Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Установление генофонда овец Юга России по группам крови и усовершенствование биотехнологии их воспроизводства и селекции на основе молекулярно-генетических методов

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Установление генофонда овец Юга России по группам крови и усовершенствование биотехнологии их воспроизводства и селекции на основе молекулярно-генетических методов"

На правах рукописи

Ж/у-

Селионова Марина Ивановна

УСТАНОВЛЕНИЕ ГЕНОФОНДА ОВЕЦ ЮГА РОССИИ ПО ГРУППАМ КРОВИ И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИИ ИХ ВОСПРОИЗВОДСТВА И СЕЛЕКЦИИ НА ОСНОВЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

03.00.23 - Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Ставрополь - 2004

Работа выполнена в Ставропольском научно-исследовательском институте животноводства и кормопроизводства

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук,

профессор, академик РАСХН, заслуженный деятель науки РФ Петрова Людмила Николаевна

доктор биологических наук, профессор Моисейкина Людмила Гучаевна

доктор ветеринарных наук, профессор Шевченко Александр Александрович

Ведущая организация: Московская государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина

Г №

уу октября 2004 года в ч

Зашита состоится у* октября 2004 года в часов на заседании регионального диссертационного совета ДМ 212.256.04 при Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корп. 2, ауд. 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корп. 1.

Автореферат разослан

оЬ

сентября 2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Джандарова Т.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Традиционные методы оценки сельскохозяйственных животных, основанные на анализе морфофизиологических и фенотипических признаков, на современном этапе не могут в полной мере удовлетворить требованиям, предъявляемым к селекции. В связи с этим, одной из главных проблем биотехнологии является установление и использование молекулярно-генетических маркеров различных хозяйственно-ценных признаков сельскохозяйственных животных. Преимущество генетических маркирующих тест-систем заключается в том, что они неизменяемы в онтогенезе, независимы от условий внешней среды, имеют кодоминантный характер наследования (В.Н.Тихонов,

1991; САКазановский, 1991; ЛА.Калашникова, 1997; Н.С.Марзанов, 1991,

Особо актуальным является исследование полиморфизма генетических систем крови, используемое для совершенствования биотехнологии воспроизводства животных.

В теоретическом аспекте оно важно для исследования генофонда различных пород и популяций, установления их генетической структуры и оценки сходства и различий, определения происхождения и эволюции под воздействием условий среды и селекционного давления.

Практическая значимость таких исследований состоит в том, что они, с учетом достижений молекулярной генетики, позволяют решать целый ряд биотехнологических прикладных задач селекции: выявление генетических маркеров, связанных с физиологическими и биохимическими процессами в организме и сопряженных с высокой продуктивностью животного; прогнозирование результатов отбора и подбора по генетическим параметрам крови; проведение генетической экспертизы достоверности происхождения племенного молодняка (АМ.Машуров, 1987; Н.О.Сухова, 1987,2002; А.А.Новиков, 2001).

Несмотря на очевидные преимущества, методы селекции на основе молеку-лярно-генетических показателей в практике овцеводства используются не в полной мере, в то время как такая проблема весьма актуальна в связи с тем, что овцеводство является одной из важных отраслей животноводства России. Особую значимость эти исследования приобретают на Юге России, поскольку в данном регионе находится более 70 % племенных заводов РФ по разведению тонкорунных и полутонкорунных овец. Исследованиями САКазановского (1983; 1987) и Н.С.Марзанова (1981; 1984) было начато определение генетической структуры пород овец Юга России. Однако до настоящего времени эта проблема остается недостаточно изученной. В*то же'вре^'без'объейтсвной информации ос гено-

2002).

фонде овец не представляется возможным судить об особенностях их происхождения и филогенетических взаимоотношений, микроэволюционных процессах, происходящих в них.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось установление генофонда основных пород овец Юга России по группам крови и использование молекулярно-генетических маркеров в совершенствовании биотехнологии их воспроизводства и селекции.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи как отдельные этапы решения проблемы в целом:

- разработать биотехнологию изготовления иммунодиагностикумов для определения групп крови у овец;

- изучить генетический полиморфизм эритроцитарных антигенов и гена /?-лактоглобулина у овец тонкорунных и полутонкорунных пород Юга России, провести оценку их генетической структуры на основе популяционно-генетических параметров;

- изучить межпородную дифференциацию, характер филогенетических взаимосвязей и динамику микроэволюционных процессов в популяциях тонкорунных и полутонкорунных пород овец;

- усовершенствовать биотехнологию трансплантации эмбрионов у овец с учетом генетических параметров крови овец-доноров и реципиентов;

- разработать биотехнологические приемы интенсификации селекции и воспроизводства овец с использованием генетических маркеров высокой продуктивности и оптимальных вариантов подбора родительских пар по группам крови.

Научная новизна. Впервые разработана оптимальная биотехнология изготовления моноспецифических сывороток и создан единственный в РФ банк им-мунодиагностикумов для определения групп крови у овец.

Впервые установлен генофонд тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России по шести генетическим системам групп крови и проведена оценка их генетической структуры, межпородной дифференциации, филогенетических взаимосвязей и микроэволюционных процессов.

Впервые определены генетические маркеры высокой продуктивности у овец тонкорунных пород и на их основе разработаны новые приемы подбора родительских пар.

Усовершенствована биотехнология трансплантации ранних эмбрионов с учетом генетических параметров крови овец-доноров эмбрионов и реципиентов;

доказана возможность использования групп крови для повышения эффективности этого биотехнологического приема.

Изучены теоретические аспекты, разработаны и предложены приемы усовершенствования биотехнологии воспроизводства и селекции овец Юга России на основе молекулярно-генетических методов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований позволили установить генофонд по группам крови основных пород овец, разводимых на Юге России, изучить их филогенез, межпородную дифференциацию, а также направленность микроэволюционных процессов в них. Использование комплекса иммуно- и молекулярно-генетических методов позволило усовершенствовать селекцию и биотехнологию воспроизводства овец.

Определены рациональные схемы использования овец донорского стада (доноров, реципиентов), предложены оптимальные режимы проведения абсорбции поливалентных сывороток. Разработана нормативно-техническая документация на изготовление и применение иммунодиагностикумов для выявления, групп крови у овец (ТУ, наставление по применению иммунодиагностикумов, утвержденные Департаментом животноводства и племенного дела РФ, 2004 г.).

Материалы исследований позволили выявить маркеры высокой шерстной продуктивности у овец тонкорунных пород и рекомендовать для практической селекции метод отбора животных желательного генотипа и прогнозирования их продуктивности в раннем возрасте, а также метод подбора родительских пар по генетическим параметрам крови.

Созданный банк иммунодиагностикумов позволил ввести в практику овцеводства Юга России (27 племенных заводов) метод экспертизы достоверности происхождения племенного молодняка. Аттестовано более 17 тыс. овец и проведена генетическая экспертиза достоверности происхождения более 5 тыс. голов племенного молодняка. На животных с подтвержденной родословной оформлены индивидуальные иммуногенетические паспорта. Существенно расширены возможности практической селекции и биотехнологии овец в овцеводческих хозяйствах Ставропольского края, Ростовской области, в Республиках Карачаево-Черкесия, Калмыкия и Дагестан. Использование методов отбора высокоценных овец по генетическим маркерам крови, подбора родительских пар и генетической экспертизы достоверности происхождения позволило повысить уровень селекционно-племенной работы в овцеводстве, увеличить продуктивность животных и повысить рентабельность овцеводства на 10 - 15 %.

Основные научные положения и практические предложения вошли в «Методические указания по нормам и правилам генетического тестирования овец»

(ВНИИОК, Ставрополь, 1998); «Методические указания по применению имму-ногенетического анализа в селекции овец, коз» (ВНИИОК, Ставрополь, 2001); «Методические рекомендации по подбору родительских пар с учетом генетических параметров крови овец и коз» (СНИИЖК, Ставрополь-Москва, 2003), монографии "Иммуногенетика в селекции овец", 2004; "Биотехнология воспроизводства овец и коз", 2004.

Апробация полученных результатов. Основные научные положения диссертации доложены на ежегодных заседаниях ученого совета ВНИИОК и СНИИЖК 1996-2003 гг.; I научно-практической конференции по биотехнологии Северо-Кавказского региона, Ставрополь (1995), Всероссийских конференциях по биотехнологии, Ставрополь (1996, 1999, 2001), Сочи (2003); на межвузовской научной конференции Ставропольского ГСХА (1997); на координационном совещании и научно-практических конференциях по овцеводству и козоводству, Ставрополь (1995, 1999); на Международной конференции памяти Ф. Ф. Эйсне-ра, Харьков (1996); на Международной научно-практической конференции, Ставрополь-Пятигорск (2003).

Публикации. Основные положения диссертации изложены в 30 научных работах, опубликованных в научных изданиях, в том числе в ведущих рецензируемых журналах, в материалах международных и всероссийских конференций.

На защиту выносятся следующие положения диссертации:

- биотехнология изготовления иммунодиагностикумов для' определения групп крови у овец;

- оценка генетической структуры, межпородной дифференциации, филогенеза и микроэволюции в популяциях овец тонкорунных и полутонкорунных пород Юга России;

- выявление генетических маркеров, детерминирующих некоторые хозяйственно-ценные признаки овец;

- использование метода оптимального подбора родительских пар по генетическим параметрам крови для интенсификации биотехнологии воспроизводства и селекции овец;

- усовершенствование биотехнологии трансплантации ранних эмбрионов на основе использования генетических параметров крови овец - доноров и реципиентов;

- обоснование применения молекулярно-генетических методов для усовершенствования биотехнологии воспроизводства и селекции тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 250 страницах машинописного текста, иллюстрирована 43 таблицами и 23 рисунками. Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты исследований, обсуждение результатов исследований, заключение, выводы, предложения производству и список литературы, включающий 197 работ отечественных и 78 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Диссертационная работа выполнена в период с 1989 по 2003 гг. в соответствии с тематическим планом НИР, входящим в программу Российской академии сельскохозяйственных наук (№ гос. регистрации 01.960007942; 01.200.1 10987) в лаборатории иммуногенетики Всероссийского НИИ овцеводства и козоводства, в связи с реорганизацией института продолжена в Ставропольском НИИ животноводства и кормопроизводства; в опытном хозяйстве СНИИЖК «Темнолес-ское»; в ФГУП «Ставропольское» по племенной работе; в ведущих племзаводах Юга России. Материалом для исследований служили овцы тонкорунных и полутонкорунных пород.

Иммунные сыворотки получали направленной изоиммунизацией. При этом индивидуальный подбор доноров и реципиентов осуществляли таким образом, чтобы между ними было минимальное различие в антигеном составе эритроцитов. Иммунизацию реципиентов проводили внутримышечно 40% взвесью эритроцитов в дозе 10 мл с интервалом семь дней. Кратность иммунизации определяли по результатам контроля процесса антителообразования. Реиммунизацию реципиентов проводили через три месяца путем четырехкратного введения 40 % взвеси эритроцитов тех же доноров в дозе 10 мл с интервалом семь дней. В шести циклах иммунизации и трех циклах реиммунизации было использовано 252 животных, из них 54 донора и 198 реципиентов.

С целью получения высокотитражных сывороток в двух циклах иммунизации при первой инъекции антигена были использованы адъювант Фрейнда и сульфазин. Адъювант Фрейнда содержал 5 г вазелинового масла, 2 г ланолина, 5 г вакцины БЦЖ; сульфазин состоял из 1 % раствора серы на вазелиновом масле.

Моновалентные сыворотки (иммунодиагностикумы) изготавливали из поливалентных сывороток, полученных в результате проведения иммунизации и реиммунизации, путем осуществления серий абсорбции. Специфичность полученных моновалентных сывороток устанавливали на образцах крови 100 контрольных животных.

Иммунологические реакции гемолиза и агглютинации и их оценку проводили в специальных иммунологических блоках согласно методическим рекомендациям ВНИИОК (1991).

С целью изучения генофонда овецразных пород Юга России было отобрано более пяти тысяч типичных для изучаемых пород животных из 20 племенных заводов. Для иммуногенетической аттестации образцы крови овец отбирали из яремной вены в стерильные пробирки, заполненные предварительно антикоагулянтом в соотношении 1:4 к объему крови. В крови исследуемых животных определяли антигены эритроцитов шести генетических систем - А, В, С, D, Л/ и R, включающих 14 факторов -Аа, АЪ, ВЪ, Be, Bd, Be, Bg, Bi, Ca, Cb, Da, Ma, Kfb и R.

С целью проведения генетической экспертизы достоверности происхождения племенного молодняка составляли триады: отец — мать - потомок, согласно записям первичного зоотехнического учета. Сопоставлением генетических характеристик барана, овцы и ягненка выявляли потомков с ложной родословной. Происхождение считали недостоверным, если у потомка выявлялись группы крови, отсутствующие у предполагаемых родителей.

ПЦР - диагностику аллельных вариантов гена ß - лактоглобулина (ß-Lg) проводили у основных баранов (п=58) кавказской породы ФГУП «Большевик». Из образцов крови выделяли ДНК с использованием набора реагентов DIAtom™ DNA Prep согласно прилагаемому протоколу.

Для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) в качестве "наружных" использовали праймеры BLG -5,5' - ТТГ ГГТ ТЦА ГТГ ТГА ГТЦ ТПГ -3', и BLG - 3, 5' - ААА АЩ ЦЦГ ГГТ ТГТ ГЦА ГЦ - 3'; "внутренних", алле-леспецифичных - BLG - А, 5' - ЦТЦ ЦАГ ГТГ ГЦГ ГТГ АЦТ ГАГ Т - 3 'и BLG - В, 5' - ГТЦ ЦГЦ ЦАТ АГЦ ЦАА ГТА ТГТ- 3'. Амплификацию проводили в объеме 25 мкл; программа ПЦР включала: денатурацию - 94° С 1 мин, отжиг "праймеров — при 63° С 1 мин и полимеризацию — 72° С 1мин - 35 циклов. Рестрикцию амплифицированных фрагментов проводили рестриктазами Rsa - с целью выявления А и В аллелей и Msp - С аллеля. Аликвоты разделяли в 2% агарозном геле при напряжении поля 120 V в трис-боратном буфере, содержащем бромистый этидий в конечной концентрации 0,5 мкг/мл.

Генотип гена устанавливали по наличию полос определенной длины: АА - 54, 66 п.н.; ВВ - 97, 120 п.н.; СС - 105; АВ - 54, 66, 97, 120 п.н.; АС -54,66,105 п.н. и ВС - 97,120,105 п.н.

Биотехнологические исследования эффективности трансплантации эмбрионов проводились в трехкратной повторности в период с 1996 по 1999 год на опытной станции ВНИИОК.

Изучение влияния сочетаемости доноров и реципиентов по группам крови при трансплантации проводили по приживляемости эмбрионов.

Для индукции полиовуляции использовали высокоочищенный гонадотро-пин - фолликулостимулирующий гормон (ФСГ, США). ФСГ инъецировали овцам-донорам эмбрионов подкожно в течение трех дней, начиная с одиннадцатого дня эстрального цикла с интервалом 12 часов по схеме: 1-й день - 5+5 мг; 2-й день - 4+4 мг; 3-й — 3+3 мг. Через 48 часов после начала обработки ФСГ, донорам инъецировали синтетический аналог ПГФ 2а (Эстрофан, Чехия) в дозе 125 мкг. Спустя 24 часа после введения ПГФ 2а проводили выборку овец в охоте. Отобранным в состоянии эструса животным с целью синхронизации множественной овуляции внутривенно вводили 800 ЕД хорионгонадотропина (ХГ, США). Осеменение овец-доноров проводили в соответствии с «Инструкцией по искусственному осеменению овец и коз» (М., 1987). Эмбрионы у овец-доноров извлекали хирургическим путем в соответствии с рекомендациями ВНИИОК (1987). Оценку качества эмбрионов, их классификацию и последующую трансплантацию проводили по методике, описанной М.М.Айбазовым (1996).

С целью проведения популяционно-генетического анализа рассчитывали частоту встречаемости антигенных факторов (Р), индекс генетического сходства (г) между породами по формуле М. Нея (1981), индекс антигенного сходства между двумя животными (га). Генетическое равновесие по Харди - Вайнбергу устанавливали по соответствию фактических частот генотипов теоретически ожидаемым, используя критерий % (хи-квадрат) (цит. по Е. К. Меркурьевой, 1991). Расчет генетических дистанций (d) и построение дендрограмм проводили методом попарно средневзвешенной кластеризации (А.М.Машуров,1987).

Математическую обработку экспериментального материала осуществляли методами вариационной статистики. Достоверность разницы устанавливали по критерию Стьюдента (Е. К. Меркурьева и соавт.,1991).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изготовление иммунодиагностикумов для дифференциации, антигенов эритроцитов у овец

Необходимым условием проведения иммуногенетических исследований по выявлению антигенов групп крови является наличие моноспецифических pea-

гентов - иммунодиагностикумов. В связи с этим особого внимания заслуживает разработка технологии их изготовления.

В экспериментах, выполненных с 1992 по 2002 гг., основное внимание было уделено изучению влияния кратности изоиммунизации, использования в схемах изоиммунизации животных разных пород, реиммунизации и применения иммуностимуляторов на формирование иммунного ответа и активность (титражность) иммунных сывороток.

В четырех сериях иммунизации, проведенных на овцах тонкорунных пород, установлено, что введение реципиентам эритроцитов доноров сопровождалось выраженной иммунологической перестройкой с продуцированием иммунных антител. Иммунологическая реактивность реципиентов изменялась в процессе цикла иммунизаторного воздействия (табл. 1).

Таблица 1. Динамика титра антител у реципиентов в процессе

изоиммунизации

Кратность инъекции Количество реципиентов с титром антител, %

- 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128

Перед 2-ой инъекцией 29Д 16,7 20,8 20,8 8,3 4Д - -

Перед 4-ой инъекцией 20,8 8,3 4,2 16,7 22,9 10,4 12,5 4Д

Перед 6-ой инъекцией 18,7 - 6 2 15,6 21,0 25,0 9,3 4Д

Перед получением иммунной сыворотки 20,8 2,1 - 15,6 17,8 33,3 10,4 -

У большей части животных (66,6%) уже после первой инъекции выявлялись антитела с титром 1:2... 1:16. Процесс антителообразования достигал максимума после третьей и четвертой иммунизации. К этому моменту у 63,5% реципиентов отмечалось повышение титра антител в сыворотке до 1:8... 1:128. Дальнейшее введение антигенов эритроцитов не приводило к возрастанию гемолизинов, а в отдельных случаях приводило к снижению их количества.

Динамика возрастания антител у различных животных была не одинаковой. У высокореагирующих реципиентов после второй иммунизации титр антител достигал 1:8... 1:16, после четвертой- 1:16... 1:128. У слабореагирующихживот-ных титры выявлялись лишь после четвертой иммунизации и не превышали 1:32.

Результаты первого цикла иммунизации показали, что у части (22,9%) животных не образовывались планируемые антитела или образовывались с низким титром. Учитывая, что для дальнейших исследований могут использоваться только антисыворотки с титром не ниже 1:16, была изучена возможность усиле-

ния иммунного ответа путем проведения повторного цикла иммунизации - ре-иммунизации.

Анализ полученных данных свидетельствовал о высокой эффективности проведения реиммунизации для получения высокотитражных иммунных сывороток. Так, если в результате проведения первой иммунизации у 66,6% реципиентов антитела выявлялись с титром 1:4... 1:16, то после реиммунизации уже после первого введения антигена у 71,7 % реципиентов титр антител достигал 1:32...1:128, одновременно процент ареактивных животных снизился до 7,7 % против 29,2 % (табл. 2).

Таким образом, реиммунизация реципиентов через 3 месяца после первого цикла иммунизации является эффективным приемом, позволяющим повысить количество реагирующих овец до 95 % и увеличить титры получаемых от них иммунных сывороток.

Таблица 2. Динамика титра антител у реципиентов в процессе реиммунизации

Кратность инъекций Количество реципиентов с титром антител, %

- 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256

Перед 2-ой инъекцией 7,7 - 7,7 - 12,8 25,6 30,7 15,4 -

Перед 3-ей инъекцией 5,1 - - 5.1 2,7 23,1 35,9 17,9 10,2

Перед 4-ой инъекцией 5,1 - - 5,1 7,7 23,1 35,9 15,4 7,7

Перед получением иммунной сыворотки 5,1 - - - 5,1 25,6 41,0 15,4 7,7

Следует отметить, что некоторые животные (до 5 - 7 % от числа обработанных) не образуют антител даже после реиммунизации. В связи с этим были проведены исследования по использованию адъюванта Фрейнда и сульфазина в качестве средств, усиливающих образование антител.

Было установлено, что наибольшее количество реактивных животных -81,8% (Р<0,05) оказалось в группе, где использовался адъюванта Фрейнда. В группе, где в качестве иммуностимулятора использовался сульфазин, и в контрольной группе, количество реципиентов, ответивших иммунной реакцией, было достоверно ниже (соответственно 63,6 %, Р <0,05 и 54,5%, Р <0,01).

Титр образовавшихся антител в крови животных различных групп имел существенные различия в зависимости от вида иммуностимулятора. Использование адъюванта значительно повысило титры до максимального уровня -1:128... 1:512, в то время как в группе с сульфазином они не превышали 1:128... 1:256. Характерно, что в первых двух подопытных группах выявлено

больше животных с титрами 1:32 и выше (соответственно 72,7 и 54,5%%), в то время как в контрольной таких животных оказалось всего 36,4% (Р<0,001).

Наряду с этим, исследования показали, что под влиянием иммуностимуляторов образовывались сложные сыворотки, сильно «загрязненные» ненужными антителами, очистка которых была затруднена. Поэтому вещества, способствующие активизации иммуногенеза, по-видимому, следует использовать в исключительных случаях, в частности, когда не удается получить иммунизацией иммунные сыворотки к редким антигенам или титр к ним невысок.

При постановке иммунологических реакций для выявления групп крови были отмечены различия в интенсивности протекания гемолиза и агглютинации в образцах крови тонкорунных и грубошерстных овец. При использовании имму-нодиагностикумов, изготовленных из иммунных сывороток тонкорунных овец, образование комплекса антиген-антитело протекало интенсивнее на эритроцитах грубошерстных овец, по сравнению с аналогичной реакцией на эритроцитах тонкорунных овец.

Учитывая, что при изучении групп крови животных исключительную важность имеет специфичность иммунологических реакций и отмеченную выше особенность, была предпринята попытка использовать межпородные различия овец для изготовления иммунодиагностикумов с высокой специфичностью.

В двух сериях опытов, проведенных на овцах грубошерстных и полутонкорунных пород, было установлено, что интенсивность иммунного ответа, динамика изменения титра антител у реципиентов полутонкорунных и грубошерстных пород были аналогичны тем же закономерностям, которые были отмечены при иммунизации тонкорунных животных. У иммунореактивных реципиентов антитела выявлялись после первой и второй инъекции (1:2... 1:32) и быстро возрастали, достигая максимума после четвертой инъекции (1:16... 1:64).

При предварительной оценке иммунологической реакции среди позитивных образцов эритроцитов тонкорунных овец близкий к полному и полный гемолиз наступил в 72,1% случаев, среди грубошерстных - 63,9%; при окончательной оценке - соответственно 86,8 и 82,8%%.

Таким образом, выяснено, что для дифференциации антигенов эритроцитов тонкорунных овец предпочтительнее использовать иммунодиагностикумы, изготовленные на овцах полутонкорунных и грубошерстных пород, в то время как для типирования антигенов эритроцитов последних лучше использовать реагенты, изготовленные на тонкорунных животных. Это позволит усилить специфичность иммунологической реакции и практически нивелировать субъективность в

оценке ее результатов, что в конечном итоге повысит точность определения им-муногенетического статуса овец.

Исследования по определению оптимальных схем изоиммунизации осуществляли различным подбором доноров и реципиентов, ставящим конечной целью получение высокотитражных сывороток, содержащих антитела ко всем известным к моменту исследований антигенам.

Анализ полученных данных позволил определить, что у овец-реципиентов тонкорунных пород чаще и легче образуются антитела к Аа, АЪ, Вй и Ба - антигенам, у овец-реципиентов грубошерстных пород - к В§, Вй, Ве и Ба- факторам. Сложными в получении, как от животных тонкорунных, так и от животных грубошерстных пород оказались анти-ВЬ, Вс, Са, СЪ, Ма, Ли О сыворотки.

Таким образом, по результатам проведенных исследований была разработана технологическая схема изготовления иммунодиагностикумов для определения групп крови у овец, представленная на рисунке 1.

Рис. 1. Технологическая схема изготовления иммунодиагностнкумов для определения групп крови у овец

За период проведения исследований были изготовлены моноспецифические сыворотки по шести системам групп крови овец: система Л - к антигенам Аа, АЬ, система В - к факторам ВЪ, Be, Bd, Be, Bel, Bg, Bi, система С - Са, СЬ, М- Ma,

Mb (экспериментальная), система D - Da, Db (экспериментальная), R-O - к анти-

генам Л и О. В банк иммунодиагностикумов было заложено более 140 тыс. доз антисывороток (табл. 3). Все сыворотки отвечали основным требованиям: были иммунными, обладали специфичностью, имели титр не ниже 1:16 и могли храниться в замороженном виде (при X — 24° С) до 10 лет.

Таблица 3. Банк иммунодиагностикумов лаборатории иммуногенетикн СНИИЖК

Система групп крови Иммунодиагностикумы Количество, тыс. доз.

А Аа, АЬ более 22

В ВЬ, Вс, В4, Ве, Ве1. В1 более 76

С Са, СЬ - - 16

О Оа, т - -12

м А/а, МЬ - - 8

Й-О ко - - 6

Итого: 17 антигенных факторов более 140 тыс. доз

За разработку методов изготовления и создание- единственного в России банка иммунодиагностикумов для типирования групп крови овец автор удостоен медали ВВЦ (Постановление от 18.12.1998,*№ 15/п.5, г. Москва).

Генофонд и межпородная дифференциация тонкорунных овец Юга России по группам крови

Проблема изучения генофонда различных сельскохозяйственных животных с использованием маркирующих тест-систем является одной из актуальных в течение длительного времени. Юг России традиционно, на протяжении многих десятилетий, был и до настоящего времени остается основной зоной мериносового овцеводства. Однако, как показал анализ литературных данных, генофонд тонкорунных пород овец по группам крови изучен недостаточно.

В связи с этим одной из основных задач собственных исследований было изучение генофонда овец Южного региона России по маркерным аллелям крови. Объектом для исследований были овцы тонкорунных пород: грозненской тонкорунной (ГТ), кавказской (КА), манычский меринос (ММ), советский меринос (СМ), ставропольской (СТ).

Анализ полученных результатов выявил, что генофонд овец тонкорунных пород характеризовался присутствием Аа, Ab, Bb, Be, Bd, Be, Bi, Bg, Ca, ^, Da, Ma и R - антигенных факторов в шести А, В, С, D, Ми R - системах групп крови. При этом отмечены определенные генетические особенности различных пород по полиморфизму эритроцитарных антигенов (табл. 4).

Овцы грозненской тонкорунной породы характеризовались высоким распространением Аа, CbuDa- антигенов и средней частотой встречаемости группы крови В, M и R - систем.

Таблица 4. Частота встречаемости антигенных факторов эритроцитов у овец тонкорунных и полутонкорунных пород Юга России

Порода Число попул яций Колнч ество живот II ых Системы группы крови

А В С Я М Я

Аа АЬ вь Вс Вй Ве В1 Вд Са сь Ба Ма мъ Я

Тонкорунные породы

ГТ 3 297 0,428 0,289 0,383 0,333 0,125 0,294 0,192 0,213 0,343 0,670 0,492 0,279 0,181 0,298

КА 3 1783 0,402 0,214 0,173 0,252 0,437 0,419 0,155 0,397 0,346 0,672 0,264 0,117 0,119 0,638

ММ • 3 1372 0,489 0,298 0,395 0,427 0,195 0,487 0,383 0,395 0,253 0,308 0,483 0,398 0,195 0,395

СМ 3 802 0,401 0,207 0,486 0,288 0,336 0,455 0,156 0,289 0,525 0,643 0,176 0,186 0,192 0,198

. СТ 3 934 0,472 0,143 0,326 0,544 0,292 0,473 0,369 0,292 ОД 15 0,290 0,319 0,327 0,216 0,351

АМ - 178 0,246 0,401 0,212 0,249 0,017 0,312 0,259 0,483 0,117 0,241 0,567 0,368 0,216 0,498

Полутонкорунные породы

СК 3 249 0,587 0,153 0,289 С 0,076 0,398 0,318 0,398 0,418 0,324 0,479 0,351 0,076 0,349 0,198

смш 2 176 0,636 0,125 0,476 0,189 0,515 0,295 0,125 0,144 0,244 0,314 0,493 0,314 0,395 0,477

Итого 20 5791 Шесть систем, 14 антигенных факторов

В популяции овец кавказской породы наибольшее распространение получили антигены, определяющие группы крови Аа, Bd, Be, Bg, ^, R. Среднюю встречаемость проявляли АЪ, Са Da, и Ма - факторы и редко выявлялись носители Bb, Be, Bi - антигенов.

Овцы манычского мериноса характеризовались значительным распространением носителей Аа, Be, Bg, R - антигенов, не высоким распространением животных-генотипов АЪ, ВЪ, Бе, Ы, Са, СЬ, Юаи Ма - групп крови и низким—Вй-фактора.

Среди овец советского мериноса наибольшую генную частоту имели Аа, Be, Са, CbaR- антигены; группы крови Bb, Be, Bd, Bg обнаруживали среднюю частоту встречаемости, а АЪ, Bi, Da и Ма - факторы наименьшую частоту встречаемости.

Овцы ставропольской породы характеризовались высокой частотой встречаемости особей с Аа, Вол Be - антигенами, средним распространением носителей ВЬ, Вй, В1, Bg, СЬ, Са, Юа, Ма и Я - локусов и редким -АЬ - фактора.

Для австралийских мериносов характерным было широкое распространение овец-носителей групп крови A, D M и R - систем, среднее - В - системы, за исключением фактора Bd, который в данной популяции выявлялся с самой низкой частотой среди всех тонкорунных пород.

Для установления генетических особенностей овец помимо полиморфизма эритроцитов был использован полиморфизм гена В — лактоглоблина. Исследования проводились на овцах породы КА ФГУП «Большевик».

Установлено наличие пяти вариантов гена 1£ — АА, АВ, АС, ВВ, ВС, детерминированных различными комбинациями аллелей (табл.

5).

Таблица 5. Генетическая структура овец кавказской породы по локусу гена

Генотип Частота встречаемости Аллели Частота встречаемости

фактическая теоретическая

АА 0,310 0,285 0,534

АВ 0,207 0Д76 0,259

АС 0,241 0,221 0,207

ВВ 0,069 0,067

ВС 0,172 0,107

СС - 0,043

Наибольшую частоту встречаемости имели гомозиготные АА - животные (0,310), гетерозиготные АВ и АС особи получили примерно равное среднее распространение (соответственно 0,207 и 0,241). Наименьшее распространение по-

лучили особи-носители ВС и ВВ генотипов. Гомозиготный СС - генотип среди овец данной популяции не выявлен.

Соответственно частоте встречаемости генотипов самую высокую концентрацию среди овец кавказской породы имел А - аллель, частота встречаемости которого более чем в два раза превышала частоту встречаемости В и С - аллелей (Р< 0,05).

Сопоставляя полученные в собственных исследованиях результаты с данными других авторов, отмечено, что генетической особенностью овец кавказской породы является присутствие в ее генофонде аллеля С в локусе гена fi-Lg, не встречающегося у овец мясошерстных и мясных пород (Н.А.Зиновьева и со-авт, 1999; Н.С.Марзанов и соавт., 1998,2000).

Расчет генного равновесия в локусе fi-Lg по формуле Харди-Вайнберга показал, что фактически наблюдаемая частота встречаемости генотипов была близка теоретически ожидаемой. Сумма у2 при Р=0,05 составила 3,01, что свидетельствует о сохранении в популяции овец кавказской породы генного равновесия в локусе гена fi-Lg. Таким образом, установлена генетическая структура овец кавказской породы по полиморфизму гена лактоглобулина, определено равновесное состояние в данном локусе.

Несомненный интерес как для освещения теоретических вопросов общей генетики овец, так и для решения практических задач прикладной селекции представляют исследования по изучению генетической дифференциации и сходства различных пород. До открытия генетических маркеров крови породные особенности животных изучали в основном с помощью морфофизиологических и фенотипических признаков. Однако их сложное полигенное наследование и изменяемость под воздействием факторов внешней среды не позволяли получать объективные данные о генетическом различии или сходстве пород. Кодоминан-тый тип наследования эритроцитарных антигенов, большое количество генетических систем, в которые они объединяются, неизменяемость в онтогенезе, позволили принципиально изменить методические подходы к исследованию межпородной дифференциации сельскохозяйственных животных (В.Н.Тихонов, 1991).

При анализе научной литературы по рассматриваемой теме не удалось составить полных и системных данных о генетическом различии или сходстве наиболее распространенных отечественных тонкорунных пород овец. Учитывая важность подобных исследований, часть собственных экспериментов была направлена на изучение генетической дифференциации тонкорунных и полутонкорунных пород овец, разводимых на Юге России.

Выявлено, что общим для большинства овец всех тонкорунных пород явилось высокая частота встречаемости антигенов Аа (0,401...0,498), Be (0,419...0,487), СЪ (0,643...0,672) и R (0,395...0,638) - антигенов; средняя концентрация групп крови АЬ (0,214...0,298), ВЪ (0,212...0,383), Bi (0,192...0,383), Bg (0,213...0,395), Са (0,215...0,346), Ma (0,186...0,368) и низкая (0,119...0,195) Mb - фактора. Антигены Bd, Be и Da в одних породах имели широкое распространение, в других же выявлялись редко. Так, фактор Bd достоверно чаще (Р< 0,01) встречался среди овец КА, СМ, ГТ, чем у овец АМ и ММ. Напротив, носители антигена Вс значительно реже выявлялись среди овец КА по сравнению с другими породами (Р< 0,05). Антиген Da имел высокое распространение среди животных ГТ, СТ, ММ и АМ (Р<0,05), в то время как среди овец КА и СМ встречался со средней частотой.

На основании данных иммуногенетического типирования и показателей частот встречаемости антигенных факторов (табл. 4) были рассчитаны индексы генетического сходства (га), генетические дистанции (ё) между тонкорунными породами и проведен кластерный анализ с построением дендрограммы (табл. 6, рис. 3).

Выявлено, что наименьшее генетическое расстояние обнаруживали породы ММ и СТ (ё=0,0237). Несколько большее генетическое удаление имели породы ММ и АМ (ё=0,0702), ГТ и СМ (ё=0,0741), ГТ и ММ (ё=0,0781). Еще большие генетические дистанции выявлены между животными СМ - КА, СТ, и ММ (ё=0,103...0,138), а также между овцами КА - ГТ, ММ, СТ (ё=0,1 15...0,149). Наибольшие генетические дистанции определены между овцами АМ и овцами СТ, КА и СМ (ё=0,151...0,189).

Таблица б. Индексы генетического сходства (га), генетические дистанции (ё) между тонкорунными породами овец (1999-2002 гг.)

Породы, IV <1 ГТ КА ММ СМ СТ АМ

ГТ - 0,1156 0,0781 0,0741 0,1133 0,1509

КА 0,8908 - 0,1492 0,1032 0,1471 0,1518

ММ 0,9249 0,8614 - 0,1384 0,0237 0,0702

СМ 0,9286 0,9016 0,8708 - 0,1327 0,1895

СТ 0,8928 0,8631 0,9764 0,8757 - 0,1544

АМ 0,8599 0,8064 0,9322 0,8273 0,8569 -

Кластерный анализ показал, что кластер А образовали наиболее генетически близкие породы - ставропольская и манычекий меринос. Кластер Б (ё=0,095) отражал генетическое расстояние между тонкорунной грозненской породой и породами кластера А. В кластере В (ё=0,1032) нашли соприкосновение породы советский меринос и кавказская. Кластер Г (ё=0,1252) объединил поро-

ды кластера Б и породу австралийский меринос. Кластер Д ^=0,1476) отражал точку соединения двух кластеров - Г, включающий ставропольскую, манычский меринос, грозненскую и породу австралийский меринос и В, включающий породы кавказская и советский меринос (рис. 2).

Рис.2. Дендрограмма генетических дистанций между тонкорунными породами овец Юга России

Генетический профиль по группам крови и особенности генетических взаимоотношений между тонкорунными породами овец являются, в какой-то степени, отражением их происхождения и определенного момента эволюционного процесса, протекающего в них в настоящее время и в конкретных экологических условиях их разведения. Эти данные дают своеобразную точку отсчета для последующего мониторинга и оценки хода эволюционного процесса вида в целом. При установлении генетической структуры еще не исследов'анных пород овец дендрограмма филогенетических связей овец Юга России будет становиться более сложной, многокластерной и завершенной.

В теоретическом аспекте и для прикладной селекции важным моментом является выяснение точечных микроэволюционных процессов, происходящих за последнее время в популяциях изученных пород. Для ответа на обозначенный вопрос был проведен сравнительный анализ генетических структур тонкорунных пород, изученных в разное время с разницей между моментами исследований 10 лет. Первое исследование проводилось в 1994 г., второе - в 2003 г.

Сравнительный анализ частот встречаемости групп крови в популяциях овец, исследованных в разные периоды времени, показал, что в распространении отдельных антигенных факторов произошли достоверные изменения.

Так, среди овец КА в 2003 году по сравнению с 1994 годом достоверно чаще (Р<0,05) выявлялись животные-носители АЬ, Be, Bg, и R - факторов. В то же время существенно (Р<0,05) сократилось количество овец с Аа, Bd, и Ма группами крови. В распространении ВЬ, Be, Bi, Са, СЬ u Da- факторов достоверных изменений не выявлено. В популяции овец ММ в 2003 году достоверно больше, по сравнению с 1994 годом, стало особей-носителей Bi, Da и Ве антигенов, но меньше животных-носителей СЬ - фактора. В концентрации остальных групп крови достоверных изменений не отмечено. Среди овец СТ за указанный период исследований достоверно (Р<0,05) увеличилась частота встречаемости Ве, Ве, Bi, Da и Ма эритроцитарных антигенов, однако значительно снизилось количество животных - носителей Аа, ВЬ, Bd, CbuR- групп крови. В концентрации АЪ, Bg и Са - антигенов достоверных изменений не произошло.

Из вышеизложенного можно заключить, что наименьшие изменения в генетической структуре по группам крови, в сравнении с другими породами, отмечены в популяции овец ММ. За десятилетний период в данной популяции достоверные изменения произошли в концентрации четырех (30,7%) из тринадцати групп крови. Более значимые изменения претерпела генетическая структура популяции овец СТ. У последних неизменной осталась частота встречаемости лишь трех групп крови, в то время как в концентрации значительной части антигенов (79,9 %) произошли достоверные изменения. Условно среднее положение между изученными породами, с точки зрения произошедших изменений в распространении групп крови, занимает популяция овец КА. Достоверные сдвиги среди животных данной породы отмечены в концентрации семи (53,8%) эритро-цитарных антигенов.

Сравнительный анализ показателей генетических дистанций между тонкорунными породами в разные периоды исследований выявил, что за десять лет произошло определенное генетическое сближение изученных пород (табл. 7).

Таблищ 7. Индексы генетического сходства (га), генетические дистанции (ф между тонкорунными породами овец (1994 г.)

Породы Г./ <1 КА ММ СТ АМ

1994 г. 2003 г. 1994 г. 2003 г. 1994 г. 2003 г. 1994 г. 2003 г.

КА 0,1519 0,1492 0,1760 0,1471 ОД 178 0,1518

ММ 0,8589 0,8614 - - 0,0529 0,0237 0,0622 0,0702

СТ 0,8386 0,8631 0.9484 0,9764 - - 0,1161 0,1544

АМ' 0,8043 0,8064 0,9396 0,9322 0,8897 0,8569 - -

Так, генетическая дистанция между породами СТ и ММ сократилась более чем в два раза (0,0237 в1994 году против 0,0529 в 2003 году); между порода-

ми СТ и КА - в 1,2 раза (0,1760 в1994 году против 0,1471 в 2003 году); между КА и АМ - в 1,4 раза (0,2178 в 1994 году против 0,1518 в 2003 году).

Кластерный анализ генетических дистанций определил, что кластер А (0,0529) образовали наиболее генетически близкие породы овец СТ и ММ. Следующий кластер Б (0,0891) объединил отечественные тонкорунные породы СТ и ММ с импортной породой АМ. В кластере В (0,1819) нашли соприкосновение породы кластера Б и КА порода (рис. 3).

_|_!_|_|_|_|_I_1_

0,18 0,16 0,12 0,10 0,08 0,06 0,04 0,02

Примечание:_- 1994 г., ____- 2003 г.

Рис. 3. Дендрограммы генетических дистанции между тонкорунными породами овец в 1994 и 2003 гг.

Сравнение расположения изученных тонкорунных пород на дендрограммах, построенных по данным исследований 1994 и 2003 годов, показало, что оно было аналогичным. В 2003 году, как и в 1994, наибольшую генетическую близость проявляли породы СТ и ММ. Порода овец АМ в разные периоды исследований была ближе к указанным породам, чем КА порода. Установленный факт, по-видимому, объясняется разной интенсивностью использования генофонда овец АМ в популяциях исследованных пород. В популяции овец ММ использование баранов АМ было значительно шире и более длительным (В.А. Мороз, 1992), чем в популяции овец КА породы. Кроме того, исходным генетическим материалом для создания породы ММ являлись овцы СТ породы. Возможно, именно указанные обстоятельства повлияли на высокое генетическое сходство этих пород.

Процесс генетического сближения тонкорунных пород, по-видимому, с одной стороны, вызван длительной однонаправленной селекцией на повышение шерстной продуктивности мериносовых овец, при которой проводимый отбор животных схожих фенотипов неизбежно приводит к отбору животных схожих генотипов. С другой стороны, сокращение генетических расстояний между изу-

чаемыми породами обусловлено длительным (более 25 лет) и интенсивным использованием генофонда породы австралийский меринос, что в определенной мере являлось составной частью проводимой селекции. Полагаем также, что изменения в распределении отдельных антигенных факторов в исследованных популяциях носят адаптивный характер или могут быть детерминированы дрейфом генов, кодирующих группы крови.

Генофонд и межпородная дифференциация полутонкорунных пород.

Наряду с тем, что Южный регион является традиционно племенной базой тонкорунного овцеводства России, в этом регионе значительное распространение получило и полутонкорунное овцеводство. Удельный вес овец этого направления продуктивности в настоящее время составляет более 10 % от общего количества овец, разводимых на Юге. Существенным фактором является также и то, что благодаря двойной продуктивности, перспектива развития именно данного направления в овцеводстве с каждым годом увеличивается.

Для установления генофонда по маркерным аллелям групп крови образцы крови отбирались у достаточного количества типичных животных северокавказской мясо-шерстной и советской мясо-шерстной пород ведущих племенных заводов Ставропольского края, Республик Карачаево-Черкесия и Кабардино-Балкария.

Анализ полученных результатов выявил, что генофонд овец полутонкорунных пород характеризовался присутствием тринадцати антигенных факторов (Аа, А Ъ, ВЪ, Ве, Вй, Ве, Ш, Bg, Са, СЬ, Ла, Ма и Я) в шести системах групп крови {А, В, С, Л,Л/иЯ).

Северокавказская мясо-шерстная порода (СК) характеризовалась значительным распространением носителей Аа, Вй, Вг, BguCb - антигенов, средним распространением животных-генотипов ВЬ, Ве, СаиБа- групп крови и низким - АЬ, Ве, МапЯ~ факторов.

Для овец советской мясо-шерстной породы (СМШ) было характерным высокая частота встречаемости носителей Аа, ВЪ, Вй, Ба и Я групп крови, среднее распространение особей с Ве, Са, СЬ и Ма антигенными факторами и низкая встречаемость носителей АЬ, Ве, Вг и Bg групп крови (табл. 4).

Сравнительный анализ частот встречаемости групп крови у исследованных пород овец выявил, что животные северокавказской и советской мясошерстных пород проявляли сходство в распространении восьми и различались в распространении шести групп крови. Антигенные детерминанты эритроцитов Аа, Вй, Ве и Ба имели высокую частоту встречаемости среди полутонкорунных овец,

фактор Са получил среднее распространение и группы крови АЬ, Вс - низкое. Антигены Bi, Bg и СЬ достоверно чаще (Р<0,01) выявлялись у овец северокавказской породы, чем среди овец советской мясошерстной, в то время как у последних достоверно выше была концентрация ВЬ, Ма и R - антигенов (Р<0,05).

Генетико-статистическим анализом определено, что индекс генетического сходства и генетическая дистанция между советской мясошерстной и северокавказской мясошерстной породами составили соответственно 0,8914 и 0,1149.

Межпородная дифференциация тонкорунных и полутонкорунных пород.

Результаты исследований генетического спектра групп крови 20 популяций овец тонкорунных и полутонкорунных пород Юга России послужили основанием для изучения межпородной дифференциации и установления филогенетических связей между изученными породами. С этой целью были рассчитаны показатели генетических дистанций и построена дендрограмма методом попарно средневзвешенной кластеризации (рис. 4).

Дендрограмма начинается с кластера А, объединяющего две тонкорунные породы ММ и СТ. Последняя является исходной точкой для всей системы генетических связей между тонкорунными и полутонкорунными породами Юга России. Объединение пород ММ и СТ объясняется тем, что при создании породы ММ исходной была СТ. Вследствие этого между данными породами установлена минимальная генетическая дистанция, свидетельствующая об близости их генофондов, характеризующихся наиболее схожей частотой встречаемости групп крови.

Кластер Б объединил породы СМ и КА. Их объединение в отдельный кластер, возможно, обусловлено тем, что на ранних этапах их создания большее влияние, по сравнению с другими тонкорунными породами, оказала порода американский рамбулье, а в дальнейшем при совершенствовании этих пород меньшим было влияние породы австралийский меринос. Не исключается возможность того, что природно-климатические условия среды их разведения способствовали сохранению определенных схожих генотипов.

Следующий кластер В объединяет породы кластера А и ГГ. Соединение пород ММ, СТ и ГТ, по-видимому, объясняется тем, все они являются ярко выраженными породами шерстного направления продуктивности. Кроме этого, при их создании и дальнейшем совершенствовании наиболее существенное влияние на их генетическую структуру, по сравнению с другими тонкорунными породами, оказала порода австралийский меринос. Данная порода связана с кластером

Б в точке соприкосновения Г, которая отражает наибольшую генетическую дистанцию между всеми изученными тонкорунными породами.

Рис. 4. Девдрограмма генетических дистанций между тонкорунными и полутонкорунными породами овец Юга России

Сложный пятипородный кластер Е объединил тонкоруннее породы кластеров В и Г. Примечательно, что порода австралийский меринос вошла в общий кластер тонкорунных пород, а не образовывала собственный кластер. По-видимому, это является отражением достаточно значительного вклада генофонда этой породы в формирование генофондов отечественных тонкорунных пород.

Оставшиеся две из восьми изученных пород составили отдельно отстоящий кластер Д, включающий полутонкорунные породы СК и СМШ. Генетическое сходство между ними обусловлено схожим распределением групп крови, сложившимся, вероятно, в результате однонаправленной селекции на создание генотипов овец двойного направления продуктивности. Однако, как показано на дендрограмме, между полутонкорунными породами существуют более значительные генетические различия, чем между тонкорунными породами.

Самый большой и сложный кластер Ж объединил тонкорунные и полутонкорунные породы Юга России. Одновременно он является точкой выхода для генетических связей с еще не изученными породами.

Таким образом, методы популяционного анализа с использованием групп крови в качестве генетических маркеров, позволили получить полную и объек-

тивную информацию о генофонде, генетической структуре, филогенезе тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России и наглядно представить их взаимное расположение в пространстве условных координат.

Молекулярно-генетические маркеры признаков продуктивности овец.

Одной из важных проблем повышения эффективности животноводства является определение генетических детерминант высокой продуктивности сельскохозяйственных животных и целенаправленное их использование в селекционном процессе. Разработка этой проблемы предусматривает решение задач по установлению связи локусов генома животных с хозяйственно-ценными признаками и отбору значимых для селекционных целей маркеров (В.Г. Шевченко, Т.Ю Шмидт, 2000; Л.А.Калашникова, 2004).

Группы крови, благодаря своей неизменяемости в течение жизни животного и независимости от условий внешней среды, представляют удобную генетическую модель для поиска маркеров продуктивности. Однако исследований, посвященных выявлению генетических маркеров хозяйственно-ценных признаков у овец, выполнено недостаточно как в нашей стране, так и за рубежом. В связи с этим одной из задач собственных исследований явился поиск генетических маркеров продуктивности у овец тонкорунных пород.

Исследования проводились по двум направлениям: 1) использование групп крови и 2) аллельных вариантов гена - лактоглобулина в качестве возможных маркеров продуктивности овец. Эксперименты проводились в двукратной по-вторности в ведущих племенных заводах по разведению овец кавказской, ставропольской пород и породы манычский меринос. С целью выявления антигенов эритроцитов, сопряженных с хозяйственно-ценными признаками, был проведен сравнительный анализ показателей продуктивности тонкорунных овец различных генотипов по кровегрупповому профилю.

Результаты опьпов показали, что большинство групп крови не связаны с такими признаками как настриг чистой шерсти и живая масса. Вместе с тем, выявлено, что для каждой породы тонкорунных овец существуют собственные генотипы высокой шерстной продуктивности, присущие только ей.

Овцы кавказской породы с комплексным генотипом AbBeDa групп крови достоверно превосходили по настригу чистой шерсти животных, в крови которых данный генотип отсутствовал. Разница'в их пользу была достоверной как в 1999, так и 2002 гг. и составила соответственно 0,11 кг (Р<0,05) и 0,13 кг (Р<0,01). Для овец породы манычский меринос маркером высокой шерстной продуктивности явился AbBeDaMa генотип групп крови. Превосходство живот-

ных-носителей желательного генотипа в 1999 и 2002 гг. по настригу чистой шерсти было соответственно 0,10 и 0,11 кг (Р<0,05) (табл.8 ).

Таблица 8. Маркеры шерстной продуктивности

Маркеры 1999 г. Настриг чистой шерсти, кг 2002 г. Настриг чистой шерсти, кг

в среднем по стаду п носителей желательного генотипа п в среднем по стаду п носителей желательного генотипа п

КА АЬВейа 3,66 ±0,02 187 3,77* ±0,04 26 3,71 ±0,02 22 7 3,84** ±0,02 49

ММ АЬВейаМа 3,89 ±0,01 232 4,00* ±0,04 31 3,76 ±0,02 23 8 3,87* ±0,04 63

СТ АЬВеОаМа 3,82 ±0,01 189 3,94** ±0,03 24 3,76 ±0,02 12 3 3,87* ±0,03 17

Примечание * Р < 0,05; •* Р < 0,01.

У овец ставропольской породы высокую шерстную продуктивность маркировал AbBgDaMa генотип эритроцитарных антигенов. Животные с данным генотипом достоверно превосходили по настригу чистой шерсти на 0,12 кг (Р<0,01) в 1999 году и на 0,11 кг (Р<0,05) в 2002 году животных, в крови которых отсутствовал желательный генотип.

Примечательно, что такие группы крови как АЬ и Ба положительно коррелировали с уровнем шерстной продуктивности у овец всех трех исследованных тонкорунных пород. Можно предположить, что выявленные группы крови проявляют одну из генетических связей - или плейотропию, или сцепление с генами, контролирующими уровень шерстной продуктивности у овец тонкорунных пород.

С целью выявления возможной взаимосвязи аллелей гена — лактоглобули-на с хозяйственно-ценными признаками был проведен сравнительный анализ показателей продуктивности овец кавказской породы ФГУП «Большевик» различных генотипов по локусу - лактоглобулина.

Установлено, что большую живую массу имели особи-носители гетерозиготных АВ и ВС генотипов. Однако разница носила недостоверный характер. Сопоставление показателей настрига чистой шерсти у животных, типированных по гену лактоглобулина, выявило преимущество овец-носителей АС и ВС генотипов, по сравнению с особями АА, АВ и ВВ - генотипов. Разница в их пользу составила в среднем соответственно 0,84 и 0,52 кг (Р<0,05).

Примечательно, что у всех животных с большей живой массой в генотипе присутствовала В аллель гена р - лактоглоблина, а у животных с высоким на-

стригом шерсти — С - аллель. Следует также отметить, что гетерозиготные животные по продуктивности превосходили гомозиготных животных (табл. 9).

Следовательно, следует проводить отбор носителей гетерозиготных АС и ВС генотипов для повышения шерстной продуктивности и носителей АВ, ВС генотипов для увеличения живой массы животных КА породы.

Таблица 9. Показатели продуктивности животных кавказской породы

в зависимости от аллельных вариантов гена/?- лактоглобулина

Генотип Количество • животных Показатели продуктивности, кг

настриг чистой шерсти живая масса

АЛ 18 6,82±0,06 89,4±2,23

АВ 12 7,66±0,07 93,1±1,21

АС 14 7,91 ±0,08* 91,4±1,19

ВВ 4 6,73±0,10 88,4±2,23

ВС 10 7,44±0,09 92,6±1,31

В среднем 58 7,16±0,03 91,6±0,78

Примечание: * Р < 0,05.

Таким образом, результаты исследований, направленные на выявление генетических маркеров количественных признаков, позволили рекомендовать для практической селекции тонкорунных пород овец в плане повышения продуктивности дополнительные критерии отбора. Систематический отбор животных-носителей определенных групп крови и аллелей гена - лактоглобулина позволит в последующих поколениях повысить частоту встречаемости предпочтительных генотипов, что в конечном итоге отразится на продуктивности популяции в целом.

Подбор родительских пар по генетическим параметрам крови

В деле успешного повышения племенных и продуктивных качеств сельскохозяйственных животных большое значение имеет научно обоснованный подбор родительских пар с целью получения высокопродуктивного потомства, оптимально сочетающего хозяйственно-ценные признаки с высокой жизнеспособностью.

Существующие приемы селекционной работы в племенном овцеводстве основаны на отборе и подборе животных преимущественно по фенотипическим признакам. При этом практически не учитываются их генетические особенности и степень генетической сочетаемости, в частности, по группам крови. В то же время исследованиями показано, что при определенном сочетании родительских пар потомство, как правило, обладает более высокими продуктивными характеристиками (Э.А.Ата-Курбанов, 1987; М.Е.Гонтов и соавт, 1989; Н.ВЛазовик,

1992). Более того, проблема оптимального подбора родительских пар может быть в значительной степени решена применением в практической селекции методов иммуногенетического анализа, использующих в качестве генетических маркеров группы крови (АЛ.Подстрешный и соавт., 1991; А.А. Новиков и со-авт., 1997; М.Д.Чамуха и соавт, 2003).

Однако в овцеводстве эта проблема недостаточно исследована. В связи с этим, в задачи собственных экспериментов входило изучение влияния подбора родительских пар по группам крови на продуктивные качества потомства.

Исследования были проведены в двукратной повторности в ведущих племенных заводах по разведению овец кавказской и ставропольской пород, а также пород манычский и советский меринос.

Аттестация животных селекционного ядра и основных баранов-производителей в ПЗ позволила определить спектр групп крови каждой особи. Путем использования формулы для расчета величины индекса антигенного сходства (га) были рассчитаны его значения всех возможных вариантов родительских пар в каждой исследованной популяции (рис. 5)._

30

25

20

S? 15

10

5

О

0,1 0,2 <М 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 Индекс антигенного сходства

Рис. 5. Распределение вариантов родительских пар по величине индекса антигенного сходства в разных породах

Полученные результаты выявили различия в распределении вариантов родительских пар в зависимости от величины индекса антигенного сходства. В популяции овец КА породы из всех возможных вариантов га - 4012 наибольшее количество - 3222 (80,3%) находилось в диапазоне от 0,11 до 0,60. В популяциях овец ММ и СМ соответственно из 2212 и 6291 возможных вариантов наибольшее количество - 1773 (80,1%) и 5007 (79,6) отмечено в диапазоне от 0 до 0,50, в то время как в популяции овец СТ из общего числа вариантов 3969 наибольшее количество - 3163 (79,7%) было в диапазоне от 0,21 до 0,70. Иными словами, в

популяциях овец ММ и СМ выявлено большее количество родительских пар с низким и средним генетическим сходством по группам крови, в то время как в популяции овец СТ большее количество пар с высоким генетическим сходством по группам крови.

Экспериментальные данные, в какой то мере, можно рассматривать в качестве генетической характеристики популяций тонкорунных овец. Различия в распределении родительских пар в зависимости от величины индекса антигенного сходства косвенно указывают на особенности генетической структуры исследованных популяций. Сравнивая амплитуды распределения родительских пар в породах ММ, СМ и СТ, можно говорить о том, что в последней генетическое сходство между матками и основными баранами значительно выше, чем среди первых. Это, в определенной степени, свидетельствует об уровне консолидации по группам крови в популяции овец СТ.

С целью выявления влияния генетического сходства родителей по группам крови на продуктивные признаки потомства был проведен подбор маток и баранов с минимальным значением (га = 0 - 0,30), средним (г» = 0,31 - 0,60) и максимальным (г4 = 0,61 - 1,00). У полученного потомства опытных групп в сравнительном аспекте были изучены динамика живой массы от рождения до 12 месячного возраста и настриг чистой шерсти в 15 месячном возрасте. Методика проведения опыта была одинаковой для всех исследуемых пород.

Анализ полученных данных выявил зависимость живой массы и настрига чистой шерсти у потомков от величины индекса генетического сходства родителей (табл.10, 11).

Живая масса при рождении была достоверно выше у потомков, полученных от барана и овцы, величина индекса антигенного сходства которых была от 0,31 до 0,60, по сравнению с живой массой потомков, рожденных от родительских пар с индексом от 0 до 0,30 и от 0,61 до 1,00.

У животных КА это преимущество составило 0,19 и 0,24 кг, у особей ММ -0,24 и 0,35кг и у овец СМ и СТ соответственно 0,25 и 0,23 кг; 0,31 и 0,25 кг. В 12 месячном возрасте разница в пользу животных, полученных от родителей со средним генетическим сходством, сохранялась, однако была недостоверной. Проведенный анализ выявил, что наследуемость живой массы была выше среди потомков, рожденных от родительских пар с индексом генетического сходства от 0,31 до 0,60. Примечательно, что выявленная закономерность была характерна для животных всех исследованных пород.

Таблица 10. Влияние величины индекса антигенного сходства родителей на живую массу потомства и наследуемость этого признака

Индекс антигенного сходства Живая масса, кг

п при рождении п в 12 месяцев И2

КА

0-0,30 26 4,42±0,04 0,28 23 47,42±0,15 0,18

0,31-0,60 26 4,61±0,03* 0,34 22 49,63±0,14 0,21

0,61-1,00 22 4,37±0,03 0,19 19 46Д6±0,11 0,19

В среднем 68 4,45±0.02 64 47,76^0,09

ММ

0-0,30 24 4,02±0,04 ОДЗ 21 44,82±0,14 020

0,31-0,60 24 4,26±0,04** 0,26 21 46,76±0,14 0,17

0,61-1,00 14 3,91 ±0,04 0,20 12 46,19±0,15 0,17

В среднем 62 4,04±0,02 54 45,87±0,10

СМ

0-0,30 22 3,98±0,04 027 20 45Д1±0,13 0,14

031-0,60 24 4,23±0,03** 0,29 21 45,98±0,14 0,18

0,61-1,00 22 3,92±0,03 оа2 20 44,62^0,13 0,16

В среднем 68 4,02±0,02 61 45ДЗ±0,09

СТ

0-0,30 22 3,86±0,04 0,19 20 43,2*0,14 0,17

0,314,60 24 4,09±0,03* 0,22 21 44,8±0,16 0,14

0,61-1,00 22 3,84±0,03 0,22 20 42,7±0,13 0,12

В среднем 68 3,91±0,02 61 43,55±0,11

Примечание - • Р<0,05; •• Р<0,01 по отношению кдругим вариантам подбора родительских пар

По показателю настрига чистой шерсти выделялись потомки, полученные от родительских пар с высоким генетическим сходством (га=0,61-1,00).Разницав их пользу по сравнению с другими вариантами подбора среди потомков КА составила 0,22 и 0,13 кг, среди ММ - 0,19 и 0,14 кг, среди СМ и СТ соответственно 0,20 и 0,23 кг; 0,11 и 0,15 кг (Р<0,05) (табл. 11).

Таблица 11. Влияние антигенного сходства родителей на настриг чистой шерсти и его наследуемость потомками

Индекс антигенного сходства Насгп риг чистой шерсти, кг

КА п Ь1 ММ п Ь1 СМ п СТ п I.1

0-0,30 2,71 ±0,06 23 0,41 2,69 ±0,06 25 0,52 2,74 ±0,07 24 2,78 ±0,08 20 0,48

0^1-0,60. 2,80 ±0,08 22 0,49 2,74 ±0,06 24 0,64 2,83 ±0,07 24 2,86 ±0,09 21 0,56

0,61-1,00 2,93 ±0,09* 19 0,58 2,88 ±0,08 * 16 0,64 2,94 ±0,09 21 3,01 ±0,09* 20 0,67

В среднем 2,80 ±0,06 64 2,76 ±0,06 65 2,84 ±0,05 65 2,88 ±0,07 61

Наследуемость настрига чистой шерсти была выше среди потомков, полученных от родительских пар с высокой величиной индекса генетического сходства. Следует отметить, что выявленные закономерности влияния генетического сходства родительских пар по группам крови на живую массу и шерстную продуктивность потомков, а также на наследование этих признаков имели четкую повторяемость во всех исследованных тонкорунных породах.

Таким образом, генетико-статистический анализ большого количества экспериментальных данных выявил определенную взаимосвязь между продуктивными признаками потомков и генетическим сходством родительских пар.

Полученные в собственных экспериментах результаты по оптимальному подбору родительских пар имеют существенное значение для практической селекции в тонкорунном овцеводстве. Учитывая это, а также принимая во внимание, что проведение расчетов величины индекса антигенного сходства требует значительных затрат времени, опираясь на полученные в собственных экспериментах данные, нами подготовлены и изданы «Методические рекомендации по подбору родительских пар с учетом генетических параметров крови овец» (2003). В разработанных рекомендациях приводится оригинальная программа Gen Index для расчета индекса антигенного сходства между большими массивами овец. Данная программа позволяет любому пользователю, имеющего навыки работы с программой «Windows», внести данные иммуногенетической аттестации животных и получить оптимальный подбор родительских пар.

Результаты исследований по выявлению генетических маркеров продуктивности овец и оптимальных вариантов родительских пар позволили разработать новый подход к селекции овец, представленный на рисунке 6.

Рис. б. Биотехнологическая схема селекции овец

Эффективность трансплантации эмбрионов в зависимости от генетических параметров крови овец-доноров и реципиентов

Метод трансплантации эмбрионов от высокопродуктивных животных менее продуктивным в настоящее время является одним из наиболее распространенных биотехнологических приемов. Накопленные к настоящему времени теоретические знания и практические навыки позволяют успешно применять этот прогрессивный метод и в интенсификации воспроизводства овец. В то же время приживляемость эмбрионов после их имплантации в организм реципиента остается невысокой и составляет от 20 до 60% (Л.К.Эрнст, 1989; К.Касымов и соавт, 1994; М.М.Айбазов, 2003). Одной из причин низкой приживляемости пересаженных эмбрионов может явиться иммуногенетическая несовместимость доноров и реципиентов. Часть собственных исследований была направлена на изучение приживляемости трансплантированных ранних эмбрионов у овец в зависимости от иммуногенетических параметров донора и реципиента и определения теста, прогнозирующего результативность этого биотехнологического приема.

С этой целью у доноров и реципиентов были отобраны образцы крови и определены антигены эритроцитов. На основании иммуногенетических характеристик между ними были рассчитаны индексы антигенного сходства. Подбор пар донор - реципиент осуществляли по величине индекса антигенного сходства га. В первую группу вошли пары, имеющие среднее генетическое сходство по группам крови (га=0,25-0,55), во вторую группу вошли пары со сходным спектром групп крови (га=0,75-1,00). Эффективность трансплантации определяли по уровню приживляемости зародышей и по числу полученных ягнят-трансплантатов. Кроме того, проводили генетическую экспертизу достоверности происхождения ягнят-трансплантатов путем сопоставления иммуногенетиче-ских характеристик триады: «отец-мать-донор-потомок-трансплантат». Проведенная генетическая экспертиза показала, что все ягнята были получены от пересаженных зигот: группы крови трансплантатов соответствовали группам крови овец-доноров и баранов, спермой которых они были осеменены. Антигены реципиентов, от которых были получены ягнята-трансплантаты, в их крови отсутствовали.

Результаты биотехнологических опытов, проведенных в трехкратной по-вторности, свидетельствовали о достаточно четкой зависимости показателя приживляемости эмбрионов при трансплантации от индекса антигенного сходства. При этом полученные данные настолько однозначны, что можно говорить не о тенденции, а о явной закономерности, которая заключается в том, что с уве-

личением индекса антигенного сходства между донором и реципиентом происходит повышение степени приживляемости, а, следовательно, увеличение количества полученных ягнят-трансплантатов (табл. 12).

Таблица 12. Приживляемость эмбрионов у овец после трансплантации в зависимости от индекса антигенного сходства доноров и реципиентов

Индекс антигенного сходства Годы Использовано реципиентов Получено ягнят Результативность трансплантации, %

всего в том числе

гол пересажено эмбрионов

0,25-0,75 1996 18 36 24 13 11 66,7

1997 19 38 26 14 12 68,4

1998 18 36 22 12 10 61,1

Итого 55 НО 72 39 33 65,4

0,75-1,00 1996 13 26 20 12 8 76,9

1997 15 30 23 12 11 76,7

1998 14 28 21 12 9 75,0

Итого 42 84 64 36 28 76,2

Повышение уровня имплантации эмбрионов в среднем на 10,8% (Ьт=6,6 -15,8%) при подборе оптимального сочетания доноров и реципиентов по группам крови позволит значительно снизить потери при эмбриопересадках и увеличить эффективность трансплантации как биотехнологического метода.

Схема биотехнологии воспроизводства овец представлена на рисунке 7.

Достоверность происхождения племенного молодняка

Одним из основных факторов, снижающих эффективность селекции, являются ошибки в записях о происхождении племенных животных. Выявлено, что даже в ведущих овцеводческих хозяйствах Ставропольского края процент ошибочных записей колеблется от 7,7 до 48,8% (М.В.Егоров и соавт., 2003).

Генетико-статистическими расчетами доказано, что каждый процент неправильно зарегистрированных животных снижает эффективность селекционной работы на 1,72 % (В.ИЛовенко, 1987). В то же время при анализе научной литературы не удалось найти данных о влиянии ошибочных записей на наиболее важные хозяйственно-ценные признаки тонкорунных овец.

В связи с этим целью исследований явилось выявление связи между уровнем ошибочных записей о происхождении племенного молодняка и уровнем шерстной продуктивности овец различных пород. Работа выполнялась в ФГУП «Большевик» на овцах КА (п=187), ПЗ им. Ленина - ММ (п=189), СПК «Нива» -СМ (п=201), ФГУП «Советское руно» - СТ (п=203) в период с 1999 по 2002 гг. Для проведения генетической экспертизы достоверности происхождения племенного молодняка животные селекционного ядра были аттестованы по группам крови. Путем сопоставления иммуногенетических характеристик полной семьи (отец - мать - потомок) подтверждалась или отрицалась достоверность происхождения потомства.

3,8

« 2

3,7 +

„3,6 х

¿3,5 £3,4

а

3,3

= 3,2-

3,1

I

2000 г.

2001 г.

% недостоверных записей '

1

16

14 |

•2 I

ю а

о. о со о

ь

о ч

ФГУП "Большевик" ПЗ Им. Лента ПЗ "Нива" ФГУП "Совруно"

Рис.8. Шерстная продуктивность и процент недостоверных записей происхождения племенного молодняка

Анализ полученных результатов выявил, что уровень ошибочных записей в исследованных племенных заводах был различным. Так, в 2000 году процент

недостоверных записей колебался от 9,7 до 14,3%%, в 2001 - соответственно от 10,6 до 14,9%% (рис. 8).

Сопоставление процента ошибочных записей и данных среднего настрига чистой шерсти овец в исследуемых племенных заводах, позволило сделать заключение, что между изучаемыми показателями выявлена обратная зависимость, т.е. чем ниже процент недостоверных записей происхождения молодняка, тем выше уровень шерстной продуктивности.

Так, в ФГУП «Советское руно» в 2000 году недостоверные записи в родословных племенных овец составили 9,7 %, настриг чистой шерста - 3,72 кг, в 2001 году - соответственно 10,6 % и 3,56 кг, в ФГУП «Большевик» эти показатели были - 14,3 % и 3,32 кг; 12,9 % и 3,44 кг. Рассчитано, что один процент ошибочных записей о происхождении снижает настриг шерсти на 2,31 %.

Экономическая эффективность использования генетических методов в овцеводстве.

Аргументированное доказательство экономической целесообразности научной разработки является залогом ее успешного применения в практической работе. Результаты собственных исследований показывают, что экономическая эффективность использования молекулярно-генетических методов в практической селекции овец может складываться за счет повышения продуктивности животных в результате отбора овец-носителей маркерных аллелей высокой продуктивности, подбора оптимальных вариантов родительских пар и исключения из селекционного процесса животных с ложной родословной.

Экономический эффект отбора овец-носителей маркерных аллелей высокой продуктивности составил 8,58 рублей (при сложившихся ценах на продукцию овцеводства в 2002 г.), подбора оптимальных вариантов родительских пар составил 7,91 рублей и проведения генетической экспертизы достоверности происхождения молодняка (ГЭДП) - 4,01 рублей на 1 животное.

Кроме того, следует отметить, что проведение ГЭДП и подтверждение на ее основе высокого уровня ведения племенного учета дает право ПЗ на лицензирование деятельности в области племенного животноводства и получение государственной дотации (ПО руб. на 1 гол), составляющей 30 % от общих затрат на содержание одной овцы. Именно господдержка в переходный период позволит сохранить уникальный генофонд тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России и в этом определенную роль должны сыграть молекулярно-генетические методы. Вышеизложенное позволяет утверждать, что суммарный

экономический эффект при использовании комплекса молекулярно-генетических методов составляет 130,5 рублей на одно животное.

Таким образом, ведение научно-обоснованной селекционной работы с использованием современных генетических методов, как показали представленные расчеты, является экономически целесообразным.

ВЫВОДЫ

Исследование генофонда овец Юга России с использованием молекуляр-но-генетических методов позволило усовершенствовать биотехнологию их воспроизводства и селекции:

1. Разработана биотехнология изготовления моноспецифических сывороток для установления групп крови овец, включающая иммунизацию, реимуниза-цию, абсорбцию поливалентных сывороток, получение моновалентных, хранение в гранулированном виде при - 24° С. Создан единственный в РФ банк имму-нидиагностикумов по шести системам, включающий реагенты к 14 кровегруп-повым факторам овец.

2. При совершенствовании биотехнологии воспроизводства и селекции овец тонкорунных и полутонкорунных пород овец необходимо учитывать особенности их генофонда. Установлено, что для тонкорунных пород овец Юга России: грозненской (ГТ), кавказской (КА), манычский меринос (ММ), советский меринос (СМ) и ставропольской (СТ) характерно высокая частота встречаемости Аа (0,401...0,498), Ве (0,419...0,487), СЬ (0,643...0,672) и Я (0,395...0,638) антигенов; средняя концентрация АЪ (0,214...0,298), ВЪ (0,212...0,383), В1 (0,192...0,383), Ве (0,213...0,395), Са (0,215...0,346), Ма (0,186...0,368) групп крови и низкая М (0,119...0,195) фактора. Полутонкорунные овцы северокавказской мясо-шерстной (СК) и советской мясо-шерстной (СМШ) пород характеризовались высокой частотой встречаемости носителей Аа, Вй, Ве и Ва (0,398...0,636) групп крови, средним распространением особей с Са (0,244...0,324) фактором и низкой встречаемостью носителей АЪ и Вс (0,076...0,189) групп крови.

3. Наименьшие генетические дистанции установлены между тонкорунными породами ММ - СТ, ГТ, АМ (ё=0,023...0,078); несколько большие - между СМ - СТ, ММ, КА и СТ - ГТ (ё=0,103...0,138). Наибольшие генетические дистанции выявлены между КА - ММ, СТ и АМ - ГТ, КА, СМ и СТ (ё=0,150...0,189), а также между тонкорунными и полутонкорунными породами овец (ё=0,159.. .0,252). Выявлена тенденция к генетическому сближению тонко-

рунных пород овец. За десять лет показатели генетических дистанций между КА, ММ и СТ сократились в среднем в 1,5 раза.

4. При селекционном совершенствовании овец тонкорунных пород и биотехнологии их воспроизводства следует использовать генетические маркеры шерстной продуктивности. Высокий настриг чистой шерсти у овец кавказской породы контролировал совокупный (комплексный) генотип АЬВеБа; у овец ставропольской породы и манычский меринос соответственно генотипы -AbBgDaMa иАЬВеБаМа.

5. Установлена зависимость признаков продуктивности потомства от генетического сходства родителей, необходимых для совершенствования биотехнологии воспроизводства овец. Большую живую массу при рождении (на 16,4%, Р<0,05) имели потомки, полученные от родительских пар со средним генетическим сходством (га= 0,31.. .0,60). Больший настриг чистой шерсти (на 12,3%, Р<0,05) был у животных, полученных от родителей с высоким генетическим сходством (га=0,61... 1,0). Выявлено, что в популяциях овец ММ, СМ и КА наибольшее количество родительских пар 80,1; 79,6 и 80,3 %% соответственно имело низкое и среднее генетическое сходство по группам крови =0...0,50 и 0,11...0,60). В популяции овец СТ наибольшее количество родительских пар 79,2% было со средним различием по группам крови (га:=0,21 ...0,70).

6. Приживляемость ранних эмбрионов овец при их трансплантации от овец-доноров к овцам-реципиентам зависит от генетического сходства животных: с повышением индекса генетического сходства между истинной и суррогатной матерями происходит увеличение степени имплантации на 11 - 15% (Р<0,05).

7. Установлена обратная зависимость уровня ошибочных записей о происхождении племенного молодняка и уровня шерстной продуктивности в племенных заводах по разведению овец тонкорунных пород. Один процент ошибочных записей о происхождении снижает настриг шерсти на 2,31 %.

Предложения производству

1. Предложена технология изготовления иммунодиагностикумов для определения групп крови у овец; разработана нормативно-технологическая документация (технические условия, наставление по применению, утвержденные Департаментом животноводства и племенного дела России, 2004 г.).

2. В целях совершенствования селекционно-племенной работы в овцеводстве предложены биотехнологические методы селекции и воспроизводства:

- отбор овец-носителей маркерных аллелей групп крови - КА - ЛЬБвБа, ММ - ЛЬБвБаЫа, СТ - ЛЬBgDaMa;

- подбор оптимальных вариантов родительских пар с индексом сходства от 0,31 до 0,60, обеспечивающий сочетание высокого уровня шерстной продуктивности и живой массы;

- подбор доноров и реципиентов при трансплантации эмбрионов с учетом их сходства по группам крови, увеличивающий уровень приживляемости на 11 -15%;

- генетическая экспертиза достоверности происхождения племенного молодняка с целью исключения из селекционного процесса животных с недостоверной родословной.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Чижова Л.Н., Айбазов ММ., Утина (Селионова) М.И. Приживляемость зигот овец с учетом иммуногенетической совместимости // Генетика, селекция и качество продукции овец и коз: Сб научн. тр. ВНИИОК. - Ставрополь, 1995. - С. 89-93.

' 2. Использование иммуногенетических, иммунологических методов при подборе родительских пар / ВАМороз, Л.Н.Чижова, М.И.Утина (Селионова) и др. // Сб. научн. тр. ВНИИОК. -1996. - Вып. 41. - С.37 - 46.

3. Айбазов А-М.М., Утина (Селионова) М.И. Трансплантация эмбрионов у овец - биотехнологический метод ускорения генетического прогресса // Современные достижения биотехнологии: Матер. Всерос. конф. / Ставрополь. - 1996. -С. 22-23.

4. Айбазов А-М.М., Утина (Селионова) М.И. Биотехнологические методы воспроизводства овец // Современные достижения биотехнологии: Матер. Все-рос. конф. / Ставрополь. - 1996. - С. 24 - 25.

5. Чижова Л.Н., Утина М.И. (Селионова). Влияние сочетаемости родительских пар по полигенным системам крови на приживляемость эмбрионов / Современные достижения биотехнологии: Матер. Всерос. конф. / Ставрополь. -1996.-С. 25-26.

6. Мороз ВА, Чижова Л.Н., Утина (Селионова) МЛ. Иммуногенетический мониторинг овец манычский меринос // Современные методы селекции с/х животных: Матер. Между нар. конф. памяти Ф.Ф.Эйснера / Харьков. - 1996. - С.77.

7. Айбазов А-М.М., Утина (Селионова) М.И. Биотехнологические методы воспроизводства в селекции овец // Современные методы селекции с/х животных: Матер. Междунар. конф. памяти Ф.Ф.Эйснера / Харьков. -1996. - СИЗ.

8. Мороз В.А. Чижова Л.Н., Утина (Селионова) М.И. Иммуногенетические тесты, прогнозирующие продуктивность овец манычский меринос // Сб. научн. тр. ВНИИОК. - 1997. - Вып. 42. - С. 105 - 108.

9. Утина М.И. (Селионова). Природная половая сочетаемость - основа подбора родительских пар в овцеводстве // Вестник ветеринария. - 1998. - № 8. -С24- 27.

10. Генетические факторы жизнеспособности ягнят / Л-Н.Чижова, Л.В.Ольховская, М.И.Утина (Селионова) и др. // Вестник ветеринарии. - 1998. -№11.-С. 46-51.

11. Правила и нормы генетического тестирования / ЛЛЛижова, Л.В.Ольховская, М.И.Селионова и др. // Мет. указания. - Ставрополь: Изд. ВНИИОК.-1998.-14 с.

12. Новый подход к подбору родительских пар в овцеводстве / Л.Н.Чижова, ЛЗ.Ольховская, МЛ Селионова и др. // Матер. Всеросс. научн.-произв. конф. по овцеводству и козоводству / Ставрополь, ВНИИОК. - 1999. - С. 177 - 180.

13. Селионова М.И. Ольховская Л.В., Дьякова СП. Генетические маркеры продуктивности овец, коз // Современные достижения биотехнологии - вклад в науку XXI века: Матер. Всеросс. конф. - Ставрополь. - 1999. - С.27 - 29.

14. Селионова М.И., Дьякова СП. Иммуногенетический мониторинг овец манычский меринос // Сб. научн. тр. ВНИИОК. - 2000 - Вып. 45. - С. 101 -105.

15. Силкина СФ. Селионова М.И., Наказной К Л. Генетическая структура овец манычский меринос в связи с селекцией // Сб. научн. тр. ВНИИОК. - 2000. -ВЫП.45.-С105-111.

16. Иммуногенетический анализ в селекции овец, коз (Методические указания) / Л.Н.Чижова, Л.В.Ольховская, М.И.Селионова и др. / Ставрополь: Изд. ВНИИОК.-2001.-31 с.

17. Селионова М.И., Эльгайтаров ВА. Использование иммуногенетических методов для повышения мясной продуктивности овец // Роль биотехнологии в экологизации природной среды, питания и здоровья человека: Матер. Всеросс. конф., Ставрополь. - 2001. - С. 162 - 163.

18. Селионова М.И., Чижова Л.Н., Михайленко А.К. Прогнозирование продуктивности овец по биохимическим и иммуногенетическим параметрам крови // Сб. научн. тр. ВНИИОК. - 2002. - С. 156 -161.

19. Селионова М.И., Дьякова СП. Способы повышения эффективности изготовления монореагентов // Сб. научн. тр. ВНИИОК. - 2002 - С 166 -169.

20. Чижова Л.Н., Селионова М.И., Ольховская Л.В. Иммуногенетические, биохимические тесты в селекции овец // Вестник ветеринарии. - 2002. - № 22/4. -С. 50-53.

21. Чижова Л.Н., Селионова М.И., Дьякова СП. Генетическая дифференциация тонкорунных пород овец // Сб. научн. тр. ВНИИОК. - 2003. - 4.1 - С.120 -127.

22. Абонеев В.В., Чижова ЛЛ., Селионова М.И. Генетические маркеры при оценке межпородной дифференциации овец // Биотехнология — 2003: Матер. Всерос. научн.-практ. конф. - Сочи: Изд. СтГАУ, 2003. - С.86 - 87.

23. Методические рекомендации по подбору родительских пар с учетом генетических параметров крови овец и коз / Л.Н.Чижова, МЛ.Селионова, Л.В.Ольховская и др. / Ставрополь: Изд. СНИИЖК. - 2003. - 23 с.

24. Дьякова СП., Селионова М.И. Банк реагентов - основа иммуногенети-ческих исследований // Биоресурсы. Биотехнологии. Инновации Юга России: Матер. Междунар. научно.-произв. конф. - Ставрополь-Пятигорск: Изд. СГУ, 2003. - 4.1. -С. 172- 174.

25. Селионова М.И. Генофонд и дифференциация тонкорунных пород овец Юга России по группам крови // Овцы. Козы. Шерстяное дело. - 2004. - № 1. -С 1-6.

26. Чижова Л.Н., Селионова М.И., Витанова О.И. Использование индекса генетического сходства при подборе родительских пар // ЭКО. Экология. Культура. Образование. - Вып. 13. - 2004. - С 54 - 56.

27. Селионова М.И. Генетический анализ микроэволюционных процессов в популяциях овец тонкорунных пород с использованием групп крови // Вестник Ставропольского госуниверситета. -№ 36. - 2004. - С. 98-101.

28. Селионова М.И. Иммуногенетические маркеры и их использование в селекции овец // Зоотехния. - № 6. - 2004. - С 13-16.

29. Абонеев В.В., Чижова Л.Н., Селионова М.И. Иммуногенетика в селекции овец: Монография - Изд. М - Apr, Ставрополь. - 2004. - 168 с.

30. Айбазов М.М. Селионова М.И., Абонеев В.В. Биотехнология воспроизводства овец и коз: Монография - Изд. Кавказ-Полиграфия, Ставрополь. - 2004. -326 с.

СЕЛИОНОВА МАРИНА ИВАНОВНА

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Подл, к печати 17.08.2004 Заказ 148. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная Печать офсетная. Усл. изд. л. 1,7. Тираж 100 экз.

Отдел оперативной полиграфии СНИИЖК г. Ставрополь, пер. Зоотехнический 15

»16304

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Селионова, Марина Ивановна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Иммуногенетические методы

1.1.1. Группы крови овец

1.1.2. Генетическая экспертиза достоверности происхожде- 16 ния племенного молодняка

1.1.3 Генофонд и генетическая дифференциация различных 20 пород овец по группам крови

1.1.4. Генетические маркеры продуктивных признаков 31 сельскохозяйственных животных

1.1.5. Подбор родительских пар с учетом иммуногенетиче-ских и иммуннобиологических параметров

1.1.6. Иммуногенетические аспекты трансплантации эмбрионов

1.2. Молекулярно - генетические методы

1.2.1. Методы исследования полиморфизма ДНК

1.2.2. Селекция на основе молекулярных маркеров

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 79 ^ 3.1. Изготовление иммунодиагностикумов для выявления групп крови у овец

3.2. Генофонд и межпородная дифференциация тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России по группам крови

3.2.1. Генофонд тонкорунных пород овец

3.2.2. Полиморфизм гена (3-лактоглобулина у овец кавказ- * ской породы

3.2.3. Межпородная дифференциация тонкорунных пород 110 ^ овец

3.2.4. Генофонд полутонкорунных пород овец

3.2.5. Межпородная дифференциация полутонкорунных по- 124 род овец

3.2.6. Межпородная дифференциация тонкорунных и полутонкорунных пород овец

3.3. Молекулярно-генетические маркеры признаков продуктивности

Ф 3.3.1. Продуктивные признаки овец тонкорунных пород с учетом групп крови

3.3.2. Продуктивные признаки овец кавказской породы с учетом аллельных вариантов р-лактоглобулина

3.4. Подбор родительских пар по генетическим параметрам крови

3.5. Эффективность трансплантации эмбрионов в зависимощ*' сти от генетических параметров крови овец доноров и реципиентов

3.6. Достоверность происхождения племенного молодняка

3.7. Экономическая эффективность использования молеку-лярно-генетических методов в овцеводстве

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Установление генофонда овец Юга России по группам крови и усовершенствование биотехнологии их воспроизводства и селекции на основе молекулярно-генетических методов"

Актуальность темы. Традиционные методы оценки сельскохозяйственных животных, основанные на анализе морфофизиологических и фено-типических признаков, на современном этапе не могут в полной мере удовлетворить требованиям, предъявляемым к селекции. В связи с этим, одной из главных проблем биотехнологии является установление и использование молекулярно-генетических маркеров различных хозяйственно-ценных признаков сельскохозяйственных животных. Преимущество генетических маркирующих тест-систем заключается в том, что они неизменяемы в онтогенезе, независимы от условий внешней среды, имеют кодоминантный характер наследования (В.Н.Тихонов, 1991; С.А.Казановский, 1991; Л.А.Калашникова, 1997; Н.С.Марзанов, 1991, 2002).

Особо актуальным является исследование полиморфизма генетических систем крови, используемое для совершенствования биотехнологии воспроизводства животных.

В теоретическом аспекте оно важно для исследования генофонда различных пород и популяций, установления их генетической структуры и оценки сходства и различий, определения происхождения и эволюции под воздействием условий среды и селекционного давления.

Практическая значимость таких исследований состоит в том, что они, с учетом достижений молекулярной генетики, позволяют решать целый ряд биотехнологических прикладных задач селекции: выявление генетических маркеров, связанных с физиологическими и биохимическими процессами в организме и сопряженных с высокой продуктивностью животного; прогнозирование результатов отбора и подбора по генетическим параметрам крови; проведение генетической экспертизы достоверности происхождения племенного молодняка (А.М.Машуров, 1987; Н.О.Сухова, 1987, 2002; А.А.Новиков, 2001).

Несмотря на очевидные преимущества, методы селекции на основе молекулярно-генетических показателей в практике овцеводства используются не в полной мере, в то время как такая проблема весьма актуальна в связи с тем, что овцеводство является одной из важных отраслей животноводства России. Особую значимость эти исследования приобретают на Юге России, поскольку в данном регионе находится более 70 % племенных заводов РФ по разведению тонкорунных и полутонкорунных овец. Исследованиями С.А.Казановского (1983;1987) и Н.С.Марзанова (1981; 1984) было начато определение генетической структуры пород овец Юга России. Однако до настоящего времени эта проблема остается недостаточно изученной. В то же время без объективной информации о генофонде овец не представляется возможным судить об особенностях их происхождения и филогенетических взаимоотношений, микроэволюционных процессах, происходящих в них.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось установление генофонда основных пород овец Юга России по группам крови и использование молекулярно-генетических маркеров в совершенствовании биотехнологии их воспроизводства и селекции.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи как отдельные этапы решения проблемы в целом:

- разработать биотехнологию изготовления иммунодиагностикумов для определения групп крови у овец;

- изучить генетический полиморфизм эритроцитарных антигенов и гена /?-лактоглобулина у овец тонкорунных и полутонкорунных пород Юга России, провести оценку их генетической структуры на основе популяцион-но-генетических параметров;

- изучить межпородную дифференциацию, характер филогенетических взаимосвязей и динамику микроэволюционных процессов в популяциях тонкорунных и полутонкорунных пород овец;

- усовершенствовать биотехнологию трансплантации эмбрионов у овец с учетом генетических параметров крови овец-доноров и реципиентов;

- разработать биотехнологические приемы интенсификации селекции и воспроизводства овец с использованием генетических маркеров высокой продуктивности и оптимальных вариантов подбора родительских пар по группам крови.

Научная новизна. Впервые разработана оптимальная биотехнология изготовления моноспецифических сывороток и создан единственный в РФ банк иммунодиагностикумов для определения групп крови у овец.

Впервые установлен генофонд тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России по шести генетическим системам групп крови и проведена оценка их генетической структуры, межпородной дифференциации, филогенетических взаимосвязей и микроэволюционных процессов.

Впервые определены генетические маркеры высокой продуктивности у овец тонкорунных пород и на их основе разработаны новые приемы подбора родительских пар.

Усовершенствована биотехнология трансплантации ранних эмбрионов с учетом генетических параметров крови овец-доноров эмбрионов и реципиентов; доказана возможность использования групп крови для повышения эффективности этого биотехнологического приема.

Изучены теоретические аспекты, разработаны и предложены приемы усовершенствования биотехнологии воспроизводства и селекции овец Юга России на основе молекулярно-генетических методов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований позволили установить генофонд по группам крови основных пород овец, разводимых на Юге России, изучить их филогенез, межпородную дифференциацию, а также направленность микроэволюционных процессов в них. Использование комплекса иммуно- и молекулярно-генетических методов позволило усовершенствовать селекцию и биотехнологию воспроизводства овец.

Определены рациональные схемы использования овец донорского стада (доноров, реципиентов), предложены оптимальные режимы проведения абсорбции поливалентных сывороток. Разработана нормативно-техническая документация на изготовление и применение иммунодиагностикумов для выявления групп крови у овец (ТУ, наставление по применению иммунодиагностикумов, утвержденные Департаментом животноводства и племенного дела РФ, 2004 г.).

Материалы исследований позволили выявить маркеры высокой шерстной продуктивности у овец тонкорунных пород и рекомендовать для практической селекции метод отбора животных желательного генотипа и прогнозирования их продуктивности в раннем возрасте, а также метод подбора родительских пар по генетическим параметрам крови.

Созданный банк иммунодиагностикумов позволил ввести в практику овцеводства Юга России (27 племенных заводов) метод экспертизы достоверности происхождения племенного молодняка. Аттестовано более 17 тыс. овец и проведена генетическая экспертиза достоверности происхождения более 5 тыс. голов племенного молодняка. На животных с подтвержденной родословной оформлены индивидуальные иммуногенетические паспорта. Существенно расширены возможности практической селекции и биотехнологии овец в овцеводческих хозяйствах Ставропольского края, Ростовской области, в Республиках Карачаево-Черкесия, Калмыкия и Дагестан. Использование методов отбора высокоценных овец по генетическим маркерам крови, подбора родительских пар и генетической экспертизы достоверности происхождения позволило повысить уровень селекционно-племенной работы в овцеводстве, увеличить продуктивность животных и повысить рентабельность овцеводства на 10 - 15 %.

Основные научные положения и практические предложения вошли в «Методические указания по нормам и правилам генетического тестирования овец» (ВНИИОК, Ставрополь, 1998); «Методические указания по применению иммуногенетического анализа в селекции овец, коз» (ВНИИОК, Ставрополь, 2001); «Методические рекомендации по подбору родительских пар с учетом генетических параметров крови овец и коз» (СНИИЖК, Ставрополь

Москва, 2003), монографии "Иммуногенетика в селекции овец", "Биотехнология воспроизводства овец и коз".

Апробация полученных результатов. Основные научные положения диссертации доложены на ежегодных заседаниях ученого совета ВНИИОК и СНИИЖК 1996-2003 гг.; I научно-практической конференции по биотехнологии Северо-Кавказского региона, Ставрополь (1995), Всероссийских конференциях по биотехнологии, Ставрополь (1996, 1999, 2001), Сочи (2003); на межвузовской научной конференции Ставропольского ГСХА (1997); на координационном совещании и научно-практических конференциях по овцеводству и козоводству, Ставрополь (1995, 1999); на Международной конференции памяти Ф. Ф. Эйснера, Харьков (1996); на Международной научно-практической конференции, Ставрополь-Пятигорск (2003).

Публикации. Основные положения диссертации изложены в 30 научных работах, опубликованных в научных изданиях, в том числе в ведущих рецензируемых журналах, в материалах международных и всероссийских конференций.

На защиту выносятся следующие положения диссертации:

- биотехнология изготовления иммунодиагностикумов для определения групп крови у овец;

- оценка генетической структуры, межпородной дифференциации, филогенеза и микроэволюции в популяциях овец тонкорунных и полутонкорунных пород Юга России;

- выявление генетических маркеров, детерминирующих некоторые хозяйственно-ценные признаки овец;

- использование метода оптимального подбора родительских пар по генетическим параметрам крови для интенсификации биотехнологии воспроизводства и селекции овец;

- усовершенствование биотехнологии трансплантации ранних эмбрионов на основе использования генетических параметров крови овец - доноров и реципиентов;

- обоснование применения молекулярно-генетических методов для усовершенствования биотехнологии воспроизводства и селекции тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 250 страницах машинописного текста, иллюстрирована 43 таблицами и 23 рисунками. Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты исследований, обсуждение результатов исследований, заключение, выводы, предложения производству и список литературы, включающий 197 работ отечественных и 78 зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Селионова, Марина Ивановна

218 ВЫВОДЫ

Исследование генофонда овец Юга России с использованием молеку-лярно-генетических методов позволило усовершенствовать биотехнологию их воспроизводства и селекции:

1. Разработана биотехнология изготовления моноспецифических сывороток для установления групп крови овец, включающая иммунизацию, реимунизацию, абсорбцию поливалентных сывороток, получение моновалентных, хранение в гранулированном виде при - 24° С. Создан единственный в РФ банк иммунидиагностикумов по шести системам, включающий реагенты к 14 кровегрупповым факторам овец.

2. При совершенствовании биотехнологии воспроизводства и селекции овец тонкорунных и полутонкорунных пород овец необходимо учитывать особенности их генофонда. Установлено, что для тонкорунных пород овец Юга России: грозненской (ГТ), кавказской (КА), манычский меринос (ММ), советский меринос (СМ) и ставропольской (СТ) характерно высокая частота встречаемости Аа (0,401.0,498), Ве (0,419.0,487), СЪ (0,643.0,672) и Д (0,395.0,638) антигенов; средняя концентрация АЪ (0,214.0,298), ВЬ (0,212.0,383), В1 (0,192.0,383), (0,213.0,395), Са (0,215.0,346), Ма (0,186. .0,368) групп крови и низкая МЬ (0,119. .0,195) фактора. Полутонкорунные овцы северокавказской мясо-шерстной (СК) и советской мясо-шерстной (СМШ) пород характеризовались высокой частотой встречаемости носителей Аа, Вй, Ве и Эа (0,398.0,636) групп крови, средним распространением особей с Са (0,244.0,324) фактором и низкой встречаемостью носителей АЬ и Вс (0,076.0,189) групп крови.

3. Наименьшие генетические дистанции установлены между тонкорунными породами ММ - СТ, ГТ, АМ (<1=0,023.0,078); несколько большие - между СМ - СТ, ММ, КА и СТ - ГТ (<1=0,103.0,138). Наибольшие генетические дистанции выявлены между КА - ММ, СТ и АМ - ГТ, КА, СМ и СТ (<1=0,150.0,189), а также между тонкорунными и полутонкорунными породами овец (<1=0,159.0,252). Выявлена тенденция к генетическому сближению тонкорунных пород овец. За десять лет показатели генетических дистанций между КА, ММ и СТ сократились в среднем в 1,5 раза.

4. При селекционном совершенствовании овец тонкорунных пород и биотехнологии их воспроизводства следует использовать генетические маркеры шерстной продуктивности. Высокий настриг чистой шерсти у овец кавказской породы контролировал совокупный (комплексный) генотип АЬ-ВеИа; у овец ставропольской породы и манычский меринос соответственно генотипы - AbBgDaMa и АЬВеОаМа.

5. Установлена зависимость признаков продуктивности потомства от генетического сходства родителей, необходимых для совершенствования биотехнологии воспроизводства овец. Большую живую массу при рождении (на 16,4%, Р<0,05) имели потомки, полученные от родительских пар со средним генетическим сходством (га=0,31.0,60). Больший настриг чистой шерсти (на 12,3%, Р<0,05) был у животных, полученных от родителей с высоким генетическим сходством (га=0,61. .1,0). Выявлено, что в популяциях овец ММ, СМ и КА наибольшее количество родительских пар 80,1; 79,6 и 80,3 %% соответственно имело низкое и среднее генетическое сходство по группам крови (га=0.0,50 и 0,11.0,60). В популяции овец СТ наибольшее количество родительских пар 79,2% было со средним различием по группам крови (га=0,21.0,70).

6. Приживляемость ранних эмбрионов овец при их трансплантации от овец-доноров к овцам-реципиентам зависит от генетического сходства животных: с повышением индекса генетического сходства между истинной и суррогатной матерями происходит увеличение степени имплантации на 11 — 15% (Р<0,05).

7. Установлена обратная зависимость уровня ошибочных записей о происхождении племенного молодняка и уровня шерстной продуктивности в племенных заводах по разведению овец тонкорунных пород. Один процент ошибочных записей о происхождении снижает настриг шерсти на 2,31 %.

Предложения производству

1. Предложена технология изготовления иммунодиагностикумов для определения групп крови у овец; разработана нормативно-технологическая документация (технические условия, наставление по применению, утвержденные Департаментом животноводства и племенного дела России, 2004 г.).

2. В целях совершенствования селекционно-племенной работы в овцеводстве предложены биотехнологические методы селекции и воспроизводства:

- отбор овец-носителей маркерных аллелей групп крови - КА -АЬВеВа, ММ -АЬВеОаМа, СТ - AbBgDaMa;

- подбор оптимальных вариантов родительских пар с индексом сходства от 0,31 до 0,60, обеспечивающий сочетание высокого уровня шерстной продуктивности и живой массы;

- подбор доноров и реципиентов при трансплантации эмбрионов с учетом их сходства по группам крови, увеличивающий уровень приживляемо-сти на 11 - 15%;

- генетическая экспертиза достоверности происхождения племенного молодняка с целью исключения из селекционного процесса животных с недостоверной родословной.

Заключение

В последние годы в результате экономических преобразований в сельском хозяйстве Российской Федерации произошли радикальные перемены, носящие в основном негативный характер. Резко снизилось количество животных во всех отраслях животноводства. Значительно уменьшилась их продуктивность. Кроме экономических причин, приведших к столь негативным явлениям, необходимо отметить и сугубо административные подходы к проблемам развития отраслей животноводства, в частности к принципам широкомасштабной селекции. Специфика развития отечественного животноводства характеризовалась не только нерациональным использованием имеющихся генетических ресурсов, но и вымыванием их из селекционного процесса. Широкое использование в различных отраслях животноводства генофонда зарубежных пород, не дав ощутимых результатов в повышении продуктивности, существенно ухудшило генофонд отечественных пород. Одновременное всеохватывающее использование безусловно прогрессивного метода искусственного осеменения при отсутствии необходимого генетического контроля привело к резкому сужению генетического разнообразия в стадах и породах. Известно, что генетическое разнообразие как в пределах породы, так и в пределах вида - этот тот материал, с которым работают селекционеры, вследствие чего любое сокращение ограничивает возможности адекватно реагировать на изменения экономической, экологической и социальной ситуации.

Таким образом, сокращение численности животных снижение их продуктивности, ухудшение показателей воспроизводства, увеличение подверженности к заболеваниям оказываются тесно связанными с причинами генетического плана. Сегодня с определенной уверенностью можно утверждать, что к сожалению, призыв А.С.Серебровского (1928) о сохранении и бережном отношении к генофонду как к естественному богатству, не был услышан и по сей день не находит должной поддержки. Вследствие этого, актуальнейшей задачей, стоящей перед учеными и практиками альнейшей задачей, стоящей перед учеными и практиками животноводства является сохранение и рациональное использование генофонда как императивной предпосылки и составной части программы по значительному увеличению продуктивности сельскохозяйственных животных. Традиционные методы селекции и разведения сельскохозяйственных животных, основанные на учете и анализе фенотипических признаков, не могут в полной мере удовлетворить этому требованию. Необходимо осуществлять контроль не только за развитием продуктивных особенностей (фенотипом), но и за изменением генетической структуры, а также генетическим влиянием родительских пород и форм на генофонд популяции. Большинство хозяйственно-полезных признаков имеет непрерывную фенотипическую изменчивость и находится под контролем многих генетико-физиологических систем и влиянием различных факторов внешней среды. В связи с этим все большее применение находят методы биохимической и молекулярной генетики, основанные на использовании генетических маркеров. Особо актуальным в теоретическом и практическом отношении является исследование полиморфизма генетических систем эритроцитарных антигенов (групп крови), так как они дискретны, не зависят от факторов внешней среды, не меняются в течение онтогенеза и имеют четкий генетический контроль.

В теоретическом аспекте оно важно для исследования генофонда пород, популяций, установления их генетической структуры, сходства и различий, определения происхождения и эволюции под воздействием условий среды.

Практическая значимость таких исследований в том, что они с учетом достижений молекулярной генетики, позволяют решать целый ряд прикладных задач селекции (рационального использование генофонда): выявление генетических маркеров, сопряженных с высокой продуктивностью; прогнозирование результатов отбора и подбора по генетическим параметрам крови; исключение из селекционного процесса особей с недостоверным происхождением (проведение генетической экспертизы достоверности происхождения племенного молодняка).

Однако в практике овцеводства Юга России методы селекции на основе генетических показателей крови используются не в полной мере, хотя такая проблема весьма актуальна в связи с тем, что овцеводство является традиционно ведущей отраслью животноводства данного региона.

До настоящего времени оставались практически неизученными генофонд тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России, особенности процесса их микроэволюции и филогенетических взаимоотношений. Без объективной информации о генофонде тонкорунных и полутонкорунных пород не представлялось возможным выявление генетических маркеров признаков продуктивности овец, определение оптимальных вариантов подбора родительских пар, использование генетических параметров овец-доноров и реципиентов при трансплантации эмбрионов, проведение генетической экспертизы достоверности происхождения племенного молодняка.

В связи с этим очевидность исследования генофонда тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России с целью сохранении ценного и рационального его использования не подлежала сомнению.

Целью исследований явилось исследование генофонда тонкорунных и полутонкорунных пород Юга России и разработка приемов рационального его использования.

В результате многолетних исследований получены важные результаты существенно расширяющие представления о генофонде тонкорунных и полутонкорунных пород овец Юга России, направленности микроэволюционных процессов, происходящих в процессе синтетической селекции, особенностях филогенетических связей между ними.

Впервые в РФ создан банк иммунодиагностикумов для выявления групп крови у овец, изучен генофонд тонкорунных и полутонкорунных пород Юга России по шести генетическим системам групп крови, включающих 14 антигенных факторов эритроцитов и полиморфизм гена /?-лактоглобулина.

На основании популяционно-генетических параметров впервые проведен анализ особенностей генеалогического процесса микроэволюции и оценка межпородной дифференциации шести тонкорунных и двух полутонкорунных пород овец Юга России. Выявлен процесс генетического сближения тонкорунных пород в результате проводимой селекции и широкого использования генофонда австралийских мериносов. Определено сохранение генного равновесия в локусе ^-лактоглобулина в популяции овец кавказской породы.

Установлена зависимость приживляемости эмбрионов при их трансплантации от генетических параметров крови овец-доноров и реципиентов, показана возможность использования групп крови для повышения эффективности этого биотехнологического приема.

Определены генетические маркеры высокой шерстной продуктивности у овец тонкорунных пород, установлена зависимость проявления продуктивных признаков у потомства ъг генетического сходства родительских пар.

Высокая информативность многих современных методов иммуногене-тики и молекулярной генетики может служить не только для изучения генома, но и для исследования процессов формирования продуктивных признаков животных в качестве дополнительных селекционных критериев, а также дает возможность использования некоторых приемов для прогнозирования селекционного воздействия на них.

Использование большого количества генетических маркеров в качестве критериев селекционных процессов позволит более достоверно оценить генетический потенциал пород, популяций и отдельно взятых особей, более точно контролировать селекционные процессы в стадах, корректировать их направленность.

Автор надеется, что изложенный материал собственных исследований будет способствовать более углубленному подходу к решению многих практических задач, дальнейшей разработке популяционно-биологической концепции селекционной работы и сможет стать фактором, который существенно изменит не только технологию, но и саму идеологию селекции в овцеводстве.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Селионова, Марина Ивановна, Ставрополь

1. Аббасова, В.А. Исследование групп крови каракульских овец / В.А.Аббасова, М.А.Риш, С.И Шадманов // Докл. ВАСХНИЛ. 1977. - С. 29 -30.

2. Абилова. Г.М. Генетические системы крови овец и их использование в селекции: Автореф. дисс. . докт. биол. наук / Г.М.Абилова / АН РК. — Алматы. 1997. - 44 с.

3. Айбазов, А-М.М. Теоретические основы, разработка и совершенствование биотехнологических методов воспроизводства овец / Автореф. дисс. . докт. с.-х. наук / А-М.М.Айбазов СНИИЖК. - 2003. - 49 с.

4. Аллелофонд овец опаринской породы / Н.С.Марзанов, Я.М.Бадалов, Л.К.Марзанова и др. // Докл. РАСХН. 2000. - № 2. - С.38 - 47.

5. Алтухов, Ю.П. Генетические процессы в популяциях. — М.; Наука. — 1983-279 с.

6. Алтухов, Ю.П. Балансирующий отбор, как фактор поддержания ал-лозимного полиморфизма / Ю.П.Алтухов // Успехи современной биологии. — 1989. Т. 107. - Вып.З. - С. 323 - 340.

7. Алтухов, Ю.П. Внутривидовое генетическое разнообразие: мониторинг и принципы сохранения // Генетики. 1995. - Т. 31. — № 1. — С 1331 — 1357.

8. Алтухов, Ю.П. Наследственное биохимическое разнообразие в процессах эволюции и индивидуального развития / Ю.П.Алтухов, Л.И.Корочкин, Л.И.Рычков // Генетика. 1996. - Т.32. - № 11. - С. 1450 -1473.

9. Алтухов, Ю.П. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике / Ю.П.Алтухов, Е.А.Салменкова // Генетика. 2002. - Т.38. - №9. С.1173 -1195.

10. Анфиногенова, Т.А., Особенности овец кавказской породы / Т.А.Анфиногенова, Н.С.Марзанов, С.А.Казановский // Иммуногенетика и селекция сельскохозяйственных животных. М., 1986. С. 122 -126.

11. Асланов, А.Ф. Иммуногенетическая экспертиза достоверности происхождения телят-трансплантатов / А.Ф.Асланов, А.П.Маркова // Иммуногенетика и селекция сельскохозяйственных животных. М., 1986. С. 6369.

12. Ата-Курбанов, Э.А. Эффективность различных методов определения происхождения каракульских ягнят / Э.А Ата-Курбанов // Каракулеводство. 1978. - Т. 27. - Вып. 9. - С. 12 - 19.

13. Ата-Курбанов, Э.А. Прогнозирование продуктивности по иммуно-генетическим показателям / Э.А Ата-Курбанов // Овцеводство. 1985. - С. 26-27.

14. Ата-Курбанов, Э.А. Иммунобиологические аспекты повышения продуктивности каракульских овец. Ташкент: Мехнат. — 1986. 172 с.

15. Ахмадиев, Г.М. Разработка способа отбора животных при трансплантации эмбрионов / Г.М. Ахмадиев, А.Г Амансугуров // Матер. Всесс. науч. конф. по с.-х. биотехнологии. Целиноград. 25 — 28 июня 1991. — Тез. выступлений. 1991. - С. 146 - 147.

16. Бажов, Г.М. Использование групп крови в качестве генетических маркеров продуктивных качеств свиней / Г.М.Бажов // Тр. / Куб. сю-хю института) 1984ю - № 248/276. - С. 15 - 25.

17. Баранов A.B. Использование и показателей при изучении сочетаемости пород // Селекционно-генетические, физиологические основы повышения продуктивности крупного рогатого скота и свиней. М. - 1994. — С. 96-99.

18. Безенко, С.П. Влияние групповых изоантигенов на сочетаемость пар / С.П.Безенко // Мат. II всесоюзн. симпозиума по иммунологии воспроизведения. М.: ВИЖ, 1980. - С. 103.

19. Бердонгарова, О.И. Пересадка зародышей овец / О.И.Бердонгарова, К.Джанабеков, Р.Б.Абильдинов // Биоморфология с.-х. и промысловых животных. 1985. - № 5. - С. 26 - 29.

20. Бобков, В.Н. Иммуногенетические реакции эмбриогенеза лошадей и перспектива их использования в воспроизводстве: Автореф. дисс. . канд. биол. наук / В.Н.Бобков ВНИИК. - 1990. - 19 с.

21. Бороздин, Э.К. Генетика и селекция романовских овец на высокую жизнеспособность / Э.К. Бороздин и др. М.: ВНИИ плем, 1992. - С. 89 - 96.

22. Быковченко, Ю.Г. Генетические маркеры и их использование в селекции алатауской породы скота: Автореф. дисс. . докт. биол. наук / Ю.Г.Быковченко / ВНИИРГЖ. Пушкин. -1991. - 40 с.

23. Вагонис, З.И. Изучение зависимости между группами крови и репродуктивными способностями у крупного рогатого скота / З.И.Вагонис, А.А.Виникас / Генетические основы селекции крупного рогатого скота. — Киев: Наукова думка. 198 - С. 91-95.

24. Введение в ДНК-технологии / В.И.Глазко, И.М.Дунин, Г.В.Глазко и др. М.: ФГНУ «Росинформагротех». - 2001. - 431 с.

25. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных / Н.А.Зиновьева, Е.А.Гладырь, Л.К.Эрнс, Г.Брем и др. — ВИЖ. Дубровицы. — 2002. - 112 с.

26. Векслер, И.Г. Сравнительное изучение влияния некоторых неспецифических стимуляторов на иммунный ответ организма / И.Г.Векслер // Бюл. эксп. биол. 1980. - № 7. - С.64 - 67.

27. Веревочкин, П.С. Иммуногенетика в селекции крупного рогатого скота / П.С.Веревочкин, H.H. Едренин Куйбышев: Кн. изд-во, 1988. - 104

28. Винничук, Д.Г. Маркер вспомогательная селекция (MAS) молочных коров / Д.Г.Винничук // Зоотехния. - 2002. - № 12. - С. 7 - 8.

29. Гафаров, Г.С. Изучение групп крови у овец, разводимых в Киргизии: Автореф. дисс. канд. с.-х. наук / Г.С.Гафаров / СибНИПТиЖ. — 1989. — 19 с.

30. Генетическая структура и изменчивость популяции овец каракалпакского сура / Н.С.Марзанов, Т.А.Пак, А.С.Ахметшиев и др. // Докл. РАСХН. 1996. - № 2. - С.24 - 23.

31. Генетические особенности многоплодной популяции овец / Н.С.Марзанов, В.С.Иолчиев, Л.К.Марзанова и др. // Овцы. Козы. Шерстяное дело. 2002. - № 1.-С. 14- 17.

32. Генофонд и геногеография народонаселения / Ю.Г.Рычков, О.В.Жукова, В.А.Шереметьева и др. / Под ред. Ю.Г.Рычкова. СПб.: Наука. -2000.-611 с.

33. Герасимова, Л.А. Использование генетических маркеров в системах экологического мониторинга зон вторичной интеграции при гибридизации пород разного экогенеза: Автореф. дисс. . канд. биол. наук /Л.А.Герасимова / КГУ Красноярск. -1995. - 22 с.

34. Гладырь, Е.А. Характеристика генофонда и установление генеалогических связей между породами овец России с использованием ДНК-микросателлитов / Е.А.Гладырь, Н.А.Зиновьева, Г.Брем // Докл. РАСХН, — 2004. -№ 1. С.26 -29.

35. Глазко, В.И. Биохимическая генетика овец / В.И.Глазко. Новосибирск: Наука. — 1985. - 167 с.

36. Глазко, В.И. Изменчивость биохимических маркеров исходных пород в процессе создания новых породных групп / В.И.Глазко // Докл. ВАСХ-НИЛ. — № 10.-1986.-С. 32-35.

37. Глазко, В.И. Генетические проблемы биотехнологии животных / В.И.Глазко// Вестн. с.-х. науки. 1991.-№ 10-С.81—88.

38. Глазко, В.И. Использование трансплантации эмбрионов для ускорения генетического прогресса / В.И.Глазко, Т.Т.Глазко, А.А.Созинов // Докл. ВАСХНИЛ. 1992. - С. 28-31.

39. Глазко, В.И. Сравнительный анализ генетической структуры некоторых пород овец в связи с особенностями их происхождения, разведения и характеристиками продуктивности / В.И.Глазко, .// Докл. РАСХН. — 1995. -№ 5. С.36 - 38.

40. Глазко, В.И. Плодовитость и генетико-биохимический полиморфизм у овец / В.И.Глазко, Дж.Овен // Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Мат. II Межд. конф., 5-8 сентября 1995 г. ВНИИФБиП, с/х животных, Боровск. - 1997. - С. 286.

41. Глазко, В.И. ДНК технологии в популяционно-генетических исследованиях с/х видов / В.И.Глазко, Г.В.Глазко // Третья Междунар. Конф. Актуальные проблемы биологии в животноводстве / Боровск. - 6 - 8 сент. 2000.-С.387-389.

42. Глик, Б. Молекулярная биотехнология / Б.Глик. М.: Мир, 2002.431 с.

43. Горелов, И.Г. Сравнительное изучение эффективности некоторых адъювантов при изоиммунизации свиней эритроцитарными антигенами /И.Г.Горелов // Мат. II конф. молодых ученых по генетике и разведению с.-х. животных. Л.: 1971. -Т. 2. - С.59 - 61.

44. Гречко, В.В. Молекулярные маркеры ДНК в изучении филогении и систматики / В.В.Гречко // Генетика. 2002. - Т.38. - № 8. С. 1013 - 1033.

45. Грудуле, Ю.Д. Иммуногенетическая проверка данных происхождения обязательный элемент племенной работы / Ю.Д.Грудуле / Использование генетических методов в селекции с.-х. животных. Рига. - 1973. — С. 60 -62.

46. Группоспецифические факторы крови овец и их использование в селекционной и племенной работе / Н.С.Марзанов, П.И.Люцканов // Изв. АН МССР. Серия биологические и химические науки. 1989. — № 5 — С. 43 - 45.

47. Данкверт, А.Г. История племенного животноводства России / А.Г.Данкверт, С.А.Данкверт. М.: Агроплемсоюз, 2002. - 332 с.

48. Дарвин, Ч. Изменение домашних животных и культурных растений / Ч.Дарвин. М. - Л.: АН СССР. - 1951.

49. Деева, B.C. Группы крови крупного рогатого скота и их селекционное значение / В.С.Деева, Н.О.Сухова. РАСХН. СО. Новосибирск. -2002.- 172 с.

50. Дегтярева, Т.Ф. Изучение возможности подбора маток и хряков по кровегрупповым факторам в целях повышения их продуктивности /Т.Ф.Дегтярева / Генетика и наследственность. М.: Мир. — 1987. - С. 30.

51. ДНК-технология оценки с/х животных / Л.А.Калашникова, И.М.Дунин, В.И.Глазко и др. ВНИИплем. - 1999. - 148 с.

52. Дубинин, Н.П. Сопряженный дрейф генов / Н.П.Дубинин, A.M. Машуров // Докл. АН СССР. 1983. - Т. 273. - № 6. - С. 1487 - 1490.

53. Дубровская, P.M. Иммуногенетика в коневодстве России / Р.М.Дубровская / Наука о коневодстве России (1930 2000 гг.). — Дивово. — 2001.-С. 39-45.

54. Дунин, И.М. Порода и породообразование / И.М.Дунин, С.К.Охапкин. М.: ВНИИплем. 1999.

55. Дунин, И.М. Генетическая экспертиза племенной продукции в Российской Федерации / И.М.Дунин, А.А.Новиков, Н.И.Романенко // Аграрная Россия. 2002. - № 5. - С. 52 - 57.

56. Егоров, Е.А. Генетические системы белков крови / Е.А.Егоров -Ташкент: Фан. 1973. - 226 с.

57. Егоров, М.В. Метод иммуногенетического анализа в селекции овец / М.В.Егоров, Л.Н.Чижова // Животноводство России. 2003. - № 1. - С.44 -45.

58. Жебровский, Л.С. Генофонд сельскохозяйственных животных / Л.С.Жебровский, А.В.Бабуков, К.М.Иванов. Л.: Колос, 1983. - 352 с.

59. Иммуногенетические особенности овец кавказской породы и использование их в практике селекционной работы / С.А.Казановский, Т.А.Анфиногенова, Н.С.Марзанов и др. // Ставр. краев, научно-практ. конф. по овцеводству. Ставрополь. - 1979. - С.211-213.

60. Инструкция по искусственному осеменению овец и коз. М.: Аг-ропромиздат. — 1986. - 28 с.

61. Иовенко, В.Н. Влияние уровня ошибок происхождения на эффективность селекции овец / В.Н.Иовенко // Науч. техн. бюл. Укр. НИИЖ. -1984. -№ 2-С. 53-55.

62. Иовенко, В.Н. Особенности и возможности использования в селекции полиморфизма некоторых белков и ферментов крови овец асканийской тонкорунной и цигайской пород: Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук / В.Н.Иовенко. Краснодар. - 1987. - 25 с.

63. Иовенко, В.Н. Использование иммуногенетических показателей в селекции овец / В.Н.Иовенко // Мат. Всесоюзн. конф. , Ставрополь, 16-18 мая 1991.-С. 209-210.

64. Иоганссон, И. Генетика и разведение домашних животных / И. Ио-ганссон, Я. Гендель, О. Граверт — М.: Колос, 1970. — С. 141 158.

65. Использование метода фингерпринтинга ДНК для изучения генетической дивергенции в популяциях с/х животных / Н.В.Дементьева, Н.П.Терлецкий, В.И.Тыщенко и др. II Вестн. РАСХН. 2003. - № 1-2. - С.79 -81.

66. Исследование полиморфизма Р-лакто глобулина у овец / Н.А.Зиновьева, В.В.Бочкарев, А.Н.Попов и др. // Вестн. РАСХН. 1999. - № 4.-С.69-71.

67. Казановский, С.А. Системы групп крови у овец кавказской породы / С.А.Казановский, Т.А.Анфиногенова, Н.С.Марзанов // Цитология и генетика. 1985. - Т - 11 - С. 446- 452.

68. Казановский, С.А. Группы крови и их использование в селекции и разведении овец / С.А.Казановский, Т.А.Анфиногенова, Н.С.Марзанов / Интенсивные методы в селекции овец. Саратов. - 1987. - С. 129 - 133.

69. Казановский, С.А. Группы крови и их использование в селекции овец / С.А.Казановский // Мат. Всесоюзн. конф., Ставрополь, 16-18 мая 1991. -С. 212-210.

70. Калашникова, Л.А. ДНК — маркеры и возможность их использования в селекции с/х животных / Л.А.Калашникова, Н.В.Рыжова, Е.П.Голубина

71. Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатизации в племенном животноводстве // Юб. сб. трудов. ВНИИПлем. - М., 1997. - С. 248 -257.

72. Калашникова, Л. А. Современное состояние и проблемы использования метода анализа ДНК в генетической экспертизе племенных животных / Л.А.Калашникова // Аграрная Россия. 2002. - № 5. - С. 7 - 11.

73. Калашников, В.Б. Продуктивные и биохимические показатели у овец ставропольской породы с различными антигенными характеристиками крови: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. / В.Б.Калашников Ставрополь. — СХИ.- 1992.-23 с.

74. Калпокас, В.К. Технология трансплантации эмбрионов у овец и некоторые продуктивные и биологические особенности полученного потомства: Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук / В.К.Калпокас. Новосибирск, 1994. — 19 с.

75. Касымов, К. Трансплантация эмбрионов у овец / К. Касымов, Г. Алимжанов, Н. Науанов и др. // Зоотехния. 1994. - № 8. - С. 29-30.

76. Кленовицкий, П. Поможет ли нам генетика / П.Кленовицкий //

77. Кочнев, H.H. Проблема генетической безопасности популяции с.-х. животных / Н.Н.Кочнев // С.-х. биология. Сер. биол. животн. — 2003. — № 3.

78. Кошель, П.П. Связь откормочных качеств свиней с группами крови / П.П.Кошель / Влияние методов селекции и использования биологически активных веществ на производство продукции животноводства. М.: Госаг-ропром, 1985. - С.48 — 51.

79. Кульберг, А.Я. Молекулярная иммунология / А.Я.Кульберг. М.: Высшая шк., 1985. - 287 с.

80. Лазовик, Н.В. Иммунологическое обоснование сочетаемости родительских пар в свиноводстве // Биотехнология и воспроизводство в животноводстве: Тез. докл. научно практич. конф. Горки, 27-28 июня, 1991. — Горки.-1991.-С. 40-42.

81. Лазовский, А.А. Генетический полиморфизм в селекционном процессе овец: Автореф. дис. д-ра с.-х. наук. / А.А.Лазовский Жодино, 1987. -35 с.

82. Максимов, Ю.Л., Индивидуальный подбор родительских пар / Ю.Л.Максимов, И.В. Казаровец // Овцеводство. 1991. - №1 - С. 22 - 23.

83. Максимов, Ю.Л. Роль половой избирательности в эволюции живой природы и ее значение в практическом скотоводстве / Интенсивные технологии производства молока и говядины / Ю.Л.Максимов // Тр. / Белорусской с.-х. акад. Горки. - 1992. - С. 5 - 9.

84. Малаховский, А.Я. Методика индивидуального подбора в молочном скотоводстве в связи с и особенностями крови крупного рогатого скота / А.Я.Малаховский //Тр. / СибНИИЖ. 1960.- Вып. 14. - С. 31 - 36.

85. Малаховский, А.Я. Тулева А.Я. Отбор и подбор и методы разведения с.-х. животных / А.Я. Малаховский, А.Я.Тулеева — Омск. 1993. — 76 с.

86. Манукян, М.А. О зависимости веса новорожденного приплода от степени иммуногенетического сходства / М.А.Манукян //Тр. / Арм. НИИ животноводства и ветеринарии. 1976. - Т. IV - С. 36 - 40.

87. Марзанов, Н.С. Группы крови овец кавказской породы и методы изоиммунизации для получения моноспецифических сывороток: Автореф. дис. . кан. биол. наук. / Н.С.Марзанов. Ставрополь, 1982. - 22 с.

88. Марзанов, Н.С. Характеристика генетических связей между различными породами и помесями овец / Н.С. Марзанов // Цитология и генетика. 1990 - Т.24. - № 5. - С. 42 - 44.

89. Марзанов, Н.С. Иммунология и иммуногенетика овец и коз / Н.С.Марзанов Кишинев: Штиинца. - 1991. - 236 с.

90. Марзанов, Н.С. Группы крови в селекционной работе с овцами / Н.С.Марзанов, П.И.Люцканов // Зоотехния. 1991. -№1. - С. 21 - 24.

91. Марзанов, Н.С. 27 ая Международная конференция по генетике животных / Н.С.Марзанов, Е.П.Макарова // С/х. биология. - 2001. - № 4. -С.120- 123.

92. Маринчук, Г.Е. Сопряженность молочной продуктивности крупного рогатого скота с комплексом локусов сцепленного блока казеинов и Р-лактоглобулина / Г.Е.Маринчук // Цитология и генетика. 1992 - Т.26. - № 5.-С. 48-53.

93. Марусяк, В.Г. Изучение некоторых факторов, определяющих эффективность изоиммунизации у свиней при получении антиэритроцитарных сывороток: Автореф. дис. кан. биол. наук. / Н.С.Марзанов. Тарту, 1974. -20 с.

94. Матоушек, Й. Иммуногенетические системы в воспроизведении сельскохозяйственных животных (млекопитающих) / И.Мотоушек // Мат. XVI Между нар. конф. по группам крови и биохим. полиморфизму жив. -Т.1.-М-Л., 1979.-С. 3.

95. Машуров, A.M. Учитывать генетические дистанции между породами при селекции / А.М Машуров, В.И.Черкащенко // Животноводство. -1987.-№2.-С. 21-23.

96. Машуров, A.M. Микрофилогенез некоторых линий уральского скота / А.М.Машуров, Ф.А.Сигитдинов, В.С.Деева // Сиб. Вестник с.-х. науки. 1992.-№ 2-С. 17-21.

97. Машуров, А.М.Фонд антигенов пород крупного рогатого скота и родственных ему видов: Справочн. каталог и методика учета маркерных генов / А.М.Машуров, Н.О.Сухова / РАСХН. СО СибНИЭСХ. ИЭ и ЭЖ. Новосибирск, 1994. -125 с.

98. Машуров, A.M. Иммуногенетическая паспортизация и экспертиза происхождения крупного рогатого скота /А.М.Машуров, Н.О.Сухова. -РАСХН. СО. СибНИИЭСХ. Новосибирск, 1997. - 100с.

99. Мельникова, М.Н. Исследование полиморфизма и дивергенции геномной ДНК на видовом и популяционном уровнях (на примере ДНК пород домашних овец и диких баранов) / М.Н.Мельникова // Генетика. 1995. -Т.31.-№ 8.-С. 1120-1131.

100. Меркурьева, Е.К. / Генетика / Е.К.Меркурьева и др. М.: Агро-промиздат. - 1991. - 446 с.

101. Методика определения экономической эффективности исследований в сельском хозяйстве результатов научных исследований и опытно-конструкторских работ. М.: Колос. - 1980. - С. 108 - 109.

102. Методические указания по контролю происхождения ягнят с использованием групп крови и полиморфных белков / С.А.Казановский, Т.А. Анфиногенова, В.И Остапенко, и др. Ставрополь. - 1982. - 34 с.

103. Методические рекомендации по изготовлению и контролю специфичности реагентов для определения групп крови у овец / С.А.Казановский, Т.А.Анфиногенова, В.И.Остапенко и др. Ставрополь. -1984.- 19 с.

104. Методические указания по использованию мини-ЭВМ для обработки иммуногенетических данных в овцеводстве / С.А. Казановский, С.Ф.Ступак, JI.B. Ольховская Ставрополь. - 1989. - 29 с.

105. Методические указания по использованию антигенных эритроци-тарных факторов и полиморфных систем белков и ферментов крови в селекции овец / С.А.Казановский, Т.А.Анфиногенова, Л.В.Ольховская — Ставрополь. 1994. - 54 с.

106. Мещеряков, В.Я. Исследование генетического полиморфизма эритроцитарных антигенов и сывороточных белков у пород крупного рогатого скота Украины: Автореф. дис. докт. с.-х. наук. / В.Я.Мещеряков -Харьков. 1975.-41 с.

107. Мороз, В.А. Направления и методы совершенствования ставропольской тонкорунной породы овец: Автореф. дис. . докт. с.-х. наук / В.А.Мороз / Куб. СХИ Краснодар - 1987. - 32 с.

108. Мороз, В.А. Мериносы Австралии / В.А.Мороз. М.: Колос. -1992.-368 с.

109. Ней, М. Генетические расстояния и молекулярная таксономия / М.Ней // Вопросы общей генетики М.: Наука. - 1981. - С. 7 - 18.

110. Нехорина, Е.Е. Возможность использования полиморфных белков, ферментов и антигенов крови в селекции лошадей русской верховой породы: Автореф. дис. . канд. с.-х. наук / Е.Е. Нехорина/ ВНИИК — Дивово. — 2001.- 19 с.

111. Новиков, A.A. Иммуногенетические маркеры и их использование в селекции / А.А.Новиков, Н.И.Романенко, М.С.Семак // Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатики в племенном животноводстве. ВНИИплем. - 1997. - С.265 - 278.

112. Новиков, A.A. Генетическая экспертиза племенного материала/ А.А.Новиков, Н.И.Романенко // Зоотехния. № 7. — 2001. — С. 14 - 18.

113. Овцеводство и козоводство / Справочник / У.Х.Арипов, В.М.Виноградов, П.А.Воробьев и др. М.: Агропромиздат, 1990. - 335 с.

114. Орлов, К.А., Применение иммуногенетических методов в свиноводстве / К.А.Орлов, А.К.Никитин, С.И.Бобрицкий // Свиноводство. 1974. - № 10.

115. Основы сельскохозяйственной биотехнологии М.: Агропромиздат, 1990. -384с.

116. Петров, Р.В. Иммунология и иммуногенетика / Р.В.Петров М.: Медицина. - 1976. - 336 с.

117. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В.Петров М.: Медгиз, 1982. - 368с.

118. Петров, Р.В. Генетика иммунного ответа каракульских овец при иммунизации колибактериозной и сальмонелезной вакцинами / Р.В.Петров, Р.М.Хаитов /Индивидуальные различия в иммунном ответе // ЖМЭИ. -1982.-№ 10.-С. 81-84.

119. Петров, Р.В. Иммуногенетики и искусственные антигены / Р.В.Петров, Р.М.Хаитов, Р.И.Атауллаханов. М.:Медгиз, 1983. - С. 125 -126.

120. Потапова, Д.А. Влияние иммуногенетических факторов на плодовитость кобыл / Д.А.Потапова / Интенсификация селекции и технологии выращивания лошадей. М., 1988 - С.76 - 80.

121. Попов, H.A. Аллелфонд пород крупного рогатого скота по ЕАВ-локусу. Справочный каталог / Н.А.Попов, Г.В.Ескин. М.: 2002. - С. 4- 5.

122. Попов, H.A. Использование аллелофонда групп крови при разведении племенного скота / Н.А.Попов // Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении генома сельскохозяйственных животных: Мат. Межд. симпозиума. 1994. - С.115 - 116.

123. Приживляемость трансплантатов крупного рогатого скота с учетом иммунобиологического статуса производителей доноров производителей / Н.О. Сухова, В.Д.Пьянов, В.С.Деева и др. // Докл. РАСХН. 1992. -№.11- 12.-С.27-30.

124. Прокофьев, М.И. Перспективы применения метода трансплантации эмбрионов в практике разведения животных и в научных исследованиях / Регуляция размножения с.-х. животных/ М.И.Прокофьев. Л.: Наука. -1983.-С. 226-230.

125. Прохоренко, Н.П. Перспективы использования иммуногенетики в сохранении генофонда и совершенствовании пород с/х животных / Н.П.Прохоренко, Г.Н.Сердюк // С/х биология. 2002. - № 6. - С.З.

126. Рассоха, В.И. Развитие исследований по иммуногенетике в животноводстве / В.И.Россоха, Н.В Мисостова // Научно-технический бюллетень / НИИ животноводства Лесостепи и Полесья УССР 1989. - № 52. — С. 88-91.

127. Романов Ю.Д. Сравнительная антигенность эритроцитарных факторов при иммунизации свиней / Ю.Д.Романов // Мат. III конф. мол. ученых по генетике и разведению с.-х. животных. Л., 1983. - С. 134 — 136.

128. Романова, Е.М. Биотехнологические аспекты подбора родительских пар в животноводстве // Биотехнология и воспроизводство в животноводстве / Тез. докладов науч.- практ. конф., Горки. 27-28 июня, 1991 год -Горки.-1991.-С.42-43.

129. Рогушкова, Н.И. Иммунобиологическая характеристика овец алтайской тонкорунной породы и определение сочетаемости родительских пар / Н.И.Рогушкова, А.Ф.Васенова / Пути увеличения продуктов животноводства в Западной Сибири. Новосибирск., 1975. - С.38-40.

130. Рысков, А.П. Полиморфизм ДНК и геномная дактилоскопия // Биотехнология. 1992. -Т.З. -С.З - 12.

131. Селекционно генетические основы повышения продуктивности овец - Д.: Агропромиздат. - 446 с.

132. Семенов, В.А. Оплодотоворяемость коров костромской породы в связи с антигенными различиями по группам крови / В.А.Семенов, Г.Ф.Пушкин, П.Ф.Сороковой // Тез. докл. Байсогола. - 1976. — С. 20 — 22.

133. Сердюк, Г.Н. Биологические основы совершенствования селекционно-генетических методов в животноводстве / Г.Н.Сердюк Д.: ВНИ-ИРГЖ.- 1980.-20 с.

134. Серебренников, В.Н. Различная сочетаемость родительских пар и значение индивидуального подбора в борьбе с перекрытиями и яловостью коров / В.Н.Серебренников // Тр. / Омского с. х. института Т. XXXIII. -Вып.1. — 1957. — С. 87-101.

135. Серебровский, A.C. Генография и генетика с/х животных / A.C. Серебровский // научное слово. 1928. № 8. - С. 7 - 42.

136. Серебровский, A.C. Генетический анализ / A.C. Серебровский -М.: Наука.-1970.-342 с.

137. Соколовская И.И. Преципитиновая реакция и гибридизация / Изв. АН СССР, Сер. биология.- Вьп.6. 1950. - С. 10.

138. Соколовская, И.И. Иммунология воспроизведения животных / И.И.Соколовска, В.К.Милованов. М.: Колос, 1981. - 264 с.

139. Сороковой, П.Ф. Исследование корреляций групп крови с оплодотворением у крупного рог. скота / П.Ф.Сороковой, A.M. Машуров / Второй Межд. симпозиум по иммунолог, размножения. 13-16 сентября 1971. Варна. Болгария. — С. 181 - 182.

140. Сравнение двух методов изучения полиморфизма ß-лактоглобулина овец / В.В.Бочкарев, Б.С.Иолчиев, Н.А.Зиновьева и др. // Докл. РАСХН. 1998. - № 3. - С.27 - 29.

141. Сравнительный анализ генных порядков домашней овцы (Ovis aries L.) и крупного рогатого скота (Bos Taurus L.) / А.К.М.Бисвас, П.Н.Кленовицкий, Ю.С.Марзанов и др. ВНИИЖ. - Дубровицы. - 2003. -48 с.

142. Сулимова, Г.Е. ДНК маркеры в оценке молочной продуктивности и резистентности крупного рогатого скота / Г.Е.Сулимова // Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Мат. III Междунар. конф. / Боровск. 6-8 сент. 2000. - С.430 - 431.

143. Сухих, Г.Т. Иммунитет и генитальный герпес / Г.Т.Сухих, Л.В.Ванько, В.И.Кулаков. Н.Новгород: Изд.-во НГМА, 1997. - 224 с.

144. Сухова, Н.О. Значение исследования групп крови у животных / Н.О.Сухова // Земля Сибирская Дальневосточная 1971. - № 5. - С 34 -35.

145. Сухова, Н.О. Взаимосвязь продуктивности свиней крупной белой породы с генотипическими особенностями по группам крови / Н.О.Сухова // Селекция в животноводстве Сибири. Новосибирск: СибНИИПТИЖ, 1985. -С. 107-114.

146. Сухова, Н.О. Использование иммуногенетического анализа в племенном свиноводстве / Н.О.Сухова, Г.Л.Дмитриева, Н.М. Набродова /Методические рекомендации. / ВАСХНИЛ СО. Новосибирск - НПО -1987.-58 с.

147. Сухова, Н.О. Получение изоиммунных сывороток к эритроцитам крови овец / Н.О.Сухова, Н.С.Марзанов, Р.С.Гафаров и др. // Докл. РАСХН.- 1988. — № 1.-С. 32-35.

148. Сысоев, A.A. Физиология размножения с/х животных / А.А.Сысоев. М.: Колос, 1978. - 359 с.

149. Тарасюк, С.И. Генетическая структура закарпатских тонкорунных овец / С.И.Тарасюк, В.И.Глазко, А.А.Макар // Зоотехния. 2001. - № 3. -С.10- 11.

150. Татевосян, С.С. Результаты внедрения иммунобиологического метода подбора в овцеводстве / С.С.Татевосян, С.С. Алексанян // Вопросы интенсификации животноводства в Арм. ССР Абовян. - 1986. - С. 44 — 50.

151. Терлецкий, В.П. Генетическая изменчивость в малых популяциях овец / В.П.Терлецкий, Л.В.Козинова // Зоотехния. 1998. - № 9. - С. 31 - 33.

152. Терлецкий, В.П. Оценка племенных животных по полиморфизму генов и ДНК / В.П.Терлецкий, Н.В.Дементьева, Е.С.Усенбеков // Зоотехния.- 2001. — № 1.-С. 14-17.

153. Тихонов, В.Н. Использование групп крови при селекции животных / В.Н.Тихонов М.: Колос, 1967. - 392 с.

154. Тихонов, В.Н. Некоторые вопросы иммуногенетической несовместимости при размножении животных / В.Н.Тихонов / Второй международный симпозиум иммунологии размножения. 13-16 сентября, 1971, Варна Болгария. -1971.-С.190.

155. Тихонов, В.Н. О генетических механизмах связи групп крови и биохимических маркеров с производительностью и резистентностью // В.Н.Тихонов / Иммуногенетика и селекция сельскохозяйственных животных. М., 1986. — С.25 32.

156. Тихонов В.Н. О генетических механизмах связи групп крови и биохимических маркеров с продуктивностью и резистентностью // В.Н.Тихонов // С.-х. биология. 1987. - № 7. - С. 57 - 65.

157. Тихонов, В.Н. Иммуногенетический и биохимический полиморфизм домашних и диких свиней / В.Н.Тихонов Новосибирск: Наука, 1991. - 304 с.

158. Тихонов, В.Н. Мониторинг микроэволюции и породообразования свиней на основе молекулярно-иммуногенетического анализа / В.Н.Тихонов, В.Е.Бобович // С.-х. биология. 2004. - № 3. - С. 10 - 28.

159. Тойшибеков, М.М. Трансплантация эмбрионов в овцеводстве: Ав-тореф. . дис. докт. с-х. наук / М.М.Тойшибеков. — Алма-Ата. —1986. — 32 с.

160. Толпеко, Г.А. Формирование иммуногенетической структуры популяций свиней в связи с методами разведения и отбором по продуктивности: Автореф. дисс. . докт. биол. наук./ Г.А.Толпеко. Краснодар, Куб. СХИ- 1985.-25 с.

161. Тутов, И.К. Характеристика антител, их природа, механизм и место образования (обзор) / И.К.Тутов // Вестник ветеринарии. №1. — 2000 (15).-С. 56-64.

162. Тюленев, B.C. Влияние различной сочетаемости родительских пар на развитие телят / В.С.Тюленев // Общая биология. № 6. — T.XXXIII. — 1962.-С. 474-478.

163. Тюленев, B.C. Подбор родительских пар по иммунологическим и биохимическим показателям крови в овцеводстве / В.С.Тюленев, Д.Н.Новикова // Биохимия и физиология с.-х. животных. Омск. — 1981. — С.

164. Удина, И.Г. Оценка генетического разнообразия отечественных пород лошадей с помощью молекулярно-генетических методов // И.Г.Удина, М.В.Костюченко // Докл. РАСХН. 2004. - № 2. - С. 32 - 35.

165. Уханов, C.B. Оплодотворяемость коров и антигенные различия групп крови / С.В.Уханов // Животноводство. 1979. - № 1. - С.17.

166. Участие маркеров структурных генов и анонимных последовательностей в генетической дифференциации видов ряда OVIS / В.И.Глазко, Т.Н.Дымань, Т.П.Сипко и др. //Докл. РАСХН. 2001. -№ 2. - С.12 - 15.

167. Участие маркеров ISSR-PCR в межвидовой дифференциации некоторых представителей видов UNGULATA / В.И.Глазко, Т.Н.Дымань, Д.А.Кутузов и др. // Докл. РАСХН. 2002. - № 5 . - С.36 - 40.

168. Хавкин, Э.Е. Молекулярная селекция растений: ДНК-технологии создания новых сортов сельскохозяйственных культур / Э.Е.Хавкин // С/х биол. 2003. - № 3. - С.26 -41.

169. Храброва, Л.А. Использование генетических маркеров в селекции пород лошадей / Стратегия развития животноводства России в XX веке. -4.1.-М.,2001.-С. 412-421.

170. Чамуха, М.Д. Взаимосвязь иммунобиологических показателей крови родителей и продуктивность потомства у овец / М.Д.Чамуха // Овцеводство. 1967. - Мб. - С. 127 - 132.

171. Чамуха, М.Д. Применение иммунобиологических показателей для корректирования племенного подбора в овцеводстве / М.Д.Чамуха, Г.С.Цой / Биохимические основы селекции овец. М.: Колос. - 1977. - С. 93 - 95.

172. Чамуха, M.Д. Прогнозирование племенной достоверности животных-производителей по иммунобиологическим тестам / М.Д.Чамуха, Г.М.Гончаренко // Вест. РАСХН. 2003. - № 1-2. - С. 75 - 76.

173. Чухрий, E.H. Иммуногенетическая сочетаемость пар и воспроизводительная функция черно-пестрого и бурого карпатского скота / Е.Н.Чухрий, Н.С.Бердичевский, А.И.Чайковская // С. х. биология. — 1988. -№ 5. С.83-85.

174. Шевченко, В.Г. Генетические маркеры в селекции крупного рогатого скота / В.Г.Шевченко, Т.Ю.Шмидт / Третья Междунар. конф. «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» / Боровск. 6-8 сент. 2000. — С.442 - 443.

175. Эрнст, JI.K. Перспектива развития с.-х. биотехнологии / Л.К.Эрнст // Вестн. с.-х. науки. 1989. - № 2. - С.36—41.

176. Эрнст, Л.К. Современные тенденции в развитии биологических исследований в животноводстве / Л.К.Эрнст // С. -х. биология. 1989. - №2. -С.3-9.

177. Эрнст, Л.К. Современные проблемы генной инженерии и перспективы селекции сельскохозяйственных животных / Л.К.Эрнст // С. х. биология. - 1994. - № 4. - С.4 - 12.

178. Эрнст, Л.К. Трансплантация эмбрионов с.-х. животных / Л.К.Эрнст, Н.И.Сергеев М.: Агропроиздат. - 1999. - 302 с.

179. Эрнст, Л.К. Принципы применения популяционной и молекулярной генетики в селекции сельскохозяйственных животных / Л.К.Эрнст // С. -х. биология. 1990. - №2. - С.З - 10.

180. Эфроимсон, В.П. Иммуногенетика / В.П.Эфроимсон М: Медицина. - 1971. - 331 с.

181. АН, S. Characterization of the gene encoding /Mactoclobulin // S.Ali, A.J.Clarc // J. Molec. Biol., 1998. - T. 199. - P. 415 - 416/

182. Ananthakriahnan, R. A. Study of gene difference between sone bride of sheep/ Ananthakriahnan, R. A // Anim. Groups Biochen. Genet. — 1973. — Vol. 4-P. 141-146.

183. Andersen, T. Untersuchungen uber blutgruppen eigenshaften der Schafe / T. Andersen // Z. Rassenphysiol. 1938. -Bd 10. - S.88 - 103.

184. A polimorphic satellite sequence maps to the pericutric region of the bovine Y chromosome / J. Perret, Y-C. Scia, R. Fries e.a. // Genomics. 1990. -V.6. -P.482-490.

185. Biolosuknia, W. On the differentiation of various breede of sheep by means of serological methods / W.Biolosuknia, B.Kaczkowki // J. Immunol. -1924.-Vol. 9.-P. 595-601.

186. Buis, P. S. Relationship between rare breeds of sheep in the Netherlands as based on blood trying / P. S Buis, E. M. Tucker // Anim. Blood Groups and Biochem. Genet. - 1983. - Vol. 14. - N1. - P. 18 - 26.

187. Casati M.Z. Genetic relationship between four sheep of the Italian alpine bow / M.Z. Casati, T. Gliozzi // XX th Inter national Conf. Animal Blood Groups and Biochemical Polymorphisms Helsinki, Finland. - 1986. - P. 194.

188. Comparison of FSH and PMSG treatment schedules to induce super ovulation ion ewes /1. K. Crisren. R. F. Rowe, M. R. Del Campo, О. I. Ginther // Theriogenology, 1980. N 13. - P.397.

189. Cubric-Curik, V.Genetic polymorphisms of /?-Lg in native sheep from the Island of paq / V.Cubric-Curik, M.Feligni, I.Luhac-Havranek e.a. / Food Te-chol. and Biotechnol. 2002. - V.40. - N 1. - P. 77 - 78.

190. Diez-Tascon, C. Genetic variation within the Merino sheep breed: analysis of closely related populations using microsatellites Animal Genetics. V. 31.-N4.-P. 243.

191. Dungern, E. Uber gruppen speziffishe structuren des bluten // Zschr. Fur Immoniated St. 1910. - N6. - S.284 -292.

192. Dungern, E. The immunological prologue of the fetus: Decreased expression of paternal HLA / E.Dungern, B. D. Tait, S. Swhttingham, P. W. Ashton // Immunogenetics. 1977. - N 5. - P. 45 - 350.

193. EAAP/FAO Survey of livestock populations' global animal genetic data bank EAAP. Hanover: EAAP/FAO, 1991. - P. 7.

194. Elsden, R.D. Embryo transfers in farm animals / R.D.Elsden, K.J.Betteridge //Monograph. 1977.-213 p.

195. Ehrlich, P. Uber hemolysine. 3. Mirreilung / P.Ehrlich, T.Morgenroth // Berl, Klin, Wochenschr. 1900. - Bd 37. - S. 453 - 458.

196. Ellory, I. C. Active porassium transport and the L and M antigens sheep and goat red cells / Ellory I. C., Tucker E. M. // Biochem, Biophys, Asta. -1970.-Vol. 219.-P. 160- 168.

197. Ejuta, H. Phenotype and gene frequency of red blood cell groups in dogs of various breeds reared in Japan. Japanese / H.Ejuta, K. L. Kurokawa, S.Ikemoto // Journal of Veterinary science. 1986 - V.48, P. 363 - -8.

198. Evans, G. Artificial Insemination of sheep and Goat. / G.Evans, W. M. C. Maxwell, S. Salamon Sidney. - 1987. - 194 p.

199. Georges, M. Velogenetics, or the synergistic use of marker assisted selection and germ-line manipulation / M.Georges, J.M.Massey // Theriogenology, 1991.-N35.-P.151 159.

200. Georges, M. Micro satellite mapping of a gene affecting horn development in Bos Taurus // Nature Genetics. 1993. - V. 4. - P.206 - 210.

201. Georges, M. Mapping quantitative trait loci controlling milk production in dairy - cattle by exploiting progeny testing / M.Georges, M. Nielsen, M. McKinnon e.a. // Genetics. - 1995. - V.139. -P. 907 - 920.

202. Jeffrey's, A.J. Individual-specific "fingerprints" of human DNA / A.J.

203. Jeffrey's, V.Wilson, S.L.Thein // Nature. 1985. - V. 316. - P. 76 - 79.

204. In evolvement of blood group lose S and A in transplantation reactions in cattle / Grzybowski G., Dunies M., Koscielny M. e.a.// Anim. Sci. Rap and Repts. — 1992. — N10. — P. 510.

205. Lanneluc, I. Genetic analysis of fingerprints in Merinos d' Aries x Booroola Merino cross bred sheep / I.Lanneluc // Animal Genetics. 1992. - V. 23.-P. 339-346.

206. Lanneluc, I. Genetic markers for the booroola fecundity (Fee) gene in sheep / I. Lanneluc, R.D. Drinkwater, J.M. Elsen e.a.// Mammalian Genome. -1994.-N5.-P. 26-33.

207. Lenstra, J.A. Short interspersed nuclear element (SINE) sequences of Bovidae // J.A. Lenstra, J.A.Van Boxtel, K.A.Zwaagstra, M.Schwerin / Animal genetics. 1993. - V. 24. - P. 33 - 39.

208. Healy, P. J. Distribution of R, r in blood group system in Australian sheep // Anim. Blood Groups and Biochem. Polymorphism. / P. J. Healy // Animal

209. Genetics. 1972. - Vol.3. - P. 241 - 244.

210. Hojny, J. Report on the pig and sheep blood groups and polymorphic protein workshops. Libechov / J.Hojny, A. Stratil // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. 1978. Vol. 9. - N4. P. 245 - 251.

211. Landsteiner, K. Zur kenntnis der antefermenratiwen / K.Landsteiner // Zbl. Bakteriol. 1900. - Bd.28. - S.357 - 362.

212. Manwell, C. Genetic distance between the Australian Merino and poll Dorset sheep / C. Manwell, C.M.A. Baker // Genet. Res. Camb. 1977. - V. 20. -N3.-P. 239-253.

213. Montgomery, G.W. The ovine Booroola fecundity (Fee) in linked marcers fcoma region of human chromosome 4 q / G.W.Montgomery, A.M. Crow-bord, I. M. Penty e.a. // Nature Genetics. 1993. - V. 4. - P. 410 - 414.

214. Maijala, K. Frequencies of blood group genes and factors in the Finnish cattle with special regard to breed comparisons / K.Maijala, G.Lindstrom //Ann. Agr. Fennuae. 1996. Vol. 56 - N2. - P. 76 - 93.

215. Maxwell, W. M. Artificial breeding embryo transfer and cloning / Maxwell W. M. C., Shell Q., Hunton J. R., Ryan J. R. / Reproductive Physiology of Merino sheep. Concepts and Consequences. / Perth, Australia. 1990. - P. 217 -239.

216. Mauer, P. H. Antigen city of polypeptides (poly-a-amino acids). V. Studies in rabbits / P. H.Mauer, B. F.Gerulat, P.Pinchuck // Immun., 1963. Vol.m 90.-P. 381-387.

217. Millot, P. Les groupies sanguine des moutons / P. Millot, T. C. Nquyen // Rev. path. Gen. et physiology. Chim. 1956. - Vol. 56. - P. 41 - 65.

218. Mullis, K.B. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase catalyzed chain reaction / K.B.Mullis, F.Faloona // Meth. Enzymol. 1987. - V. 155. -P. 335 -350.

219. Monriaux, D. Superovulation of sheep / D.Monriaux, D.Chupin, I • Saumande. // Theriogenology. 1983. - N19. - P.55.

220. Nei, M. Genetic distance between populations / M. Nei // Amer. Natur. 1972.-Vol. 106. N 949. - P.283-291.

221. Nquyen, T. C. Additional blood-groups systems in sheep / T. C. Nquyen // XVIth international conference on animal blood groups and biochemical polymorphism. USSR. Leningrad 1979. - Vol. 4. - P. 15 - 20.

222. Nquyen, T. C. Evaluation of linkage between the R-O-I and C blood groups systems in sheep / T. C. Nquyen // Amin. Blood Groops Biochem. Genet. 1985.-Vol. 16.-P. 13-17.

223. Nquyen, T. C. Nquyen T. C., Osterhoff D. R. Comparison between

224. Russian and South African karakul sheep based on blood group markers/ T. C.Nquyen, D. R. Osterhoff// J. S. Afr. Vet. Assoc. 1992. - Vol. 63. - N1. - P.20 -22.

225. Prinzenbery, P. Molecular genetic characterization of ovine p-lacto globulin C alleles and detection by PCR -PFLP / P. Prinzenbery, G.E.Erhard // Animal Genetics. 1993. -N 28. - P. 216 - 222.

226. Rasmusen, B. A. Effect of crossbreeding and inbreeding on the frequencies of blood groups in three breeds of sheep / B. A. Rasmusen, J.G.Hall //m Anim. Prod. 1974. - Vol. 18. - P. 141 - 152.

227. Rasmusen, B. A. Blood groups in sheep. I. The X-Z-system / B. A.Rasmusen // Genetics. 1958. - Vol. 43. - P. 814 - 821.

228. Rasmusen, B. A. Blood groups in sheep. / B. A.Rasmusen // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1962 - Vol. 97. - P. 306 - 319.

229. Rasmusen, B. A. An investigation into the association between potassium levels and blood types in sheep and goats / B. A.Rasmusen, I. G. Hall // Xth European Conference on Animal Blood Groups and Biochemical Polymorphism. -Paris. 1966.-P. 453-457.

230. Rasmusen, B. A. Effect of crossbreeding and inbreeding on the frequencies of blood groups in three breed brides of sheep / B. A.Rasmusen, I. G. Hall//Anim. Prod.-1974.-Vol. 18.-P. 141-152.

231. Rendel, J. Evidencece epistatic action of genes antigenic substances in sheep/J. Rendel // Genetics. 1954. - Vol. 39. - P. 396 - 408.

232. Rendel, J. Recent studies on relations between blood groups and production characters in farm animals / J.Rendel // Z. Tierzucht. Zuchtsbiol. -1961. Bd. 75.-S. 97- 109.m

233. Maxwell. Austr. Acad. Sci. And Austr. Wool Corp. - Canberra. — 1984. - P. 338.

234. Richardson, K.K. Bovine DNA contains a single major famili of interspersed repetitive sequences / K.K. Richardson, M. Crosby, P.J. Good, N.L.Rosen e.a. // Eur. J. Biochyem. 1986. - V. 154. - P. 349 - 354.

235. Roberts, G. P. Inhibiting of lymphocyte stimulation by bovine uterine proteins / G.P.Roberts // Reprod. Fert. 1977. - N50. - P. 337 - 339.

236. Schmid, D. O. New aspects on the blood groups of sheep / D.O.Schmid ^ // Proc. XII th Intern. Conf Animal Blood Groups and Biochem. Polymorphisms.

237. Budapest. 1972. - P. 567 - 573.

238. Schmid, D. O., Suzuki S. Animal blood group research; toads and future in West Germany and Japan // J. Agr. Sc. Tokyo, Nogyo Daigaku. 1980. -Vol. 25.-N2.-P. 91-112.

239. Schmid, D. O. Blutgruppen bei Tieren / D. O.Schmid, H.G.Bushman // Stuttgart: Enke, 1985. 430 s.

240. Sheep blood polymorphism and genetic divergence between Trench Rambouillet and Spanish Merino: role of genetic drift / T. C. Nguyen, L. Morrela, D. Llanes and e. a. // Animal Genetics. 1992. - N23. - P.325 - 332.

241. Smith, C. Application of embryo transfer in animal breeding / C.Smith. // Theriogenology, January. 1988. - Vol. 29. - N 1. - P. 203.

242. Stansfield, W. D. Blood groups of sheep / W.D.Stansfield, G.E.Bradford, C.Stormont, R. L.Blaekwell // Genetics 1964. - Vol. 50. - P. 1367- 1368.

243. Stansfield, W. D. Serological estimate of monozygotic twining in sheep / W. D. Stansfield // J. heredity. 1968. -N3. -P. 211 - 212.

244. Straube, W. Isolation and characterization of the prograncy zone protein / W. Straube, R.Hofman, J. Klausch e.a. // Fhird Int. Symp. Immunol. Reprod. 1975. - Varna. - Abstracts. - P. 221.

245. Stein, J.M. L-antigen and active potassium transport in HK and LK redcell of Barbary sheep (Amotragus lervia) / J.M. Stein, E.M. Tucker, C. Ellory // Comp. Biochem. And Physiol. 1987. - V.87. - N3.-P.711-716.

246. Stiglrand, T. The pregnancy zone protein J. Purification, characterization and animal analogues / T.Stiglrand, M.G.Damber, B.Schoultz // Fhird Int. Symp. Immunol. Reprod. 1975. Varna. - Abstracts. - P. 217.

247. Stormont, C. Erythrocyte mosaicism in a pain of sheep twins / C.Stormont, W. C.Weir, L. L. Lane // Science. 1953. - Vol. 11. - N35. - P. 695696.gi

248. Stormont, C. Survey hemoglobins, transferrins and certain red cell antigens in nine breeds of sheep / C.Stormont, Y.Suzuki, E. G.Bradford, P. A.King // Genetics. 1968.-Vol. 60.-P. 361 -371.

249. Todd, C. On The hemolytic immune histolysis of the OX andtheir relation to the question of individuality and blood relationship / C.Todd, P. G. Whine //J. Hyg.- 1910.-Vol. 10.-P.185- 195.

250. Tucker, E. M. Blood studies of the gene dark sheep at Whipanade Park / E.M.Tucker // Nature. 1967. - Vol. 216. - N 5.116. - P.684 - 685.

251. Tucker, E. M. The M-L Blood System and its influence on red ceils potassium levels in sheep / E. M.Tucker, J. C. Ellory // Anim. Blood Groups Biochem Genet. 1970. - Vol. 1.-P. 101 - 112.

252. Tucker, E. M. The history of the international society for animal genetics. The development from 1964 199 / E.M.Tucker // XXIV Conf. Animal Genet. - 1994. - Prague. - P. 13 - 22.

253. Tautz, D. Hypervariability of simple sequences as a general source polymorphic DNA marcers / D. Tautz // Nucleic. Acids. Rec. 1989. - V. 17. - P. 6463-6471.

254. Ward, R.D. Protein heterozygosis, protein structure and taxonomic differentiation / R.D. Ward, D.O.F. Skibinski, M. Woodwark // Evolutionary Biology / Eds M.K. Hecht e.a. NY: Plenum Press, 1992. V. 26. - P 73 - 159.

255. Weber, J.L. Abundant class in human DNA polymorphisms which can be tired using the polymerize chain reaction / J.L.Weber, P.E. May // Am. J. Human Genetics. V. 44. - S. 388.

256. Yeas, M.K.W. Studies of the development of a normal antibody and of cellular antigen in the blood of sheep / M.K.W.Yeas // J. Immunol. 1949. - Vol. 61. -N3-4. -P. 327-347.

257. Zanotti, M.C. Genetic relation ship between four sheep breeds of the Italian alpine bow / M.C.Zanotti, T.Gliozzi, F.Ponti // Animal Genetics. 1987. -V. 18.-Sup. l.-P. 137- 138.

258. Zur, T Kontrola pochodzenia tryczkow / T.Zur, F.Zur // Owczarssrwo. 1977.-N5.-P. 12.1o

259. Zur, T. Kontrola rodowodow u owiec / T.Zur, F.Zur, E.Trela // Owczarssrwo. 1981. - N9. - P. 4 - 5.