Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение экзополисахарида из Bacillus palymyxa

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Получение экзополисахарида из Bacillus palymyxa"

Р Г О О Д; МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ ШРАШ

- , киевский зтологичЕсяиа институт тугвоа промквшеннош .(4}и ,лЧ~у. _______________,„.:________________________________„

■ На правах рукописи

БОЛОХОВСШ Валентина Антоновна ;; .

Ш 547А; 577.1; 576.8

■v '

' ПОЛУЧШЕ ЭКЗСШЛИСШРШ ИЗ

ВасШи* роСумуха *

Специальность 03.00.23 - Ечотечнол огня

. АВТОРЕФЕРАТ диссертации ка соискание ученой степени \ ' ' кандидата технических наук

'.л ' . . ' ' .

Киеа -1993

Работа ьыпмшена на. 1ады;кинском эаводе ферментных препарат! и в Институте микробиолог!'.« АН Украины

НАУЧШИ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор биологических наук» профессор, заслуженный деятель науки Украины ГВОЗДЯК ?Jfc

ОФИЦШЬНКЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор биологических наук» профессор, член—корреспондент АН Украины B.C.. ПОДГОРСКИЙ

кандидат технических наук, доцент Л.Р; РЕШЕТНЯК

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: УкрШИспиртбкопрод

Защита состоится "30 " июня 1923 г. в час. ос ми

на заседании специализированного совета К 068-17-03 а Киевском технологическом институте пищевой промышленности по адресу: 252С17, г." Киев-27, ул.Владимирская» 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Киевского технологического институте лицевой прошЕленносл».

Диссертация разослана " 27 " мая 1593 г.

Ученый секретарь специализированного- совета, кандидат технических наук

E Ji. Семенова

- - I.

ЖГУАЛЬНОСТЬ ТЕШ

...... В последние десятидетяд из разгшх кикрооргов измоз выделены____

эхзвполисэхЕриди (ЭПСО. хотьрие отдичавтся уникальной структурой и специфичность®», что позволяем прижнять их во многих областях народного хозяйства и медкпте;

К 1588 г; произведет з ЭПС з мире достигло 300 млн. долл. с егегоданк увеличение» еэ Основным микробным ЗПС, пироко

применяемом в прсмышенности» caysfcr ксант&д. (продуцент toxdofiMtUtt liß9). В США к числу новых полисаха-

рндез, выпускаемых прскйгзепностьп, относится продуцент Bacillt/s polyuyxa . На УкраЕЕе изеледовгккя со етенками этого вгтда не проводились»

ЦЕЛЬ НАШЕЛ) ЕССЩОЗАЯИН - отбор итакка-продуцента ЗПС, который бы удовлетворял зхсноулгчзским показателям с точкл зрения промышленного производства; разработка технологи! его культивирования а выделения синтезируемого им ЭПС*. •

3 связи с этим ресадись следующие зЕдечн:

- отбор и селекция прошиьенного птакма-продуцекга ЗПС к изучение его ошовнше свойств;

- подбор и оптимизация питательных с^ед;

- отрабзтка параметров синтеза полисахарида;

- изучение монссвхгрядясго состава, реологических к £изихо-> химических свойств ЗПС;

разработка тгхнехогаи получения ЗПС в лабораторных, опытно-пр омы пленных и прскыплекных условиях в различных товарных формах;

ЕАУЧ/ШH0EÖ3EA. Показано, что путем естественной -елькции мохн получить штамм Ba&ihis polywyxa, обладахцай повысеннсй скоростьо роста» стабильный полисахаридообразовшием, шеокоа синтетической

способностью в лабораторных и г прошглениых условиях".- Обосновваа целесообразность проведения процесса синтеза 3!1С_Е.ро1умужа 2»69г13 . в две ствдиш первая стадия - накопление биомассы; ьторея - поправленный синтез ЭПС. При касвг ¿бированиа процесса поиучения палкяик-с&н& в условиях опытной и проы"щеаной установок определена Речевые парамгтры ведения технологического процесса Сргвида езрацки в корректировки рН); позволявшие осуществлять биосинтез пашягкеана с экономическим коэффициентом больше 0,5";

Разработана мембранная технология выделения -.¡сдожксекз и ксан^ана, а также быстрорастворимой па стсобразшП. фермы псакмккса.е с покоцьи трубчатых ул?>трафильтров РТУ 0,5/? и кеибр^в € I. Для получения высокоочиценнкх препаратов полямшссана наряду с. коагуляцион-ной схеиой. предлскен. истод разруиенвя клеток, продуцента литкчееекк ферментным коипдексои и целйчноЗ протеазоЕ/ ке приводящий к изменению состава ЗПС и способствущкй увеличении степени очистки 2ЛС в электрическом поле с применение)! нейтральных иеибран» позволявший получать препарата,. харвстеризусгиеся эдссксГ: етепевьв очистки« С помощыз спектрстурбкдинегрии разработана технология получения полимиксана в виде быстрорастворимого воровка. Ваесезаг кальция хлсристи'о и распылительная су шее в оптимальных условиях пезвоаявт . получать препарат с высоки»! реохотичееккш свойствеки в растворимостью

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Получен васокопродугзкЕНьй и технологический вт: км В.ро1унуха 1459-13 и иредяокина технология его куль^ тивировакия. Разработана технология излучения певдаяксана в различных товарных ферках: жидкой» пастообразной, сухой (технический препарат), высокоочиценн 2 (лицевые л косметические целину разработана ИГЛ и организована производство погкккксазз на 1адыишсйои

заводе сор;-:ента:;х препарат гг. Общее производство поликиксана в виде разли'иих товарных форм достиг;о 2 тис.тонн в г(у£

АПРСБЯПМ РЛБ0"1Н. Материалы диссертационной работы долсеены на всессЕЗних конференциях "Бимсшверсия4 (г. Рига; 1988 г.) и "11емйранн-9Г' (г. Косква» Еиохиммавароект,- 1591 IV), на съезде - Украинского кякрсби од ото ч': с? о обцестза (г. Черновцы. 1990 гО» обг-ек заедания стдедсз физиологии прошаденнкх микроорганизмов н фитобактериЛ Пнст^та к::кро5::олсг:га а вирусологии (г. Киев, 199? г.; заседаниях научно-технического совета Шямеддрома СССс" (г. Москва, 1987 г., 1983 г., 1990 т.), ряде технических советов -Ладта. 'некого завода фер:ентных препаратов (г. Ладыкин^ 1988-1991 г-г.). По материалам диссертации опубликовано 13 работ; из .;.« б авторских свидетельства

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТУ. Еиссертационная работа изложена на 22В стр. иапЕнсписясго текста и состоит из введения, 6 разделов, общих зстсдов, приложений, ОД таблиц, 26 рисунков, списка использованной литература, включает 217 источников, в тем числе 146 зарубежна^ "

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЬЕКта Л МЕТОДУ ИССЕЕДСЗЙКЯЯ. Объектами исследований были ста:'-'га-прод}-;ентц экзололисах .р'лдоз: %&л{отпспа\ есьпфеь-я&г ру'. ссцугЖгс* ЕГО3-6"; 235; 8158; 81*7 8162; Е169 и роТр-чуха 993; 154; 706; 1*59-3 и 1459-БЗ, получении.- из Института микробиология и з:^усолсгки !ЯУ и 5$РН АН "России п с ел е кци еннр о венные явки <1459-13).

КузьтявЕрсзаят.-э продуцентов ЭПС в лабораториях условиях проводили в колбах не хругазоЯ качалке (220 об/кин) к лабораторном ферментере ЙНагА» (Утео-* 5 а).

- ч. ■

В опцтао-промыщшнй л условиях культивирование ir сводили с использованием ферментаторов ф^риы f/otdon (I и3 —> НО и3 к 0,1 м2 —> 7 х3). и отечественного ферментационного оборудования (I u" 6,3 и3 —> 63 и3Х Продуктивность шкроорганиэкав оценивали ас выходу ЭКС (г/ж), удельной сксрсстг. образования ЭПС (г ЗПС/л/ч}, степени хонвереш субстрвть QS j в полимер (Р) - С ьконом'лческиП. коэффициент P/Ü У» .Для оценил эконокачнссти ферментации фиксировали продолжительность кулыкв! ^овёеия^Т/к степень утилизации углеводов.

Звдеденке полксахеридог в лаборатории условиях проводили и звестныки к разработанной: накк методами (злем^окоагуляция). Ви„зление полисахаридов в спытно-прэкыклеЕКЬ'х условиях проводили с помоцьв сегуратороaVesi'fdte (ФРГ) и АСЗ-Е, ультрефщьтрациеннкх установок. Bor-Oliver (Р » 10,5 к3), ДНРИ-20 с грубчашш ультрафильтрами БТУ 0,5/2 с5щей площадьс 37,5 распылительной сушилки /!ЬтШг (AlorJon ) и СИ№0.5/г (СССР)..

Гомогенность и состав ЗПС определяли с поисцьп букаккей хроматографии, гельфильтрации нг колонках с Сефарозой 4Б, П'Х, спех: >-фотометрии и поте нциоие tjc " ;че ск Ci'O титров гния. Количество егхвроз определили фёнол-серньги кетодон, урсновьгх кислот - по Дине, бедки -по Лоури. ?ракциовирозгкие лолкегхаридшие препаратов проводили с помощь« броиида-цетиятркметидеююнкя,' хроматографией ла ДЭ целлюлозе A-32.

Кинематическую вязкость определили с поксцад вясксзийетрв Оствальда стандартного образца, динамическую зязхесть - с псг.сц-н ротационного вискозиметра.

Для исследования надмолекулярной стругл-уры пцлисахаридоз в растворах и гелях асаолЕЗовади метод спектротурбидкыетрки. Чассмо-объеинув аонцентрацки зьдества, входяцего е сосааз коддозднс-дисперс-н ой фазы в расчете на полный объем суспензии» определяли по опти-

ческой плотнеет» при. пяти: значеь/лх pH и ионного: состава среды с

г

последующей автоматической обработкой результатов-»

ШБОР ПГГЛТШ-ПРОДУОЕРГА ЛЯ ПРО!ГаЛЕШгОГО ПРОИЗВОДСТВА оПС Основными. критерия!!!! ьр» отборе птанка-продуцента ЭПС, apois высоких выходов целеззга продукта, были: стабильность полисахариде образована,*, скорость рост» устойчивость к нифизированио посторон ней гакрофя'орой» Методами естественная селекции птаммов кы отобрал б ппгаммоз Х-с. p,v-campetiris и 3 штамкх В.роГумуха (табл. I), sue которых для детального изуч:ния остановились на шт. 1459-13« 8158 и 815?. Для прскапгенннх испытаний и внедрения отобран .гаыя 1459-

Таблица I."

Количество биомассы а коночкыа экономии ский коэффицкен-у разных пгакиоэ-продуцентов ЗПС

Т 1H-BQ биомассы. г/д(Х)1 К-зо АС 1-. ! • ПродуцентЦтамя 1 часы роста Сч.рГ> , ЭПС, г/д , Ур/х $ ЧФ t t-—С---С---1 (72 ч.р.),(72 ч.р, (72 ч.

Х-Г.Р^ 226 0,7 2,4 2.4 1.6 1Ч,9*О..Ч8 ВЛ 0,67 eaupfiStri 0>7 Jr5 Jt6 3ж3 25.5+0,38 4.3 Q..72

81*»? О»* 1,0 3,0 1.8 14,8^3,42 4,3 0.67

315В 1.0 4.5 5.4 3.0 16.5^0.60 3.0 0,-75

8 Кг 2.«» 5.1 3.6 15.44 \54 3,2 0.7С

8169 0.6 1.5 3.0 4.8 I5.55o.55 5,1 0.71

В-роГумуха 1455- 6.8 6.5 6.3 - 20.5+0,20 3,2 О.ЕС 33

1459-3 ЗЛ 5.1 6.2 6,0 15.2+0.42 2,4 0.6С

SS3 4.5 6.4 5.8 5.5 1б.5То,3 2,8 0.65

Приучение; Для ста мм üb Х.с.ртс cmfesim источником углерода tfi юласса*. а В.ро1умуха - крахмал.

увух — удельная синетическая способность оиомасса

у^ - экономический кгэффициент

Один из ютммоз g.polpgxa 1459-13 был получен при очередной

моноспоровсм рассева отсезехциониразанног© гзмогеннсга ^-вариант»

жгакга З^роГумуха 1459-3. который обладал значительна большая

- fis

скоростло росте ( «= 0,2f г.к у исходного втакма 0,09)»

Кислый экзопадисахарид, синтезируемый,штакмои 1459-13,. не содержит . примесей нейтрального .традукта. Ионоиернкй состав ЗПС представлен глюкозой (44JQ, ьшннсзоК (34JO, галактозой (22$), глюкуроновой (1-275) к пировиноградной клслитаик (0-5?)- Црепврат псдидксперсен-; Молекулярная касса пре парада сосг двляег 5 . ID** - 3,5 t 10® дал itch. Кинематическая вязкость 0,l£ гомогенного препарата (содержание углеводов больше 90?) равна c<~v Как загуститель, пс~исохарвд 1459-13 не уступает ксантацу и. обладает хорокзй псевдослЕстичностьо-« При снятии напряжения сдвига исходная вязкость его ре створов восстанавливается практически мгновенно (рис. I).

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ КУЛЬТЕБКРОШШЯ В.Р0Шт IA59-I3 ГОДГОТОШ ПОСЕВНОГО ИА.]£РйАЕА. Используя предварительно адаптированные к крахмалу кугьтуры при С:В сооткоигшт, равном 2:1 - 3tl можно пс-учигь посевнув культуру» которая з возрасте 16-24 часа обеспечивает стабильный биосинтез ЗПС на вгсрофтадик основной ферментации.

ИСТОЧНИК УГЛЕРОДА. Етаик Б.ро1укуха 1459-13 способен расти и синтезировать ЗПС на таких источниках углерода, как глпкоза» сахароза, донноза, ерабиноза;; мальтоза в. крахмал (тaбл¿ 2)_

Таблица 2.

Влияние источника углерода не биосинтез пояишхс&Еа штаммом КроГумуха 1459-23

Источник • Показатели .хультурвдьной жидкости на 72 часа кульгизи-.

углерода !______решения

ie? опыта | Ш ir/it YipV : »HgO^IiI

Ткони"нтпв- ISP--БРйкасеа ¡КМИЧйСЙЯЛ-"-ПФСЕКТЯЖПУТИЛтаГ

>"HiH$Pe l- ..... «ьийнассз, , С5Ште i „Yb/J вязкость !щя угл

ция 3.5F fi конце ; г/л

iciiHTeaiip/ei „Vp/J вязкость «ция угле !могь ЗПС, ! 'f/x!СПЗСк.к-.;«водов,?

1гд ср; i . i

Глгкоза 5,90 4,6+0,24 17,5ч ",44 3,80 ИО+4 ?4»3

Мальтоза 5,75 6,5^0,35 20,4+0,3 3,13 1S+& 87,6

Арабиноза 5,40 5,5^0J6 20>5+0»30 3..72 90j2 75,6

Манноза 5,75 5,6-j0,34 16.0+0,26 2'85 115,5*5 92.3

ю га .» w » «в а Ъ^ла

Рас / ¿TuMcrjntsvecjcue jca/x?/c/77t?pc/c/rrc//cu У/а pacrnÁCpoÁ псл^'михсомэ a J СУ /ссакто^о /о/ло-

¿¿cjOHrtOM 0исгсози/>?е/77ре мо/77

- 5.

рододдс таблицы 2. ___

I

12 13

! 4 15 16 ! 7

Ксилоза- 5,35-----3,5+р,Д8 П,0+03,28 50+4 58,3

Ремкоза 6,3 ^,8+0,23 следа! , ^ ' - ~ 2^,0

Г^Х г/О

Сахарозе. 5,7 18,540,25 2,53 115+6 76.6

Примечание: рП питательней среда перед, засевом - 7,0+0,05.

Состав инокул. цюнноЯ средн.-1,5% кре -улла и 0,75? БЕС,

возраст культура - ?Л часа.

Количество посевного катериала - к общему

Источник углерода влия' тна сооткосе-ике кета,/ когаюнектакк мономерного состава ЗПС, в молекулярнсгч'.ассозне характеристики к кинематичеегчк вязкость не ичиенявтея. Крахмальнее гвдрелизьги (ЛЭ « 13-64) обеспечивав? сгабкльнкй биоекгаез ЗПС. С роется .'сснцент-реции крахмала увеличивается продукция ЭПС, но снижается степень утилизации углеводов при достаточно ь^сокок экономическом кос^фк-циенте поцесса. Возможен рост к продукция ЗПС на штетедышх средах, содБраа^кх мелассу^ Если ее вносить дробно,, то происходи? (п^.и . 35» концентрации классы) ;ме.вкчьлае ородукция ЭПС в 1,5-7,8 раза, по сравнения " л.т-'гразсьам внесением. Сс.четек>ж в среде иглесса и - крахкаяа способствует увелк-еккв синтеза ЗПС к повышен;® его вязкости- Эти результаты получены только для быстрорастущего яканма, в то . врекя как другие шрамик 3^ро1уиуха на кзлассе растут очень слабо, рост заверсается тотальной споруляцяей и ЭПС не образуется.

ЙСТОЧКЖ АЗта. Стабильный рост и продукция ЭПС В.реХукуха 1*459-113 об;спечиз£шт как органические;,, так к неоргзнччеекке источник я азота (табл..З).

■ Установлена оптимальная концентрация БЕК (0,252), дрог левого автолизата (0.5 £), пептона (0,3^), сульфзтз акмоиия (0,Л£>« обеспечивавших стабщьниП бкоеяктез ЭПС. Из пепиг-ашах ксто'шиг-оз езога

I

наиболее сальная, воздействием нь биесдатез яолйкиксана обладает

Крахмел

03=60) 5.30

7,8+0,20 25,0+0, £ 3,25 113,0+3 76,6

нитратный а зет, что является неу добный, в производственных условиях. При использования амюнийшх сссеЯ итак: З.ооХумуха 1455-33 не образуем спор, "то несбходкас учитывать при получении С'ПС определенного ЕЕ'-есгга. Для крупно?оннг?«лсгс производства 2ПС наиболее «ризк-лекви лсгсчняхзи азота язллегсд БИТ.

Таблица 3.

Зазксийоль выхода ЭПС от. ясточниг - азота и соотношения углерода а езота при культивировании З.рсУунуха Х^о-яз

йсточ- иТзмеряе f ник 1нае пока азота «зателя !

БВК

Концентрации

Кодичесг 3ПС,г/л

11:1

5,5:1

11,2+0^13 2,5:1

Нуху- С:Я 22:1

г/д 6,1+0,11 9*2+0,13 10,5ч0Д7 13,5*0,.«

Дрсхне- С:И Щ'1 18:1 зой ав- Количество

Лептой 36:1

йолгсчестао .

ЗПС,г/л 13,6*0,18

7,5:1 3,5:1 ¡13,6+0,11

(ЯН^ С:Н 200:1

Количеств!? , .

Ж. г/л Г/, 840,1^-20

ЛгЯО,

32:1

»81

Гб ,5+0,21 Гб:Г

Когачестзо/// / // // X

2ПС,г/л 16,020,33 9,5+0,4

Лрока©— С:3 }1Пг1/',// -

^_(//У/,

Прскечаннег Зрекк культивирования 7? часе.. Концентрация источника углерода — гвдролизирсвашшго храхиала была постоягао{ равно2 3,С£.

ХХ'У/^дг статьз 2ГК?я кгзгичсстзох, равных »ли пргъыхву щах яввтсоаь.

■Зиоекггегз а днчакиха с раачияи источи е зс-ха, зг.-ггсс в оптикельном количестве» показал» что среды с органическими источниками азота обеспечивает самую высокуо утилизации углеводов и эффективную вязкость ЗЛ*;» Моноиерный состав ?ПС в меньией степени зависит от сменк ист очей; : азота, чек от источника углерода, е ыадеку-лярно-кассовые характеристики грешрагав ЭПС весьма блкзхи друг к другу.

При оптимизации состава питательной среды", рекомендуемой для промышленного производства, прцкенили мзтеА еддавнзно-решетчатого описания о использованием ортогональных многоуровневых планов» В процессе оптимизации критериями оценки явхглисы шхед целевого продукта, экономический коэффициент к утилизация -•тлеводсв. Пссле варьирования 3-х факторов (крахмала, пеногаситедя в БИО на 5-и уровнях и статистической обработки шйдено, что концентрация крахмала должна быгь (вез %) 3-4, БВа - б,.1-0,2, пеногаситедл - 0,025.

• Влияние условий культивирования на процесс биосинтеза ЗПС.

Начальный .рост культуры происходит- интенсивно при значении рН» равном 6,8-7,2. После накопления биомассы (16-20 часов культивирования) и росга зф1ект;.'ЕНсГ; элззостк корректировку рН кет.но не проводить, т.к. синтез ЗПС вдет интенсивно деже прг рН, равном 5,5« Этот ре иг к корректировка рН определен кек более экономичны?» в процессе оптимизации. уоковпй биосинтеза в опытных (.7КС1;-б,Зи3) и промышленных О*геоы = 63 к3) усдеетлх мкегофзкторного эксперк-иента, проводимого методом случаенего поиска.

Ягйденс, что режим .пероа-аивйния лимитирует процесс накопления ЗПС. При отключении кепелки (работа с аэратором) или снижении числа-оборотов, количество си.-.тгьируемого пелимик'.ана снимется ь 1,5-2 р£за. и оси на ранних часах роста уме ньсагь подачу воздуха от 0,Б*Г,0 до 0,2*0,4 объекта ае I оСъеа среды в минуту, .

- и.

резко 7сжпэтется дзхателниз процессы", Зто приводило к неэкономичному расходованию субстрг.та и умекьвенкв выхода целевого протг духта (рпс. 23.

Знбрснпкй резим аэрации, обеспечивающий начальное 80£ насыщение гуяьтуродькоЯ жлдзссдти. кислородом и последующее поддержание количества распоренпого «.исаорода на уровне больсг 205?, рекомендован для зклвчения в тфокнолентгей регламент*

Здя гзелячения ■эксеоиичност» п-оцесса биосинтеза в ферментаторе, ке предназначенном для биосинтеза етслсовязких продуктов, кк пр-^хенили 1трссто2 технологический прием, заюшчггцийея в доливе года (15-205 к обгему) в кскект активного биссиптеза ЭПГ и ре "эксто увеличения оф.*ех*1явной вязкости в феркентеторг (24-28 Чи-соз роста'), Зто привело тс увеличена выхода ЗПС ~ улучшению потребления краххалп. Егчалшое уггдичеяие коэффициенте • загрузки фер-кентсрв (до 0,7) оказалось т:ее экяно>:ични* приемом» так как из-за пеяоебрвзовангя приходилось уиевшать аэрации на ранних, часах роста, что приводила к усиленпз продукции культурой 00^ а снижении выхода ЗПС- По^дер^сгвая сгго:галыше параметры культивирования в проношенном фермантере (гвааазкровади Э6С ?ерментеций) удается, ара зксвошчесглм гаэффицаекге рав»-.»I 0,42*0,5С, получать культу-ралЯф» зидкасть, ссдеразцуя Ю-15 г/л полиыиксана с эффективной вязкзсед прешсаяцей 200 сПз» Ира этом утилизация углеводе з составляет 75-655-

РЕМНЯМ ТГХНОТОГЯЙ ШГНЕЩ И ОЧ'ЛСГПС! ПОШЖСАНА 1 зазисжзосто »г областа применения ЗПС к ню» лыдвагаотей. реал Фоте требования- Еоэтоцу для выделения ж « истки ЗПС ми иёпаггзегада неабракнув технологии, электроогавденвв,. ф-^рменто-ткзнуя, очистку* спирзгоссажденне»

^ «г- ь

-•5 ||

в 1с. {4 со гг *г

Рис. Ц.Ди;;^, ¡око потребления лс/&?орос:<уз«О я'О.ксиея'и* 3/7с /¿у о>рос/ъо У9<до-

сре/с/77с'&^00 ре а, £ о; при

розлич/**/* ¿/робил о,эра.чаи £ про-мышлемном срерА?ен/г7е£>е. Режимы оэроцис/: '

Эо ¿6 «асарЬсгла-пода</о ¿озЭуха /г

'/в ^ос/Г/а 6озЗс/х<? ¿ко^.

пос,е * рос. ъ „ *

ВП О? ЯЖ КЕНБРАр; К НЫФРАННУХ ЩдЛЕ:'. Испытание вксоко-прои засдотельнг-х мембран сухого хранения СМусе 2,3,4) показало их 1ХЮл-з селективность при ксгщглтрироз'пин культуральккх жидкостей Ск.зс). Однако, с увеличением, концентрации ЭПС наблюдали резкое снижение прсийводятедьности прсрсса из-за образования годкой кем-брани.' При концентрирование бесклеточких растворов полинизсеака . селективность стг/ола?.ь и зависела от рабочей температуры, начальной концентрации ЗПС к разнерз пор кгнбраны. ЕеРдеикке закономерности позволили рогуянрсвсгь селективность прщесса при получении очищенных ферм полисахаридов'»

Испытания» проведекш-'е на пята установках прокиаленного типа показала, что наибольшая преазгедительноезь процесса с минимальными потерями. достигнута при использовании трубчатку, ультрефияьт-■ров (БТ.^-О,?, мембрана £ля очистки и концентрирования -тмк-

сахзридов иЕиее пригодна установка фирии рог-О^Угг (иеубраки Х?-1В),' пел« волокна (ые гураны ЛШ-50).

Однако- качество ародугта прзшвадо свойства ЗПС, полученных при спиртоосаксдекг/г культуралькой кидкосгат

КСПОЗЬЗОЗАНИЕ ТРУБЧШХ ШТРАШЬТРОЗ ПРИ ПОЛУЧЕНИЙ 1ШШШ-СД.НА. Зля получен;« техяячреккх препаратов поликиксана, где п: 'трео'уется удаления клхребних клеток,- дег:; гочнаж тс^полопые«.«-ий- приемами из стьднк подготовки к мембранному разделения явилось разбеьдЕкае, нагревание, персмепвзгде;

На начаяшых этапах кояцентриревййкя о ростом рабочей темпе! ротурс з npcr.ee« ультрегаильтрации до 70°, селективности снижается весьма значительно (до 25& что согласуется с наЗдс.чными. закономерностями мембрэ1Гг;ого разделения подами*сана при применении внео-копроизводительннх чскбран (МУТЯ). Если процесс удьтра$ильтреции проводили при те персту ре 50-55сС, то селекгкж ость в процессе ;ультраконценгрироЕЗШ« не сник&'хогь кике уровня 90%*

-

Производителеость ироцесеа улгтрзхшцеятр^овтия в меньшей степени.зззясит сг степени предварительной счистка, чем от температуры» Б дкепэзсез работах тс ера тур 33-50° средаяп скорость про--цесса составляет ЗО-Ю -л/к^.час. Пр2 70° »тхЗД верзщпта идет значительно интенсивнее «= 5^-58 дД?»час1«.

ср

3 результате проведения балгнсовнх ксштсакй 17 яроизводсг-ЗЕЕШа ЦИКЛ.03 ДОКазаМ» ЧТО при СХНаСЯ25ЛЪН0 ЗЙЗШ5Х вязхостях разбавлекга£ ££ Езчалхная -скорость провеса является каксинальной и составляет 75-80 л/м^час. Затек сорость процесса линейно сна-¿•сзется а при жсЕцентрация ЗПС равней 16-18 г/а составляет 15 25

В условиях производственного адисла возмохва переработка значительных количеств КН.- Т&бтеягЕратурв процесса 50-7О°С»

Ба -основании лодучекЕих аьхслшхргю сте й определен мгргхгер падения производите-льноси! процесса >от грешна счиет»!, что дозволило сделать вео&содиже расчеты .дхз сргеяизацкя жрупнотоннаг:-кого. производства ислнхжсаш в гаде зФнцентрирозаиой пасты ига в виде сухого порса-л.

йРиЛИТАТИЗННЙ Г1ККШВ ШШ Ъ.ТСШШ В ЕУЛЬТЛ'АЛ ШОЙ .ПШЮСТН» Лилунение с «•оклегочшх рествороа 2ПС - это едка из сайг,-}; слсин^; £ дорого стадо стадий получения васскооч^енннх ¿•ПС. £ля разрусенаа клеток яррдуцевза ж ешользовьлн биохпки-чеекпе .методы с яаквеьв прожженно доступных пуфолитсчесЕгх ферментов — нейтральной а щелочной щротеааы и лкгачесхого дер-1-.е ктн И'О аскллекса (15К). Наименее айь£2квав зжзЕруьт клвтги В. р с1у:у'хь 1^55-13 1].ер1Ектки£ хомилекс жеЕгальнсй протее зы. Более аф?:ективш5 лизнруицее действие .¡да очной дритеезьг лшгн© объяснить, ^с-.пррв^х,. уетекавленш-'н рЕ хздрышза (5*5) и, вгкзхор&х, белее вкрад&нкой спггрфшнсстьв серкнсзс2 ирвтедназк е белкек жлетсчнаЗ степени В. ро1унула.

Ш, синтезируекай Aciincmkes rzcif Preis \'dr Ly-ficus -в течение чеса полноctbd гкзирует вегетативные клетки ст. 1459-33. Характер молекулярно-изссозсго распределения у препарата 2ПС после лизиса 1Ш имеет тееденцив к уменьшении доля высокомолекулярных фракций и увеличен га степени пслкдисперсчсетя". Однако статическое '-"напряжение едмгат, стабгяьность вязкости б присутствии сслей не ухудпмлисьт 3 серта проиыгшенкнх экспериментов уточнена целесообразность фсрнентаглгнсЯ обработки KI Ч.ро1умуха э прсцес-се мембранного разделения. Оказалось, что лря шнттльных кенгект-ргцкях используемых фермгнтов сэоисходит хорошая очистка по белку и углеводам, что кот о сбъястпъ белее элективным воздействием ферментов з условиях динамического эксперимента.

Та кии образов,. биэхс^ичес::;;е иетодн ра ару гения вт.гетатк^ннх клеток В.роХумухб позволяет в сочетании с мекбрагаей технологией выделения ЗПС с достаточной технологичностью получать препарат ЗПС высокой степеньв очистки:.

ОЧИСТКА. DHC Ц ЭЛЕКТРИЧЕСКОЕ П01Е. Для проведения лабораторных и стендовых опытов бала скоаструирсвавР специальная ячейка. При обработке постоянна током KS В.роХумуха 1459-ЛЗ и X.с.р Ciffrpestn's 8162, покеценннх ь пространство }®£ду не селективна мм (нейтральными) лзмбракам!, происходит частичное сбессолнвакис, удаление низхокояекудярних прикесеЯ, лизис бактериальных клеток к, соответственно, безреагенткая очистка з одну технолс:-::чес— кую стадии. При s'»ом оптимальная плотность тока V-5 %\k/ci? к продоллитеднюегь алсктрообраСотки 3-5 часов; За счет очистки з электрическом поле повьпаегся степень чистоты ЗПС лри сохранении высокого в1-1; ода. Выделяемый ЗПС обладает больаей однородностью пи ноле кул ярз кассе, чем логучегэнй при спиртоосгкдснр.и..

- ТВ.

Способ очистки препаратов ЗПС гам ¿¡е годом апробирован при долу-че ьки Есьнтгг.2, пашгиксана и субазкдана.

ШШЭТЩПСВВД СХЕ'А ОЧЬ'СШй"Ботяягш. Яр: всей простсте к -технологичности ¿«ркевтетиваая обработка КЖ Е.ро1укуха не дозволяет получать прозрачные растворы "ЗПС^. Раки определено, что коагуляцию клеток к беглистшх соединений,. содеркадахся в И! В. ро1умуха 1459-13, целесообразно проводить при температуре 75-?0°С и рН 6,5-9,5 в течение 30—¿:С *кнут без леренеливаиия; Затем осадок легко отделяли простым ценгризушраваняеи. Такая коагуляция клеток Б.роХумуха 1459-13 тз пронзводствеаных -условиях привела к кекоторо-ку поте женки раствора ЗПС, однако,, ультрафильтрация цектра^угета на трубчатых ультрафильтра*-.. гоззгашда удалить окрашешше СОеДК-НеНЙЯ,

Сравнительная >;о_рактеристцка двух технологических схем получения высок зачтенного ЗПС (тьбх.Ю показала, что по зкснокнчесгик показателям более предпочтительной даляется ¿¡/ерз^ентатлвная схема очистки, хотя при коагуляции происходит некоторое увеличена вязкостных характеристик, дрепарата пря-зксокяЗ прозрачнос-

ти 0,15 _растзора.

ТабЛКЦЕ

Срав!П1телькая даргктерютика .двух техншагаческих схем -получения в^сокоо'-аденнсгд сплямккса на а епягно-_про1-иеле-нн1-'у условиям__

ЗПп£?."32тел,и когкгаческсго 'С^сзи-'с показатели готозоп 2 процесса 1 птзодугга

Схеке з-ТГЧкстЩ^-Я ЗязуЛстШЗт^,

оку. стп* !.-....^пл ..-г-----ч-Т-»0.1а

р^!11 ^белка Забелка

:»" 01 { 1 1 1 ест !растг:

КОйГУЗШ-

нпепнап :хЫ5.Д> 70+5,0 ®+5»0 66,0 1.8 «,5 65,0

§и.ркакта-

т:ийжк 7+3,5 90+5,0 85,68,0 1,6 3,8

*®кааиеи1_ _ не « не не рег:

шп ~ :меве8 более юнее

65 гл 3,(5

3 производственных условиях по эбеим схемам возможно получение препарата (г.олимиксана СП), соответетвуюце-го требованиям резрьботаннэй нсрдатизяс-техггической документации.

' ОТРАБОТКА 7010341 ОБЕЗЗОНЗАНГ (РАСШШтНАЯ США).

Одной из ируднорззреusyu.tux проблей при обезвогидани''. растзо-ров ЭПС является их высокая ьязкссть. при I~í,5,í концентрации нвтишшх ЭПС сф-Мктнвкая вкзкость водных растворов презакает величину ICO спз (ЗСЗ-З, ЗСО об/мин). Распылительная сушка -роднях растворов ¿колспикеров, з частности, ксантака, полимиксика приводила к частичкой потере реологических свойств препаратов, у\;"2,-кенкв их растзоримости (температура на вхсде в сувилку - I25_¿"C, на выходе - 6С+5°С). Как оказалось, концентрация диспергированных частиц з 0,5% растворе ЭПС ксантана (метод спектрстурЗидкомехрнн) в- присутствии ионов кальция ыске, чем б деионизиразенмой воде или в растворе SaCX. При рЬ *í,C-8,0 з присутствии СаСГ-, она не npesu-аает 3,5%, тогда как з декеннгироранной воде и з присутствия йаCI пpi рН 7,0-7,5 - около 10%.

Еами было показано, 4vc при распылительной сушке ксавтена б

£

присутствии CsCIg (0,15-0,5а) получается иелкодкепзрений порозск, которьТ: при 20"С и рН V8 рзстзсрлсч я з образованием l'¡. раствора менее чем за 2 чзса. Диалогичный эффект бкл об и гружен нами и для полимиксгна. Так, при суике 1%. концентрата гэдкмиксана с добавлением 0,15?;' СэС!^ и рН раствора, разным 7,5 бил получен мелкодисперсный порсок сьетло-лзсочяога и.ьетаг растворимый при 20°С за 2 часа с вязкостьв,. аналогичной кативкому (до> распылительной суапнО; препарату.

1E7H0J!СГИЧЕСКДЯ СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИШСШ Б РАЗЛИЧНЫХ Т034Е-HUX ДОК&Х. 'В осыгко-проиывлеиннх услозяях «5ша отработана т?;гно-логпчйскйя-схема'получения мезопмиейхарида пояимиксана в раздич-

ках товарных формах:

- жидкой (пазгмахсан . -,

- двсто образней (иодиииксан - паст ообра знай) ; - '__"_____

- сужай технический, {позшккевн - Юз

- су* о" васокрсчащенныЯ (лороаасообразннй лыдаззссан - £31)»

Штателгьяуа сроду, состояла из грахкала (2,5-330#), ЕШ

С0.1-0,20 и минеральных смей стерщжзввалш (раздельно угаеведа и азотистые компоненты} в установке непрерывной стерилизации при в течение 15 кинут к напразжяли в стерялвшг2 фершвтер Угеок = 63 .V3. Засев осущестдляги лосезнни за сериалом, внргщеннш В2 среде, ссдернащеД 1,55 крах «ада» 0,75? БШ и кинеральнне сади в течение 16-24 чзсев".

Процесс культивирования гроведиш шри температуре 28+1°С я давлении в ферментере О,М-Э,С5 Ша^ Пчдачу воздуха производит . из расчета 0,5-0,6 вбъеаа/т 1 вбъе« питательной средь, з минуту пер вне 16-20 -чесов, затек еэргщйЕ увелггивалтт до 0,7-0,8 объема на I вбъек кухьтурахЕпой хидкости- Жорректяровгу рН вроизводшш , 10% растаерсм ЖаОН до 15-20 часа роста ^кв уровне 6,6-7,2). Ез 24-28 часу роста при зябкости, ирезнсадгей £0 сиз С5СН-313Г0 об/хин^ проводил дкгиз 5 м3 .сгсркдьвоЯ году» Брцдзагитгазаость гультпвп-р0В2КИЯ - Зб-йЗ 'часов.

По окончании ферментации ъугьтурЕлънув гцдк.ог?в прстревгхи при теетературе £0-В0°С з течение 30-й) »¡пнут для коагуляции а тхе-ззддпза клеток продуцента з присутствии 0,4-0,6? З-оргаазгна г после Ехпзё&екгн до дспазюгг£гьн2 вносили ^ергглгн из расчета 1% 'Сб.

Стера ¡изнашаозЕВйя мдайеткзироввшей юг (шшпзиксак Е,*^^^ б^-13-15б-Г.С)- л1пкгЕго.влгкне Йипглгкчешжх азаотх средств, под-

ч

средств,, для шнлшодееевннн в зоне Черноб^^гской ¿АЭС, э текстигъноП зфокшденности в эшяехязе танпонента Енихтув-

шгкх ^растворов ж др.

-

Для получения пестообразного прзтгарата культурчльнув гид-кость, д зависимости от вяз~.ости, разводили водой в 2-5 раз, се- . .парирозали на сепараторах ДСЭ-Б со скор о стья подачи 700-8С0 л/час и подавали на ультрафилксрацкоянуп установку с трубчаткмй ультрафильтрами Б1У 0,5/2 и нЕыбранЕми Ф-1 <Тр0(5 * 37,5 *£). Концентрирование фугата проводили при температуре 55-бО°С до достижения показателей, согласно Т?т - 6^-13-128-88. Выход препарата 15СкгЛг.

При получении сухого препарата полиииксана (1У0Пб4-13-139-89), процесс концентрирования в очистки вели в режиме периодического долива всдоП для достижения требования НТД. При IX концентрации ЭПС вносили стабилизатор- реологических свойств - кальций хлоргл-тый (0,15-0,52) к пра рБ ЧД)-8,С высушивали ев .рйспылизкльной сушняке (У/'го Шпй&г ) -иди СРУ 0,5/2. Заход препарата 8-10,0 кг/м3.

Зиаокоочиаеаннй полимихган (1УОТ 64-13-133-8?) получали по разным технологическим схема»:

1-е коагуляцией балластных соединений при рН 8,5-9,0 и тегаера-туре 75-вО°С с последующей сепарацией» ультра$ильтрац ие й и спиртоосаадениеи (иди распылительной суикаа),(Заход. 3-5 кг/и3); Если высушись культуралЕнуу жидкость, 5 затем перерастворить в воде, то коагулянта клеток В.роХуыуха моана проводить при естественном рН, что не приводи?- к деацетилировании ЗПС. В данном случае аозиокне получать- абсолютна прозрачные'растворы ЗПС, обрай/ацего вязкда тик остр опние гели; П - с лкзи'сом кяеточких стснек цодочнаП протеезой или МК,. дга-фильтрацией лиэога с последуг-дик обезвоживанием препарате (спиртоосакдеииг или распылительная сувха). (Заход 5-3 кт/м3),

Медлкобиологкческке исследования псяимпксаш, прозе денные в Институте гигиена, г,Мания (гЛСиев) з 3969-1952 г.г. позволили ре-кокендсаать а м кипя сан а питашге человека э дозе 25 иг/кг в сутки. ' ' " ,

- аз.

вывода.*

Г. Разработана технология получения препар 22а подикшсан а •различных товарных формах:

- "нслиетксан - К" жидкая форма - Ю0$ выход от культурадъной яидкостк;

- "подикиксан на стообразнай" - 80$ выход от содержания в

кудьтуральной яцдкоети кли 150 кг/ма; • :

- "полишксан - П" - сухой технический препарат, выход 60%

от содержания пйтик-ксина в кудьтурэльной жидкости, или 8-ПЗ кгД3;

- "шшпляссан - СП" - сухой дасокоочицевный препарат, выход

от исходного «дергания з .культургльяоЗ задкости или 3-5 кг/м3.

Предлснен в качестве продуцента ЗПС палимиасана быстрорастущий агам* бактерий З.рс1умуху Ц69-23, ибладасдиВ повышенной способностью к биосинтезу, стабильность*) а олисахаридообра зевания ц вкссксй скоростыз роста СА.С. £ 35^595)»

3» Изучена физиология питания В~ро1умуха 1455-13, кинетика его роста и некоторые законо*йрнос:га биосинтеза ЭИС псликихсака.

ч. Разработан и ттистзгфозан состав производственной .феркеЕ"-та цк сн но Л питательной среды: клахкал кукурузная - 3,0-4,0ЕШ -0,1-0,2а» /-аюлеза - 0,01-0,06?, хлорид кальция - 0,01-0,05л (А.С. В 1561512)» что возводило з 1,3-1,5 раза увеличить вихгд целевого продукта а сократить время биос;:нгеза.

Г'становлен^оптииальннБ возраст посевксго материала - зтс 12-24 часа» Подобрана основная питательная среда для внргпивания • вегетативного посевного интервала: жрехюл — 1,5%, БЕК - 0,75%,

6. Установлены оптимальные параметры культивирования продуцента ЗЛС полимикс&нг рН исходной летательной среды — 7,0*0,2, затеи необходим корректировка рЕ Ю* растворен М-ОВ дс значения 6,6-7,0 до 16-20 часа хэстг. При росте аффективней вязкосга в фер,1кьтатсре до значений, -срезьгыиих ЕО сиз целесообразен долив ведой (15-2Ся) не 2^-26 часу роста.

Реклм азрацип в процессе биосинтеза ступенчатый: 12--16 часа роста - 0,5-0,6 к3 ее I ж2 шгггхехьвой средд -з минуту» после 16 часа роста - увеличение азрацеи до 0,7-0,8 ы3 з минуту на I м3 культуральней лкдаясти в минуту.

7. С псисцъо метода спектрогурбидкиетрки. разработан способ ло.цучеагя быстрорастворим* сухпх препсратох ЭПС (A.C. У' 1500673). В I% рйстзор.2ГСС рнссгаи стабилизатор реологических свойств -калы;!.:! хлористый СО,.15-0,55) при pH 4,0-3,0 ' гасушквали на распылительной сушилке при. тешератур-:, на sx-здв 125-150°С, на выходе 65+2°С. Препарат мокко пркт-хнкть ¿дя интенсификации Дуровых работ при бурении сктгеин на неуть и газт

8. Разработана технология получения високэечяцекнсго поликикса на (TYqu 64-I3-138-£9) по ?вум технологическим схемам: - (I) - с ковгу.чяцяеЛ балла'.-тньм соединении пр^ рII 6,5-9,0 и -хеклерьтуре 75-80°С и (П) - с лиэ-лсом. клеточных стенок делоч:.оЙ про«ггзой при Л «ЕС, с после дувшей уяьтрафдаьтрацгге й :i спгтрт соседние и или распылительной супкой.

Сфера применения виссгсосч;Е;енного полияяксана - пплезая ;; косметическая прешаленность (па клуни, кремы и др.).

адетше дяссермш от?.шж> в сзезлшх работах:

1. Еагс.ховск?л 3.1-, Багорная О.В., Шивзхсренке 1Л1-» Григориев Г.?.

ВозкСйЛооги -управляемого биосинтеза у рзагичанх продуцентов-------

зЕЗШслксахаглцов, *Ьпо:£СК5грсия -S3" Теср.сснсза микробной конверсии,: Тезиса докладов конференции, Рига, .£3, с. 25.

2. БОлеговекая В.А., ШиннарсЕво Х.Н., Гпр° Т.А-, Нагорная 0.3. Зияние условий культавнровакия ш синтез ЗПС и спорогенез у станков BaplLuS poL^mux/z- г °Биолсньгрскя-£бв Теор.основа ю!крабГк.онверсии, Тезисы д спадов конференции, Рига, 68, с. 273. Еолояозсная В.A., JÜKEicspeEso 1.Б», Григорьев ЗГипитируада

факторы в хрупнствннЕьшоь: производстве -ЛЕробньз полисахаридов ^Биопонвсрсия -86" Тевр.основ* iebj¡d6hd1í ювверсии, Тез.донаа-доз £сы;ерекщж, Pirre, 63, c-28i

Григорьев E^í., Tcxc-xOx-.c^ea BJU, Гпро "ГЛ., Жалебузаръ В.Г., Яевасин. С. К., Еекдероз Б.А'., Елухзаа £.3-, Дерябин В-В- -Питательная среда для всрадизшпя: лтакиг бактерий Bacilas jiaiumyxcr БКПМ B-30I5 — Ají сдуцЕштз зкз сп оли идз j А »С» СОСЯ? I56I5I2, 29Е8, (неояубл.Х-

5. Григорьев Г-Б,, Елоховская Епнкареыш I.F., Халабузарь З-Г», ,Дерябин 3.3-, Старухина Х.А. - СЬособ получения полисахаридов тина ксактана, А. С.СССР £ 1500673, приоритет 26.06.87, апублХ 15.С8.89, Б.Tí. ЁХ.

6. Григорьев Е.5>., £с£всовскгя З.А., Xaia6yзарь З.Г-, Хравец 2.$., Дерябин З.В., Бовина Е-З.С - Способ вкделения ахвоаслисахарядсв, JL C. СССР 2 1549996, лрперетет 08Л>7,87,. Б-К. 1 70„ публ.-I5-Ü3-90.

7. Еолсховсгая В. А., Натерши 0.3», JtepEiESK Н-Е», Нинларенко J.E., £ергбкн 3.3-, Гаовдкг P.ÍÍ,, Майки ЕЛ. Етакн £^a¿¿¡ts

Y&- ШПМ Б-*»502 - лредуцент висохсзлагсго sacrcrc оюза-лолисаха-рнда (Заявка Ъ МТЗТП/13, гслоз-ршлгнпе 5 I549S4 от 5ЛХ.?0гО.

8. Григзршез Толстовская ЗЛ-, Евртиаск 2LT-, Иванов B.J., Еогехсвс;си2 Дерябин В-В- а ;др- - Способ зндехения зкзо-.пслисехврида из жультургаи.что2 еидевстй, А.С. СССР 5 I66I2I6, приоритет :25.С5.8В» гпубл; 07.07'Л92» £ 25.

Гвсзгяк Р.К«, ;Ме?хс К.К., GbuoSeeeícü Зсцедгд Еохо-:хсескея 3JU — Влияние сезонности am ¡образование -зкатшлисаха-

рчде icid^onicms campesiris р.ъ campes-iris еТ62,. Кккробиод;. яур'.шл, Г55С, T 52* й 3, с. 3D-33.

10. Даря 6тВ- iför Старухина tili* Чистова Т.Д., Бузин А.А;, Катю хина T.R., ЯроцкиЯ В.А., Болоховскея з.А., Шинкаренке i.h. и др; Способ получения акзопслисахаридз5, AiC. СССР S 1658293,. приоритет 04.0К89, nyöa'i 15ЙЕ2.9Г, Бал. й Чб.

II» Марталок H.H., Баюхсзская B.Ai, Глевацкэя Поджарая Tin. Яслитакиг :-£мбран. сухог? хранения я подбор ренимов очистки различных скзопглисахаридоь. Гезисн Всесоюзной конференции "Мембранные процессы в биотехнология, ме дицине "к пищевой промыидек-' ности", М.7. 1991, с. 53. . \

12; Болоховская B-AW Иванов В. Л-,. Еодсховский В .В., СоПченко F.Bi. йспс льзовакке трубчаотх ультрафильтров при получении экзопсли-сахарида "аоляниксан1'", Тезисы Зсесоазной конференции "Шкбран-нке процесса в биотехнологии, медицине и лицевой промышленности", Н-, 1991» с» 5V.

13. Еслоховсжая В.А.', Григорьев Ei®". - Возможности мембранной технологии получения экзотолисахаридоз микроорганизмов - Тззисы докл. ВсесоозноЯ конференции "Мекбргнные процессы в биотехнологии, медицине в пищевой пхоиытагешссти, П., 1991, с. 56.