Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Повышение качества мягких лекарственных средств по показателю микробиологической чистоты

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Повышение качества мягких лекарственных средств по показателю микробиологической чистоты"

ш О У«

РГ6 0Д - ,\ПР Ш

МОСКОВСКИЙ НАУЧНО- ЙССЛЕДОВЛТЕЛЬСКИЯ ИЮШУТ ЭШДЕЮЛОГЙИ И МИКРОБИОЛОГИИ Ж Г. Н. ГАБРИЧЕВСКОГО

РГ6 од

Ва прааах рукописи

БТХАРЦЗВА Кжяз. Вждагвфовяа

ПОВКШШВ КАЧЕСТВА 5МГЯИХ ЛИСАРСГЕШЗШХ СРЕДСТВ ПО

йтздж®з шшчжяожгйчешя частота

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Мэсква - 1994

Работа выполнена в лаборатории фармакологии Института биотехнологии АО "Биотехнология"

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

Доктор медицинских каук, профессор Г. Я-Еиюан Кандидат биологических каук Т. £. Куб

ОШЩЛЬЕЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Доктор медицинских наук .профессор •В.В.Пасаеаэвз. кандидат биологические наук Кадашва Е А.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Научно-исследовательский институт фармации

Защита состоится ..".........1994г. в часов на заседании специализированного Совета К 084.18.01 в Научно-исследовательском институте эпидемологии и микробиологии им. Г. К Габричевского по адресу:

• 125212 ЬЬсква, ул. Адмирала Макарова, д. 10

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МНИИЭМ

им. Г. Е Габричевского

Автореферат разослан "_"_1994г.

Ученый секретарь специализированного совета,

кандидат медицинских наук А. В. Сафромова

ОЕДАЯ ХАПЯТНРЙСТКИ РАЕОГЯ

Дятуадкосга setaj. В последние годы мягкие лекарственные средства (ШЮ)- мази, пасты, линименты, суппоаитории и др. Есе шире применяется в лекарственной терапии. В связи с обгцим ухудшением экологической обстановки отмечается рост дерматологических,гинеко-асгических заболеваний,злокачественных новообразований коза и пр., зри лечении которых наиболее часто применяется ШЮ. В районах военных конфликтов в республиках СНГ и др., крупномасштабных аварий сакже велика потребность населения в препаратах для местного применения (в их числе - мягкие лекарственные Форш, МВД при лечении зан.ожогов и воспалительных процессов. Кроме того,в рецептуре вра-тей коскйтологических медицинских учреждений около 70% препаратов ¡оставляют ШЮ.

Активизация спроса и отставание от него напей промышленности збусловили рост количества наименований и объёма И®, по которым '.э удовлетворяется потребность населения (Борищук В. А. .1990).

В связи с выходом в свет 2-го тома Государственной фармакопеи ;ССР XI издания,в который вперзые в нашей стране вошли нормы до-¡усткмой микробной загрязненности нестерильных лекарственных :родств (ШЮ) .предполагалось,что с 1.01.1992г. подавляющее боль-шнство отечественных НЛО должны отвечать этим требованиям. Однако, сачзство выпускаемых ШЮ остается низким, что определяет в ряде :лучаез неконкурентоспособность нашей продукции. Присутствие антн-шкробных агентов (действута^е вещество, консервант или их сочетала) не всегда гарантирует требуемую степень улкробной чистоты фепаратов этой группы (Денисова С. 3. и соавт. .1981, Кивман Г. Я. н :оавт. ,1933, Крылов ¡0. Ф. .Кивман Г. Я.. 1985).

Опасность повышенной микробной контаминации лекарственных :редств заключена в том,что она мояет привести к возникновению 'лекарственной инфекции" (особенно у ослабленных болезнью пациен-'ов), к снижению стабильности,специфической активности препаратов, гавышению токсичности ,а тага® уменьшению сроков их годности .

Видовой состав микрофлоры,обнаруживаемой з ШВЗ, весьма разно->бразен (Гунар О. В. ,1992, Jastalska D. .1974,Vallbausser К. Н. .1975, ¡г¡go J. ,1976 и др.). Сведения о выделении Pseudorronas aeruginosa [ Staphylococcus aureus из препаратов данной группа, включая средс-■ва лечебной косметики и дерматологические мази, встречаются до-юльно часто (S2epieto*ska В. .1971, Mohr Т. .Kovaes И. ,1972. Wszni-ik-Parnowska W. .Veracso В. ,1976 и др.).

Внедрение правил Ш3 на химико-фармацевтических предприятия: позволит повысить качество выпускаемой продукции. Однако современное состояние химико-фармацевтической промышленности требует, наряду с внедрение« названных правил, разработки и использования ] ряде случаев методов деконтаминации готовых нестерильных лекарственных средств (НЛО).

Существует несколько- способов снижения микробной загрязненности Ш1С. одним из которых является выдеришакие препаратов (( цель» их декшташшацик) при определенной температуре в теченш некоторого времени (Паграманова К. А. и соавт. .1991). Другой споссб-деконтаыикация Ж с помощью метода радиационной обработки ( Трофимов ЕЕ ,1988 Бочапинскяй ЕИ. .Трофимов Е К. .1992 и др.).Проведенные в стране и ра рубежом исследования показали перепективност; метода облучения препаратов.выпускаемых в нестерильном виде, сырь; и вспомогательных веществ, небольшими дозами ионкзирущих излучений ("пастеркзуюдамн" дозами). Помимо высокой эффективности этоп метода, в большинстве случаев сохраняется фармакологическая активность препарата, невелика опасность повышения его токсичности после обработки, а сам процесс может быть полностью механизирован ! автоматизирован (Павлов Е. П. с соавт. ,1992).

Актуальность Буранной текы определяется задачам;:, стоящим перед медицинской прошзленаостыа по выпуску лекарственны средств, удовлетворяющих ыевдународаш требованиям, е частности по показателю "Микробиологическая чистота".

Цель работы состояла £ изучении количественного и качествен ного состава микрофлоры, контамииирушэй нестерильные мягкие лекарственные средства, а также установлении возможности юс декшта минации. При этом были определены следующие задачи:

- изучить уровень контаминации отечественных мягких лекарственны средств промышленного производства, выпущенных в 1990-1992 годах

- провести микробиологическую экспертизу выделенных мюфоорганиз мов-контаминантов:

- разработать схемы и методические приемы определения микррбзо: загрязненности мазей с использованием метода мембранной фильтраци

- изучить стабильность уровня микробной загрязненности и иэнеспо собность микроорганизмов при хранении искусственно контаминирован ных образцов мазевых основ и их компонентов, используя при это

- 3 -

:етод математического планирования эксперимента; установить возможность переливания микроорганизмов в естественно онтаниннрованннх препаратах, выдерживаемых при различных темпера-урных реяикая с цельи их деконтаыинации;

исследовать влияние различных доз гамма-облучения на уровень -икробной загрязненности с целью выбора оптимальной дозы для де-онтаминации препаратов;

провести изучение влияния радиационной деконтаыинации на некото-ыэ физико-химические . и фармакологические показатели облученных ягких лекарственных средств.

.Чаучяая нав?;зна. Установлен высокий уровень контаминации не-герильных ЦЖ :34,82 изученных серий 36,12 наименований препарата, выпущенных отечественной промышленностью в 1990-1992 гг., не ^ответствовали требованиям Госфармакопеи СССР XI издания по пока-атедю "Микробиодогичес кая чистота".

Определен видовой состав выделенных микроорганизмов-контами-штов и их способность к длительному переживанию в мягких лекарс-¡енных формах при выдерживании в различных температурных реаимах. :тановлено, что патогенные микроорганизмы, выделенные из мягких ■карственных $орм препаратов, в большинстве случаев устойчивее к ■йствующему началу по сравнению с чувствительностью к нему иден-!чных музейных штаммов.

Показана перспективность применения метода математического анирования эксперимента для изучения выживаемости патогенных кроорганизмов в мазевых основах и их компонентах в случаях ис-сствеяного контзминирования с целью выяснения их жизнеспособнос-в названных средах при различных условиях хранения.

Установлены оптимальные дозы облучения, позволяющие снизить овень микробной загрязненности препаратов до пределов, соответс-утшш требованиям ГФ XI.

При изучении воздействия различных доз облучения на некоторые зика-химические и фармакологические показатели отдельных препа-гов показано, что доза 5 кГр не "приводила к изменению свойств ис-?дуемых препаратов; воздействие более высоких доз вызывало сниже-; уровня содержания действующих начал в линименте "Нафтальгин" и зи "Диоксиколь".

Палодения, выаосммш яа задиту. 1. Значительная часть исследо-

ванных мягких лекарственных средств загрязнена микроорганизмами. 2. Ь&ифоорг&чнзш-конташшанты способны к длительному пережизанкю в мягких лекарственных средствах, однако в случае загрязнения нее-поровыми формами, возможна деконтагйшация препаратов при хранении в определенных температурных рекимах. 3. Радиационная обработка позволяет деконтаю&шрозать Шй>, ке нарушая их основных свойств, если доза общения не превышает 5 кГр. 4. При дозах облучения выиа 5 кГр в части случаев возможны изменения физика - кшлчеоких к фармакологических свойств препаратов.

Щагтаюаскоэ ггачсгвгэ. В соответствии с полученными результа-гаш по радкацинной деконтакинации «ягких лекарственных средств составлены и утверждены ÎS РФ "Изтодические рекомендации по использованию ионизирующих излучений для снижения микробной загрязненности лекарственных средств, лекарственного сырья и вспомогательных материалов" (1931).

Разработаны схемы к методические приемы определения шкробно* загрязненности с использованием мембранной фильтрации мазей "Лево-екн", "Лэвоиеколь", "Двоксикадь" и мази иафенида ацетата 10S, предназначенные для вкдючеайя в частные фармакопейные статьи.

tepoSaroa ра&жл Материалы работы докладывались на симпозиума по радиационной стерилизации кэдищнекой продукции (г.Кондроао, 1991г. ) и лабораторных коллоквиумах. Диссертация апробирована на заседании Ученого совета йгетктута биотехнологии .

Соддрдаиа п объаи дгграартатузх Диссертация состоят из введения, 3 глав литературного обзора, 6 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы (150 источпк-ков). Работа изложена на 139 страницах машинописного текста и содержи 6 рисунков и 20 таблиц.

содйрыйкв ршшг

Всего было исследовано 155 серий 47 наименований мягких лекарственных средств (в том числе мазей - 81 серия 24 наименований линиментов - 35 серий 6 наименований,свечей - 39 серий 14 наименований, саге -3 серии 3 наименований), полученных от химкчо-фарма цэвтичееккх предприятий, а тагае отобранных ив различных аптек ; произведенных отечественной промышленностью в 1990-1992 гг.

Из исследуемых препаратов 54 серии 17 наименований не соответствовали требованиям ГФ XI па показателю "Микробиологическая чистота", из них 18 серни 8 наименований мазей,26. серий 6 наименований линиментов и 10 серий 3 наименований свечей. Всего - 34,82 исследованных серий или 36,IX наименований препаратов. При этом из 17 наименований загряаненных ШЮ 8 обладали различной степенью антимикробного действия. Результаты исследований приведены в табл. 1 и 2.

Таблица 1

НАИМЕНОВАНИЯ МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, НЕ СООТВЕТСТВУЮЩИХ ТРЕБОВАНИЯМ ГФ XI ГО ПОКАЗАТЕЛЮ "НЙКРОБИОЛОГЙЧЕСКАЯ ЧИСТОТА"

Наименование препаратов ■ Количество серий

Всего исследовано Из них не соответствует требованиям ГФ XI

Линимент бальзамический

(мазь Вишневского) 3 1

Линимент госскпона 3% 2 1

Линимент кафт алане ¡«эй нефти 10% 2 2

Линимент Шфгальгин 11 8

Линимент синтомицина 1,5,10% 17 12

Линимент стрептоцида растворимого 5% 3 3

Мазь ацеммна '* 8 1

Мазь Диоксиколъ 11 о ■_>

Мазь Левосин. 8 1

Мазь левориновая 4 1

йазь мафенида ацетата 102 5 4

йазь метилурациловая 5Х б 5

&зь нафталанная 3 3

&зь серная 2 1

Звечи с .лкггеиурином 3 2

Звечи с ихтиолом 3 2

Звечи с экстрактом красавки 7 б

В 41 серии' 14 наименований препаратов обшее число аэробных ¡актерий и грибов превышало допустимые нормы, а в 21 серии 8 наи-

- б -

ыэнований препаратов были обнаружены бактерии семейства Entero-bacteriaceae, а такие сннегнойная палочка.

Микрофлора, выделенная из исследованных iifiC, была представлена следующими микроорганизмами; Pseud. aeruginosa, бактерия:« семейства Enterobacteriaceao - Е.coli, Serratia rubideae, Entercb. sakasakii, Enterob. amnisenus, сапрофитными кокка;.® (коагулззоотрк-цательный стафилококк) и палочкаш (часто споровыми формами),дрон-кэвыш и плесневыми грибами.

Таблица 2

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ И КАЧЕСТВЕННЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ НЕСООТВЕТСТВИЯ ПРЕПАРАТОВ ТРЕБОВАНИЯМ ГФ XI ПО МЙКРОБШЗЮГИЧЕОКОЯ ЧИСТОТЕ*

Наименование препарата¡ОЧБ (КоЕ/г)|ОЧГ (КоЕ/г)(Наличие патогенных

Линимент бальзамический

г

(казь Вишневского) 3,8-10 Линимент госсипола 3% Линимент нафгаланской нефти 4,0-10'

с

Линимент Вафгальгина " " ""

1,8-10" 3,0-105 8.2-103 2.5-102 Е.О-Ю2 2,8-10* 2,0-10

Линимент синтомицина •Еиниьк-зт стрептоцида 5% Ыазь ацеиина Уазь Деоксиколь Иазь Лавосина Мззь лэворгаювая .

Ыааь серная 2,5-10^

Уазь ыафенида ацетата 10% 2,0-10

Иазь метидурацилоаая 2,0-10

Ыазь нафталанная 1,3-10 Свечи с экстрактом красавки 3,4-10

Свечи с лютенурином 3.0*10""

5,010

2,0*10" 1,2-10* 1,5-10*

2,5-10

4,0-10

Enterobacter:

Enterobacter.* Entercb., Ps. cierug. Enterobacter.

2

Свечи с- ихтиолом

4,0-10

E. coli.Ps. aerug;. Enterobacter. Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa

* - приведенные в таблице числовые данные являются максимальными среди всех исследованных серий одного наименования.

Наиболее высокий уровень микробной загрязненности установлен у линиментов - до 10 КоЕ/г (Рис. 1).

Еккробигя гагрзгжгояжта

1СШ

«к

50%

402

ЯК

/ / / /

/ / / / / / / / /

| ыазя лкнк&экш 1-с е р а и -

свеча | | казн лкга&еиш сгвеча | -1 1—а аииеяования—1

5ис.1. Количество млс (в X от числа исследованных), не удовлетво->ящих требованиям Госфармакопеи по микробиологической чистоте.

Установленный высокий уровень контаминации мягких лекарствен-1ых средств,зыпущэнных отечественной промышленностью в 1990992гг., свидетельствует о неблагополучном положении в производстве нестерильных препаратов этой группы. Современное состояние хи-(ико-фармацевткчеекой промышленности требует разработки и исполь-ювания в ряде случаев методов деконтаминации готовых ШЮ.

Микробиологический контроль ЫЛС по сравнению с другими лекарс-•веиными форма>,¡и затруднен наличием у них, как правило,двух фаз, [еобходимостьп высвсбоадения микроорганизмов из жировых сдоев и ;ключением в подавляющи большинстве случаев в состав мазей ант-и-мкробных средств, консервантов [Денисова С. В. и соавт. ,19813. При 'Пределении микробной загрязненности тагадх мазей необходимо пред-¡арителъное устранение антимикробного действия препарата, которое гажет быть осуществлено добавлением инактизатора, разведением пре-:арата з большем объёме растворителя, или использованием метода [«мбрзнноЛ фильтрации. Однако метод мембранной фильтрации МЛС в :адаа стране изучен недостаточно, поэтому необходима доработка ря-,а фармакопейных статей а отношении применения метода фильтрации игких форм, обладающих антимикробным действием.

В настоащээ время прош&яенностья выпускается около 1С найме-

нований мазей на основе пшнэтиленоксида (1ЕО),в состав которых входят антимикробные компоненты. Кроме того, нэ литературных и ка-них исследований известно, что сама основа обладает некоторым бактерицидным действием. Для проведения исследований были выбраны 4 наименования мазей, применяющихся как антибактериальные средства -мази "Диокеиколь", "Левоскн", "Лэвомеколь" и мазь мафеннда ацетата 10%. В качестве антимикробных агентов в состав этих мазей включены диоксидин, левомицетин, сульфадиметоксин и.мафенида ацетат в различных концентратах.

Результаты проведенных модельных опытов с искусственно конта-мншрованныш препаратами "Левосин" и "Лэвоиеколъ" показали несомненную эффективность метода мембранной фильтрации при определении их микробной загрязненности. Следовательно, так как мази на основе ЛЭО хорошо растворимы в воде (кроме мази "Левоеиг"), ьвиду неэффективности разведения, а также в связи с отсутствием в большинстве случаев специфических инактиваторов, предпочтительно использование метода мембранной фильтрации. В случае препарата "Лэвосик" ввиду наличия нерастворимого осадка сульфадиметоксина, возможно использование двухступенчатого фильтрования.

Изучение 4.-х наименований мазей, содержала антимикробные компоненты, показало, что применение мембранной фильтрации в каждом случае имеет свои методические особенкности. Их следует учитывать при составлении ЕТД, обосновывая выбор метода мембранной фильтрации для отдельных мазей его эффективностью и экономической целесообразностью.

Высокий уровень контаминации нестерильных ЮК связан в ряде случаев с загрязнением основного сырья, использованием в производстве загрязненного вспомогательного сырья и материалов, ослаблением действия консервирующих веществ, добавляемых в препараты и другими причинами.

Анализируя выявленные нами случаи микробной контаминации препаратов, можно предположить, что причиной контаминации свечей с экстрактом красавки является основное сырьё,а именно экстракт красавки. Идентичность микрофлоры , выделенной из свечей и сырья подтверждает данное предположение. Причиной инактивации консерванта (фенола) в готовом препарате (к, как следствие этого - высокого уровня контаминации свечей), ют быть взаимодействие фенола с

- 9 -

эмульгатором [Денисова С. В. и соавт., 19901.

Шибольшэй степенью микробной загрязненности характеризовались препараты, содержащие нафгаланскув нефть: помимо зысокого уровня контаминации, значительная часть проанализированных образцов содержала патогенные бактерии, как правило, - Ps. aeruginosa, (более 3/4 исследованных серий), йзжно предположить, что в данном случаэ источником контаминации являлось сырьё - нефть нафталанс-кая. Выживание еинегяойкой палочки более 3 месяцев в искусственно контаминмрованной нефти в модельном опыте свидетельствует в пользу этого предположения.

Следует обратить особое внимание на случаи выделения из мазей, обладающих выраженным антимикробным действием, резистентных форм микроорганизмов. Так,из мази "Диокеиколь" нами был выделен ко-агудзэоотрицательный стафилококк.сохраняющий свою жизнеспособность при хранении препарата до окончания срока годности в рекомендуемых условиях. Культура стафилококка, выделенная из мази "Диокеиколь", была устойчивее к действующему началу мази - диоксидину в 10 раз по сравнению а музейной тест-культурой Staph, aureus 209 P.

Из линимента синтомицина 10% был выделен штамм ¡Lcoli. в 50 раз более устойчивый к синтомицину по сравнению с аналогичным музейным штаммом кишечной палочки. Ослабление консервирующего действия сорбиновой кислоты в линименте можт быть вызвано несоответствием рН оптимума действия консерванта и готовой формы препарата, а тага® взаимодействием консерванта и эмульгатора ,на что указывалось в ряде публикаций СНеграи А. К. и соавт. ,1985, Денисова С. 3. и соавт. ,1990].

Одним из методов снижения уровня контаминации является способ выдерживания загрязненных препаратов в течение некоторого времени при температуре,сопоставимой с условиями их хранения ,но неблагоприятной для микроорганизыов-контаминантов.

Для решения вопроса о дальнейшем применении .¡сонташнированных выше допустимых пределов лекарственных средств, особенно если превышение уровня микробной загрязненности не очень велико, имеет значение возможность сохранения или потери жизнеспособности микроорганизмов-контамкнантов в препаратах при хранении. С этой целью изучали возможность переживания микрофлоры в естественно контами-нированиых образцах МЛФ при различных температурных рекимзх: б°С,

комнатной температуре - 20 °С и при 35°С. Исследовали следующие ИЛС: линимент нафтальгина, линимент синтомицина 51, свечи с экстрактом красавки. Уровень микробной загрязненности этих препаратов проверялся с интервалом 1 -2 месяца до окончания срока их годности. Результаты проведенных испытаний показаны на рис. 2.

Б условиях комнатной и пониженной температуры сохранялся высокий уровень контаминации свечей с экстрактом красавки споровыми бактриями. К окончанию срока годности свечей величина ОЧБ снизилась всего на один порядок, оставаясь в 2 -4. раза выше допустимого уровня. При хранении их в условиях повышенной температуры (что недопустимо для свечей) произошло отмирание бактерий к концу 2-го года хранения, но при этом полностью изменился внешний вид и консистенция препарата

В случае загрязнения свечей с экстрактом красавки плесневыми грибами, уровень контаминации препарата резко снижается до допустимых норм к 8 месяцу при хранении в условиях комнатной температуры. В образцах свечей, выдерживаемых при комнатной и повышенной температуре, плесневые грибы практически не выделялись после 12 месяцев хранения ( в отличие от хранившихся в холодильнике препаратов , в которых грибы сохраняли свою жизнеспособность в течение 1,5 года).

Dpa изучении переживания микроорганизмов е экстракте красавки, доказана возможность контаминации препаратов через данное сырье: в естественно коктамдаироваакьк образцах экстракта споровая культура выживала в течение 2 лет, при этом уровень контаминации снизился Есего на порядок - с 1,б-10едо 5-105КоЕ/г.

При хранении линимента Нафтальгина и синтомяцина 5Z при повышенной температуре (35 °С) .наблюдался усиленный рост бактерий в первые месяцу хранения. Высокий уровень микробной загрязненности образцов (порядка 1О5КоЕ/г) сохранялся до окончания срока годности. В прецаратах,хранившихся при комнатной тешзературе (условия хранения препарата).свыше 1,5 лет сохранялся высокий уровень микробной загрязненности: 10"- 10 КоЕ/r. Однако в образцах препарата Нафтальгин, перенесенных в холодильник и проанализированных на наличие Ps. aeruginosa, через месяц отмечено практически полное отсутствие этих бактерий.

Изменение температурного режима хранения (г холодильнике,при

- и -

числа КоЕ

б

Температура хранения 35 С

б 8 10 12 14 16 18 20 22 24

Бремя

хранения

(мес)

4

6 •

Л5

4 *

3

2 ) * •• • \

1 \ *""••—

__ ■ » ( 1 1... .

О 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 (мес)

Рис. 2. Переживание аэробных бактерий в естественно контаминиро-

ванных препаратах при различных температурах хранения:

где - - в линименте синтомицина 5%,

--- - - а линименте нафгадьгина,

......... - в свечах с экстрактом красавки

6°С) , влияет на способность к перзишанию синегнойной палочки в препарате линимент Нафтальгин.

Для подтверждения полученных результатов и выявления Д1йшмики сннхвеия обсенененноста Зафтальгкка синегнойной палочкой.были проведены шдельыые опыты . Предварительно проетеркДйЗоааякь» образцы линимента "Изйтальгина контаыинировалк Рб. гэги^позг, выделенной ранее кз него, разделяли на две группы для храпения при различных температурных условиях. Результаты наблюдений ва динамикой переживания синегнойной палочки в дккнжнте Нзфтальгинг в течение 2. недель представлены в табл. 3.

Как видно из таблицы, при хранении в холодильнике линимента Бафгальгина, контамшшрованкого Рз. аегиггпоза, последняя погибала в течение 2 недель. Она не выявлялась даже из среды обогащения.

Таблица 3

Переливание Рг. аегие^псза в линименте "Еафтальгнн"

Температура ¡ общее число бактерий (КоЕ/г) при сроке хранения, хранения ¡ , суток

Исходное 2- 7 10 14

количество

20 - 22° С 3,8-10* 7,8-10Ä 8,0-10^ 1,4-10" 1.2-105

5 - 8 0 С 8,0-10* . 2,8-10'- 1,9'Ю2 W 0

Анализировались тага© следуидиэ естественно кактаыинированные ШК: - шзь нафталанная (конташяированная EL col i. Ps. aeruginosa), - мазь "Дкоксиколь" (коагулаэовегатквнш стафилококком),- линимент синтомицина 1GX (Е. coli) при'хранении их в рекомендуемых условиях.

В ыазк нафталанной, хранившейся при комнаткой температуре, Pseud, aeruginosa и Е. col i в течение 2 дет и 8 месяцев (время наблюдения) сохраняли свою жизнеспособность. Уровень микробной загрязненности мази существенно не ценился до окончания срока исследования, оставаясь выше допустимых норм (порядка 3-103КоЕ/г).

В линименте синтомицина 10% к окончанию срока годности уровень микробной загрязненности повысился от 100 КоЕ/г.(начальная сгерекь контаминации) до 10 КоЕ/г, при атом бактерий семейства Enterobacteriaceas (Е. coll)сохранили свои ккзкеспособность, ггагоч-

- IS -

кне тингсгориальннй , морфологические и биохимические свойства

Начальная степень контаминации мази "Диокснколь", соетагихв-вая 100 КоЕ/г „к истечению срока годности (2 года) не изменилась, однако коагудаэонегативный стафилококк , обнаруженный в препарате, выявлялся через среды обоггдения в течение всего срока хранения препарата.

Как видно кз проведенных исследований, петогенш.'г микроорганизмы способны к -переживанию при длительном выдеркивании в репх>-¡.©ндуемых условиях в рагхччных видах \Ш. При это« они сохраняли свою жизнеспособность,типичные морфологичеекиз.ткнкториальные и биохимические свойства при хранении как в водосодержан^к (линтаея-ты синтомицина, Пафтальгин), так и в безводных препаратах Смазь "Ла-оксикшь ", мазь нафталанная).

При загрязнении мягких лекарственных средств споровой аэробной микрофлорой, бактерии , как правило, сохраняли исходный уровень контаминации практически до конца периода изучения (в большинстве случаев - срок годности препаратов).

Дня изучения аькиваеиостн микроорганизмов во вспомогательном сырье использовались искусственно тнтзьянированные образцы мазевых основ и кх компонентов. Для конкретизации поставленных зада® сведения к необусдитгу минимуму числа'модельных оиьаог о искусственно заратенккми образцами мазевнх основ и их компонентов, щлт-мевялм метод иатеиатмеского планирования эксперимента.

Зыхи ыйраны следующие иезевые основы и ж коыпокентк вг-зе-гин. ланолин. На-КЩ, 3,5% водный раствор На-КЩ, снесъ ЕЗО 1509 л iOO С1--4), 'наиболее распосгргненные компоненты мгзезьн основ ерэда Ж, вылущенных отечественной проьашениностью в 19йО-1992 гг.

В ланолине количество Staph, aureus и Pseud, aeruginosa снизится па несколько порвдкоз, а з ряде случаев - до 0. Исходная кгт-зузка существенного значения не имеет, а температура влияет только га переливание стафилококка, который погибает при 35°С. Что касался ютечней палочка, то в течение перюто месяца ее количество ;нш?гется всего на порядок независимо от теш;уратуры хранения и голь ко к концу второго месяца наблюдается значительное уненькекиё шела яизнеспособных клеток.

3 вазелине количество клеток стафилококка снимается до 10-1С0 toE/r Ебзависиуд от температуры и исходной нагрузки, причем боке

ярко это выражено в течение второго месяца хранения. Pseud. aeruginosa и E.coli сохраняют жизнеспособность в вазелине в течение всего срока наблюдения на высоком уровне. Однако следует отметать, что это происходит лишь при комнатной температуре. Синегной-вая палочка, количество клеток которой сохраняется и при 35 С. при 5 С постепенно погибает, а клетки кишечной палочки отмирают через 30 дней при обоих указанных температурных режимах.

В 3,5% растворе Na-KMg жизнеспособность EL coli и Pseud. aeruginosa полностью сохраняется, отмечается увеличение их количества на 1-2 порядка к концу срока наблюдения. Увеличение числа жизнеспособных клеток происходит при всех изученных температурах хранения. Количество клеток St. aureus сохраняется в течение первого месяца хранения при температурах 6°и 20°С на уровне близком к исходному, после чего значительно уменьшается (до 150 КоЕ/г) к концу 2 месяца. При 35°С количество клеток стафилококка уменьшается ка 2 порядка уже через месяц.

Переживание спор и грибов. На перекивание спор Вас.subtiIiis ни вид мазевой основы, ни температура хранения существенного влияния не оказывают. В течение первых 1,5 месяцев наблюдается уменьшение количества спор на 1-2 порядка,а•оставшиеся споры сохраняются до конца испытания (на уровне 103КоЕ/г).В несколько меньаей степени споры переживает в Na-КМЦ, однако и в этом случае через 3 месяца сохраняется на уровне 200 КоЕ/г. Aspergillus rüge г в смеси D30 погибает в первые дни исследования. В Na-КМЦ количество грибов в первые дни резко снижается (до 150 КоЕ/г), а через 1,5 месяца они практически погибают в образцах, хранившихся при комнатной и повы-яенной (35°С) температурах. При б°С количеству грибов сохраняется на уровне. 120 КоЕ/г в течение этого же срока. При б°С грибы пол-зостыо сохраняет жизнеспособность б ланолине, практически отмирая при других режимах хранения на протяжении трех месяцев. В вазелине * «а-квд количество Asp. niger остается на исходном уровне i

течение'всего срока наблюдения. Следует отметить,что пониженна? температура хранения, рекомендуемая для некоторых ИЛС. способствует переживанию контаминируюдас препарат плесневых грибов.

Исследоващшь мазевье основы и их компоненты (кроме раствор; Na-КВД) в целом являются неблагоприятной средой для жизнедеятельности названных видов патогенных бактерий. Это можно объяснить от

сугствиеы в них воды,а также избирательной способностью микроорганизмов использовать те или иные вещества в качестве питательных субстратов. При этом в смеси ПЗО они полностью отмирают уже в первые дни после инокуляции,что подтверждает результаты о бактерицидном действии ПЭО-основы ка эта микроорганизмы.

С целью определения эффективной дозы облучения для декоктами-нации препаратов, были выбраны два наименования мягких лекарственных средств, содержащие патогенные бактерии и имеющие высокий уровень микробной загрязненности: линимент Наттаяьгия -2 серии, а также свечи с экстрактом красавки - 5 серий. Образцы облучали следующими дозами : 1 ; 5 ; 7,5 и 10 кГр .после чего проводили исследование микробиологической чистоты облученных препаратов. Результаты снижения уровня микробной загрязненности препаратов после воздействия на них. этих доз гамма-излучения представлены в табл. %

Как ейдно та таблицы, доза 1 кГр снижает уровень естественной контаминации на 1-2 порядка, однако при этом сохраняются бактерий семейства Ег.ЬегоЬассеПасеае и дрожжевые грибы. Для деконтаминацик свечей с экстрактом красавки, инфицированных аэробными спорообра-зувщими бактериями, плесневыми грибами, а также бактериями семейства ЕпЬегоЬасЬеПаоеае в пределах КоЕ/г, аффективно облучение в дозе 5 кГр, приводящее уровень контаьошации в соответствие с требованиями ГФ XI. Для деконтамкнации линимента нафтальгииа , загрязненного епорообразулцими бактериями, плесневыми грибами, а также патогенными бактериями семейства ЕпЬегоЬяс1ег1асеае з пределах 10- 10 КоЕ/г , таете необходима доза 5 кГр.

На основании полученных денных проверялась эффективность дозы 5 иГр на остальных препаратах с исходным уровнем естественной контаминации, превышавшем требования ГФ XI по показателю "Шкроба-ологичеекая чистота": мазь ацемша, мазь метилурацияовая, мазь мз-фенида ацетата, мазь "Диоксиколь", а также линимент синтомицина 52, линимент Нафгальгин. Полученные данные приведены на рис. 4.

Кроме того, представляло интерес изучение переливания "остаточной "микрофлоры при хранении облученных препаратов. Несколько серий свечей с экстрактом красавки облучили дозой 1 кГр. При это:« определяли уровень микробной загрязненности препаратов до и после облучения и далее с интерзалом н 1 мес до окончания срока годности облученных препаратов.

Таблица $

Снижение уровня конташнацки мягких лекарственных средств под действие« различных доз гаыыа-облучешш

>---1—;-1

1 Еаи^экоьание ГЬказа-1Уровень микробной загрязненности, КоЕ/г |

1 препарата, тель )-;-:-1

¡серия Микроб-¡Исходный ¡После, облучения различными дозами| 1 ной за!'-! I-^—|-1-!---1

I

РЯЗШНОСТИ!

1 кГр | 5 ХГр |7.5 кГрЦО кГр|

Линимент 043 7,6'10

Нафгзльгин, ОЧГ О

1 наличие патог.

ЕпЬ. аялгзепиз + Еп'с. заказз!а 1 +

2,5 10*

20

2 ОЧВ 3 • 10

ОЧГ 2 • 10*

наличие патог.

Е. со11 +

свечи с экстрактом красавки, 1

ОЧБ 1,8-10 ОЧГ О

О О

210

О О

О О

О О

г

ОЧБ 3,4-10 4-10 35 О

ОЧГ 1.8-10* 2,5-10г 10 О

ОЧБ 3,2-10* 4 1032 40* О

ОЧГ 5,4-10* 1,1-10 10 О

ОЧВ ОЧГ

наличие Е. со11

1.7-10 5-10*

+

7,1 ■ 10 6

ОЧБ ОЧГ 9-10 наличие ЕсоП +

1.9-10 О

410 5-Ю3

10 О

10 90

О О

О О

О О

О О

О

О

+

5

О

О

А

+

Ье.КоЕ/г б

б

4

3

2

1

О Ч Б

О Ч Б

-О Ч В

тип

О Ч Б

О ч Г

О Ч Б

Мазь ацемина

/ / /

ЕЗ И

Мазь мафенида ацетата'

Мазь метилура-циловая

Мазь Диокси-коль

Линимент синтомицина

количество микроорганизмов до облучения

- после облучения

/ / / /

О ч Г

N « К Г» Г» Г»

чип «пи

\ \ \

- допустимая норма по ОЧВ

- допустимая норма по ОЧГ

Линимент Нафтальгин

Рис. 4. Снижение уровня микробной загрязненности М.ЛО после облучения дозой ¡5 кГр.

Результаты наблюдений за динамикой переживания бактерий и

плесневых грибов,оставшихся в свечах с экстрактом красавки после

обручения дозой 1 кГр показали, что доза 1 кГр снижет уровень

jj з

микробной загрязненности свечей бактериями на порядок (с 10 до 10 ЕоЕ/г), в течение последующих двух месяцев уровень уменьшаетея почти до допустимых норы, происходит постепенное отьщрание поврежденных клеток. Однако за последующие два месяца происходит возрастание уровня за счет репарации облученнных, но выживших клеток и превалирования процессов размножения микроорганизмов над процессами отмирания. К окончанию срока годности уровень контаминации свечей почти достигает своей первоначальной величины. При воздействии дозы 1 кГр на плесневые грибы, в течение последующих 4 месяцев при хранении свечей происходит постепенное отмирание клеток.

При облучении дозой 5 кГр свечей с экстрактом красавки, происходит резкое снижение уровня контаминации (почти на два порядка) .приводящее его в сответствие с требованиями ГФ XI,а затем полное отмирание ыикроорганизмов при дальнейшем хранении препарата.

Ш. основании полученных результатов определения микробной загрязненности ШЮ после облучения разными дозаш , могшо сказать. следующее: при степени контаминации препаратов в пределах lcß-10* КоЕ/г эффективно облучение в дозе 5 кГр, приводящее уровень шс~ робной загрязненности в соответствие с нормами ГФ XI по показатели "Ншробиологическая чистота". При более высоком уровне микробной загрязненности , а также наличии большого числа патогенных бактерий, в том числе Pseud. aeruginosa, и бактерий семейства Enterobacter!асеае, для деконтаминации препаратов необходима доза облучения более 5 кГр (в зависимости от начального уровня микробной загрязненности препаратов).

Установлено, что патогенные бактерии и грибы, контамкнирующие исследованные препараты, отличается существенно меньшей радиационной устойчивостью по сравнению со споровьая бактериями.

Проведенные испытания свидетельствуют о том, что выбор "пастеризующих" доз должен проводиться на основании установленного начального уровня микробной загрязненности облучаемой проду.щиш при неклоком уровне (порядка 10-10vбактерий к 10-105грибов ) эффективно облучение дозами 1-2 кГр, при более высоком уровне (до 10* бактерий и 10*грибов) следует увеличить дозу до 5 кГр. При сильном

загрязнении препаратов (болээ Ю^бактерпЯ и 10'грибов) для де:кз-ташнации необходима доза облучения более 5 кГр.

При выбор? доз радиационной обработки необходимо учитывать вероятность изменения стабильности препарата. Возможность прикене-нкя метода радиационной деконтамивации долота быть подтверждена экспериментальной проверкой свойств кавдсго препарата после облучения в объёме требований действующих ЗС и общих статей Гоеударс-твеннсй йармзкопеи.

Проверенные исследования показали, что применение доза 5 кГр зля радиационной деконтаминации мази ацемина.мазн ^фзнида ацеггтг Юл,»>«ази ьагтклурациловой 10%,мази "Диокеиколь", линимента Бафтай.-гин.ладимэнта синтомицина, свечей с экстрактом ¡тргеавки, не измезя-ло основных физико-химических характеристик препаратов. Однако 5?" позьшении дозы до 10 кГр, препараты линимент Нафтзльгина к «ззь "Дксксиколь" не удовлетворяли требованиям ФС по содерггни» действующих веществ. Кроме того, наблюдалось снижение специфической активности у линимента Наф-тальгин при воздействии на него дозами зы-вэ 5 кГр. Кз этого следует, что препарат линимент ЕвфтальгЕН является радиациояно нестойким и для его декантгминацют пеобходкао применять дозы облучения, не превышающие 5 кГр. При изучении специфической активности свечей с экстрактом красавки, облученных дозой 10 кГр, изменения фармакологических свойств не наблюдалось.

Получэнныз результаты говорят о необходимости исследовантй основных свойств калдого наименования ШЕ, облученного дозами выгэ 5 кГр, ввиду слсизкоста и иногокоипонентноети их состава, налнчая во многих «лгк1Н лекарственных формах воды, а также небо®них количеств действующих веществ, и ,как следствие этого, - возможной радиационной нестабильности. Доза. 5 кГр рекомендуется как доза, снижающая уровень контаминации до допустимых норм (при начальной уровне микробной загрязненности нэ выше 10 КоЕ/г),и не изменявшая при этом основных физико-химических показателей препаратов.

- 20 -выводи

1.При определении микробной загрязненности мягких лекарственных средств,выпущенных отечественной промышленностью в 1990-1992 гг., установлен высокий уровень контаминации: 36,1 % наименований исследованных препаратов не удовлетворяли требованиям ГФ XI по показателю "Микробиологическая чистота".

2. Выживаемость микроорганизмов в мазевых основах и их компонентах зависит от их состава , вида контаминаятов и температуры хранения, а) Ланолин обладает некоторым антимикробным действием в отношении стафилококка,синегнойной палочки и плесневых грибов; с увеличением температуры до 35°С это действие усиливается. При температуре 6° С наблюдается быстрое отмирание в вазелине синегнойной и кишечной палочки, б) Применяемая в качестве мазевой основу смесь ИЗО 1500 и 400, а также вспомогательное сырье - порошок Иа-КЩ обладает бактерицидным действием на патогенные бактерии и грибы. Следовательно, возможна деконтаминация названных основ'и их компонентов при хранении, в) Благоприятной для переживания микроорганизмов нз исследованных основ является гидрофильная - 3,52 раствор Ка-НМЦ; изменение температурного режима хранения при этом существенной роли не играет.

3.Установленный факт длительного сохранения жизнеспособности аэробных споровых бактерий в естественно и искусственно контамини-рованных препаратах , мазевых основах и их компонентах,свидетельствует о невозможности их деконтаминации при хранении, и о необходимости применения в этих случаях других методов,в частности,радиационную обработку.

4. Определены оптимальные "пастеризующие" дозы облучения, выбор которых зависит от начального уровня контаминации препаратов. С учетом этих данных составлены и утверждены "Методические рекомендации по использование ионизирующих излучений для снижения микроб-жоЯ загрязненности.лекарственных средств, лекарственного сырья и вспомогательных материалов".

5. Установлена нестабильность препаратов "Диоксиколь" и линимента нафтальгина при их радиационной деконтаминации дозами более 5 кГр. Излученные результаты свидетельствуют о необходимости изучения основных свойств каждого наименования ШС. облученных дозами свыше 5 кГр.

6. При составлении раздела НГД "Микробиологическая чистота" на мягкие лекарственные средства,, обладающие антимикробным действием к многокомпонентным составом , недостаточна ссылка на ГФ XI без детального описания метода мембранной фильтрации применительно к каждому конкретному препарату.

7. По результата;.« исследований микробной загрязненности мазей "Левосин", "Левомеколь", "Диоксиколь" к мази мафенида гьетнта 1СЛ, разработаны схемы и методы испытания перечисленных препаратов с помощью метода мембранной фильтрации, предназначенные для включения в частные фармакопейные статьи.

<ЖСОК FiBOT. ОЯУВЛШВАЖИ/ ГХ» HAJJSFtiiUiAK gKCCSPT/^Я

1. Пути контаминации нестерильных лекарственных средств. // Хим.-фарм. журн. - 1991. - N12. - С. 55-56. (соавторы: Шуб Т. А.,Кагра-ыанова К. А. , Кивман Г. Я. , Гунар О. В., Николаенко КС.).

2. Использование гамма-излучения для микробной дзконтаминацни лекарственных средств. //Хим. -фарм. журя. - 1992. -N2. -С. 76-78. (соавторы: Павлов Е. П. , Тушоп S. Г. , Самойлэшсо К. К , Кивман Г. Я . Дегтяренко В. В., Николаенко К. С., Эгьнатакоза ü II, Шуб Т.Д.).

3. Переживание Pseudomonas aeruginosa в препаратах,содержащих нгф-таланскую нефть. //Хим. -фарм. дурн. - 1S33. - N7. - С. EG-5S.

(соавторы; Кивиал Г. Я. , Щ/б Т. Л.). •4. Использование методе мембранной филы-раш-ги при определении мчк-робной загрязненности мазей. // Хим. -фарм. курн. - 1993. - N12. -С. 55-57. (соавторы: ILV6 Т. А. , Кивман Г. Я). 5. Рекомендации по использованию ионизирующих излучений для снияе-ния микробной загрязненности легарственных средств, лекарственного сырья и вспомогательных материалов. // КЗ СССР. - 1991. -С. б. (соавторы: Павлов Е. П., Тушов Э. Г., Гринев U. П. , Киьман Г. Я.. Осипов В. а , Трофимов В. И., Щуб Т. А., Григорьева 0. Л. , Самой-ленко Я К., Каграманова К. А.).

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бухарцева, Е. В.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. МЯГКИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА (МЛС), ИХ СОСТАВ,

РАЗНООБРАЗИЕ.

Глава II. ПРОБЛЕМА МИКРОБНОЙ ЗАГРЯЗНЕННОСТИ ПРЕПАРАТОВ.

1. История вопроса.

2. Микробная загрязненность МЛС.

3. Особенности контроля микробной загрязненности нестерильных МЛС, принципиальная схема испытания.

4. Источники контаминации.

5. Переживание микрооорганизмов в нестерильных

МЛС, мазевых основах и их компонентах.

Глава III. РАДИАЦИОННАЯ ОБРАБОТКА МЕДИЦИНСКОЙ ПРОДУКЦИИ.

1. Радиационная стерилизация и деконтаминация.

2. Радиационная обработка мягких лекарственных средств и их компонентов.

3. Радиорезистентность микроорганизмов, контамини-рующих препараты.

4. Некоторые вопросы радиационной устойчивости лекарственных средств,в том числе мягких форм, токсичность препаратов после радиационной обработки.

- 3

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава IV. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Глава У. УРОВЕНЬ МИКРОБНОЙ ЗАГРЯЗНЕННОСТИ НЕСТЕРИЛЬНЫХ

МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ.

Глава У1. ПЕРЕЖИВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ЕСТЕСТВЕННО КОНТА

МИНИРОВАННЫХ Ш1С.

Глава УП. ИССЛЕДОВАНИЕ ПЕРЕЖИВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ В ИСКУССТВЕННО КОНТАМИНИРОВАННЫХ МАЗЕВЫХ ОСНОВАХ И ИХ КОМПОНЕНТАХ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕТОДА МАТЕМАТИЧЕСКОГО ПЛАНИРОВАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА.

Глава У1II. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА МЕМБРАННОЙ ФИЛЬТРАЦИИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ МИКРОБНОЙ ЗАГРЯЗНЕННОСТИ МАЗЕЙ НА

ПЭО-ОСНОВЕ.

Глава IX РАДИАЦИОННАЯ ДЕКОНТАМИНАЦИЯ МЛС.

Глава X. ВЛИЯНИЕ РАДИАЦИОННОЙ ОБРАБОТКИ НА НЕКОТОРЫЕ ФИЗИКО

ХИМИЧЕСКИЕ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТОВ.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Повышение качества мягких лекарственных средств по показателю микробиологической чистоты"

В последние годы мягкие лекарственные формы - мази,пасты,линименты, суппозитории и др. все шире применяются в лекарственной терапии. В связи с общим ухудшением экологической обстановки (в частности, в ряде областей, подвергшихся радиоактивному загрязнению вследствие аварии на Чернобыльской АЭС),отмечается рост дерматологических , гинекологических заболеваний, злокачественных образований кожи и др. , при лечении которых наиболее часто применяются мягкие лекарственные формы. В районах военных конфликтов в республиках СНГ, произошедших в последнее время крупномасштабных аварий, также велика потребность населения в препаратах для местного применения (в их числе - мягкие лекарственные формы) при лечении ран, ожогов и воспалительных процессов. Кроме того, в рецептуре врачей косметологических медицинских учреждений около 70% препаратов составляют мягкие лекарственные формы [10,301.

Активизация спроса и отставание от него промышленности обусловили рост количества наименований и объёма мягких лекарственных форм, по которым не удовлетворяется потребность населения [10]. Однако и то ограниченное количество мягких лекарственных средств, выпускаемых отечественной промышленностью, не всегда удовлетворяет нормам ГФ XI по показателю "Микробиологическая чистота".

В связи с выходом в свет 2-го тома Государственной Фармакопеи XI издания, в который впервые в нашей стране вошли нормы допустимой микробной загрязненности нестерильных лекарственных средств, совпадающе с нормами Европейской фармакопеи, предполагалось, что с 1.01.1992 года подавляющее большинство отечественных ШЮ должны отвечать этим требованиям. Несмотря на это, качество выпускаемых мягких лекарственных средств остается низким,что определяет неконкурентоспособность нашей . продукции. Присутствие антимикробных агентов (действующее вещество, консерванты или их сочетания) не всегда гарантирует требуемую степень чистоты препаратов этой группы [26,43,44,543.

Опасность контаминации лекарственных средств связана с возможностью возникновения "лекарственной инфекции", особенно для ослабленных болезнью пациентов, а также со снижением стабильности самих лекарственных средств. Бактерии и грибы, обладая лабильными системами адаптации к внешней среде, могут использовать в качестве питательных субстратов как вспомогательные вещества, входящие в состав готовых препаратов, так и различные субстанции препаратов (действующее вещество и др.), что в конечном итоге приводит к снижению специфической активности лекарственного средства, вплоть до ее потери, уменьшение сроков годности, повышению токсичности за счет накопления токсичных продуктов метаболизма микроорганизмов.

Видовой состав микрофлоры, обнаруживаемой в мягких лекарственных формах различными исследователями, весьма разнообразен [113,118,124,129,154,155,1591. Из числа патогенных микроорганизмов наибольшее внимание следует уделять Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus, вызывающих местную инфекцию, трудноизлечимые заболевания кожи и слизистых оболочек. Сведения об их выделении из мягких лекарственных средств, включая средства лечебной косметики и дерматологические мази, встречаются довольно часто [106,133,134,141,154,155].

Внедрение правил GMP на химико-фармацевтических предприятиях позволит повысить качество выпускаемой продукции, так как эти правила включают в себя определенные требования к помещениям, персоналу, оборудованию, контролю качества полупродуктов и готовой продукции, санитарии,гигиены [39,91,153]. Однако современное состояние химико-фармацевтической промышленности требует, наряду с внедрением правил, разработки и использования в ряде случаев методов де-контаминации готовых нестерильных лекарственных средств.

Существует несколько способов снижения микробной загрязненности мягких лекарственных средств, одним из которых является способ выдерживания при определенной температуре в течение некоторого времени (обычно несколько месяцев) препаратов, которые, несмотря на принятые в производстве меры асептики и гигиены, были контами-нированы [14,39] . Другой - деконтаминация этих загрязненных в процессе производства препаратов (в конечной упаковке) с помощью метода радиационной обработки [6,24,66,75,80].

Проведенные в стране и за рубежом исследования показали перспективность метода облучения препаратов,выпускаемых в нестерильном виде, сырья и вспомогательных веществ небольшими дозами ионизирующих излучений ("пастеризующими" дозами). Помимо высокой эффективности этого метода, практически ценно то, что сохраняется фармакологическая активность препарата,сказанное подтверждается и нашей работой. Невелика опасность повышения токсичности препарата после стерилизации, а сам процесс может быть полностью механизирован и автоматизирован [12,65,66,68,80,95].

Актуальность выбранной темы определяется задачами, стоящими перед медицинской промышленностью по выпуску лекарственных средств, удовлетворяющих международным требованиям, в частности, по показателю "Микробиологическая чистота".

Цеж> работы состояла в изучении количественного и качественного состава микрофлоры, контаминирующей нестерильные мягкие лекарственные средства, а также установление возможности их деконта-минации. При этом были определены следующие задачи:

- изучить уровень контаминации отечественных мягких лекарственных средств промышленного производства, выпущенных в 1990-1992 годах;

- провести микробиологическую экспертизу выделенных микроорганизмов- контамииантов,

- разработать схемы и методические приемы определения микробной загрязненности мазей с использованием метода мембранной фильтрации

- изучить стабильность уровня микробной загрязненности и жизнеспособность микроорганизмов при хранении искусственно контаминирован-ных образцов мазевых основ и их компонентов, используя при этом метод математического планирования эксперимента;

- установить возможность переживания микроорганизмов в естественно контаминированных препаратах, выдерживаемых при различных температурных режимах с целью их деконтаминации;

- исследовать влияние различных доз гамма-облучения на уровень микробной загрязненности с целью выбора оптимальной дозы для деконтаминации;

- провести изучение влияния радиационной деконтаминации на некоторые физико-химические и фармакологические показатели облученных мягких лекарственных средств.

Научная наивна. На основе проведенных исследований в части случаев установлен высокий уровень контаминации нестерильных мягких лекарственных средств, выпущенных отечественной промышленностью в 1990-1992 годах. Наличие антимикробных веществ в препаратах не всегда обеспечивало требуемую микробиологическую чистоту (из 17 наименований препаратов, уровень контаминации которых не удовлетворял требованиям ГФ XI, 8 обладали различной степенью антимикробного действия). Наиболее загрязненными из мягких лекарственных форм оказались линименты . Кроме того, высоких уровень микробной загрязненности был выявлен у препаратов, содержащих наф-таланекую нефть : помимо высокой степени контаминации непатогенными микроорганизмами, некоторая часть исследованных образцов содержала патогенные бактерии.

Определен видовой состав выделенных микроорганизмов-контами-нантов и их способность к длительному переживанию в мягких лекарственных формах при выдерживании в различных температурных режимах. Результаты свидетельствуют о том, что в большинстве случаев при выдерживании контаминированных аэробной споровой микрофлорой препаратов при комнатной и повышенной температуре, деконтаминация или не наблюдается, или она имеет место только к окончанию срока годности. Однако при выдерживании в условиях пониженной температуры линимента нафтальгина, контаминированного синегнойной палочкой в большом количестве,происходит его деконтаминация в течение двух недель. Установлено, что патогенные микроорганизмы, выделенные из мягких лекарственных форм препаратов, в большинстве случаев устойчивее к действующему началу по сравнению с чувствительностью к нему идентичных музейных штаммов.

Показана перспективность применения метода математического планирования эксперимента для изучения выживаемости патогенных микроорганизмов в мазевых основах и их компонентах в случаях искусственного контаминирования , с целью выяснения их жизнеспособности в названных средах при различных условиях хранения. Установлено бактерицидное действие ШО основы и Ма-КМЦ в отношении отдельных тест-микроорганизмов.

Обнаружено,что при искусственной контаминации мазевых основ и их компонентов кишечной, синегнойной палочками , стафилококком и грибами, в большинстве случаев в процессе хранения происходит де-контаминация .Однако при загрязнении лекарственных средств, сырья и вспомогательных материалов споровой культурой,это не наблюдается, необходимо применять специальные методы деконтаминации, в частности, радиационную обработку.

При изучении эффективности радиационной обработки естественно контаминированных ШЮ, установлены оптимальные "пастеризующие" дозы облучения, позволяющие снизить уровень микробной загрязненности препаратов до пределов, соответствующих требованиям ГФ XI. В соответствии с полученными результатами , с нашим участием составлены и утверждены "Методические рекомендации по использованию ионизирующих излучений для снижения микробной загрязненности лекарственных средств, лекарственного сырья и вспомогательных материалов" (1991г.).

При изучении воздействия различных доз облучения на некоторые физико-химические и фармакологические показатели отдельных облученных препаратов показано, что доза 5 кГр не приводила к изменению свойств исследуемых препаратов;воздействие более высоких вызывало снижение уровня снижение уровня содержания действующих начал в линименте нафтальгина и мази "Диоксиколь".

Указанные выше положения диссертации являются основными и выносятся на защиту.

Практическое значите. В соответствии с полученными результатами по радиацинной деконтаминации мягких лекарственных средств составлены и утверждены МЗ РФ "Методические рекомендации по использованию ионизирующих излуений для снижения микробной загрязненности лекарственных средств, лекарственного сырья и вспомогательных материалов" (1991).

Разработаны схемы и методические приемы определения микробной загрязненности с использованием мембранной фильтрации мазей "Лево-син", "Левомеколь", "Диоксиколь" и мази мафенида ацетата 10%, предназначенные для включения в частные фармакопейные статьи.

- 11

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава I

МЯГКИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ, ИХ СОСТАВ, РАЗНООБРАЗИЕ

Мягкие лекарственные средства (ШЮ)-мази, линименты, суппозитории, пасты и др. являются сложной лекарственной формой и состоят из комплекса лекарственных и вспомогательных веществ (действующего начала и основы). При этом сложное взаимодействие между медикаментозной частью мази и ее основой заставляет рассматривать мазевую основу не как инертный носитель лекарственных веществ, а как важное средство для обеспечения максимального терапевтического действия входящих в состав мази лекарственных веществ. Мазевые основы оказывают большое воздействие на стабильность лекарственных веществ, их антимикробную активность,выживаемость в МЛФ микроорганизмов, контаминировавших данные препараты С8,21,34,36,43,843.

Рассматривая свойства носителей лекарственных препаратов в мазях с точки зрения их способности взаимодействовать с водой , все основы можно разделить на гидрофобные, гидрофильные и эмульсионные [2,21].

К группе гидрофобных мазевых основ относятся: 1) липофильные, 2) углеводородные, 3) силиконсодержащие, 4) полиэтиленовые и полипропиленовые гели, 5)абсорбционные гидрофобные.

Липофильными являются жиры и воски. Чаще всего из мягких жиров применяются свиной жир и некоторые гидрогенизированные жиры, из плотных жиров - говяжий жир, из жидких жиров - некоторые растительные масла. Из восков в мазевых основах находят применение ланолин, спермацет, пчелиный воск.

В качестве углеводородных основ применяются или входят в состав таковых следующие вещества этой группы: вазелин, петролатум, парафин, церезин, вазелиновое масло, нафталанская нефть [4,41,773. Они характеризуются высокой стабильностью в процессе хранения и химической индифферентностью.

Силиконовые основы, представляющие из себя высокомолекулярные крёМНИЙвргшшчесте соединения, являются сравнительно молодой группой основ. Некоторые из продуктов полимеризации окиси кремния, в частности, полиэтилоксановые жидкости, легко сплавляются с вазелином, церезином, воском и т. д., образуя стабильные мазевые основы. Силиконовые основы обладают высокой стабильностью в процессе хранения и химической стойкостью [2,213.

Гидрофильные мазевые основы по своей физико-химической структуре представляют собой студни высокомолекулярных соединений или эмульсионные составы прямого типа (масло в воде), бывают следующих видов: 1) растворы и гели полисахаридов, 2) полиэтиленгликоли, 3) растворы олигоэфиров, 4) фитостериновые , 5) гели глинистых минералов, б) растворы и гели белков, 7) абсорбционные гидрофильные .

К гидрофильным мазевым основам относятся основы с эфирами целлюлозы (метилцеллюдозой и натрий-карбоксиметилцеллюлозой), по-лиэтиленоксидные , крахмально-глицериновые, трагаканто-глицериновые, фитостериновые основы, а также основы из природных глинистых минералов (монтмориллонит, галлуазит,коалинит и др.), набухающие в воде с образованием гелей. Мази на гидрофильных основах более других подвержены микробной порче [8,78,843.

Эмульсионные основы состоят из двух фаз - гидрофильной и гидрофобной, нерастворимых друг в друге, но распределенных по типу эмульсий. Эти основы характеризуются наличием трех компонентов: гидрофильной фазы (вода), гидрофобной (жиры, углеводороды, силиконы и др.) и эмульгатора. Важной составной частью данных основ являются эмульгаторы С 8]. Наиболее известной эмульсионной основой является водный ланолин.

В качестве основ для суппозиториев используется обширная группа веществ природного и синтетического происхождения. В современной фармацевтической промышленности насчитывается более ста различных основ для суппозиториев. В настоящее время в абсолютном большинстве случаев в промышленности и в аптеках используются нерастворимые в воде основы, а именно жиры и продукты их переработки. Наиболее известными основами этой группы являются масло какао, основы типа витепсол, массупол, монолен, эетаринум, сало Илиппе, гидрогенизированные масла - хлопковое, арахисное и др. Из водорастворимых основ наиболее распостраненными являются желатино-глицериновые массы и полиэтиленоксиды.

При изготовлении мягких лекарственных средств применяются вспомогательные вещества самой различной химической природы и раз личного агрегатного состояния - от жидкого до твердого : поверхностно-активные вещества, эмульгаторы, консерванты, стабилизаторы, корригирующие вещества и др. [2,5,783.

Наиболее часто применяются при изготовлении мягких лекарственных форм следующие эмульгаторы: высокомолекулярные алифатические спирты и их производные (натрия лаурилсульфат, эмульсионные воски), циклические спирты и их производные (холестерин, ланолин), эфиры многоатомных спиртов (производные глицерина и полиглицерина, производные сорбитана и высших жирных кислот, спены, твины, пентол, жиросахара ) и др. Применяются консерванты: различные спирты (этиловый, бензиловый, фенилэтиловый, хлорбутанолгидрат и др), фенолы (собственно фенол, трихлоркрезол), кислоты С бензойная кислота и ее натриевая соль, сорбиновая кислота и ее производные), сложные эфиры параоксибензойной кислоты (метиловый - нипаген, пропиловый -нипазол, бутиловый - бутабен ), соли четвертичных аммониевых соединений (бензалкония хлорид, бензетония хлорид и др.). соли тяжелых металлов, обладающих олигодинамическим эффектом, а также борная кислота, натрия тетраборат, перекись водорода и др. [25,27,34, 52].

Многими исследованиями доказано, что мягкие лекарственные формы имеют ряд преимуществ перед пероральным и даже инъекционным введением лекарственных средств в организм. Безболезненность и простота применения, поступление большей части активной субстанции непосредственно в большой круг кровообращения дает возможность добиваться высокой терапевтической эффективности [2,21,84].

Ректальный способ введения лекарственных веществ приобретает все более широкое распостранение в терапии многих заболеваний. За рубежом наблюдается постоянный рост номенклатуры суппозиториев [30,48]. Использование суппозиториев для детей дает возможность назначать препараты, обладающие неприятным вкусом, оказывающие раздражающее действие на желудочно-кишечный тракт, снижает степень и частоту аллергизирующего действия препарата, позволяет избежать психических травм ребенка ( в отличие от инъекционных препаратов ) и заражения различными инфекционными заболеваниями ( гепатитом, СПИДом и др. ) [48].

В настоящее время отечественная промышленность выпускает мягкие лекарственные средства в ограниченном количестве и ассортименте. Промышленностью не производятся мягкие лекарственные средства по важнейшим фармакотерапевтическим группам: седативной,противосу-дорожной,психотропной,аналептической и др. Не используются в производстве мягких лекарственных форм основы, имеющие радиопротекторные свойства. Несмотря на значительный рост числа больных злокачественными заболеваниями кожи, промышленностью выпускается всего 3 наименования специфических мягких лекарственных средств, предназначенных для их лечения.

Активизация спроса и отставание от него промышленного производства обусловили рост количества наименований и объёма мягких лекарственных форм, по которым не удовлетворяется представленная в заказах потребность населения ПОЛ: в 1990 году из 187 поступивших в аптечную сеть заявок на препараты данной группы, заказ был удовлетворен только до 50% на 39 наименований, на 23 наименования - от 50 до 80%.

Является очевидным,что за последующие 1991-1992 гг. в связи с общим ухудшением экономической обстановки в стране,отставание промышленного производства от спроса на данную продукцию стало еще более явным.

Однако и то ограниченное количество наименований мягких лекарственных средств, выпускаемых отечественной промышленностью в настоящее время, в ряде случаев не удовлетворяет требованиям, предъявляемым к качеству препаратов по показателю "Микробиологическая чистота".

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Бухарцева, Е. В.

- 125 -ВЫВОДЫ

1. При определении микробной загрязненности мягких лекарственных средств,выпущенных отечественной промышленностью в 1990-1992 гг., установлен высокий уровень контаминации: 36,1 % наименований исследованных препаратов не удовлетворяли требованиям ГФ XI по показателю "Микробиологическая чистота".

2. Выживаемость микроорганизмов в мазевых основах и их компонентах зависит от их состава , вида контаминантов и температуры хранения, а) Ланолин обладает некоторым антимикробным действием в отношении стафилококка,синегнойной палочки и плесневых грибов; с увеличением температуры до 35°С это действие усиливается. При температуре 60 С наблюдается быстрое отмирание в вазелине синегнойной и кишечной палочки, б) Применяемая в качестве мазевой основы смесь ГШ 1500 и 400, а также вспомогательное сырье - порошок Иа-КМЦ обладают бактерицидным действием на патогенные бактерии и грибы. Следовательно, возможна деконтаминация названных основ и их компонентов при хранении, в) Благоприятной для переживания микроорганизмов из исследованных основ является гидрофильная - 3,5% раствор Ыа-КМЦ; изменение температурного режима хранения при этом существенной роли не играет.

3. Установленный факт длительного сохранения жизнеспособности аэробных споровых бактерий в естественно и искусственно контамини-рованных препаратах , мазевых основах и их компонентах,свидетельствует о невозможности их деконтаминации при хранении, и о необходимости применения в этих случаях других методов,в частности,радиационную обработку.

- 1£6

4. Определены оптимальные "пастеризующие" дозы облучения, выбор которых зависит от начального уровня контаминации препаратов. С учетом этих данных составлены и утверждены "Методические рекомендации по использованию ионизирующих излучений для снижения микробной загрязненности лекарственных средств, лекарственного сырья и вспомогательных материалов".

5. Установлена нестабильность препаратов "ДИоксиколь" и линимента нафтальгина при их радиационной деконтаминации дозами более 5 кГр. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости изучения основных свойств каждого наименования МЛС, облученных дозами свыше 5 кГр.

6. При составлении раздела НТД "Микробиологическая чистота" на мягкие лекарственные средства, обладающие антимикробным действием и многокомпонентным составом , недостаточна ссылка на ГФ XI без детального описания метода мембранной фильтрации применительно к каждому конкретному препарату.

7. По результатам исследований микробной загрязненности мазей "Левосин", "Левомеколь", "Диоксиколь" и мази мафенида ацетата 10%, разработаны схемы и методы испытания перечисленных препаратов с помощью метода мембранной фильтрации, предназначенные для включения в частные фармакопейные статьи.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бухарцева, Е. В., Москва

1. Абаев Ю. К., Капуцкий В. Е. , Адарченко А. А. , Собощук 0. Е /Антиби-отики и мед. биотехнология 1986. - т. 31. - N8 - С. 624-628.

2. Ажгихин И. С. Технология лекарств. -М. 1975. - С. 437.

3. Акатов А. К., Зуева В. С. Стафилококки. АМН СССР. М.: Медицина, 1983 -С. 256.

4. Алюшин М.Г. , Ли В. а / Апт. дело за рубежом, М. -1971. вып. 5 -С. 62-72.

5. Андреева 3. М. , Парашина Е А./Лаб. дело, 1991. - N7. - С. 50- 52.

6. Бабакина Г. С. , Березовская И. В., Дмитриева ЕВ. и др. / Хим.-фарм. журн. 1981. - N2. -С. 97-ЮЬ.

7. Барелко Е. В. , Тальрозе В. Л., Трофимов Е И. / I Всесоюзн. научно-техн. конф. по радиац. стерилизации мед. продукции / Тез. докл.1978. С. 6.

8. Башура Г. С. / Исследование в области применения основ и ПАВ в технологии производства готовых лекарственных форм / автореф. докт. дис. , Тбилиси, 1971.

9. Березовская И. В., Тальрозе Е Л., Трофимов Е И. / Хим. -фарм. журн. -1983. N4. - С. 443-450.

10. Боршцук В. А. / Исследования по совершенствованию обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений мягкими лекарственными формами / автореф. дис. канд. фарм. наук, Харьков, 1990.

11. Бочкарев В. В, Павлов Е. П. , Кивман Г. Я и др. /Хим. -фарм. журн.1979. N6. - С. 90.

12. Бочкарев В. В. , Павлов Е. П. , Кивман Г. Я и др. / Тезисы докл. на I Всесоюзн. научно-техн. конф. по радиац. стерилизации мед.- 128 продукции , Москва, -1978. С. 37.

13. Бочкарев В. В. , Павлов Е. Е , Хрущев В. Г. и др. / Хим. -фарм. аурн. 1978. -N2. - С. 145-149.

14. Бочкарева JL А. , Грицевская Е. В. , Гильмутдинов И. Г. и др. / Экспресс-информация, "Передовой опыт в хим.-фарм. промышл. 1979. - N1. - С. 14-17.

15. Брок Т. Мэмбранная фильтрация. М. - 1987. - С. 237.

16. Буряк R А., Данилова A. JL /Материалы Y Всероссийского съезда фармацевтов, Тез. докл. Ярославль. - 1987. - С. 202-203.

17. Бухарцева Е. В. , Кивман Г. Я. ,Щуб Т. А. / Хим.-фарм. журн. -1993. -N7. С. 56-58.

18. Володавец В. В. , Трухина Г. & , Смирнова М. К / Дезинф. и стери -лизация. материалы Всесоюзн. научн. конф. , Волгоград, -1983. - С. 24-25.

19. Володавец В. В. .Трухина Г. М. / Гигиена и санитария. 1986.- N10.-С. 22-25.

20. Государственная фармакопея СССР XI Издание. т. 2. -М.: Медицина. -1990. -С. 398.

21. Грецкий В. М. , Цагареишвили Г. В. Носители лекарственных веществ в мазях. Мецниереба, Тбилиси. - 1979.-С. 117.

22. Гудкова Е. И. , Красильников А. П. /Лаб. дело. -1991. -N1. -С. Ь9-61.

23. Гунар О. В. ,Каграманова К А. , Кивман Г. Я. , Щуб Т. А. / Микробная загрязненность лекарственного растительного сырья и подходы к ее нормированию: сб. научн. трудов "Проблемы качества лекарственных средств". М. -1991. - С. 115-117.

24. Гунар О. Е Микофлора нестерильных лекарственных средств, авто-реф. дис. канд. биол. наук, Москва, 1992.- 129

25. Денисова С. Б. , Кивман Г. Я , Крылов Ю. Ф. , Прохоров Б. С. / Хим.-фарм. журн. -1983. N12. - С. 1498-1501.

26. Денисова С. В. , Кивман Г. Я. , Прохоров Б. С. / Хим. -фарм. журн. -1981. -N5. -С. 116-120.

27. Денисова С. В., Крылов Ю. Ф. , Прохоров Б. С. /Хим. -фарм. журн. -1990. т. 24. - N8. - С. 69-76.

28. Дильбарханов Р. Д., Котова А. Л , Петрова К П. /Совр. проблемы фармации. Сб. ст. Алма-Ата. - 1989. - С. 157-158.

29. Добжинская М. Г. Микробиологический анализ в косметическом производстве, ВИНИТИ, Москва. 1977.-С. 27.

30. Драник Л. И., Козлова Е Г. , Замараева Е. Е. и др. / Состояние и перспективы создания новых готовых лек. средств и фотохимических препаратов. Тез. докл. Веесоюзн. научно-техн. конф., Харьков, 1990. С. 103.

31. Дубинский Р. А., Стрелков В. Е /Гигиена и санитария. 1981. -N2. - С. 76-77.

32. Егоров Е С. ,Пименова М. Е , Пискункова Н. Ф. и др. Биологические повреждения. М. , 1979.- С. 115.

33. Зуева Л. П. , Колосовская Е. Е , Танеева Е Ф. / Гигиена и санит. -1989. -N9.- С. 81-82.

34. Иванова Л А. Изучение антимикробной стабильности некоторых консервантов в мазевых основах. Дис. канд. фарм. наук. Москва. , 1969.

35. Иванова Л. А. / Фармация. 1971. -N2. - С. 57-59.

36. Иванова Л. А., Кондратьева Т. С. /Фармация. 1969. - N1. - С. 62-65.

37. Имшенецкий А. Л. , Мурзаков Б. Г. , Кузюрина Л А. , Якшина ЕМ./ Микробиология. 1984. - т. ЬЗ. , вып. 6. - С. 919-922.- 130

38. Каган А. Ю. , Жуковская С. А. , Моисеенко Л А., Синицин М. А. / Хим. -фарм. журн. 1990. - N3. - С. 61-65.

39. Каграманова К. А., Кивман Г. Я., Щуб Т. А. /Хим. -фарм. произволе -тво: обзорная инф. М. , ВНИИСЭНТИ Минмедпрома ССОР. - 1991. -Вып. 3. - С. 25.

40. Калина Г. П. и др. Обнаружение и идентификация Ps. aeruginosa в объектах окружающей среды (пищевых продуктах, воде и сточных жидкостях). Методич. рекомендации, М., 1984.

41. Кац М. Д. / Химическая промышленность. 1991.- N5.-С. 55 - 57.

42. Кашкин ЕЕ /Труды Ленинградского хим. фарм. института, 1947. -N1. С. 115-122.

43. Кивман Г. Я., Денисова С. В. /Хим.-фарм журн. 1979. - N3. -С. 103-111.

44. Кивман Г. Я., Крылов Ю. Ф., Каграманова К А., Щуб Т. А. / Хим.-фарм. журн. 1983. - N4. - С. 477-485.

45. Кивман Г. Я. , Снегирева Е С. , Яворская Е. С. /Хим. -фарм. журн. -1989.- N4.- С. 458-464.

46. Кобзарь А. И. , Скубко Т. П., Локсин Б. А. / Проблемы стандартиза -ции и контроля качества лекарственных средств . т.1. -1991. -М. - С. 78-79.

47. Коггл Дж. Биологические аспекты радиации. Москва, Энергоатомиз-дат, 1986, С. 49-52.

48. Козлова Е Г. , Долгая И. Е , Зубачева И. Я. и др. / Состояние и перспективы создания новых готовых лек. средств и фитохимич. препаратов. /Тез. докл. Всесоюзн. научно-технич. конф. , Харьков. , 1990. С. 106-107.

49. Кондратьев В. С. , Фиалкова М. А. и др. /Состояние и перспективы- 131 создания готовых лекарственных средств и фитохимических препаратов. / Тез. докл. Всесоюзн. научно-техн. конф. , Харьков, 1990., С. 79.

50. Кондратьева Т. С. Изучение микробной обсемененности таблетиро-ванных лекарственных препаратов. Дис. канд. фарм. наук, Москва, 1959.

51. Кондратьева Т.О. Технологические аспекты консервирования лекарственных препаратов. Актуальные вопросы изыскания и технологии лекарственных средств, М., 1982. 0. 32-34.

52. Кондратьева Т. С. Химические консерванты для лекарств. К , 1976.

53. Компендиум Медикаменторум. Берлин. 1975., вып. УП, разд. УШ, 3.0. 01-3. 0.03. ,1985. Вып. У1II, 26, 13.0.01.

54. Крылов Ю. Ф. , Кивман Г. Я. Биологический контроль лекарственных средств. М., 1985. -С. 144.

55. Крылов Ю. Ф., Прохоров Б. С. , Денисова С. В. /Основные направления работы по улучшению качества лек. средств. / Тез. докл. , Харьков, ч. 1, 1983. -С. 61-62.

56. Малюга О. А. / Совершенствование технологии хим. фарм. производств, поиск и создание новых лек. препаратов. / Тез. докл., Новокузнецк. 1986. -С. 137-138.

57. Морозов И. И. , Дергачева И. П. , Анисимова Е С. /Теоретические и прикладные аспекты радиац. биотехнологии. /Тез. докл. Киев. 1985. , ч. III, С. 32.

58. Молета Ю. С. , Тарасов В. В. Математические методы статистического анализа в биологии и медицине. М.: МГУ, 1981. - С. 179.

59. Неграш А. К. , Денисова С. В. и др. /Хим. -фарм. журн. 1985. - N6. -С. 754-756.- 132

60. Неграш А. К. , Перцев И. М. , Христенко Л. А. и др. / Хим. -фарм. журн. 1977. N5. - С. 107-110.

61. Осипян Л. Л., Григорян К. М. / Контаминация пищевых продуктов чужеродными веществами и микроорганизмами, Ереван, 1980, С. 30-31.

62. Отчет в ВНТВДентр, N гос. инвент. 01.83. 000170 "Изучение возможности переживания микроорганизмов в сырье для производства нестерильных лекарственных средств" . 1984. -С.9.

63. Отчет в ВНТИЦентр , N гос. регистрации 81 085 958 "Изучение возможности переживания микроорганизмов в нестерильных лекарственных средствах". 1983. -С. 11.

64. Павилонис А. П. и др., /Актуальные вопросы разработки , изучения и производства лекарственных средств / Матер, конф. , Каунас, 1985, С. 81-83.

65. Павлов Е. IL , Бочкарев К В. , Хрущев В. Г. идр. / I Всесоюзн. на-учно-техн. конф. по радиац. стерилизации мед. продукции. / Тез. докл., Москва, 1978, С. 10-11.

66. Павлов Е. П. , Тушов Э. Г. , Самойленко И. И. и др. / Хим. -фарм. журн. 1992. - N2. - С. 76-78.

67. Павлов Е. IL , Тушов Э. Г. , Седов В. В. /Хим. -фарм. журн. 1982. -N2. - С. 222-224.

68. Павлов Е. IL , Тушов Э. Г. , Седов В. А. / Хим. -фарм. журн. 1985. -N10. С. 1249-1251.

69. Павлов Е. П., Щеглова С. Г., Кивман Г. Я /I Всесоюзн. научно-техн. конф. по радиационной стерилизации мед. продукции / Тез. докл. Москва, 1978, С. 24-25.

70. Перцев И. М. Биофармацевтическое обоснование составов и техноло- 133 гии мазей с антибактериальными и анестезирующими веществами. Автореф. дис. докт. фарм. наук. , Харьков, 1980.

71. Перцев К \L , Башура Г. С. , Пименов А. Ф. /Международный симпозиум по биофармации и фармакокинетике. / Тез. докл. , Смолянице, 1974.- С. 267.

72. Перцев И. М., Даценко Б. М., Гунько В. Г. / Фармация. 1990. -N5. - С. 73-76.

73. Пискункова R Ф. , Пименова М.Е / Гигиена и санитария. 1981, N6,- С. 55-57.

74. Подболотов КБ. Профилактика особо опасных инфекций. , Саратов, 1980, С. 69-70.

75. Почапинский В. И. ,Трофимов В. И. /Хим. -фарм. журн. 1992. - N9.-10. - т. 26, - С. 116-121.

76. Почапинский Е IL , Сторожев И. А., Эйде ль штейн С. С. и др. / Стерилизация антибиотиков, №, 1972. С. 127-132.

77. Пучкова ЕГ. Товарные нефтепродукты, их свойства и применение. М. , 1971. , С. 216-220.

78. Ряпосова О. И. Исследования в области использования метилцеллю-лозы в мазевых основах . Автореф. канд. фарм. наук, Ставрополь, 1972.

79. Сазыкин Ю. О., Чайковская С. М. , Кочаргин В. Б. и др. / Антибиотики и химиотерапия. 1991. - N10. - С. 933-936.

80. Сафаров С. А. , Трофимов R И. / Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств, IL, 1991, т.З, С.9-10.

81. Скубко Т. П. , Оболенцева Г. В. , Кобзарь А. Е и др. /Научно-техи. прогресс и оптимизация технологических процессов создания лекарств. / Тез. докл. , Львов, 1987, С. 242-243.- 1о4

82. Сомов Г. П. , Варвашевич Т. Н. /Журн. микробиол. эпидемолог. и имму-нобиолог. -1992. -N4. -С. 62.-66.

83. Тенцова А. И., Алюшин К Т. Полимеры в фармации, К , 1985» С. 17.

84. Тенцова А. И., Грецкий В. М. Современные аспекты исследования и производства мазей. М. , 1980, С. 96-141.

85. Тимаков В. Д. , Микробиология, М., Медицина, 1983,С. 358.

86. Трофимов В. И. / Хим.-фарм. журн. 1988. - N9. - С-1111-1121.

87. Трофимов В. А., Климова Т.П., Каневская К Д. и др./I Веесойзн. научно-техн. конф. по радиац. стерилизации мед. продукции / Тез. докл. 1978, С. 62-63.

88. Трофимов К И., Мунблит В. Я. / Передовой производственный опыт в мед. пром-ти, рекомендуемый для внедрения. ВНИЖЗЭНТИ Минмедпро-ма СССР. 1991. - Вып. 4. - С. 26-30.

89. Фойстель Г., Поллак Э. И. , Бергхольц М и др. Косметика. Косметические препараты и теоретические основы современной практической косметики . Киев. Выща школа, 1990.-С. 241.

90. Шарманов Т.Ш /Материалы У111 съезда микробиологов, элидемологов и паразитологов/ Тез. докл. , Алма-Ата, 1989, С. 154-160.

91. Шилова С. В., Никульшина К И., Пузакова С. М и др. / Состояние и перспективы создания новых готовых лекарственных средств и фи-тохимических препаратов / Тез. докл. , Харьков, 1990. -С. 64.9Й. Щяегель Г. Общая микробиология. М. , Мир, 1987. -С. 567.

92. Щуб Т. А. Антимикробная активность прополиса: вопросы стандартизации и контроля качества, дис. канд. биол. наук, Москва, 1982.

93. Щуб Т. А, Каграманова К А., Кивман Г. Я., Бухарцева Е. В. , Гунар О. В. , Николаенко Н. С. /Хим. -фарм. журн. 1991. - N12. - С. 115- 117.

94. Щеглова С. Г., Павлов Е. П., Седов В. В / Первая Всесоюзная конфе- 135 ренция по прикладной радиобиологии / Тез. докл. , Кишинев, 1981, С. 116.

95. Щедрина JLE. , Потемкина С. П. , ЭДухипа Т.Ю. / Фармация. 1991. -N5.-С. 78-81.

96. Ященко ЕВ. / Микробиол. журнал. 1988. - N2. - С. 49.

97. Adams М. R. , Норе С. F. А. / Amsterdam ets.: Elsevier, 1989. -P. 330.

98. Adair F. V. , Geftic S.I. / In. Abst. Ann. Mset. Amer. Soc. Microbiol. , Washington, 1976. P. 191.

99. Anastasio P. , Carazzone M. , Pongiluppi S. /Boll. chim. Farm. -1988.- Vol.127.- P. 245-248.

100. Antolik P., Hudec J. / Gsl. Farm. , 1966, T. 15. - S. 146-147.

101. Antolik P., Hudec J. / Gsl. Farm. , 1966, 41, - N4. -S. 245-247.

102. Armbrust R. F./Radiosterilization of Medical Products.-Vienna, 1975.- P. 379-382.

103. Asseptance, Control and Trade in Irradiated Food: Processing of an International Conferense on the Asseptarise, Control of and Trade in Irradiated Food. Vienna, 1989, - P. 155-166.

104. Barteczko J. , Stachnij J. / Farm, pol., 1969, -v. 25, P. 103-109.

105. Bean H. S. Ann. pharm franc. , 1967.- v. 25, - P. 265- 270.

106. Bourgeois Claude / Ind. AI im. et Agr. -1990. -107. -Nl-2. -P. 29-31.

107. Brinston R. M. / Int. J. Radiat. Appl. Instrum. Pt. C. Radiat. Phys. Chem. 1990. - Vol. 35. -N 1-3. - P. 390-392.

108. Browman F. V. , Holdowsky S. / J. Am. pharm. Ass. sei., Ed., 1959. , v. 48. P. 95-96.

109. Chang V. V. / Dev. Ind. Microbiol, vol. 29. Simp. 44-th Gen. Meet. Soc.- 136 1.d. Microbiol. .Baltimore,, Aug. 10-14,1987. Amsterdam, 1988.- P. 297-304.

110. Czerniawski E. ,, Stolarczyk L. / Acta microbiol. pol. Ser. b.- v. 6. P. 177.

111. Diehl K.-H. /Seeifen-Ole-Fette-Wachse. 1985. - Bd. III. -N8. - S. 222-227.

112. Eperjessy E. , Fodory T. H. / Pharmazie. 1966. - Bd. 21, -S. 430- 431.

113. Failla M. L. , Benedict C. D. , Weinberg E. D. / J. Microbiol, and Serol. 1975. - v. 41. -N3. - P. 319-328.

114. Glubrecht H. In.: Food Preservation by Irradiation, Vienna, - 1978. - v. 1 . - P. 3-13.

115. Gopal N. G. S, Patel K.M., Gharma G. / Radiation Phys. Chem. / 1988. , v.32. - N4. - P. 619-622.

116. Goven R. 0. , Steiger B. / J Soc. cosmet. Chem. 1976. - v. 27.- N10. P. 467-481.

117. Grigo J. Zbl. Bakt. Hyg. - 1976.- J. Orig. B. 162.-P. 233-287.

118. Groning R. , Lanske U. / Sei. pharm. (Wien.) 1986.- Bd. 54.-N3. - P. 184.

119. Hammer C.T. .Wills E. D. / Int. J. Radiat. Biol. , 1979. v. 35.- P. 323-332.

120. Heines J. R. , Alexander M. / Appl. Microbiol. 1975. - v. 29. -P. 621-625.

121. Hill B. M. /Bull. Int. Dairy Fed. 1990. -N256. - P. 9-12.

122. Holmes B. , Wi 1 leox W. R. , Lapage S. P. / J. CI in. Pathol. 1978. -Vol.31.- P. 22 -30.

123. Jastalska D. / Farnhjl. , 1974. v. 30. - P. 343-347.- 13?

124. Jermstad A. , Baerheim A. / Pharm. Acta He 1 v. 1947. - v. 22. -S. 608-612.

125. Klosa J. / Seife-Öle-Fette-Washe . 1952. - Bd. 78. - S. 31.

126. Krethmar H., Biesoid C. , Kadner et al. / Ibid., 1977. Bd. 32.- S. 781-787.

127. Ley F.J. / In. : Manual on Radiation Sterilization of Medical and Biological Materials. Vienna. -1973. - P. 37.

128. Ludva J. / Csl. Farm , 1967. V. 16. - P. 214-216.

129. Nakashima A. K. , Highsmith A. K. , Martone V. J. /J. Clin. Microb.- 1987. V. 25. - N6. - P. 1019-1021.

130. Melichar M , Podstatova H. , Pohorny J. /Pharemazie. 1980. -Bd. 35. - S. 547-549.

131. Modrzejewski F. , Gogo 1 evska-Mikucha B. / Farm. Polska, 1963.1. N8. S. 149-151.

132. MohzT. , Kovaes M. / Gyogyszereszet . 1972. -v. 16. -P. 138-141.

133. Noble V. C. , Savin J. A. /Lancet. -1966. v. 1. - N7433. -P. 347- 349.

134. Nordheim W. , Braniger S. , Kirch B. et al. Zur Strahlen behand1und von Arzneimitteln Biochemicalien und Impgstoffen. -Mitteilungen. N94. - Leipzig. - Dec. 1984.

135. Patterson M. F. /The potential for food irradiation / Left. Appl. Microbiol. 1990. - vll. - N2. - P. 55-61.

136. Pharmacopoea Bohemoslovaca. 1987. Ed. IX. - v. 1. -4.8.

137. Rothemann /Chemishe konscrvioriingr.rcittcc . Seife - Ole -Fette- Washse. - 1960. - v. 86. - N20. - S. 605-606.

138. Sakazaki R. /Media Circle. 1975.- Vol.20. - N8.- P. 227-235.

139. Shubert J. / Jn: food preservation by irradiation. , Vienna.1978. v.2. - P. 3-29.

140. Szepietovska B. / Acta pol. pharm. 1971. - v. 28. P. 101-105.

141. Tensmeyer L. G. et al. / J. Parent. Sei. Technol. 1981. -v. 35. - N3. - P. 93-97.

142. The Pharmacopoea of the United States of America.- XXI Ed.-Washington, 1985. S. 1151.

143. The USP XYTII Bethesda, 1970.- P. 846-851.

144. Tronnier Hagen /Siefen-Öle-Fette-Washe.-1987.-Bd. 113, N8.-S. 279 -286.

145. Truskey C. A. , Cabler R. , Di Leo A. , Manter T. / J. Parent. Sei. Technol. 1987. - v. 41. - N6. - P. 180.

146. Tyneska Z. , Chodnikiewicz G. / Farm. pol. 1974. - v. 30. -P. 337-341.

147. United States Pharmacopoeia. 20- th. ed. - Rockvill. - 1980. - P. 863.

148. Van Door ne H. .Bosch E.H. et al. / Microbiological and phytochemical studies.- Pharm. Wbl. ,-1988.-10.-N5. P. 217-220.

149. Wallhauzer K.H. /Pharm. Industr. 1977. - Bd. 39. - P. 491-497.

150. Wholesomeness of Irradiation Food (Wld. Hlth. Org. techn. Rep. Ser. N659) Geneva, 1981.

151. WhyteW. , Bailey P. V., Tinkler Z. I. et al. / J. Parent. Drug Sei Technol. 1982. - v. 36. - N3. - P. 102.

152. WHO GMP Guide, Moscow, 1991.

153. Wosniak W. / Farm. pol. 1970. -v. 26. - P. 523-537.

154. Wosniak W. , Bo jar ska J. / Jbid. S. 93-100.

155. Wosniak-Parnovska W. , Werakso B. / Asta pol. pharm. 1974.v. 31. P. 819-823.

156. Wozniak-Parnovska V. , Verakso В. / Acta. pol. pharm. 1976. - v. 33. - P. 259-263.

157. Wallhauzer К. H. / Parfum, u. Kosmet. , 1972. -Bd. 53. -S. 305-320.

158. Wallhauzer К. H. / Jbid. 1975. - Bd. 101. - S. 537-559,585.588.

159. Ziolkowsky B. /Seifen-Ole-Fetten-Washe. 1986.- Bd. 112, N10.-S. 355-364.