Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Продуцент ингибитора А-глюкозидаз, стабилизация его ингибиторной активности и изучение условий биосинтеза

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Колодязная, Вера Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Углеводный обмен и его патология.

1.2. Классификация ингибиторов ферментов углеводного обмена по происхождению.

1.3. Продуценты ингибиторов а-глюкозидаз.

1.4. Ингибитор а-глюкозидаз из актиномицетов группы актиноплан -акарбоза.

1.5. Условия культивирования продуцентов ингибиторов а-глюкозидаз.

1.6. Ингибитор а-глюкозидаз из Streptomyces sp. шт. 1328-Д.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава II. Материалы и методы исследования.

Глава III. Поиск продуцентов ингибиторов а-глюкозидаз среди актиномицетов.

3.1. Выделение актиноплан из почвенных образцов селективными методами.

3.2. Характеристика активного штамма 839 — продуцента ингибитора а-глюкозидаз.

Глава IV. Посевной материал Streptomyces sp. и влияние его свойств на образование ингибитора а-глюкозидаз.

4.1. Естественная изменчивость продуцента ингибитора а-глюкозидаз.

4.2. Изучение условий выращивания посевного материала продуцента ингибитора а-глюкозидаз.

4.2.1. Влияние источника углеродного питания в составе посевной среды на биосинтез ингибитора а-глюкозидаз.

4.2.2. Оптимизация состава посевной питательной среды.

4.2.3. Влияние возраста и количества посевного материала, передаваемого на стадию ферментации, на синтез ингибитора а-глюкозидаз.

4.3. Стабилизация посевного материала продуцента ингибитора а-глюкозидаз.

4.3.1. Влияние последовательных пересевов культуры Streptomyces sp. на ингибиторообразование.

4.3.2. Изучение хранения посевного материала продуцента ингибитора а-глюкозидаз при низких температурах.

Глава V. Исследование условий биосинтеза ингибитора а-глюкозидаз.

5.1. Влияние источников азотного питания на биосинтез ингибитора а-глюкозидаз.

5.2. Влияние источников углеродного питания на биосинтез ингибитора а-глюкозидаз.

5.3. Влияние минеральных компонентов на биосинтез ингибитора а-глюкозидаз.

5.4. Изменение биохимических показателей культуральной жидкости в процессе развития продуцента ингибитора а-глюкозидаз.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Продуцент ингибитора А-глюкозидаз, стабилизация его ингибиторной активности и изучение условий биосинтеза"

Сахарный диабет стал одной из серьезнейших проблем нашего времени. По данным ВОЗ сахарным диабетом страдают около 120 млн. человек, а в 2025 году их число превысит 250 млн. человек. Основная задача при лечении инсулиннезависимого диабета - это нормализация углеводного обмена.

Углеводы поступают в организм человека в основном в виде крахмала и сахарозы. Под действием комплекса амилаз организма крахмал и сахароза гидролизуются до конечных продуктов - глюкозы и фруктозы. Нежелательные последствия потребления углеводов можно ослабить или избежать путем ограничения их потребления или путем замедления усвоения углеводов пищи при помощи ингибиторов а-глюкозидаз.

Ингибиторы а-глюкозидаз выделены из растительного сырья, а также могут быть получены путем химического синтеза. Однако особое внимание исследователей в качестве источников таких ингибиторов привлекают микроорганизмы. Обнаружены продуценты ингибиторов а-глюкозидаз среди бактерий, грибов, стрептомицетов, но чаще всего активные продуценты ингибиторов встречаются среди актиномицетов из группы актиноплан.

Эта группа актиномицетов еще недостаточно изучена в качестве «потенциальных» продуцентов различных БАВ в связи со сложностью их выделения из природных субстратов, замедленным циклом роста, особой требовательностью к условиям выращивания и крайней нестабильностью, хотя именно среди них обнаружен продуцент нового антидиабетического средства — ингибитор а-глюкозидаз акарбоза.

Проблема создания новых отечественных лекарственных препаратов на основе ингибиторов а-глюкозидаз, образуемых микроорганизмами, является актуальной. В связи с этим уделяется особое внимание разработке новых методических подходов для разностороннего изучения всех аспектов микробиологического синтеза веществ этого класса от селективного выделения микроорганизмов из почв до способа их культивирования и стабилизации биосинтетической активности, обратив особое внимание на актиномицеты из группы актиноплан.

Исследование выполнено в рамках Федеральной программы «Сахарный диабет» на 1997-2005 г.г.

Цель и задачи исследования.

Скрининг продуцентов ингибиторов а-глюкозидаз среди почвенных актиномицетов, особенно среди группы актиноплан, разработка способа стабилизации ингибиторной активности продуцента и условий его культивирования, способствующих максимальному синтезу целевого продукта.

В соответствии с целью исследования в работе были поставлены следующие задачи:

- выделить из почвенных образцов продуцент ингибитора а-глюкозидаз, используя селективные методы скрининга, характерные для актиномицетов группы актиноплан;

- провести первичную идентификацию выделенного актиномицета;

- изучить естественную изменчивость нового продуцента ингибитора а-глюкозидаз и отобрать активный штамм по признаку ингибиторообразования;

- стабилизировать ингибиторообразование у продуцента ингибитора а-глюкозидаз путем оптимизации условий выращивания и хранения посевного материала;

- исследовать условия культивирования продуцента ингибитора а-глюкозидаз, способствующие максимальному накоплению ингибитора в культуральной жидкости;

- выявить зависимость биосинтеза ингибитора а-глюкозидаз от компонентного состава и биохимических характеристик питательной среды в процессе культивирования продуцента.

Научная новизна исследования.

Выделен из почвенных образцов активный продуцент ингибитора а-глюкозидаз, который рекомендован для разработки технологии отечественного антидиабетического препарата, названного гипоглюкином.

Установлена таксономическая принадлежность культуры. По совокупности признаков она отнесена к роду Streptomyces и является новым продуцентом ингибитора а-глюкозидаз.

Предложено контролировать степень готовности вегетативного посевного материала для передачи на стадию ферментации по уровню его дегидрогеназной активности.

Установлено, что замораживание при -20°С вегетативного мицелия с криопротектором сохраняет ингибиторную активность культуры в течение одного года.

Впервые детально исследовано влияние углеводов в составе питательной среды на синтез ингибитора а-глюкозидаз. Показано, что только растворимый крахмал положительно влияет на образование ингибитора. Установлено, что собственные амилазы продуцента являются а-амилазами и расщепляют крахмал питательной среды на декстрины, мальтоолигосахариды, мальтозу и следы глюкозы. Такие продукты расщепления крахмала являются оптимальными как для роста культуры, так и для синтеза ингибитора.

Практическая значимость работы.

Среди актиномицетов, изолированных из почв различными селективными методами, отобран штамм 839, устойчивый к действию протеаз и обладающий высокой ингибиторной активностью, равной 2000±100 ИЕ/мл, достаточной для выделения ингибитора.

Методом ступенчатого отбора выделен вариант К-20 продуцента ингибитора а-глюкозидаз, превышающий по уровню ингибиторной активности исходный шт.839 на 15%.

Оптимизирован состав посевной среды для выращивания продуцента с одновременной заменой в ее составе глюкозы на зеленую патоку.

Предложен метод стабилизации продуцента ингибитора а-глюкозидаз путем замораживания вегетативного мицелия при -20°С с добавлением в качестве криопротектора 25% раствора сахарозы.

Определено, что оптимальным источником углеводного питания в составе ферментационной среды является растворимый крахмал. Показана возможность его замены на гидролизаты более дешевого нерастворимого крахмала со степенью гидролиза амилосубтилином на 25-30%.

Оптимизация компонентного состава посевной и ферментационной сред и условий культивирования, а также отбор активного варианта продуцента из естественного рассева, позволили увеличить синтез ингибитора а-глюкозидаз до 3200±200 ИЕ/мл (на 60%).

Лабораторный регламент на производство гипоглюкина дополнен технологической схемой стадии биосинтеза с использованием активного штамма К-20 на оптимизированных посевной и ферментационных средах, обеспечивающих проведение стандартных ферментаций.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Новый продуцент ингибитора а-глюкозидаз Streptomyces species шт.

839.

2. Оптимизированные питательные среды для выращивания посевного материала и проведения процесса ферментации продуцента ингибитора а-глюкозидаз.

3. Сохранение ингибиторной активности продуцента с использованием криоконсервации при -20°С вегетативного мицелия в 25% растворе сахарозы.

4. Технологическая схема приготовления партий посевного материала из замороженной культуры и стадии культивирования продуцента ингибитора а-глюкозидаз с использованием селекционированного штамма К-20 и оптимизированных сред.

Апробация работы.

Результаты исследований обсуждены на заседании кафедр биотехнологии и микробиологии СПХФА, доложены на П-м и III-м Международном конгрессе по биотехнологии «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2004, 2005 г.г.), на IX и X Российском научном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002, 2004 г.г.), на научной конференции СПХФА «Подготовка кадров для фармацевтической промышленности» (Санкт-Петербург, 2005 г.).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Объем и структура работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 159 страницах машинописного текста, содержит 30 таблиц, 22 рисунка (из них 5 фотографий). Библиография включает 233 источника.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Колодязная, Вера Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. Выделен из почвенных образцов активный продуцент ингибитора а-глюкозидаз штамм 839, который рекомендован для разработки технологии отечественного антидиабетического препарата, названного гипоглюкином.

2. На основании морфолого-культуральных, физиологических и биохимических характеристик штамма 839 установлена его таксономическая принадлежность. Культура образует спорангии с подвижными спорами, характерные для актиноплан, но по биохимическим критериям (составу диагностических Сахаров и форме ДАПК) относится к I хемотипу, т. е. к роду Streptomyces. Streptomyces sp. шт.839 является новым продуцентом ингибитора а-глюкозидаз.

3. В результате естественной селекции выделен активный вариант продуцента ингибитора а-глюкозидаз Streptomyces sp. шт. К-20, превышающий уровень ингибиторной активности исходного шт.839 на 15%.

4.0птимизирован состав посевной среды для культуры Streptomyces sp. шт. К-20. Показано, что его выращивание на среде, где глюкоза заменена на зеленую патоку, обеспечивает повышение ингибиторной активности на 30% по сравнению с контролем.

5. Предложен метод стабилизации ингибиторной активности продуцента ингибитора а-глюкозидаз Streptomyces sp. шт. К-20 путем замораживания при -20°С вегетативного мицелия с добавлением криопротекторов. При использовании в качестве криопротектора 25% раствора сахарозы ингибиторная активность культуры сохраняется в течение 12 месяцев. Разработан способ приготовления стандартных и стабильных партий посевного материала продуцента из замороженной вегетативной культуры.

6. Подобраны оптимальные условия культивирования актиномицета Streptomyces sp. шт. К-20. Установлено, что определяющим компонентом ферментационной среды, обеспечивающим максимальный синтез ингибитора а-глюкозидаз, является растворимый крахмал в концентрации 2%. Показана возможность его замены на гидролизованный амилосубтилином на 25-30% нерастворимый крахмал, добавляемый в ферментационную среду в такой же концентрации.

7. Установлено, что в процессе ферментации продуцента ингибитора а-глюкозидаз Streptomyces sp. шт. К-20 собственные амилазы актиномицета проявляют свойства а-амилаз и расщепляют крахмал питательной среды на большое количество декстринов, мальтоолигосахариды, мальтозу и следовые количества глюкозы. Такой состав продуктов расщепления крахмала является оптимальным, поскольку эти сахара не только активно потребляются на рост клетки, но и, по-видимому, участвуют как структурные единицы в синтезе самого ингибитора а-глюкозидаз, являющегося псевдоолигосахаридом.

139

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Колодязная, Вера Анатольевна, Санкт-Петербург

1. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия: Учеб. для вузов. - М.: Дрофа, 2004. -640 с.

2. Березов Т.Т., Коровин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. -528 с.

3. Беркенгейм M.JI. Нарушения углеводного обмена, ст. №152, 13.04.2003, http://berk.rnsk.ru

4. European Diabetes Policy Group. A desktop guide to type 2 diabetes mellitus. //Diabet Med. 1999. - Vol. 16. - P. 716-730.

5. Ромашевский Б.В. Современные принципы лечения инсулин-независимого сахарного диабета. //Ремедиум. 2000. №4. - С. 13-15.

6. Якушина Т.В. Российское производство инсулина — веление времени. //Ремедиум.- 2001. №5. С. 46-47.

7. Dong-Sun Lee, Nam-Soon Kim, Sang-Han Lee. 2,2-Diphenyl-l-picrylhydrazyl hydrate, a stable free radical, is an a-glucosidase inhibitor. //Biol. Pharm. Bull. 2001. - Vol. 24(6). - P.727-728.

8. Балобалкин М.И. Диабетология. M.: Медицина, 2000. - 671 с.

9. Reaver GM. Role of resistance in human disease. //Diabetes. 1988. - Vol. 37(4).-P. 1595-1606.

10. Czhaszez Т., Janicki J.II Biochem. Z. 1933. - Bd 260. - S. 354-356.

11. Frommer W., Junge B. et.al. New enzyme inhibitors from microorganisms (author's transl). //Planta medica. 1979. - Vol.35, N3. - P.195-217.

12. Hanefeld M, Temelkova-Kurtschiev T. The posprandial state and the risk of atherosclerosis. Diabetic medicine, 1997. - Vol. 14 (3). - P. S6-S11.

13. Kneen E., Sandstedt R.M. An amylase inhibitor from certain cereals. //J. Amer. chem. Soc. 1943. - Vol. 65. - P. 1247-1256.

14. Kneen E., Sandstedt R.M. Distribution and general properties of an amylase inhibitor in cereals. //Arch. Biochem. 1946. - Vol.9. - P. 238-249.

15. Schmidt D., Puis W. //Dtsch. Offenlegungsschrift. 2003934,1,- 1971.

16. Shainkin R. and Birk Y. a-amylase inhibitor from wheat. Isolation and characterization. //Biochim. Biophys. Acta. 1970. - Vol. 221. - P. 502-513.

17. Silano V., Pocchiari F. and Kasarda D. Physical characterization of a-amylase inhibitor from wheat. //Biochim. et Biophys. Acta. 1973. - Vol. 317. - P. 139-148.

18. Yagisawa M., Kato K., Koba Y. and Ueda S. Production and properties of amylase inhibitor. //J. Ferment. Technol. 1972. - Vol. - P. 572-578.

19. Puis W., Keup H., Thomas G. et al. Glucosidase inhibitors. //Naturwissenschaften. 1977. - P. 536-537.

20. Evans M. et al. Promotion of growth hydrogen ion efflux by auxin in roots of maize pretreated with ethylene biosynthesis inhibitors. //Plant Physiol. 1982. -Vol. 70.-P. 186-188.

21. Powers J., Whitaker J. Protein structures of common bean alfa-amylase inhibitor. //J. Food. Biochem. 1977.- Vol. 1, P. 217-239.

22. Marchall J., Lauda C. Purification and properties of phaseolamin, an inhibitor of alfa-amylase, from the kidney bean, Phaseolus vulgaris. //J. boil. Chem. — 1975. -Vol. 250. P. 8030-8037.

23. Matsuda H., et. al. Antidiabetic principles of natural medicines. // Chem. Pharm. Bull. 1999. - Vol. 47(12). - P. 1725-1729.

24. Masayuki Yoshikawa at al. Absolute stereostructure of potent a-glucosidase inhibitor, salcinol, with unique thiosugar sulfonium sulfate inner salt structure from Salacia reticulate. //Bioorganic&Medical Chemistry. 2002. - Vol. 10(5). -P. 1547-1554.

25. Osamu Muraoka, Shao Ying, Kazuya Yoshikai, Yoshiharu Matsuura at al. Synthesis of a Nitrogen Analogue of Salacinol and its a-glucosidase inhibitory activity. //Chem. Pharm. Bull. -2001. Vol. 49(11). - P. 1503-1505.

26. Ghavami A., Johnston В., Jensen M. et al. Synthesis of nitrogen analogues of salacinol and their evaluation as glycosidase inhibitor. //J. Am Chem. Soc. -2001. Vol. 123 (26).-P. 6268-6271.

27. Salvucci M. Effect of the a-Glucosidase inhibitor, Bromoconduritol, on Carbon

28. Metabolism in the Silverleaf Whitefly, Bemisia Argentifolii. // Arch. Insect. Biochem.&PhysioL 2000. - Vol. 45(3). - P. 117-128.

29. Yoshikawa M. et. al. Kotalanol, a potent alpha-glucosidase inhibitor with thiosugar sulfonium sulfate structure, from antidiabetic ayurvedic medicine Salacia reticulata. // Chem. Pharm. Bull.- 1998. Vol. 46(8). - P. 1339-1340.

30. Hideyuki Matsuura, Chikako Asakawa et. al. a-Glucosidase inhibitor from the seeds of Balsam Pear (Momordica charantia) and the fruit bodies of Grifola frondosa. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2002. - Vol. 66(7). - P. 1576-1578.

31. Garcia-Moreno M., Diaz-Perez P., Ortiz Mellet C., Garcia Fernandez J. Synthensis and evaluation of isourea-tyre glycomimetics related to the indolizidine and trehazolin glycosidase inhibitor families. //J. Org. Chem. -2003. Vol. 68(23). -P. 8890-8901.

32. Kwon O.S., Park S.H., et. al. Cyclo(dehydroala-L-Leu), an a-glucosidase inhibitor from Penicillium sp. F70614.// J.Antibiot., Tokyo. 2000. - Vol.53(9). -P. 954-958.

33. Inhibitory effect of agueous extract from the gall of Rhus chinensis on alpha-glucosidase activity and postprandial blood glucose. //J. Ethnopharmacol. -2003. Vol. 85(2-3). - P. 283-287.

34. Поляк M.C., Рожанская Т.И., Яковлева Е.П. Регуляторы активности ферментов и их применение в медицине. М.: Медицина, 1989. - 126с.

35. Lee S., Gepts P., Whitaker J. Protein structures of common bean (Phaseolus vulgaris) alpha-amylase inhibitors. //J. Agric Food Chem. 2002. - Vol(22). -P. 6618-6627.

36. Dong-Sun Lee, Nam-Soon Kim, Sang-Han Lee. 2,2-Diphenyl-l-picrylhydrazyl hydrate, a stable free radical, is an a-glucosidase inhibitor. //Biol. Pharm. Bull.- 2001. Vol. 24(6). - P.727-728.

37. Sonei Sou, Hiroyasu Takahashi et. al. a-Glucosidase inhibitors with a 4,5,6,7-tetrachlorophthalimide skeleton pendanted with a cycloalkyl or dicarba-closo-dodecaborane group. // Chem. Pharm. Bull. 2001. - Vol. 49(6). - P. 791-793.

38. Черных В.П. Поиск пероральных гипогликемических препаратов (обзор литературы). //Хим. фарм. журнал. 1978, №8. - С. 13-20.

39. Umezawa H. Enzyme inhibitors of microbial, origin. Tokyo; Univ. press. — 1972.-212 p.

40. Umezawa H., Aoyagi Т., Morishima H. et al. Pepstatin, a new pepsin inhibitor produced by actinomycetes. // J. Antitibiot. 1970. - Vol. 23, №2. - P. 259262.

41. Umezawa H., Aoyagi Т., Suda H. et al. Bestatin, an inhibitor of aminopeptidase B, produced by actinomycetes. // J. Antitibiot.- 1976. Vol. 29, N31.-P. 97-99.

42. Безбородов A.M. Микробные метаболиты ингибиторы ферментов. - М.: Наука, 1986.-96 с.

43. Безбородов A.M. Белковые ингибиторы метаболизма нуклеиновых кислот, полисахаридов и фосфолипидов у микроорганизмов. //Успехи микробиологии. — М.: Наука, 1983, вып. 18. — С. 232-245.

44. Kakinuta A., Sugito Н. et al. Plasmostreptin, a protein proteinase inhibitor produced by Streptomyces antifibrinolyticus. I Isolation and characterization //J. Biol. Chem. 1978. - Vol. 253, № 5. - P. 1529-1537.

45. Passarge M., Fleck W. F. Enzym-inhibitoren aus Actinimycetes. II. Inhibitoren saurer Proteinasen //J. Basic. Microbiol. 1985. - Vol. 25, №6. - P. 401-407.

46. Passarge M., Fleck W. Proteinase inhibitors from Actinomycetales. I. Screening methods and screening efficiency. //Z. Allg. Mikrobiol. 1980. -Vol. 20, №9.-P. 587-590.

47. Torstensson N.T., Jonsson A.G. Protease inhibitors from Streptomyces violascens. I. Screening and identifications of the organism. // Arch. Mikrobiol. 1972. - Vol. 83, №1. - P.63-70.

48. Umezawa H., Aoyagi T. et al. Ebelactone, an inhibitor of esterase produced by Actinomyces // J. Antitibiot. 1980. - Vol. 33, №12. - P. 1594-1596.

49. Saito N. a-amylase inhibitor from fungus Cladosporium herbarum F-828 //J. Biol. Chem. 1982. - Vol. 257, №6. - P. 3120-3125.

50. Truscheit E., Frommer W. et.al. Chemic und Biochemic microbieler a-glucosidasen // Inhibitaren Anqeuwandte Chemic. 1981. - Vol. 93, №9. - P. 738-754.

51. Hartley R. Derivaters of Bacillus amyloliguefaciens ribonuclease isolates after limited digestion by carboxypeptidase Aand B. //Biochem. and Biophys. Res. Communs. 1970. - Vol. 40, №2. - P. 263-270.

52. Arai M., Sumida M., Nakatani S. et al. A novel P-amylase inhibitor. // Agr. and //Biol. Chem. 1983. - Vol. 47, №1. - P. 183-185.

53. Schmidt D., Frommer W., et. al. a-Glucosidase inhibitors.// Naturwissenschaften. 1977. - Vol. 64(10). - P. 535-536.

54. Schmidt D., Frommer W., Muller L. et.al. Glucosidase inhibitors from Bacilli. // Naturwissenschaften. 1979. - Vol. 66(11). - P. 584-585.

55. Ueda S., Koba Y. Some properties of amylase inhibitor produced by Streptomyces sp. N280. //Arg. and Biol., Chem. 1973. - Vol. 37. - P. 2025-2030.

56. Schindler P., Hartley В., Brenner S. Enzyme Inhibitors of Microbial Origin (and Discussion). //new Horizons in Industrial Microbiology. 1980. - Vol. 11. -P. 291-301.

57. Nakano H., Tajiri Т., Koba Y. and Ueda S. Sone Properties of Amylase Inhibitor Produced by Streptomyces sp. N280. //Agr. Biol. Chem. 1981. -Vol. 45, №5.-P. 1053-1060.

58. Murao S., Oouchi N., Goto A., Arai M. New proteinaceous L-amylase inhibitor from Streptomyces corchorussi. //Agr. Biol. Chem. 1983. - Vol. 47, №2.-P. 435-454.

59. Nakagawa A., Iwai Y., Hashimoto H. et al. Virantmycin, a new antiviral antibiotic produced by a strain of Streptomyces nitrosporeus No. AM-2722. //J. Antibiot (Tokyo). 1981.-Vol. 34(11).-P. 1408-1415.

60. Murao S., Goto A., Matsui, Ohyama. New Proteinous inhibitor (Haim) of animal a-amilase from Streptomyces griseosporius YM-25//Agric. Biol. Chem.-1980.-P. 1679-1681.

61. Vertesy L. and Tripier D. Isolation and structure elucidation of a-amylase inhibitor, AI-3688, from Streptomyces aureofaciens. //Federation of Europeas Biochemical Societies. 1985. - Vol. 5. - P. 187-190.

62. Heinz A. Die Sequenz des a-amylaseinhibitores Hoe-467 und Str.tendae 4158. // Physiol.Chem. 1981, Bd362. - S. 465-467.

63. Акулова Н.Ю., Селезнева А.А. Микробные ингибиторы а-глюкозидаз псевдосахаридной природы (обзор). // Приклад, биохим. и микробиол. -1995. т. 31, №4,-С. 371-380.

64. Yokose К., Ogawa К., Suzuki Y. et al. New a-amylase inhibitor, trestatin II. Structure determination of trestatins А, В and C. //J. Antibiot. 1983. - Vol. 36, №9.- P. 1166-1175.

65. Ohyama K., Murao S. Isolation of Amylase Inhibitor-producing Microorganism. //Agric. Biol. Chem.- 1977. P. 222-230.

66. Murao S., Ohyama K. Chemical structure of an Amylase inhibitor S-AI. //Agr. and Biol. Chem. 1979. - Vol. 43, № 3. - P. 679-681.

67. Vertesy, Laszlo, Eppenhaines W. Neuer a-Glucosidase inhibitor, Verwendung und Pharmazeutische Praparate; V.S.№ 0173950, Европа, приоритет 04.09.84.

68. Ueda S., Koba Y., Chaen H. Action of amylase inhibitor produced by Streptomyces sp. on some carbohydrate hydrolases and phosphorylases. //Carbohyd. Res. 1978. - Vol. 61. -P. 253-264.

69. Namiki S.,Kangouri k. et al. Studies on a-Glugosidase hydrolase inhibitor, adiposin taxonomic studies on the producing microorganism. //J. Antibiotics -1982. Vol. 35, № 96. - P. 1156-1159.

70. Itoh J., Omoto S., Shomura Т., Ogino H., Iwamatsu K., Inouye S., Hidaka H. Oligostatins, new antibiotics with amylase inhibitory activity. I. Production, isolation and characterization. //J. Antibiot (Tokyo). 1981. - Vol. 34(11). - P. 424-428.

71. Muller L., Junge В., Frommer W. et al. Acarbose (BAY g 5421) and homologous a-glucosidase inhibitors from Actinoplanace // Enzyme Inhibitors/ Ed. U. Brodbeck., Basel. 1980. - P. 109-121.

72. Creuizfeldt W. //International Symposium on Acarbose. Inst. — Amsterdam, 1982.-534 p.

73. Михайлец Г.А., Поляк M.C. Акарбоза. // Хим-фармац. жури. 1989, №1. -С. 123-125.

74. Селезнева А.А., Акулова Н.Ю. Ингибиторы а-глюкозидаз микробного происхождения. // Биол. науки. 1992, т. 2 , - С. 25-31.

75. Glick Z., Bray G. The a-glycosidase inhibitor acarbose stimulates food intake in rats eating a high carbohydrate diet. //Nutr. Behav. 1983. - Vol. 1, №1. -P. 15-20.

76. Glick Z., Bray G. Effect of acarbose on food intake in lean and obese rats. //Pharmacol. Biochem. Behav. 1983. - Vol. 19, №1. - P.71-78.

77. Folsch U., Lembcke В., Ebert R. Saccharosetoranz beim menschen unter einahme von acarbose und/oder metronidazol. //Verch. dtsch. ges inn. Med. -1982, 88 Kongr.-P. 815-818.

78. Дедов И.И., Демидова И.Ю. Бигуаниды в современной практике лечения сахарного диабета 2 типа. М.: Наука, 1999. - 42 с.

79. Puetter J. Shelies on the pharmacokinetics of acarbose in humans // Enzyme inhibitors // Ed. U. Brodbeck-Basel. 1980. - P.139-152.

80. UKPDS Group. Intensive blood-glucose control with sulphonylureas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with type 2 diabetes. //Lancet. 1998. - Vol. 352. - P. 837-53.

81. Puis W., Keup U. // Diabetologia. 1973. - Vol. 9, № 2. - P. 97-101.

82. Puis W., Keup U. //Recent Advances in Abesity Research / Ed. A. Howard -London. 1975. - P. 391-393.

83. Puis W., Keup U., Krause H. et. al. //Naturwissenschaften. 1977. -Bd 64. -S. 536-537.

84. Hideyuki Matsuura, Chikako Asakawa et. al. a-Glucosidase inhibitor from the seeds of Balsam Pear (Momordica charantia) and the fruit bodies of Grifola frondosa. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2002. - Vol. 66(7). - P. 1576-1578.

85. Masayuki Yoshikawa at al. Absolute stereostructure of potent a-glucosidase inhibitor, salcinol, with unique thiosugar sulfonium sulfate inner salt structure from Salacia reticulate. //Bioorganic&Medical Chemistry. 2002. - Vol. 10(5). -P. 1547-1554.

86. Kwon O.S., Park S.H., et. al. Cyclo(dehydroala-L-Leu), an a-glucosidase inhibitor from Penicillium sp. F70614./ J.Antibiot., Tokyo. 2000. - Vol.53(9). - P. 954-958.

87. Mustafa N., Thorn M., Sorensson F. Inhibition of bacterial a-glucosidases by castanospermine in pure cultures and activated sludge. // Ap. Micr. Biotech.-2002.-Vol. 59(1).-P. 68-71.

88. Sonei Sou, Hiroyasu Takahashi et. al. a-Glucosidase inhibitors with a 4,5,6,7-tetrachlorophthalimide skeleton pendanted with a cycloalkyl or dicarba-closo-dodecaborane group. // Chem. Pharm. Bull. 2001. - Vol. 49(6). - P. 791-793.

89. Yoshikawa M. et. al. Kotalanol, a potent alpha-glucosidase inhibitor with thiosugar sulfonium sulfate structure, from antidiabetic ayurvedic medicine

90. Salacia reticulata. // Chem. Pharm. Bull. 1998. - Vol. 46(8). - P. 1339-1340.

91. Glyset Cleared by FDA Provides Important, New Diabetes Treatment option. Doctor's Guide., http://www.pslgruop.com/ef3e.htm.

92. Sels J.P., Huijberts M.S., Wolffenbuttel B.H. Miglitol, a new alpha-glucosidase inhibitor. / Expert Opin Pharmacother. 1999. - Vol. 1(1). - P. 149-156.

93. Drug Information Online. Drugs.Com™, http://www.drugs.com/pdr/ MIGLITOL.html.

94. Безбородов A.M. Метаболиты внутриклеточного фонда микроорганизмов. М.: Наука, 1974. -75 с.

95. Murao S., Ohyama К. and Ogura S. Isolation of Amylase Inhibitor-producing Microorganism. //Agric. Biol. Chem. 1977. - Vol. 41, №6. - P. 919-924.

96. Варпаховская И.В. Потребности в препаратах против диабета растет. //Ремедиум. 2000. №9. - С. 74-80.

97. Акулова Н.Ю. Ингибиторы а-глюкозидаз из Streptomyces. Выделение и свойства: Автореф. дис. на соиск. учен. ст. канд. биол. наук: 03.00.04. — СПб.: СПХФИ, 1993. 20 с.

98. Селезнева А.А., Акулова Н.Ю. //Инженерная энзимология (Получение и применение биокатализаторов в народном хозяйстве и медицине).: Тез. докл. VII Всесоюз. симпозиума. М.: МГУ, 1991. - С.36.

99. Селезнева А.А., Акулова Н.Ю. //Ферменты микроорганизмов (нуклеазы) Тез. докл. IX межвузов, (межотраслевого) проекта. Казань: КГУ, 1991, -С. 12-14.

100. Акулова Н.Ю., Аверьянова Е.В. и др. //Приклад, биохим. и микробиология. М.: Наука, 1992, Т. 28, Вып. 3. - С. 375-379.

101. Шарова Н.Ю., Селезнева А.А. Новый ингибитор а-глюкозидаз из Streptomyces tomytes. //Приклад, биохим. и микробиология. 1999, Т. 35, №1. — С. 10-14.103. «Bayer AG» //Biotechnol. Bull. 1989. - Vol. 8, №9. - P. 7-9.

102. Brodbeck U. Enzyme inhibitor Florida. Baxe.: Verlag Chemie Weinheim. // Planta Medica. 1980. - 135 p.

103. Практикум по микробиологии//Под ред. И.С. Егорова. Уч. пособие.

104. М.: Изд. Моск. Ун-та, 1976. 307 с.

105. Гаузе Г.Ф. Пути изыскания новых антибиотиков. М.: Ан СССР, 1958. -172 с.

106. Couch J.N. Symposium on taxonomy. // Trans. N. Y. Acad. Sci. 1954. -Vol. 16.-P. 315.

107. Willoghby L. // Veroffentlichungen des Institutes fur Meeresforschung in Bremerhaven. 1968. - Vol. 3. - P. 19-23.

108. Willoghby L. A conidial Actinoplanes isolate from Blelham Tarn.//Nova Hegwiria. 1969. - Vol. 18. - P. 45- 51.

109. Pallerony N.J. A chemo tactic method for the isolation of Actinoplanaceae // Arch. Microbial. 1980. - Vol. 128. № 1. p. 53-55.

110. Дзявго JI.A.,ЯковлеваЕ.П. Экспресс-метод отбора продуцентов ингиги-торов панкреатической а-амилазы // Хим.-фарм. журнал. -1992, №9-10. С.80-84.

111. Brenner S., Home R. A negative straining method for high resolution electron microscopy of viruses. //Biochim. biophys. Acta. -1959. Vol. 34, №1,-P. - 103-110.

112. Бондарцев A.C. Шкала цветов. -М.-Л., 1954. 34 с.

113. Гаузе Г.Ф., Преображенская Т.П., Свешникова М.А. и др. Определитель актиномицетов. М.: Наука, 1983. - 248 с.

114. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: МГУ, 1980. - 278 с.

115. Глаголев А.Н. Таксис у бактерий // Успехи микробиологии. — 1983, Т. 18. — С. 163-192.

116. Lechevalier М.Р. Jgentification of aerobic actinomycetes of clinical importans // J. Lab. Clin. Med. 1968. - Vol. 71. - P. 934-944.

117. Lechevalier M.P., Lechevalier N. A. Composition of whole-cell hydrolisates a criterion in the classification of aerobic actinomycetes // The Actinomyces Jena International Symposium on Taxonomy. 1968. - P. 311-318.

118. Захарова И.Я., Косенко JT.B. Методы изучения микробных полисахаридов. Киев.: Наукова думка. - 1982. - С. 62.

119. Becter В., Lechevalier М.Р., Lechevalier N. A. Chemical composition of cell-wall preparations from strains of various formgenera of aerobic actinomycetes // Appl. Microbiol. 1965. - Vol. 13, №2. - P. 236-243.

120. Кузнецов В.Д. Гомологические ряды наследственной изменчивости актиномицетов // Антибиотики. 1973. Т. 17. №7. - С. 579-586.

121. Плохинский Н.А. Биометрия. Новосибирск: Наука, 1970. - 254 с.

122. Бирюков В.В. Планирование экспериментов при оптимизации сложных процессов по схемам ортогональных латинских прямоугольников // Хим.-фарм. журнал. 1968, Т. 2. Вып. 1. - С. 57-62.

123. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений. — М.: Колосс, 1965. — 255 с.

124. Асатиани B.C. Ферментные методы анализа. М.: Наука, 1969. - 740 с.

125. Грачева И.М. Окисление редуцирующих Сахаров в щелочном растворе окиси меди с последующим йодометрическим определением закиси меди / Общая технология микробиологических процессов. — М., 1971. — 78 с.

126. Рухлядева А.П., Полыгалина Г.В. Методы определения активности гидролитических ферментов. — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981.-288 с.

127. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов / И.М. Грачева, Ю.П. Грачев, М.С. Мосичев и др. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 240 с.

128. Алейников Т.Л., Рубцова Г.В. Биохимия. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. -М.: Высшая школа, 1988. 240 с.

129. Лосев В.В. Пути интенсификации процесса биосинтеза гентамицина: Автореф. дис. на соиск. учен, степени, канд. биолог, наук: 14.0031. -М.: ВНИИА, 1982.-20 с.

130. Досон Р., Элиот Д., Элиот У. Справочник биохимика. М.: Мир, 1991. -596 с.

131. Родионова И.И., Миронов В.А., Пензикова Г.А., Мальцев И.И. Исследование амилаз продуцентов биологически активных веществ. // Технология получения и механизм действия новых антибиотиков. Труды ВНИИА. М. Вып. 18, 1991. - 152 с.

132. Ашмарин И.П., Васильев Н.Н., Амбросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов. JL: ЛГУ, 1975. -78 с.

133. Максимов В.Н. Многофакторный эксперимент в биологии. М.: МГУ, 1980.-278 с.

134. Walker J., Kellam S., Cannell R. Microalgae and cyanobacteria as a source of glycosidase inhibitors. // Trends Biotechnol. 1986. - Vol. 4, № 12. - P. 308-314.

135. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т./ Дж. Хоулта, Н. Крига, П. и др. М.: Мир, 1997. - 800 с.

136. Ruyssen R. Lauwers A. Farmaceutical Enzymes: Properties and Assay Methods. //Gent. Belgium. - 1978. - P. 57-84.

137. Калакуцкий Л.В., Зенова Г.М. Экология актиномицетов.// Успехи микробиологии. 1984, №19. - С. 203-221.

138. Arora D.K. Mobility and chemo taxis in Actinoplanes // Gurr. Sci (India). — 1987. Vol.56, №3. — P. 120-126.

139. Брезгунов B.H., Завальский Л.Ю., Лазарев A.B., Попов В.Г. Хемотаксис бактерий. // Успехи микробиологии. — 1987, № 23. С. 3-28

140. Couch J.N. Observations on the chomatinic bodies of two species of the actinoplanaceae. // J.Elisha Mitchell. Scient. Soc. 1963. - Vol. 73. -P. 53-59.

141. Jonston D.W., Cross T. // Fresh. Biol. 1976. - Vol. 6. - P. 457-464.

142. Meyer G., Schneider-Merck Т., Bohme Т., Sand W. A simple method for investigation on the chemataxis of Acidithiobacillus ferrooxidans and

143. Desulfovibrio vulgaris. //Acta biotechnol,- 2002. Vol. 22, №3-4. - P. 391399.

144. Williams J., Radding C. Partial purification and properties of an exonuclease inhibitors induced by bacteriophage. //J. Virol. 1981. - Vol. 39, № 2. - P. 548-558.

145. Pallerony N.J. Chamber for bacterial chemotaxis experiments. // Arch. Microbiol.- 1980.-Vol. 128, № l.-P. 53-59.

146. Красильников H.A. Лучистые грибки. M.: Наука, 1970. - 235 с.

147. Краткий определитель бактерий Берги./ Под ред. Дж. Хоулта. М.: Мир, 1980.-318 с.

148. Нестеренко О.А., Квасников Е.И., Ногина Т.М. Нокардиеподобные и коринеподобные бактерии. Киев.: Наукова думка, 1985. — 334 с.

149. Агре Н.С., Калакуцкий JI.B. Биохимические признаки в систематике актиномицетов // Успехи микробиологии. 1972, №8. - С. 59-108.

150. Терехова Л.П., Свешникова М.А., Преображенская Т.П. Проблемы первичного отбора продуцентов новых антибиотиков. //Механизм биосинтеза антибиотиков. М.: Наука, 1986. — С. 140-148.

151. Nara Т., Kawamoto J., Okachi R., Oka Т. Source of antibiotics others than Streptomyces. //J. Antibiot. 1989, suppl. - P. 174-189.

152. Гаузе Г.Ф., Свешникова M.A., Ольховатова О.П. Образование антибиотического комплекса 4041 культурой Actinoplanes ianthinogenes sp. octamycini subsp. nov. //Антибиотики. 1979, т. 24, №8. - С. 563-566.

153. Coronelli С., Pagani H., Bardone M., Zancini G. Purpuromucin, a nev antibiotic isolated from Actinoplanes ianthinogenes sp. //J. Antibiot. 1974 -Vol. 27.-P. 161-167.

154. Терехова Л.П., Садикова О.А., Преображенская Т.П. Новый вид Actinoplanes cyaneus subsp. nov. и его антибиотические свойства. //Антибиотики. 1977, т. 22, №12. - С. 1059-1063.

155. Бабенко Ю.С., Куликова Т.Я. Взаимосвязь между активностью продуцента Actinomyces var. liticus 2435 и его популяционнойизменчивостью. //Антибиотики и химиотерапия. 1984, №7. - С. 490494.

156. Колесникова В.Д., Яровенко B.JI. и др. Спонтанная изменчивость Actinomyces werraensis. //Антибиотики и химиотерапия. 1977, №5. — С. 391-398.

157. Кузнецов В.Д., Янгулова И.В. Изменчивость Actinomyces orientalis. // Антибиотики и химиотерапия. 1970, №12.-с. 1063, 1066.

158. Канделаки Н.Д., Пикришвили И.П. Естественная и индуцированная изменчивость продуцента телавимицина Streptomyces Krass шт. 243 // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1985. Т. 30. №7. - С. 529532.

159. Кузнецов В.Д. Изучение изменчивости актиномицетов — продуцентов антибиотиков и других биологически активных веществ. //Антибиотики. 1972, №7. - С. 666-671.

160. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды.- М.: Мир, 1987. С. 209-217.

161. Дебабов В.Г., Лившиц В.А. Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов. — М.: Высшая школа, 1988. -С. 70-83.

162. Карасевич Ю.Н. Основы селекции микроорганизмов, утилизириющих синтетические органические соединения. М.: Наука, 1982. - С. 118125.

163. Навашин С.М., Сазыкин Ю.О. Перспективы современной биотехнологии в области антибиотиков // Биотехнология. — М.: Наука, 1984.-С. 47-53.

164. Жукова Р.А., Коммунарская А.Д., Пронина М.И., Терешин И.М. и др. Методы селекции продуцентов антибиотиков и ферментов. — Л.: Медицина, 1978. -159с.

165. Jamaguchi H. et al. Recent progress in antifungal chemotherapy / H. Jamaguchi, G.S. Kobayashi, H. Takahashi. // Marcel Dekkerlnc. New York, Basel, Hong Kong. - 1992. - P. 427-432.

166. Жукова P.А., Фурсенко M.B. Селекция продуцента микогептина // Микогептин и его клиническое применение. — М.: ЦБНТИ Медпрома, 1973.-С. 14-23.

167. Кузнецов В.Д. Микроорганизмы продуценты антибиотиков. - В кн.: Производство антибиотиков. - М.: Наука, 1970, -С. 12-21.

168. Кузнецов В.Д. Изучение изменчивости актиномицетов-продуцентов антибиотиков и других биологически активных веществ // Антибиотики. -1972. № 7. С.666-671.

169. Терехова Л.П., Свешникова М.А., Преображенская Т.П. Проблемы первичного отбора продуцентов новых антибиотиков. — М.: Наука, 1986.-С. 140-148.

170. Лаврентьева Г.И. и др. Естественная и индуцированная УФ-лучами изменчивость продуцента нистатина Actinomyces noursei штамм № 0187 / Г.И. Лаврентьева, Р.А. Жукова, Л.М. Демченко, Т. В. Котенко // Антибиотики. 1973. № 8. - С. 692-696.

171. Торопова Е.Г., Мардамшина П.Д., Пискункова Н.Ф. Подбор посевных сред, возраста и количества мицелия, обеспечивающих одновременный биосинтез антибиотика и пигмента у гриба Hypomyces rosellus. // Антибиотики и химиотерапия. 1988. Т.ЗЗ. №2. - С. 96-99.

172. Козина A.M., Максимова Е.А., Былинкина Е.С., Дмитриева С.В. Влияние условий выращивания посевного материала на биосинтез цефалоспорина // Антибиотики. 1982. №9. - С. 9-14.

173. Шишко Ж.Ф., Михайлова Р.В., Лобанок А.Г., Ясенко М.И. Влияние качества и количества посевного материала на образование внеклеточной глюкооксидазы Penicillium funiculosum Г-15 и Penicillium adametzii БИМ-90. //Биотехнология. 1999, №6, - С. 62-67.

174. Моткова М.О., Гладких Е.Г., Коробкова Т.П. Влияние посевного материала на биосинтез тобрамицина // Антибиотики. 1981. №7. - С. 492-496.

175. Казакевич И.О., Сапунова Л.И., Парахня Е.В., Лобанок А.Г. Влияние посевного материала на рост Streptomyces viridobrunneus и образование глюкоизомеразы. //Биотехнология. 1998, №3. - С. 19-27.

176. Бирюков В.В., Кантере В.М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М.: Наука, 1985. - 296с.

177. Работнова И.Л. Тактика оптимизации микробиологических процессов // Антибиотики. 1986. №7. - С. 508-513.

178. Музыченко Л.Н. Оптимальное управление процессами биосинтеза. //Ремедиум. 2001, №4. - С.55-56.

179. Виестур У.Э., Кристапсоне М.Н., Былинкина Е.Н. Культивирование микроорганизмов. — М.: Пищевая промышленность, 1980.— 231 с.

180. Коробкова Т.П., Максимова Т.С. Олбосоватова О.Л., Юрина М.С., Зенкова В.А. Оптимизация состава питательной среды для биосинтеза блеомицина с помощью математического планирования эксперимента // Антибиотики. 1978. Т.23. №12. - С. 1065-1068.

181. Сабиров С.К., Кузнецов В.Д., Филлиппова С.Н., Фишман В.М. Оптимизация питательной среды для биосинтеза альбофунгина методом крутого восхождения // Антибиотики. 1978. Т.23. №7. — С. 590-592.

182. Максимов В.Н. Многофакторный эксперимент в биологии. — М.: МГУ, 1980.-278 с.

183. Лурье Л.М., Левитов М.М. Уточнение условий выращивания посевного материала в процессе биосинтеза пенициллина // Проблемы антибиотиков. 1966. Т. 16. Вып. 3. - С. 36-45.

184. Романова Н.Б., Куранина О.Г., Лысан Е.Ф. К вопросу оптимизации процесса биосинтеза тетрациклина // Успехи в области изучения и производства антибиотиков. М.: ВНИИА, 1985. Вып. XIV. - С. 42-49.

185. Тыщенко А.Ф., Собачкина И.С., Былинкина Е.С., Королев Н.В. Изучение параметров, характеризующих продуктивность посевного материала продуцента олеандомицина // Антибиотики. 1983. №10. -С. 739-742.

186. Лосев В.В. Пути интенсификации процесса биосинтеза гентамицина: Автореф. дис. на соиск. учен, степени канд. биолог, наук: 14.00.31. -М.: ВНИИА, 1982.-20с.

187. Грабовский О.З., Кузнецов В.Д., Кобзева Н.Я. Анализ причин падения антибиотической активности Act. kanamyceticus 33-20 при пассажах через жидкие среды. М.: ВНИИА, 1983. - 52с.

188. СидякинаТ.М. Консервация микроорганизмов. — Пущино.: ИБФ, 1985. -61с.

189. Красильников Н.А. Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов. — М.: Наука, 1967. 152с.

190. Стрингер М., Дэннис К. Охлажденные и замороженные продукты (Научные основы и технологии перевод с англ.). — Спб.: Профессия, 2004.-496 с.

191. Pham Q. Lethality calculation for thermal processes with different heating and cooling rates. //Jnt. J. Food Sei Technol. 1990. - Vol. 25. - P. 148-156.

192. Криоконсервирование клеточных суспензий. Под общей редакцией Цуцаевой А.А. Киев: Наукова думка, 1983. - 287с.

193. Шраго М.И. Криопротекторы. Киев: Наукова думка, 1983, гл.12. - С. 12-26.

194. Шраго М.И. Криоконсервация особая форма анабиоза. Экспериментальный анабиоз. /Тез. докл. II Всесоюз. конф. по анабиозу. Рига, 1984.-С. 35-37.

195. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Замораживание и криопротекция. — М.: Высшая школа, 1987, 80с.

196. Кудокоцева О.В. Влияние физико-химических факторов низкотемпературного консервирования на расы дрожжей Saccharomyces cerevisiae: Отчет о НИР, ВНТИЦ. 1988. - 171с.

197. Larkin J. and Berry R. Estimating cooling process lethality for different cooling j values. //J. Food Sci. 1991, №56 (4). - P. 1063-1067.

198. Высеканцев И.П., Крашенинников Т.К., Олехнович Е.В., Степанюк Л.В. Консервирование бактерий Pseudomonas putida при низких температурах// Микробиология. 1992, Т.61, вып. 6. - С. 1098-1099.

199. Цуцаева А.А., Сафонова Т.С., Микулинский Ю.Е., Воробьева И.И., Иткин Ю.А. Влияние низких температур (-196°) и криопротекторов на некоторые виды бактерий // Микробиология. 1978. Т. 47, вып. 3. - С. 446-449.

200. Конев Ю.Е., Кузьмина Э.Д. Результаты длительного лабораторного хранения Streptoverticillum hachijoense (Jamaguchi) Baldacci -продуцента трихомицина. //Антибиотики. -1975. Т.20. №3. С.235-239.

201. Данилова М.В., Кудрявцев В.И. Влияние температуры замораживания на выживаемость бактерий при лиофилизации // Микробиология. -1970. Т. 39, вып.6 С. 1102-1105.

202. Сидякина Т.М., Устюжанина С.В. Новикова Н.Д. Горин С.Е., Есипова

203. B.В., Калакуцкий JI.B. Исследование оптимальных режимов консервации культуры гриба Acremonium chrysogenum — продуцента цефалоспорина С // Антибиотики и химиотерапия. 1990. Т.35. №1 —1. C. 11-14.

204. Елинов Н.П. Основы биотехнологии. С-Пб.: Наука, 1995. - 600с.

205. А.с. 1805664 СССР, МКИ С 12N9/04. Штамм Streptomyces lavendulae -продуцент холестеролоксидазы. / Яковлева Т.Н., Стати Л.Б., Яковлева Е.П. (СССР) № 4911315/13; 12.02.91; Оп. 09.10.92; Приоритет 12.02.91

206. Роуз Э. Химическая микробиология. М.: Мир, 1971. - 294 с.

207. Безбородов A.M. Метаболиты внутриклеточного фонда. — М.: Наука, 1974.-75 с.

208. Craf S., Caspary W.F. Inhibition of human intestinal a-glucosidehydrolases by nev complex oligosaccharide. //Res. Exp. Med. (Berl.). 1979. Vol. 175, №1.- p. 1-6.

209. Koba Y., Najima M., Ueda S. Further purification of amylase inhibitor prodused by Streptomyces sp. //Agr. and Biol. Chem. 1976. - vol. 40. - p. 1167-1173.

210. Бекер M.E., Лиепиньш Г.К., Райпулис Е.П. Биотехнология. М.: Агропромиздат, 1990. — 334 с.

211. Яковлев В.И. Технология микробиологического синтеза. Уч. пособие. — Л: Химия, 1987. 272 с.

212. Безбородов A.M. Белковые ингибиторы ферментов метаболизма нуклеиновых кислот, полисахаридов и фосфолипидов у микроорганизмов // Успехи микробиологии. 1983. Вып. 18. - С. 232245.

213. Umezawa Н. Lon-molecular-weight enzyme inhibitors of microbial origin // Ann. Rev. Microbiol. 1982. - Vol. 36. - P. 75-99.

214. Безбородов A.M., Улезло И.В., Шульгина M.B. Актиномицеты, продуцирующие ингибиторы трипсина // Микробиология. 1985. №2. — С. 308-312.

215. Umezawa Н., Aoyagi Т., Ogawa К. et al. Histargin, a new inhibitors of carboxypeptidase B, produced by Actinomycetes. //J. Antibiot. 1984. — Vol.37, №9.-P. 1088-1090.

216. Егоров H.C. Основы учения об антибиотиках. М.: Высшая школа, 1986.-448 с.

217. Промышленная микробиология: Под ред. Н.С. Егорова. М.: Высшая школа, 1989.-688 с.

218. Блинов Н.П. Основы биотехнологии. С-Пб.: Наука, 1995. -600 с.

219. Lee S., Sauerbrei В., Niggemann J., Egelkrout E. Biosynthetic studieson the alpha-glucosidase inhibitor acarbose in Actinoplanes sp.: source of the maltoseunit. // J. Antibiot.(Tokyo). 1997. - Vol. 50, №11. - P. 964-960.

220. Mitsuo H. et al. Synthesis of "dihydroacarbose", a potent a-D-glucosidase inhibitor. //Carbohydrate Res. 1986. - Vol.158. - P. 233-236.

221. Truscheit E., Frommer W. et al. Chemie und Biochimiemicrobies a-glucosidasen. //Inhibitoren Angeuwandte Chemie. 1981. - Vol. 93, №9. -P. 738-754.

222. Романцева Jl.M., Шабловская И.С., Сергеева A.M., Маругин B.B., Шер А.А. Микроэлементы в сырье и питательных средах культивирования продуцентов антибиотиков // Антибиотики и химиотерапия. 1988. №9, Т. 33.-С. 643-646.

223. Семенов С.М. Лабораторные среды для актиномицетов и грибов. М.: Агропромиздат, 1990. - 240 с.

224. Моткова М.О., Дробышева Т.Н., Гладких Е.Г., Коробкова Т.П. Влияние макро- и микроэлементов на биосинтез тобрамицина на синтетических средах // Антибиотики. 1982. №10, Т.27. - С. 24-28.

225. Болдырев Я.А., Величко Н.А. Влияние элементов минерального питания на рост каллусной ткани и синтез алкалоидов в культуру ткани катантуса розового // Биотехнология. 2002, №1. — С.53-55.

226. Волкова Л.Д., Егоров Н.С., Яровенко В.Л. Влияние цинка на синтез глюкоамилазы дрожжами Endomycopsis Fibuligera 21 и их морфогенез. //Приют, биохим. и микробиол. 1977, Т.13, вып. 4. - С. 558-563.

227. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: МГУ, 1994. - 512 с.

228. Meneses F., Henschke P., Jiranek V. A survey of industrial strains of Saccharomyces cerevisiae reveals numerous alttems of maltose and sucrose utilization. // J. Inst. Brew. 2002. - Vol. 108, №3. - P. 310-321.

229. Hodgson D. Glucose repression of carbon source uptake and metabolism in Streptomyces coelicolor A3(2) and its perturbation in mutants resistant to 2-deoxyglucose. //J. Gen. Microbiol. 1982. - Vol. 128. - P. 2417-2430.

230. Родионов И.И., Миронов B.A., Пензикова Г.А., Мальцев Н.И. Исследование амилаз продуцентов биологически активных веществ.

231. Технология получения и механизм действия новых антибиотиков.: Труды ВНИИА. — М., 1991. 151 с.

232. Dills S., Apperson A., Schmidt М. and Saler J. Carbohydrate transport in bacteria. //Microbiol. Rev. 1980. - Vol. 44. - P. 385-418.

233. Henderson P. The inter-relationship between protocoupled and binding protein-dependent transport system in bacteria. //Biochem. Soc. Trans. -1980.-Vol. 8.-P. 677-679.

234. Hegge R. and Boos W. Maltose and lactose transport in Escherichia coli. Examples of two different ofconcentrative transport system. //Biochim. Biophys. Acta. 1983. - Vol. 737. - P. 443-478.

235. Muir M., Williams L. and Ferenci T. Influence of Transport Energization on the Growth of Escherichia coli. //American Sosiety for Microbiology. -1985. Vol. 163. - P. 1237-1242.

236. Состав питательных сред (г/л)

237. Крахмало-аммиачная среда №601. Крахмал 10,01. К2НР04-1,01. MgS04-7H20-l,01. NaCl-1,01. NH4)2S04-1,01. СаСОз-3,01. Агар 20,02. Среда № 4 JSP

238. Крахмал 10,0 К2НР04-1,0 MgS04 -7Н20 — 1,0 NaCl-1,0 (NH4)2S04 - 2,0 СаСОз - 2,0

239. Раствор солей микроэлементов — 1 мл Агар 20,0

240. Минеральная среда Гаузе № 1

241. Крахмал 20,0 KN03 - 1,0 MgS04 - 0,5 К2НР04 - 0,5 NaCl - 0,5 FeS04 - 0,01 Агар - 20,0

242. Среда Чапека с крахмалом №84-1

243. Крахмал 20,0 К2НР04-1,0 NaN03 - 3,0 КС1 - 0,5 MgS04 - 0,5 FeS04-0,015 Агар - 20,01. Хитиновый агар

244. Хитин 10,0 NaCl - 0,5 KNO3 — 1,0 MgS04 - 1,0 К2НР04-0,3 Агар - 20,0

245. Агар с кукурузным экстрактом и крахмалом № 21/12 Крахмал 20,0

246. Кукурузный экстракт 5,0 (по сухому весу)1. NH4)2HP04 4,01. К2НР04- 2,01. MgS04 0,251. СаСОз 2,01. Агар 20,0

247. Среда Чапека с глюкозой №84-2

248. Глюкоза- 20,0 К2НР04-1,0 NaN03-3,0 КС1 0,5 MgS04 - 0,5 FeS04 — 0,015 Агар - 20,0

249. Глицерин-аспарагиновый агар №63

250. Аспарагин — 1,0 Глицерин 1,0 К2НР04-1,0

251. Раствор солей микроэлементов 1,0 мл Агар - 20,0

252. Органическая с переваром Хоттингера №2

253. Среда Придхэма-Готтлиба №45

254. NH4)2S04 2,64 КН2Р04-2,38 К2НР04 - 5,65 MgS04-7H20-l,0 CuS04-5H20-0,0064 FeS04-7H20-0,0011 МпС12-4Н20- 0,0079 ZnS04-7H20-0,0015 Агар (отмытый) - 20,0

255. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА БИОСИНТЕЗА ИНГИБИТОРАа-ГЛЮКОЗИДАЗ1. ТП 1.1 Подготовка сырьятп 2.2 Подготовка сырья1. ТП Приготовление41 партии посевного материала иззамороженнойкультуры

256. ТП.1 кт, Кх Приготовление посевной питательной среды1

257. ТП.2 кт, Кх Приготовление ферментационной питательной средыi

258. ТП.З Кт, кх Стерилизация питательных сред в автоклавеi г

259. ТП.4 Кт, кх Выращивание посевного материала в колбах1. ТП.5 Биосинтез 1. Кт, кх ингибитора 4а-глюкозидаз 1 г1. Культуральная жидкостьна стадии фильтрации, выделения и очистки препарата гипоглюкина

260. В качестве продуцента ингибитора а-глюкозидаз используют культуру Streptomyces species штамм К-20.

261. Выращивают культуру в пробирках на агаризованной среде Чапека с крахмалом №84-1 в течение 10-14 суток при температуре 27±1°С в термостате.

262. Культуру хранят в холодильнике при температуре 4°С на скошенной крахмало-аммиачной среде №60 не более 3-х месяцев.

263. Продуцент, хранящийся в холодильнике, используют для засева жидкой посевной питательной среды следующего состава (г/л): соевая мука 12,5; зеленая патока — 7,5; натрий хлористый - 8,0; кальций углекислый - 4,0; вода питьевая — до 1,0 литра.

264. Колбы с питательной средой стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин. при давлении 0,08 МПа.

265. После стерилизации питательная среда должна удовлетворять следующим требованиям:- водородный показатель рН от 6,8 до 7,2- отсутствие посторонней микрофлоры.

266. Длительность выращивания посевного материала в колбах 48 часов. Выращивание производят на круговой качалке с частотой вращения 220 мин"1 при температуре 27±1°С.

267. Биохимические показатели посевного материала перед пересевом:- водородный показатель от 6,7 до 7,0- цвет от светло-коричневого до темно-коричневого- количество мицелия от 15% до 35% заполнения пробы после отстаивания в течение 30 мин. в пробирке.

268. Посевной материал должен быть стерильным, что устанавливают по отсутствию посторонней микрофлоры в высевах на МПА и МПБ после инкубации высевов в термостате при температуре 37±1°С в течение 72 ч, а также по результатам микроскопического исследования.

269. Выращенный посевной материал, удовлетворяющий указанным требованиям, передают для засева ферментационных качалочных колб.

270. Приготовленную среду разливают с помощью мерного цилиндра в колбы Эрленмейера по 100 мл. Среду стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин. при давлении 0,08 МПа.

271. После проверки среды на стерильность ее засевают с помощью пипетки вегетативным посевным материалом в количестве 10% от объема ферментационной питательной среды.

272. Культивирование осуществляют на качалке с частотой вращения 220 мин'1 при температуре 27±1°С в течение 96 часов. Каждые 24 ч отбирают пробы для контроля за процессом биосинтеза.

273. Культуральную жидкость, отвечающую указанным требованиям, отфильтровывают. Полученный нативный раствор передают на стадии выделения и очистки ингибитора а-глюкозидаз.

274. НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ФИРМА

275. Общество с Ограниченной Ответственностью

276. SCIENTIFIC TECHNOLOGICAL PHARMACEUTICAL FIRM1.mited Liability Partnership

277. ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ ОТЕЧЕСТВЕННОГО РЫНКА

278. ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ РАЗВИТИЯ ОТЕЧЕСТВЕННОГО РЫНКА ПРОТИВОДИАБЕТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ В ПЕРИОД С 1997 ПО 2000 гг.

279. На рисунке и в таблицах 8,9 представлена динамика российского рынка противодиабетических средств за последние три года.