Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Нейроспецифический белок 10-40-4: идентификация, выделение и некоторые физико-химические и иммунологические свойства

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Клюшник, Татьяна Павловна

I. ВВЕДЕНИЕ.

П. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Современные подходы к идентификации нейроспецифических антигенов.

1. Идентификация нейроспецифических белков по их специфичности для нервной ткани.

2. Направленный поиск белков, обеспечивающих уникальную структуру и организацию нервной ткани.

3. Поиск нейроспецифических изоформ известных ферментов.

4. Поиск нейроспецифических белков с использованием генно-инженерных методов.

Ш. Материалы и методы.

1У. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЕ.

§ I. Выделение нейроспецифического антигена

10-40-4.

§ 2. Получение моноспецифических антисывороток к нейроспецифическому антигену 10-40-4; метод иммуноферментного определения антигена

Ю-40-4.

§ 3. Специфичность антигена 10-40-4 для ткани мозга.

§ 4. Видовая специфичность антигена 10-40-4.

§ 5. Сравнительная характеристика физико-химических свойств антигена 10-40-4 из мозга человека и крысы.

§ 6. Клеточная и региональная локализация антигена 10-40-4 в мозге человека.

У. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

У1 .УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ. на русском языке. на английском языке.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Нейроспецифический белок 10-40-4: идентификация, выделение и некоторые физико-химические и иммунологические свойства"

Актуальность исследования. В настоящее время изучение нейроспецифических белков представляет значительный интерес, так как позволяет приблизиться к пониманию фундаментальных механизмов функционирования мозга. Становится все более очевидным, что нейроспецифические белки принимают участие в таких специфических процессах, протекающих в нервной ткани, как генерация и проведение нервного импульса, установление контактов между клетками, регуляция проницаемости ионных каналов, а также обучение и память. Однако, четко определить роль нейроспецифических белков в этих процессах пока невозможно.

В настоящее время идентифицировано около 60 нейроспецифических белков, однако, информация о многих из них исчерпывается лишь сообщением об их выявлении. Далеко не для всех нейроспецифических белков достаточно подробно изучены их физико-химические свойства, клеточная и субклеточная локализация, а также их специфичность для тех или иных областей мозга, что также может иметь значение для понимания их роли в функционировании нервной системы.

Существуют также многочисленные данные о роли нейроспецифических белков при различных патологических состояниях. Так, появление некоторых из них с спинномозговой жидкости при ряде нервных и психических заболеваний рассматривается как индекс повреждения нервной ткани. Рядом авторов в сыворотке крови больных психическими заболеваниями обнаружены антитела и сенсибилизированные лимфоциты к мозговым, в том числе и нейро-специфическим белкам.

Ранее в нашей лаборатории из экстракта водорастворимых белков мозга человека была выделена фракция, условно обозначенная фракция 10, обогащенная нейроспецифическими белками. К белкам этой фракции в сыворотке крови больных шизофренией с большой частотой (до 70 %) выявлялись антитела.

Сказанное выше определяет актуальность работы, посвященной выделению из фракции 10 нейроспецифического антигена, получившего название 10-40-4 по номерам хроматографических фракций, а также изучению его физико-химических характеристик, клеточной и региональной локализации в нервной ткани.

Цели и задачи исследования. Целью данного исследования является выделение и изучение свойств нейроспецифического антигена из фракции, к которой с большой частотой выявляются антитела в сыворотке крови больных шизофренией. Получение индивидуального препарата нейроспецифического белка, моноспецифической сыворотки к нему, а также разработка высокочувствительного иммуноферментного метода его определения позволят в дальнейшем подойти к изучению его функциональной роли, а также оценить его участие в индукции патологических иммунных реакций при психических заболеваниях.

В задачи исследования входит:

1. Разработка схемы выделения нейроспецифического антигена 10-40-4, выявленного иммунохимическими методами.

2. Получение моноспецифической антисыворотки к нейро-специфическому белку 10-40-4.

3. Изучение физико-химических свойств выделенного белка, а также изучение эволюционной стабильности его антигенной детерминанты.

4. Разработка метода количественного определения нейроспецифического антигена 10-40-4.

5. Изучение клеточной и региональной локализации вццелен-ного антигена.

Научная новизна. Выделен новый нейроспецифический антиген из ткани мозга человека и крысы. К этим антигенам получены моноспецифические антисыворотки. По своим физико-химическим свойствам, а также по специфичности антигенных детерминант для отдельных видов млекопитающих, выделенный антиген отличается от других описанных в литературе нейроспецифических белков.

Разработан высокочувствительный метод иммуноферментного определения вццеленного антигена в белковых экстрактах, с использованием которого проведено измерение его количества в различных органах человека, а также в отдельных структурных образованиях мозга.

Практическая ценность. Выделен и охарактеризован новый нейроспецифический антиген из фракции 10, к которой в сыворотке крови больных шизофренией с высокой частотой (до 70 %) выявляются антитела. Получена также моноспецифическая антисыворотка к нему и разработан иммуноферментный метод определения вццеленного антигена с чувствительностью 1-2 нг/мл, который в данной работе был использован для подтверждения нейроспецифи-чности выделенного антигена и для изучения его региональной локализации в мозге. В дальнейшем метод предполагается использовать для измерения содержания антигена в биологических жидкостях больных нервно-психическими заболеваниями.

Описанный нейроспецифический белок и полученные к нему моноспецифические антисыворотки используются при осуществлении совместных исследований, проводимых БНЦПЗ АМН СССР и Белградским центром иммунологических исследований (CiPD), а также используется в исследованиях, входящих в Государственную программу, направленных на изучение роли нейроспецифи-ческих белков в процессах, протекающих в мозге в нормальных и патологических условиях.

Автор выражает глубокую благодарность коллективу лаборатории нейрохимии и химии физиологически активных веществ за содействие в осуществлении этой работы.

П. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ИДЕНТИШАЩИ НЕЙРОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ.

Настоящий литературный обзор посвящен анализу возможных подходов к идентификации нейроспецифических антигенов, среди которых можно выделить следующие направления:

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Клюшник, Татьяна Павловна

100 выводы

1. Выделен новый нейроспецифический белок 10-40-4 из мозга человека и крысы с молекулярной массов 78-80 кД и изоэлект-рической точкой PI 4,6-4,7. Нейроспецифичность белка доказана иммунодиффузионным и иммуноферментным методами.

2. Получены моноспецифические антисыворотки и очищенные антитела к выделенным антигенам.

3. Разработан иммуноферментный метод определения нейроспецифического антигена 10-40-4 с чувствительностью 1-2 нг/мл.

4. Установлена видовая специфичность антигена 10-40-4 и определена степень перекреста нейроспецифической детерминанты 10-40-4 мозга человека с антигеном некоторых видов млекопитающих (максимальная степень 6 % - с антигеном из мозга мартышки, минимальная - 0,22 % - с антигеном из мозга крысы). Показано, что наиболее отличающиеся в иммунологическом отношении антигены 10-40-4 из мозга человека и крысы имеют также некоторые различия в значении молекулярных масс, изоэлектрических точек и аминокислотном составе.

5. Определена концентрация антигена 10-40-4 в II структурных образованиях мозга человека: максимальная концентрация в продолговатом мозге - 180 мкг/мг белка, минимальная - в коре - 5-10 мкг/мг белка.

101

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Клюшник, Татьяна Павловна, Москва

1. Анисимов Ю.З., Тимофеев Н.А. Нейроспецифические белки и медиаторная чувствительность нейронов. Материалы 9 Всесоюзной конференции по биохимии нервной системы. Ереван,1983, с. 34.

2. Беляев С.В., Куприяненко Г.И., Лысова Н.П., Полетаев А.Б. Физико-химические, антигенные и некоторые ферментативные свойства белков S -100. Биохимия, 1981, вып.46, № 12,с.2193-2202.

3. Бережной Г.А., Белик Я.В. Распределение нейроспецифических белков £ -100 и антигена Д в субклеточных фракциях головного мозга быка. Доклады АН УССР, 1981, Б, № II, с.60-62.

4. Березин В.А., Шмарева Е.Н., Шевченко Г.М. Нейроспецифические мембранные антигены в опухолях головного мозга человека. Материалы 9 Всесоюзной конференции по биохимии нервной системы. Ереван, 1983, с.6.

5. Буйлов В.К., Лакосина Н.Д., Татаринов Ю.С., Терентьев А.А. Иммунохимическая идентификация специфического о^-глобу-лина спинномозговой жидкости человека. Там же, с.39.

6. Галева Н.Н., Никитин Р.П., Влияние нейроспецифических белков S -Ю0 и гамма-глобулинов к ним на специфические функции идентифицированных нейронов виноградной улитки. Девятая Всесоюзная конференция по биохимии нервной системы. Ереван, 1983, с.263.

7. Глебов Р.Н., Крыжановский Г.Н. Специфические белки синаптических структур. Украинский биохимический журнал,1977, № 2, с.117-128.

8. Гусев А.И. Микрометод преципитации в агаре. В кн.: Иммунохимический анализ, Медицина, М, 1968, с.99-120.

9. Зайко С.Д., Соколова Н.И., Клюшник Т.П., Бурбаева Г.Ш. Нейроспецифические белки 14-3-2, 14-3-3, 10-40-4: выделение и свойства. Биохимия, 1984, вып.49, № 3

10. Использование метода аффинной хроматографии для выделения антител к мозгоспецифическим антигенам и некоторые данные к характеристике этих антигенов. Ж.невропатол. и психиатр., 1977, т.7, № I, с.48-53.

11. Игнатов С.А., Ведерникова Л.В., Бурбаева Г.Ш., Лозовский Д.В. Антигенный состав белковых фракций коры головного мозга человека, полученных хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе. -Ж.невропатол. и психиатр., 1977, т.77, вып.2, с.273-278.

12. Казначеев В.П., Штарк М.Б., Горш Л.В., Гайнутдинов Х.Л. Нервноспецифические белки и их возможные физиологические функции. Успехи физиологических наук. т.8, № 2, 1977, с. 2852.

13. Капралов А.А., Смерчинская Л.С. Влияние Са^+ на стимулируемое нейроспецифическим белком £ -100 фосфолирование белков изолированных ядер мозга крыс. Материалы девятой Всесоюзной конференции по биохимии нервной системы. Ереван, 1983,с.61.

14. Кашкин К,П., Шарецкий А.Н., Суринов Б.П., Бочкова Д.Н. Электрофоретическое и иммуноэлектрофоретическое исследование белков и эстераз головного мозга. Вопрос.мед. химии, 1969,3, с.235-243.

15. Клейн Н.Э., Чоговадзе И.С. О мембранных белках нервных окончаний, синтез которых тормозится ингибиторами памяти. -Сообщ.АН Груз.СССР, 1974, №2, с.181-184.

16. Королева Е.И., Матвеева Л.Н., Методы количественного определения белка в биологическом материале. В кн.: Практикум по биохимии. Изд-во Моск.ин-та М, 1979,с.90.

17. Конышев В.А. Методы количественного определения белка. В кн.: Лабораторная иммунология. Медицина, М, 1967, с.234.

18. Конышев В.А. Методы выделения антигенов, основанныена экстракции и фракционировании осаждением. В кн.: Лабораторная иммунология. М, 1967, с.292.

19. Корочкин Л.И., Голикова Е.В., Свиридов С.М. Иммгуно-электрофоретическое и ферментативное исследование некоторых антигенов головного мозга крысы белой. Бголл.экспер.биол. и мед., 1971, № 8, с.80-83.

20. Кулагин П.П., Чиш ева М.А. Иммунохимическая идентификация и характеристика двух органоспецифических антигенов мозга человека. Ш Всесоюзный биохимический съезд, Рига, 1976, I, с.189.

21. Кулагин П.П., Чишиева М.А. Иммунохимический анализ кислых гликопротеинов мозга человека. Материалы девятой Все--союзной конференции по биохимии нервной системы. Ереван, 1983, с.67.

22. Манукян К.Г. Протеолипиды миелина. Материалы девятой Всесоюзной конференции по биохимии нервной системы. Ереван, 1983, с.19.

23. Менджерицкий A.M., Поверенный A.M. О ДНК-связывающей способности основного белка миелина. Материалы девятой Всесоюзной конференции по биохимии нервной системы. Ереван, 1983, с.70.

24. Менджерицкий A.M., Вовченко И.В., Шерстнев К.Б. Характеристики основного белка миелина из спинного мозга собак. -Биохимия, т.44, вып.1, 1979, с.177-180.

25. Назарян К.Б., Карапетян М.Г., Казарян Б.А. Енолазная активность белков нервной ткани. Материалы девятой Всесоюзной конференции по биохимии нервной системы. Ереван, 1983, с.72.

26. Остерман JI.A. В кн.: Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. М., 1981, с.76-83.

27. Остерман JI.A. В кн.: Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М., 1983, с.ПЗ-116.

28. Полетаев А.Б., Мещерякова О.Д. Новые данные о функции нейроспецифического белка S -100: взаимодействие с тубулином нервной ткани. Биохимия, 1982, вып.47, № I, с.1835-1838.

29. Райдер К., Тейлор К. Вкн.: Изоферменты, М., 1983,с.56.

30. Райдер К., Тейлор К. В кн.: Изоферменты. М., 1983, с.9-10.

31. Райдер К., Тейлор К. В кн.: Изоферменты, М., 1983, с.48-49.

32. Синичкин А.А., Гершенович З.С., Румбешт JI.M. Обнаружение специфических и индивидуальных белков мозга крысы. ДАН СССР, 1969, т.186, № 2, с.474-476.

33. Соколова Н.И., Зайко С.Д., Бурбаева Г.Ш. Выделение нейроспецифического изофермента енолазы из мозга человека. -Ереван, 1983, с.88.

34. Старостина М.В. Функциональные характеристики нейроспецифического белка 5 -100. Автореферат кандидатской диссертации. М., 1981.

35. Старостина М.В., Свиридов С.М. Взаимодействие различных фракций нейроспецифического белка S -100 с кальцием. Молекулярная биология, 1978, т.12, вып.2, с.372-376.

36. Старостина М.В., Свиридов С.М. Современные представления об органоспецифических белках мозга. Вестник АМН СССР, 1979, № 7, с.66-70.

37. Трапезонцева Р.А., Козлова Л.С., Менджерицкий A.M., Вилков Г.А., Вовченко И.Б. Активация протеолиза в мозгу и лик-воре антителами к основному бежу миелина. Ереван, 1983, с.90.

38. Туркова Я. Нерастворимые носители и наиболее распространенные методы иммобилизации лиганда. В кн.: Аффинная хроматография, М., 1980, с.188.

39. Туровский B.C., Репин B.C., Надточий В.В. Нейроспеци-фический белок 5 -100 ^синаптосомах коры головного мозга крысы. Бгалл.экспер.биол. и медицины, 1976, т.81, №2, с. 164-166.

40. Тюленев В.И., Канралов А.А., Велик А.Я. Роль белка £ -100 в фосфорилировании ядерных белков мозга. Материалыдевятой Всесоюзной конференции по биохимии нервной системы. Ереван, 1983, с.25.

41. Хватова Е.М. Мембраносвязанные и растворимые ферменты нервной клетки. Ереван, 1983, с.28.

42. Храмкова И.И., Абелев Г.М. Пределы чувствительности метода преципитации в агаре. Бюлл. экспер. биолог, и медицины, 1961, т.52, № 12, с.107-109.

43. Шаде Д?к., Форд Д. Основы неврологии. М., 1976, с.156.

44. Штарк М.В. Бидонеспецифические белки нервной системы: белок3 -100. В кн.: Иммунонейрофизиология, Л., 1978,с.11-23.

45. Штарк М.В. Белки синаптосом. В кн.: Иммунонейрофи-зиология, Л., с.32-33.

46. Энгельгардт Н.В. В кн.: Имцунохимический анализ под ред. Зильбера Л.А., М., 1968, с.165-178.1. Ю7ь) на английском языке

47. Abe Т.,Talcanashi K.,AndoT. Purification and properties of S-IOO proteine brain.-J.Biochem.,1974, v.75,No.I,p.11-22.

48. Amaducci L.,Porno K.,Eng L. Glial fibrillary acidic protein in cryogenic lesions of rat brain.-Neurosiense Letters, 1981, v.2I, p.21-32.

49. Amerongen V.N.A. ,Roukema P.A. Immunofluorescence study of the cellular localization of GP-350» a sialoglycoprotein from brain.-Brain Researsh, 1974, v.81, p.I-I9«

50. Amerongen V.N.A. ,Roukema P.A. Physico-chemical charac teristics and regional distribution studies of GP-350, a soluble sialoglycoprotein from brain.-J.lTeurochem., 1973, v.2I, p.125-136.

51. Bennett G.S., Edelman G.M. Isolation of an acidic protein from rat brain.-J.Biol.Chem., 1968, v.243, p.6234--6241.

52. Bigbee J.W., Eng L.F. Analysis and comparison of in vitro synthesisized glial fibrillary acidic protein in the rat Cttb intermediate filament proteins.-J.Heurochem., 1982, v.38, No.I, p.130-134.

53. Bignami A., Dahl D. Specificity of the glial fibrillary acidic protein for astroglia.- J.Histochem. and Cytochem., 1977, v.25j Ho.6, p.466-469.

54. Bignami A., Dahl D. Differentiation of astrocytes in cerebellar cortex and the pyramidal tracts of the newborn rat,-Brain Research, 1973, v.49, p.393-4-02.

55. Bock E. Nervous system specific proteins.-J.Neuro-chem., 1978, v.30, p.7-14.

56. Bock E.,Dissing J. Demonstration of enolase activity connected to the "brain-specific protein 14—3-2.-Scand. J. Immunol., 1975» v.4, p.31-36.

57. Bock E., Jorgensen O.S., Dittman L.,Eng L.F. Determination of "brain-specific antigens in short term cultivated rat astroglial cells and in rat synaptosomes.-J.Neuro-chem., 1975, v.25, p.867-870.

58. Boston Р.ЗГ., Jackson P.,Kynoch P.A.M., Thompson R.J, Purification, properties and immunohistoshemical localization of human brain 14-3-3 protein.-J.lTeurochem.,1982, v.38, p.1466-1474.

59. Boston P.F.,Jackson P. Purification and properties of a brain specific protein: human 14-3-3 protein.-Biochemical Society Transact. 590 th Meeting. Sheffield, 1980, v.8, p.617-618.

60. Brown B.A., Strocchi P., Kixon., Marotta C.A. Characterization of rat and mouse CITS neurofilament proteins.--Trans. Am. Soc. Neurochem., 1980, v.II, p.26.

61. Calvert R., Anderton B.H.,In vivo metabolism of mammalian neurofilament polypeptides in developing and adult rat brain.-PEBS Letters, 1982, v.145, No.2, p.171-175»

62. Cammer W.,Norton W. Di«c gel electrophoresis of myelin proteins: new observations on development of the intermediate proteins (Ш-20).-Brain Researsch, 1976, v.109, p.643-648.

63. Cocchia D. Immunohistochemical localisation of S-IOO protein in the brain of adult rat*0ell and Tissueresearch, 1981, V.2I4, p.529-540.

64. Chiu P., Korey В., Norton W. Intermediate filaments from bovine, rat and human CNS; mapping analyses ofthe major proteins.-J.Neurochem., 1980, v.34-, p.II49-II59*

65. Chiu P., Norton W. Bulk preparation of CNS cyto-sceleton separation of individual neurofilament protein bygel filtration: dye-binding characteristics and amino acid compositions.-J.Neurochem., 1982,,v.39, p.I252-I260.

66. Comings D. Two-Dimensional gel electrophoresis of human brain proteins. I. Technique and nomenclature of proteins.-Clin.Chem., 1982, v.28/4, p.782-789.1.l

67. Comings D. Two dimensional gel electrophoresis of human, brain proteins. II. Specific proteins and brain sub-fractions.- Clin.Chem., v,28/4, p.789-798.

68. Dahl D. Astroglial and axonal proteins in isolation of a 70 000 dalton polypeptide from bovine brain filament preparations by immunoaffinity chromatography with antineuro-filament antisera.- Biochimica et Biophysica Acta, 1980, v.622, P.9-17.

69. Dahl D. Immunochemical and immunofluorescense studies of the glial fibrillary acidic protein in vertebrates.-Brain Research, 1973, v.61, p.279-293.

70. Dahl D., Bignami A. Glial fibrillary acidic protein from normal human brain;purification and properties.-Brain

71. Research, 1973, v.57, No.2, p.343-360.89* Dahl D., Bignami A. Heterogenity of the glial fibrillary acidic protein in gliosed human brains.-J. of the neurological sciences, 1974, v.23, p.551-563.

72. Dahl D., Bignami A. Glial fibrillary acidic protein from normal and gliosed human brain. Demonstration of multiple related polypeptides. -Biochimica et Biophisica Acta, 1975»v.386, p.41-51.

73. Dahl D., Bignami A. Immunogenic properties of the glial fibrillary acidic protein.-Brain Research, 1976, v.II6, No.I, p.150-157.

74. Dahl D.,Crosby C., Gardner E., Bignami A. Purification of the glial fibrillary acidic protein by ani.onexchange chromatography.-Analytical biochemistry, 1982, v.I26, p.165-169.

75. Davison P.F., Hong B-S. Structural homologies in mammalian neurofilament proteins* Brain Research, 1977» v.I34, No.2, p.287-295.

76. De Armound S.J., Fajardo M.,Naughton S., Eng L.F. Degradation of glial fibrillary acidic protein by calciumdependent proteinase: an electroblot study.-Brain Research., 1983, v.262, p.275-282.

77. Pranko H.C., Koski C.L., Gibbs C.J., McParlin D.E. monoclonal antibody specific for myelin glycoprotein PQ. Derivation and characterization. Proc. Natl. Acad. Sci. UCA,1982, v.79, p.3618-3622.

78. Geisler N., Plessman U., Weber K. Related amino acid sequences in neurofilaments and non-neuronal intermediate filamets.-Nature, 1982, v.296, p.448-450.

79. Gennarini G., Corri P., Pavia R., Viliello P., DiEenedetta G. A novel soluble brain-specific protein

80. Sy-I). Identification and partial characterization.-J. Neuroimmunol., 1983, v.4(2), p.69-76.

81. Gheuen J., Lowenthal A., Karcher D., Noppe M. Similarities bettween the nervous tissue proteins alpha-albumin and glial fibrillary acidic protein.-In: Dynamicproperties of glial cells. Ed. by E. Schoffenields. Pergamon Press, Oxford and N.X., 1978.

82. Hong B-S., Peter F. Biochemical and immunochemical evidence for the formation of a dimer of glial fibrillary acidic protein.-Biochemica et Biophysica Acta, 1982, v.700, p.16-25,

83. Hoque-Angeletti R.A., Wu H-L. ,Schaepfer V/.W. Preparative separation and amino acid composition of neurofilament triplet proteins.-J.Heurochem., 1982, v.38, p.116-120.

84. Hoffman P.,Lasek R. Identification of major structural polypeptides of the axon and their generality among mammalian neurons.-J.Сell Biol., v.66, p.351-366.

85. Hyden H. Acalcium-dependent meshanism for synapse and nerve cell membrane modulation.-Proc. Nat.Acad.Sci.USA,1974, v. 71, No.8, p.2965-2968.

86. Hyden H., Ronhback L. Effect of S-IOO protein on nerve re generation.-Brain Research., 1978, v.145, Ho.I,p.179-180.

87. Hyden H., McEwen B. Aglial protein specific for the nervous system.-Proc. Hat. Acad.Sci. USA, 1966, v.55» p.554-558.

88. Hullin D.A., Brown K., Kynoch P., Smith 0., Thompson R. Purification, radioimmunoassay and distribution of human brain 14-3-2 protein (nervous system specific eno-lase)in Human Tissues.- Biochimica et Biophysica Acta, 1980, v.628, p.98-108.

89. Huston J.S., Bignami A. Structural properties of the glial fibrillary acidic evidence for intermolecular disulfide bonds.-Biochimica et biophysica acta, 1977» v.493, P.93-103.

90. Ibsen S., Beresin V., H^rgard-Pedersen В., Bock E., Ensime linked immunosorbent assay of the D2 glycoprotein.--J. Heurochem., 1983»

91. Iones T.R., Ruoslant E., Clifford S.S., Bigner D.D, Fibronectin and glial fibrillary acidic protein expression in normal human brain and anaplastic human gliomas.--Cancer Research, 1982, v.42, p.168-177.

92. Iqbal K. ,Irundke-Iqbal, Wisnieivski H.M., Terry K.D, On neurofilament and neurotubule protein from human autopsy tissue.-J. Heurochem., 1977, v.29, p.417-424.

93. Isler H., Honegger G.G. The effect of human myelin basis protein (НШВР) on the frog spinal cord. -J. neurological sciences, 1985, v.58, p.387-597.

94. Isobe T.,Ishioka IT., Okuyma T. Structural relation of two S-I00 proteins in bovine brain, subunit composition of S-IOOA proteins.-Eur. J.Biochem;, 1981, v. 115, p.469-4-74.

95. Isobe T.,Tsugita A., Okuyama T. The amino acid sequence and subunit structure of bovine brain S-I00 protein (PAP I-b).-J. Neurochem., 1978, v.30, p.921-923.

96. Isobe Т., Ishioka N., Masuda Т., Takanashi Г., Ganno S., Okuyama T. A rapid separation of S-I00 subunits by high performance liquid chromatography: the subunit compo sitions of S-I00 protein.-Biochem. Int., 1983, V.6(3),p.419-426.

97. Jambeth A, Immunochemical characterization of antisera to rat neurofilament subunits.-J. Neurochem,, 1981, v.37, No.5, p,1260-1267*

98. Jorgensen O.S., Bock E. Brain specific synaptosomal membrane proteins demonstrated by Immunoelectrophoresis.-J. Neurochem., 1974, v.25, No.p.879-885.

99. Jorgensen O.S., Delouvee A., Thiery J-P.,Edelmann G.N. The nervous system specific protein D2 is involved in adhesion among neurites from cultured rat ganglia.-PEBS Letters, 1980, v.III, p.39-42.

100. Jeckson P., Thompson R. High-resolution two-dimensional analysis of human brain soluble proteins.--Biochem. Society Transact., 1980, v.8, No.2, p.616-617.

101. Jacques В., Paul M., Dominique G. Bovine brain S-IOO protein: separation and characterization of new S-IOO protein species.-J. Neurochem., 1983» v.40, p.145-I52.

102. Keiko K., Shoichi I., Hideo S., Xasuo T. Identification of calcium-activated neutral protease in the peripheral nerve and its effects on neurofilament degeneration. -J,Neurochem., 1983, v.40, p.908-913.

103. Keller A., Scarna H.,Hermet A., Priol J-F. Biochemical and Immunological properties of the mouse brain enolase purified by a simple method,-J.lTeurochem., 1981,v. 36, p.1389-1397.

104. Kitamura K., Suzuki A., Suzuki M. ,Uyemuza K. Amino acid sequence of the glycopeptide derived froom a major glycoprotein in bovine peripheral nerve myelin.--FEBS Letters., 1979, v.100, No.I, p.67-70.

105. Kosinski E., Grabar P. Immunological studies of rat brain.-J.Neurochem., 1967, v.14, p.273-281.

106. Labourdette G., Marka A. Synthesis of S-I00 protein in monolayers of rat glia cells. -Europ. J. Biochem., 1975, v.58, No.I, p.73-79.

107. Legault-Demare L., Zeitoun J., Lando D.,Lamande N., Grasso A.,Gros F. Expression of a specific neuronal protein 14-3-2 during in vitro differentiation of neuroblastoma сells.-Experimental cell research, 1980, v.123,p.233-239.

108. Liem R. Simultaneous separation and purification of neurofilament and glial filament protein from brain.-J.Neurоchem., 1982, v.38, p.142-147.

109. Liem R. ,Goedker EUP. A partially purified membrane protein specific to the brain.-Biochimica et Biophysica Acta, 1973, v.322, No.2, p.359-371.

110. Liem R., Hutchison S. Purification of individual components of the neurofilament triplet: filament assemblyfrom the )70 ООО d subunit.-Biochemistry, 1982, v.21, p.3221-3226.

111. Liem R., Yen S., Salomon G., Scelanski H. Intermediate filaments in nervous tissues.- J.Cell Biol., 1978» v.79, p.637-643.

112. Lee V., Horecker B.L. Subunit structure of rabbit brain aldolase.-Arch. Biochem. Biophys., 1974, v.162,p.401-411.

113. Lee V., Wu H., Schlaepfer W. Monoclonal antibodies recognise individual neurofilament triplet proteins.--Proc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1982, v.79, p.6089-6092.

114. Liakopoulow A., MacPherson C.P. Studies of brain antigens. IV. Isolation and partial characterization of a rat species-restricted antigen of nervous tissue (SRAHT).-J. Immunol., 1970, v.105, p.512-320.

115. Lucas C.V., Bensch E.G., Eng L.P. In vitro polymerization of glial fibrillary acidic (GFA) protein extracted from multiple sclerosis (MS) brain.-J.Heurochem. Res.,1980, v.5, p.247-255.

116. Many R.S., Kay C.M. Isolation and spectral studies on the calcium-binding properties of bovine brain S-IOO a protein .-Biochemistry, 1983, v.22, p.3902-3907.

117. Marangos P.J., Zomzely-Heurath C., Luk D.C.M., York 0. Isolation and characterization of the nervous system specific protein 14-3-2 from rat brain.-J.Biol. Chem., 1975, v.2$0, p.1884-1891.

118. Marangos P.J., Zomzely-!Teur ath C., York G. Determination and characterization of nervous specific protein (NSP) associated enolase activity.-Biochem. Biophys. Res. Gommun., 1976, v.68, p.I309-I3I6.

119. Marangos P.J., Zomzely-Neurath 0., Goodwin F.K. Structural and functional properties of neuron-specific protein (NSP) from rat, cat and human brain.-J.Neurochem., 1977, v.28, p.1097,-10107.

120. Marangos P.J., Goodwin F.K., Parma A., Lauter K., Trems E. Neuron specific protein (NSP) in neuroblastoma cells: relation to differentiation.-Brain Research, 1978» v.145, p.49-58.

121. Marangos P.J., Zis A.P., Clark R.L., Goodwin F.K. Neuronal, non-neuronal and hybrid forms of enolase in brain: structural, immunological and functional comparisons.-Brain Research, 1978, v.150, p.II7-I33.

122. Marks A., Law J., Mahony J.В., Baumal R.

123. The structural conservation of S-IOO protein during evolution: analysis by reactivity with a monoclonal antibody.--Neurochem., 1983, v.41, p.I07-II2.

124. Maxshak D.R., Watterson D.M., VanEldic L.J. Calcium-dependent interaction of S-IOOb , troponin С and calmodulin with immobilized phenothiazine.-Proc Natl.Acad. Sci USA, 1981, v.78, p.6793-6797.

125. Martenson R.E., Deibler G.F. ,Kies M.W., McKheally S.S., Shapira R., Kibler R.F. Differences between the twomyelin basis proteins of of the rat central nervous system,-Biochim. Biophys. Acta., 1972, v.26^, p.193-203.

126. Masuda T., Sakimura K., Yoshida Y., Kuwano R., Isobe Т., Okuyama Т., Takakashi Y. Developmental changes in the translatable тША for b-subunit of S-I00 protein in rat brain.-Biochim. Biophys. Acta., 1983» v.740, p.249-232.

127. Matthew V/., Tsalaver L., Reichardt L.F. Identification of a synaptic vesicle-specific membrane protein with a wide distribution in neuronal and neurosecretory tissue,-J. Cell Biol., 1981, v.91, p.257-269.

128. Mendell J.R., Whitaker J.H. Immunocytоchemical localization studies of myelin basis protein.-J. Cell Biol., 1978, v. 76, p.502-511.

129. Michetti 3?., Miani IT., DeRenzis G., Canglia A., Correr S. Nuclear localization of S-I00 protein.-J.lTeurochem., 1974, v.22, No.2, p.239-244.

130. Moore B.W. Chemistry and biology of two proteins, S-I00 and 14-3-2, specific to the nervous system,-Int, Rev, of Neurobiol,, 1972, v.I5, p,215-225.

131. Moore B.W. Brain-specific proteins, -In:Proteins of the nervous system. Raven Press, New York, 1973, p.I-I2.

132. Moore B.W., McGregor D, Chromatographic and electrophoretic fractionation of soluble proteins of brain and liver.-J. Biol. Chem., 1965, v.240, p.I647-I653,

133. Moore B.W., Petez V.J. Specific acidic proteinsof the nervous system.-In: Physiological and biochemical aspects of nervous integration. N.Y., Englwood Cliffs , 1968, p.343-359.

134. Moore B.W., Perez V.J., Gehring M, Assay and regional distribution of a soluble protein characteristic to nervous system.-J.Neurochem., 1968, v.I5, p.265-272.

135. Hakazato Y., Yamaguchi H., Takanashi K., Mori T. Immunohistochemical localization of nervous tissue proteins S-IOO, GPAP and astroprotein in extraneural tissue.-Protides Biol. Fluid, 1983, v.30, p.47-50.

136. Nixon R., Brown B.,Marotta G. Posttranslational modification of a neurofilament proteins during axoplasmic transport, regional specialization.-J. Cell Biol., 1982, v.94, p.150-158.

137. Omlin F.X., Webster H.F., Palkovits G., Cohen S.R. Immunocytochemical localization of basis protein inmajor dens line regions of central and peripheral myelin.-J. Cell Biology, 1982, v.95, p.242-248.

138. Pant H.C., Yoshioka Т., Tasaki I., Gainer H.

139. A calcium activated protease in squid axoplasm.-J. lleuro-chem., 1979., v.32, p.99-Ю2.

140. Pant H.C., Terakawa S., Gainer H. Divalent cation dependent phosphorylation of proteins in squid giant axon.--Brain Research., 1979, v.162, p.303-313.

141. Patel J., Marangos P. Modulation of brain protein phosphorylation by the S-IOO protein.-Biochem. Biophys.res. Commun., 1982, v.109, p.I083-I093.

142. Raymond. S., Miles J.L., Lee J.C.J. Lipoprotein patterns in acrylamide gel electrophoresis.-Science, 1969, v.I3I, No.3708, p.34-6-347.

143. Rueger D.C., Dahl D., Bignami A. Purification of a brain-specific astroglial protein by immunoaffinity chromatography.-Analytical biochemistry, 1978, v.89,p.360-371.

144. Rider C.C., Taylor C.B. Enolase isoenzymes in rat tissue. Electrophoresis, chromatographic, immunological and kinetic properties.-Biochimica et Biophysica Acta,1974, v.365, p.283-300.

145. Runge M.S., Schlaepfer W.W., Williams R.C. isolation and characterization of neurofilament from mammalian brain.-Biochemistry, 1981, v.20, p.170-173.

146. Shapiro A.L., Vinuela E., Maizel J.V., Molecular Weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylarrn.de gels.-Biochem. Biophys. Res. Commun., 1967, v.28, p.815-820.

147. Sciffer D., Giordana M.T., Mauro A., Megheli A. Glial fibrillary acidic protein (GFAP) in human cerebral tumors. An immunohistochemical study.-ITumori, 1983, v.69, p.95-104.

148. Schlaepfer V/., Freeman L. Calcium-dependent degradation of mammalian neurofilaments by soluble tissue factors from rat spinal cord.-Neuroscience, 1980, v.5, p.2305-2314.

149. Schlaepfer W., Micko S. Chemical and structural changes of neurofilaments in transected rat sciatic nerve»--J. Cell Biol., 1978, v.78, p.369-378.

150. Schlaepfer W., Lee Y., Wu H.L. Assessment of immunological properties of neurofilament triplet proteins.--Brain Res., 1981, v.226, p.259-272.

151. Schlaepfer W., Zimmerman V.-J. Calcium mediated breakdown of glial filaments and neurofilaments rat optic nerve and spinal cord.-Heurochem. Res., 1981, v.6, p.243--255.

152. Scbmechel D., Marangos P.J., Brightman N. Heuron--specific enolase is a molecular marker for peripheraland central neuroendocrine cells.-Nature, 1978, v.276, p.834-836.

153. Schmechel D., Marangos P.J., Zis A.P., Brightman M., Goodwin F.K. Brain enolases as specific marcers of neuro

154. Glial cells.-Science, 1978, v.199, p.313-315.

155. Schmechel D.E., Brighman M.W., Marangos P.J. Ueurons switch from nonneuronal enolase to neuron-specific enolase during differentiation.-Brain Research., 1980, v.190, p.195-214.

156. Schmechel D.E., Brightman M.W., Barker J.L. Localisation of neuron-specific enolase in mouse spinal neurons grown in tissue culture.-Brain Research, 1980, v.181,p.391-400.

157. Schook W., Norton W. Neurofilaments account for the lipid in myelin-free axons.-Brain Res., 1976, v.118, p.517-522.187,. Shaw G., Weber K. Differential expression of neurofilament triplet proteins in brain development., Nature, 1982, v.298, p.277-279.

158. Shecken G., Lasek J. Neurofilament protein phosphorylation. Species degenerality and reaction characteristics.--J. Biol. Chem., 1982, v.257, p.4788-4794.

159. Smith R., McDonald B. Association of myelin basis protein with detergent micelies.-Biochimica et Biophysica Acta, 1979, v.554, p.133-147.

160. Sternberger N.H., Quarles R.H., Itoyama Y.,Webster H.D. Myelin-associated glycoprotein demonstrated immunocy-tochemically in myelin and myelin forming cells of developing rat.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v.76, N0.3,p.I5IO-I514.

161. Sternberger L.A., Harwell L.W., Sternberger N.H. Neurotypy: Regional individuality in rat brain detected by immunocytochemistry with monoclonal antibodies.-Proc.

162. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v.79, No.46, p.I326-I330.

163. Stewart J.A. Subunit composition of tissue specific S-IOO protein of beef brain.-Biоcliem.Biophys. Res.

164. Comm., 1972. v.46, No.3, p.I403-I4I0.

165. Stevens P.L., Fluharty A.L., Killgrove A.R. Arylsulfatase of human tissue studies on a form of aryl-sulfatase В found predominantely in brain.-Biochimica et Biophysica Acta, 1977, v.481, No.2, p.34-9-360.

166. Strong D.D., Herschman H.R. Identification and characterization of a brain-specific antigen enriched in neonatal brain.-Brain Researsh, 1978, v.151, p.83-89.

167. Strong D.D., Herschman H.R. Identification and characterization of a brain-specific antigen enriched in neonatal brain.II. Antigenic stability, species cross-reactivity and tumor cell association.-Brain Research, 1980, v.184, p.271-282.

168. Thompson R., Grahem J., McQueen J., Eynoch P.,

169. Ueda C.T.,Eng L.E., Bignami A. Immunological study of the glial fibrillary acidic protein.-Brain Research, 1972, v.37, p.81-89.

170. Uyemura K., Vincendon G., Gombos G., Mandel P. Purification and some properties of S-IOO protein fractions from sheep and pig brain.-J. Neurochem., 1971, v.3, p.429--438.

171. Voller A., Bidwell D.E., Bartlett A. Enzyme immunoassays in diagnostic medicine.-Bull. World Health Organ., 1976, v.53, p.55-65.

172. Warecka K. Isolation of brain specific glycoprotein.--J. Neurochem., 1970, v.17, p.829-830.

173. Warecka K., Bauer H.J. Studies on brain-specific proteins in aqueous extracts of brain tissue.-J.Neurochem., 1976, v.I4, p.783-793.

174. Warecka Moller H.J., Vogel H.M., Tripatris J. Human brain-specific alpha-glycoprotein: purification by affinity chromatography and detection of a new component,128localization in nervous сells.-J. Neurochem., 1972, v.19, p.719-725.

175. Whitaker J.N., Seyer J.M. The sequential limited degradation of bovine myelin basis protein by bovine brain cathepsin D.-J. Biol. Chem., 1979, v.254, N0.15, p.6956--6963.

176. Wills on V.J.C., Graham J.G., Mclween I.N.F., Thompson P.J. Immunoreactive aldolase C^ in cerebrospinal fluid of patients with neurological disorders.-Ann. of Clin. Biochem., 1980, v.I7, p.II0-II3.

177. Willson V.J.C., Iones H.,Morgan P., Thompson R. A two-site immunoradiometric ass;;.у for the BB isoenzyme of human creatin kinase.-Biochem, Soc. Transact., 1980, v.8, No.2, p.621-622.

178. V/ilson M.B., Nakane P.K. In: immunofluorescence and related staining teckniques. Eds. W. Khapp, E. Holubar, G. Wick. Elsevier/North-Holland Biomedical Press, Amsterdam, 1972.

179. Zacharius R., Zell Т., Horrison J., Woodlock J. Glicoprotein sta.im.ng following electrophoresis on acrilamide gels.-Anal. Biochem., 1969, v.9, p.148-132.

180. Zimmerman U-J.P., Schlaepher W.V/. Characterization of a brain calcium-activated protease that degrades neurofilament proteins.-Biochemistry, 1982, v.21, p.3977-3983.