Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Оценка пестицидной интоксикации некоторых рыб и амфибий в период раннего онтогенеза
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Оценка пестицидной интоксикации некоторых рыб и амфибий в период раннего онтогенеза"

На правах рукописи

ПОЛУЯН АННА ЯКОВЛЕВНА

ОЦЕНКА ПЕСТИЦИДНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ НЕКОТОРЫХ РЫБ И АМФИБИЙ В ПЕРИОД РАННЕГО ОНТОГЕНЕЗА

03.00.16- экология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону — 2006

Работа выполнена в ФГУП «Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства» (АзНИИРХ), г. Ростов-на-Дону

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Корниенко Галина Гавриловна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Кренева Софья Викторовна

доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Дементьев Михаил Сергеевич

Ведущая организация: ФГУП «Федеральный селекционно-

генетический центр рыбоводства», г. Краснодар

Защита состоится 15 декабря 2006 г. в 16.30 на заседании диссертационного совета К 212.208.07 при Ростовском государственном университете по адресу: 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Большая Садовая, 105, РГУ, ауд. 304. (E-mail: ecology@bio.rsu.ru, факс: (863) 263-87-23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного университета: 344006 г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 148.

Автореферат разослан « & » ноября 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

О.Ф. Пелипенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследований. Пестициды являются одним из существенных антропогенных химических факторов, вызывающим неблагоприятные изменения экологической обстановки природной среды (Врочинский, 1975; Лукь-яненко, 1987, 1989; Курляндский, 1996; Потапов, Ястребов, 1998; Соколов и др., 2001). Обладая высокой биологической активностью, они вносятся в окружающую среду, способны циркулировать и накапливаться в разных звеньях экосистемы (Kidd at al., 1995; Ракитский, 1990, 1997; Коропенко, 2004). Поступая в живые организмы с водой и пищей, пестициды воздействуют на физиоло-го-биохимические процессы, затрагивая при этом репродуктивные функции гидробионтов. Вследствие этого, изучение влияния пестицидов на ранние этапы развития живых организмов является необходимым условием обоснования безвредных уровней содержания в объектах окружающей среды, в том числе, в воде рыбохозяйственных водоемов.

Использование осетровых в лабораторной практике с каждым годом становится затруднительным в связи с проблемой их исчезновения из природных водоемов. Назрела необходимость поиска альтернативных тест-объектов, в соответствии с широко распространенной в научно-исследовательской практике концепции трех R (réduction, refïnement, replacement): снижение, уточнение, замена (Катаскова, 1999; Glomot, 1999; Sterling, Rispin, 2002). При выборе тест-организмов необходимо учитывать такие критерии как массовость вида, короткий цикл онтогенеза, чувствительность к действию ксенобиотиков, наличие прикрепленной икры, простота отлова и анализа биологического материала (Строганов, 1971; GESAMP, 1995). Этим требованиям отвечают бычок-кругляк и ребристый тритон.

Амфибии активно включены в трофические связи водоемов, имеют большое значение в осуществлении связей различных биоценозов. Большинство видов хвостатых амфибий постоянно живет или размножается в воде, а многие наземные виды проводят в водоемах большую часть жизни. Однако, методическая схема установления рыбохозяйственных ПДК в стандартном наборе тест-объектов не предусматривает проведения исследований на амфибиях.

Исследования тератогенности водных сред на основе массового визуального анализа организмов позволяют выявить специфические уродства и нарушения, а в некоторых случаях достоверно определить химическую природу пол-лютантов, тем самым, сокращая трудоемкость биотестирования (Покоева, 2002, 2003). Изучение фенодевиантов и поиск специфических тератогенных эффектов является перспективным направлением в системе биоиндикации загрязняющих веществ

В этой связи актуальным является изучение уровня токсического воздействия пестицидов на стадии раннего онтогенеза различных представителей гидробионтов, а поиск доступных методов биоиндикации их токсического действия является приоритетным направлением современной науки. Эта задача является актуальной с экологических позиций.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы: дать оценку воздействия пестицидов на ранний онтогенез гидробионтов в условиях экотокси-кологического эксперимента и обосновать тест-объекты при изучении токсического воздействия пестицидов.

Для достижения поставленной цели были сформулированы и решены следующие задачи:

- Исследовать толерантность бычка-кругляка (на стадиях раннего онтогенеза) к водным средам разной солености в экспериментальных условиях.

- Установить токсикометрические параметры, дозоэффективные зависимости пестицидов: Адмирал (д.в. пирипроксифеи), Батыр (д.в. тирам и д.в. тебу-коназол), Бетанал (д.в. фенмедифам и д.в. десмедифам), Мерлин (д.в. изоксаф-лютол), Фуроре-супер (д.в. феноксапроп-П-этил) для икры русского осетра, бычка-кругляка и ребристого тритона; для предличинок русского осетра, мальков бычка-кругляка и личинок ребристого тритона.

- Провести сравнительный анализ токсикорезистентности к пестицидной интоксикации рыб и амфибий на ранних стадиях онтогенеза.

- Исследовать воздействие пестицидов на постэмбриоиальный период при хронической экспозиции.

- Исследовать тератогенность и выявить возможные специфические эффекты воздействия пестицидов на рыб и амфибий.

Личный вклад автора заключается в непосредственном выполнении экспериментальных исследований по всем разделам диссертационной работы, проведении анализа, систематизации и обобщении экспериментальных и литературных данных. Комплексные исследования проводились в отделе рыбохо-зяйственной токсикологии ФГУП «АзНИИРХ» совместно с к.б.н. Катасковой С.И., К.6.И. Щербаковой Н.И. По результатам исследований научным коллективом с участием автора опубликован ряд работ, где проанализирован полученный материал и включены основные результаты диссертации.

Научная новизна работы.

- В работе впервые проведен сравнительный анализ реакции бычка-кругляка, ребристого тритона и русского осетра на ранних стадиях развития при пестицидной интоксикации.

- Исследована толерантность бычка-кругляка в период раннего онтогенеза к соленой и пресной воде в условиях лабораторного эксперимента.

- Разработаны методологические основы постановки хронического эксперимента для диагностики состояния рыб в ранний постэмбриональный период.

- Выявлены характерные и специфические тератогенные эффекты некоторых пестицидов, что позволяет установить качественные показатели загрязнения при мониторинге природных вод.

Теоретическая и практическая значимость. Проведенные исследования позволяют предложить эвригалинного бычка-кругляка для лабораторных исследований как в пресной, так и в солоноватой воде. Полученные данные о достаточно высокой токсикорезистентности бычка-кругляка определяют возможность использования его в качестве тест-объекта при разработке ПДК для воды пресных и морских объектов.

Данные по изучению реактивности ребристого тритона в период раннего онтогенеза позволяют рекомендовать его в качестве тест-объекта для проведения токсикологических исследований.

. Исследования хронической пестицидной интоксикации различной экспозиции для раннего постэмбрионального развития рыб позволили усовершенствовать методический подход.

Выявленные тератогенные эффекты позволяют использовать рыб и амфибий на ранних стадиях онтогенеза для биотестирования загрязнения природных вод. В результате таких исследований возможно определение качественного состава поллютантов и, тем самым, сокращать трудоемкость биотестирования.

Практическая значимость работы заключается в следующем: определены токсикометрические параметры и дозоэффективные зависимости воздействия изученных пестицидов для осетра, бычка-кругляка и тритона. Установлена чувствительность рыб и амфибий к пестицидному загрязнению на эмбриональном и раннем постэмбриональном этапах онтогенеза. Выявлены специфические тератогенные эффекты воздействия пестицидов.

Комплексными исследованиями сотрудников отдела рыбохозяйственной токсикологии ФГУП «АзНИИРХ» установлены ПДК 13 пестицидов («Перечень рыбохозяйственных нормативов: предельно допустимых концентраций (ПДК) и ориентировочно безопасных уровней воздействия (ОБУВ) вредных веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение», М.:ВНИРО, 1999).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Бычок-кругляк на ранних стадиях развития является чувствительным к интоксикации видом рыб и может использоваться в качестве тест-объекта при разработке ПДК загрязняющих веществ для воды пресных и морских водоемов, имеющих рыбохозяйственное значение.

2. Ребристый тритон на ранних стадиях развития является чувствительным к интоксикации видом и может быть рекомендован для использования в качестве тест-объекта при разработке ПДК загрязняющих веществ для пресноводных водоемов, имеющих рыбохозяйственное значение.

3. Токсический эффект изученных пестицидов для гидробионтов определяется длительностью воздействия, этапами интоксикации, химической природой действующего вещества и биологическими особенностями гидробионтов.

4. Специфический тератогенный эффект у тест-объектов при воздействии пестицидов, выявленный в лабораторных экспериментах, может использоваться как информативный маркер при индикации загрязнения природных водоемов.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на 13 научных конференциях и съездах, среди которых: IV Международная конференция Балканской Ассоциации по защите окружающей среды «Глобальное загрязнение» (Эдирн, Турция, 2001); Международная научно-практическая конференция «Стратегия развития аквакультуры в условиях XXI века» (Минск, Беларусь, 2004); Международная научная конференция «Актуальные проблемы экологической физиологии, биохимии и генетики животных» (Саранск, Россия, 2005); Международная научная конференция «Проблемы устойчивого функ-

ционирования водных и наземных экосистем» (Ростов-на-Дону, Россия, 2006).

Публикации: по изучаемой проблеме опубликовано 25 научных работ. Объем публикаций — 1,409 п.л., доля участия автора — 59%.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 159 страницах печатного текста, состоит из введения, четырех глав, обсуждения полученных результатов, практических рекомендаций, выводов, списка литературы. Работа содержит 81 таблицу, 6 рисунков. Список литературы включает 194 наименований, в том числе 49 зарубежных источников.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВЛИЯНИЯ ПЕСТИЦИДНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ НА ВОДНЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ РЕСУРСЫ

Освещены вопросы воздействия пестицидного загрязнения на водные экосистемы. Изложены данные литературы о негативном влиянии пестицидов на основные показатели жизнедеятельности рыб и амфибий в период раннего онтогенеза. Приведены сведения об использовании в экотоксикологических исследованиях различных представителей гидрофауны в качестве тест-объектов. Показано значение тератологического анализа при проведении биотестирования загрязнения природных водоемов. Обсуждаются вопросы использования установленных специфических нарушенийразвития в качестве биомаркеров и перспективы данного направления исследований.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа проводилась в отделе рыбохозяйственной токсикологии ФГУП «АзНИИРХ» в соответствии с научно-исследовательскими работами Министерства сельского хозяйства РФ, Федерального Агентства по рыболовству согласно Государственной программе «Научно-техническое обеспечение развития рыбного хозяйства России», проект «Экология» в 1997-2006.

Объектами исследования явились представители разных систематических групп водных организмов, на которых оценивали воздействие токсических веществ:

1) хрящевые ганоиды - икра и предличинки русского осетра (Asipenser quldenstcitti),

2) костистые рыбы - икра и мальки бычка кругляка (Neogobius melanostomus),

3) хвостатые амфибии - икра и личинки ребристого тритона (Pleurodeles waltli).

Исследовали 13 пестицидов отечественного и импортного производства (Адмирал, Батыр, Бетанал, Вираж, Карате-зеон, Клинер, Кортес, Ланцет, Матч, Мерлин, Премис, Силк, Фуроре-супер), из них:

- для определения и сравнения ответной реакции осетра, бычка кругляка и тритона изучено 5 препаратов;

- для установления зависимости токсического эффекта пролонгации хро-

нического эксперимента для бычка-кругляка — 6, для осетра - 9 пестицидов.

Оценивали воздействие пестицидов по 8 биологическим показателям и проведено 8576 анализов, для чего использовано более 150 тыс. биологических объектов. Основные направления и объем исследований представлены в табл.1.

Предварительным этапом исследований проведено определение степени адаптации бычка-кругляка (на стадиях раннего онтогенеза) к воде разной солености. Определение возможности использования этого вида рыб для исследований в лабораторных условиях оценивали по следующим показателям: выживаемость эмбрионов и мальков, продолжительность инкубационного периода, продолжительность выклева, морфологические параметры мальков.

Определение степени токсического воздействия пестицидов на эмбриональное и раннее постэмбриональное развитие рыб и амфибий проводили согласно методическим рекомендациям («Методические указания по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение», 1998). На основании данных по выживаемости эмбрионов, предличинок, мальков и личинок рассчитывали токсикометрические параметры (JIKiö, JIK50, ЛК84).

Данные тератологического анализа подвергались статистической обработке для выявления недействующих (ЕСо, мг/л) и пороговых эффективных концентраций (ЕС 16, мг/л) с использованием регрессионного анализа в соответствии с методическим руководством («Руководство по определению методом биотестирования токсичности вод, донных отложений, загрязняющих веществ и буровых растворов», 2002).

Оценку токсического эффекта пестицидов для раннего постэмбрионального развития рыб в зависимости от постановки хронического эксперимента проводили в двух вариантах: 1 вариант — исследования на мальках бычка-кругляка и предличинках осетра, инкубированных в токсических средах пестицидов от стадии ранней бластулы до рассасывания желточного мешка; 2 вариант - исследования на мальках бычка-кругляка и предличинках осетра, инкубированных в токсических средах пестицидов от выклева до рассасывания желточного мешка.

Степень токсичности пестицидов для раннего постэмбрионального развития рыб в зависимости от варианта хронического эксперимента оценивали по выживаемости, патоморфологическим признакам, физиолого-биохимическим показателям - длине и массе тела, содержанию общих липидов по методу Фол-ча (Folch at al., 1957). Показатели состояния тест-организмов подвергали статистической обработке с привлечением t- критерия Стьюдента (Лакин, 1973).

Тератогенный анализ токсического дествия препаратов проводили на ключевых стадиях раннего онтогенеза, когда нарушения развития проявляются наиболее четко — на выклеве и на стадии рассасывания желточного мешка. Рассчитывали процент уродливых особей (Гинзбург, Детлаф,1969; Гинзбург, Шмальгаузен, 1981). Результаты подвергали корреляционно- регрессионному анализу в соответствии с разработанными методами (Методические указания..., 1998; Руководство..., 2002).

Таблица 1.

Основные направления и объем исследований__

Обьем

№ Направление Объекты Водная Показатели исследований

п/п исследований исследований среда (кол-во

анализов)

1. Оценка парамет- Икра и Пресная, 1.Выживаемость эмбрионов

ров развития мальки 11%0, и мальков 32

бычка-кругляка бычка- 19%о 2.Длительность инкуба-

на ранних ста- кругляка ционного периода, продол-

диях онтогенеза жительность выклева 38

при инкубации в З.Морфометрические

воде разной параметры мальков:

солености а.длина тела 453

б. масса тела 453

2. Оценка токсико- 1 .Икра и Пестициды 1 .Выживаемость

резистентности мальки Адмирал эмбрионов, предличинок,

русского осетра, бычка- Батыр личинок и мальков 630

бычка-кругляка кругляка Бетанал 2.Токсикометрические

и ребристого 2.Икра и Мерлин параметры 125

тритона предличинки Фуроре-супер 3. Длительность инкуба-

русского ционного периода, скорость

осетра прохождения стадий, про-

3. Икра и должительность выклева 630

личинки 4.Морфометрические

ребристого параметры мальков, личи-

тритона нок ипредличинок:

а.длина тела 594

б. масса тела 594

5.Корреляционно-

регрессионный анализ 28

б.Тератологический анализ 690

3. Определение Мальки Пестициды 1 .Выживаемость

зависимости бычка- Адмирал эмбрионов, предличинок и

токсического кругляка Батыр мальков 630

эффекта Бетанал 2.Токсикометрические

пестицидов от Кортес параметры 150

варианта Мерлин 3 .Морфометрические

постановки Фуроре-супер параметры предличинок и

хронического Предличинки Пестициды мальков:

эксперимента русского Вираж а.длина тела 1110

осетра Карате-зеон б. масса тела 1110

Клинер 4.Биохимические

Кортес показатели:

Ланцет а. общее содержание

Матч липидов 594

Премис 5.Тератологический анализ 690

Силк

Фуроре-супер |

Для оценки перспективности использования бычка-кругляка и тритона ребристого на ранних стадиях онтогенеза в качестве тест-объектов в токсикологических исследованиях проведен корреляционно-регрессионный анализ данных токсикорезистентности. Для статистической обработки результатов исследований использованы программы STATISTICA и Microsoft Excel'XP в среде Windows "ХР.

Автор выражает глубокую благодарность д.б.н., профессору Гвозденко С.И., к.б.н. Катасковой СЛ., к.б.н. Щербаковой Н.И и к.б.н. \Шепило 1Щ оказавших большую помощь в подготовке и проведении экспериментов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Токсическое воздействие водных растворов пестицидов на гидро-бионтов в период раннего онтогенеза.

Определена степень адаптации бычка-кругляка (на стадиях раннего онтогенеза) к воде разной солености; установлена возможность использования этого вида рыб для исследований в лабораторных условиях. Основные параметры развития бычка-кругляка представлены в табл.2.

Таблица 2

Параметры развития бычка-кругляка в экспериментальных условиях

Параметры Инкубация в пресной воде Инкубация в воде соленостью

11%0 19%0

Икра

Гибель, % 10,4 ± 4,069 5,2 ± 2,059 7,2 ± 1,356

Инкубационный период, сут 12-14 12-14 12-14

Продолжительность выклева, сут 2,7 ± 0,255 3,4 ±0,187 3,8 ± 0,479

Патоморфологические признаки отсутствие

Мальки (5 суток)

Гибель, % отсутствие

Длина, мм 8,712 ±0,032 8,432 ± 0,072 8,400 ± 0,083

Вес, мг 4,521 ±0,045 4,281 ±0,030 4,234 ± 0,082

Патоморфологические признаки отсутствие

Выживаемость эмбрионов бычка-кругляка в соленой воде была выше, чем в пресной. Процент естественной гибели эмбрионов содержащихся в пресной воде не превышал возможный для лабораторных и токсикологических исследований. Гибели мальков и патоморфологических признаков не отмечалось. Средние значения морфометрических показателей мальков уменьшались с возрастанием солености среды. Вариации морфологических показателей личинок, вызванные действием солености в период инкубации, определяются как структурные адаптации, возникающие в ответ на осмотический стресс; причина -эффект дегидратации (Шекк и др., 1991; Рыкова, 1998; McKenzie et. al., 2001).

Результаты исследования степени адаптивности бычка-кругляка к средам различной солености показали, что данный вид рыб может применяться в качестве тест-организма для проведения лабораторных испытаний в пресной и соленой воде. Бычок-кругляк является перспективным видом рыб для нормирования загрязняющих веществ в воде пресных и морских водных объектах.

1.1.Токсикологическая оценка пестицидного воздействия на ранний онтогенез рыб и амфибий.

Результаты проведенного исследования токсичности пестицидов свидетельствуют об угнетении обмена веществ у осетра, бычка кругляка и тритона в период раннего онтогенеза, что может привести к общей депрессии всех жизненных функций. Это выражается в приостановке роста, уменьшении массы рыб.

Величина токсических эффектов положительно коррелировала с увеличением дозы токсиканта. Максимальное угнетение пестицидами нормального развития отмечено у осетра и тритона. Исследования воздействия препаратов на жизнеспособность и физиологические показатели икры оценивали по проценту выживаемости, токсикометрическим параметрам, динамике выклева. Наблюдения за выживаемостью определили наиболее токсичный для всех эмбрионов препарат - фунгицид Батыр. Из всех изученных пестицидов наименьшая гибель эмбрионов осетра наблюдалась в растворах инсектицида Адмирал, а бычка и тритона в токсических средах гербицида Мерлин.

Исследования влияния препаратов на выклев организмов показали, что пороговые концентрации для тритона по этому показателю были в 2,2 - 7,4 раз меньше, чем пороговые концентрации по выживаемости. Таким образом, для эмбрионов тритона момент выхода из зародышевых оболочек является наиболее критическим в эмбриональном периоде.

По показателям выклева бычка только в растворах гербицида Фуроре-супер отмечалось немного большее токсическое действие, чем по данным выживаемости. В остальных токсических растворах значения пороговых концентраций по выклеву были выше в 1,3 — 12,9 раз соответствующих параметров выживаемости бычка. Следовательно, выход из зародышевых оболочек не является критическим периодом. Это объясняется особенностями раннего онтогенеза бычка-кругляка: из оболочек выклевывается малек, имеющий вполне сформированные системы жизнеобеспечения. Наибольшей чувствительностью к воздействию внешней среды кругляк обладает в процессе формирования организма в зародышевых оболочках.

Эмбрионы осетра проявили избирательную резистентность к растворам пестицидов в момент выклева. Токсические среды пестицидов Батыр, Бетанал и Фуроре-супер в большей степени влияли на выклев эмбрионов, чем на их выживаемость. В растворах пестицидов Адмирал и Мерлин отмечена обратная тенденция. Результаты, представленные на рис. 1 и 2, дают наглядное представление о токсическом воздействии пестицидов и степени токсикорезистент-ности гидробионтов на стадии икры.

2,5 2 1,5

1 н

0,5 0

-0,5 --1 --1,5 -

га

п!

£

ф ш

□ ОСЕТР

□ БЫЧОК

о.

Рис.1. Влияние токсических растворов пестицидов на выживаемость эмбрионов

□ ОСЕТР

□ БЫЧОК

Рис.2. Влияние токсических растворов пестицидов на выклев эмбрионов

Исследования воздействия препаратов на жизнеспособность и физиологические показатели гидробионтов в ранний постэмриональный период определили, что наиболее токсичный для всех тест-организмов является фунгицид Батыр. Из всех изученных пестицидов наименьшая гибель наблюдалась в растворах гербицида Мерлин (рис.3). Анализ параметров длины и массы тела показал, что пороговые концентрации токсикантов по морфометрическим параметрам находились на уровне недействующих концентраций по выживаемости (рис.4). Это подтверждает высокую информативность этих линейных показателей о негативных процессах, протекающих в организме гидробионтов.

Исследования пестицидной интоксикации показали, что все изученные препараты обладают выраженным токсическим действием на рыб и амфибий. Выживаемость подопытных животных находилась в обратной зависимости от концентраций токсинов. По степени уменьшения токсичности препараты располагаются в ряду: Батыр > Фуроре-супер > Адмирал > Бетанал > Мерлин.

Сравнительный анализ токсикорезистентности рыб и амфибий позволил установить, что наименьшей устойчивостью к растворам пестицидов обладают осетр и тритон. Рассчитанные эффективные и пороговые концентрации препа-

ратов подтверждают многочисленные литературные и собственные натурные данные о значительной реактивности осетра к действию растворов пестицидов. Эмбрионы и мальки бычка-кругляка более резистентны к токсическому воздействию поллютантов. Результаты исследования представлены в табл. 3.

4 -

3

о

III 2 -

о

о 1 -

О) о 0 -

-1 -

-2 J

£

со

из

I

0) ш

□ ОСЕТР

□ БЫЧОК В ТРИТОН

8.

о g

о. Е

Рис.3. Влияние токсических растворов пестицидов на выживаемость гидробионтов в ранний постэмбриональный период

3 2

0

2 1

1 о

-1 -

-2 -

s £

ri

i

с; о.

CD

□ ОСЕТР

□ БЫЧОК ■ ТРИТОН

m

Рис.4. Влияние токсических растворов пестицидов на морфометрические показатели гидробионтов в ранний постэмбриональный период

По результатам проведенного анализа токсичности пестицидов были установлены лимитирующие концентрации веществ (Lim) для тест-объектов. Данные величины используются для нормировании пестицидов при разработке ры-бохозяйственных ПДК.

На основании проведенных исследований установлены корреляционно-регрессионные зависимости между пороговыми и лимитирующими концентрациями пестицидов для бычка и тритона и соответствующими параметрами осетра. Корреляционно-регрессионный анализ, проведенный между величинами loglO выявил достоверную прямолинейную зависимость. Диапазон коэффициентов корреляции для связи осетр/бычок составил от 0,78 до 0,92, для связи осетр/тритон — от 0,71 до 0,96. Данные исследования представлены в табл. 3.

Таблица 3

Параметры токсичности пестицидов в период раннего онтогенеза рыб и амфибий_

Эмбриональное развитие Раннее постэмбриональное развитие

Наименование Выживаемость Выклев Выживаемость Морфометрические Нш

пестицида показатели

ШЕС Ж,б ШЕС ЕС16 ШЕС Ж,б ШЕС ЬОЕС

Адмирал

осетр 5,0 9,19 5,0 15,92 2,5 6,13 1,0 2,5 2,5

бычок 5,0 12,26 15,0 16,29 2,5 3,33 1,0 2,5 2,5

тритон 10,0 11,58 1,0 2,15 5,0 13,57 0,1 0,5 0,5

Батьго

осетр 0,1 0,28 0,025 0,027 0,05 0,13 0,05 0,1 0,027

бычок 0,05 0,13 0,1 >0,1 1,0 1,63 0,1 0,5 0,13

тритон 0,025 0,08 0,01 0,023 0,25 0,28 0,025 0,05 0,023

Бетанал

осетр 2,5 5,28 2,5 2,52 1,0 2,78 0,1 0,5 0,5

бычок 1,0 5,15 10,0 25,93 10,0 11,58 5,0 10,0 5,15

тритон 5,0 19,34 1,0 2,61 25,0 27,93 10,0 25,0 2,61

Мерлин

осетр 1,0 7,01 5,0 12,01 10,0 34,90 5,0 10,0 7,01

бычок 25,0 77,78 1000,0 >1000,0 250,0 370,0 10,0 25,0 25,0

тритон 750,0 >750,0 250,0 505,97 750,0 >750,0 100,0 250,0 250,0

Фуроре-супео

осетр 5,0 8,36 1,0 1,08 0,5 0,88 0,5 1,0 0,88

бычок 4,0 7,62 5,0 5,98 3,0 3,98 2,0 3,0 3,0

тритон 5,0 7,23 2,0 3,29 5,0 6,48 0,5 1,0 1.0

Коэффициент

корреляции

осетр /бычок 0,69 0,89 0,86 0,88 0,81 0,79 0,65 0,78 0,92

осетр/тритон 0,55 0,78 0,81 0,81 0,91 0,96 0,56 0,71 0,84

1.2. Оценка токсического действия пестицидов на раннее постэмбриональное развитие рыб при различной хронической экспозиции. Методическими рекомендациями предусматривается проведение исследований по нормированию пестицидов на этапах раннего онтогенеза рыб. В рекомендациях нет четкого указания на способ постановки эксперимента. Следует ли исследовать ранний онтогенез рыб от оплодотворения до перехода в стадию активной личинки как один опыт; или же следует разделять периоды эмбрионального и раннего постэмбрионального развития. Нашими исследованиями впервые были установлены зависимости пороговых и недействующих концентраций от варианта постановки хронического эксперимента.

Для оценки влияния пестицидов на раннее постэмбрионалыюе развитие бычка-кругляка и осетра русского было проведено два варианта опытов различной длительности:

1 вариант — воздействие пестицидов на рыб от ранней бластулы (икра) до перехода мальков бычка (18 суток) и предличинок осетра (13 суток) на смешанное питание;

2 вариант — воздействие пестицидов на мальков бычка (5 суток) и предличинок осетра (7 суток) от выклева до перехода на смешанное питание.

Наблюдения за выживаемостью мальков бычка в растворах пестицидов позволили рассчитать токсикометрические параметры. При сравнительном анализе данных для каждого препарата был определен метод, использование которого позволяет установить меньшие токсические дозы. В растворах пестицидов Батыр, Кортес и Мерлин гибель 16% мальков из первого варианта опыта была в 7,8; 1,4 и 1,8 раз больше, чем из второго. Степень токсичности пестицидов Адмирал, Бетанал и Фуроре-супер по выживаемости мальков бычка была выше во второй серии хронического эксперимента. Аналогичные результаты получены при изучении влияния токсикантов на морфометрические параметры бычка (табл.4).

Таблица 4

Пороговые концентрации пестицидов для мальков бычка-кругляка

при выдерживании в растворах токсикантов, мг/л

Выживаемость Морфометрические параметры

Наименование (Ж,б) (ЬОЕС)

пестицида 1 вариант 2 вариант 1 вариант 2 вариант

(18 сут) (5 суток) (18 сут) (5 суток)

Адмирал 14,85 3,33 5,0 2,5

Батыр 0,21 1,63 0,05 0,5

Бетанал 25,31 11,58 25,0 > 10,0< 25,0

Кортес 573,52 785,33 500,0 750,0

Мерлин 206,97 370,0 25,0 25,0

Фуроре-супер 21,63 3,98 5,0 3,0

По степени хронической токсичности пестицидов для мальков бычка-кругляка препараты распределяются в ряду уменьшения Батыр (1 в.о.) > Адми-

рал (2 в.о.) > Фуроре-супер (2 в.о.) > Бетанал (2 в.о.) > Мерлин (1 в.о.) > Кортес (1 в.о.). Следовательно, уровень токсического воздействия высокотоксичного (согласно классификации Лесникова Л.А. и Врочинского К.К., 1973) и, наоборот, малотоксичных препаратов выше при затравке тест-организмов на стадии дробления зародыша, т.е. на стадии икры.

Определение степени токсичности пестицидов в зависимости от варианта постановки хронического эксперимента проводили и на предличинках осетра. Наблюдения за выживаемостью тест-организмов показали, что для осетра более губительны были растворы пестицидов при затравке на стадии свободных эмбрионов. Только в растворах гербицида Кортес выживаемость предличинок из второго варианта опыта была выше, чем из первого. Однако по показателям физиологического состояния пороговые концентрации второй серии более чем в 3 раза ниже (табл.5). Установлено, что при затравке осетра на стадии выхода из зародышевых оболочек препараты обладают большей токсичностью.

Таблица 5

Пороговые концентрации пестицидов для предличинок осетра

при выдерживании в растворах токсикантов, мг/л

Выживаемость Морфометрические параметры

Наименование 1 вариант 2 вариант 1 вариант 2 вариант

пестицида (13 сут) (7 суток) (13 сут) (7 суток)

Вираж 115,79 112,69 50,0 50,0

Карате-зеон 0,21 0,09 0,05 0,01

Клинер 6,24 2,91 5,0 1,25

Кортес 134,92 >750,00 125,0 35,0

Ланцет 22,42 20,99 25,0 10,0

Матч 24,67 1,77 0,5 0,5

Премис 26,33 10,75 5,0 5,0

Силк 33,27 28,60 10,0 1,0

Фуроре-супер 8,45 0,88 1,0 1,0

Это объясняется тем, что в процессе эмбриогенеза в растворах токсикантов, именно в период развития в оболочках (икра), формируется устойчивость организмов к изменению среды. Эмбрион менее подвержен влиянию изменившейся среды, благодаря своей защищенности от внешнего воздействия наличием оболочек. Своеобразие раннего постэмбрионального периода развития заключается в смене зародышевых приспособлений и функций на дефинитивные. В процессе такой смены изменяются отношения развивающегося организма со средой. Своеобразие этого периода явилось причиной выделения в развитии осетровых особого предличиночного периода. В этот период развития интенсивно идут процессы формообразования и дифференцировки, а значит это один из самых критических периодов в раннем онтогенезе осетровых (Детлаф и др., 1981). При затравке организмов в возрасте предличинок (свободных эмбрионов) наблюдались отклонения от контроля по всем показателям, следовательно, в данный период развития осетровых адаптационные способности снижены, т.е.

предличинки обладают более узкой амплитудой защитных приспособлений.

Многочисленные исследования показали, что организм рыб адаптируется не к фактору, а к интенсивности его воздействия. Результаты наших исследований и литературные данные позволяют предположить, что стрессовые воздействия обусловливают адаптацию рыб к острым летальным воздействиям различных факторов среды, при одновременном снижении адаптивных возможностей к хроническим летальным воздействиям тех же факторов. При тренировке наблюдается обратная картина (Лукьяненко, 1983, 1987; Метелев и др., 1971; Михайленко, 1997; Катаскова, 1999; Катаскова и др, 2000; Полуян, 2001, 2002; Poluyaii, 2003).

Таким образом, при использовании предличинок осетра в качестве тест-объекта при нормировании поллютантов предпочтительно применять второй вариант постановки хронического эксперимента.

Данные, представленные в табл. 5, подтверждают вывод о необходимости использования второго варианта постановки хронического эксперимента. При разработке ПДК загрязняющих веществ указанным способом норматив, лимитирующий содержание токсиканта в природной воде, будет жестче.

Таким образом, величины пороговых и недействующих концентраций при оценке токсического действия пестицидов на раннее постэмбриональное развитие рыб, могут зависеть от биологических особенностей тест-объекта, что и предусматривает и соответствующий методический подход.

2. Оценка тератогенной активности пестицидов в период раннего онтогенеза гидробионтов. Водные организмы на изменения внешней среды, в том числе на проявление ею токсических свойств, реагируют множеством реакций, протекающих на разных уровнях организации организма — молекулярном, субклеточном, клеточном, органотканевом, организменном, популяционном и т.д. (Мельников и др., 1995). Патоморфологические признаки развития являются показателями на органотканевом уровне организации материи.

При воздействии пестицидов отклонения от нормы на стадиях раннего онтогенеза могут усугубляться на последующих этапах развития и приводить к снижению жизнеспособности и гибели организмов. Практически все аномалии и уродства закладываются на ранних, наиболее чувствительных стадиях развития, которые проходят в воде насыщенной разными загрязнителями и ядами. Аномалии в развитии личинок, исследуемых на этапе вылупления и при переходе на активное питание, не приводят напрямую к их гибели, но такие личинки составляют группу риска и под воздействием неблагоприятных факторов среды могут погибнуть в первую очередь. Следовательно, изучение тератоген-ности поллютантов является неотъемлемой частью экотоксикологических исследований.

Общепризнано, что среди существующих в настоящее время методов индикации качества воды и экологического состояния водоемов ведущая роль принадлежит методам биоиндикации, с использованием в качестве объектов-биоиндикаторов рыб как консументов высшего трофического звена, особенно чувствительных к нарушению нормальных условий обитания в водоемах. По-

скольку многие показатели различных сторон биологии рыб достаточно адекватно отражают характер и степень загрязнения водоемов, состояние водных экосистем в целом, при осуществлении программ биомониторинга водных экосистем одной из его составных частей должны являться методы ихтиоиндика-ции (Лукин, 1995; Попов, Попова, 1995; Лепилина, Романов, 1997). При этом особое внимание следует обратить на методы, позволяющие выявить специфические тератогенные эффекты загрязняющих веществ.

2.1 .Тератогенное воздействие пестицидов на ранний онтогенез рыб и амфибий. Изучение действия химических токсикантов на эмбриональное развитие разных тест-объектов с целью установления их тератогенности проводятся многими исследователями (Крылова, 1991; Berrill и др., 1995; Fort и др., 1999, Lehtinen и др, 1999; Горюнова и др., 1997; Земков, 2000 и др.). Однако исследования тератогенности пестицидов в сравнительном аспекте представлены недостаточно.

В результате наших исследований были определены степень тератогенной активности для осетра, бычка и тритона, что позволило установить корреляцию между активностью химической структуры и видовой принадлежностью тест-организма. А также провести сравнительный анализ резистентности рыб и амфибий к возникновению различных патологий. Данные исследования представлены в табл. 6.

Результаты изучения тератогенности пестицидов показали, что все изученные препараты обладают токсическим действием на рыб и амфибий. Однако не все гидробионты были реактивны по отношению к пестицидам. Так, в растворах инсектицида Адмирал не отмечалось появление уродливых особей бычка-кругляка ни на одном из этапов раннего онтогенеза. Мальки бычка, инкубированные в токсических средах гербицида Бетанал не имели патологий. В токсических растворах фунгицида Батыр только на предличинках осетра не проявилось тератогенное действие данного фунгицида. Однако во всех случаях выявленных тератогенных эффектов установлено, что интенсивность проявления патологических изменений рыб и амфибий носило дозозависимый характер. По степени уменьшения тератогенности препараты располагаются в ряду: Батыр > Адмирал > Фуроре-супер > Мерлин > Бетанал.

Сравнительный анализ токсикорезистентности рыб и амфибий показал, что наименьшей устойчивостью к растворам пестицидов обладают тритон. Эмбрионы и мальки бычка-кругляка были более устойчивы к тератогенному воздействию поллютантов.

Нами были выявлены некоторые характерные и специфические патологии, индуцированные разными пестицидами. Инкубация осетра и тритона а растворах инсектицида Адмирал привела к формированию различных патологий. Однако следует отметить, что характерной аномалией для этих тест-объектов стало нарушение водного обмена, выраженное в скоплении жидкости в перикар-диальной полости.

В результате инкубации гидробионтов в растворах гербицида Бетанал наблюдали характерное влияние препарата на развитие головного отдела. В максимальных концентрациях развивались зародыши бычка-кругляка практически

не имеющие головы и в дальнейшем погибшие в оболочках; у личинок тритона - недоразвитие передней части головного отдела; у выклюнувшихся мальков бычка - единично отмечалось недоразвитие головы, зафиксирован один выклюнувшийся двухголовый малек.

Морфологическое проявление токсичности гербицида Мерлин проявлялось в очень сильной общей водянке, при которой желточный мешок и другие органы практически отделены от брюшной стороны скопившейся жидкостью и прижаты к спинной стороне тела. Организмы приобретали вид «лампочек». Указанная патология явилась многочисленной для личинок тритона, эмбрионов осетра и бычка, единично для икры тритона и предличинок осетра.

В результате анализа тератогенности гербицида Фуроре-супер установлено, что препарат оказывает патогенное действие на гидробионтов, индуцируя широкий спектр аномалий. В ранний постэмбриональный период развития гидробионтов зафиксирована характерная направленность патологического процесса, выраженная в подавлении формирования пигментного комплекса.

Наиболее интенсивным патологическим действием обладал фунгицид Батыр. В токсических растворах фунгицида Батыр у эмбрионов осетра на 28 стадии (прямой удлиненной сердечной трубки) наблюдалось чрезмерное накопление жидкости во внутренних полостях эмбрионов: в собирающих почечных каналах, полости продолговатого мозга и перикардиальной полости. В ходе дальнейшей инкубации икры осетра, начиная с 30 стадии, происходила деформация хорды - она приобретала характерный «гофрированный» вид. Аналогичные нарушения водного обмена, приводящие к деформации осевого скелета отмечены у зародышей бычка: это специфическая «гофрированность», укорочение, моло-тообразное утолщение хвостового стебля эмбрионов. Дальнейшее содержание в растворах Батыра стало летальным для зародышей бычка. Исследование влияния фунгицида Батыр на тритона выявило многочисленные нарушения водного обмена, но специфической деформации осевых структур не обнаружено. Следовательно, специфическое тератогенное действие фунгицида Батыр характерно для рыб.

По результатам проведенного анализа тератогенности пестицидов были установлены лимитирующие дозы веществ для тест-объектов. Данные величины используются для нормировании пестицидов при разработке рыбохозяйст-венных ПДК. Очевидно, что при включении в схему экотоксикологических исследований тритона в качестве тест-объекта, нормируемые величины Адмирала, Батыра и Фуроре-супер были бы жестче.

На основании проведенных исследований установлены корреляционно-регрессионные зависимости между эффективными и недействующими концентрациями пестицидов для бычка и тритона и соответствующими параметрами осетра. Корреляционно-регрессионный анализ, проведенный между величинами 1§ЕСо, 1^ЕС)б и выявил прямую линейную зависимость между пороговыми и лимитирующими величинами тритона и осетра. Так же достаточно высокий коэффициент корреляции установлен для лимитирующих величин бычка и осетра. Это математически подтверждает возможность использования бычка-кругляка и ребристого тритона в период раннего онтогенеза в качестве тест-

объектов при установлении рыбохозяйственных ПДК.

Таблица б

Параметры тератогенности пестицидов в период раннего онтогенеза рыб и амфибий

Раннее

Наименование Эмбриональное постэмбриональное 1лт,

пестицида развитие развитие мг/л

ЕС0, мг/л ЕС 16, мг/л ЕС0, мг/л ЕС16, мг/л

Адмирал

осетр 5,0 12,30 1,0 3,28 3,28

бычок нет нет нет нет -

тритон 1,0 10,09 0,1 0,54 0,54

Батыр

осетр 0,05 0,1 нет нет 0,10

бычок 0,05 9,18 0,1 0,37 0,37

тритон 0,025 0,03 0,11 0,05 0,03

Бетанал

осетр 2,5 5,0 2,5 4,86 4,86

бычок 1,0 18,02 нет нет 18,02

тритон 2,49 19,72 2,5 8,26 8,26

Мерлин

осетр 1,0 3,28 5,0 15,77 3,28

бычок 100,0 396,94 100,0 469,84 396,94

тритон 100,52 166,42 25,0 35,54 35,54

Фуроре-супер

осетр 5,0 9,76 1,0 3,03 3,03

бычок 1,0 4,43 3,0 3,78 3,78

тритон 5,0 10,87 1,0 2,49 2,49

Коэф. корреляции

осетр /бычок 0,48 0,11 - - 0,74

осетр/тритон 0,59 0,82 0,91 0,87 0,84

2.2. Оценка тератогенного воздействия пестицидов на раннее постэмбриональное развитие рыб при различной хронической экспозиции. По окончании эксперимента по установлении степени токсичности пестицидов на раннее постэмбриональное развитие рыб в зависимости от пролонгации хронического опыта нами оценивался тератогенный эффект препаратов. При анализе учитывались только живые аномальные особи, погибшие уродливые эмбрионы в расчет не входили. Результаты сравнительного исследования тератогенных эффектов пестицидов для раннего постэмбрионального развития рыб представлены в табл. 7 и 8.

Для мальков бычка по степени уменьшения тератогенности пестициды располагаются в ряду: Батыр (2 в.о.) > Фуроре-супер (2 в.о.) > Бетанагг (1 в.о.) > Адмирал (1 в.о.) > Кортес (1 в.о.) > Мерлин (1 в.о.). Следовательно, при увеличении времени выдержки увеличивается степень тератогенности менее ток-

сичных пестицидов. Это явление объясняется биологическими особенностями раннего онтогенеза бычка. У кругляка отсутствует присущий большинству костистых рыб период свободной личинки, который считается одним из самых чувствительных этапов развития. Этап развития соответствующий личиночному протекает у бычка кругляка в зародышевых оболочках и, таким образом, защищен от негативных воздействий.

Таблица 7

Тсратогеиность пестицидов для мальков бычка-кругляка

п ри выдерживании в растворах токсикантов

Наименование пестицида 1 вариант (18 суток) 2 вариант (5 суток) 1лт, мг/л

ЕСо, мг/л ЕС16, мг/л ЕС0, мг/л ЕСк„ мг/л

Адмирал 10,0 21,78 нет 21,78

Батыр нет 0,1 | 0,37 0,37

Бетанал 10,0 15,52 нет 15,52

Кортес 100,0 262,37 нет 262,37

Мерлин 100,0 398,36 100,0 469,84 398,36

Фуроре-супер 3,0 3,98 3,0 3,78 3,78

Таблица 8

Тератогенность пестицидов для предличинок осетра

при выдерживании в растворах токсикантов _

Наименование пестицида 1 вариант (18 суток) 2 вариант (5 суток) Ыт, мг/л

ЕСо, мг/л ЕС |б, мг/л ЕСо, мг/л ЕС к,, мг/л

Вираж нет 10,0 66,59 66,59

Карате-зеон 0,013 0,027 0,05 0,072 0,027

Клинер 10,0 70,02 нет 70,02

Кортес 35,0 68,94 19,08 52,72 52,72

Ланцет нет 10,0 52,78 52,78

Матч 0,27 0,72 0,1 0,99 0,72

Премис 1,18 2,28 нет 2,28

Силк 5,0 17,80 5,0 13,92 13,92

Фуроре-супер 0,5 2,19 1,0 3,03 2,19

Раннее постэмбриональнос развитие осетровых, наоборот, характеризуется неполной сформированностью кровеносной, пищеварительной и дефинитивных систем. Токсические вещества в наименьшей степени накапливаются в теле эмбрионов, защищенных оболочками, в наибольшей — в теле предличинок в первые 24-48 часов их жизни (Са^Б), Са1атап, 1983; Лепилина, 1991). Поэтому у осетра при увеличении сроков инкубации тератогенность более токсичных пестицидов усиливается. Для предличинок осетра по степени уменьшения терато-генности пестициды располагаются в ряду: Карате-зеон (1 в.о.) > Матч (1 в.о.) > Фуроре-супер (1 в.о.) > Премис (1 в.о.) > Силк (2 в.о.) > Кортес (2 в.о.) > Ланцет (2 в.о.) > Вираж (2 в.о.) > Клипер (1 в.о.). Следовательно, менее токсичные пес-

тициды проявляют большую тератогенность только при затравке свободных эмбрионов, т.е. в наиболее «уязвимый» момент раннего развития.

При анализе хронического патологического процесса, протекающего в растворах гербицида Кортес, наблюдали предличинок осетра с различными нарушениями системы пищеварения. Вне зависимости от варианта постановки эксперимента наблюдаемые нарушения органогенеза носили дозозависимый и направленный характер. У предличинок зафиксировано оводнение желточного мешка с характерной «пузырчатостью» его поверхности, причем процент случаев такой аномалии был в два раза выше у особей из второго варианта. Отмеченный в наших экспериментах с гербицидом Кортес характерная патология предличинок осетра требует дальнейших исследований данного класса гербицидов.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Проведенные исследования позволяют предложить эвригалинного бычка-кругляка для лабораторных исследований как в пресной, так и в солоноватой воде. Полученные результаты достаточно высокой чувствительности бычка-кругляка к пестицидной интоксикации определяют возможность использования его в качестве тест-объекта при разработке нормативов (ПДК и ОБУВ) для воды пресных и морских водоемов.

2. Результаты изучения реактивности ребристого тритона к пестицидному воздействию в период раннего онтогенеза позволяют рекомендовать его в качестве тест-объекга для проведения токсикологических исследований.

3. Выявленные характерные и специфические тератогенные эффекты пес-тицидного воздействия рекомендуются для использования рыб и амфибий на ранних стадиях онтогенеза как биомаркеров при биотестировании загрязнения водных экосистем.

4. В связи с поступлением новых пестицидов в водоемы рекомендуем для установления ПДК использовать разработанный методический подход и новые тест-объекты (бычка-кругляка, тритона ребристого), т.к. разработанные ранее методики и руководства недостаточны для объективной оценки экотоксиколо-гического состояния водных экосистем.

ВЫВОДЫ

1. Гибель эмбрионов бычка-кругляка в пресной воде и соленостью 11%о и 19 %о находится в пределах 5,2-10,4%, что не превышает показатели возможные для лабораторных и токсикологических исследований; гибели мальков не зафиксировано. Отмечена высокая адаптивная способность бычка-кругляка к средам различной солености, патоморфологические признаки формирования организмов отсутствуют, физиологическое состояние соответствуют естественным параметрам развития.

2. Исследования токсичности пестицидов свидетельствуют об угнетении обмена веществ у русского осетра, бычка-кругляка и тритона ребристого в пе-

риод раннего онтогенеза, что проявляется в замедлении роста и уменьшении массы гидробионтов. Пороговые концентрации исследованных пестицидов составили: для осетра 0,027-34,90 мг/л, для бычка — 0,13->1000,00 мг/л, для тритона - 0,023->750,00 мг/л. Токсикорезистентность гидробионтов к воздействию пестицидов уменьшается в ряду бычок - тритон - осетр.

3. Установлены зависимости пороговых и недействующих концентраций пестицидов от варианта постановки хронического эксперимента. Пороговые концентрации пестицидов Батыр, Кортес и Мерлин для бычка, инкубированного со стадии икры (18 суток), до 8 раз меньше, чем из опыта продолжительностью 13 суток при затравке после выклева. Степень токсичности пестицидов Адмирал, Бетанал и Фуроре-супер для мальков бычка выше при меньших сроках интоксикации. В растворах всех изученных пестицидов при затравке осетра в стадии свободных предличинок (ст.Зб) отмечены отклонения от контроля по показателям выживаемости и развития.

4. Установлено, что изученные препараты обладают тератогенным действием. По степени уменьшения тератогенности препараты располагаются в ряду Батыр>Адмирал>Фуроре-супер>Мерлин>Бетанал. Резистентность гидробионтов к возникновению различных патологий развития уменьшалась в ряду бычок - осетр - тритон. Количество патологических признаков и степень их проявления у рыб и амфибий носят дозозависимый характер.

5. При моделировании хронического токсикоза установлено, что у мальков бычка при увеличении продолжительности опыта повышается степень тератогенности менее токсичных пестицидов. При увеличении сроков инкубации осетра тератогенность более токсичных пестицидов усиливается, менее токсичные пестициды проявляют большую тератогенность только при затравке свободных эмбрионов, наиболее «уязвимого» периода раннего онтогенеза.

6. Отмечены патологические процессы для препаратов Мерлин, Кортес и Адмирал, выражающиеся в нарушениях водного обмена различной интенсивности; для гербицида Бетанал — в нарушениях в формировании головного отдела; для гербицида Фуроре-супер - в подавлении формирования пигментного комплекса

7. Установлено интенсивное патологическое действие фунгицида Батыр на гидробионты. У эмбрионов осетра в результате нарушения процесса выведения жидкости из полости гастроцеля в перивителлиновое пространство происходит накопление избытка воды, что приводит к «гофрированной» деформации хорды. Нарушение водного обмена, приводящее к деформации осевого скелета, отмечены также у зародышей бычка: «гофрированность», укорочение, молото-образное утолщение хвостового стебля. У зародышей и личинок тритона наблюдались многочисленные нарушения водного обмена, но специфической деформации осевых структур не обнаружено. Выявленный единый симптомоком-плекс для рыб в период эмбрионального развития определяет специфичность тератогенного эффекта и возможность его использования при биоиндикации и оценки экологического состояния среды обитания.

8. Установлены корреляционно-регрессионные зависимости токсичности между к^Ю пороговых и лимитирующих концентраций пестицидов для бычка-

кругляка и тритона ребристого и соответствующими параметрами русского осетра; выявлена прямолинейная зависимость для связей осетр/бычок (г=0,78-0,92) и осетр/тритон (г=0,71-0,96). Корреляционно-регресионный анализ тера-тогенности пестицидов установил прямолинейную зависимость между 1о§10 лимитирующих величин для связей осетр/бычок (г=0,74) и осетр/тритон (г=0,84). Высокая коррелятивная связь параметров токсичности позволяет рекомендовать бычка кругляка и тритона ребристого в качестве тест-объектов при разработке ПДК загрязняющих веществ для воды рыбохозяйственных водоемов.

9. Разработан новый методический подход для оценки экологического состояния водных экосистем и определения ПДК для 13 пестицидов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Полу ян А.Я. (Костелянчик А.Я.)

1. Гвозденко С.И., Катаскова С.И., Карпушова Т.Н., Костелянчик А.Я. Оценка чувствительности некоторых гидробионтов к действию фунгицида "Монцарен" / 1 Конгр. ихтиологов России, Астрахань, сент., 1997: Тезисы докл. - Астрахань, 1997. С. 261.

2. Гвозденко С.И., Катаскова С.И., Костелянчик А.Я., Тимофеева И.Г., Карпушова Т.Н. Особенности чувствительности эмбрионов и предличинок осетровых рыб к воздействию препарата "Бульдок" / 1 Конгр. ихтиологов России, Астрахань, сент., 1997: Тезисы докл. - Астрахань, 1997. С. 271.

3. Катаскова С.И., Полуян А.Я., Щербакова Н.И. Зависимость пороговых и недействующих концентраций пестицидов от биологических особенностей тест-объекта / Основные проблемы рыбного хозяйства и охраны рыбохозяйственных водоемов Азово-Черноморского бассейна. Сборник науч. трудов АзНИИРХ,-Ростов-на-Дону, 2000. С.341-343.

4. Катаскова С.И., Полуян А.Я., Тесова Л.Г., Щербакова Н.И. Сравнительная токсикологическая оценка гербицидов разных химических классов для гидробионтов / Материалы междунар. науч. конф. «Проблемы сохранения экосистем и рационального использования биоресурсов Азово-Черноморского бассейна». -Ростов-на-Дону, 2001. С. 163-165.

5. Карпушова Т.Н., Полуян А.Я., Тесова Л.Г. Сравнительная оценка токсических эффектов гербицида Кортес и его действующего вещества хлорсульфуро-на / Тезисы докл. конф. молодых ученых «Пробл. экологии Азово-Черноморского бас.: совр. состояние и прогноз».-Севастополь, 2001. С.11-12.

6. Полуян А.Я. Оценка токсического эффекта пестицидов в зависимости от экспозиции опыта / Тезисы докл. XI Межд. симп. по биоиндикаторам «Совр. пробл. биоиндикации и биомониторинга»,- Сыктывкар, 2001. С.78-79.

7. A.Ya Poluyan. Dependence of the toxic effect of pesticides on their chemical composition, the exposition time and biological characteristics of test-objects / Материалы IV Междунар. конф. Балканской Ассоциации по защите окруж. среды «Глобальное загрязнение» ,-Эдирне, Турция, 2001. С. 135.

8. Полуян А.Я. Оценка токагческого эффекта пестицидов в зависимости от

экспозиции опыта / Тезисы докл. Всерос. коиф. молодых ученых,-Мурманск, 2002. С.164-165.

9. Карпушова Т.Н., Полуян А.Я., Тесова Л.Г. Определение чувствительности некоторых тест-объектов водной среды к сульфонилмочевинным гербицидам / Тезисы докл. Всерос. конф. молодых ученых,-Мурманск, 2002. С.92-93.

10. Щербакова Н.И., Полуян А.Я., Катаскова С.И. Изучение тератогенного и мутагенного эффектоа при нормировании пестицидов / Тезисы докл. научн. конф. молодых ученых,- Мурманск: ПИНРО, 2003. С. 83.

11. A.Ya. Poluyan An assessment of the toxic effect of pesticides on their chemical composition, the exposition time and biological characteristics of test-objects / Материалы межд. конф. «Marine Enviromental Research», - США, 2003. C.121-122.

12. Щербакова Н.И., Полуян А.Я., Катаскова С.И. Влияние ксенобиотиков на ранний онтогенез бычка-кругляка / Тезисы докл. Межд. науч. семинара «Пробл. репродукции и раннего онтогенеза морск. гидробионтов»,- Мурманск, 2004. С.45,

13. Гвозденко С.И., Катаскова С.И., Щербакова Н.И., Полуян А.Я. Тератогенные эффекты пестицидов дитиокарбаматного ряда // Осн. пробл.рыбного хоз-ва и охраны рыбохозяйственных водоемов Азово-Черноморского бассейна / Сборник науч. трудов АзНИИРХ.- Ростов-на-Дону, 2004. С.397-401.

14. Катаскова С.И., Гвозденко С.И., Щербакова Н.И., Полуян А.Я. Обоснование оценки ущерба от пестицидного загрязнения водных объектов Азовского бассейна // Осн. пробл. рыбного хоз-ва и охраны рыбохозяйственных водоемов Азово-Черноморского бассейна / Сборник науч. трудов АзНИИРХ.- Ростов-на-Дону, 2004. С.353-357.

15. Щербакова Н.И., Полуян А.Я. Экологические аспекты пестицидного загрязнения водоемов / Сборник тр. науч.-практ. конф. «Лиманчик. Экологические проблемы. Взгляд в будущее.», - Ростов-на-Дону, 2004. СЛ62-164.

16. Гвозденко С.И., Катаскова С.И., Щербакова Н.И., Полуян А.Я. К вопросу о биотестировании при пестицидном загрязнении / Материалы межд. науч.-практ. конф. «Стратегия развития аквакультуры в условиях XXI века»,- Минск, 2004. С.285-288.

17. Катаскова С.И., Щербакова Н.И., Полуян А.Я. Интенсивность спонтанного мутационного процесса у осетровых рыб Азовского моря / Тезисы докл.2-й межд. науч. конф. «Биотехнология - охране окружающей среды»,-Москва, 2004. С. 186.

18. Полуян А.Я. Сравнительный анализ ответной реакции Neogobius melanostomiis и Asipenser quldenstatti на пестицидную интоксикацию / Материалы межд. науч.-практ. конф. «Стратегия развития аквакультуры в условиях XXI века»,- Минск, 2004. С.327-329.

19. Полуян А.Я., Гвозденко С.И., Щербакова Н.И., Катаскова С.И. Токсикологическая оценка пестицидного воздействия на ранний онтогенез рыб и амфибий / Материалы междунар. науч. конф. «Актуальные проблемы экологической физиологии, биохимии и генетики животных»,- Саранск, 2005. С.56-57

20. Щербакова Н.И., Полуян А.Я. Патоморфология раннего онтогенеза осетровых рыб при пестицидной интоксикации / Материалы IV Междунар. конф.

«Биол. ресурсы Белого моря и внутр. водоемов Европейского Севера»,-Вологда,

2005. С.269-271.

21. Карпушова Т.Н., Нагорная Ю.В., Полуян А .Я., Щербакова Н.И. Сравнительная оценка токсичности гербицидов для гидробионтов / Сборник тр. науч.-практ. конф. «Экологические проблемы. Взгляд в будущее», - Ростов-на-Дону,

2006. С. И 8-120.

22. Полуян А.Я., Щербакова Н.И. Принципы нормирования содержания пестицидов в воде рыбохозяйственных водоемов / Сборник тр. науч.-практ. конф. «Экологические проблемы. Взгляд в будущее», - Ростов-на-Дону, 2006. С. 170172.

23. Полуян А.Я. Сравнительная оценка токсичности пестицидов для рыб и амфибий на ранних стадиях онтогенеза / Известия ВУЗ. Сев.-Кавказский регион. Естест.науки. Приложение.№7, - Ростов-на-Дону, 2006. С.65-69.

24. Полуян А.Я., Щербакова Н.И., Зинчук O.A., Гарбузова Е.С. Специфическая тератогенность сульфонилмочевинных гербицидов / Материалы межд. науч. конф. «Пробл. устойч. функционир. водных и наземных экосистем», - Ростов-на-Дону, 2006. С.337-340.

25. Щербакова Н.И., Полуян А.Я., Катаскова С.И. Новый подход к оценке тератогенной активности пестицидов / Материалы межд. науч. конф. «Пробл. устойч. функционир. водных и наземных экосистем», - Ростов-на-Дону, 2006. С.491-492.

Список использованных сокращений

ПДК - предельно-допустимая концентрация

ОБУВ - ориентировочно-безопасный уровень воздействия

Д.в. — действующее вещество

ЫОЕС — концентрация, не вызывающая токсического эффекта (ЕСо) или гибели (ЛКо) подопытных организмов

ЕС16 — эффективная концентрация токсического вещества, вызывающая изменение тест-реакции на 16% при установленных условиях экспозиции

ЛК16 — концентрация токсического вещества, вызывающая гибель 16% тест-объекта

ЛК50 — концентрация токсического вещества, вызывающая гибель 50% тест-объекта

ЛК84 — концентрация токсического вещества, вызывающая гибель 84% тест-объекта

Печать цифровая. Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме». Формат 60x84/16. Объем 1,0 уч.-изд.-л. Заказ №1111. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ «КОП^ЦЕНТР» 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Суворова, 19, тел. 247-34-88

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Полуян, Анна Яковлевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВЛИЯНИЯ ПЕСТИЦИДНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ НА ВОДНЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ РЕСУРСЫ.

1.1. Экологические аспекты пестицидного загрязнения водоемов.

1.2. Влияние пестицидного загрязнения на гидробионтов в период раннего онтогенеза.

1.3. Тератологический анализ как тест-система при биоиндикации загрязнения водоемов.

ГЛАВА 2. ПРОГРАММА, ОБЪЕМ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. ТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ ПЕСТИЦИДОВ НА ГИДРОБИОНТОВ В ПЕРИОД РАННЕГО ОНТОГЕНЕЗА.

3.1 Оценка влияния водных растворов разной солености на ранние стадии онтогенеза бычка-кругляка.

3.2 Токсикологическая оценка пестицидного воздействия на ранний онтогенез рыб и амфибий.

3.3 Оценка токсического действия пестицидов на раннее постэмбриональное развитие рыб при различной хронической экспозиции.

ГЛАВА 4. ОЦЕНКА ТЕРАТОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПЕСТИЦИДОВ В ПЕРИОД РАННЕГО ОНТОГЕНЕЗА ГИДРОБИОНТОВ.

4.1 Тератогенное воздействие пестицидов на ранний онтогенез рыб и амфибий.

4.2 Оценка тератогенного воздействия пестицидов на раннее постэмбриональное развитие рыб при различной хронической экспозиции.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Оценка пестицидной интоксикации некоторых рыб и амфибий в период раннего онтогенеза"

Актуальность исследований

Пестициды являются одним из существенных антропогенных химических факторов, вызывающим неблагоприятные изменения экологической обстановки природной среды (Врочинский, 1975; Лукьяненко, 1987; 1989; Курляндский,1996; Потапов, Ястребов, 1998; Соколов и др.,2001). Обладая высокой биологической активностью, они вносятся в окружающую среду, способны циркулировать и накапливаться в разных звеньях экосистемы (Kidd at al.,1995; Ракитский, 1990; 1997; Коропенко, 2004). Поступая в живые организмы с водой и пищей, пестициды воздействуют на физиолого-биохимические процессы, затрагивая при этом репродуктивные функции гидробионтов. Вследствие этого, изучение влияния пестицидов на ранние этапы развития живых организмов является необходимым условием обоснования безвредных уровней содержания в объектах окружающей среды, в том числе, в воде рыбохозяйственных водоемов.

Использование осетровых в лабораторной практике с каждым годом становится затруднительным в связи с проблемой их исчезновения из природных водоемов. Назрела необходимость поиска альтернативных тест-объектов, в соответствии с широко распространенной в научно-исследовательской практике концепции трех R (reduction, refinement, replacement): снижение, уточнение, замена (Катаскова, 1999; Glomot, 1999; Sterling, Rispin, 2002). При выборе тест-организмов необходимо учитывать такие критерии как массовость вида, короткий цикл онтогенеза, чувствительность к действию ксенобиотиков, наличие прикрепленной икры, простота отлова и анализа биологического материала (Строганов, 1971; GESAMP, 1995). Этим требованиям отвечают бычок-кругляк и ребристый тритон.

Амфибии активно включены в трофические связи водоемов, имеют большое значение в осуществлении связей различных биоценозов. Большинство видов хвостатых амфибий постоянно живет или размножается в воде, а многие наземные виды проводят в водоемах большую часть жизни. Однако, методическая схема установления рыбохозяйственных ПДК в стандартном наборе тест-объектов не предусматривает проведения исследований на амфибиях.

Исследования тератогенности водных сред на основе массового визуального анализа организмов позволяют выявить специфические уродства и нарушения, а в некоторых случаях достоверно определить химическую природу поллютантов, тем самым, сокращая трудоемкость биотестирования (Покоева, 2002; 2003). Изучение фенодевиантов и поиск специфических тератогенных эффектов является перспективным направлением в системе биоиндикации загрязняющих веществ.

В этой связи актуальным является изучение уровня токсического воздействия пестицидов на стадии раннего онтогенеза различных представителей гидробионтов, а поиск доступных методов биоиндикации их токсического действия является приоритетным направлением современной науки. Эта задача является актуальной с экологических позиций.

Цель и задачи исследования

Цель настоящей работы: дать оценку воздействия пестицидов на ранний онтогенез гидробионтов в условиях токсикологического эксперимента и обосновать тест-объекты при изучении токсического воздействия пестицидов

Для достижения поставленной цели были сформулированы и решены следующие задачи:

- Исследовать толерантность бычка-кругляка (на стадиях раннего онтогенеза) к водным средам разной солености в экспериментальных условиях.

- Установить токсикометрические параметры, дозоэффективные зависимости пестицидов: Адмирал (д.в. пирипроксифен), Батыр (д.в. тирам), Бетанал (д.в. фенмедифам и д.в. десмедифам), Мерлин (д.в. изоксафлютол), Фуроре-супер (д.в. феноксапроп-этил) для икры осетра русского, бычка-кругляка и ребристого тритона; для предличинок осетра русского, мальков бычка-кругляка и личинок ребристого тритона.

Провести сравнительный анализ токсикорезистентности к пестицидной интоксикации рыб и амфибий на ранних стадиях онтогенеза.

- Исследовать воздействие пестицидов на постэмбриональный период рыб при различной хронической экспозиции.

- Исследовать тератогенность и выявить возможные специфические эффекты воздействия пестицидов на рыб и амфибий.

Научная новизна работы

- В работе впервые проведен сравнительный анализ реакции бычка-кругляка, ребристого тритона и русского осетра на ранних стадиях развития при пестицидной интоксикации.

- Исследована толерантность бычка-кругляка в период раннего онтогенеза к соленой и пресной воде в условиях лабораторного эксперимента.

- Разработаны методологические основы постановки хронического эксперимента для диагностики состояния рыб в ранний постэмбриональный период.

- Выявлены характерные и специфические тератогенные эффекты у рыб и амфибий при воздействии некоторых пестицидов.

Теоретическая и практическая значимость

Проведенные исследования позволяют предложить эвригалинного бычка-кругляка для лабораторных исследований как в пресной, так и в солоноватой воде. Полученные данные о достаточно высокой токсикорезистентности бычка-кругляка определяют возможность использования его в качестве тест-объекта при разработке ПДК для воды пресных и морских объектов.

Данные по изучению реактивности ребристого тритона в период раннего онтогенеза позволяют рекомендовать его в качестве тест-объекта для проведения токсикологических исследований.

Исследования хронической пестицидной интоксикации различной экспозиции для раннего постэмбрионального развития рыб позволили усовершенствовать методический подход.

Выявленные специфические тератогенные эффекты позволяют использовать рыб и амфибий на ранних стадиях онтогенеза для биотестирования загрязнения природных вод. В результате таких исследований возможно определение качественного состава поллютантов и, тем самым, сокращать трудоемкость биотестирования.

Практическая значимость работы заключается в следующем: определены токсикометрические параметры и дозоэффективные зависимости воздействия изученных пестицидов для осетра, бычка-кругляка и тритона. Установлена чувствительность рыб и амфибий к пестицидному загрязнению на эмбриональном и раннем постэмбриональном этапах онтогенеза.

Выявлены специфические тератогенные эффекты воздействия пестицидов.

Комплексными исследованиями сотрудников отдела рыбохозяйственной токсикологии ФГУП «АзНИИРХ» установлены ПДК 13 пестицидов («Перечень рыбохозяйственных нормативов.», М.:ВНИРО, 1999).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Бычок-кругляк на ранних стадиях развития является чувствительным к интоксикации видом рыб и может быть рекомендован для использования в качестве тест-объекта при разработке ПДК загрязняющих веществ для воды пресных и морских водоемов, имеющих рыбохозяйственное значение.

2. Ребристый тритон на ранних стадиях развития является чувствительным к интоксикации видом и может использоваться в качестве тест-объекта при разработке ПДК загрязняющих веществ для пресноводных водоемов, имеющих рыбохозяйственное значение.

3. Токсические эффекты изученных пестицидов для гидробионтов определяются как длительностью воздействия, этапами интоксикации, химической природой действующего вещества и биологическими особенностями организмов.

4. Специфический тератогенный эффект у тест-объектов при воздействии пестицидов, выявленный в лабораторных экспериментах, может использоваться как информативный маркер при индикации загрязнения природных вод.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на 13 конференциях и съездах, среди которых: IV Международная конференция Балканской Ассоциации по защите окружающей среды «Глобальное загрязнение» (Эдирн, Турция, 2001); Международная научно-практическая конференция «Стратегия развития аквакультуры в условиях XXI века» (Минск, Беларусь, 2004); Международная научная конференция «Актуальные проблемы экологической физиологии, биохимии и генетики животных» (Саранск, Россия, 2005); Международная научная конференция «Проблемы устойчивого функционирования водных и наземных экосистем» (Ростов-на-Дону, Россия, 2006).

Публикации: по изучаемой проблеме опубликовано 25 научных работ.

Структура диссертации

Диссертация изложена на 159 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания постановки экспериментов и методов исследования, 2-х глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, практических рекомендаций и выводов. Работа содержит 81 таблицу и иллюстрирована 6 рисунками. Список использованной литературы включает 194 наименований, в том числе 49 зарубежных источников.

Личный вклад в работу заключается в непосредственном выполнении экспериментальных работ по всем разделам диссертационной работы, проведении анализа и обобщения результатов работы, сборе, систематизации и анализе литературы и экспериментальных данных. Изучение токсического действия пестицидов проводилось совместно с к.б.н. Катасковой С.И., к.б.н. Щербаковой Н.И. Икра ребристого тритона для токсикологических исследований любезно предоставлена к.б.н. Шепило В.Ю.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Полуян, Анна Яковлевна

1. Гибель эмбрионов бычка-кругляка в воде соленостью 11%о, 19%о и

пресной воде находится в пределах 5,2-10,4%, что не превышает показатели

возможные для лабораторных и токсикологических исследований; гибели

мальков не зафиксировано. Отмечена высокая адаптивная способность

бычка-кругляка к средам различной солености, патоморфологические

признаки формирования организмов отсутствуют, физиологическое

состояние соответствуют естественным параметрам развития. 2. Исследования токсичности пестицидов свидетельствуют об

угнетении обмена веществ у русского осетра, бычка-кругляка и тритона

ребристого в период раннего онтогенеза, что проявляется в замедлении роста

и уменьшении массы гидробионтов. Пороговые концентрации

исследованных пестицидов составили: для осетра 0,027-34,90 мг/л, для бычка

- 0,13-> 1000,00 мг/л, для тритона - 0,023->750,00 мг/л. Токсикорезистентность гидробионтов к воздействию пестицидов

уменьшается в ряду бычок - тритон - осетр. 3. Установлены зависимости пороговых и недействуюш;их

концентраций пестицидов от варианта постановки хронического

эксперимента. Пороговые концентрации пестицидов Батыр, Кортеса и

Мерлин для бычка, инкубированного со стадии икры (18 суток), до 8 раз

меньше, чем из опыта продолжительностью 13 суток при затравке после

выклева. Степень токсичности пестицидов Адмирал, Бетанал и Фуроре-супер

для мальков бычка выше при меньших сроках интоксикации. В растворах

всех изученных пестицидов при затравке осетра в стадии свободных

предличинок (ст.36) отмечены отклонения от контроля по показателям

выживаемости и развития. 4. Установлено, что изученные препараты обладают тератогенным

действием. По степени уменьшения тератогенности препараты

располагаются в ряду Батыр>Адмирал>Фуроре-супер>Мерлин>Бетанал. Резистентность гидробионтов к возникновению различных натологий

развития уменьшалась в ряду бычок - осетр - тритон. Количество

патологических признаков и степень их нроявления у рыб и амфибий носят

дозозависимый характер. 5. При моделировании хронического токсикоза установлено, что у

мальков бычка при увеличении продолжительности опыта повышается

степень тератогенности менее токсичных пестицидов. При увеличении

сроков инкубации осетра тератогенность более токсичных пестицидов

усиливается, менее токсичные пестициды проявляют большую

тератогенность только при затравке свободных эмбрионов, наиболее

«уязвимого» периода раннего онтогенеза. 6. Отмечены патологические процессы для препаратов Мерлин, Кортес

и Адмирал, выражаюш,иеся в нарушениях водного обмена различной

интенсивности; для гербицида Бетанал - в нарушениях в формировании

головного отдела; для гербицида Фуроре-супер - в подавлении

формирования пигментного комплекса

7. Для фунгицида Батыр установлено интенсивное патологическое

действие на гидробионты. У эмбрионов осетра в результате нарушения

процесса выведения жидкости из полости гастроцеля в перивителлиновое

пространство происходит накопление избытка воды, что приводит к

«гофрированной» деформации хорды. Нарушение водного обмена,

приводяш,ее к деформации осевого скелета, отмечены также у зародышей

бычка: «гофрированность», укорочение, молотообразное утолш,ение

хвостового стебля. У зародышей и личинок тритона наблюдались

многочисленные нарушения водного обмена, но специфической деформации

осевых структур не обнаружено. Выявленный единый симптомокомплекс для

рыб в период эмбрионального развития определяет специфичность

тератогенного эффекта и возможность его использования при биоиндикации

и оценки экологического состояния среды обитания. 8. Установлены корреляционно-регрессионные зависимости

токсичности между log 10 пороговых и лимитирующих концентраций

пестицидов для бычка-кругляка и тритона ребристого и соответствуюш,ими

параметрами русского осетра; выявлена прямолинейная зависимость для

связей осетр/бычок (г=0,78-0,92) и осетр/тритон (г=0,71-0,96). Корреляционно-регресионный анализ тератогенности пестицидов установил

прямолинейную зависимость между log 10 лимитирующих величин для

связей осетр/бычок (г=0,74) и осетр/тритон (г=0,84). Высокая коррелятивная

связь параметров токсичности позволяет рекомендовать бычка-кругляка и

тритона ребристого в качестве тест-объектов при разработке ПДК

загрязняющих веществ для воды рыбохозяйственных водоемов. 9. Разработан новый методический подход для оценки экологического

состояния водных экосистем и определения ПДК для 13 пестицидов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Полуян, Анна Яковлевна, Ростов-на-Дону

1. Анохин П.К. Теория функциональной системы и ее место в построениитеоретической биологии // В кн.: Эволюция темпов индивидуальногоразвития животных. - М.: Наука, 1977. - 9-18.

2. Балабанова Л.В. Действие некоторых токсических веществ на ультраструктуру иммунокомпетентных клеток рыб // 1 Конгр. ихтиологовРоссии, Астрахань, сент., 1997 : Тез. докл. - Астрахань, 1997. - 210.

3. Банников А.Г., Даревский И.С., Денисова М.П. Земноводные.Пресмыкающиеся // В кн.:Жизнь животных; Под редакциейБанникова А.Г., т.5. - М.:Просвещение, 1985. - 24 - 46.

4. Биба Н.А. Питание бычков моллюсками в Молочном лимане и прилегающей зоне Азовского моря / Пробл.экол.Азово-Черном.бассейна:совр.сост.и прогноз //Тез.докл.конф.молодыхученых,Севастополь,2001.-С.22-23.

5. Брагинский Л.П. Пестициды и жизнь водоемов.-Киев: Паукова думка, 1972. -227с.

6. Брагинский Л.П. Проблема пестицидов в водной токсикологии // Вопросы водной токсикологии. -М.:Паука, 1970.-С.81-88.

7. Брагинский Л.П., Комаровский Ф.Я., Мережко А.И. Персистентные пестициды и экология пресных вод.-Киев: Наукова думка, 1979. -141с.

8. Васецкий Г. Испанский тритон Pleurodeles waltli Michah.. В кн. «Объекты биологии развития» АН СССР. М.:Наука,1975.- 342 - 364.

9. Вахтина Т.Б. Активность ферментов в крови бычка-кругляка, обитающего в бухтах с разным уровнем антропогенной нагрузки.//Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов:Межд. конф.. Тез. докл. - Петрозаводск, 2004. - 23.

10. Велиханов Э.Э. Определение токсичности некоторых пестицидов для икры, личинок и молоди куринского осетра // Методыихтиотоксикологических исследований. - Ленинград, 1987. - 17-18142

11. Вернадский В.И, Химическое строение биосферы Земли и ее окружение. - М, 1965- 635 с.

12. Врочинский К.К. Гидробионты как индикаторы содержания пестицидов в воде: Сб.науч.тр. ПГУ "Проблемы водн.токсикол"- Петрозаводск, 1975. -С. 199-201

13. Врочинский К.К., Мухопад Л.П. Эколого-гигиенические аспекты миграции пестицидов в водоемах //Сб.науч.трудов ГосПИОРХ "Влияниебиологически активных веществ на гидробионтов" - 1988. - Вып.287. -С.31-38.

14. Высочина Ю.А., Кузьмина С. Влияние пестицидов толбана и томилона на кроветворение сеголеток карпа // Мат.межд.науч.конф.«Пробл.устойч.функциопир. водных и наземных экосистем», - Ростов-на-Дону, 2006. - 66-68.

15. Гвозденко СИ., Катаскова СИ., Щербакова П.И., Полуян А.Я. Тератогенные эффекты пестицидов дитиокарбаматного ряда /Осн.проб.рыбного хоз-ва и охраны рыбохоз.водоемов Азово-Черноморского бассейна // Сб.науч.трудов.Ростов-на-Допу,2004.-С.397-401.

16. Гинзбург А.С, Детлаф Т.А. Развитие зародышей осетровых рыб. АП СССР,М.,1955.-87с.143

17. Гинзбург А.С., Детлаф Т.А. Развитие осетровых рыб. Созревание яиц, оплодотворение и эмбриогенез.- М., 1969 - 257 с.

18. Гинзбург А.С., Детлаф Т.А. Осетр Acipenser gueldenstaedti. В кн. «Объекты биологии развития» АН СССР. М.:Наука,1975.- 217 - 260.

19. Гладких К.К. Влияние загрязнений на жизнеспособность рыб Воронежской водохранилища // Прир. ресурсы Воронеж, обл., их воспр-во, монит. и охрана / Воронеж, обл. сов. - Воронеж, 1995. - 179-182.

20. Голиков Н., Саноцкий И.В., Тиунов Л.А. Общие механизмы токсического действия - Л.: Медицина, 1986. - 280 с.

21. Гордина А.Д., Ткач А.В., Севрикова Д. Реакция ихтиопланктона портовых зон Черного моря на антропогенное воздействие (на примереСевастопольской бухты) // Гидробиол. ж. -1999. - 35, N 4. - 88-95.

22. Гурова Г.В., Краснов К., Мазманиди Н.Д. Влияние некоторых галогенидов фосфора на рыб в онтогенезе // Вопросы воднойтоксикологии. -М.:Наука, 1970.-С.136-149.

23. Гусева С., Данильченко О.П. Реагирование эмбрионов и личинок карпа на фосфорорганические соединения // В кн.: Реакции гидробионтовна загрязнение.-М.: Наука, 1983.-С.158-167.

24. Данильченко О.Н. Нриспособительные реакции рыб в эмбриональный период развития на изменение химического состава воды //Экологич.физиология и биохимия рыб.- Вильнюс, 1985.- 299-300.

25. Демченко В.А. Динамика возрастного состава бычка кругляка в Азовском море / Нробл.экол.Азово-Черноморского бассейна: совр.сост.ипрогноз // Тез.докл.конф.молодых ученых, Севастополь, 2001.- 25-26.

26. Детлаф Т.А., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб. - М.: Наука, 1981.- 223 с.

27. Дубинина В.Г., Семенов А.Д.Развитие марикультуры в низовье Волги и его загрязнение // Междунар. симн. но марикультуре, Тез. докл. - М.,1995. - 20-22.

28. Дудкин СИ., Колесникова Л.В., Калмакова Т.С.Критерии оценки 144негативного действия антроногенного загрязнения на репродуктивнуюфункцию азовского осетра // 1 Конгр. ихтиологов России, Астрахань,сент., 1997 : Тез. докл. - Астрахань, 1997. - 217.

29. Евланов И.А., Козловский СВ., Минеев К. Этапы антроногенного воздействия на ихтиофауну Средней Волги // Взаимодействие человека иприроды на границе Европы и Азии. Тез. докл. конф., Самара, 1996. - 90-92.

30. Зотин А.И. Физиология водного обмена у зародышей рыб и круглоротых. АНСССР,М.,1961.-317с.

31. Иванов А.А. Результаты мониторинга загрязнения рыбы и рыбопродуктов пестицидами // Здоровье населения и среда обитания. Ежемес. инф. бюл. -1999.-N11.-С. 19-21.

32. Калинина Э.М. Размножение и развитие азово-черноморских бычков.- Киев:Наукова думка, 1976.- 119 с.

33. Катаскова СИ. Критериальная значимость изменений линидного статуса раннего онтогенеза рыб при эколого-гигиеническом нормированиипестицидов в воде водоемов: Дис.канд. биол. наук. М., 1999.-133 с.

34. Кашулин Н.А. Принципы организации ихтиологического мониторинга качества поверхностных вод // ЭКВАТЭК-2000: 4-й Междунар. конгр."Вода: экол. и технол.".Тез. докл. - М., 2000. - 622-623.

35. Кольвах А. Биостатическая характеристика азовских бычков в современный период / Осн.проб.рыб.х-ва и охраны рыбохоз.водоемовАзовского бассейна // Сб.науч.трудов АзНИИРХ, Ростов-на-Дону, 1998.-С.167-171

36. Кондратьева Л.М., Чухлебова Л.М. Микробиологическая оценка изменения качества рыбы при загрязнении среды обитания // Рыбохоз.исслед. мир. океана : Тр. Междунар. науч конф., Владивосток, 27-29 сент.,1999. Т.1. - Владивосток, 1999. - 142-144.

37. Корниенко Г.Г. Физиологические аспекты оценки состояния азовских осетровых рыб // 2-й Междунар. симп. "Ресурсосберег. технол. ваквакультуре". Матер, докл. - Краснодар, 1999. - 47.

38. Коропенко Е.О. Загрязнение экосистемы Нижнего Дона пестицидами / Осн.проб.рыбного хоз-ва и охраны рыбохоз.водоемов Азово-Черноморского бассейна // Сб.науч.трудов.Ростов-на-Дону,2004.-С.338-345.

39. Коросов А.В., Калинкина Н.М. Количественные методы экологической токсикологии: Учебно-методическое пособие. ПетрГУ,КНЦ. -Петрозаводск, 2003.- 56 с.

40. Кравченко Е.В. Питание осетровых рыб в районе о. Малый Жемчужный // Каспийский Плавучий Ун-т. - 2000. - № 1. - 135-136.

41. Крыжановский Г., Дислер П.П., Смирнова Е.П. Эколого- 146морфологические закономерности развития окуневых рыб (Percoidei) //Труды Ин-та морфол.животных АН СССР, вып. 10. - М.,1953. - 213 с.

42. Крылова В.Д. Нарушения в развитии бестера на ранних этапах онтогенеза при искусственном разведении // Тез.докл.У Всесоюзной конференции пораннему онтогенезу рыб. Астрахань, 1-3 октября, 1991 г.-М., 1991.-е. 194-198.

43. Кудерский Л.А. Ихтиологические критерии биологической индикации экологических нарушений // Биологическая индикация вантрапоэкологии. - Л., 1984. - 120-125.

44. Кузьминова Н.С. Токсические эффекты пестицидов на личино черноморских рыб // Тез.докл. 2 Съезда токсикологов России.- М., 2003.-С.150-151.

45. Курзыкина Л.Г.,Артемьева Н.В. Влияние продуктов синтеза витамина Е на ранний онтогенез лососевых рыб/Биологические ресурсы Белого моряи внутр.водоемов Европ. Севера // Сб.мат. междун. конфер., Вологда,5-10дек.,2005.-Вологда,2005.Т.1.-С.237-239

46. Курляндский Б.А. Профилактическая токсикология в преддверьи третьего тысячелетия // Токсикологический вестник.- №1 - 1996. - 2-4.

47. Лакин Г.В. Биометрия.- М.: Высшая школа, 1973.- 343 с.

48. Левина И.Л. Активность детоксикационных процессов у рыб при длительном пестицидном воздействии / Биологические ресурсы Белогоморя и внутр. водоемов Европ. Севера // Сб. мат. междун. конфер.,Вологда,5-10дек.,2005.-Вологда,2005.Т.1.-С.254-257.

49. Левина И.Л. Оценка воздействия гетероциклических пестицидов группы диазолов на гидробионтов. Автореф. дис. канд. биол. наук. -Ростов-на-Дону, 2002. - 24 с.

50. Лепилина И.Н. Нарушения в раннем онтогенезе осетровых // Тез.докл.У Всесоюзной конференции по раннему онтогенезу рыб. Астрахань, 1-3октября,1991г.-М.,1991.-с.161-162.

51. Лепилина И.Н., Романов А.А. Отклонения в развитии предличинок 147осетровых // Вестн. Астрахан. гос. техн. ун-та. Рыб. х-во . - Асрахань,1997. - 75-78.

52. Лукин А.А. Патологии рыб как индикатор качества вод Кольского Севера // Пробл. хим. и биол. мониторинга экол. состояния вод. Объектов Кол.Севера / РАН. Кол. науч. центр. - Апатиты, 1995. - 105-119,192.

53. Лукьяненко В.И. Экологические аспекты ихтиотоксикологии.- М.:Агропромиздат, 1987.- 307 с.

54. Макаров Э.В, Воловик СП, Грибанова Э, Хрусталев Ю.С. Есть ли будущее у Азовского моря? // Рыб. х-во. - 1999. - JST» 1. - 40-41.

55. Макаров Э.В., Житенева Л.Д., Абросимова П.А. Живые ископаемые близки к вымиранию. - Ростов-на-Дону,2000. - 9-22.

56. Мельников Н.Н., Повожилов К.В., Белан СР. Пестициды и регуляторы роста растений.- М., 1995.- 574 с.

57. Метелев В.В., Канаев А.И., Дзасохова П.Г. Водная токсикология. - М.: Колос,1971.-247с.

58. Методические указания морским токсикологическим биотестам.- М.,ВПИРО.,1978.-27с.

59. Методические указания по рыбохозяйственной оценке пестицидов.- 148Л.:ГосНИОРХ, 1973.-43C.

60. Методические указания по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водныхобъектов, имеющих рыбохозяйственное значение.- М.: ВНИРО, 1998. -148 с.

61. Минак М.Б. Токсикологическая резистентность рыб на ранних стадиях онтогенеза // Мат.докл.П Молод.науч.конф.«Актуал.пробл.биологии иэкологии».-Сыктывкар, 2004. - 181-182.

62. Минеев А.К., Евланов И.А., Кохловский С В . Оценка "здоровья" экосистемы р. Волги по состоянию рыбной части сообщества // Экол.пробл. бассейнов круп, рек - 2 : Тез. докл. Междунар. конф., Тольятти, 14-18 сент., 1998. - Тольятти, 1998. - 223.

63. Михайленко В.Г. Адаптация рыб в процессе стресса и тренировки: Тез. докл. Первый конгресс ихтиологов России.-М.: ВНИРО, 1997 - 231-232.

64. Морозов Е.И., Тарасевич Е.И., Анохина B.C. Генетика в вопросах и ответах. - Минск: Университетсткое,1989. - 288 с.

65. Мороз И.Е. Видовая и возрастная чувствительность рыб к хлорорганическим токсикантам: Тез. докл. I Всесоюзная конференция порыбохозяйственной токсикологии. - Рига, 1989. - 45-46 с.

66. Москалькова К.М. Морфо-экологические особенности развития бычка- кругляка Neogobius melanostomus.- В кн.: Морфо-экологич. анализразвития рыб. М. «Наука», 1967, С48-74.

67. Москалькова К.М. Реакция бычка-кругляка на изменение экологических условий // 1 Конгр. ихтиологов России, Тез. докл. - Астрахань, 1997. -162 с.149

68. Мухина Н.В., Плотицина Н.Ф., Голубева Т.А. Нарушения в эмбриогенезе трески лофотенобаренцевоморского стада и нерестовый период // 1Конгр. ихтиологов России,: Тез. докл. - Астрахань, 1997. - 256.

69. Нахаева В.И., Рожко К.А., Гурова О.П. Цитогенетическая оценка тяжелого металла цинка в системе био-тестов на индукцию хромосомныхаберраций. // Ест.науки и экол.-2001 .-№6.-С. 199-203.

70. Нефедова З.А. Эколого-физиологическое значение липидов в процессе раннего онтогенеза рыб // Теор. аспекты экол. биохимии / РАН. Кар. науч.центр. Ин-т биол. - Нетрозаводск, 1994. - 55-73.

71. Низова Г.А., Лебедева Е.А.. Современное эпизоотическое состояние промысловых рыб Азово-Черноморского бассейна // Основн. пробл. рыб.хоз-ва и охр.рыбохоз.водоемов Азово-Черноморского бас: Сб.науч.трАзНИИРХ. Ростов-на-Дону, 2004.-С.309-314.

72. Одум Ю. Основы экологии.- М.: Мир, 1975. - 740 с.

73. Перечень рыбохозяйственных нормативов: предельно допустимых концентраций (НДК) и ориентировочно безопасных уровней воздействия(ОБУВ) вредных веществ для воды водных объектов, имеющихрыбохозяйственное значение», M.:BIfflPO, 1999.-200 с.

74. Нокоева А.Г. Оценка экотоксикологической ситуации по клиническим натологоанатомическим симптомам заболеваемости рыб на примереучастков Верхней и Нижней Волги. Тр.науч.конф. «Водные экосистемы и150организмы - 4». М.,2003.-С.111.

75. Покоева А.Г. Рекомендации по экотоксикологической оценке качества вод в бассейне реки Волги // Тез.докл.Всерос.конф., Борок, 29 окт.-Знояб.,2002.- Ярославль, 2002.- 239-241.

76. Полуян А.Я. Оценка токсического эффекта пестицидов в зависимости от экспозиции опыта // Тез.докл.Всерос.конф.молодых ученых,-Мурманск,2002.- 164-165.

77. Помазовская И.В. Токсикорезистентность рыб в эмбриональный и ранний постэмбриональный периоды // "Эксперим водн.токсик."- Рига:3инатне,1987.-Вып. 12.-С.22-29

78. Помазовская И.В., Федорова П.В. Влияние гербицидов на эмбриональное развитие форели // Сб. науч. трудов ПГУ "Проблемы воднойтоксикологии".-Петрозаводск, 1988. - 57-59.

79. Попов П.А., Попова П.А. Оценка состояния водных экосистем методами ихтиоиндикации // Сиб. экол. ж. - 1995. - 2, N 6. - 536-539.

80. Попова Г.В., Шамрова Л.Д. Пакопление пестицидов в вопроизводительной системе рыб и их гонадотоксическое действие //Экспериментальная водная токсикология.Вып.12.,1987. - с.191-193.

81. Потапов А.И., Ракитский В.П., Повиков Ю.В., Макаров Э.В., Гвозденко СИ. Современные эколого-гигиенические проблемы пестицидногозагрязнения водоемов. - М. Медицина, 1998. - 247 с.

82. Потапов А.И., Ястребов Г.Г. Гигиенические проблемы национальной безопасности России. Мат-лы VIII Всероссийского съезда гигиенистов исанитарных врачей. Сб. н. Трудов, т. 1.: М. -1998. - 7-10.

83. Прозоровский В.Б. Использование метода наименьших квадратов для пробит анализа кривых летальности //Фармакология и токсикология -1962, №1-С. 68-72.

84. Ракитский В.П. Оценка степени реальной опасности воздействия пестицидов на организм человека и окружающую среду: Тез.докл. XIIМежд.Конгресс по химии пестицидов 5-10 авг.1990 г.- М., 1990 - 18-21.

85. Ракитский В.П. Проблема оценки потенциальной и реальной опасности 151В санитарной токсикологии и гигиене. Сб. научных трудов. - Уфа. - 1997.-С. 12-14.

86. Решетников Ю.С., Попова О.А., Кашулин Н.А., Лукин А.А., Амундсен П.А., Сталдвик Ф. Оценка благополучия рыбной части водногосообщества по результатам морфопатологического анализа рыб // Успехисоврем, биол. - 1999. - 119, № 2. - 165-177.

87. Риклефс Р. Основы общей экологии.- М.: «Мир», 1979. 424 с. ПО. Руководство по определению методом биотестирования токсичностивод, донных отложений, загрязняющих веществ и буровых растворов. -М.: РЭФИА, НИА-Природа, 2002. - 118 с.

88. Рыкова Т.И. Изучение влияния солености среды на рыб в раннем онтогенезе.//Вопросы ихтиологии.-38,№3 .-М., 1998.-С. 185-193.

89. Савваитова К.А., Чеботарева Ю.В., Пичугин М.Ю., Максимов СВ. Аномалии в строении рыб как показатели состояния природнойсреды//Вопросы ихтиологии,т.З 5 ,№2.-Москва, 1995 .-С. 182-188.

90. Самылин А.Ф Возникновение уродств при эмбриональном развитии рыб под влиянием гексахлорана // Вопросы водной токсикологии. -М.:Наука, 1970.-С.106-111.

91. Седалищев В.Т. Сибирская лягушка как индикатор антропогенных воздействий // Мат. междунар.науч.конф. «Актуальные проблемыэкологической физиологии, биохимии и генетики животных»,-Саранск,2005.-С.209-211.

92. Селиванова Е.В., Реков Ю.И. Питание бентосоядных рыб и обеспеченность их кормом в современный период / Осн.проб.рыбногохоз-ва и охраны рыбохоз.водоемов Азово-Черноморского бассейна //Сб.науч.трудов.Ростов-на-Дону,2004.-С.43-51.

93. Семенов А.Д., Коропенко Е.О. Динамика пестицидного загрязнения нижнего Дона / Повью технологии в защите биоразнообразия ввод.экосистемах //Тез.докл.-М.:МАКС Пресс,2002.- 215.

94. Сидоров B.C. Экологическая биохимия рыб. Липиды. - Л.: «Наука»,1983.240с.

95. Соколов М.С, Жариков Г.А., Дядищев Н.Р., Подгорный Л.И. Концептуальное обоснование эколого-гигиенического нормированияэкосистем // Токсикологический вестник. - 2001. - №3 - 31-35.

96. Сторож Н.В., Сорокина А.В., Кузьминова Н.С. Активность каталазы в органах некоторых черноморских рыб // Мат.межд.науч.конф.«Пробл.устойч.функционир. водных и наземных экосистем», - Ростов-на-Дону, 2006. - 406-407.

97. Стрекозов Б.П., Сухопарова В.П., Соколов О.А., Тюрюканова Г.К., Перфилова Н.В. Эколого-токсикологическое состояние агроландшафтовпоймы реки Оки // Изв. РАН. Сер. биол. - 1995. - N 1. - 87-96.

98. Стритинская Т.В., Стенанова Т.Г. Сравнительная характеристика питания бычков в районе о. Малый Жемчужный // Каспийский ПлавучийУн-т.-2000.-№1." 153-154.

99. Строганов Н.С. Методика определения токсичности водной среды // Сб. «Методики биологических исследований по водной токсикологии». -М.:Наука, 1971.-С. 14-60.

100. Студенцова Н.А., Скляров В.Я., Сергеева Н.Р. Ихтиология, гидробиология с основами токсикологии: Учеб. пособие / - Краснодар :Изд-во КубГТУ, 1999. -142 с.

101. Таликина М.Г., Изюмов Ю.Г., Чеботарева Ю.В.Аберрантные митозы и гистопатология гонад у сеголеток плотвы Rutilus rutilus послетоксических воздействий в эмбриональный и личиночный периодыразвития // Вопр. ихтиол. - 2001. - 41, № 2. - 232-238.

102. Филенко О.Ф., Дмитриева А.Г. Биотестирование как способ контроля токсичности загрязняемой водной среды // Нриборы и сие. управ. - 1999. -.№1.-С. 61-63.

103. Христов В.М. Икра и личинки рыб как индикатор загрязнения водоемов //Методы ихтиотоксикологических исследований.- Ленинград, 1987.-С.129-130.

104. Чесалина Т.Л., Руднева И.И. Воздействие тяжелых нефтяных фракций на икру и личинок бычка-кругляка Neogobius melanostomus. // Вопр.ихтиол. - 1998. - 38, № 3. - 426-429.

105. Чихачев А.С., Кладас Е.Ю.Аномалии ядерного аппарата у двух видов рыб из прибрежной зоны северо-восточных районов Черного моря // 1154Конгр. ихтиологов России, Астрахань, сент., 1997 : Тез. докл. -Астрахань, 1997. - 367-368.

106. Шатуновский М.И., Пегасов В.А., Соколова Е.Л., Кистенев А.Н., Соколов Л.И. Рыбы Москвы-реки в черте города / Наука в России. - 1996.- N 4 . - С . 75-59.

107. Шевченко В.Н. Использование резервов желточного мешка в раннем онтогенезе белуги //1 Конгр. ихтиологов России, : Тез. докл. - Астрахань,1997.-С. 467.

108. Шекк П.В., Яковенко А.В., Воля Е.Г., Портнягин Г.Т., Дручин А.И. Влияние некоторых абиотических факторов на рост личинок кефали-пиленгаса. Астрахань, 1-3 октября, 1991г.-М., 1991.-С. 177-178.

109. Шмальгаузен О.И.. Осетр Acipenser gueldenstaedti colchicus. Развитие предличинок. В кн. «Объекты биологии развития» АН СССР.М.:Наука,1975.- 264 - 276.

110. Шульман Г.Е. Физиолого-биохимическая индикация и мониторинг состояния гидробионтов Черного моря // Гидробиол. ж. - 1999. - 35, N 1. -С. 42-52.

111. Щербакова Н.И. Прогнозирование токсического действия пестицидов разных химических классов для осетровых рыб в период их раннегоонтогенеза. Автореф. дис. канд. биол. наук. - Ростов-на-Дону, 2002. - 25 с.

112. Юровицкий Ю.Г. Система зародыш-желток в развитии костистых рыб // Изв. РАН. Сер. биол. - 1996. - N 3. - 265-275.

113. Audit CO., Eger К., Aimar Possible involvement of an acylation mechanism in thalidomide-induced teratogenesis of the newt (Pleurodeleswaltl) // Dev., Growth and Differ. - 1996. - 38, № 1. - P. 47-57.

114. Brown Sullivan Karen, Spence Karla M.// Environ. Toxicol. and Chem. - 2003. - 22, № 3 . - P . 627-635.

115. Cameron P., Berg J., Von Westemhagen H. Biological effects monitoring of the North Sea employing fish embryological data // Environ. Monit. andAssess. -1996. - 40, № 2. - P . 107-124.

116. Carlson Richard W., Bradbury Steven P., Drummond Robert A., Hammermeister Dean E. Neurological effects on startle response and escapefrom predation by medaka exposed to organic chemicals // Aquat. Toxicol. -1999.-43, № 1 . - P . 51-68.

117. Das Shampa, Thomas Peter. Pesticides interfere with the nongenomic action of a progestogen on meiotic maturation by binding to its plasma membranereceptor on fish oocytes // Endocrinology. -1999. -140, № 4. - P. 1953-1956.

118. Fisk Aaron Т., Johnston Thomas A. Maternal transfer of organochlorines to eggs of walleye (Stizostedion vitreum) in Lake Manitoba and western LakeSuperior // J. Great Lakes Res. -1998. - 24, № 4. - P. 917-928.

119. Folch J., Zees M., Sloand-Stanley C.A. Simple method for the isolation and 156parification of total lipids from animal tissues. // J.Bid.Chem., 1957. - № 226 -P.492-509.

120. Galassi M., Galamari С Stage-specific toxicity and the protective role of chorion // Environ. Monit. and Assess. - 1983. - 39, № 3. - P . 117-122.

121. GESAMP.Biological indicators and their use in the measurement of the marine environment// GESAMP Reports and Studies.- №55.-UNEP,1995.-56p.

122. Glomot R. Harmonisation intemationale des protocoles en toxicologie : Rapp. // Sci. et techn. anim. lab. - 1999. - 24, N 1. - P. 8-9.

123. Hamm J.T., Hinton D.E. The role of development and duration of exposure to the embryotoxicity of diazinon //Aquat. Toxicol. - 2000. - 48, JSfo 4. - P. 403-418.

124. Kwak H.-I., Вае М.-О., Lee М-Н., Sung H.-J., Shin J.-S., Ahn G.-R, Kim Y.-H., Lee C.-Y., Cho M.-H. Effects of cartap on the early-life stages ofmedaka (Oryzias latipes) // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. - 2000. - 65,№ 6 . - P . 717-724.

125. Komienko G.G., Dudkin S.L, Lozhichevskaya T.V. Monitoring of reproductive potential of Azov sea surgeons under present conditions of habita// 3rd Int. Symp. Sturgeon, Piacenza, July 8-11, 1997 : Booklet Abstr. -Piacenza, 1997. - P. 299-230.

126. Kovriznych Jevgenij A., Urbancikova Miroslava. Acute toxicity of acetochlor for zebrafish (Danio rerio) and guppy (Poecilia reticulata) //Ekologia (Bratislava). - 1998. - 17, № 4. - P. 449-456.

127. Lajmanovich R.C., Izaguirre M.F., Casco V.H. Paraquat tolerance and alteration of internal gill structure of Scinax nasica tadpoles (Anura: Hylidae) //Arch. Environ. Contam. and Toxicol. -1998. - 34, № 4. - P. 364-369.

128. Logan Dennis Т., Wilson Harold T. An ecological risk assessment method for species exposed to contaminant mixtures // Environ. Toxicol. and Chem. -1995.-14, № 2 . - P . 351-359.

129. Lower N., Moore A. Exposure to insecticides inhibits embrio development and emergence in Atlantic salmon (Salmo salar L.) // Fish Phisiol. andBiochem.-2003.-28, № 1.-P.431-432.

130. Netting Jessa Pesticides implicated in declining frog numbers // Nature (Gr. Brit). - 2000. - 408, № 6814. - P. 760.

131. Oliveira-Filho E.C., Paumgartten F.J.R. Comparative study on the acute toxicities of a-, P-, j - and 5-isomers of hexachlorocyclohexane to freshwaterfishes // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. -1997. - 59, No 6. - P. 984-988.

132. Pawert M., Muller E., Triebskom R. Ultrastructural changes in fish gills as 158biomarker to asses small stream pollution // Tissue and Cell. 1998.- 30.- №6.-P.617-626.

133. Persichino J., Christian E., Carter R. Short-term effects of bolero on the gill apparatus of a small number of mosquitofish (Gambusia affinis) // Bull.Environ. Contam. and Toxicol. - 1998. - 61, № 2. - P. 162-168.

134. Poluyan A. An assessment of the toxic effect of pesticides on their chemical composition, the exposition time and biological characteristics of test-objects //«Marine Enviromental Research», - USA,2003.-C. 121-122.

135. Ramade F. La pollution les eaux par lesinsecticides organochlores et ses effects sur la faune aquatique.-Nature.-Paris.-1968.- №3403.-P.441-448.

136. Rehnor Rebecca. National fish survey links pesticides with sex hormone inbalance // Environ. Sci. and Technol. - 1997. - 31, №7. - P. 312-313.

137. Shedd Tommy R., Widder Mark W., Toussaint Margaret W., Sunkel Mark C, Hull Eugene Evaluation of the annual killfish Nothobranchius guentheri asa tool for rapid acute toxicity screening // Environ. Toxicol. And Chem. - 1999.-18,№10.-P. 2258-2261.

138. Shivakumar R., David M. Endosylfan induced behavioural changes in the freshwater fish, Cyprinus carpio // J.Ecotoxicol. and Envirion.Monit.- 2004.-14,№l.-P.65-69.

139. Schuhe Christoph, Nagel Roland Testing acute toxicity in the embryo of zebrafish, Brachydanio rerio, as an alternative to the acute fish test:Preliminary results // ATLA. -1994. - 22, №1. - P. 1-8.

140. Schuytema G.S., Nebeker A.V. Comparative toxicity of diuron on survival and growth of Pacific treefrog, bullfrog, red-legged frog, and African clawedfrog embryos and tadpoles // Arch. Environ. Contam. and Toxicol. - 1998. - 34,№ 4. - P. 370-376.

141. Sterling Sherry, Rispin Amy. Incorporating the 3Rs into regulatory scientific practices: International Symposium "Regulatory Testing and AnimalWelfare"// ILAR Journal- 2002.-43.- P. 18-20.

142. The Pesticide Manual, Eleventh Edition. Editor: C.D.S.Tomlin. British Crop Protection Council-1997.-1606 p.159

143. Topic Popovic N., Strunjak-Perovic I. //Ribarstvo.-1999.-57, №1. - P.3-11.

144. Van Leewen C.J. Ecotoxicological aspects of dithiocarbamatees (Thesis)// University of Utrecht.- Utrecht.-1986.- 235 p.

145. Villalobos S.Alex, Hamm Jonathan Т., Teh Swee J., Hinton David E. Thiobencarb-induced embryotoxicity in medaka (Oryzias latipes): Stage-specific toxicity and the protective role of chorion // Aquat. Toxicol. - 2000. -48, № 2-3. - P. 309-326.

146. Vismara Claudio, Vailati Giovanni, Bacchetta Renato. Reduction in paraquat embriotoxicity by ascorbic acid in Xenopus laevis // Aquat.Toxicol.- 2001.-51,№3.-P.293-303.

147. Wickett Robert G., Corkum Lynda D. Nest defense by the non-indigenous fish, the Round Goby, Neogobius melanostomus (Gobiidae), on a shipwreck inWestern Lake Erie // Can. Field-Natur. - 1998. -112, № 4. - P. 653-656.