Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Синтез и метилирование ДНК в развивающихся этиолированных проростках пшеницы

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кравченко, Светлана Александровна

Введение

I. Обзор литературы .II

I. Природа, возникновение дополнительных оснований и содержание 5-метилцитозина в ДНК растений.II

1.1. Природа дополнительных оснований в ДНК растений . II

1.2. Содержанке 5-метилцитозина в ДНК растений.

1.2.1. Видовые различия.

1.2.2. Тканевая (клеточная) разнокачественность метилирования генома растений.

1.2.3. Метилированные основания в ДНК субклеточных органелл растений (хлоропласты и митохондрии)

1.2.4. Метилирование ДНК при разных инфекциях и неблагоприятных условиях произрастания

1.2.5. Метилирование ДНК при прорастании семян

1.3. Возникновение дополнительных метилированных оснований в ДНК растений.

1.3.1. Механизм метилирования.

1.3.2. Специфичность метилирования ДНК.

1.4. Распределение 5-метилцитозина в геноме

1.4.1. Метилирование сателлитной ДНК.

1.4.2. Содержание 5-метилцитозина в AT- и GC -обогащенных фракциях ДНК.

1.4.3. Метилирование повторяющихся и уникальных последовательностей ДНК.

1.5. Метилирование и синтез ДНК

1.5.1. Возникновение полупрометилированных сайтов

1.5.2. Влияние 5-азацитидина.

I.6. Возможная функциональная роль метилирования ДНК у эукариотов.

II. Экспериментальная часть.

2. Материалы и методы исследования

2.1. Обработка и посев семян пшеницы, отбор и пикировка проростков.

2.2. Введение радиоактивной метки в ДЕК проростков

2.2.1. Срезанные проростки

2.2.2. Целые проростки

2.3. Фиксация проростков и подготовка к выделению ДНК

2.4. Выделение ДНК.

2.4.1. Использование модифицированного метода Шмидта и Таннгаузера для определения уровня метилирования и состава новообразованной ДНК.

2.4.2. Выделение ДНК с проназной и РНКазной обработкой для фракционирования в градиенте плотности хлористого цезия.

2.4.3. Выделение ДНК с проназной ж щелочной обработкой для анализа уровня метилирования.

2.5. фракционирование ДНК в градиенте плотности хлористого цезия.

2.6. Анализ состава и уровня метилирования ДНК.

2.6.1. Суммарная немеченая ДНК.

2.6.2. Меченая новообразованная ДНК.

2.7. Анализ состава (плавучей плотности) ДНК методом равновесного ультрацентрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия.

2.8. Выделение и очистка митохондрий из проростков пшеницы

2.9. Фиксация митохондрий, обработка, подготовка препаратов, электронная микроскопия.

2.10. Выделение ДНК из градиента плотности хлористого цезия и измерение радиоактивности

2.11. Измерение радиоактивности, включенной в ДНК отдельных органов проростка (динамика синтеза ДНК в проростке).

2.12. Определение содержания ДНК в проростке

3. Результаты и их обсуждение

3.1. Состав и уровень метилирования новообразованной

ДНК в развивающихся проростках пшеницы

3.1.1. Проростки пшеницы разного возраста

3.1.2. Разные органы проростков пшеницы

3.1.3. Колеоптили и листья разного возраста.

3.2. Митохондриальная природа фракции ДНК, синтезирующейся в стареющих колеоптилях: ее состав и уровень метилирования.

3.2.1. Метаболическая стабильность новообразованной в стареющем колептиле ДНК.

3.2.2. Влияние циклогксимида и бромистого этидия на синтез ДНК в стареющих колеоптилях.

3.2.3. Влияние истощения путем инкубации в воде срезан- , ных проростков на синтез ДНК

3.2.4. Митохондриальная природа новообразованной в стареющих колеоптидях ДНК, ее состав и уровень метилирования

3.3. Первый лист развивающихся этиолированных проростков пшеницы как модель для исследования метилирования ДНК в клеточном цикле на уровне целого растения: синхронность синтеза ДНК в органе и возможность дифференцировать синтез мтДНК и яДНК.

3.4. Метилирование яДНК в клеточном цикле интеркалярной меристемы первого листа развивающихся проростков пшеницы.

3.4.1. Уровень метилирования ДНК, синтезируемой в разные моменты цикла синтеза (короткая импульсная метка)

3.4.2. Динамика "дометилирования" новообразованной ДНК вне репликации.

3.4.3. Исследование репаративного синтеза ДНК в клеточном цикле в развивающихся проростках пшеницы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Синтез и метилирование ДНК в развивающихся этиолированных проростках пшеницы"

Актуальность исследования. Энзиматическая модификация (метилирование) ДЕЖ, открытая в I964-I965 гг., рассматривается как один из механизмов регуляции экспрессии генов и шхеточной дифференциров1Ш у про- и эукариотических организмов. Исследование специфичности и свойств такой модификации генома в клетке тлеет первостепенное значение для расшифровки механизмов трансформации клеток, для понимания регуляции репликации и репарации ДНК. Поэтому проблема метилирования ДНК - это одна из важнейших проблем современной молекулярной биологии и молекулярной генетики, иг^ егощая важное значение для многих прикладных работ в области медицины, сельского хозяйства, генной инженерии.В ДНК всех высших растений количество метилированного основания - 5-метилцитозина - в несколько раз больше, чем в ДНК животных и бактерий, где его содержание не превышает нескольких долей процента. В ДНК некоторых видов растений более половины всех остатков цитозина оказывается прометилированной. Эта энзиматическая модификация у микроорганизмов лежит в основе явлений хозяйской модификации и рестрикции и является одним из тонких механизмов в контроле за репликацией ДНК. У высших эукариот роль метилирования ДНК, по-вид1шому, полифункциональна: метилирование ДНК связывают с регуляцией активности генома и клеточной дифференцировкой. На это указывают непостоянство содержания т^с в ДНК в разных органах и тканях одного и того же животного, изменения в уровне метилирования ДНК в онтогенезе и под воздействием гормонов, а также различный уровень метилирования работающих и молчащих генов. Для реализащ ш сигнальных функций модификации-рестрикции достаточно очень малого количества этого минорного основания в ДНК. Функциональная же роль "суперметилирования" ДНК растений в сравнении с животными и микроорганизмами не известна. До сих пор совершенно не изучены ни природа механизма "суперметилирования" ДНК, ни свойства и специфичность действия ДНК-метилаз у высших растений.Совершенно не изучены также ни динамлка метилирования при воспроизведении ДНК в клеточном цикле, ни характер метилирования ДНК при репликации. Во многом это связано с отсутствием достаточно надежных и удобных растительных моделей, сочетающих синхронность клеточных процессов с гомогенностью клеточной : . популяции в целом растении или его отдельных органах.Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы явились поиск и анализ растительной модели, сочетающей естественную, природную синхронность репликации ДНК всех ее клеток и связанную естественными регуляторными связшш в системе целого развивающегося растения, а также использование тшюй модели для решения вопроса о динаглике и природе "суперметилирования" ДНК у высших растений. Эти сведения не только вакны для общетеоретического представления об участии метилирования в процессах регуляции активности генома растений и клеточной дифференцировKi'i, но и, в принципе, могут быть использованы практически для подбора регуляторов роста и развития растений с четко установленным механизмом действия.Научная новизна. Полученные данные оригинальны и представляют существенный научный интерес. Впервые установлено, что в первом листе этиолированных проростков пшеницы синтез ДНК cimxронен и цикличен. В каждом щшле С1штеза репжщируется ядерная и митохондриальная ДНК, репликация дЩЖ опережает репликацию мтДНК. За первые три цикла синтеза ДНК в листе содержание ДНК в этом органе каддый раз удваивается. Таким образом, первый лист можно использовать как модельную систему для исследования метилирования ДНК в luieTочном цикле на уровне целого растения.С помощью этой модели впервые установлено, что метилирование ДЕЖ в меристеме у растений осуществляется как при репликативном, так и репаратиЕном синтезе ДНК; уровень репликативного метилирования ДНК низок и HanoMJfflaeT уровень метилирования ДНК }кивотного происхождения. Дометилирование новообразованной ДНК до уровня сумгларной ДЕЖ проростка происходит при репаративном синтезе и завершается к концу клеточного цикла; мтДНК пшеницы не содержит т^с и по этому признаку, так же как и по составу, отличается от яДНК. Практическая значтюсть работы. Диссертационная работа носит теоретический характер. Полученные орипшальные данные могут быть использованы при чтении курсов лекций по физиологии растений и молекулярной биологии. Результаты экспершлентальной работы вносят вклад в понимание механизма метилирования ДНК и могут быть использованы в ряде случаев как тестовые системы при изучении природы синтеза ДНК при экспериментальных воздействиях на целые растешш или его части. Практическое значение работы та1сже заключается в отработке условий и подходов для изучения участия механизма метилирования ДНК в регуляции репликации и экспрессии генома растений и клеточной дифференциров1ш.Исследование характера энзиматической модификации ДНК в ядре, хлоропластах и митохондриях у высших растений приобретает особый интерес и валено не только для понимания регуляции транскрипции генома в этих субклеточных структурах, но и для выяснения вопроса о происхождении и эволюции этих струтстур.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кравченко, Светлана Александровна, Москва

1. Бартон К. Определение концентрации ДНК с помощью дифениламина. - В кн.: Методы исследования нуклеиновых кислот. -М.: Мир, 1970, с. 7-10.

2. Башките Е. А., Кирнос М. Д., Кирьянов Г. И., Александ- рушкина Н. И., Ванюшин Б. Ф. Репликация и метилирование ДНК в клетках суспензионной культуры табака и влияние ауксина. - Биохимия, 1980, т. 45, № 8, с. I448-I456.

3. Башките Е. А., Славенас; И. 10., Ванюшин Б. Ф. Содержание 5-метилцитозина в ДНК салата при воздействии гибереллином на ранних стадиях онтогенеза. - Вести. Моск. Ун-та. Сер. биология, 1978, в I, с. 45-50.

4. Башките Е. А., Хвойка Л. А., Фридрих А., Ванюшин Б. Ф. Р1зменение содержания 5-метилцитозина в ДНК растений гороха под влиянием фитогормонов. - Биологические науки. Молекулярная биология и вирусология, 1979, № 7, с. 23-28.

5. Боженко В. П., Беляева В. Н. Влияние недостаточности микроэлементов на изменение содержания 5-метилцитозина в ДНК растений. - Физиология растений, 1977, т. 24, с. 357-361,

6. Боженко В. П., Беляева В. Н., Кокурина И. А., Ванюшин Б. Ф. Изменения содержания 5-метилцитозина в ДНК подсолнечника при неблагоприятных условиях произрастания. - Физиология растений, 1972, т. 19, с. I235-I239.

7. Бурьянов Я. И., Ерошина Н. В., Вагабова Л. М., Ильин А. В, О нахождении 6-метиламинопурина в ДНК пыльцы высших растений. - Докл. АН СССР, 1972, т. 206, 1ё 4, с. 992-995.

8. Ванюшин Б. Ф. - Цитировано по кн.: Проблемы филогении растений. - Труды / МОИН. - М., 1965, т. 13, с. 14.

9. Ванюшин Б. Ф. Метилирование ДНК и его биологическое значение, - Успехи соврем, биологии, 1968, т, 65, J^ 2, с, 163-185.

10. Ванюшин Б, Ф, Метилирование ДНК и его значение в диф- ференцировке видов и эволюции организмов. - В кн.: Строение ДНК и положение организмов в системе. - М.: МГУ, 1972, с. 279-319.

11. Ванюшин Б. Ф. Метилирование ДНК в клетках различных организмов. - Успехи соврем, биологии, 1974, т. 77, 1^ 2, с. 68-90.

12. Ванюшин Б. Ф. Симпозиум по метилированию ДНК (Хроника, Несибридж, Шотландия )• - Молекул^ная биология, 1983, т. 17, В I, с. 197-204.

13. Ванюшин Б. Ф., Башките Е. А., Фридрих А., Хвойка Л. А. Метилирование ДНК в проростках пшеницы и влияние фитогормонов. - Биохимия, I98I, т. 46, вып. I, с. 47-53.

14. Ванюшин Б. Ф., Белозерский А, Н. Нуклеотидный состав ДНК высших растений. - Докл. АН СССР, 1959, т. 129, В А , с. 944,

15. Ванюшин Б. Ф., Бердышев Г. Д. Молекулярно-генетические механизмы старения. - М.: Медицина, 1977, с. 296-305.

16. Ванюшин Б. Ф., Кадырова Д. X., Каримов X. X. Нуклеотидный состав и метилированные основания ДНК прорастающих семян хлопчатника. - Научн. Докл. Высш. Школы. Биологические науки, 1972, № I (97), с. 85-89.

17. Ванюшин Б. Фг Кадырова Д. X., Каримов X. X., Белозерский А. И. Минорные основания в ДНК высших растений. - Биохимия, I97I, т. 36, вып. 6, с. I25I-I257.

18. Ванюшин Б. Ф., Машарина Л. 3., Белозерский А. Н. О распределении пиримидинов в ДНК. - Докл. АН СССР, 1962, т. 147, № 4, с. 958-961.

19. Ванюшин Б. Ф., Романенко Е. Б. Изменение метилирования ДНК крыс в онтогенезе и под влиянием гидрокортизона. - Биохимия, 1979, т. 44, вып. I, с. 17- 25.

20. Ванюшин Б. Ф., Сингх С , Сонвол Г. Изменение метилирования ДНК люцерны при заражении кускутой и тканевые различия в ДНК паразитического растения. - Биохимия, 1979, т. 44, вып. 5, с. 201- 233

21. Васильев В. К., Барибян Д. В., Захарян Р. А., Гальян А. А., Ванюшин Б. Ф. Различный уровень метилирования ДНК в разных отделах головного мозга крупного рогатого скота. - Докл. АН СССР, 1972, т. 205, с. 721-723.

22. Гаузе Г. Г. - Цитировано по кн.: Митохондриальная ДНК. -М.: Наука, 1977, с. 106-109.

23. Демидкина Н, П., Кирьянов Г. И., Ванюшин Б. Ф. Метилирование вновь синтезированной ДНК в культуре мышиных фиброблас-тов. - Биохимия, 1979, т. 44, вып. 8, с. I4I6-I426.

24. Дохнем М., Сулимова Г. Е., Ванюшин Б. Ф. Нуклеотидный состав и пиримидиновые олигонуклеотиды в ДНК некоторых высших растений. - Вестн. М1У, Биология, 1978, № I, с. 70-74.

25. Дохием М., Сулимова Г. Е., Ванюшин Б. Ф. Распределение 5-метилцитозина в пиримидиновых олигонуклеотида ix ДНК некоторых высших растений. - Биохимия, 1978, т. 43, вып. 7, с, I3I2-I3I8.

26. Дрожденюк А. П., Сулимова Г. Е. ^ Ванюшин Б. Ф. Содержание 5-метилцитозина в ДНК пшеницы на разных стадиях онтогенеза. - Вестн. Моск. Ун-та. Биология, 1975, № 4, с. 76-79.

27. Дрожденюк А. П., Сулимова Г. Е., Ванюшин Б. Ф. Изменение характера метилирования и молекулярной популяции ДНК пшеницы при прорастании. - Молекулярная биология, 1976, т. 10, I378-I386.

28. Дрожденюк А, П., Сулимова Г. Е., Ванюшин Б. Ф. Содержание 5-метилцитозина в разных классах повторяющихся последовательностей ДНК некоторых высших растений. - Биохимия, 1977, т. 42, вып. 8, с. I439-I444.

29. Зиньковская Г. Г., Бердышев Г. Д., Ванюшин Б. Ф. Тка- нево-специфическое уменьшение и изменение характера метилирования ДНК крупного рогатого скота при старении, - Биохимия, 1978, т. 43, вып. 10, с. I039-I043.

30. Кирнос М. Д., Александрушкина Н. И., Ванюшин Б. Ф. 5- Метилцитозин в пиримидиновых последовательностях ДНК растений и животных: специфичность метилирования. - Биохимия, 198I, т. 46, вып. 8, с. I458-I473.

31. Кирнос М. Д., Бакеева Л. Е., Волкова А,, Ганичева Н. И., Ванюшин Б. Ф. Митохондриальная природа новообразованной ДНК в стареющих колеоптилях этиолированных проростков пшеницы. - Биохимия, 1983, т. 48, вып. 9, с. I505-I5I2.

32. Кокурина Н. А., Ванюшин Б. Ф. - Дитировано по кн.: Тез. докл. XII Межд. ботан. конгр. Л.: Наука, 1975, с. 26.

33. Кудряшова И. Б., Волкова С, А., Кирнос М. Д., Ванюшин Б. Ф. Метилирование новообразованной ДНК в разные моменты онко-генеза проростков пшеницы. - Биохимия, 1983, т. 48, вып. 9, с. I505-I5I2.

34. Одинцова - Цитировано по кн.: ДНК хлоропластов и митохондрий (структура, репликация, физико-химические свойства). -М.: ВИНИТИ, сер. Биологическая химия, 1976, т. 10, с. 31-36.

35. Остерман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. - М.: Наука, I98I.

36. Пахомова М. В., Зайцева Г. Н., Белозерский А. Н, Наличие 5-метилцитозина и 6-метиламинопурина в составе ДНК некоторых водорослей. - Докл. АН СССР, 1968, т. 2, J^ 3, с. 712-714.

37. Романов Г. А., Ванюшин Б. Ф. Метилирование ДНК у эука- риотов. II. Биологическое значение. - Научн. докл. высш. школы. Биологические науки, I98I, J^ I, с. 5-13.

38. Смирнова Т. А,, Кирьянов Г, И., Будницкая Е. В, Содержание 5-метилцитозина в ДНК листьев пшеницы, зараженных стеблевой ржавчиной. - Научн. докл. высш. школы. Биологические науки, 1976, \% 5, с. 20-23.

39. Сулимова Г. Е. Структурные особенности некоторых растительных и животных ДНК и их отдельных фракций: Автореф. дис. на соиск, ученой степени канд. биолог, наук. М., I97I (Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова) .

40. Сулимова Г. Е., Ванюшин Б. Ф., Хвойка Л. А., Фридрих А., Булгаков Р., Черны Б. О невозможности включения 5-метилцитозина и его нуклеозидов в ДНК высших растений. - Биохимия, 1978, т. 43, вып. 2, с. 240-245.

41. Сулимова Г. Е., Дрожденюк А. П., Ванюшин Б. Ф. Изменение метилируемых последовательностей и молекулярной популяции ДНК пшеницы при прорастании. - Молекулярная биология, 1978, т. 12, ih 3, с. 496-503.

42. Сулимова Г. Е., Мазин А. Л., Ванюшин Б. Ф., Белозерский А. Н. Содержание 5-метилцитозина в различных по составу фракциях ДНК высших растений. - Докл. АН СССР, 1970, т.193, В е, с. I422-I425.

43. Хвойка Л. А., Сулимова Г. Е., Булгаков Р., Башките Е. А,, Ванюшин Б. Ф. Изменение содержания 5-метилцитозина в ДНК растений по мере градиента цветения. - Биохимия, 1978, т. 43, вып. 6, с. 996-1000^

44. Adams R. L. P. Delayed methylation of DNA in developing sea urchin embryos. - Nature New Biol., 1973, v. 244, p. 27--39.

45. Adams R. b. P., Hogarth С DNA methylation in isolated nuclei old and new DNA is methylated. - Biochira. Biophys. Acta, 1973, V. 331, p. 214-222.

46. Adams R. L. P. Newly synthesized DNA is not methylated.- Biochera. et Biophys. Acta, 1974, v. 335, No. 3, p. 365-373.

47. Adams R. L. P., MeKay E. b., Douglas J. Т., Burdon R. H. Methylation of nucleosomal and nuclease sensitive DNA. - Nucl. Acids Res., 1977, v. 4, p. 3097-3045.

48. Adams R. L. P., Fulton J., Kirk D. The effect of 5-aza- deoxycytidine on cell growth and DNA methylation. - Biochim. Biophys. Acta 1982, V. 697, p.286-295.

49. Adams R.L.P., Burdon R.H. DNA methylases in Enzymes of Nucleic Acid Synthesis and Processing, - In: ORG Press Boea Raton. Pla, 1982, v. 2, Hnilico. p. 1-10.

50. Adams R. L. P., Burdon R. H. DNA methylation in eu- karyotes. - C.R.G. Grit. Rev, Biochem., 1982, v. 13» No,4» p. 349-384.

51. Bestwick R.K,, Matheus C. K. Unusual compartmentation of precursors for nuclear and mitochondrial DNA in mouse L. cells,- J. Biol, Ghem,, 1982, v. 257, No. l6, p, 9305-9308,

52. Use restriction enzymes to study eukaryotic DNA methy lation. II. The symmetry of methylated site support a semi-con servative copying of the methylation, - J. Mol, Biol., 1978, V. 118, p. 49-61.

53. Bird A. P, DNA methylation and the frequency of CpG- in animal DNA, - Nucl. Acids. Res,, 1980, v. 8, p, 1499-1509.

54. Bloch S,, Gedar H, Methylation of chromatin DNA, - Nucl, Acids Res., 1976, v. 3, p. 1505-1511.

55. Bonen L., Huh T. Y,, Gray M. W. Gan partial methyla tion explain the complex fragment patterns ohseorved when plant mitochondrial DNA is cleaved with restriction endonucleases ? -PEBS lett., 1980, v. Ill, No 2, p. 340-346.

56. Borek E., Srinivasan P.R. Enzymatic alteration of macro- molecular stmicture. - Prog, Nucl, Acid, Res,, 1966, No 5, p, 157-189.

57. Brown P, L,, Musich P. R., Maio J. I. Cae I: an endo- nuclease isolated from the african green monkey with properties indicating site specific cleavage of homologous and heterogous mammalian DNA. - Nucl. Acid. Res., 1978, v. 5, p. 139-154.

58. Bryant J.A. Biochemical aspects of DNA replication with particular reference to plants. - Biol. Revs. Cambridge Phil, Soc, 1980, V, 55, No 3, p.237-284.

59. Bu:.gler В., Valencia R., Bertaux 0. Mitotic overmethy- lation of ША in synchronous BHK 21 fibroblasts-HS.5 transformed.- 12th PEBS Mett. Dresden, 1978, Abstr. 0637.

60. Bui.gler В., Bertaiix 0., Valencia R. Nucleic acid methy- lation of synchronized BHK 21 HS,5 fibroblast during the mitotic phase.- J. Cell. Physiol., 1980, v. 103, p. 149-157-

61. Burdon R.H., Adams R. L. P. The in vivo methylation of DWA in mouse fibroblasts, - Biochem. Biophys. Acta, 1969, V, 174, No. 1, p. 322-330.

62. Burdon R. H. Enzyme modification of chromosomal macro- molecules. I, DNA and protein methylation in mouse tvunour cell chromatin, - Biochim. Biophys. Acta, 1971, v. 232, p. 359-361.

63. Burton K,, Peterson Y. B. The frequencies of certain sequences of nucleotides in deoxyribonucleic acid.- Biochem. J., 1960, V. 75, p. 17-27.

64. Cooper K. V/. Meiotic conjunctive elements not involving chiasmata. - Proc. Natl. Acad, Sci, USA, 1964, v, 52, p. 1248-1251.

65. David J. B., Brown D. D., Reeder R, H, Composition and structure of chromosomal and structure of chromosomal and amplified ribosomal DNA's of Xenopus laevus, - J. Mol. Biol,, 1970, V, 51, p. 341-353.

66. Deum ling В. Sequence arrangement of a highly methylated satellite DNA of a plant. Scilla: A tandemly repeated inverted repeat. - Proc. Nat. Acad. Sci. tJSA Biol. Sci., 1981, v. 78,No 1, p. 338-342.

67. Doenecke D. Modification of DNA in chromatin with methyl transferase from Haemophilus influenzae Rd. - Eur, J. Biochem., 1979, V. 93, p.481-486.

68. Doerfler W. Review article DNA methylation - a regulatory signal in eukaryotic gene expression. - J. Gen, Virol,,1981, V. 57, No 1, p. 1-20.

69. Doskocil J., Sorm P. Distribution of 5-methylcytosine in pyrimidine sequences of DNA. - Biochim. Biophys. Acta, 1962, V. 33, p. 953-961.

70. Drahovsky D., Morris N. R. Mechanism of action of rat liver DNA methylase. II. Interaction with stranded methyl-acceptor DNA. - J. Mol. Biol., 1971, v. 6l, p. 343-356.

71. Drahovsky D., Morris N.R. Mechanism of action of rat liver DNA-methylase. I. Interaction with double stranded methyl-acceptor DNA. - J. Mol. Biol., 1971, V. 57, p. 475-489.

72. Drahovsky D., Wacker A. Enzymatic methylation of replication intermediates in Enrlich ascites tumour,- Naturwissen-schaften, 1975, Bd. 62, S. 169-190.

73. Drahovsky D., Boehm T. L. J. Enzymatic DNA methylation in higher eixkaryotes.- Int. J. Biochem., 1980, v. 12, No 4, p. 523-528.

74. Evans H.H., Evans Т.Е., Littman A. Methylation of parental and progress DNA strands in physaiTum polycephalum. - J. Mol. Biol., 1973, V. 74, p. 563-572,

75. Gauntier P., Bunemann H., Grotjahn L. Analysis of calf a thymus stellite DNA: evidence for specific methylation of cytosi-ne in C-G-sequences. - Eiir. J. Biochem., 1977» v. 80, p. 175-180.

76. Geraci D., Eremenko Т., Coechiara R., Granieri A., Sca- rano E., Volpe P. Correlation between synthesis and methylation of DNA in HeLa cells.- Biochim. Biophys. Res, Commun., 1977, V. 57, p. 353-360.

77. Glickman B., Van den Elsen P., Radman M. Induced mutagenesis in dam mutants of Escherichia coli: a role for 6-methyla-denine residues in mutation avoidance. - Mol. Gen. Genetics,1978, V. 163, Ho 3, p. 320-331.

78. Gjerset R.A., Martin D.W. Presence of a DNA demethylat- ing activity in the nucleus of murine erythroleukemic cells.- J, Biol. Chem., 1982, v. 257, No 15, p. 8581-8583.

79. Gruenbaura Y., Waveh-Many Т., Cedar H., Razin A. Sequence specificity of methylation in higher plant DNA. - Nature (London), 1981, V. 292, p. 8б0-8б7.

80. Gruenbaura Y., Stein R., Cedar H., Razin A. Methylation of CpG sequences in eukaryotic DNA, - PEBS Lett., 1981, v. 124, No 1, p. 67-71,

81. Gupta P.K., Sirover M.A. Cell cycle regulation of DNA repair in normal and repair deficient human cells. - Chem. Biol, Interactions, 1981, v. 3^, p, 19-31.

82. Gupta P. K., Sirover M, A. Sequential stimulation of DNA repair and DNA stimulation in normal hiiman cells, - Mutation Res., 1980, p, 273-284.

83. Guseinov V. A., Vanyushin B,?. Content and localization of 5-methylcytosine in DNA of healthy and wilt-infected cotton plants, - Biochim, et biophys. Acta, 1975, v, 395, No 3, p, 229--238.

84. Holliday R., Pugh J, E. ША modification mechanisms and gene activity during development, - Science, 1975, v, 187, p. 226-232.

85. Holliday R. A new theory of carcinogenesis. - Br. J. Cancer, 1979, v. 40, p. 513-522.

86. Hotta Y., Hecht H. Methylation of lilium DNA during the meiotic cycle. - Biochim. Biophys. Acta, 1971, v. 238, По 1, p. 170-173.

87. Jackson V., Chalkley R, A new method for the isolation selective deposition of histone on both new and old DNA. - Cell, 1981, V. 23, p. 121-126.

88. Jones R. A., Taylor S. M. Cellular differentiation cyti- dine analogs and DNA methylation. - Cell, 1980, v, 20, p. 85-88.

89. Kalousek Р., Morris N. R. Deoxyribonucleic acid methy- lase activity in pea seadlings. - Science, 1969, v. 1б4, Ыо 3880, p. 721-722.

90. Kappler J. W. The kinetics of DNA methylation in culture of a mouse adrenal cell line. - J. Cell. Physiol,, 1970, v. 75, No 1, p. 21-24.

91. Karran P., Lindahl T. A., Griffin R. Adaptive response to alkylating agents involves alteration in site of 0 -raethylgu-anine residues in DNA. - Nature (London), 1979, v. 280, p. 76-77.

92. Khan M. A., Upadhyaya K. С Synthesis of mitochondrial DITA in relation to nuclear cell cycle in geirainating harley embryos. - Z. Pflanzenphysiol., 1979, Bd. 94, S. 159-161.

93. Kiryanov G. I,, Kimos M. D., Deraidkina H. P., Alexan- drushkina H. I., Vanyushin B. F, Methylation of DNA in L. cells on replication. - PEBS Lett., 1980, v. 112, No 2, p. 225-228.

94. Lautenberger J. A., Kan N. C , Lackey D., Linn S., Edifll M. H., Hutchison С A. Recognition site of the E. coli В restriction enzyme on 0X SB I and SV-40 DNA's: an interi*upted sequence. - Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, v. 75, p. 2271-2282.

95. Mache R., V/aygood E. R. Characterisation of DNA in wheat chloroplasts isolated by a new "laceration tecHnique". -PEBS Lett., 1969, v. 3, No 2, p. 89.

96. Miller J. R., Cartwright E. M. et al. The nucleotide sequence of oocyte 5S DNA in Xenopus laevus. II.. The GC-rich region. - Cell, 1978, v. 13, p. 717-721.

97. Morris P. Deoxyribonucleic acid methylase activity in Pea seedlings. - Science, 1969, v. I64, p. 721-723.

98. Mudd S. H., Gantoni G. L. Activation of methionine for transmethylation. III. The methionine activating enzyme of Baker's yeast. - J. Biol. Chera., 1958, v. 231, p. 481-492.

99. Nass M. K. Differential methylation of mitochondrial and nuclear DNA in cultures mouse, hamster and virus-transformed hamster cells. In vivo and in vitro methylation. - J. Mol. Biol., 1973, V. 80, p. 155-161.

100. Olsson М., Lindahl Т. A. Repair of alkylated DNA in E. coli. - J. Biol. Chem., 1980, v. 255, p. 10568-10571. Ill, Riggs A. D. X. Inactivation, differentiation and DKA metiiylation. Cytogenet. Cell Genet., 19T5> v. 14» No 1, p. 9-11.

101. Sager R., Kitchin R. Selective silencing of eukaryo- tic DNA. - Science, 1975, v. 189, Жо 4201, p. 426-431.

102. Sager R., Grabowy G., Sano H. The mat-I gene in Chla- mydomonas regulates DNA methylation during garnetogenesis, - Cell, 1981, V. 24, No 1, p. 41-45.

103. Sano H., Sager R. Deoxyribonucleic acid raethyltrans- ferase from the eukaryote chlamydomonas reinhardi. - Eur. J. Bio-chem., 1980, v. 105, p. 471-480.

104. Sano H., Grabowy С Differential activity of DNA methyl- transferase in the live cycle of chlaraidomonas reinhardi. - Proc. Nat. A;c:ad. Sci. USA, Biol. Sci., 1981, v. 78, No 5, p. 3118-3122.

105. Scarano E., laccarino M. et al. The heterogeneity of thymine methyl group origin in DNA pyrimidine isostichs of de-velopping sea urchin embryos. - Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1967, V. 57, No 5, p. 130-136.

106. Scarano E. The control of gene fimction in cell differentiation and in embryogenesis. - Ade. Cytopharmac, 1971, No 1, p. 13-23.

107. Schildkraut C.L., Marmur J,, Doty P. - Цитировано ПО: Определение содёрясания гуанина и цитозина в ДНК с помощью ультрацентрифугирования в градиенте плотности хлористого цезия. - В кн.: Методы исследования нуклеиновых кислот. М.: Мир,1970,с.175.

108. Schmidt G., Tannhauser S. J. A method for the determination of deoxyribonucleic acid ribonucleic acid and phosphopro-teins in animal tissues. - J. Biol. Chem., 1945, v. l6l, p. 83--89.

109. Seidman М. М., Levine А, J., Weintrauh Н. The asymmetric segregation of parential nucleosomes during chromosome replication. - Cell, 1979, V. 18, p. 439-445.

110. Shapiro H. S., Chargaff E. Studies on the nucleotide arrangement in deoxyribonucleic acids. IV. Patterns of nucleotide sequence in the deoxyribonucleic acid of rye germ and its fractions. - Biochim. et Biophys. Acta, I960, т. 39, По 1, p. 68-92.

111. Simon D,, Grunert P., Kroger H., Grassman A. In vitro methylation of SV-40 DNA by a methylase from rat liver. - Eur. J. Cell, Biol., 1980, V. 22, p. 33-37.

112. Sneider T. W., Kaput J., Neiman D., 7/estraoreland B. Hemiraethylation of Шк: A basis fo>r genetic recombination ? - In; Transmethylation (Ed. -E. Usdin, R. T. Borchardt, G, R. Creveling. North Holland-New York: Plsevior 1978, p. 473-482.

113. Sneider T. W. Methylation of mammalian DNA. - J. Biol. Ghem., 1972, v. 247, p. 2872-2879.

114. Sneider T. W. The 5-cytosine in CCGG is methylated in two eukaryotic DNA's and MSP I is sensitive to methylation at this site. - Nucl. Acids. Res., 1980, v. 8, p. 3829-3836.

115. Spencer J. H., Chargaff E. Studies on the nucleotide arrangement in deoxyribonucleic acids. VI. Pyriraidine nucleotide clusters and distribution in several species of the AT-type. -Biochera. et Biophys. Acta, 1963, v. 68, No 1, p. 18-27.

116. Tewari К. К., Wildman S. G. Chloroplast DNA from tobacco leaves, - Science, 1966, v. 153» p. 1269-1271.

117. O?osi L., Scarano E. Effect of trypsin on Шк methyla- tion in isolated nuclei from developing sea urchin embroys. -Biochem. Biophys. Res. Coramun., 1973, v. 55, p. 470-479.

118. Tumbull J. P., Adams R. L. P. DNA methylase: purification from astcites cells and the effect of various DNA substrate on its activity. - Nucl. Acids Res., 1976, v. 3, p. 677--682.

119. Vanyushin B. P., Mazin A. b., Vasiliev V. K,, Belo- zersky A. N. The content of 5-methylcytosine in animal DNA: the species and tissue specificity. - Biochim. et Biophys, Acta,1973, V. 229, p. 397-403.

120. Vanyushin B. P., Nemirovsky L. E., Kliraenko V. Y. et al. The 5-methylcytosine in DNA of rate. - Gerontologia, 1973, V. 19, No 2, p. 138-152.

121. Vardimon J., Kresamann A., Cedar H., Doerfler W. Methy- lation of adenovirus genes in transformed cells and in vitro: influence on the regulation of gene expression. - Bur. J. Cell Biology, 1981, V. 25, p. 13-15.

122. Warden W. L., Skoog P. Plower formation in excised tobacco stem segments. I. Methodology and effects of plant hormones, - Plant Physiol., 1969, v. 44, No 10, p. 1402-1406.

123. Warden V/. L. Ploral induction of vegetative plants supplied a purified fraction of deoxyribonucleic acid from stems of flowering plants. - Plant Physiol., 1977, v. 60, No 6, p. 885--891. Ill

124. Woodcock D. M., Adams J. K., Cooper I. A, Characteristics of enzymatic DNA methylation in cultured cells of human and hamster origin, and the effect of D M replication inhibition. -Biochira. et Biophys. Acta 1982, v. 696, p. 15-22.

125. V/uatt G.R. Occurence of 5-methylcytosine in nucleic acids. - Nature, 1950, v. 166, No. 4214, p. 237-241.

126. V/yatt G.R. Recognition and estimation of 5-raethylcyto- sine in nucleic acids. - Biochem. J., 1978, v, 48, p. 581-588.

127. Yadav S. P. Phytmic increase in DNA content and in- corporation of ( H)- thymidine in the developing wheat embryo during seed gennination. - Planta, 1976, v. 129» p. 87-89.

128. Yamamoto M., Miklos G. L. G. Genetic studies on hetero- chromatin in D.melanogaster and their implications for the functions of satellite DM. - Chromosoraa, 1978, v, 66, p. 71-78.

129. Zimmerman Z., Goldberg R, Molecular organization of plant genome. - J. Cell Biol., 1975, v. 67, No 2, pt.2, p. 471--473. Ц.'.