Роль блуждающего нерва в регуляции функций альвеолярных макрофагов при хроническом эмоциональном стрессе

Казакова, Мария Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль блуждающего нерва в регуляции функций альвеолярных макрофагов при хроническом эмоциональном стрессе
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль блуждающего нерва в регуляции функций альвеолярных макрофагов при хроническом эмоциональном стрессе"

005048785

На правах рукописи

/Г'

КАЗАКОВА МАРИЯ ВИКТОРОВНА

РОЛЬ БЛУЖДАЮЩЕГО НЕРВА В РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИЙ АЛЬВЕОЛЯРНЫХ МАКРОФАГОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЭМОЦИОНАЛЬНОМ СТРЕССЕ

03.03.01 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 ЯНВ 2013

Самара - 2013

005048785

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ижевская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Ирина Георгиевна Брындина, ГБОУ ВПО ИГМА Минздрава России (г. Ижевск)

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Олег Львович Никитин ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России (г. Самара)

доктор медицинских наук, профессор

Тимур Львович Зефиров ФГА ОУ ВПО КФУ(г. Казань)

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита диссертации состоится 013 года в /У часов на

заседании диссертационного совета Д 2С(8 085.03 при ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (443079, г. Самара, пр. К.Маркса, 165 Б).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор ^ В.А. Кельцев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Механизмы эмоционального стресса и стрессорных нарушений физиологических функций являются актуальной медико-биологической проблемой. Известно, что в реализацию стрессорных реакций вовлечены центральные механизмы, нейрохимическим субстратом которых являются норадренергическая, холинергическая, дофаминергическая, серотонинергическая и ангиотензинергическая нейромедиаторные системы. Различные виды эмоционального стресса (иммобилизация, ограничение подвижности, изоляция) сопровождаются повышением уровня ангиотензина II в мозге и усилением экспрессии АТ1 рецепторов, а блокаторы рецепторов ангиотензина II устраняют стресс-индуцированные нарушения ряда физиологических функций (,1.М.8аауе(1га е1 а1., 2005, 2011).

Стресс-реакция сопровождается изменениями функций иммунной системы, причем, в процесс вовлекаются структурно-функциональные элементы как врожденного, так и адаптивного иммунитета (Е.А.Корнева, 1990; 8.К.8ипс1аг, 1990;

B.В.Абрамов, 1991; Е.М^егпЬе^, 1995; Г.Н.Крыжановский, 1997; 0.\Угопа, 1999; И.Г.Акмаев, 2001; Р.Евкапскл, 2003). Одним из клеточных компонентов врожденной иммунологической резистентности являются макрофаги, в том числе макрофаги легких. Альвеолярные макрофаги (АМ) - это полифункциональные клетки, которые, с одной стороны, участвуют в механизмах неспецифической защиты от инфекционных агентов, клиренсе альвеолярной поверхности от инородных частиц и «отработанного» сурфактанта, а с другой стороны, осуществляют секрецию цитокинов (ИЛ-1, ФИО), ферментов, в том числе фосфолипаз, оксида азота, активных форм кислорода, способных индуцировать острое или хроническое повреждение легких (В.В.Ерохин, 2000).

При стрессе в системе мононуклеарных фагоцитов происходят количественные и качественные изменения (Т.Китае, 2003; В.А.Назаров, 2007;

C.О.Ьеапс1го, 2007), однако, исследованию механизмов стрессорных влияний на АМ посвящены единичные работы. Выводы о влиянии стресса на функции АМ противоречивы. С одной стороны, стресс стимулирует секрецию цитокинов, активных форм кислорода, супероксид-аниона этими клетками (Е.Вго1Щ-Но!иЬ, 1996, 1998), с другой стороны - стресс ослабляет фагоцитарную функцию АМ (С.О.Ьеапс1го, 2007). Следует подчеркнуть, что вышеупомянутые эксперименты были проведены в условиях острого стресса, тогда как влияние хронических, повторяющихся стрессорных воздействий на функции АМ исследовано недостаточно.

Нейрогуморальная регуляция функций иммунных клеток при стрессе включает в себя центральные и периферические звенья. Согласно классическим представлениям, в механизмах стрессорной реакции участвуют две основные системы - гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая и симпато-адреналовая (М.Г.Пшенникова, 2000). Установлено, что выход на периферию стресс-система имеет также через блуждающий нерв, описан паравентрикуловагусный путь, через который могут быть реализованы эффекты центральных стресс-реализующих структур (И.Г.Акмаев, 1999; М.Г.Пшенникова, 2000). Не исключено, что в

механизмах стресс-опосредованных изменений активности AM, как основных клеточных компонентов неспецифической резистентности легких, определенную роль также может играть блуждающий нерв.

Блуждающий нерв является смешанным нервом: в его состав входят афферентные (более 75%) и эфферентные волокна. Общепризнано, что эффекторная функция п. vagus реализуется при участии холинергических механизмов. В настоящее время широко обсуждается противовоспалительный эффект парасимпатической нервной системы и, в частности, блуждающего нерва, в механизмах изменений иммунологической реактивности организма (П Ф Забродский, 1993, 1995; Kevin J.Tracey, 2007). В основном, его связывают с н-холинорецепторами (a7nAChR, «4nAChR, ß2nAChR) фагоцитирующих клеток. Известно также, что блокада м-холинорецепторов AM (особенно МЗ подтипа) подавляет секрецию этими клетками факторов хемотаксиса для нейтрофилов и ограничивает воспалительный процесс при хронической обструктивной болезни

легких (F.Bühling, 2007; G.Vacca, 2011).

Афференты блуждающего нерва передают в ствол мозга механо- и хемочувствительные сигналы, на основе которых осуществляется автономная, эндокринная, и поведенческая регуляция гомеостаза. Присутствие в определенной доле чувствительных терминалей блуждающего нерва (10-30%) везикул, содержащих нейропептиды, в основном субстанцию Р, кокальцигенин, нейропептид А (В.А.Золотарев, А.Д.Ноздрачев, 2001), делает актуальным исследование локальной «эффекторной функции» этих окончаний. При стрессе усиливается выделение тахикининов, содержащихся в терминалях капсаицинчувствительных кожных афферентов (L.K.Singh, 1999; R.A.Joachim, 2006). В ряде работ описаны стресс-индуцированные изменения легочного сурфактанта, обусловленные влиянием капсаицинчувствительных афферентов п.vagus (В.Л.Исаева, 2004, 2005; И.Г.Брындина, 2006). Доказано активирующее влияние субстанции Р (in vitro) на поглотительную и бактерицидную функции AM, а также секрецию провоспалительных цитокинов (E.Boichot, 1993; M.Murns-Espin, 1995; S.Brunelleschi, 1996; C.Bardelli, 2005; N.N.Sun, 2007). Показано, что капсаицин при системном или периневральном применении существенно ограничивает локальные висцеральные проявления стресс-реакции: язвообразование в желудке, повреждения гепатоцитов и дегенеративные изменения мочевого пузыря (A.Sugitani et al„ 1992; N.Erin et al.; 2000, F.Ercan et al„ 2001). Характер участия капсаицинчувствительных афферентных волокон в регуляции активности альвеолярных макрофагов в условиях стресса не изучен.

Цель исследования - выяснение роли капсаицинчувствительных афферентных волокон блуждающего нерва в реализации стресс-опосредованных влияний на фагоцитарную и кислород-зависимую бактерицидную функции альвеолярных макрофагов.

Задачи исследования:

1) оценить поглотительную и бактерицидную функции альвеолярных макрофагов при хроническом эмоциональном стрессе, индуцированном ограничением подвижности животных в тесных клетках-пеналах или внутрижелудочковым введением ангиотензина II;

2) выявить эффекты колхициновой блокады аксонального транспорта в блуждающем нерве или истощения депо нейропептидов в его капсаицинчувствительных афферентах на функции альвеолярных макрофагов при хроническом эмоциональном стрессе;

3) изучить влияние блокады холинергических нейромедиаторных механизмов атропином на поглотительную и бактерицидную функции альвеолярных макрофагов в условиях хронического эмоционального стресса.

Научная новизна. Установлено активирующее влияние блуждающего нерва на клеточное звено системы неспецифической резистентности легких в условиях хронического эмоционального стресса. Доказана ведущая роль капсаицинчувствительных пептидергических афферентов блуждающего нерва в механизмах стресс-индуцированной активации поглотительной и бактерицидной функций альвеолярных макрофагов.

Практическая значимость. Повышение активности альвеолярных макрофагов можно расценивать как один из механизмов адаптации респираторного аппарата к стрессу. С другой стороны, необходимо учитывать, что активация альвеолярных макрофагов в условиях продолжительного эмоционального напряжения может индуцировать повреждение легочной ткани.

Полученные данные могут послужить теоретической базой для разработки профилактических и лечебных мер, уменьшающих негативное воздействие эмоционального стресса на легочные компоненты системы естественной резистентности организма, путем направленного фармакологического воздействия на центральные ангиотензинергические структуры или пептидергические механизмы, реализуемые при участии капсаицинчувствительных афферентов блуждающего нерва.

Положения, выносимые на защиту:

1. Хронический эмоциональный стресс, вызванный ограничением подвижности животных или активацией центральных стресс-реализующих ангиотензинергических структур, сопровождается повышением поглотительной и бактерицидной функций альвеолярных макрофагов.

2. Колхициновая блокада аксонального транспорта в блуждающем нерве и истощение депо нейропептидов в его капсаицинчувствительных афферентах ограничивают стресс-индуцированную активацию альвеолярных макрофагов.

3. В реализации активирующего влияния блуждающего нерва на поглотительную и бактерицидную функции альвеолярных макрофагов при стрессе ведущую роль играют его капсаицинчувствительные афферентные волокна.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на VI межвузовской научной конференции молодых ученых «Актуальные медико-биологические проблемы» (Ижевск, 2006); IV Российской конференции «Нейроиммунопатология» (Москва, 2006); научно-практической конференции посвященной юбилею кафедры патофизиологии (Ижевск, 2007); XVI Всероссийской научно-практической конференции «Нейроиммунология» (Санкт-Петербург, 2008); IX Российской конференции иммунологов Урала, посвященной 90-летию проф. Л .Я. Эберта (Челябинск, 2011); на совместном заседании кафедр нормальной физиологии, патофизиологии, биохимии, биологии и экологии человека, микробиологии, иммунологии .и вирусологии, клинической биохимии и лабораторной диагностики ФПК и ПП ГБОУ ВПО ИГМА Минздрава России; на заседании кафедры нормальной физиологии ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России.

Декларация личного участия автора. Автором самостоятельно проведен анализ литературы по профилю диссертационного исследования. Автор участвовала в проведении всех серий экспериментов, лично осуществляла забор материала, определение функций АМ, биохимические исследования, полностью провела статистическую обработку данных. Доля личного участия в совместных

публикациях составляет 70%.

Публикации результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 17 работ, из них 3 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций.

Внедрение результатов исследования. Материалы диссертации включены в лекционные курсы по нормальной физиологии и патофизиологии Ижевской

государственной медицинской академии.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 172 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы из трех подглав собственных исследовании, обсуждения результатов исследования, выводов и списка литературы. Работа содержит 27 таблиц и 19 рисунков. Библиографический указатель содержит 355 источников, из которых 153 работы отечественных и 202 работы зарубежных авторов.

ОРГАНИЗАЦИЯ, ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Опыты проведены на белых нелинейных крысах -самцах массой 180-230 г, в возрасте 2-3 месяца, содержавшихся в стандартной обстановке вивария на обычном рационе. Эксперименты проводили в осенне-зимний период, в первой половине дня, в условиях, позволяющих избежать излишних физических страданий, в соответствии с требованиями Хельсинскои декларации Всемирной Медицинской Ассоциации (пересмотр от 2004 г.), после одобрения этического комитета Ижевской государственной медицинскои академии. Дизайн исследования представлен на рисунке 1.

Хронический эмоциональный стресс вызывали иммобилизацией животных по 10 часов в течение 10 дней в тесных клетках-пеналах с регулируемым подвижным барьером, позволяющим изменять длину клетки. Ангиотензин II

Рис 1. Дизайн исследования

(AT II) вводили посредством микроинъектора через имплантированные канюли, вживленные в правый боковой желудочек мозга по координатам атласа мозга (Я.Буреш, 1962; АР= +1; V= -3,7; S=2,0, обезболивание - этаминал нагрия 50 мг/кг и местная анестезия 0,25% раствором новокаина, стереотаксическая установка СЭЖ-2, фиксация канюль эвекролом). Через 5-7 дней после операции вводили микродозы AT II (150нг - 25,33 мкмоль), растворенного в 5 мкл изотонического раствора NaCl (Я.Буреш, 1962; Л.С.Исакова 1991; Г.Е.Данилов, 1992, 1997). Процедуру повторяли через день, в течение 10 дней. Контроль локализации канюль осуществляли морфологически.

Заготомию осуществляли в шейном отделе правого блуждающего нерва (обезболивание - этаминал натрия, 50 мг/кг) путем полного поперечного пересечения нервного ствола. Результаты оценивали через 10 дней после операции. Атропин вводили внутримышечно в течение 10 дней в дозе 0,05 мг/кг массы тела крысы (M.E.Olson et al„ 1994). Нарушение аксонального транспорта в блуждающем нерве производили путем аппликации миниатюрного ватного тампона, смоченного в растворе колхицина (10 ммоль/л, «Мегск»; Е.М.Волков, 1985; Т.Л.Зефиров, 1991), истощение депо регуляторных пептидов, содержащихся в терминалях капсаицинчувствительных афферентов, осуществляли путем аппликации миниатюрного ватного тампона, смоченного в растворе капсаицина (50мкМ, «Merck»; U.Petsche, 1983) на шейный отдел нерва. Длительность экспозиции в обоих случаях - по 10 мин. Результаты оценивали через 10 дней после операции. При сочетании воздействий на головной мозг и блуждающий нерв интервал между операциями составлял 4-5 дней. В качестве контроля использовались данные, полученные: а) на интактных крысах; б) на животных, которым интрацистернально вводили эквивалентное количество 0,9% NaCl; в) на крысах, у которых для аппликации на блуждающий нерв использовали раствор 0,9% NaCl, г) на крысах, которым внутримышечно вводили эквивалентное

количество 0,9% NaCl.

Животных выводили из эксперимента путем кровопускания из общей сонной артерии под легким наркозом (этаминал натрия 30 мг/кг). Бронхоальвеолярные комплексы извлекали и готовили бронхоальвеолярные смывы (БАС). Каждое легкое раздельно промывали через введенную в бронх канюлю изотоническим раствором NaCl, доводя объем лаважной жидкости в пересчете на массу легкого (в среднем до 60-65 мл для правого легкого, до 30-35 - для левого).

Естественную иммунную резистентность легких оценивали по ряду показателей: общее количество лейкоцитов в БАС (методом подсчета в счетной камере Бюркера с сеткой Горяева), общее количество альвеолярных макрофагов в эндопульмональной цитограмме (окраска по Романовскому-Гимзе, подсчет в 10 участках мазка, всего учитывалось по 500 клеток) и их процентное соотношение.

В мазках, полученных из клеток бронхоальвеолярного лаважа, фагоцитарную активность оценивали по фагоцитарному индексу (ФИ -количество фагоцитирующих клеток из 100 клеток), фагоцитарному числу (ФЧ -среднее число объектов фагоцитоза, поглощенное одним фагоцитом) после 30 и 60 минут инкубации с объектами фагоцитоза и индексу завершенности фагоцитоза (ИЗФ = ФЧ 30/ФЧ 60). Фагоцитоз считали завершенным при ИЗФ >1

(Н.М.Кондрашова, 2010). В качестве объекта фагоцитоза использовали инактивированные нагреванием до 60" в течение 1 часа пекарские дрожжи. Считали, что ФИ отражает поглотительную активность AM, ФЧ — ее интенсивность.

Для оценки бактерицидной активности альвеолярных макрофагов использовали НСТ-тест в модификации Д.Н.Маянского, основанный на реакции восстановления нитросинего тетразолия до нерастворимого диформазана, образующегося при контакте с продуктами «кислородного взрыва», и отложения его гранул внутри фагоцитов (Д.Н.Маянский, 1996). Подсчитывали общее количество диформазан-позитивных (ДФ«+») клеток (иммерсионный объектив 90х, в 4 полях, всего 100 клеток, %) в спонтанном (ДФ«+»баз) и стимулированном (ДФ«+»стим) тестах (индуктор - латекс). По разнице показателей ДФ«+»стим и ДФ«+»баз вычисляли функциональный резерв фагоцитов (ФРФ). В популяции диформазан-позитивных макрофагов оценивали интенсивность НСТ-реакции по формуле Астальди-Верга (1957), подсчитывали цитологические индексы (ЦИбаз и ЦИстим) и индекс активации макрофагов (ИАМ = ЦИстим / ЦИбаз). Считали, что данные показатели отражают разные степени активности внутриклеточных кислород-зависимых ферментативных систем альвеолярных макрофагов.

В бронхоальвеолярных смывах оценивали количество общего белка (набор реагентов с бромфеноловым синим «TOTAL PROTEIN «Е-FL» фирмы Vital Diagnostics (СПб)). Для оценки влияния фосфолипидных компонентов сурфактанта на функции макрофагов использовали данные о содержании общих фосфолипидов и их фракций, полученные на тех же животных В.Л.Исаевой (с разрешения автора).

Характер общих реакций на стресс со стороны клеток врожденного иммунитета оценивали ориентировочно путем подсчета лейкоцитарной формулы крови (окраска по Романовскому-Гимза, подсчет в 4 полях зрения, всего 200 клеток белой крови, иммерсионный объектив 90х). С целью подтверждения развития экспериментального стресса определяли массу надпочечников, содержание в плазме крови животных 11-оксикортикостероидов (11-ОКС) флуориметрическим методом (А.Г.Резников, 1980), уровень катехоламинов (КХА) фотоэлектроколориметрическим методом (В.Г.Колб, 1976).

Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики и корреляционного анализа на персональном компьютере IBM PC с использованием программы «Microsoft Excel» для операционной системы Windows ХР. Определяли следующие параметры: М - средняя арифметическая, ш - ошибка средней арифметической, г - коэффициент корреляции. Достоверность различий определяли по и - критерию Манна-Уитни для уровней значимости 5%, 1% и 0,1% (вероятность ошибочной оценки Р<0,05, Р<0,01 и Р<0,001).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Иммобилизация животных и введение микродоз AT II в правый желудочек мозга сопровождались активацией поглотительной и бактерицидной функций AM: показатели неспецифической резистентности легких (ФИ 30, ФИ 120, ФЧ 30, ФЧ 120, ИЗФ, ДФ«+»баз, ЦИбаз, ЦИстим) возрастали (табл 1).

Таблица 1

Поглотительная и бактерицидная активность альвеолярных макрофагов при хроническом иммобилизациошюм стрессе и интрацистерналыюм введении ангиотензина II

Показатель Правое легкое Левое легкое

Контроль (п=8) Стресс (п=10) Ангиотензин II <п=6) Контроль (п=8) Стресс (п = 10) Ангиотензин П (п=6)

ФИ через ЗО'инкубации 33,83 ± 0,7 66,49 ± 1,59*** 79,2 ±4,95*** 33,28 ±0,68 61,8±035*** 81,2 ±339***

ФИ через 120' инкубации 60,5 ±2Д8 91,8±4,84*** 87,26 ±3,16*** 60,0±2,12 90,4±2^7*** 86,25 ±2,48***

ФЧ через ЗО'инкубации 1,62 ± 0,08 7,02±0,29*** 6,12±0,04*** 1,62 ±0,05 8,05 ±0,1*** 5,12±0,05***

ФЧ через 120' инкубации 1,54 ±0,09 3,79±0,47*** 3,75 ±038*** 1,45±0,01 337±034* 3,89 ±0,037***

ИЗФ 1,05 ±0,01 1,8±0,12*** 1,63 ±0,1* 1,11 ±0,08 2,09 ± 0,05*** 13 ± 0,058*

ДФ«±»баз, % 48,25 ±3,23 58,3 ± 1,12» 58,2 ± 1,3* 47,13 ±4,3 58,16 ±'2,8* 57,2 ± 1,5*

ДФ^Ысгим, % 64,12 ± 1,61 59,4 ± 1,01* 59,2 ± 1,2* 64,75 ±3,88 59,12 ±8,1* 58,3 ±1,15*

ФРФ,% 14,5 ± 1,12 1,1 ±0,11*** 1,01 ±0,002*** 17,52 ±0,08 0,96 ±0,02*** 1,1 ±0,05***

ЦИбаз 0,94 ± 0,07 2ДЗ± 0,208*** 2Д7± 0,069*** 0,91 ±0,06 2,19 ± 0,228*** 2^4 ± 0,087***

ЦИсшм 1,45 ± 0,06 243±0,П *** 2,94±0,07*** 1,35 ±0,02 2,61 ±0,139*** 2,81 ±0,11***

ИАМ иЗ ± 0,092 1,169±0,05*** 1,29 ±0,06* 1,52 ±0,08 1,187±0,065 1,28 ±0,05

Примечание: * - достоверность решшчий показателей с кошралем (* - р<0,05, *** - р<0,001). ФИ - фагоцитарный индекс, ФЧ - фагоцитарное число, ИЗФ -индекс завфшенности фагоцотгаа, ДФ«+» - диформазан-пгаигивные клетки, ФРФ - функциональный резерв фагоцитов, ЦП - цитологический индекс, ИАМ -ивдекс аюивации макрофагов.

Функциональный резерв AM (ФРФ, ИАМ) снижался. В правом и левом легком изменения были идентичны. Иммобилизация животных и введение микродоз AT II в правый желудочек мозга вызывали умеренный прирост уровней 11-ОКС и КХА. При иммобилизации животных наблюдалось двустороннее повышение общего количества лейкоцитов, макрофагов в БАС. При интрацистернальном введении AT II мы наблюдали увеличение доли AM в эндопульмональной цитограмме обоих легких.

Глюкокортикоиды (ГК) и адреналин, уровни которых повышаются при стрессе, могут оказывать влияние на функции AM (J.H.Persoons et al, 1997; E.Broug-Holub, 1996; R.P.Schleimer, 2004). Известно, что ГК подавляют провоспалительную активность клеток иммунной системы. Однако показано, что долговременное воздействие малыми концентрациями ГК и непродолжительная инкубация AM с большими дозами ГК способствуют усилению выработки ИЛ-1 и NO макрофагами легких (E.Broug-Holub, 1996); таким образом, установлено, что эффект глюкокортикоидов зависит от дозы и времени экспозиции. В нашем эксперименте при иммобилизационном стрессе были выявлены положительные корреляционные взаимосвязи между показателями фагоцитарной и бактерицидной активности (ЦИстим правого легкого, ИАМ левого легкого, ФЧ 120 правого легкого) и уровнем 11-ОКС в плазме крови (г = 0,88, 0,92 и 0,93 соответственно, р<0,05). При введении AT II была обнаружена прямая корреляция между уровнем 11 -ОКС и ФИ 30 правого легкого (г = 0,7, р<0,05), что может свидетельствовать о стимулирующем влиянии ГК на ряд изученных нами функций.

Другим возможным механизмом, оказывающим влияние на AM при стрессе, может являться активация симпатоадреналовой системы. Макрофаги легких экспрессируют рецепторы к катехоламинам, причем эффект модулирующего воздействия на рецепторы зависит от степени зрелости клетки, уровня ее базальной активности, дифференцировки, а также преобладания на мембране той или иной популяции адренорецепторов (Е.А. Корнева, 1988; J.Wong, 2012). Известно, что активация а2-адренорецепторов фагоцитирующих клеток посредством фосфатидил-инозитолового пути и изменения концентрации внутриклеточного Са2+ приводит к усилению фагоцитоза, развитию респираторного взрыва, слиянию фагосомы с лизосомой, секреции лизосомальных ферментов. Однако преобладающий подтип адренорецепторов в легком - р2-адренорецепторы. AM также экспрессируют на своей поверхности Р2-адренорецепторы (P.A.Henricks et al., 1988). Согласно экспериментальным данным последних лет, активация р2-адренорецепторов макрофагов ограничивает синтез и секрецию провоспалительных цитокинов (M.Bosman et al., 2012; J.Wong, 2012). При интрацистернальном введении AT II мы выявили тесную положительную корреляционную взаимосвязь между уровнем КХА и ФИ 30 правого и левого легкого (г = 0,7, р<0,05), между КХА и показателями бактерицидной активности AM (г КХА / ЦИбаз = 0,53 для правого легкого и 0,63 - для левого легкого, р<0,05). При иммобилизационном стрессе положительных корреляционных взаимосвязей между КХА и показателями поглотительной и бактерицидной активности AM мы не наблюдали.

Не отрицая прямого влияния ГК и КХА на функции АМ, нельзя исключить их опосредованный эффект через компоненты легочного сурфактанта. Раннее в экспериментах (В.Л.Исаева, 2005; И.Г.Брындина, 2006), выполненных с использованием аналогичной модели стресса, было выявлено увеличение количества общих фосфолипидов сурфактанта (ОФЛ), в основном за счет фракции фосфатидилхолина (ФХ) и лизофосфатидилхолина (ЛФХ). Известно, что клетки-продуценты сурфактанта - альвеолоциты 2 типа (АЦ 2) экспрессируют рецепторы к ГК и КХА- данные вещества стимулируют синтез и секрецию фосфолипидов и апопротеинов сурфактанта (С.11.Мепс1е180п, 1991; А.К.Ке1а, 1990; А.СЬапс1ег, 1990; 1.Е.Кеепеу, 1993; ТЛавкоИ, 1996; В.В.Ерохин, 2000). Изменения фосфолипидного спектра сурфактанта при стрессе могут быть обусловлены действием КХА, активирующих фосфолипазу А2 и перекисное окисление липидов (П.А.Мотавкин, 1998; М.Г.Пшенникова, 2000). Макрофаги легких экспрессируют рецепторы к липо'протеидным комплексам сурфактанта, специфическим белкам БР-А и БР-Э, участвуют в утилизации измененного сурфактанта (В.В.Ерохин, 2000). Белковые компоненты альвеолярного выстилающего комплекса способны повышать поглотительную активность АМ (П.В.Сергеев, 1999). В нашей работе не было найдено четких корреляционных взаимосвязей между фосфолипидными фракциями и показателями фагоцитарной и бактерицидной активности АМ, что однако не исключает влияния сурфактанта на эти функции посредством апопротеинов (8Р-А, С.Я.МепскЬоп, 1991; Т.^коИ, 1996).

Согласно данным литературы, блуждающий нерв играет существенную роль в нейроиммунных взаимодействиях (Р.Е5капс1ап, 2003). Влияние блуждающего нерва на органы-мишени может осуществляться посредством эфферентных (холинергических) и афферентных (пептидергических) волокон. Для выяснения роли капсаицинчувствительных афферентов блуждающего нерва в стресс-индуцированных изменениях клеточного звена неспецифической резистентности легких мы провели ряд экспериментов, в которых с помощью ваготомии, аппликации на нерв колхицина или капсаицина исключали холинергическое и (или) пептидергическое воздействие на легкие.

Показано, что при ваготомии возрастала как активность (ФИ 30), так и интенсивность (ФЧ 30, ФЧ 120, ИЗФ) фагоцитоза, причем в ипсилатеральном легком эффект был более выражен. Также ваготомия приводила к повышению бактерицидной активности АМ с преобладанием эффекта на стороне воздействия (ДФ«+»баз, ДФ«+»стим) и усилению интенсивности процессов внутриклеточного переваривания (ЦИбаз, ЦИстим, табл 2). Подобный эффект мог быть связан с «отменой» противовоспалительного холинергического воздействия блуждающего нерва на активность макрофагов. С другой стороны, устранение пептидергичских эффектов афферентов также могло оказать влияние на исследуемые показатели.

При ваготомии наблюдалось повышение общего количества лейкоцитов, уровня белка БАС и положительные корреляционные связи между уровнем белка и ФЧ что отражает параллельное нарастание двух процессов - экссудацию жидкости и макрофагальную активацию в очаге воспаления, развившегося вследствие денервации ткани.

Таблица 2

Поглотительная и бактерицидная активность альвеолярных макрофагов при правосторонней ваготомии, колхициновой блокаде правого блуждающего нерва и истощении депо нейропептидов в его

Показатель Правое легкое Левое легкое

Контроль (п=10) Ваготомия (п=6) Колхицин (п = 15) Капсаицин (п= 15) Контроль (п=10) Ваготомия (п=6) Колхицин (п = 15) Капсаицин (п= 15)

ФИ через ЗО'инкубации 25,01 ±5.8 89,76 ±2,05 *** 38,9 ±6,5 46,1 ±8,4 26,2 ±6,49 54,6 ±1,85 41,2±8,9 54,18 ±10,2

ФИ через 120' инк>бации 72,6 ±6,6 80,1 ±338 62,28 ±4,01 67,4±93 68,8 ±2,1 73,1 ±235 70,09 ±6,3 65,6 ±8,1

ФЧ через ЗО'инкубации 2,7 ±0,28 6,13 ±0,28 1,75 ±038 33 ±0,6 2,76 ±0,09 4,25 ±0,58 1,7 ±026 2,81 ±0,98

ФЧ через 120' инк><)ацин 236±0,6 3,9 ±0,2 *** 2,65 ±0,22 43 ±1.1 235 ±0,1 2,1 ±039 233±0,049 4,06±1Д

ИЗФ 1,05 ±0,018 1,5±0,012 * 0,66 ±0,009 0,76 ±0,2 1,1 ±0,081 1,9 ±0,05 * 0,73±0,011 *** 0,67 ±0,12

ДФ«+»баз, % 41,5 ±4,1 89,1 ±2,2 *** 68,9±8,16 * 61,7±8,7 40,5 ±3,1 64,8 ± 1,01 *»* 513 ±9,6 44,1 ±5,29

ДФ«+»сп«м, % 56,75 ±2,7 91,7 ¿0,8 693 ±5,8 673 ±6,9 57,1 ±2,1 69,1 ± 1,95 *** 57,4 ±83 58,05 ±4,26

ФРФ,% 14,92 ±03 2,5910,059 *** 2,44 ±0,9 *** 6,42 ±2,8 16,62 ±0,42 4,29 ±0,48 5,8 ± 1,9 *** 6,05 ±235 ***

ЦИбаз 1,60 ±0,092 2,06±0,11 * 1,86±0Д4 131 ±0,03 1,68 ±0,09 1,67 ±0,07 1,75±0,16 1,5 ±0,1

ЦИсгам 2,05 ±0,09 232 ±0,07 * 233±034 1,85 ±0,08 2,05 ±0,195 2,07 ±0,05 2,6 ±0,24 1,88 ±0,(И

НАМ 1,287±0,08 1Д±0,08 1Д9±0,1 1,19±0,04 1,22±0,12 13 ±0,05 1,48±0,12 1Д7±0,14

Примечание: * - достоверность различий показателей с контролем (* - р<0,05, *** - р<0,001). ФИ - фагоцитарный индекс, ФЧ -фагоцитарное число, ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза, ДФ«+» - диформазан-позитивные клетки, ФРФ - функциональный резерв фагоцитов, ІДИ - цитологический индекс, НАМ - индекс активации макрофагов.

Колхицин - алкалоид из безвременника осеннего. Известно, что колхицин вызывает диссоциацию тубулиновых микротрубочек (Ф.Хухо, 1990), нарушает процессы выстраивания цитоскелета и связанные с ним функции клетки (Ю.Сузуки, 1998; E.Pozas, 1999). Колхицин блокирует аксональный транспорт при аппликации на нерв (Е.М.Волков, 1985). При аппликации колхицина на блуждающий нерв наблюдалось повышение поглотительной и бактерицидной активности AM (как при ваготомии), однако изменения (ФИ 30, ФИ 120, ФЧ 30, ФЧ 120, ДФ«+»стим, ЦИбаз, ЦИ стим) оказались статистически недостоверными (табл 2). Известно, что блокада аксонального транспорта может частично нарушать процессы холинергической передачи в блуждающем нерве (А.С.Кириллова, 2009), хотя, согласно исследованиям Т.Л.Зефирова (1991), Е.М.Волкова (1985), импульсная активность нерва при данном воздействии сохраняется.

Действие капсаицина на нерв, в отличие от колхицина, нарушающего аксональный транспорт и в эфферентных, и в афферентных волокнах, является более избирательным. Доказано, что чувствительность к капсаицину выражена в основном у немиелинизированных С и отчасти А5-волокон блуждающего нерва (S.Bevan, 1992). Капсаицин стимулирует кратковременный выброс нейропептидов из терминалей первичных афферентов, сменяющийся продолжительной блокадой синтеза и транспорта нейропептидов. Описан нейротоксический эффект капсаицина: набухание 32-40% безмиелиновых волокон как дистальнее, так и проксимальнее места аппликации этого вещества, который может продолжаться 2-3 недели, что подтверждается морфологическими исследованиями (В.А.Золотарев, А.Д.Ноздрачев, 2001). Десенситизация не затрагивает эфферентные автономные нейроны (P.Holzer, 1992). В нашей работе направленность изменений показателей фагоцитарной и бактерицидной активности AM при истощении депо нейропептидов в терминалях капсаицинчувствительных афферентов блуждающего нерва была такой же, как при ваготомии, однако изменения не являлась статистически достоверными (табл 2).

Сопоставляя результаты, полученные при односторонней колхициновой и капсаициновой блокадах, необходимо рассмотреть вопрос о роли холинергических механизмов блуждающего нерва в регуляции функций альвеолярных макрофагов. Поскольку известно, что к повышению активности AM приводит активация М-холинорецепторов, особенно МЗ-подтипа (F.Bühling, 2007; G.Vacca, 2011), мы попытались оценить роль М-холинергических механизмов путем системного введения их блокатора атропина.

Действительно, повторные внутримышечные инъекции атропина характеризовались уменьшением количества фагоцитирующих (ФИ 30, ФИ 120) и кислород-продуцирующих (ДФ«+»баз, ДФ«+»стим) клеток. При этом, однако, повышалась интенсивность процессов поглощения и переваривания объектов (ФЧ 30, ФЧ 120, ЦИбаз, табл 3), а фагоцитоз оставался незавершенным (ИЗФ = 0,83 ± 0,012 справа и 0,89 ± 0,007 слева). Возможно, усиление процессов интенсивности фагоцитоза является компенсаторным в ответ на снижение количества функционально активных макрофагов. Не исключено действие атропина на АЦ 2 (В.В.Ерохин, 2000) с последующим изменением синтеза компонентов сурфактанта, влияющих на активность AM.

При хроническом иммобилизационном стрессе на фоне внутримышечного введения атропина направленность и степень изменений показателей функций

Таблица З

Поглотительная и бактерицидная активность альвеолярных макрофагов при внутримышечном введении атропина, иммобилизацнонном стрессе и при сочетании данных воздействий

Показатель

Правое легкое

Контроль (п=8)

Атропин (п=б)

Стресс (п = 10)

Стресс+ атропин (п=7)

Левое легкое

Контроль (п=8)

Атропин (п=6)

Стресс (11=10)

Стресс+ атропин (п=7)

ФИ через 30'инкубации

33,83 ± 0,7

15,0±131 ***

66,49 ± 1,59

72,6 ±1,9 ***#

33,28 ±0,68

16,8 ±1,62

61,8±035 ***

75,5 ±2,4 ***#

ФИчфез120' инкубацш

60,5±2Д8

40,1 ±0,81 ***

91,8±4,84 ***

82,8 ±1,01

60,0 ±2,12

35,66 ±2,9 ***

90,4 ±2^27 ***

8,8 ±2,06 ***

ФЧ через 30'инкубации

1,62 ±0,08

2,21 ±0,21

7,02 ±0,29

6,55 ±0,1 ***

1,62 ±0,05

2^8 ±0,199 ***

8,05 ±0,1 ***

6,8 ±03 ***

ФЧ через 120' инкубации

1,54 ±0,09

2,66±0,178 ***

3,79 ±0,47

6,11 ±03

1,45 ±0,01

2^4±0,19

337±034

6,47 ±13

ИЗФ

1,05 ±0,01

0,83 ±0,012

1,8 ±0,12 ***

1,07 ±0,04 ***

1,11 ±0,08

0,89 ±0,01

2,09 ±0,05

1,04 ±0,04

ДФ«+»баз, %

48,25± 3,23

31,2 ±1,28 ***

58,3 ± 1,12

60,1 ± 1,2 ***

47,13 ±4,3

32,4 ±0,9 ***

58,16±2,8

59,01± 1,02 ***

ДФ«+»сгим, %

64,12± 1,61

38,2 ±0,58 ***

59,4 ± 1,01

64,4 ±43

64,75 ± 3,8

39,2 ± 0,58

59,1 ±8,1

63,9± 13

ФРФ,%

14,5 ± 1,12

7,1 ±0,7 ***

1,1 ±0,11 ***

4,29 ±0,16

17,52 ±0,08

6,8 ±0,49 ***

0,96 ±0,02 ***

4,78 ±0,56

ЦИбаз

0,94 ±0,07

1,12±0,04

2ДЗ ±0,208 ***

2,15 ±0,06

0,91 ±0,06

1,105 ±0,05

2,19± 0,228 ***

2,17 ±0,04

ЦИсшм

1,45 ±0,06

1,46 ±0,04

2^3 ±0,11

232 ±0,03

135 ±0,02

1,48 ±0,04

2,61± 0,139

2,63 ±0,07 ***

ИАМ

1,53 ±0,092

13 М,056

1,169±0,05 ***

1,16±0,02

1,52 ±0,08

131 ±0,033

1,187±0,065

1Д±0,06

Примечание: * - достоверность различий показателей с контролем (* - р<0,05, *** - р<0,001), # - достоверность различий показателей со стрессом (# - р<0,05, ### - р<0,001). ФИ - фагоцитарный индекс, ФЧ - фагоцитарное число, ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза, ДФ«+» - диформазан-позитивные клетки, ФРФ - функциональный резерв фагоцитов, ЦИ - цитологический индекс, ИАМ - индекс активации макрофагов.

АМ оставались такими же, как при стрессе (ФИ 120, ФЧ 30, ДФ«+»баз, ДФ«+»стим, ЦИбаз, ЦИстим, табл 3), а ФИ 30 и ФЧ 120 превышали стрессорные показатели. Таким образом, мы можем предположить, что в условиях хронического эмоционального стресса М-холинергические механизмы не играют существенной роли в активации функций АМ.

При сочетании хронического иммобилизационного стресса с колхициновой блокадой аксонального транспорта и истощением депо нейропептидов в правом блуждающем нерве мы наблюдали существенное ограничение активирующего влияния стресса на функции АМ (понижение показателей фагоцитарной активности - ФИ 30, ФИ 120, ФЧ 30, ФЧ 120, ИЗФ, показателей внутриклеточного кислород-опосредованного киллинга - ДФ«+»баз, Дф«+»стим, ЦИбаз, ЦИстим) на стороне воздействия. В контралатеральном легком показатели поглотительной и бактерицидной функций, в основном, соответствовали стрессорным или превышали их (табл 4).

Таблица 4

Поглотительная и бактерицидная активность альвеолярных

макрофагов при иммобилизационном стрессе в сочетании с колхициновой блокадой правого блуждающего нерва и истощением депо нейропептидов в его __капсанцинчувствительных афферентах_

Показатель Правое легкое Левое легкое

Стресс (п=10) Стресс+ колхицин (л = 10) Стресс+ капсаицин (п= 10) Стресс (п = Ю) Стресс+ колхицин (п=10) Стресс+ капсаицин (п=10)

ФИ через 30'инкубации 66,49 ±1,59 32,0 ±1,58 *** 35,85 ±3,2 * 61,8 ±035 64,25 ±0,85 78,1 ±1,8 *

ФИ через 120' инкубации 91,8 ±4,84 76,18 ±3,42 74,05 ±1,15 * 90,4 ±2,27 86,48 ±2,62 92,1 ±13

ФЧ через 30'инкубации 7,02 ±0,29 3,45 ±0Д 3,16±0,09 *** 8,05 ±0,1 6,21 ± 1,03 6,25 ±0,92

ФЧ через 120' инкубации 3,79 ±0,47 3,73 ±0,62 3,56 ±0,09 337 ±034 5,05 ±0,04 * 6,24 ±0,44 ***

ИЗФ 1,8 ±0,12 0,93 ±0,07 0,88 ±0,02 2,09±0,05 1,19±0,08 * 1,006 ±0,06 *

ДФ«Ъ>,баз, % 58,3 ± 1,12 43,4 ± 1,07 * 43,9 ±4,06 * 58,16±2,8 77,8 ±3,01 *** 72,6 ±1,25 *

ДФ«+»сгим., % 59,4 ± 1,01 55,1 ± 1,58 ♦ 57,1 ±4,08 59,12±8,1 83,1 ±2,2 + 83,6 ± 1,3 *

ФРФ,% 1,1 ±0,11 12,53 ±4,4 12,58 ± 1,4 *** 0,96 ±0,02 5,2 ± 0,4 11,2 ±0,04 ***

ЦИбаз 2^3 ±0,208 1,6 ±0,069 * 1,1 ±0,12 ♦ 2,19±ОДЗ 1,8 ±0,064 2,1 ±0,11

ЦИстим 2,53±0,11 2,04 ±0,06 * 1,49±0,12 *** 2,61 ±0,14 2,48 ±0,12 2,48 ±0,08

ИАМ 1,169±0,05 1Д79±0,1 1,4±0,11 * 1,187 ±0,07 132 ±0,04 1Д±0,06

Примечание: * - достоверность различий показателей со стрессом (* - р<0,05, *** - р<0,001), ФИ -фагоцитарный индекс, ФЧ - фагоцитарное число, ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза, ДФ«+» -диформазан-позитивные клетки, ФРФ - функциональный резерв фагоцитов, ЦИ - цитологический индекс, НАМ - индекс активации макрофагов.

В условиях внутрижелудочкового введения АТ II воздействие колхицином ограничивало стресс-индуцированное повышение фагоцитарной и бактерицидной активности АМ (ФИ 30, ФИ 120, ФЧ 30, ФЧ 120, ДФ«+»баз, ДФ«+»стим), тогда как в противоположном легком эффект был менее выражен (ФИ 30, ФИ 120, табл 5). Воздействие капсаицином на правый блуждающий нерв ограничивало степень повышения бактерицидной активности АМ (ЦИбаз, ЦИстим) в ипсилатеральном легком и не влияло на показатели левого легкого (табл 5).

Таблица 5

Поглотительная н бактерицидная активность альвеолярных макрофагов

при интрацистерналыюм введении ангиотензина II в сочетании с колхициновой блокадой правого блуждающего нерва и истощением депо

нейропептидов в его капсаицинчувствительных афферентах

Показатель Правое легкое Левое легкое

Ангиотензин II (п = 6) Ангиотензин II + колхицин (п= 10) Ангиотензин II (п = 6) Ангиотензин II колхицин (п= 10)

ФИ через 30 мин инкубации 79,2±4,95 10,4±0,51 *** 81,2*3,39 20,6±0,51 ***

ФИ через 120мин инкубации 87,26±3,16 25Д5±0,85 *** 90,4 ± 2,27 67,2±0,22***

ФЧ через 30 мин инкубации 6,12±0,04 2,3 ±0,07"** 8,05 ± 0,1 6,8 ± 1,27

ФЧ через 120 мин инкубаїціи 3,75 ±0,38 2,9±0,15 *** 3,37 ± 0^4 6,22 ±0,4***

ИЗФ 1,63 ±0,1 0,79±0,011 *** 2,09 ± 0,05 1,09 ±0,045

ДФ«+»баз, % 58,2 ± 1,3 34,05 ± 3,2 * 58,16 ± 2,8 60,1 ±43

ДФ«+»сгам, % 59,2 ± 1,2 46,1 ±0,8* 59,12 ± 8,1 65,15 ±3,8

ФРФ,% 1,01 ±0,002 11,9 ± 2,1*** 0,96 ± 0,02 5,05 ±0,11 ****

ЦИбаз 2,27 ±0,069 2,305 ±0,05 2,19 ± 0,228 2,548 ±0,18

ЦИстим 2,94 ±0,07 2,92 ±0,103 2,61 ± 0,139 2,86 ±0,098

ИАМ 1,29 ±0,06 1,29 ±0,055 1,187 ± 0,065 1,174 ±0,055

Показатель Правое легкое Левое легкое

Ангиотензин II (п = 6) Ангиотензин II + капсаицин (п = Ю) Ангиотензин II (4 = 6) Ангиотензин II -і капсаицин (п= 10)

ЦИбаз 2,27 ±0,069 1,62±0,16 * 2,19 ± 0,228 2,44±0,12

ЦИсшм 2,94 ±0,07 2,07±0,13 *** 2,61 ± 0,139 2,59±0,103

ИАМ 1,29 ±0,06 1,14±0,08 1,187 ± 0,065 1,103±0,035

Примечание: * - достоверность различий показателей с интрацистернальным введением ангиотензина II, (* - р<0,05, *** - р<0,001), ФИ - фагоцитарный индекс, ФЧ - фагоцитарное число, ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза, ДФ«+» - диформазан-позитивные клетки, ФРФ -функциональный резерв фагоцитов, ЦИ - цитологический индекс, ИАМ - индекс активации макрофагов.

Ослабление стрессорных эффектов при воздействии колхицином и капсаицином преимущественно в ипсилатеральном легком подтверждает наше предположение о ведущей роли пептидергических капсаицинчувствительных

афферентов блуждающего нерва в механизмах активации фагоцитарной и

кислород-зависимой бактерицидной функций АМ при хроническом

эмоциональном стрессе.

ВЫВОДЫ

1. Хронический эмоциональный стресс, индуцированный иммобилизацией животных или активацией центральных ангиотензинергических структур мозга, вызывает повышение фагоцитарной и бактерицидной активности альвеолярных макрофагов.

2. Колхициновая блокада аксонального транспорта в блуждающем нерве и блокада его капсаицинчувствительных афферентов уменьшают степень изменений фагоцитарной и бактерицидной активности альвеолярных макрофагов при хроническом эмоциональном стрессе. М-холинергические механизмы не играют существенной роли в стресс-индуцированных изменениях функций альвеолярных макрофагов.

3. Блуждающий нерв участвует в регуляции фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов при хроническом эмоциональном стрессе, усиливая их поглотительную и кислород-зависимую бактерицидную функции. Ведущую роль при этом играют капсаицинчувствительные афферентые волокна блуждающего нерва.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При клинической оценке патологии легких, развившейся на фоне действия хронических психогенных факторов, следует учитывать роль стресс-индуцированной активации АМ.

2. При использовании препаратов, блокирующих активность ангиотензинергической системы, возможно ослабление стресс-индуцированной активации механизмов естественной резистентности легких.

3. Необходимо учитывать, что патологические процессы в блуждающем нерве (невриты, нейропатии, травмы) могут приводить к изменению состояния неспецифической резистентности легких как при стрессе, так и вне стрессорных воздействий.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в ведущих рецензируемых журналах, определенных ВАК

1. Зорина М.В. Морфо-функциональные аспекты нарушения нейротрофического контроля в легких при колхициновой блокаде аксонального транспорта в блуждающем нерве / Г.Е. Данилов, И.Г. Брындина, В.Л. Исаева, М.В. Зорина, Е.В. Минаева // Морфологические ведомости. - 2003. - №1-2. - С.13-15.

2. Зорина М.В. Свойства сурфактанта легких при воздействиях на капсаицинчувствительные афференты блуждающего нерва в условиях эмоционального стресса / И.Г. Брындина, В.Л. Исаева, М.В. Зорина // Росс, физиол. журн. им. И.М.Сеченова.- 2006. - Т.92, №12. -С.1493-1497.

3.Казакова M.B. Пептидергические механизмы регуляции бактерицидной активности альвеолярных макрофагов в условиях эмоционального стресса / И.Г. Брындина., H.H. Васильева, М.В. Казакова // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2012. - № 3 (85). - С. 257-260.

Работы в сборниках и журналах, не входящих в список ВАК

1. Зорина М.В. Центральные нейрохимические механизмы регуляции иммунной резистентности организма при хроническом эмоциональном стрессе / И.Г. Брындина, B.J1. Исаева, М.В. Зорина, Е.В. Минаева, H.A. Никулина // Материалы XII Всерос. конф. «Нейроиммунология». - Нейроиммунология. - 2003. - Т.1, №2. -С.28.

2. Зорина М.В. К вопросу о сурфактантной системе легких при хроническом нейрогенном стрессе / В.Л. Исаева, М.В. Зорина, P.C. Борознов // Материалы II междунар. конф. «Патофизиология и современная медицина». - 2004. - С. 176177.

З.Зорина М.В. Пептидергические механизмы активации альвеолярных макрофагов в условиях эмоционального стресса / И.Г. Брындина, В.Л. Исаева, М.В. Зорина // Материалы XIII Всерос. конф. «Нейроиммунология». - Нейроиммунология. -2004. - Т.2, №2. - С. 16-17.

4. Зорина М.В. Легочный сурфактант и неспецифическая резистентность легких при капсаицин-зависимом истощении депо нейропептидов в блуждающем нерве в условиях эмоционального стресса / И.Г. Брындина, В.Л. Исаева, М.В. Зорина // Материалы межрегион, науч.-практ. конф. с междунар. участием, посвящ. 100-летию проф. В.А.Самцова «Типовые патологические процессы». Здравоохранение Башкортостана. - 2005. — Спецвып. №7. - С.46-47.

5. Зорина М.В. Роль блуждающего нерва в регуляции бактерицидной активности альвеолярных макрофагов при хроническом эмоциональном стрессе / М.В. Зорина, И.Г. Брындина // Материалы IV конф. иммунологов Урала "Актуальные проблемы фундаментальной и клинической иммунологии и аллергологии"-Иммунология Урала. - 2005. - №1 (4). - С.13-14.

6. Зорина М.В. К вопросу о роли блуждающего нерва в регуляции водного баланса легких / М.В. Зорина, И.Г. Брындина // Труды Ижевской медицинской государственной академии. - 2006.- Т. 44. - С.36.

7. Казакова М.В. Неспецифическая резистентность легких при истощении депо нейропептидов в капсаицинчувствительных афферентах блуждающего нерва в условиях эмоционального стресса / М.В. Казакова, И.Г. Брындина // Материалы межрегион, науч. конф., посвящ. 70-летию кафедры патофизиологии ИГМА «Патофизиология - современной медицине». - Ижевск, 2007. - С. 131-133.

8. Казакова М.В. Стресс и легкие / И.Г. Брындина, Г.Е. Данилов, H.H. Васильева, М.В. Казакова, A.B. Сорокин // Патогенез. - 2007. - Т 5, № 1-2. - С. 42-48.

9. Казакова М.В. Бактерицидная активность альвеолярных макрофагов при капсаицин-зависимом истощении депо нейропептидов в блуждающем нерве в условиях нейрогенного стресса / М.В. Казакова, И.Г. Брындина // Росс, иммунологич. журн,- 2008. -Т 2(11), №2-3. - С.154

10. Казакова М.В. Вагусные механизмы регуляции неспецифической резистентности легких при хроническом гипокинетическом стрессе / И.Г.

Брындина, M.B. Казакова // Вестник Уральской медицинской академической науки : тематич. вып. по аллергологии и иммунологии. - Екатеринбург, 2010. -№2/1 (29).-С. 19.

11. Казакова М.В. Влияние хронического стресса на систему неспецифической иммунологической резистентности у крыс с разной стресс-устойчивостью в условиях введения даларгина / JI.C. Исакова, И.Г. Брындина, H.H. Васильева, Е.В. Минаева, М.В. Казакова, Ю.А. Кривоногова // Вестник Уральской медицинской академической науки : тематич. вып. по аллергологии и иммунологии. - Екатеринбург, 2010.-№2/1 (29).-С. 141- 142

12. Казакова М.В. Роль блуждающего нерва в механизмах стресс-индуцированных

изменений альвеолярных макрофагов / М.В. Казакова, И.Г. Брындина, B.JI. Исаева // Вестник Уральской медицинской академической науки : тематич. вып. по аллергологии и иммунологии. - Екатеринбург, 2011. - № 2/1(35). - С. 35

13. Казакова М.В. Легочной сурфактант и бактерицидная активность альвеолярных макрофагов у крыс с разной стресс-резистентностью при хроническом эмоциональном стрессе / И.Г. Брындина, H.H. Васильева, М.В. Казакова // Материалы II междунар. науч.-практ. конф. «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли». - Казань, 2011. - С. 18-22.

14. Казакова М.В. Механизмы регуляции бактерицидной активности альвеолярных макрофагов в условиях хронического эмоционального стресса / И.Г. Брындина, М.В. Казакова, H.H. Васильева // Вестник Уральской академической науки,- Екатеринбург, 2012,- №39.- С.-110.

Список сокращений

AM - альвеолярные макрофаги AT II - ангиотензин II АЦ 2 - альвеолоциты 2 типа БАС - бронхоальвеолярный смыв ГК - глюкокортикоиды

ДФ«+»баз - диформазан-позитивные альвеолярные макрофаги в базальных условиях

ДФ«+»стим - диформазан-позитивные альвеолярные макрофаги в

стимулированных условиях

ИАМ - индекс активации макрофагов

ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза

ЛФХ - лизофосфатидилхолин

КХ - колхицин

КХА - катехоламины

ОФЛ - общие фосфолипиды сурфактанта

ФИ 30 - фагоцитарный индекс на тридцатой минуте инкубации