Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярная организация альфа-актинина и его взаимодействие с актином

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Молекулярная организация альфа-актинина и его взаимодействие с актином"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ ГРУЗИН ИНСТИТУТ БИОХИМИИ РАСТЕНИИ

На'правах рукописи

РУСИН Лаина Ушангиевна

УДК:547.962¡577 Л12

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ а-АКТИНИНА И ЕГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С АКТИНОМ.

03.00.04. - БИОХИМИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тбилиси - 1992

Работа выполнена в Лаборатории первичной структуры макромолекул Института молекулярной биологии и биологической физики АН Республики Грузия

Научный руководитель - Доктор химических наук

М.Ш.Симонвдзе Научный консульта{йр- - Академик АН FF, Доктор биологических наук М.М.Заалишвили Официальные оппоненты - доктор биологических наук

Д.Г.Микеладзе

кандидат биологических наук Ц.С. Турманидзе

Ведущая организация - Филиал Института биоорганической химии им.N.M.Шемякина, АН РСФР.

Защита состоится " дл/х&АЛ. 19Э2г. в час.

на заседании специализированного совета К 007.04.01 в Институте биохимии растений АН Республики Грузия по адресу: 380059, г.Тбилиси, Аллея Давида Агмашенебели, 10-й км.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Института биохимии растений АН Республики Грузия.

Автореферат разослан 1992г.

Ученый секретарь специализированного совета,

кандидат биологических наук /], М.В.Бендианишвили

Актуальность проблемы. В последние года оолыное внимание уделяется изучению структуру индивидуальных кошоненектов сократительной система, выяснения механизмов их функционирования в процессе сокращения и принципов организации сократительного элемента. В 70-ых годах были открыты и выделена белки связывающиеся с тонки.® и толстыми ф&гаментами и белковые сомплекси регулирующие актомиозиновое взвииодействив (тропонин, а-актинин,

тррпошга-тропомиозиноБЫй комплекс и др.). С момента открытия а-актинина , минорного белка сократительной системы, были достигнуты значительные успехи в исследовании молекулярной организации миозина, актина, тропонина и др. Для а-актинина было установлено, что он состоит из двух идентичных субъедениц с закрытыми н-концами с 'молекулярными массами около ЮОкДа. а-актинин увеличивает СПП и АТФ-азу реконструированного актошозина, но непосредственно взаимодействует только с Ф-актином, связывая его поперечными мостиками. Цредпологается, что субъеденицы а-актинина ориентированы антипаралельно и центр связывания с актином расположен в н-домэвэ. Несмотря на значительные сведения о физико-химических- свойствах, фукцни и структуры а-актинина, его роль при функционировании актомиозинового комплекса до конца не выяснена. В связи с этим нам представлялось целесообразным провести подробное исследование структурной организации а-актинина, а такте изучить его взаимодействие с актаном на уровне первичной структура.

Цель работы. Настоящая работа представляет собой часть комплексных исследований по выясЕешзэ структурной организации и кзханизма функционирования минорного белка а-актинина. Основной целью ес еле да вайя Сто детальное ' изучение структура и свойства а-тгтнша выделенного из поперечнополосатой гашщ кролика для уточнения гипотетической кодедп его молекулярной организация.В

процессе работы з наши задачи входило:I) изучение сеойств а-актинина модифицированного бифункциональными реагентами; 2) получение пептидов " нативного гидролиза модифицированного а-актинина-, 3) исследование взаимодействия и установление центров связывания а-актинина и актина.

Научная новизна и практические ценности работы. При помощи бифункционального реагента диметилсуберимидата получен внутримолекулярносвязанный а-актинин, изучены свойства модифицированного а-актинина, кинетика его ферментативного расщипления и продукты нативного трипсинолиза. Обнаружено, что бифункциональным реагентом поперечно связываются С-домены а-актинина, м-домен с С-концом С-доыена и нет сшивок между N-концевыми доменами, которые обеспечивают связь мевду актином и а-актинином.Таким образом были полученные данные подтверадавдие молекулярную организацию а-актинина. Установили, что связывание бифункциональными реагентами вызывает конформационное изменение структуры белка, вследствии чего а-актинин теряет свойство связывания Ф-актиновых нитей.

Сопоставление способностей Ф-актина и Ф-актина полученного химической модификацией, взаимодействовать с а-актинином, свидетельствует о важной функциональной роли катионов в белок-Селковом взаимодействии. Полимер Ф-актина в отсутствии солей не взаимодестЕует с а-актинином.

Путем выравнивания первичной структуры и-концевого домена, найдено, что в полипептидной цепи этого домена существуют схожие участки 64-^8 я 176-190. Мощность сходства которых составляла 4.48во. - -

Проведенные в работе исследования расширяют и дстолняют

представления о структуре и механизме функционирования минорного бежа а-актинина. Экспериментальные материалы, сочетание современных методов исследования и подхода к .решению поставленных зацачь могут представлять интерес при изучении многокомпонентных биологических систем и исспользоваться при выяснении регуляции биологической подвикности.

Апробация работы.Основные результаты работы были доложены на следувдих конференциях и симпозиумах: Международном симпозиуме "Молекулярная организация биологических сгруктрур" (Москва, 1у89), 6-ой всесоюзной конференции по биохимии мышц (Тбилиси, 1989), Всесоюзном симпозиума "Химия белков" (Тбилиси, 1990).

Струкгура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, изложения результатов и их обсуждения, вывода и списка литературы. Диссертационная работа изложена на страницах, включая 2 таблицы, 3 схемы и 21 рисунка.

Содеркание работы. Во введении излогена цель и задача проведенного исследования. В литературном обзоре рассмотрен материал по исспользовангаэ бифункциональных реагентов для исследования структуры белков и изложены данные по исследованию структуры кшючных бэлков'(миоззша, актина, тропонина, тропомиозика) при помощи бифункциональных реагентов.

В экспериментальной части детально изложены методы исследования.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ К ИХ ОБСУЖДЕНИЯ

I. Получение внутржолекуляриосЕитого а-актинина. Прл

спрэдгязнги тлела гжгсг-ероз з олзгокэрв и Езученнз пространственного озвазззея и рзстшкавия соседтз тзэкул все бол,"ее рзсцростралзнпэ получает метод, основанный вз

мономеров бифункциональными реагентами с последующим анализом продуктов реакции с помощью электрофореза в ПААГ ДСН. Решение этой проблемы требует тщательный подбор экспериментальных условий.

При получении внутримолекулярносшитого а-актинина наш была исследована зависимость выхода продукта от длины реагента, рН среды, концентрации реагента, белка и солей.

В работе использовались следующие бифункциональные реагенты: глутаровый альдегид, диметилглутаримидат, диметшидапимидат, диметилпимэлинимидат, диметилсуберимидат и 3,3--дитиобис1гропионовая кислота.

В результате проведенной работы были подобраны условия для получения . внутримолекулярносшитого а-актинина с оптимальным выходом. Условия этого эксперимента следующие: состав буфера: 0,2 М HgB03 0,1 М HaCi, рН 8,7; концентрация белка 0,5 мг/мл, концентрация диметилсуберимидата 25 мМ, продолжительность реакции 3 часа, температура 18-22°С. Результаты эксперимента приведены на РИС. I. IÍ3 ДеНСИТОГраММЫ ВИДНО, ЧТО В ПРИСУТСТВИИ 0,1 М NaCl выход поперечносшитого а-актинина достигает примерно 90Я> от начального колличества белка.

Предложенная процедура является быстрой и удобной и может быть исспользована в лабораторной практике при исследованиях модифицированного а-актинина.

2. Свойства внутримолекулярносшитого а-актинина.

Триптический гидролиз внутримолекулярношитого а-актинина.

Данная глава посвящена изучению локализации поперечных мостиков образованных при внутримолекулярном сшивании а-актинина бифункциональным реагентом ДМСИ, используя метод ограниченного

трипсннолиза. путем сравнения триптических фрагментов нативного и модифицированного а-актинина.

Известно, что расщепление нативного а-актинина происходит

Рис. I. Денситогракма взаимодействия а-актинина с ДОК в присутствии 0.1 М КаС1. а) Нативный белок , б) Белок модифицированный ДМСИ.

слэдущим образом: первоначально белок под действием протеазы укорачивается с ю-конца и при атом образуется фрагмент 98 кДа. Далее, укороченный а-актинин быстро распадается на два домена: И-домзн (30 кДа) накапливается в гидролизате, а С-домен (70 кДа) претерпевает^дальнейшее расщепление с С-конца,образуя фрагмента с аолекулярными массами 64,Бб и 38 кДа. Нам представлялось штерэстным сравнить ход и скорости гидролизов нативного и гапречносшитого а-актининов. На рис.2 представлена »лектрофорегмрагжз продуктов тршгпггеского гидролиза нативного (I) [ попэрэчносшитого (2) а-актиниЕов. Гидролиз в обоих случаях

и

в

проводили б одинаковом буфере: о,2 М троиэтаяолгидрохлорид, рН 8,6,

Рис. 2. Электрофорез продуктов триптического гидролиза нативного (I) и поперечносшитого (2) а-актининов.

Как видно из рисунка, на электрофореграммах гидролизатов поперечносшитого а-актинина в денатурирующих условиях, в основном, наблюдается образование гетерогенной полосы соответствующей 130-140 кДа, которой нет в гидролизатах нативного а-актинина, и полосы 30-33 кДа, которая чуть тяжалее ы-концевого домена нативного а-актишша, т.е. его молекулярная масса выше, чем молекулярная масса н-кондевого домена образовавшегося при трипсинолизе нативного а-актинина. Полученный результат указывает на то, что я-концевой домен, как и в случае нативного а-актинина, образуется в мономерной форме; а из этого следует, что ы-концевые домены а-актинина не связываются между собой бифункциональным реагентом, следовательно, они расположены друг от друга на расстоянии превышающем длину

£3 $ — |о

1 ¡1

юспользуемого реагента. Образование сплошной полосы 130-140 кДа на электрофореграммах указывает на то, что С-концеЕой домен белка и хродукты его трипсинолиза в денатурирущих условиях выделяются в химерной форме, следовательно, бни в молекуле а-актинина связываются бифункциональным реагентом. Мы прэдпологаем, что ¡гвеличение массы ГТ-домена вызвано тем, что при модиикации Я-концевой домен бифункциональным реагентом соединяется с С-доменом I после гидролиза пептид С-концевой части С-домена остается зрикрепленным к н-домену.

Исследования скоростей нативного и модифицированного х-актининов, показало, что они сильно отличаются друг от друга. На зис.З представлено изменение молярного колличества нативного и юдифицированного а-актининов в ходе ограниченного гидролиза трипсином. Анализируя приведенные результаты мы пришли к зледунцему заключению, что гидролиз поперечносшитого а-актинина гротекает медленее: в одинаковых условиях (см. выше) полное расщепление нативного белка происходит примерно за 40 минут, тогда сак для полного расщепления поперечносшитого а-актинина требуется 1е.менее 90 кинут. Замедление гидролиза поперечносшитого а-актинина збусловлено тем, что я-концевой домен, прикрепленный к С-концевой ■шсти С-домена стерически перекрывает его и для экспонирования звязей подверзенных гидролизу, требуется время. . Ход гидролизов ютивного и поперечносшитого а-актининов схематически представлены 1а рис.4.

Если наш суждения о фрагменте 33 кДа правомерны, то при «¡следовании емянокислогис-й последовательности этого фрагмента золгшы обнаружится два последовательности: одна относящаяся к {-концевому домену а-актшгина, а вторая - С-концевому фрагменту

С-домена, прикрепленному к нему бифункциональным реагентом. Для подтверждения выошесказашого нами была исследована аминокислотная последовательность фрагмента 33 кДа с использованием метода Эдмана.

В результате проведенного исследования было установлено, что на каждой стада деградации образуются две аминокислоты. Исключая уже известную аминокислоту пркеоядашщую ашиешанвгу принадлежащую к N-концевому домену, нам удалось установить частичную N-концевую последовательность фрагмента отщепленного от С-домена:

Giu - Giy - Pro- (N-концевая последовательность N-домена)

Leu - Val - Giy- (n-Концовая ПОСЛвДОВаТВЛЬНОСТЬ

неизвестного фрагмента)

I (min)

Рис.3. Изменение молярного колличества нативного (А) и модифицированного (*) а-эктинияов в ходе ограниченного

трипсинолиза.

Рис.4,

Ход гидролиза нативного и поперечносшитого Ы-актининов. (стрелкой обозначено"действие фермента)

Таким образом, ссумируя результаты представленные в этой главе, можно заключить, что в молекуле а-актинина бифункциональным реагентом связываются С-домены белка, нет связывания меаду ы-доменами, но существует связь мезду ¡¡-доменом и С-концевой частью С-домена; следовательно, субъеденицы а-актинина в молекуле белка расположены антипаралельно и расстояние между ы-доменом' и С-концевой частью С-домена не превышает 11,2 2.

Биологическая активность попречносшитого а-актинина.

Известно, что бифункциональные реагенты часто стабилизируют белки препятствуя разворачиванию полипептидаой цепи и повышая жесткость их структур. Мы предположили, что образование попречных сшивок между м- и С- доменами а-актинина могло повлиять на его конформацию и вызвать тем самым изменение его биологической активности. Тем более известно, что в ы-концевом домене расположен центр связывания с актином, а в немышечных а-актининах - петли для связывания ионов Са2+, которые регулируют активность белка, находятся в С-концевой части субъеденицы а-актинина .

Методом вискозиметрии наш был исследован комплекс а-актиннина и актина реконструированный из нативного актина и поперечносшитого а-актинина. Полученные результаты указывают на то, что а-акишин, обработанный бифункциональным роеагентом, не увеличивает вязкость Ф-актина, т.е. теряет способность соединять попречными кр(остиками Ф-актиновые нити. Такой же результат был получен при иследовании данного комплекса с помощью электронной микроскопии: модифицированный а-актинин не сшивает Ф-актиновые тонкие нити и не образуются Ф-актиновые пучки. Мы предпологаем, что изменение пространственной структуры а-актинина (уменьшение степени свободы вращения я-концевого домена) приводит к потере биологической

ц

активности белка.

Гидродинамические исследования внутримолекулярношитого а-актинина. Проводили сравнительный анализ коэффициентов седиментации нативного и поперечноспштого а-актининов при разных концентрации бифункционального реагента. Результаты эксперимента показывают, чтф ростом концентрации реагента увеличивается коэффициэнт седиментации белка, от 4,7 до 5,3, что свидетельствует о некоторой компактизации молекулы а-актинина в результате поперечного сшивания.

3. Изучение взаимодействия а-актинина и актина при помощи бифункциональных реагептоз.

Участки связывания а-актинина и актина. Для установления участков связывания а-актинина на молекуле актина мы проводили поперечное связывание этих белков бифункциональным реагентом 1-этш-3(3-дометиламдоо)пропилкарбодиимид (ЭДК). Приемущество исспользования ЭДК по сравнении с другими бифункциональными реагентами состоит в том, что поперечно связываются только те остатки которые находятся на контактной поверхности нативных белков, что имеет большое значение для опредиления участков взаимодействия .

В результате проведенных экспериментов (рис.б.) были установлены оптимальные условия для получения поперечноспштого комплекса а-актинина с актином.В фореграммах такого препарата наблюдается полоса соответствукщая молекулярной массе 145 кДа, свидетельствующая о связывании актина и субъеденицы а-актинина, а отсутствие в фореграммах полос, отличающихся от М^ 100 кДа (а-актинин) и 45 кДа (актин), свидетельствуют о том, что не происходят меж- и внутримолекулярные сшивки в молекулах а-актининов

и актинов.

Мы изучали ограниченный тршхтический гидролиз поперечносшитого комплекса а-актинина - актина и сравнивали его с триптическими гидролизатами нативного а-актинина, актина и комплекса етих белков (рис.6).В гидролиза те поперэчносиитого комплекса были обнаружены несколько отличающиеся полосы, соответствующие молекулярным массам - 145,133, 100-115 кДа. Полоса 145 кДа представляет собой к этому времени гидролиза еще не гидролизовашый комплекс а-актинина и активаполоса 133 кДа свидетельствует о взаимододействии субъеденицы а-актинина с С-доменом актина (100 кДа и 33 кДа соответственно) и, наконец, немного расплывшаяся полоса 100-115 кДа может свидетельствовать о взаимодействии субъедеиицц а-актинина с ы-доменом актина (12' кДа). По интенсивности этик полос можно заключить, что а-актинин из поперечнополосатой мышцы кролика приемущественно связывается с С-доменом актийа. На рис.7 представлено схематическое изображение доменной структуры актина с указанием участков взаимодействия с а-актинином. Результаты полученные наш, находятся в согласии с даннымй японских исследователей Мимура и Асано , которые изучали взаимодействие актина с 27 кДа фрагментом актиногелина и а-активша из первого желудочка цыпленка, :

Участки связывания актина на молекуле а-актитшй. . Как

отмечалось в предыдущей главе, 'на аминокислотной последовательности актина имеется два участка связывания а-актинина: на С- и н-домонах этого бежа. Ийходя • ив этих даншх логично было предположить, что и на аминокислотной последовательности а-актинина тага® могут существовать два участка

0

•л*

©

4

и

«Да -145

т -к»

> I ег? <да|

I 2 3

4 5

-45

Рис.5. Электрофорез в ПААГ ДСН нативного и ЭДК обработанного

а-актинина (1,4), актина (2,5) и комплекса а-актинина с актином (3,6).

Рис.6. Денситограммы электрофореграмм ограниченного

тряптического гидролиза I. а-актишша; 2. актина; Зкошшекса а-актинина с актином;4.ЭДК-обработаншй комплекс а-актшина-актина.

вчаРг.Ор а Рг.Ор

Рис.7. Схематическое изображение актина с указанием участков взаимодействия с сЛ-актинином.

для связывания актина. Для этой цели нами были исспользованы результаты работы , где исследовался ферментативный гидролиз N-концэвого домена а-актинина л его взаимодействие с актином. В работе показано, что ограниченный гидролиз ажтинсвязывающего домена хгмотрипсаном приводит к образованию фрагментов 28,25,20,15 кДа,которые взаимодействуют с ктином. Зная, что- Фрагмент 15 кда является С-концевой частью к-домена, мы попытались найти второй участок связывания актина в н-кояцэвой часта N-докена. С этой целью мы исследовали взаимодействие гидролизата >]-кояцевого домена с актином бифункциональным реагентом. В результате этих работ нам не удалось выявить легкие пептиды и пептиды массой менее 15 кДа, возможно вовлекаемые во взаимодействие с Ф-актином.

Мы сравнивали аминокислотные последовательности и-котщевого домена а-актиника и фрагмента 15 кДа, сказалось, что в полипептидной цепи н-концевого домена он занимает позицию 147-277. Мы провели сравнение аминокислотной последовательности N-концевого домена а-актинина с последовательностью других актинсвязываииих 6e'jJKOB при ПОМОЩИ программ Smart позволяющей произвести быстрый поиск подобий по банку. Были выявлены cxoarne последовательности N-домена а-актинина и дастрофина из цыпленка. Мощность сходства составляла 8,112 sd, а схожие последовательности представлены аминокислотами в позициях для а-актинина 64-150 и 41-127 для дастрофина. Этот фрагмент дастрофина содержится в актинсвязывавдем домене этого белка. Исходя из этого, полученные нами данные дают возможность предположить, что аминокислотный участок 64-150 N-концевого домена а-актинипа, как и выделенный нами 15 кДа фрагмент 147-277, принимает участие во взаимодействии с актином. При ПОМОЩИ программы Dot-helix С использованием пакета Genbee,

который основывается на методе построения локального сходства, разработанного Горбаленем и сотр., было произведено самосравнивание ы-домена а-актинина. Обнаружилось, что существует сходство мевду участками 64-78 и 176-190. Мощность сходства 4,48 во. Участок 64-78 расположен в н-концввой части актшсвязывакщего домена, а учаток 176-190 находится в фрагменте 15 кДа, который является С-концевой частью актинсвязываицего домена и сохраняет способность связывания с Ф-актином. Так как аминокислоты в паз!щиях 64-78 являются частью аминокислотной последовательности к-концевого домена схожего с актинсвязывающим участком дистрофина, моано предположить, что именно участки 64-78 и 176-190 ы-концевого домена а-актинина являются центрами взаимодействия с актином.

Взаимодействие'модифицированного актина с а-актшшном.

Актин, один из главных белков тонких филаментов скелетных мышц, как ужа отмечалось выше, имеет характерное свойство находится в двух разных формах - мономерной (Г-актин) и фибрилярной (Ф-актин), в зависимости от условий среды и присутствувдих белков. Г-актин, это мономерная форма актина при низкой концентрации солей,Ф-актин - филаментная структура актина при физиологических значениях концентрации солей. Как известно, а-актишш взаимодействует с Ф-актин,ом, но не взаимодействует с г-акишом, хотя известно, что он увеличивает скорости образования тримеров актина - центров полимеризации.

В данной главе представлены, результаты по исследованию взаимодействия а-актинина с ф-актином, полученном при помощи бифункцаоналыюго реагента ЛИСИ. Обработка актина поперечносшквааднм реагентом приводит к образованию полиаэра белка при нивкой ионной силе с сохранением всех свойств ©-актина: высоко*!'

вязкости, связывания АДФ, взаимодействия с тяжелым меромиозином, активации АТФ-азн тяжелого меромиозина. Методом электронной микроскопии на?ет было изучено взаисодействие модифицированного актина с а-актинином при высокой и низкой ионной силе. Результаты этого исследования приведены на рис. 8. Как показывают полученные цанные взаимодействие' между а-актинином и ДОСИ-обработанным актином

I - ■ * ^ 1 -

иЩ Г * Г

ш-1 ■ f V ,«* л./ € V - у-"

iSäfc «", i а #....."» ч» , >*

¿/ «X. кл f^V ll^^C j

• ' 41;' Ш % j « «ras/. f

¿kW &

Рис.8. Электронная микрофотография взаимодействия ДДОСИ обработанного актина и а-актинина

а)при низкой ионной силе; б)при концентрации О,IM KCl.

;еет место только в присутствии солей. Электрономикроскопяческие шки комплекса ДМСИ-обработанного актина с а-актинином и самого СИ-обработанного актина мало чем отличаются друг от друга, а имок комплекса ДМСИ-обработанного актина с а-актинина при 0,1 М 1 не отличается от таковой комплекса нативных актина и актинина.

Таким образом, результаты проведенного исследования дали возможность заключить, что для контакта сх-актинша с актанином не достаточна только лишь полимеризированная форма актина, а необходимо присутствие солей. Кроме этого, эти и полученные ранее данные, касающиеся внутримолекулярного сшивания а-актинина, ведут к предположению, что в физиологической зоне концентрации ионов а-актинин приобретает-благоприятную структуру для взаимодействия с другими молекулами.

вывода

1. Предложена методика получеши внутримолекулярносштого а-актинина и показано, что химическая модификация вызывает компактнаа щи) молекулы вследствие чего изменяется пространственная структура белка, что и приводит к потере биологической активности последнего.

2. Исследования с помощью методов химической модификации, ограниченного гидролиза и определения н-концевой аминокислотной последовательности позволили установить, что расстояние мазду ■ я-доменом одной субъеденицы и О-концевой частью С-домэна другой не превышает 11,22, нет связи кезду н-доменами белка, т.е. субъэденида в молекуле а-актншша ориентированы антипаралвльно.

3. Установлено, что на полипептвдной цеш! актина существуют два участка для связывания а-актинина (на н- и 0- доменах актина), а центры связывания актина на . а-актишне расположены на гмиЕоккслотноС последовательности ограниченно® позициями 64-1Е0, 147-277.

4. аэтгэтанием методов химичеокоЗ кйдафгяацш и электрокпоЯ глгшюскопж показано, что а-актинзпн нэ взаимодействует с

полимерным актином в отсутствии солей. Для взаимодействия указанных белков необходима физиологическая концентрация ионов.

Результаты диссертации изложены в следующих работах:

1. Русия Л.У., Куридзе К.Ш., Бохсчадзе Н.Н., Симонидзе М.Ш., Заалишвили М.М. - Исследование структурной организации а-актинина бифункциональными реагентами. Известия АН ГССР,Серия биологическая, T.I5.N3, 1989, С.194-198. •

2.Kuridse К.Sh., Simonidse M.Sh., Russia L.U., Nadirashvili N.Sh., Zaaliehvili M.M. Structure and characteristics of O-actinin .In international SimphoGium on molecular organisation of biological structures.- Moscow, 1989, p.215

3.Куридзе К.Ш., Русия Л.У., Симонидзе М.Ш., Заалишвили М.М. Изучение взаимодействия а-актинина с актином при помощи бифункциональных реагентов. - тезисы докладов 6-ой всесоюзной конференции по биохимии мышц, Тбилиси, 1989, с.76.

4. Русия Л.У., Куридзе К.Ш., Симонидзе М.Ш., Гамкрелидзэ Ц.Д., Надирашвшш Н.Ш. - Исследование взаимодействия а-актинина и актина - доклад на всесоюзном симпозиуме по химии белка, Тбилиси, 19Э0,с.34.

5.Куридзе К.Ш., Русия Л.У., Симонидзе М.Ш., Заалишвили М.М., Щрайбман Ф.О. -Модифицированный а-актинин, получение и свойства. -тезисы на всесоюзном симпозиуме по химии белка, Тбилиси, 1990, с.Т39.

6.oimonidse M.Sh., Eueia L.M., Gamkrelidse Ts.D., Zaalishvili M.M.-Chemical modification of Cl-aetlnin: effects on Interaction with actin - Georgian academy of sciences, USSR, Tbilisi, 1991, p.1-14

7.Русия Л.У., Симонкшвили С.О., Симонидзе Ы.Ш., Заалнзвили М.М.-Исслэдование участков а-актишнз взаимодействующих с актином. -Весткник АН Республики Грузия, т.145, N1, 1992,с.17-21.

8. РусияЛ.У., Симонидзе М.Ш., Гамкрелидзе Ц.Д., Куридзе У.Ш., Заалшюили K.M. - Изучение взаимодействия а-актинина и шстина методом химической модификации. - Известия АН Грузии, Серия биологическая, (в печати).

¡;оп5с> дЭобдпЬ ¿Ь^о Л^Ьпо

а-о>^йг>6пбг,Ь Эг^з^зсзЛп с>ст6о4пЭо ЭлЬп зЛхпэЛл^Ээйал ¿¿$п5то6 /Л^Ьзс оБсЗо/

ПЕЧАТНЫХ.Л. - 1,5 УЧЁТ.ИЗДАТ.Л,- 1,05

БЕСПЛАТНО

ЗАКАЗ № 1349 1352 ТИРАЖ ЮО

уоп грузгидрометА, Тбилиси мР. давида лгмашенвы-ли юо