Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Клонирование и характеристика семейства генов рибосомного белка S21 и фактора дифференцировки HLDF человека

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Смирнова, Евгения Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ГЕНЫ РИБОСОМНЫХ БЕЛКОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ И ИХ РЕГУЛЯЦИЯ НА УРОВНЕ ТРАНСКРИПЦИИ (обзор литературы).

1.1. Рибосомные белки и их экспрессия в клетках млекопитающих.

1.2. Семейства генов рибосомных белков.

1.3. Характерные особенности активных интрон-содержащих рб-генов млекопитающих.

1.3.1. Структурные особенности и расположение на хромосомах.

1.3.2.Ассоциация с CpG островками.

1.3.3.Ассоциация с Л/и-последовательностями и последовательностями гетерогенных РНК.

1.4. Отдельные предсталители семейства рб-генов млекопитающих и особенности регуляции их транскрипции.

1.4.1. rpL30, rpL32 и rpS16.

1.4.2. rpL7.

1.4.3. rpL7a.

1.4.4. rpS4.

1.4.5. rpS6.

1.4.6. rpS14.

1.4.7. rpS24.

1.4.8. rpS7.

1.4.9. rpL23a.

1.5. Дополнительные функции рибосомных белков и динамика их экспрессии в клеточных процессах.

1.5.1. Внерибосомные функции рибосомных белков.

1.5.2. Изменения экспрессии рибосомных белков при пролиферации, дифференцировке и злокачественном перерождении клеток.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

2.1. Введение.

2.2. Клонирование и установление нуклеотидной последовательности гена рибосомного белка RPS21 человека.

2.2.1. Клонирование и установление нуклеотидной последовательности внутренних областей гена грБ21.

2.2.2. Поиск 5' и 3' областей гена грБ21.

2.2.3. Определение тонки инициации транскрипции.гена грБ21.

2.2.4. Экзон-интронная организация гена рибосомного белка человека гр821.

2.2.5. Анализ 5'-регуляторной области гена грБ21.

2.2.6. Сравнение нуклеотидной последовательности гена грБ21 с генами известных рибосомных белков млекопитающих.

2.2.7. Клонирование и определелие нуклеотидной последовательности псевдогена р$грБ21 из семейства генов рибосомного белка человека КР821.

2.3. Гипотеза возникновения НЬЭТ на базе геномной последовательности гена рибосомного белка человека.

2.4. Клеточная локализация НЫ)Е и Б1Р821.

2.4.1. Выделение мРНК и синтез первой цепи кДНК.

2.4.2. Получение экспрессирующих конструкций, содержащих кДНК рибосомного белка Ш*821.

2.4.3. Экспрессия ЫР821 в клетках Е. соИ, идентификация и выделение рекомбинантного продукта.

2.4.4. Получение и очистка С-коцевого фрагмента 1*1*821.

2.4.5. Получение поликлональных антител к полноразмерному рибосомному белку КР821, его С-концевой области и фактору дифференцировки НЬБЖ человека.

2.4.6. Иммуногистохимическое окрашивание клеток НЬ-60.

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. Материалы.

3.1.1. Реактивы.

3.1.2. Ферменты.

3.1.3. Штаммы и плазмидные векторы.

3.1.4. Микробиологические среды и буферы.

3.1.5. Другие растворы.

3.1.6. Фотографические растворы.

3.2. Методы.

3.2.1. Амплификация фрагментов ДНК (ПЦР).

3.2.2. Аналитический электрофорез в агарозном геле.

3.2.3. Выделение ДНК из агарозы.

3.2.4. Обработка продуктов ПЦР полинуклеотидкиназой и ДНК-полимеразой I фага Т4.

3.2.5. Реакция лигирования.

3.2.6. Получение компетентных клеток E.coli.

3.2.7. Трансформация компетентных клеток.

3.2.8. Отбор рекомбинантных клонов с помощью ПЦР.

3.2.9. Препаративная рестрикция.

3.2.10. Реакция дефосфорилирования.

3.2.11. Выделение плазмидной ДНК из клеток E.coli.

3.2.12. Подготовка образцов для проведения оПЦР.

3.2.13. Определение нуклеотидных последовательностей по методу Сэнгера.

3.2.14. Выделение ДНК фага 1 (X. Fix П)в микроварианте.

3.2.15. Выделение ДНК фага I в макроварианте.

3.2.15. Перенос и иммобилизация ДНК фага на фильтрах.

3.2.16. Лизис колоний E.coli на нитроцеллюлозных фильтрах.

3.2.17. Гибридизация лизированных колоний с радиоактивномечеными зондами

3.2.18. Определение точки инициации транскрипции).

3.2.19. Электрофорез белков.

3.2.20. Электроблотинг белков.

3.2.21. Иммуноокрашивание.

3.2.22. Определение N-концевых аминокислотных последовательностей.

3.2.23. Выделение тотальной РНК из клеток линии HL-60.

3.2.24. Синтез первой цепи кДНК.

3.2.25. Экспрессия кДНК рибосомного белка RPS21 в клетках Е. coli.

3.2.26. Очистка рекомбинантного белка.

3.2.27. Бромциановый гидролиз RPS21.

3.2.28. Получение коньюгата для иммунизации животных.

3.2.29. Получение поликлональных антител.

3.2.30. Очистка поликлональных антител.

4. ВЫВОДЫ.

5. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клонирование и характеристика семейства генов рибосомного белка S21 и фактора дифференцировки HLDF человека"

В настоящее время в связи с резким ростом числа онкологических заболеваний и ограниченностью эффективных терапевтических средств их лечения, особую значимость приобретают исследования, направленные на поиск новых эндогенных белков, останавливающих рост и метастазирование раковых опухолей и вызывающих их дифференцировку.

Одним из таких белков является фактор дифференцировки с молекулярной массой 8.2 кДа, выделенный ранее из среды культивирования клеток линии HL-60 промиелоцитарного лейкоза человека и названный HLDF (Human Leukemia Differentation Factor).

Важным этапом при изучении HLDF, как и любого другого фактора дифференцировки, является клонирование и исследование кодирующего его гена, так как последующее функциональное изучение гена HLDF позволит установить механизм дифференцировки клеток линии HL-60. Только имея исчерпывающую информацию о структуре гена HLDF и, особенно, его лромоторной области можно судить о истинной роли этого белка в нормальной и опухолевой клетке, и ответить на вопрос, связан ли патогенез злокачественных новообразований с изменениями в структуре самого гена или же на уровне регуляции его активности. Полученная информация, в конечном счете, позволит значительно продвинуться на пути понимания причин злокачественного перерождения клеток.

Данная работа является частью структурно-функциональных исследований, проводимых в лаборатории белков гормональной регуляции ИБХ им. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН по выяснению механизма 6 биосинтеза НЬОР в клетках линии НЬ60 промиелоцитарного лейкоза человека, индуцированных ретиноевой кислотой.

Целью данной работы являлось клонирование гена, кодирующего НЬБР, и изучение возникновения мРНК НЬБР в процессе дифференцировки клеток линии НЬ-60.

Автор выражает признательность своему научному руководителю, кандидату химических наук И.А. Костанян и зав. лабораторией белков гормональной регуляции доктору химических наук, профессору В.М. Липкину за внимание к данной работе и помощь в ее проведении, кандидату химических наук Т.В. Ракитиной, К.Б. Игнатову и С.Н. Бережному за постоянную помощь, внимание и ценные советы в работе. Автор так же признателен кандидату химических наук Н.С. Быстрову за синтез олигонуклеотидных зондов. 7

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Смирнова, Евгения Владимировна

4. ВЫВОДЫ.

1. Установлена полная нуклеотидная последовательность функционально-активного гена грБ21 человека и его 5'- и 3'-фланкирующих областей, длиной 6 т.п.н., его экзон-интронная организация, проведен анализ потенциальной промоторной области, определена точка инициации транскрипции.

2. Исследовано семейство генов рибосомного белка 11Р821 в геномах человека и клеточной линии НЬ-60. Выделено и структурно охарактеризовано 9 процессированных псевдогенов рибосомного белка ЯР 821 человека.

3. Показано, что как в геноме человека, так и в геноме клеточной линии НЬ-60 присутствует единственный интрон-содержащий ген, по своей кодирующей последовательности соответствующий кДНК рибосомного белка 11Р821.

4. Выдвинута гипотеза о том, что мРНК НЬОЬ является продуктом посттранскрипционых модификаций пре-мРНК ЯР821, включающих аберрантный сплайсинг и РНК-редактирование.

5. Иммуногистохимическое исследование НЬОЬ показало, что в дифференцированных и апоптотических клетках фактор в отличие от рибосомного белка ЫР821 локализован преимущественно в ядре и клеточной мембране клетки, что позволяет предположить, что в процессе дифференцировки линии НЬ-60, в клетках НЬЭР функционирует в виде профактора, причем «незрезрелый» НЬЭР имеет общую 1чГ-концевую последовательность с 11Р821.

5. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ATP - аденозин-5'-трифосфат

БСА - бычий сывороточный альбумин

DAB - 3,3'-диаминобензидин тетрагидрохлорид

ДНК, кДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота, комплементарная ДНК

ДТТ - дитиотрейтол

DMSO - диметилсульфоксид

ЕДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

HLDF - фактор дифференцировки лейкоза человека

IPTG - изопропил-/Ш-тиогалактопиранозид

KLH - гемоцианин из виноградной улитки

РНК - рибонуклеиновая кислота

PMSF - фенилметилсульфонилфторид

SDS - додецилсульфат натрия

Трис - трис(гидроксиметил)аминометан

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ИФА - иммуноферментный анализ

М - молекулярный вес

MALDI - масс-спектрометрия с ионизацией лазерной дисорбцией

SDS-ПААГ - электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия

ПЦР - полимеразная цепная реакция ед.акт. - единица активности а. о. - аминокислотный остаток п. о. - пара оснований т.и.т. - точка инициации транскрипции

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Смирнова, Евгения Владимировна, Москва

1. Wool I.G. (1979). The structure and function of eukaryotic ribosomes. Annu. Rev. Biochem., Y. 1050, 69-73.

2. Спирин A.C. Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка. М.: Высшая школа, 1986, 303 стр.

3. Bhat K.S., Morrison S.G. (1993). Primary structure of human ribosomal protein S21. Nucleic Acids Res., V. 21, 2939.

4. Itoh Т., Otaka E., Matsui K.A., (1985). Primary structures of ribosomal protein YS25 from Saccharomyces cerevisiae and its counterparts from Schizosaccharomyces pombe and rat liver. Biochemistry, V. 24, 7418-7423.

5. Schnier J., Kitakawa M., Isono K. (1986). The nucleotide sequence of an Escherichia coli chromosomal region containing the genes for ribosomal proteins S6, SI8, L9 and an open reading frame Mol. Gen. Genet., V. 204, 126-132

6. Mager H.W. (1988). Control of ribosomal protein gene expression. Biochem. Biophis. Acta, V. 949, 1-15.

7. Meyuhas O., Thompson E.A. Jr., Perry R.P. (1987). Glucocorticoids selectively inhibit translation of ribosomal protein mRNAs in PI798 lymphosarcoma cells. Mol. Cell Biol., V. 7, 2691-2699.

8. Hammond M.L., Bowman L.H. (1988). Insulin stimulates the translation of ribosomal proteins and the transcription of rDNA in mouse myoblasts. J. Biol. Chem., V. 263, 17785-17791.

9. Aloni R., Peleg D., Meyuhas O. (1992). Selective translational control and nonspecific posttranscriptional regulation of ribosomal protein gene expression during development and regeneration of rat liver. Mol. Cell Biol., V. 12, 2203-2212.

10. Perry R.P. Meyuhas O. (1990). Translational control of ribosomal protein production in mammalian cells. Enzyme, V. 44, 83-92.

11. Amaldi F., Bozzoni I., Beccari E., Pierandrei-Amaldi P. (1989). Expression of ribosomal protein genes and regulation of ribosome biosynthesis in Xenopus development. Trends Biochem. Sci., V. 14, 175-178.

12. Monk. R.J., Meyuhas O., Perry R.P. (1981). Mammals have multiple genes for individual ribosomal proteins. Cell, V. 24, 301-306.

13. Dudov K.P., Perry R.P. (1984). The gene family encoding the mouse ribosomal protein L32 contains a uniquely expressed intron-containing gene and an unmutated processed gene. Cell, V.37, 457-468.

14. Todorovska E.G., Atanassova A., Antonov L.S., Dudov K.P. (1997). Studies on the mouse rpL32 pseudogene family: features of a new member. Biol. Chem., V. 378, 1531-1535.

15. Kuzumaki T., Tanaka T., Ishikawa K., Ogata K. (1987). Rat ribosomal protein L35a multigene family: molecular structure and characterization of three L35a-related pseudogenes. Biochim. Biophys. Acta, V. 909, 99-106.

16. Lee M.G.-S., Lewis S.A., Wilde, C.D., Cowan N.J. (1983). Evolutionary history of a multigene family: an expressed human beta-tubulin gene and three processed pseudogenes. Cell, V. 33, 477-487.

17. Warner J.R. (1989). Synthesis of ribosomes in Saccharomyces cerevisiae. Microbiol. Rev, V. 53(2), 256-271

18. Sapi E., Flick M.B., Kacinski B.M. (1994). The first intron of human c-fms proto-oncogene contains a processed pseudogene (RPL7P) for ribosomal protein L7. Genomics, V. 22, 641-645.

19. Smith T.M., Lee M.K., Szabo C.I., Jerome N., McEuen M., Taylor M., Hood L., King M.C. (1996). Complite genomic sequence and analysis of 117 kb of human DNA containing the gene BRCA 1. Genome Res., V. 6, 1029-1049.

20. Kas K., Stickens D., Merregaert J. (1995). Characterization of a processed pseudogene of human FAU1 on chromosome 18. Gene, V.160, 273-276.

21. Rudert F., Gamier J.M., Schuhbaur B. (1993). Cloning a pseudogene and cDNA encoding a 17-kDa ribosomal protein from mouse: structure and regulation of expression. Gene, V. 133, 249-254.

22. Zahradka P., Larson D.E., Sell B.H. (1990). Characterization of a mammalian ribosomal protein gene promoter. Biochem. Cell Biol., V. 68, 949-956.

23. Colombo P., Yon J., Fried M. (1991). The organization and expression of the human L7a ribosomal protein gene. Biochim. Biophys. Acta, V. 1129, 93-95.

24. Hariharan N., Kelly D.E., Perry R.P. (1989). Equipotent mouse ribosomal protein promoters have a similar architecture that includes internal sequence elements. Genes Dev., V. 3, 1789-1800.

25. Mariottini P., Bagni C., Annesi F., Amaldi F. (1988). Isolation and nucleotide sequences of cDNAs for Xenopus laevis ribosomal protein S8: similarities in the 5! and 3' untranslated regions of mRNAs for various r-proteins. Gene, V. 67, 69-74.

26. Mariottini P., Amaldi F. (1990). The 5' untranslated region of mRNA for ribosomal protein S19 is involved in its translational regulation during Xenopus development. Mol Cell Biol, V. 10,816-822.

27. Huxley C., Fried M. (1990). The mouse rpL7a gene is typical of other ribosomal protein genes in it's 5' region but differs in being located in a tight cluster of CpG-rich islands. Nucleic Acids Res., V. 18, 5353-5357.

28. Tanaka T., Kuwano Y., Kuzumaki T., Ishikawa K., Ogata K. (1987). Nucleotide sequence of cloned cDNA specific for rat ribosomal protein L31. Eur. J. Biochem., V. 162, 45-48.

29. Hariharan N., Perry R.P. (1990). Functional dissection of a mouse ribosomal protein promoter: significance of the polypyrimidine initiator and an element in the TATA-box region. Proc. Natl Acad. Sci. USA, V. 87, 1526-1530.

30. Chung S., Perry R.P. (1991). Cell-free transcription of a mouse ribosomal-protein-encoding gene: the effects of promoter mutations. Gene, V. 100, 173-180.

31. Safrany G., Perry R.P. (1995). The relative contributions of various transcription factors to the overall promoter strength of the mouse ribosomal protein L30 gene. Eur. J. Biochem., V. 230, 1066-1072.

32. Jefferies H.B., Fumagalli S., Dennis P.B., Reinhard C., Pearson R.B., Thomas G., (1997). Rapamycin suppresses 5'TOP mRNA translation through inhibition of p70s6k. EMBO J., V. 16, 3693-3670.

33. Levy S., Avni D., Hariharan N., Perry R., Meyuhas O., (1991). Oligopyrimidine tract at the 5' end of mammalian ribosomal protein mRNAs is required for their translational control. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, V. 88, 3319-3323.

34. Gardiner.M., Frommer M. (1987). CpG islands in vertebrate genomes. J. Mol. Biol., V. 196, 261-282.

35. Cedar H., Razin A. (1990). DNA methylation and development. Biochem. Biophis. Acta, V. 1049, 1-8.

36. Tasheva E.S., Roufa D.J. (1995). Regulation of human RPS14 transcription by intronic antisense RNAs and ribosomal protein SI4. Genes Dev., V. 9, 304-316.

37. Kenmochi N., Higa S., Yoshihama M., Tanaka T. (1996). U14 snoRNAs are encoded in introns of human ribosomal protein S13 gene. Biochem. Biophys. Res. Commun., V. 228,371-374.

38. Moura-Neto R., Dudov K.P., Perry R.P., (1989). An element downstream of the cap site is required for transcription of the gene encoding mouse ribosomal protein L32. Proc Natl Acad Sci U S A, V. 86, 3997-4001.

39. Atchison M.L., Meyuhas 0., Perry R.P (1989). Localization of transcriptional regulatory elements and nuclear factor binding sites in mouse ribosomal protein gene rpL32. Mol. Cell. Biol., V. 9,2067-2074.

40. Chung S., Perry R.P. (1993). The importance of downstream delta-factor binding elements for the activity of the rpL32 promoter. Nucleic Acids Res., V. 21, 3301-3308.

41. Bushmeyer S.M., Atchison M.L. (1998). Identification of YY1 sequences necessary for association with the nuclear matrix and for transcriptional repression functions. J. Cell Biochem., V. 68, 484-499.

42. Genuario R.R., Perry R.P. (1996). The GA-binding protein can serve as both an activator and repressor of ribosomal protein gene transcription. J. Biol. Chem., V. 271,4388-4395.

43. Yoaganathan T., Sell B.H. (1991). Identification of polypeptide bound to the P region of the mouse r-protein L32 promoter. FEBS Lett., V. 286, 163-166.

44. Yoganathan T., Bhat N.K., Sells B.H. (1992). A positive regulator of the ribosomal protein gene, beta factor, belongs to the ETS oncoprotein family. Biochem. J., V. 287, 349-353.

45. Yoganathan T., Cowie A., Hassell J.A., Sells B.H. (1992). Enhanced cell-free transcription of the ribosomal protein L32 gene by the polyoma virus enhancer PEA3 DNA-binding protein. Eur. J. Biochem., V. 207, 195-200.

46. Nunn M.F., Hunter T. (1989). The ets sequence is required for induction of erythroblastosis in chickens by avian retrovirus E26. J. Virol., V. 63, 398-402.

47. Thompson C.C., Brown T.A., McKnight S.L. (1991). Convergence of Ets- and notch-related structural motifs in a heteromeric DNA binding complex. Science, V. 253, 762-768.

48. Wiedemann L.M. (1987). Three functional ribosomal protein genes are unlinked in mouse genome. Somat. Cell. Mol. Genet., V. 13, 77-80.

49. Wiedemann L.M. and Perry R.P. (1984). Characterization of the expressed gene and several processed pseudogenes for the mouse ribosomal protein L30 gene family. Mol. Cell. Biol., V. 4, 2518-2528.

50. Yoganathan Т., Horikoshi M., Hosegava S., Roeder R.G., Sells B.H. (1992). Yeast transcription factor II D participates in cell-free transcription of mammalian ribosomal protein TATA-less promoter. Biochem. J., V. 285, 721-723.

51. Safrany G., Perry R.P. (1993). Transcription factor RFX1 helps control the promoter of the mouse ribosomal protein-encoding gene rpL30 by binding to its alpha element. Gene, Y. 132, 279-283.

52. E.B. Смирнова, T.B. Ракитина, А.Ю. Евтодиенко, И.А. Костанян, В.М. Липкин (2000). Клонирование и характеристика гена рибосомного белка S21 человека. Биоорг. Химия, Т. 26. С. 392-396.

53. Reith W., Herrero-Sánchez С., Kobr М., Silacci P., Berte С., Barras E., Fey S., Mach B. (1990). MHC class II regulatory factor RFX has a novel DNA-binding domain and a functionally independent dimerization domain. Genes and Dev., V. 4, 1528-1540.

54. Meyuhas O., Klein A. (1990). The mouse ribosomal protein L7 gene. J. Biol. Chem., V. 265, 11465-11473.

55. Klein A., Meyuhas O. (1984). A multigene family of intron lacking and containing genes, encoding for mouse ribosomal protein L7. Nucleic Acids Res., V. 12, 37633776.

56. Colombo P., Yon J., Garson K., Fried M. (1992). Conservation of the organization of five tightly clustered genes over 600 million years of divergent evolution. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, V. 89, 6358-6362.

57. De Falco S., Russo G., Angiolillo A., Pietropaolo C. (1993). Human L7a ribosomal protein: sequence, structural organization, and expression of a functional gene. Gene, V. 126, 227-235.

58. Colombo P., Fried M. (1992). Functional elements of the ribosomal protein L7a gene promoter region and their conservation between mammals and birds. Nucleic Acids Res., V. 20, 3367-3373.

59. Fisher E.M., Beer-Romero P., Brown L.G. (1990). Homologous ribosomal protein genes on the human X and Y chromosomes: escape from X-inactivation and possible implications for Turner syndrome. Cell, V. 63, 1205-1218.

60. Zinn A.R., Alagappan R.K., Brown L.G., Wool I., Page D.C. (1994). Structure and function or ribosomal protein S4 genes on the human and mouse sex chromosomes. Mol. Cell. Biol., V. 14, 2485-2492.

61. Antoni M., Fried M. (1992). The organization of the intron-containing human S6 ribosomal protein (rpS6) gene and determination of its location at chromosome 9p21. Hum. Mol. Genet., V. 1, 565-570.

62. Pata I., Hoth S., Krippa J., Metspalu A. (1992). The human ribosomal protein S6 gene: isolation, primary structure and location in chromosome 9. Gene, V. 121, 387-392.

63. Pata I., Metspalu A. (1996). Structural characterization of the mouse ribosomal protein S6-encoding gene. Gene, V. 175, 241-245.

64. Nakamichi N.N., Kao F.T., Wasmuth J., Roufa D.J. (1986). Ribosomal protein gene sequences map to human chromosomes 5,8 and 17. Somat. Cell. Mol. Genet., V. 12, 225-236.

65. Rhoads D.D., Dixit A., Roufa D.J. (1986). Primary structure of human ribosomal protein S14 and the gene that encodes it. Mol. Cell. Biol., V. 6, 2774-2783.

66. Roads D.D., Roufa D.J. (1987). A cloned human ribosomal protein gene functions in rodent cells. Moll. Cell. Biol., Y. 7, 3767-3774.

67. Overman P.F., Roads D.D., Tasheva E.S., Pyle M.M., Roufa D.J. (1993). Multiple regulatory elements ensure accurate transcription of a human ribosomal protein gene. Somat. Cell. Mol. Genet., V. 19, 347-362.

68. Khochbin, S and J.-J. Lawrence (1994). An antisence RNA involved in p53 mRNA maturation in murine erythroleukemia cells induced to differentiate. EMBO J., V. 8, 4107-4114.

69. Nepveu A. and Marcu K.B. (1986). Intragenic pausing and antisence transcription within the murine c-mic locus. EMBO J., V. 5, 2859-2865.

70. Watson K.L., Konrad K.D., Woods D.F., Bryant P.J. (1992). Drosophila homolog of the human S6 ribosomal protein is required for tumor suppression in the hematopoietic system. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, V. 89, 11302-11306.

71. Bommer U.A., Lutch G., Stahl J., Bielka H. (1991). Eukaryotic initiation factors eIF-2 and eIF-3: interactions, structure and localization in ribosomal initiation complexes. Biochimie, V. 73, 1007-1019.

72. Jagus R., Anderson W.F., Safer B. (1981). The regulation of initiation of mammalian protein synthesis. Prog. Nucleic Acids Res. Mol. Biol., V. 25, 127-185.

73. Iwasaki K., Nagata S., Mizumoto K., Kaziro Y. (1974). The purification of low molecular weight form of polypeptide elongation factor 1 from pig liver. J. Biol. Chem., V. 249, 5008-5010.

74. Tolan D.R., Hershey J.W., Traut R.T. (1983). Crosslinking of eukaryotic initiation factor eIF3 to the 40S ribosomal subunit from rabbit reticulocytes. Biochimie, V. 65, 427-436.

75. Westermann P., Nygard O. (1983). The spatial arrangement of the complex between eukaryotic initiation factor eIF-3 and 40 S ribosomal subunit. Cross-linking between factor and ribosomal proteins. Biochim. Biophys. Acta, V. 741, 103-108.

76. Xu W.B., Roufa D.J. (1996). The gene encoding human ribosomal protein S24 and tissue-specific expression of differentially spliced mRNAs. Gene, V. 169, 257-262.

77. Sterner D.A., Berget S.M. (1993). In vivo recognition of a vertebrate mini-exon as an exon-intron-exon unit. Mol. Cell. Biol., V. 13, 2677-2687.

78. Black D.L. (1991). Does steric interference between splice sites block the splicing of a short c-src neuron-specific exon in non-neuronal cells? Genes and Dev., V. 5, 389-402.

79. Reed R. (1989). The organization of 3' splice-site sequences in mammalian introns.Genes and Dev., V. 3,2113-2123.

80. Annilo T., Laan M., Stahl J., Metspalu A. (1995). The ribosomal protein S7 encoding gene: isolation, structure and localization in 2p25. Gene, V. 165, 297-302.

81. Fan W., Christensen M., Zhang X., Lennon G. (1997). Cloning, sequencing, gene organization and localization of the human ribosomal protein RPL23a gene. Genomics, V. 46, 234-239.

82. Davies B., Fried M. (1993). The structure of the human intron-containing S8 ribosomal protein gene and determination of its chromosomal location at Ip32-p34.1. Genomics, V. 15,68-75.

83. Chen I.T., Roufa D.J. (1988). The transcriptionally active human ribosomal protein SI7 gene. Gene, V. 70, 107-116.

84. Mazuruk K., Schoen T.J., Chader G.J., Iwata T., Rodriguez I.R. (1996). Structural organization and chromosomal localization of the human ribosomal protein L9 gene. Biochym. Biophys. Acta, V. 1305, 151-162.

85. Filipenko M.L., Vinichenko N.A., Karpova G.G., Mertvetsov N.P., Amaldi F. (1998). Isolation, structural analysis and mapping of the functional gene of human ribosomal protein S26. Gene, V. 211, 287-292.

86. Wool I.G. (1996). Extraribosomal functions of ribosomal proteins. TIBS, V. 21, 164-165.

87. Kim J., Chubatsu L.S., Admon A., Stahl J., Fellous R., Linn S. (1995). Implication of mammalian ribosomal protein S3 in the processing of DNA damage. J. Biol. Chem., V. 270, 13620-13629.

88. Elenbaas B., Dobbelstein M., Roth J., Shenk T., Levine A.J. (1996). The MDM2 oncoprotein binds specifically to RNA through its RING finger domain. Mol. Med., Y. 2,439-451.

89. Toczyski D.P., Matera A.G., Ward D.C., Steitz J.A. (1994). The Epstein-Barr virus (EBV) small RNA EBER1 binds and relocalizes ribosomal protein L22 in EBV-infected human B lymphocytes. Proc. Natl. Acad. Sci., Y. 91, 3463-3467.

90. Omoe K., Endo A. (1996). Relationship between the monosomy X phenotype and Y-linked ribosomal protein S4 (Rps4) in several species of mammals: a molecular evolutionary analysis of Rps4 homologs. Genomics, V. 31,44-50.

91. Watanabe M., Zinn A.R., Page D.C., Nishimoto T. (1993). Functional equivalence of human X- and Y-encoded isoforms of ribosomal protein S4 consistent with a role in Turner syndrome. Nat. Genet., V. 4,268-271.

92. Ito Y. (1992). Purification and partial identification of bone-inducing protein from a murine osteosarcoma. Biochem. J., V. 284, 847-854.

93. Furukawa T., Uchiumi T., Tokunaga R., Taketani S. (1992). Ribosomal protein P2, a novel iron-binding protein. Arch. Biochem. Biophys., V. 298, 182-186.

94. Geyer P.K., Meyuhas O., Perry R.P., Johnson L.F. (1982). Regulation of ribosomal protein mRNA content and translation in growth-stimulated mouse fibroblasts. Mol. Cell. Biol., V. 2, 685-693.

95. Agrawal M.G., Bowman L.N. (1987). Transcriptional and translational regulation of ribosomal protein formation during mouse myoblast differentiation. J. Biol. Chem., Y. 262,4868-4875.

96. Ferreri S., Manfredini R., Tagliafico E., Rossi E., Donelli A., Torelli G., Torelli U. (1990). Noncoordinated Expretssion of S6, Sll and S14 Ribosomal Protein in Leukemic Blast Cells. Cancer Research, V. 50, 5825-5828.

97. Kostanyan I.A., Astapova M.V., Starovoytova E.V., Dranitsyna S.M., Lipkin V.M., (1994). A new human leukemia cell 8.2 kDa differentiation factor: isolation and primary structure. FEBS Lett., V. 356(2-3), 327-329.

98. Feo S., Davies В., Fried М. (1992). The mapping of seven intron-containing ribosomal protein genes shows they are unlinked in the human genome. Genomics, V. 13,201-207.

99. Lutsch G., Stahl J., Kargel H.-J., Noll F., Bielka H., (1990). Immunoelectron microscopic studies on the location of ribosomal proteins on the surface of the 40S ribosomal subunit from rat liver. Eur. J. Cell Biol., V. 51, 140-150.

100. Sato M., Saeki Y., Tanaka K., Kaneda Y. (1999). Ribosome-associated protein LBP/p40 binds to S21 protein of 40S ribosome: analysis using a yeast two-hybrid system. Biochem. Biophys. Res. Commun., V. 256, 385-390.

101. Itoh T., Otaka E., Matsui K.A. (1985). Primary structures of ribosomal protein YS25 from Saccharomyces cerevisiae and its counterparts from Schizosaccharomyces pombe and rat liver. Biochemistry, V. 24, 7418-7423.

102. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. (1977). DNA sequencing with chai-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, V. 12, 5463-5467.

103. Ochman H., Ajioka J.W., Garza D., Hartl D.L., (1990). Inverse polymerase chain reaction. Biotechnology, V. 8, 759-760.

104. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition. Cold Spring Harbor. N.-Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

105. Woo S.L.C. (1979). A sensetive and rapid method for recombinant phage screening. Methods Enzymol., V. 68, 389-395.

106. Забаровский Е.П., Турина О.В. (1988). Быстрое выделение ДНК фага X. Мол. Биология, Т. 22, 1451-1455.

107. Mount S.M. (1982). A catalogue of splice junction sequences. Nucl. Acids Res., V. 10, 459-472.

108. Tarn W.Y., Steitz J.A. (1997). Pre-mRNA splicing: the discovery of a new spliceosome doubles the challenge. Trends Biochem. Sci., V. 22, 132-137.

109. LaMarco K., Thompson C.C., Byers B.P., Walton E.M., McKnight S.L. (1991). Identification of Ets- and notch-related subunits in GA binding protein. Science, V. 253,789-792.

110. Park K., Atchison M.L. (1991). Isolation of a candidate repressor/activator, NF-E1 (YY-1, delta), that binds to the immunoglobulin kappa 3' enhancer and the immunoglobulin heavy-chain mu El site. Proc. Natl. Acad. Sci. USA., V. 88, 9804-9808.

111. Gajavala K.S., Chen H., Cornille F., Roques B.P., Reith W., Mach В., Burley S.K. (2000). Structure of winged-helix protei hRFXl reveals a new mode of DNA binding. Nature, V. 403, 916-921.

112. Becker K.G., Jedlicka P., Templeton N.S., Liotta L., Ozato K. (1994). Characterization of hUCRBP (YY1, NF-E1, delta): a transcription factor that binds the regulatory regions of many viral and cellular genes. Gene, V. 150, 259-66.

113. Pugh B.F., Tjian R. (1990). Mechanism of transcriptional activation by Spl: evidence for coactivators. Cell, V. 61, 1187-1197.

114. Jurka J., Milosavljevic A. (1991). Reconstruction and analysis of human Alu genes. J. Mol. Evol., V. 32,105-121.

115. Bai G., Lipton S.A. (1998). Aberrant RNA splicing in sporadic amyotrophic lateral sclerosis. Neuron, V. 20, 363-366.

116. Chang J.G., Chen Y.J., Perng L.I., Wang N.M., Kao M.C., Yang T.Y., Chang C.P., Tsai C.H. (1999). Mutation analysis of the PTEN/MMAC1 gene in cancers of the digestive tract. Eur. J. Cancer, V. 35, 647-651.

117. Wang N.M., Chang J.G., Liu T.C., Lin S.F., Peng C.T., Tsai F.J., Tsai C.H. (2000). Aberrant transcripts of FHIT, TSG101 and PTEN/MMAC1 genes in normal peripheral mononuclear cells. Int. J. Oncol., V. 16, 75-80.

118. Chomczynski P., Sacchi N. (1987). Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal. Biochem., V. 162, 156-159.

119. Rosenberg, A. H., Lade, B. N., Chui, D., Lin, S., Dunn, J. J. and Studier, F. W. Vectors for selective expression of cloned DNAs by T7 RNA polymerase. Gene, V. 56, 125-135.

120. Studier F., Moffett B. (1986). Use of bacteriophage T7 RNA polymerase do directselective high-level expression of cloned genes. J. Mol. Biol., V. 189, 113-130.

121. Hockney R. (1994). Recent developments in heterologous protein production in Escherichia coli. Trends Biotechnol., V. 12, 456-463.

122. Harlow E., Lane D. Antibodies (A Laboratory Manual). Cold Spring Harbor; N.-Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988.

123. Hsu S.M., Raine L., Fanger H. (1981). Use of avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques: a comparison between ABC and unlabeled antibody (PAP) procedures. J. Histochem. Cytochem., V. 25, 577-580.

124. Laemmli U.K. (1970). Cleavage of structural proteins assembly of 6the head of bacteriophage T4. Nature, V. 227, 680-685.

125. Левина Н.Б., Слепак B.3., Киселев О.Г., Шемякин В.В. (1989). Пприменение электроблоттинга в качестве метода получения образцов белков и их фрагментов для микросеквенирования. Биоорг. Химия, Т. 5, 24-31.

126. Engval Е., Perlmann Р. (1972). Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA. J. Immunol., V. 109, 129-135.