Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование строения слоя слизи и флокулярных структур желудочно-кишечного тракта

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Исследование строения слоя слизи и флокулярных структур желудочно-кишечного тракта"

санкт-петербургский государственный университет

На правах рукописи

денисова евгения александровна

исследование строения слоя слизи и флокулярных структур желудочно-кишечного тракта

03.00.02 - Биофизика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 1991

Л О-ВСглу ¿т

Работа выполнена в Институте теоретической и экспериментальной биофизики Академии наук СССР

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущее предприятие -

кандидат физико-математических наук Л.А.Железная; доктор биологических наук П.И.Лазарев

доктор биологических наук С.Н.Борхсениус

кандидат физико-математических наук М.Т.Коган

Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова

.7.

, .Защита диссертации состоится "' " _ 1992 г.

в (Ьчас. ОО мин. на заседании Специализированного совета Д 063.57.50 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук в Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, г.Санкт-Петербург, Университетская набережная 7/9, биолого-почвенный факультет

С диссертацией можно ■ ознакомиться в • библиотеке Санкт-Петербургского государственного университета

Автореферат разослан

1992 Г.

Ученый секретарь Специализированного совета, к.б.н.

З.И.Крутацхая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность текы. Слой слизи выстилает все внутренние тракты тела - пищеварительный, дыхательный, цервикальный - и является самым внешним барьером на пути транспорта веществ во внутреннюю среду организма. Известно, что он играет важную роль в защите нижележащих тканей от химических и механических повреждений (P.W.Kent, 1967; P.A.W.Edwards, 1978). В последнее вчемя было высказано предположение о возможном участии слоя слизи в транспорте питательных веществ из полости пищеварительного канала во внутреннюю среду организма (Ю.М.Гальперин, П.И.Лазарев, 1986). Однако долгие годы влияние слизистого слоя на процессы пищеварения и всасывания во внимание практически не принималось. В морфологических работах и при исследовании■ мембранного пищеварения от слизи стремились избавиться как от нежелательной примеси, влияющей на истинность получаемых результатов.

В последнее десятилетие интерес к изучению слоя слизистых наложений возрос в связи с осознанием его важней роли в процессах пищеварения. Биохимическими методами было установлено присутствие в слое слизи в активном состоянии большого числа ферментов -амилазы, липазы, сахаразы и других (М.В.Руденская, Т.З.Иванова, 1981 ; И.Е.Митин и др., 1983; И.Л.Медкова я др.,1983). В работах Ю.М.Гальперина и эго сотрудников (1981 - 1986) было показано, что все эти ферменты входят в состав хлопьевидного осадка (флокул) дуоденального сока, принимающих участие в процессах полостного пищеварения. Ясно, что для понимания механизмов функционирования -слизи и флокул необходима информация об их строении.

Одним из возможных подходов к исследованию структуры слизи и флокул является использ' зание метода малоугловой рентгеновской дифракции, так как в ISL'4 г. А.А.Вазиной, Л.А.Железной и П.И.Лазаревым было показано, что слой слизи дает дифракционную картину.

Цель работы состоит в выделении основного макромоле куЖрюг5~5юмпонента слоя слизи и флокул - гликопротеинов (ГП) - и их рентгенографическом исследовании.

Основные задачи исследования:

I. Выделение, очистка и идентификация ГП из пристеночного слоя слизи тонкой кишки крысы с использованием биохимических методов: гель-фильтрации, равновесного центрифугирования в градиенте плотности CsCi, электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) и специфических для ГП колориметрических реакций: кислотно-

шффового окрашивания и окрашивания красителем "Stains all".

2. Выделение, очистка и идентификация ГП из дуоденального сока собаки вышеперечисленными методами.

3. Исследование препаратов очищенных ГП методом малоугловой рентгеновской дифракции и установление их пространственной структуры.

4. Исследование методом малоугловой рентгеновской дифракции флокул дуоденального сока (ДС) с целью выявления их упорядоченности; изучение зависимости структурного состояния флокул от рН среды в пищеварительном канале.

5. Сравнительное исследование очищенных ГП слизи и осадков ДС различных млекопитающих.

Научная новизна. Выделены гликопротеины из слизи тонкого кишечника крысы. Препарат очищенных ГП впервые - исследован рентгенографически и получена дифракционная картина, свидетельствующая о наличии упорядоченности в исследуемом материале. На основе этих данных количественно охарактеризовано пространственное строение гликозилированных субъединиц молекул гликопротеинов.

Впервые выделены ГП из дуоденального сока собаки. Этот препарат также исследован рентгенографически; дифракционная картина от пего идентична полученной от гликопротеинов слизи.

Впервые показано, что препараты концентрированного ДО и его осадков по своей структуре сходны с очищенными ГП. Это позволяет рассматривать слой слизи и энтеральную среду как единую систему с общими принципами функционирования, в основе которой лежит гликопротеиновый матрик;.

Впервые проведены сравнительные исследования структуры ГО желудочно-кишечного тракта различных млекопитающих.

Впервые показана возможность использования метода малоугловой рентгеновской дифракции для изучения упорядоченности концентрированных растворов на основе ГП.

Практическая ценность. Результаты работы позволяют развить теоретические представления о молекулярной структуре ГП, образующих полимерный матрикс пристеночного слоя слизи и осадков ДС. Обнаруженная нами упорядоченность надмолекулярных структур на основе ГП позволяет лучше понять механизмы деградации и транспорта питательных веществ из энтеральной среды во внутреннюю

среду организма. Полученные данкке о структуре слоя слизи могут быть использованы для совершенствования методов повышения биологической доступности фармакологических препаратов и питательных сред. Данные, полученные при изучении структурирования осадков ДО в зависимости от рН энтеральной среда, позволяют судить о функциональном состоянии дуоденального сока.

Апробация работы. Результаты диссертации докладывались на конференции молодых ученых Пущинсяого научного центра (Пущино, 1985 г.), на сессии Секции кристаллохимии по проблеме структурных аспектов биологической активности (Пущино, 1986 г.), на IV и V' рабочих совещаниях "Жидкокристаллическое состояние в биологических системах и их моделях" (Пущино, 1984 и 1986 г.г.), на IV съезде физиологов Узбекистана (Ташкент, 1988 г.), на международном симпозиуме "Молекулярная организация биологических структур" (Москва, 1989 г.), на семинарах ИТЭБ АН СССР (Пущино, 1990 и 1991 г.г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, указанных в списке цитируемой литературы.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, четырех глав (обзора- литературы, экспериментальной части, излог:эния результатов и их обсуждения), выводов и списка цитируемой литературы (132 источников). Работа изложена на 122 страницах машинописного текста, включая 16 рисунков и 5 таблиц.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования являлись:

- очищенные ГП пристеночного слоя слизи кишечника крысы, кролика, цыпленка, а также дуоденального сока.собаки;

- концентрированные растворы ДС собаки и человека и их осадки. ,

Для получения препарата очищенных ГП слизи кусочки тонкого кишечника крысы на холоду разрезали вдоль и соскребали шпателем тонкий слой слизи. После растворения и гомогенизации слизи в экстрагирующем растворе центрифугированием отделяли супернатант от нерастворившейся части слизи. Очистку ГП от белков и низкомолекулярных компонент экстракта * проводили гель-фильтрацией супернатанта. Присутствие ГП во фракциях, полученных в результате гель-фильтрации, определяли, используя специфическое

прокрашивание по кислотно-шиффовой реакции, электрофорез в ПААГ и в агарозном геле с последующим прокрашиванием по кислотно-шиффовой реакции и красителем "Stains all".

Для полного отделения ГП от белков и нуклеиновых кислот фракции, содержащие ГП, объединяли и подвергали дальнейшей очистке равновесным центрифугированием в градиенте плотности СвС1. После центрифугирования содержимое пробирок фракционировали и полученные фракции тестировали на присутствие ГП с помощью кислотно-шиффового прокрашивания и электрофореза в ПААГ с последующим прокрашиванием геля красителем "Stains all". Фракции, содержащие ГП, объединяли и готовили из них образцы для рентгенографического исследования.

Для получения ГП из дуоденального сока были использованы те же способы выделения и очистки ГП, что и для слизи, но с небольшой модификацией.

Рентгенографическое исследование препаратов очищенных ГП, а также дуоденального сока и его осадков проводили с помощью малоугловой рентгеновской камеры. В качестве источника излучения использовали генератор рентгеновских лучей с вращающимся анодом GX-6 (Великобритания) с размером фокусного пятна 1x0Л мм2. Рентгенограммы получали с помощью тороидальной фокусирующей камеры (Великобритания) с расстоянием образец - пленка 158 мм и 73.8 мм; использовали излучение с длиной волны 1.54 А. Камера позволяла регистрировать межплоскостные расстояния от 100 до 4 А.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I. Выделение гликопротеиков из пристеночного слоя слизи кишечника и дуоденального сока.

Результаты гель-фильтрации супернатанта экстракта слизи приведены на рис.I. Из рисунка видно, что кривая поглощения на 280 нм имеет два пика. Положение первого пика совпадает со свободным объемом колонки и, следовательно, материал, содержащийся в этом пике, имеет молекулярный вес порядка нескольких миллионов. Второй пик совпадает с полным объемом колонки и, соответственно, в нем присутствуют компоненты, имеющие молекулярные веса порядка десятков тысяч и менее.

После окрашивания фракций, полученных в результате гель-фильтрации, по кислотно-пшфЕовой реакции наблюдается пик

. Ряс. I. Гвль-фяльтрацня супернатанта экстракта слизи на колонке с Сефарозои 4В. Объем фракций 6 мл. Поглощение Фракций измерено на длине еолны" 280 ем (•) п 555 нн поста окрашивания фракций по кислотно-пиффовой реакции (о)

поглощения на длине волны 555 юл, положение которого совпадает с положением первого пика на 280 нм (рис. I). Таким образом, высокая молекулярная масса (порядка 10а) материала первого пика и окрашивание его в ходе кислотно-шкффовой реакции свидетельствуют о том, что фракции первого пика содержат гликопротешы.

При электрофорезе фракций первого пака в 4 - 5 % ПААГ и окрашивании.красителем "Stains all" они дают тонкие голубые полосы, расположенные у дна колодца. Окрашивание того же препарата по кислотно-пиффовой реакции дает тонкие розовые полосы с аналогичным расположением у дна колодца. Окрашивание в голубой цвет красителем "Stains all" и в розовый по кислотно-шиффовой реакции характерно для гликопротеинов. Таким образом, данные электрофореза подтверждают данные гель-фильтрации о том, что фракции 1-го пика' содержат гликопротеины.

При прокрашивании 10$ ПААГ красителем Кумасси R-250 выявляются очень слабые белковые полосы, что свидетельствует о незначительной примеси белка во фракциях. Очистку гликопротеинов от нековалентно связанных белков и ДНК проводили путем равновесного центрифугирования в градиенте плотности csci с начальной плотностью 1.46 г/мл. Результаты центрифугирования. приведены на рис. 2. Из рисунка видно, что фракции, дающие положительную кислотно-шиффовую реакцию, имеют плотность, типичную для гликопротеинов (1.55 г/мл). При электрофорезе белковые полосы в этих фракциях не обнаруживаются (рис. 3).

1 23456739 Ю номер фракции

Рис. 2. Очистка гликопротеинов слизи равновесным центрифугированием в градиенте плотности СзС1. Объем фракций - I мл. Поглощение фракций измерено на длине волны 280 нм (•) и 555 нм после окрашивания фракцкй по кис-лотно-шиффовой реакции (п). Плотность СзС1 во фракциях (д) определена по показателю преломления фракций.

1.5

Рис. 3. Электрофорез фракций, полученных после

равновесного центрифугирования в градиенте плотности

CsCl. Окрашивание красителем "Stains all". Цифрами обозначены номера фракций (см. рис. 2).

Таким образом, материал, полученный из пристеночного слоя слизи тонкой кишки, действительно, по общепринятым биохимическим критериям, представляет собой гликопротеины. Выход очищенных гликопротеинов составляет в среднем 1+2 мг/мл слизи.

Выделение и очистка ГП дуоденального сока со стадии гель-фшльтрации супернатанта ДС проведена по описанной выше схеме получения очищенных ГП из слизи. Данные специфического колориметрического прокрашивания свидетельствуют о том, что материалом, выделенным из ДС, являются ГП. Результаты гель-фильтрации, равновесного центрифугирования в градиенте плотности С5С1 и электрофореза - в ПМГ свидетельствуют об идентичности ГП дуоденального сока и слизи: они обладают близким молекулярным весом, одинаковой плавучей плотностью и сходной, элактрофоретической подвижностью. Выход очищенных ГП составляет 0.2 о.З мг/мл дуоденального сока.

IX. Рентгенографическое исследование очищенных ГП слоя слизи тонкого кишечника крысы и ДС собаки

Препараты очищенных ГП, полученных из слизи и ДС, дают дифракционную картину, на которой наблюдается 9 рефлексов (таблица I; рис.4). Наличие дифракционной картины указывает на высокую упорядоченность исследуемого материала. Однако ГП в препарате не имеют преимущественной ориентации, так как рентгенограмма состоит из рефлексов в форме концентрических колец. Малая ширина (не более 0.2 мм) и четкость наблюдаемых рефлексов дают основание предполагать, что они обусловлены структурой самой молекулы, т.е. относятся к так называемым "структурным" рефлексам. Рефлексы же,

ТАБЛИЦА I. Мехплоскостные расстояния 1 (А) и интенсивность рефлексов, наблюдаемых на рентгенограммах от концентрированных растворов гликопротеинов слизи.

1 Интенсивность а Интенсивность

90.5 очень сильный 23. .4 сильный

80.4 сильный- 15. .6 очень сильный

65.0 слабый II. .6 слабый

46.5 очень сильный 9. ,3 средний

41.5 средний

Примечания: ошибка измерения 1 - 1$; интенсивность оценивалась визуально.

Рис. 4. Рентгенограмма от препарата очищенных глико-протеинов слизи: а) концентрированные очг^нные гликопро-теины; б) увеличенная центральная часть рентгенограммы а). Расстояние образец - пленка составляет 158.5 мм

обусловленные регулярной взаимной упаковкой молекул - "упаковочные" рефлексы, как правило, имеют сравнительно большую ширину.

Наблюдаемые рефлексы можно разделить на две серии. К первой относятся рефлексы с мекплоскостными расстояниями от 46.5 А до 9.4 1; межплоскостные расстояния и интенсивность этих рефлексов не изменяются на рентгенограммах от препаратов, полученных в разных экспериментах. Ко второй серии относятся рефлексы с межплоскостными расстояниями более 46.5 А; количество рефлексов в этой области, их межплоскостные расстояния и интенсивность значительно варьируют от препарата к препарату, что может быть

связано с различной концентрацией глинопротеинов в разных препаратах.

Рефлексам первой серии-(46.5 А, 23.3 А, 15.6 А, I1.6 А и 9.4 А) свойственна еще одна закономерность: все они являются последовательными порядками отражения от рефлекса 46.5 А (т.е. кратны ему). Это говорит о том, что они обусловлены одним и тем не структурным мотивом. Для того, "чтобы понять, каков этот мотив, необходимо обратиться .к имеющимся в литературе биохимическим данным.

Согласно данным литературы, молекула ГП состоит из нескольких гликозилированных субъединиц, соединенных дисульфидными связями - с центральным, негликозилированным пептидом. Каждая субъединица, в свои очередь, представлена белковой и карбогидратной частями. Последняя составляет 70Ж массы всей молекулы и состоит из карбогидратных цепочек, каздая из которых содержит до 19 Сахаров. Всего же на одну субъединицу приходится около 150 карбогидратных цепочек. Естественно предположить, что высокая . упорядоченность, регистрируемая рентгенографически,-обусловлена именно совокупностью регулярно расположенных на гликозилированном пептиде карбогидратных цепочек. Результаты биохимического анализа пептида приводят к выводу, что единственно возможной его конфигурацией является развернутая цепь длиной порядка 150 нм. Если это действительно так, то наиболее вероятным вариантом расположения карбогидратных цепочек вдоль пептида является спиралевидное, так как данный тип расположения наиболее распространен для рассеивающих единиц в полимерах. В этом случае при анализе рентгенограмм от ГП можно воспользоваться теорией дифракции на спиральных молекулах.

Согласно результатам проведенных вычислений, спираль, образуемая олигосахаридными цепочками вдоль гликозилированного пептида, имеет период 46.5 А; на этот период приходится 3 цепочки, расстояние мезкду которыми (в проекции на ось спирали) равно 15.6,1. Если с каждым гликозилированным пептидом связано около 150 цепочек, то примерная длина этого пептида должна составлять около 2000 А. Эта оценка хорошо согласуется ' с результатами расчетов длины гликозилированного пептида на основе биохимических данных (около 2600 А).

Таким образом, рентгенографические данные не только

подтверждают биохимические данные о строении гликозилированной суСъединицы, но и позволяют детализировать ей строение.

Как уже было указано выше, ГП, выделенные из ДС, по своим биохимическим характеристикам идентичны ГП слизи. В результате рентгенографического исследования от гликопротеинов дуоденального сока была получена дифракционная картина, свидетельствующая о наличии структурированности в образце. Межплоскостные расстояния и интенсивность рефлексов на дифракционных картинах от гликопротеинов слизи и дуоденального сока совпадают. Это позволяет заключить, что структуры гликозилированных частей ГП дуоденального сока и ГП слизи полностью идентичны.

От препарата концентрированного ДС была получена дифракционная картина, состоящая из 12 очень тонких и четких концентрических рефлексов (рис.5, табл. 2). Среди, них присутствует серия рефлексов, характерных для очищенных ГП. Однако помимо этой серии на рентгенограмме наблюдаются и новые, дополнительные рефлексы. В настоящей работе не ставилась задача

Рис. 5. Рентгенограмма, полученная от препаратов концентрированного дуоденального сока. Расстояние образец - пленка составляет 73.8 мм.

III. Рентгенографическое исследование концентрированных растворов и флокул ДС

ТАБЛИЦА 2. Мекплоскостные расстояния <1 (А) и интенсивность рефлексов, наблюдаемых на рентгенограммах от концентрированного дуоденального сока и его осадков.

N d Интенсивность N d Интенсивность

1 76.8 сильный 7 7.2 сильный

2 47.9 очень сильный 8 6.2 очень сильный

3 23.3 средний 9 5.2 слабый

4 15.7 сильный 10 5.0 средний

5 12.4 средний II 4.7 сильный

6 9.4 слабый 12 4.5' средний

Примечание: ошибка измерения d- 1%; интенсивность оценивалась визуально.

выявления природы этих рефлексов, поэтому мы не знаем достоверно, каким именно материалом они обусловлены. Однако весь материал дуоденального сока был исследован рентгенографически по фракциям и было обнаружено, что лишь в совокупности всех фракций может быть получена дифракционная картина, характерная для исходного ДС.

Кроме препарата концентрированного ДС, были исследованы рентгенографически препараты флокул трёх типов:

1) формирующихся спонтанно при длительном стоянии ДС с рН около 7.2 при 4°С;

2) формирующихся при смешивании ДС с желудочным содержимым in vivo;

3) формирующихся in vitro при закислении дуоденального сока (с рН 7.2) соляной кислотой до рН 4.0 + 3.5.

Показано, что спонтанно выпадающий при ' стоянии осадок ДС (N1) дает дифракционную картину, идентичную (в пределах ошибки эксперимента) полученной от концентрированного ДС. На ней наблюдаются те же 12 тонких и чётких рефлексов в виде концентрических колец и присутствует серия рефлексов, характерных для очищенных ГП. По-видимому, в состав осадка входят те же

компоненты, которыми обусловлена структурированность самого ДС.

Однако описанная рентгенограмма характерна только для осадков ДС с рК не ниже 7.0 (HI). Бри смешивании ДС с кислым желудочным содержимым на дифракционной картине флокул (Н2) исчезает центральная часть, включающая ' серию рефлексов, характерных для глшсопротеинов (рис. 6). Для того, -чтобы убедиться, что наблюдаемые изменения на рентгенограмме являются результатом действия закисленияа не протеолитических ферментов, нами был проведен опыт по получению осадка ДС закисленизм in vitro (N3). На рентгенограмме от осадка N3 тог;е отсутствуют центральные рефлексы, характерные для гликопротеиноз.

Таким образом, результаты модельных экспериментов позволяют сделать вывод, что исчезновение дифракционной картины от ГП обусловлено действием рН. Следовательно, зактасление ДС приводит к разрушению макромолекул ГП.

Обнаруженное явление может иметь двоякий функциональны« смысл. Во-первых, гликопротеины, входящие в состав ДС, могут выполнять защитную функцию: в силу своего- большого молекулярного веса и объемной разветвленной структуры они могут образовывать пространственную сеть, в которую включаются сравнительно небольшие молекулы пищеварительных ферментов. При этом возможна частичная инактивация ферментов, что предохраняет слизистую

Рис. 6. Дифракционная картина, полученная от препарата закисленных флокул. На рентгенограмме отсутствует центральная серия рефлексов, характерная для молекул глико-протеинов. Расстояние образец - пленка составляет 73.8 мм.

оболочку от самопереваривания. Во-вторых, закисление дуоденальной среды вследствие попадания пищи и желудочного сока в 12-перстную кишку совпадает с началом процесса пищеварения в кишечнике и разрушением гликопротеинов. Это приводит к увеличению границы раздела фаз флохулы - дуоденальный сок и, соответственно, площади реакционной поверхности, на которой идет ферментативный гидролиз пищевых субстратов.

17. Сравнительное' исследование гликопротеинов гелудочно-кишечного тракта различных эивотных

Нами было проведено сравнительное биохимическое и рентгенографическое исследование гликопротеинов из разных источников: дуоденального сока собаки, слоя слизи тонкого кишечника кролика, крысы и цыпленка. Креме того, были рентгенографически исследованы флокулы дуоденального сока человека и собаки.

Гликопротеины из всех упомянутых источников были выделены с использованием единого, описанного выше способа и обнаружили одинаковый молекулярный вес (= 2-1 о6 Да) и близкую плавучую плотность (1.55 г/мл) в растворе СвС1. На дифракционных картинах ГП различного происхождения наблюдалась серия уже описанных выше рефлексов в областях 70 А, 47.9 А, 23.5 А, 15.7 А и 12.5 А. Таким образом, гликопротеины из различных источников дают сходные дифракционные картины.

От препаратов флокул дуоденального сока человека и собаки были получены рентгенограммы, сходные в области больших периодов дифракции с рентгенограммами, характерными для очищенных ГП. Это сгидетельствует о сходстве дифрагирующего ' материала, содержащегося в обоих образцах. По-видимому, этим материалом являются ГП.

Таким образом, сходство дифракционных картин от флокул ДС различных животных и от основного структуроопределяющего компонента слизи и флокул - гликопротеинов - свидетельствует о сходстве принципиальной схемы строения гликопротеиновых молекул, входящих в состав пищеварительных соков и слизи, не только для одного какого-либо вида животных, но и для всего класса млекопитающих.

выводы

1. Впервые показано, что основной макромолекулярный компонент слизи - гликопротеины - дает четкую рентгенограмму с девятью рефлексами, три из которых ранее наблюдались на рентгенограмме от слизи. Это свидетельствует о высокой структурированности гликопротеинов и дает основание заключить, что упорядоченность слизи обусловлена присутствием в ней гликопротеинов.

2. На основе полученных рентгенографических данных и биохимических данных, содержащихся в литературе, предложена модель строения гликозилированной субъединицы молекулы гликопротеинов.

3. Впервые выделены гликопротеины из сока двенадцатиперстной кишки. По физико-химическим характеристикам они сходны с гликопротеинами слизи. Очищенные гликопротеины дуоденального сока дают дифракционную картину, идентичную уже полученной от гликопротеинов слизи. Следовательно, препараты очищенных гликопротеинов дуоденального сока и слизи обладают сходной упорядоченностью.

4-. Впервые установлено, что спонтанно формирующиеся осадки дуоденального сока (флокулы) обладают упорядоченностью, регистрируемой рентгенографически. Показано, что эта упорядоченность обусловлена, как и в случае слизи, гликопротеинами.

5. Впервые показано, что структура флокул дуоденального сока изменяется в зависимости от стадии пищеварения, и что одним из факторов, влияющих на неё, является кислотность энтеральной среды.

6. На .основании физико-химических и рентгенографических данных показано сходство принципиальной схемы строения гликопротеинов, входящих в состав слизи тонкого кишечника животных разных ющощ.

7. Обнаруженное сходство структуры гликопротеинов слизи и дуоденального сока позволяет рассматривать энтеральную среду и слой слизи как единую систему, строение которой определяется гликопротеиновым матриксом.

, Основные результаты диссертации опубликованы в работах:

1. Вазина А.А., Денисова Е.А., Железная Л.А., Лазарев п.И. Рентгенографическое исследование флокулярных структур эндогенной плотной фазы химуса // Докл. АН СССР. - 1984. - 278, N8. С.1240-1242.

2. Вазина А.А., Денисова Е.А., Железная Л.А., Лазарев П.И. Рентгенографическое исследование гликопротеинов, выделегаых из дуоденального сока собака // Докл. АН СССР. - 1985. - 281, N4. C.S75-978.

3. Eenisova Е.А., Lazarev P.I., Vazina k.A., Zheleznaya L.A. Intestinal mucus and. juice glycoproteins have a liquid crystalline structure // Studia Biophys. - 1985. - 103, N2.-?.117-124.

4. Вазина А.А., Денисова E.A., Железная Л.А., Лазарев П.И. Структура геля гликопротеинов слизи // Препринт. - Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР. - 1987. - 15 С.

5. Железная Л.А., 'Вазина А.А., Денисова Е.А., ~ Лазарев- П.И. Жидкие кристаллы и структура гликопротеинов желудочно-кишечного тракта // Межмолекулярное взаимодействие и конформации макромолекул. - Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР. - 1987. - С.140-143.

6. Гальперин Ю.М., Ксстюченко Л.Н., Железная Л.А., Денисова Е.А. Роль гликопротеинов в образовании флокулярных гелевых структур, иммобилизующих ферменты в естественных условиях пищеварения // Тез. докл. на IV съезде физиологов Узбекистана. -Ташкент. - 1988. - С.15.

7. Денисова Е.А., Железная Л.А., Лазарев П.И., Матыс Ю.В. Сравнительное биохимическое исследование гликопротеинов пищеварительного тракта различных животных // Тез. докл. на 17 съезде физиологов Узбекистана. - Ташкент. - 1988. - С.19.

8. Mintz R.J., Scopinov S.A., Yakovleva S.V., Denisova E.A., Vazina-A.A., Zheleznaya L.A., Lazarev P.I. Formation of oriented films by mucus glycoproteins on the faces of NaCl crystal // Studia Biophys. - 1989. - 133, N3.- P.221 - 2259. Zheleznaya L.A., "Vazina A.A. , Denisova E.A., lazarev P.I.

The structure of high molecular weight, heavily glycosylated mucus glycoprotein // Molecular Organization of Biological Structures // Proc. Intern. Symposium. - Moscow. - 1989. - P.226.

ю. Гальперин Ю.М., Костюченко Л.Н., Железная Л.А., Денисова Е.А. Роль гликопротеинов в образовании флокулярных гелевых структур естественного пищеварения // Физиол. журнал СССР. -1990. - N8. - С.1068 - 1071.

26.12.91 г. Зак. 3782Р Тир. 125 экз. Уч.-изд.л. 1.0 Отпечатано на ротапринте в ОНТИ ГМЦ