Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофизиологическая характеристика эритроцитов периферической крови в условиях дисбиотических изменений кишечника свиней

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Морфофизиологическая характеристика эритроцитов периферической крови в условиях дисбиотических изменений кишечника свиней"

Хуснатдинова Екатерина Александровна

МОРФОФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ В УСЛОВИЯХ ДИСБИОТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ КИШЕЧНИКА СВИНЕЙ

03.03.01 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

5 ДЕК 2013

Москва 2013

005542866

Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии и гигиены Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова»

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент

Красноперова Юлия Юрьевна

Официальные оппоненты: Козлов Сергей Анатольевич,

доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой скотоводства и коневодства ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина» Любин Николай Александрович, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой морфологии, физиологии и патологии животных ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П. А. Столыпина»

1ущая организация: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» (г. Казань)

Защита диссертации состоится «24» декабря 2013 г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д.220.042.04 на базе ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, д.23, rector@mgavm.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина»

Автореферат разослан (-/Ои!^4-? 2013 г.

Ученый секретарь ду ~

диссертационного совета т^

канд. вет. наук, доцент ( Фомина В.Д.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Современное отечественное свиноводство — динамично развивающаяся отрасль животноводства России, позволяющая в сравнительно короткие сроки удовлетворить потребность населения в доступном, биологически полноценном животном белке, а также обеспечить продовольственную безопасность государства (В.Н. Ямщиков, 2003; Е.Н. Васильев, 2004; П.П. Диденко, Д.В. Зуев, 2006; А.Т. Мысик, 2008).

Однако, несмотря на общее стабильное состояние отрасли, имеется целый ряд актуальных вопросов, требующих неотложного решения. Одним из них являются кишечные паразитозы продуктивных животных, которые имеют достаточно широкое распространение в регионах с развитым свиноводством. Кроме того, кишечные инвазии у свиней часто встречаются в виде сочетанных микробных поражений, что ведет к снижению уровня естественной резистентности и продуктивности организма, вынужденному убою и падежу животных, нанося ощутимый экономический ущерб (Р.Т. Сафиуллин, 1984; В.В. Буров, 2001; Е.К. Кизин, 2003; С.Г. Федотов, 2004; В.И. Крылов, 2004; Н.В. Глазунов, 2006).

Следовательно, в настоящее время становится все более очевидным глубокое изучение системы крови, включающей периферическую кровь, органы кроветворения и кроворазрушения, а также нейрогуморальный механизм её регуляции (В.Г. Леонова, 1987; Г.А. Симонян, Ф.Ф. Хисамутдинов, 1995; Р.Я. Гильмутдинов и соавт., 2005; А.В. Новожилов, JI.H. Катюхин, 2008).

Как известно, кровь составляет внутреннюю среду организма, которая обеспечивает жизнедеятельность клеток, являясь посредником между ними и внешней средой. При этом важнейшую функцию в организме человека и животных выполняют форменные элементы крови, основную часть которых составляют эритроциты (А.Г. Голубев, 1997; И.Н. Тодоров, Г.И. Тодоров, 2003; Н.Д. Гончарова, В.Ю. Маренин и др., 2008; D.L. Teply, 2010). Так, по данным Theret et al. (1993); Cao et al. (2002); Zhao et al. (2006); Л.Н. Лесниковой (2006); Д.Д. Теплого (2011), функциональное состояние эритроцитов представляет со-

бой наиболее удачную биологическую модель для изучения динамики происходящих в организме многих нарушений. Поэтому диагностическая важность определения количественных и качественных характеристик эритроцитов в крови при патологических процессах высоко значима как в теоретическом, так и практическом аспектах.

В контексте изложенного выше целью диссертационной работы является изучение особенностей структурно-функционального состояния эритроцитов периферической крови при протозойно-грибковых поражениях кишечника свиней.

Для реализации поставленной цели исследований были сформулированы следующие задачи:

1. Оценить динамику морфофизиологического состояния эритроцитов у свиней в условиях дисбиотических изменений кишечника.

2. Изучить характер колебаний морфометрических и биохимических параметров.

3. Провести анализ хронической интоксикации организма по степени спонтанной альтерации эритроцитов.

4. Определить структуру микробиоценозов кишечника.

Научная новизна. Установлено, что количественные и качественные показатели эритроцитов периферической крови свиней, характеризующие их морфофизиологическое состояние (число, объём, размеры, уровень осмотической резистентности, активность глутатионредуктазы и Ыа+ - , К+ - аденозин-трифосфатсинтазы, а также концентрация гемоглобина в эритроцитах), зависят от характера протозойно-грибковых поражений кишечника.

Отмечена причинно-следственная связь между проявлением у животных хронической интоксикации различной степени и структурой микробиоценозов, частотой встречаемости дисбиотических нарушений кишечника.

В моделируемых экспериментах показано, что в испражнениях свиней было обнаружено и идентифицировано 8 видов простейших, 4 вида гельминтов, 4 вида условно-патогенных микроорганизмов, 4 рода грибов.

Теоретическая и практическая значимость. Сформулированы новые

научные положения, дополняющие современную теорию о специфичности физиологической активности эритроцитов в крови свиней во взаимосвязи с разной структурой микробиоценозов кишечника и хронической интоксикацией организма различной выраженности.

Теория работы построена на известных фактах о закономерностях фазных изменений структурно-функционального состояния эритроцитов и согласуется с данными отечественных и зарубежных ученых в области физиологии системы крови. Научная идея диссертации основывается на обобщении передового опыта применения инновационных методов профилактики протозойно-грибковых поражений кишечника у продуктивных животных.

Разработаны научно-обоснованные практические рекомендации, направленные на повышение жизнеспособности и продуктивности сельскохозяйственных животных, которые могут быть использованы специалистами агропромышленного комплекса в производственной деятельности.

Реализация результатов исследований. Научные положения, выводы и рекомендации диссертационной работы используются в учебном процессе ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова» и ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия».

Полученные результаты исследований рекомендуются к использованию специалистами ветеринарных лабораторий и станций по борьбе с болезнями сельскохозяйственных животных, а также при написании учебных пособий по физиологии и этологии животных для студентов высших учебных заведений по агробиологическим и педагогическим специальностям.

Апробация работы. Основные результаты и практические рекомендации диссертационных исследований доложены на Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека (Ульяновск, 2007), I региональной конференции молодых ученых Поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007), научно практических конференциях ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный

университет» (Ульяновск, 2007-2008), ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова» (Ульяновск, 20072012), расширенном заседании кафедры анатомии, физиологии и гигиены ФГБОУ ВПО «УлГПУ им. И.Н. Ульянова» (Ульяновск, 2012).

Научные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности структурно-функциональных характеристик эритроцитов периферической крови свиней обусловлены дисбиотическими изменениями кишечника.

2. Существует взаимосвязь структуры микробиоценозов и частоты прото-зойно-грибковых поражений кишечника у животных с проявлением хронической интоксикации организма различной степени.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них 3 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях согласно перечню ВАК Министерства образовании и науки Российской Федерации.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения (5 е.), обзора литературы (28), собственных исследований (49), обсуждения результатов исследований (9), выводов (1), практических рекомендаций (1), списка литературы (26), приложений (3). Диссертация изложена на 131 странице компьютерного исполнения, иллюстрирована 15 таблицами и 16 рисунками. Список литературы включает 297 источников, в том числе 40 зарубежных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Диссертационные исследования проводили в период 2006-2012 гг. на кафедрах анатомии, физиологии и гигиен, а также зоологии. Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова», на базе свиноводческих комплексов ООО «Стройпла-

стмасс-Агропродукт», ООО «Курортный» Ульяновского района Ульяновской области согласно государственному плану НИОКР (номер госрегистрации 01.2010.67214).

Проведены две серии научно-хозяйственных опытов и лабораторных экспериментов с использованием 196 откормочных свипей обоего пола. Подопытных животных подбирали с соблюдением принципа аналогов по клинико-физиологическому состоянию, клинико-физиологическому состоянию, породе, возрасту, полу, массе тела по 49 голов в каждой из 4 групп (схема исследований).

В течение наблюдений свиней контрольных (клинически здоровых) и опытных (с дисбиотическими изменениями кишечника по данным ветеринарного статистического отчета) групп с 250-; 260-; 270-; 280- и 300 дневного возраста (период заключительного откорма) содержали на основном рационе, сбалансированном по основным показателям в соответствии с нормами РАСХН (А.П. Калашников и соавт., 2003).

В обеих сериях опытов у 5 животных из каждой группы на 250-; 260-; 270-; 280- и 300-й день жизни изучали клинико-физиологическое состояние, гематологические и биохимические показатели организма.

Для проведения исследований использованы следующие методы:

I. Гематологические -

а) определение количества и объема эритроцитов в периферической крови на счетчике микрочастиц «PS-4» фирмы «Medikor» (С.А. Луговская, В.Т. Морозова, 2006);

б) определение размеров эритроцитов при помощи лазерного проточного цитометра «Epiics-C» (П.А. Авроров, A.B. Климкин, В.П. Мальцов, К.А. Семь-янов, П.А. Тарасов, 2006; Ю.А. Кисляков, A.B. Копыльцов, 1990);

в) определение концентрации гемоглобина в эритроцитах унифицированным гемоглобинцианидным методом (В.В. Меньшиков, JI.H. Делекторская, Р.Г. Золотницкая, 1987).

II. Биохимические —

а) определение осмотической резистентности эритроцитов на фотометре КФК-3 M (В.В. Меньшиков, J1.H. Делекторская, Р.Г. Золотницкая, 1987);

б) определение активности ферментов глутатионредуктазы и Na+ - , К+ -аденозинтрифосфатсинтазы в эритроцитах методом G. Carlberg (1975) в модификации Е.М. Сорокиной (1980) и А.М. Кузенкова, М.Н. Масловой, А.Д. Ша-лабазова(1984).

III. Биологические -

а) определение хронической интоксикации организма по показателю спонтанной альтерации эритроцитов (Т.Ф. Шевченко, Н.А. Крикунова, 1995).

б) определение структуры микробиоценозов кишечника (А.С. Лабинская, 1978; Г.М. Уркхарт, Дж. Эрмур, Дж. Дункан, А.М. Данн, Ф.В. Дженнингс, 2000; А.С. Лабинская, Е.Г. Волина, 2008).

в) определение токсичности плесневых грибов (Е.А. Карпеева с соавт., 2010; А.В. Рыбин, А.С. Нестеров, Н.И. Потатуркина-Нестерова, 2010).

V. Биометрические —

проведение статистической обработки полученных результатов исследований с использованием пакета специальных прикладных программ Microsoft Office Excel 7.0 с вычислением значений средней арифметической (М), средней ошибки средней арифметической - m, критерия Стьюдента -1 и степени вероятности - Р. Достоверным считали различия при Р<0,05 (О. Ю. Реброва, 2002).

Схема исследований

Объект^изучения

Откормочные свиньи обоего пола (эритроциты периферической крови, масса тела, микробиоценоз кишечника)

Условия экспериментов

Критерии постановки экспериментов (наличие ветеринарных свидетельств, клинико-физиологическое состояние, пол, порода, возраст, масса тела)

Группа I серия (98 свиней) II серия (98 свиней)

1 (контрольная) животные клинически здоровые животные клинически здоровые

2 (опытная) животные с дисбиотическими изменениями кишечника животные с дисбиотическими изменениями кишечника

— Методы исследов^ \ яий-—_______________^

Гематологические Биохимические 1 Биологические | Биометрические

Внедрение научных положений / 1 в учебный процесс^^

ФГБОУ ВПО «УлГПУ им. И.Н. Ульянова» ФГБОУ ВПО «УлГСХА»

2.2. Оценка характера изменений структурно-функционального

состояния эритроцитов периферической крови в условиях протозойно-грибковых поражений кишечника свиней

В первой серии опытов установлено, что у откормочных свиней контрольной и опытной групп имели место полный пульс, ритмичное глубокое дыхание; слизистая оболочка носа была бледно-розового цвета, умеренной влажности, конъюнктива глаз - также бледно-розового цвета, волосяной покров эластичным, гладким, прочно удерживаемся в коже, кожа - упругой, без видимых повреждений, упитанность — средней, поза - естественной.

2.2.1. Динамика морфометрических показателей. Из анализа параметров гематологического профиля следует, что происходили значительные изменения количества, объема, размеров эритроцитов, уровня гемоглобина в условиях инвазии Balantidium coli- Candida spp., Aspergillus.

Ha 260 день жизни животных количество эритроцитов увеличилось у животных опытной группы до 5,38±0,09*10®/л (в группе контроля 4,25±0,22*109/л). На 270 день количество эритроцитов подопытных животных уменьшилось и составляло - 4,11±0,16*109/л и 4,23±0,08*109/л. Снижение числа эритроцитов у животных продолжало и на 280 день - 3,27±0,12*109/л (у контрольных животных - 4,13±0,06*109/л.). На 300 день от начала исследования количество эритроцитов у опытных животных составляло лишь 2,27±0,11*109/л (у свиней контрольной группы оставалось в прежних пределах). Полученные данные свидетельствуют о резких изменениях количественных показателей популяции эритроцитов при длительном вегетировании Balantidium coli- Candida spp., Aspergillus в толстой кишке животных (рис. 1).

Параллельно с изучением динамики количества эритроцитов, в те же сроки было проведено изучение объема эритроцитов свиней, то есть их качественной характеристики (рис. 2). Собственные исследования показали, что на 260 день жизни экспериментальных животных наблюдалось увеличение объема эритроцитов свиней опытной группы до 9,7±0,08 мкм3, а на 270 день - снижение до 6,8±0,13 мкм3. В последующие сроки наблюдалось дальнейшее уменьшение объ-

ема эритроцитов: на 280 день жизни до 6,3±0,11 мкм3 и 300 день до 5,2±0,21 мкм3.

Измерение размеров эритроцитов при инвазии Balantidium coli- Candida spp., Aspergillus проводили у свиней опытной и контрольной групп на 250, 260, 270, 280 и 300 день жизни животных.

У животных опытной группы наблюдалось уменьшение размеров эритроцитов уже на 250 день жизни (5,58±0,03 мкм) по сравнению с размерами эритроцитов контрольных животных (6,25±0,04 мкм). На 260 день размеры эритроцитов животных опытной группы значительно увеличивались и достигали максимума (9,91±0,07 мкм) по сравнению с размерами эритроцитов контрольных

12

10

хоЕпршьяая груша опыташ груша

230 '¡260 «70 " 280 Х300

Возраст, дни Рис.1. Динамика объема эритроцитов свиней

Примечание:* здесь и далее знак достоверных различий между свиньями контрольной и опытной групп

«250 »1260 я 270 111 280 S300

Возраст, ДНИ Рис. 2. Динамика размеров эритроцитов

животных (5,64±0,03мкм). К 270 дню жизни у животных опытной группы наблюдалось резкое снижение размеров эритроцитов до 4,92±0,08 мкм. На 280 день размеры эритроцитов подопытных животных составляли 3,44±0,05 мкм. на 60 день 3,25±0,02 мкм.

Размеры эритроцитов животных контрольной группы колебались в пределах 5,58±0,03 - 7,25±0,04 мкм на протяжении всего эксперимента.

Длительное пребывание Balantidium coli- Candida spp., Aspergillus в организме свиней вызывало изменение концентрации гемоглобина в эритроцитах этих животных. Данные свидетельствуют о снижении гемоглобина на 250 день жизни животных от начала эксперимента у опытных животных по сравнению с контрольными (10,56±0,03 г/% и 13,38±0,02 г/% соответственно). Затем концентрация гемоглобина у свиней опытной группы резко увеличивалось и на 260 день достигало максимума (16,11±0,52 г/%), в то время как количество гемогло-

бина у контрольных животных не изменялось (13,31±0,25 г/%). На 300 день жизни животных количество гемоглобина у опытных животных снижалось почти в 2 раза (4,37±0,02 г/%), как по сравнению с началом эксперимента, так и в отношении к показателям контрольной группы 13,32±0,25 г/%). Таким образом, в первые 20 дней опытов наблюдалось увеличение количества, размеров, объема эритроцитов и концентрации гемоглобина в них.

2.2.2. Динамика биохимических показателей. Результаты проведенных исследований выявили снижение осмотической резистентности эритроцитов у животных опытной группы па 250 день жизни. Затем, наступало резкое увеличение показателей осмотической резистентности, и на 260 день они достигали максимума. На 270, 280 и 300 дни жизни животных наблюдалось снижение осмотической резистентности, тогда как у контрольных животных она на протяжении всего опыта не изменялась (табл. 1).

Резистентность не является в полной мере показателем свойств структуры мембраны без параллельных биохимических измерений.

Для понимания физиологических процессов, протекающих в эритроцитах, несомненную важность имеет изучение активности Na+ - , К+ - аденозин-трифосфатсинтазы и глутатионредуктазы. С ферментом Na+ -, К+ - аденозин-

Таблица 1.

Изменение осмотической резистентности эритроцитов _ периферической крови__

Статистические Возраст животных, (дни)

показатели 250 260 270 280 300

л ч о о, н М±т 0,35±0,07 0,35±0,06 0,36±0,03 0,36±0,03 0,36±0,02

о ьа N 10 10 10 10 10

н М±т 0,23±0,01 0,39±0,04 0,35±0,06 0,35±0,03 0,34±0,04

•а с о N 10 10 10 10 10

Р <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001

трифосфатсинтазы связана скорость гликолиза, а именно обеспечение активного обмена через мембрану ионов и К+. С 260 дня наблюдения активность - , К+ - аденозинтрифосфатсинтазы падала и на 300 день жизни животных достигала 0,025±0,007 нмоль, что почти в 3 раза меньше по сравнению с началом опыта и почти в 4 раза меньше по сравнению с контролем (0,098±0,002 нмоль), по видимому это объясняется нарушением работы «натриевого насоса». В результате снижения активности Ыа+ - , К+ - аденозинтрифосфатсинтазы уменьшается скорость гликолиза, нарушается энергетический обмен клеток. Следствием этого является раннее старение эритроцитов, что приводит к увеличению их объема (рис. 3).

В реакциях гликолиза участвует и глутатионредуктаза, являющаяся ферментом антиокислителыюй защиты, при ее недостаточности также уменьшается продолжительность жизни эритроцитов. Поэтому в собственных исследованиях определяли активность глутатионредуктазы эритроцитов свиней при экспериментальной протозойно-грибковой микстинфекции. Изменение активности данного фермента отличалось от динамики предыдущих показателей тем, что не носило циклический характер.

Уменьшение активности глутатионредуктазы отмечалось на 260 день жизни животных. На 300 день жизни активность глутатионредуктазы эритроцитов животных опытной группы продолжало снижаться и достигало 1,33±0,22 нмоль, что почти в 5 раз меньше по сравнению с началом эксперимента и почти в 8 раз меньше по сравнению с контролем (12,77±0,31 нмоль).

2.2.3. Динамика хронической интоксикации организма. Для аргументации влияния протозойно-грибковой микстинфекции в развитии адаптивной реакции со стороны организма свиней необходимо изучение хронической интоксикации по показателю спонтанной альтерации эритроцитов.

Проведенные исследования показали, что из 134 проб крови свиней с протозойно-грибковой инвазией, в 127 (94,8 %) обнаружено явление хронической интоксикации различной выраженности, величина показателя варьировала от 2,4±0,6 до 19,6±0,8 %.

0,099

0,049

Возраст, дни

Рис. 3. Динамика активности 1\а+,К+-зависимой аденозинтрнфосфатсинтазы эритроцитов

0,029

контрольная группа опытная группа

Степень интоксикации проб первой группы была слабо выражена и составила 2,4±0,6 %. Количество проб этой группы равнялась 25 (19,7 %). Хроническая интоксикация проб, включенных во вторую группу (49), была выше и составила 14,2±0,5 %, что соответствует средней степени интоксикации. В третей группе (53 пробы) этот показатель еще более увеличивался и составлял 19,6±0,8 %, что соответствовало тяжелой форме интоксикации.

Таким образом, нами было установлено, что не во всех пробах крови свиней с поражением кишечника Balantidium coli- Candida spp., Aspergillus отмечена положительная реакция на хроническую интоксикацию. Только 94,8 % взятых проб вызывали спонтанную альтерацию эритроцитов. Степень выраженности данного признака была неодинакова. Она варьировала, что позволило по степени интоксикации все пробы разделить на 3 группы. Наибольшее количество проб характеризовалось тяжелой хронической интоксикацией, тогда как всего 25 проб имели слабую выраженность данного свойства.

Глубокое и разностороннее изучение функциональной особенности эритроцитов позволяет оценивать и прогнозировать здоровье и продуктивность животных.

2.3. Оценка характера изменений микробиоценозов кишечника свиней

Во второй серии экспериментов показатели клинико-физиологического состояния подопытных животных в целом соответствовали таковым установленным в первой серии опытов.

2.3.1. Результаты изучения паразитоценоза. В последние годы в России особенно напряженной стала эпидемиологическая обстановка по паразитарным болезням животных. Особый интерес инфекционистов, паразитологов, ветеринаров, к смешанным инфекциям вызванных двумя и более возбудителями. Это связано с тем, что не один микроорганизм не существует изолированно, а является компонентом многочленной и многофункциональной системы, где между микробами складываются сложные и неоднозначные связи способные изменить ход уже изученных физиологических процессов при данном заболевании, что, несомненно, затруднит его диагностику и лечения (О.В. Бухарин, 2013).

В нашем исследовании выявлено 12 видов кишечных паразитов: 8 видов простейших и 4 вида гельминтов. Определены доминирующие в структуре пораженное™ свиней виды паразитов: из простейших - Blastocystis hominis, Balantidium coli, Lamblia intestinalis, из гельминтов - Enterobius vermicularis.

Установлен высокий удельный вес (28,75 %) моноиинвазий в структуре пораженное™ кишечными паразитами кишечника свиней, на двухчленные ассоциации приходится (63,9 %), тогда как четырехчленные ассоциации встречаются крайне редко (0,6 %). Среди диинвазий доминируют протозойно-грибковые ассоциации (48,56 %), наиболее редки гельминто-гельминтные ассоциации (0,31 %).

2.3.2. Структура микоценоза. При микологическом изучении испражнений было установлено (рис. 4), что по видовому составу микопейзаж свиней контрольной и опытной групп животных был практически идентичным. Так, из испражнений были выделены грибы рода Aspergillus, Pénicillium, Mucor и Candida. Частота высеваемости плесневых грибов из испражнений здоровых и больных свиней также была почти одинаковой по содержанию грибов Pénicillium и Мисог, но имела значительные отличия по обсемененности грибами Aspergillus и Candida.

Количественное изучение обсемененности испражнений спорами плесневых грибов и дрожжеподобных показало, что только грибы рода Aspergillus и Candida имеют статистически достоверное различие у здоровых и больных свиней - lg 2,8±0,3 КОЕ/г и lg 3,5±0,5 КОЕ/г (lg 0,9±0,05 КОЕ/г, lg 1,1±0,7 КОЕ/г, р<0,0001) соответственно. Количественное содержание грибов рода Pénicillium и Мисог достоверно не отличалось у всех обследованных животных.

контрольная группа опытная группа

Рис.4. Микопейзаж кишечника подопытных животных

Pénicillium

s Aspergillus

я Мисог

■ Condida

2.3.3. Характер изменений микробиоценоза. Изучение микробоценоза кишечника свиней в отсутствие у них кишечных инфекций при определении количественного и качественного состава бактериальных сообществ с последующей идентификацией пространственной структуры и иерархии экологических групп, показало, что такие представители нормальной микробиоты кишечника, как лактобактсрии (8,4±1,6 lg КОЕ/г), бифидобактерии (8,7±1,9 lg КОЕ/г) и кишечные палочки (7,7±2,1 lg КОЕ/г) присутствовали у всех животных (100%), представители других таксонов встречались реже.

Из испражнений достаточно часто высевали условно - патогенные энте-робактерии (28,6 %). Высокое микробное число было установлено для протеев -3,5±0,4 lg КОЕ/г и энтеробактер - 3,2±0,7 lg КОЕ/г, меньшую обсемененность обнаруживали у клебсиелл - 3,1±0,7 lg КОЕ/г.

Достаточно часто в фекалиях обнаруживались стафилококки. Представители рода Staphylococcus были выделены у 15,2 % животных, при этом чаще высевался S.epidermidis (63,4 %), значительно реже - S. aureus (15,2 %), на долю остальных видов приходилось 21,4 %.

Почти у каждого четвертого обследованного животного регистрировались дрожжеподобные грибы рода Candida (23,1 %). Однако обсемененность этими микроорганизмами была весьма незначительной, и средняя арифметическая величина составила 3,5±1,4 lg КОЕ/г.

Полученные нами результаты свидетельствуют о широкой распространенности в микробиоте кишечника обследованных свиней при отсутствии паразитарных инвазий аэробных микроорганизмов.

2.3.4. Микробиоциноз кишечника животных при микстинвазии Balantidium coli- Candida spp., Aspergillus. Наши исследования так же выявили, что у свиней с протозойно-грибковыми поражениями происходило статистически достоверное снижение, по сравнению со здоровыми животными, встречаемости и обсемененности представителями облигатной кишечной микрофлоры, с одновременным увеличением данных показателей среди условно - патогенных микроорганизмов Staphylococcus, Streptococcus, Klebsiella, Proteus. В груп-

пе здоровых свиней количественные показатели контаминации представителями транзиторной кишечной микрофлорой находились в пределах физиологической нормы.

3. ВЫВОДЫ

1. Проведена комплексная физиологическая оценка характера колебаний структурно-функционального состояния эритроцитов периферической крови свиней в условиях дисбиотических изменений кишечника.

2. Доказано, что у 260 - дневных животных при протозойно-грибковых поражениях кишечника происходили значительное увеличение количества, объема, размеров, концентрации гемоглобина и уровня осмотической резистентности, а также снижение активности глутатионредуктазы и Na+ - , К+ -аденозинтрифосфатсинтазы в эритроцитах по отношению к контрольным параметрам (р<0,05 - 0,005).

3. Выявлена взаимосвязь между проявлением у свиней хронической интоксикации организма различной степени с учетом характера спонтанной альтерации эритроцитов и структурой микробиоценозов, частотой случаев дисбиотических нарушений кишечника.

4. Установлено, что в условиях моделируемых экспериментов у животных выделено и идентифицировано 8 видов простейших (Entamoeba coli, Е. hartmanni, Е. nana, Blastocysts sp, Iodamoeba butschlii, Lamblia intestinalis, Balantidium coli, Cryptosporidium partum), 4 вида гельминтов (Opistorchis felineus, Hymtnolepis nana, Enterobius vermicularis, Ascaris lumbricoides), 4 вида условно-патогенных микроорганизмов (Staphylococcus, Streptococcus, Klebsiella, Proteus), 4 рода грибов (Aspergillus, PenicilHum, Mucor, Candida spp.).

5. Отмечено, что у свиней опытной группы наблюдалось достоверное снижение количества облигатной микробиоты и одновременное увеличение числа простейших, дрожжеподобных и плесневых грибов, тогда как у контрольных животных уровень контаминации с транзиторной микрофлорой кишечника соответствовало состоянию естественного микробиоценоза.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные положения и выводы диссертационной работы используются при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова», ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» и рекомендуются к использованию специалистами ветеринарных лабораторий и станций по борьбе с болезнями сельскохозяйственных животных, а также при написании учебных пособий по физиологии и этологии животных для студентов высших учебных заведений по агробиологическим и педагогическим специальностям.

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зубкова Е.А. Влияние микробиоценоза кишечника на формирование и тяжесть течения экспериментальной язве желудка, ассоциированной с бласто-цистозом / Ю.Ю. Красноперова, Е.А. Зубкова, H.H. Потатуркина-Нестерова, Н.В. Бугеро // Вестник Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова. - Саратов, 2006 - № 1. - С. 17-19.*

2. Зубкова Е.А. Состояние эритроцитов периферической крови и микрофлоры толстой кишки при поражении простейшими Blastocystis hominis / Ю.Ю. Красноперова, Е.А. Зубкова, A.M. Лазарев // Успехи современного естествознания. - М„ 2006.-№ 1. - С. 93-94.

3. Зубкова Е.А. Влияние простейших Blastocystis hominis на гематологическую картину и микобиоциноз толстого кишечникаЛО.Ю. Красноперова, Е.А. Зубкова, A.M. Лазарев // Успехи современного естествознания. - М., 2006. -№2-С. 30-31.

4. Хуснатдинова Е.А. Результаты определения чувствительности простейших к антибактериальному ферментному препарату лизоамидаза / Е.А. Хуснатдинова, Ю.Ю. Красноперова, Н.Г. Гумаюнова // Мат. I конферен-

ции молодых ученых Поволжской ассоциации государственных университетов. -Ульяновск, 2007.-С. 140-141.

5. Хуснатдинова Е.А. Определение чувствительности простейших Blastocyslis hominis к различным концентрациям ферментного препарата лнзоа-мидаза /Е.А. Хуснатдинова, Ю.Ю. Красноперова // Мат. Всерос. конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» - Ульяновск, 2007. - С. 202-203.

6. Хуснатдинова Е.А. Изменение гематологического профиля и микрофлоры кишечника свиней при микозах / Е.А. Хуснатдинова, Е.А. Карпеева, О.Г. Зотов // Вестник Чувашского государственного педагогического университета им. И.Я. Яковлева. - Чебоксары, 2011. - № 4 (72). - Ч. 1.- С. 2628.*

7. Хуснатдинова Е.А. Морфофизиологические особенности эритроцитов периферической крови при протозойной-грибковых поражениях кишечника свиней / Е.А. Хуснатдинова, Ю.Ю. Красноперова // Естественные и технические науки - М., 2013 - № 3 (65). - С. 97-100.*

* - публикации в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных ВАК Минобрнауки России для докторских и кандидатских диссертаций

Подписано в печать 21.11.2013 г. Заказ № 2611 Тираж 100 шт. Отпечатано в типографии «АллА-принт» г. Москва, Лубянский пр-д., д.21, стр.5

www.allaprint.ru

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Хуснатдинова, Екатерина Александровна, Москва

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «УЛЬЯНОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. И.Н. УЛЬЯНОВА»

МОРФОФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ В УСЛОВИЯХ ДИСБИОТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ КИШЕЧНИКА СВИНЕЙ

На правах рукописи

Хуснатдинова Екатерина Александровна

03.03.01 - физиология

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент КРАСНОПЕРОВА Ю.Ю.

Москва 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ....................................................................................................................4

ВВЕДЕНИЕ..........................................................................................................................................................5

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................................................................11

1.1. Биологическое значение системы крови для организма человека и животных................................................................................................................................................................11

1.2. Физиологическая роль эритроцитов периферической крови в организме сельскохозяйственных животных....................................................................................13

1.3. Агроэкосистема - микробиоценоз -продуктивные животные: причинно-следственная связь..................................................................................................................................................18

1.4. Биологическое значение ассоциативных взаимоотношений микроорганизмов............................................................................................................................................................33

ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ........................................................................40

2.1. Материалы и методы исследований....................................................................................40

2.1.1. Материалы исследований........................................................................................................40

2.1.2. Методы исследований..................................................................................................................44

2.2. Оценка характера изменений структурно-функционального состояния эритроцитов периферической крови в условиях протозойно - грибковых поражений кишечника свиней............................................................................................59

2.2.1. Динамика морфометрических показателей..............................................................59

2.2.2. Динамика биохимических показателей........................................................................72

2.2.3. Динамика хронической интоксикации организма................................................77

2.3. Оценка характера изменений микробиоценозов кишечника свиней ... 80

2.3.1. Результаты изучения паразитоценоза............................................................................80

2.3.2. Структура микоценоза..................................................................................................................83

2.3.3. Характер изменения микробиоценоза............................................................................87

я

2.3.4. Микробиоциноз кишечника животных при микстинвазии Balantidi-

ит coli - Candida spp. - Aspergillus..................................................................................................89

ГЛАВА 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ..............92

4. ВЫВОДЫ............................................................................. 101

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ........................................ 102

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ........................................................ 103

7. ПРИЛОЖЕНИЯ..................................................................... 129

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АТФ-аза - аденозинтрифосфатаза; КОЕ - колониеобразующая единица; ЖСА - желточно - солевой агар.

ВВЕДЕНИЕ

Кровь является внутренней средой для всех органов и тканей и наиболее полно отражает разнообразные физиологические процессы, происходящие в организме. Ее морфологические и биохимические свойства у животных разных видов различны: в пределах одного вида животных состав крови зависит от породы, пола, возраста, физиологического состояния животного, продуктивности, ухода и содержания (Е.Г. Воронкова, 2008).

Система крови наиболее полно отражает в себе разнообразные физиологические процессы, происходящие в организме. Ее морфологические и биохимические свойства у животных разных видов различны: в пределах одного вида животных состав крови зависит от породы, пола, возраста, физиологического состояния животного, продуктивности, ухода и содержания (А.Н. Голикова, Г.В. Паршутина, 1980).

В современной ветеринарии состояния периферической крови у животных является одним из обязательных критериев постановки правильного клинического диагноза и в последующем предопределяет проведение терапевтически высокоэффективного вмешательства (Е.А. Васильева, 1982; Г.И. Козинец, 1995).

Исходя из того, что в организме человека и позвоночных животных зрелые клетки красной крови отделены от камбиальной ткани и доступны исследователю без вмешательства в кроветворные органы, представляется обоснованным их использование в качестве объекта исследования с целью оценки и прогнозирования физиологического состояния организма человека и животного (А.Н. Голиков, 1991).

На сегодняшний день работы по изучению функционального состояния эритроцитов при кишечных инфекциях более подробно проведены только на лабораторных животных. По остальным животным опубликованы лишь фрагментарные сведения о функциональном состоянии красных кровяных клеток. Поэтому целесообразно изучение данных показателей у различных

животных, т.к. они имеют значительные различия в биологии обменных процессов многих систем организма.

В современных условиях ведения животноводства создаются благоприятные условия для распространения факторных инфекций, которые способствуют созданию оптимальных условий среды обитания для микроорганизмов и повышению их вирулентности. (И.А. Анисим, В.В. Вантеев и др., 1998; Н.Д. Ардатская, A.B. Дубинин, О.Н. Минушкин, 2001;С.А. Данкверт, 2008 и

ДР-)-

Паразитарные сообщества представляют собой важную часть биоценозов, их разнообразие и устойчивость служат гарантией сохранения экологического равновесия. Они являются важной частью биоценозов, выполняя ре-гуляторные функции (П.С. Иванова, 1948). Со своими хозяевами паразиты тесно связаны эволюционно отлаженными паразито-хозяинными отношениями и оказывают на хозяев существенное влияние на всех уровнях организации (В.Г. Хамцов, 1990; А.Д. Адо, М.А. Адо, В.И. Пыцкий и др., 2000; A.B. Атаман, 2000; А.Д. Адо, 2002).

Одним из представителей паразитарного микробиоценоза является Balantidium col (И.М. Лаптева, 1970; Т.К. Жордания, 1971).

Возбудитель балантидиаза - Balantidium coli распространен одинаково по всему земному шару. Он относится к ресничным инфузориям и является самым крупным представителем среди патогенных кишечных простейших (A.A. Рочкени, 1977; E.D.Storgaard et al., 1996), вызывающий кишечный про-тозооз, характеризующийся интоксикацией и язвенным поражением толстой кишки, склонный к затяжному и хроническому течению (В.Г. Хамцов, 1971; М.Ш. Акбаева, 1998).

Актуальность темы. Современное отечественное свиноводство - динамично развивающаяся отрасль животноводства России, позволяющая в сравнительно короткие сроки удовлетворить потребность населения в доступном, биологически полноценном животном белке, а также обеспечить продовольственную безопасность государства (В.Н. Ямщиков, 2003; E.H. Ва-

сильев, 2004; П.П. Диденко, Д.В. Зуев, 2006; А.Т. Мысик, 2008 и др.).

Однако, несмотря на общее стабильное состояние отрасли, имеется целый ряд актуальных вопросов, требующих неотложного решения. Одним из них являются кишечные паразитозы продуктивных животных, которые имеют достаточно широкое распространение в регионах с развитым свиноводством. Кроме того, кишечные инвазии у свиней часто встречаются в виде со-четанных микробных поражений, что ведет к снижению уровня естественной резистентности и продуктивности организма, вынужденному убою и падежу животных, нанося ощутимый экономический ущерб (Р.Т. Сафиуллин, 1984; В.В. Буров, 2001; Е.К. Кизин, 2003; С.Г. Федотов, 2004; В.И. Крылов, 2004; Н.В. Глазунов, 2006).

Следовательно, в настоящее время становится все более очевидным глубокое изучение системы крови, включающей периферическую кровь, органы кроветворения и кроворазрушения, а также нейрогуморальный механизм её регуляции (В.Г. Леонова, 1987; Г.А. Симонян, Ф.Ф. Хисамутдинов, 1995; Р.Я. Гильмутдинов и соавт., 2005; А.В. Новожилов, Л.Н. Катюхин, 2008).

Как известно, кровь составляет внутреннюю среду организма, которая обеспечивает жизнедеятельность клеток, являясь посредником между ними и внешней средой. При этом важнейшую функцию в организме человека и животных выполняют форменные элементы крови, основную часть которых составляют эритроциты (А.Г. Голубев, 1997; И.Н. Тодоров, Г.И. Тодоров, 2003; Н.Д. Гончарова, В.Ю. Маренин и др., 2008; D.L. Teply, 2010). Так, по данным Theret et al. (1993), Cao et al. (2002), Zhao et al. (2006), Л.Н. Лесниковой (2006), Д.Д. Теплого (2011), функциональное состояние эритроцитов представляет собой наиболее удачную биологическую модель для изучения динамики происходящих в организме многих нарушений. Поэтому диагностическая важность определения количественных и качественных характеристик эритроцитов в крови при патологических процессах высоко значима как в теоретическом, так и практическом аспектах.

В контексте изложенного выше целью диссертационной работы является изучение особенностей структурно-функционального состояния эритроцитов периферической крови при протозойно-грибковых поражениях кишечника свиней.

Для реализации поставленной цели исследований были сформулированы следующие задачи:

1. Оценить динамику морфофизиологического состояния эритроцитов у свиней в условиях дисбиотических изменений кишечника.

2. Изучить характер колебаний морфометрических и биохимических параметров.

3. Провести анализ хронической интоксикации организма по степени спонтанной альтерации эритроцитов.

4. Определить структуру микробиоценозов кишечника.

Научная новизна. Установлено, что количественные и качественные показатели эритроцитов периферической крови свиней, характеризующие их морфофизиологическое состояние (число, объём, размеры, уровень осмотической резистентности, активность глутатионредуктазы и N3+ -, К+ - адено-зинтрифосфатазы, а также концентрация гемоглобина в эритроцитах), зависят от характера протозойно-грибковых поражений кишечника.

Отмечена причинно-следственная связь между проявлением у животных хронической интоксикации различной степени и структурой микробиоценозов, частотой встречаемости дисбиотических нарушений кишечника.

В моделируемых экспериментах показано, что в испражнениях свиней было обнаружено и идентифицировано 8 видов простейших, 4 вида гельминтов, 4 вида условно-патогенных микроорганизмов, 4 рода грибов.

Теоретическая и практическая значимость. Сформулированы новые научные положения, дополняющие современную теорию о специфичности физиологической активности эритроцитов в крови свиней во взаимосвязи с разной структурой микробиоценозов кишечника и хронической интоксикацией организма различной выраженности.

Теория работы построена на известных фактах о закономерностях фазных изменений структурно-функционального состояния эритроцитов и согласуется с данными отечественных и зарубежных ученых в области физиологии системы крови. Научная идея диссертации основывается на обобщении передового опыта применения инновационных методов профилактики протозойно-грибковых поражений кишечника у продуктивных животных.

Разработаны научно-обоснованные практические рекомендации, направленные на повышение жизнеспособности и продуктивности сельскохозяйственных животных, которые могут быть использованы специалистами агропромышленного комплекса в производственной деятельности.

Реализация результатов исследований. Научные положения, выводы и рекомендации диссертационной работы используются в учебном процессе ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова» и ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия».

Полученные результаты исследований рекомендуются к использованию специалистами ветеринарных лабораторий и станций по борьбе с болезнями сельскохозяйственных животных, а также при написании учебных пособий по физиологии и этологии животных для студентов высших учебных заведений по агробиологическим и педагогическим специальностям.

Апробация работы. Основные результаты и практические рекомендации диссертационных исследований доложены на Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека (Ульяновск, 2007), I региональной конференции молодых ученых Поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007), научно практических конференциях ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет» (Ульяновск, 2007-2008), ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова» (Ульяновск, 2007-2012), расширенном заседании

кафедры анатомии, физиологии и гигиены ФГБОУ ВПО «УлГПУ им. И.Н. Ульянова» (Ульяновск, 2012).

Научные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности структурно-функциональных характеристик эритроцитов периферической крови свиней обусловлены дисбиотическими изменениями кишечника.

2. Существует взаимосвязь структуры микробиоценозов и частоты про-тозойно-грибковых поражений кишечника у животных с проявлением хронической интоксикации организма различной степени.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них 3 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях согласно перечню ВАК Министерства образовании и науки Российской Федерации. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из списка сокращений (1с.), введения (6), обзора литературы (29), собственных исследований (52), обсуждения результатов исследований (9), выводов (1), практических рекомендаций (1), списка литературы (26), приложений (4). Диссертация изложена на 132 страницах компьютерного исполнения, иллюстрирована 15 таблицами и 16 рисунками. Список литературы включает 297 источников, в том числе 40 зарубежных.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Биологическое значение системы крови для организма человека и

животных.

Кровь — внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью, которая осуществляет перенос кислорода от легочных альвеол к тканям (за счет дыхательного пигмента гемоглобина, содержащегося в эритроцитах) и углекислого газа - от тканей к органам дыхания (это выполняют соли, растворенные в плазме), а также питательных веществ (глюкозы, аминокислот, жирных кислот, солей и др.) к тканям, а конечных продуктов обмена (мочевины, мочевой кислоты, аммиака, креатина) - от тканей к органам выделения, а также транспортирует биологически активные вещества (гормоны, медиаторы, электролиты, продукты обмена - метаболиты) (Л.И.Иржак, 1975).

Кровь не соприкасается с клетками тела, питательные вещества переходят из нее в клетки через тканевую жидкость, заполняющую межклеточное пространство (В.Н. Волков, 1984; В.П. Войтенко, 1984; И.А. Быкова,1993). Эта жидкая ткань участвует в регуляции водно-солевого обмена и кислотно-щелочного равновесия в организме, поддержании постоянной температуры тела. Также кровь предохраняет организм от воздействия бактерий, вирусов, токсинов, чужеродных белков. Объем циркулирующей крови в организме свиньи составляет 7-11% от общей живой массы и зависит от возраста, типа и породы животного (E.H. Мосягина с соавт., 1976; О.В. Волков, Ю.К. Елецкий, 1982; А.И. Воробьев, 2002).

Кровь состоит из 2 важных компонентов - форменных элементов и плазмы. На долю форменных элементов приходится примерно 30 - 40%, плазмы - 70% объема всей крови. К форменным элементам относятся эритроциты, лейкоциты и тромбоциты, их содержание у здоровых животных при количестве крови - 68-74 мл/кг живого веса составляет: гематокритов -35-45%., эритроцитов - 5-8 млн./мм3., гемоглобина - 10-14 г/100 мл, лейкоци-

л

tob - 7-20 тыс./мм ., лимфоцитов - 40% (М.Г. Абрамова, 1985; E.H. Мосягина с соавт., 1976).

Эритроциты, или красные кровяные тельца, переносят кислород из легких к органам и тканям, а также обусловливают иммунологические особенности крови. Сочетание антигенов эритроцитов определяет группу крови. Лейкоциты, или белые кровяные тельца, делятся на зернистые (эозинофилы, базофилы и нейтрофилы) и незернистые (моноциты и лимфоциты). Процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов составляет лейкоцитарную форму крови. Все типы лейкоцитов участвуют в защитных реакциях организма. Тромбоциты, или кровяные пластинки, принимают участие в процессе свертывания крови (Г.М. Ахмадиев, С.А. Чернышева, 2010).

Плазма крови - это жидкая ее часть, состоящая из воды (91-92%) и растворенных в ней органических и минеральных веществ. Соотношение объема форменных элементов и плазмы крови в процентах называется гематокрит-ным числом (В.И. Козинец, 2004).

Кровь является тканью, в которой отражаются все наиболее важные жизненные функции организма. Она снабжает все органы и ткани питательными веществами и уносит все ненужные отработанные продукты обмена. Через кровь осуществляется действие на организм эндокринных желез. Она вы