Культура пыльников в селекции ярового рапса

Муравлёв, Анатолий Анатольевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Культура пыльников в селекции ярового рапса
ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Культура пыльников в селекции ярового рапса"

□ОЗОБ42Б5

На правах рукописи

Муравлёв Анатолий Анатольевич

КУЛЬТУРА ПЫЛЬНИКОВ В СЕЛЕКЦИИ ЯРОВОГО РАПСА

06.01.05 - селекция и семеноводство

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

САРАТОВ 2007

003054265

Работа выполнена в ГНУ Всероссийском научно-исследовательском и проектно-технологическом институте рапса в 1990 - 2005 гг.

Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук,

Карпачёв Владимир Владимирович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Тучин Святослав Викторович

кандидат сельскохозяйственных наук, доцент Ткаченко Оксана Викторовна

Ведущая организация: ФГНУ Российский научно-исследовательский и проектно-технологический институт сорго и кукурузы

Защита диссертации состоится « 22 » февраля 2007 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.050.01 при ГНУ Научно-исследовательском институте сельского хозяйства Юго-Востока Адрес: г. Саратов, ул. Тулайкова, 7, зал заседаний. Тел. (факс) 845-2-64-76-88

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГНУ НИИСХ Юго-Востока.

Автореферат разослан ¿¿Ус

»2007 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета, ^

кандидат биологических наук^^^1^^^^-Ю. Е. Сибикеева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Прогресс в селекции ярового рапса в значительной мере связан с привлечением нового исходного материала, который, с одной стороны, обеспечивает расширение спектра генетической изменчивости, а с другой - достаточную генетическую стабильность. Таким критериям отвечают удвоенные формы рапса, полученные с использованием метода культуры пыльников. В настоящее время вовлечение данного метода в селекционный процесс сдерживается рядом ограничений. В связи с этим, совершенствование приёмов создания андрогенных удвоенных гаплоидов рапса является весьма актуальной задачей.

Цель и задачи исследования - разработать технологию получения андрогенных гаплоидов ярового рапса. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Выявить оптимальный состав питательных сред для культивирования пыльников.

2. Изучить влияние предобработки бутонов рапса пониженной температурой и растворами 2,4-Д, кинетина и гиббереллиновой кислоты на частоту выхода эмбриоидов и регенерацию растений.

3. Исследовать влияние генотипа и условий культивирования пыльников на эмбриоидогенез.

4. Провести цитологическое изучение растений-регенерантов.

5. Изучить продуктивность андрогенных линий по хозяйственно - ценным признакам.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Технологический регламент получения андрогенных удвоенных гаплоидов ярового рапса, включающий:

- оптимизацию состава питательной среды для культивирования пыльников ярового рапса;

- условия предобработки бутонов регуляторами роста;

- стадии развития пыльников;

- температурные условия культивирования пыльников.

2. Влияние генотипических особенностей сортов и гибридов ярового рапса на частоту выхода эмбриоидов и регенерацию растений.

3. Влияние типа эмбриоидов на регенерацию растений.

4. Результаты оценки потомств андрогенных линий (АЛ) по хозяйственно - ценным признакам.

Научная новизна. Впервые проведена оценка сортов на способность к эмбриоидогенезу в культуре пыльников ярового рапса. Разработаны условия получения гаплоидных растений и перевод их на диплоидный уровень. Впервые экспериментально показано влияние типа эмбриоидов на регенерацию растений рапса. Выявлена положительная корреляция между концентрациями хелата железа в питательной среде и типом эмбриоидов. Впервые на рапсе показано совместное влияние пониженных положительных температур (3-5°С) и регуляторов роста (2,4-Д, кинетина, гиббереллиновой кислоты) на эм-

бриоидогенез в культуре пыльников ярового рапса. В результате исследований созданы линии с ценными селекционными признаками и свойствами.

На рассмотрении научно-технической экспертизы находится заявка на изобретение «Способ культивирования изолированных пыльников растений ярового рапса» № 2006101968/13 от 24. 01.06.

Практическая значимость работы. Разработанный метод получения удвоенных гаплоидов в культуре пыльников in vitro может быть рекомендован для использования в селекционных программах. По результатам работы опубликованы «Методические рекомендации по получению андроклинных растений ярового рапса» (1999 г.), методическое пособие «Биотехнология» для лабораторных работ студентов ЛГПУ (2004 г.). Находятся в печати рекомендации «Технология получения удвоенных гаплоидных растений ярового рапса».

Создана коллекция андрогенных линий ярового рапса в количестве более 2000 номеров, включающие «00» типы, высокомасличные линии, ко- то-рые могут быть широко использованы в селекционной работе при создании нового исходного материала и гетерозисных гибридов.

Апробация работы и публикации результатов исследований. Результаты исследований и основные положения диссертационной работы были доложены на межрегиональной научно-практической конференции молодых учёных и специалистов (Воронеж, 1991 г.), областной научно-практической конференции (Липецк, 1996 г.), Всероссийской научно-производственной конференции (Пенза, 1998 г.), научной сессии Россельхо-закадемии (Киров, 1998 г.), межвузовской научной конференции преподавателей, аспирантов и студентов (Липецк, 2000 г.) и на международных координационных совещанииях по рапсу (Липецк, 2000,2005 гг.).

По теме диссертации опубликовано 14 работ в научных изданиях.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста. Состоит из введения, 4 глав, выводов и предложений для селекционной практики. Экспериментальные данные изложенные в 21 таблице, 21 рисунке и 6 приложениях. Список литературы включает 227 наименований, в том числе 171 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в лаборатории биотехнологии растений ГНУ ВНИПТИР с 1990 по 2005 гг.

В исследованиях использовали сортообразцы рабочей коллекции отдела селекции и гибриды ярового рапса. Культивирование пыльников, сбор бутонов, предобработку проводили согласно методическим рекомендациям (Муравлёв, 1999).

Дополнительно изучали влияние на эмбриоидогенез сочетание пониженных положительных температур (3-5°С) с регуляторами роста (2,4-

дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д), гиббереллиновой кислоты, кинети-на) в концентрациях - 0,1; 0,5; 1,0 мл / л.

Дополнительно в питательную среду добавляли мезоинозит в концентрациях 50,100, 200 мг/л и хелат железа в концентрациях 5,0, 7,5, 10,0, 12,5, 15,0 мг/л.

Уровень плоидности регенерантов исследовали цитофотометричес-ким методом (Lutsenko et al., 2005).

При анализе структуры урожая определяли: высоту растений, длину центральной кисти, число стручков в центральной кисти, число семян в стручке, число стручков на растении, массу 1000 семян.

Качество семян оценивали по содержанию эруковой кислоты (ГОСТ 30089-93, 1996), глюкозинолатов (Демьянчук и др., 1988) и масличности (ГОСТ 134496.15-85).

Устойчивость андрогенных линий к болезням оценивали на инфекционном фоне лаборатории генетики и иммунитета растений ГНУ ВНИПТИР. Закладка опытов, фенологические наблюдения, самоопыление линий проводили по общепринятым методикам (Пустовойт, 1967). Фазы развития рапса выделяли согласно классификатору ВИР (Куделич, 1983).

Дифференциацию по баллам поражённости фузариозом проводили, исходя из количества больных растений (Никоноренков, 2000).

Наследуемость индукции эмбриоидов в пыльниках гибридных растений рассчитывали по формуле (Дорофеев, Пушкина, 1974).

Статистическая обработка экспериментальных данных проводилась по методике Б. П. Доспехова (1985), AGROS-2.06 (1997).

РАЗРАБОТКА ОПТИМАЛЬНЫХ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ АНДРОГЕНЕЗА ЯРОВОГО РАПСА В КУЛЬТУРЕ ПЫЛЬНИКОВ IN VITRO

Оптимизация минерального состава питательной среды

Для определения оптимального минерального состава питательной среды в культуре пыльников ярового рапса использовали наиболее распространённые их прописи (табл. 1).

Формирование эмбриоидов на поверхности пыльников наблюдали на всех питательных средах, при этом частота выхода эмбриоидов колебалась от 0,4% на средах LS и Blaydes до 1,8% на среде MB 5.

Достоверно лучший результат отзывчивых пыльников получен на модифицированной среде Гамборга (MB 5) - 1,0% (НСРо,оз= 0,19). На этой среде частота формирования эмбриоидов является максимальной и составляет -1,8%, различия между изучаемыми средами достоверны (НСР0,05= 0,18).

Таблица 1

Влияние состава питательной среды на андрогенез ярового рапса,

1990 г.

Количество, шт. Частота, %

Среда культивируемых отзывчивых эмбриои- отзывчивых выхода эм-

пыльников пыльников дов пыльников бриоидов

В5 3216 25 30 0,8 0,9

МВ5 2025 21 36 1,0 1,8

МВ 2100 12 17 0,6 0,8

2115 7 9 0,3 0,4

Вкуёеэ 1847 8 8 0,4 0,4

НСРо.05 0,19 0,18

Влияние регуляторов роста на эмбриоидогенез пыльников

В дальнейших исследованиях изучали влияние концентраций 2,4-Д на индукцию эмбриоидов в культуре пыльников рапса (табл. 2).

Таблица 2

Влияние концентраций 2,4-Д на андрогенез ярового рапса сорта Наппа, 1990 г.

Количество, шт. Частота индукции, %

Концен- культиви- отзывчивых эмбриоидов пыльников эм-

трация, руемых пыльников брио-

мг/л пыльников идов

од 480 3 6 0,63 1,3

0,25 556 4 7 0,71 1,1

1,0 540 3 4 0,56 0,7

НСРо.оз 0,26 0,29

Частота индукции эмбриоидов на изучаемых средах составляет 0,7 -1,3%. Не существенны различия между средами, содержащими 0,1 и 0,25 мг/л 2,4-Д.

Результаты культивирования пыльников на среде с различными регуляторами роста выявили различия по частоте выхода эмбриоидов (табл. 3)

Максимальная частота индукции пыльников и сбор эмбриоидов получены на среде, содержащей 2,4-Д и НУК в концентрации по 0,1 мг/л. Различия с другими изучаемыми средами по частоте отзывчивости пыльников и выходу эмбриоидов достоверны.

Таблица 3

Влияние фитогормоналыюго состава питательной среды на андрогенез пыльников сорта Hanna, 1990 г.

Регуляторы роста, мг/л Количество, шт. Частота, %

культивируемых пыльников отзывчивых пыльников эмбриоидов отзывчивых пыльников выхода эмбриоидов

2,4-Д-ОД НУК0,1 876 6 8 0,7 0,9

2,4-Д-ОД кинетин-0,25 1627 6 9 0,4 0,6

2.4-Д-0.1 6-БАП-0,25 1896 3 3 0,2 0,2

НСРо.05 0,08 0,22

Влияние мезоинозита на эмбриоидогенез в культуре пыльников

Индукция эмбриоидов у изучаемых образцов на каждой концентрации мезоинозита различна (табл. 4). Максимальная частота выхода (сбора) эмбриоидов получена у сорта Global на среде с добавлением 50 мг/л мезоинозита - 9,3%. При культивирование пыльников на стандартной среде с добавлением 100 мг/л лучший результат- 10,8% - получен у образца WW 3525-88.

Таблица 4

Влияние донорного генотипа и концентраций мезоинозита на андрогенез, 1992 г.

Образец, фактор А Концентрация, мг/л, фактор В Количество, шт. Частота индукции эмбриоидов, %.

культивируемых пыльников эмбриоидов

Global 50 150 14 9,3

100 172 3 1,7

200 125 2 0,8

WW 352588 50 90 3 3,3

100 74 8 10,8

200 177 3 1,7

НСР0,05 по фактору А = 0,65; по фактору В = 0,79

Взаимодействие факторов А и В = 0,79

Максимальный эффект взаимодействия генотип-среда получен у образца WW 3525-88 при культивировании пыльников на стандартной среде с добавлением 100 мг/л - 10,8%.

Таким образом, использование в питательных средах для рапса рекомендуемой концентрации мезоинозита (100 мг/л) не является оптимальной, В тоже время добавление в среду 50 мг/л также не является оптимальной, и можно предположить, что наиболее универсальной для всех генотипов рапса будет концентрация мезоинозита 75 мг/л.

Влияние хелата железа на змбриовдогенез

Известно, что недостаток железа в индукционной питательной среде останавливает развитие э мори о идо в на глобулярной стадии (№15с!1, 1969),

Результаты культивирования пыльников сорта Ратник на питательных средах с различным содержанием хелата железа показали, что увеличение концентрации железа стимулирует индукцию эмбриоидов с 0,53% в варианте без хелата до 2,32% в варианте с добавлением 10,0 мг/л хелата железа. Культивирование пыльников на изучаемых вариантах сред приводит к дифференциации эмбриоидов по различным типам (рис. ]). Выделены следующие типы развития: полиэмбриоидный, глобулярный, сердцевидный, тор пело видный, котиледольный (семядольный), аномальный.

варианта

ИполиэмбриондньЕй Е глобулярный О сердцевидный Оторпсллвилный б котиледольный

Рис. 1. Влияние хелата железа на частоту индукции и тип эмбриоидов.

Варианты: 1 - 0 мг/л; 2 - 5,0 мг/л; 3 - 7,5 мг/л; 4 - 10,0 мг/л; 5 - 2,5 мг/л; 6-15 мг/л.

Формирование эмбриоидов сердцевидного типа лучше происходит на варианте с добавлением 12,5 мг/л хелата и соответствует 50,0 % индукции эмбриоидов. Максимальный эмбриоидогенез торнедовидного типа, 39,3%, получен на варианте с добавлением 10,0 мг/л хелата железа.

Предобработка бутонов дсшорных растений

Предобработка бутонов холодом стала важнейшей составной частью в повышении эмбриоидогенеза пыльников рапса (Keller, Armstrong, 1978; Dunwell, Cornish, 1985; Keller, Klocke, 1986).

Обработка бутонов раствором 2,4-Д во всех концентрациях стимулировала образование эмбриоидов (рис. 2). Максимальный выход - 6.6% получен на растениях сорта Hanna rip и хранении бутонов в растворе 1,0 мг/л. У других генотипов при увеличении концентрации 2,4-Д до I мг/л сохранялась тенденция повышения выхода эмбриоидов. Различия между генотипами при данной концентрации достоверны (HCPo.ss "0,15, фактор А).

1 2 3 4 5

Я Karat 0,9 2,7 5,5 5,6 5,3

□ Hanna 1,8 2,8 5,6 6,6 5,9

И К-4285 Ii 2,5 4,1 4,3 4

Рис. 2, Зависимость частоты выхода эмбриоидов (%) от обработки 2,4-Д (мг/л) и генотипа. ! - контроль; 2 - 0,1 мг/л; 3 - 0,5 мг/л; 4 - 1,0 мг/л; 5 - 1,5мг/л.

Использование кинетина в качестве обрабатывающего раствора стимулирует образование эмбриоидов на пыльниках всех изучаемых образцов в сравнение с контролем (рис 3). Максимальный выход (5,5%) эмбриоидов у сорта Karat получен при совместной обработке бугонов в концентрации раствора 0,5 мг/л и пониженной положительной температуре. Индукция эмбриоидов у образцов Hanna и к-4285 также выше на данной концентрации -3,5 и 3,7%, соответственно.

Обработка бутонов раствором ГК в минимальной концентрации 0,1 мг/л стимулировала максимальную индукцию эмбриоидов у сорта Karat и образца к-4285 до 7,4 % и 5,3 % , соответственно (рис.4). Различия по фак-

1 2 3 4

Ш Karat 0,9 7,4 5,4 1,8

□ Hanna 1,8 5,5 5,1 3,3

: Ш k-4285 1,8 5,3 4,3 2,8

Рис. 4. Зависимость частоты выхода эмбриоидов (%) от обработок ГК (мг/л) и генотипа. 1- контроль; 2- 0,1 мг/л; 3- 0,5 мг/л; 4-1,0 мг/л.

тору А, то есть между генотипами, на всех вариантах обработки фитогормо-ном достоверны (НСРо,о5 = 0,14). Частота индукции эмбриоидов после обработок разными концентрациями ГК у всех сортообразцов имеет достоверные различия (НСРо,05 = 0,16, фактор В).

■ Karst ; 0,9 2,7 5,5 3,9 □ Наша 1,8 2 3,5 2 Йк-4285 1,8 2,1 3,7 2,7 Рис.3. Зависимость частоты выхода эмбриоидов (%) от обработки кинетином (мг/л) и г енотипа; 1 - контроль; 2 - 0,1 мг/л; 3 - 0,5 мг/л; 4 - 1,0 мг/л.

Таким образом, максимальный выход эмбриоидов зависит от сочетания продолжительности обработки бутонов холодом, от типа и концентрации фи-тогормонов и генотипа донорного растения.

Стадия развития пыльников

Важнейшим условием успешной индукции эмбриоидогенеза является отбор пыльников на определённой стадии развития микроспор (Zaki, Dickinson,1991). Результаты культивирования пыльников сорта Hanna разных размеров показали, что максимальная частота выхода эмбриоидов - 1,0% получена на пыльниках, размер которых находится в интервале 2,5-3,5 мм (2 группа) На пыльниках большего размера 3,5-4,5 мм (3 группа) частота выхода эмбриоидов снижается - 0,6%. Пыльники размером 1,5-2,5 мм (1 группа) индуцируют эмбриоиды с частотой 0,9%. Различия в частоте эмбриоидогенеза между 1 и 2 группой не существенны (НСР0.о5=0,27).

Отмечено, что каждому размеру пыльников соответствует определённая окраска: 1 группа - светло-зелёная, 2 группа - зелёная, 3 группа - жёлто-зелёная.

По результатам исследований, Келлер (Keller, 1983) предложил в качестве маркерного показателя использовать длину лепестка, которая равна 0,25-0,50 длины пыльника.

Анализ пыльников 1 группы показал наличие большого количества микроспор на ранней одноядерной стадии развития. Стадия развития бутонов соответствует предложенным показателям.

Температурные условия культивирования изолированных пыльников

Повышенная температура культивирования в течение 14 суток положительно влияет на выход эмбриоидов на всех изучаемых средах, за исключением среды Мурасиге и Скуга (MS) (рис. 5).

Максимальная частота выхода эмбриоидов - 1,6% получена на среде MB 5 при повышенной температуре. Резкое различие в выходе эмбриоидов наблюдали на среде В 5, повышенная температура стимулирует образование эмбриоидов с 0,4% в контроле до 1,3% в опыте.

Таким образом, культивирование пыльников в условиях с повышенной температурой - 30°С, в течение 14 суток стимулирует эмбриоидогенез в пыльниках ярового рапса сорта Hanna на среде MB 5 с 1,0% до 1,8%.

12 3 4 5

азсгс

Рис. 5. Влияйие температур культивирования и состава сред на андрогенез.

1 - В5;2- MB5;3 - MS;4 - LS: 5 - Blaydes.

I____________________

Влияние генотипа доноров на андрогенез ярового рапса

В работе по оценке сортов ярового рапса на способность к андрогенезу использовали сорта из рабочей коллекции отдела селекции ярового рапса.

Максимальную способность эмбрион догенеза получили у пыльников сорта Bnitor (Франция) - ] 7,0%.

Из отечественных сортов максимальную индукцию эмбриоидов получили у Фрегата - 10,4% и CHK-I98 - 10,0%. Лучшая регенерация была получена на сортах Эввин - 90,0% и Галант - 83,9%.

Сорта и образцы канадской селекции индуцировали эмбриоиды с частотой от 0,6 до 3,3%. Максимальную индукцию эмбриоидов наблюдали у образца 98 № 10608 ~ 3,3% и сортов Triton - 2,5%, Christe - 2,4%. Регенерация растений составила от 5,0% у сорта Christe до 123,0% у эмбриоидов do рта Andor. Высокая регенерация растений получена ори использовании культуры вторичных эмбриоидов. Не были получены растения у сортов Triton, Ого, Tower и образцов 98 № 08223, 98 № 08228.

Причина низкого андрогенеза сортов канадской селекции, по нашему мнению, состоит в их узкой генетической базе. При создании сортов использовали в основном отборы из сортов Ого, Tower.

Хорошей андрогенной способностью характеризуются сорта финской селекции, из трёх изученных сортов два индуцируют эмбриоиды с частотой 7.9 % и 8,9 %, а лучшей регенерационной способностью обладал сорт Deki -93,0 %.

Французские сорта Orpal и Brutor индуцировали эмбриоиды от 3,0 % до 17,0 %. Регенерация растений из эмбриоидов составила 57,0 и 85,7 %. В создании этих сортов была использована общая материнская форма - сорт Canbra, а опылителями были разные сорта.

Пыльники растений сортов немецкой селекции индуцировали эмбрио-иды с частотой от 0,8 % у Zemu 250 до 7,9 % у сорта Pura. Не были получены растения из эмбриоидов сорта Zemu 249 и Kosa.

Частота выхода эмбриоидов шведских сортов изменялась в пределах от 0,3 % (AC Excel) до 15,2 % (Karat). Не регенерировали растения эмбриоиды из пыльников сортов Gulliver, Global, Galaxy, AC Elect, AC Excel. В Швеции сорта ярового рапса создавались на базе Bronowski, Oro, Guile и Hermes.

Таким образом, на основании полученных результатов сделан вывод, что способность пыльников к эмбриоидогенезу и регенерации растений зависит от генотипа донорного сорта.

В таблице 5 представлены результаты андрогенеза сортов ярового рапса из разных регионов происхождения. Различия между сортами стран Северной Европы - 3,5% и России - 3,5% не существенны (НСР005 = 0,29) Это объясняется тем, что из 14 сортов ярового рапса, внесённых в Госреестр, 9 (64,3%) имеют генетическую плазму шведских сортов (Карпачёв, 1997).

Таблица 5

Влияние места происхождения рапса на андрогенез

Группы по происхождению Страны Количество, шт. Частота, %

культивируемых сортов отзывчивых сортов культивируемых пыльников отзывчивых сортов индукции эмбриоидов

Россия 13 12 9824 92,3 3,5

Центральная Европа Австрия, Германия, Польша, Чехия 13 13 4438 100 3,1

Западная Европа Англия, Франция 3 3 2456 100 4,4

Северная Европа Финляндия, Швеция 19 18 10730 94,7 3,5

Северная Америка Канада 16 16 13278 100 1,2

Итого: 63 61 40726 96,82 2,75

Все сорта показали хорошую способность к андрогенезу, исключение составили сорта Северной Америки, у которых частота индукции эмбриоидов является самой низкой - 1,2%. Различия с другими регионами достоверны.

Максимальную частоту индукции эмбриоидов наблюдали на пыльниках сортов селекции стран Западной Европы - 4,4%. Сравнивая эмбриоидоге-нез сортов выявили, что высокий выход эмбриоидов получили за счёт сорта Впйог (17,0%). При исключении данного сорта из расчёта частоты выхода эмбриоидов сортов региона Западной Европы она составила - 3,1%, это на-

ходится в пределах показателей эмбриоидогенеза сортов Европейского эко-типа.

Таким образом, исследованиями установлена связь между происхождением сортов и их способностью к андрогенезу. Особенно это показано на примере андрогенеза сортов европейского и американского происхождения.

Эмбриоидогенез пыльников гибридов Fi и андрогенных линий

Нами изучена частота андрогенеза у гибридов, родителями которых при скрещивании были отзывчивые и менее отзывчивые сорта рапса (табл 6). Различия по выходу эмбриоидов в данном эксперименте существенны (НСР0,05= 0,21).

Максимальное количество эмбриоидогенных структур получено у гибрида Ратник х Аргумент в Fi поколении (9,5%). У этого гибрида получили образец, имеющий сверхдоминирующую способность индуцировать эмбрио-иды. Это единственный образец в наших исследованиях, который превосходит родительские сорта по способности формировать эмбриоиды.

Гибридная комбинация Липецкий х Ж 99-89 индуцировала эмбриоиды с частотой 1,5%, что ниже соответствующих показателей родителей. В данной комбинации отцовский генотип имел выход эмбриоидов выше, чем материнский, и попытка повысить способность к андрогенезу не увенчалась успехом. В этом случае получили полное доминирование индукции эмбриоидов по материнской линии.

У гибрида, полученного от отзывчивого образца Brassica napus 1283 (2,6%) и слабо отзывчивого Ac Elect (0,8%), получены растения, которые индуцируют эмбриоиды с разной частотой. Использование в качестве материнского генотипа Brassica napus 1283 привело к снижению индукции на 1,4%. Наблюдалось промежуточное наследование андрогенеза по материнской линии - 1,2%. Использование Ac Elect в качестве материнской формы снижает индукцию эмбриоидов до 0,1%. Происходит депрессия индукции эмбриоидов.

Таким образом, в результате проведённых исследований только одна гибридная комбинация Fj (Ратник х Аргумент) позволяет получить повышение андрогенеза и более полно оценить комбинацию по селекционным показателям.

Аналогичные результаты были получены и в скрещивании 98 № 10608 х Excel. Исключение составляет гибридная комбинация 98 № 05058 х 08228, в которой в качестве материнской линии использовали отзывчивый сорт, в результате культивирования пыльников выявили полное снижение (депрессию) андрогенеза.

Анализ индукции эмбриоидов гибридных комбинаций показал достоверные различия в эмбриоидогенезе пыльников (HCPo.os= 0,21).

Таблица 6

Эмбриоидогенез в культуре пыльников гибридов ярового рапса, 2002 г.

Количество, шт. Частота индукции

культиви- эм- эмбриоидов

Наименование руемых бриои- насле-

пыльников дов % дования

Липецкий 578 25 1,8

Fi (Липецкий х ЛК-99-89) 741 11 1,5 Д

ЛК-99-89 527 12 2,3

Ратник 200 11 5,5

Fi (Ратник х Аргумент) 470 21 9,5 СД

Аргумент 543 3 0,6

Brassica napus 1283 819 21 2,6

Fi(Brassica napus 1283 x Ac Elect) 1008 18 1,2 нд-

Fi(Ac Elect x Brassica napus 1283) 685 1 0,1 Д

Ac Elect 258 2 0,8

98 № 10608 1031 34 3,6

F, (98 №10608 x Ex Cel) 815 6 0,7 нд-

Fi (Ex Cel x98 № 10608) 1006 1 0,1 д

ExCel 348 1 0,3

98 № 08228 887 5 0,6

F, (98 № 08228 x 98 № 05058) 889 6 0,7 нд-

Fi (98 № 05058 x 98 № 08228) 459 0 0 д

98 № 05058 1130 16 1,4

HCPQ.05 0,21

Примечание: Д - депрессия (отрицательный гетерозис); НД+ (НД-) -неполное доминирование одного из родителей; СД - сверхдоминирование (гетерозис).

В следующей серии экспериментальных исследований с применением разработанной технологии в качестве доноров использовали AJ1 для выявления их отзывчивости в культуре пыльников (табл. 7). Способность к андроге-незу AJI сравнивали с исходными донорными сортами. Из 5 андрогенных линий Hanna две (509, 907/1) превосходят донорный сорт по частоте индукции эмбриоидов — 9,5 и 5,5%.

Лучшая по частоте отзывчивых пыльников и выходу эмбриоидов среди линий сорта Karat линия 961/13 - 51,3%. Все андрогенные линии имеют достоверные различия с донорным сортом по индукции эмбриоидов.

Таким образом, использование AJI в качестве донорных растений при введении пыльников в культуру оказывает влияние на повышение индукции эмбриоидов. У сорта Hanna 40,0% линий превосходят донорный сорт по частоте индукции эмбриоидов, а у сорта Karat только 16,7%.

Таблица 7

Эмбриоидогенез андрогенных линий ярового рапса, 1999 г.

Номер образца Количество, шт. Частота, % Получено растений

культивируемых пыльников отзывчивых пыльников эм-бриои- ДОВ отзывчивых пыльников выхода эмбриои-дов количество, шт %

Hanna

AJI-498 327 3 4 0,9 1,2 2 50,0

АЛ-509 355 7 34 1,9 9,5 20 58,8

АЛ-906/1 72 1 1 1,4 1,4 1 100,0

АЛ-906/2 234 2 2 0,8 0,8 2 100,0

ДН-907/1 72 3 4 4,2 5,5 3 75,0

сорт Наппа 1810 19 64 1,0 3,5 41 64,0

НСР0,05 0,61

Karat

АЛ - 754 1067 29 117 2,7 10,9 101 89,2

АЛ - 809 669 1 1 0,1 0,1 0 0

АЛ-940 4443 1 1 0,2 0,2 1 100, 0

АЛ-943 276 2 2 0,7 0,7 1 50,0

АЛ-944 107 0 0 0 0 0 0

АЛ - 947 148 11 28 7,4 18,9 15 53,5

АЛ - 948 88 1 1 1,1 1Д L 0 0

АЛ-950 158 0 0 0 0 0 0

АЛ-961/1 108 2 3 1,9 2,8 2 66,6

АЛ-961/10 72 1 3 1,4 4,2 1 33,3

АЛ-961/13 158 15 81 9,5 51,3 12 14,8

АЛ-963/2 57 3 4 5,2 7,0 2 50,0

сорт Karat 342 5 52 1,5 15,2 52 100, 0

НСРо,о5 0,71

Эмбриоидогенез межвидовых гибридов ярового рапса

С целью расширения изменчивости генотипов в эксперименте использовали пыльники межвидовых гибридов рапса сорт Ратник {Brassica napus) с

сортами сурепицы Эмма, L 159 (Brassica rapa), капусты белокочанной сорт Харьковская 6 (Brassica oleráceo) и горчицы белой сорт Рапсодия (Sinapis alba).

Максимальный процент эмбриоидогенеза отмечен у гибрида F, (Ратник х Эмма) - 4,7 %. Индукция эмбриоидов у данного гибрида имеет достоверные различия (НСРо,о5 = 0,53). Замена опылителя на другой сорт сурепицы (L-159) снижает индукцию эмбриоидов до 0,75 %. Аналогичные результаты получены и при эмбриоидогенезе пыльников гибридов Fi (Аргумент х L 159) и Fi (Аргмент х Эмма), процент выхода эмбриоидов составляет от 0 до 2,9 %, соответственно.

Культивирование пыльников гибрида Fi с участием андрогенной линии Ликолли повышает выход эмбриоидов до 1,79 %, что выше, чем использование в качестве материнской формы донорного сорта Ликолли (0,0%).

Гибрид F5, полученный от скрещивания капусты белокочанной (Харьковская 6) с рапсом (Hanna), индуцировал эмбриоиды с частотой 0,6 %. В ранних поколениях индукцию эмбриоидов на пыльниках не наблюдали.

Индукция эмбриоидов межвидового гибрида В napus (сорт Ратник) и Sinapis alba (сорт Рапсодия) получена только в F¿. Процент выхода эмбриоидов у этого гибрида составил 1,4 %.

Таким образом, на примере межвидовых гибридов (Харьковская 6 х Hanna) и (Ратник х Рапсодия) показано увеличение выхода эмбриоидов в 5 и 6 поколениях.

Регенерация растений из эмбриоидов ярового рапса

Анализ регенерационной способности сортов показал, что в большинстве случаев регенерация растений из культивируемых пыльников осуществляется путём эмбриоидогенеза. Однако, в некоторых случаях развитие происходило путём вторичного эмбриоидогенеза, эти результаты согласуются с данными других авторов (Loh, Ingram, 1982; Loh et. al., 1983; Lott, Haube, 1983; Антонова, Никитина, 1990).

В результате культивирования пыльников на питательных средах были выделены 6 типов (стадий) эмбриоидов и определена регенерационная способность каждого типа (табл. 8). Регенерация эмбриоидов у всех типов имеет достоверные различия. Нет существенных различий по прорастанию эмбриоидов у сердцевидного и семядольного типов.

Выявлено, что структуры аномального типа не формировали растения, и только дополнительная пересадка на органогенную среду MS с добавлением регуляторов роста 6-БАП в концентрации 0,2 мг/л и НУК - 0,1 мг/л способствовала индукции вторичных эмбриоидов. Регенерация растений получена при пересадки их на безгормональную среду с Уг состава макросолей. Из-за отсутствия прямой регенерации растений не приведены данные по эм-бриоидам аномального типа.

Формирование аномальных эмбриоидов является особенностью культуры пыльников капустных культур В. campestris (Keller et al., 1975), В. napus (Keller, Armstrong, 1977), B. nigra (Govil et al., 1986).

Анализ регенерационной способности эмбриоидов по типам выявил, что сердцевидные и торпедовидные эмбриоиды имеют хорошую частоту регенерации растений (66,6 и 76,9 %), несколько снижается регенерационная способность у семядольных структур - 62,5 %.

Таблица 8

Влияние типа эмбриоидов на регенерацию растений, 1994 г.

Тип Количество эм- Регенерация растений

эмбриоида бриоидов, шт. штук %

глобулярные 20 6 30,0

полиэмбриоиды 22 9 40,9

сердцевидные 27 18 66,6

торпедовидные 26 20 76,9

семядольные 16 10 62,5

НСРо.05 5,24

Таким образом, регенерация растений зависит от типа эмбриоидов, лучшую регенерацию имели сердцевидные эмбриоиды. Пересадка эмбриоидов с морфологическими нарушениями на среду для формирования вторичных эмбриоидов повышает количество растений.

За годы исследований были получены 667 растений из первичных эмбриоидов и 795 из вторичных растений ярового рапса. Выявлено, что расте-ния-регенеранты имели различия по морфологическим признакам. Одна группа по внешнему виду не отличалась от донорных растений, эта группа нами охарактеризована как спонтанно удвоенные гаплоиды (Hoffmann, 1982; Lichter, 1985: Govil et al., 1986). Другая группа имела мелкие бутоны и лепестки меньшего размера, редуцированные пыльники с незначительным количеством редуцированной пыльцы. Бутоны этой группы были взяты для определения плоидности растений.

С помощью цитофотометрического анализа определили плоидность трёх линий данной группы: Hanna, Липецкий, Karat и сорта Hanna, все три линии являются гаплоидами.

Биотехнология создания AJI ярового рапса

На основании многолетних исследований закономерностей процессов морфогенеза и регенерации растений в культуре изолированных пыльников in vitro, предлагаем оптимизированную гаплоидную технологию применительно к используемым генотипам ярового рапса (рис. 6).

Получение гибридов РГР2 выращивание донорных

_растений _

1 срок (поле), 2 срок (поле), 3 срок теплица (освещение 3000 люкс при 15/20°С, день/ночь)

_I_

Отбор донорных растений

Сбор бутонов, размер (1,5 - 3,5 мм)

_I_

Холодовая предобработка бутонов (4-6°С) _в растворе ГК - 0,1 мг/л, 48 часов_

_I_

Культивирование пыльников в темноте на среде: Гамборга (В5) + хелат железа - 10 мл/л, мезоинозит 75 мг/л, 2,4-Д - 0,1 мг/л, НУК - 0,1 мг/л при температуре 30°С в течение 14

суток

Культивирование эмбриоидов на свету и пересадка:

Типы

глобулярные, сердцевидные,

полиэмбриоиды, торпедовидные,

ненормальные эмбриоиды котиледольные эмбриоиды

органогенная среда: регенерационная среда:

МБ + 6-БАП - 0,2 мг/л, —> '/г М8 без гормонов

НУК-0,1 мг/л

Пересадка в почву, получение семенного материала

Анализ плоидности регенерантов,

колхицинирование (0,5%), 18 часов

_±_

Биохимический анализ семян (эруковая кислота, глюкозино-

_латы)_

_А_

Отбор и передача селекционерам _андрогенных линий._

Рис. 6. Регламент получения андрогенных линий ярового рапса.

ХАРАКТЕРИСТИКА АНДРОГЕННЫХ ЛИНИЙ ЯРОВОГО РАПСА ПО БИОЛОГИЧЕСКИМ И ХОЗЯЙСТВЕННО - ЦЕННЫМ

ПРИЗНАКАМ

Варианты регенерантов по высоте, массе и другим характеристикам

Анализ андрогенных линий выявил, что высота растений и длина центральной кисти у большинства линий (76,2 %) достоверно меньше донорного сорта Hanna. За счёт меньшей длины кисти снижается высота растений и повышается устойчивость к полеганию растений - с 2,5 до 5 баллов.

Важным элементом, влияющим на урожайность растений, является число стручков на растении. По этому показателю большинство линий (80,9 %) уступают, а остальные (19,1 %) находятся на уровне сорта-донора Шесть линий (28,6%) превышают сорт Hanna по количеству семян в стручке и массе семян. Девять или 42,8% линий имели массу семян достоверно ниже донорного сорта.

В таблице 9 представлены данные биохимического анализа семян андрогенных линий. Анализ содержания эруковой кислоты и глюкозинолатов показал большое разнообразие по этому показателю.

Таблица 9

Биохимические варианты андрогенных линий.

Количество линий

Наименование Всего «00» типа Эруковая ки- Глюкозино-

линий шт. слота более 0,5% латы более 0,6%

шт. % шт. % шт. %

АЛ Наппа 60 19 31,7 41 68,3 6 10,0

АЛ Karat 70 57 81,4 13 10,6 1 1,4

АЛ Липецкий 37 25 67,6 11 29,7 9 24,3

АЛ Липецкий 1 7 4 57,1 1 14,2 3 42,8

АЛ Талант 14 1 7,1 5 37,7 12 85,7

АЛ Loras 4 2 50,0 2 50,0 2 50,0

АД Duplo 4 2 50,0 1 25,0 1 25,0

196 110 56,12 74 37,75 34 17,34

Изучение характеристик андрогенных линий выявили различия по содержанию масла в семенах (табл. 10). Анализ масличности семян 43 андрогенных линий выявил различия линий между сортами и внутри линий. 14 линий достоверно превышают стандартный сорт Ратник по содержанию масла в семенах (НСР0,05 = 1,44). Лучшие по содержанию масла в семенах выделены 4 андрогенных линий из сорта Наппа (64/4-96, 68/3-96, 69/1-96, 169-96), 5 из

линий Karat (71/2-96, 72/20-96, 74/11-96, 76-96, 296-93), 2 из Orpal (16/2, 16/7), 1 из Haplona (56/2), 1 из Duplo (129/2), 1 из Loras (122/3-96).

Таблица 10

Масличность семян андрогенных линий ярового рапса, 2000 г.

Наименование линии Пределы содержания масла в семенах, %

минимальное максимальное среднее по линиям

сорт Hanna 45,47

Hanna 37,30 51,10 44,55

Karat 38,58 50,47 45,13

Orpal 41,68 48,79 44,97

Loras 43,77 44,31 44,08

Haplona 41,73 48,43 45,04

Duplo 36,67 48,21 42,62

Westar 38,06 46,12 42,53

st Ратник 46,67

Проблема создания устойчивых к болезням сортов рапса является одной из важнейших в селекции растений (Ога^^, 1985; Никоноренков, 1995; 2000).

На инфекционном фоне 1996 г. изучали 120 линий. Основное количество линий (59 шт. или 49,2%) поражалось фузариозом на уровне 3 баллов. Андрогенные линии, полученные из одного сорта, имели большие различия по поражённости (табл. 11).

Таблица 11

Оценка андрогенных линий по поражённости фузариозом, 1996 г.

Наименование образца Всего образцов, шт. Количество пораженных образцов, %

1,0 1,1-3,0 3,1-5,0 5,1-6,0 Свыше 6,0

AJI Hanna 49 2,0 59,2 16,3 8,2 14,3

st Hanna 1 - - - - 100,0

AJI Липецкий 15 - 53,4 20,0 20,0 6,7

st Липецкий 1 - - 100,0 - -

АЛ Золото-нивский 1 - 100,0 - - -

st Золотонив-ский 1 - 100,0 - - -

АЛ Талант 12 83,4 8,3 - - 8,3

st Талант - 100,0 - - -

АЛ СНК 198 2 100,0 - - - -

stCHK 198 1 100,0 - - - -

В результате анализа выявили линии, обладающие фузариозной устойчивостью выше донорных сортов - AJI 60-94, AJI 5-96 и AJI 40-96. В настоящее время в разных питомниках отдела селекции изучаются андрогенные линии межсортовых и межвидовых гибридов.

В 2001 г в ГНУ ВНИИМК изучались 29 андрогенных линий ярового рапса лаборатории биотехнологии.

Анализ урожайности семян показал, что АЛ 214-97 (Глобаль х Липецкий) на 1,54 ц/га превосходит стандарт - 8,18 ц/га. Различия достоверны (НСРо,о5= 0,57). Шесть линий формировали урожай на уровне стандарта (Яр-велон). По содержанию масла в семенах 6 линий (№, № 2-93, 32-00, 28-00, 31-00, 36-00, 39-00) имели показатели на уровне стандарта- 43,4% (НСР0 os -1,67). Выделены линии (№, № 157-96, 7-00, 31-00, 34-00, 36-00), содержащие глюкозинолаты меньше стандартного сорта Ярвелон - 15,1 мкмоль/г. Различия между лучшими линиями, которые могут быть использованы в селекционных программах, и стандартом достоверны (HCP0j05= 0,79)

ВЫВОДЫ

1. Разработан технологический регламент получения андрогенных ди-гаплоидных линий ярового рапса.

2. Оптимальной питательной средой для культивирования пыльников ярового рапса является модифицированная среда Гамборга (МВ 5) с добавлением 2,4-Д и НУК в концентрации 0,1 мг/л, хелата железа - 10,0 мг/л, мезо-инозита - 75,0 мг/л.

3. Определены условия предобработки бутонов пониженными температурами (4-6°С) в сочетании с регуляторами роста: 2,4-Д в концентрации 1 мг/л повышает частоту индукции эмбриоидов с 1,8% до 6,6%; гиббереллино-вая кислота в концентрации 0,1 мг/л - с 0,9% до 7,4%.

4. Начальные условия культивирования изолированных пыльников в течение 14 суток при 30°С повышают индукцию эмбриоидов на всех изучаемых средах. Максимальная частота индукции эмбриоидов получена на среде МБ 5- 1,6%.

5. На андрогенез ярового рапса оказывает влияние происхождение и генотип донорного сорта. Европейский экотип индуцирует эмбриоиды с более высокой частотой (3,1 - 4,4%), чем образцы из Северной Америки (1,2%).

6. Использование андрогенных линий в качестве донорных растений повышает эмбриоидогенез у 40% линий сорта Наппа и 16,7% линий сорта Karat.

7. Разработанные основные параметры культивирования пыльников ярового рапса могут использоваться для получения удвоенных гаплоидных растений межвидовых гибридов рапса.

8. Частота образования андрогенных структур (эмбриоидов) межвидовых гибридов зависит от поколений донорного гибрида В napus х В olerácea индуцируют эмбриоиды в 5 поколении - 0,6%, а гибрид В napus х Sinapis alba в 6 поколении индуцирует - 1,4% эмбриоидов

9. Регенерация растений зависит от типа эмбриоидов. Высокую регенерацию растений имеют эмбриоиды торпедовидные - 76,9%, сердцевидные -66,6%, котиледольные (семядольные) - 62,5%.

10. При оценке генотипов по способности к андрогенезу получено более 2000 удвоенных гаплоидных линий рапса. Из них выделили линии с высокой урожайностью, с высоким содержанием масла - 47,3-51,1%, фузариоз-ной устойчивостью (с баллом поражения от 1 до 3), с содержанием глюкози-нолатов в семенах 13 мкмоль/г и ниже.

ПРЕДЛОЖЕНИЕ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ

1. Для ускорения селекционного процесса и повышения эффективности отборов рекомендуется использовать разработанную технологию получения удвоенных гаплоидов ярового рапса с целью создания нового исходного материала.

2. Рекомендуем использовать разработанную технологию для получения андрогенных линий межвидовых гибридов рапса.

3. Полученные дигаплоидные линии с высоким содержанием масла (64/4-96, 68/3-96, 69/1-96, 169-96, 71/2-96, 72/20-96, 74/11-96, 76-96, 296-93, 16/2, 16/7, 56/2, 129/2), «ОО» типа (157-96, 7-00, 31-00, 34-00, 36-00), фузари-озной устойчивостью (АЛ 60-94, АЛ 5-96 и АЛ 40-96) рекомендуем использовать в селекционном процессе при создании сортов и гибридов ярового рапса на основе ЦМС.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Муравлев A.A. Культура пыльников ярового рапса / A.A. Муравлев, А.К. Мазепин // Произв. потенциал агропром. комплекса и пути улучшения его использ.: тез. докл. межрегион, науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. - Воронеж, 1991. - ЧII. - С. 108-109.

2. Муравлев A.A. Андрогенез ярового рапса: влияние ориентации пыльников к поверхности питательной среды на выход эмбриоидов / A.A. Муравлев, В.В. Карпачев // Изобретательское и инновационное творчество в решении пробл. развития Липецкой обл.: материалы обл. науч.-практ. конф., 10 апр. 1996 г. - Липецк, 1996. - Ч. II. - С. 76-77.

3. Муравлев A.A. Влияние обработки бутонов холодом на эмбриогенез пыльников ярового рапса / A.A. Муравлев // Изобретательское и инновационное творчество в решении пробл. развития Липецкой обл.: материалы обл. науч.-практ. конф., 10 апр. 1996 г. - Липецк, 1996. - Ч. II. - С. 75-76.

4. Муравлев A.A. Эффективность использования микроцита в культуре пыльников ярового рапса / A.A. Муравлев, В.А. Никоноренков // Изобретательское и инновационное творчество в решении пробл. развития Липецкой обл.: материалы обл. науч.-практ. конф., 10 апр. 1996 г. - Липецк, 1996. - Ч. II.-С. 75.

5. Муравлев A.A. Получение исходного материала для селекции рапса / A.A. Муравлев, В.А. Никоноренков //Кормопроизводство. - 1997. - №4. - С. 14-15.

6. Муравлев A.A. Получение эмбриоидов ярового рапса методом анд-рогенеза / A.A. Муравлев, Г.Н. Никонова //Сб. науч. тр. - Воронеж, 1997. - С. 86-88.

7. Муравлев A.A. Использование культуры пыльников на селективной среде / A.A. Муравлев //Интродукция нетрадиционных и редких с.-х. растений. - Пенза, 1998. - Т. 2. - С. 72-74.

8. Муравлев A.A. Реакция пыльников ярового рапса на состав питательной среды / A.A. Муравлев //Новые методы селекции и создание адаптивных сортов с.-х. культур: результаты и перспективы. - Киров, 1998. - С. 44-45.

9. Муравлев A.A. Методические рекомендации по получению андрок-линных растений ярового рапса / A.A. Муравлев, О.Г. Кривошеева. - М., 1999.-23 с.

10. Муравлев A.A. Влияние питательной среды на тип эмбриоидов ярового рапса / A.A. Муравлев // Вопр. естествознания. - Липецк, 2000. - Вып. 3. -С. 20-22.

11. Муравлев A.A. Использование методов биотехнологии растений в создании оригинального исходного материала ярового рапса / A.A. Муравлев // Науч. обеспечение отрасли рапсосеяния и пути реализации биол. потенциала рапса. - Липецк, 2000. - С. 31-33.

12. Муравлев A.A. Влияние состава питательной среды на андрогенез ярового рапса (Brassica napus L.) / A.A. Муравлев, A.A. Артамонов // Вопр. естествознания. - Липецк, 2003. - Вып. 11. - С. 99-100.

13. Жидкова E.H. Биотехнология. Методическое пособие для студентов ЛГПУ / E.H. Жидкова, Е.В. Котлярова, A.A. Муравлев. - Липецк, 2004. - 45 с.

14. Муравлев A.A. Изменение агрономических показателей у андрок-линных линий ярового рапса {Brassica napus L.) / A.A. Муравлев // Рапс -культура XXI века: аспекты использ. на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк, 2005. - С. 125-127.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Муравлёв, Анатолий Анатольевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЗНАЧЕНИЕ, БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАПСА, ИСТОРИЯ И МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ГАПЛОИДОВ КАПУСТНЫХ КУЛЬТУР (ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР).

1.1. Народнохозяйственное значение и распространение рапса.

1.2. Биологические особенности рапса.

1.3. Методы получения гаплоидов капустных культур.

1.4. История развития культуры тканей и органов in vitro.

2. УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РАЗРАБОТКА ОПТИМАЛЬНЫХ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ АНДРОГЕНЕЗА ЯРОВОГО РАПСА В КУЛЬТУРЕ

ПЫЛЬНИКОВ IN VITRO.

3.1. Оптимизация состава питательных сред.

3.1.1. Минеральный состав.

3.1.2. Влияние регуляторов роста на эмбриоидогенез пыльников ярового рапса.

3.1.3. Влияние мезоинозита на эмбриоидогенез пыльников.

3.1.4.Влияние хелата железа на эмбриоидогенез пыльников.

3.2. Предобработка бутонов донорных растений.

3.3. Стадия развития пыльников.

3.4. Температурные условия культивирования изолированных пыльников.

3.5. Влияние генотипа доноров на андрогенез ярового рапса.

3.5.1. Эмбриоидогенез пыльников гибридов F[ и андрогенных лиий.

3.5.2. Эмбриоидогенез межвидовых гибридов ярового рапса.

3.6. Регенерация растений из эмбриоидов ярового рапса.

3.7. Удвоение хромосом гаплоидных растений.

3.8. Биотехнология создания АЛ ярового рапса.

4. ХАРАКТЕРИСТИКА АНДРОГЕННЫХ ЛИНИЙ ЯРОВОГО РАПСА ПО БИОЛОГИЧЕСКИМ И ХОЗЯЙСТВЕННО-ЦЕННЫМ ПРИЗНАКАМ.

4.1. Варианты регенерантов по высоте, массе и другим характеристикам.

4.2. Устойчивость к болезням.

ВЫВОДЫ.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Культура пыльников в селекции ярового рапса"

Сельскохозяйственная наука ведёт активные исследования по увеличению выхода продукции, повышению её питательности, устойчивости растений к неблагоприятным погодным условиям, патогенам и вредителям.

Биотехнология, возникшая во второй половине XX столетия в связи с необходимостью решения глобальных проблем современности - продовольственной, энергетической, экологической, играет всё возрастающую роль в интенсификации сельскохозяйственного производства. Она открывает принципиально новые возможности в селекции и размножении растительных и животных организмов, в защите растений от вредителей, болезней и сорных растений, в решении проблемы обеспечения растений азотом; в производстве физиологически активных веществ, в обеспечении животных кормами и кормовыми добавками, в утилизации отходов животноводства и растениеродства. Решить эти проблемы с помощью традиционных приёмов довольно сложно, необходимы принципиально новые подходы, оригинальные научные разработки.

Биотехнологические методы позволяют расширить возможности исследований в области генетики, физиологии, молекулярной биологии, а также нашли практическое применение в сельском хозяйстве и промышленности. Совершенствуются технологии культивирования изолированных растительных тканей и клеток, открываются новые перспективы для улучшения растений.

Среди новых подходов в селекции растений, бесспорно, важное место занимает использование изолированных тканей и клеток in vitro. Наиболее многообещающими методами культуры in vitro в селекции растений являются:

- микроклональное размножение, клонирование с освобождением от специфических патогенов, изменчивость при образовании клонов (сомакло-нальная изменчивость);

- культура зародышей, завязей и семяпочек, оплодотворение in vitro для получения гибридных растений;

- гаплоидия, как результат культивирования мужского и женского га-метофита in vitro;

- мутации и отбор in vitro - манипуляции с гаплоидными культурами, мутагенез, селективные системы регенерации растений, отбор на продуцирование вторичных метоболитов;

- соматическая гибридизация (слияние протопластов для переноса генов, хромосом, цитоплазмы, органелл, ядер, ДНК и плазмид).

Перспективным приёмом, ускоряющим селекционный процесс, является получение гаплоидных растений в культуре пыльников и микроспор. Основной интерес к гаплоидам связан с возможностью их использования в качестве посредников для получения гомозиготных растений, через удвоение числа хромосом. Такой быстрый путь достижения гомозиготности предоставляет большие возможности для селекции растений.

Наиболее значимые практические результаты получены при индукции и использовании гаплоидов и дигаплоидов ячменя, риса, табака, кукурузы, пшеницы и других культур. Применение современной технологии культивирования пыльников позволило за короткие сроки создать значительное количество высокопродуктивных, устойчивых к болезням гибридов и сортов культурных растений (Лукьяшок и др., 1983а; Ни Han, 1983; Стоянова, 1988; Соколов, Шумный, 1989; Дьячук, 2003).

Гаплоидия - особая система размножения, поддающаяся экспериментальному индуцированию, воспроизведена сегодня для большинства культурных растений (Kimber, Riley, 1963; Magoon, Khanna, 1963; Konar, 1963).

Индукция гаплоидных растений с использованием культуры пыльников описана для более чем 240 видов 85 родов и 38 семейств однодольных и двудольных культур (Бутенко, 1999).

Расширяется использование гаплоидов в генетических экспериментах, (по изучению взаимодействия генов), а также получение на их основе гомозиготных линий, имеющих большое значение для селекции (Burk, 1970; Kochhar et al.,1971; Sunderland, 1971; Азизходжаев, 1989; Матвеева, 1990).

В связи с этим особый интерес приобретает использование селекционерами масличных капустных культур методов биотехнологии и генетической инженерии, открывающие путь для новых нетрадиционных способов получения изменённых форм сельскохозяйственных растений.

Актуальность проблемы. Прогресс в селекции ярового рапса в значительной мере связан с привлечением нового исходного материала, который, с одной стороны, обеспечивает расширение спектра генетической изменчивости, а с другой - достаточно генетически стабилен. Таким критериям отвечают удвоенные гаплоидные формы рапса, полученные с использованием метода культуры пыльников. В настоящее время вовлечение данного метода в селекционный процесс сдерживается рядом ограничений. В связи с этим, совершенствование приёмов создания андрогенных удвоенных гаплоидов рапса, является весьма актуальной задачей.

Цель исследований - разработать технологию получения андрогенных гаплоидов ярового рапса. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Выявить оптимальный состав питательных сред для культивирования пыльников.

3. Исследовать влияние генотипа и условий культивирования пыльников на эмбриоидогенез.

4. Провести цитологическое изучение растений-регенерантов.

5. Изучить продуктивность андрогенных линий по хозяйственно - ценным признакам.

На защиту выносятся следующие основные положения: 1. Технологический регламент получения андрогенных удвоенных гаплоидов ярового рапса, включающий:

- оптимизацию состава питательной среды для культивирования пыльников ярового рапса;

- условия предобработки бутонов регуляторами роста;

- стадии развития пыльников;

- температурные условия культивирования пыльников.

3. Влияние типа эмбриоидов на регенерацию растений.

4. Результаты оценки потомств андрогенных линий (AJ1) по хозяйственно - ценным признакам.

Научная новизна. Впервые проведена оценка сортов на способность к эмбриоидогенезу в культуре пыльников ярового рапса. Разработаны условия получения гаплоидных растений и перевод их на диплоидный уровень. Впервые экспериментально показано влияние типа эмбриоидов на регенерацию растений рапса. Выявлена положительная корреляция между концентрациями хелата железа, в питательной среде и типом эмбриоидов. Впервые на рапсе показано совместное влияние пониженных положительных температур (3-5°С) и регуляторов роста (2,4-Д, кинетина, гиббереллиновой кислоты) на эмбриоидогенез в культуре пыльников ярового рапса. В результате исследований созданы линии с ценными селекционными признаками и свойствами.

Практическая значимость работы. Разработанный метод получения удвоенных гаплоидов в культуре пыльников in vitro может быть рекомендован для использования в селекционных программах. По результатам работ опубликованы «Методические рекомендации по получению андроклинных растений ярового рапса», (Москва, 1999 г.), методическое пособие лабораторных работ «Биотехнология» для студентов ЛГПУ (2004 г.). Находятся в печати рекомендации «Технология получения удвоенных гаплоидных растений ярового рапса».

Создана коллекция андрогенных линий ярового рапса в количестве более 2000 номеров, включающие «00» типы, высокомасличные линии, которые могут быть широко использованы в селекционной работе при создании нового исходного материала и гетерозисных гибридов.

Апробация работы и публикации результатов исследований. Результаты исследований и основные положения диссертационной работы были доложены на межрегиональной научно-практической конференции молодых учёных и специалистов (Воронеж, 1991 г.), областной научно-практической конференции (Липецк, 1996 г.), Всероссийской научно-производственной конференции (Пенза, 1998 г.), научной сессии Россельхозакаде-мии (Киров, 1998 г.), межвузовской научной конференции преподавателей, аспирантов и студентов (Липецк, 2000 г.) и на международных координационных совещаниях по рапсу (Липецк, 2000, 2005 гг.).

По теме диссертации опубликовано 14 работ в научных изданиях.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста. Состоит из введения, 4 глав, выводов и предложений для селекционной практики. Экспериментальные данные изложены в 22 таблицах, 21 рисунке и 6 приложениях. Список литературы включает 227 наименований, в том числе 171 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Муравлёв, Анатолий Анатольевич

выводы

1.Разработан технологический регламент получения гомозиготных линий ярового рапса.

3. Определены условия предобработки бутонов пониженными температурами (4-6°С) в сочетании с регуляторами роста: с 2,4-Д в концентрации - 1 мг/л повышает частоту индукции эмбриоидов с 1,8% до 6,6%; гибберел-линовая кислота в концентрации 0,1 мг/л с 0,9% до 7,4%.

5. На андрогенез ярового рапса оказывает влияние происхождение и генотип донорного сорта. Европейский экотип индуцирует эмбриоиды выше (3,1 - 4,4%) чем образцы из Северной Америки (1,2%).

6.Использование андрогенных линий в качестве донорных растений повышает эмбриоидогенез у 40% линий сорта Наппа и 16,7% линий у сорта Karat.

8. Частота образования андрогенных структур (эмбриоидов) межвидовых гибридов зависит от поколений донорного гибрида. В. napus х В. olerácea индуцируют эмбриоиды в 5 поколении - 0,6% а гибрид В. napus х Sinapis alba в 6 поколении индуцирует - 1,4% эмбриоидов.

9. Регенерация растений зависит от типа эмбриоидов. Высокую регенерацию растений имеют эмбриоиды торпедовидные - 76,9%, сердцевидные - 66,6%, котиледольные (семядольные) - 62,5%.

10. При оценке генотипов по способности к андрогенезу получено более 2000 андроклинных линий рапса. Из них выделили линии с высокой урожайностью, с высоким содержанием масла - 47,3-51,1%), фузариозной устойчивостью (баллом поражения от 1 до 3), с содержанием глюкозинола-тов в семенах 13 мкмоль/г и ниже.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ

1. Для ускорения селекционного процесса и повышения эффективности отборов рекомендуется использовать усовершенствованную технологию получения удвоенных гаплоидов ярового рапса с целью создания нового исходного материала.

3. Полученные андрогенне линии с высоким содержанием масла (64/4-96, 68/3-96, 69/1-96, 169-96, 71/2-96, 72/20-96, 74/11-96, 76-96, 296-93, 16/2, 16/7, 56/2, 129/2,), «00» типа (157-96, 7-00, 31-00, 34-00, 36-00), фуза-риозной устойчивостью (АЛ 60-94, АЛ 5-96 и АЛ 40-96) рекомендуем использовать в селекционном процессе при создании сортов и гибридов ярового рапса на основе ЦМС.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Муравлёв, Анатолий Анатольевич, Саратов

1. Анапияев Б. Б. Экспериментальный морфогенез и биотехнология получения гаплоидов в культуре микроспор пшеницы. / Б. Б. Анапияев // Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук. М.: 2001. 50 с.

2. Антонова Т. С., Никитина Н. И. Методические рекомендации по получению гаплоидных и гомозиготных растений озимого и ярового рапса в культуре пыльников. / Т. С Антонова, Н. И. Никитина // Москва, ВАСХ-НИЛ.- 1990.- 12 с.

3. Азизходжаев А. Влияние мезоинозита на морфогенез недоразвитых зародышей хлопчатника in vitro. / А. Азизходжаев, 3. М. Умаров // Узбекский биологический журнал. 1985. - №5. - С. 49-50.

4. Азизходжаев А. Генетическая реакция по эмбриогенезу in vitro у хлопчатника. / А. Азизходжаев // Всес. конф. по генет. сомат. клеток в культуре, посвящ. памяти Н. И. Шапиро, / Звенигород, 12-15 окт. 1989. Тез. докл. М. 1989,-С. 57-58

5. Араратян Л. А. Цитологические эффекты фитогормонов. / Л. А. Араратян // Ереван: АН Арм. ССР. 1989. - 137с.

6. Артёмов И. В. Рапс. Корма основа интенсификации животноводства. / И. В. Артёмов // Москва.: В О Агропромиздат. - 1989. - С. 13-14.

7. Базько Л. В. Влияние генотипа и основной среды на индукцию эмбриогенеза и регенерацию растений в пылышковой культуре пшеницы. / Л. В. Базько // Прогресс в селекции озимой пшеницы как фактор интенсивного производства зерна. Мироновка. - 1988. - С. 38-42.

8. Башаркина Н. В: Взаимодействие гормонов питательной среды и гормонов экспланта в культуре пыльников мягкой пшеницы. / Н. В. Башаркина // Тез. докл., III съезда ВОФР. Ч. I. СПб., 1993. - С. 66.

9. Бочкарёва Э. Б. Генетические ресурсы озимого и ярового рапса во ВНИИМК. / Э. Б Бочкарёва, С. JI. Горлов, В. В. Сердюк // Рапс культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк. - 2005. - С. 23-27.

10. Бутенко Р. Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. / Р. Г. Бутенко // М.: Наука. 1963. - С. 29-56.

11. Бутенко Р. Г. Технология in vitro в сельском хозяйстве. / Р. Г. Бутенко // С. х. биология. - 1983. - № 5. - С. 3-7.

12. Бутенко Р. Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе. / Р. Г. Бутенко // ФБК-ПРЕСС. Москва, 1999, 160 с.

13. Воскресенская Г. С., Михалкин Ф. В. Сурепно-капустные гибриды. / Г. С. Воскресенская, Ф. В. Михалкин // Краткий отчёт о научно-исследовательской работе ВНИИМК за 1959 1960 гг. - Краснодар. - 1961.

14. Горбунова В. Ю. Генетические предпосылки спорофитного пути развития микроспор злаков в условиях in vitro. / В. Ю. Горбунова // Уфа: УНЦ РАН, 1993,- 104 с.

15. ГОСТ 30089 93 Межгосударственный стандарт. Масла растительные. Метод определения эруковой кислоты. Межгосударственный совет по стандартизации, метрологии и сертификации. - Минск. - 1996. - 5 с.

16. ГОСТ 134496.15-85 Государственный стандарт СССР. Корма, комбикорма, комбикормовое сырьё. Методы определения сырого жира. Москва.-1985.- 15 с.

17. Турецкая В. С. Роль биологически активных соединений в индукции гаплоидов в культуре пыльников. / В. С. Турецкая // Тез. докл. между-нар. конф., Молекулярная генетика и биотехнология. Минск. 1998. - С. 170-171.

18. Дорофеев В. Ф., Пушкина Г. А. Наследование высоты растений при гибридизации короткостебельных сортов пшеницы. / В. Ф. Дорофеев, Г. А Пушкина // Вестник с.-х. Науки. 1974. - № 4. - С. 55-60.

19. Дёрфлинг К. Гормоны растений. Системный подход. / К. Дёрфлинг //М.: Мир.- 1985.-305 с.

20. Дьячук Т. И. Технологические и селекционные аспекты гаплоидии (на примере пшеницы и ячменя) / Т. И. Дьячук // Диссертация на соискание учёной степени доктора биологических наук. Саратов. - 2003. - 280 с.

21. Жидкова Е. Н., Муравлёв А. А. Использование культуры in vitro для получения ресинтезированных форм рапса. / Е. Н Жидкова, А. А. Муравлёв // Науч. техн. бюл. ВНИИР им. Н. И. Вавилова. - 1993, вып. 230.

22. Зудилин С. Н. Продуктивность звена севооборота после занятого и сидерального пара. /С. Н. Зудилин, С. А. Кирсанов, В. В. Ракитина, П. А. Угаров / Проблемы повышения продуктивности полевых культур. Сборник научных трудов. 1998. - С. 25-28.

23. Калинин Ф. А. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. / Ф. А. Калинин, В. В. Сарнацкая, В. Е. Полищук / Киев. - 1980. -С. 96-123.

24. Карпачёв В. В. Результаты селекции ярового рапса. / В. В. Карпа-чёв / Кормопроизводство. 1997. - № 4. - С.8 -11.

25. Карпачёв В. В. Научное обеспечение отрасли рапсосеяния: итоги и задачи на 2006 2010 годы. / В. В. Карпачёв / Рапс - культура XXI века: аспекты использования на продовольственные, кормовые и энергетические цели. - Липецк. - 2005. - С. 4 - 11.

26. Карпеченко Г. Д. Полиплоидные гибриды Raphanus sativus L. х Brassica olercea L. / Г. Д. Карпеченко / Тр. по прикл. ботанике, генетике и селекции. 1927. - С. 17.

27. Корябин Н. А. Селекция рапса и сурепицы. Лекция. / Н. А. Коря-бин // Издательство МСХА. Москва. 1989. - 20 с.

28. Куделич В. С. Классификатор вида Brassica napus L. (рапс). / В. С. Куделич, В. И. Шпота, Т. В. Бек / Л., 1983.-20 с.

29. Лукьянюк С. Ф. Использование приёмов in vitro для создания гаплоидов у ячменя и тритикале. / С. Ф. Лукьянюк, С. А. Игнатова, А. А. Сози-нов // Tagungsber. Dt., Akad. Landwirtschaftswiss. Berlin. 1983a. - Bd. - 207. -S. 41-48.

30. Лукьянюк С. Ф. Получение гаплоидов ячменя с помощью гапло-продюсеров. / С. Ф. Лукьянюк, С. А. Игнатова // Методические рекомендации. Одесса. - 19836. - 21 с.

31. Лукьянюк С. Ф. Метод гаплоидии в селекции зерновых культур. /С. Ф. Лукьянюк // С.-х. биология. 1983 в. - № 5. - С. 8-18.

32. Лукьянюк С. Ф. Роль генотипа в гаплопродукции тритикале. /С. Ф. Лукьянюк, М. Л. Махновская, С. Ф. Игнатова, Н. Г. Максимов // Науч. -техн. бюл. Всес. селекц. генет. ин-та ВАСХНИЛ, - 1988. - № 2/68. - С. 4347.

33. Матвеева Н. П. Эмбриология растений: использование в генетике, селекции, биотехнологии. / Н. П. Матвеева // под ред. И. П. Ермакова. М. 1990.-С. 335-370.

34. Маруненко И. М Физиологические аспекты получения гаплоидов картофеля методом культуры пыльников. / И. М. Маруненко, А. А. Кучко, Р. Г. Бутенко // Физиология растений. 1988. - Т.35. - № 1. - С. 136-143.

35. Маруненко И. М. Андрогенез и получение растений в культуре пыльников картофеля. / И. М. Маруненко // Физиология растений. 1990. - с 138.

36. Мартынов Б. П. Агрономическая тетрадь. Возделывание рапса и сурепицы по интенсивной технологии. / Б. П. Мартынов, И. С. Шатилов, Д. Е. Цываров, А. С. Сёмин, Н. Ф. Коробской, А. Н. Кондротенко, Э. Б. Балаев / М.: Россельхозиздат. 1986. - 120 с.

37. Муравлёв А. А. Дьячук П. А. А. с. 1706479 СССР, МКИ, 23.01.92 Бюл. № 3 Способ регенерации растений люцерны in vitro. / А. А. Муравлёв, П. А. Дьячук (СССР) 5 с.

38. Навашин М. С. Новая возможность в селекции (об использовании гаплоидов)./ М. С. Навашцн / Семеноводство. 1933. - № 2. - С. 11-16.

39. Навашин М. С. Новая возможность в селекции (об использовании гаплоидов)./ М. С. Навашин / Ботан. журн. СССР. 1934. - № 4. - С. 402408.

40. Никоноренков В. А. Перспективы использования болезнеустойчивости в контроле фитосанитарного состояния ярового рапса. / В. А. Никоно-реиков, JI. Г. Партенко, В. В. Карпачёв / Всероссийский съезд по защите растений. С.-Петербург. 1995. - С. 226.

41. Никоноренков В. А. Методы и принципы селекции кукурузы и рапса на устойчивость к• грибным заболеваниям. / В. А. Никоноренков / Диссертация на соискание учёной степени доктора сельскохозяйственных наук. Рамонь. - 2000. - С. 271.

42. Ницше В. Гаплоиды в селекции растений. / В. Ницше, Г. Венцель / М.: Колос.- 1980.- 128 с.

43. Новосёлов 10. К. Состояние и перспективы рапсосеяния в России. / Ю. К. Новосёлов / Научное обеспечение отрасли рапсосеяния и пути реализации биологического потенциала рапса. 2000. - С. 13-17.

44. Паушева 3. П. Практикум по цитологии растений. / 3. П. Паушева // М.: Агропромиздат. 1988. - 271 с.

45. Плотников В. А. Факторы лимитирующие морфогенез в культуре пыльников подсолнечника. / В. А. Плотников // Культура клеток растений. -Абовян. 1979. -с. 155.

46. Пустовойт В. Т. Руководство по селекции и семеноводству масличных культур. / под руководством В. Т. Пустовойта / М.: Колос, 1967. -351 с.

47. Соколов В. А. Технология гаплоидов в генетике и селекции растений. / В. А. Соколов, Шумный В. К. // Вавиловское наследие в современной биологии / М.: Наука. 1989. С.247-270.

48. Стоянова И. Основни направления на изследванията в областта на биотехнологиите в растениевъдството. / И. Стоянова // Селскостопанска наука. 1988. - Т. 26. - № 2. - С. 28-32.

49. Хохлов С. С. Гаплоидия у покрытосеменных растений. / С. С. Хохлов, Е. В. Гришина, М. И. Зайцева, В. С. Тырнов, Н. А. Малышева-Шишкинская II.-ч. 1. Изд-во Саратовск. ун-та. - 137 с.

50. Чайлахян М. X. Гормональная регуляция роста и развития высших растений. / М. X. Чайлахян // Успехи современной биологии.-1982. Т. 95. -вып.1. - С. 23-34.

51. Agache S. Studies of the genetic relationship between anther culture and somatic tissue culture abilities in wheat. / S. Agache, J. De Buyser, Y. Henry, J. W. Snape//Plant Breed. 1988.- V. 100.-№ l.-P. 26-33.

52. Arnison P. G. The influence of various physical parameters on anther culture of broccoli. ( Brasssica oleracea var. italica). / P. G. Arnison, P. Donaldson, L. С. С. Ho, W. A. Keller // Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1990 a. - V. -20.-P. 147-155.

53. Arnison P.G. Genotype specific response of cultured broccoli (Brasssica oleracea var. italica) anthers to cytokinins. / P. G. Arnison, P. Donaldson, A. Jackson, C. Semple, W. A. Keller // Plant Cell Tiss. Org. Cult. - 1990 b. - V. 20. -P. 217-222.

54. Arnison P. G., Keller W. A. A survey of the anther culture response of Brassica oleracea L. cultivars grown under field conditions. / P. G. Arnison, W. A. Keller // Plant Breed. 1990. - V. 104. - P. 125-133.

55. Aspinall D., Paleg L. G. Proline accumulation: Physiological aspects. /In: I. G. Poleg and D. Aspinal (Eds.) // Physiology and Biochemistry of Drought Resistance in Plants. Academic Press, Sydney. 1981. - P. 204-241.

56. Baillie A. M. K. In vitro culture of isolated microspores and regeneration of plants in Brassica campestris. / A. M. K. Baillie, D. J. Epp, D. Hutcheson, W. A. Keller // Plant Cell Rep. 1992. - V. 11. - P. 234-237.

57. Banga S. S., Ladana K. S. Spontaneous haploidy in Brassica napus. / S. S., Banga, K. S. Ladana // Cruciferae Newsl. 1986. - № 11. - P. 54-55.

58. Barclay L. R. High frequencies of haploid production in wheat (Tr. aesti-vum.) by chromosome elimination. / L. R. Barcley // Nature. London, •-1975.-№256.-P. 410-411.

59. Biddington N. L. Silver nitrate increases embryo production in anther culture of Brussels sprouts. / N. L. Biddington, R. A. Sutherland, H. T. Robinson //Ann.Bot. 1988. - V. 62. - P. 181-185.

60. Biddington N. L. The effects of gibberellic acid, fluridone, abscisic acid and paclobutrazol on anther culture of Brussels sprouts. / N. L. Biddington, R. A. Sutherland, H. T. Robinson // Plant Growth Regul. 1992. - V. 11. - P. 81-84.

61. Biddington N. L., Robinson H. T. Variations in response to high temperature treatments in anther culture of Brussels sprouts. / N. L. Biddington, H. T. Robinson // Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1990. - V. 22. - P. 48-54.

62. Blakeslee A. F. A haploid mutant in the Jimson weed, Datura stramonium. / A. F. Blakeslee, F. Belling, M. E. Farnham, A. D. Bergner // Science. -1922.-V. 55.-P. 646-647.

63. Burnett L. Embryogenesis and plant regeneration from isolated microspores of Brassica rapa L. ssp. oleifera. / L. Burnett, S. Yarrow, B. Huang // Plant Cell Rep. 1992.-V. 11. - P. 215-218.

64. Burk L. G. Green and light yellow haploid seedlings from anthers of sulpher tobacco. / L. G. Burk // J. Hered. 1970. - V. 61. - P. 276.

65. Brunklaus-Jung E. Genetical and physiological investigations on mutants for polyenoic fatty acids in rapeseed (Brassica napus). IV Fatty acid composition of leaf lipids and luminescence. / E. Brunklaus-Jung / Agew Bot. 1986. -V. 60.-№6.-P. 333-338.

66. Chengqing S. I. Rapeseed production and progress of double low varieties breeding programme in China. / S. Chengqing // GCIRC Bull. 1985 № 2. -P. 17-21.

67. Chi Ch.-Ch. The N6 medium and its application to anther culture of cereal crops. / Chi Ch.-Ch. // Proc. sumpos. on plant tissue culture. Peking. Sci. Press. 1978. - P. 43-50.

68. Chua B. Kh. Anther culture of rice hybrids 1854 and 1856. / B. Kh. Chua, Y. H. Chen, O. Omar // Mardi Res. Bull. 1984. - V. 12. - № 3. - P. 275280.

69. Chuahg C. C., Ouyang T. W. A set of Potato medium for wheat anther culture. / C. C. Chuahg, T. W. Ouyang, H. Chia, S. M. Chou, C. K. Chiang // In: Proceedings of Symposium on Plant Tissue Culture, Science Press, Beijing, China. 1978.-P. 51-56.

70. Chuong P. V., Beversdorf W. D. High frequency embryogenesis through isolated microspore culture in Brassica napus L. and B. carinata Braun. / P. V. Chuong, W. D. Beversdorf// Plant Science. 1985. - 39. - P. 219-226.

71. Chuong P. V. Effects of donor genotype and bud sampling on microspore culture of Brassica napus. / Chuong P. V., C. Deslauriers, L. S. Ott, W. D. Beversdorf// Can. J Bot. 1988. - V. 66. - № 8. - C. 1653-1657.

72. Clapham D. Haploid Hordeum plants from anthers in vitro. / D. Clapham // Z. Pflanzenzuchtg. 1973. - V. 69. - P. 142 - 155.

73. Collins G. B. Production and utilization of anther haploids in crop plants. /G. B. Collins // Crop. Sci. 1977. - V. 17. - № 4. - P. 583-586.

74. Corduan G. Regeneration of anther-derived plants of Hyoscyamus niger L. / G. Corduan // Planta. 1975. - V. 127. - № 1. - P. 27-36.

75. Coventry J. Manual for microspore culture technique for Brassica napus. / J. Coventry, L. Kott, W. D. Beverslorf / Dept. of Crop Sei. Techn. Bull. OAC Publication 0489, Univ. of Guelph. Guelph. 1988.

76. Clapham D. Haploid Hordeum plants from anthers in vitro. / D. Clapham // Z. Pflanzenzuchtg. 1973. - V. 69. - P. 142-155.

77. Duijs J. G. Microspore culture is successful in most crop types of Brassica oleracea L./ J. G. Duijs, R. E. Voorps, D. L. Vissel, J. B. M. Custers // Euphytica. 1992. - V. 60. - P. 45-55.

78. Dunwell J. M., Sunderland N. Pollen ultrastructure and anther culture of Nicotiana tabacum. I. Early stages of culture. / J. M. Dunwell, N. Sunderland // J. Exp. Bot. 1974 a. - V. 25. - P. 352-361.

79. Dunwell J. W., Sunderland N. Pollen ultrastructure and anther culture of Nicotiana tadacum. II. Changer associated with embryogenesis. / J. M. Dunwell, N. Sunderland // J.Exp. Bot. 1974 6. - V. 25. - P. 363-373.

80. Dunwell J.M., Sunderland N. Pollen ultrastructure and anther culture of Nicotiana tabacum. III. The 1st sporophytic division. / J. M. Dunwell, N. Sunderland // J. Exp. Bot. 1975. - V. 26. - P. 240-252.

81. Dunwell J. M. Comparative study of environmental and developmental factors which influence embryo induction and growth in cultured anthers of Nicotiana tabacum. / J. M. Dunwell // Env. Exp. Bot. 1976. - V. 16. - P. 108-118.

82. Dunwell J. M., M. Cornish, De Courcel A. G. L. Induction and growth of microspore-derived embryos of Brassica napus ssp.oleifera. / J. V. Dunwell, M. Cornish, A. G. L. De Courcel // J. Exp. Bot. 1983. - V. 34. - № 149. - P. 1768-1778.

83. Dunwell J. M., Cornish L. M. Influence of preculture variables on microspore embryo production in Brassica napus ssp oleífera cv. Duplo. / J. M. Dunwell, L. M. Cornish//Ann. Bot. 1985. - № 56. - P. 281-289.

84. Dunwell J. M, Thurling N. Role of sucrose in microspore embryo production in Brassica napus ssp. oleífera. / J. M. Dunwell, N. Thurling // J. Exp. Bot. 1985.-V. 36.-P. 1478-1491

85. Fabijanski S. Heat shock response of Brassica oleracea, L. (broccoli). / S. Fabijanski, I. Altosaar, P. G. Arnison // J. Plant Physiol. 1987. - 128. - P. 2938.

86. Fabijanski S. Heat shock response during anther culture of broccoli (B. oleracea var. italica). / S. Fabijanski, I. Altosaar, P. G. Arnison // Plant Cells Tiss. Org. Cult. 1992. - V. 26. - P. 203-212.

87. Fan Z. Development of microspores in vivo and in vitro in Brassica napus L. / Z. Fan, K. C. Armstrong, W. A. Keller // Protoplasma. 1988 a. - V. 147.-P. 191-199.

88. Flores H. E., Galston A.W. Polyamines and plant stress: activation of putrescine biosynthesis by osmotic shock. / H. E. Flores, A. W. Galston // Science. V. 217. - P. 1259-1260.

89. Foroughi-Wehr R., D. Mix In vitro responce of Hordeum vulgare L. anthers cultured from plants grown under different environments. / R. Foroughi-Wehr, D. Mix // Env. Exp. Bot. 1979. - V. 19. - P. 303-309.

90. Gamborg O. L. Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells. / O. L. Gamborg, R. A. Miller, K. Ojima // Exp. Cell. Pes. 1968. -V. 50.-P. 151-158.

91. Gautheret R. J. Culture du tissu cambial. / R. J. Gautheret // Acad. Sei. 1934. - 198p.

92. Giamoustaris A., Mithen R. Modifying leaf glucosinolates in oilseed rape and its effects upon pest and pathogen interactions. / A. Giamoustaris, R. Mithen // Proc. 9th Intern. Rapeseed Congr. 1995. - V. 4. - P. 1220-1222.

93. Govil S. Plant regeneration from in vitro cultured anthers of black mustard {Brassica nigra Koch). / S. Govil, S. B. Babbar, S. C. Gupta // Plant Breed. 1986. - V. 97. - № 1. - P. 64-71.

94. Guha S., Maheshwari S.C. In vitro production of embryos from anthers of Datura. / S. Guha, S.C. Maheshwari // Nature. 1964. - V.204. - P. 497498.

95. Guha S., Maheshwari S. C. Cell divisions and differentiation of embryos in the pollen grains of Datura in vitro. / S. Guha, S. C Maheshwari // Nature. 1966. - V. 212. - P. 97-98.

96. Guha S., Maheshwari S. C. Development of embryoids from pollen grains of Damara in vitro. / S. Guha, S. C Maheshwari // Phytomorhology. -1967.-V. 17.-P. 454-461.

97. Guha-Mukherjee S. Genotype differences in the in vitro formation of embryoids from rice pollen. / S. Guha-Mukherjee // J. Exp. Bot. 1973. - V. 24. -P. 139-144.

98. Gund M., Huai Ming W. In vitro Erzeugnung von haploiden cow Peapflanzen (Vigna unguiculata L.). / M. Gund, W. Huai - Ming // Landbau-forsch Volrenrode. - 1988. - V. 38. - № 4. - S. 305-309.

99. Gland A. Genetic and exogenous factors affecting embryogenesis in isolated microspore culture of Brassica napus L. / A. Gland, R. Lichter, H.-G. Schweiger// J. Plant Physiol. 1988. - V. 132. - P. 613-617.

100. Guerrero F., Mullet J. T. Increased abscisic acid biosynthesis during plant dehydration requires transcription. / F. Guerrero, J. E. Mullet // Plant Physiol. 1986. - V. 80. - P. 588-591.

101. Guy G. I. Sucrose phosphate synthesis and sucrose accumulation at low temperature. / G. I. Guy, J. L. A. Huber, S. Huber // Plant Physiol., 1992. -V. 100.-P. 502-508.

102. Gresshoff P. M., Doy C. H. Development and differentiation of haploid Lycopersiccum esculentum (tomato). / P. M. Gresshoff, C. H. Doy // Planta (Berl.)- 1972.-V. 107. P: 161-170.

103. Hadwiger M. A., Heberle Bors E. Pollen plant production in Triti-cum turgidun ssp. durum. / M. A. Hadwiger, E. Heberle - Bors // Genetic manipulation in plant breeding. - 1986. - P. 303-306.

104. Hanson A. D., Hitz W. D. Metabolic response of mesophytes to plant water deficits. / A. D. Hanson, W. D Hitz // Ann. Rev. Plant Physiol. 1982. - V. 33.-P. 163-203.

105. Hamaoka Y., Fujita Y., Iwai S. Effect of temperature on the mode of pollen developmeht in anther culture of Brassica campestris. / Y. Hamaoka, Y. Fujita, S. Iwai // Physiol. Plant 1991. - V. 82. - P. 67-72.

106. Hause B. Cytoskeletal changes in induction of embryogenesis in microspore and pollen cultures of Brassica napus L. / B. Hause, G. Hause, P. Pechan, A. A. M. Van Lammeren // Cell Biol. Intl. 1993. - V. 17. - P. 153-168.

107. Heller R. Recherches sur la nutrition minerale des tissus végétaux cultives in vitro. / R. Heller // These. Paris, et Ann. Sei. nature/ Bot. biol. et veget. -1953.-V. 14.-P. 1-223.

108. Hofman W., Peters R. Versuche zur Hergtellung synthetischer Rapsformen. / W. Hofman, R. Peters R. // Der Zuchter. 1961. - S. 15-17.

109. Hoffmann F. Anther culture as a breeding tool in rape. II. Progeny analysis of androgenic lines and induced mutants from haploid cultures. / F. Hoffmann, E. Thomas, G. Wenzel // Theor. Appl. Genet. 1982. - V. 61 - P. 225-232.

110. Hildebrandt A. C. The influence of the composition of the medium on growth in vitro of excised tobacco and sunflower tissue cultures. /A. C. Hildebrandt, A. J. Riker, B. M. Duggar // Amer. J. Bot. 1946. - V. 33. - P. 591597.

111. Hu Han. Crop improvement by anther culture. / Hu Han. // 15 Intern. Congr. of Genet. 1983. - P. 121.

112. Jain R. K. Plant regeneration from in vitro cultures of cotyledon explants and anthers of Sinapis alba and its implications on breeding of crucifers. / R. K. Jain, U. Brune, W. Fredt // Euphytica. 1989. - V. 43. - P. 153-163.

113. Kamey T., Hinata K. Induction of haploid plants from pollen grains in Brassica. / T. Kamey, K. Hinata // Jap. J. Bred. 1970. V. 20. - P. 82-87.

114. Keller W. A. In vitro production of plants from pollen in Brassica campestris. / W. A. Keller, T. Rajhathy, J. Lacapra // Can. J. Genet. Cytol. 1975. -V. 17.-P. 655-666.

115. Keller W. A., Armstrong K. C. Embryogenesis and plant regeneration in Brassica napus anther cultures. / W. A., Keller, K. C. Armstrong // Can. J. Bot. 1977.-V. 55.-P. 1383-1388.

116. Keller W. A., Armstrong K. C. High frequency production of micro-spore-derived plants from Brassica napus anther cultures. / W. A. Keller, K. C Armstrong//Z. Pflanzenzuchtg. 1978. - V. 80. - P. 100-108.

117. Keller W. A., Stringam G. R. Production and utilization of micro-spore-derived plants. / W. A. Keller, G. R. Stringam // In: T.A. Thorpe (Ed.), Frontiers of Plant Tissue Culture, Intern. Assoc. Plant Tiss. Cult., Calgary. 1978. -P. 113-122.

118. Keller W.A., Armstrong K.C. Stimulation and embryogenesis and haploid production in Brassica campestris anther cultures by elevated temperature treatments. / W.A. Keller, K.C. Armstrong // Theor. Appl. Genet. 1979. - V. 55.-P. 65-67.

119. Keller W. A., Armstrong K. C. Production of haploids via anther culture in Brassica oleracea var. italica. / W. A. Keller, K. C. Armstrong // Euphytica. 1983. - V.32. - № 1. - P. 151-159.

120. Keller W. A., Klocke E. Einige morphologische Aspekte bei der Kul-ture von Antheren. / W. A. Keller, E. Klocke, H. B. Schmidt // Biol. Rundsch. -1986.-V. 24.-№ 6.-P. 367-381.

121. Kehr A. E. Monoploidy in Nicotiana. / A. E. Kehr // J. Hered. 1951. -V. 42.-P. 107-112.

122. Kieffer M., Anther culture of kale (Brassica oleracea L. var. acephala D. C. Aief.). / M. Kieffer, M. P. Fuller, J. E. Chauvin, A. Schlesser // Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1993. - V. 33. - P. 303-313.

123. Kimber G. Haploid angiosperms. / G. Kimber, R. Riley // Bot. Rev. -1963.-V. 29.-P. 80-531.

124. Kochar T. Production of homozygous diploid plants by tissue culture technique. / T. Kochhar, P. Sabhariwal, J. Engeelberg // J. Hered. 1971. - V. 62. -P. 59-61.

125. Komatsu Y. Investigation on the progeny plants of haploid plants and embryo sac formation by diploid and haploid plants of Brassica napus. /Y. Komatsu // Proc. Crop. Sei. Soc. Japan. 1936. - V. 8. - P. 364-372.

126. Konar R. N. A haploid tissue from the pollen of Ephebra foliata. / R. N. Konar // Phytomorphology. 1963. - V. 13. - P. 170-174.

127. Kotte L. S. Cytological aspects of isolated microspore culture in Brassica napus. / L. S. Kotte, L. Polsoni, W. D. Beversdorf // Can. J. Bot. 1988a. -V. 66.-P. 1658-1664.

128. Kotte L. S. Autotoxicity in isolated microspore culture of Brassica napus. / L. S. Kotte, L. Polsoni, B. Ellis, W. D. Beversdorf// Can. J. Bot. 1988b. -V. 66.-P. 1665-1670.

129. Kotte L. S. Beversdorf W. D. Enhanced plant regeneration from microspore-derived embryos of Brassica napus by chilling, partial desiccation and age selection. / L. S Kotte, W. D. Beversdorf // Plant Cell Tiss.Org Cult. -1990.-V. 23.-P. 187-192.

130. Kuriyama H., Watanabe Y. Studies on the haploid plant of Brassica carinata. / H. Kuriyama, Y. Watanabe // Ikushugaku Zasshi Jpn. J. Breed. -1955. - V. 5. - P. 1-5.

131. Lo K. H. Plant growth environment effects on rapeseed microspore development and culture. / K. H. Lo, K. P. Pauls // Plant Physiol. 1992. - V. 99.- P. 468-472.

132. Loh C. S., Ingram D. S. Production of haploid plants from anther cultures and secondary enbryoids of winter oilseed rape, Brassica napus ssp. oleif-era.IC. S. Loh, D. S. Ingram // New Phytol. 1083. - V. 91. - P. 507-516.

133. Loh C. S. Cytokinins and the regeneration of plantlets from secondary embryoids of winter oilseed rape Brassica napus ssp. oleifera. / C. S. Loh, D. S. Ingram, D. E. Hanke //New Phytol. 1983. - V. 95. - № 3. - P. 340-358.

134. Lok 0. F. Induction of microspore embryogenesis in cultured anthers of Hordeam vulgare. The effects of ammonium nitrate, glutamine and aspara-gines as nitrogen sources. / 0. F. Lok // Carlsberg Res. Commun. 1987. - V. 52.- №. 6. P. 393-404.

135. Lott C. S., Haube D. E. Cytokinins and the regeneration of plantlets from secondary embryoids of winter oilseed rape, Brassica napus ssp. oleifera. / C. S Lott, D. E. Haube // New Phytol. 1983. - V.95. - P. 349-350.

136. Linsmaier E. M., Skoog F. Organic growth factor requirements of tobacco tissue cultures. / E. M. Linsmaier, F. Skoog // Physiol. Plant. 1965. - V. 18.-P. 100-127.

137. Lihter R. Anther culture of Brassica napus in a liquid culture medium. /R. Lihter//Z. Pflanzenphysiol. -1981. V. 103. - P. 229-237.

138. Lihter R. From microspores to rape plants: A tentative way to low glu-cosinolate strains in world crops. / R. Lihter / In Sorenran H. (ed) Production, utilization, description. // Junk, Dordrecht 1985. - V. 11. P. 268-277.

139. Lillo C., Hansen M. Anther culture cabbage. Influence of growth temperature of donor plants antf media composition on embryo yield and plant regeneration. / C. Lillo, M. Hansen //Norw. J. Agr. Sei. 1987.1. - P. 105-109.

140. Liu C.-M. Auxin polar transport is essential for establishment of bilateral symmetry during early plant embryogenesis. / C.-M. Liu, Z. H. Xu, N.-H. Chua// Plant Cell 1993. - V. 5. - P. 621-630.

141. Leelavathi S. Somatic cell genetics in Brassica species. I. High frequency production of haploid plants in Brassica alba (L.) H. F.+ T. // S. Leelavathi, V. S. Reddy, S. K. Sen // Plant Cell Rep. 1984. - V. 3. - P. 102-105.

142. Lutsenko E. K. Effects of Fusicoccin on the Early Stages of Sorghum growth at high NaCl Concentrations / Lutsenko E. K., E. A. Marushko, N. V. Ko-nonenko, T. G. Leonova / Translated from Fiziologiya Rasteii 2005. - V. 52 № 3,-P. 378-283.

143. Magoon M. Z., Khanna K. R. Haploids / M. Z. Magoon, K. R.Khanna //Caryologia.- 1963.-V. 16.-P. 191-235.

144. Melchers G. Haploid higher plants for plant breeding. / G. Melchers // Z. Pflanzenzuchtg. 1972. - V. 67. - P. 21-32.

145. Mithen R. F. Resistance of Brassica Species to Leptosphaeria macu-lans (stem canker) the role of glucosinolates. / R. F. Mithen //Proc. Rapessed Cong. - 1987.-P. 125-130.

146. Moieni A., Sarrafi A. The effect of gibberellic acid, phenylethylanune, 2,4-D and genotype on androgenesis in hexaploid wheat (Triticum aestivum). / A. Moieni, A. Sarrafi // Cereal Res. Commun. 1996. - V. 24. - № 2. - P. 139-145.

147. Morinage T., E. Fukushima Karyological studies on a spontaneous haploid mutant of Brassica napella. / T. Morinage , E. Fukushima // Cytologia. -1933. V. 4. - P. 457-460.

148. Murashige T., Skoog P. A revised medium for rapid growth and bio-assays with tobacoo tissue cultures. // Physiol. Plant. 1962. - № 15. - P. 473 -497.

149. Nalecsunska A., Cegielska T. Digaploid production in Brassica napus L. in vitro androgens. / A. Nalecsunska, T. Cegielska // Genetica Polonica. -1984. V. 25. - № 3. - P. 271-276.

150. Nitsch S. P. Experimental androgenesis in Nicotiana. / S. P. Nitsch // Phytomorphology. 1969. - V. 19. - P. 389-404.

151. Nitsch J. P., Nitsch S. Haploid plants from pollen grains. / J. P. Nitsch, S. Nitsch // Science. 1969. - V. 163. - P. 85-87.

152. Nitsch S. P. Haploid plant from pollen. / S. P. Nitsch // Z. Pflanzenzucht. 1972. - V. 67. - P. 3-18.

153. Nitzsche W., Wenzel G. Haploids in plant breeding. / W. Nitzsche , G. Wenzel // In: Fortschr. Pflanzenzuchtg. 1977. - V. 8. - Parey, Berlin.

154. Ockendon D. J. Anther culture in Brussels sprouts (Brassica oleracea var. gemmifera). I. Embryo yields and plant regeneration. / D. J. Ockendon // Ann. Appl. Biol. 1984. - V. 105. - P. 285-291.

155. Ockendon D. J. Anther culture in Brussels sprouts (Brassica oleracea var. gemmifera ). II. Effect of genotype on embryo yields. / D. J. Ockendon // Ann. Appl. Biol. 1985. - V. 107. - P. 101-104.

156. Ockendon D. J., Sutherland R. A. Genetic and non-genetics factors affecting anther culture of Brussels sprout (Brassica oleracea var. gemmifera ). / D. J. Ockendon, R. A. Sutherland // Theor. Appl. Genet. 1987. -V. 74. -P. 566-570.

157. Olsson G., Ilagberg A. Investigations on a haploid rape. / G. Olsson, A. Hagberg // Hereditas. 1955. - V. 41. - P. 227-237.

158. Pearcy R. W. Effect of growth temperature on the fatty acid composition of leaf lipids in Atriplex lentiformis (Torr.) / R. W. Pearcy // Wats. Plant. Physiol. 1978. - V. 61. - P. 484-486.

159. Pechan P. M. Messenger RNA and protein changes associated with induction of Brassica microspore embryogenesis. / P. M. Pechan, D. Bartels, D. C. W. Brown, J. Schell // Planta. -1991. V. 184. - P. 161-165.

160. Pundir N. S. Experimental embryology of Gossypium arboreum L. and G. hirsutum L. and their reciprocal crosses. / N. S. Pundir // Bot. Gaz. 1972. -V. 133.-№ l.-P. 7-26.

161. Phippen C., Ockendon D. J. Genotype, plant, bud size and media, factors affecting anther culture of cauliflowers {Brassica oleracea var. botrytis). / C. Phippen, D. J. Ockendon // Theor. and Appl. Genet. 1990. - V. 79. - № 1. - P. 33-38.

162. Polsoni L. Large-scale microspore culture technique for mutation-selection studies in Brassica napus. / L. Polsoni, L. S. Kott, W. D. Beversdorf // Can. J. Bot. 1988. - V. 66. - P. 1681-1685.

163. Prakash S. Haploidy in Brassica nigra Koch. / S. Prakash // Euphytica. 1973. - V. 22. - P. 613-614.

164. Prakash S. Haploid meiosis and origin of Brassica tournefortii Gouan. / S. Prakash // Euphytica. 1974. - V. 23. - P. 591-595.

165. Raghavan V. Induction of haploid plants from anther cultures of henbane. / V. Raghavan // Z. Pflanzenphysiol. 1975. - V. 76. - № 1. - P. 89-92.

166. Rakow C. Selection auf Linol- und Linolensäure gehalt in Rapssamen nach mutagenen Behandlung. / C. Rakow/Z. Pflzucht. -1971. V. 69. - S. 62-82.

167. Reddy V. S. Influence of genotype and culture medium on microspore callus induction and green plant regenerationin anthers of Oryza saliva. / V. S. Reddy, S. Leelavathi, S. K. Sen // Physiol, plant. 1985. - V. 63. - № 3. - P. 309314.

168. Reni A., Bhojwani S. S. Production of androgenic plants through pollen embryogensis in anther cultures of Brassica carinata Braun. / A. Reni., S. S. Bhojwani//Biol, plant. 1988. - V. 30. - № 1. - P. 25-26

169. Rikin A. Correlation between the circadian rhythm of resistamce to exstreme temperatures and changes in fatty acid composition in cotton seedlings. / A. Rikin, J. W. Dillwith, D. K. Bergman // Plant Physiol. 1993. - V. 101. - P. 31-36.

170. Roulund N. N. Effect of genotype, environment an carbohydrate on anther culture response in head cabbage (Brassica oleracea L. convar. capitata Alef.). / N. N. Roulund, L. Hansted, S. B. Anderson, B. Farestveit // Euphytica. -1990.-P. 237-242.

171. Rose J. B. Anther culture of Sorghum bicolor (L). Moench. I. Effect of panicle pretreatment, anther incubation temperature and 2,4-D concentration. / Ju. B. Rose, J. M. Dunwell // Plant cell tissue organ culture. 1986. - V. 6. - № 1. - P. 15-22.

172. Sato T. Plant respiration from isolated microspore cultures of chinense cabbage {Brassica campestris ssp. pekinensis). / T. Sato, T. Nishio, M. Hirai // Plant Cell Rep. 1989. - V. 8. - P. 486-488.

173. Seguin-Swarts G. Anther culture in Brassica campestris. / G. Seguin-Swarts, D. S. Hutchesonet, R. K. Downey // In: Proc. Intl. Rapeseed Congr., Paris. 1983.-P. 246-251.

174. Shetty K., McKersie B. D. Proline, thioproline and potassium mediated stimulation of somatic embryogenesis in alfalfa (Medicago sativa L.). / K. Shetty, B. D. McKersie // Plant Sei. 1993. - V. 88. - P. 185-193.

175. Shu W., Loh C. S. Secondary embryogenesis in long-term cultures of winter oilseed rape, Brassica napus ssp. oleifera. / W. Shu, C. S. Loh // New. Phytol. 1987. - V. 107. - № 1 - P. 39-46.

176. Siebel J., Pauls K. P. Inheritance of erucic acid content in populations of Brassica napus microspore-derived spontaneous diploids. / J. Siebel, K. P. Pauls // Theor. Appl. Genet. 1989. V. 77. - P. 489-494.

177. Songstag D. D., Conger B. V. Factors influencing somatic embryo induction from orchardgrass anther cultures. / D. D. Songstag, B. V. Conger // Grop. Sei. 1988. - V. 28. - № 6. - P. 1006-1009.

178. Sopory S. K. Production of haploid embryoid by anther culture techniques in Datura innoxia further study. / S. K. Sopory, S. C. Maheshwari // Phy-tomorphol. 1972. - V. 22. - P. 87-90.

179. Sopory S. K., Maheshwari S.C. Development of pollen embryoids in anther cultures of Datura innoxia. II. Effects of growth hormones. / S. K. Sopory, S. C. Maheshwari // J. Exptl. Bot. 1975. - V. 27. - № 96. - P. 58-68.

180. Sorvari S. Production of haploids from anther culture agriculturally valuable Brassica compestris L. cultivars. / S. Sorvari I I Ann. Agr. fenn. 1985. -V. 24. - № 3. - P. 149-160.

181. Sorvari S., Schieder 0. Influence of sucrose and melibiose on barley anther cultures in starch media. / S. Sarvari, 0. Schieder // Plant Breed. 1987. -V. 99.-№2.-P. 164-171.

182. Sudhakar V. Anther culture of tobacco (Nicotiana tabacum L.) and pigeon-pea (Cojanus cajan Millsp.) genotypes. / V. Sudhakar, I. S. Singh, C. P. Singh // Proc. Acad. Sci. India B. 1987. - V. 57. - № 4. - P. 487-490

183. Sunderland N. Anther culture, a progress report. / N. Sunderland // Sci. Prog. Oxford 1971. - V. 59. - P. 527-549

184. Sunderland N. Anther culture as a means of haploid induction. / N. Sunderland // In K. J. Kosha (en), Haploids in higher plants. Advances and potentials / Univ: of Gueloh Guelph. 1974. - P. 91-122.

185. Sunderland N. Strategies in the improvement of yields anther culture. / N. Sunderland // In: Proc. of symposium on plant tissue culture. Science Press, Peking. 1978. - P. 65.

186. Sunderland N. Wildon Multicellular pollen formation in cultured barley anthers. 1.Independent division of the generative and vegetative cells. / N. Sunderland, M. Roberts, L.Y. Evans, D.C. Wildon // J. Exp. Bot. 1979. - V. 30. -№ 119.-P. 1133-1144.

187. Sunderland N. Multicellular pollen formation in cultured barley anthers. 2. The A. B. C. pathway. / N. Sunderland, L. Y. Evans // J. Exp. Bot. -1980.-№ 121.-P. 501-514.

188. Stewart J. In ovuloe embryo culture and seedling development of cotton (G. hirsutum L.). / J. Stewart, D. Mc, C. L. Hsu // Planta. 1977. - V. 137. -№2.-P. 113-117.

189. Stringam G. R. Haploid frequencies in Brassica napus. / G. R Strin-gam, R. K. Downey // Can. J. Plant. Sei. 1973. - V. 53. - P. 229-231.

190. Sharma K. K. Microspore embryogenesis in anther cultures of two Indian cultivars of Brassica juncea (L.). / K. K. Sharma, S. S. Bhojwani // Czern. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1985. - V. 4. - P. 235-239.

191. Schenk R. U., Hildebrandt A. C. Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures. / R. U. Schenk, A. C. Hildebrandt // Canad. J. Bot. 1972. - V. 50. - № 1. - P. 199-204.

192. Takahata Y. Effect of donor plant age and inflorescence age on microspore culture of Brassica napus L./ Y. Takahata, D. C. W. Brown, W. A. Keller // Euphytica. 1991. - V. 58. - P. 51-55.

193. Telmer C. A. Determination of developmental stage to obtain high frequencies of embryogenic microspores in Brassica napus. / C. A. Telmer, D. H. Simmonds, W. Newcomb I I Physiol. Plant 1992 - V. 84. - P. 417-424.

194. Telmer C. A. Microspore development in Brassica napus and the effect of high temperature on division in vivo and in vitro / C. A. Telmer, W. New-comb, D. N. Simmonds // Protoplasma. 1993. - V. 172. - P. 154-165.

195. Thomas E., Wenzel G. Embryogenesis from microspores of Brassica napus. / E. Thomas, G. Wenzel I IZ. Pflanzenzuchtg. 1975. - V. 74. - P. 79-81.

196. Thompson K. F. Production of haploid plants of marrowstem kale. / K. F. Thompson // Nature (London). 1956. - V. 178. - P. 748-753.

197. Thompson K. F. Frequencies of haploids in spring oilseed rape (Brassica napus). / K. F. Thompson // Hereditas. 1969. - V. 24. - P. 318 - 319.

198. Thompson K. F. Homozygous diploid lines from naturally occurring haploids. / K. F. Thompson // In: 4th Intern. Rapskongr, Giessen / 1974. P. 119124.

199. Foroughi-Wehr B., Mix G. In vitro response of Hordeum vulgare anthers cultured from plants growh under different environments. / B. Foroughi-Wehr, G. Mix // Environment. Exp. Bot. 1979. - V. 9. - №. 14. - P. 303-309.

200. Truong A. In vitro haploid plants derived from pollination by irradiated pollen on cucumber. / A. Truong // Cucurbitaceal 88: Proc EUCARPIA Meet Cucurbut Genet, and Breed., Avignon- Montfavet, May 31-Iune 1-2, 1988. -Paris. - 1988.-P. 143-144.

201. Thurling N. The influence of donor plant genotype and environment on production of multicellular microspores in cultured anthers of Brassica napus ssp. oleifera. / N. Thurling, P. M. Chay I I Annals of Botanu. 1984. - V. 54. - № 5.-P. 681-693.

202. Tsay S. S. Factors affecting haploid plant regeneration from maize anther culture. / S. S. Tsay, S. H. Miao, J.M. Widholm // J. Plant Physiol. 1986. -V. 126.-№ l.-P. 33-40.

203. Vazart B. Infrastructure of Nicotuana tabacum L. microspores capable of developing into embryoids after excession and culture of the anthers. / B. Vazart // C. R. Hebd. Sean. Acad. Sei. Ser. Natur. Paris. 1971. - V. 272. - P. 549-552.

204. Vyvadilova M. Anther cultures of Brassica napus L. / M. Vyvadilova, S. Zelenkova, D. Tomaskova // Scientica agriculturae bohemoslovaca 1987. - № 4.-P. 267-273.

205. Wenzel G. Recent progress in microspore culture of crop plants. / G. Wenzel // In: D. R. Davies, D. A. Opwood (Eds.), The Plant Genome. The John Innes Charity, Norwich. 1980. - P. 185-213.

206. Wenzel G. Anther culture as a breeding tool in rape. I. Ploidy level and phenotype of androgenetic plants. / G. Wenzel, F. Hoffmann, E. Thomas // Z. Pflanzenzuchtg. 1977. - V. 78. - P. 149-155.

207. White Ph. R. Plant tissue cultures; a preliminary report of results obtained in the culturing of certain plant meristems. / Ph. R. White // Arch, exptl. Zellforsch. 1932. - V. 12. - P. 602-620.

208. White Ph. R. Potentally unlimited growth of excised tomato root tips in a liquid medium / Ph. R. White // Plant Physiol., 1931. 12. - P. 777-791.

209. Yang Q. A study of factors affecting anther culture of cauliflower (Brassica oleracea var. botrytis). / Q. Yang, J. E. Chauvin, Y. Herve // Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1991. - V. 28. - P. 289-296.

210. Yang Q. Obtention d' embryos androgenetiques par culture in vitro de boutons floraux chez le broccoli (Brassica oleracea var. italica). / Q.Yang, J. E. Chauvin, Y. Herve / C. R. Acad. Sci. Paris 314 Serie III: 1992. - P. 145-152.

211. Zaki M., Dickinson H. G. Structural changes during the first divisions of embryos resulting from anther and microspore culture in Brassica napus. / M. Zaki, H. G. Dickinson // Protoplasma. 1990. - V. 156. - P. 149-162.

Информация о работе

Муравлёв, Анатолий Анатольевич
кандидата биологических наук
Саратов, 2006
ВАК 06.01.05

Диссертация

Культура пыльников в селекции ярового рапса - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы