Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА ПО ГРУППАМ КРОВИ У СВИНЕЙ РАЗНЫХ ПОРОД

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА ПО ГРУППАМ КРОВИ У СВИНЕЙ РАЗНЫХ ПОРОД"



На правах рукописи

ИШЖГГЕРСТВО СЕЛЬСКОГО.ХОЗЯЙСТВА СССР , Новосибирский сельскохозяйственный институт

' ГОРЕЛОВ Иван Григорьевич

ИЗУЧЕНИЕ ИИШГНОГЕНВГИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗИА ; ПО ГРУППАМ КРОВИ У СВИНЕЙ РАЗНЫХ ПОРОД

Разведеими к селекция сельскохозяйственных животных -

06.02.0It

А в * ореферат ■-. - - ■ \ ■.-*.. двооертации на соискание ученой степени • кандидата сельскохозяйственных наук

Новосябнрок, 1975

■ ', ■* ' / ■ 'V-: ■ \На.права* рукописи

; МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР

Новосибирский сельскохоаяас5ввввый 'шсстму»;

-' ГОРЕЛОВИван Григорьевич г .

■г-;-' ■ ■ ;. - ' . - .'"-¿ч ■

; ^ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГИ1ВГИЧБСКОГО !*ОЛИШРШШ -ПО ГРУППАМ КРОВИ У СВИНЕЙ РАЗНЫХ ПОРОД

Р&5Веденив-И СЗЛвКДвЯСвДЬСКОХОЗЯИСТБвННКХ животных -

■ ; ■ • 06.02.01ji: * у..,; -[■.■/

, * " ,>А » т.о р е ф в р;а *

диссертации на соискание учавой степени кандидатас е дьс кохоа яй ст во нных аау*.

Новосибирск, 1975

■"■■ г'

Ч- ' Лсд Т^Ы! :л -,: :-. д Гм?ЗгШШЖ~

- ■■ = " ■"■ " 1 *- С с;« М-

.■л-. ■ I.; ■ _ ¡ев:

Диссертационная работа .выполнена а даОоратории иммуногв-. аатики в гибридизации животных Института цитологии и генетики Скбирского отделения АН СССР. " 1 '

' ■ ■ Научный руководитель -

, *"" ■ ' - :.*.¡'; - доктор биологических наук,

' ■■V™'-. профессор ТИХОНОВ В.Н.

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных-наук, ■ - - . ' профессор ЭЙДРИГЕВИЧ Е.В, .

.,-■/. " . кандидат биологических науку

-- ■ . доцент ; РУБАН А.И.

Ведущее предприятие - Сибирский н ауч но-исследовате льский и Проектно-технологический Институт животноводства. . '.

Автореферат разослан *1< Я 1975г.

Зацита^состоится , ",/3 " Сы-иил? 1975г. в /Ччао; У? мин. » аудитории 327 на заседании Ученого Совета агрономического и зоотехнического факультетов Новосибирского сельскохозяйственного института. . ,

Адрес: Новосибирск 630039* уд.Добролюбова, 160, Сельскохозяйственный институт. •

" .-■.-■-■ С диссертацией ложно ознакомиться в библиотеке института

Ученый секретарь'Совета кычидат-сельскохозяйственных наук, ^ . доцент Г.В.ЕАЯНДИНА

,В(последние два десятилетия исключительно■ быстро.развива ется илщуноген'етшса.животных,один,,йз наиболее молодых разделоз 'зоотехнической науки. Важное «естов шмуногенетике>занимает изучение полиморфиэма до грушам крова. . * ^ -у .',-

V Современною _состояние животноводства настоятельно,нуздае^-ся в дальнейшем развитии теоретических основ и большем исполь1 -эовании в зоотехнической науке новых прогрессивных методов физиологии, биохимии и генетики. Б. этом отношении изучение групп врови "животных могут сыграть значительную роль при разработке "многих вопросов генетики й селеидаи животннх.Кммуногенетичес-, кий метод определения происхождения кожет оказать большую по мощь при сравнительной оценке'производителей по.потомству методом полиаллельного скрещивания . на одних и тех же матках с последующей расшифровкой происхождения потомства .по группам крови» Знание групп крови приобретает особенно большое 'значение при ■ искусственном осеменении, поскольку при выборе производителей, -оставляющих десятки тысяч потомков, очень ваяно точно знать их происхождение. С помощь» изучения г^упп.крови можно вести анализ структуры пород, их отродий, линий и'семейств, оценивать' ,степень их консолидации, родства, гетерогенности и использовать получаемые данные'для целей совершенствования;стад и пород, а также осуществлять контроль родословных при выведении новых пород, линий и'семейств. ■ .J". .

; В последние, годи широко изучается связь групп крови с хо-аяйотвенно-полезными признаками (J.B*nd«l , 1961; J.Belts« , 1964;" В.Н.Тйхонов,1967; С.П.Ееэёнко, А.С.Терентьева и др.1971; Н.О.Сухова, 1972; В.А.Корешков, 1973 и др.). Успешно изучается связь групп крови с устойчивостью животных к заболеваниям, а также при анализе несовместимости по группам крови, и при -чина гемолитической болезни поросят (D.Bvuimer , Н.Brown, т.

Hull , 1949;J.Buxton «¿ а!., I955; E.Andres*n , 1962; Г.Н.Сер-даж, 1971 и др.). . <

Иммуногенетический анализ, связанный с полиморфизмом по ■ группам крови,.можно.проводить, только располагая моноспешфи-ческими антисыворотками (реагентами), содержащими антитела про-

тив каждого изучаемого. антигенного фактора/ При наличии внтисы-- вороток определение антигенов является несложным и де лается легко осуществимым в практических условиях* Однако изготовление pea.-L.. гейтов очень трудоемкий, сложный и'длительный проце сс (i/i ?« г gu ■ en, IS4I; B.Andr«s»a',1959; J.Matoae»k .IS60;' В.Н.Тихонов,IS65{ С.П.- '{ Безёшад,'П.Ф,Сороковой и др. 1966; Ф.ШВорон, 1969; В.П.Павли*-' V ченко, С.И.Шадманов,1973; Н.О.СуховаДЭТЭ; Г.В.МарусякД974 и ! ' другие).' ■ ;;;./" ''^' !■..;

: v В связи о вышеуказаянт, первой задачей' нашей работы, которая была начата в 1962 году, было изготовление моноспеци^ячео -

■ кях антя сывороток,* выявляющих возможно больше число антигенов. .С »той цель» было иммунизировано и реикмувизировано более 600 i животных--реципиентов v При этом для повышения доли иммунореактив— ;вш животных, а также увеличение,титра иммунных сывороток в задачу работы входило изучение эффективности использования внутри-породных, межпородных и межвидовых иммунизации, различных' ыето-¡дик н 'схем иммуниэвщш, - проведение сравнительной оценки эффективностинекоторых адьювантов. Кроме того, необходимо было раз-. „ Í работать новую методику иммуннэ ацяи кроликов для ускорения по. — * (лучения высокоактивной антиглобулпнс^ой сыворотки. Проведенная:; ' ¡работа по получению моноспетдафических сывороток позволила соэ -

| дать большой'банк реагентов и приступить к выполнению главной ' [ задачи ~ изучению пситлорфизма групп крови свиней разных пород.

. Второй.основной задачей работы было изучение распростране- .. ния антигенов разных систем гругшкровив породах свияей,раз -

■ водимых в СССР, отделение межпородной и внутрипородной диф -¡ ференшапии по генным частотам и установление иммуногенетиче-—

. '.ских характеристик разных пород-по кровогрупповсму полиморфиз-' .„ «у.'' ' ''-'' 'Х-'1!'''

Изучение разных методов и>щувизадиь для получения ■ " ■ ' .- швоспацифичес кюс сывороток-реагентов.выявляющих ,, полиморфизм яЬ-тотЯяам крови свиней

.Хотя.начало изучению групп крови свиней положено в 191Эг* только после 1955 г. использование полиморфизма * : -втях.хивоткых стало быстро развиваться, благодаря открывшийся' возможностям использования иммунных изо- и гетероантисывороток. За сравнительно короткий период были подучены 16 иммунные сы-

'С: * " "' 1 " ' *

- И -

вороток, выявляющих соответствующее число эритрогытарных анти— -геиоь 9 генетических систем ( Е.Дп4г«з«п ,1962). Вскоре Р.Вга-ипег - N1613611 (1561) сообщил об открытии антигена Ма, а год спустя еще двух антигенов Мв и Мс новой системы групп крови М , -В 1962 г. Е.1пйг«веп ; и ь.Вакаг опубликовали* данные об открытии системы Б* а в 1963 г. - системы С. В 1964-1969 гг.К.Н*1а и л.но^пу сообщили об открытии антигенов еще:трех генетических систем - и , 0 и в . В самые последние годы в литературе появились сообщения об антигенах,'которые, по-видимому, составляют новые:системы; о чемсвядетельствуют материалы международных конференций по группам крови и биохимическому полиморфизму, состоявшихся в 1^дапеште (1970) , Бене (1972) и Дэвис (1974)./

' Работы по пслученяю аитвснвороток (реагентов) начаты нами с 1962 Г. Основными животными в этих работах были чистопород ные 'свиньи ландрас, вьетнамские масковые черные н епятнистые свиньи и их гибриды* Кроме того; для межпородных им«унизаций в, качестве доноров и реципиентов.использовали'.кемеровских свиней (совхозы им.Чкалова и "Возвьшенка" Кемеровской области), берк-широких"(совхоз "Красная Мордовия*-, Мордовская А0СР1, кахетинских (Госплемстанции Грузинской СС"),омских 1ерах (экспериментальное хозяйство:СибНИИсхоз, Омская область). Крема того, были проведены' межвидовые ишунизахщи с диким кабанш,'Для ' ввделения■моноспецифических реагентов были использованы также сложные антисыворотки, полученные'на Кубе» где были проведены ■ межвидовая иммунизация с пекари и межпородная с дпрокской, польско-китайской и.гемпширской породами. - ,'■' -

• В период о 1962 по 1974 гг. проведено более 25 различных "V серий ишуииззций и реиммунизаний в т.ч. 15.внутрипородных и 10 межпородных с общим числом 650 голов. Донорами мы подбирали ~ животных; имеющих эритроциты с-антигенами, на которые требовав'',' лось выработать соответствующие-антисыворотки, а реципиентами -животных, не.имеющих соответствующих антигенов. При планировании кммуниэатш мы стремились к тому, чтобы донор возможно меньше превосходил реципиента по разнообразию антигенов и не .обра-\ -'зовалось бы комплексов антител, труднорасчленяемнх, например, I 1^о,ЬаЬ,БЪ4 ?И Т.П. .-■ „ • ..

.".Кровь у.доноров брели из,передней полой вены'по методу | , Шипо^ (1955),-Для иммунизации применяли в разных сериях свежие эритроциты,Га также "гемолизированные и их строму. Антигены вводили интравеноэно, интрамускулярно (иногда одновременно) и суб^

кутально в рецепторную зону у основания уха.

. Во избежание гибели''животных от посттранс$узнойного ана - ' филаксического шока перед внутривенной инъекцией,начиная со второй иммунизации, проводили десенсибилизацию реципиентов введением за 1,5-2 часа до внутривенной инъекции 1/3 дозы антигена подкожно. Инъекции яри иммунизации проводили, как правило четырех- . кратно е разной частотой,"-.разными дозами и'о'разными адыаваыта-МИГ, '. ■ ..';. " - ' ..' _ ■'■■' ■■ ■ :' *

Изучая результаты многих серий шицунизаний свиней ври получении антисывороток,пришли к заключению, что наилучше результаты волучаются при тщательном подборе реципиентов и доноров из достаточно различающихсяишуногенетически пород или специально селекционированных линий по антигенным характеристике»*.' Самая высокая эффективность.иммунязаций достигалась, когда она проводилась путем одновременного введения антигена интравенозно и интрамускулярно, При атом оптимальной дозой оказалась 10 мл 50# трижды^ отмытой ератровдтарыой суспензией, вводимой 4 раза о интервалом &-7 дней*'. Более частые и,длительные иммунизации не приводят к улучшении антитело ой раэовавия,, а гиперимцунизации -'часто являются причиной понижения титра антител и уменьшение их' специфичности* Антитела"у большие тьа иммуноре'активных животных : появлялись уже после второй иыцунизации, и рост.их титра про-долаался до 8-10 дня посла 17 иккуаизации, затем титр начинает , снижаться ,;,причем у кекоторьа животных весьма бистро.; Солучен-нве данные о зависимости эффективности иммунизаций от "времени / ■ года и возраста реципиентов показывают« что сезон года,-по-видимому, не играет значительной роли в.иммунореактивности животных» хотя.возможно в осенне-зимний период она несколько новы -шается* Известно, чтовзрослыеаивотшеявляится лучшими продуцентами ентисывороток нежели молодыеОднако данных о' раз ли ч -щэй реактивности аэрослых свиней разного возраста в литературе «в»* . ■ . \ ' . .По нйшим данным,начиная о возраста от X года до/5 лет.ЗнЬля! реактивных- животных/увеличивается ит СО до —-

начмает сшшатьоя. Наиволее внсокий титр антител в сыворотках найшдали.у'свинейввозрасте 2 года (табл.1)«

/Поскольку во многих случаях цельную кровь для; иммунизации сохранять сложно, иы Провели исследование по использованию для , имыуяиэадии гемолнзата крови и стромы эритроцитов. Проведенные ошты покаэали» что геыолизированная кровь и строма аритроци-

тов, хранившиесягв замороженной состояния 4 года при -20°С, не утрртили своих антигенных свойств . У" реципиентов образ овивались антитела (как полные, так'и неполные) с'титром,- не отличающимся от полученного при'контрольных иммунизация* суспензией из неповрежденных эритроцитов. В результате четырехкратных иммуниэа-гшй гемолизатои удалось получить Ра, Еа, На, Кв, 1в, Ic, El и некоторые другие с титром до 1:128, как теоретически ожидалось по схеме иммунизации. Наши опыты также подтвердили эЗДектив ность использования "стромы эритроцитов для абсорбции сырых сывороток при изготовлении некоторых вариантов антисывороток Еа, Ed, Бе, La, Ig я 1с. ■ ' .

'. Таблица I

Иммунологическая реактивность свиней-реципиентов на эритроцвтарные антигены в зависимости от возраста

Возраст реципиентов Число иммунизированных животных Средний титр гм-муннцх

Всего реакт ивны^ ареак гивных

(число лет) абс. абс. сывороток

I IIS 72 60,8 - 43 39,2 15,6 >

2 81 48 ео,о 33 40,0 44,8

. 3 40 26 65,0 14 ■ 35,0 21,2

4 . ■ 39 ' 28 71,7 : " II 20,3 , 1В,2

17 14 82,3 3 ' 17,7 - 22,1

'6 '10 ; б- 60,0 4 40,0 16,0

■ Всего: 302 , 194 61,0 108 39,0 23,2

• Число ишунореактивннх животных в каждой серии при обыч -

них иммунизация* (без использования адаювантов) составляла от -50 до 60^,. В результате каждой серии иммунизации обычно удавалось получить 10-12 иммунных "сырых* сывороток, содержащих различные антитела, которые часто отличались по титру.' Для того, чтобы из таких "сырых" сывороток получить какой-либо моноспецифический реагент, мы или проводили инактивацию слабых антител разведением, или чаще абсорбировали все антитела, креме нужных нам эритроцитами с известным антигенным составом. После каждой аналиэируящей абсорбция обязательно проводили ковфравтацшо сыворотки со стандартной "панелью" - ваборсы эритроцитов известного антигенного состава от 20-30 животных разных пород, что

позволяет определить мончспецифичность полученной штисыворотки. - ... Наряду с иымунологической оценкой полученных моноспецифи-ческихсывороток-реагентов путем использования крови животных, у которых заранее был известен антигенный состав, мы проводили генетическое их изучение антисывороток путем семейного и статистического анализов. Этим анализом с высокой достоверностью можно (шло подтвердить ели отвергнуть гипотезу об аллельности выявленных антигенов. Применяя различные комбинации абсорберов из -сложных поливалентных сывороток, вши были получены несколько сот моноспецифических антисывороток, вштляших во многих нов -торностях 60 антигенов 13 генетических систем (табл.2). Высокая активность и чистота приготовленных нами антисывороток била подтверждена в 5 международных сравнительных испытаниях, которые проходили в 1964-74 гг,

Повышение эффективности аитителообразования при получении штисывороток к эритроцитарным антигенам

: Получениеыоносцеяифических сывороток-реагентов для иэуче-. ^ ния вритроцитарного полиморфизма животных-трудоемкий и длительный процесс. Одна из причин сложности - сравнительно низкий процент иыиунореактивных животных при иммунизации вритроцитарными антигенами. По нашим данным, средний процент иммунореактивных животных обычно составляет 53$, Исследования" других авторов, проведенные также на свиньях (Ф.П.Ворон,1969; Н.О.Сухова,1971; В.Г,Марусяк,1974 и другие), подтверждают, что не более поло -вины животных образуют иммунные антитела после иммунизации. Аналогичные данные бшш подучены при яэоймнуняэации эритроцитарны-ми'антигенами крупного рогатого скота (Ч.П.Меткеусас,I9S7; Х.А. Йыги>1969; Э.Г.Воробьев,1970,и др.). Причины ¿реактивности некоторых реципиентов, которым вводят антигенные факторы крови, недостаточно выяснены до настоящего времени (й.Saison , 1962} Bednlkoff , Dotte , Stona ,1962; B.ÀndroHtm .1963; B.Buach^ J. Thons ,1970 и др.). "

Реиммунизация.считается наиболее надежным средством усиления синтеза антител {и\'^св¥1955;В.Ап5гввёя,1&69; г.£?ашмг~ Jtt«j»*n ,1961; X^Hai^ j.Hojny »1962; Матоуиек,1964 и др.), Од-нако^часто и реиммунизалия не позволяет подучить необходимые антисыворотки. Поэтому требуется разработка методов введения антигена Одновременно о неспецифическим стикулятором-адьюван -

■' V • - 8 - ■. ' ; ;

. .-v Таблица^ -Стандартные специфические антисыворотки- ; " / .реагенты полученные разными методами иммунизации f . а

ш, га Реагент Система "1 групп КЕЮВИ Рабочий титр Реакция JEJS ' пи Реагент Система групп RDOBH Рабочий : ТИТр; ' ; •• * Реакция

■•vi- Ас' А4 1:10 .А'.. 27. ■ Нв H 1:10 , Co

2 Ар , *» КбО .; А,Со 26 Но и 1:2. Co

3 Ва • В 1:50 А 29 Hd; '' я 1:5 Co

4 Вв ь 1:10 А ■30 la ,1 1:10- Co

. 8: Са' с 1:10 н 31 IB n 1:5 V Co

-6 ;оа..- D 1:5. .; . А . 32 Ка к 1:10. A

7 ■ Db п 1(20 ! А. 33 KB 1:5 . A.H

-<'в Еа.-. 1:40 А 34 Ко 1:2 v" A

9 Ев- It ■ 1:50 ^ А ,35. Kd (* J " 1:4 , .. Co

10 Ed * ItIOO: А • ■36 Г* 1:2. CO '

II Ее 9 ' , .1:20 'А, 37. 1л If 1:30., A,Co'

12 Ег 1:15 А за ID' 1:40- А 'Л-

13 Ев . 1:10 А 39 lo 1:30... Co

14 Eh 1« . 1:10 А 40 Id 1:5 ■.A"''-'

15 El 1« 1:5- А .,. 41 Lf 1:4 — A;CO

16 Ej 1:10 А 42 Lg 1:10 A,Co

17 Ек • * 1:10 А 43 Lh H ItS A,Co

18 El п 1:15 А 44 , ¿1 1:10 Co

19 Eh н >' 1:5 . , А 45 1-1 11 1:5 .A...

20 Еа - м 1:6 А, 46 u 1:5 A,Co

21 Eo ' * ,'v 1:2 Со. 47 LI и 1:10 A, CO

22 Га р 1:50 А 48 Ma M 1:5 Co

23 Гв . ^ 1:50 49 Ho « - * '1:4 Co':

"24 0а .'■ о . 1:30 Со1 • 50 " M4 * 1:5 ' Co

25 Ов П ' 1:200 А,Со

26 На н 1:5 Со '

А - агглютинация,,Н - гемолиз, Со,- непрямая реакция по кумбсу

том различного происхождения, которые стимулиругт иммуногенез. , Применении адызвадтов для приготовления оыворотоя-реаген-тов при из оиымуниз аиди эритроцитарными антигенами до последнего времени не уделяла должного внимания. Исследования по этому вопросу' были начаты нами путем применения кристаллвиолета и адъю-ванта Фрейвда» А.С.Терентьева, С.П.Безенко (1970), которые под-' твердили, что, применяя адъювант Фрейяда при изоимкуиизацни свиней эритроцитарными антигенами, можно значительно увеличить число иымунореактивных животных и во много раз повысить титр иммунных сывороток. В дальнейшем мы изучали эффективность использования скипидара и кофеина натрио-чЗензойного.

~" Приготовление и применение адьювантов з наших опытах было следующее. ^рисуадлвиолет применяли в виде 1% - раствора в днс-*тиллвровавной воде по I мл (10 мг сухого вещества) на каждого . реципиента* Вводили его в смеси'с антигенсы З-4 раза внутривенно и внутримышечно'. Адъювант Фрейня'а приготовляли из минерального масла» вмульгатораи туберкулезных ыикобактерий (БЦЕ).Этот адышент» такай образом, представляет модификацию масляной смеси Раыона , \оторвй впервые применил ее в 1925 году для стимуляции-.;» иммуногенеза.-Мы готовили по прописи (на одного реципиента): эритроциты, отмытые 3-4 раза - 2,6 мл* вазелиновое масло - 5,0 мл, ланодЕН - 2,5 ил, БЦХ - 5 мг, пенициллин - 50 тыс,ел. Ва -зеливовое маслоо ЕЦК илансдашсм а теряли зова ли наводяноВ бане в течение 30 мин* при 200°С, Затем в эту'смесь, охлазденную до Ч40°С, добавляли антиген и тщательно перемешивали в фарфоровой ступка пестиком до гомогенной эмульсии, одновременно добавляли пенициллин. Перед введением реципиентам смесь подогревали в горячей* воде'до +40°С, Антиген с адъювантоы Фрейвда вводили толь-.-. ко однократно,' а последующее" иммунизации проводили без адьюваа-та." Мася^ терпентинное очишерное (скипидар) мы использовали в , качестве адьгаанта в смеси о вазелиновым маслом {30% скипидара и 70$ вазелинового масла)« учитывая его свойства как сильного раздражителя*. . , • -- - - - — . _...

• Смесь перед употреблением стерлизовали на тягучем пару в течение 30 мин.' при,100°С н вводили однократно в дозе ДО мл адыаванта я 10 мл 5С#-вой и^льсяиэритровдтов,' Добавление адь-ввшта и смепшв&нхе его с эритроцитамидо тонкой эмульсии проводили Перед введением реципиентам, |(офеид - бен^оат натрия использовали в "виде20£-ного раствора. Препарат из ампул вво -дили под кожу в дозе 1,5-2 мл 205? раствора 3-4 раза одновре — - - 10 -

• " ;-. ' " Таблица 3

'Иммунологическая реактивность реципиентавв зависимости от использования при вэоишушзацаи адызвантов

Группа Метода введения Число ■ Уетодн иммунизаций Число хивотнкх, образовавших анти -тела с титрои .1:4 я больше % реактивна :■■.■ кивот— них ■

антигена ровакных швотшх доза антигена (50% суспензия, ил) кратность введения адьлванта кратность введения антигена Интервал между имыуни-, залиями в цнях

,1 Внутривенное.и внутримышечное без адаивантов 32 10 4-5 6 17 53,12

II . С Внутримышечное и . внутривенное с крис- , ташшислетш 149 10 4 4-5 б ■ 94 '63,51

1 я Внутривенно' с| крис-тадлваолетом 118. 10 ■' 4 6 89 75,42

и- Внутримышечно с адью-вантсы Фрейнда, 14 10 I '4 е 12 85,71

7 . Внутривенное и внутри-ышечное с кофейной 31 10 3-4 4 5-6 . 29 93,54

Л Внутримышечное с 30% терпеитиннш маслом 105 10 I 4 » 6 28 93,33

Таблица 4

Дивацжха антителообраэ свания при ищуклзаши свиней эритроцвта1ш1аш антигенами в зависимости от ^ применения различных адызвантсш

■ ; Метод ■: иммунизации ' динамика титра антител

после 0 иммунизации после Ш ишукизашш после ХУ иммунизации

я П- п. ис*-^

Внутривенно и внутримышечно с кристаллвиолетои; ; 66 8,40+0,37 77 14,26+1,568 68 19,796+2,162

Внутривенно с 1фасталлвио-летсы 69 9,00+0,72 77. 16,24+0,772 55 27,22+5,297

Внутривенно с кофеином 27 11,33+1,178 27 26,59+4,047 .17. 36,23+3,92

Внутримышечно с аддавантси Фрейда 12 15,33+3,272 12 24,66+2,82 12 ■42,66+5,93

Внугриышечно о ЗС$ -терпентинным наслои 30 16,3311,138 30 24,77+2,46 30 , ' Г 43,66+5,94

менно «.введением антигена (но,пев смеси с ним). ■ „•.'.„..■,.Некоторые ..результаты,. полученные „при^изучении влияния вды>-вантов;на.иммуногенез Г'приведекы в таблицах 3 и 4. При сравне нии внутримышечной и внутривенной 1шмуккзацид с кристохявйолетсм и иммунизации без адъюванта, статистической обработкой разница по числу ишунореактивных животных была небольшая и не подтвердилась. При сравнении остальных груш,' где применяли адышанты» с контрольной первой получили статистически'высокодостоверное : различие (PsO,9S - O.SSS). Кроме того, при использовании адью-вантов титр шинных сывороток значительно увеличивался. Очень важно, что титр увеличивался как на сильные,тая и на слабые антигены, т.е. конкуренция между дани сглаживается (табл.4). Реципиенты вырабатывали антитела одновременно на слабые и- сильные антигены, что редко наблюдалось при обычных имгчунизадаях без адьювантов, Что касается здоровья животных-реципиентов при применении адъювантов, то мы не обнаружили заметных, отклонений в . период иммунизации и после нее...

Изучение полиморфизма по антигенам групп крови свиней разных пород, разводимые в Советском Союзе

Имкувагенетические исследования пород о помощью груш крови приобретают все большее значение," поскольку дам важную дополнительную информации для понимания их происхождения, гене — алогических связей и путей происхождения.

Больше различия по группам крови между породам свиней показали"А.Качиарек и др. (IS6I) на крупной бедой и злотниц-кой породах; £.Andresea (XS62) на геышшрекой, дюрокской и лаид-расской породах; к.Hala , J. Но jay (1964) и R.Braka (1964) на ландшвайнах; V.iovanovis and z.stcjnOviS (1965) на беркширской, ыангалицкой, черно-словенской; J.c*ro«(I966) на свиньях слове -кии и шведсксм ландрассе;ш£ата11«г(19б&) на крупной белой,чешской, корнвальской и ландрасской породах; j.Ho^ny * » J.Mitat (1968) на гемшоирской и дюрокской породах; С.П.Безенко м др. (1968) на 1фупной белой, ургуыской и брейтовской породах;Г.А. Толпеко (1969) на крупной белой и северокавказской породах; В.П.Павличенко и др. (1971) на крупной белой, брейтовскоа породах; Н.Dioklage (1969,1971) на немецкой улучшенной белой а ; миниатюрной геттингенсяой породах свиней; З.Д.Тйльман и др. (1974) на крупной белой и белорусской черно-пестрой и др.

^ В^Советском Союзе |обшрныс; исследования гру пй'нрови: многих' ■ , пород ^¿виней ' систематически ''проводятся с т196± *года лабораторией имкуногёнетики и гибридизации животных Института цитологии генетики' ''СО^Ж СССР ХВ,Н.Тихонов и др. 1582-74 гг.). В отих исследованиях при нашем участии были изучены не только особенности .'■'■ , полиморфизма по группам' крови 29 пород свиней," связанные с их '' ' филогенезом', но также внутрипородная 'популяционкая гдифференциа^'-ция зГ связи со структурой пород, генеалогическими и заводскими линиями.' " ■:'■"[■' " . *'

Для изучения полиморфизма и иыму н ог енетичёских особенностей ;. по группам крови пород свиней были проведены при нашем участии несколько експедшщй на племенные фермы совхозов и колхозов в ■ Украинскую ССР, Эстонскую ССР, Литовскую ССР, Грузинскую ССР,Алтайский и Краснодарский края, Московскую, Воронежскую, Омскую, Кемеровскую, Новосибирскую я ряд других областей,-а тамке и Ыор-довсяую АССР. По группам крови мы. исследовали свиней следующих пород: крупная белая, крупная белая Эстонии, лакомйская, ландрас-ская, украинская степная белая и рябая, муромская, эстонская беконная/ латвийская белая, сибирская северная, литовская белая, брейтовская, берширская, сеьерок&вкаэская," крупная черная,мир-- городская, уркумская, пьетренская, белая длинноухая, кемеровская ливенская, сибирская черно-пестрая, омская серая, польсноткитайская черная и рябая, мангадишая/ кахетинская и вьетнамская черная и пятнистая породы* Таким образом, изученные нами по группам крови породы в генеалогической отношении била очень разнообразны» Ишуногенетическое изучение проводили о помощью подученных нами ноноспецифических антисывороток (реагентов), о которых было сказано выше* Изучение"пород.проводили по встречаемости антигенов, генной концентрации и частоте генотипов по 10 генетически* системам:; А,ВГД,Б,Г,в,В,1,К,1« Вычисление иммуногенетических па~ раметров осуществляли по общепринятым методикам, при необходи -мости материал статйчески обрабатывался, достоверность разнэды _ определяли по углу У. (Н.А,Плохияскка;ХУ63). : ——

Изучение пород свиней по миогоаялельным генетическим "закрытым" системам групп ррови Е и ь

: Система Е является наиболее сложной из изученных в насто-"•■'ящее время систем групп крови* В настоящее время в этой ..системе .. : известно более 12 антигенов, которые контролируются соответствуй

вдиы числоьг аллелейт- наел еду юдажся- гвиде- определенных фоногрутш-сочетаний,'которые не'дают рекомбинаций. Начи:бшэ( получены и неоднократно воспроизводились онтисыворотки, которые выявляют следующие антигены этой системы: £а, Еэ,;ЬУ, Ее, Ег, 1«, Е1, Ек, Е1, Еп и Но. Благодаря тако;лу большому набору-реагентов,мы могли идентифицировать по этой системе в закрытой. популяции лапдрасов . экспериментального хозяйства СО АН СССР 8 аллелей-аегапо , ц»г1и, аввИ, авДи, , ь¿гки, и которые образова-

■ ли 23 генотипа. Проведенное исследование раз них породно системе Б выявило значительное ик^уногенетическое 'различие' между'ними. Например, антиген Ьа у-некоторых пород встречается очень редко или отсутствует.совсем. Наоборот, у других пород концентрация ' этого.антигена очень высокая - у берширской 56,а у Вьетнам-* ской — ЮОЙ, Для характеристики популяция очень-большое значение имеет концентрация аллелей, и по этому параметру наблюдается ■ весьма значительная доЦд.1.ер'енииашя, Большой интерес, в частности,

■ представляет концентрация.аллели ав£ в разных породах. Концент-

. рация этой аллели варьирует от 0,6188 у вьетнамской,черной породи до 0,0012 у литовскоЦ белой. Под'давлением определенных се — -;.-лекционных процессов аллель «ее из - популяций сибирской северной, украинской степной рябой и некоторых других пород полностью али-минировала..Большое различие наблюдается между породами также по разнообразию и частоте генотипов Е -'системы. ' - -Ч ■.1' :

■ - -.- Система ^ - слахная система, которая по последний данным состоит из: 6 аллелейГ Ьов!, ьал , айа^к ,айЩ , . Нами получены реагенты, выявляющие все известные антигены этой системы: ¿а-', ХЛ, ¿о , Ьа , ЬГ",:!,®' ЬЬ ► 11 , Х,к 1 11

Таким образом мы мшем точно установить все аллели и генотипы,1 Исследованные нами породы, значительно различаются друг от друга по частоте антигенов. Обнаружена исключительно, высокая встречаемость антигенаЬа у.вьетнамских черных свиней"- 10С$, кахетинских - 76,51$ и некоторых других. У свиней крупной белой породы частота'значительно (статистически достоверно) меньше -5,55^.-Следует отметить, что высокая частота антигена Ха характерна для многих пород, выведенных с участием аборигенных сви -ней и дикого кабана. Соответственно, значительное'разнообразие . наблюдается между породами и по концентрайш аллелей (табл.5), / Большая концентрация аллели Ьов1.обнаружена у свиней сибирской черно-пестрой породной группы - 0,9455, крупной белой - 0,9305,' ландрасской - 0,9055 и сибирской северной - 0,6569. С другой ' '' . ■ . * . . -15 - ■ .

концентрация амелей групп кроеи система I у некоторых пород синей

Породы Число животных .Частота аллелей.{доля)

Ъев! цп а^к* в<1М 41.

I Сибирская черяо-пестргя НО 0,£455. с 0,С40$ 0 0,013? 0 ;

2 Крупная белая 103 0,5305 0,0417 0,0165 0 . 0,0(&3 0 :

3 Давдрасская 505 0,£055 ■0,0105 0,0116 0,071:4 0 0 ^ :

4 Сибирская северная 659 0,65Ь2 0.02Е5 0,0182 0,0470 0,0354 0

5 Кемеровская ■ 78 0,5446 0,2814 О.ОЕбё 0,С£35 0,0104 0 ■

б Оиская серая - 167 0,4045 0,074$ 0,0216 0,2325 0,1527 0,113с '

7 Кангалицкая 154 0,4195 0.2&87 0,0574 0 0,0422 0,0422

■ 8 Кахетинская , 143 0,4127 0,1544 .0,2048 0,073(3 0,1208 0,0336 ■

9 Польско-китайская г

': ' - пятнистая 103 0,3737 0,2900 ' 0,2720 0,0243 0,0340 0

10 Вьетнамская черная '42 0,2449 0,0510 0,3367 0,0715 0,2857 . 0,0102:

II Польско-китайская черная . 200 0,1525 0,4075 0,2875 0,0^25 0,0150- 0,0050 :

стороны, аллель agí встречается у них очень редко.

Изучение пород свиней по цвууаллелънку, *' "закритш" скот снам групп крови В,р. F, С- п ^

Срстема.В, Первый антиген этой системы Ва обнаружен Андрей сеном в 1961 (E.Andraaen ¿IS6X) при изучении гемолитической болезни^ поросят. Однако по данным международник испытаний cimopo-V ток до 1970 г. только ношей лаборатории удалось воспроизвести реагент ,'енти- Ва. В настоящее время этот реагент получек в ОРТ и других'странах.■ Трудность его получения обусловлена тем, что почти все свиньи, разводимых у нас пород, имеют антиген Ва и, -следовательно, у них не мажет, синтезироваться соответствующее антитело. Только цутем иммунизации беркшярских свиней кровью ландрасов мы получили необходимую англсыворотку. Сыворотка, выявляющая : второй антиген этой системы Вв, получена нами в 1974 году изоиммушзацией лвндрасской свиньи №1158 эритроцитами свиньи J6 2028 сибирской черно-пестрой породы» После четырех кратной иш.ушзашш с 30$ иаслянш адъсвантом (который вводили дважды) кэ шести специально подобранны1: реципиентов одно живот-; ное Я 1158 выработало полные антитела, анти- Вв с титром xICO, ■■ В связи с тем, что реагент Вв удалось получить совсем недавно, нами приводятся данные только цо породам, - изученные в настоящее время,'

Все исследованные с этими антасывороткши породы: линд -расская, кемеровская, крупная'белая, вьетнамская черная,, сибирская северная и сибирская черно-пестрая - имела встречав - . мость антигена Ва равну» 100^, а второй антиген этой системы Вв был обнаружен только у одной свиньи из 110 животных сибир -схой черно-пестрой породной группы. У животных других исследованных пород, a Raicee у европейского дикого кабана антиген Ва нами до сах пор не обнаружен,' , ■ - -Л. ■:

Система D бала открыта несколько лет назад «контролируется двумя аллелями ДО ,В Х970 годуантисьшоротка, Db была получена нами путем специальной цзоиммуниааоией вьет- .: намских свиней М 3,5,9,4 и 53 эритроцитами;свиньи * 28 той же породы. В конце 1973 г. наш был получен реагент, выявля— ; иций я второй антиген этой системы da, также спеодальной иы-муниэацией чистопородных ландрасов и их гибридов второго по *- '

колешь с вьетнамской породой эритроцитами гибрида ft 161 с гомозиготным г он от к пои D а/а, 3 обоих случаях при иммунизации применяли кзсляный адыавант. - „'.* .. - ., V. . - ■

S св;:эл с тс«, что peor сити для антигенов" системы и' получены недэш:о,по это'.1, си стеке изучены нсшогке породы. Однако ыы . уже располагаем дшшцгш по антигенам.ва и уъ таких генеэлогаче-ски рвзнообразкшс пород, как вьетнамская черная,крупнач белая, сябирсксл ссгср;иш, кемеровская, а таиге н сибирская черно-пестрая породиoj¡ группа. Иодучйшше донные, показывают, что по-ввдп -иску для больейнства культурных пород с белой мастью характерна встречаемость ватегйна . Db 1СС;5. Б то яе вре&л у вьетнш.*ских черных ce;:hoü этот антиген ¡ü.ícct частоту только 55ДСЙ. Интересно, что енткген Юа до евх пор не иаГаен у лавдрасских, сибирских севсрних, сибирских черно-пеетркх, кемеровских, а тагеяе у европейских ликкх кабаков, хотя частота этого штигена^у свиней круп ной белой пород« 14,Б7#, а у вьетнамской - 100^.

Систег-з Г групп крови сеиисй открыта Е, Андресепом в 1557г. когда был обнаружен антиген Га. Реагент, выявляющий второй антиген этой crtcTei.-u 1ь,0ил получен ишн в ISG5 г. путем мш-уни-*зации свиньи ]£■ 320 бсртатрской породы эритроцитами,ландраса й 286. Независимо от наиих исследований сыворотку анти- Гв получил Ф,П.Ворон (I960) по аналогично!! методике, .используя в качестве реципиентов миргородских свиней. Следует отметить; что реагента анти- Га и Ев на:.*л неоднократно воспроизводились' с весьма высоким титрсм и при всех международных сравнительных испытаниях показывали полную специфичность. В таблице 6 приведены данные о концентрации аллелей групп "крови системы Р у свиней разных по -род. Из приведенных данных видно, что у большинства изученных пород свиней или совсем кет антигена Га, или частота его очень низкая. В то же время нами обнаружена очень высокая встречав -«ость антигена Га у вьетнамских, беркширских, кемеровских, миргородских, северокавказских и других пигментированных пород, что дает убедительное иодуногенетическое подтверждение историко-зо-отахнических данные о генеалогических связях стих пород. •

Система о , - одра ад первых описанных генетических систем г^упп крова у свиней ( fi.Andreeen > ¿-.Yrotaewski »1961). В Советском Союзе изучение этой системы было начато в 1962 г., ;когда были подучена первые отечественные реагенты для определения групп крови свиней аяти- 6а и анти- Св. Антисыворотки, четко реагирующие с высоким титрсм при непрямой пробе Кумбса~, не -

Таблица 6,:

Концентрация аллелей групп крови Гсисте.уы Г у свиней разных пород (в долях)

.. . - П о р оды Число ."Аллели

животнюс Ра . . , ; рв

Бермсирская "'.''.-' "'' 280 - 0,7926 ; 0,2074-,.

Вьетнамская черная ' ■.; ~ - . 49 0,7957 ' 0;2143

Польско-китайская черная : 200 ;; 0,6675 0,3325

Крупная черная !- .-"■> .200', 0,5528 0,4472

Кемеровская ■■Л. '403. 0,4002' 0,5918 -

Украинская степная рябая ~ '424 0,3269 "0,6731 ,

Омская серая ' Л ' .'. < - 167 0,2425 0,7575

Миргородская - ■ ' '.'< ■■"/'■ 163. 0,2206 0,77341

Северокавказская * ""' «■- V 159 0,2149 0,7851 У

: Лакомбская ■--' ■ 63 0,1533 ' 0,6067

Польско-китаВская пятнистая ;Ч ЮЗ 0,1602. . .0,8398 7

. Эстонская•беконная , * 97 • 0,1628 .. 0,8372 ":

Цакгалацкая V ' '.' . 154 0,1298 :0,8702

Брейтовскоя' V' - 44 0,0955 6,9045

Украинсяаяотепнаябелая - 342 0*0603 ; 0,9397

Ландрасская" : '■'-■ 905 0,1558*.' . 0,8442,'

Сибирская черно-пестрая - ; 301: 0,0686 0,9324 .

Крупная белая 1 - - Л 717 ■ , 0 .; .1,000 ".

Латвийская белая " ■ л . 48 , - 0 • 1,000 .

. Литовская белая ■ ;■■ ' 'V 219 V о :'.'-",' 1,000 -

'Крупная белая Эстонии.". ■ . . • ' 47; .'о -у 1,000 -

Ь{уромская о- 20 0 1,000

Сибирская северная ; V;- . 415 . '■."--' о 1,000

.Белая длинноухая • 47 , * .0 . 1,000 •

"Уржумская' ■"■ 'V 160 0 - 1,000 г-

Пьетренская ■'■ V- 30,- •,-.. 0 - ..'.1,000..,.'

, Кахетинская ^ * : 149 . ■ о" : •1,000

. однократно воспроизводились на.ти розличнши кетсдаш кежпород — noil в ьиутрипорсщноП ишупиэапии. Более того, нам впервые уда^ лось получить антксыпсротку • содержащую антитела Gs» реаггрушяе б npavoü peiiKÍyni агглютинации. ¡Дашам исследования частоты алле-деа и г «ют к not скотом G у 20 пород, представлена в тайл.7 по-каэивают, что породы значительно различаются кдауногенетически. . По системе G при назем участий' Сило проведено много работ» кото-рке показали игу три породную'1 дилере кци адав на генеалогические и заводские л: ни it в породах лаидрас,' крупная белая, сибирская се.. верная, украинские белая.и-рябая, а та.ске бсркширская, .Кроме" того, в некоторых' исследованиях» проведенных также при нашем участии, бил обнаружен коногетюй гетерозге и показано преимущество гстъроз кг от; 1ых си:ней по б,— системе в отнесении некоторых ре,-.продуктивных качеств» . .... -

* С-/стс^ц I изучена "в нашей стране относительно мало, по-ви-д::моку в связи с тем, что реагенты для выявления антигенов,1а и-1в получить трудно. Нем удалось получить ентисыворотку,. выявляющую антигены 1а и 1в» в нескольких.новторностях с рабочим титром до хХО. Наиболее активную сыворотку анти- 1а мы подучили^от ре -ци сиен та £ 4 £.72 внутри породи ой и з о;м-.у пи э аци е it.'ландра с ских свиней. Этот реагент» судя по международным сравнительным испытаниям 1072 и 1973'годов, обладает.высокое специфичностью. Полученные нами реагенты"1в работает удовлетворительно пока только /о эритроцитами животных определенных пород. Изучение:разных пород свиней по системе I такке показало значительную дифференциацию в отношения генной.концентрации и частоте генотипов по этой системе групп крови,

* • ; • ' 1 4 4 "

Изучение пород свиней по "открытым" генетическим • системам груда крови А,Н.К и другим

Система А, групп крови свиней была обнаружена более 50 лет назад» но до сих пор она остается "открытой"» т.е. не все аллели изучены. Антиген А свиней» как свидетельствует многие уссле--дователи, имеет определенное иммуногенеткческов сходство с ан — )тигенайи А у человека, J у крупного рогатого-скота, а у овец. , ■В настоящее время в А системе известны три штигена: Ар, Ас и Ао. Путем иммунизации свиней наш получены ре агентывыявляющие антигены Ар, Ас и Ао. Реагенты Ар и Ао неоднократно воспроизво-■ дались в лаборатории разными методами иммунизации и проверялись

^ ' ' .'-i-. j

. - 20 - ■■■■.:

■ Таблица 7

.Концентрация аллелей и,частота генотипов групп . крови системы <5 у свиней различных пород

И о р оды Число животных ' Аллеж (доля) - Генотипы {%) ■

, в3;, * С0 6а/а Св/в За/в

Вьетнамская черная 49 0,1735 0,8265 4,08. 26,53 69,39

тройская ■ 20 0,2500 0,7500 : 0 50,0 50,0

Крупная белая Эстонии "47,. 0,2553 0,7447 8,5 57,4 34,1

Крупная белая 609а 0,2553 0,7447. 16,51 46,53 36,96

Лакомбская - .'63 0,3333 0,6607 9,52 47,62 42,86

Ландрас :905. 0,2901 0,7099 .7,96 49,94 42,10

Украинская степная белая 342 0,3363 0,6637 11,3 45,3 43,4

Сибирская черно-пестрая 301 0,3406 0,6594 12,3 44,2 43,5

Эстонская беконная ~ -', - 96 0,3594 0,6406 19,79 47,92 32,29

Латвийская белая _ ■ 48 0,3646 0,6345 12,50 39,58 47,92

Сибирская северная 415' 0,3964 0,6036 12,5 33,3 54,2

Литовская белая ■ ■. 219 0,4100 0,5900 18,7 44,8 36,5

Ьрейтовская . 118 0,1692 0,0108 14,55 66,70 18,75

Беркашрская ' - 280 0,4122 0,5878 12,90 30,47 56,63

Северокавказская 158 0,4621 0,5379 17,09' 59,23 24,68

Крупная черная .. 20 0,5000 0,5000 20,0 20,0 60,0

Миргородская : 163 0,5031 0,4969 22,60 20,99 57,41

Украинская степная рябая 424 0,6092 0,3908 36,39 14,55 49.06

Ураумская 20 0,6250 0,3750 50,00 25,00 25,00

Оьетрекская 30 0,6333 0,3667 33,33 6,67 60

Омская серая 167 0,6617 0,3383 38,32 6,0 55,68

Белая длинноухая 47 0,6915 0,3085 53,19 14,89 31,91

Кемеровская ^ • 403' 0,7146 0,2854 52,1 9,2 38,7

Ливенская ■ 49 0,8571 0,1429 75,51 ■ 4,08 20,41

Польско-китайская черная 200 0,6775 0,1225 , . " '

Польско-китайская 6^54 ода 17, Л7

пятнистая 103 0,9029 0,0971

Иангалицкая. _' 154 0,9513 0,0467 91,56 0 :'в,44

Кахетинская 149 0,9531 0,0469 91,94 1 о 8,06

в кскдукзродшх срагнительньэс испытаниях (1Ь6&-1973 гг).-Антитела пнта- А в молом титре обнаруживаются и в нативной сыворот- . ке киоггл cDiine¡l, а при кккунизация А -негативные реципиенты ; почти всегда вырабатывают А -оититела на эритроциторный антиген А. Однако титр их, кок правило, небольшой. Реагент для определения антигена Ло, судя по междунеродным сравнительным*испытаниям IS73 г., веется только в Чехословакии и Японии. В IS74г. нем также удаюсь получить реагент онти- Ао из сыворотки свиньи Jt 3025 лгищрассKoii породы, которую вш^унизировали Ао позитивными эритроцитами хряка Jt 3 вьетнамской породы.! Этот реагент ре -ботает, как полный агглютинин с титром х5.

Ллл изучения распространения антигена А у пород и породных -групп-СЕКней, разводимых в СССР, ноки в период с IS62 по 197Эг, били проведены обширные исследования с помощью антисывороток енти- Ас к Ар. Очень редко встречаются животные, имеющие Ар, но не имеющие Ас и наоборот. Поэтому:мы при масовнх исследованиях' оба эти антигена определяли, как один антиген А (Аср).-

Снстема Н. как в настоящее время можно считать доказанным; вклзчавт не менее 6 антигенов: а, в, с, d, е и еще один (а возможно, более чем один) не изученный. При этш указанные антигены образуют не иенее 7 аллелей: а, в, с, аз, Bd, cd.Be. Неми получены реагенты, выявляющие антигены этой системы - На, Кв,• lid; Однако результаты международных сравнительных испытаний показывают, что возможно некоторые из полученных реагентов выявляют не один,*а два и более антигенов, сцепленных между собой. Надо сказать» что чистые реагенты анти- На, <-Нв и -41 d подучить весьма сложно. Дело в том, что при обычных иммунизацаях реци -шенты плохо вырабатывают антитела на эти антигены. Нем удалось получить вышеуказанные антисыворотки только после применения при иодунизацигмасляных адьввеытов. Антитела в полученных сыворотках и^ели сравнительно высокий титр (до хЗО) при добавле--юш антиглобулиповой сыворотки, т.е. реагировали только при постановке'пробы^кумбса.'Нами изучены некоторые породы по ветре-" чаемости антигенов, концентрации аллелей и частоте генотипов, системы Н. Однако необходима дальнейшая большая работа по изучению этой системы*

* Система' К была открыта в 1957 году Андресеном с помощью сывороток,'реагировавших топко ври постановке реакции агглютинации по Куыбсу. В 1963 гещу нами была найдена естественная свиная сыворотка, содержащая антитело Ra. В дальнейшем путем

Таблица 8

Концентрация аллелей групп крови система'К в некоторых породах свиней, рэзводимюс в СССР

. П о р од ы А - Число жкзот-. них Частота аллелей

- : Ка; . -К* ... ... ки. '

Миргородская ■ 163 0,0123 ч .0,6125 0,3752

Мангалицкая 154 . . 0,0437 0,9448: 0,0065■

Крупная белая Эстонии 47 0,0550 ' 0,6453 ■0,2992

Еергепирская 280 ' 0,1039 0,6563 0,2393

Омская серая; N V ■:167 . ■ 6,5833 0,2393

Сибирская северная 415 : 0,1200 . . 0,6215 0,3685.

Сибирская »ерно-пестрая 301 0,1209 0,5880,- 0,2911,

Кемеровская*' " 403';. 0,1534 0,1410 0,7056

Украинская-степная ■ У- ■■

ряоая- .... 424 0,1568 а, 5821 0,2611

Украинская степная ■ 1 ^

белая 342 - 0,1836 . 0,6540 " 0,1624

Латвийская белая 48 . 0,2036 0,6118 . 0,1846

Кахетинская ' ■ ■ ' 149". 1 0,2115" 0,6677 0,1208

Литовская - белая 219 ' 0,2391 0,6292° .0,1317

Лакомбская " ■ 63 0,2647 0,3928 ' 0,3425

" С еверокавказ екая ' " 158 0,2941 0;4403 '0,2656

Уржумская 20 . 0,2958 0,4882 * .0,2120

Ландрасская 723 0,2931 0,2769 0,4250

Крупная белая • 609 ■ 0,3279 0,4979 ! 0,17*2"

Пьетрекская "■"„'..' 30 0,3293 . СГ,3542 0,3165

. Эстонская беконная 96 0,3548 0,2794 0,3658

Крупная чернаЯ ф 20 0,4069. 0,4069 0,1362

Брейтовская ^ ' " 44 . 0*4226„ 0,4035 0,1739

Белая длинноухая 47 ■ 0,4890 0,2846 0,2264

"йурСкска»------ 20 0,6500 0,3500 Щ

Вьетнамская черная 49 ■ 0,6937 0,1439- 07157«

' ..'-У ."'О. V,

внутркпородпой ик-лунизации нш неоднократно удавалось пригото-; вить антискьоротку Ка с оолее высоким титром, обнаруживE.:omjüv' соответствующий антиген путем обычно!! реакции агглютинации. В настоящее врс^-л мы располагаем Пятью антисыворотками выявляю щики антигены К -скстеки: На, Кв, Кс, Kd и Ке. ' ,' ^ " ' .

Ь'.онос пеци^кче ски е сильные реагенты для выявления основных антигенов рассматриваемой системы - На, Кв и.Кд'получены в нашей лаборатория в п е сколь ких повтори остях .Надежно сть ; юс рабо-. ты подтверждена всеми-последними международными сравнительными испытаниями (П'6б-1Ь73 гг.).В сшое последнее время нами получены путем изоиш^унизации татае реагенты для антигенов*Кс и Ке,' которые работают, как полные агглютинины. Следует отметить, что наст реагенты анти- Ка и анти- Кв хорошо работают не только в, пробе Кумбса,но,и как полные агглютинины. Антисыворотка Кй полу-1 чена в двух вариантах: полного но относительно слабого агглютинина и неполного агглютинина, но реагирующего с высоким титром. Эти реагенты получены внутрипородноН изошиуШзацией ландрас -ских свиней. Антисыворотки Ка и Ка почти всегда имеют неболь -шой титр (до х15). Что касается получения сывороток анти- Kd," Кс и Ке, то они вырабатываются на : имеющихся у нас реципиентах весьма трудно. Только применяя различные ачьюванты,нам удалось после многих иммунизаций и реяк(.г/1шзаций. получить эти сыворотки, равные по концентрации аллелей Ка,в Кв в разных.породах, представленные в табл. 8, свидетельствуют, что система К может эффективно использоваться для дифференциации многих пород, разводимых в нашей стреле и за рубежом.

В настоящее время мы продолжаем работу по дальнейшее изучению систем групп крови свиней С, Ы, к , 0 небольшого числа вновь выявленных антигенов пока неизвестных систем. "

' \ . ..ВЫВОДЫ

; I. Путем использования иммуногенетических методов получе-' но большое число моноспецифических высокоактивных антисыворо -ток, которые идентифицируют, по данным международных сравни " -'.тельных испытаний, проведенных в¡I96&-74 гг., 50 эритроцитар- : них антигенов свиней. Подученные реагенты позволили изучить

-икмуногенетические особенности г полиморфизм-погруппом крови 'многих порсщ и породннх'групп'сииней,.разводга/.1д в-Советском V Союзе. ■ _ ■ _ ;;''■., '."* 'V' " "■.'

■ , 2. В процессе создания банка (набора) реагентов для изу -чения'груш крови свиней усоэершсиствовапы :д разработаны эффективные метода получения моносиецк^ических антясквороток:'генетический подбор доноров.и реципиентов'нэ скециатьицх гокоген — ных линий, использование для межпородных" туунизацлД пород.' -с 'С определенным генотипом, межвидовая гибридизация с использованием диких кабанов и пекарей, "применение для* повышения иммунологической "реактивности реципиентов алъювантов 'широкого спектра действия,-а также применение стромы эритроцитов и' гемолиза-. -тов в качестве антигена при иммунизации я абсорбции поливалентных сывороток и.'другие методические' и технические приемы.' . " ■.'3. Установлено, что наиболее эффективными методами иику низедки свилей для получения реагентов, учитывая процент ш.-. ьцгноре активных »квотных и высокий окончательный титр антител в - сыворотке крови реципиентов, являются, следувшде: а) внутршы - 1 печное введение антигена с ёдаивантом Орейнда,,.б) подкожное и ., внутримышечное введение антигена'с тегпентино-масляной смесью Л (30£ очищенного скипидара и 70Е£ вазе-цинового касла), в) симультанное внутривенное и внутримышечное введение антигена с кофеином я реиммунизация с интервалом 2-3 месяца, - - -

4. Показано,.что строма эритроцитов и гемолизат свиней не теряют антигенных свойств при длительной хранении при температуре -20°С (в нашем опыте втечеике 4 лет) и могут эффективно использоваться для иммунизации, реиииункзащш и "абсорбции.,,

2то открывает дополнительные возможности длительного и широкого использования крови животных о редко встречасщямиея генотипами (по системам А, Б, Р, 0 и I/).

5. Разработзд новый способ получения антиглобуливовой сы-; воротки цутем использования в качестве антигена .'смеси имцуннкх ^ свиных сывороток по вдедлескенной нами схем э; кммуниз арии.' Этот метод ¿"сравнении с другими методами менее трудоемок,' надежен' : и дает возможность при наличии'малого числа животных (краиш * { ков) "и в короткое время подучить сыворотки в титрах до х200&» -4000 и выше, практически без видовых антител. * .^'Ч''"

6. Изучено влияние низких температур на сохранность некоторых сывороток-реагентов. При этом выяснено, что глубокое за- . мораживание (-15-20-°С) сывороток надежно консервирует ищущие

сыворотки. Iipn• этта температурах в .сыворотках и плазме длитель-. .ное время сохраняются полные к неполные агглютинины и антигло-' 'булпны (по HaffiiiM огштш, в течение-М лет). ■ ' __

7. ¡'зучснпэ с псмсщь» полученыiac нами антиснвороток.по s эритроцит ар тэг антигеном с синей ландрасскоД,. кс;.;еровской,,си — бирекой северно:;,- îtpynucii Село:!, бергсжрекой, лакомбской, ук рапнскоК стегло;! бело;! и рябой пород и не аоторьк^ других обнаружило генетический пол;*.:.;opï изн '' из начл те льпу к> "межпородную ди;М>е-'ренцкзциэ по группам кроги А, К, î', 0, jI, K,;L и Н»,

^ ; 8. С пометаю получение'eamicUBopoToit,' выявляющих антигены свет«.: Е, Ï1, С и I," показана возможность .изучения Дилогене-эо современных пород от, европейского кабана и. свиней азиатского происхождения, а так»с нд^уноген с. т;:ч некого .анализа недавних породообразоьотельных процессов по призере у ttpanitcreix степных белоЦ и рябой.пород, си С;: рекой' се в ерно А породы свиней.

9. При iiuvyн оге нетическом исслодовалии внутрипородной структуры ландрЕсской, сибирской северной,крупной белой, берк— широкой, украинских стенных белой к рпбой пород впервые была установлена внутрппородная цопуляшониая ли ?» ерешш агал на уровне генеалогических,заводских и инбреднга линий. Установленная специфичность частот антигенов и концентрация аллелеЦ разных систем делает возмешпзл использование их в качество кммуиоге -нетических маркеров при селекции свиней. - . /

Предложения внедрения

1. Для интенсификации получения сывороток-реагентов еле- . рует использовать разработанные, в диссертации-генетические и иммунологическле методы,, повышающие &.^екта*шость иммунизации: гемолизатом эритроцитов и их'строки с редким генотипом, широкое использование при иммунизации адыовантов - адъювент Фрейн-да, 3CÇS терпентинное масло п косина натрио-бензойпого, подбор реципиентов и доноров из специальных гомогенных линий, а также использование в качестве доноров диких кабанов-и пекарей,-

2. Созданный банк специфических ентясывороток (реагенвов) может быть использован в качестве эталона при организации.про-мышленного.производства их в специальных цехах биофабрик.

3. Подученные данные , по иммуногенетическим характерней- 1 кам разных пород могут быть использованы, как генетические

;характеристики пород для их дальнейшего чистопородного совер-

г.- \ч -'26 — " ¿7 4'

шенствовашм, а,тс.кже подбора по сочетаемости; при гибридизации в промышленных свиноводческих комплексах.^ . " .T-^i-O

. -Список опубликованных работ по;техе диссертации" V,':;

• I.'Ишу ногенетпчесгаШпрог ноз .г ет е роэи с нойсочет аемостиу сви-' • : • ней, Рурлал "Сельскохозяйственная- биология" Ji Э,' IS66 •*•

-"V (в соавторстве).:' - ■:.""-■- 'Л-

2, Имьугногенетический анадиз*;разведения по лшшны. Цурнал "Еи-- вогноводство" ¡1 D. IcGS (в соавторстве). - ' ■ ■*

3, Ш.куногеиетический анализ меяпородаоК а;внутрипородной днф-- - ференциации у свиней. Нурнол "Генетика"-К 12, I9S6-(в

соавторстве),';:''. ■' . ' •'. ■■ -v -.

• 4. Имкуногенетические.особенности сибирских пород сшией и. ' ■

.. анализ". породообразовательного процессаi 1^рн£д "Еквотно-

водство"li>. 12,''2968 (в соавторстве),. ^ '".*'■ . '."' .

5, Imrnuno gene trie analyale of Iatrabreea titrueture oi Qenea- ''

logic alii Belated, v. Br о ей», Х1ТИ European. Conference

■'.'- oa aalmal' oiooa srnuvs biochemical polymorphiBB. ".-° . Warsaw, 1968 ( » соавторстве).- ч ; г

6.1Иэучение ш1утряпорс1дной .;линейной' структуры у украинских -" степной белой и рябой поред свиней. Генетическийiполи - . ' - морфизм групп крови и Щелков у сельскохозяйственных жи-, вотных (сб. научных работ), I960'{в соавторстве),

7, Эффективность иммуногенеза у свиней цри получении антисы -

. вороток на зритроцитарные антигены. Актуальные вопросы^., повышения продуктивности сельскохозяйственных• гшвотных." Изд-во "Урожай", Кинск, IS69. (в соавторстве). '.. : ' -'■

8, Иммуногенетическое изучение пород свиней ; разводимых в;Со- ^

ветском Союзе.. 5 книге -"Породы свиней*в СССР",; Иэд-воIу ^ "Колос", 1970 (в соавторстве),- , v:V- '

9, Иммуногенетическое совершенствование метода линейного раз-

_ ведения свиней, Журнал "Еивотноводство" й 12,1970 (в соавторстве). . . /'- -"Л;-.1 --v.1

10. йымуногенетические характеристики внутрипородной заводской, структуры украинских степных белой и рябой пород свиней* Журнал "Цитология'и.генетика" £ I, 1971 (в соавторстве).' IX, Йымуногенетические-особенности и межпородная дифференша ция украинских степных .белой и рябой пород свиней. Яур-■ чял "Цитология « генетика11 Я 6,1970 (в соавторстве). -■ Л.: - Л- 27 - :.-.'..'

12, Сравнительное изучение эМсктлености некоторые адъюван'тов

/- 'V л " АР1** лзок-'лууниэацкл' езиней эритроцитарнцми ангагенаии. ..... У- - " ыэтерколн II KOHjepeifUii» колодкх ученых*по'генетике и-/; > резведсии» сель схохоэяй с та оякьж к&в откых ;'т, Д, I,. Ле-:

' КИНГрЭД. .'■ V' '. ;

13, Цвтогелетическое исследование дальневосточные и.среднеази-'

атеккх дкккх ¡сабанов и доютклх свиней» Известия Сибир-v ского отделения All СССР. Выпуск 2 (в соавторстве)^_

14, Кмг.дгкогеиетяческке особенности; евлней омской серой породной

групгш. Журнал "Сибирский вестник с-х наук" К б, .1972 (В . соавторстве), ■ ... .

.15. Изучений полиморфизма групп крови дальневосточного",. среднеазиатского кабанов в связи с' происхождением домашних — ■•V ' . свиней.,Сб. научные трудов "Кормление и*разведение ; с-х : животных". Одесса, 1972 (в соавторстве),.-

16, Разработка методов.получения ^оноспсцй^итеских сывороток-

реагентов для ицяьлекия генетических маркеров у,свиней, : * Сб. научныхтрудов.Института'цитологии и. генетики. Новосибирск, IS74 (в соавторстве). : • . " ■ : / ; --- " -.' .}■■

17, Изменение юл/у ноге неткч еских характеристик лородашх в внут-- , рапородных популяций свиней ори племенной работе „Дурнал

"Генетика" Jt- 12, IS74 (в соавторстве). '

18, bw«mogeoetic studies of vrlld European, and.American ' . Bulformes la connection wtth the origin, of ecme antigone in Susserofa doattetloa. "Anliaal Blood Group sand

: Biochemical Genetics" Abstracts of papers read at the 13th European Conference oa Anlaal Blood Groups and Bi-ocbeEloal Polymorph!ran.Vienna,' 1972, 3, ( В- соавторстве).

19, study of genetic eye-teas controlling blood7 polynor-

phiemln. pige."AniaalBlcod Groins Bio chenical Ge net! с в". '-'Abstract aof papers read at the 13 th Bur ope an conferen-, ce of Аа1ша1 Blood Groups.aodBi о chemical Polymorphism. v ;, Vienna,1972, 3 (в соавторстве). *

20, Imomiogeneiicel «tudias. of Suropeao,.,Asian and American -f vtld. eulf orntea. Is counectlon: wl «й--phylogenesis of, do: ' - •estic .pigs.World congrees oa gBn«tice opplied_to 11-

.;;'■;■.' we gte c3r. production; Madrid, 197* (» соавторстве).

•_Прдпиоано к печати 15 апреля 1975 г. Формат бумаги 60x64/16. Тираж .150 ака. , ?ЯШ Ж ИР

г» Новосибирск, ротапринт ЙГД СО АН СССР