Механизмы образования секрета в молочной железе

Марков, Александр Георгиевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы образования секрета в молочной железе
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Механизмы образования секрета в молочной железе"

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

■ г

На правах рукописи

МАРКОВ АЛЕКСАНДР ГЕОРГИЕВИЧ

МЕХАНИЗМЫ ОБРАЗОВАНИЯ СЕКРЕТА В МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЕ

(03.00.13- физиология человека и животных)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург 2000

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте физиологии им. A.A. Ухтомского Санкт-Петербургского государственного университета

Научные консультанты: академик А.Д. Ноздрачев доктор биологических наук, Ю.А. Толкунов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор И.А. Баранникова доктор биологических наук, профессор Э.П. Кокорина доктор медицинских наук, академик РАЕН P.C. Орлов

Ведущее учреждение - Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, Санкт-Петербург

Защита состоится « 7 » 2000 г. в //ч.

на заседании Диссертационного совета Д 063.57.19 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук в Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7/9, ауд. 90.

С диссертацией можно познакомиться в библиотеке им. A.M. Горького Санкт-Петербургского государственного университета Автореферат разослан « ¿ZufeeCZ? 2000 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета,

доктор биологических наук Н. Д. Ещенко

Efao

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Образование молока в альвеолах представляет собой совокупность процессов, обеспечивающих синтез органических компонентов молока, формирование его ионного состава и выведение в протоковую систему. Молочная железа является сложным органом, выполняющим одновременно и секреторную, и выделительную функции. Оба эти процесса тесно связаны, переплетены и разграничение их не всегда возможно (Грачев, 1964). Основу молочной железы составляют секреторные клетки, в которых происходит синтез основных органических компонентов секрета. Накопление синтезированных продуктов в структурах емкостной системы жвачных животных приводит к снижению синтетической деятельности железистого эпителия (Rennison et al., 1993; Wilde et al., 1996). Выведение секрета является необходимым процессом, обеспечивающим функционирование железистых образований. Продвижение из полости альвеол в протоковую систему жидкости, имеющей значительную вязкость, обусловлено сокращением миоэпителиальных клеток молочной железы.

Лактация характерна для всех млекопитающих, обитающих в самых разнообразных условиях. Видовые особенности рождения детенышей, периодичности вскармливания, строения молочной железы могут обуславливать специфику механизмов образования молока у различных видов животных. Изучение этих особенностей целесообразнее проводить на тех видах, которые существенно различаются по характеру вскармливания потомства. В связи с этим, может представлять интерес сравнение некоторых представителей мелких грызунов (мыши, крысы) и жвачных животных, в частности коров и коз. В первую очередь, они отличаются по степени зрелости рожденных детенышей и периодичности их кормления. Различие в характере кормления коррелирует с особенностями анатомического строения, а также с отличием физиологических механизмов процесса вскармливания.

Анатомические особенности строения молочных желез этих животных связаны с развитием емкостной системы, которая представляет собой объём, образуемый внутренней полостью альвеол и разветвленной системой протоков, синусов и цистерн молочной железы. Сельскохозяйственные животные, в особенности коровы и козы, характеризуются наличием разветвленный системы мелких и крупных протоков, а также развитием значительной цистерны самой железы и сосков (Грачев, Галанцев, 1974). У грызунов - мышей и крыс - протоки не образуют ни цистерн, ни синусов (Грачев и др., 1976).

Вскармливание потомства молоком - это физиологическая и поведенческая активность лактирующего млекопитающего, направленная на создание условий доступности секрета молочной железы потомству (Грачев, Галанцев, 1973; Hall et al., 1988). Одним из этапов вскармливания является контакт матери и детенышей для получения ими полноценного питания. Кормление возможно при реализации определенного поведения детенышей, в частности, их сосательных движений, а также в результате

осуществления специфических физиологических процессов в организме матери.

В регуляции образования и выведения секрета из молочной железы важная роль принадлежит гормону задней доли гипофиза окситоцину и медиаторам вегетативной нервной системы. Наличие рецепторов окситоцина в молочной железе было показано работами группы М. Солофф и соавт. (Soloff et al., 1972,1975,1979; Soloff, Swartz, 1973; Muller et al., 1989). Окситоцин вызывает сокращение миоэпителиальных клеток, которые оказывают механическое давление на альвеолу и, тем самым, способствуют продвижению секрета по протоковой системе наружу (Moore et al., 1987; Zavizion et al., 1992a). Электрофизиологические эксперименты позволили обосновать возможность прямого действия окситоцина на секреторные клетки (Грачев и др., 1979; Толкунов, 1993). Такое представление согласуется с данными о стимуляции окситоцином экструзии секреторных гранул из железистого эпителия молочной железы (Попов, 1989,1994). Однако некоторые аспекты влияния окситоцина на миоэпителиальные клетки и на деятельность секреторного эпителия остаются не изученными. Необходимо исследование внутриклеточного транспорта секреторного продукта как начального этапа реализации ряда физиологических процессов, направленных на образование секрета в молочной железе. В связи с этим, требуются дальнейшие исследования по анализу параметров сократительной реакции миоэпителиальных клеток. В частности, для выяснения факторов, определяющих ритмику осуществления рефлексов выведения молока, подлежит изучению лабильность миоэпителиальных клеток при многократном применении окситоцина.

Радиоиммунное определение концентрации окситоцина в плазме крови коров при доении свидетельствует о наличии животных, у которых концентрация гормона в крови в этот период не изменялась (Bruckmaier et al., 1992). Однако афферентный нервный путь к гипоталамусу у этих животных оставался интактным, так как при стимуляции сосков концентрация пролактина в крови этих животных увеличивалась. Нарушения образования окситоцина в нейросекреторных клетках гипоталамуса также не происходило, поскольку растяжение влагалища вызывало значительное увеличение концентрации окситоцина в крови (Bruckmaier et al., 1992). Поведенческая оценка вскармливания в этих условиях показывает, что происходит нормальное развитие потомства. Такие результаты позволили некоторым исследователям ставить вопрос так: действительно ли окситоцин необходим для выведения молока, в частности, у коров? (Lefcort, Akers, 1983).

распространение получило представление о том, что катехоламины оказывают тормозное влияние на деятельность молочной железы (Lefcourt, Akers, 1984; Gorewit, Aromando, 1985; Shu-Lan Song et al., 1988). Вывод o тормозном влиянии катехоламинов на процесс образования молока был сформулирован, исходя из опытов по введению веществ в общий круг кровообращения и использованию в них интегральных показателей оценки деятельности молочной железы (Bruckmaier et al., 1991; Bruckmaier et al., 1997a), которые не могли дать представления о характере влияния катехоламинов на секреторные и миоэпителиальные клетки. Создавая в опытах стрессорные условия, в исследованиях такого направления авторы оставляли без внимания физиологические реакции клеток молочной железы при естественном повышении уровня катехоламинов в плазме крови. Кроме этого, положение о том, что изменение функций молочной железы в различных условиях связано только с их торможением, находится в определенном противоречии с представлением об адаптационно-трофическом влиянии симпатоадреналовой системы на функционирование различных органов (Орбели, 1949).

Альвеола представляет собой комплекс секреторных и миоэпителиальных клеток, находящихся во взаимодействии между собой и другими клеточными элементами в период развития (Zavizion et al., 1992b; Gomm et al., 1997) и лактопоэза (Попов, 1994; Скопичев, 1994). Следует учесть простые пространственно-временные характеристики взаимодействия этих клеток. Во-первых, выделение секрета из железы происходит периодически. Накопление секрета в молочной железе, по-видимому, приводит к увеличению гидростатического давления жидкости, которое оказывает механическое воздействие на структуры молочной железы и, в частности, на секреторные и миоэпителиальные клетки. Секреторные клетки молочной железы, расположенные по внутренней поверхности альвеолы, видимо, испытывают на себе механическое воздействие при накоплении молока в полостях альвеол. Секреторные клетки, испытывая деформацию под действием этих сил, в свою очередь могут оказывать влияние на миоэпителиальные клетки. С другой стороны, при сокращении миоэпителиальных клеток, напротив, происходит существенное механическое воздействие на секреторные клетки.

Все вышесказанное позволяет предполагать существование в альвеоле механизмов саморегуляции, которые обладают известной самостоятельностью и, в тоже время, включены в более высокие уровни регуляции, связанные с системным действием биологически активных веществ. Механочувствительность может играть роль местного фактора регуляции процесса выведения молока. Данное взаимодействие может проявляться в усилении ответных реакций на центральные стимулы. Кроме этого, механочувствительность клеток альвеол молочной железы может обеспечить получение молока при взаимодействии мать-детеныш. Поведение детеныша, его двигательная активность может оказывать массированное механическое воздействие на железу, обеспечивая выведение и получение молока.

Цели и задачи исследования. Целью работы явилось изучение у животных разных видов пусковых, модулирующих и местных механизмов регуляции образования секрета в молочной железе.

В связи с этим были поставлены следующие основные задачи:

1. Определить у животных с незначительной по объему емкостной системой характеристики процесса вскармливания потомства, такие как продолжительность кормления детенышей, особенности поведения детенышей при получении молока, концентрация окситоцина в плазме крови самки, изменение веса потомства в течение вскармливания и интенсивность синтетических процессов при накоплении секрета в полости альвеол.

2. Исследовать влияние окситоцина на процесс образования секрета, в том числе, на внутриклеточный транспорт в секреторном эпителии, на параметры сократительной реакции и лабильность миоэпителиальных клеток молочной железы мышей и трансэпителиальную разность потенциалов у коз.

3. Проанализировать роль разных типов адренорецепторов в регуляции синтеза, транспорта и экструзии секрета из железистых клеток молочной железы, а также в изменении электрических процессов и давления альвеолах в процессе образования молока.

4. Провести исследование целостности альвеол и роли механочувствительности миоэпителиальных и секреторных клеток при образовании секрета в молочной железе.

Научная новизна. Впервые на животных с незначительной по объему емкостной системой (на примере лабораторных мышей) проведено длительное исследование процесса вскармливания детенышей, в результате чего показано, что процесс вскармливания занимает у самки большую часть суток и состоит из повторяющихся периодов (от 30 до 60 мин) кормления. Выяснено, что при кормлении детенышей происходит регулярное кратковременное повышение уровня окситоцина в крови самок с интервалом в 4-5 мин в течение этого периода. Показано, что возрастание интервала между кормлениями сопровождается снижением синтеза белков в секреторных клетках молочной железы.

Установлено, что сократительная реакция миоэпителиальных клеток характеризуется быстрой фазой развития сокращения и медленной фазой расслабления. Миоэпителиальные клетки способны к сокращению с большей частотой, чем та, с которой происходит осуществление рефлекса выведения молока в естественных условиях.

Впервые установлено, что активация р-адренорецепторов секреторных клеток вызывает экструзию содержимого секреторных везикул в эксплантатах ткани молочной железы. Этот эффект увеличивается с возрастанием концентрации агониста и угнетается при блокаде |!-адренорецепторов пропранололом. Стимуляция изопротеренолом вызывает исчезновение везикул из секреторных клеток железы и

увеличение содержания мицелл казеина в секрете, находящемся в полости альвеол.

Впервые показано, что применение р-адреномиметика вызывает выведение молока из альвеолярной части молочной железы. Обнаружено, что влияние изопротеренола на железистый эпителий, связано с дозозависимым увеличением трансзпителиального потенциала. Применение р-агониста не ведет к торможению образования секрета в молочной железе коров.

Впервые показано, что в молочной железе животных с незначительной по объему емкостной системой длительный перерыв между кормлениями (до 20 ч) не вызывает нарушения целостности секреторного эпителия альвеол. Показано, что блокатор механоактивируемых ионных каналов (ионы гадолиния, СсР) угнетает развитие реакций секреторных и миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы.

Основные положения, выносимые на защиту. Образование молока у животных с незначительной по объему емкостной системой зависит от накопления секрета в полости альвеол. При увеличении интервала между кормлениями целостность альвеол не нарушается, происходит реализация физиологических механизмов, обеспечивающих продвижение и распределение секрета из полости альвеол по системе протоков. Характер вскармливания и выделения окситоцина в кровь, обеспечивает активное выведение секрета из альвеолярной части и поддержание синтеза молока.

Симпатоадреналовая система оказывает модулирующее влияние на образование секрета в альвеолах и его выведение из молочной железы, направленное на оптимизацию деятельности разных отделов в интервал между кормлениями и в период кормления потомства. Роль катехоламинов при активировании р-адренорецепторов состоит в стимулировании специфических функций секреторных клеток молочной железы мышей и выведении секрета из альвеолярной части молочной железы коров. Активация а-адренорецепторов секреторных и миоэпителиальных клеток не влияет на синтез и выведение молока из альвеол, но обеспечивает торможение выведения молока через а-адренорецепторы гладкомышечных клеток протоков.

Механочувствительность клеток альвеол молочной железы является одним из местных механизмов регуляции деятельности молочной железы в период между кормлениями и может обеспечивать выведение молока при взаимодействии детенышей с матерью во время кормления.

Научно-практическое значение работы. Научно-практическая ценность полученных результатов заключается в раскрытии сложных, взаимосвязанных механизмов образования секрета в молочной железе у различных видов животных. Близкие характеристики основных параметров процесса вскармливания детей у женщин и детенышей некоторых лабораторных животных (мыши) позволяют рассматривать последних как удобную физиологическую модель в изучении различных аспектов лактации у женщин. Выявленные различия в физиологических реакциях клеток альвеол молочной железы у разных видов при активации симпатоадреналовой системы позволяет обосновать мероприятия по предупреждению и снятию лактостаза у женщин и разработки мероприятий по повышению молочной продуктивности сельскохозяйственных животных.

Результаты исследования включены в курс лекций «Электрофизиология» на биолого-почвенном факультете, в курс лекций «Нормальная физиология» и «Основы биологии поведения» на медицинском факультете Санкт-Петербургского государственного университета.

Апробация работы. Материалы диссертации обсуждались на заседаниях Ленинградского отделения общества физиологов, биохимиков и фармакологов им. И.М. Сеченова (1976 - 1992); на V, VI, VII, VIII Всесоюзных симпозиумах по физиологии и биохимии лактации (Ленинград, 1976; Львов, 1982; Алма-Ата, 1986; Баку, 1990); на V Всесоюзной конференции «Физиология и биохимия медиаторных процессов» (Москва, 1990); на IV Всероссийской конференции «Нейроэндокринология-95» (Санкт-Петербург, 1995; на научной конференции, посвященной 100-летию каф нормальной физиологии СПбГМУ (Санкт-Петербург, 1998); на XV и XVII съездах Всероссийского физиологического общества им. И.П. Павлова (Кишинев, 1987; Ростов-на-Дону, 1998).

Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 32 печатных работах, опубликованных в отечественных и зарубежных изданиях.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены во введении, 5 главах, заключении и выводах. В первой главе представлены основные объекты и методические приемы. В каждой следующей главе первый подраздел посвящен обзору литературы по проблемам, анализируемым в данной главе. Во втором подразделе каждой главы описаны специфические методические особенности экспериментов, а в следующих - результаты исследований и заключительные замечания. Работа документирована 43 рисунками и 21 таблицей. Список литературы включает 431 ссылку. Общий объем диссертации - 337 с.

ОСНОВНЫЕ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДИЧЕСКИЕ ПРИЕМЫ

Эксперименты были проведены на лактирующих самках нелинейных белых мышей SHR питомника РАМН (Рапполово), мышах линии Prob 01 питомника Лейпцигского университета, козах, содержащихся в виварии Физиологического НИИ и коровах отдела медицинской ветеринарии Лейпцигского университета.

В опытах использовали радиоиммунный метод определения окситоцина, разработанный в Лейпцигском университете (Landgraf, 1981). Для оценки величины включения радиоактивной метки (Н3-лейцин) были одновременно использованы дополняющие друг друга методики: авторадиография и жидкостный сцинтилляционный метод определения радиоактивности (Доис,1983). Применение авторадиографии позволяет локализовать радиоактивный материал в секреторной клетке. При помощи спектрометрического метода измеряется радиоактивность всей пробы ткани. Сопоставление результатов данных методов позволяет оценивать динамику перемещения меченого предшественника из железистого эпителия в полость альвеол.

Фракцию цитозольных белков получали осаждением макромолекул кислотой и отделением осадка на фильтре (Малахова и др.,1987). Содержание белка в пробе определяли по методу Лоури (Lowry et al.,1951).

Визуальное наблюдение за поведением самок и детенышей осуществляли непрерывно в течение 48 ч (в ночное время при темно-красном свете). В этот срок животным задавали суточный режим освещения с соотношением светлой и темной фаз 12:12 (светлая фаза с 9.00). Сократительную реакцию миоэпителиальных альвеол регистрировали электромеханическим способом (Грачев и др., 1979).

В качестве электрофизиологических параметров, используемых в оценке функций секреторных клеток, использовали регистрацию трансэпителиальной разности потенциалов и трансэпителиального сопротивления (Толкунов, 1989; Alekssev et al., 1992).

Для регистрации давления в молочной железе коз в полость цистерны вводили полиэтиленовый катетер, имеющий боковой отвод для присоединения к нему датчика давления. В опытах использовали резисторный датчик с чувствительностью 1мВ/5 мм рт.ст..

В качестве модельной системы, позволяющей изучать экзоцитоз секреторных гранул, используют методику переживающей культуры клеток молочной железы. Достоинством данного методического подхода является возможность прямой оценки экструзии секреторного материала из железистого эпителия при добавлении в среду инкубации медиаторов и гормонов (Попов, 1989, 1994).

Для изучения ультратонкой организации секреторного эпителия пробы ткани молочной железы готовили для исследования в электронном микроскопе по методу, описанному у Hayat (1974). Обезвоженные кусочки молочной железы заключали в смолу Spurr (Spurr, 1969).

Для изучения различных сторон выделительной функций молочной железы коров использовали разделение молока на порции (Грачев, 1964; Bruckmaieret al.,1994). Количество жира в молоке определяли стандартным кислотным методом (Кугенев, Барабанщиков, 1978).

В опытах применяли окситоцин («Гедеон Рихтер», Венгрия), синтетический кристаллический окситоцин с активностью 450 МЕ/мг (Институт органической химии, Латвия) и кристаллический окситоцин с активностью 400 МЕ/мг (Ferak, Berlin). Для активации ß-адренорецепторов использовали изопротеренол (Novodrin, «Germed», ФРГ), а для активации а -адренорецепторов - фенилзфрин (мезатон, Харьков). При изучении экструзии белка из переживающей культуры клеток молочной железы в среду инкубации добавляли блокатор ß-адренорецепторов пропранолол (Obsidan, «Germed», ФРГ). В опытах применяли блокатор механочувствительных ионных каналов ионы гадолиния (GdCI3 6Н20, «Aldrich», США). Концентрации применяемых веществ зависели от методики проведения конкретных опытов и были обоснованы собственными экспериментальными результатами или данными других авторов.

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами (Ивантер, Кросов, 1992). Выбор конкретного метода был связан с установлением сопряженности совокупности выборок, а также выбора независимого события. Уровень достоверности р<0.05 был принят как статистически значимый. Данные представлены в виде среднего + стандартная ошибка.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Особенности процесса вскармливания потомства у животных с незначительной емкостной системой

Изучение продолжительности кормлений и перерывов между ними у мышей. В период лактации у мышей кормление потомства является преобладающим видом поведенческой деятельности. Наблюдения показали, что самки мышей проводят большую часть суток на гнезде с прикрепленными к соскам детенышами. Продолжительность отдельного периода кормления равнялась 53±2 мин. Анализ частотного распределения продолжительности периодов кормления за все время наблюдений показываетЮ что наиболее часто встречающиеся значения лежат в интервале от 30 до 60 мин. С увеличением продолжительности периодов кормления происходит постепенное снижение их количества. Интервал между кормлениями составлял 35±2 мин. Более половины периодов между двумя последовательными кормлениями длилось не более 30 мин. Через час после прекращения кормления самка возвращалась в гнездо уже в 83% случаев. Максимальный перерыв между периодами кормления мышат самкой составлял около 2 ч.

Особенность поведения детенышей при сосании. Изменение уровня окситоцина в крови самки при кормлении детенышей. В периоды кормления у мышат наблюдали регулярно повторяющиеся периоды повышенной

двигательной активности. Концентрация окситоцина в крови у самцов и нелактирующих самок составляла соответственно 11.5+1.6 (п=7) и 5.1+2.3 (п=5) пг/мл. Уровень гормона в крови контрольной группы лактиругащих животных был равен 4.6+1.9 пг/мл (п=5). Чтобы уточнить, выделяется ли окситоцин в кровь сразу после прикрепления детенышей к соскам, брали кровь у группы лактирующих мышей в промежуток времени от 1 до 3 мин после начала кормления. Реакции повышенной активности мышат до и во время взятия крови у этих лактирующих самок не происходило. Концентрация гормона в этом случае соответствовала контрольному значению и составляла величину 5.0+0.7 пг/мл. Уровень окситоцина достоверно повышался от 4.6+1.9 пг/мл в контрольной группе до 13.6+3.6 пг/мл (п=7) в первые секунды реакции повышенной активности мышат. Через 30 с концентрация окситоцина снижалась до исходного уровня и практически не изменялась в течение последующих полутора минут, несмотря на продолжавшиеся активные сосательные движения детенышей. Таким образом, повышение концентрации окситоцина в плазме крови самок мышей во время кормления происходит периодически.

Динамика рефлексов выведения молока в течение кормления. Во всех опытах для развития первого рефлекса выведения молока у мышей требовалась продолжительная (12+0.8 мин) стимуляция рецепторов соска детенышами. Его величина была наиболее вариабельной. Латентный период последующих рефлексов снижался, составляя в среднем 5 мин. Следует обратить внимание на одну важную особенность вскармливания потомства у мышей, а именно, регистрацию серии рефлексов выведения молока со стабильным интервалом между рефлексами. Спонтанная двигательная активность мышат в период вскармливания является одной из причин, вызывающих постоянное беспокойство самки во время кормления. Тем не менее, в опытах удавалось наблюдать периоды, в течение которых передвижение мышат, их спонтанная активность была незначительна. В эти периоды рефлексы выведения молока, разделенные интервалом в 180 - 240 с, возникали с точностью до нескольких секунд: Осуществление следующих друг за другом рефлексов выведения молока с фиксированным интервалом между ними связано с формированием внутреннего нейрогормонального стереотипа, который запускается сосанием и лимитируется длительностью кормления.

Изменение веса мышат при различной продолжительности кормления

Контрольное кормление детенышей в первый день эксперимента обнаружило значительные различия в продолжительности кормления, изменении веса детенышей и интенсивности получения молока детенышами у каждой мыши (табл.1). В последующих опытах время кормления составляло стандартную, заданную величину (5, 15, 30, 50 мин) для всех взятых в опыт самок мышей (табл.2). Таким образом, при вскармливании потомства может происходить в отдельные периоды кормления, как увеличение, так и уменьшение веса детенышей.

Таблица 1. Продолжительность кормления и изменение веса детенышей в течение контрольного опыта

номер кол-во изменение время изменение изменение

животного мышат веса кормления веса одного веса одного

детенышей (мин) мышонка за мышонка за

(мг) кормление (мг) мин (мг мин"1)

1 5 600 129 120 0.9

2 7 770 50 110 2.2

3 7 560 82 80 0.9

4 5 1300 104 260 2.5

5 7 330 83 47 0.6

6 6 530 72 88 1.2

7 7 1410 144 201 1.4

Таблица 2. Изменение веса детенышей при различной продолжительности кормления

Номер Время кормления

животного (мин)

5 15 30 50

1 0 0 0 -140

+180 +490 + 100

2 -20 -30 -150 +300

+70 +70 +140

3 +90 -240 -170 -250

+100 +160

4 -210 -100 -370 -280

+140 +30 +40

5 +20 0 +220 +210

+220 +90 +320

6 -60 -30 -40 0

7 -70 +50 +30 +40

+370

Каждая цифра в графе обозначает изменения веса (мг) в отдельном опыте;

О - изменения веса детенышей не произошло; (+) - увеличение веса детенышей после кормления; (-) - уменьшение веса детенышей после кормления; Сравнение интенсивности включения Н3-лейцина в ткань молочной железы мышей через различные интервалы после прекращения кормлении Количество Н3-лейцина в ткани молочной железы через 4 и 6 ч после отсаживания детенышей достоверно снижается по сравнению с животными, подвергнутых двухчасовому перерыву в кормлении (табл.3).

Включение Н3-лейцина в белковые молекулы через 2 ч было равно 94 ±16-10"3 имп мкл ^мкг1, что статистически достоверно (р<0.05, п=36, И-ест) превосходило величины включения Н3-лейцина через 4 и 6 ч, составивших

соответственно З6±5-Ю"3 и 54+3-10"3 имп мкл'1-мкг"1. Достоверных различий между средними значениями Н3-лейцина в пробах из различных участков во всех группах не обнаружили. Накопление секрета в молочной железе приводит к снижению интенсивности образования цитозольных белков. Продвижение синтезированных веществ из полости альвеол в емкостную систему является важным условием поддержания синтетических процессов на высоком уровне.

Таблица 3. Включение Н3-лейцина в ткань молочной железы мышей через _ 2, 4 и 6 ч после прекращения кормления потомства____

Номер Радиоактивность ткани СМ

Отсаживание животного (ИМПМГ"1-МКЛ'1)' 10'1 (п=5) %

1 11.2 ±0.4 8

/ 2 7.1 ±0.5 17

' 3 31.7 ±6.3 44

2 часа 4 41.3 ±3.3 17

5 64.8 + 25.9 85

31.2 ±6.6 (п = 25)

6 8.1 ±0.3 9

7 22.7 ± 1.6 15

4 часа 8 7.9 ±0.9 26

9 16.4 ± 1.2 16

13.8 ±1.5 (л = 20)*

10 7.9 ±0.4 13

11 12.0 ±0.3 5

6 часов 12 15.2 + 3.9 43

13 30.3 ± 3.9 28

16.4 + 2.2 (п = 20) *

* - достоверное различие с группой, отсаженной на два часа. р<0.05; 1-тест.

2. Исследование влияния окситоцина на функции секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы

Влияние окситоцина на внутриклеточный транспорт Н3-лейцина в секреторных клетках молочной железы мышей

В этом исследовании в двух независимых экспериментах было обнаружено, что окситоцин инъецированный вместе с Н3-лейцином лактирующим мышам вызывал достоверное уменьшение количества радиоактивной метки в секреторных клетках животных из экспериментальных групп по сравнению с контрольными. Оценка авторадиограмм в первом опыте показала, что применение окситоцина уменьшает включение Н3-лейцина в секреторные клетки железы на 32%. Во втором эксперименте плотность зерен серебра над секреторными клетками уменьшилась на 60% (табл.3). В этом опыте не обнаружили отличия в количестве зерен серебра над секреторным эпителием у мышей, которые

кормили детенышей до самого момента введения Н3-лейцина и окситоцина, и теми, которые были отсажены от своего потомства за два часа до начала опыта. Данный результат означает, что характер реакции секреторных клеток на окситоцин сохраняется при естественном максимальном перерыве в кормлении.

Спектрометрический подсчет радиоактивности в первом опыте не выявил достоверной разницы во включении Н3-лейцина в ткань молочной железы между контрольной и опытной группами. Все же следует отметить, что абсолютное значение радиоактивности ткани было выше в экспериментальной группе животных. Во втором опыте, в условиях свободного продвижения секрета по протокам, величина радиоактивности ткани уменьшилась на 51% (табл.4).

Таблица 4. Влияние окситоцина на включение Н3-лейцина в ткань и секреторные клетки молочной железы

Экспериментальная группа Первый эксперимент Второй эксперимент

радиоактивность ткани ИМП'МГ"1 (п=5)___ кол-во зерен серебра на 25 мкм2 (п=180) радиоактивность ткани импмг"1 (п=3) кол-во зерен серебра на 25 мкм2 (п=500)

контроль (1) 1458 ±139 2.1 ±0.01 5996±1811 2.1 ±0.03

окситоцин (2) 1618 ±269 1.510.02* 2986 ± 522 0.8 ±0.01

окситоцин (3), отсаживание детенышей - - 3003 ± 267 1.0 ±0.004

среднее групп 2 и 3 - - 2994 ±276. (п=6) 0.9 ±0.01,

* - достоверное различие с контрольной группой, р< 0.02.

♦ - достоверное различие с контрольной группой, р< 0.05.

Перераспределение радиоактивности свидетельствует, что происходит ускорение внутриклеточного транспорта белков при действии окситоцина.

Исследование сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мышей при аппликации окситоцина.

Опыты показали, что миоэпителиальные клетки альвеол молочной железы обладают высокой чувствительностью к окситоцину. На каждую аппликацию окситоцина в концентрации 0.5 нмоль/л регистрировали ответную сократительную реакцию миоэпителия (п=422). Во многих опытах в ответ на однократную аппликацию регистрировали несколько волн сокращений. Всего было зарегистрировано 112 однокомпонентных реакций, что составило 26% от их общего числа. Из других 310 реакций (73%) преобладали такие, в которых отчетливо прослеживались две волны

сокращений. Их было 192, или 46% от общего числа. Три волны сокращения наблюдали почти с такой же частотой как и однокомпонентные реакции, то есть 93 реакции (23%).

Особенность сократительных реакций на окситоцин состояла в том, что время сокращения до максимума было в несколько раз. больше чем время расслабления. Размах варьирования амплитуды сокращений сократительных реакций колебался от 4 до 18 мм, а длительность реакций - от 16 до 72 с. Другие параметры сократительных реакций представлены в табл. 5.

Таблица 5. Параметры сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы мыши при аппликации окситоцина

Параметры М ± т

(п=126)

Амплитуда реакции, мм 9.4 + 0.06

Длительность реакции, с 37.1 ±0.3

Время сокращения до максимума, с 8.5 + 0.07

Время расслабления, с 31.3 + 0.2

Скорость сокращения, мм/с 1.2 ±0.01

Скорость расслабления, мм/с 0.3 + 0.003

Таким образом, электромеханическая регистрация смещения альвеолы свидетельствует, что сокращение миоэпителиальных клеток в ответ на кратковременную аппликацию окситоцина представляет собой градуальную реакцию с относительно быстрым фронтом- сокращения и длительным периодом расслабления.

Сократительная реакция миоэпителиальных клеток молочной железы мышей при многократном применении окситоцина. Исследование сократительной реакции при различной частоте аппликации окситоцина было продиктовано стремлением дать характеристику сокращения миоэпителия в зависимости от частоты рефлекса выведения молока и продолжительности кормления. С этой целью в первой серии опытов были подсчитаны параметры сократительной реакции на первую, пятую и десятую аппликации гормона. Между амплитудой реакции в начале, середине и конце опыта статистически достоверных различий обнаружено не было. В основном не отмечали изменений и в других параметрах сократительной реакции. Только скорость расслабления на пятую и десятую аппликации был достоверно больше, чем на первое применение окситоцина. Увеличение этого параметра связано с незначительным увеличением амплитуды ответной реакции и одновременным небольшим уменьшением длительности фазы расслабления как на пятую, так и на десятую аппликации окситоцина (табл.6).

В следующей серии экспериментов была исследована сократительная реакция миоэпителиальных клеток при более частом применении окситоцина в сравнении с осуществлением рефлекса выведения молока у самки при кормлении детенышей. В этих опытах

интервал между аппликациями был сокращен до 1 мин. Так же как в первой серии были проанализированы параметры сократительной реакции на первую, пятую и десятую аппликации окситоцина. Достоверных различий ни по одному из параметров зарегистрировано не было (табл.7).

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что миоэпителиальные клетки способны к сокращению с большей частотой, чем та, с которой происходит осуществление рефлексов выведения молока у мышей в естественных условиях. Реактивность миоэпителия при многократном действии окситоцина не является фактором, определяющим минимальный интервал между рефлексами, и, следовательно, не ограничивает естественную периодичность рефлекторных актов.

Таблица 6. Характеристики сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы мыши при аппликации окситоцина с _интервалом в 5 мин_

Параметры сократительной реакции Порядковый номер аппликации

первая (п=12) пятая (п=12) десятая (п=6)

Амплитуда реакции, мм 7 + 0.3 9 ±0.3 8 + 0.3

Длительность реакции, с 36+0.8 36 ±1.2 30 ±1.3

Время сокращения до максимума, с 8 ±0.3 11 ±0.3 8 + 0.3

Время расслабления, с 28 + 0.7 26 ± 1.0 23 ±1.3

Скорость сокращения мм/с 1.0 + 0.02 0.9 ± 0.02 1.2 ±0.08

Скорость расслабления мм/с ■ 0.3 ±0.01 0.4 ±0.01 + 0.4 + 0.03*

♦-статистически достоверная разница относительно первой аппликации. р< 0.05; \Л/ - тест Вилкоксона.

Влияние ручного доения и окситоцина на трансэпителиальную разность потенциалов и внутрижелезистое давление в молочной железе коз. При регистрации разности потенциалов между секретом во внутренней полости железы и кровью, электрод, контактирующий с молоком в соске, имел отрицательный потенциал относительно электрода, контактирующего с кровью в бедренной вене. Исходные значения трансэпителиальной разности потенциалов и давления у разных коз, а также у одного и того же

жйвотного в разных опытах, отличались. По результатам измерений во всех Ьпытах наименьшее значение трансэпителиальной разности потенциалов было равно 14 мВ, а наибольшее - 38 мВ. Уровень трансэпителиального потенциала, по результатам измерений в начале, середине и конце опытов оказался равным 24.6+0.6 мВ (п=75). Среднее значение давления в молочной железе было 24.9±0.6 мм рт. ст (3.32±0.08 кПа) (п=25). Разброс данных составлял от 16 до 38 мм рт. ст. (0.21 - 5.1 кПа).

Таблица 7. Характеристики сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол при аппликации окситоцина с

интервалом в 1 мин

Параметр сократительной реакции Порядковый номер аппликации

первая (п=8) пятая (п=8) десятая (п=7)

Амплитуда реакции, мм 9 + 0.3 9 + 0.6 7 + 0.2

Длительность реакции, с 28 + 1.3 25 ± 1.0 21 ± 1.2

Время сокращения до максимума, с 7 ±0.2 7 + 0.4 6+0.2

Время расслабления, с 22 + 1.1 17 + 0.8 . 16 ± 1.1

Скорость сокращения, мм/с 1.4 + 0.07 1.4 ±0.1 1.3 ±0.07

скорость расслабления, мм/с 0.5 + 0.03 0.7 + 0.05 0.5 ±0.03

Влияние различных веществ на трансэпителиальную разность потенциалов целесообразно сравнивать с ее изменением, развивающимся при адекватной стимуляции органа. Ручное доение свободного соска вымени приводило к увеличению трансэпителиальной разности потенциалов (электрод, контактирующий с молоком, становился более негативным) и увеличению давления в молочной железе (рис.16). Латентный период этих реакций составлял 28.0±2.7 с и 35.0±2.8 с (п=25) соответственно. Амплитуда изменения трансэпителиальной разности потенциалов равнялась 7.9+1.1 мВ, длительность реакции - 257±27 с. Скорость увеличения трансэпителиальной разности потенциалов была 0.45 +0.1 мВ/с, скорость уменьшения - 0.03+0.004 мВ/с. Отношение скорости увеличения потенциала к скорости его уменьшения равнялось 15. Амплитуда увеличения давления внутри молочной железы составляла 5.41 0.6 мм рт. ст. (0.72±0.08 кПа), длительность реакции - 195±19 с.

Изменение трансэпителиальной разности при ручном доении может быть обусловлено воздействием на секреторные клетки окситоцина, рефлекторно выделившегося в кровь в ответ на стимуляцию рецепторов. Для проверки данного предположения в следующей серии исследовали

влияние внутривенной инъекции окситоцина в различных дозах. Введение этого гормона (5 - 100 мМЕ) вызывало дозозависимое увеличение трансэпителиальной разности потенциалов. Латентный период данной реакции был равен 20.6±0.6 с (п=55). При использовании наиболее высокой дозы окситоцина была зарегистрирована наибольшая реакция, амплитуда которой составила 14.8 мВ, длительность - 415 с. Скорость изменения разности потенциалов в ответ на инъекции окситоцина составляла 0.3± 0.003 мВ/с, скорость уменьшения - 0.04±0.001 мВ/с (п=53).

В большинстве опытов изменение трансэпителиальной разности потенциалов сопровождалось возрастанием давления в молочной железе, амплитуда которого увеличивалась с инъецируемой дозой окситоцина. Латентный период реакции повышения давления был 17.9±0.7 с (п=45). При инъекции низких концентраций окситоцина (п=10), при возникновении изменения трансэпителиальной разности потенциалов, не зарегистрировали повышения внутрижелезистого давления в молочной железе. Максимальная амплитуда реакции, достигнутая в одном из опытов на применение максимальной дозы окситоцина, составила 21 мм рт. ст. (2.8 кПа).

В одном из опытов было отмечено, что при исходном давлении молока в железе в 34 мм рт. ст. (4.5 кПа) были зарегистрированы реакции изменения трансэпителиальной разности потенциалов противоположные тем, которые обычно регистрировались при инъекциях окситоцина. Удаление части молока через катетер в объеме 110 мл (при общем объеме полученного после опыта молока 560 мл) приводило к снижению давления до 19 мм рт. ст. (2.5 кПа) и восстановлению характерного развития изменения разности потенциалов. Удаление части молока из железы могло снизить избыточное давление на уровне альвеол, так как амплитуда повышения давления при последующих инъекциях окситоцина уменьшилась приблизительно в два раза. Таким образом, доение и введение окситоцина приводило к увеличению трансэпителиальной разности потенциалов и давления в молочной железе коз. Повышение давления в альвеолах животных с развитой системой протоков сверх определенной величины может изменять функциональное состояние секреторного эпителия.

3. Роль катехоламинов в регуляции функций секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы.

Влияние изопротеренола и фенилэфрина на включение Н3-лейцина в секреторные клетки молочной железы мышей. Использование Н3-лейцина, как количественного показателя оценки уровня синтетических процессов в секреторных клетках, выявило отсутствие каких-либо различий в эффекте [5 -агониста по сравнению с а-агонистом. Общая радиоактивность проб ткани молочной железы при инъекции изопротеренола и фенилэфрина не менялась по сравнению с инъекцией физиологического раствора. Количество радиоактивной метки над секреторным эпителием не отличалось в опытной и контрольной группах, что доказывает равномерное поступление Н3-лейцина в железистую ткань (табл.8).

Таблица 8. Влияние изопротеренола и фенилэфрина на включение Н3-_ лейцина в молочную железу мышей_

Эксперимен- количество кол-во зерен серебра на 25 мкм2

тальная группа животных имп-мг"1

контроль 6 2247 ± 250 2.9 ±0.2

фенилэфрин 4 2093 ±244 2.7 ±0.1

контроль 5 1113+140 1.7 ±0.2

изопротеренол 5 1108 ±131 1.5 ±0.2

Следовательно, повышение концентрации катехоламинов в плазме крови на период, соответствующий естественному его подъему при кормлении самкой мышей детенышей, не может рассматриваться как причина снижения интенсивности синтетических процессов в железистом эпителии, которое, как считают некоторые исследователи (Blum et al., 1989), связано с вазоконстрикцией.

Сравнивая величину общей радиоактивности ткани и количество зерен серебра над секреторным эпителием оценивали влияние а- и |5-адреномиметиков на внутриклеточный транспорт. Общее количество Н3-лейцина в ткани и количество радиоактивной метки над секреторным эпителием при применении изопротеренола и фенилэфрина не менялось. Таким образом, равномерное включение Н3-лейцина в ткань молочной железы в контрольной и опытной сериях свидетельствует об отсутствии влияния катехоламинов на внутриклеточный транспорт в секреторном эпителии.

Влияние изопротеренола на включение Н3-лейцина в секреторные клетки молочной железы мышей при действии окситоцина. Радиоактивность проб ткани молочной железы в контроле была равна 1951 ±406 импмг'1. В группе животных, которым ввели перед окситоцином изопротеренол, она составляла 2500±286 имп мг"1 (р>0.05). Количество зерен серебра, подсчитанное над секреторным эпителием, достоверно не отличалось в контрольной и опытной группах. В контроле над секреторным эпителием было обнаружено 2.1±0.3 зерна серебра на 25 мм2. У животных опытной группы эта величина составляла 2.6±0.3 зерна на 25 мм2. Таким образом, на фоне повышенной концентрации изопротеренола в плазме крови мышей не происходит уменьшения количества Н3-лейцина в секреторных клетках под влиянием окситоцина.

Исследование влияния изопротеренола на экструзию белка из эксплантатов ткани молочной железы мышей. Содержание белка в среде культивирования, в которой находились контрольные препараты ткани молочной железы, было того же порядка, как в других аналогичных исследованиях (Попов, 1989). Добавление в среду изопротеренола в возрастающих концентрациях вызывало дозозависимое увеличение количества белка в среде. Предварительное применение блокатора ß-адренорецепторов- пропранолола ингибировало эффект изопротеренола. При этом количество секреторных гранул в апикальной зоне клеток резко

снижается, количество мицелл казеина в полости альвеол возрастает. Активация ß-адренорецепторов секреторных клеток молочной железы мышей вызывает экструзию секреторных везикул. Увеличение экструзии белка из эпителиоцитов при действии ß-агониста свидетельствует о том, что катехоламины могут участвовать в регуляции выведения секрета в альвеолах молочной железы, активируя специфические функции секреторных клеток.

Исследование трансэпителиальной разности потенциалов и давления в молочной железы коз при действии адреналина, норадреналина.

изопротеренола и фенилэфрина._После внутривенных инъекций

норадреналина и адреналина были зарегистрированы фазные изменения трансэпителиальной разности потенциалов. В них можно выделить быстрые и медленные компоненты реакций, а также фазы снижения и нарастания уровня разности потенциалов. При инъекциях норадреналина регистрировались первоначальное быстрое и последующее медленное возрастания уровня трансэпителиальной разности потенциалов (рис. 25 а). Увеличение дозы норадреналина с 10 до 50 мкг приводило к увеличению первичного быстрого повышения уровня трансэпителиальной разности потенциалов с 1.6 до 6.8 мВ (длительность, соответственно, - 15 и 20 с) и вторичного медленного изменения уровня трансэпитедиальной разности потенциалов с 1.2 до 4 мВ (длительность, соответственно, - 275 и 480 с).

Одновременно с развитием изменений трансэпителиальной разности потенциалов, вызываемых действием норадреналина, регистрировались реакции кратковременного повышения давления в молочной железе. Амплитуда реакции при инъекциях норадреналина в указанных концентрациях возрастала с 2.5 до 13.8 мм рт. ст., а длительность - с 29 до 95 с.

При инъекциях адреналина регистрировались первичное снижение, а затем быстрое повышение трансэпителиальной разности потенциалов, за которым развивалась медленная реакция вторичного повышения уровня разности потенциалов. Первичное снижение трансэпителиальной разности потенциалов при применении адреналина в дозах 10, 25 и 50 мкг колебалось в пределах 1.2 - 2.0 мВ с длительностью 20 - 30 с и, по-видимому, не зависело от концентрации адреналина. Амплитуда фазы быстрого повышения трансэпителиальной разности потенциалов возрастала с 1.6 до 8.0 мВ сл стабильной длительностью 15 с. Возрастание вторичного медленного повышения уровня потенциала, в зависимости от дозы адреналина, было менее выраженным и изменялось с 2.4 до 3.6 мВ, длительность реакции увеличивалась с 380 до 550 с. Давление в молочной железе при действии указанных возрастающих доз адреналина увеличивалось с 8.5 до 16.5 мм рт. ст., а длительность - с 40 до 80 с.

Инъекции а-адреномиметика фенилэфрина в дозах от 50 до 300 мкг вызывали однофазные и двухфазные изменения трансэпителиальной разности потенциалов. Латентный период составил 13±0.7 с (п=35) и не зависел от развития одно- или двухфазной реакции. Вместе с тем, фаза снижения уровня потенциала всегда предшествовала фазе его повышения.

Фаза снижения трансэпителиальной разности потенциалов в ответ на инъекции фенилзфрина была зарегистрирована в 15 из 35 случаев. Наибольшая амплитуда данной фазы была равна 2 мВ, а наибольшая амплитуда фазы увеличения уровня потенциала - 8 мВ. Характерно, что длительность фазы снижения трансэпителиальной разности, потенциалов была всегда короче (5 - 50 с) относительно фазы возрастания (250 - 280 с). Одновременно с развитием изменения трансэпителиальной разности потенциалов в ответ на применение фенилзфрина с латентным периодом 13+0.4 с (п=33) регистрировали кратковременные реакции повышения давления в железе. Наибольшее повышение давления до 15 мм рт. ст. было зарегистрировано при действии фенилзфрина в дозе 200 мкг. Следует отметить, что во всех случаях длительность повышения давления при инъекциях фенилзфрина была короче длительности изменения трансэпителиальной разности потенциалов.

Внутривенные инъекции изопротеренола в дозах от 0.25 до 12 мкг вызывали развитие быстрых первичных и медленных последующих возрастаний трансэпителиальной разности потенциала. Латентный период реакции составил 17±0.7 с (п=48). Характерно, что длительность быстрой фазы повышения уровня потенциала оказалось достаточно стабильной (в пределах 15-36 с). Скорость нарастания быстрого первичного повышения трансэпителиальной разности потенциалов оказалось равной 0.74+0.1 мВ/с, а спада - 0.29±0.04 мВ/с (п=48). Наибольшая зарегистрированная амплитуда быстрой фазы возрастания уровня потенциала при действии изопротеренола в максимальной дозе составила 20 мВ. Вторичная медленная реакция повышения и спада трансэпителиальной разности потенциалов при применении изопротеренола в максимальной дозе имела длительность до 10-ти минут. Амплитуда этой реакции была всегда значительно меньше быстрого первичного повышения уровня трансэпителиального потенциала. Существенным отличием для действия изопротеренола оказалось отсутствие изменений уровня давления в молочной железе.

Изучение процесса выделения молока у коров при инъекции адреналина, норадреналина, изопротеренола и фенилзфрина. Введение адреналина в концентрации 4 мкг/кг вызывало у различных подопытных животных выделение молока, которое составляло от 8 до 59% от общего количества молока в альвеолярной части катетеризированной четверти вымени. Норадреналин в концентрации 2,5 мкг/кг также вызывал поступление молока из железы, которое достигало 33% от общего количества молока. И в том, и в другом случае наблюдали полное торможение рефлекса выведения молока. Остальное молока было получено в «остаточной» порции. Время получения этой порции увеличивалось с 2 мин в контрольном опыте до 10 мин при действии адреналина, достигая 24 мин дл.я норадреналина.

При инъекции изопротеренола в кровеносную систему коров происходило выведение молока из катетеризированной четверти. При возрастании вводимых концентраций (5-адреномиметика происходило

увеличение «катехоламиновой» порции. Латентный период реакции на изпротеренол в концентрации 0.25 мкг/кг составлял 146 с. При увеличении концентрации происходило уменьшение латентного периода. Для концентрации изопротеренола, равной 1 мкг/кг, это время снижалось почти в три раза и достигало 53 с. Укорочение латентного периода в диапазоне концентраций от 0.25 до 1 мкг/кг имело линейный характер. После применения изопротеренола параметры реакции выведения молока на окситоцин изменялись следующим образом. «Рефлекторная» порция молока снижалась с 62 до 13. Объем «остаточной» порции молока при инъекции изопротеренола остается в тех же пределах. Изопротеренол не вызывал изменения времени получения «рефлекторной» и «остаточной» порций. Латентный период реакции на инъекции окситоцина также не менялся. При получении «рефлекторной» порции он составлял 31 с, при получении «остаточной» - 25 с. Предварительное применение изопротеренола даже в значительных концентрациях перед окситоцином не оказывало тормозного влияния на выведение молока. Действие катехоламинов на р-адренорецепторы клеток различных структур молочной железы не сопровождается блокированием процесса выведения молока.

Введение фенилэфрина в общий круг кровообращения во всех концентрациях не вызывало молоковыведения из катетеризированной четверти. После применения фенилэфрина параметры реакции выведения молока на окситоцин существенно изменялись. При увеличении применяемых концентраций а-адреномимтеика происходило уменьшение «рефлекторной» порции молока с 66% до 10%. У некоторых животных фенилэфрин в концентрации 12 мкг/кг вызывал полное блокирование процесса выведения молока. «Остаточная» порция молока на фоне введения все больших доз а-агониста увеличилась с 34 до 90 %. Под влиянием а-адреномиметика латентный период реакции на окситоцин в концентрации 0.4 мМЕ/кг увеличивался и для концентрации фенилэфрина 12.5 мкг/кг достигал 55 сек, то есть возрастал вдвое. Латентный период для окситоцина в концентрации 40 мМЕ/кг не имел столь четко выраженной тенденции к увеличению для возрастающих доз фенилэфрина, но при концентрации последнего равной 12.5 мкг/кг возрастал в 1.5 раза. Время получения «окситоциновой» порции в контроле составляло 5 мин. Оно оставалось практически неизменным для этой порции при всех концентрациях фенилэфрина. Учитывая то обстоятельство, что одновременно происходило существенное снижение количества молока в этой порции, можно считать, что происходило уменьшение скорости поступления секрета из железы. Время выведения «остаточной» порции увеличивалось с 5 до 18 мин. Следовательно, в основе блокирующего действия симпатоадреналовой системы на процесс выведения молока у коров лежит активация а-адренорецепторов.

Исследование поступления молока при действии изопротеренола на фоне максимального опорожнения молочной железы коров. Отношение «основной» порции молока к «суммарной» было равно 98% у каждой коровы. Такое же соотношение сохранялось и для остальных четвертей. По

имеющимся расчетам протоковая система составляет основной внутренний объем органа, тогда как альвеолярная часть имеет объем, равный примерно 10% от всей емкости железы (Грачев и др., 1984). Следовательно, после проведенного предварительного опорожнения вымени секрет выводится из всех крупных и средних протоков молочной железы."

Возможность влияния изопротеренола альвеолярный отдел молочной железы оценивали по наличию «катехоламиновой» порции и изменению «дополнительной» порции из катетеризированной четверти. Несмотря на предварительное опорожнение вымени, внутривенная инъекция р-агониста вызывала выделение молока из катетеризированной четверти, причем у одной коровы поступление молока отмечали во всех экспериментах, у другой - в одном опыте выделение секрета не наблюдали. Объем «катехоламиновой» порции составлял у первой коровы 3 и 8 мл, у второй 2, 10 и 17 мл (по вариантам опыта). Латентный период реакции колебался от 40 до 100 с (х=68±11, п=5).

Объем «дополнительной» порции после введения изопротеренола составлял 32 ±12 мл (п=6), а в контрольных опытах - 22 ±3 (п=6). (р >0.05; \Л/-теста Вилкоксона. Таким образом, после предварительной инъекции изопротеренола выделение молока на окситоцин не отличается по своим параметрам от контрольного опыта, в котором молоковыведение обеспечивалось только инъекцией окситоцина. Поступление секрета из железы с таким же латентным периодом в условиях максимально возможного опорожнения вымени свидетельствует о влиянии изопротеренола не только на крупные выводные протоки, но и на концевые отделы, включая железистый эпителий.

Влияние изопротеренола на количество молока и содержание в нем жира у коров. В паренхиме молочной железы по данным радиолигандных исследований имеются клетки, обладающие р-адренорецепторами (Наттоп е! а1., 1994). Как указывалось выше, на других секреторных органах показано, что р-агонисты могут вызывать экструзию. Можно предположить, что стимулирующее действие изопротеренола на выделение молока связано с его влиянием на секреторные клетки и с экструзией секрета в полость альвеол. Для решения вопроса о возможности осуществления экструзии при действии изопротеренола провели серию экспериментов по сравнительному изучению количества молока и содержания в нем жира в сериях, где производились сравнительная оценка действия изопротеренола (опытная серия) с окситоцином (контрольная серия). При анализе этих результатов учитывали два обстоятельства: 1) осуществление экструзии из секреторных клеток при действии окситоцина является твердо установленным фактом (Попов, 1989; ОШуюг-ВоиздиеН, 1976); 2) сокращение миоэпителиальных клеток способствует осуществлению экструзии и увеличению количества жира в полости альвеол (Лебедева, 1978).

Параметры реакции выделения молока после общих процедур,связанных с опорожнением вымени, не различались в

контрольной и опытной сериях. Количество молока в «катехоламиновой» порции (26±5 мл) катетеризированной четверти вымени было меньше, чем во второй «остаточной» порции (33+4 мл) контрольной серии. В то же время, следующая инъекция окситоцина вызывала достоверное увеличение объема молока во второй «остаточной» порции (24±4 мл) опытной серии по сравнению с третьей «остаточной» порцией (15+3 мл) молока в контроле. Так как значение общих показателей выведения молока после этих инъекций не менялось (сумма порций молока, общий удой, процентное отношение порций от удоя и т.д.), то следует считать данные изменения отражением сходных физиологических процессов при инъекции окситоцина и р-адреномиметика.

Количественное соотношение объемов «катехоламиновой» и «остаточных» порций показывает, что на инъекцию р-агониста происходит экструзия секрета. Объем этого секрета меньше, чем при действии окситоцина, так как инъекция окситоцина сопровождается сокращением миоэпителиальных клеток. Последовательное одно за другим применение окситоцина в контрольной серии позволяет более полно извлечь вновь синтезированное молоко, что обуславливает увеличение «остаточной» порции по сравнению с контролем.

Анализ изменения количества жира в порциях из катетеризированной четверти согласуется с этим заключением. Экструзия секрета из клеток секреторного эпителия вызывает выделение молока с повышенным количеством жира, которое близко по содержанию в «катехоламиновой» порции (2.2+0.4 г) опытной серии и второй «остаточной» порции (2.8±0.3 г) контрольной серии. Однако, отсутствие сократительной реакции миоэпителиальных клеток миоэпителиальных клеток при инъекции р-агониста приводит к задержке некоторого количества жира, которое удается получить в следующей порции молока после инъекции окситоцина и активного продвижения секрета. Таким образом, при повышении концентрации изопротеренола в плазме крови и активации р-адренорецепторов секреторных клеток молочной железы коров происходит экструзия секрета. Усиление процесса экструзии и одновременное снижение тонуса выводных протоков при действии р-адреномиметика позволяют секрету под действием гидростатического давления поступать в емкостную систему молочной железы.

4. Изучение целостности альвеол и механочувствительности миоэпителиальных и секреторных клеток при накоплении и выведении секрета в молочной железе мышей

Исследование величины давления в полости соска молочной железе мышей. Проведенные опыты показали, что не происходило увеличения давления молока в полости соска молочной железы мышей через различные интервалы после кормления детенышей (от 2.5 до 20 ч). Во всех случаях зарегистрированная величина давления не превышала 1 мм рт.ст. (0.15 кПа). Тестирующие инъекции окситоцина в концентрации 0.5 мМЕ/мл вызывали увеличение давления молока от 3 - 5 мм рт.ст. (от 0.4 до 0.66

кПа), которое со временем возвращалось к начальному уровню. Внутрибрюшинное введение окситоцина в дозе 50 мМЕ/100 г массы тела вызывало возрастание давления молока до 20 мм рт.ст. (1.66 кПа). Таким образом, в полости соска молочной железы мышей через различные интервалы после кормления детенышей не происходит увеличения давления молока. В то же время, инъекции окситоцина приводили к повышению давления в молочной железе.

Регистрация через различные интервалы после кормления сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол при аппликациях окситоцина. Постоянное давление в полости соска мышей не может рассматриваться в качестве доказательства неизменности давления в других отделах альвеолярно-протоковой системы. В первую очередь необходимо было провести анализ в отношении альвеол молочной железы, поскольку включение 3Н-лейцина в секреторные клетки и продолжающийся синтез белков свидетельствует, что полного торможения синтетической деятельности не происходит. Величина сократительной реакции гладкомышечных клеток усиливается при растяжении этих клеток, которое обусловлено повышением давлением в полости структур (Орлов и др., 1991). При увеличении интервала после кормления детенышей амплитуда и длительность сократительной реакции миоэпителиальных клеток возрастала (табл.9).

Таблица 9. Параметры сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мышей через различные промежутки времени

после прекращения кормления

Экспериментальная группа

Параметры Контроль 2.5 ч 20 ч

(п=3) (п=3) (п=3)

Амплитуда, мм 15 + 0.8 18 + 2 25 ± 3*

Длительность, с 20 ±3 30 ±6 50 ±12*

«Величина

сократительной 154 ±26 266 ±32* 614 ±101*

реакции», мм-с

* - достоверное различие с контрольной группой; (р<0.01; 11-тест Манн-Уитни)

Через 2.5 ч возрастание этих двух параметров не имело статистически достоверных различий с контрольной группой. Однако тенденция к увеличению длительности и амплитуды проявлялась в достоверном увеличении «величины сократительной реакции» миоэпителиальных клеток в сравнении с контролем. Через 20 ч не только «величина сократительной реакции», но также амплитуда и длительность сократительных реакций, которые увеличивалась почти в два раза, имели статистически достоверное различие по сравнению с контрольной группой. Увеличение интервала после кормления детенышей приводило к возрастанию сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы. Следовательно, изменение величины сократительной реакции

миоэпителиальных клеток через разные сроки после прекращения кормления указывают на повышение давления секрета в полости альвеол.

Исследование реакций секреторных клеток и целостности секреторного эпителия молочной железы мышей через различные интервалы после кормления. Трансэпителиальная разность потенциалов в альвеолах молочной железы мышей, взятых в опыт после кормления детенышей, варьировала от -10 до -25 мВ (среднее значение было равно 18 ±1 мВ). Секрет во всех случаях имел негативное значение относительно межклеточной жидкости. Через 2.5 ч отмечали достоверное повышение уровня трансэпителиальной разности потенциалов до -25+1 мВ (р<0.01). При дальнейшем увеличении интервала после прекращения кормления значения трансэпителиальной разности снижались. Через 15 и 20 ч после кормления трансэпителиальный потенциал в некоторых альвеолах был равен нулю: в 14% при 15 ч и 18% при 20 ч.

Величина трансэпителиального электрического сопротивления у животных, непосредственно перед опытом отделенных от детенышей, составляла 114+1 кОм. Через 2.5 ч она возрастала до 131 ± 1 кОм. Дальнейшее увеличение интервала приводило к снижению трансэпителиального электрического сопротивления (р<0.01) по сравнению с контрольной группой животных, которое достигало наименьшего значения к 10-ти часовому интервалу. Дальнейшее увеличение периода после кормления не сопровождалось уменьшением сопротивления и даже при самом длительном перерыве в 20 ч в альвеолах всегда регистрировали трансэпителиальное сопротивление не ниже 40 кОм. Важным является то, что в альвеолах, в которых отсутствовала трансэпителиальная разность потенциалов, регистрировали трансэпителиальное сопротивление от 40 до 70 кОм. Результаты статистического анализа показали, что между значениями трансэпителиального сопротивления и трансэпителиальной разности потенциалов у животных непосредственно взятых из гнезда в опыт, а также при интервалах после кормления детенышей в 2.5, 5 и 10 ч существует достоверная корреляция (г=+0.5; р<0.01;п=124). Между теми же показателями при интервалах в 10, 15 и 20 ч такая зависимость исчезала (г=+0.1; р>0.01 ;п=42).

Таким образом, динамика изменения трансэпителиального потенциала и трансэпителиального сопротивления оказалась различной. Увеличение интервала приводило к постепенному снижению величины потенциала до нулевых значений. Снижение трансэпителиального сопротивления в этих условиях происходило только до определенной величины, оставаясь в дальнейшем без заметных изменений. Высокая и постоянная величина трансэпителиального сопротивления в альвеолах молочной железы мыши после продолжительного интервала после кормления свидетельствует, что не происходит разрушения структуры плотных • контактов и нарушения целостности секреторного эпителия. Поэтому транспорт ионов, в частности натрия, о возможности которого сообщают другие авторы (Linzell, Peaker, 1971; Neville et al., 1981; Кислякова, Леонтьев, 1987) по межклеточной жидкости в полость альвеолы

нельзя рассматривать как основной путь поступления натрия в полость альвеол и как шунтирующий способ изменения трансэпителиального потенциала при повышении давления в ней.

В этом плане постепенное снижение трансэпителиальной разности потенциалов при длительных перерывах в кормлении указывает на существование комплекса изменений в функционировании секреторных клеток, направленное на выравнивание электрохимического градиента между цитоплазмой секреторных клеток, внеклеточной жидкостью и молоком. Изменение электрохимического градиента связано с изменением механизмов формирования секрета, включающим в себя поддержание осмотического давления, а также изменением электрического и концентрационных градиентов.

Проведенные исследования показали, что увеличение периода после кормления детенышей более 2.5 ч приводило к прогрессивному снижению величины трансэпителиальной разности потенциалов в альвеолах молочной железы.

Одновременно с изменением трансэпителиальной разности потенциалов при действии окситоцина происходило изменение трансэпителиального сопротивления. Во всех группах исследуемых животных при аппликациях окситоцина наблюдали три типа реакций изменения трансэпителиального сопротивления: реакция уменьшения сопротивления, реакция увеличения сопротивления, а также двухфазная реакция. В последнем случае сначала регистрировали кратковременное снижение сопротивления (в течение 3 - 5 с), а затем - его возрастание. Соотношение этих типов реакций менялось в зависимости от интервала после кормления детенышей.. Через 2.5 ч, когда регистрировали наибольшее по амплитуде изменение трансэпителиального потенциала и происходило увеличение сократительной реакции при аппликации окситоцина, все изменения трансэпителиального сопротивления были двухфазными. Через 5 ч наблюдали значительный рост реакций, в которых зафиксировали уменьшение трансэпителиального сопротивления. При дальнейшем увеличении интервала можно выделить две тенденции. Во-первых, происходило постепенное увеличение реакций, в которых регистрировали увеличение сопротивления. Через 20 ч эти реакции составляли 92%. Во-вторых, снижалось количество реакций, в которых регистрировали снижение величины сопротивления. Двухфазные реакции оставались приблизительно в одинаковых пропорциях.

Следует отметить, что величина изменений трансэпителиального сопротивления также зависела от интервала после кормления. Так, среди реакций уменьшения трансэпителиального сопротивления отмечали ее постепенной снижение по мере увеличения срока отсаживания детенышей. В противоположность этому, величина сопротивления возрастала в той группе реакций, которые демонстрировали увеличение сопротивления. Величина реакций в двухфазных ответах не имела резких отличий между группами исследуемых животных.

Исследование реакций миоэпителиальных и секреторных клеток на окситоцин в условиях применения ионов гадолиния. Использование физиологического раствора, содержащего ионы Gd3+ в концентрациях 1 и 10 мкмоль/л в течение 2-5 мин, не оказывало влияния на параметры и характер изменения трансэпителиальной разности потенциалов и трансэпителиального сопротивления при аппликации окситоцина. При использовании Gd3+ в концентрации 50 мкмоль/л в течение 2.5 мин регистрировали уменьшение параметров ответной реакции в альвеолах при аппликации окситоцина по сравнению с контрольными значениями. Изменение трансэпителиальной разности потенциалов после аппликации окситоцина в условиях применения Gd3+ в концентрации 50 мкмоль/л была меньше на 5±1 мВ (р<0.01, п=15) среднего значения контрольной реакции, равного 12±1 мВ.

Было также установлено, что ионы Gd в концентрации 50 мкмоль/л вызывали уменьшение и блокирование сократительных реакций миоэпителиальных клеток в ответ на аппликации окситоцина. Скорость наступления полной блокады сократительной реакции была различной, но к 5 мин сокращение миоэпителия полностью прекращались. Влияние Gd3t в концентрации 50 мкмоль/л на сократительные реакции миоэпителиальных клеток имело длительный характер. Через 18-20 мин после начала отмывания Gd3+ физиологическим раствором в отдельных опытах можно было зарегистрировать слабые сократительные реакции миоэпителиальных клеток, которые никогда не достигали исходного уровня.

Исследования показали, что в контрольных опытах, а также при предварительном применении Gd3+ в концентрациях менее 50 мкмоль/л регистрировались обычные двухфазные (уменьшения и последующего возрастания) изменения трансэпителиального сопротивления. В тех случаях, когда сократительные реакции миоэпителиальных клеток при действии окситоцина оказывались заблокированными под влиянием Gd3+, фаза увеличения трансэпителиального сопротивления не регистрировалась. В то же самое время сохранялась фаза уменьшения трансэпителиального сопротивления. Результаты проведенных исследований подтверждают наличие в плазматической мембране секреторных клеток молочной железы механочувствительных ионных каналов. Механочувствительность клеток альвеол молочной железы является одним из местных механизмов регуляции деятельности молочной железы.

ВЫВОДЫ

1. В период лактации самки лабораторных мышей проводят большую часть суток в гнезде с прикрепленными к соскам детенышами. Продолжительность отдельного периода кормления составляет 53±2 мин. Длительная стимуляция сосков молочной железы детенышами периодически вызывает кратковременный выброс окситоцина в кровь. Его концентрация в плазме крови самки повышается с 5 до 32 пг/мл. Для развития первого рефлекса выведения молока у мышей требуется более

длительная (12+0.8 мин) стимуляция рецепторов соска, чем последующих (5+1 мин).

2. Возрастание количества молока в железе мышей при увеличении интервала между кормлениями приводит к снижению интенсивности синтетических процессов в секреторном эпителии. Включение Н3-лейцина в ткань молочной железы через два часа составляет 31±6 10"1 импмГ1-мкл"\ через шесть часов - 16±2-10"1 имп> мг'1-мкл"1. Изопротеренол и фенилэфрин не влияют, а окситоцин, вызывает достоверное уменьшение (на 60%) количества Н3-лейцина в секреторных клетках молочной железы.

3. Увеличение интервала до 20 ч после кормления детенышей у животных с незначительной по объему емкостной системой (лабораторные мыши) не приводит к возрастанию давления в соске молочной железы, однако, сократительная реакция миоэпителиальных клеток альвеол под влиянием окситоцина усиливается.

4. Сокращение миоэпителиальных клеток при действии окситоцина представляет собой градуальную реакцию с быстрым фронтом нарастания и длительным периодом спада. Длительность реакции равняется 40±0.3 с, время сокращения до максимума - 9±0.07 с. При аппликациях окситоцина с частотой, близкой к естественной ритмике рефлекса выведения молока, параметры сократительной реакции миоэпителиальных клеток остаются без изменений и не создают ограничений для процесса образования молока.

5. (5-адреномиметик изопротеренол вызывает дозозависимое выделение белка из эксплантатов ткани молочной железы, которое блокируется при предварительном применении блокатора [5-адренорецепторов пропранолола. При этом количество секреторных гранул в апикальной зоне клеток резко снижается, количество мицелл казеина в молоке в полости альвеол возрастает.

6. Окситоцин, а-адреномиметик фенилэфрин и (5-адреномиметик изопротеренол вызывают дозозависимые изменения трансэпителиальной разности потенциалов в молочной железе у лактирующих животных, что свидетельствует о их влиянии на ионную проницаемость секреторного эпителия альвеол. При действии окситоцина и фенилэфрина происходит рост давления в железе. Изопротеренол в физиологических и высоких концентрациях не вызывает увеличения давления секрета в молочной железе.

7. Трансэпителиальная разность потенциалов в альвеолах молочной железы повышается с исходных 18+1 до 25±1 мВ через 2.5 ч после прекращения кормления детенышей, затем снижается до нулевых значений через 15-20 ч. Трансэпителиальное сопротивление увеличивается с 114±1 до 131 ±4 кОм через 2.5 ч после прекращения кормления детенышей, а затем оно снижается до 70±2 кОм (в период от 5 до 15 ч) и не изменяется при возрастании интервала до 20 ч. Динамика изменения трансэпителиальной разности потенциалов и трансэпителиального сопротивления свидетельствует о том, что увеличение интервала после

кормления детенышей не приводит к нарушению плотных межклеточных контактов и целостности секреторного эпителия альвеол.

8. Через 2.5 ч после прекращения кормления детенышей амплитуда и длительность реакции повышения трансэпителиальной разности потенциалов при действии окситоцина достигает наибольших значений, затем она прогрессивно снижается. При этом происходит замещение реакций уменьшения трансэпителиального сопротивления (66%) и его двухфазных изменений (34%) на реакции возрастания сопротивления (до 92%) при одновременном увеличении амплитуды трансэпителиального сопротивления. Таким образом, увеличение интервала после кормления детенышей приводит к постепенному снижению ионной проницаемости секреторного эпителия альвеол.

9. Блокаторы механоактивируемых ионных каналов (ионы гадолиния, Gd3+) при увеличении их концентрации в окружающей среде с 10 до 100 мкмоль/л вызывают прогрессивное угнетение развития трансэпителиальной разности потенциалов и сократительных реакций миоэпителиальных клеток в альвеолах. Механоактивируемые ионные каналы могут участвовать в регуляции ионной проницаемости плазматических мембран секреторных и миоэпителиальных клеток, в образовании и выведении секрета в молочной железе.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Толкунов. Ю.А., Марков А.Г. Адренорецепторная организация секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы. Л.: Наука, 1981. С.186-190.

2. Марков А.Г. Участие катехоламинов в периферических механизмах торможения рефлекса выведения молока. Тез. докл. VI Всесоюз. симпоз. физиол. и биохимии лактации. М.:1982. С.11-112.

3. Толкунов Ю.А., Марков А.Г. Влияние адренергических веществ на реакции секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы. Вестник ЛГУ. 1983. вып.З, № 21. С.52-57.

4. Толкунов Ю.А. Марков А.Г. Роль а- и р-адреномиметических воздействий в регуляции функций секреторных и миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы. Тез. докл. VII Всесоюз. симпоз. физиол. и биохимии лактации. М.: 1986. Ч. 2. С. 9-10.

5. Попов С.М., Толкунов, Ю.А., Балакина Г.Б. и др. Современное состояние проблемы клеточных механизмов регуляции секреции молока. Тез. докл. XV Всесоюзн. физиол. общества им. И.П. Павлова. 1987. Кишинев. Наука. Т.2. С. 588.

6. Марков А.Г. Влияние а- и p-адреномиметиков на процесс выведения молока у коров. Тез. докл. VII Всесоюз. симпоз. физиол. и биохимии лактации. М.: 1986. Ч. 2. С. 7-9.

7. Марков А.Г. Влияние катехоламинов, действующих через [5-адренорецепторы, на процесс выведения молока у коров. Сельскохозяйственная биология. 1988. №2, С.85-88.

8. Марков А.Г., Мильке Г. Исследование роли а- и р-адренорецепторов в регуляции процесса выведения молока у коров. Arch. Exper. Vet. Med. Leipzig. 1988. В. 48, № 5, S. 660-668.

9. Марков А.Г., Рюле Х.-И., Бруст П. Сравнение интенсивности включения Н3-лейцина в различные участки молочной железы. Физиол. журн. СССР. 1988. Т. 74, № 3. С. 435-438.

10. Марков А.Г. Мильке Г. Физиологический эффект а-адреномиметика мезатона на молоковыделительную реакцию у коров. Сельскохозяйственная биология. 1989. № 2. С.127-129.

11. Марков А.Г. Ландграф Р. Особенности поведения детенышей при сосании. Уровень окситоцина в крови самок при кормлении. Физиол. журн. СССР. 1989. Т. 75, № 8. С. 1089-1094.

12. Марков А.Г., Мильке Г. О механизме действия катехоламинов на процесс выделения молока. Сельскохозяйственная биология. 1990. № 6. С. 79-83.

13. Толкунов Ю.А. Марков А.Г. Взаимодействие медиаторов вегетативной нервной системы в регуляции функций секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы. Тез. докл. V Всесоюз. конф. «Физиология и биохимия медиаторных процессов». М., 1990. С.301.

14. Марков А.Г. Уменьшение включения Н3-лейцина в секреторные клетки молочной железы мыши при введении экзогенного окситоцина. Тез. докл. VIII Всесоюз. симпоз. физиол. и биохимии лактации. М., 1990. Ч. 2. С. 9-10.

15. Алексеев Н.П. Марков А.Г., Толкунов Ю.А. Узбеков В.В. Трансэптелиальная разность потенциалов в молочной железе у коз и ее изменения при ручном доении, введении окситоцина и катехоламинов. Тез. докл. VIII Всесоюз. симпоз. физиол. и биохимии лактации. М., 1990. Ч. 2. С. 14-15.

16. Марков А.Г. Мильке Г., Клопциг У. Увеличение давления в молочной железе коров при введении окситоцина и |5-адреномиметика. Тез. докл. VIII Всесоюз. симпоз. физиол. и биохимии лактации. М., 1990. Ч. 2. С. 21-22.

17. Mielke Н„ Markov A.G., Furll В., Kaskous S., Ponce P. Untersuchungen zur Wirkung des ß-Rezeptoragonisten Isoprenalin auf die Milchdrusenalveolen des laktierenden Rindes unter besonder Berücksichtigung seines Eihflusses auf die Sekretionsfunktion der Drusenepithelzellen. Mh. Vet. Med. 1991. B.46, H. 12. S. 427-430.

18. Марков А.Г. Изучение продолжительности кормлений и перерывов между ними у мышей в период установившейся лактации. Физиол. журн. СССР. 1991. Т. 77, № 8. С. 142-148.

19. Марков А.Г., Мильке Г., Клопциг У. Изменение давления в вымени коров при действии окситоцина и изопротеренола. Доклады ВАСХНИЛ. 1992. № 3. С. 31-35.

20. Марков А.Г. Сократительная реакция миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы мыши при многократном применении окситоцина. Физиол. журн. 1992. Т. 78, № 6. С. 105-112.

21. Alekseev N.P., Markov A.G., Tolkunov Y.A. Trancepithelial potential difference-in the goat mammary gland and its change during hand milking and administration of oxytocin and catecholamines. J. Dairy Reasearch. 1992. V.59. P. 469-478.

22. Markov A.G., Ruhle H.-J. Influence of exogenous oxytocin on labelling of secretory epithelium of mouse mammary gland by H3-leucine, evidenced by autoradiography. Exp. Clin. Endocrinol. 1992. V.100, № 3, P. 112-116.

23. Марков А.Г., Рюле Х.-И., Мильке Г. Включение Н3-лейцина в секреторные клетки молочной железы мышей при действии адреномиметиков. Цитология. 1993. Т. 35, №4. С. 81-86.

24. Алексеев Н.П., Марков А.Г., Толкунов Ю.А., Узбеков В.В. Изменение трансэпителиальной разности потенциалов в молочной железе коз при ручном доении, введении окситоцина и катехоламинов. Доклады РАСХН. 1993. № 2. С. 58-63.

25. Толкунов Ю.А., Марков А.Г. Роль гипоталамических нанопептидов в регуляции вегетативных функций: лактация. В кн.: Нейроэндокринология. 1994. СПб. ВИР. 4.2. С.248-258.

26. Марков А.Г. Роль окситоцина и бета-адреномиметических воздействий в регуляции деятельности секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы в период лактопоэза. Тез. докл.науч. конф. «Нейроэндокринология-95». 1995. СПб. С.83.

27. Марков А.Г., Рыбальченко О.В. Влияние изопротеренола на экструзию белка из эксплантатов ткани молочной железы мыши. Цитология. 1996. Т.6. С. 48-55.

28. Tolkunov Y.A., Markov A.G. Integrity of the secretory epithelium of the lactating mouse mammary gland during extended periods after suckling. J. Dairy Research. 1997. V. 64. P. 39-45.

29. Толкунов. Ю.А., Марков А.Г. Исследование реактивности и механочувствительности секреторных и миоэпителиальных клеток в альвеолах молочной железы мыши. Российск. физиол. журн. 1997. Т.83, № 8. С. 99-105.

30. Магазаник Jl.rvMapKOB А.Г., Наточин Ю.В. Механизмы модуляции сигналов в возбудимых и невозбудимых клетках. Тез. докл. науч конф., посвящен. 100-летию каф. норм, физиол. СПбГМУ. СПб. 1998. С. 74-75.

31. Марков А.Г. Исследование целостности секреторного эпителия альвеол молочной железы. Тез. докл. XVII съезда Всеросс. физиол. общества им. И.П. Павлова. Ростов-на-Дону. 1998. С. 498-499.

32. Толкунов Ю.А., Балакина Г.Б., Марков А.Г. Исследование механизмов выведения секрета из молочной железы мышей. Российск. физиол. журн. 2000. Т. 86, № 2. С. 196-201.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Марков, Александр Георгиевич

Введение

Глава 1 Основные объекты и методические приемы, используемые в диссертации

1.1 Объекты исследований

1.2 Радиоиммунное определение окситоцина в крови самок мышей

1.3 Введение радиоактивной метки и измерение радиоактивности

1.3.1 Авторадиографическое исследование включения Н3-лейцина в секреторные клетки молочной железы мышей

1.3.2 Измерение радиоактивности образцов жидкостным сцинтилляционным методом

1.3.3 Измерение радиоактивности фракции цитозольных белков

1.4 Электромеханический способ регистрации сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы

1.5 Электрофизиологические методики изучения функций секреторных клеток альвеол молочной железы

1.5.1 Регистрация трансэпителиальной разности потенциалов в альвеолах молочной железы мышей

1.5.2 Регистрация трансэпителиальной разности потенциалов в молочной железе коз

1.5.3 Измерение трансэпителиального электрического сопротивления в альвеолах молочной железы мышей

1.6 Измерение давления в молочной железе мышей и коз

1.7 Исследование выделения белка из эксплантатов ткани молочной железы

1.8 Изучение выделения молока из молочной железы коров

1.9 Состав растворов и концентрации физиологически 43 активных веществ

1.10 Статистическая обработка результатов исследований

Глава 2 Особенности процесса вскармливания потомства у животных с незначительной по объему емкостной системой

2.1 Литературные предпосылки

2.2 Специфические методические особенности экспериментов

2.2.1 Наблюдение за поведением самок и детенышей в период кормления

2.2.1.1 Определение продолжительности кормлений и перерывов между ними

2.2.1.2 Поведение мышат при сосании

2.2.2 Определение концентрации окситоцина в крови самок

2.2.3 Регистрация динамики рефлексов выведения молока

2.2.4 Измерение веса потомства

2.2.5 Включение Н3-лейцина в ткань молочной железы

2.3 Результаты исследований

2.3.1 Изучение продолжительности кормлений и перерывов между ними у мышей

2.3.2 Особенности поведения детенышей при сосании. Уровень окситоцина в крови самок при кормлении потомства

2.3.3 Изучение динамики рефлексов выведения молока

2.3.4 Изменение веса мышат при различной продолжительности кормления

2.3.5 Сравнение интенсивности включения Н3-лейцина в ткань молочной железы мышей через различные интервалы после прекращения кормления 90 Заключительные замечания

Глава 3 Исследование влияния окситоцина на функции секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы

3.1 Литературные предпосылки

3.2 Специфические методические особенности экспериментов

3.2.1 Оценка количества Н3-лейцина в секреторных клетках и ткани молочной железы мышей при действии окситоцина

3.2.2 Регистрация сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мышей

3.2.3 Регистрация сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мышей при многократном применении окситоцина

3.2.4 Регистрация трансэпителиальной разности потенциалов и давления в молочной железе коз

3.3 Результаты исследований

3.3.1 Влияние окситоцина на внутриклеточный транспорт Н3-лейцина в секреторных клетках молочной железы мышей

3.3.2 Исследование сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мышей при аппликации окситоцина

3.3.3 Сократительная реакция миоэпителиальных клеток молочной железы мышей при многократном применении окситоцина

3.3.4 Влияние ручного доения и окситоцина на трансэпителиальную разность потенциалов и давление в молочной железе коз 133 Заключительные замечания

Глава 4 Роль катехоламинов в регуляции функций секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы

4.1 Литературные предпосылки

4.2 Специфические методические особенности экспериментов

4.2.1 Оценка количества Н3-лейцина в секреторных клетках и ткани молочной железы мышей при действии изопротеренола и фенилэфрина

4.2.2 Оценка количества Н3-лейцина в секреторных клетках и ткани молочной железы мышей при действии окситоцина на фоне повышенной концентрации изопротеренола

4.2.3 Определение концентрации белка в переживающей культуре клеток молочной железы мышей

4.2.4 Исследование влияния катехоламинов на процесс выделения молока у коров

4.2.4.1 Оценка выведения молока при инъекции адреналина, норадреналина, изопротеренола и фенилэфрина

4.2.4.2 Оценка выделения молока при инъекции изопротеренола на фоне максимального опорожнения молочной железы коров

4.2.4.3 Оценка выведения молока и содержание в нем жира при инъекции изопротеренола

4.3 Результаты исследований

4.3.1 Влияние изопротеренола и фенилэфрина на включение Н3-лейцина в секреторные клетки молочной железы мышей

4.3.2 Влияние изопротеренола на количество Н3-лейцина в секреторных клетках молочной железы мышей при действии окситоцина

4.3.3 Исследование влияния изопротеренола на экструзию белка из эксплантатов ткани молочной железы мышей

4.3.4 Исследование трансэпителиальной разности потенциалов и давления в молочной железы коз при действии адреналина, норадреналина, изопротеренола и фенилэфрина

4.3.5 Изучение процесса выделения молока у коров при введении адреналина, норадреналина, изопротеренола и фенилэфрина

4.3.6 Исследование выделения молока при действии изопротеренола на фоне максимального опорожнения молочной железы коров

4.3.7 Влияние изопротеренола на количество молока и содержание в нем жира у коров 201 Заключительные замечания

Глава 5 Изучение целостности альвеол и механо-чувствительности миоэпителиальных и секреторных клеток при накоплении и выведении секрета в молочной железе мышей

5.1 Литературные предпосылки

5.2 Специфические методические особенности экспериментов

5.2.1 Методические подходы для определения состояния альвеолярно-протоковой системы молочной железы мыши

5.2.1.1 Регистрация через различные интервалы после кормления сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол при аппликациях окситоцина

5.2.1.2 Измерение давления в молочной железе мышей при различных интервалах после кормления

5.2.2. Оценка реакций секреторных клеток и целостности железистого эпителия молочной железы мышей через различные интервалы после кормления

5.2.3 Регистрация реакций миоэпителиальных и секреторных клеток при применении ионов гадолиния

5.3 Результаты исследований

5.3.1 Изучение состояния альвеолярно-протоковой системы молочной железы мышей через различные интервалы после кормления

5.3.1.1 Изменение параметров сократительной реакции миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы мышей

5.3.1.2 Исследование величины давления в молочной железе мышей

5.3.2 Исследование реакций секреторных клеток и целостности секреторного эпителия молочной железы мышей через различные интервалы после кормления

5.3.3 Исследование реакций миоэпителиальных и секреторных клеток на окситоцин в условиях применения ионов 254 гадолиния

Заключительные замечания

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы образования секрета в молочной железе"

Актуальность проблемы. В процессе эволюционного развития часть позвоночных животных приобрела способность к кормлению потомства секретом экзокринных желез. Дальнейшее развитие этих структур привело к возникновению специализированных желез, функцией которых является синтез и выведение питательной жидкости - молока. Наличие молочных желез стало характерным признаком большей части животных одного из классов позвоночных.

Лактация характерна для всех млекопитающих, обитающих в самых разнообразных условиях. Видовые особенности рождения детенышей, периодичности вскармливания, строения молочной железы могут обуславливать специфику механизмов образования и выведения молока у различных видов животных. Изучение этих особенностей целесообразнее проводить на тех видах, которые существенно различаются по характеру вскармливания потомства. В связи с этим, может представлять интерес сравнение некоторых представителей мелких грызунов (мыши, крысы) и жвачных животных, в частности коров и коз. В первую очередь, они отличаются по степени зрелости рожденных детенышей и периодичности их кормления. Различие в характере кормления коррелирует с особенностями анатомического строения, а также с отличием физиологических механизмов процесса вскармливания.

Отличие в регуляции физиологических механизмов вскармливания отчетливо проявляются в активности различных отделов центральной нервной системы. У коров в ответ на экстерорецептивные сигналы формируется условный рефлекс выведения молока. Его проявление зависит от типа высшей нервной деятельности животных (Кокорина, 1982; 1990; Brukmaier et al., 1996). Выведения молока в ответ на условные сигналы у крыс не обнаружено. Реализация рефлекса выведения молока у них связана с появлением на энцефалограмме медленных волн, характерных для сна (Voloschin, Tramezzani, 1979).

Молочная железа является сложным органом, выполняющим одновременно и секреторную, и выделительную функции. Оба эти процесса тесно связаны, переплетены и разграничение их не всегда возможно (Грачев, 1964). Основу молочной железы составляют секреторные клетки, в которых происходит синтез основных органических компонентов секрета. Накопление синтезированных продуктов в структурах емкостной системы жвачных животных приводит к снижению синтетической деятельности железистого эпителия (Rennison et al., 1993; Wilde et al., 1996). Выведение секрета является необходимым процессом, обеспечивающим функционирование железистых образований. Продвижение из полости альвеол в протоковую систему жидкости, имеющей значительную вязкость, обусловлено сокращением миоэпителиальных клеток молочной железы. Образование молока в альвеолах представляет собой совокупность процессов, обеспечивающих синтез органических компонентов молока, формирование его ионного состава и выведение в протоковую систему.

В регуляции выведения секрета из молочной железе главная роль принадлежит гормону задней доли гипофиза окситоцину и медиаторам вегетативной нервной системы. Наличие рецепторов окситоцина в молочной железе было показано работами группы М. Солофф и соавт. (Soloff et al., 1972,1975,1979; Soloff, Swartz, 1973; Muller et al., 1989). Окситоцин вызывает сокращение миоэпителиальных клеток, которые оказывают механическое давление на альвеолу и, тем самым, способствуют продвижению секрета по протоковой системе наружу (Moore et al., 1987; Zavizion et al., 1992a). Электрофизиологические эксперименты позволили обосновать возможность прямого действия окситоцина на секреторные клетки (Грачев и др., 1979; Толкунов, 1993). Такое представление согласуется с данными о стимуляции окситоцином экструзии секреторных гранул из железистого эпителия молочной железы (Попов, 1989,1994). Уровень окситоцина в плазме крови коров при доении, независимо от индивидуальных особенностей животных, остается повышенным в течение всего срока воздействия (Mayer et al., 1984; Bruckmaier et al., 1992). Выделение окситоцина в кровь у самок крыс происходит периодически, несмотря на длительное воздействие детенышей на соски (Higuchi et al., 1986). Однако некоторые аспекты влияния окситоцина на миоэпителиальные клетки и на деятельность секреторного эпителия остаются не изученными. Необходимо исследование внутриклеточного транспорта секреторного продукта как начального этапа реализации ряда физиологических процессов, направленных на образование секрета в молочной железе. В связи с этим, требуются дальнейшие исследования по анализу параметров сократительной реакции миоэпителиальных клеток. В частности, для выяснения факторов, определяющих ритмику осуществления рефлексов выведения молока, подлежит изучению лабильность миоэпителиальных клеток при многократном применении окситоцина.

Радиоиммунное определение концентрации окситоцина в плазме крови коров при доении свидетельствует о наличии животных, у которых концентрация гормона в крови в этот период не изменялась (Bruckmaier et al., 1992). Однако афферентный нервный путь к гипоталамусу у этих животных оставался интактным, так как при стимуляции сосков концентрация пролактина в крови этих животных увеличивалась. Нарушения образования окситоцина в нейросекреторных клетках гипоталамуса также не происходило, поскольку растяжение влагалища вызывало значительное увеличение концентрации окситоцина в крови (Bruckmaier et al., 1992). Поведенческая оценка вскармливания в этих условиях показывает, что происходит нормальное развитие потомства. Обращают на себя внимание результаты, полученные на двух породах овец, которые имели одинаковый удой. У первой из них во время доения происходило значительное увеличение концентрации окситоцина в крови, у второй - такое повышение отсутствовало или происходило очень медленно и незначительно (Bruckmaier et al., 19976). Такие результаты позволили некоторым исследователям ставить вопрос так: действительно ли окситоцин необходим для выведения молока, в частности, у коров? (Lefcort, Akers, 1983).

Увеличение количества регуляторных факторов служит одним из важных механизмов, с помощью которых достигается повышение эффективности работы функциональных систем (Наточин, 1984). Адаптация деятельности молочной железы к потребностям детенышей и условиям среды осуществляется при участии симпатоадреналовой системы (Lefcourt, Akers, 1984; Blum et al., 1989; Hammon et al., 1994). Широкое распространение получило представление о том, что катехоламины оказывают тормозное влияние на деятельность молочной железы (Lefcourt, Akers, 1984; Gorewit, Aromando, 1985; Shu-Lan Song et al.,

1988). Увеличение активности симпатоадреналовой системы вызывает блокаду рефлекса выведения молока, в том числе, блокирование выведения окситоцина из нейрогипофиза и его действия на клетки альвеол молочной железы (1ейюш1 е! а1., 1997). В то же время катехоламины стимулируют адренорецепторы гладкомышечных клеток протоков и вызывают их сокращение (Вгиктаюг, В1ит, 1998).

Вывод о сугубо тормозном влиянии катехоламинов на процесс выведения молока был сформулирован, исходя из опытов по введению веществ в общий круг кровообращения и использованию в них интегральных показателей оценки деятельности молочной железы (Вгискплаюг а1., 1991; Вгискта1ег е! ак, 1997а), которые не могли дать представления о характере влияния катехоламинов на секреторные и миоэпителиальные клетки. Создавая в опытах стрессорные условия, в исследованиях такого направления авторы оставляли без внимания физиологические реакции клеток молочной железы при естественном повышении уровня катехоламинов в плазме крови. Кроме этого, положение о том, что приспособление молочной железы к различным условиям среды связано только с торможением ее функций, находится в определенном противоречии с представлением об адаптационно-трофическом влиянии симпатоадреналовой системы на функционирование различных органов (Орбели, 1949).

Альвеола представляет собой комплекс секреторных и миоэпителиальных клеток, находящихся во взаимодействии между собой и с другими клеточными элементами в период развития (1ау|2'юп е1 а1., 1992Ь; Оотт е* а1., 1997) и лактопоэза (Попов, 1994; Скопичев, 1994). Следует учесть простые пространственно-временные характеристики взаимодействия этих клеток. Во-первых, выделение секрета из железы происходит периодически. Накопление секрета в молочной железе, по-видимому, приводит к увеличению гидростатического давления жидкости, которое оказывает механическое воздействие на структуры молочной железы и, в частности, на секреторные и миоэпителиальные клетки.

Секреторные клетки молочной железы, расположенные по внутренней поверхности альвеолы, видимо, испытывают на себе механическое воздействие при накоплении молока в полостях альвеол. Секреторные клетки, испытывая деформацию под действием этих сил, в свою очередь могут оказывать влияние на миоэпителиальные клетки. С другой стороны, при сокращении миоэпителиальных клеток, напротив, происходит существенное механическое воздействие на секреторные клетки.

Все вышесказанное позволяет предполагать существование на клеточном уровне механизмов саморегуляции, которые обладают известной самостоятельностью и, в тоже время, включены в более высокие уровни регуляции, связанные с системным действием биологически активных веществ. Механочувствительность может играть роль местного фактора регуляции процесса выведения молока. Данное взаимодействие может проявляться в усилении ответных реакций на центральные стимулы. Во-вторых, данное свойство может обеспечивать получение молока при взаимодействии мать-детеныш. Поведение детеныша, его поведенческая активность может оказывать массированное механическое воздействие на железу, обеспечивая выведение и получение молока.

Цель исследования

Целью работы явилось изучение у животных разных видов пусковых, модулирующих и местных механизмов регуляции образования секрета в молочной железе.

В связи с этим были поставлены следующие основные задачи: 1. Определить у животных с незначительной по объему емкостной системой характеристики процесса вскармливания потомства, такие как продолжительность кормления детенышей, особенности поведения детенышей при получении молока, концентрация окситоцина в плазме крови самки, изменение веса потомства в течение вскармливания и интенсивность синтетических процессов при накоплении секрета в полости альвеол.

3. Проанализировать роль разных типов адренорецепторов в регуляции синтеза, транспорта и экструзии секрета из железистых клеток молочной железы, а также в изменении электрических процессов в альвеолах и внутрижелезистого давления в процессе образования молока.

Научная новизна результатов

Впервые на животных с незначительной по объему емкостной системой (на примере лабораторных мышей) проведено длительное исследование процесса вскармливания детенышей, в результате чего показано, что процесс вскармливания занимает у самки большую часть суток и состоит из повторяющихся периодов (от 30 до 60 мин) кормления. Выяснено, что при кормлении детенышей происходит регулярное кратковременное повышение уровня окситоцина в крови самок с интервалом в 4-5 мин в течение этого периода. Показано, что возрастание интервала между кормлениями сопровождается снижением синтеза белков в секреторных клетках молочной железы.

Установлено, что сократительная реакция миоэпителиальных клеток характеризуется быстрой фазой развития сокращения (8 с) и медленной фазой расслабления (31 с). Миоэпителиальные клетки способны к сокращению с большей частотой, чем та, с которой происходит осуществление рефлекса выведения молока в естественных условиях.

Впервые установлено, что активация (3-адренорецепторов секреторных клеток вызывает экструзию содержимого секреторных везикул в эксплантатах ткани молочной железы. Этот эффект увеличивается с возрастанием концентрации агониста и угнетается при блокаде (3-адренорецепторов пропранололом. Стимуляция изопротеренолом вызывает исчезновение везикул из секреторных клеток железы и увеличение содержания мицелл казеина в секрете, находящемся в полости альвеол.

Впервые показано, что применение (3-адреномиметика вызывает выведение молока из альвеолярной части молочной железы. Обнаружено, что влияние изопротеренола на железистый эпителий связано с дозозависимым увеличением трансэпителиального потенциала. Применение р-агониста не ведет к торможению образования секрета в молочной железе коров.

Впервые показано, что в молочной железе животных с незначительной по объему емкостной системой длительный перерыв между кормлениями (до 20 ч) не вызывает нарушения целостности секреторного эпителия альвеол. Показано, что блокатор механоактивируемых ионных каналов (ионы гадолиния, Сс!3+) угнетает развитие реакций секреторных и миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы.

Основные положения, выносимые на защиту

Образование молока у животных с незначительной емкостной системой зависит от накопления секрета в полости альвеол. При увеличении интервала между кормлениями целостность альвеол не нарушается, происходит реализация физиологических механизмов, обеспечивающих продвижение и распределение секрета из полости альвеол по системе протоков. Характер вскармливания и выделения окситоцина в кровь, обеспечивает активное выведение секрета из альвеолярной части и поддержание синтеза молока.

Научно-практическая ценность работы

Научно-практическая ценность полученных результатов заключается в раскрытии сложных, взаимосвязанных механизмов образования секрета в молочной железе у различных видов животных. Близкие характеристики основных параметров процесса вскармливания детей у женщин и детенышей некоторых лабораторных животных (мыши) позволяют рассматривать последних как удобную физиологическую модель в изучении различных аспектов лактации у женщин. Выявленные различия в физиологических реакциях клеток альвеол молочной железы у разных видов при активации симпатоадреналовой системы позволяет обосновать мероприятия по предупреждению и снятию лактостаза у женщин и

17 разработки мероприятий по повышению молочной продуктивности сельскохозяйственных животных.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Марков, Александр Георгиевич

Выводы

2. Возрастание количества молока в железе мышей при увеличении интервала между кормлениями приводит к снижению интенсивности синтетических процессов в секреторном эпителии. Включение Н3-лейцина в ткань молочной железы через два часа составляет 31+6 10~1 имп мг"1-мкл"1, через шесть часов - 16±2-10"1 имп- мг"1-мкл"1. Изопротеренол и фенилэфрин не влияют, а окситоцин, вызывает достоверное уменьшение (на 60%) количества Н3-лейцина в секреторных клетках молочной железы.

4. Сокращение миоэпителиальных клеток при действии окситоцина представляет собой градуальную реакцию с быстрым фронтом нарастания и длительным периодом спада. Длительность реакции равняется 40+0.3 с, время сокращения до максимума - 9+0.07 с. При аппликациях окситоцина с частотой, близкой к естественной ритмике рефлекса выведения молока, параметры сократительной реакции миоэпителиальных клеток остаются без изменений и не создают ограничений для процесса образования молока.

5. (3-адреномиметик изопротеренол вызывает дозозависимое выделение белка из эксплантатов ткани молочной железы, которое блокируется при предварительном применении блокатора (3-адренорецепторов пропранолола. При этом количество секреторных гранул в апикальной зоне клеток резко снижается, количество мицелл казеина в молоке в полости альвеол возрастает.

6. Окситоцин, а-адреномиметик фенилэфрин и (3-адреномиметик изопротеренол вызывают дозозависимые изменения трансэпителиальной разности потенциалов в молочной железе у лактирующих животных, что свидетельствует о их влиянии на ионную проницаемость секреторного эпителия альвеол. При действии окситоцина и фенилэфрина происходит рост давления в железе. Изопротеренол в физиологических и высоких концентрациях не вызывает увеличения давления секрета в молочной железе.

7. Трансэпителиальная разность потенциалов в альвеолах молочной железы повышается с исходных 18+1 до 25+1 мВ через 2.5 ч после прекращения кормления детенышей, затем снижается до нулевых значений через 15-20 ч. Трансэпителиальное сопротивление увеличивается с 114±1 до 131+4 кОм через 2.5 ч после прекращения кормления детенышей, а затем оно снижается до 70±2 кОм (в период от 5 до 15 ч) и не изменяется при возрастании интервала до 20 ч. Динамика изменения трансэпителиальной разности потенциалов и трансэпителиального сопротивления свидетельствует о том, что увеличение интервала после кормления детенышей не приводит к нарушению плотных межклеточных контактов и целостности секреторного эпителия альвеол.

Заключение

Целью данного исследования было изучение механизмов образования и выведения молока из молочной железы различных видов животных. Биологическая значимость синтеза и выведения секрета из молочной железы определяется его доступностью для потомства. У любого из видов животных одним из факторов, характеризующих вскармливание, является периодичность кормления. В зависимости от экологических условий, степени зрелости детенышей, а также других факторов, периодичность кормления изменяется в широких пределах.

Результаты проведенного исследования показали, что вскармливание потомства у мышей характеризуется большим количеством периодов кормления в течение суток. Хотя продолжительность периодов кормления и перерывов между ними могли значительно изменяться, средние данные хорошо отражают ритмику вскармливания потомства у мышей. Кормление потомства в среднем продолжалось около 60 мин. Перерыв в кормлении в среднем составлял около 30-50 мин, после которого вновь начинался новый период кормления потомства.

В противоположность мышам, ритмика кормления потомства у жвачных животных (коров и коз) имеет другие параметры. Время доения или получения молока потомством продолжается около 8 мин, а перерывы в кормлении достигают 12 ч. (Mayer et al.,1984; Svennerstren et al.,1990). Несмотря на значительное различие в характере вскармливания, у животных имеется период, в течение которого не происходит активного передвижения секрета в железе.

В этот интервал должны существовать механизмы, направленные на выведение молока из железистого эпителия в протоки молочной железы. Реализация этих физиологических реакций находит свое отражение в том, что цистернальный отдел коров начинает заполняться сразу же после доения (Stelwagen et al.,1996). Известно, что в протоках и цистернах молочной железы депонируется у коров от 17 до 55% молока (Knight,Dewhurst, 1994; Pfeilsticker et al.,1996), а у коз - до 27% от общего удоя (Bruckmaier et al., 1994b).

Результаты проведенных исследований (измерение давления в сосковом канале молочной железы мыши, сократительной реакции миоэпителиальных клеток через различные интервалы после кормления, изменение трансэпителиального сопротивления при действии окситоцина) показывают, что в промежутках между кормлениями в молочной железе мышей происходит накопление молока в полости альвеол и мелких протоках.

Изучение включения 835-метионина в изолированные клетки молочной железы мышей и секреции белков при применении аналогов цАМФ, цГМФ и Са2+-ионофора иономицина свидетельствуют о наличии конститутивной секреции в этих клетках (Turner et al.,1992). Поскольку активного сокращения миоэпителиальных клеток в период между кормлениями не происходит, а секреторные клетки отличаются высокой интенсивностью синтеза лактозы, казеина и других белков молока, необходимо проанализировать возможные механизмы выведения секрета в этот период.

Постоянный синтез органических компонентов молока должен приводить к увеличению объема секреторных клеток. Регуляция объема является важной задачей сохранения гомеостаза клетки, а его увеличение сигналом для запуска реакций, направленных на его уменьшение (Lang et al.,1993а). Одним из основных механизмов регуляции объема клеток является изменение проницаемости плазматической мембраны для различных ионов (Lang et al.,1993a,b). Гипоосмотический стресс, который приводит к увеличению объема клеток, вызывает увеличение количества внутриклеточного кальция в ацинусах молочной железы мышей. Ни демонтаж микротрубочек ппи использовании нокодазола, ни разрушение актина при действии цитохалазина В не блокировали поступление кальция из внеклеточной жидкости при увеличении объема клеток молочной железы. В то же время, применение гадолиния частично ингибировало увеличение концентрации внутриклеточного кальция при гипоосмотическом стрессе (Sudlow,Burgoyne,1997). В опытах по изучению изменения объема железистых клеток слезной железы также установлено, что гипоосмотический стресс вызывает увеличение концентрации внутриклеточного кальция. Изменение объема клеток предотвращалось применением блокаторов Са2+-зависимых К+-каналов (Speake et al.,1998). Синтез органических веществ и накопление их в секреторной клетке может являться причиной механических воздействий на плазматическую мембрану секреторных клеток. В проведенных экспериментах установлено, что секреторные клетки имеют механочувствительные ионные каналы. Можно предположить, что один из механизмов экструзии в период между кормлениями реализуется через вход ионов кальция по механочувствительным ионным каналам секреторных клеток.

Экструзия секрета в период между кормлениями может быть связана с действием физиологически активных веществ, в том числе, как показали проведенные исследования, катехоламинов. Увеличение базального уровня катехоламинов в крови лактирующих животных (Blum et al.,1989; Lefcourt et al.,1997), наличие симпатической иннервации молочной железы (Скопичев,1971) создают условия для влияния катехоламинов на деятельность различных клеток молочной железы, в том числе на функции секреторных клеток. Это подтверждается данными электрофизиологических экспериментов. Аппликация пропранолола, блокирующего ß-адренорецепторы, на отпрепарированную поверхность молочной железы мыши приводит к длительному снижению мембранного потенциала секреторных клеток (Толкунов, 19896).

Как показали наши опыты на переживающей культуре клеток молочной железы, применение изопротеренола вызывает экструзию секреторных везикул в полость альвеол. Кроме этого, опыты на молочной железе коз свидетельствуют, что скорость и амплитуда изменения трансэпителиальной разности потенциалов отражает влияние р-адреномиметика на определяющие для секреторных клеток процессы, в первую очередь, связанные с образованием секрета и перераспределением ионов между клеткой и полостью альвеолы. Наличие медленного компонента в спаде изменения трансэпителиального потенциала, которое особенно четко проявляется при повышении концентрации изопротеренола, может отражать развитие не одного, а нескольких процессов, связанных с изменением трансэпителиальной разности потенциалов. Использование блокаторов транспорта различных ионов, а также замещение ионов в перфузионном растворе при изучении трансэпителиальной разности потенциалов в альвеолах молочной железы мыши показало, что при действии изопротеренола происходит увеличение проницаемости плазматической мембраны секреторных клеток для ионов хлора (Толкунов, 19896). Кроме этого происходит блокирование функций Ма+/К+-ионного насоса в базально-латеральной плазматической мембране секреторных клеток (Толкунов, 19896), поэтому следует ожидать, что одновременно возрастет транспорт натрия и хлора и сопряженный транспорт воды в полость альвеол.

Экструзия секрета в полость альвеол вызывает его перераспределение в емкостной системе молочной железы. Анатомические особенности строения молочной железы жвачных животных и мелких грызунов (мыши, крысы) предопределяют реализацию различных механизмов продвижения и накопления молока. Важную рель в этом процессе может играть симпатоадреналовая система. Катехоламины, обладая одновременно действием на а- и р-адренорецепторы, могут оказывать различное воздействие на гладкомышечные клетки выводных протоков и цистерн. В связи с этим, обращает на себя внимание факт распределения разных типов адренорецепторов в молочной железе коров. Плотность а-адренорецепторов возрастает в крупных выводных протоках и мышцах соска, тогда как в паренхиме молочной железы они почти полностью отсутствуют. В гладкомышечных клетках крупных протоков локализуется наибольшее количество p-адренорецепторов (Hammon et al., 1994).

У видов, имеющих значительную емкостную систему, протоковая. система имеет строение, обеспечивающее эффективное перемещение секретируемого молока в депонирующие емкости органа (Грачев и др.,1984). Проведенные на максимально опорожненном вымени опыты показали, что изопротеренол обеспечивает выведение секрета из альвеолярного отдела молочной железы. Снижение тонуса мелких и средних протоков уменьшает сопротивление продвижению секрета. В средних и крупных протоках молочной железы коров, ввиду их крупного диаметра, секрет может двигаться под влиянием физических факторов. Следовательно, в период между кормлениями у коров происходит значительное по объему пассивное перемещение синтезированных веществ и формирование гидростатического столба жидкости. Воздействие на а-адренорецепторы вызывает сокращение гладкомышечных клеток протоков и тормозит выведение секрета (Lefcourt,1982; Bruckmaier et al., 1997а). В этих условиях, достаточно преодолеть сопротивление сфинктера соска, для того чтобы детеныш получил доступ к секрету молочных желез. Запасенное в цистерне молоко является непосредственно доступным для выделения (Bruckmaier, Blum, 1998).

Молочная железа у грызунов, в частности мышей, не имеет цистерны и, кроме этого, ее расположение (параллельно брюшной4 поверхности) не способствует формированию гидростатического столба жидкости. Следовательно, у этих животных складывается другое исходное состояние для процесса выведения молока. Концентрация катехоламинов в плазме крови крыс, в отличие от коров, увеличивается только в момент кормления детенышей (Clapp et al., 1985; Mena et al., 1991). Кроме этого, выводные протоки у крыс не отличаются значительной плотностью (3-адренорецепторов (Marchetti et al.,1990). Поэтому у мышей не происходит снижения напряжения клеток гладкой мускулатуры протоков, что, в силу их незначительного диаметра, может существенно снижать продвижение секрета в молочной железе, обеспечивая тем самым его задержку в полости альвеол. Результаты по измерению давления в соске молочной железы мыши и амплитуды сократительных реакций миоэпителиальных клеток через различные сроки после прекращения кормления подтверждают, что накопление секрета происходит в полости альвеол и мелких выводных протоках. Таким образом, поддерживается рассредоточенное распределение синтезированных продуктов по всему объему железы, что важно для животного, передвижение которого происходит в контакте брюшной стороны тела с поверхностью земли.

Накопление секрета в полости альвеол приводит к осуществлению ряда других процессов, направленных на адаптацию деятельности молочной железы. Визуальное наблюдение и оперативное повреждение выводных протоков молочной железы мыши свидетельствует о постепенном заполнении их просвета молоком. При длительных интервалах между кормлениями в молочной железе крыс было зарегистрировано спонтанное повышение давления в молочной железе (Poulain,Tasker,1985). Проведенные исследования показали, что миоэпителиальные клетки обладают механоактивируемыми ионными каналами. Наличие таких каналов является характерным для клеток тех структур, которые обладают сократительной активностью. Так, в плазматической мембране гладкомышечных клеток артерий (Setoguchi et al.,1997; Ohya et al.,1998), кардиомиоцитов (Offstad et al.,1997; Tatsukawa et al.,1997) существуют активируемые растяжением механочувствительные каналы. Увеличение давления в альвеолах молочной железы мыши может вызывать растяжение миоэпителиальных клеток и развитие периодических спонтанных сократительных реакций миоэпителиальных клеток альвеол, вызывающих продвижение секрета в протоки.

В связи с полученными результатами по изменению параметров сократительной реакции, а также по включению 3Н-лейцина стоит вернуться к вопросу о влиянии накопления секрета на уровень синтетической деятельности в молочной железе мышей. Как уже указывалось выше, использование различных методик исследования у разных авторов привело к формированию двух точек зрения. Так, на основании результатов о постоянном линейном увеличении массы железы после прекращения кормления, полученных при ее взвешивании, делается вывод об отсутствии торможения синтетической деятельности по мере наполнения молочной железы мышей секретом (Кислякова и др., 1994). В то же время электронномикроскопические и биохимические данные по изучению состояния секреторного эпителия через различные интервалы после кормления показывают, что в клетках происходит торможение синтетической активности (Грачев и др., 1976; Попов, 1989).

В проведенных исследованиях для оценки синтетической деятельности использовали физиологический (изменение параметров сократительной реакции), так и биохимический (включение 3Н-лейцина и синтез белков de novo) показатели. Действительно, как и в цитируемых выше работах, использование разных методов позволяет сделать противоположные выводы. Увеличение параметров сократительной реакции через 2.5 и 20 ч показывает, что накопление секрета происходит на протяжении всего этого периода, что является аргументом в пользу точки зрения об отсутствии снижения уровня синтетических процессов.

Биохимические исследования показали, что происходит уменьшение включения 3Н-лейцина и синтеза белков при увеличении интервала между кормлениями детенышей. Таким образом, накопление секрета в молочной железе снижает интенсивность синтетических процессов. Однако при увеличении периода после кормления детенышей не происходит полного торможения включения меченой аминокислоты и синтеза белка. После первоначального снижения синтетической деятельности через 2 ч ее величина не меняется в течение продолжительного времени. Выявленные изменения в деятельности секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы позволяют считать, что наполнение секретом молочной железы снижает интенсивность синтетических процессов. Однако, полного торможения не происходит и биосинтез может продолжаться на пониженном уровне

Накопление секрета в полости альвеол создает предпосылки для изменения условий реализации функций клеток и их взаимодействия. Возникновение и поддержание трансэпителиальной разности потенциалов и трансэпителиального сопротивления зависит от целостности альвеол и перераспределения ионов (Peaker,1977; Blatchford,Peaker,1988; Толкунов, 1989а,б, 1990). Существование высокой величины трансэпителиального сопротивления в альвеолах молочной железы мыши после продолжительного перерыва в кормлении свидетельствует, что не происходит разрушения структуры плотных контактов и нарушения целостности секреторного эпителия.

Синтез секрета в железистом эпителии может регулироваться аутокринным способом (Wilde et al., 1996). Молоко содержит ингибитор своей собственной секреции, который накапливается в полости альвеолы и действует как аутокринный агент на секреторные клетки. Из молока коз был выделен гликопротеин (относительная молекулярная масса 7600), который синтезируется секреторными клетками молочной железы (Wilde et al., 1995). Определенные фракции молока и этот белок сходным образом ингибировали синтез казеина и лактозы в эксплантатах ткани молочной железы (Wilde et ai., 1987,1995), в культуре клеток молочной железы (Rennison et al.,1993). Инъекция данных фракций или выделенного в просвет альвеол 6enKa(Wilde et al., 1988,1995) вызывала -блокаду секреции молока.

Регуляция деятельности секреторных клеток может происходить при участии клеток, не входящих в состав альвеол. В период лактостаза в молочной железе, в частности при задержке выведения молока, значительно возрастает уровень миграции из крови в ткань лейкоцитов, которые быстро преодолевая слой клеток железистого эпителия, попадают в молоко (Грачев и др.,1978в; Попов,1994). Высокоочищенный препарат миелопероксидазы, которая содержится в основном в нейтрофилах, является тормозным фактором, блокирующим процессы поглощения клетками молочной железы аминокислот и синтез белка (Грачев и др.,1978г; Попов,1994). Вероятным механизмом тормозного действия миелопероксидазы нейтрофилов в молочной железе является усиление свободно-радикального процесса перекисного окисления липидов мембран (Попов, 1986,1994). Сходным образом действует и лактопероксидаза, синтезируемая клетками железистого эпителия (Попов и др.,1981; Попов,1994).

Снижение трансэпителиальной разности потенциалов при длительных перерывах в кормлении указывает на выравнивание электрохимического градиента между цитоплазмой секреторных клеток, внеклеточной жидкостью и молоком. Изменение электрохимического градиента связано с изменением механизмов формирования секрета, включающим в себя поддержание осмотического давления, а также изменением электрического и концентрационных градиентов.

Общей закономерностью для всех млекопитающих является изоосмотичность молока и плазмы крови (Наточин, 1967; Галанцев, Гуляева, 1987). Важную роль в образовании общего осмотического давления молока принадлежит лактозе, поэтому любое изменение концентрации ее в молоке может вызвать нарушение изоосмотичности молока к крови (Закс, 1964). Увеличение концентрации лактозы в молоке с 115 до 135 мМ вызывает снижение трансэпителиальной разности потенциалов в молочной железе коз -20 до -4 мВ (Реакег,1 977а).

Повышение концентрации лактозы в молоке способно привести к развитию компенсаторных изменений других составных частей молока для того, чтобы сохранить осмотическое постоянство. Прежде всего, такая компенсация может происходить за счет электролитов молока. Для большинства млекопитающих характерна обратная зависимость между содержанием в молоке лактозы и концентрацией зольных элементов (Галанцев, Гуляева, 1987). В процессе накопления секрета в молочной железе мыши происходит постепенное снижение суммарного содержания натрия и калий в молоке (Кислякова, Леонтьев, 1991). Перераспределение ионных потоков должно быть направлено на изменение градиента ионов, при котором происходит сдерживание секреции и поддержание изоосмотичности молока по отношению к плазме крови.

Векторность ионных процессов, происходящих в секреторном эпителии альвеол молочной железы, связана с функциональной разницей свойств базально-латеральной и апикальной мембран. Na+/K+-АТФаза локализована в базально-латеральной плазматической мембране. Применение оуабаина со стороны базально-латеральной плазматической мембраны этих клеток вызывает снижение уровня их мембранного потенциала. Введение оуабаина в той же концентрации в полость альвеолы не влияет на уровень мембранного потенциала секреторных клеток (Толкунов, 1989а). Активность Na+/K+-Hacoca является ключевой в поддержании концентрационного градиента для ионов натрия и калия между внутриклеточной и внеклеточной средой. Апикальная мембрана секреторных клеток молочной железы, как следует из электрофизиологических и радиоизотопных исследований, проницаема для К+ и Na+ в обоих направлениях (Linzeil, Peaker,1971; Berga, Neville, 1985; Blatchford, Peaker, 1988). Изучение динамики изменения трансэпителиального потенциала в альвеолах молочной железы коз в зависимости от ионного состава жидкости с апикальной стороны клеток показало, что транспорт ионов Na+ и К+ через апикальную мембрану происходит через неспецифические для этих ионов каналы (Blatchford, Peaker,1988).

Система транспорта натрия имеет стержневое значение в функциональной организации асимметричных клеток (Наточин, 1984). В молочной железе мышей распределение натрия имеет концентрационный градиент от 180 ммоль/л в плазме крови до 33 ммоль/л в молоке, полученном сразу же после кормления (Кислякова, Леонтьев, 1991). Содержание натрия в цитозоле секреторных клеток молочной железы оценивается в 47 ммоль/л (Berga, Neville, 1985). Градиент ионов натрия совпадает с вектором транспортных процессов (от базальной к апикальной части) в секреторных клетках. Учитывая, что транспорт натрия через плотные контакты не происходит, следует допустить, что натрий выделяется в молоко в той же концентрации, в какой он находится в эпителиальных клетках молочной железы. Поскольку Na+/K+-ATOa3a расположена в базальной части секреторных клеток, а апикальная мембрана не имеет ферментов, способных обеспечивать активный перенос натрия в полость альвеолы (Толкуноз, 1989а), основным звеном определяющим в дальнейшем изменение концентрации натрия в молоке следует считать активность Na+/K+-насоса.

В плазме крови лактирующих мышей концентрация калия составляет 5 ммоль/л (Кислякова, Леонтьев, 1987). Внутриклеточное содержание ионов К+ (129 ммоль/л) (Berga, Neville, 1985) превышает содержание этих ионов в молоке (41 ммоль/л) (Кислякова, Леонтьев, 1991), создавая градиент концентрации этих ионов через апикальную мембрану. Анализируя соотношение концентраций калия можно прийти к заключению, что калий не может выделяться в полость альвеол в тех же концентрациях, в каких он находится в эпителиальных клетках молочной железы.

В динамике изменения трансэпителиальной разности потенциалов следует отметить значительное повышение уровня потенциала через 2 час после прекращения кормления. Изменение трансэпителиальной разности потенциалов через различные периоды после прекращения кормления совпадает с существенным изменением концентрации ионов в молоке. В этот момент концентрация натрия снижается до 18 ммоль/л, а концентрация калия возрастает до 46 ммоль/л (Кислякова, Леонтьев, 1991). Снижение концентрации натрия происходит за счет деятельности Ма+/К+-насоса, активность которого одновременно создает предпосылки для повышения концентрации ионов калия в клетке и полости альвеолы.

При дальнейшем увеличении времени после кормления происходит снижение величины трансэпителиальной разности потенциалов. Динамика изменения трансэпителиального потенциала совпадает с увеличением концентрации натрия в молоке и понижением ионов калия (Кислякова, Леонтьев, 1991).

В настоящее время существуют две концепции о механизмах формирования солевого состава молока. Одна из них состоит в признании двухэтапного характера формирования ионного состава (Закс и др., 1965; Кислякова, Леонтьев, 1991, Кислякова, 1996), а другая основывается на представлении о стационарном характере ионных потоков при формировании секрета (ЫигеН, Реакег, 1971; Реакег, 19776; Толкунов, 1993). Изменение транэпителиальной разности потенциалов в альвеолах при различных сроках после прекращения кормления свидетельствует об изменении ионных потоков, происходящих в процессе подготовки к выведению молока, то есть подтверждает наличие определенных этапов в формировании ионного состава секрета.

Заключение о сохранении целостности альвеол при накоплении секрета относится только к молочной железе мышей. По всей видимости, в альвеолах молочной железы коров при увеличении давления происходит нарушение целостности их структуры, так как при высоком исходном давлении изменение трансэпителиальной разности в ответ на применение окситоцина меняется на противоположное. Снижение давления в железе приводит к восстановлению первоначального характера изменения трансэпителиальной разности потенциалов. В молочной железе мышей характер изменения трансэпителиальной разности не менялся ни при каких условиях. Отмечалось только снижение амплитуды реакции. Полученные результаты являются отражением тех различий, которые существуют на клеточном уровне в деятельности молочной железы различных видов животных.

Возможность продвижения секрета в цистерну или выведение его наружу является одним из решающих условий высокой синтетической деятельности секреторных клеток молочной железы. Активное передвижение секрета по протокам и выведение его наружу происходит при увеличении концентрации окситоцина в крови, то есть при кормлении детенышей.

Фоновая концентрация окситоцина и изменение его уровня в крови у мышей при кормлении детенышей были близки к тем концентрациям окситоцина, которые были определены радиоиммунным методом в крови самок разных видов при кормлении потомства. Известно, что у морских свинок уровень гормона при вскарливании потомства повышался с 5 до 40 пг/мл (Robinson, 1986). При сходном базальном уровне гормона у крольчих пиковые значения его в крови достигали 150 пг/мл (Summerlee et al., 1986). В крови женщин фоновый уровень гормона составлял от 2 до 10 пг/мл. Через некоторое время после начала кормления уровень окситоцина достигал 30 - 50 пг/мл (Dawood et al., 1981; McNeilly et al., 1983; Yokoyama et al., 1994). В момент увеличения давления в молочной железе крыс также достоверно повышался уровень окситоцина в крови с 15 до 49 пмоль/л (Higuchi et al., 1985; Meyer et al., 1987). Ручное доение коров приводит к повышению уровня окситоцина с 1 до 38 нг/л (Bruckmaier et al., 1993). Стимуляция молочной железы кобыл жеребенком вызывала рост концентрации окситоцина в крови с 15 до 40 пмоль/л (Ellendorff, Schams, 1988). Сравнение концентрации окситоцина в плазме крови у самок разных видов млекопитающих следует проводить с осторожностью, так как результаты существенно зависят от места взятия пробы крови. У жвачных животных кровь берут из большой наружной яремной вены, по которой венозная кровь оттекает от головного мозга. У представителей других видов, а также женщин, кровь чаще всего берут из периферической вены. Кроме этого, чувствительность различных методов определения окситоцина может вносить существенные различия в абсолютные показатели количества гормона в крови самок.

Необходимым представляется сравнение характера выделения окситоцина в кровь, как одного из главных звеньев реализации рефлекса выведения молока, у разных видов. У сельскохозяйственных животных, особенно у коров, уровень гормона в крови, несмотря на индивидуальные особенности, остается повышенным в течение всего периода доения, т.е. при механостимуляции сосков (Mayer et al., 1984). Иной характер носит выделение окситоцина у лактирующих крыс. На фоне активного воздействия на соски самки детенышами выброс окситоцина происходит в ограниченные промежутки времени, продолжительностью до одной минуты (Higuchi et al., 1985,1 986; Sutherland et al., 1987; Meyer et al.,1 987). По этому параметру процесс вскармливания у крыс и мышей является схожим.

Близкий к этим видам профиль выделения окситоцина наблюдается у женщин. Измерение концентрации окситоцина у женщин в течение всего периода кормления ребенка обнаруживает появление пиков повышения его концентрации (Lucas et al., 1980; McNeily et al., 1983; Yokoyama et al., 1994). В зависимости от интервала между взятиями проб крови, время между пиками по данным разных авторов отличается. Если пробы крови брали через 10 мин, то интервал между пиками составлял 5 - 7 мин (Yokoyama et al., 1994). При более частом взятии проб анализ индивидуальных профилей окситоцина в крови женщин показывает, что выбросы гормона происходят с интервалом около 2 мин (McNeilly et al., 1983).

Динамика рефлексов выведения молока у мышей характеризуется относительно продолжительным латентным периодом первого рефлекса, последующим снижением их величины и появлением определенной ритмики. У крыс динамика рефлексов выведения молока имеет такие же закономерности. Средняя величина первого рефлекса выведения молока у ненаркотизированных крыс составляет 10-11 мин (Linkoln et al., 1973; Jans, Woodside, 1987). Анализ литературных данных по распределению интервалов между рефлексами выведения молока у крыс свидетельствует, что наиболее часто встречающимся является период в 3-4 мин. Средняя величина этого периода, как и у мышей, равняется 5 мин. Количество интервалов между рефлексами менее 3 и более 7 мин составляет незначительную часть частотного распределения интервалов между рефлексами выведения молока (Linkoln et al., 1973; Jans, Woodside, 1987; Sutherland et al., 1987).

По многим параметрам, таким как временные параметры кормления, концентрация гормона в крови, периодический характер выделения окситоцина при кормлении, динамика осуществления рефлексов выведения молока, вскармливание у мышей и крыс является похожим. Нет никаких параметров вскармливания, которые были бы не сопоставимы у этих животных. Ранее было отмечено, что многие вопросы, связанные с изучением периферических механизмов лактации, исследуются на мышах. Проблемы, относящиеся к центральной регуляции лактационного процесса, традиционно изучают на крысах (Hatton, Yang, 1990; Voisin et al., 1996). Полученные данные о практическом совпадении характера вскармливания позволяют объединять результаты, полученные на мышах и крысах.

Изучение механизмов регуляции лактационного процесса у женщин имеет естественное ограничение в выборе методик и характера проводимых экспериментов. Как отмечено выше, крысы и мыши имеют практически одинаковые характеристики вскармливания потомства. Близкие параметры вскармливания отмечают и у женщин при кормлении ребенка. У них можно отметить наличие продолжительных периодов кормления (от 10 до 30 мин), которые осуществляются через несколько часов с определенным интервалом в течение суток (Lucas et al., 1979; Drewett, Woolridge, 1979; Alexander, Roberts, 1988; Алексеев и др., 1994; Yokoyama et al., 1994; Алексеев и др., 1996; Prieto et al., 1996; Alekseev et al., 1998). Совпадение основных параметров (динамика механостимуляции соска детенышами и ребенком, профиль окситоцина в крови) вскармливания потомства у женщин и некоторых лабораторных животных (мыши, крысы) позволяет рассматривать последних как удобную физиологическую модель в изучении различных аспектов лактации у женщин.

Возможность передвижения секрета в цистерну является одним из решающих условий высокой синтетической деятельности. Окситоцин является основным гормоном, обеспечивающим продвижение секрета в молочной железе. При рассмотрении динамики выделения окситоцина у коз и коров по сравнению с мышами, становится ясно, что для первых характерно длительное повышение уровня гормона, а для вторых -залповые, частые выбросы в кровь. Является ли данное различие существенным для регуляции деятельности процесса выведения? Изучение сократительной реакции показывает, что у каждого из перечисленных видов миоэпителиальные клетки обладают необходимым функциональным резервом, обеспечивающим выделение молока. Повышение давления в железе у коз в ответ на доение и инъекции окситоцина достаточно для того, чтобы сбросить альвеолярную часть молока в цистерны.

Продвижение секрета по выводным протокам молочной железы мыши несколько отличается от такового у коз и коров. Для продвижения секрета необходимо преодолеть сопротивление выводных протоков, так как не существует возможности накопления секрета в цистерне молочной железы. Физиологические характеристики сокращения миоэпителиальных клеток способны обеспечить данный процесс. Растяжение миоэпителиальных клеток обеспечивает повышение реактивности миоэпителиальных клеток к действию окситоцина. Высокая скорость развития сокращения позволяет создать необходимый градиент давления для продвижения секрета по протокам. Миоэпителиальные клетки являются основным элементом альвеол, обеспечивающим развитие активной силы, необходимой для продвижения секрета. Низкая скорость расслабления удерживает секрет в протоках, увеличивая то время, в течение которого мышата могут получить корм. Многокомпонентное^ сократительной реакции, в основе которой может лежать как механочувствительность миоэпителиальных клеток, так и паракринное взаимодействие клеток альвеол, обеспечивает более длительное поддержание необходимого давления в протоковой системе.

Физиологические механизмы многокомпонентности могут быть связаны, с одной стороны, с особенностями процесса выведения молока у мышей и физиологическим свойствами миоэпителиальных клеток, а с другой стороны, с взаимодействием миоэпителиальных клеток между собой в процессе сокращения.

Высокая скорость сокращения альвеол свидетельствует о том, что при одновременном действии окситоцина на большое количество альвеол в систему протоков молочной железы мышей поступает значительная масса секрета. Изучение пищевого поведения мышат показало, что в момент залпового выведения молока (отдельный рефлекс выведения молока) детеныши не могут поглотить все имеющееся в железе молоко (Кислякова и др., 1994). Визуальные наблюдения подтверждают, что после сокращения в полость альвеол обратно поступает значительная часть молока. При отсутствии цистернальных образований возвращение части секрета вызывает повторное растяжение миоэпителиальных клеток. Можно предположить, что возвратное движение в альвеолы большой массы секрета, которое является источником механического воздействия на миоэпителиальные клетки, провоцирует развитие последовательного ряда дополнительных сокращений. Известно, что нанесение механического воздействия вызывает развитие сокращения миопителиальных клеток (Толкунов,

1989). Авторитмические сокращения лимфангионов появляются при достижении определенного уровня внутрисосудистого давления (Орлов и др-, 1991).

Взаимодействие миоэпителиальных клеток в процессе сокращения обеспечивается наличием паракринного взаимодействия между ними. Обнаружено, что механическое воздействие на отдельную клетку в культуре клеток молочной железы мышей вызывает распространяющуюся со скоростью 10-20 мкм/с кальциевую волну в рядом расположенных клетках (Ригиуа е! а1., 1993а;Уатавак1 е1 а1., 1994). Распространение сигнала может быть связано с межклеточным взаимодействием через щелевые контакты (ЕпотоЬ а1., 1992). Однако, передача сигнала возможна также между клетками или группами клеток, не имеющих физического контакта (Ригиуа е! а1., 1993а). В отсутствии движения среды культивирования распространение сигнала имело характер концентрических кругов. При движении жидкости характер распространения сигнала вытягивался в направлении тока жидкости. Данные результаты свидетельствуют о том, что при механической стимуляции из этих клеток выделяется какое-то вещество, которое вызывает увеличение входящего в окружающие клетки тока кальция (Епото1о е1а1., 1992).

На основании изучения реакций секреторных клеток при действии окситоцина на фоне применения холинолитиков было высказано предположение, что миоэпителиальные клетки могут оказывать паракринное действие с участием веществ холинергической природы (Грачев и др., 1976в, 1978а; Скопичев, 1994). Результаты опытов по многократному применению окситоцина показали высокую лабильность миоэпителиальных клеток. Способность к сокращению с высокой частотой создает функциональную основу для активного продвижения секрета во время кормления.

Повышение концентрации окситоцина в крови и наличие рецепторов окситоцина на плазматической мембране секреторных клеток обуславливает влияние окситоцина на деятельность секреторных клеток. Действительно, изменение трансэпителиальной разности потенциалов у коз по продолжительности соответствует периоду доения, тем самым, свидетельствуя о том, что секреторные клетки изменяют свои функциональные свойства на больший период, по сравнению с миоэпителиальными клетками. У мышей окситоцин оказывает на секреторные клетки не длительное, но зато частое и регулярное действие.

Характер влияния окситоцина на секреторные клетки, несмотря на различное время воздействия, принципиально не отличается у коз и мышей. Сравнивая электрические реакции железистого эпителия на окситоцин в молочной железе коз и мышей, следует признать их совпадение по основным параметрам. Увеличение отрицательного потенциала внутри альвеолы относительно индифферентного электрода и дозозависимый характер изменения трансэпителиальной разности потенциалов при аппликации окситоцина обнаружены в альвеолах на секреторном эпителии молочной железы мышей (Толкунов, 1989а, 1994).

Важно знать, можно ли рассматривать влияние окситоцина на процессы, происходящие в железистом эпителии как на процессы, способствующие образованию секрета в молочной железе. Полученные результаты и литературные данные позволяют считать, что действие окситоцина на железистый эпителий молочной железы мыши обеспечивает ускорение внутриклеточного транспорта секреторных везикул в этих клетках. Следовательно, одним из первоначальных этапов образования секрета в молочной железе является действие окситоцина на секреторные клетки молочной железы, включающее в себя усиление внутриклеточного транспорта секрета.

Существующие литературные данные проясняют возможные внутриклеточные механизмы влияния окситоцина на внутриклеточный транспорт секреторных везикул. Действие окситоцина и его агонистов на клеточные рецепторы вызывает увеличение обмена фосфатидилинозитолов (Pettibone et al., 1990; Enomoto et al., 1993). Увеличение инозитолтрифосфата является сигналом для быстрого, увеличения концентрации внутриклеточного кальция. Выброс Са2+ из депо является решающим фактором, определяющим передвижение секреторных гранул с помощью микротрубочек от транс-части аппарата Гольджи к апикальной части клеток. Применение колхицина, который блокирует рост микротрубочек и, таким образом, ведет к их разборке, снижает секрецию в молочной железе коз (Henderson, Peaker, 1980). Изучение роли микротрубочек в культуре клеток молочной железы мышей показывает, что они обеспечивают транспорт везикул, содержащих казеин, к плазматической мембране. Применение нокодазола, не влияющего на синтетические процессы, но переводящего тубулин микротрубочек из полимеризованной формы в растворимую, вызывает накопление секреторных гранул в клетке. В этих условиях применение ионофора ионов кальция (иономицина) не вызывает экзоциотсза секреторных гранул (Rennison et al., 1992).

Кроме этого, окситоцин вызывает усиление экструзии секреторных гранул в железистом эпителии молочной железы (Попов, 1989), снижает трансэпителиальное сопротивление и увеличивает активность ионов калия в полости альвеолы (Толкунов, 1989а). В целом действие окситоцина на функции клеток молочной железы можно рассматривать как пусковой сигнал в регулируемой секреции, усиливающий и интенсифицирующий все основные этапы продвижения и выведения секрета, связанные с доступностью молока для детенышей. Выведение -процесс стабилизации и оптимизации синтетической деятельности секреторного эпителия.

Одной из основных задач данного исследования являлся анализ роли симпатоадреналовой системы в регуляции лактации. Исходя из адаптационно-трофической роли этой системы в регуляции деятельности различных органов, представлялось естественным разобраться, исчерпывается ли приспособительный характер ее влияния на деятельность молочной железы блокирующим эффектом на процесс выведения молока.

Известно, что при кормлении детенышей происходит повышение концентрации катехоламинов в плазме крови самок крыс (С1арр et а1., 1985; Мепа а1., 1991) Существуют также электрофизиологические доказательства действия р- и а-адреномиметиков на железистый эпителий молочной железы мышей (Толкунов, 1989,6), что создало предпосылки для изучения изменения функций секреторных и миоэпителиальных клеток при действии катехоламинов.

Электромеханическая регистрация реакций миоэпителиальных клеток альвеол показала, что применение изопротеренола в любых концентрациях не вызывает развития сокращения миоэпителиальных клеток. Однако в концентрациях, не вызывающих изменения мембранного потенциала секреторных клеток, он уменьшает сократительную реакцию миоэпителия на окситоцин. При повышении концентрации изопротеренола наступает ее полное блокирование (Грачев и др., 1978; Марков, 1995). На уровне миоэпителиальных клеток активация р-адренорецепторов обеспечивает ограничение выведения молока. Активация а-адренорецепторов не сказывается на сократительной реакции миоэпителиальных клеток на окситоцин (Грачев и др., 1978).

Полученные результаты о включении Н3-лейцина в секреторные клетки молочной железы, свидетельствуют, что катехоламины не влияют на начальные этапы, связанные с синтетической деятельностью секреторного эпителия. Кроме этого, активация р-адренорецепторов обеспечивает экструзию секрета, что не позволяет говорить о сугубо блокирующем эффекте катехоламинов на секреторный процесс. Однако действие симпатоадреналовой системы через р-адренорецепторы секреторных клеток связано с ограничением ускорения внутриклеточного транспорта секреторных везикул. То есть, роль симпатоадреналовой системы при активировании р-адренорецепторов состоит в стимулировании специфических функций секреторных клеток и торможении сократительной реакции миоэпителиальных клеток молочной железы мыши на окситоцин. Можно рассматривать ее роль как фактора оптимизирующего процесс выведения молока.

Доступность молока у коров может быть достигнута при усилении функций симпатоадреналовой системы. В отличие от мышей, активация ß -адренорецепторов способствует выведению молока, облегчая этот процесс на уровне альвеол и выводных протоков. Это способность хорошо заметна при поступлении молока из максимально опорожненного вымени коров при инъекции изопротернола. При доении коров, облегчающее действие активации ß-адренорецепторов проявляется в увеличении скорости выведения молока (Bernaben, Ricordel, 1985).

Торможение процесса выведения молока осуществляется через а-адренорецепторы. Применение фенилэфрина вызывает полное блокирование процесса выведения молока на окситоцин. В основе торможения продвижения секрета лежит активация а-адренорецепторов клеток гладкой мускулатуры соска и протоков, которая вызывает их сокращение (Lefcourt, 1982; Bruckmaier et al., 1998).

Таким образом, симпатоадреналовая система обеспечивает адаптацию деятельности молочной железы к среде обитания животного, характеру вскармливания потомства и направлена на создание оптимальных условий функционирования железы в интервал между кормлениями и в период кормления детенышей.

Широко распространенной точкой зрения является представление о том, что для выведения секрета необходимо развитие значительного внутрижелезистого давления, способствующего продвижению и выведению секрета. Повышение давления связано с увеличением концентрации окситоцина в плазме крови, поэтому продолжение стимуляции молочной железы до конца доения является необходимым (Bruckmaier, Blum, 1998). Тем не менее, существует достаточно доказательств того, что у животных с развитой емкостной системой для реализации процесса вскармливания повышение окситоцина не является обязательным условием выведения молока (Lefcourt, Akers, 1983). Так, при условии одинаковой стимуляции молочной железы овец у животных одной породы происходит резкое увеличение концентрации окситоцина, а у животных другой - повышения концентрации либо вообще не происходит, либо увеличение очень незначительно, притом, что удой был одинаковым у обеих пород (Brukmaier et al., 1997).

Отсутствие цистерн и синусов позволяет отнести мышей к той группе животных, у которых повышение окситоцина является обязательным для процесса вскармливания. Однако для этих животных тоже существуют данные о том, что вскармливание, возможно, происходит без повышения концентрации окситоцина. Прибавка в весе детенышей из большого гнезда (12 детенышей) не отличалась от прибавки веса у детенышей из маленького гнезда (4 детеныша) (Jans, Woodside, 1987). В то же время, уменьшение количества детенышей в потомстве с 10 до 5 вносит существенные изменения в динамику возникновения рефлексов выведения молока. Из 11 самок, кормивших 5 детенышей, у двоих вообще не наблюдали рефлексов выведения молока, а у остальных они происходили значительно реже (Lincoln et al., 1973). Наблюдение за вскармливанием детенышей мышами, у которых после родов в помете остается от 2 до 5 детенышей, показывает, что рефлекс выведения молока может отсутствовать. Однако детеныши развиваются нормально.

В связи с этим встает вопрос о том, какие еще дополнительные механизмы, обеспечивающие выведение секрета в альвеолах и протоках молочной железы коров и мышей, могут существовать. Одним из таких возможных добавочных механизмов может являться механическая стимуляция молочной железы. В этом случае речь идет не о воздействии на механорецепторы соска и ареолы, которое служит механизмом запуска рефлекса выведения молока, а об общем воздействии на всю молочную железу.

Действительно, во многих статьях авторы отмечают, хотя не акцентируют на этом внимание, дополнительное механическое воздействие, оказываемое детенышами на молочную железу. При наблюдении за поведением кормящихся мышат было установлено, что они активно надавливают передними лапами на поверхность молочной железы во время «реакции вытягивания». Такая же реакция зарегистрирована при кормлении детенышей у крыс (Карякин, Алексеев, 1991а). Жеребенок также периодически механически воздействует на молочную железу без последующего осуществления рефлекса выведения молока. Количество таких эпизодов составляет около шести в час. Кроме этого перед началом кормления происходит интенсивная механическая стимуляция жеребенком (головой) молочной железы, определяемое как «бодание» (ЕНепс^, в^атв, 1988). Аналогичная поведенческая реакция наблюдается у маленьких ягнят и телят (Коуи, 1987). Значение добавочных механических воздействий на молочную железу может быть связано с запуском местных процессов, усиливающих процесс выведения молока. В этом плане наиболее вероятным следствием этого представляется реакция как секреторных, так и миоэпителиальных клеток, обусловленная активированием механочувствительных ионных каналов. Механическая стимуляция может обеспечивать реакцию отдельной клетки или совокупности клеток.

Таким образом, образование молока у животных с незначительной по объему емкостной системой зависит от накопления секрета в полости альвеол. При увеличении интервала между кормлениями целостность альвеол не нарушается, происходит реализация физиологических механизмов, обеспечивающих продвижение и распределение секрета из полости альвеол по системе протоков. Характер вскармливания и выделения окситоцина в кровь, обеспечивает активное выведение секрета из альвеолярной части и поддержание синтеза молока. Увеличение давления в альвеолах молочной железы мыши может вызывать растяжение миоэпителиальных клеток и развитие периодических спонтанных сократительных реакций миоэпителиальных клеток альвеол, вызывающих продвижение секрета в протоки.

Реактивность миоэпителиальных клеток альвеол молочной железы при многократном действии окситоцина не является фактором, определяющим минимальный интервал между рефлексами и, следовательно, не может ограничивать естественную периодичность рефлекторных актов. Симпатоадреналовая система оказывает модулирующее влияние на образование секрета в альвеолах и его выведение из молочной железы, направленное на оптимизацию деятельности разных отделов в интервале между кормлениями и в период кормления потомства. Активация а-адренорецепторов секреторных и миоэпителиальных клеток не влияет на синтез и выведение молока из альвеол, но обеспечивает торможение выведения молока через а-адренорецепторы гладкомышечных клеток протоков. Роль катехоламинов при активировании р-адренорецепторов состоит в стимулировании специфических функций секреторных клеток молочной железы мышей и выведении секрета из альвеолярной части молочной железы коров. Механочувствительность клеток альвеол молочной железы является одним из местных механизмов регуляции деятельности молочной железы в период между кормлениями и может обеспечивать выведение молока при взаимодействии детенышей с матерью во время кормления при выключении центрального звена рефлекса выведения молока. Образование секрета в молочной железе представляет собой комплексную реакцию секреторных и миоэпителиальных клеток, регулируемую внешними пусковыми и модулирующими сигналами, а также взаимодействием клеток альвеол на местном уровне.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Марков, Александр Георгиевич, Санкт-Петербург

1. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. - М.: Наука, 1994.- 288 с.

2. Алексеев Н.П., Алиева С.А., Грачев И.И., Даринская B.C., Хатажукова Э.И., Эпштейн Н.З. О свойствах механорецепторных единиц паренхимы молочной железы//Физиол.журн. СССР. 1977. - Т.63, № 5.- С.673-680.

3. Алексеев Н.П., Веллинг В.А., Грачев И.И. Исследование электрической активности механорецепторных единиц кожи соска молочной железы крысы//Физиол.журн. СССР 1975. - Т.61, № 5. - С.738-743.

4. Алексеев Н.П., Веллинг В.А., Грачев И.И. Функциональные характеристики быстроадаптирующихся механорецепторных единиц соска молочной железы крысы//Физиол.журн. СССР 1976. - Т.62, № 3.- С.375-381.

5. Алексеев Н.П., Ярославский В.К., Гайдуков С.Н., Ильин В.И., Спесивцев Ю.А., Тихонова Т.К., Кулагина Н.Б. Роль вакуумных и тактильных стимулов в процессе выведения молока из молочной железы женщины //Физиол.журн. 1994. - Т.80, № 9. - С. 67-74.

6. Алексеев Н.П., Луцик Е.А., Пруцкова Н.П. Анализ тормозных реакций нейросекреторных клеток супраоптического ядра гипоталамуса лактирующих крыс на стимуляцию субикулума// Нейрофизиология. -1988. Т.20, № 3. - С.413-420.

7. Барышников И.А. Рефлекторная регуляция функций молочной железы. В кн.: Нейро-гормональная регуляция лактации. М. П.: Наука,1966. -С. 3-24.

8. Бейли Д. Методы химии белков. М.: Мир, 1965. - 284 с.

9. Ю.Блатнер Р., Классен X., Денерт X., Деринг X. Эксперименты наизолированных препаратах гладких мышц. М.: Мир, 1983. - 208 с.

10. Богач П.Г., Решодько Л.В. Алгоритмические и автоматные модели деятельности гладких мышц. Киев.: Наукова думка, 1979. - 348 с.

11. Галанцев В.П., Гуляева Е.П. Некоторые особенности пищевого поведения новорожденных ондатрят//НТИ ВНИИ охотничьего хозяйства и звероводсва. Киров, 1970. - Вып. 28. - С.67-70.

12. Галанцев В.П., Гуляева Е.П. Эволюция лактации. Л.: Наука,1987. -176 с.

13. Галанцев В.П., Камардина Т.А., Скопичев В.Г. Локализация кальция в секреторных клетках молочной железы при воздействии окситоцина//Архив анат., гистол. и эмбриол. 1987. - Т.62. - С.69-74.

14. Галанцев В.П., Коротецкова Л.В., Михайлова Г.М. Некоторые особенности лактационного периода у желтой пеструшки, дальневосточной и рыжей полевок//Экология. 1980. - № 4. - С.65-71.

15. Галанцев В.П., Ермолаева В.Н., Скопичев В.Г. Исследование реакций микроциркулярного русла молочной железы лактирующих белых мышей//Вестник ЛГУ. 1982. - № 9. - С.103-106.

16. Грачев И.И. О рефлекторной регуляции лактации//Журн. общей биологии. 1949а. - Т. 10, № 4. - С.303-315.

17. Грачев И.И. О рефлексах с молочной железы//Журн.общей биологии. -19496. Т.10, № 5. - С.401-420.

18. Грачев И.И. Образование условного молоковыделительного рефлекса на базе механического раздражения соска.//Докл. АН СССР. 1952. -Т.86, № 2. - С.441-444.

19. Грачев И.И. Рефлекторная регуляция лактации. Л.: Изд-во ЛГУ,1964. -281с.

20. Грачев И.И. Условный рефлекс с интерорецепторов молочной железы//Вестник ЛГУ. 1954. - № 7. - С.87-95.

21. Грачев И.И., Алексеев Н.П. Роль рецепторов в регуляции лактации. -Л.: Наука, 1980. 220 с.

22. Грачев И.И., Алексеев Н.П., Веллинг В.А. Свойства механорецепторов соска молочной железы морской свинки (быстро адаптирующиеся рецепторы)//Физиол.журн.СССР. 1976а. -Т.62, № 6. - С.885-892.

23. Грачев И.И., Алексеев Н.П., Веллинг В.А. Медленно адаптирующиеся механорецепторные единицы соска молочной железы морской свинки//Физиол.журн.СССР 1977. - Т.63, № 3. - С.391-400.

24. Грачев И.И., Алексеев Н.П., Хатажукова Э.И., Эпштейн Н.З. Ответы одиночных рецепторных единиц паренхимы молочной железы крысы на тактильное раздражение //Физиол.журн.СССР. 1979а. - Т.65, № 6.- С.912-919.

25. Грачев И.И., Галанцев В.П. Физиология лактации сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1974. - 279 с.

26. Грачев И.И., Камардина Т.А., Скопичев В.Г., Филимонцева Г.С. Изменение формы и объема секреторных клеток молочной железы при развитии секреторного цикла //Цитология. 1978а. - Т.20, №1. - С.21-26.

27. Грачев И.И., Коваленко С.Г., Попов, С.М., Толкунов Ю.А. О роли ионов кальция в деятельности секреторных клеток молочной железы //Физиол. журн.СССР. 19766. - Т.62, №11. - С. 1703-1707.

28. Грачев И.И., Попов С.М., Скопичев В.Г. Цитофизиология секреции молока. Л.: Наука, 1976г. -242 с.

29. Грачев И.И., Попов С.М., Слепенков C.B. Роль лейкоцитов в регуляции секреторного процесса в молочной железе//Вестник ЛГУ. 1978в. - №3.- С.78-85.

30. Грачев И.И., Попов С.М., Слепенков C.B. О природе веществ, тормозящих секретообразование в молочной железе. Влияниепероксидазы нейтрофилов. Тез.докл. V Всесоюзн.симпоз. физиол. и биохим лактациии. М.,1978г. - С.39-40.

31. Грачев И.И., Скопичев В.Г., Камардина Т.А. Роль ионов в развитии сокращения миоэпителиальной клетки молочной железы//Вестник ЛГУ. 19786, №21. -С.76-82.

32. Грачев И.И., Скопичев В.Г., Камардина Т.А. Исследование сократительной функции миоэпителия молочной железы//Физиол.журн.СССР. 1976в. -Т.72, № 11. - С.1708-1714.

33. Грачев И.И., Скопичев В.Г., Филимонцева Г.С. Изменение реакций секреторного эпителия молочной железы на действие окситоцина под влиянием уабаина//Цитология. 1980. - Т.22, № 12. - С.1432-1437.

34. Грачев И.И., Толкунов Ю.А. Роль ионов калия и кальция в изменениях мембранного потенциала секреторных клеток молочной железы//Физиол.журн.СССР 1975. - Т.61, № 6. - С.933-937.

35. Грачев И.И., Толкунов Ю.А., Марков А.Г. Влияние изадрина и пропранолола на мембранный потенциал секреторных клеток молочной железы//Физиол.журн.СССР. 1978д. - Т.64, №3. - С.309-314.

36. Грачев И.И., Толкунов Ю.А., Марков А.Г. Действие медиаторов и окситоцина на функции миоэпителиальных и секреторных клеток молочной железы//Вестник ЛГУ. 19796. - № 15. - С.58-64.

37. Грачев И.И., Шерешков В.И., Узбеков В.В., Беззубцев B.C., Алексеев Н.П. Особенности емкостной системы молочной железы коров и коз и скорость выведения молока //Сельхоз.биология. 1984. - № 12. - С.8-10.

38. ЗЭ.Доис Э. Количественные проблемы биохимии. М.: Мир, 1983. - 376 с.

39. Дюсембин Х.Д. Торможение и стимуляция лактации у животных. -Алма-Ата.: Наука, 1977. 208 с.

40. Ивантер Э.В., Кросов A.B. Основы биометрии. Петрозаводск.: Изд-во ПГУ, 1992. 128 с.

41. Инихов Г.С., Врио Н.П. Химический анализ молочных продуктов. М., 1949.

42. Карякин М.Г., Алексеев Н.П. Характеристика положительного давления, оказываемого детенышами на сосок крысы в процессе кормления//Физиол.журн.СССР. 1990. - Т.76, № 6. - С.820-823.

43. Карякин М.Г., Алексеев Н.П. Особенности двигательной активности крысят во время рефлекса выведения молока//Физиол.журн.СССР. -1991а. -Т.77, № 7. С.83-88.

44. Карякин М.Г., Алексеев Н.П. Особенности рефлекса выведения молока у крысы во время механической стимуляции молочной железы//Физиол.журн.СССР. -19916. Т.77, № 8. - С. 137-141.

45. Кислякова Л.П. Динамика формирования водно-солевого состава молока. Автореф.док.дис. СПб, 1996. - 33 с.

46. Кислякова Л.П. Кровоснабжение и кислородное обеспечение локальных участков молочной железы//Физиол.журн.СССР. 1983. -Т.69, № 11 - С.1479-1484.

47. Кислякова Л.П., Леонтьев В.Г. Динамика трансэпителиального переноса натрия, калия и воды в молочной железе белой мыши//Физиол.журн.СССР. -1991. Т.77, № 8. - С. 130-136.

48. Кислякова Л.П., Леонтьев В.Г. Закономерности перераспределения натрия, калия и воды в тканях лактирующих белых мышей//Физиол.журн.СССР. 1987. - Т.73, № 12. - С.1696-1702.

49. Кислякова Л.П., Леонтьев В.Г., Флейшман Д.Г. Динамика секреции молока у белых мышей и его потребление потомством//Физиол.журн. -1994.-Т.80, № 10.-С.119-127.

50. Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Панов A.A., Петров Е.Ю., Капилевич Л.В., Медведев М.А. Влияние нитропруссида натрия на мембранный потенциал и механическое напряжение гладкомышечных клеток аорты крысы// Российск.физиол.журн. 1997. - Т.83, № 7. - С.70-76.

51. Коваленко С.Г., Попов С.М. Роль клеточной микротубулярной системы и ионов Ca в механизмах экструзии белка секреторными клетками молочной железы//Тез.докп. V Всесоюзн. симпоз. физиол. и биохим. лактации. М.,1978. - С.74-75.

52. Кокорина Э.П. Кортикальная регуляция реактивности молочной железы к внешним воздействиям.//Тез.докл.\/1 всесоюзн.симпоз. физиол. и биохим. Лактации. Львов, 1982. - С.85-86.

53. Кокорина Э.П. Физиологические аспекты стимуляции молочной продуктивности//Тез.докп.\/111 всесоюзн.симпоз. физиол. и биохим. лактации. Баку, 1990. - С.89-91.

54. Кокорина Э.П., Лановская М.Г. Секреторная активность молочной железы коров различного типа высшей нервной деятельности.//Тез.докл.\/ Всесоюзн.симпоз. физиол. и биохим. лактации. М., 1978. - С.77-78.

55. Коуи А. Лактация. В кн.Гормональная регуляция размножения у млекопитающих. М.: Мир, 1987. С.245-290.

56. Кубынин А.Н. Модуляция суточных ритмов агрессивного поведения и локомоторной активности агонистами и антагонистами опиатных рецепторов у мышей//Журн.высш.нерв.деят. 1988. - Т.38, Вып.1. -С.172-173.

57. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш.школа, 1980. - 293 с.

58. Лебедев O.E., Тюшев В.Е., Крутецкая З.И. Механизмы регуляции рецепторзависимого входа ионов кальция в клетки асцитной карциномы Эрлиха//Физиол.журн. -1994. Т.80, № 9. - С.144-154.

59. Лебедева К.А. О выведении жира из секреторной клетки молочной железы./Яез.докл. V Всесоюзн. симпоз. физиол. и биохим. лактации. -М.:1978. С.87.

60. Линкольн Д.У. Задняя доля гипофиза. В кн.: Гормональная регуляция размножения у млекопитающих. М.: Мир, 1987. - С.32-70.

61. Лис М., Крейчи П., Билек Й. К вопросу о механизме торможения молокоотдачи ткани молочной железы крысы адреналином. В кн.: Физиология и биохимия лактации. Л.: Наука, 1972. - С. 127-133.

62. Малахова М.Я., Соломенников A.B., Беляков H.A., Владыка A.C. Определение фракции молекул средней массы в сыворотке крови осаждением белков ТХУ и ультрафильтрацией//Лаб.дело. 1987. - № 3. - С.224-227.

63. Матвеев Б.С. О приспособлениях к лактации у млекопитающих//Зоол.журн. 1942. - Т.21, вып. 3. - С.47-68.

64. Мелькумянц A.M., Балашов С.А., Картамышев С.П., Наумов А.Ю., Шептуцолов К.В. Роль механочувствительности эндотелия в реакциях сосудистого русла на изменения давления у кошек//Российск.физиол.журн. 1998. -Т.84, № 11. - С. 1191-1201.

65. Молчанов A.A., Коваленко Р.И. Адаптивное значение перекисного окисления в ткани молочной железы//Нервная система. Межвузовск. сб. Ленингр. ун-та. 1989. - Вып. 28. С.36-43.

66. Наточин Ю.В. Некоторые вопросы функциональной эволюции осморегулирующих органов и желез внешней секреции//Журн.эвол.биох.физиол. 1967. - Т. 3, № 6. - С.555-562.

67. Наточин Ю.В. Проблемы эволюционной физиологии водно-солевого обмена. Л.: Наука, 1984. - 38 с.

68. Орлов P.C., Борисова Р.П., Бубнова H.A., Гашев A.A., Ерофеев Н.П., Лобов Г.И., Панькова М.Н., Петунов С.Г. Лимфатические сосуды: тонус,моторика, регуляция//Физиол.журн.СССР. 1991. - Т. 77, № 9. - С. 140149.

69. Пашкова И.Г., Сорокина Л.В., Штанько С.А. Влияние предварительной острой гипотермии на характеристику одиночного сокращения скелетной мышцы крыс//Российск.физиол.журн. 1997. -Т.83, № 7. -С.115-119.

70. Попов С.М. Клеточные механизмы регуляции секреторного процесса в молочной железе. Л.: Изд.Ленингр.ун-та., 1989. - 200 с.

71. Попов С.М. Клеточные механизмы регуляции секреторного процесса в молочной железе. Автореф.докт.дис. СПб, 1994. - 32 с.

72. Попов С.М. Цитофотометрические аспекты регуляции лактопоэза.//Тез.докл.\/11 Всесоюзн.симпоз. физиол. и биохим. лактации. М„ 1986. - С.41-42.

73. Попов С.М., Слепенков C.B., Кокряков В.Н. Сравнительное исследование пероксидазы нейтрофилов и молока коровы (к вопросу о, происхождении лактопероксидазы). В кн.: Современные достижения физиологии и биохимии лактации. Л.: Наука, 1981. - С.205-211.

74. Пруцкова Н.П., Петров Ю.А. Электрофизиологическое исследование проекций гиппокампа к нейросекреторным клеткам супраоптического ядра гипоталамуса крыс//Физиол.журн.СССР. 1989. - Т.75, № 3. -С.297-303.

75. Рахимбердиев С.А. Катехоламиновый механизм периферического торможения молокоотдачи//Изд.АН Казахской ССР. 1982. -№ 2. -С.69-73.

76. Рукосуев B.C. Идентификация миозина гладких мышц в миоэпителии//Бюл. эксперим.биол и мед. 1973. - Т.76, № 9. - С.116-118.

77. Семенова С.Б., Киселев К.И., Можаева Г.Н. Кальциевые каналы низкой проводимости в плазматической мембране макрофагов: активация инозитол (1,4,5)-трифосфатом//Российск.физиол.журн. 1998. - Т.84, № 5-6. -С.417-425.

78. Скопичев В. Г. Адренергическая иннервация молочной железы (гистохимическое исследование)//Вестник ЛГУ. -1971.- № 15. С.80-84.

79. Скопичев В.Г. Ионный гомеостаз в деятельности секреторных и миоэпителиальных клеток молочной железы. В кн.: Современные достижения физиологии и биохимии лактации. Л.: Наука, 1981. -С.190-195.

80. Скопичев В.Г. Механизмы интеграции клеток в альвеолярном отделе молочной железы. Автореф.докт.дис. СПб, 1994. -30 с.

81. Солофф М. Рецепторы окситоцина. В кн.: Взаимодействие гормонов с рецепторами. М.: Мир, 1979. - С.130-149.

82. Тверской Г.Б. Регуляция секреции молока. Л.: Наука, 1972. - 350 с.

83. Тверской Г.Б. Чувствительность мускулатуры протоков, цистерны и сфинктеров соска коровьего вымени к медиаторам нервного возбуждения и питуитрину//Тр. Ин-та физиол.им.И.П. Павлова. 1955. -Т.4. - С.51-57.

84. ЭО.Тверской Г.Б., Боков Е.В., Макар З.Н. Значение периодического опорожнения альвеолярного отдела емкостной системы вымени коровы в регуляции секреции молока//Бюл.ВНИИБП. 1986. - № 82. -С.3-6.

85. Толкунов Ю.А. Секреторный цикл в молочной железе//Вестник ЛГУ. -1980.-№ 3.-С.86-90.

86. Толкунов Ю.А. Исследование реакций секреторных и миоэпителиальных клеток в альвеолах молочной железы при действии нейромедиаторов и окситоцина//Физиол.журн.СССР. 1987. - Т.73, № 9. - С.1241-1247.

87. ЭЗ.Толкунов Ю.А. Ионная зависимость гиперполяризационных изменений мембранного потенциала секреторных клеток молочной железы//Физиол.журн.СССР. 1989а,- Т.75, № 4. - С.567-574.

88. Толкунов Ю.А. Мембранный потенциал секреторных клеток молочной железы при действии мезатона и изадрина//Физиол.журн.СССР. -19896.-Т.75, № 10,- 1445-1451.

89. Толкунов Ю.А. Об участии ионов натрия и хлора в реакциях секреторных клеток и миоэпителия альвеол молочной железы//Физиол.журн.СССР. 1990. - Т.76, № 6. - С.813-819.

90. Толкунов Ю.А. Исследование зависимости электрических реакций от экзоцитоза секреторных везикул в альвеолах молочной железы мышей//Физиол.журн.СССР. -1991. -Т.77, № 2. С.111-115.

91. Толкунов Ю.А. Механизмы регуляции функций альвеолярного отдела молочной железы. Автореф.докт.дис. СПб, 1993. -34 с.

92. Фрайфелдер Д. Физическая биохимия. М.: Мир, 1980. - 582 с.

93. Цахаев Г.А. Нервная регуляция секреции молока. Л.: Наука, 1974. -187 с.

94. ЮО.Шамсутдинов Н.Ш., Исламов Р.И., Валуиллин В.В.//Бюл.эксперим.биол. и мед. -1991,- Т.111, № 3. С.320-321.

95. Шапиро Ф.Б., Умарова Б.А., Струкова С.М. Гормональная регуляция секреции гепарина тучными клетками крыс при стрессорных воздействиях//Российск.физиол.журн. 1998. - Т.84, № 5-6. - С.469-473.

96. Alberi S., Dreifuss J.J., Raggenbass M. The oxytocin-induced inward current in vagal neurons of the rat is mediated protein activation but not by increase in the intracellular calcium concentration//Eur.J.Neurosci. 1977. -V.9, № 12. - P.2605-2612.

97. Alekseev N.P, Markov A.G., Tolkunov Y.A. Transepithelial potential difference in the goat mammary gland and its change during hand milking and administration of oxytocin and catecholamines//J.Dairy Res. 1992. -V.59. - P.469-478.

98. Alexander G.S., Roberts S.A. Sucking behaviour and milk intake in jaundiced neonates//Early Human Develop. 1988. - V.16.- P.73-84.

99. Archer F.L., Swanson B.J., Melvin M.O. Localisation of smooth muscle protein in myoepithelium by immunofluorescence//Amer.J.Pathol. 1971.-V.63. - P.109-118.

100. Asking B., Gjorstrup P. Amilase secretion in response to activation of different autonomic receptors in the rabbit parotid gland//Acta Physiol.Scand. 1980. -V. 109, № 4. - P.407-413.

101. Auestad N., Korsak R.A., Bergstrom J.D., Edmond J. Milk-substitutes comparable to rat's milk, their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat//British J.Nutrition. -1989.-V.61.-P.495-518.

102. Barowicz T. Changes of blood cateholamine levels in the sheep during machine milking//J.Dairy Res. 1979. - V.46. - P.555-557.

103. HO.Barowicz T. Inhibitory effect of adrenaline on oxytocin release in the ewe during the milk-ejection reflex//J.Dairy Res. 1979. - V.46. - P.41-46.

104. Bear C.E. A nonselective cation channel in rat liver cells is activated by membrane stretch//Amer.J.Physiol. 1990. - V.258. - P.421-428.

105. Belin V., Moos F. Paired recordings from supraoptic and paraventricular oxytocin cells in suckled rats: recruitment and synchronization//J.Physiol. -1986. V.377. - P.369-390.

106. Berga S.E., Neville M.C. Sodium and potassium distribution in the lactating mouse mammary gland in vivo//J.Physiol. 1985. - V.361. - P.212-230.

107. Bernabe J., Peeters G. Studies on the motility of smooth muscles of the teats in lactating cows//J.Dairy Res. 1980. - V.47. - P.259-275.

108. Bernabe J., Ricordel M.J. Modifications des conditions d'extraction du lai sous l'effet d'un p-mimetique (isoprenalin) administre par voie intrajugulaire pendant la traite mecanique de la vache//Reprod.Nutr.Develop. 1985. -V.25. - P.61-74.

109. Bhagat B.D., Karumahchi V.C., Pina J.I. Propranolol in the treatment of renin mediated hypertension //Can.J.Physiol.Pharmacol. 1980. - V.58. -P.889-895.

110. Bisset G.W., Ckark B.J., Lewis G.P. The mechanism of the inhibitory action of adrenaline on the mammary gland//Br.J.Pharmac.Chemother. -1967. V.31. - P.550-559.

111. Blatchford D.R., Peaker M. Effect of ionic composition of milk on transepithelial potantial in the goat mammary gland//J.Physiol. 1988. -V.402. - P.533-541.

112. Blum J.W., Froehli D., Kunz P. Effects of cateholamines on plasma free fatty acids in fed and fasted cattle//Endocrinology. 1982. - V. 110. - P.452-456.

113. Blum J.W., Schams D., Bruckmaier R Catecholamines, oxytocin and miik removal in dairy cows//J.Dairy Res. 1989. - V.56. - P.167-177.

114. Boissonas R.A., Guttman S., Berde B., Konzett H. Relationship between the chemical structures and the biological properties of the posterior pituitary hormones and their synthetic analogues//Experientia. 1961. -V.17. - P.377-390.

115. Bowen-Jones A., Thompson C., Drewett R.F. Milk flow and sucking rates during breast-feeding//Develop.Med.Child Neurol. 1982. - V.24. - P.626-633.

116. Bruckmaier R., Blum J.W. B-mode ultrasonography of mammary glands of cows, goats and sheep and during alpha- and beta-adrenergic agonist and oxytocin administration//J.Dairy Res. 1992a. - V.59. - P.151-159.

117. Bruckmaier R., Blum J.W. Responses of calves to treadmill exercise during beta-adrenergic agonist administration//J.Anim.Sci. 1992b. - V.70, №9. - P.2809-2821.

118. Bruckmaier R., Blum J.W. Simulteneous recording of oxytocin release, milk ejection and milk flow during milking of dairy cows with and without prestimulation//J.Dairy Res. 1996. V.63. - P.201-208.

119. Bruckmaier R., Blum J.W. Oxytocin release and milk removal in ruminants//J.Dairy Res. 1998. - V.81. - P.939-949.

120. Bruckmaier R., Mayer H., Schams D Effects of alpha- and beta-adrenergic agonists on intermammary pressure and milk flow in dairy cows//J.Dairy Res. 1991.-V.58.-P.411-419.

121. Bruckmaier R., Paul G., Mayer H., Schams D. Machine milking of Ostfriesian and Lacaune dairy sheep: udder anatomy, milk ejection and milking characteristics//J.Dairy Res. 1997b. - V.64. - P.163-172.

122. Bruckmaier R., Pfeilsticker H.U., Blum J.W. Milk yield, oxytocin and beta-endorphin gradually normalise during repeated milking in unfamiliar surroundings//J.Dairy Res. 1996. - V.63. - P.191-200.

123. Bruckmaier R., Schams D., Blum J.W. Aetiology of disturbed milk ejection in parturient primiparous cows//J.Dairy Res. 1992. - V.59. - P.479-489.

124. Bruckmaier R., Wellnitz O., Blum J.W. Inhibition of milk ejection in cows by oxytocin receptor blockage, alpha-adrenergic receptor stimulation and in unfamiliar surroundings//J.Dairy Res. 1997a. - V.64. - P.315-325.

125. Bruckmaier R.M., Schams D., Blum J.W. Continuosly elevated concentration of oxytocin during are necessary for complete milk removal in dairy cows//J.Dairy Res. 1994a. - V.61. - P.323-334.

126. Bruckmaier R.M., Ritter C., Schams D., Blum J.W. Machine milking of dairy goats during lactation: udder anatomy, milking characteristics, and blood concentration of oxytocin and prolactin//J.Dairy Res. 1994b. - V.61. - P.457-466.

127. Bruckmaier R.M., Schams D., Blum J.W. Milk removal in familiar and unfamiliar surroundings: concentration of oxytocin, prolactin, Cortisol and endorphin//J.Dairy Res. 1993. - V.60. - P.449-456.

128. Caldwell R.A., Clemo H.F., Baumgarten C.M. Using gadolinium to identify stretch-activated channels: technical consideration//Amer.J.Physiol. 1998. -V.275, № 2. - P.619-621.

129. Cereijido M., Ponce A., Gonzales-Mariscal L. Tight junction and apical/basolateral polarity//J.Membrane Biol. 1989. - V.110. - P.1-9.

130. Chan W.Y. Mechanism of epinephrine inhibition of the milk-ejection response to oxytocin//J.Pharm.Exp.Ther. 1965. - V.147. - P.48-53.

131. Chatton J.Y., Cao Y., Liu H„ Stucki J.W. Permissive role of cAMF in the oscillatory Ca2+ response to inositol 1,4,5-trisphosphate in rat hepatocytes//Biochem.J. 1998. -V.330, Pt.3. - P.1411-1416.

132. Cirino M., Renaud L.P. Influence of lateral septum and amygdala stimulation on the excitability of hypothalamic supraoptic neurons. An electrophysiological study in the rat//Brain Res. 1985. - V.326. - P.357-361.

133. Clapp C., Martinez-Escalera G., Morales M.T., Shyr S.W., Grosvenor C.E., Mena F. Release of catecholamines follows suckling or electrical stimulation of mammary nerve in lactating rats//Endocrinology. 1985. - V.117. -P.2498-2504.

134. Corey D.P., Hudspeth A.J. Kinetics of the receptor current in bullfrog saccular hair cells//J.Neuroscience. 1983. - V.3, № 5. - P.962-976.

135. Cornell-Bell A.N., Finkbeiner S.M., Cooper M., Smith S.J. Glutomate induces calcium waves in cultured astrocytes: long-range glial signaling//Science. 1990. - V.247. - P.470-473.

136. Crankshaw D.J., Branda L.A., Matlib M.A., Daniel E.E. Localization of the oxytocin receptor in the plasma membrane of rat myometrium//Eur.J.Biochem. 1978. - V.16, № 86. - P.481-486.

137. Cross B.A. Comparative physiology of milk removal//Symp. of the Zool. Society of London. 1977. - V.41. - P.193-210.

138. Cross B.A. Milk ejection resulting from mechanical stimulation of mammary myoepithelium in the rabbit//Nature. 1954. V.4401. - P.450-451.

139. Cross B.A. Neural control of lactation. In: Milk. The mammary gland and its secretion. Ed. S.K.Kon, A.T.Cowie. New York and London. Academic Press, 1961. - P.229-277.

140. Cross B.A. Silver IA In: Oxytocin. Ed. Caldeyro-Barcia R.@.Heller H. Pergamon Press. Oxford, 1961. P.24-47.

141. Cross B.A. Sympathetico-adrenal inhibition of the neurohypophysial milk-ejection mechanism//J.Endocrinol. 1953. - V.9. - P.7-18.

142. Cross B.A. The motility and reactivity of the oestrogenized rabbit uterus in vivo; with comparative observations on milk ejection//J.Endocrinol. 1958. -V.16. -P.237-260.

143. Cross B.A., Harris G.W. The role of the neurohypophysis in the miik-ejection reflex//J.Endocrinol. 1952. - V.48. - P.148-160.

144. Cross B.A., Wakerley J.B. The neurohypophysis. In: International Reviews of Physiology. II.Endocrine Physiology. Ed. S.M. McCann. Baltimore. University Park Press, 1977. V.16. - P. 1-34.

145. Culler L.E., Chandhry A.F. Differentiation of the myoepithelial cells of the rat submandibular gland in vivo and in vitro: an ultrastructural study//J.Morphol. 1973. - V.140, №3. - 343-354.

146. Cunningham E.T., Bohn Ir.M.C., Sawchenko P.E. Organization of adrenergic inputs to the paraventricular and supraoptic nuclei of the hypothalamus in the rat//J.Comp.Neurob. 1990. - V.292. - P.651-667.

147. Dawood M.Y., Khan-Dawood F.S., Wahi R.S., Fuchs F. Oxytocin release and plasma anterior pituitary and gonadal hormones in women during lactation//J.CIin.Endocrinol.Metab. -1981. V.52, №4. - P.678-683.

148. Day T.A., Renaud L.P. Eletrophysiological evidence that noradrenergic afferents selectively facilitate the activity of supraoptic vasopressine neurons//Brain Res. 1984. - V.303. - P.233-240.

149. Decavel C., Van den Pol A.N. GABA: the dominant transmitter in the medial hypothalamus//Soc.Neurosci.Abstr. 1989. -V. 15. - P. 1086.

150. Demer L.L., Wortham C.M., Dircsen E.R., Sandersen M.J. Mechanical stimulation induces intracellular calcium signaling in bovine aortic endothelial cells//Am.J.Physiol. 1993. - V.264. - P.2094-2102.

151. Deutsch C., Lee S.C. Cell volume regulation in lymphocytes//Ren.Physiol.Biochem. 1988. - V.11, №3-5. - P260-276.

152. Devor D.C., Prizzell R.A. Modulation of K+ channels by arachidonic acid in T 84 cells. Activation of a Ca 2+-independent K+ channel//Am.J.Physiol. -1998. V.274. - P.149-160.

153. Ding J.P., Bowman C.L., Sokabe M., Sachs F. Mechanical transduction in glial cells: SICS and SACS//Biophysical J. 1989. - V.55. - P.244a.

154. Dodge K.L., Sanborn B.M. Evidence for inhibition by a mechanism not involving PLCbeta2//Endocrinology. 1998. - V.139, №5. - P.2265-2271.

155. Drewett R.F., Woolridge M. Sucking patterns of human babies on the breast//Early Human Develop. 1979. - V.3/4. - 315-320.

156. Du Vigneaud V., Ressler C.H., Swann J.M., Roberts C.W., Kaysoyannis P.G. The synthesis of oxytocin//J.Am.Chem.Soc. 1954. - V.76. - P.3115-3121.

157. Dukes I.D., Vaughan Williams E.M. Effects of selective ar, a2-, Pi- and p2-adrenoreceptor stimulation on potentials and contractions in the rabbit heart//J.Physiol. 1984. - V.355. - P.523-546.

158. Ellendorff F., Forsling M.L., Poulain D.A. The milk ejection reflex in the pig//J.Physiol. 1982. - V.333. - P.577-594.

159. Ellendorff F., Schams D. Characteristics of milk ejection, associated intramammary pressure changes and oxytocin release in the mare//J.Endocrinol. 1988. - V.119. - P.219-227.

160. Emerman J., Vogl A.W. Cell size and shape changes in the myoepithelium of the mammary gland during differentiation//Anat.Rec. 1986. - V.216, №3.- P.405-415.

161. Enomoto K., Furuya K., Maeno T., Edwards C., Oka T. Mechanically induced electrical responses in murine mammary epithelial cells in primary culure//FEBS Lett. 1987. -V. 19, №223(1). - P.82-86.

162. Enomoto K., Furuya K., Yamagishi S., Maeno T. Mechanically induced elecyrical and intracellular calcium responses in normal and cancerous mammary cells//Cell Calcium. 1992. -V.13, №8. - P.501-511.

163. Enomoto K., Furuya K., Yamagishi S., Maeno T. Proliferation-associated increase in sensitivity of mammary epithelial cells to inositol-1,4,5-trisphosphate//Cell Biochem.Funct. 1993. - V.11, №1. - P.55-62.

164. Ermisch A., Ruhle H.-J., Auerbach B. Influence of oxytocin on the incorporation of H 3 phenylalanine into the pancreas. An autoradiographic study//Gen.Comp.Endocrinol. 1974. - V.22. - P.340.

165. Fahrenholz F., Eggena P., Kojro E., Gazis D., Schwartz I.L. Synthesis and biological activities of a photoaffinity probe for vasotocin and oxytocin receptors//lnt.Pept.Protein Res. 1987. - V.30, №5. - P.577-582.

166. Fenelon V.S., Poulain D.A. Electrical activity of dorsal horn neurons during the suckling-induced milk ejection reflex in the lactating rat//J.Neuroendocr.- 1993. V.5, №5. - P.575-584.

167. Ferrier B.M., Branda L.A. Synthesis and some biological properties of 1-Deamino-4Gly-Oxytocin (1-p-Mercaptopropionic acid-4-Glytamic Acid-Oxytocin) and its use in preparing a hormone-agarose complex//Can.J.Biochem. 1975. - V.53, №21. - P.21-27.

168. Flanagan-Cato L.M., Fluharty S.J. Guanine nucleotide regulation and cation sensitivity of agonist binding to rat brain oxytocin receptors//Brain Res. 1995. - V.701, №1-2. - P.75-80.

169. Fluoret G., Du Vigneaud V. The synthesis of D-oxytocin canatiomer of the posterior pituitory hormone oxytocin//J.Am.Chem.Soc. 1965. - V.87. -P.3775-3776.

170. Franco A., Lansman J.F. Calcium entry through stretch-inactivated ion channels in mdx myotubes//Nature. 1990. - V.344. - P.670-673.

171. Freissmuth M., Casey P.J., Gilman A.G. G proteins control diverse pathways of transmembrane signaling//FASEB J. 1989. - V.3. - P.2125-2131.

172. Fuchs A.R., Fuchs F., Husslein P., Soloff M.S. Oxytocin receptors in the human uterus during pregnancy and parturition//Am.J.Obstet.Gynecol. -1984. V.150. - P.734-741.

173. Funase K. Oxytocin-induced sodium current is mediated by c AMP-dependent protein phosphorylation in an identified snail neuron//Brain.Res. 1990. - V.517. - P.263-268.

174. Furukawa M., Enomoto K., Kato H., Ishida T., Maeno T. Effects of hyperthermia on intracellular calcium concentration and responses of cancerous mammary cells in culture//Cell Biochem.Funct. 1992. - V.10, №4. - P.225-232.

175. Furuya K., Enomoto K. Real-time ivaging of intracellular calcium change with simultaneous single channel recording in mammary epithelial cells/Brain Res.Bull. 1990. - V.25, №5. - P.779-781.

176. Furuya K., Enomoto K., Furuya S., Yamagishi S., Edwards C., Oka T. Singl calcium-activated potassium channel in cultured mammary epithelial cells//Pflugers Arch. 1989. - V.414, №2. - P.118-124.

177. Furuya K., Enomoto K., Maeno T., Yamagishi S. Mechanically induced calcium signal in mammary epithelial cells//Jpn.J.Physiol. 1993a. - V.43, №1. - P.105-108.

178. Furuya K., Enomoto K., Yamagishi S. Spontaneous calcium oscillations and mechanically and chemically induced calcium responses in mammary epithelial cells//Pflugers Arch. 1993b. - V.422, №4. - P.295-304.

179. Goligorsky M.S. Mechanical stimulation induces Ca+2 transients and membrane depolarisation in cultured endothelial cells: effects on Ca+2 in CO-perfused smooth muscle cells//FEBS Lett. 1988. - V.240. - P.59-64.

180. Gomm J.J., Browne P.J., Coope R.C., Bansal G.S., Yiangou C., Johnston C.L. Manson R., Coombes R.C. A paracrine role for myoepithelial cell-derived FGF2 in the normal human breast//Exp.Cell Res. 1997. - V.234, №1. - P.165-173.

181. Gorewit R.C., Wachs E.A., Sagi R., Merrill W.G. Current concepts on the role of oxytocin in milk ejection//J.Dairy Sci. 1983. - V.66, №10. - P.2236-2250.

182. Guharay F., Sachs F. Stretch-activated single ion channel currents in tissue-cultured embryonic chick skeletal muscle//J.Physiol. 1984. - V.352.- P.685-701.

183. Guillon G., Balestre M.N., Roberts J.M., Bottari S.P. Oxytocin and vasopressin: distinct receptors in myometrium//J.Clin.Endocrinol.Metab. -1987. -V.64. P. 1129-1135.

184. Gysembergh A., Margonari H., Loufoua J., Ovize A., Andre-Fouet X., Minaire Y., Ovize M. Stretch-induced protection shares a common mechanism with ischemic preconditioning in rabbit heart//Am.J.Physio'. -1998. V.274, №3, Pt.2. - P.955-964.

185. Hack M., Estabrook M.M., Robertson S.S. Development of sucking rhythm in preterm infants//Early Human Develop. 1985. - V. 11. - P. 133-140.

186. Hajduczok G., Chapleau M.W., Ferlic R.J., Abboud F.M. Gadolinium inhibits mechanoelectrical transduction in rabbit carotid baroreceptors. Implication of stretch-activated channels//J.Clin.Invest. 1994. - V.94, №6.- P.2392-2396.

187. Hammon H.M, Bruckmaier R.M., Honegger U.E., Blum J.W. Distribution and density of alpha- and beta-adrenergic receptor binding sites in the bovine mammary gland//J.Dairy Res. 1994. - V.61. - P.47-57.

188. Han S.S., Kim S.K., Cho M.I. Cytochemical characterization of the myoepithelial cells in palatine glands//J.Anat. 1976. - V.122, №3. -P.559-570.

189. Hansen M., Boitano S., Dircsen E.R., Sanderson M. Intracellular calcium signaling induced by extracellular adenisine 5-triphosphate and mechanical stimulation in airway epithelial cells//J.Cell Science. 1993. - V.4. - P.995-1004.

190. Hatton G.I., Yang Q.Z. Activation of excitatory amina acid inputs to supraoptic neurons. 1.Induced increases in dye-coupling in lactating, but not virgin or male rats//Brain Res. 1990,- V.513. - P.264-269.

191. Hayat M.A. Principle and techniques of electron microscopy. Biological application. New York.: Van Nostrand Rienhold Co., 1974. V.1. - P.3-51.

192. Hebb C.O., Linzell J.L. Some conditions affecting the blood flow through the perfused mammary gland, with special refrence to the action of adrenaline//Q.J.Exper.Physiol. -1951. V.36. - P.159-175.

193. Hellmen E., Isaksson A. Immunohistochemical investigation into the distribution pattern of myoepithelial cells in the bovine mammary gland//J.Dairy Res. 1997. - V.64, №2. - P. 197-205.

194. Henderson A.J., Blatchford D.R., Peaker M. The effects on milking thrice instead of twice daily on milk secretion in the goat//Quart.Experim.Physiol. -1983.-V.68.-P.645-652.

195. Henderson A.J., Peaker M. Feedback control of milk secretion in the goat by a chemical in milk//J.Physiol. 1984. - V.351. - P.39-45.

196. Henderson A.J., Peaker M. The effects of colchicine on milk secretion, mammary metabolism and blood flow in the goat//Q.J.Exp.Physiol.Cogn.Med.Sci. 1980. - V.65, №4. - P.367-378.

197. Higuchi T., Honda K., Fukuoka T., Negoro H., Wakabayashi K. Relise of oxytocin during suckling and parturition in the rat//J.Endocrinol. 1985. -V.105. - P.339-346.

198. Higuchi T., Tadokoro Y., Honda K., Negoro H., Detailed analysis of blood oxytocin levels during suckling and parturition in the rat//J.Endocrinol. —1986.-V. 110, №20. P.251-256.

199. Hillerton J.E., Knight C.H., Turvey A., Wheatley S.D., Wilde C.J. Milk Yield and mammary function in dairy cows milked four times daily//J.Dairy Res. -1990. V.57. - P.285-294.

200. Hirata K., Nathanson M.H., Sears M.L. Novel paracrine signaling mechanism in the ocular ciliary epithelium//Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1998. -V.95, №14. - P.8381-8386.

201. Holtback U., Ohtomo Y., Forberg., Sahlgren B., Aperia A. Neuropeptide Y shifts equilibrium between alpha- and beta-adrenergic tonus in proximal tubule cells//Am.J.Physiol. 1998. - V.275, №1, Pt.2. - P.1-7.

202. Honda K., Negoro H., Higuchi T., Tadokoro Y. Activation of neurosecretory cells by osmotic stimulation of anteroventral third ventricle//Am.J.Physiol.1987. V.252. - P. 1039-1045.

203. Hope D.B., Musti V.V.S., Du Vigneaud V. A highly potent analogue of oxytocin deamino-oxytocin//J.Biol.Chem. 1962. - V.237. - P.1563-1566.

204. Jans J.E., Woodside B. Effects of litter age, litter size and ambient temperature on the milk ejection reflex in lactating rats//Develop.Psychobiol. 1987. - V.20, №3. - P.333-344.

205. Jara-Almonte M., White J.M. Milk production in laboratory mice//J.Dairy Sci. 1972. - V.55, №10. - P. 1502-1505.

206. Jensen D.R., Gavigan S„ Sawicki V., Witsell D.L., Eckek R.H., Neville M.C. Regulation of lipoprotein lipase activity and mRNA in the mammary gland of the lactating mouse//Biochem.J. 1994. - V.328. - P.321-327.

207. Jhamandas J.H., Raby W., Rogers J., Buijs R.M., Renaud L.P. Diagonal band projection towards the hypothalamic supraoptic nucleus: Light and electron microscopic observation in the rat//J.Comp.Neurol. 1989. -V.282. - P. 15-23.

208. Jhamandas J.H., Renaud L.P. Diagonal band neurons may mediate arterial baroreceptor input to hypothalamic vasopressin-secreting neurons//Neurosci.Lett. 1986. - V.65. - P.214-218.

209. Johnston J.M., Amico J.A. A prospective longitudinal study of the release of oxytocin and prolactin in response to infant suckling in long term lactation//J.Clin.Endocrinol.Metab. 1986. - V.62, №3. - P.653-657.

210. Jones C.J., Kealey T. Dye coupling in cells of isolated human eccrine sweat gland//J.Physiol. 1985. -V.369. - P.121.

211. Joshi K., Ellis J.T.B., Hughes C.M., Monaghan P., Neville A.M. Cellular proliferation in the rat mammary gland during pregnancy and lactation//Lab.Invest. 1986. - V.54, №1. - P.52-61.

212. Juss T.S., Wakerley J.B. Mesencephalic areas controlling pulsatile oxytocin release in the suckled rat//J.Endocrinol. 1981. - V.91. - P.233-244.

213. Kannan H., Yamashita H., Osaka T. Paraventricular neurosecretory neurons: synaptic inputs from the ventrolateral medulla in rats//Neurosci.Lett. 1984. - V.37. - P.235-239.

214. Karyakin M.G., Alekseev N.P. The influence of tactile stimulation of nipples on the milk ejection reflex in the rat//J.Comp.Physiol.A. 1992. - V.170. -P.645-650.

215. Keenan T.W., Dylewski D.P. Aspects of intracellular transit of serum and lipid phases of milk//J.Dairy Sci. 1985. - V.68. - P.1025-1040.

216. Kimura T., Makino Y., Saji F., Takemura M., Inoue T., Kikuchi T., Kubota Y., Azuma C., Nobunaga T., Tocugawa Y., Tanizawa O. Molecular characterization of a cloned human oxytocin receptor//Eur.J.Endocrinol. -1994.-V. 131,-P.385-390.

217. Kimura T., Tanizawa O., Mori K., Brownstein M.J., Okayama H. Structure and expression of a human oxytocin receptor//Nature. 1992. - V.356. -P.526-529.

218. Kirber M.T., Walsh J.V., Singer J.J. Stretch-activated ion channels in smooth muscle: a mechanism for the initiation of stretch-induced contraction//Pflugers Arch. 1988. - V.412. - P.339-345.

219. Knight C.H., Dewhurst R.J. Once daily milking of dairy cows: relationship between yield loss and cisternal milk storage//J.Dairy Res. 1994. - V.61. - P.441-449.

220. Knight C.H., Hirst D., Dewhurst R.J. Milk accumulation and distribution in the bovine udder during the interval between milkings//J.Dairy Res. 1994. -V.61. - P.167-177.

221. Knight C.H., Maltz E., Docherty A.H. Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation number//Comp.Biochem.Physiol. 1986. -V.84, №1. - P.127-133.

222. Knyihar E. Myoepithelial nexus. Intercellular membrane fusions in the dilator pupillae muscle//Acta Biol.Acad.Sci.Hung. 1972. - V.22, №3. -P.351-360.

223. Kvetnansky R„ Sun C.L., Lake C.R., Thoa N. Torda T., Kopin I.J. Effect of handling and forced immobilization on Rat plasma levels of epinephrine, norepinephrin, and dopamine-p-hydroxylase//Endocrinology. 1978. -V.103, №5.-P. 1868-1874.

224. Landgraf R. Simultaneous mesurement of arginine vasopressin and oxytocine in plasma and neurohypophyses by radioimmunoassay//J.Endocrinol. 1981. - V.78. - P.191-204.

225. Landgraf R., Wehowsky G., Schulz J., Schulze H., Bothur D. Radioimmunoassay measurement of plasma oxytocin and vasopressin in cows during machine milking//Endokrinologie. 1982. - V.79. - P.434-436.

226. Lang F., Ritter M., Vokl H., Haussinger D. Cell volume regulatory mechanism an overview//Advan.Comper.Envirom.Physiol. - 1993a. - V.14.- P.1-31.

227. Lang F., Ritter M., Vokl H., Haussinger D. The Biological significance of cell volume//Renal Physiol.Biochem. 1993b. - V.16. - P.48-65.

228. Lansman J.B., Hallam T.J., Rink T.J. Single stretch-activated ion channels in vascular endothelial cells as mechanotransducers?//Nature. 1987. -V.235.-P.811-813.

229. Lau C., Henning S.J. Mammary resistance: a possible controlling factor in milk ejection//J.Endocrinol. 1987. - V.112. - P.379-385.

230. Lebl M., Hill P., Kazmierski W., Karaszova L., Slaninova J., Fric I., Hruby V.J. Conformationally restricted analogs of oxytocin; stabilization of inhibitory conformation//int.J.Pept.Protein Res. 1990. - V.36, №4. -P.321-330.

231. Lefcourt A.V. Rhythmic contractions of the teat sphincter in bovines an expulsion mechanism//Am.J.Physiol. 1982. - V.242, №3. - P.181-184.

232. Lefcourt A.V., Akers R.M. Is oxytocin really necessery for efficient milk removal in dairy cows?//J.Dairy Sei. 1982a. -V.66. - P.2251-2259.

233. Lefcourt A.V., Akers R.M. Endocrine responses of cows subjected to controlled voltages during milking//J.Dairy Sei. 1982b. - V.65, №11 -P.2125-2130.

234. Lefcourt A.V., Akers R.M. Small increases in peripheral noradrenaline inhibit the milk-ejection response by means of a peripheral mechanism//J.Endocrinol. 1984. - V.100, №3. - P.337-344.

235. Lefcourt A.V., Akers R.M. Teat stimulation-induced oxytocin and catecholamine release in pregnant and lactating//Domest.Anim.Endocrinol.- 1991. V.8, №2. - P.235-243.

236. Lefcourt A.V., Paul G., Mayer H., Schams D., Bruckmaier R.M. Response of catecholamines to manual teat stimulation or machine-milking of lacaune and Friesen dairy ewes//J.Dairy Sei. 1997. - V.80, №12. - P.3205-3211.

237. Leng G., Blackburg R.E., Dyball R.E.J., Russell J.A. Role of anterrior peri-third ventricular structures in the regulation of supraoptic neuronal activity and neurohypophysial hormone secretion in the rat//J.Neuroendocr. 1989.- V.1. P.35-46.

238. Lesson T.S., Lesson C.R. Myoepithelial cells in the exorbital lacrimal and parotid glands of the rat in frozen-etched replicas//Am.J.Anat. 1971. -V.132, №2.-P. 133-145.

239. Lincoln D.W., Hentzen K., Hin T., van der Schoot P., Clarke G., Summerlee A.J.S. Sleep: a prerequisite for reflex milk ejection in the rat//Exp.Brain Res. 1980.-V.38. - P.151-162.

240. Lincoln D.W., Hill A., Wakerley J.B. The milk ejection reflex of the rat: intermittent function not abolished by surgical levels of anaesthesis//J.Endocrinol. 1973. - V.57. - P.459-476.

241. Lincoln D.W., Paisley A.C. Neuroendocrine control of milk ejection//J.Reproduction, Fertility. 1982. - V.65. - P.571-586.

242. Lincoln D.W., Wakerley J.B. Electrophysiological evidence for the activation of supraoptic neurosecretory cells during the release of oxytocin//J.Physiol. 1974. - V.242. - P.533-554.

243. Linzell J.L. Mammary blood flow and methods of identifying and measuring precursors of milk. In: Lactation. Comprehensive treatise. Ed. B.L.Larson and V.R.Smith. Academ.press. New York and London, 1974. V.1. -P.143-226.

244. Linzell J.L. Some observations on the contractile tissue of the mammary glands//J.Physiol. 1955. - V.130. - P.257-267.

245. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with thefolin phenol reagent//J.Biol.Chem. 1951. - V.193. -P.265-267.

246. Lucas A., Lucas P.J., Baum J.D. Pattern of milk flow in breast fed infants//Lancet. 1979. - V.2. - P.57-58.

247. Luther E.C., Arballo J.C., Sala N.L., Cordero Funes J.C. Suckling pressure in humans: relationship to oxytocin-reproducing reflex milk ejection//J.Appl.Physiol. 1974. - V.36, №3. - P.350-353.

248. Manning M., Coy E., Sawyer W.H. Solid Phase synthesis of (4-threonine)-oxytocin. A more potent and specific oxytocin agent than oxytocin//Biochemistry. 1970. - V.9. - P.3925-3930.

249. Manning M., Sawyer W.H. Structure-active studies on oxytocin and vasopressin 1954-1976//Neurohypophysis Int.Conf.Koy.Biscayne.Fla. -1976.-P.9-21.

250. Marchetti B., Labrie F. Hormonal regulation of beta-adrenergic receptors in the rat mammary gland cduring the estrous cycle and lactation: role of sex steroids and prolactin//Endocrinology. 1990. - V.126, №1. - P.575-581.

251. Markle H.V., Warr J.L., Branda L.A. Oxytocin binding sites in lactating rabbit mammary gland//Can.J.Biochem. 1978. - V.56, №10. - P.968-976.

252. Martina M., Mozrzymas J.W., Vittur F. Membrane stretch activates a potassium channel in pig articular chondrocytes//Biochim.Biophys.Acta -1997. V. 1329, №2. - P.205-210.

253. Mayer H., Bruckmaier R., Schams D. Lactational changes in oxytocin release, intramammary pressure and milking characteristics in dairy cows//J.Dairy Res. -1991. V.58. - P. 159-169.

254. McBride G.E., Christopherson R.J. Effects of adrenaline, oxytocin and 2-Br-a-ergocryptine on mammary blood flow in the lactating ewe//Can.J.Anim.Sci. 1986. - V.66. - P.983-993.

255. McNelly A., Robinson I.C.A.F., Houston M.J., Howie P.W. Release of oxytocin and prolactin in response to suckling//British Medical J. 1983. -V.286. - P.257-259.

256. Mein G.A., Williams D.H., Thiel C.C. Compressive load applied by the teatcup liner to the bovine teat//J.Dairy Res. 1987. - V.54. - P.327-337.

257. Mena F., Clapp C., Aguayo D., Morales M.T. Martinez-Escalera G. Stimulatory and inhibitory effects of suckling on lactation//Endocine Regulations. -1991. V.25. - P.25-35.

258. Meyer C., Freund-Mercier M.J., Guerne Y., Richard Ph. Relationship between oxytocin releas and amplitude of oxytocin cell neurosecretory bursts during suckling in the rat//J.Endocrinol. 1987. - V.114. - P.263-270.

259. Mielke H., Michel G. Zum verhalten der Myoepithelzellen des Rinderuters bei der Milchgewinnung/A/Viss.Z.Karl-Marx.Univ. 1982. - B.31, №5. -S.429-439.

260. Miselis R. The efferent projections of the subfornical organ of the rat: a ciccumventricular organ with a neural network subserving water balance//Brain Res. 1981. - V.230. - P. 1-23.

261. Monga M., Ku C.Y., Dodge K., Sanborn B.M. Oxytocin-stimulated responses in a pregnant human immortalized myometrial cell line//Biol Reprod. 1996. - V.55, №2. - P.427-432.

262. Moore D.M., Vogl A.W., Baimbridge K., Emerman J.T. Effect of calcium on oxytocin-induced contraction of mammary gland myoepithelium as visualized by NBD-phallicidin//J.Cell Science. 1987. - V.88. - P.563-569.

263. Moore R.D., Zarrow M.X. Contraction of the rabbit mammary strip in vitro in response to oxytocin//Acta Endocr.Copenh. 1965. - V.48. - P. 186-198.

264. Moos F., Poulain D.A., Rodriguez F., Guerne Y., Vincent I.D., Richard Ph. Release of oxytocin within the supraoptic nucleus during the milk ejection reflex in rats//Exp.Brain Res. 1989. - V.76. - P.593-602.

265. Moos F., Richard Ph. Characteristics of early- and late-recruited oxytocin bursting cells at the beginning of suckling in rats//J.Physiol. 1988. -V.399. - P.1-12.

266. Moos F., Richard Ph. Effects of dopaminergic antagonist and agonist on oxytocin release induced by various stimuli//Neuroendocrinology. 1979. -V.28. - P.138-144.

267. Moos F., Richard Ph. Paraventricular and supraoptic bursting oxytocin cells in rat are locally regulated by oxytocin and functionally related//J.Physiol. 1989. - V.408. - P.1-18.

268. Morris C.E. Mechanosensitive ion channels//J.Membbrane Biol. 1990. -V.113.-P.93-107.

269. Mosdol G., Sjaastad O.V., Blom A.K. Plasma concentrations of oxytocin and ¡ntramammary pressure in goats during manual stimulation of the udder and hand-milking//Endocrinology. 1981. - V.90. - P. 159-166.

270. Muller M., Soloff M.S., Fahrenholz F. Photoaffinity labelling of the oxytocin receptor in plasma membranes from rat mammary gland//FEBS Lett. -1989. V.242. - P.333-336.

271. Naoto Y., Minoru I., Seiichiro S., Hirokazu U., Toshihiro A. Usefulness of recombinant human prolactin for treatment of poor puerperal lactation in a rat model//Eur.J.Endocrinol. 1995. - V.133. - P.613-617.

272. Naruse K., Yamada T., Sai X.R., Hamaguchi M., Socabe M. Pp125FAK is required for stretch dependent morphological response of endothelial cells//Oncogene. 1998. -V. 17, №4. - P.455-463.

273. Natsume K., Kometani K Desynchronization of carbachol-induced theta-like activities by alpha-adrenergic agent in guinea pig hippocampal sliced//Neurosci.Res. 1999. - V.33, №3. - P.179-186.

274. Navar L.G. Integrating multiple paracrine regulators of renal microvascular dynamics//Am.J.Physiol. 1998. - V.274, №3, Pt.2. - P.433-444.

275. Negoro H., Honda K., Uchide K., Higuchi T. Facilitation of milk ejection-related activation of oxytocin -secreting neurons by osmotic stimulation in the rat//Exp.Brain Res. 1987. - V.65, №2. - P.312-316.

276. Negoro H., Uchide K., Todokoro Y., Honda K., Higuchi T. Vaginal distension induces milk ejection-related burst of oxytocin neurons interacting with suckling stimuli in lactating rats//Brain Research. 1987. -V.404. - P.371-374.

277. Neville M.C., Peaker M. Ionized calcium in milk and the integrity of the mammary epithelium in the goat//J.Physiol. 1981. - V.313. - P.561-570.

278. Neville M.C.,Berga S.E., Susan J.P. Sodium and potassium distribution in mammary tissue from pregnant and lactating mice//Biophys.J. 1981. -V.33, №2, Pt.2. - P.44a.

279. Newton M., Newton N.R. The let-down reflex in human lactation//J.Pediatr. -V.33.-P.698-704.

280. Ollivier-Bousquet M. Effet de l'ocytocine in vitro sur le transit intracellulaire et la secretion des proteines du lait//C.R.Acad.Sc.Paris Endocrinologie. -1976. T.282, Serie D. - P. 1433-1436.

281. Palmer R.M., Eveson J.W. Ultrastructural quantitation of myoepithelial cells in normal human major and minor salivary glands//J.Biol.Buccale. -1986. -V.14, №4. P.281-286.

282. Park E.S., Won J.H., Han K.J., Suh P.G., Ryu S.H., Lee H.S., Yun

283. H.Y.,Kwon N.S., Baek K.J. Phospholipase C-delta1 and oxytocin receptor signalling evidence of its role as an effector//Biochem.J. 1998. - V.331, Pt.1.- P.283-289.

284. Peaker M. Mechanism of milk secretion: milk composition in relation to potential difference across the mammary epithelium//J.Physiol. 1977a. -V.270. - P.489-505.

285. Peaker M. The aquens phase of milk: ion and water transport//Comparative aspects of lactation. Symposia of the Zoologycal Society of London. London, 1977b. - P. 113-134.

286. Peaker M. The effect of raised intramammary pressure on mammary function in the goat in relation to the cessation of lactation//J.Physiol. -1980.-V.301.-P.415-428.

287. Peaker M., Taylor J.C. Milk secretion in the rabbit. Changes during lactation and the mechanism of ion transport//J.Physiol. 1975. - V.253. -P.527-545.

288. Peeters G., Petre P., Quintelier W. Nature of adrenoceptor sites in bovine teat muscles//Naunyn.Schmiedebergs Arch.Pharmacol. 1977. - V.296, №2. - P.111-115.

289. Peeters G., Vanderputte-Van Messom G., Bürvenich C. 50 years of Lactation research.//Flem.Vet.J. -1991. V.62, Suppl. 1. - P. 13-29.

290. Pfeilsticker H.U., Bruckmaier R.M., Blum J.W. Interruption of machine milking in dairy cows: effects on intramammary pressure and milking characteristics//J.Dairy Res. 1995. - V.62. - P.559-566.

291. Pinkstaff C.A. The cytology of salivary glands//lnter.Rev.Cytol. 1980 -V.63. - P.141-261.

292. PiteIka D.R., Hamamoto S.T., Duafala J.G., Nemanic M.K. Cell contacts in the mouse mammary gland. 1. Normal gland in postnatal development and the secretory cycle//J.Cell Biol. 1973. - V.56, №3. - P.797-818.

293. Poulain D.A., Tasker J.G. Recurrent mammary gland contraction induced by a low tonic release of oxytocin in rats//J.Endocrinol. 1985. - V107, №1. - P.89-96.

294. Prieto C.R., Cardenas H„ Salvatierra A.M., Boza C., Montes C.G., Croxatto H.B. Sucking pressure and its relationship to milk transfer during breastfeeding in humans//J.Reproduction and Fertility. 1996. - V.108. -P.69-74.

295. Qian A., Wang W.,Sanborn B.M. Evidence for the involvement of several intracellular domains in the coupling of oxytocin receptor to G alpha (g/11 )//Cel! Signal. 1998. - V.10, №2. - P.101-105.

296. Quissell D.O., Barzen K.A., Redman R.S., Camden J.M., Turner J.T. Development and characterization of SV40 immortalized rat parotid acinar cell lines//ln Vitro Cell Dev.Biol.Anim. 1998. - V.34, №1. - P.58-67.

297. Raby W.N., Renaud L.P. Dorsomedial medulla stimulation activates rat supraoptic oxytocin and vasopressin neurones through different path ways//J.Physiol. 1989a. - V.417. - P.279-294.

298. Ragueneau S. A simple method of milk extraction//Physiol.Behav. 1986. -V.38, №3. - P.443-445.

299. Randor C.J. Myoepithelium in the prelactating and lactating mammary glands of the rat//J.Anat. 1972. -V. 112. - P.337-355.

300. Renaud L.P., Bourque C.W. Neurophysiology and neuropharmacology of hypothalamic magnocellular neurons secreting vasopressin and oxytocin//Progress in Neurobiology. -1991. V.36. - P. 131-169.

301. Renaud L.P., Rogers l.,Sgro S. Terminal degeneration in supraoptic nucleus following subfornical organ lesions: ultrastructural observation in the rat//Brain Res. 1983. - V.275. - P.365-368.

302. Rennison M.E., Handel S.E., Wilde C.J., Burgoyne R.D. Investigation of the role of microtubules in protein secretion from lactating mose mammary epithelial cells//J.Cell Sci. 1992. - V. 102, Pt2. - P.239-247.

303. Ressler C.H. The cyclic disulfide ring of oxytocin//Proc.Soc.Exp.Biol. and Med. 1956. - V.92. - P.725-727.

304. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high Pb as an electrone stain in electron microscopy//J.Cell Biol. 1963. - V.17. - P.208-212.

305. Robertson G.L., Roth J., Beardwell C., Klein L.A., Petersen M.J., Gorden P. Radioimmunoassay In: Peptide hormones. Eds. Berson S.A. Yalow R.S. Amsterdam: Noth-Holland Publishing Company 1973. - P.656-668.

306. Robinson I.C.A.F. Oxytocin and the milk-ejection reflex//Current Topics in Neuroendocrinol. 1986. - V.6. - P.153-172.

307. Roets E., Peeters G. A comparison of the binding characteristics of the alpha 2-adrenoceptor antagonists 3H-yohimbine and 3H-rauwolscine in bovine teat muscles//Arch.lnt.Pharmacodyn.Ther. 1986. - V.279, №2. -P.212-222.

308. Roets E., Peeters G. Identification and characterization of 3H-prazosin binding to alpha 1-adrenoceptors in bovine teat muscles//Arch.lnt.Pharmacodyn.Ther. 1985-V.275, №2. - P.189-198.

309. Roets E., Peeters G., Leysen J.E. Identification of beta-adrenoceptors in bovine teat muscles by 3H-dihydroalprenolol binding//Arch.lnt.Pharmacodyn.Ther. 1984. - V.270, №2. - P.203-214.

310. Roets E., Vandeputte-vanMesson G., Peeters G. Relationship between milkability and adrenoceptor concentratons in teat tissue in primiparous cows//J.Dairy Sci. 1986. -V.69. - P.3120-3130.

311. Roets E., Vauquelin G., Peeters G., Braeckman R. Homogeneity of beta-adrenoceptors on bovine teat muscles//Arch.lnt.Pharmacodyn.Ther. 1985. -V.276, №1. - P.44-49.

312. Rozen F., Russo C., Banville D., Zingg H.H. Structure, characterization, fnd expression of the rat oxytocin receptor gene//Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -1995. -V.92, №1.-200-204.

313. Rusch F., Kros C.J.Richardson J. Block by amiloride and its derivatives of mechano-electrical transduction in outer hair cells of mouse cochlear cultures//J.Physiol. 1994. - V.474. - P.75-86.

314. Russell J.A., Coombes J.E., Leng G., Bicknell R.J. Morphine tolerance and inhibition of oxytocin secretion by kappa-opioids acting on the neurohypophesis//J.Physiol. 1993. - V.469. - P.365-386.

315. Saacke R.G., Heald C.W. Cytologycal aspects of milk formation and secration. In: Lactation. A.Comprehensive Treatise. V.2. Biosynthesis end Secretion of Milk Diseases. Ed. Larson B.L., Smith V.R. New York.: Academic Press, 1974. - P. 147-189.

316. Sachs F. Stretch-sensitive ion channels: an update In: Sensory Transduction. The Rockefeller University Press., 1992. P.242-260.351 .Sachs F., Lecar H. Stochastic models for mechanical trunsduction//Biophys.J. 1991. - V.59. - P. 1143-1145.

317. Sagi R., Gorewit R.C., Merrill W.G., Wilson D.B. Premising stimulation effects on milking performance and oxytocin and prolactin release in cows//J.Dairy Sei. 1980. - V.63. - P.800-806.

318. Sala N.L., Freire F. Relationship between ultrastructure and response to oxytocin of the mammary myoepithelium throughout pregnency and lactation: effect estrogen and progesterone//Biol.Reprod. 1974. - V.11, №1. - P.7-17.

319. Sala N.L., Luther E.C., Arballo J.C., Cordero Funes J.C. Roles of temperature, pressure and touch in reflex milk ejection in lactating women//J.Appl.Physiol. 1974. - V.37, №6. - P.840-843.

320. Salvatore C.A., Woyden C.J., Guidotti M.T., Pettibone D.J., Jacobson M.A. Cloning and expression of the rhesus monkey oxytocin receptor//J.Recept.Signal.Transduct.Res. 1998. - V.18, №1. - P.15-24.

321. Santos-Sacchi J. Gadolinium ions reversibli block voltage dependent movements of isolated outer hair cells//Soc.Newrosci.Abstr. 1989. - V.15. - P.208-211.

322. Sapido A., Macri L., Tonda L., Bussolati G. Oxytocin enhances myoepithelial cell differentiation and proliferation in the mouse mammary gland//Endocrinology. 1993. - V.133, №2. - P.838-842.

323. Sawyer W.H., Manning M Synthetic analoge of oxytocin and the vasopressin//Annul.Rev.Pharmacol. 1973. - V.13. - P.5-17.

324. Sawyer W.H., Manning M. 4-threonine analogues of neurohypophysial hormones with selectively enhanced oxytocin-like activities//J.Endocrinol. — 1971.-V.49. -P.151-165.

325. Schafer H., Reinert S. Zytochemische Untersuchungen zum Einflus von Isoprenalin und Nifedipin auf Sekretion und Resynthese in der Glandula submandibularis der Ratte//Zbl.allg.Pathol.pathol.Anat. 1989. - V.135. -P.384.

326. Schalm O.W., Jain N.C., Caroll E.J. In.Veterinary Hemotology. Philadelphia, 1975.-201p.

327. Schulz H., Du Vigneaud V. Synthesis of 1-L-penicillamine-oxytocin, 1-D-penicillamine-oxytocin, and 1 -deaminopenicillamine-oxytocin,potent inhibitors of the oxytocic response of oxytocin//J.Med.Chem. 1966. - V.9. - P.647-650.

328. Seo J.T., Sugiya H., Lee S.I., Steward M.C., Elliott A.C. Caffeine does not inhibit substance P-evoked intracellular Ca+2 mobilization in rat salivary acinar cells//Am.J.Physiol. 1999. - V.276, №4, Pt 1. - P.915-922.

329. Setoguchi M, Ohya Y., Abe I., Fujishima M Stretch-activated whole-ceel currents in smooth muscle cells from mesenteric resistance artery of guinea-pig//J.Physiol 1997. - V.501, Pt. 2. - P.343-353.

330. Sheng M., Thompson M.A., Greenberg M.E. CREB: a Ca(2+)-regulated transcription factor phosphorylated by calmodulin-dependent kinases//Science. 1991. -V. 151, №5011. - P. 1427-1430.

331. Shu-Lan Song, Crowley W.R., Grosvenor C.E. Evidence for involvement of an adrenal catecholamine in the p-adrenergic inhibition of oxytocin release in lacktating rats//Brain Res. 1988. - V.457. - P.303-309.

332. Sigurdson W.J., Sachs F., Diamond S.L. Mechanical perturbation of cultured human endothelial cells causes rapid increases of intracellular calcium//Am.J.Physiol. 1993. - V.264, №6, Pt.2. - P. 1745-1752.

333. Smith M.W. Some propertis rat mammary tissue//Nature. 1961. -V.190,№ 4775.-P.541-542.

334. Sokabe M., Naruse K., Sai S., Yamada T., Kawakami K., Inoue M., Murase K., Miyazu M. Mechanotransduction and intracellular signaling mechanisms of stretch-induced remodeling in endothelial cells//Heart-Vessels. 1997. - V.12. - P.191-193.

335. Soloff M.S., Alexandrova M., Fernstrom M.J. Oxytocin receptor: triggers for parturition and lactation//Science. 1979. - V.204, № 4399. - P. 13131315.

336. Soloff M.S., Rees H.D., Sar M., Stumpf W.E. Autoradiographic localization of radioactivity from H3-oxytocin in the rat mammary gland and oviduct//Endocrinology. 1975. - V.96. - P.475-1477.

337. Soloff M.S., Swartz T.L. Characterization of a proposed oxitocin receptor in rat mammary gland//J.Biol.Chem. —1973. V.248. - P.6471-6478.

338. Soloff M.S., Swartz T.L., Saffran M. Specific uptake of radioactivity from 3H-oxytocin by surviving segments of mammary gland//Endocrinology. -1972. V.91. - P.213-216.

339. Speake T., Douglas I.J., Brown P.D. The role of calcium in the volume regulation of rat lacrimal acinar cells//J.Membr.Biol. 1998. - V.164, №3. -P.283-291.

340. Spurr A.R. A low-viscosity epoxy resin embedding medium for electron microscopy//J.UItrastruct.Res. 1969. - V.26. - P.31-43.

341. Stelwagen K., Davis S.R., Farr V.C., Eichler S.J., Politis I. Effect of once daily milking and concurrent somatotropin on mammary tight junction permeability and yield of cows//J.Dairy Sci. 1994b. - V.77, №10. -P.2994-3001.

342. Stelwagen K., Davis S.R., Farr V.C., Prosser C.G., Sherlock R.A Mammary epithelial cell tight junction integrity and mammary blood flow during an extended milking interval in goats//J.Dairy Sci. 1994a. - V.77, №2. - P.426-432.

343. Stelwagen K., Knight C.H. Effect of unilateral once or twice daily milking of cows on milk yield and udder characteristics in early and late lactation//J.Dairy Res. 1997. - V.64. - P.487-494.

344. Stelwagen K., Knight C.H., FarrV.C., Davis S.R., Prosser C.G., McFadden T.B. Continuous versus single drainage of milk from the bovine mammary gland during a 24 hour period//Exp.Physiol. 1996. - V.81, №1. - P.141-149.

345. Sterm J.M. Johnson S.R. Ventral somatosensory determinants of nursing behavior in norway rats.1 .Effects of variantions in the quality and quantity of pup stimuli//Physiology and Bechavior. 1990. - V.47. - P.993-1011.

346. Strakova Z., Copland J.A., Lolait S.J., Soloff M.S. ERK2 mediates oxytocin-stimulated PGE2 synthesis//Am.J.Physiol. 1998. - V.274, №4, Pt.1. - P.634-641.

347. Sudlow A.W., Burgoyne R.D. A hypo-osmotically induced increase in intracellular Ca2+ influx//Pflugers Arch. 1997. - V.433, №5. - P.609-616.

348. Summerlee A.J.S., Paisley A.C., O'Byrne K.T., Fairhall K.M., Robinson I.C., Fletcher J. Aspects of the neuronal and endocrine components of reflex milk ejection in conscious rabbits//J.Endocrinol. 1986. - V.108, №1.- P.143-149.

349. Summerlee A.J.S., Parry L.I. Stimulus-Secretion coupling in the oxytocin system//Current Topics in Neuroendocrinol. 1988. - V.9. - P.29-72.

350. Sutherland R.C., Juss T.S., Wakerley J.B. Prolonged electrical stimulation of the nipples evokes intermittent milk ejection in the anaesthetised lactating rat//Exp.Brain Res. 1987. - V.66. - P.29-34.

351. Svennersten K., Claesson C.O., Nelson L. Effect of local stimulation of one quarter on milk production and milk components//J.Dairy Sci. 1990. -V.73, №4,- P.970-974.

352. Swerup C., Purali N., Rydqvist B. Block of receptor response in the stretch receptor neuron of the cryfish by gadolinium//Acta Physiol.Sci. 1991. -V.143. - P.21-26.

353. Szabo I., Petronilli V., Guerra L., Zoratti M. Cooperative mechanosensitive ion channels in Escherichia coli//Biochem.Biophys.Res.Communic. 1990.- V. 171. P.280-286.

354. Tang L.Q., Hong P.H., Siddiqui Y., Sarkissian E.S., Huang R.Y., Lee E., Krupin T. Effect of beta-adrenergic agent on intracellular potential of rabbit ciliary epithelium//Curr.Eye.Res. 1998. - V.17, №1. - P.24-30.

355. Tatsukawa Y., Kiyosue T., Arita M. Mechanical stretch increases intracellular calcium concentration in cultured ventricular cells from neonatal rats//Heart.Vessels. 1997. - V. 12, №3. - P. 128-135.

356. Theodosis D.T., Paut L., Tappaz M.L. Immunocytochemical analysis of the GABAergic innervation of oxytocin- and vasopressin-secreting neurons in the rat supraoptic nucleus//Neuroscience. 1986. -V. 19. - P.207-222.

357. Thompson P.D., Pearson R.E., Gorewit R.C. Milking cows with positive pressure stimulation in late lactation//J.Dairy Sci. 1983. - V.66, №5. -P.1167-1173.

358. Tribollet E., Armstrong W.E., Dubois-Dauphin M., Dreifuss J.J. Extrahypothalamic afferent inputs to the supraoptic nucleus area of the rat as determined by retrograde and anterograde tracing techniques//Neuroscience. 1985. - V.15. - P.135-138.

359. Turner M.D., Rennison M.E., Handel S.E., Wilde C.J.,Burgoyne R.D. Proteins are secreted by both constitutive and regulated secretory pathways in lactating mouse mammary epithelial cells//J.Cell Biol. 1992. - V.117, №2. - P.269-278.

360. Valenzuela G.J., Craig J., Bernhardt M.D., Holland M.L. Placental passage of the oxytocin antagonist atosiban//Am.J.Obstet.Gynicol. 1995. - V.172, №4, Pt.1. - P.1304-1306.

361. Voisin D.L., Herbison A.E., Chapman C., Poulain D.A. Effects of central GABA-B receptor modulation upon the milk ejection reflex in the rat//Neuroendocrinology. —1996. V.64, №3. - P.368-376.

362. Voloschin L.M., Tramezzani J.H. Milk-ejection reflex linked to slow-wave sleep in nursing rats//Endocrinology. 1979. -V. 105. - P.1202-1207.

363. Voloshin L.M., Dottaviano E.J. The channeling of natural stimuli that evoke the ejection of milk in the rat. Effect of transections in the midbrain and hypothalamus//Endocrinology. 1976. - V.99. - P.49-58.

364. Vorcherr H. Catecholamine antagonism to oxytocin-induced milk-ejection//Acta.Endocrinol. 1971. - V.67. - P.5-38.

365. Vorherr H., Kleeman C.R., Lehman E. Oxytocin-induced stretch reaction in suckling mice and rats: a semi-quantitative bioassay for oxytocin//Endocrinology. 1976. - V.81. - P.711-715.

366. Wallis N.T., Banerjee S.S., Eyden B.P., Amerstrong G.R. Adenomyoepithelioma of the skin: a case report with immunohistochemical and ultrastructural observations// Hystopathology. 1997. - V.31, №4. -P.374-377.

367. Warburton M.J., Hughes C.M., Ferns S.A., Rudland P.S. Localization of vimentin in myoepithelial cells of the rat mammary gland//Histochem.J. -1989. V.21, №11. - P.679-685.

368. Weiss M.L., Hatton G.I. Collateral input to the paraventricular and supraoptic nuclei in rat. I.Afferents from the subfornical organ and the anteroventral third ventricle region//Brain Res.Bull. 1990a. - V.24. -P.231-238.

369. Weiss M.L., Hatton G.I. Collateral input to the paraventricular and supraoptic nuclei in rat. II.Afferents from the ventral/lateral medulla and nucleus tructus solitarius//Brain Res.Bull. 1990b. -V.25. - P.561-567.

370. Wilde C.J., Addey C.V.P., Boddy L.M., Peaker M. Autocrine regulation of milk secretion by a protein in milk//Biochem.J. 1995. - V.305. - P.51-58.

371. Wilde C.J., Addey C.V.P., Casey M.J., Blatchford D.R., Peaker M. Feedback inhibition of milk secretion: the effect of a fraction of goat milk on milk yield and composition//Quart.J.Exper.Physiol. 1988. - V.73. - P.391-397.

372. Wilde C.J., Addey C.V.P., Peaker M. Effects of immunization against an autocrine inhibitor of milk secretion in lactating goats//J.Physiol. 1996. -V.491. - P.465-469.

373. Wilde C.J., Calvert D.T., Daly A., Peaker M. The effect of goat milk fractions on synthesis of milk constituents by rabbit mammary explants and on milk yield in vivo//Biochem.J. 1987. - V.242. - P.285-288.

374. Wilde C.J., Knight C.H. Milk yield and mammary function in goats during and after once-daily milking//J.Dairy Res. 1990. - V.57. - P.441-447.

375. Williams D.M., Mein G.A. Closing forces of the bovine teat canal//J.Dairy Res. 1987. - V.54. - P.321-325.

376. Williams N.G., Zhong H., Minneman K.P. Differential coupling of alphal-, alpha2-, and beta-adrenergic receptors to mitogen-activated protein kinase pathways and differentiation in transfected PC12 cells//J.Biol.Chem. -V.273, №38. P.24624-24632.

377. Wolridge M.W., Baum J.D., Drewett R.F. Effect of a traditional and of a new nipple shild on sucking patterns and milk flow//Early Human Developm.- 1980. V.4, №4. - P.357-364.

378. Yamasaki T., Enomoto K., Moritake K., Maeno T. Analysis of intra- and intercellular calcium signaling in mouse malignant glioma cell line//J.Neurosurg. 1994. - V.81, №3. - P.420-426.

379. Yamashina S., Katsumata O., Wada I., Kato K. Electron microscopic localization of 5'-nucleotidase in rat salivary glands. Comparative enzyme-and immunohistochemical studies//Histochemistry. 1986. - V.84, №3. -P.231-236.

380. Yasugi T., Kaido T., Uehara Y. Changes in density and architecture of microvessels of the rat mammary gland during pregnancy and lactation//Arch.Histol.Cytol. 1989. -V.52, №2. - P.115-122.

381. Yeh T.H., Tsai M.C., Lee S.Y., Hsu M.M., Tran-Ba-Huy P. Stretch-activated nonselective cation CI" and K+ channels in apical membrane of epithelial cells of Reissner's membrane//Hear Res. 1997. - V.109, №1-2. -P.1-10.

382. Yoshihara T., Kanda T., Nagata H., Nomoto M. Kaneko T., Kato Y., Yaku Y. Cytochemical demonstration of actin filaments in myoepithelial cells of the human parotid gland//Acta anat. 1988. - V.132, №4. - P.317-320.

383. Yoshimura K., Nezu E., Yoneyama T. Mechanism of regulation of amylase release by a- and p-adrenergic agonists in rat parotid tissue//Jap.J.Physiol.- 1984.-V.34.-P.655-667.

384. Yoshimura R., Kiyama H., Kimura T., Araki T., Maeno H., Tanisawa O., Tohyama M. Localization of oxytocin receptor messenger ribonucleic acid in the rat brain//Endocrinology. 1993. -V. 133, №3. - P. 1239-1246.

385. Zagotta W.N., Brainard M.S., Aldrich R.W. Single-channel analysis of four distinct classes of potassium channels in Drosophila musc!e//J.Neurosci. -1988. V.8. - P.4765-4779.337

386. Zavizion B., Politis I., Gorewit R.C. Bovine mammary myoepithelial cells. I.lsolaton, culture, and characterization//J.Dairy Sci. 1992a. - V.75, №12. - P.3367-3380.

Информация о работе

Марков, Александр Георгиевич
доктора биологических наук
Санкт-Петербург, 2000
ВАК 03.00.13

Диссертация

Механизмы образования секрета в молочной железе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы