Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Металлосвязывающие белки при псевдотуберкулезе и инфекционном мононуклеозе у детей

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Металлосвязывающие белки при псевдотуберкулезе и инфекционном мононуклеозе у детей"

^ • V •»'

-■ российская академия медицинских наук

научно-исследовательскии институт экспериментальной медицины

На правах рукописи

ДРОБОТ Ирина Владимировна

МЕТАЛЛОСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ПРИ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗЕ И И НФЕКЦИОННСШ МОНОНУКЛЕОЗЕ У ДЕТЕЙ

03.00.07 — микробиология

14.00.30 — аллергология м иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

санкт-петербург 1.092

Работа вып0.-мюна в Санкт-Петербургском педиатрическом медншш-CKO.11 институте МЗ РФ.

Научный руководитель: доктор медицинских наук .профессор А. М. Яковлев.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук Б. Н. Козыиин-Соколов, доктор медицинских наук П. Г. Назаров.

Ведущая организация: Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и .микробиологии имени Ластера МЗ РФ.

Защита диссертации состоится 1992 года

в часов на заседании специализированного совета Д 001.23.02 при

научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАМН (197022, Санкт-Петербург, ул. акад. И. П. Павлова, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИ11ЭМ РАМН.

Автореферат разослан

1992 года.

Учений секретарь сиешшлизирозашюго сизета диктор медицинских наук

Л. А. Бурова

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годи достигнут большой прогресс в изучении белков плазмы крови, причем выделено и охарактеризовано около 100 белков /Новикова Л.И., 1990 ;putnan F.wV , 1982/. Особый интерес представляют металлосвязыпаютю белки с различными физико-химическими и биологическими характеристиками . Связывая различные ионы металлов, они участвуют в поддержании гомеостаза организма человека и животных при физиологических и патологических состояниях.

Многие металлосодержащие белки, такие, как например, церу-лоплазмин, трансФеррин, лактоферрин, сулероксиддисмутаза относятся к важнейшим звеньям в системе гуморальных факторов естественной резистентности /Яковлев A.M. и соавт., 1988 ; Дубинина Е.Е., 1989 ; Morgan Е.Н. , 1981 ; Putnam Т.Ч. , 1902/ И

представляют собой один из первых универсальных барьеров, обеспечивающих общую устойчивость к различным патогенны:.! агентам, особенно при инфекциях - бактериальных и вирусных /Алешкин В.А. и соавт., 1988/. Защитное действие ыеталлопротеидов реализуется по нескольким направлениям. Основные - это выраженный противовоспалительный з«х£ект, антибактериальная, вируеннгибирующая активности и иимунорегуляторнце свойства белков /Картрзия Ц.И., 1987 ; Gutteridge J.И. et al., f 198Г ; "Harolund S.L. , 1984; Tomaa E. et al. f 1985 ;Kojiraa E. et al. , 1986 ; Bergor D.i Beger H., 1987/. Можно предположить, что эффективность' действия факторов неспецифической резистентности не одинакова при заболеваниях различной этиологии. Пряных данных по этому вопросу в литературе не встречается. Несомненный теоретический и практический интерес представляет'сравнительное изучение показателей естественной резистентности при инфекционных заболеваниях бактериальной и вирусной этиологии, в качестве которых были внбраны псевдотуберкулез и инфекционный мононуклеоз. Обоснованием выбора именно этих инфекций послужили: сравнительно высокая частота в структуре детской инфекционной заболеваемости ; сходство клинических симптомов в начальном периоде болезни , следовательно, затруднения в дифференциальной диагностике ; а таюке предположение о возможном использовании количественного определения

белков, реагирующих в острой фазе воспалительного ответа -церулошшзмина 1ырансферрина - как дополнительных дифференциально-диагностических признаков развития псевдотуберкулеза или инфекционного мононуклеоза.

ОсобиН интерес представляет изучение металлосвязывапцих белков в общей системе факторов неспецифической защиты у детей Именно у них механизмы естественной резистентности играют значительную роль, обеспечивая защиту от патогенных агентов на фо не запаздывающего по времени иммунного ответа /Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е., 1977 ; Милер И., 1983; Ваучагй ¿.к. , 1983/.

Целью работы явилось изучение содержания и динамики ме-толлосвязиваюдих белков, выявление взаимосвязей металлопротеи-дов между собой и с другими факторами иммунобиологической реак тивности при бактериальной и вирусной инфекциях у детей на примере псеьдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза.

В соответствии с поставленной целью в ходе работы предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить содержание и динамику металлосвязывапцих белков церулоплазмина и трансферрина, а также СЗ и СЗа фракций системы комплемента у детей, больных псевдотуберкулезом и инфекциок ним мононуклеозом ;

2. Провести сравнительный анализ динамики уровней иммуноглобулинов М, (Н А и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови при псевдотуберкулезе и инфекционном мононуклеозе у детей ;

3. Выявить взаимосвязи между металлопротеидами и показателями естественной резистентности и иммунологической реактивности сопоставить характер их изменений у больных детей.

Основные положения, выносимые на эащиту:

I. У больных псевдотуберкулезом и инфекционным мононуклеозом детей достоверно увеличиваются концентрации металлосвязы-вающих белков церулоплазмина и трансферрина в сыворотке крови. Динрмика содержания металлопротеидов сходна при изученных заболеваниях бактериальной и вирусной этиологии: содержание церулоплазмина достигает максимума уже в начале болезни, в противоположность этому концентрация трансферрина постепенно нарастает в ходе заболевания.

2. Достоверно более высокое содержание церулоплазмина и трансферрина у больных инфекционным мононуклеозом дотеИ по сравнению с детьми, переносящими псевдотуберкулез, мотет использоваться как вспомогательный тест ранней дИ|»Т.>ерэшшальной диагностики изученных заболеваний.

3. Установлены обрзтная взаимосвязь мехду медьоксидазой и железосодержащим белком, а также прямые корреляции медьсвязы-ва гад его белка с СЗ фракцией комплемента, иммуноглобулинами М,

лейкоцитами, СОЭ. свидетельствующие об активном участий ме-таллопротеидов церулоплазмина и трансферрина в патогенетическом процессе при псевдотуберкулезо и инфекционном мононуклеозе.

Научная новизна.

Впервые проведено сравнительное изучение содержания и динамики металлопротеидов церулоплазмина и трансферрина у детей, больных псевдотуберкулезом и инфекционным мононуклеозом

Установлено достоверное увеличение концентраций медь- и железосвязииающих белков при изученных заболеваниях бактериальной и вирусной этиологии. Показаны одинаковые тенденции изменения их содертатш: повышение церулоплазмина уже в начальном периоде, концентрация трансферрина увеличивалась на протяжении всего срока наблюдения. Отмечены более значительные уровни металлопротеидов у детей, больных инфекционным мононуклеозом.

Выявлены корреляционные связи металлосодер.тащлх белков церулоплазмина и трансферрина между собой а с другими показателями иммунобиологической реактивности: СЗ фракцией комплемента и продуктом ее активации СЗа ; иммуноглобулинами М, Сг, лейкоцитами, СОЭ при псевдотуберкулезе и инфекционном мононуклеозе у детей.

Практическая значимость.

Разработана методика количественного определения церулоплазмина с помощью ,"сэндвич"-варианта иммуноферментного анализа ; показана возможность ее применения, эффективность использования для измерения медьевязывающего белка в сыворотке крови здоровых или больных детей.

Учитывая достоверно более высокие концентрации церулоплазмина и трансферрина у больных инфекционным мононуклеозом детей

I ¡с¿о'

по сравнению с больными псевдотуберкулезом, доказана возможность использования количественного определения металлосвязы-ьап1(их белков в качестве дополнительного признака при ранней дифференциальной диагностике этих заболеваний.

Показано, что оценка уровней металлопротеидов церулоплаз-мина и трансферрина в сыворотке крови характеризует остроту воспалительного процесса при псевдотуберкулезе и инфекционном мононуклеозе.

Апробация работы,

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на заседании Ленинградского общества микробиологов и эпидемиологов /март 1938/ ; на конференции Научно-технического творчества молодежи I ЛШ /апрель 1990/.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ.

Внедрение результатов исследования.

Определение металлопротеидов используется в практической работе инфекционной клиники Санкт-Петербургского педиатрического медицинского института. Полученные данные внедрены в учебный процесс со студентами и слушателями факультета повышения квалификации на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии. СПбПШ.

Разработано и внедрено в практику 5 рационализаторских предложений. По результатам исследования подана заявка на изобретение Я 4786899/30-14, положительное решение патентной экспертизы от 30.05.91.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 176 страницах машинописного текста, включающего введение, обзор литературы, описание методов исследования, результаты собственных исследований, обсуждение, вывода и практические рекомендации. Работа иллюстрирована 15 рисунками и 32 таблицами. Список литературы содержит 279 наименований, в том числе отечественных 131 и иностранных 148.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В соответствии с задачами исследования в 1988-1990 годах в детской инфекционной клинике Ленинградского педиатрического

медицинского института обследовано 185 детеИ в возрасте от 6 месяцев до 14 лет о диагнозам псевдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза /98 и 84 ребенка соответственно/ ; у троих отмочена смешанная инфекция - псевдотуберкулез и инфекционный моно-нуклеоз. Контрольную группу составили 38 доте.'!, интактних по отношению к этим инфекциям /14 детой, обследованных в клинике нервных болезней и 24 ребенка, находящихся в санатории по поводу склонности к респираторным заболеваниям /стадия ремиссии но менее трех месяцев//. Для исследования использовалась кройь, оставшаяся после проведения обязательных биохимических анализов.

Диагнозы псевдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза ставились специалистами клиники детских инфекции на основании характерной клинической картины, эпидемиологических данных и специфических лабораторных тестов: для псевдотуберкулеза - выявление возбудителя заболевания и нарастание титра специфических антител в реакции непрямой гемагглитинации с псевдотуберкулезным эритроцитарным диагностикумом от 0 до 1:100 - 1:2200 ; для инфекционного мононуклеоза - наличие атипичных лимфоцитов в крови и положительной реакции Гоффа-Бауера.

Материалом для исследования служила кровь, взятая натощак из локтевой вены в первые дни поступления в инфекционную клинику и через 5-10 дней - перед выпиской. Сыворотку крови после центрифугирования при 600 g в течение 10-15 минут замораживали в день взятия и хранили при температуре. -20°С. При изучении СЗ и СЗа фракций комплемента использовали плазму крови. Консервантом служил 0,1 M раствор ЭДТА рН 7,4. Плазму центрифугировали при 1000 s 5 минут ; пробы замораживали в течение 4 часов от момента взятия и хранили в жидком азоте.

Так как целью работы явилось изучение содержания металло-связывзгощих белков, следовательно, были необходимы как специфические антисыворотки, так и стандартные препараты белков. Перед началом работы в нашем распоряжении имелись: набор для количественного определения трансферрина "se-vac" /Институт сывороток и вакцин, Прага/ и препарат "Церулоплазмин диагностический очищенный жидкий человеческий" производства Ленинградского НИИЭиМ им.Пастора. Специфические антитела к церулоплазми-ну получали путем иммунизации кроликов. Содержание металлопро-

теидов церулоплазшша и трансферрина изучали с помощью метода ридиальной икыуно^даффузии в агаровом геле, использовали собственною антицерулоплазминовые и стандартные антитрансферриновые сиворотки.

Следует заметить, что используемый метод радиальной имму-нод1!(1Фузии имеет некоторые1 недостатки. К их числу следует отнести невозможность определения низких концентраций /нг/мл/ исследуемых веществ, большую продолжительность реакции, довольно высокую стоимость исследований. Поэтому было необходимо разработать и применить высокочувствительный быстрый экономичный метод количественного определения металлопротеидов. Всем указанным требованиям отвечает метод иммунофэрментного анализа. В ходе исследования разработан метод твердофазного иммунсфермент-ного анализа для количественного определения церулоплазмина на основе "сэндвич"-модификации и показана возможность его практического применения.

Параллельно у часта больных исследовали оксидазную /ферментативную/ аКТИВНОСТЬ ЦеруЛОПЛаЗМИНа ПО МеТОДУ Ravin H.A. /1961/. Исследования проводились в лаборатории молекулярной биохимической генетики ШШ.1 PAI.1H /заведующий лабораторией -д.м.н. профессор В.С.Гайцхоки/.

Одновременно с изучением церулоплазшша и трансферрина проводились эксперименты по определению и других металлосвявы-вающих белков - лактоферрпна и плазменной супероксидцисмутазы. С этой целью бил получен препарат основного железосвязывающе-го белка внеш1шх секретов в соответствии о заявкой на изобретение "Способ получения лактофоррииа" и выделена плазменная супероксидцисмутаза по методу Дубининой Е.Е. и соавт. /1989/, которые затем использовали для иммунизации кроликов и получения специфических сывороток. Однако, концентрацию лактоферрина и супероксидцисмутазы в биологических жидкостях организма человека /секрете ротовой полости и сыворотке крои/ изучить не удалось, что связано как с низкими ко ! пле нт рациями этих белков, так и с недостаточным титром полученных сывороток.

Актуальность изучения взаимосвязей металлосодержащих белков с факторами естественной резистентности и иммунологической реактивности, данные литературы об иммуномодулирующем влиянии in vitro некоторых из них, недостаточная изученность у де-

тей, больных псевдотуберкулезом, инфекционным мононутлоозом ; отсутствие сравнительных исследований при бактериальной и вирусной инфекциях ; простота, доступность и послужили обоснованием выбора даш работы следующих показателей: третьей Фракции комплемента, иммуноглобулинов М, G4 А и циркулирующих иммунных комплексов. Тагам образом, помимо изучения церулоплззмнна и трансферрина, методы обследования включали следующие тесты:

- оценка уровня СЗ Фракции комплемента и продукта ее активации СЗа с использованием методики конкурентного иг.шунофбр-ментного анализа /Трофимов A.B. и соавт., 1988/ на базе лаборатории выделения и очистки препаратов хроматогрзфичеемши методами НИИ ОЧБП /и.о. заведующего лаборатории - к.м.н. Л.Л.Горбунов/ ;

~ определение содержания сывороточных иммуноглобулинов М, G-, А методом радиальной иммунодиффузии / Manchlni G. et al. , 1965/ с применением моноспецифических сывороток Горьковского НИИЭиМ ;

- исследоваш!е циркулирующих иммунных комплексов /ЦИК/ сыворотки крови путем преципитации полиэтиленгликолем 6 ООО.

- выявление антител к возбудителю псевдотуберкулеза - по стандартной методике в реакции непрямой гемагглютинации с коммерческим псевдотуберкулезнш эритроцитарным даагностикумом.

Статистический анализ материалов проводился на'1Ш - ХТ о помощью пакета прикладных программ агор

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ иБСУЦЦЕШЕ Металлоггротеидм в сыворотке крови при бактериальной и вирусной инфекциях у детей-

Анализ полученных при исследовании данных позволил выявить определенное сходство и некоторые отличия в изменении уровней медь- и делезосвязнвакхцих белков у детей, больных псевдотуберкулезом и инфекционным мононуклеозом. Так, сходными в содержании металлопротеидов били:

- достоверное увеличение в ходе болезни концентраций церу-лоплазмина и трансферрина /рис. I и 2/;

- дина мига содержания белков: сшшзние высокого уровня це~ рулоплазмина /рис. I/ н постепенное повышение трансферрина в ходе заболеваний /рис. 2/ ;

- значительное повышение активности медьоксидазы ;

2 /с¿У

БОЛЬНЫЕ ПСЕВДОТУЕЕРКУЛЕЗОМ

БОЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИОННЫМ . МОНОНУКЛЕОЗОМ

А/ Обследование в динамике

0,5 г/л 0,4

0,35--

п

0,5" г/л 0.4- 50с »

0,35" П

Условные обозначения:

□ - контрольная _ группа

Б83" при

1 ' поступлении

- перед выпиской

V В зависимости от степени тяхести

Ь

0,5-0,4-"

аЙ

I

0.6 +

г/л

0,5-0,4

п

р 1

Условные обозначения:

О- т -средняя

ГШ- легкая рящ

- тяжелая

В/ Возраст детей

0, 5 - -г/л

0,4

0,35--

Д

Ш

Условные обозначения:

I Ь контрольная —' группа до 2 лет

|- с 3 до 6 лег гуу|- С 7 до 14 лет

Рис.1 УРОВЕНЬ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА при бактериальной и вирусной инфекциях у детей

БОЛЬНЫЕ ПСЕВДОТУЕЕРКУЛЕЗОМ

3,5 г/л 3,0"

2,5"

БОЛЬНЫЕ ИНФЕКВДОННЫД М0Н0НУКЛЕ03СМ

А/ Обследование в динамика

3,5-* • г/л 3,0"

2,5" •

Условные обозначения:

| |-контрольная 1 1 группа |_при поступлении

1 перед "выпиской

Ц/ В зависимости от степени тяжести

3,.5 г/л 3,0-2,5--

Условные обозначения:

I

3,5 г/л 3,0-2,5-

О контрольная "группа

ОПШ-легкая

Г

У//Л - средняя - тяжелая

т/л 3,5-3,0

П

В/ Возраст детей

Условные обозначения:

I-1 Контрольная

—1'группа до 2 лет

12Я с 3 до 6 лет |ТГ8 с 7 до 14 лет

Рис. 2 УРОВЕНЬ ТРАНСФЕРРИНА при бактериальной и вирусной инфекциях у детей

- максимальные ко1щентрации церулоплазмина при тяжелых формах псевдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза.

Полно предполагать, что указанные общие свойства обусловлены особенностями металлосвязывающих белков церулоплазмина и ■ трансфаррина как реактаитов острой фазы воспаления. Основной признак белков этой группы - быстрое и значительное изменение концентрации в результате нарушения гомеостаза независимо ог природы и места приложения вызвавшего его стимула. Как известно, механизм острофазной реакции заключается в следующем: под воздействием повревдаюцего Фактора выделяются биологически актив- , ные вещества, способствующие увеличению синтеза интерлейкина I и других. Стимулируются защитные реакции организма и увеличивается синтез 'Велков острой фазы" воспаления печенью, в частности - церулоплазмина. Поэтому при выраженной воспалительной реакции наблюдается более высокая концентрация медьсвязывающего белка в крови, что и было установлено при исследовании тяжелых форм инфекций /рис. I/.

Следует отметить, что у больных псевдотуберкулезом и инфекционным мононуклеозом детей увеличивался уровень не только им-мунореактивной формы церулоплазмина, значительно возрастало содержание в крови ферментативно-активной Фракции этого бежа /0,508+0,043 г/л у детей с бактериальной инфекцией и 0,565± ±0,053 - с вирусной ; в контрольной группе - 0,329+0,022/. Последнее позволяет предполагать важную защитную роль именно этой формы церулоплазмина, что, по-видимому, обусловлено способностью медьоксидазы инактивировать свободные радикалц в избытке имеющиеся в очаге воспаления / Си«сг1<1ве .км. , 1978/.

Принято считать, что железосодержащий белок относится к "отрицательным острофазным белкам", концентрация которых падает в начале болезни. Более низкое содержание протеида у больных тяжелой формой псевдотуберкулезной инфекции подтверждает это положение /рис. 2/. Механизм тот же - развитие острой фазы воспалительного ответа. Увеличение уровня интерлейкина I способствует освобождению лактоферрииа нейтрофилами, именно лактоферрин захватывает железо и ведет к ишосидеремии. Можно предположить,' что снижение уровня сывороточного железа, сопровождающее развитие многих воспалительных заболеваний и приводит к уменьшению концентрации трансферрпна. Возможно, и медьевязыващий белок

участвует в этом процессе, так как обладает выраженными феррок-сидазными свойствами: он окисляет железо П+ в железо Ш +, которое и встраивается в молекулу апо-трансферрина.

Несколько более высокие концентрации металлопротеидов в динамике заболеваний у детей до двух лет /рис, I и 2/ подтверждают важную роль церулоплазмина и трансферрина как факторов собственно естественной резистентности развивающегося организма.

Описанное выше сходство в характере изменений металлосвязы-вающих белков у детей при бактериальной и вирусной инфекциях не исключает и ряда существенных различий и особенностей в зависимости от этиологии инфекции /рис. 3/. Эти отличия заключаются в следующем:

- достоверно более высокие концентрации металлопротеидов у больных инфекционным мононуклеозом детей ;

- при инфекционном моионуклеозе у детей уровень железосвя-зывающего белка не опускался ниже значений контрольной группы.

Скорее всего эти отличия обусловлены патогенетическими особенностями обеих инфекций. Так, инфекционный мононуклеоз - быстротекущий доброкачественный лимфопролиферативный процесс, вызванный активирующим влиянием вируса Эпштейна-Барр на иммунную систему организма. Резко увеличивается общее количество клеток в кровяном русле, особенно В-лимфоцитов / Тоаа-Ьо в., В1аеве Н. , 1985/. Псевдотуберкулез, напротив, медленно, постепенно развивающаяся бактериальная инфекция. Иерсинии устойчивы к действию фагоцитирующий клеток, так как капсульная субстанция и внеклеточный антигенный комплекс ингибируют переваривающую активность фагоцитов. Следовательно, микробы могут длительное время персис-тировать и даже размножаться в фагоцитирующих клетках, будучи защищенными от гуморальных факторов. В результате медленнее развивается и специфический иммунный ответ. Необходимо заметить, что сниженные уровни трансферрина у больных псевдотуберкулезом, детёй могут быть обусловлены и утилизацией этого белка иерсиния-ми. Известно, что эти микроорганизмы имеют железорегулируемые белки и способны использовать в качестве источника жизненно необходимого им железа белок гемин / Иоо1соск , 1988/.

В целом полученные данные о достоверно более высоких уровнях металлопротеидов церулоплазмина и трансферрина у больных

инфекционным мононуклеозом детей по сравнению с больными псевдотуберкулезом могут быть использованы в качестве дополнительного теста ранней дифференциальной диагностики этих заболеваний.

Факторы иммунобиологической реактивности

Изучение факторов иммунологической реактивности и естественной резистентности при бактериальной и вирусной инфекциях у детей так же позволило выявить общие закономерности /рис.3/:

- значительное увеличение содержания в плазме крови, больных СЗ фракции комплемента с одновременно низким уровнем СЗа - продукта активации этого компонента ;

- рост концентраций иммуноглобулинов М, (Ь А и циркулирующих иммунных комплексов ;

- высокие показатели СОЭ, лейкоцитоза, постепенно снижающиеся при реконвалесценции.

Полученные данные об увеличении концентраций иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов в целом совпадают с исследованиями проведении;.'® другими авторами при этих же заболеваниях /Чирешкина Н.М., 1970 ; 1973 ; Касали Р. и соавт., 1982 ; Цутянова Н.Г., 1983 ; Гордеец A.B., 1986 ; Ценева Г.Я., 1986/.

Были обнаружены и некоторые отличия между изученными показателями у больных псевдотуберкулезом и инфекционным мононуклеозом детей /рис. 3/:

- более высокий уровень СЗ фракции комплемента и его постепенное снижение при псевдотуберкулезной инфекции ; у больных инфекционным мононуклеозом детей следует оплетить тенденцию к увеличению содержания этой фракции в динамике заболевания ;

- различный характер динамики иммуноглобулинов М, G-, А и циркулирующих иммунных комплексов.

Высокий уровень СЗ компонента комплемента в начале псевдотуберкулеза и его постепенное снижение в последующем связано с усилением синтеза этой фракции под воздействием бактериальных эндотоксинов. Более низкие концентрации иммуноглобулинов и ' циркулирующих иммунных комплексов у больных псепдотуберкулезом по сравнению с детьми, переносящими инфекционный мононушгеоз, обусловлены депрессивным воздействием иерсишш на иммунный ответ; ингибирующим влиянием на фагоцитарные процессы. Однако, развитие бактериальной инфекции сопровождалось иоотеппнним позрпста-

а/

0,5 г/л

0,4+V 0,55- —

Н-Ь

61 1 4

2000-- >

мкг/мл ' 1500-1-

N

2 3 СЗ

1000- -X

И—Н

I

3-4

в/ 450 МЕ/мл_ 350 250--

150-к^* -+

2

ИГ м %

*—л

г/

200" • МЕ/мл 150 1254

I

2 3-4 ИГ СУ ¿Г*

д/ 20 мм/ч 151

ю- и

*

.^соэ

3-4

3,5 "" г/л 3,0

2,5

та /Г

Н-1-1-1-

5,0-' мкг/мл -

у

2 3 СЗа

3,0"' 1,0 +

ч-1-Ь-

3-4

^ А т.

■4—4-

150 МЕ/мл

200 ед.оп. •пл.

50-

—Ь-

3-4

I 2 ЦИК

-4---ь-

хЮ9/л II

9-7"

■п—

г Лейкоциты

1-Г

3-4

недели заболевания

Рис. 3 Динамика показателей иммунобиологической реактивности при псевдотуберкулеза и инфекционном мононуклеозе у детей

Условные обозначения:

-- — - дети, больные псевдотуберкулезом

....... - дети, больные инфекционным мононуклеозом

нием и повышенными, уровнями иммуноглобулинов на протяжении всего периода наблюдения. При инфекционном мононуклеозе у детей отмечено уже со второй недели заболевания снижение концентраций

иммуноглобулина М, ЧТО Подтверждается исследованиями Дапесгко

.Г. /1982/.

Более высоте цифры лейкоцитоза у больных инфекционным мо-нонуклеозом, нехарактерные для вирусных заболеваний, обусловлены, по-видимому, активацией эндогенной флоры и развитием бактериальных осложнений /отитов, пневмоний/ на фоне первичного вирусного поражения.

Корреляционные связи металлопротеидов В результате проведения корреляционного анализа удалось выявить достоверные /р < 0,05/ связи между изученными показателями иммунобиологической реактивности /табл. I/.

При обоих заболеваниях обнаружена полотательная корреляция между иммунореактивной и ферментативно-активной формами медьсвя-зывающего белка, СОЭ. Общей для этих инфекций была и обратная зависимость между уровнями трансферрина и медьоксидазой. Таким образом было показано, что взаимодействие между основными ме-таллосодержащими белками сыворотки крови церулоллазмшом и транс-феррином реализуется именно через ферментативно-активную форму церулоплазмина. Следует отметить обратный характер связи и ее проявление только в динамике заболеваний.

Выявлены и некоторые отличия корреляционных связей при бактериальной и. вирусной инфекциях у детей. Так, у больных псевдотуберкулезом были обнаружены прямые корреляции ишунореактивно-го церулоплазмина с СЗ фракцией системы комплемента, лейкоцитами, то есть с неспецифическими защитными факторами. У больных инфекционным мононуклеозом детей взаимосвязи, предположительно, отражают уже следующий этап развития иммунного ответа: прямые корреляции медьсвязывающего белка с иммуноглобулином усиливающиеся в динамике заболевания. Такое иммуншодулирующее влияние церулоплазмина подтверждается положительными связями фермента тийно-активной Форш этого белка с иммуноглобулинами М, Ск

Обнаруженная прямая зависимость между уровнем медьсвязывающего белка и количеством иммуноглобулинов соответствует экспериментальным данным Ко;)1та е. et а1/1986/ об иммунопотенцирущем

Таблица I

Корреляционные связи металлосодержащих белков при бактериальной и вирусной инфекциях у детей

Корреляционные связи с факторами иммунобиологической реактивности. Металлопротеиды Значение коэффициентов корреляции

при поступлении при выписке

Иммунореактивный 0,78 ферментативно- 0,93 ферментативно-церулоплазмин активный п активным п

церулоплазмин^ церудоплазмин

О,,33 СЗ фракция п 0,47 СЗ фракция п

комплемента комплемента

0,29 -0,52 СЗа фрагмент"

0,23 иммуноглобулин

ОМ

0,34 иммуноглобулин

ем

0,22 лейкоциты11

Ферментативно- 0,70 иммунореактивный 0,88 иммунореактивный активный церудоплазмин^ церудоплазмин^

церулоплазмин п

-0,79 трансФеррин"

0,91 иммуноглобулин

gM

0,90 иммуноглобулин Мм

Трансферрин - -0,74 ферментутивно-

активныи м церулоплазмин^

Условные обозначения:

• , п - данные приведены для больных псевдотуберкулезом детей ;

м - данные приведены для больных инфекционным мононуклео-зом детей ;

Подчеркнуты корреляции, выявленные при обеих инфекциях.

действии этого протеида in vitro .

Биологический смысл выявленного изменения уровней металло-

протеидов и взаимосвязанных с ними факторов реактивности при бактериальной и вирусной инфекциях заключается в каждом отдельном случае в том, что включается и запускается комплекс защитных специфических и неспецифических реакций. При этом характер изменения уровней - более раннее повышение церулоплазмина и последующее трансферрина - обеспечивает преемственность реакций этих двух белков, длительный защитный эффект металлопро-теидов в организме ребенка.

Таким образом, полученные результаты позволяют считать, что металлосвязывающие белки церулоплазмин и трансферрин выполняют важную защитную функцию, являются существенным звеном в системе факторов неспецифической резистентности и иммуноло-• гической реактивности. Металлопротеиды, возможно, участвуют в обеспечении преемственности действий этих двух систем ; препятствуют развитию бактериальной и вирусной агрессии и способствуют сохранению постоянства внутренней среды организма.

ВЫВОДЫ

1. Концентрация металлосвязывагощих белков церулоплазмина и трансферрина в сыворотке крови достоверно выше у больных псевдотуберкулезом и инфекционным мононуклеозом детей по сравнению со здоровыми.

2. Характер динамики металлс.фотеидов сходен у больных псевдотуберкулезом и инфекцинным мононуклеозом: содержание церулоплазмина достигало максимума уже в начале болезни, в противоположность этому концентрация трансферрина постепенно нарастала в ходе заболевания. Сниженное содержание трансферрина наблкдалось только у детей с тяжелой формой псевдотуберкулеза

в остром периоде.

3. Максимальные концентрации церулоплазмина отмечаются при тяжелых формах псевдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза.

4. Развитие инфекционного мононуклеоза у детей сопровождается достоверно более высокими концентрациями церулоплазмина и трансферрина по сравнению с больными псевдотуберкулезом, что может быть использовано в качестве вспомогательного теста ранней дифференциальной диагностики исследованных заболеваний.

5. При сравнительном изучении псевдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза установлено достоверно более высокое со-

держание иммуноглобулинов М, (Ь А и циркулирующих иммунных комплексов у детей, больных инфекционным мононуклеозом.

6. Обнаружены корреляции между изменениями содержания ме-таллопротеидов церулоплазмина и трансферрина, а также взаимосвязь медьсодержащего белка с другими изученными факторами, в частности с СЗ и СЗа компонентами комплемента, иммуноглобулинами М, G-, лейкоцитами, СОЭ, свидетельствующие об активном участии металлосвязывающих белков в течение псевдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение содержания и динамики церулоплазмина и трансферрина у больных цнфвкционным мононуклеозом и псевдотуберкулезом детей рекомендовано для оценки остроты воспалительного процесса.

2. Предложено для дифференциальной диагностики псевдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза в сложных случаях в начальном периоде болезни в качестве вспомогательного теста использовать определение концентрации металлосвязывающих белков церулоплазмина и трансферрина в крови больных детей.

3. Новые данные о роли церулоплазмина и трансферрина, а также об их взаимосвязях с другими факторами иммунобиологической реактивности в развитии псевдотуберкулеза и инфекционного мононуклеоза рекомендуется использовать в учебном процессе в разделе "Механизмы и факторы неспецифической резистентности".

о

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Выделение супероксиддисмутазы из плазмы крови,- Л., 1939.- II е.- Рукопись деп. в ШНИТИ № 7043-В89 /соавт. Дубинина Е.Е., Туркин В.В./

2. Получение антител против плазменной супероксиддисмутазы,- Л., 1989,- 9 с,- Рукопись деп. в ЗДНИТИ & 6I22-B89 /со-, авт. Туркин В.В., Дубинина Е.Е., Яковлев A.M., Толмазова Т.В./

3. Содержание иммуноглобулинов при инфекционном мононуклеоза и псевдотуберкулезе у детей // ©акторы клеточного и гуморального иммунитета при различгшх физиологических и патологических состояниях; Тез. докл. к X науч. конф. - Челябинск: Б. и., 1990.- С.45 /соавт. Туркин В.В., Яковлев A.M./

la

4.. Иммуноферментный анализ церулоплазмина // Вурн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1991.- № 7.- С.66-69. /соавг. Туркин В.В./

5. Металлопротеиды сыворотки крови детей, больных инфекционным мононуклеозом и псевдотуберкулезом // Тез. докл. У1 Всерос. съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов, г. Нижний Новгород, I99I.-M.: Б.и., 1991.- T.I.- С.76-77. /соавт. Туркин В.В., Яковлев A.M./

6. Изучение факторов неспецифической резистентности при инфекционном мононуклеозе и псевдотуберкулезе // Современные вопросы иммунопатологии и методологии изучения заболеваемости детей: Сб. науч. тр.- СПб.: Изд. отд. ШИ, 1991.- С.72-74. /соавт. Туркин В.В., Яковлев A.M./

Список рационализаторских предложений и изобретений

1. Модификация метода получения гипериммунных сывороток против супероксидцисмутазы: Удостоверение на рац. предложение / Ле-нингр. педиатр, мед. ин-т.- 1226 30.11.88 /соавт. Туркин В.В., Толмазова Т.В./

2. Количественное определение церулоплазмина: Удостоверение на рац. предложение / Ленингр. педиатр, мед. ин-т,- !i 1336 20.03.90 /соавт. Туркин В.В./

3. Иммуноферментный анализ церулоплазмина: Удостоверение на рац. предложение / Ленингр. педиатр, мед. ин-т,- И 1358 300690 /соавт. Туркин В.В., Потапенко Л.Б., Зверева Н.Д./

4. Модификация метода определения концентрации белков в реакции радиальной иммунодиффузии в геле: Удостоверение на рац. предложение / Ленингр. педиатр, мед. ин-т,- JS 1366 30.06.90 /соавт. Туркин В.В./

5. Модификация метода определения циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови: Удостоверение на рац. предложение/ Ленингр. педиатр, мед. ин-т.- Js 1387 22.02.91 /соавт. Туркин В.В., Зверева Н.Д./

6. Способ получения лактоферрина: Заявка на изобретение

№ 4786899/30-14, положительное решение 30.05.91 /соавт. Туркин В.В./