Влияние экзогенного мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в процессе регенерации

Гусева, Вероника Валентиновна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние экзогенного мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в процессе регенерации
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние экзогенного мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в процессе регенерации"

На правах рукописи

ГУСЕВА Вероника Валентиновна

ВЛИЯНИЕ ЭКЗОГЕННОГО МЕЛАТОНИНА НА ЛИПИДЫ РАНЕВОГО ПОЛЯ КОЖИ КРЫС В ПРОЦЕССЕ РЕГЕНЕРАЦИИ

03.00.04 -Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тверь 2005

Работа выполнена на кафедре биохимии и биотехнологии Тверского государственного университета и в Научно-исследовательском и учебно-методическом Центре биомедицинских технологий «ВИЛАР», г. Москва

Научный руководитель: доктор биологических наук

Алла Николаевна Панкрушина

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Николай Николаевич Соколов;

доктор медицинских наук, профессор Николай Николаевич Слюсарь

Ведущая организация: Московский государственный медико-

стоматологический университет

Защита состоится ¿£ .¿¿¿¿Я' _ 2005 года в 14 часов на заседании диссертационного совета К 212.263.01 в Тверском государственном университете по адресу: 170002, г. Тверь, пр. Чайковского, 70 а, корп. 5, ауд. 318.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тверского государственного университета по адресу: г. Тверь, ул. Володарского, 44 а.

Автореферат разослан 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета К 212.263.01

токтор биологических наук А.Н. Панкрушина

У-

¿MSdL 4ГШ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Регенерация кожных ран является сложным многоэтапным процессом, сопровождающимся разнообразными изменениями клеточных компонентов раневого поля (грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей, струпа, прираневых участков кожи), существенными биохимическими перестройками белкового, углеводного, липидного и минерального обменов в нем (Бурневич С.З. и др., 2003; Нестеров Ю.В. и др., 2003: Колосова Н.Г. и др., 2004; Сыч Ю.П. и др., 2004). Проведены многочисленные исследования, посвященные проблемам регуляции раневого процесса с помощью различных физико-химических факторов, лекарственных и гормональных препаратов (Madlener M. et al., 1998; Schmid P. et al., 1998; Chen W.Y.J, et al., 1999; Гаркави A.B. и др., 2000; Торховская Т.И. и др., 2002).

В настоящее время все большее значение приобретает изучение влияния на заживление ран эпифизарного гормона мелатонина, в связи с его использованием в лечении разнообразных, в том числе, кожных заболеваний (Андреева Н.И. и др., 1999; Мальцев C.B. и др., 1999; Малиновская Н.К., 2002; Арушанян Э.Б. и др., 2003; Мухин

H.А., 2004). Известно, что мелатоиин проявляет широкий спектр действия. Этот гормон считается модулятором иммунной и эндокринной систем (Рапопорт С.И. и др., 2000; Рапопорт С.И. и др., 2001 ; Арушанян Э.Б. и др., 2002), обладает выраженными антиоксидантными свойствами (Stehie J.H. et al., 1993; Tortonese D.J. et al.,1995; Reiter RJ. et al., 1997; Перцов C.C. и др., 2004), влияет на пролиферацию клеток (Janus J. et al., 1994; Carossino A.M. et al., 1996; Fischer T. et al.,1999; Пикалова Б.М. и др., 2003), участвует в регуляции метаболизма белков, липидов и углеводов разных органов и тканей (Slominski A., et al., 1994; Chan T.Y., et al., 1995; Van Cauter E., 1998). Перечисленные функции мелатонина позволяют предполагать как прямые, так и опосредованные механизмы его влияния на процессы репарации. На клеточном уровне это может выражаться в изменении динамики энергетического и пластического обменов компонентов раневого поля. Установлено, что экзогенный мелатонин изменяет спектр солерастворимых белков и фракционный состав гликозаминогликанов грануляционно-фиброзной ткани (Ким Рен Хва, 2000). Данные, касающиеся влияния мелатонина на превращения липидов раневого поля кожи, в настоящее время крайне ограничены. Вместе с тем, подобные исследования представляют интерес как с точки зрения выявления новых аспектов действия гормона в организме, так и в плане разработки общей проблемы регуляции восстановительных процессов в различных тканях.

Целью исследования явилось изучение изменений липидов раневого поля кожи крыс при нормальном заживлении и в присутствии экзогенного мелатонина.

В задачи исследования входило:

I. Выявить изменения липидного состава раневого поля кожи крыс при нормальном заживлении.

2. Исследовать влияние длительного предварительного подкожного введения мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в динамике заживления.

3. Оценить действие однократных и многодневных внутрибрюшинных инъекций мелатонина на липидные параметры грануляционно-фиброзной ткани крыс в процессе регенерации.

4. Изучить эффект местного нанесения мелатонина на липидные показатели грануляционно-фиброзной ткани крыс в условиях регенерации.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту. 1. Процесс регенерации сопровождается значительными изменениями липидных показателей раневого поля кожи крыс: грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей, струпа, прираневых участков кожи. В грануляционно-фиброзной ткани крыс к 5 дню регенерации происходит накопление липидов, с их последующим гидролитическим расщеплением к 8 дню. Превращение данной ткани в рубцовую сопровождается уве-

WC. Н\1»И0НА/»ЬНАЯ Е>ИГ.,"М(»1 С.Петс??!>рг

«Ш РК

личением количества липидов, с активацией распада фосфолипидов в струпе и прираневых участках кожи.

2. Длительное предварительное подкожное введение мелатонина вызывает отчетливые дозозависимые изменения липидов раневого поля кожи крыс: в дозе 0,3 мг/кг он препятствует, в дозе 4 мг/кг - способствует увеличению количества липидов в гра-нуляционно-фиброзной ткани крыс на 5 день регенерации. К 8 дню преобладают реакции гидролиза липидов; к 23 дню заживления наблюдается аккумулирование липидов. Под влиянием мелатонина в дозах 0,3; 1 и 4 мг/кг в струпе крыс усиливаются процессы гидролитического расщепления липидов; в прираневых участках кожи обнаруживается накопление липидов и фосфолипидов.

3. Многодневные инъекции мелатонина ограничивают возрастания липидного и фосфолипидного компонентов в грануляционно-фиброзной ткани крыс на 5 и 8 дни регенерации.

4. Местное нанесение мелатонина на раневую область стимулирует накопление фосфолипидов в грануляционно-фиброзной ткани крыс на ранних и более поздних сроках регенерации.

Научная новизна. В работе представлены новые данные о липидном составе раневого поля кожи крыс и динамике его изменений в ходе нормального заживления кожных ран. Выявлены изменения липидных показателей грануляционно-фиброзной ткани, струпа, прираневых участков кожи на 5 и 8 дни регенерации, рубцовой ткани на 23 день заживления под влиянием предварительного подкожного введения разных доз мелатонина. Проведено сравнительное изучение изменений липидных и фосфо-липидных параметров грануляционно-фиброзной ткани в условиях внутрибрюш и иного (однократного и многодневного) и местного применения разных доз мелатонина в процессе регенерации. Проведенные нами исследования установили участие мелатонина в регуляции уровня липидов в раневом поле кожи крыс. Выявлено неоднозначное, в ряде случаев разнонаправленное влияние мелатонина, а также дозозависимый характер действия данного гормона в отношении липидов раневого поля кожи крыс.

Теоретическое и практическое значение. Полученные данные вносят определенный вклад в понимание роли липидов в процессе заживления кожных ран. Результаты проведенных исследований дают возможность более полного понимания моле-кулярно-биохимических механизмов влияния мелатонина на липидный состав грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей, струпа и прираневых участков кожи крыс, дополняют и расширяют представления о роли эпифизарного гормона в регуляции липидного обмена в исследуемых тканях в динамике регенерации. Представленные результаты открывают возможность поиска новых путей предупреждения негативных последствий применения мелатонина в восстановление повреждений кожи, выполнение ею разнообразных функций. Представленные данные необходимо учитывать при разработке рекомендаций для клинических испытаний мелатонина в практике гастроэнтерологии, дерматологии, в косметологии и других областях медицины.

Материалы работы используются на кафедре биохимии и биотехнологии ТвГУ при подготовке курсовых и дипломных работ, а также в курсах «Молекулярная патология», «Биохимия гормонов».

Апробация работы. Материалы диссертационного исследования докладывались и обсуждались на VII, VIII, XII, Областной научно-технической конференции молодых ученых «Химия и химическая технология», Тверь, 2000, 2001, 2005; научной конференции аспирантов и студентов, Тверь, 2001; I Международном конгрессе «Новые медицинские технологии», СПб, 2001; Межвузовской научной конференции молодых ученых, Тверь, 2001; 5-ой, 6-ой, 7-ой Международной Путинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука 21 гс века», Пушино, 2001, 2002, 2003.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и списка литературы, включающего 201 источник, из которых 87 иностранных. Работа иллюстрирована 15 таблицами, 11 рисунками и схемами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования выполнены на половозрелых белых крысах-самцах линии Вистар массой 180-200 г. Для получения ГФ ткани использовали метод Слуцкого Л.И. (1969). У животных, находящихся под эфирным наркозом, в межлопаточной области делали циркулярный разрез кожи диаметром 1,5 см, в который для предотвращения эпители-зации и контракции вставляли кольцо из органического стекла. Поверхность раны покрывалась подсыхающей корочкой - струпом (1,5x1,5 см), под которым развивалась ГФ ткань. Через 5 и 8 дней после операции кольцо снимали, срезали пласт ГФ ткани, струпа (массой 90-150 мг) и отбирали прираневые участки кожи (1.5x1,5 см). Для получения рубцовой ткани кольцо снимали на 8 день и далее оставляли на заживление, вплоть до 23 дня исследований.

Сроки эксперимента (5, 8 и 23 дни) определены исходя из литературных данных (Серов В.В. и др., 1981; Гаркави A.B. и др., 2000), согласно которым, на 5 день регенерации формировалась ГФ ткань (незрелая ГФ ткань), к 8-10 дню регенерации ГФ ткань считалась более зрелой, к 23 дню исследований происходило окончательное формирование рубцовой ткани. Дозы МТ выбраны на основании экспериментальных данных (Van Cauter Е., 1998; Ким Рен Хва, 2000) о его влиянии на липидный и углеводный обмены в организме животных.

Влияние МТ на липиды раневого поля кожи крыс изучали на трех модельных системах, позволяющих оценить особенности действия различных доз, способов и режимов введения гормона.

1. Предварительное подкожное введение. Инъекции раствора МТ в дозах 0,3; 1 и 4 мг/кг в 1 мл ФР делали подкожно по схеме: 21 день до эксперимента и ежедневно в течение 5 и 8 дней после нанесения раны. Контрольным животным вместо гормона вводили 1 мл ФР.

2. Внутрибрюшинное введение. Раствор МТ в дозе 4 мг/кг в 1 мл ФР вводили однократно (сразу же, после нанесения раны) на 5 и 8 дни регенерации и ежедневно в течение 5 и 8 дней вплоть до отбора образцов ткани. Контролем служили животные с нормальным ходом регенерации.

3. Местное воздействие. Раствор МТ в концентрациях 1,5 и 15 мг/мл в 1 мл дистиллированной воды наносили ежедневно в течение 5 и 8 дней регенерации непосредственно на раневую поверхность. Контрольным животным раствор гормона заменяли 1 мл дистиллированной воды.

Экстракцию общих липидов из исследуемых образцов тканей крыс проводили по методу Фолча и др. (Folch J. et al., 1957). Содержание OJI, ОФЛ и их фракций определяли экспрессными микрометодами с применением одномерной микротонкослойной хроматографии на силикагеле (Грибанов Г.А. и др., 1975, 1980; Молочкина Е.М., 1992). Результаты обрабатывали статистически с использованием критерия Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Характеристика изменений липидных показателей раневого поля крыс при нормальном заживлении кожных ран

Анализ образцов ГФ ткани крыс на 5 день регенерации показывает достаточно

высокое (4013 мг %) содержание в ней ОЛ (табл. 1) в сравнении с интактной кожей (1726 мг %), главным образом, за счет ТГ (рис. 1, А) Биологическое значение накопления липидов, вероятно, состоит в создании депо материала, который может служить источником энергии для роста и деления клеток, синтеза элементов внеклеточного матрикса (Елисеев В.Г., 1961). К более поздним срокам регенерации (8 день) по сравнению с предыдущим сроком (5 день) выявлено двукратное снижение уровня ОЛ, в основном за счет ТГ и СЖК. В период с 5 по 8 дни основными процессами, протекающими в ГФ ткани, по-видимому, являются: 1) ограничение притока из крови различных веществ, в том числе и липидов; 2) гидролитическое расщепление части липидов на энергетические и пластические процессы, в том числе, на синтез белка (Музыкант Л.И. и др., 1975). По мере развития ГФ ткани и ее превращения в рубцовую ткань количество ОФЛ (табл. 1) остается постоянным, но наблюдается перераспределение ФЛ фракций: изменяется соотношение ФХ/ФЭА (рис. 1, Б). Рубцовая ткань (23 день эксперимента) отличается от интактной кожи, о чем свидетельствует достоверно высокий уровень ОЛ, ТГ, СЖК, X. ДГ, а также ФЭА, ФК+ПГФ.

В струпе крыс (табл. 1, рис. 1, А, Б) количество ОЛ ниже в 2,6 раза на 5 день регенерации и 1,7 раза на 8 день, чем в ГФ ткани Наряду с этим, содержание ОЛ в струпе крыс практически не отличается от значений интактной кожи на ранних сроках регенерации, однако снижается в 1,4 раза к более поздним этапам регенерации. На долю депонируемых форм липидов в струпе приходится менее 15 %. В ходе регенерации (от 5 дня к 8) содержание ТГ, СЖК, общего холестерина снижается, что, вероятно, является составной частью протекающих в струпе процессов некроза и фиброзного его превращения (Войткевич А.А.. 1965; Серов В.В. и др., 1981). Обращает на себя внимание постоянство уровня ОФЛ на 5 и 8 дни регенерации, содержание которых в струпе крыс существенно выше, чем в ГФ ткани и интактной коже. К 8 дню регенерации уменьшается количество основных мембранных фракций - ФХ, СФМ, что наряду с накоплением мощного детергента - ЛФЛ - может свидетельствовать о глубоких нарушениях структуры и функций биологических мембран клеток струпа крыс.

Таблица 1

Содержание липидов в грануляционно-фиброзной, рубцовой тканях, струпе и прираневых участках кожи крыс в процессе регенерации (мг %, М± т, п = 6)

Липиды Вид ткани

Интактная кожа ГФ ткань Рубцовая ткань Струп Прираневые участки кожи

5 день 8 день 23 день 5 день 8 день 5 день 8 день

ОЛ 1726 ±121 4013 ± 281" 2120 ± 169 1 2329* 186 3 1537± 107 1230± 86 1932± 135 1831± 146

ОФЛ 315 ± 22 249 ± 17 234 ± 19 270 ± 22 391 ± 31 385 ± 31 301 ± 24 185 ± 15й

Здесь и далее: 1 - достоверно по сравнению с 5 днем регенерации, при р < 0,05;

2 - достоверно по сравнению с 8 днем регенерации, при р < 0,05;

3 - достоверно по сравнению с животными интактной группы, при р < 0,05.

В прираневых участках кожи крыс (табл. 1, рис. А и Б) количество ОЛ на 5 и 8 дни регенерации, а также содержание большинства лилидных фракций на 5 день не отличается от показателей интактной кожи, однако, на 8 день эксперимента выявлен более низкий уровень ЭХ и более высокий - ДГ, ТГ. К этому сроку регенерации отмечается достоверное снижение уровня ОФЛ и таких фракций как СФМ, ФХ,

ФИ+ФС, ФЭЛ по сравнению с 5 днем и интактной кожей. Можно предполагать активацию гидролитического распада фосфолипидов при участии фосфолипазы С.

интактная кожа - ГФ ткань: 5 день -Ш, 8 день - В, 23 день - Н; струп: 5 день , 8 день - ё$; прираневые участки кожи: 5 день - Н , 8 день - ЕЭ .

Рис. 1. Содержание отдельных липидньгх (А) и фосфолипидных (Б) фракций в ГФ, рубцовой тканях, струпе и прираневых участках кожи крыс в процессе регенерации.

Полученные результаты свидетельствуют о сложной динамике липидных превращений в ГФ. рубцовой тканях в ходе регенерации. Формирующийся на месте раны рубец отличается от интактной кожи по содержанию многих липидных и фосфолипидных фракций. Регенерация сопровождается также значительными изменениями липидного состава струпа и прираневых участков кожи крыс.

2. Сравнительная характеристика влияния различных доз и способов введения мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс

Результаты исследований показывают, что мелатонин оказывав! влияние на характер изменений липидов раневого поля кожи крыс в ходе регенерации. Обнаружено, что его эффект определяется дозой, длительностью (однократные или многократные инъекции) и способом (подкожное, внутрибрюшинное или местное) введения гормона.

2.1. Влияние предварительного длительного подкожного введения мелатонина на липиды раневого ноля кожи крыс

Из данных табл. 2,3 и рис. 2,3,4 (А, Б) видно, что заживление кожных ран на фоне длительного подкожного введения животным ФР сопровождается иными изме-

нениями липидов ГФ ткани (в отличие от струпа и прираневых участков кожи), чем в условиях нормального заживления. По данным литературы, возможной причиной различий может быть стресс, который вызывает у животных сама процедура инъекций (Ким Реп Хва, 2000). Полученные результаты свидетельствуют о том, что экзогенный МТ вмешивается в динамику изменений липидов ГФ ткани (табл. 2, рис. 2, А, Б) в ходе заживления, причем характер вызванных изменений сильно зависит от дозы гормона.

Таблица 2

Влияние длительного подкожного применения мелатонина на содержание общих

липидов и общих фосфолипидов в грануляционно-фиброзной, рубцовой тканях крыс в _процессе заживления ран (мг %, М± т, п = 6)_

Группы ОЛ ОФЛ

Интактная кожа 1726 ±121 315 ± 22

5 день 8 день 23 день 5 день 8 день 23 день

Контроль 3208± 2626 ± 2157 * 262 ± 246 ± 252 ±

ФР 222 184 129 21 19 20

Мелатонин 2261± 1222 ± 2689 ± 195 * 229 ± 329 ±

0,3 мг/кг 158* 86* 1 161* 2,1 13* 18 19*2

Мелатонин 3016± 1445 ± 2146 ± 257 ± 295 ± 350 ±

1 мг/кг 241 116* 1 172 2 15 23 24*

Мелатонин 4580± 1593 ± 1771 ± 359 ± 252 ± 264 ±

4 мг/кг 321* 112* 1 142 29* 18 1 21

Здесь и далее: * - достоверно по сравнению с соответствующим сроком у контрольных животных, при р < 0,05.

Так, длительное подкожное введение МТ в низких дозах - 0,3 мг/кг препятствует накоплению ОЛ (табл. 2) и ТГ (рис. 2 А) к 5 дню регенерации по сравнению с контрольной группой животных и способствует более резкому снижению их количества к 8 дню регенерации как по сравнению с 5 днем, так и с контрольными показателями. Вероятно, энергия, образующаяся при распаде ТГ, а также СЖК, используется для синтеза гексозаминов, уроновых кислот (Ким Рен Хва, 2000). Обращает на себя внимание также достоверно низкий уровень ОФЛ (табл. 2) и холинсодержащих фракций (СФМ, ФХ) (рис. 2 Б) в ГФ ткани крыс на 5 день регенерации по сравнению с контрольными значениями. В ходе дальнейшего заживления (к 8 дню) содержание почти всех групп фосфолипидов не отличается от контрольных показателей. На последних этапах заживления (23 день) на фоне введения гормона происходит аккумулирование липидов' содержание ОЛ, ДГ, СЖК, ОФЛ, а также ряда фосфолипидных фракций достоверно превышает контрольные величины.

При введении высоких доз МТ - 4 мг/к) (табл. 2, рис. 2 А, Б) в ГФ ткани крыс на 5 день регенерации количество ОЛ, ТГ, ОФЛ и ФЭА, напротив, выше, чем контрольной группе животных. Накопление липидов, вероятно, происходит в результате активации соответствующих синтетических ферментных систем или притока их с кровью, что характерно для начальных этапов регенерации. К 8 дню регенерации наблюдается резкое снижение содержания ОЛ и ОФЛ, главным образом, за счет ТГ, СЖК, а также ФЭА. К 23 дню в отличие от группы крыс, получавших МТ в дозе 0,3 мг/кг, выявлено лишь возрастание уровня отдельных липидных фракций, ФЭА, в частности, относительно контрольных значений.

В динамике изменений содержания липидов у животных, которым вводили гормон в количестве 1 мг/кг, наблюдаются некоторые черты сходства, как с первой, так и с третьей экспериментальными группами. А именно, к 5 дню регенерации отмечено вы-

сокое содержание ТГ по сравнению с контрольными показателями, что характерно для действия МТ в дозе 4 мг/кг. В то время как при формировании рубцовой ткани- перестройки липидов аналогичны таковым в группе животных, получавших МТ в дозе 0,3 мг/кг.

интакгная кожа - □ ; контроль: 5 день Ш , 8 день -И ; 23 день - И ; мелатонин 0,3 мг/кг: 5 день -Ш, 8 день - Й , 23 день ; мелатонин 4 мг/кг: 5 день - Ш, 8 день - В , 23 день - 9 .

Рис. 2. Содержание отдельных липидных (А) и фосфолипидных (Б) фракций в ГФ, рубцовой тканях крыс на фоне длительного подкожного введения мелатонина в процессе заживления ран.

Общей особенностью действия мелатонина во всех исследуемых дозах является снижение в ГФ ткани крыс количества X и ЭХ (рис. 2, А, Б) относительно контрольных величин, что может быть результатом прямого подавления их синтеза или следствием ограничения поступления этих соединений из крови из-за уменьшения количества рецепторов к липопротеидам низкой плотности (^ Т.В. е1 а1., 1986; МиПег-'МЫапс! П. & а!., 1994).

Длительное подкожное использование МТ во всех исследуемых дозах вызывает в струпе крыс (табл. 3, рис. А, Б) значительное снижение содержания ОЛ, большинства липидных и фосфолипидных фракций к 8 дню регенерации, что связано с протеканием реакций гидролиза ТГ, а в случае малых доз (0,3 и 1 мг/кг) и ДГ. В струпе животных, получавших МТ в дозах 1 и 4 мг/кг, отмечается низкое содержание ЭХ на 5 день относительно контрольных величин, а также достоверное уменьшение количества ОФЛ и большинства фосфолипидных фракций к 8 дню регенерации по сравнению с предыдущим сроком. Полученные нами данные свидетельствуют о том,

что длительные инъекции МТ в дозах 0,3; 1 и 4 мг/кг приводят к усилению реакций гидролиза липидов струпа крыс, являющихся составной частью некротических процессов.

Таблица 3

Влияние подкожного введения мелатонина на содержание общих липидов и общих фосфолипидов в струпе и прираневых участках кожи крыс в процессе регенерации _(мг %, М± т, п = 6)_

Вид ткани

Группы Струп Прираневые участки кожи

ОЛ ОФЛ ОЛ ОФЛ

5 день 8 день 5 день 8 день 5 день 8 день 5 день 8 день

Контроль 1437± 1139± 369± 366± 1826± 1711+ 234± 171*

ФР 115 91 29 30 146 137 19 141

Мелатонин 1516± 908± 360± 298± 2718± 1886± 2841: 287±

0,3 мг/кг 136 731 25 21 190* ИЗ1 23 23*

Мелатонин 1474± 854± 487± 230± 1926± 3049± 249± 280±

1 мг/кг 103 60*' 29* 18*' 154 213*' 17 22*

Мелатонин 1483± 891 ± 425± 284± 2182± 2087± 302± 257±

4 мг/кг 133 71' 34 23' 174 167 24 21*

контроль: 5 депь - □, 8 день -Е; мелатонин 0,3 мг/кг: 5 день - Е0,8 день - БЗ; мелатонин 1 мг/кг: 5 день -£3,8 день-Щ ; мелатонин 4 мг/кг: 5 день - Ш, 8 день - Э .

Рис. 3. Содержание отдельных липидных (А) и фосфолипидных (Б) фракций в струпе крыс в условиях длительного подкожного применения мелатонина в процессе регенерации.

Установлено, что в прираневых участках кожи крыс (табл. 3, рис. 4 А, Б) при введении МТ в дозах 0,3 и 1 мг/кг увеличивается количество ОЛ и ТГ, однако это происходит на разных сроках регенерации: в дозе 0,3 мг/кг - на 5 день, в дозе 1 мг/кг - на 8 день по сравнению с контрольными показателями. Вероятными причинами накопления липидов являются как активация соответствующих синтетических ферментных систем, так и приток их с кровью (Кузин М.И. и др., 1990; Федоров В.Д. и др., 1996). В отличие от низких доз, введение МТ в дозе 4 мг/кг не приводит к изменению уровня ОЛ и ТГ, это объясняется тем, что высокие дозы гормона насыщают клеточные рецепторы к МТ и повторное использование гормона не вызывает усиления ответной реакции (Reiter R.J. et al, 1997). Влияние экзогенного МТ во всех исследуемых дозах проявляется также в увеличении количества ЭХ, ФЛ и некоторых ФЛ фракций на 8 день регенерации по сравнению с животными контрольной группы, что позволяет предположить замедление процесса распада ФЛ под действием гормона.

М1%

2000

ФЛ ДГ X сжк

1 * * * ПШШ 1 "1 иИ|П|П|П_ПЗЕВКИ1Н_

ТГ,

. 1

ЭХ

1 * *

160 140 120 100 80 60 40 -20 0

МГ%

ГЛФ

ЛФЛ

СФМ

* 1.

ФХ

ФИ+ФС

ФЭА

ФК+ПГФ

Рис. 4. Содержание отдельных липидных (А) и фосфолипидных (Б) фракций в прираневых участках кожи крыс в условиях длительного подкожного применения мелато-нина в процессе регенерации (обозначения см. на рис. 3).

В связи с тем, что ведущую роль в процессах заживления полнослойных кожных ран отводили ГФ ткани, дальнейшее детальное изучение ответной реакции со стороны липидного компонента рубцовой ткани, струпа и прираневых участков кожи крыс на внутрибрюшинное и местное применение МТ не проводили.

2.2. Действие однократного и многодневного внутрибрюшинного введения мелатонина налипидные показатели грануляционно-фибротой ткани крыс

Однократные внутрибрюшинные инъекции МТ в дозе 4 мг/кг (табл 4, рис. 5, А, Б) на ранних и более поздних сроках регенерации не оказывают влияния на липид-ный и фосфолипидный состав ГФ ткани крыс по сравнению с контрольными величи-

нами. Наряду с этим, в группе животных, ежедневно получавших внутрибрюшинные инъекции МТ, наблюдается более низкое содержание ОЛ и всех липидных фракций, как на 5, так и на 8 дни регенерации по сравнению с контрольными показателями.

Таблица 4

Влияние внутрибрюшинного введения мелатонина на содержание общих липидов и общих фосфолипидов в грануляционно-фиброзной ткани крыс в процессе регенерации __(мг%, М*т, п = 6)_

Группы ОЛ ОФЛ

5 день 8 день 5 день 8 день

Контроль 4013 ± 281 2120±169 249 ± 17 234 ±19

Мелатонин 4 мг/кг (одн.) 3994 ±320 2425± 194 1 248 ± 17 268 + 19

Мелатонин 4 мг/кг (многодн.) 3193 ± 224* 1688 ± 101*' 208 ± 14 196 + 12*

мг%

4000 3000 ■ 2000 ■ 1000 ■ О

ФЛ

ГМ'М'Л

ДГ

1 1*

сжк

11*1 П-Пиъ.

1 1

ЭХ

1 1%

140 120 100 80 60-1 40 20 О

МГ%

ГЛФ

1 1.* П 1

ФХ

ЛФЛ

1*1

СФМ

контроль: 5 день -0.8 день - 0 ; мелатонин 4 мг/кг одп.: 5 день -[3,8 день - ® ; мелатонин 4 мг/кг многодн.: 5 день - □, 8 день - □.

Рис. 5. Содержание отдельных липидных (А) и фосфолипидных (Б) фракций в ГФ ткани крыс в условиях внутрибрюшинного введения мелатонина в процессе регенерации.

Вероятно, данный факт связан с ограничением под действием эпифизарного гормона накопления липидов в ГФ ткани крыс. Многодневные инъекции гормона не влиякл на количество ОФЛ на 5 день регенерации по сравнению с контрольными значениями, однако на более поздних этапах регенерации внутрибрюшинное применение МТ приводит к снижению содержания ОФЛ, ФИ+ФС, ФЭА, повышению уровня ГЛФ, ЛФЛ относительно контроля, что, по-видимому, свидетельствует как об активации фосфолипаз типа А, Б, так и лизофосфолипаз.

2.3. Местное воздействие мелатонина ни дипидный компонент грануляционно-фиброзной ткани крыс

Обнаружено, что нанесение дистиллированной воды (табл. 5, рис. 6, А, Б) на рану контрольным животным в течение 5 и 8 дней изменяет липидный и фосфоли-

Таблица 5

Влияние местного нанесения мелатонина на содержание общих липидов и общих фосфолипидов в грануляционно-фиброзной ткани крыс в процессе регенерации _(мг %. М± т, п = 6)_

Группы ОЛ ОФЛ

5 8 5 8

Контроль диет, вода 2347 ± 141 1333 ±93' 315 ± 25 219 ±18'

Мелатонин 1,5 мг/мл 2912 ±233 1304 ±91' 387 ± 27 585 ±47*'

Мелатонин 15 мг/мл 1362±109* 1288±103 455 ±36* 380 ±27*

ТГ А

мг% ФХ ФЭА. К

контроль: 5 день - Ш , 8 день - В; мелатонин 1,5 мг/мл: 5 день - К , 8 день - 0 ; мелатонин 15 мг/мл: 5 день - ЦЗ , 8 день - Н-

Рис. 6. Содержание отдельных липидных (А) и фосфолипидных (Б) фракций в ГФ ткани крыс в условиях местного нанесения мелатонина в процессе регенерации.

пидный состав ГФ ткани крыс в сравнении нормальным ходом заживления кожных ран, без применения дистиллированной воды. Так, происходит значительное ограни-

чение накопления ОЛ, главным образом, ТГ на 5 день регенерации по сравнению с нормачьным ходом заживления Это может указывать на стрессирующее влияние дистиллированной воды при длительном нанесении ее на поверхность раны (Ким Рен Хва, 2000).

Эффект местного нанесения МТ на раневую поверхность зависит от концентрации - 1,5 или 15 мг/мл. Аппликация раствора МТ в концентрации 1,5 мг/мл на ранних сроках регенерации вызывает в ГФ ткани крыс увеличение содержания ДГ, СЖК, X, а также большинства фосфолипидных фракций по сравнению с животными контрольной группы на фоне недостоверного повышения ОЛ и ОФЛ. Увеличение концентрации гормона до 15 мг/мл на 5 день регенерации, напротив, сопровождается снижением количества ОЛ и ряда липидных фракций (ТГ, X, ДГ), при этом уровень ОФЛ возрастает по сравнению с контрольными величинами, вероятно, за счет количества ГЛФ, СФМ, ФИ+ФС, ФЭА. Нанесение раствора МТ в низкой дозе (1,5 мг/мл) сопровождается сходным с контрольной группой животных снижением содержания ОЛ и большинства липидных фракций (ТГ, СЖК, X, ЭХ), возрастанием ФИ+ФС к 8 дню регенерации по сравнению с 5 днем. Вместе с тем, необходимо отметить противоположную динамику изменений диглицеридов и фосфолипидов (ОФЛ, СФМ, ФХ, ФЭА, ФК+ПГФ) относительно контрольных показателей. Аппликация гормона в высокой дозе (15 мг/мл) в процессе регенерации приводит к аналогичным с контрольными значениями изменениям липидного компонента (уменьшением количества СЖК, ФХ), различия касаются лишь ЭХ, уровень которых возрастает к 8 дню регенерации по сравнению с предыдущим сроком.

Таким образом, воздействие мелатонина на липидный состав раны в процессе ее заживления является неоднозначным. Представляется вероятным, что в зависимости от дозы, модели введения гормона и сроков наблюдения, может происходить дифференциальная активация различных прямых (собственные мембранные и ядерные рецепторы) и опосредованных (биологически активные метаболиты и другие гормоны) регуляторных механизмов. Кроме того, эффект мелатонина определяется метаболическими и морфо-функциональными особенностями исследуемых тканей (грануляционно-фиброзной, рубцовой, струпом, прираневыми участками кожи).

ВЫВОДЫ

1. В динамике нормального заживления ГФ ткани крыс на 5 день регенерации наблюдается аккумулирование ОЛ за счет ТГ с последующим их гидролитическим расщеплением к 8 дню регенерации. Формирующаяся к 23 дню исследований рубцовая ткань отличается от интактной кожи повышенным содержанием ОЛ, ТГ, СЖК, X, что способсп вуе! восстановлению утраченных производных кожи. В струпе крыс в процессе регенерации отмечается уменьшение уровня ТГ, СЖК, X, СФМ, ФХ, накопление ЛФЛ в результате преобладания процессов некроза и фиброзного его превращения. В прираневых участках кожи в отличие от интактной кожи происходит уменьшение количества ОФЛ и их фракций: СФМ, ФХ, ФИ+ФС, ФЭА в результате активации гидролиза фосфолипидов.

2. В результате длительного предварительного подкожного введения мелатонина в дозе 0,3 мг/кг наблюдается снижение, в дозе 4 мг/кг - увеличение содержания ОЛ, ТГ в ГФ ткани крыс на ранних сроках регенерации. К 8 дню регенерации длительные инъекции мелатонина во всех исследуемых дозах приводят к уменьшению количества ОЛ, ОФЛ и их фракций. На последних этапах заживления (23 день) происходит накопление липидов за счет ОЛ, ОФЛ и ряда их фракций.

0.3.мг/кг на 5 день регенерации и 1 мг/кг на 8 день вызывает возрастание ОЛ и ТГ, в дозах 0,3; 1 и 4 мг/кг - накопление ОФЛ и большинства фосфолипидных фракций.

4. Однократное внутрибрюшинное введение мелатонина в дозе 4 мг/кг не приводит к изменению содержания липидов и фосфолипидов в ГФ ткани крыс. Вместе с тем, в результате многодневных внутрибрюшинных инъекций гормона в этой же дозе уменьшается уровень ОЛ и их фракций на 5 и 8 дни регенерации. На 8 день регенерации многодневное применение мелатонина вызывает снижение количества ОФЛ, СФМ, ФЭА, возрастание ЛФЛ.

5. В условиях местного нанесения раствора мелатонина в концентрации 1,5 мг/мл в ГФ ткани крыс на ранних сроках регенерации обнаруживается возрастание количества ОЛ, СЖК, X и ОФЛ за счет большинства фосфолипидных фракций. В концентрации 15 мг/мл на 5 день регенерации гормон способствует снижению ОЛ в результате уменьшения содержания ТГ, X, и возрастанию суммарных фосфолипидов и ряда их фракций. Мелатонин в концентрациях 1,5 и 15 мг/мл на 5 и 8 дни регенерации приводит к снижению содержания ОЛ, большинства их фракций и стимулирует увеличение уровня фосфолипидов в ГФ ткани крыс.

6. Результаты исследований позволили установить, что мелатонин неоднозначно влияет на характер изменений липидов раневого поля кожи крыс в ходе регенерации. Его эффект зависит от дозы, длительности (однократные или многодневные) и способов (подкожное, внутрибрюшинное или местное) введения гормона и определяется морфо-фукциональными особенностями исследуемых тканей (грануляционно-фиброзной, рубцовой, струпом, прираневыми участками кожи).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ким Рен Хва, Маркина Л.Г., Гусева В.В., Володина Т.В., Козельцев В.Л., Грибанов Г.А., Быков В.А. Влияние мелатонина на заживление ран и некоторые биохимические характеристики грануляциошю-фиброзной ткани крыс // Биомедицинские технологии. - М., 1999. - вып. 11. - С. 114-120.

2. Гусева В.В., Грибанов.Г-А. Влияние мелатонина на липидные показатели кожи и шерсти белых крыс при регенерации // Тезисы докладов VII Областной научно-технической конференции молодых ученых «Химия и химическая технология». -Тверь, 2000. - С. 19.

3. Ким Рен Хва, Гусева В.В., Володина Т.В., Ольшевский Е.Г., Абрамов Ю.В., Грибанов Г.А., Козельцев В.Л., Быков В.А. Влияние мелатонина на биохимическую характеристику гликозаминогликанов и липидов грануляционно-фиброзной ткани крыс // Биомедицинские технологии. - М., 2000. - вып 13. - С. 15-20.

4. Ким Рен Хва, Володина Т.В., Маркина Л.Г., Козельцев В.Л., Грибанов Г.А., Гусева В.В., Быков В.А. Влияние мелатонина на липидные показатели кожи и шерсти белых крыс при регенерации кожных ран // Актуальные проблемы биохимии и биотехнологии.-Тверь, 2001.-С. 112-119.

5. Гусева В.В., Синегина Л.Л., Грибанов Г.А. Влияние разных доз мелатонина на изменения фосфолипидных показателей гранулем крыс // Тезисы докладов научной конференции аспирантов и студентов. - Тверь, 2001. - С. 33-34.

6. Гусева В.В., Грибанов Г.А. Влияние мелатонина на фосфолипидный компонент кожи в условиях регенерации // Тезисы докладов VIII Областной научно-технической конференции молодых ученых «Химия и химическая технология». - Тверь, 2001. - С. 18.

7. Гусева В.В., Грибанов Г.А. Влияние предварительного введения мелатонина на липиды грануляционно-фиброзной ткани // Тезисы докладов VIII областной научно-технической конференции молодых ученых «Химия и химическая технология». -Тверь, 2001.-С. 39.

8. Гусева В.В., Грибанов Г.А., Володина Т.В., Козельцев В.Л. Влияние длительного введения разных доз мелатонина на изменения фосфолипидных параметров кожи крыс при регенерации // Тезисы докладов 5-ой Международной Путинской школы конференции молодых ученых «Биология - наука 21 го века». Сборник тезисов. -Пущино, 2001.-С. 121-122.

9. Гусева В.В., Грибанов Г.А., Володина Т.В., Козельцев В.Л. Влияние мелатонина на фосфолипидный компонент грануляционно-фиброзной ткани крыс при его наружном применении // Тезисы докладов 5-ой Международной Путинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука 21 го века». Сборник тезисов. - Пущино, 2001.-С. 122-123.

10. Грибанов Г.А., Костюк Н.В., Гусева В.В. Влияние мелатонина на фосфолипидный состав кожи крыс в условиях регенерации // Тезисы докладов I Международного конгресса «Новые медицинские технологии». - СПб, 2001.-С. 177-178.

11. Володина Т.В., Ольшевский Е.Г., Абрамов Ю.В., Гусева В.В., Виноградова Е.В., Грибанов Г.А., Козельцев В.Л., Быков В.А. Влияние парентерального введения мелатонина на биохимический состав грануляционно-фиброзной ткани крыс // Вопр. мед. химии. - 2001. - Т. 47, № 4. - С. 393-404.

12. Гусева В.В., Грибанов Г.А., Володина Т.В., Козельцев В.Л. Влияние разных доз мелатонина на изменения липидных параметров гранулем крыс в условиях регенерации // Тезисы докладов межвузовской научной конференции молодых ученых. -Тверь, 2001.-С. 6-7.

13. Гусева В.В., Грибанов Г.А., Володина Т.В., Козельцев В.Л. Влияние мелатонина на липидный состав прираневых участков кожи крыс при его местном применении // Тезисы докладов 6-ой Международной Пущинской школы конференции молодых ученых «Биолог ия - наука 21 га века». Сборник тезисов. Т. 1 - Пущино, 2002. - С. 238239.

14. Костюк Н.В., Гусева В.В., Грибанов Г.А., Ребров Л.Б., Козельцев В.Л., Володина Т.В. Липиды кожи крыс при длительном действии мелатонина // Тезисы докладов 6-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология -наука 21 го века». Сборник тезисов. Т. 1 - Пущино, 2002. - С. 264-265.

15. Грибанов Г.А., Гусева В.В., Володина Т.В., Козельцев В.Л., Быков В.А. Фосфолипидный компонент грануляционно-фиброзной ткани крыс при местном применении мелатонина // Бюлл. эксп. биол. и мед.-2003.-Т. 135, № 1— С. 55-57.

16. Гусева В.В., Грибанов Г.А., Володина Т.В., Козельцев В.Л. Липиды грануляционно-фиброзной ткани и прираневых участков кожи крыс на фоне введения мелатонина // Тезисы докладов 7-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука 21 ™ века». Сборник тезисов. Т.1 - Пущино, 2003-С. 325 - 326.

17. Володина Т.В., Козельцев В.Л., Виноградова Е.В., Грибанов Г.А., Гусева В.В., Быков В.А. Влияние длительного применения мелатонина на липидный состав кожи крыс // Биомедицинские технологии. - М., 2003. - вып.20- С. 111-122.

18. Гусева В.В., Панкрушина А.Н., Костюк Н.В., Козельцев В.Л., Володина Т.В. Изменения липидного компонента грануляционно-фиброзной ткани в ходе заживления: эффект экзогенного мелатонина // Сборник статей «Естествознание и гумма-низм». - Томск, 2004. - Т. 1, № 2. - С. 33-34.

19. Гусева В.В., Панкрушина А.Н. Внутрибрюшинное воздействие мелатонина на липиды грануляционно-фиброзной ткани крыс // Тезисы докладов XII Областной научно-технической конференции молодых ученых «Химия и химическая технология». -Тверь, 2005.- С./К

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГЛФ - глицерофосфаты ГФ ткань - грануляционно-фиброзная ткань ДГ - диглицериды ЛФЛ - лизофосфолипиды МТ - мелатонин ОЛ - общие липиды ОФЛ - общие фосфолипиды ПГФ - полиглицерофосфаты СЖК - свободные жирные кислоты СФМ - сфингомиелины

ТГ - триглицериды

ФИ - фосфатидилинозиты

ФК - фосфатидные кислоты

ФЛ - фосфолипиды

ФР - физиологический раствор

ФС - фосфатидилсерины

ФХ - фосфатидилхолины ФЭА - фосфатидилэтаноламины

X - холестерин

ЭХ - эфиры холестерина

Выражаю глубокую благодарность и признательность доктору медицинских наук, профессору Владиславу Львовичу Козельцеву и кандидату медицинских наук Татьяне Владимировне Володиной за предоставление возможности использования экспериментальной базы в Научно-исследовательском и учебно-методического Центре биомедицинских технологий «ВИЛАР», г. Москва, а также за участие в обсуждении и трактовке полученных результатов исследований.

Технический редактор А.М.Полякова Подписано в печать 31.03.2005. Формат 60 х 84 Vis-Бумага типографская № 1. Печать офсетная. Усл.печ.л. 1,25. Уч.-изд.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 158. Тверской государственный университет, Редакционно-издательское управление. Адрес: Россия, 170000, г. Тверь, ул. Желябова, 33. Тел. РИУ: (0822) 35-60-63.

7 i

i ¡

i !

РНБ Русский фонд

2005-4 45464

.«„«¿Ufó

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гусева, Вероника Валентиновна

I. ВВЕДЕНИЕ.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Характеристика липидов кожи.

2.2. Регенерация кожи и процесс формирования грануляционно-фиброзной ткани.

2.2.1. Морфологические характеристики грануляционно-фиброзной ткани.

2.2.2. Некоторые биохимические особенности развивающейся грануляционно-фиброзной ткани.

2.2.3. Влияние различных гормонов на процесс репаративной регенерации кожи.

2.3. Биологическое действие мелатонина.

2.3.1. Структура, синтез и содержание мелатонина в тканях.

2.3.2. Биологические эффекты мелатонина.

2.3.3. Влияние мелатонина на репаративные процессы в коже.

III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Объекты исследований.

3.2. Организация исследований.

3.2.1. Модельные системы для изучения процесса регенерации кожи.

3.2.2. Изучение влияния мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс.

3.3. Методы анализа липидов.

3.3.1. Получение и очистка общего липидного экстракта.

3.3.2. Анализ общих липидов и их отдельных фракций.

3.3.3. Микрометоды определения общих фосфолипидов и их фракций.

3.4. Статистическая обработка результатов исследований.

IV. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Изменения содержания общих липидов, общих ^ фосфолипидов и их фракций в грануляционнофиброзной, рубцовой тканях, струпе и прираневых участках кожи крыс в процессе регенерации.

4.2. Влияние подкожного введения мелатонина на липидные показатели грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей, струпа и прираневых участков кожи крыс в процессе регенерации.

4.3. Влияние внутрибрюшинных инъекций мелатонина на липидный состав грануляционно-фиброзной ткани крыс.

4.4. Изменения липидов грануляционно-фиброзной ткани крыс в условиях местного нанесения мелатонина.

V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

5.1. Характеристика изменений липидных показателей раневого поля крыс при нормальном заживлении кожных ран.

5.2. Сравнительная характеристика влияния длительного предварительного подкожного введения разных доз

Л мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс.

5.3. Особенности действия однократного и многодневного введения мелатонина на липидные показатели грануляционно-фиброзной ткани крыс.

5.4. Особенности воздействия местного применения мелатонина на липиды грануляционнофиброзной ткани крыс.

5.5. Сравнительная характеристика влияния разных способов и режимов введения мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в ходе регенерации.

VI. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние экзогенного мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в процессе регенерации"

Актуальность проблемы. Регенерация кожных ран является сложным многоэтапным процессом, сопровождающимся разнообразными изменениями клеточных компонентов раневого поля (грануляционно-фиброзной, рубцовой, тканей, струпа, прираневых участков кожи), существенными биохимическими перестройками белкового, углеводного, липидного и минерального обменов в нем [14,55,79,102]. Проведены многочисленные исследования, посвященные проблемам регуляции раневого процесса с помощью различных физико-химических факторов, лекарственных и гормональных препаратов [22,104,125,155,183].

В настоящее время большее значение приобретает изучение влияния на заживление ран эпифизарного гормона мелатонина в связи с его использованием в лечении разнообразных, в том числе кожных заболеваний [1,6,70,73,76]. Известно, что мелатонин проявляет широкий спектр действия. Этот гормон считается модучятором иммунной и эндокринной систем [5,89,90], обладает выраженными антиоксидантными свойствами [84,176,190,193], влияет на пролиферацию клеток [87,122,135,145], участвует в регуляции метаболизма белков, липидов и углеводов разных органов и тканей [123,186,194]. Перечисленные функции мелатонина позволяют предполагать как прямые, так и опосредованные механизмы его влияния на процессы репарации. На клеточном уровне это может выражаться в изменении динамики энергетического и пластического обменов компонентов раневого поля. Установлено, что экзогенный мелатонин изменяет спектр солерастворимых белков и фракционный состав гликозаминогликанов грануляционно-фиброзной ткани [50]. Данные, касающиеся влияния мелатонина на превращения липидов раневого поля, в настоящее время крайне ограничены. Вместе с тем, подобные исследования представляют интерес как с точки зрения выявления новых аспектов действия гормона в организме, так и в плане разработки общей проблемы регуляции восстановительных процессов в различных тканях. и

В задачи исследования входило:

1. Выявить изменения липидного состава раневого поля кожи крыс при нормальном заживлении.

3. Оценить действие однократных и многодневных внутрибрюшинных ^ инъекций мелатонина на липидные параметры грануляционно-фиброзной ткани крыс в процессе регенерации.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Процесс регенерации сопровождается значительными изменениями липидных показателей раневого поля кожи крыс: грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей, струпа, прираневых участков кожи. В грануляционно-фиброзной ткани крыс к 5 дню регенерации происходит накопление липидов, с их последующим гидролитическим расщеплением к 8 дню. Превращение данной ткани в рубцовую сопровождается увеличением количества липидов, с активацией распада фосфолипидов в струпе и прираневых участках кожи.

М количества липидов в грануляционно-фиброзной ткани крыс на 5 день регенерации. К 8 дню преобладают реакции гидролиза липидов; к 23 дню заживления наблюдается аккумулирование липидов. Под влиянием мелатонина в дозах 0,3; 1 и 4 мг/кг в струпе крыс усиливаются процессы гидролитического расщепления липидов, в прираневых участках кожи обнаруживается накопление липидов и фосфолипидов.

Научная новизна. В работе представлены новые данные о липидном составе раневого поля кожи крыс и динамике его изменений в ходе нормального заживления кожных ран. Выявлены изменения липидных показателей грануляционно-фиброзной ткани, струпа и прираневых участков кожи на 5, 8 дни регенерации, рубцовой ткани на 23 день заживления под влиянием предварительного подкожного введения разных доз мелатонина. Проведено сравнительное изучение изменений липидных и фосфолипидных параметров грануляционно-фиброзной ткани в условиях внутрибрюшинного (однократного и многодневного) и местного применения разных доз мелатонина в процессе регенерации. Проведенные нами исследования установили участие мелатонина в регуляции уровня липидов в раневом поле кожи крыс. Выявлено неоднозначное, в ряде случаев разнонаправленное влияние мелатонина, а также дозозависимый характер действия этого гормона в отношении липидов раневого поля кожи крыс.

Теоретическое и практическое значение. Полученные данные вносят определенный вклад в понимание роли липидов в процессе заживления кожных ран. Результаты проведенных исследований дают возможность более полного понимания молекулярно-биохимических механизмов влияния мелатонина на липидный состав грануляционно-фиброзной, рубцовой тканей, струпа и прираневых участков кожи крыс, дополняют и расширяют представления о роли эпифизарного гормона в регуляции липидного обмена в исследуемых тканях в динамике регенерации. Представленные результаты открывают возможность поиска новых путей предупреждения негативных последствий применения мелатонина в восстановление повреждений кожи, выполнение ею разнообразных функций. Представленные данные необходимо учитывать при разработке рекомендаций для клинических испытаний мелатонина в практике гастроэнтерологии, дерматологии, в косметологии и других областях медицины.

Апробация работы. Материалы диссертационного исследования докладывались и обсуждались на VII, VIII, XII Областной научно-технической конференции молодых ученых «Химия и химическая технология», Тверь, 2000, 2001, 2005; научной конференции аспирантов и студентов, Тверь, 2001; I Международном конгрессе «Новые медицинские технологии», СПб, 2001; Межвузовской научной конференции молодых ученых, Тверь, 2001; 5-ой, 6-ой, 7-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука 21 го века», Пущино, 2001, 2002, 2003.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гусева, Вероника Валентиновна

VI. выводы

1. В динамике нормального заживления ГФ ткани крыс на 5 день регенерации наблюдается аккумулирование OJ1 за счет ТГ с последующим их гидролитическим расщеплением к 8 дню регенерации. Формирующаяся к 23 дню исследований рубцовая ткань отличается от интактной кожи повышенным содержанием OJI, ТГ, СЖК, X, что способствует восстановлению утраченных производных кожи. В струпе крыс в процессе регенерации отмечается уменьшение уровня ТГ, СЖК, X, СФМ, ФХ, накопление ЛФЛ в результате преобладания процессов некроза и фиброзного его превращения. В прираневых участках кожи в отличие от интактной кожи происходит уменьшение количества ОФЛ и их фракций: СФМ, ФХ, ФИ+ФС, ФЭА в результате активации гидролиза фосфолипидов.

2. В результате длительного предварительного подкожного введения мелатонина в дозе 0,3 мг/кг наблюдается снижение, в дозе 4 мг/кг-увеличение содержания ОЛ, ТГ в ГФ ткани крыс на ранних сроках регенерации. К 8 дню регенерации длительные инъекции мелатонина во всех исследуемых дозах приводят к уменьшению количества ОЛ, ОФЛ и их фракций. На последних этапах заживления (23 день) происходит накопление липидов за счет ОЛ, ОФЛ и ряда их фракций.

3. В струпе крыс при длительном подкожном использовании мелатонина в дозах 0,3; 1 и 4 мг/кг происходит снижение количества ОЛ, ОФЛ и большинства их фракций в процессе регенерации, что, может быть, обусловлено усилением реакций гидролиза липидов. В прираневых участках кожи крыс применение мелатонина в дозах 0,3 мг/кг на 5 день регенерации и 1 мг/кг на 8 день вызывает возрастание ОЛ и ТГ, в дозах 0,3; 1 и 4 мг/кг -накопление ОФЛ и большинства фосфолипидных фракций.

4. Однократное внутрибрюшинное введение мелатонина в дозе 4 мг/кг не приводит к изменению содержания липидов и фосфолипидов в ГФ ткани крыс. Вместе с тем, в результате многодневных внутрибрюшинных инъекций гормона в этой же дозе уменьшается уровень OJI и их фракций на 5 и 8 дни регенерации. На 8 день регенерации многодневное применение мелатонина вызывает снижение количества ОФЛ, СФМ, ФЭА, возрастание ЛФЛ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гусева, Вероника Валентиновна, Тверь

1. Андреева Н.И., Ленина В.В., Либерман С.С. Мелатонин: фармакологические свойства и клиническое применение // Химико-фармац. журнал. 1999. - Т. 33. - № 8. - С.49-52.

2. Арушанян Э.Б., Арушанян Л.Г. Модуляторные свойства эпифизарного мелатонина // Пробл. эндокринол. 1991. - Т. 37. - № 3. - С. 65-68.

3. Арушанян Э.Б., Арушанян Л.Г., Симонов И.А. Физиологические и фармакологические особенности эпифизарных нейропептидов // Эксперим. и клинич. фармакол. 2001. - Т. 64. - № 4. - С.73-79.

4. Арушанян Э.Б., Арушанян Л.Г. Эпифизарный мелатонин как антистрессорный агент // Эксперим. и клинич. фармакол. — 1997. Т. 60. - № 6.-С. 71-77.

5. Арушанян Э.Б., Бейер Э.В. Иммунотропные свойства эпифизарного мелатонина // Эксперим. и клинич. фармакол. 2002. - Т. 65. - № 5. - С. 73-80.

6. Арушанян Э.Б., Дж. М. Аль-Абси, Чеботарев В.В. Лечебные возможности мелатонина и его влияние на иммунологические показатели у больных экземой // Эксперим. и клинич. фармакол. 2003. - Т. 66. - № 3. - С. 59-61.

7. Арушанян Э.Б. Нейрохимическая природа лекарственной психостимуляции: взгляд на проблему четверть века спустя // Эксперим. и клинич. фармакол. 2003. - Т.66. - № 2. - С. 72-80.

8. Бабичев Н.В. Морфофункциональные перестройки кожного покрова у пушных зверей под влиянием препарата «мелакрил» // Автореф. дисс. канд. биол. наук. -М., 1996. 17 с.

9. Богдарин Ю.А., Козлов Д.В. Возможности коррекции липидного метаболизма у кроликов с экспериментальным холелитиазом // Вопр. мед. химии. 2002. - Т. 48. - № 4. - С. 368-372.

10. Болдырев А.А. Введение в биомембранологию. М.: МГУ. — 1990. - 208 с.

11. Бондаренко JI.A. Участие метионина в формировании ночного пика мелатонина в пинеальной железе // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2004. - Т. 137. -№5.-С. 493-494.

12. Бурлакова Е.Б. Влияние липидов мембран на ферментативную активность // в кн. Липиды: структура, биосинтез, превращения, функции. М.: Наука, 1977. - С. 16-27.

13. Бурневич С.З., Сергеева И.А., Игнатенко Ю.Н. и др. Липидный обмен у больных, перенесших панкреонекроз // Анналы хирургии. 2003. - № 1. - С. 53-57.

14. Вальков А.Ю., Ходасевич Л.С. Медиаторы воспаления в патогенезе инфек-ционно-токсического шока менингококковой этиологии // Архив патологии. -2000. Т. 62. - № 2. - С. 52-57.

15. Виссарионова В.А., Иьанченкова Т.А. Липиды сыворотки крови у пациентов с избыточной массой тела до и после липосакции и абдоминопластики // Анналы хирургии. 2003. - № 3. - С. 53-58.

16. Власов А.П., Трофимов В.А., Березин В.А. и др. Модификация обмена липидов при панкреатите под влиянием мексидола // Эксперим. и клинич. фармакол. 2003. - Т. 66. - № 1. С. 48-55.

17. Войткевич А.А. Восстановительные процессы и гормоны. — М.: Медицина, 1965.-252 с.

18. Волкова Е.Н., Бутов Ю.С., Морозов С.Г. К проблеме иммунопатогенеза гнойничковых заболеваний кожи // Вестник дерматол. и венерол. — 2004. № 1.-С. 71-75.

19. Вялов C.JT., Пшениснов К.П., Куиндоз П. и др. Современные представления о регуляции процесса заживления ран (обзор литературы) // Анналы хирургии. 1999. - № 1. - С.49-56.

20. Галебская Л.В. Биохимия барьерной функции кератиноцитов // Вопр. биол., мед. и фармакол. химии. 2003. - № 4. - С. 21 -28.

21. Гаркави А.В., Елисеев А.Т. Раны и раневая инфекция // Медицинская помощь. 2000. - № 4. - С. 25-32.

22. Герман С.В. Мелатонин у человека // Клинич. мед. 1993. - Т. 71. — № 3. -С. 22-30.

23. Глянцев С.П. Вклад А.В. Вишневсого и его школы в учении о ране и раневой инфекции // Анналы хирургии. 2000. - № 5. - С. 74-79.

24. Головко М.Ю. Влияние различных экзогенных физико-химических факторов на аутолитические изменения липидного компонента головного мозга крыс: Дис. . канд. биол. наук. / Тверь, 1998.

25. Голубев A.M., Тинькова И.О. Симпозиум «Патогенез и патологическая анатомия критических, терминальных и постреанимационных состояний» // Архив патологии. 2004. - Т. 66. - № 3. - С. 62-64.

26. Гончарова Н.Д., Хавинсон В.Х., Лапин Б.А. Регулирующее влияние эпиталона на продукцию мелатонина и кортизола у старых обезьян // Бюлл. эксп биол. и мед. 2001. - Т. 131. - № 4. - С. 466-469.

27. Грибанов Г.А. Методы анализа липидов. Лабораторный практикум. -Калинин: КГУ, 1980.-51 с.

28. Грибанов Г.А. О метаболических взаимоотношениях липидов // Успехи совр. биол. 1979. - Т. 87. - № 1. - С. 16-31.

29. Грибанов Г.А. Особенности структуры и биологическая роль лизофосфолипидов // Вопр. мед. химии. 1991. - № 4. - С. 2-10.

30. Грибанов Г.А., Сергеев С.А. Экспресс-анализ общих липидов и их фракций сыворотки крови // Вопр. мед. химии. 1975. - № 6. - С. 652-654.

31. Грибанов Г.А., Сергеев С.А., Алексенко А.С. Микротонкослойная хроматография фосфолипидов сыворотки крови и их количественное определение с помощью малахитового зеленого // Лаб. дело. — 1976. № 12. -С. 724-726.

32. Гусева Н.Г. Простагландин Е 1: результаты и перспективы применения в клинической практике // Клинич. мед. 2001. - Т. 79. - № 2. - С. 4-10.

33. Дембицкий В.М., Рябинин В.Е. Влияние иммобилизационного стресса на диацильные и плазмалогенные формы фосфолипидов в различных органах и тканях // Вопр. мед. химии. 1981. - Т. 27. - № 5. - С. 698-701.

34. Думпе Л.Э., Петухова Н.А. Инструментальная и радионуклидная диагностика поражений органов пищеварения при липидном дистресс-синдроме // Анналы хирургии. 2001. - № 3. - С. 29-36.

35. Евтушенко С.К. Мелатонин и его роль в экспериментальной и клинической нейроиммунологии // Журнал неврологии и психиатрии им. Корсакова С.С. 1994. - Т. 94. - № 3. - С. 93-99.

36. Елисеев В.Г. Соединительная ткань. Гистофизиологические очерки. М.: Медицина, 1961. - 416 с.

37. Ефимов Е.А. О вариациях полноты восстановления кожи при посттравматической регенерации // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1977.-Т. 84.- № 7.-С. 101-104.

38. Ефимов Е.А. О полноте регенерации кожи // Бюлл. эксп. биол. и мед. -1976. Т.81. - № 3. - С. 368-370.

39. Ефимов Е.А. Посттравматическая регенерация кожи. М.: Медицина, 1975.- 168 с.

40. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев: Вища школа, 1974.-303 с.

41. Зенков Н.К., Душкин М.И., Меныцикова Е.Б. и др. Ингибирование мелато-нином окисления липопротеинов низкой плотности // Бюлл. эксп. биол.и мед. 1996. - Т. 122. - № 10. - С.399-402.

42. Иванов А.С. Принципы ферментативного анализа липидов // Биомедицинская химия. 2003. - Т. 49. - № 2. - С. 153-165.

43. Иванов К.П., Мельникова Н.Н. Роль лейкоцитов в динамике микроциркуляции в норме и при патологии // Вестник РАМН. 2004. - № 4. -С. 3-14.

44. Измайлов С.Г., Бесчастнов В.В. Аппаратная техника ушивания ран // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. — 2003. № 11. С. 61-64.

45. Измайлов С.Г., Измайлов Г.А., Видманов Г.И. Оценка эффективности длительно не заживающих ран и трофических язв нижних конечностей // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2003. - № 2. - С. 42-44.

46. Измайлов С.Г., Бесчастнов В.В., Ледяев Д.С. Применение радиоадаптора для лечения гнойных ран // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2004. - № 4. - С. 24-26.

47. Ильяшенко Д.В. Аутолитические изменения липидов различных отделов и ультраструктур головного мозга крыс: Дис. . канд. биол. наук. / Тверь, 1995.

48. Кветной И.М., Райхлин Н.Т., Южаков В.В. и др. Экстрапинеальный мелатонин: место и роль в нейроэндокринной регуляции гомеостаза // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1999. - Т. 127. - № 4. - С. 364-370.

49. Ким Рен Хва Влияние мелатонина на биохимический состав грануляционно-фиброзной ткани крыс: Дис. . канд. мед. наук. / М., 2000.

50. Кожа: строение, функции, общая патология и терапия /под ред. A.M. Чернуха. М.: Медицина, 1982. - 336 с.

51. Колокольчикова Е.Г., Будкевич Л.И., Бобровников А.Э. и др. Морфологические изменения ожоговых ран после пересадки аллогенных фибробластов // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2001. - Т. 131. - № 1. - С. 107-111.

52. Колосова Н.Г., Гришакова А.Ю., Крысанова Ж.С. и др. Возрастные изменения окисленности белков и липидов в печени преждевременно стареющих крыс OXYS // Биомедицинская химия. 2004. - Т. 50. - № 1. - С. 73-79.

53. Комаров Ф.И., Рапопорт С.И., Малиновская Н.К. и др. Мелатонин: язвенная болезнь и сезоны // Клинич. мед. 2003. - Т. 81. - № 9. - С. 17-21.

54. Комаров Ф.И., Рапопорт С.И., Малиновская Н.К. и др. Продукция мелатонина у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в различной стадии течения заболевания // Клинич. мед. 1998. — Т. 76. - № 3. -С. 15-18.

55. Константинова Н.В., Урсо Р.Д., Короткий Н.Г и др. Изучение роли фибробластов как основного фактора дифференцировки эпидермиса // Бюлл. эксп. биол. и мед.-1996.-Т. 121.-№ 1.-С. 80-84.

56. Коркушко О.В., Хавинсон В.Х., Шатило В.Б. и др. Влияние пептидного препарата эпиталамина на суточный ритм мелатонинобразующей функции эпифиза у людей пожилого возраста // Бюл. эксп. биол. и мед. 2004. - Т. 137. - № 4. - С. 441-443.

57. Корнилова З.Х., Селищева А.Н., Перельман М.И. Влияние липосом из фосфатидилхолина на регенерацию операционной раны легкого морскойсвинки // Бюлл. эксп биол. и мед. 2001. - Т. 131. - № 2. - С. 228-232.

58. Костюк Н.В. Влияние мелатонина на липидные показатели кожи крыс в условиях водно-иммобилизационного воздействия: Дис. канд. биол. наук. / Тверь, 2001.- 125 с.

59. Лабунец И.Ф., Бутенко Г.М., Магдич Л.В. и др. Влияние эпиталамина на циркадианные взаимоотношения эндокринной функции тимуса и мелатонинобразующей функции эпифиза у пожилых людей // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2004. - Т. 137. - № 5. - С. 578-580.

60. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. - 351 с.

61. Лизенко Е.И., Сидоров B.C., Регеранд Т.И. и др. Сравнительное исследование уровня холестерина в липопротеидах сыворотки крови человека и некоторых животных // Вопр. биол., мед и фармакол. химии. 2000. - № 2. -С. 34-38.

62. Липатов К.В., Сопромадзе М.А., Емельянов А.Ю. и др. Использование физических методов в лечении гнойных ран // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2001. - № 10. - С. 56-61.

63. Липшиц Р.У., Цераидис Г.С., Звягинцева Г.В. Реакция тучных клеток в поврежденной коже при экспериментальной ране // Вестник дерматол. и венерол. 1984. - № 1. - С. 25-30.

64. Лотова В.И. Результаты изучения репаративного процесса в коже при дополнительном введении гормонов гипофиза // В сб. Проблемы регенерации в эксперименте и клинике / под ред. Соловьева В.А. Тверь, ТГМА, 1999. - С. 11-14.

65. Лычкова А.Э., Смирнов. В.М. Роль липидного и фосфолипидного состава тканей в синергизме отделов вегетативной нервной системы // Вестник РАМН. 2003. - № 3. - С. 28-32.

66. Малиновская Н.К. Мелатонин: вчера, сегодня, завтра // Клинич. мед. -2002. Т. 80. - № 6. - С.71-73.

67. Малиновская Н.К., Рапопорт С.И. Роль мелатонина в регуляции функций желудочно-кишечного тракта // Клинич. мед. 1999. — Т. 77. - № 8. — С. 4-9.

68. Малиновская Н.К. Роль мелатонина в организме человека // Клинич. мед. -1998.-Т. 76.-№ 10.-С. 15-22.

69. Мальцев С.В., Ишкина JI.A. Физиология и патофизиология мелатонина // Казанский мед. журнал. 1999. - Т.80. - № 5. - С. 390-393.

70. Меерсон Ф.З., Петухов М.И., Ходырева А.Ф. и др. Нарушение липидного обмена семенников при эмоционально-болевом стрессе // Вопр. мед. химии. -1983.- Т. 29.- №2.-С. 40-43.

71. Музыкант Л.И., Дудникова Г.Н. Современные данные о функциональной морфологии клеток грануляционной ткани в кожной ране // Архив патологии. 1975. - Т. 37. - № 5. - С. 80-87.

72. Мухин Н.А. Мелатонин в норме и при патологии // Клинич. мед. 2004. -Т. 82.-№6.-С. 71-72.

73. Нагорнев В.А., Мальцева С.В., Васканьянц А.Н. Эволюция взглядов на роль макрофагов в атерогенезе: от Н.Н. Аничкова до наших дней // Архив патологии. 2003. - Т. 65. - № 2. - С. 8-12.

74. Нагорнев В.А., Мальцева С.В. Роль инфекции в развитии иммуного воспаления и патогенезе атеросклероза // Архив патологии. 2000. - Т. 62. -№6.-С. 55-59.

75. Нестеров Ю.В., Теплый Д.Л. Онтогенетический особенности стресс-реактивности легких в отношении липидного обмена // Биомедицинская химия. 2003. - Т. 49. - № 5. - С. 456-463.

76. Новое в учение о регенерации / под ред. Лиознера Л.Д. — М.: Медицина, 1977.-358 с.

77. Осочук С.С. Изменения липидтранспортной системы при экспериментальном перитоните у крыс // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2002. - Т. 134. -№ 1.-С. 169-171.

78. Палеев Н.Р., Палеев Ф.Н. Цитокины и их роль в патогенезе заболеванийсердца // Клинич. мед. 2004. - Т. 82. - № 5. - С. 4-7.

79. Пальцын А.А., Колокольчикова Е.Г., Алексеев А.А. и др. Морфологическое изучение инфицирования ожоговых ран // Хирургия. Журнал имени Н.И. Пирогова. 2000. - № 3. - С. 33-37.

80. Перцов С.С., Абрамов Ю.В., Володина Т.В. и др. Биохимические показ тели кожи и содержание мелатонина в крови у крыс при острой стрессорной нагрузке и введении экзогенного мелатонина // Бюлл. эксп. биол. и мед. — 2004. Т. 137. - № 4. - С. 369-373.

81. Петрова Н.В., Озерова И.Н., Парамонова И.В. и др. Фосфолипидный состав ЛПВП как отражение процессов липолиза богатых триглицеридами липопротеидов при гиперлипидемии // Бюлл. эксп биол. и мед. 2001. - Т. 131.-№4.-С. 382-386.

82. Пикалова В.М., Поступаев В.В., Тимошин С.С. Состояние ПОЛ и антиоксидантной защиты тканей желудка белых крыс при введении ангиотензина II и аналаприла малеата // Бюлл. эксп. биол. и мед.-2003- Т. 135.-№4.-С. 402-405.

83. Раны и раневая инфекция / под ред. Кузина М.И., Костюченок Б.М. М.: Медицина, 1990.-592 с.

84. Рапопорт С.И., Шаталова A.M., Малиновская Н.К. и др. Продукция мелатонина у больных гипертонической болезнью // Клинич. мед. 2000. - Т. 78.-№6.-С. 21-24.

85. Рапопорт С.И. Шаталова A.M. Мелатонин и регуляция деятельности сердечно-сосудистой системы // Клинич. мед. 2001. - Т.79. - № 6. - С. 4-7.

86. Романенко В.Н., Баринова М.Э. Лейкотриены как факторы регуляциивоспалительной реакции кожи крыс при псориазе // Вестник дерматол. и венерол. 2001. - № 5. - С. 93-99.

87. Рябых Т.П., Николаева Т.Г., Бодрова Н.Б. Действие регулятора биоритмов мелатонина на синтез ДНК в краткосрочных культурах злокачественных опухолях человека // Вестник АМН СССР. 2000. - № 8. - С. 30-33.

88. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Степовая Е.А. и др. Эритроцит при патологии: размышления у электоронного микроскопа// Архив патологии. -2004.-Т. 66. № 3.- С. 53-61.

89. Савченкова А.П., Дудник Л.Б., Подгорецкая И.Л. и др. Влияние фибриногена на пероксидное окисление липидов при ишемической болезни сердца и в эксперименте in vitro // Бюлл. эксп. биол. и мед.-2003.- Т. 135. № 1.-С. 37-41.

90. Самсонов В.А., Хачукова Л.М. Липоидный некробиоз: патогенез, клиника, лечение // Вестник дерматол. и венерол. 2002. - № 1. - С. 56-60.

91. Семичева Т.В., Гарибашвили А.Ю. Эпифиз: современные данные о физиологии и патологии // Пробл. эндокринол. 2000. - №. 4. — С. 38-45.

92. Сергеев П.В., Ухина Т.В., Семейкин А.В. и др. Стероидные гормоны-регуляторы липидного спектра лизосомальных мембран фибробластов кожи //Бюлл. эксп. биол и мед. 1998.-Т. 125.-№2.-С. 165-167.

93. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань (функциональная морфология и общая патология). М.: Медицина, 1981. - 312 с.

94. Слуцкий Л.М. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани. Л.: Медицина, 1969. - 376 с.

95. Соколов В.Е. Кожный покров млекопитающих М.: Наука, 1973. - 488 с.

96. Сыч Ю.П., Фадеев В.В., Мельниченко Г.А. и др. Нарушения липидного обмена при субклиническом гипотиреозе // Пробл. эндокринол. 2004. - № 3. -С. 48-53.

97. Титов В.Н. Транспорт липопротеинами (транспортными макрофагами) насыщенных и ненасыщенных жирных кислот (гипотеза) // Вопр. биол., мед и фармакол. химии. 2000. - № 2. - С. 3-10.

98. Торховская Т.Н., Фортинская Е.С., Иванова Л.И. и др. Особенности липид-транспортной системы при псориазе // Вопр. мед. химии. 2002. - Т.48. - № 3. - С. 297-303.

99. Тулабаева Г.М., Ахмедова Н.А. Нарушения липидного состава мембран тромбоцитов при развитии тяжелых форм стенокардии // Вопр. мед. химии. -2002. Т. 48. - № 2. - С. 215-218.

100. Удовиченко О.В., Токмакоча А.Ю., Анциферов М.Б. и др. Клинические и морфологические особенности репаративных процессов у больных с синдромом диабетичекой стопы // Пробл. эндокринол. 2003. - № 1. - С. 19-24.

101. Федоров Д.Н., Ивашкин А.Н., Шинин В.В. и др. Морфологическая и им-муногистохимическая характеристика репаративных процессов в длительно не заживающих ранах // Архив патологии. 2002. - Т. 64. - № 1. - С. 8-11.

102. Федоров В.Д., Саркисов Д.С., Алексеев А.А. и др. Пластическое восстановление кожных покровов с использованием культивированных фибробластов // Анналы хирургии. 1996. - № 4. - С. 16-19.

103. Хомулло Г.В. Репаративная регенерация тканей и гормоны щитовидной железы // В сб. Репаративная регенерация тканей и гормоны / под ред. Хомулло Г.В. М.: Медицина. - 1987. - С.5-12.

104. Хомулло Г.В., Черняев А.Н., Иваненко Т.В. Репаративная регенерация кожи и кальцитонин // В сб. Проблемы регенерации в эксперименте и клинике / под ред. Соловьева В.А. Тверь, ТГМА, 1999. - С. 7-10.

105. Черняев А.Н., Грибанов Г.А. Состояние коллагенеза и обмена липидов в грануляционной ткани при воздействии кальцитонином // Сб. науч. трудов под общей ред. Хомулло Г.В. М.: Медицина, 1982. - С. 19-22.

106. Чибисов С.М., Илларионова Т.С. Роль мелатонина и мелатонинсодержащих препаратов в профилактике десинхроноза // Новая аптека—2002.-№ 6.-С. 60-64.

107. Швец В.Н., Давыдов В.В. Перекисное окисление липидов в сердце взрослых и старых крыс при иммобилизационном стрессе // Биомедицинская химия. 2003. - Т. 49. - № 2. - С. 117-122.

108. Abe М., Reiter R.J., Orhil Р.В. et al. Inhibitory effect of melatonin on cataract fo mation in newborn rats: Evidence for an antioxidative role ofmelatonin // J.

109. Pineal Res. 1994.- V.l 7.- P.94-100.

110. Bindoni M„ Raffacle R. Mitotic activity of the adenohypophis of rats after pinealectomy//J. Endocrinol. -1968.-V. 41.-P. 451-455.

111. Blaicher W., Imhof M.H., Gruber D.M. et al. // Endocrinologic disorders-focusing on melatonins interactions // Gynecol Obstet Invest. 1999. - V. 48. - P. 179-182.

112. Braverman I.M. The cutaneous microcirculation: ultrastructure and microanatomical organization // Microcirculation. 1997. - V. 4. — N 3. - P.329-340.

113. Cagnacci A., Soldani R., Romagnolo C., Yen S.S.C. Melatonin induced decrease of body temperature in women: a threshold event // Neuroendocrinology.1994.-V. 60.-P. 549-552.

114. Cahill G.M., Besharse J.C. Retinal melatonin is metabolized within the eye of xenopus laevis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. - V. 86. - N 3. - P. 10981102.

115. Carossino A.M., Lombardi A., Matuccicerinic M. et al. Effect of melatonin on normal and sclerodermic skin fibroblast proliferation // Clin, and Experim. Rheumatol. 1996. - V. 14. - Iss. 5. - P. 493-498.

116. Chan T.Y., Tang P.L. Effect of melatonin on the maintenance of cholesterol homeostasis in the rat // Endocr. Res. 1995. - V. 21. - N 3. - P. 681-696.

117. Chen L.D., Tan D.X., Reiter R.J. et al. In vivo and in vitro effects of the pineal gland melatonin on ( Ca +Mg ) dependent ATPase in cardiac sarcolemma //J. Pineal Res. 1993. -V. 14.-P. 178-183.

118. Chen W.Y.J., Abatangelo G. Functions of hyaluronan in wound repair // Wound Repair Regen. 1999. - V. 7. - Iss. 2. - P. 79-89.

119. Chithra P., Sajithlal G.B., Chandrakasan G. Influence of aloe-vera on the gly-cosaminoglycans in the matrix of healing dermal wounds in rats // J. Ethnopharmacol. 1998. - V. 59. - lss.3. - P. 179-186.

120. Cho Y.W., Cho Y.N., Chung S.H., et al. Water-soluble chitin as a wound-healing accelerator // Biomateriales. 1999. - V. 20. - Iss. 22. - P. 2139-2145.

121. Costa E.J.X., Lopez R.H., Larnyfreund M.T. Permeability of pure lipid bilayers to melatonin //J. Pineal Res. 1995. - V. 19.-P. 123-129.

122. Drobnik J., Dabrowski R., Szezpanowska A. Collagen accumulation in the wound of a rat is controlled by the pineal gland // Biomedical Letters. 1995. - V. 51.-P. 23-29.

123. Drobnik J. Effect of pineal gland on level of some connective tissue elements in the wounds of rats // Eur. Pineal Soc. News. 1993. - V. 30. - P. 19-20.

124. Elias P.M., Feingold K.R. Lipids and the epidermal water barrier: metabolism, regulation, and pathophysiology // Semin. Dermatol. 1992. - V. 11. - N 2. -P. 176-182.

125. Elias P.M., Feingold K.R. Lipid-related barriers and gradients in the epidermis // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1988. - V. 548. - P. 4-13.

126. Emilsson A., Wijkandrf J., Sundler K. Diacyiglycerol induces deacylation of phosphatidylinositol and mobilisation of arachidic acid in mouse macrophages // Biochem J. 1986. - V. 239.- N 3. - P. 685-690.

127. Farese R.V. Phospholipids as intermediates in hormone action // Mol. and Cell Endocrinol. 1984. - V. 35. - N 1. - P. 1-14.

128. Fischer Т., Wiggeralberti W., Eisner P. Melatonin in dermatology -Experimental and clinical aspects // Hautarzt. 1999. -V. 50.- Iss. l.-P. 5-11.

129. Folch J., Less M., Sloane G. et al. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues // J. Biol. Chem. 1957. - V. 226. -№5.-P. 497-509.

130. Grace M.S., Besharse J.C. Solubilization and biochemical characterization of the melatonin deacetylase from Xenopus laevis retina // J. Neurochem. 1993. -V. 60. -N 3. - P. 990-999.

131. Greco R.M., locono J.A., Ehriich H.P. Hyaluronic-acid stimulates human fibroblast proliferation within a collagen matrix // J. Cell. Physiol. 1998. - V. 177. -Iss. 3. - P. 465-473.

132. Grzesiak J.J., Pierschbaacher M.D., Arnodeo M.F. et al. Enhancement of cell interactions with collagen / glycosaminoglycan matrices by RGD derivatization // Biomaterials. 1997. - V. 18. - Iss. 24. - P. 1625-1632.

133. Hairnov 1., Lavie P. Melatonin a chronobiotic and soporific hormone // Arch. Gerontol. And Geriatrie. - 1997. - V. 24. - Iss. 2.- P. 167-173.

134. Harper E. Collagenases // Ann. Rev. Biochem. 1980. - V. 49. - P. 1063-1078.

135. Holfbauer L.C., Heufelder A.E. Endocrinology meets immunology-T lymphocytes as novel targets for melatonin // Eur. J. Endocrinol. 1996. - V. 134. -P. 424-425.

136. Houck J.C., Jacob R.A., Sharma V.K. et al. The catabolism of cutaneous collagen // Advances in Biology of Skin. Vol. X. The Dennis. / Eds. W. Montagnaand J.P. Bentley and R.L. Dobson. Appleton-Century-Crofts, New York. - 1968. -P.49-67.

137. Howdieshell T.R., Riegner C., Gupta V. et al. Normoxic wound fluid contains high-levels of vascular endothelial growth-factor // Ann. Surg. 1998. -V. 228. - Iss. 5.-P. 707-715.

138. Janus J., Dabrowski R. The effect of pinealectomy and exogenous melatonin on some connective tissue elements content in the skin // Thirtieth Congress of Polish Biochemical Society. 1994.-P.-309-312.

139. Kelly G.S. Squalene and its potential clinical uses // Altern. Med. Rev. 1999. -V.4.-N l.-P. 29-36.

140. Kossi J., Peltonen J., Ekfors T. et al. Effects of hexose sugar-glucose, fruc tose, galactose and mannose on wound-healing in the rat // Eur. Surg. Res. 1999. -V. 31.-Iss. l.-P. 74-82.

141. Kuc I.M., Scott P.G. Increased of collagen fibrils precipitated in vitro in the presence of decorin from various connective tissues // Connect. Tissue Res. -1997. -V. 36. Iss. 4. - P. 287-296.

142. Lemer A.B. My 60 years in pigmentation // Pigm. Cell. Res. 1999. - V. 12. -Iss. 2-P. 131-144.

143. Leppimaki P., Kronqvist R., Slotte J.P. The rate of sphingomyelin synthesis de novo is influenced by the level of cholesterol in cultured human skin fibroblasts // Biochem. J. 1998. - V. 335. - N 2. - P. 285-291.

144. Lerner A.B., Case J.D., Takahashi Y. Isolation of melatonin the pineal factor that linghtens melanocytes // J. Amer. Chem. Soc. 1958. - V. 80. - P. 2587-2589.

145. Li L., Wong J.T.Y., Pang S.F., Chui S.Y.W. Melatonin induced stimulation of rat corpus epididymal epithelial-cell proliferation // Life Sci. 1999. - V. 65. -Iss.10.-Р. 1067-1076.

146. Lopez-Gonsalez M.A., Calvo J.R., Osuna C. et al. Synergistic action of melatonin and vasoactive intestinal peptide in stimulating cyclic AMP production in human lymphocytes//J. Pineal Res. 1992. -V. 12. - P. 74-181.

147. Madlener M., Parks W.C., Werner S. Matrix metalloproteinases ( Mmps ) and their physiological inhibitors (Trimps ) are differentially expressed during excisional skin wound repair//Exp. Cell. Res. 1998. -V. 242.-Iss. l.-P. 201-210.

148. Mahal H.S., Sharma H.S., Mukherjee T. Antioxidant properties of melatonin-a-pulse-radiolysis study // Free Radical Biol. Med. 1999. - V. 26. - P. 557-565.

149. Malpaux В., Thiery W.C., Chemineau P. Melatonin and the seasonal control of reproduction // Reprod. Nutr. Develop. 1999. - V. 39. - Iss. 3. - P. 355-366.

150. Martson M., Viljanto J., Laippala P., Saukko P. Connective-tissue formation in subcutaneous cellullose sponge implants in the rat the effect of the size and cellulose content of the implant // Eur. Surg. Res.-1998.-V. 30.-Iss.6.-P. 419-425.

151. Menaghini R., Martins E.I. Hydrogen peroxide and DNA damage // DNA and free radicals / Eds. B. Halliwell, I.I. Aruorna. Ellis Harwood, Chichester, 1993. -P. 83-94.

152. Moulin V., Castilloux G., Auger F.A. et al. Modulated response to cytokines of human wound-healing myofibroblasts compared to dermal fibroblasts // Exp. Cell. Res. 1998.-Iss. l.-P. 283-293.

153. Muller-Wieland D., Behnke В., Koopmann K. et al. Melatonin inhibits LDL receptor activity and cholesterol synthesis in freshly isolated human mononuclear leukocytes//Biochem. Biophys. Res. Commun-1994. V. 203.-N 1-P. 416-421.

154. Ng T.B., Wong C.M. Effects of pineal indoles and arginine vasotocin on lipolysis and lipogenesis in isolated adipocytes // J. Pineal. Res. 1986. - V. 3. — N l.-P. 55-66.

155. Nesher M., Boneh A. Effect of fatty acids and their acyl-CoA esters on protein kinase С activity in fibroblasts: possible implications in fatty acid oxidation defects // Biochim. Biophys. Acta. 1994. - V. 1221. - N 1. - P. 66-72.

156. Nishikori Y., Kakizoe E., Kobayashi Y. et al. Skin mast-cell promotion of matrix remodelling in bum wound healing in mice - relevance of chymase // Arch. Dermatol. Res. - 1998. - V. 290. - Iss. 10. - P. 553-560.

157. Ozaki Y., Sakaguchi 1., Tujimura M. et al. Study of the accelerating effect of shikonin and alkannin on the proliferation of granulation-tissue in rats // Biol. Pharm. Bull. 1998. - V. 21. - Iss. 4. - P. 366-370.

158. Papazisis K.T., Kouretas D., Geromichalos G.D. et.al. Effects ofmelatonin on proliferation of cancer cell-lines // J. Pineal. Res. 1998. - V. 25.-Iss. 4.-P. 211-218.

159. Parker L. Vitamin E is nature's master antioxidant // Sci. Amer. (Sci. Med.) 1994. Mar./Apr. - P.54-63.

160. Parola M., Muraca R., Dianzani I et al. Vitamin E dietary supplementation inhibits transforming growth factor В I gene expression in the rat liver // FEBS Lett. 1992.-V. 308.-P. 267-270.

161. Petit L., Guardiola В., Delagrange P. et al. Signaling by melatonin receptors // Therapie. 1998. - V. 53. - N 5. - P. 421-428.

162. Pierrefiche G., Topall G., Courboin G. et al. Antioxidant activity of melatonin in mice // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol. 1993. - V. 80. - P. 211-223.

163. Poli G., Parola M. Oxidative damage and fibrogenesis // Free Radical Biology & Medicine. 1997. - V. 22. - P. 287-305.

164. Ramsing D.W., Agner T. Effect of water on experimentally irritated human skin // Br. J. Dermatol. 1997. - V. 136. - N 3. - P. 364-367.

165. Redoules D., Tarroux R., Perie J. Epidermal enzymes: their role in homeostasis and their relationships with dermatoses // Skin. Pharmacol. Appl. Skin. Physiol.- 1998.-V. 11.-N 4.-P. 183-192.

166. Reiter R.J. Functional-aspects of the pineal hormone melatonin in combating cell and tissue-damage induced by free-radicals // Eur. J. Endocrinol. 1996. -V. 134.-P. 412-420.

167. Reiter R.J., Melchiorri D., Sewerynek E. et al. A review of the evidence supporting melatonin's role as an antioxidant // J. Pineal Res. 1995. - V. 18. -N l.-P. 1-11.

168. Reiter R.J., Tang L.D., Garcia J.J., Munozhoyos A. Pharmacological actions of melatonin in oxygen radical // Life Sci. 1997. - V. 60. - Iss. 25. - P. 2255-2271.

169. Reppert S.W., Weaver D.R., Ebisawa T. Cloning and characterization of mammalian melatonin receptor that mediates reproduction and circadian response // Neuron. 1994. - V. 13. -P. 1177-1185.

170. Robson K.J., Stewart M.E., Michelsen S. et al. 6-Hydroxy-4-sphingenine in human epidermal ceramides // J. Lipid. Res. 1994. - V. 35. - N 11. - P. 20602068.

171. Roca A.L., Godson C., Weaver D.R., Reppert S.M. Structure, characterization and expression of the gene encoding the mouse Mel (IA) melatonin receptor// Endocrinol. 1996. - V. 137. - P. 3469-3477.

172. Rogers J., Harding C., Mayo A. Stratum corneum lipids: the effect of ageing and the seasons // Arch. Dermatol. Res. 1996. - V. 288. - N 12. - P. 765-770.

173. Sato J., Denda M., Nakanishi J. et al. Cholesterol sulfate inhibits proteases that are involved in desquamation of stratum corneum // J. Invest. Dermatol. 1998. -V. 111.-N2.-P. 189-193.

174. Schaeffer H.J., Sirotkin A.V. Melatonin and serotonin regulate the release of insulin-like growth-factor-1, oxytocin and progesterone by cultured human granulosa-cells // Exp. and Clinical Endocrinology & Diabetes. 1997. - V. 105. -ss. 2.-P. 109-112.

175. Schmid P., Itin P., Cherry G. et al. Enhanced expression of transforming growth-type-factor-beta type-I and type II receptors in wound granulation-tissue and hypertrophic scar// Amer. J. Pathol. - 1998.-V. 152.- Iss. 2. - P. 485-493.

176. Sekine Т., Kojirna K., Matsumoto T. et al. Evaluation of shikonin on granulation tissue formation compared with carrageenan // Biolog.& Pharmac. Bull. 1998. - V. 21. - Iss. 9. - P. 950-952.

177. Slominski A., Baker J., Rosano T.G. et al. Metabolism of serotonin to N-acetylserotonin, melatonin, and 5-methoxytryptamine in hamster skin culture // Biol. Chem.- 1996.-V. 271.-N21.-P. 12281-12286.

178. Slominski A., Chassalevris N., Mazurkiewicz J. et al. Murine skin as a target for melatonin bioregulation // Exp. Dermatol. 1994. -V. 3. -N 1. - P. 45-50.

179. Song Y., Tarn P.C., Poon A.M.S. et al. 2- ( J125 ) iodomelatonin-binding sites in the human kidney and the effect of 5 ®-0- (3-thiotriphosphate) // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. - V. 80. - P. 1560-1565.

180. Spyrou G.E., Watt D.A.L., Naylor I.L. The origin and mode of fibroblast migration and proliferation in granulation-tissue // Brit. J. Plast. Surg. 1998. -V. 51.-Iss. 6.-P. 455-461.

181. Srinivasan V. Melatonin, oxidative stress and aging // Curr. Sci. 1999. - Vol. 76.-Iss. l.-P. 46-54.

182. Stehie J.H., Foulkes N.S., Molina C.C. et al. Adrenergic signals direct rhythmic expression of transcriptional represser CREM in pineal gland // Nature. — 1993.-V. 365.-P. 314-320.

183. Tan D.X., Reiter R.J., Chen L.D. et al. Both physiological and pharmacologica levels of melatonin reduce DNA adduct formation induced by the carcinogen safrole // Carcinogenesis. 1994. -V. 15.-P. 215-218.

184. Tortonese D.J., Lincoln G.A. Effects of melatonin in the mediobasal hypothalamus on the secretion of gonadotrophins in sheep: rote of dopaminergic pathways // J. Endocrinol. 1995. - V. 146. - N 3. - P. 543-552.

185. Van Cauter E. Putative roles of melatonin in glucose regulation // Therapie. -1998. V. 53.-N 5. - P. 467-472.

186. Wade G.N., Bartness T.J. Seasonal obesity in Syrian hamsters: effects of age, diet, photoperiod, and melatonin // Amer. J. Physiol. 1984. - V. 247. - N 2. - P. 328-334.

187. Warner R.R., Boissy Y.L., Lilly N.A. et al. Water disrupts stratum corneum lipid lamellae: damage is similar to surfactants // J. Invest. Dermatol. 1999. -V. 113.-N6.-P. 960-966.

188. Wetterberg L. Melatonin ana clinical-application // Reprod. Nutr. Develop. 1999. V. 39. - Iss. 3. - P. 367-382.

189. Wittenderby P.A., Dubocovich M.L. Characterization and regulation of the human ml(IA) melatonin receptor stably expressed in chinese-hamster ovary cells // J. Mol. Pharmacol. 1996. -V. 50.-P. 166-174.

190. Yie S.-M., Miles L.P., Younglai E.V. Melatonin receptors on human granulosa cell membranes. 1995. - V. 80. - P. 1747-1749.

Информация о работе

Гусева, Вероника Валентиновна
кандидата биологических наук
Тверь, 2005
ВАК 03.00.04

Диссертация

Влияние экзогенного мелатонина на липиды раневого поля кожи крыс в процессе регенерации - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы