Структурно-функциональная организация гена P53 свиней и его полиморфных вариантов

Никулин, Артем Валерьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Структурно-функциональная организация гена P53 свиней и его полиморфных вариантов
ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Структурно-функциональная организация гена P53 свиней и его полиморфных вариантов"

На правах рукописи /

Ннкулин Артем Валерьевич

СТР^УТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ГЕНА Р53 СВИНЕЙ И ЕГО ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ

06.02.01 диагностика болезней и терапия животных, патология,

онкология и морфология животных 06.02.07 разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных

животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 5 НОЯ 2010

Саранск-2010

004614178

Рабата выполнена на кафедре генетики Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Трофимов Владимир Александрович

Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ,

доктор биологических наук, профессор Тельцов Леонид Петрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Зенкин Александр Сергеевич (Мордовский госуниверситет, г. Саранск)

доктор биологических наук, профессор Ерофеев Владимир Иванович (ВНИИ сельского хозяйства, г. Саранск)

Ведущая организация: ФГОУВПО «Ивановская государственная

сельскохозяйственная академия им. Д.К. Беляева»

Защита состоится декабря 2010 года в /на заседании диссертационного совета Д 212.117.15 при ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу 430005, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская 68.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева, www.mrsit.ru, e-mail: dsov@mrsu.ru

СW

Автореферат разослан —^ ноября 2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Т.А. Романова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы. Эффективная реализация контролирующих программ клеточного управления зависит от гена р53, который находится на верхней ступени иерархии генов, поскольку его белковый продукт является транскрипционным фактором и участвует в контроле клеточного цикла, апоптоза, старения клеток и связанных с ними фенотипических проявлений. Актуальность проблемы Р53-зависимой регуляции клеточных процессов несомненна как для медицины, так и для животноводства. Нарушение регуляции ростовых процессов и злокачественная трансформация клеток более чем в половине случаев связаны с изменениями в структуре гена и, соответственно, белка Р53 (Копнин, 2008). Поэтому в медицине и ветеринарии решение данной проблемы приблизит к пониманию молекулярных механизмов онкологических заболеваний и их лечению, а в селекции будет расширен спектр генетических маркеров, используемых для улучшения фенотипов сельскохозяйственных животных.

Для решения проблемы ростовых процессов, и связанных с ними злокачественных трансформаций клеток, важно изучение регуляции экспрессии гена р53 и изучение структурных особенностей мутантных или полиморфно-аллельных вариантов гена и их функциональной активности. К особенностям регуляции транскрипции гена р53 относят его широкую мутабельную активность, наличие изоформ и полиморфизмов, характерных для £>/ р53, а также зависимость от других регуляторных белков, в том числе, МБМ2 (Чумаков, 2000). В настоящее время показано, что большинство мутаций в гене р53 человека обнаруживаются в эволюционно-консервативном домене белка, причем в определенных, так называемых, «горячих точках» (Копнин, 2000). При патологии нарушения могут происходить не только вследствие мутаций в самом гене, но и в регуляторных элементах, что может приводить к изменению экспрессии гена (ВоЬаБЬ 1993). Однако данных о структурной организации гена р53 свиней недостаточно. Неизвестны мутации, которые могли бы приводить к изменениям в фенотипе, имеющим как хозяйственное значение, так и являющихся патологическими. Значительный интерес представляют исследования, направленные на изучение регуляции экспрессии гена р53 и позволяющие сформировать подходы к управлению активностью гена и его целенаправленной регуляции.

1.2. Целью исследования являлось изучение структурно-функциональных особенностей гена р53 свиней и его полиморфных вариантов.

В задачи исследования входило:

1. Изучить структурно-функциональную организацию гена р53 млекопитающих, построить филогенетическое древо и оценить степень гомологии генар53 человека, свиньи и мыши;

2. Исследовать мутационную изменчивость гена р53 свиней в 5-ом и 7-ом экзонах;

3. Изучить морфологические изменения моноцитов и их ядер при действии патологических агентов липополисахарида Е. coli и холестерола;

4. Изучить некоторые аспекты небелковой регуляции экспрессии гена свиней в связи с участием липидов в апоптозе и влиянием холестерола на

транскрипцию генар53;

5. Провести компьютерное моделирование и экспериментально обосновать связывание холестерола с промотором гена />55 свиней.

1.3. Научная новизна работы. В сравнительном аспекте рассмотрены структурно-функциональные особенности гена р53 у человека, мыши и свиньи, установлена высокая степень гомологии, свидетельствующая о генетическом сходстве гена. Впервые секвенированы последовательности нуклеотидов 5-го и 7-го экзона гена р53 свиней, в которых сосредоточены «горячие точки мутагенеза», различающихся скоростью прироста мышечной массы. Впервые показаны изменения в спектре и окисленности эндогенных липидов в моноцитах крови мышей и их ядрах при липополисахарид-индуцированном апоптозе. Проведено исследование влияния холестерола на экспрессивную активность гена р53 свиней и выявлено его дозозависимое влияние на транскрипцию. Определены последовательности нуклеотидов в промоторной области гена, обладающие повышенным сродством к холестеролу и выявлен гиперхромный эффект при связывании холестерола с олигонуклеотидами. Получены данные, свидетельствующие об участии экзогенного холестерола в реализации апоптотической программы в моноцитах крови свиньи.

1.4. Научно-практическая значимость работы

Проведенные исследования, связанные с выявлением мутаций в гене р53 и изучением генной экспрессии, вносят вклад в решение фундаментальной проблемы биологии развития - проблемы молекулярных механизмов процессов роста, в том числе и злокачественного роста клеток. Исследование имеет не только теоретическую, но и практическую значимость, поскольку позволяет на основе выявления мутаций формировать группы риска и проводить профилактические мероприятия, а в животноводстве - с помощью новых маркерных последовательностей идентифицированных в гене р53, осуществлять мероприятия маркерной селекции, направленные на отбор животных с более эффективным ростом организма.

Сравнительные исследования гомологичных участков гена р53 млекопитающих (человека, свиньи и мыши) позволяют расширить сведения о мутационной изменчивости гена р53 и влияние ее на фенотип организмов, геном которых до конца не секвенирован. Полученные данные по изучению транскрипции гена р53 свиней рекомендуем - для поиска новых способов влияния на клеточные процессы, связанные с белком Р53 (апоптоз, клеточный цикл, репарация ДНК, клеточное старение).

Положения, выносимые на защиту:

1. Высокая степень гомологии гена р53 свиньи с геном человека и общность молекулярных механизмов регуляции генной экспрессии.

2. Спектр мутационной изменчивости в 5-ом и в 7-ом экзоне, оценка фенотипа свиньи в сравнительном аспекте.

3. Перестройка в спектре липидов при липополисахарид-индуцированном апоптозе моноцитов и изменение транскрипционной активности генар53 мышей.

4. Компьютерное моделирование и экспериментальное обоснование связывания холестерола с промотором генар53 свиней.

1.5. Апробация работы. Материалы диссертации, опубликованы в трудах: XXXVII, XXXVIII Огаревских чтениях Мордовского госуниверситета (Саранск, 2009, 2010); съезда генетиков и селекционеров, посвященный 200-летию со дня рождения Ч. Дарвина и V съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Москва, 2009); Всероссийской заочной научно-практической конференции с Международным участием (Саранск, 2009); региональной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения Н.Ф. Санаева (Саранск, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

1.6. Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 127 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Диссертационная работа включает 40 рисунков, 14 таблиц. Список цитируемой литературы состоит из 261 источника, в том числе 140 -опубликованных в зарубежных журналах.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ

В основу работы положены результаты экспериментальных исследований, проводимых на кафедре генетики Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева в период с 2007 по 2010 годы. В качестве объекта исследования использовали периферическую кровь и моноциты млекопитающих.

Моноциты получали путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл/гипак (р 1,06 г/мл). Жизнеспособность клеток определяли по величине проникновения внутрь клеток красителя трипанового синего. Клетки культивировали в монослое в воздушном термостате при 37°С на предметных стеклах влажных камер и в пробирках Эппендорф при температуре 37°С в течение 3 часов. Рабочая концентрация суспензии

составляла 106 клеток/мл (рис. 2.1).

В работе использовали холестерол («Sigma», США) и ЛПС Е. coli («Sigma», США).

Рисунок 2.1. Схема эксперимента

Ядерную фракцию получали центрифугированием в градиенте сахарозы клеточной суспензии при 600 g в течение 10 минут.

Морфологию клеток, погибающих апоптозом и некрозом выявляли методами флуоресцентной (микроскоп «Motic ВА400», длина волны возбуждающего света 320-390 нм, барьерный фильтр 420-450 нм) и световой микроскопии (микроскоп «Nikon Eclipse Е200»), используя, Hoechst 33258 (Sigma), краситель Мая-Грюнвальда и Гимза (Merk).

Экстракцию липидов из моноцитов и их ядер проводили по методу Folch (Folch et al., 1957). Диеновые и триеновые коньюгаты определяли спектрофотометрическим методом. О накоплении малонового диальдегида (МДА) судили по образованию окрашенного комплекса с тиобарбитуровой кислотой (ТБК). Фракционирование липидов проводили в тонких слоях силикагеля. Количественное определение липидов проводили непосредственно на хроматограммах, обработанных 10%-ной фосфорномолибденовой кислотой в метаноле, денситометрическим методом. Количественный анализ проводили на денситометре Model GS-670 (BIORAD, США) с программным обеспечением (Phosphor Analyst/ PC Software).

Для выделения мРНК из клеток и проведения реакции обратной транскрипции использовали наборы фирмы «ИнтерлабСервис». Об изменении концентрации мРНК гена р53 судили, используя полимеразную цепную реакцию в реальном времени на приборе АНК 32 (ЗАО «Синтол», Россия).

Теоретические расчеты взаимодействия промоторной области гена р53 с холестеролом проводили с помощью метода молекулярной механики ММ+ с применением программы HeperChemTM 6.1 Molecular Modeling System фирмы Hypercude США.

Для моделирования взаимодействия промоторной области гена р53 с холестеролом in vitro выделяли ДНК из крови по методике Laura-Lee Boodram с модификациями. Затем проводили полимеразную цепную реакцию, для синтеза интересующей области гена р53. Амплификат отделяли от продуктов реакции электрофорезом в агарозном геле. А из геля выделяли с помощью набора фирмы «Fermentas». Эффективность связывание холестерола с промоторной областью гена р53 исследовали спектрофотометрическим методом.

Для секвенирования были выбраны теоретически рассчитанные 5-й и 7-й экзоны гена р53 свиньи. Пробы подготавливались путем проведения полимеразной цепной реакции, а затем секвенировались с применением набора ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit в соответствии с рекомендациями фирмы производителя. Продукты реакции анализировали на автоматическом секвенаторе ABI PRISM 310 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США).

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Структурно-функциональная организация гена р53 у млекопитающих

В генетических базах (NCBI, The ТР53 web site, GenBank и др., 2010) содержится информация о гене р53, которая нами обобщена и систематизирована с целью получения новых знаний о структуре и регуляции активности гена, его патогенетической роли, а также использования их для практических целей генетики и селекции сельскохозяйственных животных.

Общее строение гена р53 у различных видов млекопитающих сходно. Все они содержат 11-ать экзонов (исключение составляет крыса, у которой 9 и 10 экзоны слились), имеют протяженный первый интрон, у всех организмов первый экзон не несет информации о белке Р53, а одиннадцатый экзон несет информацию частично (рис3.1).

Рисунок 3.1. Строение гена р53: А - Mus musculus, Б - Rattus norvégiens, В - Homo sapiens (национальная база данных биотехнологов NCBI), прямоугольники - экзоны, линии - интроны

3.2. Оценка степени гомологии гена р53 млекопитающих

В генетических базах данных не представлена последовательность гена р53 свиньи, поэтому, основываясь на данных о сходном строении кодирующих последовательностей гена р53 млекопитающих, нами произведена первичная оценка степени гомологии (с использованием программы BLAST) мРНК р53 человека мыши и свиньи. При сопоставлении мРНК человека и свиньи (GenBank № NM_213824) выявлено, что их гомология составляет 83%. А при сопоставлении мРНК мыши и свиньи (GenBank № NM_213824) выявлено, что их гомология составляет 84%. С помощью программного пакета BioEdit, было проведено более тщательное определение степени гомологии между последовательностями мРНК р53 у свиньи, человека, мыши и крысы. На основании полученных данных можно заключить, что мРНК Sus scrofa наиболее гомологична Rattus Norvergicus (т=0.611), а наименее гомологична матричной РНК Homo sapiens (т=0.523), но это не означает, что Sus scrofa и Homo sapiens эволюционно далеко отстоят друг от друга (таблица 3.1).

Таблица 3.1 - Матрица идентичности для исследуемых последовательностей

Виды Sus scrofa (свинья) Mus musculus (мышь) Homo sapiens (человек) Rattus norvegicus (крыса)

Sus scrofa 1 0.599 0.523 0.611

Mus musculus 0.599 1 0.465 0.833

Homo sapiens 0.523 0.465 1 0.471

Rattus norvegicus 0.611 0.833 0.471 1

С помощью алгоритма Neighor phylogenetic tree было построено филогенетическое древо (рис. 3.2), которое более наглядно отражает эволюционные отношения изучаемых организмов.

мыши и крысы

Полученные данные свидетельствуют о том, что гомология изученных мРНК очень высока. Исходя из этого, можно говорить о высокой гомологии кодирующих областей генов р53 у человека, свиньи, а также мыши. Это позволяет с большой долей уверенности переносить известные мутации в геномах человека и мыши на возможные мутации в гене р53 свиньи.

33. Мутационная изменчивость гена р53

Известно, что мутации обнаруживаются в разных участках гена р53, но с наибольшей частотой в кодонах 175, 245, 248, 249, 273, 282 - так называемых горячих точках (Копнин, 2000). Определено семь «горячих точек», причем все они локализованы в эволюционно консервативном ДНК-связывающем домене, кодируемом экзонами 5,6,7, 8.

В этой связи нами проведено секвенирование предполагаемых экзонов гена р53 свиньи. По сопоставлению последовательности мРНК свиньи (СепВапк № ЫМ_213824) и последовательности клона хромосомы 12 (вепВапк № СШ14279), где расположен ген р53, выявлены предполагаемые участки расположения экзонов гена р53 свиньи. Согласно данным о том, что наиболее значимыми с точки зрения выполняемых функций белка Р53

являются экзоны 5, 6, 7, 8 для секвенирования были выбраны 5-й и 7-й экзоны как наиболее мутантные у человека.

Для секвенирования отобраны образцы ДНК свиней, характеризующихся разной скоростью роста и набора массы тела. В результате проведенных исследований выявлено, что экзон 5 генар53 свиньи консервативен у всех проанализированных животных, и вероятно мало влияет на скорость роста. Секвенирование экзона 7 выявило наличие различий в нуклеотидной последовательности у всех животных (рис. 3.3).

Таким образом, выявленные особенности изменчивости в 7-ом экзоне гена р53 возможно могут использоваться в качестве маркерных для оценки особенностей процессов роста у свиней. Однако это предположение, требует последующих детальных исследований.

го зо а

.ТО CAGO AGCTOC Т А О А С А Т ТА A CACA

С А

A G С Т О T T А С А С A T

A A G Т Т G Т А

Рисунок 3.3. Секвенограмма фрагмента предполагаемого экзона 7 гена р53 свиньи. А - свинья с высокой скоростью роста мышечной массы, Б -свинья с низкой скоростью роста мышечной массы

3.4. Небелковая регуляция экспрессии гена р53 в связи с участием липидов в апоптозе и влиянием холестерола на транскрипцию гена р53

Ген р53 может существовать во многих аллельных вариантах, поэтому его белковый продукт может по-разному реализовывать свою функциональную активность, часто оказывая негативное действие. В этой связи отмечаем, что патология клетки может инициироваться многими генами, экспрессия которых или мутации в которых приводят к появлению дисфункциональных белков. Ген р53 в силу своей функциональной значимости и нахождения в верхней ступени иерархии генов может рассматриваться в качестве ключевого гена, определяющего клеточное «здоровье».

Реализация нежелательного действия гена р53 нами рассматривается на примере влияния холестерола на экспрессию гена. Холестерол привлекает внимание исследователей как патогенетический агент, который при определенных условиях способствует развитию атеросклероза. Для свиньи же, которая в результате многовекового отбора набирала повышенную массу тела за счет высокого жироотложения, данная проблема является особенно актуальной, так как в последнее время основная тенденция развития свиноводства связана с получением мяса высокого качества и низким уровнем жира.

В опытах in vitro изучено влияние холестерола на экспрессию гена р53 и апоптоз моноцитов крови.

Моноциты, выделенные из периферической крови мыши, не имели первичных признаков апоптоза или некроза (рис. 3.4).

А Б

Рисунок 3.4. Морфология моноцитов и их ядер в норме (увеличение в 900 раз (окуляр 15х, объектив 60х). А - окрашивание по Папенгейму-Крюкову, Б - окрашивание Hoechst 33258.

Под влиянием холестерола отмечалось усиленное свечение клеток крови, поглощающих Hoechst 33258, которое возрастало с увеличением времени инкубации. Клетки, гибнущие путем апоптоза, накапливали Hoechst 33258 и имели ярко-зеленое свечение хроматина, конденсированного по периферии, либо были фрагментированными на несколько частей. Согласно данным световой микроскопии наблюдалось сморщивание клеток,

уменьшение их объемов, частичная фрагментация ядер (рис. 3.5).

Р? ШЩЖ ЯШ

ИШ

, :, : •

* '

fSIiEV ■■» г. ■ 'v ■

А Б

Рисунок 3.5. Морфология моноцитов и их ядер при апоптозе (увеличение в 900 раз (окуляр 15х, объектив 60х). А - окрашивание по Папенгейму-Крюкову, Б - окрашивание Hoechst 33258

Наиболее высокой проапоптотической активностью холестерол обладал в концентрации 0,01 мМ. Однако дальнейшее увеличение концентрации не приводило к усилению проапоптотического действия холестерола (рис. 3.6).

АИ, %

1 1 3

Время инкубации, ч

II Контроль В 0,01 мМ □ 0,1 мМ 00,5мМ

Рисунок 3.6. Изменение величины апоптотического индекса моноцитов крови при действии холестерола (р<0,001)

Мощный провоспалительный инфекционный агент липополисахарид Е. coli (1 мкг/мл) приводил к гибели культивируемых клеток уже к 60 мин инкубации и по величине апоптотического индекса (АИ) лилополисахарид-

индуцированная гибель многократно превосходила проапоптотическое действие холестерола. Липополисахарид Е. coli приводил к гибели одной трети моноцитов.

При совместном действии липополисахарида Е. coli (1 мкг/мл) и холестерола количество клеток, гибнущих путем апоптоза возрастало (рис. 3.7).

1 2 3

Время инкубации, ч

1 Контроль В LPS DLPS+0,01 мМ

□ LPS+0,1 мМ a LPS+0,5 ММ

Рисунок 3.7. Изменение величины апоптотического индекса моноцитов крови свиньи при действии холестерола и липополисахарида Е. coli (р<0,001)

На патологической модели апоптоза липополисахарид-индуцированной гибели клеток, в которой важнейшую роль играет ген, и белок Р53 нами изучены изменения в спектре липидов моноцитов и их ядер. При индуцированном апоптозе в спектре нейтральных липидов моноцитов крови мышей произошли следующие изменения: уровень свободных жирных кислот уменьшился на 49,5% по отношению к контролю, триацилглицеролов - на 16,5%, доля суммарных фосфолипидов возросла - на 4%, содержание моноацилглицерола - на 41%, холестерола - на 15%, содержание эфиров холестерола возросло - на 13% .

В спектре нейтральных липидов ядер моноцитов при действии ЛПС Е. coli произошли следующие изменения: уровень свободных жирных кислот уменьшился на 61,5% по отношению к контролю, триацилглицеролов — на 8,5%, эфиров холестерола - на 12,7%, монокцилглицеролов - на 50%, доля суммарных фосфолипидов возросла - на 8%, холестерола - на 7%.

В спектре фосфолипидов моноцитов при ЛПС-индуцированном апоптохе уровень фосфоинозитита уменьшился на 34,4% по отношению к

контролю, сфингомиелина - на 31,6%, содержание фосфатидилэтаноламина возросло - на 29,7%, фосфатидилсерина - на 41,5%, фосфатидилхолина - на 18,6%, лизофосфатидилхолина- на 19,4%.

В спектре фосфолипидов ядер моноцитов при действии ЛПС Е. coli произошли следующие изменения: уровень фосфоинозитита уменьшился на 21,4% по отношению к контролю, фосфатидилхолина - на 12,5%, лизофосфатидилхолина - на 32,2%, содержание фосфатидилэтаноламина возросло - на 33,5%, фосфатидилсерина - на 14,3%, сфингомиелина - на 34,8%.

Полученные данные свидетельствуют о перестройках в спектре липидов клеток и их ядер при апоптозе. Наиболее лабильными липидами являются свободные жирные кислоты, эфиры холестерола, свободный холестерол, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин,

фосфатидилинозитол, сфингомиелин, фосфатидилсерин.

Нежелательные перестройки в спектре липидов дополняются при апоптозе усилением процессов перекисного окисления липидов. Под влиянием липополисахарида Е. coli в клетках накапливаются диеновые и триеновые коньюгаты. Так в контроле индекс окисленности диеновых коньюгатов у фосфатидилэтаноламина составляет 0,74; у фосфатидилсерина - 1,31; у фосфатидилхолина - 1,2. При действии липополисахарида Е. coli индекс окисленности составляет у фосфатидилэтаноламина - 1,73; у фосфатидилсерина-1,41;у фосфатидилхолина-1,76.

Индекс окисленности триеновых коньюгатов в контроле у фосфатидилэтаноламина равен 0,12; у фосфатидилсерина - 0,32; у фосфатидилхолина - 0,25.

При действии липополисахарида Е. coli индекс окисленности составляет у фосфатидилэтаноламина - 0,4; у фосфатидилсерина - 0,21; у фосфатидилхолина - 0,29.

Высокий уровень окисленности фосфолипидов при действии ЛПС Е. coli может быть одним из факторов способствующих переходу клеток к апоптозу.

Таким образом, липополисахарид Е. coli стимулирует в моноцитах процессы пероксидации липидов, что выявлено нами по увеличению содержания в липидах начальных продуктов перикисного окисления липидов.

В опытах in vitro нами изучено влияние холестерола на экспрессию генар53 в моноцитах крови мышей (таблица 3.3).

Показано, что во всех трех опытных пробах и в контроле не происходило накопление мРНК р53 к 15 мин инкубации. К 30 минутам инкубации наблюдалось накопление мРНК р53, причем при действии холестерола в концентрации 0,01 мМ образовывалось 106,и относительных единиц (по относительной калибровочной кривой) мРНК, А при действии холестерола в концентрации 0,1 и 0,5 мМ происходило образование 105'85 относительных единиц мРНК.

Таблица 3.3 - Изменение содержания мРНК р53

Концентрация холестерола, мМ Время инкубации, мин Концентрация мРНК р53, относительные единицы

0,01 15 -

60 |0б,Ы±О,О5

0,1 15 -

60 2 QЬ,iW,M

0,5 15 -

60 -

Инкубация проб в течение 60 мин приводила к увеличению концентрации мРНК при воздействии 0,01 мМ холестерола до 106,61 единиц, при воздействии 0,1 мМ холестерола до 106'27 единиц относительно калибровочной кривой. При концентрации в 0,5 мМ накопления мРНК р53 не наблюдалось.

Если сопоставить данные об экспрессии гена р53 и поведении клеток при действии холестерола становится ясным, что холестерол в концентрации 0,01 мМ вызывает активацию экспрессии мРНК р53 (что наблюдается к 30 мин инкубации), что в конечном итоге приводит к гибели моноцитов путем апоптоза к 60 мин инкубации.

3.5 Компьютерное моделирование н экспериментальное обоснование связывания холестерола с промоторной областью гена р53

В модельном эксперименте изучено взаимодействие холестерола с промоторной областью гена р53 с целью доказательства участия липида в регуляции генной экспрессии

Для оценки липид-зависимой регуляции транскрипционной активности гена р53 нами проведено компьютерное моделирования методом молекулярной механики в системе ММ+ в программе НерегСЬетТМ версия 7.0 взаимодействия с регуляторно-промоторной областью гена р53 холестерола. Энергия связи ДНК с холестеролом определялась как разность полных энергий комплекса ДНК-липид и изолированных молекул ДНК, и липидов.

В ранее проведенных исследованиях выяснено, что холестерол преимущественно связывается с определенными последовательностями (Жданов и др., 2003) (таблица 3.4).

Мы проанализировали наличие данных последовательностей в исследуемой промоторной области гена р53 и выявили ряд последовательностей сходных с последовательностями, описанными Р. И. Ждановым (2003).

Таблица 3.4 - Поиск последовательностей, обладающих наибольшей степенью гомологии с известными сиквенсами

Последовательности ДНК (по Жданову, 2003) Последовательности, обладающие наибольшим сродством в гене р53

CGACTA ССАСОО

TGCGTA тссетт

AGAGTG АСАССА

TGAAGG ТвААСТ

АТААТТ АТАТТА

Из полученных данных видно, что выигрыш в энергии при взаимодействии сиквенса с холестеролом Е(ЬопсЗ) для последовательностей АХЗЛССА и АТАТТА составляет 38,95 и 37,0 соответственно (таблица 3.5).

Таблица 3.5 - Расчет выигрыша энергии при связывании с ДНК

Последовательность Потенциальная энергия нуклеотидной последовательности Е(Ю0 Кса1/то1' Выигрыш в энергии при взаимодействии сиквенса с холестеролом Е(Ьопё)

CGACGG 264.10 35.62

TGCGTT 325.6 28.6

AGAGCA 355.98 38.95

TGAACT 1148.83 32.88

АТАТТА 406.0 37.0

Это свидетельствует о наибольшей вероятности взаимодействия данных последовательностей с холестеролом.

Экспериментальное определение взаимодействия холестерола с промоторной областью генар53 проводили спектрофотометрически.

Минимальная оптическая плотность, в пределах 0,1 единицы, характерна для чистого раствора ДНК. При добавлении к ДНК холестерола в соотношении 1:1, спектр поглощения изменяется, но максимум поглощения изменяется незначительно (рис. 3.10).

При добавлении холестерола в более высоких концентрациях, характерный максимум поглощения при 260 нм возрастает. При этом появляется новые максимумы поглощения в диапазоне от 310 до 340 нм. Новые максимумы поглощения характерны для холестерола и отражают увеличение концентрации последнего. Поскольку в качестве олигонуклеотидной последовательности выбрана последовательность промоторного участка молекулы ДНК, то мы можем заключить, что регуляция эффективности транскрипции с промоторными областями может изменяться под влиянием холестерола.

0,6

0,4

0,3

0,2

0,1

' ■ »Ж-'-: ... Г' ' :

у \ V \ А

\ л ■ -v. >.; ч. ■ •

У V- 4 •• •'/-

•• ••.;;.' ' N V -....., _ .'"б г

* ' it-ik "N 5 4 у' %

200

250

300 350 Длина волны

400

1 - чистая ДНК

2 - ДНК+холестерол 1 1

3 - ДНК+холестерол 1 2

4 - ДНК+холестерол 1 5

5 - ДНК+холестерол 1 10

6 - ДНК+холестерол 1 20

450

Рисунок 3.10. Спектр поглощения раствора ДНК с холестеролом

ВЫВОДЫ

1. С помощью компьютерных программ установлено, что кодирующие последовательности гена р53 человека и свиньи гомологичны на 83%, свиньи и мыши - на 84% (программа BLAST). При сравнении степени гомологии более специфичной программой BioEdit выявлено, что степень гомологии у свиньи и человека составляет 52,3%, у свиньи и мыши - 59,9%, у свиньи и крысы - 61,1%.

2. Согласно данным секвенирования у свиней с различной скоростью роста 5-ый экзон является консервативным, а 7-ой экзон характеризуется высоким уровнем изменчивости.

3. Липополисахарид Е. coli приводит к морфологическим изменениям моноцитов и их ядер, которые связаны с уменьшением объема клетки, их сморщиванием, частичной фрагментации ядер. Холестерол усливает липополисахарид-индуцированный апоптоз клеток. Максимально в концентрации 0,5 мМ.

4. При действии липополисахарида Е. coli в спектре липидов моноцитов крови мышей происходит уменьшение уровня свободных жирных кислот на 49%, фосфатидилинозитола - на 34,4%, сфингомиелина - на 31,6%, лизофосфатидилхолина - на 19,3%, а также увеличение содержания

холестерола на 15%, фосфатидилэтаноламина - на 30%, фосфатидилсерина -на 41,4%, фосфатидилхолина - на 18,6%.

При действии липополисахарида Е. coli в спектре липидов ядер моноцитов крови мышей происходит уменьшение уровня свободных жирных кислот на 61%, моноацилглицеролов - на 48,8%, фосфатидилинозитола - на 21,6%, фосфатидилхолина - на 12,5%; лизофосфатидилхолина - на 32%, а доля суммарных фосфолипидов возростает - на 8,4%, содержание фосфатидилэтаноламина - на 33,6%, сфингомиелина- на 34,8%.

4. Холестерол дозозависимым образом активирует транскрипцию гена р53 и апоптоз моноцитов крови свиней. При этом приводя к максимальному накоплению мРНК к 30 мин. после воздействия. Наибольшей проапоптотической активностью обладает холестерол в концентрации 0,01 мМ.

5. Холестерол дозозависимым образом взаимодействует с разной степенью специфичности с уникальными сайтами промотора гена р53 свиньи. И ведет к изменению двухцепочечной структуры ДНК.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Дозозависимый эффект влияния холестерола и липополисахарида Е. coli на экспрессию гена р53 и апоптоз моноцитов должен учитываться при лечении сельскохозяйственных животных как механизм формирования нежелательного фенотипа. ■

2. Изменчивость 7-го экзона позволяет рассматривать ген р53 как маркерный при проведении селекционных мероприятий направленных на увеличение скорости роста свиней.

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Trofimov, V.A. The bioinformatical ahalysis of promoter régions p53 and ob genes at mammals / V.A. Trofimov, A.V Nikulin. S.N. Palaev, A.M. Oreshin, E.N. Lopukhova // Molecular phylogenetics: contributions to the 2nd Moscovv International Conférence "Molecular Phylogenetics", Moscow, Russia, May 18-21, 2010, Compiled by A. Troitsky, L. Rusin, and V. Aleoshin, Moscow: Torus press, 2010.-P. 171

2. Аксенова, O.H. Влияние холестерола на экспрессию генов раннего ответа и мнтотическую активность перитонеальных макрофагов / О.Н. Аксенова, В.А. Трофимов, М.В. Ромашкина, А.В. Никулнн, Е.А. Иванова, А.М. Орешин // Казанский медицинский журнал, 2009. №4. Т. 90. - С. 560-563.

3. Никулин, А.В. Анализ распространённости мутаций гена р53 / А.В. Никулин. В.А. Трофимов, Д.Б. Дукика, М.А. Рыжкова, Е.Н. Лопухова, Н.В. Воробьёв // XXXVII Огарёвские чтения: материалы науч. конф.: в 3 ч. Ч. 2: Естественные науки. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2009. - С. 24 - 25

4. Никулин, А.В. Вариабельность 72-го кодона гена р53 и её генетическая оценка / А.В. Никулин. Н.В. Воробьёв, Е.Н. Лопухова //

Материалы XIII научной конференции молодых учёных, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарёва: в 2ч. 4.2: Естественные науки. - Саранск. 2008. - С. 36 - 38.

5. Никулин, A.B. Влияние холестерола на экспрессивную активность генов c-FOS, C-JUN, PS3/A.B. Никулин. В.А.Трофимов, Е.А. Иванова, М.В. Ромашкина, A.M. Орешин // V Съезд генетиков и селекционеров, посвященный 200-летию со дня рождения Ч. Дарвина и Пятый съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров. Москва, 2009. - С. 133

6. Никулин, A.B. Изучение экспрессивной активности гена р53: теоретические и практические аспекты / A.B. Никулин // Материалы Итоговой региональной научно-практической конференции «Научный потенциал молодежи - будущему Мордовии». - Саранск: Изд-во Мордов. унта, 2009. В 2 ч. 4.2: Естественные и технические науки. - С. 51 - 52

7. Никулин A.B. Небелковая регуляция гена р53 / A.B. Никулин. М.А. Рыжкова, В.А. Трофимов // XXXVIII Огаревские чтения: материалы науч. конф. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2010. В 3 ч. Ч. 2: Естественные науки. - С. 33-34

8. Трофимов, В.А. Влияние холестерола и липополнсахарнда Е. coli на апоитоз моноцитов и лимфоцитов периферической крови человека / В.А. Трофимов, A.B. Никулин, М.А. Рыжкова, Е.Г. Сергеева // Естественные и технические науки, 2010. - С. 172-174

9. Трофимов, В.А. Взаимодействие холестерола с промоторной областью гена р53 / В.А. Трофимов, A.B. Никулин. С.Н. Палаев // Биотехнология начала III тысячелетия: Сборник тез. Междунар. науч. конф. (Саранск, МГУ им. Н.П. Огарева, 26-28 мая 2010 г.) - Саранск, 2010. - С. 124125

10. Трофимов, В.А. Влияние модификаторов Са2+-проницаемости на НгОг-индуцированный апоптоз перитонеальных макрофагов / В.А. Трофимов, О.Н. Аксенова, A.B. Никулин // Вестник Мордовского университета, 2007. №4. - С. 93 - 96.

11. Трофимов, В.А. Полиморфизм гена р53 / В.А. Трофимов, М.В. Ромашкина, A.B. Никулин. A.M. Орешин, Д.Б. Дукина, М.А. Рыжкова // V Съезд генетиков и селекционеров, посвященный 200-летию со дня рождения Ч. Дарвина и Пятый съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров. - Москва, 2009. - С. 469

12. Шубин, В.П. Экспрессия генар53 в регенерирующей печени белых мышей / В.П. Шубин, A.B. Никулин. О.В. Сазанова, A.A. Дудко, В.А. Трофимов // Студенты - науке XXI века: сб. науч. работ студентов биол. факультета - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2006. - С. 69 - 72.

13. Шубин, В.П. Экспрессия генар53 в печени белых мышей в норме и при патологии / В.П. Шубин, A.B. Никулин. О.В. Сазанова, В.А. Трофимов // XXXIV Огаревские чтения. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2005. Ч. 2. - С. 78-81.

Подписано в печать 03.11.10. Объем 1,25 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1679. Типография Издательства Мордовского университета 430005, Саранск, ул. Советская, 24

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Никулин, Артем Валерьевич

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. Обзор литературы

1.1. Регуляция транскрипции генов как основа для создания специализированных фенотипов

1.2. Структура и функция генар53. Полиморфные и мутантные формы гена р

1.3. Экспрессия генар53 и его аллельных форм

1.4. Роль белка Р53 в регуляции экспрессии генов. Влияние мутаций генар53 на реализацию р53-зависимых программ клеточного управления

1.5. Липидыядра

II. Материалы и методы исследования

2.1. Объект исследования

2.2. Постановка эксперимента

2.3. Получение моноцитов крови

2.4. Определение жизнеспособности клеток

2.5. Инкубация моноцитов

2.6. Окрашивание по Паппенгейму-Крюкову

2.7. Окрашивание Hoechst

2.8. Выделение ядер моноцитов

2.9. Экстракция липидов из моноцитов и их ядер

2.10. Определение диеновых, триеновых коньюгатов и малонового диальдегида в моноцитах и их ядрах

2.11. Фракционирование липидов в тонких слоях силикагеля и их количественное определение

2.12. Выделение мРНК

2.13. Проведение реакции обратной транскрипции

2.14. Полимеразная цепная реакция в реальном времени

2.15. Выделение ДНК из крови

2.16. Амплификация промоторной области генар

2.17. Очистка амплификата

2.18. Выделение амплификата из агарозного геля

2.19. Молекулярное моделирование взаимодействия липидов с ДНК

2.20. Эксперементальное исследование эффективности связывания холестерола с нуклеотидными последовательностями спектрофотометрическим методом

2.20. Амплификация для секвенирования

2.21. Секвенирование

2.22. Статистическая обработка результатов

III. Результаты собственного исследования

3.1. Структурно-функциональная организация генар53 млекопитающих

3.2. Оценка степени гомологии генар53 млекопитающих

3.3. Мутационная изменчивость генар

3.4. Небелковая регуляция экспрессии генар53: роль липидов в апоптозе моноцитов, влияние холестерола на транскрипцию гена р

3.5. Компьютерное моделирование и экспериментальное связывания холестерола с промоторной областью генар

Обсуждение результатов

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Структурно-функциональная организация гена P53 свиней и его полиморфных вариантов"

Актуальность проблемы. Эффективная реализация контролирующих программ клеточного управления зависит от гена р53, который находится на верхней ступени иерархии генов, поскольку его белковый продукт является транскрипционным фактором и участвует в контроле клеточного цикла, апоптоза, старения клеток и связанных с ними фенотипических проявлений. Актуальность проблемы Р53-зависимой регуляции клеточных процессов несомненна как для медицины, так и для животноводства. Нарушение регуляции ростовых процессов и злокачественная трансформация клеток более чем в половине случаев связаны с изменениями в структуре гена и, соответственно, белка Р53 (Копнин, 2008). Поэтому в медицине и ветеринарии решение данной проблемы приблизит к пониманию молекулярных механизмов онкологических заболеваний и их лечению, а в селекции будет расширен спектр генетических маркеров, используемых для улучшения фенотипов сельскохозяйственных животных.

Для решения проблемы ростовых процессов, и связанных с ними злокачественных трансформаций клеток, важно изучение регуляции экспрессии гена р53 и изучение структурных особенностей мутантных или полиморфно-аллельных вариантов гена и их функциональной активности. К особенностям регуляции транскрипции гена р53 относят его широкую мутабельную активность, наличие изоформ и полиморфизмов, характерных для £)/ р53, а также зависимость от других регуляторных белков, в том числе, МОМ2 (Чумаков, 2000). В настоящее время показано, что большинство мутаций в гене р53 человека обнаруживаются в эволюционно-консервативном домене белка, причем в определенных, так называемых, «горячих точках» (Копнин, 2000). При патологии нарушения могут происходить не только вследствие мутаций в самом гене, но и в регуляторных элементах, что может приводить к изменению экспрессии гена (БоЬаэЬ 1993). Однако данных о структурной организации гена р53 свиней недостаточно. Неизвестны мутации, которые могли бы приводить к изменениям в фенотипе, имеющим как хозяйственное значение, так и являющихся патологическими. Значительный интерес представляют исследования, направленные на изучение регуляции экспрессии гена р53 и позволяющие сформировать подходы к управлению активностью гена и его целенаправленной регуляции.

Целью исследования являлось изучение структурно-функциональных особенностей гена р53 свиней и его полиморфных вариантов.

В задачи исследования входило:

2. Исследовать мутационную изменчивость гена р53 свиней в 5-ом и 7-ом экзонах;

4. Изучить некоторые аспекты небелковой регуляции экспрессии гена-р53 свиней в связи с участием липидов в апоптозе и влиянием холестерола на транскрипцию генар53;

5. Провести компьютерное моделирование и экспериментально обосновать связывание холестерола с промотором гена р53 свиней.

Научная новизна работы. В сравнительном аспекте рассмотрены структурно-функциональные особенности гена р53 у человека, мыши и свиньи, установлена высокая степень гомологии, свидетельствующая о генетическом сходстве гена. Впервые секвенированы последовательности нуклеотидов 5-го и 7-го экзона гена р53 свиней, в которых сосредоточены «горячие точки мутагенеза», различающихся скоростью прироста мышечной массы. Впервые показаны изменения в спектре и окисленности эндогенных липидов в моноцитах крови мышей и их ядрах при липополисахаридиндуцированном апоптозе. Проведено исследование влияния холестерола на экспрессивную активность гена р53 свиней и выявлено его дозозависимое влияние на транскрипцию. Определены последовательности нуклеотидов в промоторной области гена, обладающие повышенным сродством к холестеролу и выявлен гиперхромный эффект при связывании холестерола с олигонуклеотидами. Получены данные, свидетельствующие об участии экзогенного холестерола в реализации апоптотической программы в моноцитах крови свиньи.

Научно-практическая значимость работы.

Проведенные исследования, связанные с выявлением мутаций в гене р53 и изучением генной экспрессии, вносят вклад в решение фундаментальной проблемы биологии развития - проблемы молекулярных механизмов процессов роста, в том числе и злокачественного роста клеток. Исследование имеет не только теоретическую, но и практическую значимость, поскольку позволяет на основе выявления мутаций формировать группы риска и проводить профилактические мероприятия, а в животноводстве - с помощью новых маркерных последовательностей идентифицированных в гене р53, осуществлять мероприятия маркерной, селекции, направленные на отбор животных с более эффективным ростом организма.

Положения, выносимые на защиту:

2. Спектр мутационной изменчивости в 5-ом и в 7-ом экзоне, оценка фенотипа свиньи в сравнительном аспекте.

Апробация работы. Материалы диссертации, опубликованы в трудах: XXXVII, XXXVIII Огаревских чтениях Мордовского госуниверситета (Саранск, 2009, 2010); съезда генетиков и селекционеров, посвященный 200-летию со дня рождения Ч. Дарвина и V съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Москва, 2009); Всероссийской заочной научно-практической конференции с Международным участием (Саранск, 2009); региональной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения Н.Ф. Санаева (Саранск, 2009).

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 126 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и обсуждений, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Диссертационная работа включает 40 рисунков, 14 таблиц. Список цитируемой литературы состоит из 261 источника, в том числе 140 -опубликованных в зарубежных журналах.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Никулин, Артем Валерьевич

выводы

4. При действии липополисахарида Е. coli в спектре липидов моноцитов крови мышей происходит уменьшение уровня свободных жирных кислот на 49%, фосфатидилинозитола - на 34,4%, сфингомиелина - на 31,6%, лизофосфатидилхолина — на 19,3%, а также увеличение содержания холестерола на 15%, фосфатидилэтаноламина - на 30%, фосфатидилсерина -на 41,4%, фосфатидилхолина - на 18,6%.

4. Холестерол дозозависимым образом активирует транскрипцию гена р53 и апоптоз моноцитов крови свиней. При этом приводя к максимальному накоплению мРНК к 30 мин после воздействия. Наибольшей проапоптотической активностью обладает холестерол в концентрации 0,01 мМ.

5. Холестерол дозозависимым образом взаимодействует с разной степенью специфичности с уникальными сайтами промотора гена р53 свиньи, что ведет к изменению двухцепочечной структуры ДНК.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Никулин, Артем Валерьевич, Саранск

1. Аксель, Е.М. Статистика заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований в 2000 г. / Е.М. Аксель, М.И. Давыдов // Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2000 г. М.: РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, 2002. - С. 85-106.

2. Аксенова, О.Н. Влияние модификаторов ФИ-цикла на апоптоз перитонеальных макрофагов / О.Н. Аксенова, В.А. Трофимов, Т.Н. Лычкина // Бюлл. эксперим. биол. и мед., 2004. № 6. - С. 653-656.

3. Албертс, Б. Молекулярная биология клетки: В 3 т. / Б. Албертс, Д. Брей, Дж. Льюис и др.; М.: Мир, 1994. 2: 540 с.

4. Алесенко, A.B. Функциональная роль сфингозина в индукции пролиферации и гибели клеток / A.B. Алесенко // Биохимия, 1998. Т. 63. — С.5-82.

5. Алесенко, A.B. Влияние циклогексемида на липидный состав ядер клеток печени / A.B. Алесенко, В.А. Красильников // Фармакология и токсикология, 1998. Т. 49, № 1. - С. 38 - 44.

6. Андреева, Е.В. Локализация липидов в политенных хромасомах / Е.В. Андреева, Г.П. Пинаев // Цитология, 1987. Т. 3, № 12. - С. 1491-1495.

7. Арчаков, А.И. Модификация белков активным 02 и их распад / А.И. Арчаков, И.М. Мохосоев // Биохимия, 1989. № 2. - С. 179 - 186.

8. Баранов, B.C. Геном человека и гены «предрасположенности» (введение в предиктивную медицину) / B.C. Баранов, Е.В. Баранова, Т.Э. Иващенко, М.В.Асеев. СПб.: Интермедика, 2000.-271 с.

9. Белоконева, О.С. Роль ядерных мембранных лнпидов в регуляции функционирования рецепторов нейтромедиаторов / О.С. Белоконева // Биохимия, 1993.-Т. 58.-Вып. 11.-С. 1685-1708.

10. Белоусова, А.К. Загадки гена опухолевого супрессора р53 / А.К. Белоусова// Экспер. онкология. 1996. - Т. 18. - С. 197-207.

11. Блохин, Д.Ю. Программированная гибель клеток в механизмах циторедуктивной терапии опухолевых заболеваний / Д.Ю. Блохин // Патогенез, 2004. -№1. С. 54-60.

12. Бочков, Н.В. Форболовый эфир блокирует сопряжение ГТФ связывающего белка с рецептор-управляемыми Ca + каналами / Н.В .Бочков, И.А. Феоктистов, П.В.Авдонин, В.А.Ткачук // Биохимия, 1998. — № 9. — С. 1533-1542.

13. Брюне, Б. Апоптотическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации, анатагонистические сигнальные пути / Б. Брюне, К. Сандау, А.Ф. Кнете // Биохимия, 1998. № 7. - С. 966 - 975.

14. Владимирская, Е.Б. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста / Е.Б. Владимирская, A.A. Масчан // Молекулярная биология, 2000. № 11.-С. 537-532.

15. Генкин, A.A. Опухолевые заболевания системы крови: возраст, уровень холестерина и количество эритроцитов / A.A. Генкин // Тер. архив., 1998. -№3.- С. 60-66.

16. Геннис, Р. Биомембраны: молекулярная структура и функции / Р. Геннис. М.: Мир, 1997. - 635 с.

17. Гинтер, Е. К. Медицинская генетика / Е. К. Гинтер. М.: Медицина, 2003.-448 с.

18. Горбунова, В. Н. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний / В. Н. Горбунова, В. С. Баранов. -СПб.: Специальная литература, 1997. 96 с.

19. Груздев, B.B. Повреждения хроматина и матрикса печени крыс при асцитной опухоли Эрлиха / В.В. Груздев // Вопросы мед. Химии, 1995. — Т. 38, № 3. — С. 300-307.

20. Досон, Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джони. М.: Мир, 1991. - С. 466 - 467.

21. Доценко, Э.А. Холестерин и липопротеины низкой плотности как эндогенные иммуномодуляторы / Э.А. Доценко, Г.И. Юпатов, A.A. Чиркин // Клинич. Иммунопатология, 2001. № 3. - С. 6-15.

22. Дранник, Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология / Г.Н. Дранник. М.: ООО « МИА», 2003. - 604 с.

23. Егорова, А.Б. Повреждение цитоскелета и клеточных мембран при апоптозе / А.Б. Егорова, Ю.А. Успенская, C.B. Михуткина, Е.Ю. Ставицкая // Усп. совр. биол., 2001. № 5. - С. 502-509.

24. Жданов, Р.И. Липидом новый информационный уровень в исследовании генома человека / Р.И. Жданов, A.A. Кубатиев // Патогенез, 2003.-Т. 1. — № 1.-С. 2-11.

25. Зборовская, И. Б. Молекулярно-генетические маркеры при раке легкого: онкогены и гены-супрессоры / И. Б. Зборовская, А. Г. Татосян. М.: Медицина, 1997.- 152с.

26. Зборовская, И. Б. Досимптоматическая диагностика опухолей с использованием молекулярно-генетического тестирования онкогенов и антионкогенов / И.Б.Зборовская// Канцерогены, 2005. — Т.1. Вып. 5. — С.365-379.

27. Землякова, В. В. Исследования метилирования ряда генов, вовлеченных в канцерогенез, в различных типах опухолей / В. В. Землякова,

28. М. В. Немцова, И. Б. Зборовская, JI. Н. Любченко, О. А. Майорова, Д. В. Залетаев // Медицинская генетика, 2005. Т. 4, № 4.-186 с.

29. Зенков, Н.К. Активные кислородные метаболиты в биологических системах/ Н.К. Зенков, Г.Б. Меньшикова // Успехи современной биологии, 1993.-№3.-С. 286-290.

30. Зенков, Н.К. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз / Н.К. Зенков, В.А. Козлов // Успехи современной биологии, 2001. № 5. -С. 440-445.

31. Зинченко, В.П. Активация фосфолипазы связыванием с мембраной, индуцированным ФИ-3 киназой опосредованым доменом ПГ /

32. B.П. Зинченко, A.C. Гуковская, Т.В. Вышинская // Биохимия, 2001. № 3.1. C. 414-422.

33. Зинченко (Мамедова), P.A. Анализ разнообразия аутосомно-рецессивных заболеваний в Российских популяциях / P.A. Зинченко (Мамедова), Г.И. Ельчинова, С.Г. Гаврилова, Е.К. Гинтер // Генетика, 2001— Т. 37, № 11.-С. 1559-1570.

34. Зинченко (Мамедова), P.A. Разнообразие аутосомно-доминтантных заболеваний в Российских популяциях / P.A. Зинченко (Мамедова),-Г.И. Ельчинова, С.Д. Нурбаев, Е.К. Гинтер // Генетика, 2001. Т. 37, № 3. -С. 373-385.

35. Зубова, С.Г. Роль молекул адгезии в процессе распознавания чужеродных и трансформированных клеток макрофагами млекопитающих / С.Г. Зубова, В.Б. Окулов // Усп. совр. биол, 2001. Т. 121, № 1. - С. 59-66.

36. Иванов, А. В. Мутация р53 необходима для стабильной трансформации клеток REF52 онкогенами MYS+RAS / А. В. Иванов, П. Б. Копнин, В. С. Осовская, Б. П. Копнин, П. М. Чумаков // Молекулярная биология, 2000.-Т. 34.-Вып. 2. -С.316-325.

37. Канцерогенез/Под ред. проф. Д.Г. Заридзе. М.: Научный мир, 2000. -745 с.

38. Kapp, Ян. Макрофаги: Обзор ультраструктуры и функций / Ян. Kapp // М.: Медицина, 1978. 189с.

39. Карнаухов, В.Н. Люминесцентный спектральный анализ клетки /

40. B.Н. Карнаухов, М.: Наука. 1978. - 208 с.

41. Карпищенко, А. И. Онкомаркеры и их диагностическое значение / А. И. Карпищенко, В. Г. Антонов, А. Б. Бутенко, А. С. Белохвостов, Е. П. Шелепина. СПб.: Военно-медицинская академия, 1998. - 472 с.

42. Кетлинский, С. А. Эндогенные иммуномодуляторы /

43. C. А. Кетлинский, А. С. Симбирцев, А. А. Воробьев. СПб: Гиппократ, 1992. -256 с.

44. Киселев, Ф. Л. Общие механизмы действия онкобелков ДНК-содержащих вирусов / Ф. Л. Киселев // Канцерогены, 2002. Т. 4 . - Вып. 3. -С.178-180.

45. Клебанов, Г.И. Клеточный механизм прайминга и активации фагоцитов / Г.И. Клебанов, Ю.А. Владимиров // Усп. совр. биол, 1999. № 5. -С. 462-475.

46. Козлова, С. И. Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование / С. И. Козлова, Е. Семанова, Н. С. Демикова: М.: Медицина, 1999. - 472 с.

47. Козначеев, К.С. Функция гена р53/ К.С Козначеев, Ф.Г.Румянцев, И.Г Мустафин // Биохимия, 2001. № 2. - С. 366-370.

48. Колчанов, Н. А. Регуляция транскрипции генов эукариот: база данных и компьютерный анализ / Н. А. Колчанов // Молекулярная биология, 1997. — Т. 31. -С.581-583.

49. Кондрашова, М.Н. Отрицательные аэроионы и активные формы кислорода / М.Н. Кондрашова // Биохимия, 1999. Т.64. - Вып.З. - С. 430432.

50. Копнин, Б. П. Р53 многофункциональный опухолевый супрессор, чаще всего поражаемый в различных новообразованиях человека / Б. П. Копнин // Канцерогены, 2000. Т. 37 . - Вып. 2 . - С.79-85.

51. Копнин, Б. П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза/ Б. П. Копнин // Биохимия, 2000. Т. 65. - Вып. 1. - С.5-33.

52. Копнин, Б. П. Опухолевые супрессоры и мутаторные гены / П. Б. Копнин // Биохимия. 2000. - Т. 39. - С.2-18.

53. Копнин, Б. П. Механизмы действия протоонкогенов и опухолевых супрессоров. Обзор / П. Б. Копнин // Биохимия, 2000. — Т. 35. — Вып. 3. С.2-29.

54. Копнин, Б. П. Защитная функция р53 при RAS-индуцированной трансформации клеток REF52 / П. Б. Копнин // Молекулярная биология, 2003. Т. 37. — Вып. 3. - С.458-471.

55. Копнин, Б. П. Многоликий р53: разнообразие форм, функций, опухоль супрессирующих и онкогенных активностей / Б. П. Копнин, П. Б. Копнин, Н. В. Хромова, JI. С. Агапова // Клиническая онкогематология, 2008.-Т. 5,№ 1.-С.З-10.

56. Коршунов, А.Г. Иммуногистохимическое изучение экспрессии онкобелка р53 в астроцитарных глиомах больших полушарий головного мозга / А.Г. Коршунов, Р.В. Сычёва // Архив паталогии, 1996. Вып.6 - С.37-42.

57. Коршунов, А.Г. Иммуногистохимическое изучение апоптоза в глистомах больших полушарий головного мозга / А.Г. Коршунов, Р.В. Сычёва, A.B. Голанов // Архив патологии, 1998. Вып.З - С. 23-27.

58. Красильников, В.А. Состав фосфолипидов ядерного матрикса раковых клеток / В.А. Красильников // Архив патологии, 1999. Т. 43. - № 1. -С. 12-16.

59. Красильников, В.А. Сигнальные пути регулируемые фосфоинозит-3-киназой и их значение для роста, выживаемости и злокачественной трансформации клеток / В.А. Красильников // Биохимия, 2000. № 1. -С. 68-75.

60. Крутецкая, З.И. Структурно-функциональная организация G белков и связанных с ними рецепторов/ З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев // Цитология, 1992.-№ 11 .-с.24-411. О А

61. Крутецкая, З.И. Механизмы регуляции входа Ca в перитонеальные макрофаги крысы / З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев // В матер. Междунар. Конф.: Рецепция и внутриклеточная сигнализация. Пущино-на-Оке, 1998. — С. 30-32.

62. Кузина, A.M. Липиды в над молекулярном комплексе ДНК тимуса и печени крыс / A.M. Кузина, И.К. Коломейцева, С.Д. Стразина // ДАН СССР, 1985.-Т. 85.-С.1189-1191.

63. Лукьянова, Н. Ю. Роль генов р53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей / Н. Ю. Лукьянова, Г. И. Кулик, В. Ф. Чехун // Вопросы онкологии, 2000. Т. 46. - Вып. 2. - С.121-129.

64. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский // Новосибирск: Наука, 1989. 344 с.

65. Меньшикова, Е.Б. Активные кислородные метаболиты в биологических системах / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии, 1993. № 3. - С. 286-296.

66. Меньшикова, Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меньшикова, Н.К.Зенков // Успехи современной биологии, 1999. № 2. -С. 1056-1063.

67. Морозов, В.А. Необходимые элементы ретровирусных векторов. Терапевтические гены и принципы их действия / В. А. Морозов // Канцерогены, 2003. Т. 6. - Вып. 2. - 385 с.

68. Мушкамбаров, H.H. Молекулярная биология / H.H. Мушкамбаров, С.Л. Кузнецов. М.: МИА, 2003. 535 с.

69. Новик, А. А. Молекулярно-генетические исследования в онкогематологии / А. А. Новик, А. С. Белохвостов. — СПб.: Военно-медицинская академия, 1997. 100 с.

70. Новиков, В. С. Генная регуляция апоптоза: программированная клеточная гибель / В.С.Новиков, Д. В. Ястребов, М. Ю. Бахтин СПб.: Наука, 1996.-С. 72-8.

71. Новиков, B.C. Физиологические аспекты апоптоза/ В.С.Новиков, В.Н.Цыган // Российский физиологический журнал им.И.М.Сеченова, 1997. -№ 4. С. 344-350.

72. Новикова, В. С. Программированная смерть клеток / В. С. Новикова. М.: Наука, 1997. - С. 352 - 354.

73. Новожилова, А.П. Механизмы клеточной смерти: проблемы и перспективы / А.П. Новожилова, А.Н. Плужников, B.C. Новиков // Программированная клеточная гибель. СПб.: Наука, 1996. - С. 22-26.

74. Пальцев, М.А. Цитокины и их роль в межклеточных взаимоотношениях / М.А. Пальцев // Арх. пат. 1996. - Вып. 6 - С. 37.

75. Пальцев, М.А. Мелкоклеточный рак и карциноиды легких: морфология апоптоза и экспрессия биомолекулярных маркеров опухолевого роста / М.А. Пальцев, С.А. Демура, Е.А. Коган // Архив паталогии, 2000. -Вып. 5.-С. 11-17.

76. Паниченко, И. В. Клиническое значение определения экспрессии р53 в злокачественных опухолях яичников / И. В. Паниченко, В. Н. Богатырев, В. В. Кузнецов, К. И. Жерданов, Т. Н. Заботина // Медицинская иммунология, 2007. Т. 9, № 2, 3. - С. 151-159.

77. Патрушев, Л. И. Экспрессия генов / Л. И. Патрушев. М.: Наука, 2000. - 527 с.

78. Петухов, В.И. Роль Fas-опосредованного апоптоза в реализации противоопухолевого эффекта а-интерферона при хроническом миелолейкозе / В.И. Петухов // Гематол. трансфузиол., 2000. № 4. - С. 29-33.

79. Пинаев, Г.П. Свободнорадикальные повреждения ядерного генетического аппарата клетки / Г.П. Пинаев, В.А. Стручков, Ю.И. Губский // Укр. биохим. журн., 1994. Т .66. - № 4. - С. 18-30.

80. Погорелов, В.М. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом апоптозе / В.М. Погорелов, Г.И. Козинец // Гематол. трансфузиол., 1995. -№ 5. С. 17-24.

81. Попова, E.H. Регуляция фосфоинозитид специфичной фосфолипазы С / E.H. Попова, О.Ю. Плетюшкина, Л.Ю. Щепкина // Биохимия, 2002 . - № 2. - С. 265-270.

82. Попов, Л.С. Генетически программированная смерть клеток (апоптоз) / Л.С. Попов, Л.И. Корочкин // Генетика, 2004. Т. 40. - № 2. -С. 149-166.

83. Проказова, Н.В. Влияние лизофосфатидилхолина на передачу трансмембранного сигнала внутрь клетки / Н.В. Проказова, Н.Д. Звездина, A.A. Коротаева//Биохимия, 1998. -№ 1. С. 38-46.

84. Проскуряков, С.Я. Некроз активная управляемая форма программируемой клеточной гибели / С.Я. Проскуряков, В.Л. Габай,

85. A.Г. Конопляников // Биохимия, 2002. Т. 67. - Вып. 4. - С. 467-491.

86. Пузырев, В. П. Патологическая анатомия генома человека/

87. B. П. Пузырев, В. А. Степанов. Новосибирск: Наука, 1997. - 223 с.

88. Райхлин, Н.Т. Скорость роста опухолевых клеток, лекарственная устойчивость и апоптоз / Н.Т. Райхлин // Актуальные вопросы патологической анатомии. Челябинск, 1996. — С. 32-33.

89. Райхлин, Н.Т. Регуляция и проявления апоптоза в физиологических условиях и в опухолях / Н.Т. Райхлин, А.Н. Райхлин // Вопросы онкологии, 2002. Т.48. — № 2. — С. 159-171.

90. Ровенский, Ю. А. Клеточные и молекулярные механизмы опухолевой инвазии // Биохимия, 1998. Т. 63. - Вып. 1. - С.1204-1221.

91. Ровенский, Ю. А. Морфологические реакции клеток и их нарушения при опухолевой трансформации / Ю. А. Ровенский, Ю. М. Васильев // Канцерогенез, М.: 2000. С.260-283.

92. Самуилов, В. Д. Биохимия программированной клеточной смерти (апоптоза) у животных / В. Д. Самуилов// Сорос, образов, журн., 1996. — № 10-С. 28-32.

93. Самуилов, В.Д. Программируемая клеточная смерть / В.Д.Самуилов, А.В.Олескин, Е.М. Лагунова // Биохимия, 2000. Т. 65. -Вып. 8.-С. 1029-1034.

94. Семиглазов, В.Ф. Минимальный рак молочной железы (профилактика, выявление, лечение) / В.Ф. Семиглазов, А.Г. Веснин,

95. B.М. Моисеенко. СПб.: Гиппократ, 1992. - 342 с.

96. Скулачев, В.П. Снижение внутриклеточной концентрации 02 как особая форма дыхательной системы клетки / В.П. Скулачев // Биохимия, 1994. — № 2. — С. 1910-1912.

97. Слюсарь, H.H. Фосфолипидный состав ядерного матрикса саркомы Калоши / H.H. Слюсарь // Экспериментальная онкология, 1999. Т. 14.1. C. 135-140.

98. Смирнов, B.C. Иммунодифицитные состояния / B.C. Смирнов, И.С. Фрейдлин // СПб: Фолиант, 2000. 568 с.

99. Соколовская, A.A. СД95-дефицитные клетки сублинии Jurkat/A4, усойчивые к лекарственно-индуцированному апоптозу / A.A. Соколовская, Т.Н. Заботина, Д.Ю. Блохин // Экспер. онкол., 2001. Т. 23, №3. - С. 174-180.

100. Спиваков, М. В. Онкогены и опухолевые супрессоры в регуляции Gl- и С2-чекпойнтов клеточного цикла, контролирующих повреждения ДНК / М. В. Спиваков // Сорос, образов, журн., 2001. -№ 14-С.49-57.

101. Сторожаков, Г.И. Роль апоптоза в развитии атеросклероза, ишемии миокарда сердечной недостаточности/ Г.И. Сторожаков, Д.Б. Утешев // Сердечная недостаточность, 2000 г. № 4. - С. 131-134.

102. Стражевская, Н.Б. Структурная липидомика: ДНК-связанные липиды эухроматина, гетерохроматина и ядерного матрикса тимуса и печени крыс / Н.Б. Стражевская, Р.И. Жданов, A.A. Кубатиев // Патогенез, 2004. — №1. — С. 4-8.

103. Стручков, В.А. Структурные и функциональные аспекты ядерных липидов нормальных и опухолевых клеток / В.А. Стручков // Биохимия, 2000. — Т.65. — № 5. — С. 620-643.

104. Стручков, В.А. ДНК-связанные липиды клеток асцитной гепатомы Зейдела и асцитного рака Эрлиха/ В.А.Стручков, Н.Б Стражевская // Экспериментальная онкология, 1989. Т.11. - № 1. - С. 35-39.

105. Стручков, В.А., Стражевская Н.Б. ДНК-связанные липиды: состав и возможные функции // Биохимия, 1993. Т. 58.- №8. - С. 1154-1175.

106. Стручков, В.А. Структурные и функциональные аспекты ядерных липидов нормальных и опухолевых клеток/ В.А.Стручков, Н.Б Стражевская // Биохимия, 2000. Т.65. - Вып. 5. - С.620-643.

107. Таносян, А. Г. Молекулярно-генетические изменения в злокачественных клетках / А. Г. Таносян // Канцерогенез, 2000. — С.50-74.

108. Терентьев, A.A. Жирнокислотный состав хроматина крыс при гепатоцилюлярном раке / A.A. Терентьев, Ю.А. Кузьмин // Архив патологии, 1989. — Т.42, № 12. — С. 1229-1234.

109. Тихомирова, М. М. Генетический анализ / М. М. Тихомирова. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1990. - 280 с.о»

110. Ткачук, В.А. Фосфоинозитидный обмен и осцилляция ионов Ca / В.А. Ткачук // Биохимия, 1999. № 1. - С. 47-56.

111. Трофимов, В.А. Влияние перекиси водорода на спектр липидов в перитонеальных макрофагах и их ядрах / В.А. Трофимов, О.Н. Аксенова, A.A. Дудко, А.П. Власов // Современные наукоемкие технологии, 2004. — № 3. С. 92-93.

112. Турпаев, К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов / К.Т. Турпаев // Биохимия, 2002. Т. 67. - вып.З. - С. 339-352.

113. Филиппов, П.П. Как внешние сигналы передаются внутрь клетки / П.П. Филиппов // Соров. Образов, журн. 1998. - № 3. - С. 28-34.

114. Фильченков, A.A. Апоптоз и рак / A.A. Фильченков, P.C. Стойка // Киев: Морион, 1999. 184 с.

115. Фрейфельд, Е.И. Гематология / Е.И. Фрейфельд. М., 1947. 374 с.

116. Хансон, К.П. Апоптоз: молекулярные механизмы и роль в биологии и медицины / К.П. Хансон // Вопросы медицинской химии, 1997." — №5.-С. 402-407.

117. Хансон, К.П. Апоптоз: современное состояние проблемы / К.П. Хансон // Известия АН. Серия биологическая, 1998. № 2. - С. 134-141.

118. Цыпленкова, В.Г. Апоптоз/ В.Г Цыпленкова, H.H. Бескровнова // Архивы патологии, 1996. № 5. - С. 1015-1020.

119. Чумаков, П.М. Роль гена р 53 в программированной клеточной гибели / П.М. Чумаков // Известия РАН. Серия биологическая, 1998. С. 151156.

120. Чумаков, П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью / П.М. Чумаков // Биохимия, 2000. Т. 65, №1. - С. 34-47.

121. Шпигель, С. Роль сфингозин-1-фосфата в росте, дифференцировке и смерти клеток / С. Шпигель // Биохимия, 1998. Т. 63. - С. 83-88.

122. Штам, Т.А. Чувствительность к тамоксифену клеток опухоли молочной железы MCF-7 не зависит от уровня экспрессии гена р53 / Т.А. Штам, P.A. Пантина, Е.Ю. Варфоломеева, М.В. Филатов // Вопросы онкологии, 2007. Т. 53, № 2. - С. 194-199.

123. Штиль, A.A. Развитие множественной лекарственной устойчивости как срочный ответ клетки на экзогенные воздействия /

124. A.A. Штиль // Биол. мембраны, 2003. Т. 20, №3. - С. 236-243.

125. Щербаков, В.И. Макрофаги: новая функция рострегулирующая /

126. B.И. Щербаков // Усп. совр. биол., 1990. № 1. - С. 106-119.

127. Элиот, В. Биохимия и молекулярная биология / В. Элиот, Д. Элиот. М.: НИИБМХ, 1999. 372 с.

128. Alan, W. Signalling shortcuts: cell-surface receptors in the nucleus / W. Alan, M. Ulrich // Nat. Rev. Molecular Cell Biologi, 2002. Vol. 3. - P. 697702.

129. Albi, E. Sphingomyelin synthase in rat liver nuclear membrane and chromatin / E. Albi, M.V. Magni // FEBS Letters, 1999. Vol. 460. - P. 369-372.

130. Albi, E. A possible role of cholesterol-sphingomyelin/phosphatidylcholine in nuclear matrix during rat liver regeneration / E. Albi, S. Cataldi, G. Rossi, M.V. Magni // Journal of Hepatology, 2003. Vol. 38.-P. 623-628.

131. Amundson, S.A. Roles for p53 in growth arrest and apoptosis: putting on the brakes after genotoxic stress / S.A. Amundson, T.G. Myers, A.J.jr. Fornace //Oncogene, 1998.-V. 17. P. 3287-3289.

132. Andersson, J. Worse survivalfor TP53 (p53)-mutated breast cancer patients receiving adjuvant CMF/ J. Andersson., L. Larsson, S. Klaar // Ann. Oncol., 2005. Vol. 16. - P.743-748.

133. Arai, N. Immunologically distinct p53 molecules generated by alternative splicing / N. Arai, D, Nomura, K. Yokota, D. Wolf, E. Bril, O. Shohat, V. Rotter // Mol Cell Biol., 1986. V. 6. - P.3232-3239.

134. Ashkenazi, A. Death receptors. Signaling and modulation / A. Ashkenazi, V.M. Dherin // Science, 1998.-V. 281.-P. 1305-1308.

135. Balint, Zs. Lipids as integral constituents of nuclear and chromatin fractions in Ehrlich ascites tumor cells / Zs. Balint // Bsic Appl. Histochem, 1987. -V. 31, №3.- P. 365-376.

136. Barnard, J.A. The cell biology of transforming growth factor beta / J.A. Barnard, R.M. Lyons, H.L. Mases // Biochem. Biophys. Acta., 1990. -V. 1032.-P. 79-87.

137. Benjamini, E. Immunology, a short course / E. Benjamini, G. Sunshine, S. Leskowitz. WILEY - LISS, New York, 1996. - 451 p.

138. Berns, E. p53 protein accumulation predicts poor response to tamoxifen therapy of patients with recurrent breast cancer / E. Bems, J. Klijn, van W. Putten // J. Clin. Oncol., 1998.-Vol. 16.-P.121-127.

139. Berridge, MJ. Elementary and global aspects of calcium signaling / M.J. Berridge //J. Exper. Biol., 1997 a. -V. 200. P. 315-319.

140. Berridge, MJ. Calcium a life and death signal / M.J. Berridge, M.D. Bootman, P. Lipp // Nature, 1998. - V. 395. - № 6703. - P. 645-648.

141. Berridge, M.J. Inositol triphosphate and calciuml signaling / M.J. Berridge//Nature, 1993. -V. 361. № 6410. P. 315-325.

142. Betram, J. S. The molecular biology of cancer / J. S. Betram // Molecular Aspects of Medicine, 2001. V.21, № 6. - P. 167-223.

143. Beutler, B. Tumor necrosis factor in the pathogenesis of infectious diseases / B. Beutler, G.E. Grau // Crit. Care Med., 1993. V. 21. - P. 423.

144. Beyaert, R. Molecular mechanisms of tumor necrosis factor-induced cytotoxicity.What we do understand and what we do not / R. Beyaert, W. Fiers // FEBS Letter, 1994. V. 340. - P. 9.

145. Biron, Ch. Effects of IL-12 on immune responses to microbial infections: a key mediator in regulating disease outcome / Ch. Biron, R. Gazzinelly // Current Opinion in Immunology, 1995. V. 6. - P. 485-493.

146. Boesze-Battaglia, K. Collagen-induced changes in platelet membrane lipid asymmetry / K. Boesze-Battaglia, RJ. Schimmell // Biophys. J., 1994. -V. 66. — N 2. — Pt. 2. P. 60.

147. Bona, C. Textbook of immunologi, sekond ed / C. Bona, F. Bonilla. -Harwood Acad. Publ., Amsterdam, 1996. 406 p.

148. Bortner, C.D. The role of DNA fragmentation in apoptosis /

149. C.D. Bortner, N.B.E. Oldenburg, J.A. Cidlowski // Trends in Cell Biol., 1995. -V. 5.-P. 21.

150. Bourdon, J. C. P 53 isoforms can regulate p53 transcriptional activity / J. C. Bourdon, K. Fernandes, F. Murray-Zmijewski, G. Liu, A. Diot,

151. D. P. Xirodimas, M. K. Saville, D. P. Lane // Genes Dev., 2005. -V. 19. -P.2122-2137.

152. Bourdon, J.C. p53 and its isoforms in cancer / J. C. Bourdon // Cancer, 2007. V. 97, № 3. - P 277-359

153. Bredesen, D. E. Neuronal apoptosis: genetic and biochemical modulation. In Apoptosis II: The molecular basis of apoptosis in disease / D. E. Bredesen, L. D. Tomei, F. O. Cope // Cold Spring Harbor Lab. Press., 1994. -P.397-421.

154. Bursch, W. Cell de ath by apoptosis / W. Bursch // Growth regulation and carcinogenesis, 1992. Vol. 2. P. 327-341.

155. Burley, S. K. Biochemistry and structural biology of transcription factor IID (TEIID)/ S. K. Burley, R. G. Roeder // Annu. Rev. Biochem, 1996. Vol. 65. P. 769-799.

156. Butthe, T.M. Oxidative stress as a mediator of apoptosis / T.M. Butthe, P.A. Sadstrom // Immunol. Today, 1994. V. 15. - P. 7-10.

157. Cabelguenne, A. p53 Alterations Predict Tumor Response to Neoadjuvant Chemotherapy in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma: A Prospective Series. J. of Clin / A. Cabelguenne, H. Blons, de I. Waziers // Oncol., 2000. P. 1465-1473.

158. Casiano, C. A. Mol.Cell Proteomics / C. A. Casiano, M. Mediavilla-Varela, E. M. Tan., 2006. 72 c.

159. Cocco, L. Nuclear localization and signalling activity of inositol lipids./ L.Cocco, N.M.Maraldi, S.Capitani, A.M.Martelli, F.A.Manzoli //J. Anat. Embryol., 2001. V. 106. - Suppl 1. - P. 31 -43.

160. Cocco, L. New frontiers of inositide-specific phospholipase C in nuclear signalling./ L. Cocco, N.M. Maraldi, F.A.Manzoli //Eur. J. Histochem., 2004.-V. 48.-N1.-P. 83-88.

161. Clarke, R. Ctlluar and molecular pharmacology of antiestrogen action and resistance / R. Clarke, Leonessa F., J. N. Welch, T. C. Skaar // Pharmocol. Rev., 2001. Vol. 53. -P.25-71.

162. Currach, M.E. bax- deficiency promotes drug resistance and oncogenic transformation by attenuating p53-dependent apoptosis / M.E. Currach, T.M.F. Connor, C.M. Knudson // Proc. Natl. Acad. Sci USA., 1997. V. 94. -P. 2345-2349.

163. Danoff, S.K. Characterization of a membrane protein from mtdifmg the inhibition of inasitol 1,4,5,-triphosfati / S.K. Danoff, S.H. Snyder // Biochim., 1998.-N3.-P. 5-9.

164. Dinarello, C. The role of interleukin-1 in disease / C. Dinarello, S. Wolff//N. Engl. J.Med., 1993.-V. 328.-P. 106-115.

165. Dobash, Y. Overexpression of p53 as a possible prognostic factor in human thyroid carcinoma / Y. Dobash, A. Sakamoto, H. Sigimura // Amer. J. Surg. Path., 1993.-V. 17.-P. 375-381.

166. Downey, G.P. Intracellular signalling in neutrophil priming and activation. / G.P. Downey, T. Fukushima, L. Fialkow, T.K. Waddel // Cell Biology., 1995.-V. 6.-P. 345-356.

167. Duffy, M.J. Biochemical markers in breast cancer: Which'-ones are clinically usefue? / M.J. Duffy // Clin. Biochem., 2001. Vol. 34. - P. 347-352.

168. Ford, D. Genetic heterogeneity and penetrance analysis of the BRCA 1 and BRCA 2 genes in breast cancer families / D. Ford, D. Easton, M. Stratton // Am J Hum Genet., 1998. Vol. 62. - P. 676-689.

169. Flaman, J. M. The human tumour suppressor gene p53 is alternatively spliced in normal cells / J. M. Flaman, F. Waridel, A. Estreicher, A. Vannier, J. M. Limacher, D. Gilbert, R. Iggo, T. Frebourg // Oncogene, 1996. V. 12. -P.813-818

170. Galazka, K. Apoptosis and proliferative activity in primary gastric lymphoma / K. Galazka, J. Stachura // Virch. Arch., 1999. V. 435. - P. 244.

171. Gajdos, O. Selektive estrogen receptor modulators as a new therapeutic dreg group: concept to reality in a decade / O. Gajdos, V. C. Jordan // Clin. Breast.

172. Cancer, 2002. Vol. 2. -P.272-281.

173. Gao, X. Recessive oncogenes: current ststus / X. Gao, K. Honn // Path. Oncol. Res., 1995. V. 1. - P. 7-22.

174. Georgiev, G. P. Tumor progression and metastasis: Genome structure and function / G. P. Georgiev, S. L. Kiselev, E. M. Lukanidin // Kluver AcadPubl, Netherlands, 1997.-C.217-237.

175. Gordon, S. Molecular immunobiology of macrophages: recent progress / S. Gordon, S. Clarke, D. Greaves, A. Doile // Current Opinion in Immunology, 1995.-V. 7.-P. 24-33.

176. Hale, A.J. Apoptosis: molecular regulation of cell death / A.J. Hale, C.A. Smith, L.C. Sutherland, V.E. Stoneman, V.L. Longhthorne, A.C. Culhane, G.T. Williams // The European Journal of Biochemistry, 1996. V. 236. - P. 1-26.

177. Hanahan, D. The hallmarks of cancer / D. Hanahan, R.A. Weinberg // Cell, 2000. V. 100. - P. 57-70.

178. Hannun, Y.A. The sphingomyelin cycle: a prototypic sphingolipid signaling pathway// Y.A.Hannun, R.M.Bell // Adv. Lipid. Res., 1993. V. 25. -Nl.-P. 27-41.

179. Hannun, Y.A. The sphingomyelin cycle and the second messenger function of ceramide / Y.A. Hannun // J. Biol Chem. 1994. - N5. - P. 3125-3128.

180. Haslett, C. Why is apoptosis important to clinicians? / C. Haslett, J. Savill // BMJ, 2001. V. 322. - P. 1499-1509.

181. Harris, S.L. The p53 pathway: positive and negative feedback loops / S. L. Harris, A. J. Levine // Oncogene, 2005. -V. 24, № 17. -P.2899-3907.

182. Heinrich, P. Interleukin-6 and the acute phase response / P. Heinrich, J. Castell, T. Andus // Biochem. J., 1990. V. 265. - P. 621-629.

183. Hoffman, D. C. Macronuclear gene-sized molecules of hypotrichs / D. C. Hoffman, R. C. Anderson, M. L. DuBois, D. M. Prescott // Nucl. Acids, 1995.-V. 23.-P. 1279-1283.

184. Horn, H. F. Coping with stress: multiple ways to activate p53 / H. F. Horn, K. H. Vousden // Oncogene, 2007. V. 26, № 9. - P.1306-1322.

185. Huwiler A. / A. Huwiler, T. Kolter, K. Sandhoff// Biochim, Biophys., 2000. — C.63-99.

186. Iin, F. Secretory leukocyte protease inhibitor a macrophage product induced by and antagonistic to bacterial lipopolysaccharide / F. Iin, C. Nathan, D. Radzioch, A. Ding // Cell, 1997. V. 88, № 3. - P. 417-426.

187. Jabs, T. Reactive oxygen interneediates as mediators of programneed cell death in plants and animals / T. Jabs // Biochem. Pharmacol, 1999. № 3. -P.231-245.

188. Janeway, Ch.A. Immunobiology / Ch.A. Janeway, P. Travers // London: Current Biology Ltd., 1994. 480 p.

189. Jones, D.R. Linking lipids to chromatin / D.R Jones, N. Divecha // Curr. Opin. Genet. Dev., 2004. -N 2. P. 196-202.

190. Kehrl, J. Transforming growth factor-is a potent negative regulator of human lymphocytes / J. Kehrl, A. Taylor, S. Kim, A. Fauci // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1991. -V. 628. P. 345-354.

191. Kobayashi, D. Protein kinase c inhibitors augment tumornecrosis -factor induced apoptosis in normal human diploid cells / D. Kobayashi, N. Watanabe, N. Yamauchi // Chemotherapy, 1997. -V. 43. - P. 415-423.

192. Kolomiytseva, I.K. Nuclear and chromatin lipids: metabolism in normal and gamma-irradiated rats./ I.K. Kolomiytseva, T.P.Kulagina,

193. N. Markevich, V.I. Archipov, L.V. Slozhenikina, L.A. Fialkovskaya, N.I. Potekhina // Bioelectrochemistry, 2002 . V. 58. - N1. - P.31-39.

194. Kolpakov, F. A. Gene Net: a database for gene networks and its automated visualization / F. A. Kolpakov, E. A. Ananko, G. B. Kolesov, N. A. Kolchanov // Bioinformatics, 1998. V. 14. - P.529-537.

195. Kolpakov, F. A. Interactive data input into the Gene Net database/ F. A. Kolpakov, E. A. Ananko // Bioinformatics, 1999. V. 15. - P.713-714.

196. Lee, T. H. Transcription of eukaryotic protein-coding genes / T. H. Lee, R. A. Young // Annu. Rev. Genet, 2000. -V. 34. P. 77-137.

197. Lever, A.F. Is Cancer releted to hypertension or to its treatment? / A.F. Lever, D.J. Hole, G.T. Mclnnes // Clin. Esper. Hypertens, 1999. V. 21. - № 5/6.-P. 937-946.

198. Levine, A. J. The P53 pathway: what questions remain to be explored? / A. J. Levine, W. Hu, Z. Feng // Cell Death Differ, 2006. № 6. -P. 1027-1063.

199. Liscovitch, M. Crosstalk among multiple signal-activated phospholipases / M. Liscovitch // Trends in Biochem Sci., 1992. V. 17. - P. 393.

200. Lowe, S.W. Apoptosis in cancer / S.W. Lowe, A.W. Lin // Carcinogenesis, 2000. V. 21. - 3. P. 485-495.

201. Luttrell, L.M. G-protein-coupled receptors and their regulation / L.M. Luttrell // Adv. Second Messenger Phosphohrotein Res., 1997. № 31. -P. 263-277.

202. Malkin, D. Germ-line p53 mutations in a familial syndrome of breast cancer, sarcomas and othe neoplasms / D. Malkin, F. Li, L. Strong // Science, 1990.-V. 250.-P. 1233.

203. Maraldi, N.M. Nuclear lipid-dependent signal transduction in human osteosarcoma cells / N.M.Maraldi, S.Marmiroli, L.Cocco, S.Capitani, O. Barnabei, F.A.Manzoli //Adv. Enzyme Regul, 1997. -V. 37. P. 351-375.

204. Marshall, C.J. Specificity of receptor tyrosine kinase signalindg / CJ. Marshall // Cell, 1995. № 64. -P. 310-319.

205. Martelli, A.M. The generation of lipid signaling molecules in the nucleus. / A.M.Martelli, S.Capitani, L.M.Neri // Prog Lipid Res., 1999. V. 38. -N4.-P. 273-308.

206. Martelli, A.M. Nuclear inositol lipid signaling and its potential involvement in malignant transformation / A.M. Martell, L. Manzoli, I. Faenza, R. Bortul, A. Billi, L. Cocco // Biochim. Biophys. Acta., 2002. V. 1603. - N 1. -P. 7-11.

207. Martelli, A.M. Nuclear inositides: facts and perspectives / A.M. Martelli, L. Manzoli, L. Cocco // Pharmacology & Therapeutics, 2004. -V. 101.-P. 47-64.

208. Moll, U.M. Transcription-independent pro-apoptotic functions of p53 / U. M. Moll, S. Wolff, D. Speidel, W. Deppert // Curr Opin Cell Biol., 2005.1. V. 17, № 6. — P.631-637.

209. Muller, G. PKC zeta is a molecular switch in signal transduction of TNF-a, bifimctionally regulated by ceramide and arachidonic acid / G. Muller, M. Ayoub, P. Storz, J. Rennecke, D. Fabbro, K. Fflzenmaier // EMBO J., 1995. -V. 14.-P. 1961.

210. Nakamura, H. Redox regulation of cellular activation / H. Nakamura, K. Nakamura, J. Yodoi // Annu. Rev. Immunol., 1997. V. 15. - P. 351-369.

211. Nathanson, K. Breast cancer genetics: what we know and what we need • / K. Nathanson, R. Wooster, B. Weber // Nat. Med., 2001. V. 7. - P. 552-556.

212. Obeid, L.M. Programmed cell death induced by ceramide / L.M. Obeid, C.M. Linardic, L.A. Koralak, Y.A. Hannum // Science, 1993. V. 259. - P. 1769.

213. O'Connor, L. Apoptosis and cell division / L. O'Connor, D.C. Huang, L.A. O'Reilly // Curr. Opin. Cell. Biol., 2000. -V. 12. P. 257-263.

214. Ohta, H. A possible role of sphingosine in induction of apoptosis by tumor necrosis factor a in human neutrophilis / H. Ohta, Y. Yatomi, E.A. Sweeney, S. Hakomori, Y. Igarashi // FEBS Lett., 1994. V. 355. - P. 267.

215. Osborn, B.A. Essential genes that regulate apoptosis / B.A. Osborn, L.M. Schwartz // Trends in Cell Biol., 1994. V. 4. - P. 245-248.

216. Pardon, J.F. Lipids of politens and metafase chromasom / J.F. Pardon, M.N.F. Wilkins//New Engl.J.Med., 1997.-V. 336.-P. 1276-1282.

217. Parmer, P.M. Nitric oxide induces apoptosis/ P.M Parmer, A.G. Ferrge //Nature, 1993.-P. 524-525.

218. Ray, P. S. Two internal ribosome entry sites mediate the translation of p53 isoforms / P. S. Ray, R. Grover, S. Das. EMBO Rep, 2006.

219. Pedersen, A. G. The biology of eukaryotic promoter prediction — a review / A. G. Pedersen, P. Baldi, Y. Chauvin, S. Brunak // Computers and Chemistry, 1999. V. 23. - P. 191-207.

220. Peller, S. TP53 in hematological cancer: low incidence of mutations with significant clinical relevance / S. Peller, V. Rotter // Hum Mutat., 2003. — V. 21, № 3. — P.277-361.

221. Petitjean, A. TP53 mutations in human cancers: functional selection and impact on cancer prognosis and outcomes / A. Petitjean, M. I. Achatz, A. L. Borresen-Dale // Oncogene, 2007. -V. 26, № 15. -P.2157-2222.

222. Reisman, D. Two promoters that map to 5"-sequences of the human p53 gene are differentially regulated during terminal differentiation of human mieloid leukemic cell. / D. Reisman, V. Rotter // Oncogene, 1989. V. 4. P.945-953.

223. Pietsch, E.C. Polymorphisms in the p53 pathway / E. C. Pietsch, O. Humbey, M.E. Murphy // Oncogene, 2006. V. 25, № 11. - P.1602-1613

224. Roberts, S. Mechanisms of action of transcription activation and repression domains / S. Roberts // Cell Mol. Life Sci., 2000. -V. 57. P. 1*149-1160.

225. Rohaly, G. A novel human p53 isoform is an essential element of the ATR-intra-S phase checkpoint / G. Rohaly, J. Chemnitz, S. Dehde, A. M. Nunez, J Heukeshoven, W. Deppert, I. Dornreiter // Cell, 2005. V.122. - P.21-32.

226. Ronen, D. Expression from the murine p53 promoter is mediated by factor binding to a downstream helix- loop-helix recognition motif / D. Ronen, V. Rotter, D. Reisman //Proc. Natl. Acad. Sci., 1991. -V. 88. P. 4128-4132.

227. Sablina, A.A. The antioxidant function of the p53 tumor suppressor / A. A. Sablina, A.V. Budanov, G. V. Ilyinskaya// Nat Med., 2005. V.l 1, № 12. -P.1306-1346.

228. Seely, A.J. Cell membrane expression (connectivity) regulates neutrophil delivery, function and clearance. / A.J. Seely, J.L. Pascual, N.V. Christou // Crit. Care, 2003. V. 7. - P. 291-307.

229. Sengupta, S. p53: traffic cop at the crossroads of DNA repair and recombination / S. Sengupta, C. C. Harris // Nat Rev Mol Cel. Biol., 2005. V. 6,1231. P.44-99.

230. Shwartz, L.M. Cold throughts of death: the role of ICE proteases in neuronal cells death / L.M. Shwartz, C.E. Milligan // Trends in Neurosci, 1996. — V. 19.-P. 555-562.

231. Smale, S. T. The initiator element: a paradigm for core promoter heterogeneity within Metazoan protein-coding genes / S. T. Smale, A. Jain, J. Kaufmann, K. H. Emami, I. P. Garraway // Cold Spring Harbor Lab. Press., 1998.-V. 63. P. 21-31.

232. Smith, M.R. Phospholipase C-gamma 1 can induce DNA synthesis by a mechanism independent of its lipase activity / M.R. Smith, Y.L. Liu, N.T. Matthews, S.G. Rhee, W.K. Sung, H.F. Kung // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1994. -V. 91.-N 14.-P. 6554-6558.

233. Somia, N. Gene therapy: trials and tribulations / N. Somia, I. M. Verma //Nature Reviews: Genetics, 2000. V.l, № 2. - P. 91-190.

234. Soussi, T. Assessing TP53 Status in Human Tumours to Evaluate Clinical Outcome / T. Soussi, C. Beroud // National Reviews Cancer, 2001. V.3, № 1. -P.233-473.

235. Soussi, T. Cloning and characterisation of a cDNA from Xenopus laevis coding for a protein homologous to human and murine p53 / T. Soussi , Caron de, C. Fromental, M. Mechali // Oncogene, 1987. V.l. P. 71-78.

236. Steller, H. Apoptosis / H. Steller // Science, 1995. V. 267. - P. 14431449.

237. Struchkov, V.A. DNA-bound lipids of normal and tumor cells: retrospective and outlooks for functional genomics / V.A. Struchkov, N.B. Strazhevskaya, R.I. Zhdanov // Bioelectrochem, 2002. V. 58. - 1. - P. 2330.

238. Suffys, P. TNF-mediated cytotoxicity is correlated with phospholipase A activity, but not with arachidonic acid release per se / P. Suffys, R. Beyaert, D. De Valck, B. Vanhaesebroeck, F. Van Roy, W. Fiers // Eur. J. Biochem, 1991. -V. 195.-P. 465.

239. Suliman, A. Intracellular mechanisms of TRAIL: apoptosis through mitochondrial-dependent and -independent pathways / A. Suliman, A. Lam, R. Datta, R.K. Srivastava // Oncogene, 2001. V. 20. - 17. - P. 2122-2133.

240. Szabo, C. Population genetics of BRCA 1 and BRCA2 / C. Szabo, M.-C. King // Am J. Hum. Genet, 1997. V. 60. - P. 1013-1020.

241. Tamija-Koizumi, K. Nuclear lipid metabolism and signaling / K. Tamija-Koizumi // J. Biochem., 2002. -V. 132, № 1. P. 13-22.

242. Tarapore, P. Loss of p53 and centrosome hyperamplification / P. Tarapore, K. Fukasawa // Oncogene, 2002. V. 21, № 40. - P.6234-6274.

243. Thornton, P.D. Characterisation of TP53 abnormalities in chronic lymphocytic leukaemia / P. D. Thornton, A. M. Gruszka-Westwood, R. A. Hamoudi //Hematol J., 2004. -V. 5, № 1. -P.47-101.

244. Thelen, M. Neutrophil signal transduction and activation of the respiratory burst / M. Thelen, B. Dewald, M. Baggiolini // Physiol. Rev., 1993. -V. 73.-P. 797-821.

245. Theodarakis, P. Unmasking of prolifferation restraining activity of the anti-apoptosis / P. Theodarakis, C. D'sa-Eipper, T. Subramanian // Oncogene, 1996.-V. 12, №8.-P. 1707-1713.

246. Thomson, A.(Ed.) The Cytokine Hand book / A.(Ed.). Thomson // London: Acad. Press., 1992. 418 p.

247. Ulevitch, R J. Recognitionol of Gram negative bacteria and endotoxin by the innate immune system / R.J. Ulevitch, P.S. Tobias // lurnet opinion in Immunology, 1999.-V. 11.-P. 19-22.

248. Venkitaraman, A. Breast cancer genes and DNA repair / A. Venkitaraman // Science, 1999. V. 286. - P. 1100-1102.

249. Wada, R. The possible association between expression of p53 and development in depresses type colorectal carcinoma / R. Wada, H. Miwa, H. Abe // Acta. Histochem. Cytochem., 1993. V. 26. - P. 21-26.

250. Wang, H.-G. Apoptosis regulation by interaction of Bcl-2 protein and Raf-1 kinase / H.-G. Wang, T. Mijashika, S. Takajama // Oncogene, 1994. V. 9. -P. 2751-2756.

251. Wang, H.-G. Apoptosis: a functional paradigm for programmed plant cell death induced by a host-selective phytotoxin and invoked during development / H.-G. Wang, R.M. Bostock, D.G. Gilchourist // Plant Cell, 1996. № 8. - P. 375391.

252. Wiegmann, K. Functional dichotomy of neutral and acidic sphingomyelinases in tumor necrosis factor signaling / K. Wiegmann, S. Schutze, T. Machleidt, S. Witte, M. Kronke // Cell, 1994. V. 78. - P. 1005.

253. Xu Y. p53 induces differentiation of mouse embryonic stem cells by suppressing Nanog expression / Y. Xu, T. Lin, C. Chao, S. Saito // Nat Cell Biol., 2005. V.7, № 2. - P.165-236.

254. Yang, E. Bad, a heterodimeric partner for BCL-XL and BCL-2, displaces Bax and promotes cell death / E. Yang, J. Zha, J. Jockel // Cell, 1995. -V. 80.-P. 285-291.

255. Yao, B. Phosphorylation of Raf by ceramide-activated protein kinase / B. Yao, Y. Zhang, S. Dellkat, S. Mathiass, S. Basu, R. Kolesnick //Nature, 1995. -V. 378.-P. 307.

256. Yoshinori, N. Alarm lipids / N. Yoshinori // J. Biochem., 2002. -V. 131.-P. 283-284.

257. Zhang, H. Sphingosine stimulates cellular proliferation via a protein kinase C-independent pathway / H.Zhang, N.E.Buckley, K. Gibson, S.Spiegel // J. Biol. Chem., 1990.-V. 265.-N l.-P. 76-81.

258. Zhou, X. Evidence for a local immune response in atherosclerosis. CD4+ T cells infiltrate lesions of apolipoprotein-E-deficient mice / X. Zhou, S. Stemme, G.K. Hansson // Am. J. Pathol., 1996. V. 149. - 2. - P. 359-366.

259. Zweier, L. NADPH oxidase activation increases the sensitivity of intracellular Ca stores of inasitol 1,4,5,-triphosfati in human endothelial cell / L. Zweier, R.C. Jieglstin// Bioll.Chem ™nn -N 21.-P. 1579-1585.

Информация о работе

Никулин, Артем Валерьевич
кандидата биологических наук
Саранск, 2010
ВАК 06.02.01

Диссертация

Структурно-функциональная организация гена P53 свиней и его полиморфных вариантов - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы