Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Рецепция андрогенов изолированными ядрами скелетных мышц и её изменения при физической нагрузке и введении 19-нортестостерона

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Степанов, Михаил Григорьевич

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Современные представления о механизмах реализации биологического эффекта стероидных гормонов

2.2. Рецепторы стероидных гормонов

2.3. Мышечная деятельность и андрогены

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Методическая часть

3.1.1. Постановка опытов на животных

3.1.2. Препаративные методы исследования

3.1.2.1. Выделение ядер из скелетных мышц

3.1.2.2. Получение сыворотки крови

3.1.2.3. Очистка 3Н-стероидов

3.1.3. Аналитические методы исследования

3.1.3.1. Определение величины связывания андрогенов ядрами скелетных мышц

3.1.3.2, Определение константы диссоциации и количества связывающих мест ядерных рецепторов андрогенов

3.1«3.3. Исследование процессов диссоциации и инактивации ядерных андрогенрецепторных комплексов

3.1.3.4. Обработка ферментами изолированных ядер скелетных мышц и экстрагированных из них рецепторов андрогенов

3.1.3.5. Измерение радиоактивности 47 ' 3.1.3.6. Количественное определение ДНК

3.1.3.7. Определение концентрации 19-нортеетостерона в сыворотке крови

3.1.3.8. Математическая обработка результатов

3.2. Результаты исследования

3.2.1. Сравнительная характеристика методов разделения свободного и белоксвязанного стероида

3.2.2. Экстрагируемость связанного с ядрами ^-стероида растворами KCl различной концентрации

3.2.3. Зависимость связывания андрогенов ядрами скелетных мышц от температуры и времени инкубации

3.2.4. Анализ связывания андрогенов по Скэтчарду 6?

3.2.5. Лигандная специфичность связывания андрогенов ядрами скелетных мышц

3.2.6. Диссоциация и инактивация ядерных андрогенрецеп-торных комплексов в скелетных мышцах

3.2.7. Природа ядерных рецепторов андрогенов в скелетных мышцах

3.2.8. Влияние введения 19-нортестостерона на связывание андрогенов ядрами скелетных мышц

3.2.9. Влияние физических нагрузок на рецепцию андрогенов ядрами скелетных мышц

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

5. ВЫВОДЫ

6. УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ

I. В В Е ДЕН И Е

Введение Диссертация по биологии, на тему "Рецепция андрогенов изолированными ядрами скелетных мышц и её изменения при физической нагрузке и введении 19-нортестостерона"

Проблема гипокинезии становится актуальной и в животноводстве, особенно, в связи с переводом этой отрасли народного хозяйства на крупномасштабную промышленную технологию, предусматривающую безвыгульное содержание скота на промышленных комплексах. Показано, что отсутствие моциона, как правило, имеет своим следствием нарушение воспроизводительной функции и снижение продуктивности животных.

Разработка вопросов функциональной биохимии скелетных мышц привела ряд авторов (2, II, 16, 21, 22, 24, 39) к заключению, что при адаптации организма к систематической физической нагрузке в мышечной ткани происходят изменения, затрагивающие все основные этапы синтеза белка - транскрипцию, процессинг, трансляцию. Исследование молекулярных механизмов регуляции биосинтеза белка показало прямое участие в этих процессах стероидных гормонов и, в частности, андрогенов (55, 75, 95, 119, 141).

При этом установлено, что анаболический эффект андрогенов на мышечную ткань опосредован рецепторными белками цитоплазмы (14, 40, 97, III, 145). Выявлена зависимость количества цито~ плазматических рецепторов андрогенов от систематической физической нагрузки (14, 40).

Однако процесс передачи гормонального сигнала из цитоплазмы в ядра скелетных мышц остается практически не изученным. И хотя имеются данные о том, что в так называемых тканях-ми*» шенях действие стероидных гормонов на уровне ядерного аппарат та клетки реализуется процессом транслокации цитоплазматичес« кого гормонрецепторного комплекса в ядро с последующим взаи» модействием с хроматином, для мышечной ткани эти механизмы остаются не изученными. В литературе нет данных о физико^хими** ческой характеристике рецепторного аппарата ядер скелетных мышц, его взаимодействия с гормонами при различного рода мышечной деятельности. Представляется актуальным изучение явления рецепции стероидных гормонов ядрами скелетных мышц при эк« зогенном их применении, что имеет место в практической медицине и животноводстве с целью лечения и стимуляции роста и раз*» вития организма.

Все вышеизложенное предопределило актуальность, цель и задачи настоящей работы.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было изучение связывания андрогенов изолированными ядрами скелетных мылит, и влияния на этот процесс систематических физических нагрузок и введения 19*-нортестостерона.

В процессе исследования предстояло решить следующие задачи:

1. Установить наличие связывания андрогенов изолирован«» ными ядрами скелетных мышц и разработать метод количественной оценки этого процесса.

2. Определить некоторые физико-химические характеристики андрогенсвязывающей системы ядер скелетных мышц.

3. Изучить влияние 19*«нортестоетерона и систематической физической нагрузки на связывание-.андрогенов изолированными ядрами скелетных мышц.

Научная новизна. Используя препараты изолированных ядер скелетных мышц, впервые показано образование комплекса андрогенов с высокомолекулярным компонентом ядра в условиях in vitro.

Специфичность, высокая аффиность и ограниченная емкость андрогенсвязывагощих мест ядерного компонента свидетельствуют о рецепторном характере процесса связывания.

Впервые показана низкая температурная устойчивость гор« монрецепторного комплекса андрогенов в ядрах скелетных мышц.

Обработка связывающего компонента ферментами позволила получить новые данные, дополняющие общую концепцию о белковой природе рецепторов андрогенов. Показано существование различи ных по растворимости в растворе KCl фракций андрогенрецептор-ного комплекса в ядрах скелетных мышц.

Установлена ранее не изученная способность ядер скелетных мышц увеличивать связывание андрогенов под влиянием однократ« ного и систематического введения 19<*нортестостерона.

Впервые показано, что под влиянием систематических физических нагрузок изменяется как общее связывание андрогенов изолированными ядрами скелетных мышц, так и распределение его между экстрагируемой и неэкстрагируемой 0,4 М KCl фракциями ре» цепторов, которое зависит от функционального состояния мышц.

Получены данные о возможной потенцирующей роли анаболических стероидов в образовании и распределении фракций андрогек-рецепторного комплекса ядер скелетных мышц при физической на~ грузке.

Теоретическая и практическая значимость результатов исследования. Результаты настоящей экспериментальной работы направлены на развитие теоретических представлений о биохимии мышечной деятельности, роли гормональной регуляции и механизм мах реализации биологического эффекта андрогенов на уровне ядерного аппарата поперечнополосатых мышц. Изучение гормон» рецепторного взаимодействия в ядрах скелетных мышц в процессе. систематической физической нагрузки и при мышечной деятельное» ти на фоне хронического введения анаболического стероида (19** нортестостерона) позволяют создать более точное и более полное представление о роли андрогенов в функциональной биохимии мышц и теоретически обосновывает методические подходы оценки потен*-циальных резервов мышечной системы. Последнее может иметь боль« шое значение в практике для прогнозирования работоспособности организма человека и животных. Перспективность результатов данного исследования очевидна для теории и практики медицины, животноводства, спорта.

Положения, выносимые на защиту;

1. Связывание андрогенов ядрами скелетных мышц обусловлен но наличием в них специфического рецепторного аппарата белко» вой природы.

2. Уровень связывания андрогенов ядрами скелетных мышц и распределение гормонрецепторного комплекса на экстрагируемую и неэкстрагируемую 0,4 М раствором КС1 фракции изменяются в зависимости от функционального состояния организма.

- 9

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1; Современные представления о механизмах реализации биологического эффекта стероидных гормонов

Гормонам, как факторам регуляции метаболических процессов в организме человека и животных „в последние десятилетия придается все возрастающее значение специалистами клинических и экспериментальных дисциплин. Этому способствуют современные достижения в области фундаментальных наук - физики, химии, математики, на основе которых создаются ноше и совершенствуются существующие методы познания биологической сущности эндокринной системы, разрабатываются прикладные аспекты физиологии, биохимии и патологии гормональной регуляции (4, 12, 38, 42).

Трудно себе представить решение проблемы гормональной регуляции без глубокого изучения механизма действия гормонов. В последние годы опубликован ряд работ обзорного и монографического характера, в которых в общем виде и в деталях изложены экспериментальные факты и теоретические представления авторов к моменту публикации работ об организационной структуре и функции механизма действия гормонов и гормональной регуляции (19, 27, 31, 92, 123). При анализе литературы по вопросу о механизме действия гормонов принципиальным представляется то, что установлено различие в путях реализации биологического эффекта гормонов белковой и полипептидной природы и гормонов небелковой структуры. Эти различия заключаются в клеточной топографии начального этапа действия гормона - узнавания и восприятия гормона субстратом действия, которым по общему современному представлению является рецептор.

Если для белковых и полипептидных гормонов место взаимодействия ("встречи") гормона с рецептором является плазматическая мембрана (I, 20, 24, 43, 61, 148), то контакт стероидных гормонов с рецептором осуществляется внутри клетки в цитоплазме (19, 31, 84). В последние годы появились работы (I, 24) показывающие что в механизме действия белковых гормонов концепция о мембранной локализации рецепторв в клетках-здгапенях может и должна быть дополнена этапом внутриклеточного существо» вания (цитоплазматического и даже ядерного) белкового гормона, скорее всего в комплексе со специфическим рецепторным белком. Поскольку предметом нашего исследования является рецепция стероидных гормонов, и специально, андрогенных гормонов, то мы ограничимся лишь вышеупомянутыми сведениями по проблеме рецепции белковых гормонов и более детально остановимся на основном предмете работы.

В обстоятельной монографии Мейнуоринга (19), посвященной механизму действия андрогенов, построена схема-модель механизма реализации эффекта этих гормонов на ткани органов- мишеней. Её сущность состоит в определенной последовательности биохимических явлений, обеспечивающих:

1) контакт андрогена с цитоплазматическим белком, специфически взаимодействующим с гормоном;

2) транслокацию гормонрецепторного комплекса в ядро клетки» мишени;

3) лимитированное во времени взаимодействие активированного комплекса со специфическими участками хроматина и индукцию биохимических процессов путем активации соответствующей матриц цы ДНК;

4) снятие эффекта действия гормона в результате деграда*» ции и элиминации из клетки продуктов гормонрецепторного комп» лекса.

Модель механизма действия андрогенов в том виде, как ее себе представляет Мейнуоринг, приведена на рисунке 2.1.

Данные современной литературы в области биохимии' стероида ных гормонов позволяют прийти к общему заключению, что биологический эффект андрогенов в отличие от эффекта эстрогенов, прогестинов и кортикостероидов реализуется при обязательном их включении в метаболический процесс. При этом, согласно Хор*, тон и сотр.,(79), периферический метаболизм андрогенов охватыва* ет и процесс взаимопревращения андростендиона в тестостерон. Учитывая то, что основным андрогеноподобным стероидом, секре-тируемым надпочечниками, является андростендион, становится очевидной возможность обеспечения потребностей организма в андрогенах в определенных пределах за счет надпочечников благо« даря периферическому метаболизму. Однако процесс образования тестостерона из андростендиона осуществляется не у всех животных и не во всех тканях.(19).

Важную роль в механизме действия андрогенов с участием периферического метаболизма играет превращение андрогенов в эстрогены (26). Доказательством реальности такого положения являются работы Нимрод и сотр. (117), Нафтолин и сотр.,(115), Киршнер и сотр. (93), Швейкерт и сотр. 146), Редци и сотр. (129), Виттак и сотр. (156) и др., показавшие наличие аромати« зирующей ферментной системы, способной превращать андростендион и тестостерон в эстрон и 17^>-эстрадиол в жировой тка

Плазма Т

ПССГ или КСГ цАМФ

НАДВ.Н - Т

-Активация фермента (пентозный шунт)

Цитоплазма редуктаза

НАДФ+ 5^-ДГТ-+ Рц

Ядро

Ядерные акцепторные О связывающие места ?

Рц

Антиандрогены)

5о6диолы

Секреция с

Первоначальные Ранние. у

Поздние,

Ответы.

Рибосомная РНК' мРНК ДНК

Некоторые белки Фосфолипиды Гистоны Шосфорилирование Мембраны Митоз белков Основная масса белков

Рисунок 2.1. Схематическая модель механизма действия андрогенов, по Мейнуорингу (19).

Об£значения: Т - тестостерон, ПССГ - глобулин, связывающий половые стероиды, КСГ - кортикостероидсвязывагощий глобулин, бсб-ДГТ - ЬсС -дигидротестостерон, Рц - рецептор. Звездочками показана конфигурация гормонрецепторного комплекса в процессе активации: активированная, неактивированная. го I ни, в гипоталамусе и лимбической системе межуточного мозга, в опухолевой ткани, в костной ткани и даже в волосах. Что касается скелетных мышц, то указания о возможности взаимного превращения андрогенов (андростендиона в тестостерон и обратно) в этой ткани в литературе отсутствуют. Нет сведений также и о наличии ароматазной активности в мышцах. Скелетная мускулатура, согласно данным Стенстада (147), практически не обладает 5л -редуктазной активностью, тогда как -дигидротестостерон в этой ткани очень быстро метаболизирует в андростандиолы. Таким образом, анаболический эффект андрогенов на скелетные мышцы, в отличие от органов полово^ сферы, обусловлен самим тестостероном. На этом различии основывается более выраженное влияние синтетических анаболических стероидов на мускулатуру, чем на вторичные половые железы.(154). Реализуется же этот феномен с обязательным участием рецепторов андрогенов, которые были обнаружены в цитозоле скелетных мышц в лабораториях Болье (110,111), Крига (97), Густафсона (62,63, 145, 146), Тремблея (78,155), а также работами Фельдкорена и сотр.,(14, 40), выполненными в нашем институте.

По проблеме взаимоотношения андрогенов с ядерным аппаратом скелетных мышц сведений в литературе к началу наших исследований не было. Лишь в 1982 г. появилась работа Волмера и сотр.,(157), в которой авторы на скелетных мышцах мышей показали, что связывание цитоплазматического гормонрецепторного комплекса с ядрами носит кооперативный характер. Константа диссоциации образующихся ассоциатов составляет 6 - 8 х М.

Эти данные указывают на слабую разработанность вопроса андрогенрецепторного взаимодействия в ядрах скелетных мышц как этапа механизма реализации биологического эффекта аядрогенных гормонов на мышечную систему, что делает необходимыми исследования рецепции андрогенов ядерным аппаратом скелетных мышц и влияния на этот процесс активной мышечной деятельности и моделирования гиперандрогенемии в условиях in vitro,

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Степанов, Михаил Григорьевич

5. вывода

1. Изолированные ядра скелетных мышц связывают андрогены; стереоспецифичность, высокая аффиность и ограниченная емкость связывающих мест свидетельствуют о рецепторном характере этого связывания.

2. Ядерные рецепторы андрогенов скелетных мышц имеют белковую природу. Их константа диссоциации (Кд) составляет 10-12 нМ, а количество связывающих мест - 45-100 фмол/мг ДНК.

3. В ядрах скелетных мышц имеются фракции рецепторов, различающихся по скорости диссоциации их комплексов со стероидом и по растворимости в растворах KCl различной концентрации.

4. Связывание андрогенов изолированными ядрами скелетных мышц при 0°С обусловлено преимущественно неоккупированными стероидом рецепторами.

5. Систематическая физическая нагрузка приводит к снижению в 1,8 раза связывания андрогенов предсуществующими в ядрах рецепторами, определяемого в состоянии покоя. При этом соотношение связывания андрогенов растворимыми и нерастворимыми в 0,4 М KCl фракциями рецепторов изменяется от 1:1 у нетренированных животных до 3:1 у тренированных.

6. При выполнении физической нагрузки нетренированными животными наблюдается тенденция к снижению связывания андрогенов ядрами скелетных мышц, а распределение связывания между растворимой и нерастворимой фракциями рецепторов изменяется от 1:1 до нагрузки до 4:1 после нагрузки.

7. При выполнении физической нагрузки тренированными животными связывание андрогенов ядрами скелетных мышц возрастает до величины, характерной для нетренированных животных в состоянии покоя, а распределение связывания между растворимой и нерастворимой фракциями рецепторов изменяется от 3:1 до нагрузки до 1:2 после нагрузки.

8. Однократное введение 19-нортестостерона в дозе I мкг/г массы тела крыс приводит к возрастанию связывания андрогенов изолированными ядрами скелетных мышц в 3 раза через 2 часа после введения стероида.

9. Систематическая физическая нагрузка, систематическое введение 19~нортестостерона в дозе 0,5 мкг/г массы тела и их совместное воздействие приводят к увеличению связывания андрогенов изолированными ядрами скелетных мышц в условиях стимуляции транслокации рецепторов в 1,7, 6,0 и 3,7 раза соответственно.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Степанов, Михаил Григорьевич, Ленинград

1. Афар Я.М., Рогозкин В.А. Активация аминокислот в цитоплазме скелетных мышц и печени при тренировке. Вторая научная конф. болгарского общества физиол. наук, София, 1964, с. 18-21.

2. Бабичев В.Н. Нейроэндокринология пола. М.: Наука, 1981. - 423 с.

3. Биохимия гормонов и гормональной регуляции./Ред. Юда-ев H.A. М.: Наука, 1976, с. 145-246.

4. Больен Э.-Э. Рецепторы эстрогенов и восприимчивость к действию гормонов: Новые подходы в фармакологии и терапии. -В кн.: Рецепторы клеточных мембран для лекарств и гормонов. -М.: Медицина, 1983, с. 142-166.

5. Виру A.A. Участие гипофизЧрно-адренокортикальной системы в механизме становления состояния тренированности. -В кн.: Эндокринные механизмы регуляции приспособления организма к мышечной деятельности. Тарту: ТГУ, 1975, вып. 5, с. 27-37.

6. Виру A.A. Функции коры надпочечников при мышечной деятельности. М.: Медицина, 1977. - 176.с.

7. Виру A.A. Механизм общей адаптации. Успехи физиол. наук, 1980, т. II, № 4, с. 27-46.

8. Виру A.A. Гормональные факторы мобилизации способностей спортсмена. В кн.: Физиологические факторы, определяющие и лимитирующие спортивную работоспособность: Тез. докл. ХУ1 Всесоюзной конф. по физиологии мышечной деятельности. - М., 1982, с. 30-32.

9. Зильбер М.Л. Изучение механизма регуляции процесса транскрипции при мышечной деятельности. В кн.: Регуляция обмена веществ при мышечной деятельности и выполнении спортивных упражнений. - Л.: ЛНИШК, 1972, с. 58-64.i

10. Зильбер М.Л-., Рогозкин В.А. Влияние смеси аминокислот на активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы скелетных мышц и печени крыс при мышечной деятельности. Украинский биохимический журнал, 1972, т. 44, № 5, с. 580-582.

11. Клиническая эндокринология./Ред. Баранов В.Г. Л.: Медицина, 1980. - 550 с.

12. Корнева И.А., Чайковский B.C. Математический анализ и автоматическая обработка результатов радиоиммунного определения анаболических стероидов. В кн.: Медицинский и допинговый контроль спортсменов. - Л.: ЛШШК, 1981, с. 48-56.

13. Коцегуб Т.П., Осипова Е.И., Фельдкорен Б.И. Влияние физических нагрузок и введения анаболических стероидов на рецепцию андрогенов в скелетных мышцах. В кн.: Фармакологическая регуляция физической и психической работоспособности. -М.: ВНИШ, 1980, с. 27.

14. Коцегуб Т.П., Фельдкорен Б.И. Влияние физической нагрузки на содержание тестостерона в сыворотке крови у тренированных белых крыс. В кн.: Эндокринные механизмы регуляции приспособления к мышечной деятельности. Тарту: ТГУ, 1980, вып. 9, с. 138-144.

15. Литвинова В.Н., Морозов В.И., Пшендин А.И., Федорова Г.П., Фельдкорен Б.И., Чайковский B.C., Рогозкин В.А. Влияние кратности питания на обмен белков в скелетных мышцах и печени белых крыс. Вопросы питания, 1976, т. 4, № I, с. 36-41.

16. Матарадзе Г.Д., Гонтарь Е.В., Кондратьев Я.Ю., Розен В.Б. Сравнительный анализ изучения взаимодействия различных фррм эстрогенных рецепторов с клеточным ядром. Биохимия, 1982, т. 47, вып. 5, с. 869-878.

17. Матарадзе Г.Д., Кондратьев Я.Ю., Гонтарь Е.В., Смирнов А.Н., Розен В.Б. Закономерности транслокации различных форм эстрогенных рецепторов печени из цитоплазмы в ядро. -Бюлл. экспер. биол., 1981, т. XCI, с. 568-571.

18. Мейнуоринг У. Механизмы действия андрогенов. М.: Мир, 1979. - 224 с.

19. Митюшов М.И., Степанов Г.С. Общие представления об эндокринных железах и гормонах. В кн.: Физиология эндокринной системы. -JI.: Наука, 1979, с. 3-29.

20. Михеева Л.П. Влияние мышечной деятельности на активность кислых и нейтральных протеаз: Автореф. дисс. канд. биол, наук. Л, 1975, 22 с.

21. Морозов В.И., Пшендин А.И., Рогозкин В.А. Влияние мышечной деятельности и введения смеси аминокислот на синтез белков в скелетных мышцах крыс. Украинский биохимический журнал, 1977, т. 49, № 3, с. 31-34.

22. Неменова Ю.М., Крючкова Г.М., Любина А.Я., Полес М.Э. Практикум по технике лабораторных работ. М.: Медицина, 1968, - 248 с.

23. Петруц П., Сар М., Штумпф У.Е. Локализация связывающих центров гонадотропина в клетках-мишенях с помощью световой микроскопии. В кн.: Рецепторы клеточных мембран для лекарств и гормонов. - М.: Медицина, 1983, с. I8I-I97.

24. Раскин A.M. Адрено-генитальный синдром. В кн.: Руководство по клинической эндокринологии. - Л.: Медицина, 1977, с. 286-289.

25. Резников А.Г. Половые гормоны и дифференцировка мозга. Киев: Наукова думка, 1982. - 252 с.

26. Рецепторы клеточных мембран для лекарств и гормонов./ Ред. ШтраубР., Болис Л. М.: Медицина, 1983. - 380 с.

27. Рогозкин В.А., Афар Я.М. Активация аминокислот в цитоплазме скелетных мышц при тренировке. Украинский биохимический журнал, 1965, т. 37, № 2, 218-221.

28. Рогозкин В.А., Фельдкорен Б.И. Андрогены и адаптация организма к физическим нагрузкам. В кн.: Мышечная деятельность и гормоны. - Л.: ЛНИШК, 1982, с. 6-13.

29. Розен В.Б., Смирнов А.Н. Рецепторы и стероидные гормоны. М.: МГУ, 1981. - 310 с.

30. Руководство по клинической эндокринологии./Ред. Баранов В.Г. Л.: Медицина, 1977. - 664 с.

31. Русин В.Я. Влияние кастрации на неспецифическую сопротивляемость мышей. Патол. физиол. и экспер. терапия, 1970, т. 14, № 6, с. 56-61.

32. Русин В.Я. Половые железы, сопротивляемость организма и адаптация к физическим нагрузкам. В кн.: Эндокринные механизмы регуляции приспособления организма к мышечной деятельности Тарту* ТГУ, 1971, вып. 2, с. 51-53.

33. Сапетлиев Д. Статистические методы в научных медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1968. - 419 с.

34. Селезнев Ю.М., Данилов С.Н. Стабилизация декваметазон-связывающего белка цитозоля сердца крысы. Проблемы эндокринологии, 1979, т. 25, № 3, с. 70-74.

35. Смирнов А.Н., Смирнова О.В., Розен В.Б. Рецепторы к эстрадиолу в цитозоле почек, печени и матке крыс. Докл. АН СССР, 1975, т. 220, № I, с. 244-247.

36. Старкова Н.Т. Основы клинической андрологии. М.: Медицина, 1973. - 391 с.

37. Федоров И.В., Черный A.B., Федоров А.И. Интенсивность синтеза и распада тканевых белков при гипокинезии и мышечной активности. Физиол. журнал СССР, 1977, т. 63, № 8, с. 11281133.

38. Фельдкорен Б.И. Изучение влияния ретаболили и систематической мышечной деятельности на активность ДНК-зависимой РШ-полимеразы I в ядрах скелетных мышц белых крыс. Дисс. канд. биол. наук. Л., 1979. - 122 с.

39. Фельдкорен Б.И. Влияние ретаболила и тренировки на синтез рибосомальных РНК в скелетных мышцах. В кн.: Медицина и спорт. - Л.: ЛНИШК, 1979, с. 24-29.

40. Физиология эндокринной системы./Ред. Баранов В.Г. -Л.: Наука, 1979. 680 с.

41. Хелмрейх Э.Дж.М., Пфейффер Т. Передача сигнала от рецепторов гормонов к аденилатциклазе: Обзор данных и гипотезы. -В кн.: Рецепторы клеточных мембран для лекарств и гормонов: Междисциплинарный подход. М.: Медицина, 1983, с. 133-142.

42. Anderson J., Clark J.H., Feck E.J. Oestrogen and nuclear binding sites. Determination of specific binding sites by -oestradiol exchange. Biochem. J., 1972, v. 126, Ho 3,Уp. 561-567.• * >f~

43. J, Biol. Chem., 1968, v. 243, No 22, p. 5953-5966,4 457* Burton K. A study of the conditions and mechanism of diphenylamine reaction for the colorimetric estimation of de-oxyribonucleic acid. Biochem. J., 1956, v. 62, No 2, p. 315323.

44. Chauveau J., Moule Y., Rouiller Ch. Technique disole-ment des moyanx cellulaires base sur leur densite. Biochimie, 1957, v. 39» No 12, p. 1521-1533.

45. Cuatrecasas P. Membrane receptors. Ann. Rev. Biochem., 1974, v. 43, p. 169-214.4 4 » ' *o

46. Dahlberg E., Snochowsky M., Gustaffson J.-A. Androgenfand glucocorticoid receptors in rat skeletal muscle. Acta Chem. Scand;, 1980, v. B34, No 2, p. 141-143.4 4 " 4-4O

47. Dahlberg E., Snochowsky M., Gustaffson J.-A. Regulationof the androgen and glucocorticoid receptors in rat and mouse*skeletal muscle cytosol. Endocrinology, 1981, v; 108, No 4, p. 1431-1440.

48. Donaldson H.,Meeser R. On the effect of exercise carried throughout seven generations on the weight of the musculature and on the composition and weight of several organs of the4 4 4 » •albino rats. Amer. J. Anat., 1932, v. 50, No 3» P. 359-396.

49. Foil P., Bardin C. The use of medroxyprogesterone acetate to study progestin receptors in immature, pregnant and adult rabbit uterus. In: Steroid Hormone Receptor Sys-terns» U.Y. - London,1979» p. 244-254.1. V 0 0 * » ' '

50. Peit E.I., Muldoon T.G. Differences in androgen-bind-ing properties of the two molecular forms of androgen receptor in rat ventral prostate cytosol. Endocrinology, 1983» v. 112,4 ' •»1. No 2, p; 592-600.

51. Fleischmann G., Beato M. Characterization of the progesterone receptor of rabbit uterus with the synthetic progestin l6ct-ethyl-21-hydroxy-19-norpregn-4-en-3,20-dione. Biochim. Biophys. Acta, 1978, v. 540, No 2, p. 500-517.

52. Gardner R.S., Tomkins G.M. Steroid hormone binding to a macromolecule from hepatoma tissue culture cell. J. Biol* Chem., 1969» v. 244, No7, p; 4761-4767.

53. Glasscock R.K., Hoekstra W.G. Selective accumulation of tritium-labelled hoexestrol by the reproductive organg of immature female goats and sheep. Biochem. J., v. 72, No3, p. 673-675.

54. Goidl A., Cake M.H., Dolan K.F., Farcbman L.G., Lit-wack G. Activation of the rat liver glucocorticoid-receptorcomplex, Biochemistry, 1977, v. 16, No 10, p. 2125-2130.

55. Gorsk$ J, Toft D., Sfayamala G., Smith D., Notides A.

56. Hormones receptors: Studies on the interaction of oestrogen' /with the uterus. Recent Prog. Horm. Res., 1968, v. 24, p. 45-80./ * *

57. Guezennec C.Y., Pesouies P.O., Delcroix J.P. Role des androgenes testiculaires lors de l1exercice physique prolong!.• г- Rev. frang. endocrinol. clin., nutr. et metabol., 1982, v» 23» No 3» Р* 261-267.

58. Hodgins M.B. Binding of androgms in 5oC-reductase-deficient human genital skin fibroblasts: Inhibition by progesterone and its metabolites— J. Endocrinol., 1§82, v. 94» No3, P. 415-427.

59. Jensen E.V«, Suzuki T., Kawashima T*, Stumpf W*E*, Jungblut P*W,, DeSombre E.R* A two-step mechanism for the interaction of oestradiol with rat uterus* Proc* Nat*,Acad* Sci** . ' f i

60. King R., Mainwaring W. Cell-steroid interactions. -London: Butterworth, 1974. 224 p.

61. Kirschner М.А», Cohen F.B., Jespersen D. Estrogen production and its origin in men with gonadotropin-producing neoplasms. J. Clin. Endocr., 1974, v. 39, No 1, p. 112.

62. Kobayashi S., Nagai В., Asai K. Effect of composition of buffer of %-estradiol-17p with estrogen receptor of immature rabbit uterus.-Nagaya Med. J., 1973, v. 18, No 1, p. 191197.

63. Kochakian C.D., Tillotston C., Auatin J., Dougherty E., Haag V., Collson R. The effect of castration on weight and composition of the muscles of the guinea pig. Endocrinology,1956, v. 58, Ho 3, pw 315-326.

64. Litwack G., Filler R., Rosenfeld S.S., Lichtash N., Wishman C.A., Singer S. Liver cytosol corticosteroid binder II, a hormone receptor* J* Biol* Chem., 1973» v. 248, No 23, P* 7481-7486.

65. Menezes Ferreira M.M., Bismuth J., Torresani J. Reversible dissociation of triiodthyronine-nuclear receptor complexes by mercurial and chaotropic reagents. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1982, v. 105, No 1, p. 244-251.

66. Michel G., Baulieu E.-E. Recepteur cytosoluble des androgenes dans un muscle strie squelettique. C. R. Acad. Sei.

67. Parish v. 279, serie D, p. 421-424.4 » '

68. Michel G., Baulieu E.-E. Androgen receptor in rat skeletal muscle: Characterization and physiological variations.4 * .

69. Endocrinology, 1980, v# 107, No 6, p. 2088-2098.

70. Milgrom E., Atger M», Baulieu E.-E. Acidophilic activation of steroid hormone receptors. Biochemistry, 1973, v.r * 412., WO 23, p. 5198-5205.

71. Morozov V.I., Rogozkin V.A., Tchaikovsky V.S. Rapid radioimmunoassay for anabolic steroids in urine. In: Sportmedizin Deutscher Sportarze Kongress. Bad Hauheim, 1978. - Vertr.f 4 » *

72. Stuttgart, N.Y., 1980, S. 143»4 4 ' t115« Haftolin P., Ryan K.J., Petro Z. Aromatization of and-rostendione by limbic system tissue from human foetus. J. Endocrinol., 1971, v. 51, Ho 4, p« 795.

73. Nielsen C.J., Sando f.J., Vogel V.M., Pratt W.B. Glucocorticoid receptor interaction under cell-free conditions. -J. Biol. Chem., 1977, v. 252, Ho 20, p. 7568-7578.

74. Nimrod A., Ryan K.J. Aromatization of androgens by hu4 'man abdominal and breast fat tissue. J. Clin. Endocrinol., 1975, v. 40, Ho 2, p. 367.

75. Norris J.S., Kohler P.O. The coexistence of androgen and glucocorticoid receptors in the DDT-j cloned cell line. -» Endocrinology, 1977, v. 250, Ho 2, p. 613-618.

76. Novak A. Effects of androgenic hormones on the rateof incorporation of labelled amino acids in male adult mice, * • * *

77. Arner. J* Physiol., 1957, v. 191, Ho 2, p. 306-312.

78. Oddvar N. Characterization of the androgen receptors in the hypothalamus, preoptic area and brain cortex of the rat. Steroids, 1976, v. 27, Ho 2, p. 167-185.

79. Okulicz W.C., Boosma R.A., McDonald R.G., Leawitt W.W. Conditions for the measurement of nuclear estrogen receptor at low temperature. Biochem., Biophys. Acta, 1983, v. 757, No 1, p. 128-136.

80. Onoyama S., Ichii S. Nuclear binding sites in the liver for dexamethasone and in the ventral prostate for R1881. -Endocr. Japon., 1982, V. 29, No 3, p. 349-356.

81. Perspectives in steroid receptor research./Ed. Bres-ciani P. N.Y.: Raven Press, 1980. - 316 p.

82. Puca G.A., BrescianUp. Binding activity of oestrogen receptors destroyed by iodination. Nature, 1970, v. 225, p# 1251-1252.

83. Reddy V«V«R., Naftolin P., Ryan K.J« Conversion of androstendione to estrone by neutral tissues from fetal and neonatal rats. Endocrinology, 1974, v« 94, No 1, P. 117.

84. Robel P. Steroid hormone metabolism in responsive tissue in vitro. Ins In vitro methods in reproductive cellendocrinology. Stockholm, 1971, p. 1-9.* t * '

85. Rochefort H., Baulieu E.-E. Effect of KC1, CaCl2, temperature and oestradiol on the uterine cytosol receptor of o«st-radiol. Biochimie, 1971, v. 53, No 6, p. 893-907.

86. Rogozkin V.A., Morozov V.I., Tchaikovsky V.S. Rapid radioimmunoassay for anabolic steroids in urine« Revue Suisse de Medicine des Sport, 1979, No 4, p. 169.• * 4 * *

87. Scatchard G. The attraction of proteins for small molecules and ions. Ann'. N. Y. Acad. Sci., 1949» v. 51»p. 660-672.

88. Shyr C.-I., liao S. Protein factor that inhibits binding and promotes release of androgen-receptor complex ffom nuclear chromatin. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A.,1978, v. 75, Ho 12, p. 5969-5973.s *

89. Sireff D.A,N., Grant J.K. Effect of sodium molybdate on the interaction of androgens and progestins in human hyperplastic prostatic tissue. J. Endocrinol., 1982, v. 92, No 1, p. 95-102.

90. Snochowsky M#, Dahlberg E., Gustaffson J.-A» Characterization and quantification of the androgen and glucocorticoid* *receptors in cytosol from rat skeletal muscle. Eur» J« Biochem.,, 1980, v. 111, p. 603-616.

91. Snochowsky M., Saartok T., Dahlberg E., Eriksson E.,o'

92. Gustaffsen J*«A* Androgen and glucocorticoid receptors in human skeletal muscle cytosol. J. Steroid Biochem., 1981, v. 14, No 8, p. 765-771.

93. Stenstad P., Eik-Nes K.B. Androgen metabolism in rat• *skeletal muscle in vitro. Biochim. Biophys. Acta, 1981, v. 663, HO 1, p. 169-176.

94. Tamulevieius P., Lax E.R., Muller A., Schriefers H.1. A '

95. Tremblay R.R., Dube J.Y., Ho-Kim M.A., Lesage R. Determination of rat muscles androgen-receptor complexes with me-thyltrienolone. Steroids, 1977, v. 29, No 2, p. 185-195.

96. Vittek J., Altman K., Gordon G.G., Southern b.A.

97. The metabolism of 7 ot,-%-testosterone by rat mandibular bone. -Endocrinology, 1974, v. 94, No 2, p. 325.

98. Yollmer G#, Haase A., Eisele K. Androgen-receptor complex binding in murine skeletal muscle nuclei. Biochem.ф « ' * * * *

99. Biophys; Res. Commun., 1982, v. 105, No 4, p# 1554-1560.4 4' 4 4 4

100. Walters M.R., Huzinker W., Clark J.H. Hydroxyl apatite prevents nuclear receptor loss during the exchange assay of progesterone receptors, J. Steroid Biochem., 1980, v. 13,1. No 12, p. 1129-1132.4 4 4

101. Warren J.C. Affinity labeling steroids for characterization of steroid binding sites. In: Advances in experimental medicine and biology, 1973, v. 36, p. 263-288.

102. Wilkerson J.E., Horvath S.M., Gutin B. Plasma testosterone during treadmill exercise. J. Appl. Physiology; Respiratory, Environmental and Exercise Physiology, 1980, v. 49, Ho 2, p. 249-253.

103. Wu C. Estrogen receptor translocation and ornitine aminotransferase induction by estradiol in rat kidney, Bio4 » . r ' / ,chem« Biophys. Res. Commun., 1979» v. 89, No 2, p. 769-776.4

104. Zakar T., Toth M# Steroid binding properties of the androgen receptor of rat seminal vesicle. Endokrinologie, 1983, No 3, P. 257-265.