Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Состояние оксидантной, антиоксидантной и иммунной системы при иммобилизационном стрессе и разработка принципов их биохимической коррекции (экспериментально-клиническое исследование)

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Состояние оксидантной, антиоксидантной и иммунной системы при иммобилизационном стрессе и разработка принципов их биохимической коррекции (экспериментально-клиническое исследование)"

«« «и

, 3 ©л

АЩШИЯ ШЖ ШШУЕЖЕИ УЗБЕКИСТАН ИВСШТУТ Ш1Ш5ШИ

На пря'яят рукописи УДК 616-022:5Г2..С!Г7 Л

А1ШТ0Ш Лала Загадовна

СОСТОЯНИЕ ОКПЩЩШОЙ, АНШОКСИДАНШОЙ И ИММУННОЙ СИСТЕМЫ Ш ШЮНШЗАШОВНШ СТРЕССЕ И РАЗРАБОТКА ПБШШОВ ИХ ШОМЙЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ (экспвриментально-ялзначеское исследование)

03.00.04. - биологическая хгмая

АВТОРЕФЕРАТ диссертации нз соискннив ученой СТБПЭЕИ кандидата цядрп^уодктут на ух

ТАШКЕНТ -1995 г

В&йота выполнена в Ташкентском педиатрическом медицинском институте

Иаучннй руководитель -Официальные оппоненты -

Ведущее учреждение

доктор медицинских наук, профессор РЛ'Хултанав

доктор медицинских наук, профессор АЛ.Айвдпв доктор биологических наук ПЛирхашдова

Первый Ташкентский Государственный Медицинский институт

Защита с ос той таг

¡в

года в

часов на заседании специализированного Совета Д 015.16.21 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук щя Институте йисошмил АН РУз (700125, г.Ташкент, проспект {¿.Горького, 56).

С диссертацией мпхно ознакомиться в йийлиотеде Иксгатута гйятнта АН ЕГз

Автореферат рвасслда хад г.

Ученый секретарь стютщадизировааного Совета, доктор биологических наук

С.А.ЕУШН0В

■ОШЯ ХАРАШШСЗЙКА РЛШШ

^ дуальность те мы. Неизбежные стресон ртановятся неотъеы -лемой стороной существования человека и приводят к нарушению структуры и функции практически всех систем органивма» особенно нейроэндокринной, шдуниой системы и связанного'о ним метаболизма. Нарушение структура мембран обуславливает нарушение рецепции клеток, которые такие. могут оказать непосредственно отрицательное влияние на биохимические процессы в клетке. Молекулярные механизмы трансформации клеток И нарушения метаболизма при стрессовых воздействиях следует связывать со свободнорадикальным (СРО) повреждением мембран,переокислением липидов (ПОЛ), нарушением метаболизма белков и нуклеиновых кислот (Владимй£ов Ю.А., 1991, Дрыгин А.Н. и соавт. IS92, Николаев А.И., 1992).

В связи с этим изучение влияния стрессовых факторов на организм экспериментальных животных, на состояние клеточных мембран их оксидантной и антиоксидантной систем.» а также иммунологического статуоа является весьма актуальным.

Нарушение структуры и.функции мембран различных органов и клеток при накоплении в организме продуктов ПОЛ монет оказать, выраженное влияние на проницаемость таток (ферментёшя), нарушение образования медиаторов иммунного статуса органивма (Ибрагимов У.К. 1992,1993, Николаев А.И* 1992, Султанов Р.Г. IÖ94). В то «а время влияние продуктов ПОЛ клеточных мембан н'а иммунную систему орГа -ниэма, на показатели обмена веществ не исследовались.

Ддя предотвращения нарушений, происходящих при воздействии стреооовых факторов, для регуляции окислительной, антиокислительной системы, ферментных и иммунных на рушений (на органном, оубклето-' чйом и молекулярном уровне) необходимо разработать принципы их кор- ' рэкции. Исследование действия препарата компливита - комплекс витаминов (A,E|C,Bj,Bg,Bj2»P»PP) с микроэлементами (цинк, железо, магний, селен й другие), а также ищуномодулятора нуклеината натрия для коррекции биохимических и иммунологических реакций при стрессовых воздействиях явлйется новым направлением. . .

Цель и задачи работы. Целью настоящего исследования явилось изучение состояния оксидантной и антиоксидантной систем йммунных органов, их взаимосвязь о показателями иммунологических сдшгов в эксперименте при иммобилизационном отресов у экспериментальных крыс.и у детей, подвергнутых функциональному натяжению шиной

Беллера при переломах бедренной кости, а также разработка методов их биохимической коррекции. Дня достижения этой цели были поставлены следующие экспериментальные задачи:

- Исследовать состояние перекисного окисления липидов и анти -оксидантной системы (АОС) в органах иммунной системы и печени при иммобилизационном стрессе у крыс в эксперименте и в крови у детей, подвергнутых функциональному вытяжению при перелодах бедренной кости.

- Изучить состояние иммунных сдвигов при иммобилизации в экс-перимонтё и в клинике у детей с переломами бедренной кости.

- Изучить взаимозависимость между биохимическими и иммунологическими изменениями и разработать диагностические и прогностичес -кие критерии динамики иммобилизационного стресса.

- Провести сравнительный анализ аффективноети применения ком -лишта, нуклеиНата натрия и их сочетанного воздействия для'коррек -ции выявленных биохимических й иммунологических изменений при иммо-йилизатеонном стрессе у крыс и функциональном вытяжении у детей.

Научная новизна работы: . ., ;

. - На экспериментальном и клиническом материале выявлена акти -вация ПОЛ и недостаточность ДОС в органах иммунной системы и крови при иммобилизационном стрессе.

- Путем комплексного исследования йюхимических и иммунологи, -ческих показателей крови и органов иммунной системы (тимуса и селезенки) установлены динамика иммунных сдвигов при иммобилизационном стрессе.

- Выявлена взаимозависимость изменения ПОЛ, АОС, фагоцитоза и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) у экспериментальных крыс и у больных^детей и разработаны диагностические критерии их течения.

- Экспериментально обоснована и клинически проверена целесообразность применения комплишта и нуклеина та натрия для коррекции выявленных биохимических и иммунологических сдвигов при иммобилизационном стрессе и их значительная эффективность при сочетаняом введении.

Теоретическая и Практическая вднкрсть работы;

- Установлены возможные пути реализации иммобилизационного стресса на динамику изменений ПОЛ, активность ферментов АОС органов иммунной системы и крови в эксперименте и в клинике.

- Результаты анализа оиохимических и иммунологических показа -гелей дают возможность разработки диагностических и прогностических критериев тяжести патологического процесса.

- Коррекция выявленных биохимических и иммунных нарушений при иммобилизационном стрессе применением комплищта и нуклеина та натрия имело положительное влюпще на регулящю обменных процессов (ПОЛ, АОС) и иммунных сдвигов.

- Установленные в работе теоретические положения включены в соответствующие разделы лекционных курсов кафедр биологической химий ТашПМИ и кафедры травматологии и ортопедии, а практические рекомендации переданы в травматологические отделение клиник ТэиШН.

Положения, внносимне на защиту:

- Иммобилизационный стресс дестабилизирует мембрану клеток-иммунных органов, приводя к активации процессов ПОЛ и нарушению ак -тивности АОС.

- В процессе иммобилизационного стресса обнаружены изменения иммунного статуса организма.

- Применение компливита и нуклеина та натрия проявляет высокую эффективность в устранении биохимических и иммунологических сдвигов при иммобилизационном стрессе.

Аппобашм диссертации.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на XI Всесоюзной конференции "Микроэлементы в биологии и их применение в сельском хозяйстве и медицине", 1990 г г.Самарканд, на I съезде молодых ученых-медиков и враче!! Узбекистана г.Андижан 1991 г., на I научной конференции биохимического общества Республики Таджикистан "Проблемы биохимии" г.Душанбе 1993 г, на II конференции йюхимиков Узбекистана г.Ташкент 1993 г.

Птйпикаши. По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Объем и структура диссертатад.

Диссертация изложена на 117 страницах машинописи, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, описания собственных данных, обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 155 отечественных и 55 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В соответствии с доставленными задачами проводника наш исследования были разделены на 2 части - экспериментальную и кдпн:1чес1ув.

В эксперименте о целью изучения биохимических и свяванных о ними иммунологических изменений в процессе развитая стреооа МЫ попользовали метод Седье - иммобилизация животных на спине а течении 6 часов. .

Опыты проводили на 100 молодых белых tíaопородных крысах-оамцах массой IIQ-I60 грамма В экспериментальной части работа приведено 2 серии опытов. В первой серии на крысах изучено влияние иммобилиаа -ционного стресса на исследуемые показатели, Забой животных производили после 6-часовой иммобилизации путем дакапитании, В качестве контроля служили интактние крысы.

Bo II оерии опытов кивотные подвергались шестичасовому ишоба-лизационному стресоу и получали испытуемые препарата, Еивотнне I группы получали нуклеинат натрия Ю мг на 100 г веса; ц - комшшвит -I таблетка, растворенная в 0,9 мл физ.раствора по 0,1 мл на 100 г веса; III - сочетание нуклеината натрия и кошиишта) 1У группе (контроль I) - физиологический раствор. Препараты вводйлийь ёяеднвв-но в течении 16 дней при помощи аьнда.

Забой животных проводили на 16 дешь опыта после введения испы -туемых препаратов. При забое учитывали массу твмуоа* селезенки й надпочечников.

Для оценки состояния иммобилкзационного стреооа у взятых в опыт животных и у больных исследовали биохимические я ишунологячео-кие показатели крови, гомогенатов печени, тамуса й селезенки. Интенсивность свечения тадроксильных радикалов гомогенатов оргёйов опре -деляли на хемилюминометре XJAi Щ-01 по методу Владашрова Ю.А. & Арчакова А.И. (1072). Содержание гидроперекисей липидов (111) по Романовой Л.А. и Стальной И.Д. (1977), малоновай диальдегад (МДА) по методу Стальной И.Д. и Гаришвили Т.Г. (1977), активность супероксид-дисмутаэы (СОД) по (1972), каталаэы по методу

Баха и Зубковой (1983.). Активность аланмаминотрайсферазы (АЛаТ) и аопартатаминотрансфераэы (АСаТ) набором биотестов ЧССР).

Содержание белка поА>и>-»^-(1951). Содержание антиген,яесдвцифических циркулирующих комплексов (ЦИК) по Барановскому П.В. и рудыку*Б.И. (1982). Общее количество лимфоцитов в тимусе й селезенке по методу Горизонтова П.Д. (1983); количество Т- и В~лимфоцитов (фримель Г. 1987).

Клинический материал охватывает 27 больных детей, которые были разделены на 3 группы.

I груйщ * 9 детей, подвергнутых функциональному вытяжении шиной Ебллера ярк переломах бедренной кости. Получали общепринятое лечение*

II rpytota - 9 детей, подвергнутых функциональному вытяжению шиной Беллера. Им со дня поступления наряду с общепринятым лечением проводилась терапия компливитом с нуклеинатом натрия. Диагноз был подтвержден рентгенологически,

В контрольную III группу вошли дети с врожденным вывихом бедра, кривошеей. Они функциональному вытяжению не подвергались.

. Статистическую обработку цифрового материала проводили по методике Стьюдента-Фишера с использованием персонального компьютера ПЭШ "Роботрон" и Ш PC/AT.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Изменения оксмдантной, антиоксидантной и иммунной системы крыс ири иммобилизационном- стрессе

Анализ экспериментальных исследований показал, что у крыс, которые подвергались 6-часовому иммобилизационному стрессу, снижалась масса тимуоа и селезенки в 1,9 раза и увеличивалась масса надпочечников в 1,6 раза.

Исследование содержания МДА, ГО липидов, хемилюминесценции (ХЛ) в тканях печени, тимуса и селезенки у подопытных крыс при иммобилизационном стрессе (табл.1) выявило определенные сдвиги в изучаемых показателях. Одновременное исследование интенсивности неферментативного и ферментативного ПОЛ в гомогенатах органов показало увеличение образования липидных перекисей в обеих системах перекис-ного окисления крыс при стрессе. В гомогенатах тимуса уровень спои-таиногб ПОЛ превышал контроль в 4,9 раза, в гомогенатах селезенки -в 2,8 раза• Содержание аскорбатзависимого перекисного окисления ли-лвййдов (АЗП) в тимусе увеличилось в 2 раза, а НАИН-зависимого (НЗП) в 1,9 раза. 'В гомогенате селезенки крыс, подвергшихся ejpeccy, обнаружено достоверное увеличение АЗП - в 2,2 раза (р^£),001), в то время как НЗП в 1,5 раза по сравнению с контрольными. Так'же достоверное изменение интенсивности ПОЛ отмечено в гомогенатах печени. Изучение интенсивности спонтанного и индуцируемых систем ПОЛ показало активацию переокисления во всех органах иммунной системы и печени, причем максимальное возрастание зарегистрировано в гомогенатах тиму-оа. Это объяоняется тем, что на I стадии фазы тревоги у животных выделяется большое количество гормонов катехоламинов, которйе активируют катаболические процессы в имцунокомпетентных клетках и органах.

Таблица I

Показатели оксидантной, антиокоидантной и иммунной, пеакции органов иммунной системы и печени экспериментальных крыс при стрессе

Показатели

Тимус

Селезенка

Печень

Спонтанное ПОЛ (шлоль/ш? белка.мин)

А ЕЛ (шлояь/мг белка.шн)

НБП (шлоль/мг белка.шн)

ХЛ иып.10с/мг белка

СОД (ЕД/глг белка)

Катала за (Eli/ мг белка)

Спонтанное ПОЛ (нмоль/мг белка.шн) А 311 (нмоль/мг белка.шн) НЭП (нмоль/мг белка.мин)

ХЛ имп.Юс/мг белка

СОД (ЕД/мг белка)

Каталава (ЕД/ мг белка)

Интактные крысы (Контроль I)

1,80*0,10 3,93-0,10 б,ет±0,05 46,25*1,37 1,91-0,05 5,94*0,45

0,63*0,07 0,84+0,05

2,I7*0,IL I,78±0,II 2,52*0,12 3,63*0,11

6,56*0,36 23,07*0,51 1,30±О,Ю 1,58*0,04

3,22*0,23 ' 1,92-0,30

Стресс+$из.раствор (КонтрольИ)

2,50*0,13* 3,82*0,06*

4,00*0,09* 6,02*0,07*

5,61*0,10*' 8,54*0,14*

35,04*0,08* 66,11*1,34*

0,39*0,04** 0,68*0,05*

5,21*0,48* 15,25*1,04*

3,12*0,13* 4,33*0,12* 4,90*0,14* 14,54*0,46* 0,29*0,07** 7,70*0,64*

Примечание: *р 0,001

**р-С0,05 сравнительно с контролем I

Интенсивность ХЛ при ишобилизационном стрессе в гомогенате чящса увеличилась в 2,2 раза, в гомогенате селезенки - в 1,5 раза И в печени - в 1,4 раза относительно контрольного уровня (р <0,001). Одновременно с увеличением концентрации МДА и интенсивности хемилю-минеоценции насЗлюдалось увеличение гидроперекисей липидов в тимусе в 3,0 раза, в селезенке - в 2,5 раза и печени. - в 1,9 раза. Выявленные наш изменения в исследуемых органах при ишобилизационном стрессе крыс характеризуют сдвиг окислительно-восотановительннх процес -сов и выявляют недостаточность в кровяном русла ангиоксидантов. Причем эти изменения были наиболее выражены в гомогенатах тимуса, что, видимо, свидетельствует о более интенсивном образовании активных форм кислорода и о недостаточных компенсационных возможностях А ОС тканей тимуса.

У крыс при стрессе активность основного фермента антиоксидант-ной системы - супероксиддисмутазы была снижена в гомогенате тимуса'-в 4,4 раза, в селезенка - в 4,0 раза и в печени - в 2,8 раза (р<-0,001) по сравнению с интактными животными. Наибольшее снижение' ' активности СОД обнаружено в гомогенате тимуса по сравнению с селе -зенкой и печенью. Мы наблюдали снижение активности СОД в цельной . крови, что можно объяснить повышенным расходом антиоксидантов (АО) и значительной утилизацией в организме витаминов и микроэлементов, обладающих антиоксидантным свойством.

Важную роль в ограничении концентрации перекиси водорода и регуляции ПОЛ.играет каталаза. В наших исследованиях при стрессе ее активность была повышена в гомогенатах органов: тимуоев 2,3 раза, в селезенке - в 2,7'раза, в печени - в 2,5 раза, в цельной крови -в 3,0 раза. Значительное увеличение активности фермента наблюдалось в селезенке.

Активация ПОЛ сопровождается изменением физико-химического состояния мембран илеток. Свидетельством этого является повышение их проницаемости и выход цитоллазматических ферментов (АЛаТ и АСаТ) в кровь и развитие ферментемии. При стрессе у крыс в тимусе актив -ность АСаТ возросла в 2,7, АЛаТ - в 3,2 раза, в селезенке - в 2,0 и 1,8 раза, в печени - в 2,4 и 2,0 рава, в сыворотке крови - в 3,7 и 7,3 раза соответственно относительно контрольного уровня. Таким, образом, максимальное увеличение активности ферментов в сыворотке крови подтверждает повышенную проницаемость мембран клеток в связи с активацией ПОЛ и снижением активности ферментов АОС. #

'Уменьшение массы тимуса п селезенки привело к уменьшению

количества лимфоцитов в тимусе в 2,0 раза (контроль 897,СЁ28,72), в селезенке - в 1,7 раза (контроль 938,6+19,01). Снижение пролифе-рагиеной активности лимфоцитов в иммунных органах связано с цитото-ксическим действием метаболитов СРО,. нарушением структурно-функционального состояния мембран клеток иммунных органов, вызывающих изменение уникальных механизмов фагоцитоза а ретикулоэндотелиальной системе. У подопытных животных при стрессе обнаружено достоверное оншйение как поглотительной, так и переваривающей способности лейкоцитов. Эти нарушения проявлялись в снижении процента фагоцитоза в 1,8 раза, снижение фагоцитарного числа на 66 % и снижений количества активных фагоцитов почти в 3 раза. Снижение переваривающей способности клеток проявлялось в снижении индекса завершенности фагоцитоза в 2,2 раза. В процессе фагоцйтоза в фагоцитирующих клет -ках усиливается поглощение кислорода и образование его активных форм, что приводит к нарушению их функциональной опособности и гибели.

Циркулирующие иммунные комплексы характеризуют резистентность организма. Мы наблюдали увеличение содержания ЦИК в ответ на стрессовое воздействие в 3,6 раза. Что связано о усилвнием переписного окисления липидов, денатурацией белка и возникновением аутоиммунных реакций в ответ на отресоовое раздражение.

Анализ приведенных данных показал, что активация СРО в результате иммобилизаадонного стресса привела к увеличению в исследуемых объектах количества промежуточных и конечных продуктов ПОЛ, изменению активности ферментов ДОС. Одновременно обнаруживаются иммунологические сдвиги. Учитывая важную роль' фоефолипидов мембран в функ-■ ционироваши клеток, можно предположить взаимосвязь изменений иммунного статуса подопытных животных с нарушением показателей обмена липидов. Эти метаболические сдвиги обладают ювдунодепрессивным действием - формирует метаболическую ивдунодапрессшз.

Элективное ть компливита и нуклеина та натрия для коррекции биохимических и иммунологических сдвигов ,у крыс при йммобилизационном стреосе Поскольку при стрессовых ситуациях увеличивается содержание продуктов перекисного окисления липидов и снижается активность ферментов антиоксидантной системы и утилизация витаминов и микроэлементов, то целесообразность применения последних в комплексной терапии . данной патологии очевидна, особенно тех злементов, которые обладают

антиоксидантным действием - витамины А,Е,С, группы В и микроэлементы - медь, нелезо, цинк, марганец, селен. Поэтому исследование для коррекции биохимических и взаимосвязанных иммунологических сдвигов привело нас к использованию отечественного препарата "комшшвит" и иммуностимулятора нуклеината натрия.

Установлено, что введение на фона стресса комлливита и нуклеи-нага натрия и сочетание комлливита и нуклеината натрия животным (табл,2) способствовало снижению у них показателей, характеризую -щих ПОЛ (ЩА.хемилюминесценция, гидроперекиси липидов) и нормализации активности ферментов АОС. Эти изменения наиболее выражены в груше животных, которые получали сочетание двух препаратов. Введение нуклеината натрия животным способствовало снижению спонтанного МДА в гомогенате тимуса в 1,1 раза, при введении комплишта цифры спонтанного МДА не изменялись. При введении одновременно комлливита и нуклеината натрия уровень спонтанного МДА снизился в 3,5 раза и приблизился к уровню контрольных групп. Интенсивность АЗП при введении .' нуклеината натрия в гомогенате тимуса снизилась в 1,3 раза (р^.0,001), введение комлливита привело к торможению АЗП в 1,1 раза. Совместное введение препаратов оказало нормализующее действие. Уровень НЗП под • влиянием нуклеината натрия снизился по сравнению с контролем в 1,3 раза. При одновременном .использовании препаратов уровень НЗП снизился в 1,2 раза. Аналогичная картина наблюдалась и при исследовании спонтанного ПОЛ, АЗП и НЗП в гомогенатах селезенки и печени.

При хемилюминесцентном исследовании органов иммунной системы и печени выявлены изменения интенсивности свечения однонаправлено с изменениями количества продуктов ПОЛ под влиянием исследованных препаратов. Ингибирование интенсивности свечения происходило в разной степени в зависимости от класса применяемого препарата. Наиболее выраженное снижение получено при совместном применении нуклеината натрия и комлливита, максимальное снижение ХЛ обнаружено в гомогенатах тимуса, ,. . '

Выявлено, что активность СОД в гомогенате тимуса под 'влиянием нуклеината натрия увеличилась в 2,3 раза, под влиянием комплишта в 2,9 раза, при совместном введении комплишта и нуклеината натрия -в 3,8 раза и приближалась к значениям контрольных групп кивотных. Использование' нуклеината натрия привело к повшешио активности СОД в селезенке в 2 раза, при введении комлливита - в 2,5 раза и при совместном введении комлливита и нуклеината натрия - в 3,5 раза.

Таблица 2

Показатели оксидантной, антиоксидантной системы экспериментальных крыс ш фоне лечения нуклеина том натрия и кшшшвитом

(М*м) П=Ю

Группа ' 'ЖИВОТНЫХ • Тимус Селезенка Печень

сод | ш; СОД .[ ХЛ сод ХЛ

Стресс+нукле-инат натрия Сгрзсс+комп-ливит - Стресс+нукле-инат натрвд+ комшшвит Интактные • (контроль I) Стресс+физ. ^контроль II) 0,68*0,04*^ II»11*0»52й 0,86*0» (Б5^ 10,97*0,37* 1 1,13*0, Об5^ 8,14*0,37®* 1»30*0»1С^! 6,56*0,36* 0,29*0,07 ,14,54*0,46 ; 1 0,79*0,09 *0,99*0,07** 1,38*0,10* 1,58*0,04** 0,39*0,04 33,21*0,70 5 30,46*0,51® 24$88*0,61* 23,07-0,51* 35,04*1,08 к0,90*0,06** 1,01*0,09** 1,66*0,07** 1,91*0,05** 0,68*0,05 53,59*1,80** ' . 54,10*1,20** 48,60*0,87* 46,25*1,37* 66,11*1,34

и о

Примечание: СОД—ЕД/мг белка

М - имп.Ю с/мг белка

* - р <0,001

р^.0,05 сравнительно с контролем II

Результаты исследований показали, что использование нуклеина-та натрия и компливита приводило к значительному снижению АСаТ в гомогенатах тимуса. Так, при введении нуклеината натрия активность АСаТ падала в 2 раза, при введении компливита - в 1,4 раза, а при введении нуклеината натрия и компливита одновременно - в 2,5 раза. На активность АЛаТ препараты оказали однонаправленный эффект. Во всех случаях предотвращалась активация фермента в 2 раза. Изменение активности ферментов под влиянием предлагаемых препаратов в гомоге-нате селезенки было незначительное.

Усиление цод в организме влечет за собой повышение концентрации низко молекулярных пептидов (НМП), являющихся продуктами про-теолиза. При введении нуклеината натрия онижевде' прироота НМЛ бы- . ло в 1,5 раза, при введении компливита - в 1,9 раза й почти в 3,0 раза под влиянием нуклеината натрия и компливита одновременно. Использование ингибиторов ПОЛ тормозило прирост ИШ в сыворотка • крови.

Иоследуемые Нами препараты дои коррекции приводили к йормализа-ции шссы органов иммунной системы и достоверному повышению количества лимфоцитов в них. При использовании нуклеината натрия: протекторное действие проявлялось в повышении числа лимфоцитов к 16 дню лечения в 1,6 раза, прй введении компливита - в 1,6 раза, а при ссче-4?йн!НЬм применении препаратов - в 1,8 раза. В селезенке введение нуклеината натрия способствовало увеличению количества лимфоцитов в 1,4 раза, а в оочетании с копливитом - в 1,6 рава. .

Максимальное повышение процента фагоцитоза обнаружено при со-четанном введении нуклеината натрия и компливита и превышало в 1,4 раза контрольный уровень (р <¿0,001). Анализ показателей фагоцитарного числа показал, что максимальное повышение фагоцитарного числа наблюдалось при введении отдельно нуклеината натрия в 1,3 раза.-При введении компливита протекторное действие не проявляло сь Под влиянием препаратов наблюдалось' возрастание количества активных фагоцитов: при введении нуклеината натрия - в 2,3 раза,^ри комплексном введении препаратов - в 2,7 раза.

• Результаты проведенных экспериментов со всей очевидностью.указывают на то, что предложенные нами препараты нуклвинат натрия и компливит действительно являются ингибиторами процессов ПОЛ, акти-.ваторами антиокислительной системы и протекторами иммунной системы у экспериментальных животных при стрессе.

КЛИНИЧЕСНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Наш были проведены биохимические и иммунологические исследования крови у 18 детей, подвергнутых функциональному вытяжению ввь ной Ееллера с переломами бедренной кости. Исследование состояния оксидантной и антиоксидантной системы крови у больных выявило активацию реакции переписного окисления лишдов крови (табл.3). Содержание малонового диальдегида в крови у больных было повышено в 10 раз в сравнении с донорами. Интенсивность аокорбатаависимого ПОЛ увеличивалось в 2,8 раза и НАДЬН-зависимого ПОЛ - в 2 раза. Аналогичная . тенденция отмечалась в содержании гидроперекисей лишдов крови. Содержание гидроперекисей липидов в крови при поступлении было увеличено более чем в 1,5 раза и достоверно отличалось от показателей контрольной группы.

Также выявлено снижение активности фермента АОС суперркоиддис-мутазы в 3,5 раза и повышение активности каталазы - в 2. раза. Вида-, мо, это связано с Включением защитных механизмов срочной адаптации и повышенным расходом антиаксидантов.

Выявленные биохимические изменения проявлялись и в ишунологи-ческих показателях больных, которве сопровождались количественными и функциональными изменениями Т- и В-звеньев иммунно? системы. Общее содержание лимфоцитов достоверно снизилось в 1,4 раза. Угнетение Т-лимфоцитов происходило в 1,5 раза. Относительное содержание В-лимфоцитов не изменялось.

■ Эти изменения, видимо взаимосвязаны, Вероятно, активация ПОЛ, изменения в активности ферментов АОС ведут к нарушению структурно-функциональной целостности мембран клеток, что приводит к иммунодеп-рессии при иммобилизационном стрессе.

Больные, дети, подвергнутые вытяжению шиной Ееллера при переломах бедренной кости, после»проведенных исследований были разделены на 2 группы.

В I группе больные получали базисную терапию, которая включала симптоматическое лечение, не обладающее мембранстабилизирующим эф -фектом.

Во 2 группе больные дополнительно к базисной терапии получали комшшвит и нуклеинат натрия в течении 20 дней в возрастных дозах. После' завершения лечения больные были повторно обследованы.

Результаты исследования биохимических и иммунных показателей больных,получавших базисное лечение, показали определенные положи-

Таблица 3

Перекисное окисление лшшдов, антиокислителъная способность тканей • и показатели иммунитета у детей, подвергнутых функциональному вы -фргярвшп при переломах бедренной кости на фоне леченая нуклеянатом натрия и коышшвитом .

М*м 11=27

Показатели' Доноры ■ Иммобилизация Л е. ч е н и е

Базисное ! Базисное+нухлвинат • натрия+кгашшвит

Спонтанное ПОЛ (нмодь/мг белка.мин) 0,50*0,07 5,2-0,99х 3,5*0,24** 1,4*0,30®

АЭД (нмоль/мг белка.мин) 2,6*0,2 7,4?0,7Х Б.бО^ДЗ3® 3,36*0,19*

НЗП (нмодь/мг ' белка.шн) Ш СЕД). 5,08*0,34 0,12С*0,С£.. 10,0*0,70* 0,180*0,01* н,20*0,51®* 0,160*0,02 505 4,19*0,48** 0,130*0,01К

С СИ (ЕД/Ю6 эр) 3,50*0,25 1,00*0,19х 2,00*0,10** з.гс^о.к5®

Каталаза , (ед7ю эр) 18,С#3,3 36,0*3,2х 2 6,2*1,2** 16,0*2,Ю1®

ЛиьфОЦИТЫо (тыс/1 шг)- * 2,89*0,12 1,90й0,09х 3,01*0,13

Т-ЛИМЕОЦИЗД (тыс/1 . 1,77-0,(77 о,а5±о,1б* 1,30*0,06 1,00*0,03®

В-лимфоцихы (тыс/1 мм^) 0,75*0,02 0,89*0,24х 1,40*0,29 0,80*0,24**

Примечание: * рс0,05-0,001 сравнительно с донорами

^р^ 0,05-0,001 сравнительно со II группой

тельные сдвиги, но они ре достигли нормальных значений. Снижение накопления спонтанного МДА было Bi 1,4 раза, АЗП - в 1,3 и НЗП - в 1,1 раза, гидроперекисей липидов - в 1,2 раза по сравнению с больными. При исследовании активности ферментов АОС - суперокисддисмута-зы и каталааы получено увеличение активности супероксидисмутазы в 2 раза, снижение активности каталааы - в 1,3 раза. Общее содержание лимфоцитов увеличилось в 1,2 раза, Т-лимфоцитов - в 1,1 раза, В-лимфоцитов - в'1,6 раза.

При сопоставлении результатов лечения больных базисной терапией, получавших дополнительно компливит и нуклеинат натрия,были выявлены значительные положительные изменения, а именно: снижение спонтанного МДА - в 3,7 раза, АЗП - в 2,2 раза, НЗП - в 2,4 раза, ГЦ - в 1,3 раза, Наблюдалось повышение активности суперокисддисму-тазы в 3,2 раза, снижение активности каталазы - в 2,2 раза. Вира -женные положительные сдвиги произошли в иммунологических показателях. Выявлено, что общее содержание лимфоцитов у детей увеличилось в 1,4 раза, а содержание Ттдофздитов - в 1,3 раза.

В' процессе патогенетического лечения детей включение компли-вита и нуклеина та натрия в комплекс к общепринятому базисному лечению уменьшало накопление продуктов, перекисного окисления лишдов, нормализовывало активность ферментов антиоксидантной системой у детей, подвергнутых функциональному вытяжению шиной Ееллера,при переломах бедренной кооти у детей.

Таким образом, проведенными исследованиями выявлено, что при иммобшшзационном стрессе у експериментальных животных, а также у • детей, подвергнутых функциональному вытяжению шиной Беллера при' переломах бедренной кооти, в организме происходят ряд биохимических и иммунологических изменений. Они проявляются в увеличении содержания продуктов ПОЛ, изменений активности ферментов АОС, цито -плазматических ферментов с одновременными иммунологическими сдви -гами. Эти изменения имеют определенное значение в механизме развития патологического процесса при иммобилизационном стрессе. •

Включение в комплекс лечебных .препаратов нуклеина та натрия с компливитом, которые обладают иммуностимулирующим, мембраностабили зирующим и антиоксидантным действиями, и, участвуя в синтетических и продаферативных процессах, обеспечивает нормализацию метаболических и иммунологических процессов при стрессе. Эффективное действие компливита и нуклеина та натрия в комплексе с базисной терапией позволяет рекомендовать использовать их в практика лечения больных с переломами бедренной кости.

выводы

1. В процессе развития иммобилизацнснного стресса у крыс происходит значительное увеличение продуктов ПОЛ в исследуемых органах: спонтанного МДА - в 4,9-5,0, ГП липидов - в 3,0 и ХД - в 2,2 раза. Эти изменения наиболее выражены в гомогенате тимуса. У детей, подвергнутых функциональному вытяжению шиной Беллера при переломах бедренной кости, в крови содержание спонтанного МДА увеличилось в 10,0 раз, АЗП - в 2,8 и НЗП - в 2,0 раза, гидроперекисей липидов -

в 3,0 раза, ВСе указанное имеет значение в понимании механизма иммо-билизационного стресса и в определении глубины процесса поражения.

2. Накопление продуктов ПОЛ в гомогенатах органов сопровождалось одновременным нарушением активности ферментов антиокислительной системы - СОД и катализы. Наибольшее снижение СОД. отмечено в тимусе - в.4,4 раза и увеличение активности каталазы - в 2,3 раза

в селезенке. В крови у больных детей снижение СОД было - в 3,5 раза и увеличение каталазы - в 2,0 раза.

3. В процессе иммобилизационного стресса у экспериментальных крыс наблюдалось снижение массы тимуса и селезенки^ общего количества лимфоцитов, фагоцитарной активности поли- и мононуклеаров, а также возрастание числа циркулирующих иммунных комплексов. В крови больных снижение общего количества лимфоцитов в 1,4 раза, ; Т-лим-фоцитов - в 1,6 раза, что указывает на значительное поражение иммунной системы организма.

4. Установлена взаимосвязь между показателями иммунологического состояния (клеточные и гуморальные факторы иммунитета) и ПОЛ, а также активностью фершнтов антиоксидантной защиты. Наиболее наглядную информацию и глубине и течении иммобилизационного стресса дают показатели, спонтанного МДА, СОД, ХЛ,, которые превышали контрольные величины - в .2,8-10,0 раз. Из Иммунологических показателей наибольшие изменения выявлены при изучении фагоцитарной активности лейкоцитов и общего количества лимфоцитов и Т~люл|юцитов, что имеет диагностическое значение в определении метаболических и иммунных сдвигов при иммобилизационном стрессе,

5. Включение в комплекс базисной Терапии нуклеината натрия и компливита для коррекции метаболических и иммунологических сдвигов при иммобилизационном стрессе способствовало снижению содержания продуктов перекисного окисления липидов и нормализации активности

ферментов АОС, а также улучшению показателей иммунитета как у экспериментальных крыс, так и у Сольных детей.

б.Сочеганное введение нуклеината натрия и компливита привело к более эффективной нормализации изучаемых показателей, чем их отдельное применение. Эта схема лечения рекомендована в практику терапии больных, подвергнутых функциональному йытяжению при переломах бедренной кости.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ .

1. Ашурова Л.З., Талимбекова Г.З., Юлдашава Л.Н» Влияние нуклеина та натрия на обменные процессы яри физической нагрузке в эксперименте /Материалы I съезда молодых учейых-медако^ и врачей Узбекистана.Андижан. -1991. -С.236-237.

2. Шохимаческое обоснование включений антиоксидантов и иммуностимуляторов при лечении переломов костей /Л.З.Айуро£а, А.Усман-ханов, Б,Махкамов, Л.Н.Юлдашева, У.К.Ибрагимов //Труды ПервЬй научной конференции биохимического ЬйцеЬтва Республики Таджикистан "Проблемы биохимии" Душанбе. -1993. -С.57.

3. Коррелирующий эффект компливита и нуклеината натрия на течение ишобилизационйого стресса /Л.З.Ашурева, Л.Н.Юлдашева, У.К.Ибрагимов, Г. 3. Талимбекова //1£уды Первой научной конференций, биохимического общества Республики Таджикистан "Проблемы биохиши" Душанбе. -1993. -С.56.

4. Влияние компливита и нуклеината натрия.на интенсивность свободнорадакальНого окисления при стрессе /1.3»Ашурова, Л.Н.Юлдашева, У.К.Ибрагимов, Г.3.Талимбекова, З.Р.ХаЙбулина, К.А.Хамзаей //Мед.лурнал Узбекистана. -1993. 5. -С.10.

ХУЛОСА Ашурове Лохе Захидоена "Стрессдя кядвмущларнинг оксид8нт,антиоксидант вв иммунологии рип?емвяйр хояати ва улврни биокимевий бошчврияи принииплври"

Ушбу иими" ишдя 100 тй квлвмушлардв иммобилизация /6 соат боглаб чиРйпг/ чийиш билвн чячириягян стрегп холяти, 27 та сон оуя-ги еинган ее Беллер шингги бидян ^ункционял тортиб чУРиягян боля-ляр оргвнизмидй булвдигя биокимевиР ва иммунояогик узгяришйвр Vpre-нилгвн.

Квламушлврни иммобилнвацикга Рргвтгвндвн стнг улврни жигвр, тедок вРрисмок Сездярининг гоыогенатлвридв ва понида ояиб борилгвн текширивлар бу оргвнлердв дипидяврни пероксидлвнииида хосид булвди-гвн орялиц метаболитяярнинг мивдорини ошиб кетишигя, хужаРрани анти-оксидйнт система /АОС ферменте еупероксиддисмутаэанинг вктивлигини ооишигё олив Кедди. Юцоридв вРтиб утийган биокимеви^ рзгвришлар организм иммунологии фвояиятини /гГягоцитозни, лимфоиитлвряй/ пасвриши биявн борди.

Эксперимента» ХаРвсняерга хужеРря мембрвнясини тургунлаштирув-чи, ентиоксиапмт хусусйятини Тугувч« вя «ммунологик системами мус-тйКивмяовчи нвтрйР нуклеинэт ва номпливит каби доривор модавпарни ориз орНяли пбориягандв ийяамуиййрнинг умуми" Холятйнйнг яхпгйланген-йиг», ииГйр, тялоц, вРрисймон беэяярдв липидлврнинг перокоидляниши ва ву оргвняярдв «оРЯйШгян АОС Лерментлйрининг вктивлигини ва иммунология К'рСВТЙИЧЛярНИ ТИЙЛйНГЯНЙИГЙ виичлянди.

Сон еуяги Беяяер гаиняги бнйан *ункимонял тортиб ч^Рипгвн бемор ЯопвйЯрнинг цснйдв овкб Яориягвн текширишаяр хвм уйяр оргвнймыДв ли-пидларнинг перойгйдяянивд купеЯганлигинй, янтипксиДйнтлик хусусияти-Г8 9Г8 б?ЙГ8Н ({«рменгяяр вктивлигини рзгвргяйлигини вя иммунологи« зистеИа феолиятини пёпя^йнлигини и^рсвтди.

Кйсвллярни дяволйшдя кенг Н^яяянийвдиган аеогиР системвга нятриР 1уклеинйГ ва комлливитларнй к?шйб Серии квссаллврда аничлинган био-смевиР ва'иммунологи» жйрвеняярни тез меьергя келишигй, улярнинг гмумиР хояатинй яхшилвниийгв олиб кеяади.

THE C01IDITI0JJ OP OXIDANT, ANTIOXIDANT a1id II.MUNE SYSTEMS III CASE OF IffiuOBILIZATIVE STRE33 AND DEVELOPMENT OF PRIKCIPLE3 OP ITS BIOCHEMICAL CORRECTION

Ashurova Lola Zakhidovna

In this scientific article, were examined biochemical and immunological changes in cases of 100 rates after immobi-lizativo stress (6-houra immobilizative stress) and cases of 27 children v/ith hip fractures, over whom was made a functional stretching with Bailor's tyya, and following plaster immobilization. In rates after immobilization in gomogenatea of spleen, tymus and liver and also in blood was determined the intermidant products of lipid peroxidation store increase, changes of activity of antioxidant system enzyms - SOD and oatalaza. Biochemical changes were accompaned with reduction of immunological activity of organism.

The peroral introduction in animals sodium nuclein&te end Complevit (multivitamins), which have membranestabilize, antioxidant and immunostymulative properties showed an improving of clinical condition of the rates. Free Radicalea oxidation restoration in liver, spleen,.tymus and activity changes of antioxidant system (AOS) enzyms. The blood examination of children with hip fractures showed also (FR oxidation) activity increased, activity changes of antioxidant system (AOS) enzyms and immunity indicators reduction.

Sodium Kucleinate and Complivit in complex of basic therapy made a result of more effective normalization of biochemical and immunological indicators, then its separate using. This way .of treatment is recommended in treatment of patients viith functional stretcliing and following plaste immobilization in case of hip fracture.

CoHCKaieja:

Ъшогрзопя ГФНТИ

Зак. 159 ïuv . с. м 00 леи.л. 1,0