Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка сухих питательных сред на основе из непищевого сырья для контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка сухих питательных сред на основе из непищевого сырья для контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств"

131 0 9 9 ?

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МВДШШШ: НАУК

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВАКЦИН И СЫВОРОТОК им.И.И.МЕЧНИКОВА.

На правах рукописи

КОВТУН Юрий Сергеевич

РАЗРАБОТКА СЛЖ ПИТАТЕЛЬНЫ! СРЕД НА ОСНОВЕ ИЗ НЕПИЩЕВОГО СЫРЬЯ ДЛЯ КОНТРОЛЯ МИКРОБНОЙ ЗАГРЯЗНЕННОСТИ НВСТЕИШЬШ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРДЦСТВ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 1992

Работа выполнена в ШО "Аллерген".

Научные руководители - кандидат медицинских наук,

доцент С.А.Угримов

- доктор биологических наук

B.А.Мельникова

Официальные оппоненты - доктор биологических наук,

профессор И.А.Баснакьян

- кандидат медицинских, наук

C.А.Корнеева

Ведущее учреждение - Московская Медицинская Академия им.И.М.Сеченова.

Защита диссертации состоится " 17 " се/^/ти'/у^л 1992 г. в часов на заседании специализированного совета Д 001.38.01 при Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток иы.И.И.Мечникова по адресу: 103064, г.Москва, переулок Мечникова, д.5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова.

Автореферат разослан " // " лА^г^т'г 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Н. Г. Кудрявцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Наличке микроорганизмов в нестерильных лекарственных средствах, составляющих около 80 % продукции медицинской промышленности, с одной стороны может изменить их качественные показатели, с другой - привести к накоплению опасных для здоровья, токсичных продуктов или' заражению людей /Berkeley r.c.w. с соавт., 1978; Ringertz О., Ringeitz S., 1982; Крылов Ю.Ф., Кив-ман Г.Я., 1985; Safranec г.J с соавт., 1987/. Исходя из этого ВОЗ и Международная федерация фармацевтов /ЙФФ/ рекомендовали ввести нормы, ограничивающие общую микробную загрязненность нестерильных лекарственных средств и не допускающие наличия в препаратах представителей семейства Enterobacteriaceae, staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa.

Основанный на рекомендациях ВОЗ и МФФ в отношении нормативов допустимого количественного и качественного состава микрофлоры метод выделения,и идентификации микроорганизмов в нестерильных лекарственных средствах был разработан в Государственном НИИ по стандартизации и контролю лекарственных средств МЗ СССР /ВФС 421846-88/. Этот метод предусматривает использование 10 питательных сред, качество и стандартность которых обусловливают чувствительность и воспроизводимость определений микрофлоры, содержащейся в исследуемых препаратах. Из регламентированных десяти сред только две выпускались промышленностью. Изготовление остальных восьми сред осуществлялось из мясного сырья, децентрализовано, что не экономично и отчего качество и стандартность их не всегда отвечали предъявляемым требованиям. Кроме того, общепризнан ряд преимуществ коммерческих препаратов по сравнению со средами децентрализованного изготовления: экономичность, удобство в применении, длительный срок хранения /Гриднева Н.И. с соавт., 1978; Сперанская И.Д. с соавт., 1988; Сыпченко А.Я., 1990/.

Одной из основных проблем при разработке технологии изготовления питательных сред, особенно для крупномасштабного производства, является подбор белковой основы. Экономически целесообразно и обеспечивает высокую степень стандартности выпускаемых препаратов применение непищевых белковых продуктов /Мэджидов М.М., Султанов 3.3., 1986; Меджидов М.М., 1990; Мигунов А.И. с соавт., 1990/.

Все вышеизложенное определило актуальность разработки сухих

питательных сред на основе из непищевого сырья для контроля безопасности лекарственных средств.

Пель и задачи исследования. Цель настоящей работы - экспериментальное обоснование промышленного выпуска сухих питательных сред для контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных препаратов на основе использования непищевого белкового сырья.

Для реализации этой цели было намечено решить следующие задачи:

1. Установить возможность и целесообразность использования различных белковых гидролизатов в составе питательных сред для контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных препаратов.

2. Изучить физико-химические и биологические свойства белковых гидролизатов, высушенных контактным и конвективным способами.

3. Экспериментально обосновать и разработать технологию изготовления восьми агаризовашшх и жидких сред.

4. Провести комплекс биологических испытаний для оценки качества разработанных препаратов.

Научная новизна. В результате проведенных исследований показана гетерогенность - экспериментальных и коммерческих белковых гидролизатов по физико-химическим и биологическим свойствам, что позволило выявить наиболее пригодные-основы для конструирования питательных сред, используемых при.контроле загрязненности нестерильных лекарственных средств. Установлена возможность применения с этой целью, кроме аминопептида, панкреатических гидролизатов БВК, рыбной муки, пептона .ферментативного "СК".

Получены данные, свидетельствующие о том, что в процессе высушивания гидролизатов происходят сходные изменения их физико-химических и биологических свойств, как при использовании контактного, так и конвективного способов обезвоживания. Контактная сушка приводит к более выраженным изменениям некоторых физико-химических показателей /прозрачность, цветность, содержание углеводов/, однако биологические, свойства продуктов, обезвоженных обоими методами, различаются несущественно.

Экспериментально обоснована технология получения на основе аминопептида восьми сухих коммерческих питательных сред для контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств.

Практическая значимость. На основании полученных результатов для промышленного изготовления препаратов подготовлена и утверждена МЗ СССР нормативно-техническая документация /ВФС и ЭПР/ на восемь питательных сред доя контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств. Среды 1-3 выпускаются предприятием НПО "Аллерген" с 1989 г., среды .ГШ 8-10 - с 1990 г., среда М 6,7 - с 1991 г..

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Технология получения на основе аминопентида 8 сухих питательных сред дои контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств

2. Применение панкреатических гидролизатов ЕВК, рыбной муки, пептона ферментативного "СК", амикопептида в качестве питательных основ сред для определения микробиологической чистоты фармацевтических препаратов.

3. Методы высушивания белковых гидролизатов и других компонентов сред, позволяющие получить препараты с длительными сроками хранения.

Апробация. Основные результаты работы были доложены на научной конференции НПО "Аллерген" 16 января 1992 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, списка цитируемой литературы /185 наименований/. Работа изложена на Ш страница*машинописного текста и включает в себя 22 таблицы и 11 рисунков.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. С целью выбора питательной основы разрабатываемых сред исследовали: гидролизат кордовых дрожжей - промежуточный продукт изготовления ряда питательных сред, выпускаемых НПО "Аллерген", сухие панкреатический, протосубтилиновый и сернокислотный гидролизаты БВК, панкреатический и солянокислотный гид-ролизаты казеина, панкреатический и сернокислотный гидролизаты рыбной/муки, разработанные во Всесоюзном ШИ прикладной микробиологии, пептон ферментативный "СК" разработанный ПТО "Севтехрыб-

пром" совместно с ГИСК им. Л.А.Тарасовича, гидролизат казеина ДОЛИПК - кровезаменитель с истекшим сроком действия, аминопептид для микробиологических питательных сред.

Оценку качества белковых основ и питательных сред по биологическим показателям проводили с помощью 31 тест-штамма микроорганизмов, полученных из ГИСК им. Л.А.Тарасовича, НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, НИО глубоких микозов Ленинградского ГИДУВ, Государственного института иммунных препаратов и питательных сред МЗ ГДР.

Физико-химические и биологические свойства сред определяли в соответствии с утвержденными МЗ СССР "Методическими указаниями по применению физико-химических методов контроля питательных сред" № 1610-77 АЛ., 1977/, "Методическими рекомендациями к контролю питательных сред по биологическим показателям" /М., 1980/, "Методическими рекомендациями к контролю, питательных сред по параметрам роста микроорганизмов в процессе культивирования" /Ж., 1980/, методиками изложенными в Сборнике инструкций, утвержденном приказом МЗ СССР № 31 от 13.01.83 г.

Пептидный состав гидролизатов изучали методом гельфильтрации на сефадексе 0-25» анионный - методом ионной хроматографии, ка-тионный - методом атомно-змяосионной спектрометрии.

Содержание свободных аминокислот изучали на аминокислотном анализаторе ААА-881 /производства ЧСФР/, нитритов - в качественной реакции с реактивом Грисса.

Общий азот определяли по методу Къельдаля на автоматическом анализаторе общего азота фирмы "Текатор" /Швеция/, модель 1030.

При оценке изучаемых препаратов в качестве контрольных были использованы среда с основой из мясо-лептонного агара или бульона, а также среды, производимые фирмой "Серва" /ФРГ/: соево-казе-иновый бульон, бульон Моаае1 , цетримидный агар.

Статистическую.обработку результатов проводили по формулам, изложенным в монографии Ашмарина и Воробьева /1962/.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Экспериментальное обоснование использования питательных основ из непищевого сырья в составах сред для контроля ииктэобной загрязненности лекарственных средств. Первым этапом исследования был выбор оптимальных питательных основ, для чего провели изуче-

нив взятых в работу пептонов по физико-химическим /рН, прозрачность, цветность, содержание хлоридов, общего, аминного азота, пептидных фракций, свободных аминокислот, нитритов/ и биологическим свойствам.

Выявлена значительная гетерогенность изученных гидролизатов по вышеперечисленным параметрам. Наибольшей цветностью обладали растворы сернокислотного гидролизата БВК, что препятствовало его использованию в средах с индикаторами, несколько менее окрашенными были пептон "СК" и сернокислотный гидролизат рыбной муки. Гид-ролизаты казеина, осоинно ферментативный, напротив, были почти бесцветны. При определении показателя рН кислую реакцию /менее 5,6/ имели аминопзпгид, гидролизат казеина ЦОЛИПК и сернокислотный гидролизат БВК, что облегчает приготовление на их основе среда для культивирования и счета дрожжевых и плесневых грибов. Качественная реакция на нитриты была положительной с протосубтилино-вым гидролизатом БВК; с панкреатическим гидролизатом рыбной муки ее учет был затруднителен вследствие интенсивного помутнения раствора. Это препятствовало использованию указанных пептонов в составе среда № 7.

Результаты исследования ростовых свойств гидролизатов представлены в таблицах Ш 1,2. Наибольшее количество колоний s. flex-neri la 8516 удовлетворительного размера вырастало на средах с основами из аминопелтида, пептона ферментативного "СК", панкреатических гидролизатов рыбной муки и ББК. При выращивании других штаммов наблюдали сходные результаты, однако были выявлены и определенные отличия. Так для с. xerosis 1911 все гидролизатн БВК не оптимальны, с другой стороны, хороший рост этого микроорганизма был на средах с сернокислотным гидролизатом рыбной муки. Чувствительность к росту стрептококка зависела прежде всего от вида гидролиз ата: на средах с ферментативными гидролизатами она была в среднем на 2 порядка выше, чем с кислотными.

Сопоставляя результаты изучения питательных основ по качественному и количественному составу пептидов различных молекулярных масс и аминокислотному составу с данными их биологического тестирования, мы сделали заключение, что оптимальные по ростовым свойствам гидролизаты содержали в большом количестве пептидные фракции с молекулярной массой от 400 до 150 дальтон. Для этих пептонов был характерен и определённый аминокислотный состав. Так в аминопеп-

Таблица 1.

Сравнительная оцонка биологических свойств питательного агара с основой из различных гидролизатов.

Наименование питательной основы

Количество и средний размер колоний тест-штаммов:

С. хегов!в 1911

Э. Леупег! 1а 8516 Б. аигеив АТСС 6538-Р

1 • 2 3 4 * 1 • 4

39,2 + 2,7 1.4 + 0,2 34,4 + 1,4 1,6 + 0,2 113,4 + 3,9 1,2 + 0,2

35,9 + 2,0 2,1 + 0,3 28,7 ± 2,7 1,6 + 0,2 109,8 + 3,0 1,3 + 0,2

28,9 + 2,1 1,5 + 0,2 18,1 + 2,3 1,1 + 0,2 99,9 + 2,7 1,0 + 0,2

21,7 + 1.8 0,8 + 0.1 18,0 + 2,6 0,9 + 0,3 99,2 + 6,2 0,7 + 0,2

54,0 > 2,4 1,4 + 0,2 28,4 + 3,2 1.0 + 0,2 99,0 + 3.4 0,8 + 0,2

56,4 + 3,5 1,3 + 0,3 27,9 + 3.6 1,0 + 0,2 102,5 + 3,4 0,6 + 0,2

43,1 + 3,4 0,4 + 0,2. 31,7 + 2Д 1.0 + 0,2 104,1 + 5,3 0,3 + 0,1

54,0 + 3,0 2,1 + 0,3 38,2 + 3,3 1,6 + 0,2 107,4 + 2,7 1,4 ± 0,2

55,4 + 2.1 1,8 + 0,2 26,7 + 3,2 0,9 + 0,3 110,5 + 3,3 1,0 + 0,2

57,8 + 4,2 2,1 + 0,2 36,3 + 3,4 1,4 + 0,2 107,0 + 3,3 1,4 + 0,3

62,3 + 2,2 2,2 + 0,2 36,4 + 1,3 1,6 + 0,2 ' 104,0 + 2,9 1,3 + 0,2

Панкреатический г-т /ВГО "Аллерген";

атический г-т ЕНК

Протосубтилиновый г-т БВК

Зернокислотный г-т БВК

Панкреатический г-т казеина

Солянокислотный г-т казеина

Г-т казеина ЦОЛИПК

Панкреатический г-т рыбной цуки

Сернокислотный г-т рыбной кутей

Ферментативный пептон "СК"

Аминопептид для микробиологических питательных сред

Примечание: 1 - количество колоний при посеве из разведения 1СГ5; 2 - средний размер колоний в мм через 48 ч инкубации; 3 - количество колоний при посеве из разведения 10"®; 4 - средний размер колоний в мм через 24 ч инкубации.

Таблица 2.

Чувствительность питательных сред с основой из различных белковых гидролизатов к росту тест-штамма S- pyogenes Dick.

Наименование белковой основы

Чувствительность к росту тест-штамма S. pyogenes Dick при выращивании:

в питатель-:на питательном бульоне:ном агаре

Панкреатический г-т БВК /НПО "Аллерген"/ Панкреатический г-г БВК /ВНИШШ/ Протосубтилиновый г-т БВК Сернокислотный г-т БВК Панкреатический г-г казеина Солянокислотный г-т казеина /ВНШБМ/ Г-т казеина Ц0Ж1К Панкреатический г-г рыбной муки Сернокислотный г-т рыбной муки Ферментативный пептон "СК" Аминопептид для микробиологических питательных сред

10"6 ю-6

Ю-6 ю-4

10~6 10~6

10~5 ИГ4

ю-6 ю-6

кг3 10"3

10~3 10~3

10"S ю-6

10~3 10~3

10~5 10~5

ю-5 'иг6

гиде пептиды с молекулярной массой 400-150 дальтон составляли 71 % всех пептидных фракций, а соотношение основных, кислых и нейтральных аминокислот равнялось 22:30:48. Альтернативные питательные основы: панкреатические гидролизаты БВК, рыбной муки, ферментативный пептон "СК" содержали указанные пептиды в количествах 42, 48, 48, 38 % соответственно. Соотношение основных, кислых и нейтральных аминокислот в этих основах близко к таковому в аминопепти-де.

В процессе изучения образования гогоцианина на соответствующих агарах, включающих в качестве основы исследуемые гидролизаты, было выявлено, что наиболее интенсивно сине-зеленый пигмент тест-штаммы p. aeruginosa 273 и 453 продуцировали на средах, содержащих панкреатический гидролизат рыбной муки, несколько менее выражено - при использовании аминопептида, панкреатических гидролизатов БВК /НПО "Аллерген"/ и казеина.

Таким образом, результаты комплексного изучения физико-хими-

ческих и биологических свойств белковых гидролизатов позволили отобрать оптимальные питательные основы для коммерческого изготовления разрабатываемых питательных сред: к ним относятся аминопеп-тид, панкреатические гидролизаты БВК и рыбной муки, пептон ферментативный "СК".

2.. Разработка технологии изготовления коммерческих питательных сред для контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств, В дальнейших исследованиях по разработке технологии изготовления коммерческих питательных сред использовали аминопептид, т.к. только этот гидролизат к моменту введения контроля микробной чистоты лекарственных препаратов выпускался промышленностью стабильно и в достаточном объеме.

С целью получения агарнзованных препаратов были отработаны условия концентрирования в вакуумно-выпарной установке жидкого аминопептида, режим приготовления и сушки агаро-белковой основы. Дальнейшие операции сводились к измельчению полученной основы в дисмембраторе или шаровой мельнице и смешиванию с другими компонентами среды.

В соответствии с этой технологией на предприятии НПО "Аллерген" с 1989 г. изготавливаются питательные среды М 1 и 2 для контроля микробной загрязненности, а с 1990 г. - среды Ш 9 и 10. Суммарный выпуск указанных препаратов к настоящему времени составил около 10 тонн.

Основными операциями при изготовлении безагаровых сред являлись концентрирование и высушивание аминопептида с последующим смешиванием сухих ингредиентов. В связи с тем, что для получения сухого гидролизата использовано нестандартное оборудование с нетрадиционным принципом действия, возникла необходимость в сравнительном изучении физико-химических и биологических свойств обезвоженного в вакуумно-супшльной установке аминопептида со свойствами нативного и высушенного на распылительной сушилке.

■ Данные таблицы 3 свидетельствуют, что по ряду показателей /содержание общего и аминного азота, хлоридов/ сравниваемые продукты различались не существенно. Вместе с тем, водородные показатели сухих гидролизатов были на 0,4-0,6 ниже чем в нативном аминопептиде. Отмечено снижение содержания углеводов, прозрачности и увеличение цветности при _дегидратации.пептона, особенно осуществляемой с помощью вакуумно-сушильной установки. Это можно

Таблица 3.

Сравнительная характеристика кативного аминопептида и высушенного на распылительной и контактной

сушилках.

П с к а з а тели/М ±ш /

ЛИД аминопептида рН ; Прозрачность Цветность : Содержа-: Содержание амин^- ние общего ЖГ ¡Степень ¡расщепления ¡белка ¡Содержание хло- гт |Содержание ¡углеводов

1.Нативный 6,01 ±0,05 0,009 ±0,001 0,040 ±0,003 7,23 ±0,44 13,50 ± 0,61 0,54 4,89 ±0,09 0,82 ±0,07

2.Высушенный на распылительной сушилке 5,41 ±0,04 0,022 ±0,002 0,096 ±0,015 7,02 ±0,25 14,16 ± 0,63 0,50 5,18 ±0,32 0,56 ±0,05

3.Высушенный на контактной сушилке 5,39 ±0,03 0,032 ±0,002 0,163 ±0,011 6,87 ±0,13 13,38 ± 0,19 0,51 5,10 ±0,31 0,38 ±0,03

Достоверность различий между препаратами: 1-2 р<0,01 1-3 р<0,01 2-3 р>0,05 р<0,01 р<0,01 р<0,01 р<0,01 р<0,01 р<0,01 р>0,05 р>0,05 р>0,05 р>0,05 р>0,05 р>0,05 р*0,05 р>0,05 р>0,05 р<0,01 р<0,01 р<0,01

Примечание: а/ данные анализов на содержание аминного и общего азота, хлоридов, углеводов, ли-пидов в нативном аминопептиде приведены в пересчете на сухое вещество; б/ определение в нативном аминопептиде показателей прозрачности, цветности проводилось в пробах содержащих 1 %, показателя рН - 2 % сухого вещества.

объяснить взаимодействием углеводных компонентов гидролизата с аминокислотами, в результате которого образуются гуминовые продукты.

Для характеристики влияния контактного метода сушки на биологические свойства аминопептида, были определены параметры процесса культивирования тест-штаммов S. pyogenes Dick , С. xerosis 1911,.S. flexneri la 8516, S. aureus ATCC 6538-P, B. subtilis ATCC 6633 в бульонах с нативным и высушенным разными способами гидролизатом. Как видно из рис. 1 кривые роста стрептококка практически идентичны. Аналогичная картина наблюдалась .и при культивировании других микроорганизмов.

По количеству колоний, выросших при посеве тест-штаммов ко-ринебактерий, шигелл, стафилококков, питательные агары, содержащие аминопептид, высушенный на различном оборудовании, также не различались существенно между собой /рис. 2/. Наблюдалось достоверное снижение числа колоний стафилококков на средах с сухими гидролизатами, по сравнению с числом колоний на агаре с нативным аминопептидом /р<0,01/. Ни на одной среде не отмечено диссоциации колоний. Размер всех выросших колоний на среде с аминопептидом, высушенным на контактной сушилке, был несколько меньшим, чем на средах с двумя другими основами, что возможно, связано с частичным разрушением углеводов и аминокислот.

Анализируя вышеприведенные данные, можно сделать заключение . о том, что при конвективном и контактном способах высушивания происходят сходные изменения физико-химических и биологических свойств ферментативных гидролизатов. В случае применения контактной сушки физико-химические показатели / прозрачность, цветность, содержание углеводов/ изменяются в большей степени. Различия биологических свойств продуктов, обезвоженных обеими методами, несущественны.

При изготовлении первых экспериментальных серий сред МЗ, 8 мы обнаружили в получаемых продуктах высокое содержание влаги, превышающее 7 % ж приводящее через 6-12 месяцев к значительному снижению показателя pH, изменению цвета и комкованию. Исходя из этого, в дальнейшем были отработаны режимы дегидратации глюкозы при температуре 50-60 °С в течение 4~х суток, и фосфорнокислых солей калия и натрия с помощью вакуумно-сушильной установки при отрицательном давлении /минус 0,05-0,07 МПа/ и температуре 95-105 °С

2Т

1"

А

¿pnml-ЮО)

4

/

А

V

/

/

/

1- 1

/

/

/

/

/

/

1-

/

V

2 3

/

/

/

/

2 4

1 tsfoi 3

t ми. jUm*x

12l 04f 04-

2- 9 • 03- 03-

6 - 02-

3- 01-

02

01-

0 2 4 6 8 10 12 twc 0 2 4 6 8 10 12 0 2 4 6 8 10 12

2

Рис. 1. Зависимость оптической плотности микробной суспензии от времени выращивания и параметры роста тест-штамма s. pyogenes Dick в питательных средах, приготовленных из амикопептида: А - высушенного на распылительной сушилке; Б - высушенного на контактной сушилке; В - нативного.

КОЛИЧЕСТВО КОЛОНИЙ А

1 ¡1 ¡¡¡: fhl

г-ь

li> ¡2' 3

" — - 1111

30 20 10

1-2J

80 60 40 201-2J

ДИАМЕТР КОЛОНИЙ /ММ/

Рис. 2. Количество и размер колоний тест-штаммов: А - С. xerosis 1911, Б - S. flexneri la 8516, В - S. aureus АТСС 6538-Р выросших на шгательных агарах с основой из аминолептида: 1 - нативного, 2 - высушенного на распылительной сушилке, 3 - высушенного на контактной сушилке.

в течение 8-10 часов. Применение этих режимов обеспечивало стабильность качественных показателей питательных сред в течение 2-3 лет с момента изготовления.

Полученные экспериментальные данные послужили обоснованием для организации коммерческого производства бульонных питательных сред 3, 6-8. Суммарный выпуск этих препаратов составил 5 тонн.

3. Оценка коммерческих сред для контроля микробной загрязненности и'перспективы дальнейшей "разработки проблемы контроля безопасности лекарственных средств. Экспериментально-производственные серии сред 1-3, 8, на которые производится первичный посев исследуемого материала, были испытаны в НПО "Аллерген", Государственном НИИ по стандартизации и контролю лекарственных средств и в микробиологических лабораториях 9 химико-фармацевтических за-

водов. Биологические свойства разработанных препаратов оценивались " в сравнении с аналогичными показателями мясных сред лабораторного изготовления при помощи музейных тест-штаммов в.сегеиз ATCG 10702, С.albicans NCTC 885/653,1!.cloacae А-186, E.coli 113-3, Е. ooli М-17, а также путем посевов естественно контаминированных лекарств и сырья. Результаты испытаний показали, что сухие среды не уступали средам сравнения.

В связи с тем, что разработанные препараты полностью удовлетворяют требованиям к средам, применяемым для контроля микробной загрязненности лекарств, их использование было регламентировано ВФС 42-1846-88 "Испытание на микробиологическую чистоту".

Помимо указанных испытаний, сухие среды № 1, 2, 3 сравнивали соответственно с питательным агаром и агаром Сабуро, изготовленными предприятием "Имуна" и применяемыми в соответствии с фармакопеей ЧСФР для определения, микробной загрязненности лекарственных препаратов, а также бульоном Mossel , выпущенным фирмой "Серва" /ФРГ/.

Полученные данные свидетельствовали, что по числу выросших колоний музейных культур коринебактерий, псевдомонад-, стафилококков, фекальных стрептококков, дрожжевых грибов агаризованные отечественные препараты не уступали зарубежным аналогам или превосходили их. Исключение составили результаты испытания с тест-штаммом B.subtiiis 8/58, количество колоний которого на чехо-словац-ком питательном агаре статистически значимо /р<0,01/ превышало число колоний на среде Л 1. При определении общего числа микроорганизмов и количества дрожжевых и плесневых грибов в готовых лекарственных средствах на чехо-словацхих агарах также вырастало несколько больше колоний, чем на средах JUS 1 и 2, однако разница была статистически незначимой /р>0,05/.

Питательная среда & 3 в меньшей степени, чем бульон ингибировала рост ассоциантов /B.subtiiis, в.'сегеив, c.albi -cans /, наличие которых допускается в лекарственных средствах в ограниченном количестве. Это приводило к тому, что при посеве смеси ассоциантов с нигеллами, обладающими относительно низкой скоростью роста, в среде № 3 чаще, чем в бульоне Mossel наблюдалось подавление энтеробактерий сопутствующей микрофлорой". Усиление ин-гибирупцих свойств среды Ä 3 в эксперименте было достигнуто введением в состав препарата сухой желчи житного рогатого скота. Одновременно с повышением ингибиции посторонней микрофлоры мы наб-

людали и улучшение биологических свойств в отношении энтеробакте-рий: ускорение скорости их роста и увеличение накопления биомассы.

Исходя из полученных данных, для улучшения биологических свойств сред М 1, 2, 3 предполагается модифицировать питательные основы первых двух препаратов, а в состав третьего ввести сухую желчь крупного рогатого скота.

Таким образом, в результате выполнения работы получены сравнительные данные о физико-химических и биологических свойствах 11 перспективных для промышленного использования белковых гидролиза-тов, что позволило предложить отечественные пептоны, которые могут быть использованы в составе разрабатываемого набора сред. "Экспериментально обоснована и разработана технология изготовления 8 бульонных и агаровых сред дая контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств, которые в настоящее время выпускаются предприятием объединения. Проведенные испытания разработанных сред свидетельствуют о целесообразности их использования вместо мясных при контроле микробной чистоты лекарств.

ВЫВ ОД Ы

1. Разработана технология промышленного- изготовления на основе аминопептида восьми.питательных сред дая контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных препаратов, по своему качеству не уступающих мясным средам.

2. Показана гетерогенность 11 коммерческих и экспериментальных белковых гидролизатов по цветности, рН, содержанию хлоридов, нитритов, общего и аминного азота, пептидов различных молекулярных масс, свободных аминокислот, степени расщепления белковой молекулы, биологическим.свойствам, что позволило выработать дифференцированный подход к их применению.

3. Экспериментально обоснована возможность использования панкреатических гидролизатов БЕК, рыбной муки, пептона ферментативного "СК" при изготовлении набора сухих питательных сред дая контроля микробной загрязненности нестерильных лекарственных препаратов.

4. Обнаружено уменьшение значения рН, прозрачности, содержания углеводов и увеличение цветности аминопептида при высушивании

его с помощью распылительной сушилки и вакуумно-сушильной установки; в последнем случае указанные изменения, за исключением снижения pH, выражены в большей степени. Биологические свойства ферментативных гидролизатов крови животных, обезвоженных на обоих видах оборудования, существенно не различались между собой, что свидетельствовало о возможности использования более экономичного контактного метода сушки при изготовлении сухих питательных сред.

5. Предложен эффективный способ обезвоживания фосфорнокислых солей натрия и калия, применение которого позволяет гарантировать сохранение качественных показателей питательных сред в течение 2-3 летнего периода.

6. Намечены перспективы дальнейших исследований по совершенствованию сред Jfc№ 1, 2 путем разработки комбинированных белковых основ, улучшению вегетирующих и ингибирукщих свойств среды № 3 посредством введения в ее состав желчи крупного рогатого скота.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Предварительные .итоги разработки промышленной технологии изготовления сухих питательных сред из непищевого сырья для контроля обсемененности нестерильных лекарственных препаратов. / Уг-римов С.А., Раскин Б.М., Мельникова В.А., Крылов Ю.Ф., Каграмано-ва К.А., Ковтун Ю.С., Бобрышев В.И., Пивоварова Н.И., Молотова

В.П., Соколенко М.Г. // Вопросы физиологии, метаболизма и идентификации микроорганизмов:- Сб. научн. трудов ШИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи АМН СССР. - Москва, 1987. - С. 59-61.

2. Усовершенствование промышленной технологии изготовления сухих питательных сред из непищевого сырья. / Угримов С.А., Пивоварова Н.И., Бобрышев.В.И., Соколенко М.Г., Ковтун. Ю.С., Молотова В.П. // Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии: Тез. конф. 4.2..- Махачкала, 1988. - С. 284-285.

3. Некоторые изменения состава и технологии производства солевого агара для выделения стафилококков. / Угримов С.А., Ковтун Ю.С., Чурилова Т.П., Пивоварова Н.И., Молотова В.П., Соколенко

М.Г., Бобрышев В.И. // Деп. ВНИИМИ. - 1988. - J6 Д-15133.

4. Фракционный состав различных белковых основ питательных сред. / Угримов С.А., Пивоварова Н.И., Смирнова Г.А., Раскин Б.М. Ковтун Ю.С. // Ж. микробиол. 1988. -17. - С. 102-103.

5. Определение физиологических показателей роста тест-штаммов при сравнительном изучении различных белковых основ питательных сред. / Угримов С.А., Пивоварова Н.И., Мельникова В.А., Раскин Б.М., Ковтун Ю.С. // Ж. микробиол. - 1989. - & 1. - С. 96-97.

6. Сравнительное, изучение биологических свойств некоторых гидролизатов. / Ковтун Ю.С., .Шепелин А.П., Угримов С.А., Чурило-ва Т.П., Пивоварова Н.И. // Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии: Тез. конф. 4.1. - Махачкала, 1990.

С. 25-27.

3« № SU L_Подл, к тчЛ 04. U Тир.

Ротапринт ВНИИОК, Ставрополь, пер.Зоотехнический, 15