y.L.Lin, T.K.Lin e.a. // Eur. J. Clin. Nutr. 2007. -6.-3.-P. 31-33.

131. Ciocoiu M. The intervention of antioxidant therapy on platelet adhesion and immunomodulation in experimental physical stress / M. Ciocoiu, M.M. Badescu, E.C. Lupusoru. // Free Radie. Res. 2007. - 41(7). -P.829-838.

132. Crepinsek M.K. Meals offered and served in US public schools: do they meet nutrient , standards? / M.K.Crepinsek, A.R.Gordon, P.M.McKinney e.a. // J. Am. Diet. Assoc. 2009. 109(2 Suppl). - S. 31-43.

133. Dam H. Ueffectiveness if vitamin E in preventing chjlesterol deposition in ajrta / H.Dam // Nutrition. 1944. 28. - P. 289-295.

134. Daniel J.L. Myosin light chains can be phosphorilated in human platelets without a rise in cytoplasmic gree calcium / J.L.Daniel, T.J.Hallam // J. Physiol. (Gr. Brit.). 1984. - 357. - P. 10.

135. Daniel T. Platelet-derived growth factor and phospholipase Cactivation / T.Daniel, D.Kumjian // Kidney Int. 1992.- 41. - 3. - P. 575580.

136. De Moerloose P. Should neurologists measure D-dimer concentrations? / De P.Moerloose, F. Boehlen // Lancet Neurol. 2003. — 2. -P. 77.

137. Denas G. An oral vitamin K protocol to reverse over-anticoagulation in patients presenting with an International Normalised Ratio above 10.0./ G.Denas, U.Cucchini, S.Iliceto e.a. // Thromb. Haemost — 2009. 101(2).-410-411.

138. De Sanctis V. Spermatozoal DNA damage in patients with B thalassaemia syndromes / V. De Sanctis, D. Perera M. e.a. // Pediatr. Endocrinol. Rev. -2008. -6. S. 1. - P. 185-189.

139. Desrumaux C. Plasma phospholipid transfer protein prevents vascular endothelium dysfunction by delivering alphatocopherol to endothelial cells / C.Desrumaux, V.Deckert, A.Athias e.a. // FASEB J. -1999.- 13 (8). P.883-833.

140. Di Stilo A. Effects of nitric oxide donor antioxidants containing the phenol vitamin E substructure and a furoxan moiety on ischemia/reperfusion injury / A.Di Stilo, K.Chegaev, L.Lazzarato e.a. // Arzneimittelforschung. 2009. - 59(3). - P. 111-116.

141. Duthie G.G. Effects of antioxidants on vascular health / G.G Duthie, M.C. Bellizzi //Br. Med. Bull. -1999. 55 (3). - P.568-577.

142. Evans I. (miT. no EpeMeHep C.M., 1966. C. 338).

143. Gagné A. Absorption, transport, and bioavailability of vitamin e and its role in pregnant women A. Gagné, S.Q. Wei, W.D. Fraser e.a. // J. Obstet. Gynaecol. Can. 2009 31(3). -P.210-217.

144. Gao X. The maximal amount of dietary a-tocopherol intake in U.S. adults (NHANES 2001-2002) / X.Gao, P.E.Wilde, A.H.Lichtenstein e.a. // J. Nutr. 2006. - 136 (4). - P.1021-1026.

145. Gawaz M.P. Agglutination of izolated platelet membranes /

146. M.P.Gawaz, I.Ott // Arterioscl. Thromb. Vase. Biol. -1996.-16.-P. 621-627.

147. Gawaz M.P. Blood Platelets / M.P.Gawaz // Stuttg.; New York: Time.-2001.- 190 p.

148. Halliwel B.Vitamin E and thetreatment and prevention of diabetes: a case for a controlled clinical trial /B.Halliwell // Singapore Med. J. 2002. - 43 (9). - P.479-184.

149. Hayes K., Vitamin E in fortified cow milk uniquely enriches human plasma lipoproteins / K.Hayes, A.S.Pronczuk, D.Perlman // Am. J. Clin. Nutr. 2001. - 74 (2). - P211-218.

150. Hooda S. Effects of supplemental vitamin E in diet of Japanesequail on male reproduction, fertility and hatchability / S.Hooda, P.K.Tyagi, P.K.Mohan J. e.a. // Br. Poult Sei. 2007. - 48 (1). - P.104-110.

151. Zubairov D.M. Über die Thrombinzirculation in Blut / D.M. Zubairov // Folia Haematol. 1962. - 79. - 1. - S. 62-75.

152. Jones C.R. a2-Adrenoreceptor coupling to adenylate cyclase and adrenaline-induced aggregation of human fetal plasma / C.R Jones, J.L.Reid, I.W.Rodger, M.A.Giembicz // Brit. J. Pharmacol. 1985. - 885. - Suppl. 265.

153. Jialal Is I. There a vitamin E paradox? /LJialal, S.Devaraj // Curr Opin Lipidol. 2001. 12(l):49-53.-124184. Kamgar M. Antioxidant therapy does not ameliorate oxidativestress and inflammation in patients with end-stage renal disease /

154. M.Kamgar, F.Zaldivar, N.D.Vazir e.a. // J .Natl. Med. Assoc. 2009.101(4).-P.336-344.

155. Kasaikina O.T Exploratiry stady of karotene autooxidation using nitroxyl radicals / O.T Kasaikina, O.A.Ozhogina / / Magnetying resonans in medicine. 1994. - №6. - P. 11-14.

156. Kaul N. A comparison of fish oil, flaxseed oil and hempseed oil supplementation on selected parameters of cardiovascular health in healthy volunteers / N.Kaul, R.Kreml, J.A.Austria e.a.// J. Am. Coll. Nutr. 2008. -№27(1).-P.51-58.

157. Klein EA. Selenium and vitamin E: interesting biology and dashed hope / EA.Klein // J. Natl. Cancer. Inst. 2009. - 4. - 101(5). -P/283-285.

158. Klor H.U., Nutrition and cardiovascular disease / H.U.Klor, A.Hauenschild, I.Holbach // Eur. J. Med. Res. 1997. - 16.-2 (6). - P.243-257.

159. Kobayashi N. Criteria for diagnosis of DIC based on the analysis of clinical and laboratory in 345 DIC patients collected by the Research Committee on DIC in Jpan / N.Kobayashi, K.Maegawa, M. Takadae.a.e // Bibl. Haematol. 1987. - 49. - P. 265-275.

160. Kritharides L. The use of antioxidant, supplements in coronary heart disease /L.R.Kritharides, LStocker // Atherosclerosis. 2002. - 164 (2). -P.211-219.

161. Lagarde M. Peroxide dependence of polyunsaturated fatty acid oxygenation in platelets and endothelium / M.Lagarde, M.Croset, J.C.Bordet e. a. // Agents and Action. 1987. - 22. - 3-4. - P. 335-336.

162. Lazzari P. Epidemiology of fibrinogen in a population aged >40 years: a cross-sectional study / P.Lazzari, G.Madini, A.Zoppi e a. // Fibrinolysis. 1996. - 10. - Suppl. 1. - P. 16.

163. Levinson J.P. Influence of vitamin E on blood coagulation./ J.P.Levinson, Moses C., Rhodes J.Z. // Angiology. 1959. - №3. - P.397-403.

164. Livio M. MDA formation in rat platelet-rich plasma / M.Livio, G.Raitar, J.Merini e. a.// Thromb. and Haemost. 1980. - 44. - 2. P. 52-55.

165. Luomala M. High plasma levels of CD40 are associated with low coenzyme Q and vitamin E content of low-density lipoprotein in healthy men / M. Luomala, R.Laaksonen, T.Janatuinen e.a. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 2007. - 67 (2). - P. 115-122.

166. Mahlapuu, U. Soomets, G.P.Carlson // J. Toxicol. Environ. Health. A. 2009. -72(10). -P.642-650.

167. Martin R. Placental calcium transporter (PMCA3) gene expression predicts intrauterine bone mineral accrual / Martin R. // Bone. -2006.-6.-P.3-7.

168. Masure R.D. L"action dela vitamine E sur le tenps de saignement di lapin / R.D.Masure, P.Stoop, H.Solvay // Rev. Belg. Pathology, et med. exp. 1953. - 23. - 2. - P. 102-110.

169. Marzoev A.I. Thyroid hormones and phospholipase activity in rat liver mitochondria / A.I.Marzoev, A.P.Andriushchenko, I.A.Vladimirov // Biull. Eksp. Biol. Med. 1983. - 96. - 12. - P. 45-46.

170. Mayer K. Fatty acids suppress monocyte adhesion to humanendothelial cells: Role of endothelial PAF generation /K. Mayer, M. Merfels, M. Muhly-Reinholz e.a. // Amer. J. Physiol. 2002. - 283. - 2. -P.811-818.

171. Mazzetti G.M. Sullazione anticoagulante in vitro: delle a-tocoferolo / G.M. Mazzetti // Acta Vitam. (ital.). 1956. - 5. - P. 2.

172. Mente A.A systematic review of the evidence supporting a causal link between dietary factors and coronary heart disease / A.Mente, L. de Koning, H.S. Shannon, S.S.Anand // Arch. Intern. Med. 2009. - 13. -169(7). -P.659-669.

173. Moon D.G. The inhibitory effect of plasma fibronectin on collagen-induced platelet aggregation / D.G.Moon, J.G.Capian, J.E.Mazurkiewicz // Blood. 1986. - 67. - 2. - P. 450-457.

174. Munteanu A. Antiatherosclerotic effects of vitamin E myth or reality? / A.Munteanu, J.M.Zingg, A.Azzi // J. Cell. Mol. Med. 2004 - 8 (1).-P.59-76.

175. Ochsner A. Venous thrombolysis / A.Ochsner, M. Bakcy, P.T.De Camp // J.Am. Med. Ass. 1950. 144. - 10. -P.831-834.

176. Ofosu F.A. Age-related changes in f. VII proteolysis in vivo / F.A.Ofosu, S.Craven, L.Devar e.a. // Brit. J. Haematol. 1996. - 2. - P. 407412.

177. Okabe T, Antiatherosclerotic function of Kokuto, Okinawan noncentrifugal cane sugar / T. Okabe, T.Toda M. Inafuku e.a. // J. Agric. Food Chem. 2009. - 14. - 57(1). - P. 69-75.

178. Olas B. Wachowicz Z. Role of reactive types of oxygen in thethrombocytes of blood / B. Olas., Z.Wachowicz // Post. biol. komorki. — 2003.-30.-2.-P. 325-337.

179. Pandolfi F. Serological and functional characterisation of human T cell subsets / F.Pandolfi, D.M.Strong, R.B.Slease et al. // Clin. exp. Immunol, 1981. 43. - P.319-328.

180. Patil S.B. Lipid peroxidation and antioxidant status in hypertensive pregnancies / S.B .Patil, M.V.Kodliwadmath, S.M.Kodliwadmath // Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 2008. - 35(4). - P. 272274. .

181. Paul E.M. Blood coagulation in venous thrombosis / E.M.Paul, J.C.Paterson, J.A.Maclachlin // Canad. Med. Ass. J. 1954 a. -70. 50. -P. 556-551.

182. Paul R.M. The lack of effect of vitamin E on the blood clotting mechanism / R.M.Paul, Levis J.A., DeLuca e.a. // Canad J. Biochim, a. Physiol. 1954 b. - 32. - 4. P.347-353.

183. Pawlak K., Borawski J., Naumnik B. e.a. Relationship between oxidative stress and extrinsic coagulation pathway in haemodialyzed patients // Thromb. Res., 2003. 109. -P.247-251.

184. Rota S. Atherogenic lipoproteins support assembly of the prothrombinase complex and thrombin generation: modulation by oxidation and vitamin E. / S.Rota N.A.McWilliam, T.P.Baglin, C.D. Byrne // Blood. -1998. 15. - 91. - 2. - P. 508-515.

185. Riccioni G. Plasma antioxidants and asymptomatic carotid atherosclerotic disease /G. Riccioni, T. Bucciarelli, N. e.a.// Ann. Nut.r Metab. 2008. - 53(2). - P.86-90.

186. Ross G.D. Identification of human lymphocyte subpopulations by surface marcer analysis / G.D. Ross// Blood, 1979. 53. - P. 799-811.

187. Salonen R. Relationship of serum selenium and antioxidants to plasma lipoproteins / R.Salonen, Seppanen, M.Kantela e. a. // Atherosclerosis. 1988. - 70. - 1-2. - P. 155-160.

188. Sanguigni V. CD40 ligand enhances monocyte tissue factor expression and thrombin generation via oxidative stress in patients with hypercholesterolemia. V.Sanguigni, D.Ferro, P.Pignatelli, e.a. // J. Am. Coll. Cardiol. 2005. - 4. - 45(1). - P. 2.

189. Satia J.A. Validation of an antioxidant nutrient questionnaire in whites and African Americans / J.A.Satia, J.K.Waiters, J.A. Galanko / J. Am. Diet. Assoc. 2009. -109(3). - P.502-508.

190. Santangelo G. Asione dell vitamins E sull fibrinolisi ematica / G.Santangelo // Boll. Soc. Ital. boil. Sperim, 1959. - 35. - 6. - P. 308-310.

191. Scelton F. Antipurpuricaction of alfa-tocoferol / F.Scelton, E.Shute, H. G.Scinner // Sci. 1946. - 103. - P. 766-769.

192. Schwarz K. Untersuchungen uber die Wirkung des vitamin E auf der Blutbild und eincelne Stoffwechselgrossen / K.Schwarz, I.Wust // Z.Klinische Medicin. 1953.- 152. 0 S. 118-128.

193. Shute E. /Peripheral thrombotic treeted with a-tocoferol / E.Shute, W. Shute // Am. J. of surger. 1952. - 84. - P. 187-191.

194. Socha P. Pharmacological interventions for nonalcoholic fattyliver disease in adults and in children: a systematic review /P.Socha, F.Horvath, P.Vajro e.a. // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2009. - 48(5). -P.587-596.

195. Solov'eva A.V. Impact of Opisthorchis invasion on lipid peroxidation and hemostasis during pregnancy. /A.V.Solov'eva //Klin. Lab. Diagn. 2008. - 12. - P.20-23.

196. Spiel A.O. Pronounced platelet hyperfunction in patients with cardiac arrest achieving restoration of spontaneous circulation /A.O.Spiel, M.Frossard, F.B.Mayr e.a. // Crit. Care. Med. 2009. - 37(3). - P.975-979.

197. Tepel M., Antioxidant therapy i in vascular and renal diseases /M.Tepel, M.van Giet, W.Zidek // Med.Klin. (Munich). 2002. - 15. - 97(3). - P.144-151.

198. Tomoda J. Influence of vitamin E on blood coagulation / J.Tomoda // Itamins. 1963. - 27. - 63. - P. 442-446.

199. Tranter P.R. Mechanism on agonist synergism, in human -isolated platelets / P.R.Tranter, R.R.Bruckdorfer, M.Schachter // Bioch. Soc. Trans. 1989. - 47. 1 - P. 216.

200. Xue C., Antioxidative activity of carp blood plasma on lipid peroxidation / C.Xue, G.Yu, T.Hirata e.a. // Biosci. Biotechnol. Biochem. -1998. -62 (2). P.201-205.

201. Yamamoto N. GP lb-dependent and GPIb-independent pathways of thrombin-induced platelet activation / N. Yamamoto, N. Greco., M. E. Barnard e. a. // Blood. 1991. - 77. - 8. - P. 1740-1748.

202. Umeki Sc. Prostaglandin Ei and analogs prostacyclin influencing superoxide production by the human neutrophil / Sc.Umeki // Int. J. Biochem., 1994. -26. -8. P. 1003-1008.

203. Violi F. Antioxidant supplements and cardiovascular disease in men / F.Violi, R.Cangemi // JAMA. 2009. - 1. - 301(13). - 1335; author reply 1336-1337.

204. Vijver L.P. Lipoprotein oxidation, antioxidants and cardiovascular risk: epidemiologic evidence /Vijver LP, Kardinaal AF, Grobbee DE, e.a. // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 1997.- 57 (4-5). - P.479-487.

205. Vogelsang A.E. (it is quoted on Б.А. Кудряшов «Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови». М., 1975).

206. Wada Н. Hemostasis study before onset of disseminsted intravascular coagulation / H.Wada, K.Minamikawa, Y.Wakita e.a. // Am. J. Hematol. 1994. - 43. P. 265-275.

207. Wada H. Increastd plasma solubilit fibrin in patients with dissiminated iinravascular coagulation / H.Wada, Y.Wakita, T.Nakase e.a. // Am. J. Hematol., 1996. 51. P. 255-260.

208. Wada H. The diagnosis and treatment of the DIC-syndrome / H.Wada, C.Esteban, H.Gabbaza e.a. // Тромбоз, гемостаз и реология. -2003.- l.C. 16-22.

209. Watson S. Importance on tyrosine phosphorilation in the regulation of phospholipase С and A2 in human platelets / S.Watson, R.Blake, A.Borsch-Haubold e. a. // Platelets. 1995. - 6. - 2. - P. 117-118.

210. Weiss C. Effects of supplementation with alpha-lipoic acid on exercise-induced activation of coagulation / C.Weiss, A.Bierhaus, P.P.Nawroth e.a. // Metabolism. 2005. - 54(6). - 8. - P. 15-20.

211. Westfahl C.P. Estimation of inevitable macro mineral losses inamazons as basis for the calculation of maintenance requirement / CP.Westfahl, P.Wolf, J.Kamphues // Arch. Anim. Nutr. 2009/ - 63(1). -P.75-85.

212. Wilson W.L. The activation of plasminogen by nicotinic acid in vivo / W.L.Wilson, G.Fostiropulos // Proceed. 7-th congr. Europ. Soc. Haematol.: Basel-N.-Y. 1960. - P. 916-919.

213. Zahn C.M. Low-dose oral contraceptive effects on thromboelastogram criteria and relationship to hypercoagulability / C.M.Zahn, D.I.Gonzalez, C.Suto e.a. // Am. J. Obstet. Gynecol. 2003. -189 (1). -P.43-47.

214. Zierler K.L. / On the antithrombic and antiproteolytic activity of a-tokoferol / K.L. Zierler, D.Grob, J.L.Lilienthal // Am. J. Physiol. -1948.- 153.-1.-P. 127-132.

Информация о работе

Кондаков, Владимир Вениаминович
кандидата медицинских наук
Тюмень, 2010
ВАК 03.01.04

Диссертация

ВЛИЯНИЕ ДЕФИЦИТА И ИЗБЫТКА ТОКОФЕРОЛА НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы