Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофункциональное исследование тимуса кур в онтогенезе

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональное исследование тимуса кур в онтогенезе"

ин

АКЛДЕЛШЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ БИОХИМИИ

На правах рукописи

АЛЛАЯРОВА ГУЛЬИАРА НБАДУЛЛАЕВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ТИМУСА КУР В ОНТОГЕНЕЗЕ

(03.00.25 — клеточная биология)

А втореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ташкент — 1993

Работа выполнена в лаборатории радиационной биотехнологии Института биохимии АН РУ н лаборатории патологической анатомии. Научного Центра Хирургии Д\3 РУ.

Научный руководитель:

доктор биологических наук,

профессор К. Н. Нншаибаев

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Б. С. Гильдиева

доктор биологических наук,

профессор П. Л. Хакимов

Ведущая организация: 2-oii Ташкентский Государственный Медицинский Институт.

Защита диссертации состоится « iû ъ сглТл 1993 г. в « // » часов на заседании специализированного сонета Д 015.16.21 по защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук при Институте биохимии Академии Наук Республики Узбекистан по адресу: 700143, Ташкент, ул. X. Абдуллаева, 56.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биохимии АН РУ.

Автореферат разослан « fé » ¿jâ ¿j/^u 1093 г.

Ученый секретарь Специализированного совета доктор биологических наук

С. А. Бурханот

ОЕЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Особый интерес для оценки состояния иммунной системы в процессе развития и при действии различных физических воздействий представляет исследование тимуса, как органа, осуществляющего регулирующее влияние на иммунологические реакции, а такиэ на формирование всей лим-£оидной системы организма (Р. В. Петров, 1987; 3. Кемилева, 1984; R. Rouse et. al.. 1980; M. Kendal. 1981).

Изучение процессов, происходящих а лимфсидных клетках при их активации и трансформации, имеет огромное значение для современной биологии. Моделирование in vitro с помощью митогенных агентов различных стадий перехода • лимфоцита в трансформированное состояние может оказаться весьна полезным для понимания механизмов изменения функционального состояния клетки ( К. А. Болотников и др.. 1983, 1987; Е. ¡1 ОлеДник, 1982; Y. Nakaoot. al.. I960).

За последние' годы значительно возросло использование различных видов воздействий (гамма-облучение, рентгеновское излучение, ультрафиолетовое и лазерное облучение) с целью иммунокоррекции, хотя до настоящего времени механизм их биологического действия на организм изучены недостаточно (G.Casarett. 1980; R. Hlckey et. al., 1983).

Известно, что стимулирующее действие доинкубационного облучения куриных яиц малыми дозами радиации проявляется но только в значительном увеличении вылупляемости цыплят, но и в повышении их выживаемости, ¡шзнеспособности и преду;стиз-ности ( Д. X Уямидов И ДР.. 1975, 1985; П. Л. Хакимов, 1978, 1984; A. il Кузин, 1981, 1987; Д. А. Каушанский и др. 1984; ¡0. а Шполякский и др. 1987, 1989). Анализируя эти данные, можно предпологать, что малые дозы гамма-облучения оказывают сти-мулирувдэе воздействие и на процессы дифференцировки ц функциональнее состояние клеток лкмфоидных органов. '

Поэтому, исследование вилочковой железы при облучении; > представляет несомненный теоретический и практический интерес, особенно о условиях промышленного птицеводства, так как на основе результатов этих исследований можно разработать эффективные меры сохранения поголовья «типы и пенження ее Щ-олуктивности.

Цели и задачи работы. i^Jitn mhiuix исследовании явитое!.

ивучение монофункциональных особенностей тимуса и мито-ген-индуцированной активности тимических клеток в процессе развития и при доиниубационном воздействии малой дозы ионизирующей радиации. Б ходе работы решались следующие задачи:

1. изучение морфологии тимуса кур на различных этапах эмбриогенеза и постэмбрионального онтогенеза

2. определение последовательности структурных и иммуно-мор$ологических изменений, происходящей в клеисах тимуса эмбрионов и цыплят в процессе развития.

3. изучение динамики включения 8Н-тимидина в тиммческие клетки интактных и доинкубационно облученных малой дозой ионизирующей радиации эмбрионов и цыплят в онтогенезе.

4. исследование интенсивности бласттрансформации лимфоцитов тимуса интактных и доинкубационно облученных эмбрионов и цыплят разного возраста при изменении концентрации фитоге-магглютинина (ФГА).

Научная новизна и практическая ценность работы. Впорвые светооптическими и элекгронномикроскопическими методами исследована морфология тимуса доинкубационно облученных малой дозой ионизирующей радиации кур на разных этапах эмбрио-генева и постэмбрионального онтогенеза.

Выявлено, что на 13 сутки у доинкубационно облученных эмбрионов происходит четкое разделение тимуса на корковую и мозговую 80ны, тогда как у интакгных этот процесс наблюдается на 15 сутки, изменение соотношения коркового и шзгоеого вещества в сторону преобладания последнего отмечается у интактных на 17 сутки, у эмбрионов, облученных до инкубации -на 15 сутки. Окончательно вилочковая лелеза формируется на 18 сутки у доинкубационно облученных эмбрионов, а у интакт-ных - у цыплят суточного возраста. Кроме того, у доинкубаци-сннсоблученных обнаружено статистически достоверное увеличение размеров тимических долек во все исследуемые сроки развития.

Впервые изучены и проанализированы: динамика включеню "н-тимидина в тимические клетки в онтогенезе и возрасты« особенности зависимости бласттрансформации лимфоцитов тимус; от концентрации ФГА в кульгуральной жидкости.

Ешалено, что в процессе развития наблюдается тенденция к снижении импульсного е¡-сличения 8Н-тимндина с тимоциты как у интактных, так и у доинкубационно облученных эмбрионов и цыплят, причем интенсивность включения у последних в 1,5 - 2 раза килэ, что свидетельствует о более высокой степени функциональной зрелости тимуса последних.

Увеличение концентрации 5ГА в эмбриональный период подавляет бласттрансформацию лимфоцитов тимуса, тогда как в постнатальньй период наблюдается обратная тенденция.

Результаты экспериментальной части работы дают основание рекомендовать применение различных концентраций ФГА для оценю! возрастных изменений реакции бласттрансформацни. Такой подход предоставляет возмозкность получить дополнительную информацию о функциональном состоянии клеток.

Совокупность полученных результатов может содействовать раскрытию механизмов действия малых доз ионизирующей радиации на эмбриогенез, показать особенности реакции иммунной системы развивающегося организма на это воздействие, кроме того, дает Солее полную картину функционирования иммунной системы домашних птиц в условиях промышленного птицеводства

Публикации и апробация работы. Натериалы диссертации до-лсжены на: Всесоюзной конференции по действию малых доз ионизирующей радиации (Киев, 1984); Европейском конгрессе по радиобиологии (Прага, 1985); Советско-финляндском симпозиуме по биологии развития (Ташкент; 1988); Европейском биохимическом конгрессе (Будапешт, 1990).

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения , выводов и списка цитируемой литературы, вклочаюзего 164 источника. Работа изложена на /¿^страницах иашнопнси и включает 1 таблицу и 40 рисунков.

. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Объектом исследования слумши эмбрионы (с 11 по 20 день инкубации) и цыплята (в возрасте от 1 до 120 дней) породы белый леггорн кросс " Янтарь ". В работе были использованы 50ПП эмбрионов и 350 цыплят иа НПО им Ильича Ташкентской

3

области. ДоинкуСащюнное облучение проводили на гацыа установке 0Я-О1 (источник излучения - 6 Со+, 0,011 А/кг; ыоц-ность дозы - 0,029 Гр/iatH), облученные и необлучешше яйца инкубировались совместно.

Электронная микроскопия клеток тимуса. Кусочки тимуса фиксировали 2,5?. раствором глутаралъдегида на 0,1 Ы фосфатном буфере (pH 7,4). Образцы обезвоживали в спиртах и ацетоне восходящей крепости и заливали в смесь эпои-аралдит.

Полутоикпе (ПГС) и ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме LKB-8Ö00 (¡Швеция). ГГТС окрашивали штилековой с!шью и Фуксином по ыэтоду Humphrey (1974). Препараты просматривали на световом микроскопе.

Ультратонкие срезы контрастировали 2.5Х раствором уранн-лацетата no Watscri (1958) и цитратом свинца no Reynolds (ieai). Ультраструкгуру глеток miyca научали под электрон-кш микроскопом Hitachi Н-600 (Япония.)

Морфзь!етрическ:'А анализ и математическая обработка результатов. Линейные размеры цолек тимуса измеряли окулярной вставкой с ценой деления 2,5 мкм, при увеличении об х40, ок Х12.5.

Данные обрабатывали методами вариационной и альтернативной статистики (Аьтандилов и др., 1931).

Исследование суспензии клеток тимуса методой пероксида-за-антипероксидаза (ПАШ. Суспензию клеток тиыуса, полученную обцчнии способом, фиксировали в 0,5% глутаральдегиде н; трис-фцзиолэгпческом буфере (pH 7,4) и инкубировали триады:

а) в кроличьей сыворотке против куриных Ц;М;

б) в ослиной сыворотке против кроличьих шшуноглобулино;

й) в ПАП-комплексе (полученном в нашей лаборатории).

Улырацктохикическое выявление пероксвдзаы производил

по методу Graham, Karnovsky (1966). Послэ обработки, клетк вторично фиксировали 1,6t глутяральдегидом на 0,1 М фосфат ном буфере (pH 7,4), содержаодм 1% сахарозы и 4Х поливинил пирроладона и инкубировали ь' среде Греема-Кярновского. Дс фиксировали тетраокисью осмия, обезволивали в спиртах восхс дяшей крепости и заключали в смесь апон-нр'уд'лт, Контроле служили препараты, инкубироранные в среде, пч гтдер;т№

4

диамияобензидин (ЛАБ).

Определение спонтанной и митоген-индуцированной активности лимфоцитов тимуса эмбрионов и цыплят. Клетки тимуса, выделенные на градиенте плотности фиколла-верографина, культивировали в среде RFMI-1640 с бикарбонатом натрия ("Flo* laboratories"), содеркацей 10% инактивированнуи куриную сыворотку, 5х10~5 М 2-мвркаптозтаяола ("Chempol"), 100 мкг/мл геитамицина ("Schering corporation"), 10 мМ Hep«s ("Slgrra"), 2 mM-глуташн ("Flow laboratories"), 2 ЕД/ил инсулина Клетки культивировали п 96-луночных планнетах ("Linbro") в термостате при 39°С во влаяной атмосфере с 5Z COg. В исследованиях использован! следующие концентрации ''ГЛ - 20 мкг/мл, 30 их?/iui и 50 мгаУмл. Лимфоциты культивировали 72 '¡аса За 4 часа до окончания инкубации добавляли 8Н-тими-дия п дозе 1 мкКи на лунку (удельная активность 20 мБЮ. После инкубации клетки переносили на Фильтры ("Tltertek") с помощью аппарата "Харвестер" ("Titertek").

Сильтры сушили, помеиали во флаконы со сшштилляшюнной .-щдкостыо и подсчитывали абсолютно"© число импульсов в минуту на счетчике ("LKB Rack Beta 1217").

Полученные результаты подвергали статистической обработке; достоверность разницы средних значений определяли по критерию Стыодента

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ.

1. Влияние облучения на структуру тимуса эмбрионов и цыплят.

Тимус С вилочкозая железа ) - центральный орган системы иммунитета, контролирующий созревание и функциональную активность лимфоцитов, которке осуществляют иммуиый надзор в организме и играющий ведущую роль не только в дифференциации тимоцитов, но и в "обучении" Т-клеток и егр'ышчении Т-кле-точной специфичности. Кроме того, тумуг является связуюшим звеном меаду иммунологической реактивностью организма и его пялокринйым аппаратом ( В. II Кемиссорстм и до. , 1980; Д. Ф. Глуг млн п лр. , i'M?: Р. В. Л' 71 jB и др. , 11У.2-, v. В. ЗаГрать-яни, г->31).

On г"|11Н'г< -»т«»:ггх -1»г«рг";''.г1.н5Го ртзггою (1i -If! сутки) Я

тимус куриных эмбрионов представлен мелкими (40-80 ыкм) дольками округлой или овальной формы, разделенными широкими соединительнотканными прослойками. Дольки состоят из бласт-иых клеток различного типа и размера, большого количества митотичёски делящихся клеток и больших лимфоцитов. Строма тимуса интактных эмбрионов представлена в основном нежными, рыхлыми волокнами, а татаке соединительнотканными клетками (преимущественно фибробластами) и немногочисленными кровеносными капиллярами. Относительный объем строма органа велик.

В это время лимфоидные клетки впервые экспрессируюг типические специфические Т-антигены на поверхности клетки. Начиная о 12 суток инкубации эмбриональные клетки тимуса содержат также терминальную • дезоксинуклеотидилтрансферазу (ТДГ). как фермент, рассматриваемый в качестве маркера примитивных Т-клеток (R. Scollay et al. ,1080; К. Kawakamt et al./1082; F. Bollum,1982; I. Goldschneidor,lSS2; A.Goldstein et al. ,1983 ).

Известно, что для функционирования любой клетки вообще и для лшфоидной, в частности, наибольшее значение имеют поверхностные мембранные антигены, определяющие рецепцию, взаимодействие и эффекторные функции клеток. Поверхностные иммуноглобулины (Igr) являются основными распознающими структурами и антигенами В-лимфоцитов (Р. В. Петров, 1987). Присутствие В-лимфоцитов в тимусе было доказано исследованиями ряда авторов (A. Duljvestljn et al. ,1982; P. Isaacson a4t al. ,1987; V. Hoffman et al. ,1988; M. Marcos ot al. ,1989).

С 13 суток эмбрионального развития в тимусе, с помощью метода перокеидаза-антиперокоидаза (ПАП), нами обнаруязнь В-лимфоциты, несущие на своей поверхности иммуноглобуликь (lgM-рецепторы). Ультраструктурное исследование показало, что эти клетки имеют высокое ядерно-цитоплазматическое отношение, электронно светлую цитоплазму с многочисленными рибосомами и митохондриями, различной Форш и размеров, с чети контурируемыми кристами, короткими канальцами гранулярной эндоплазматического ретикулума. Ядра крупные, гетерохромные с одним-двумя ядрышками. В-лимфоциты, на мембране которы:

6

ПАП-комплекс локализуется в виде прерывистой линии - менее зрелые. На более зрелых В-лимфоцитах продукт реакции на ПАП-комплекс располагается в виде сплоиюй линии. Плотность локализации 1еМ на мембране В-клетки является одним из критериев определения степени ее зрелости.

В ходе развития эмбрионов (15-18 сутки) дольки тимуса разделяются на корковую, более богатую лимфоцитами зону, и медуллярную, менее' богатую. Плотность расположения лимфоцитов, в основном, больших и средних, в корковой зоне значительно выше, чем в шаговой. Субкапсулярный корковый слой представлен низкодифференцированными клетками. Эпителиальные клетки коркового слоя - относительно небольпие, с отростками, цитоплазма обильная, содержит эндоплазматический ретику-луи, хорошо развитый комплекс Гольдам и много митохондрий. Ядро овальное, располагается эксцентрично и имеет одно яд-рыЕко. Медуллярная ■ часть дольки содержит средние и малые лимфоциты и ретикулярные клеточные элементы различной формы и величины,огромные и вакуолизированные эпителиальные.клетки, иногда встречается зачаточные формы телец Гассаля. Считает, 'что их происхождение обусловлено концентрическим наслоением эпителиальных клеток, в которых, преимущественно з центральной части, начинаются процессы дегенеративного характера (М. Б 1пга1 et.al.1986).

В дольках тимуса цыплят (1-30 сутки) наблюдается преобладание мозгового вещества. ' Субкапсулярный кортовый слой ровный без сильных вдавлени'. септ. Септы узкие, состоят га коллагеновых волокон. Корковая зона несколько уменьшена, в ней превалируют малые лимфоциты,' располагающиеся между эпителиальными клеткам! и составлявшие крупные скопления по 20-25 клеток. В глубине коркового слоя увеличивается соотношение эпителиальных клеток к лимфоцитам. Иного дегенеративных форы лимфоцитов и микрососудов. Шаговая гона представлена разнообразными по форме и размерам ретккудо-зпктелиалъ-ными клетками и хорошо дифференцированными лимфоцитами.

Эпителиальные компоненты тимуса необходимы для формирования первичного сигнала клеточной дифференцировки, что приводит к притоку в тимус гемопоэтических клеток, являющихся

7 -

арбДОйетг&йиикши Т-ли«2ошяоб к дополнительных клеток (В.Наупоз ot.al.1989 ). Эпителий тимуса так» необходиы «да последаяаго Функционального развития популяции эмигрировавших прс-дд^стЕенннков Т-лига1»№тов (!.'. ^газп а! ,1082).

У доиикубационио облученных эмЗркснов отючаэтс* увеличение количеств диффгреицироваикьк лимфцигоь и митотичгски делящихся клеток. - Дольки адмуса располагается более компактно. относительный ссюь? строки невелик.

Харьгегорной особенность» долек тимуса ара облучении является воя&яешю у*« к 13 суткаа эмбриогенеза "волнистого" суйкаяеулляркого коркового слоя, что указывает на увеличение-«го плз&чдз . .Эта ш{4<»логическгш особенность, а я&кхе солее йи^тр-аэ нйрастйние ыассы ткмнч&ских лол-;к свкдетблъстйуюг о стимуляции пролиФерагивкой актиааэети клеток тимуса в ре-аудьтаи,- ¡клкания каи.ых доэ радиации.

Отьечево таила увеличение клкшсУБй и кровенаполнение« -тм микрососудсй как еептальких, тал а внутридолыют. 8 дольках пьЛлтажсн большие лшлфеияты и бласткис- клетки, уь^личизддося кышчвегьо гршулоциюь . Лифздигы, как правило, округлой формы с раздигаш оргаиеллаыа рас-псльгагясл 0ОГ.ч<; КОкШсиСГКО, <№М Ь КОИТрОЛй.' ОйНйру#21ШЛ'СН ЛШрСЦНП! С ьиоокш йдерио-щстош&одшгс&скш отио^нигы. Цитоплазма со-д&рх!? много рибосом, хорово рааьтий сетчатый шгарат к эн-гоплмкитичаокий {МХИКУЛУИ, иного МИТОХОНДрИй. Ядро баэо-4«льйой, риополагаетсм в центре «лбтки или ¿кешж'рично, содержи? мелкп<? адриши и глыйчтнй хроматин ао иерифрки. Знача гедыю больи> б перенайме химических долек гранулоци-тов, которые локализую«^ к в корковом, к в юггоьац слоях.

й субкааоулляраои кэрксьом слое тфодсти располагайте! йОЛёО КОУи&КТЙО; в осийьном юкомэрфяьц В ретикуло-еаи-таиодышх назтк&х, больших и средам* лиьфцкгах обн&ру«йва ютея липйдньк включения. В норковой и в шаговой воиах ваяв лаки скопления разруиениих лимфошшх клеток, интенсинн ьоседлшшшш краситель.

Та-аш осраьом, н&*«1 установлено, что дкДО>ргнцироь<.дн*ш гимичесюи лш^овднш клетки подвлявгея у нап^льши: ?м4ри оно« на 13 сутки разпитил. к 16 суткам у икшти«

а

Таблица 1.

Размеры тшлмеских долек (мкм) эмбрионов и цыплят при доинкубационнэм облучении

1 Возраст 1 Контроль (п-ЗО) Спкт {п-ЗО) !

1 11 1 61,0 + 2.9 125,0 + 5,7 А !

1 12 1 156,0 + 9,2 204,0 + 9,8 * 1

1 13 ! 235,0 + 12,1 289,0 £ 15,2 * 1

1 15 1 324,0 + 15,7 425,0 + 20,9 л 1

1 18 1 480,0 + 21,3 722.0 + 30,3 * 1

1 1 цып. 1 898,0 + 51,0 1012,0 + 83,9 1

(примечание: * - Р < 0,05)

дольки отчетливо разделяется на корковую и мозговую зоны. У суточных цыплят тимус окончательно сформирован. Это касается как лимфоидных, так и'эпителиальных компонентов тимуса. Наиболее активно функционирующий тимус морфологически определяется в начальные дни жизни после внлупления. Начиная с 10 суток постнатального развития обнаруживаются признаки инволюции тимуса, что проявляется в уменьшении толщнш коркового слоя,увеличении мозговой зоны, уменьшении количества лимфоцитов в последней и образования сформированных телец Гасса-ля.

У доинкубационио облученных эмбрионов наблюдается опере-ление эмбрионального развития тимуса по сравнению с контролен на 2 суток. Так, к 13 суткам в тимических дольках уже разделяются корковая и мозговал зоны. Размеры тимических долек превыиают таковые контрольных (Табл.1.). Отмечается, особенно начиная с 15 суток, увеличение площади субкапсуляр-ной корковой зоны за счет множественных инвагинация септ внутрь долек., В эти л» сроки обнаруживается превышение количества лимфоцитов мозговой зоны у облученных эмбрионов над таковыми в контроле. Окончательно тимус доинкубационио облученных эмбрионов формируется на 18 сутки.

Выявленные в тимусе доинкубационно облученных эмбрионов 9

изменения свидетельствуют о стимулирующем влиянии иониоирую-шей радиации в килой дозе на становление тимуса птиц, (выполнена совместно с к. м. н. Мавлян-Ходжаевым Р. Щ.)

2. Спонтанная и митоген-индуцированная активность лимфоцитов тимуса кур в онтогенезе и при действии малой дозы ионизирующей радиации.

Наши исследования . по включению аН-тимидина в тимоциты, охватывающие период от 11 суток эмбрионального развития до 120 суток после вылупления (Рис. 1), позволили вачвить, что пролиферативная активность клеток тимуса в эмбриональный период выше, чем таковая в постэмбриональный . Наиболее высокое включение тимидина отмечается на 11 и 17 сутки эмбрионального развития (4516,7 + 106,3 имп/мин и 3313,1 + 127,9 имп/мин соответственно). Впоследствии вплоть до 20 суток постэмбрионального развития (1377,5 + 103,1 имп/мин) регистрируется снижение уровня включения с некоторым увеличением у 30 суточных цыплят. Резкое снижение включения тимидина на 13 сутки эмбриогенеза (2544,5 + 192,7 имп/мин), возможно, связано с увеличением в тимусе пула более дифференцированных тимоцитов по сравнению с 11 суточными (N. MLe Douarln et al. 1983).

Уменьшение пролиферативной активности на заключительных этапах эмбрионального онтогенеза (19 сутки) и после вылупления (1-20 сутки), по-видимому, связано с перестройкой иммунного статуса организма в связи с переходом б новую среду обитания и сменой пролиферативно-миграционной активности популяции тимоцитов (30 - 60 сутки) (Ы.Kendal, 1981).

Результаты по изучению динамики включения 3Н-тимидина в тимические клетки доинкубационно облученных эмбрионов и цыплят, позволили выявить менее выраженное по сравнению с контролем повышение спонтанной пролиферативной активности на 11 И 17 сутки (2978,8 > 181,3 имп/мин и 3183,9 + 145,0 имп/мин) эмбрионального развития. В дальнейшем наблюдается снижение индекса включения тимидина с незначительным повышением на 30 сутки постнатального развития. ■

Проведенные нами исследования динамики включения 3Н-ти-мидина в тимические клетки интактных. и доинкубационнооблу-ченных эмбрионов и цыплят (Рис. 1) показали, что.у последних во все исследуемые сроки развития ниокие индексы включения.

10 '

сутки развития

3

Рис. 1. Динамика включения Н-тимидина в клетки тимуса интает-ных и доинкубационно облученных кур в онтогенезе. К - контроль; 0 - опыт.

По мере развития наблюдается тенденция к снижению импульсного включения тимидина в тимоцити обеих исследуемых групп почти з 2-4 раза, причем у клеток тимуса опытных эмбрионов и цыплят включение ниже в 1,5-2 раза, вероятно, это связано с уменыпением числа клеток, находящихся в периоде синтеза ДНК.

Известно, что малоди$|{еренцированны9 клетки, в отличие от зрелых, интенсивно включают ^Н-тимидин (Т. Мео,1984) и, возможно, они составляют основную пролиферируюаую фракцию тимических клеток у интактннх дивотных.

Тагам образом, можно зашпсчить, что низкие значения уровня Н-тимидина у доинкубационно облученных эмбрионов и цыплят свидетельствуют о более высокой степени функциональ-

С'- '¡О

. <",!;; 1 лпг:Р ^ М

,"/11 ¡П ]¡П !' ЙП

И 13 15 17 19 1 10 20 30 60 90 120

сутки развития

Рис.2. Бласттрансформация клеток тимуса под действием ФГА (концентрация - 20 мкг/мл) в онтогенезе. К - контроль+ФГА; 0 - опыт+СГА.

ной зрелости тимуса и снижении в связи с этим пролифератив-ной активности тимических клеток, что об'ясняется стимулируем влиянием ионизирующей радиации в малой дозе.

Как показывают результаты проведенных исследований, клетки тимуса 11 дневных доинкубационно облученных эмбрионог способны отвечать на ФГА (в дозе 20 ыкг/мл - 5788,9 + 202,{ имп/мин) (Рис.2). У интактных я® митоген-индуцированный ответ зафиксирован лишь на 13 сутки (4993,3 + 140,3 имп/мин] развития с очень низким индексом стимуляции по сравнению с таковым у опытных . Затем бластогенный эффект исчезает 1 вновь обнаруживается лишь у лимфоцитов тимуса 17 суточни эмбрионов. В дальнейшие исследуемые нами сроки развития № выявлено стимулирующего эффекта вышеуказанных концентрат!

12

ЯМп/иЯН

сутки развития

Fko. 3. ФГА-индуцированная активность лимфоцитов тиыуса кур s онтогенезе (квнценграцил ~ 30 ыкг/мл). К - контроль+СГА; О - опих+ЗГА.

ФРА ка динамику вкеючгиия "м-тодщша в культуру JStMíotun чв тимуса.

При концентрация штогена 20 ккг/мл бластогенкыЗ з^лш выявляется (Рис. 3,) зо вое исследуемые сроки по№{&?ад1.кого развития. Однако, после 20 суток яостн&таяького раэвн'пи, когда зарегистрирован максимальный уровень шслючения üí! гп кидина в культуру лимфоцитов тимуса, эффект амиеуиазадшоц доеы ослабевает.

. Отметим тага», что у цыплят,начиная с 30 суточного возраста (Рис. 4.)f при повышении концентрации СГА (СО «кг.чип интенсивность бласттрапсфсрмации возрастает. Такая зшмно мерность наблюдается и в контрольной и в опытной культурш;

13

сутки развития

Ркс. 4. СГА- индуцированная активность лимфоцитов Tiaiyca от онтогенезе (концентрация ФГА - БО шг/ыл) К - контроль+ФГА; 0 - опьтс+ФГА.

клеток. Концентрация $ГА, вызывашая максимальней сткыулкр> К5ИЙ аффект, у цыплят выаз, чей у аиЗрионов.

Богшашо, возрастные изменения концентрации ЯГА являете следствием возрастного сдвига в соотношении субпопулящ лимфоцитов, различаодася со чувствительности к разным доз; шггогена в сторону оолеа чувствительных, так как иввост! сусрстБовшшэ субпопуляций лимфоцитов, отличавдися по реей ции на различные дозы ФГА (Г. С. Щубинский и др., 1981).

Тот факт, что в ликвидной популяции на ФГА роагиру] только икыунологически зрелыо клетки, позволяет нам o6w нить Солее ранний (опережение на 2 суток - на 11 сутки у д инкубационно' облученных а 13 сутки у интактных эмбрионов)

повиданный отьет на иитоген тимоцитов доинкубационно облученных змбрионоз. По-видимо;,(у, в тимусе последних увеличира-ется содержание наиболее зрелых тимоцитов, в том число их активированных форм.

Наблюдаемые при доинкубационном облучении изменения в тимусе эмбрионов и цыплят, не нося деструктивный характер и не нарупая качество происходящих в нем процессов (пролиферация и дифференцировал тимоцитов), ускоряют процессы кюрфоге-пеза

ВЫВОДЫ

1. Выявлено, что у кур этап органной дифференцировки тимуса начинается на 15 сутки эмбрионального развития и заканчивается к моменту вывода (1 сутки). Мэрфогенетмческие процессы з -Т5*мусе, в основном, завершаются к 30 суткам постэмбрионального периода

2. У эмбрионов кур пролифератявная активность тимоцитов изменяется волнообразно (мзкспталышо индексы включения аН-тимидина на И и 17•сутки).

3. Выявлены оптимальные концентрации ФГА, вызывающие бласттрансформаци» лимфоцитов тимуса в различные периоды развития: 20 мкг/мл - эмбриональный; 30 мкг/мл - ранний постэмбриональкый; 50 мкг/мл - для остальных исследуемых сроков развития.

4. С помощь» метода пероксидаза-антипероксидаза (ПАП) в тимусе 13 суточных эмбрионов обеих исследуемых групп впервые выявлены В-лимфоциты, несущие на поверхности 1?М-рецепторы.

5. С 20 суток постэмбрионального периода развития отмечается сниягние пролиферативной активности в 2-4 раза и увеличение индекса стимуляции лимфоцитов ФГА в 2-2,5 рава.

6. Облучение куриных зародышей налой дозой радиации (0,029 Гр) за счет стимуляции процессов пролиферации и дифференцировки клеток тимуса призодит к ускорению морфогенеза: сдвигает сроки, формообразовательных процессов на 2 суток, увеличивает размеры его долек в 1,5-2 раза

Список опубликованных работ 1. Выявление иммуноглобулиннесущих лимфоцитов бурсы Фаб-15

радиуса куриных эмбрионов методом ПАП (пероксидаза-антипе-роксидаза) / Р. 3. Рустамова, Г. II Лллаярова, !й В. Шполянскнй и др. // ДАН Уз ССР .- 1983.- N 12. - С. 37-39 .

2. Аллаярова Г. JL , ШполянскиЯ Ю. В. Лммунофлуореоцентное исследование рецепторов В-лимфоцитов куриных эмбрионов при действии малых'доз радиации / Всесоюзная конференция по действию малых доз ионизирующей радиации. - Киев; Наукова Думка, 1984. - С. 39.

3. The effect of small doses of Irradiation on lymphocyte receptors of chicken errbryos / K.tl. Nlshanbaov, Ju. V. Shpoljansky, G. I. Allajarova et. al. // Europon society for radiation biology. 19th Annual Moetlne, Praque, 26-30 August. - 1985.- P. 103.

4. Surface IpM and ceclic nucleotides of chicken B-lymphocytes In errbryogenesls / Shpoljansky Ju. V. , Mishanbaev K. N.. Allajarova G.I. // Cell different, Helsinki.- 1987.- v. 20. - P. 255.

5. Цитофункциональный анализ становления иммунной системы птиц в процессе онтогенеза / Ю. Е ШполянскиЯ, Г. К. Лллаярова, Р. 3. ИногамоЕа и др. // Онтогенез, - 1988.- Т. 19. - N 4.-С. 445.

6. Surface IgM B-lymphocytes the bursa of Fabriclus n embrlogenesls / K. N. Nlshanbaev, G. I. Allajarova. Ju. V. Shpoljansky et. al. // European blochomical societies. 20th Meeting Federation, Budapest, 19-24 August.- 1930,-P. 205.

"Тогук тимусшшнг онтогенеадаги морфофункщгонал тадкшути" Кисца мазмуни

Бярин'ш маротаба, эмбрионал ва постэмбриенал ривохпани-пининг турли боскичларвда, ионловчи радиашянинг кичик до;>а-лари Оилан инкубацилга йадар нурлантирилган товук тимусиншн мпр'}ологияси ёруглик ва электрон микроскопик тадкикотлар ер ломила £рганилди.

Тичуошшг иустлок ва магиз кисмларпга аник ажралиши ин кус-ишдга клдар нурлант'иридган пмйрисшнр ригожининг 13 г,у »'.1Д-1, нур тач/гпр эттириглотнн змб; нгн.тар ркг.о>2»гичг -у:

15-кунида содир булиши аникланди. Тимус пустлок ва ыагна кисмлари нисбатшншг магиз цисшшинг ортиб боришига тоыои узгариши нурладтирилган змбрионларда 15-кунда, нурлантирил-маган эмбркснларда зса 17 купила содир булади. Инкубацияга иадар нурлантирилган 13 кунлик эмбрионларшшг айрнсимон бези тулик шаклланади, нурлантирилмаслик сароитида бу .тараен 1 кунлик яужаларида кузатнлади,

Бундан ташкари • рипомланишнинг какма бсскнчларида рэдаа-цня таъсиридаги тимус булакчалари хашаншг сезиларли дара-гада ошлши аникланган.

УсОу кшда биринчи марта ривожланиш лараёнидаги Н-тиш-•диншшг тимус хугйЛраларига бнрикиши динамикаси ва тимус лшфонитлари бласттрансфориациясининг сунъий устиргеи мухкти-даги фитогемагглютишш концентрацнясига кай даражада богллк-лпги тф.а ёш! била!! бэлгиланиш тадкик ва т ах лил килинди.

Нурлаитирилган эмбрионларда хам, нурлантирилмаганида хам. ва яулвларда риво.гланиш гараэнидаги 3Н-тимидиннииг тимус хугайраларига импульсли бирпкишшшг камайиб бориаи к/ • затилди ва айни пайтда, нурлантириш бу гараёшш 1,5-2 маро-таСага камайтнрики аникл&чди. Онтогенезнинг турли даврдари-даги тимус лимфоцитлари бласттрансформациясннинг узгарипиа-рини бахрлаш учун фитогемагглкггиннннинг (ФГЛ) турли концент-рацияларини цуллаа ма^садга мувофпкдир.

Олинган иэъауютлар мажмуаси кичик ызвдордаги иоиловчи рздиацнянинг эмбриогенезга таъсир'мэханизмларини очиб бери-;'Л1. ривояланастган организм .^мун системасшшнг уи5у таъсир-га кавобинн ернткп йулида з?измат г-углиб, уй паррандалари им-пун системасшшг паррандачилик саноати пароитидаги Фаодияти хасида тула'^рок маълукотга зга булиш имкокики яратадн.

" Morfofunotlonal investigations on chicken thymus in ontogenesis" Summary

For-the first tiro by mean of microscopy and electron microscopy methods morpology of pieincubatlon Irradiated chicken thymus during the different periods of embnofrene4is and posternbrlonal ontogenesis has benn

17

investigated.

Distinct thymus devlslon into cortical and rasdullt zones in preincubation irrdlated chickens etrhryos has bee established on the 13th day whereas in intact ones on th 15th day of embrlogenesis. Change in cortical to madulk substance ratio in the direction to the prevallenco of tt latter is observed in the thyiaus of oxperimental chlcker embryos on tha 15th day, whereas in the thymus of contrc ones-on tha 17th day. In preincubation irradiated embryc tha formation of the thymus is complete on tha 18th day, l the intact ones-in a day old chickens. Besides statistically reliable enlargement of thymic lobes durlr all periods of development studies has been established.

Dynamics of 3H-thymldine inclusion into thymic cells ! tha process of development as well as Dge-relat< peculiarities of thymic lynphocyto blasttransformatK dependence on PHA concentration in cultural fluid have bs; studies and analyzed in tho work presented.

It is discovered that in tha process of dovelopmant tl tendeoios to decrease in impulse inclusion of 3H-thymJ.dli intact end preincubation irradiated embryos and chickei have been observed, the intensity of inclusion, in tl latters being 1,5-2 tlrras lover. To estimate ago-relati changes in tho thymus lymphocyte blasttransformatlon ontogenesis it is necessary to use phytogemaeclutlnino (Fil of different concentrations.

Tha whole complex of results obtained can provldo t elucidation of mochanlsns of ionizing radiation effect low dose on ambryogenesis, deronstrato ths peculiarities developing organism imrcune system rcactlonson the off© alovo and,besides, help to irnaglna ths viholo picture poultry liraune system functioning under tha conditions poultry breeding.

Coucketsjix •