Иммунологические особенности репродуктивной функции свиноматок

Бурков, Игорь Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунологические особенности репродуктивной функции свиноматок
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Иммунологические особенности репродуктивной функции свиноматок"

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ .БИОХИМИИ И ПИТАНИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

На правах рукописи

ИММУНОФКЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ СВИНОМАТОК

03.00.13 - физиология человека и животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

БУРКОВ ИГОРЬ АЛЕКСАНДРОВИЧ

УДК 636.4.082.4:612.017.1/018

Боровск 1989

"Работа вш10лнека'в<5"В'сёсовзнои иаучно-и'осладовагельс-ком шютитуте физиологии,: биохимии:В цитаюш: сельскохозяйственных ЖИВОТНЫХ

■Официальные оппоненты:

- доктор биологических наук, профессор И.И.Соколовская

- доктор ветеринарных наук, профессор Н.Н.Михайлов

- доктор биологических наук В.Ф.Коваленко

Ведущее учреждение: Украинский НИИ физиологии и биохимии -сельскохозяйственных живота их

Завдта диссертации состоится " " . 1990 г.,

на заседании специализированного Совета Д.020.17.01 при Всесоюзной научно-исследовательском институте физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных

Адрес: 249010. г.Боровск, Калужской обл., ВНИИФБиП с.-х. животных

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат;разослан " " 1990 г

Ученый секретарь специализированного

совета '••' ' В.И.ДУДИЯ

ОБЩ ХАРАКТЕРИСТИКА PABOTil

Актуальность работы. Интенсификация свиноводства очень слоаный процесс, включающий как решение организационных вопросов, гак и вопросов содержания, рационального кормления, интенсивного воспроизводства. Комплексное решение этих вопросов позволит обеспечить выполнение задач, поставленных Продовольственной программой и ХХУ11 съездом КПСС.

Успешное решение вопросов, связанных с воспроизводством, неотделимо от достижений биологии воспроизведения ( Милованов В.К., Соколовская И. И., Квасницкий A.B., Эрнст JI.K., Иипилов B.C., Сысоев A.A., П:1ткянен И.Г., Михайлов H.H., Зверева Г.В., Прокофьев И.И., Кононов В.П., Клинский D-Д., Шавкун В.Е., Федоров Ю.Н., Коваленко В.Ф., Карпуть И.М. и др. ).

Прогресс в познании закономерностей воспроизводительной функции связан с открытием новых гормонально-активных соединеннй и взаимосвязей, а также роли иммунных факторов и иммунологических механизмов. Экспериментальный материал, которым располагает на сегодня иммунология репродукции, дает достаточно оснований для того, чгооы полагать, что иммунологические механизмы играет существенную роль на ьсех этапах осуществления воспроизводительной функции человека и животных: при созревании и продвижении гамет, оплодотворении, беременности,родах, лактации, развитии плода и адаптации новоровденных. Становится очевидным, что без знания иммунологических закономерностей, лежащих в основе воспроизводительной функции, невозможно создание современной теории репродукции, а, соответственно, и решение или дальнейшее совершенствование многих прикладных вопросов, связанных с этой проблемой. Большое значение могут приобрести иммунологические тести оценки иммунной реактивности племенных репродуктивных животных и молодняка при апробации систем содержания и кормления, а такг® в качестве контроля за адаптацией животных, фундаментальные закономорносги Ф.унк-

ционирования иммунной системы, вскрываемые сегодняшней иммунологией, касаются не только частного случая взаимодействия макро- и микроорганизмов, а представляют одну из форм и, возможно, наиболее главную, опознагания, комплементарности, кооперации макромолекул и клеток, регуляции их жизнедеятельности и памяти о их строении. Применительно к иммунологии репродукции наибольшее внимание исследователей привлекают вггтросы, связанные с изучением иммунологических аспектов беременности, являющейся уникальной естественной моделью парабиоза мехду двумя, генетически отличающимися организмами. Крайне мало изученными являются также вопросы, связанные с исследованием иммунных взаимосвязей между организмом самки при осеменении и сперматозоидами. Характер, протекающих в репродуктивном тракте самки иммунных процессов при осеменении, может влиять на переживаемость и депонирование сперматозоидов, их селекцию, процессы оплодотворения и сохранения зиготы, процессы плантации и плацейтации. Большое влияние на течение этих процессов может оказывать степень антигенного полиморфизма гамет. Глубокое изучение и осмысливание сущности, происходящих при осеменении иммунных реакций, позволит наметить новые пути к практическому решению многих.задач, связанных с повышением оплодотворяемости и плодовитости животных я совершенствованием селекционной работы.

"I.

Цель и задачи исследования. Основной целью работы било изучение гуморальных и клеточных иммунных факторов в репродуктивных и лимфо-идных органах, а также крови свиноматок в различные периоды.полового цикла и супоросности. Исходя из этой цели, были поставлены задачи: I. Получить комплексную оценку содержания инмунокомпегентных клеток в репродуктивных органах свиноматок и их иымунноП реактивности в связи с режимом осеменения, оплодотворяемостыо, супоросностыо и плодовитость».

2- Получить сравнительную характеристику по спермоантителам в крови, репродуктивных и лнмфоидных органах, а также иммуноглобулинов в кро-

ви и репродуктивных органах в различные периодц полового цикла и су-поросности.

3. Выявить особенности переживания сперматозоидов в различных отделах репродуктивного тракта свиноматки и дать количественную оценку фагоцитов в этих отделах.

Выявить некоторые механизмы регуляции иммунологических процессов у свиноматок в связи с воспроизводительной функцией. 5. Провести апробацию некоторых иммунологических подходов к регуляции пола потомства и иммуноселекции.

Научная новизна. Получены новые данные, характеризующие популяции иммунокомпетентных клеток в репродуктивных органах и иммунную реактивность свиноматок в связи с режимом осеменения, оплодогворяемос-тьп и плодовитостью, супоросносгью и временем отъема поросят.

Впервые апробированы иногие иммунологические методы и подходи для оценки репродуктивной функции свиноматок, благодаря чему получен материал, свидетельствующий о существовании различий в иммунной го-меостазе и иммунологической реактивности менду виргинными свинкьии и рожавшими свиноматками. Эти различия могут оказывать влияние на проявление репродуктивной функции. В результате комплексной с:л;ии-тельной оценки по ряду морфо-функциональных и иммунологических тестов различных отделов репродуктивного тракта свиноматок выявлен л, что утеротрубный участок репродуктивного тракта, выполняющий функцию депонирования сперматозоидов, по своим иммунологическим характеристикам отличается сг других участков матки.

Впервые проведен анализ экспериментальных данных по гуморальным и клеточно-опосредованным иммунным факторам, характеризующим иммунную реактивность свиноматок в связи с осеменением, с точки зрения физиологически обоснованной реактивности, способствующей осуществлению воспроизводительной функции в норме. Основой для такого анализа было положение, что условия иммунологического кояфорга складываются не для исех сперматозоидов, что в репродуктивном тракте свиноматки

осуществляется предзигогная иммунная селекция сперматозоидов, и, наиболее вероятно, что к этому причастны механизмы иммунной супрессии, иммунной толерантности и взаимодействия идиотип-антиидиотип.

Сравнительный анализ уровня гормонов и иммунологического профиля свиноматок в различные фазы цикла',"> в связи с осеменением и в период оупоросносги, а такие данные опытов, в которых моделировали уровень кортизола в организме, послужили основанием для заключения о причастности гипоталамо-гплофизарно-надпочечниковой системы и половых гормонов к регуляции иммунологических процессов у свиноматок в связи с воспроизводительной функцией. Такое комплексное исследование на свиноматках проведено впервые. В этих исследованиях также показано, что оплодотворявмооть и плодовитость свиноматок зависит как от степени инфильтрации эндометрия лимфоцитами в период овуляционной фазы, так и от величины функционального резерва надпочечников. Отмечено повышение функционального резерва надпочечников перед наступлением охоты.

Впервые: проведены сравнительные исследования клеточно-опосредо-ванной сенсибилизации к антигенам спермы хряка и антигенам плодов. Исследования с клетками, выделенными из ондометрия, лимфоузлов и крови проведены в основные критические периоды (период оплодотворения, период освобождения бластоцисты от блестящей оболочки и различные периоды супоросности);

- показана зависимость степени инфильтрации лимфоцитами эндометрия и количества переживающих в репродуктивных органах сперматозоидов от сочетания хряков при двукратном осеменении. Первое осеменение произведенное в начале охоты, влияет на избирательность оплодотворения и, или, на предзиготную селекцию сперматозоидов при двойном покрытии различными хряками через сутки после начала охоты;

- апробирована иммунизаци.1 самок млекопитающих спермой монога-метного самца птиц в целях влияния на соотношение полов в потомстве,

Теооеаическая и практическая значимость.Теоретическая значимость

работы состоит в том, что полученный экспериментальный материал свидетельствует о том, что нормальное осуществление воспроизводительной функции свиноматок связано с проявлением целого ряда иммунологических реакций и феноменов как в репродуктивных, так и в лимфоидных органах. Иммунологические механизмы играют существенную роль на всех этапах осуществления воспроизводительной функции в связи с чем вскрытые закономерности будут способствовать созданию современной теории репродукции сельскохозяйственных животных.

Иммунный гомеостаз репродуктивных органов в связи с осеменением определяется как составом и свойствами спермы, так и иммунной реактивностью свиноматки. Особый интерес представляют выявленные связи оплодотворяемости и плодовитости свиноматок как с состоянием популяции иммунокомпетентнах клеток в эндометрии, так и с функциональном состоянием надпочечников. По ряду иммунологических характеристик слизистую репродуктивного тракта свиноматок можно квалифицировать как локальную иммунную систему; показаны некоторые из сторон механизма регуляции этой системы. В перспективе результаты этих исследований зоногут решать вопросы, связанные с использованием иммуноактиваторов, шмунодепрессоров или специфических ангисыворогок о целью регулирования иммунных процессов и, тем самым, влияния но оплодотворяемость 1 плодовитость свиноматок. В результате исследования иммунологичес-:ой реактивности при различных физиологических состояниях, получены [анные, которые могут быть использованы в качестве нормативных для тределения нормального иммунологического профиля ремонтных свинок ; свиноматок, диагностики иммунодефицитов и возможной их коррекции.

Различия в иммунологическом профиле репродуктивных органов вир-инных свинок и рожавших свиноматок (как по критериям г/моральных ммунологических факторов, так и по характеристикам популяции клеток), е»ют основания для апробации в будущем дифференцированной технологии земенения для свинок и для свиноматок.

В результате иммунологической апробации режимов осеменения д»нн

- б -

рекомендации. При двукратном осеменении -первый раз в начальной период охоты и второй раз через сутки -в репродуктивных органах свиноматок складывается более благоприятная иммунологическая ситуация для осуществления репродуктивной функции, чеч при однократном осеменении. Для племенных хозяйств следует рекомендовать этот режим осеменения.

Получены данные, о возможном наличии у свиноматок иммунологического механизма опознавания степени генетического различия гамет хряка, и эффекторного механизма причастного х селекции сперматозоидов. Более глубокое познание этих механизмов позволит использовать их в це лях регулирования предэиготной селекции гамет и влияния на избирательность оплодотворения и способствовать направленной селекции животных.

О практической значимости отдельных положений работы свидетельствует также следующее:

-Исследование функционального резерва надпочечников в период фолликулярной .^"овуляторной фазы с прогностической целью -определения оптимальной оплодотворяемости и плодовитости свиноматок. -Использование молозива коров с целью создания пассивного иммунитета новороисценных поросят, в случаях их изолированного выращивания (случаи агалактии, гибели свиноматки, ветеринарные показания4. -Апробация иммунологических подходов к регуляции пола в потомстве мле копитающих. Иммунизация виргинных самок кролика моногаметной спермой птиц обусловливает эффект увеличения в потомстве самок, -Возможность использования данных по содержанию свободных аминокислот в эндометрии свиноматок в целях коррекции различных сред, используемых для работы с свиныш яйцеклетками, зиготами и пр.. -Методические приемы, примененные в расЗоте, могут быть использованы б экспериментальных и производственных разработках вопросов иммунология репродукции.

-Полученнне данные могут бот г рекомендованы для включения в спрэвоч-и-« и "чебние руководства по иммунологии и физиокогии с.х. животных.

Апг-ойацчя узости. Оснсгет'е результаты и положения диссертации

доложены и обсуждены: на '(-ой, б-ой и 7-ой Всесоюзных конференциях по физиологическим и биохимическим основам повышения продуктивности с.-х. «ивотных (Боровск, 1966, 1968, 1970); на Всесоюзных координационных советах по воспроизводству с.-х. животных (Дубровицы, I97S, 1983; Ри-1«, 1985); на 2-ом, 3-ем, 4-ом, 5-ом, б-ом, 7-ом Международных симпозиумах по иммунологии размножения (Варна, Болгария, 1971, 1975, 1978, 1902, 1985, 1988; на Заседаниях Московского физиологического общества (Ёоровск, 1974, 1976); на XII съезде Всесоюзного физиологического общества имени И.П.Павлова (Тбилиси, 1975); на У1П Международном конгрессе по воспроизведению и искусственному осеменении животных (Краков, 1976); на I Всесоюзном симпозиуме по современным проблемам иммунологии репродукции (Новосибирск, 1977); на Всесоюзном симпозиуме "Eto-охимия и животноводство" (Боровск, 1977); на втором Всесоюзном симпозиуме по иммунологии воспроизведения (Москва, I960); на Всесоюзной конференции по физиолого-биохимическим основеи высокой' продуктивности с.-х. животных (Боровск, 1980);

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Нормальное осуществление воспроизводительной функции свиноматок связано с проявлением целого ряда иммунологических реакций и феноменов как в репродуктивных, так и в лимфоидных органах.

2. В репродуктивных органах свиноматок функционирует регулируе-' мая популяция иммунокомпетентных клеток. Численность этих клеток и их функциональное состояние меняются в связи с периодом полового иикла, режимом осеменения, периодом оупоросности.

3. Слизистая репродуктивных органов функционирует у свиноматок как локальная иммунная система. Иммунный ответ этой системы на поступающую при осеменении сперму реализуется » зависимости от соотношения ккмунос.упрессивного (толерогенного) и имнуногенного действия спермы,

а также иммунной реактивности саной свиноматки.

<t. Угерптрубный участок репродуктивного трактз осемененных сви-

юматок, выполняющий функцию депонирования сперматозоидов, по иммунологическим характеристикам отличается от других участков матки.

5. Имеются различия в иммунологической реактивности, связанной с осуществление« воспроизводитедьной функции, между виргинными свинками и рожавшими свиноматками.

6. факторы, оказывающие регулирующее влияние на иммунную систему, оказывает влияние и на иммунный гомеостаз репродуктивных органов, а тем самым, и на оплодотворяемость и плодовитость свиноматок.

Структур и объем работы. Диссертация включает: введение, обзор литературы, характеристику собственного экспериментального материала (5 глав>, заключение, выводы, практические предложения и описок литературы, включающий 86О работ отечественных и иностранных авторов. 06-^ щий объем работы 450 страниц, 66 таблиц, 14 рисунков, схем, диаграмм, фотографий.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены в период с 1966 по 1933 гг. в условиях вивария БЯШЕиП с.-х. животных. Часть опытов проведены в свиноводческом комплексе "Кузнецовский" совхоза-комбината имени 50-летия СССР

Московской области. В опытах использованы клинически здоровые, нормально раэвитиые, с полноценными'признаками половой охоти свинки в воз-р.юте 9 -12 месяцев и свиноматки крупной белой породы и помесные (ла-н.драо х крупная белая); хряки пород крупной белой, ландрао и поыес-нне (ландрао х крупная белая). Всего использовано 711 свинок и свиноматок, 54 хряка, 1126 порооят, 289 взрослых кроликов и 2037 крольчат. Материалы для исследования репродуктивных и лиифоидных органов в большинстве опытов получали при убое жлвотных. В отдельных опытах пробы матки били получены методом биопсии. Кровь у поросят брали иглой из сердца или передней полой вены. В другие возрастные периоды кровь получали из передней полой венц или хвостовых сосудов; в отдельных исследованиях из сосудов катки.

Основная задача исследований -изучение чммунного гомеостаза репродуктивных органов свиноматок и его регуляции, определил? методы, которые были использованы в работе. При изучении клеточного иммунитета ■использованы методы количественного определения иммунокомпетентных клеток и клеток причастных к проявлению иммунных. реаг.ций, а такта методы определения функционального состояния этих клеток. При изучении гуморального иммунитета использованы методы обнаружения антител и иммуноглобулинов', а также реакции, свидетельствующие о наличии иммунных медиаторов. Исследованы гормоны и биологические вещества, оказывающие регулирующее влияние на иммунную систему. В работе использованы физиологические, иммунологические, гистологические, цитологические, радиоизотопные, игмунофлуоресцентнце, хроматографичеокне, иммуногенетичес-кие и другие методы. Для определения кортизола и половых гормонов -радиоиммунологические методы. Содержание II -оксикортикостероидов определяли флворометрическим методом• (Панков Ю.А., Усвагова И.Я., 1966). Реакцию подавления прилипания лейкоцитов (НИЛ) по методу КаНЫау 1974. Для изучения миграционной активности лейкоцитов использован тест торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). Функциональную активность лимфоцитов определяли с помощью реакции бласттрансформации, с использованием митогенстимулированной культуры лимфоцитов и' 3Н-тимидина . (Хоробрых В.Б. и др., 1983). Исследование Г- и В- лимфоцитов в крови - методом розеткообразования Ссгош1а1 et а1., 1972). Для определения локализации антител к антигенам спермы в тканях репродуктивных и лим-фондннх органов использовали иммунофлуорес'центний метод,- сэндвич метод, разработанный Соопз А.И. .Ьойис Е.Н. , Оо.шоПу Х.1А. (?955). Для определения иммуноглобулинов в тканях матки -непрямой метод люминкс-цирующих антител. Уровень иммуноглобулинов в плазме крови -по методу Ыапо1п1 с. еЪ а1. (1955), с использованием моноспецифических снти-снворогок. Реакцию преципитации по Оу .терлсни в микромодификации Гусева и Цветкова (1961). Для изучения синтеза спермоантигел тканями репродуктивных и лимфоидных органов, использован радиоиндикаторный

метод в сочетании с методом краткосрочных культур тканей (Рябых Б.П., Бурков И.А., 1973).

Групповые антигены крови кроликов определяли методом прямой агглютинации (Бурков П.А., 1972). Групповые изоантигены эритроцитов свиней в опытах по установлению отр^вства -реакцией гемолиза- (на базе лаборатории имнуногенетики свиней. ВШШЖ, Еезенко С.П., 197^). Количество естественных лимфоцитов -киллеров (мК -клетки) по зонам гемолиза в монослое эритроцитов, который получали с помощью поли-Ь-лизина (Лесков В.П., и др., 1980). Функциональную активность лейкоцитов -по НСТ-тесту (Шубин "¡.Г., Медкикова В.Г., 1978). Пересадки аллогенного кожного лоскута хряка производили по методу Каунат X (1979). Полученные результаты обработаны методами вариационной статистики с использованием критерия Стьвдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ I. Иммунекомпетентные клетки в репродуктивных органах и иммунная реактивность свиноматок в связи с осеменением и супоросностьв

1.1. Кммунокомпетентные клетки в репродуктивных органах свиноматок и их иммунная реактивность в связи с режимом осеменения.

Исследование огепени инфильтрации эндометрия не цнклировавших свинок (п » 22), цшслирующих не осемененных свинок в период охоты и свинск в период охоты при разных режимах естественного осеменения (п ^71), выявило определенные закономерности. К моменту полового созревания с наступлением охоты повышается степень инфильтрации эндометрия лимфоцитами. Усиливается степень инфильтрации лимфоцитами псдэпи-телиального слоя эндометрия при однократном осеменении как в начале охоты (Р<0,05), так и через сутки после начала охоты (Р<0,01); при двух- и трехкратных осеменениях усиление степени инфильтрации эндометрия лимфоцитами не происходит. Повторное поступление спермы в репродуктивные органы овинок снгибирует усиление степени инфильтрации эндометрия лимфоцитами. Выявлены огхаччя в количестве лимфоцитов в слизи-

П -

стой яйцеводных концов и других участков рогов матки. Влияние режима осеменения проявляется и на количество лимфоцитов слизистой утеро-трубного соединения. Помимо спс-рмы, на степень инфильтрации эндометрия лимфоцитами могут элиягь кортикостероицы. В наших исследованиях было выявлено влияние спаривания свинок (п ■ 23) на уровень в крови II -оксикортикостероидов, который у двукратно осемененнн;: свинок был относительно более высоким (Р<0,02). На степень инфильтрации эндометрия иммунокомпетентными клетками могут влиять многие факторы. Предположение о иммуносупрессивном действии спермы нами было сделано в 1976 году. Основанием для этого послужили опнты по изучению влияния режима осеменения на популяцию лимфоцитов и эозинофильных гранулоци-т тов в эндометрии и опыта по изучению интенсивности локального синтеза эндометрием свиноматок слермоангител комплементарных к антигенам стер-матозоидов хряка. 3 настоящее время в ряде стран на различных животных и человеке выполнены in vitro исследования супреосивного действия

компонентов спермы. В наших исследованиях плазма спермы хряка в раз-2 3k

ведениях I : 10; 20; 10 ; 10 ; Ю , при добавлении в среду содержащую лимфоциты, вызывала агглютинацию и адгезию клеток. При больших разведениях плазмы отмечена в методике розеткообразования тенденция к подавлению розеткообразования лимфоцитов. Способностью усиливать адгезивные свойства обладала не только плазма спермы, но и экстракт сперматозоидов и сами сперматозоиды при добавлении их'л» реагента у э смесь. В опытах in vitro выявлены также цитотоксические свойства плазмы спермы хряка по отношению к лимфоцитам (в концентрации I : 2 х ic£ и I : 2 х I03).

Можно полагать, что как и при беременности в отношении плода, так и при осеменении в отнесении сперматозоидов, иммунная супрессия достигается за счет ряда биологически активных веществ; при осеменении первичная индукция происходит зь счет компонентов спериь», осуществлявших пусковой механизм. Поступление антигенов спермы в катку ев«'

ней может индуцировать образование комплексов антиген-антитело. В основе иммуносупрессивного дейсгвия таких комплексов может лежать как связывание антигенов спермы, так и выключение функциональной активное ти соответствующих иммувокомпет^нтных клеток. Косвенным доказательством образования комплексов антиген-антитело кокет служить феномен повышения количества эозинофильных гранулоцитов в эндометрии свиноматок (п " 93) при определенных режимах осеменения. Количество этих клеток, осуществляющих фагоцитоз комплексов антиген-антитело, в матке свиней осемененных через сутки после начала охоты, было значительно больше (Р<0,01), чем у свиней осемененных в начале охоты. Так, у свинок осе мененных в начале охоты в подэпителиальном слое середины рога матки обнаруживали при исследовании через сутки после осеменения в среднем 1,5 + 0,8 клеток (в 10 полях зрения) и 5 + 2,4 клеток при исследовании через двое суток после осеменения. У свинок же осемененных через сутки после начала охоты и исследованных через 12 часов после осемене ния соответственно выявили 56 + 13 клеток и через сутки после осемене ния -72 + 21 клетки. Выявлены также различия в количестве эозинофиль них гранулоцитов в эндометрии при 2-, 3- кратных осеменениях и однократном (Р<0,05). Предположение о том, что большее количество этих клеток свидетельствует об относительно большем образовании комплексов антиген-антитело, подкрепляется также исследованиями в эндометрии количества ангителосодержащих клеток и интенсивностью синтеза спермо-антител. Исследования проведенные с покоцыо иммунофлуоресцентного метода (Бурков И.А., Никитина В.Н., 1976, 1977) показали, что в эндометрии свинок, при ре,кимах осеменения оопроводдающихся большим содержанием эозинофильних гранулоцитов, обнаруживаются относительно большее количество антителосодержащих клеток как по отношению .к антигенам сперматозоидов, так и по отношений к антигенам плазмы.

Анализ популяции иммунокомпегентных клеток в эндометрии свиноматок при разных режимах осепенеиия, дает основание полагать, что при

двукратном осеиеиении -первый раз в начале охоты и второй раз через сутки —в репродуктивных органах складывается более благоприятная для осуществления репродуктивной ¿ункции иммунологическая ситуация, чем при однократном осеменении. Да и сана природа не случайно отселекци-онировчга вариант, при котором самка приходит в охоту, примерно, за сутки до овуляиии и, следовательно, осеменяется самцами неоднократно.

В опытах на виргинных помесных свинках (п - ^7) выявлено достоверное влияние породного сочетания хряков при двукратном осеменении на степень инфильтрации лимфоцитами подэпителиального слоя эндометрия. Двукратное осеменение в начале охоты и через сутки одним и тем же хряком или генетически более близкими хряками обусловливает меньшую степень инфильтрации эндометрия иммуноконпетентныии клетками, чем при осеменении генетически более различными хряками, когда в ре продуктивные органы поступает сперма с большей степенью аллогенноеги. По-видимому, у самки имеется механизм опознавания степени генетического различия гамет самца и эффекторнкй механизм селекции сперматозоидов. Индуцирование оеменем различных форм иммунного реагирования обеспечивает , по-видимому, создание "иммунологического комфорта" только для части сперматозоидов. Большинство ке сперматозоидов элиминируются в результате фагоцитоза, а возможно, и в связи с цитотоксическим и ци~ толитическим действием определенных субпопуляций лимфоцитов. Зтим процессам может способствовать, а, возможно, и является непременным условием -наличие в секретах репродуктивного тра::та естественных или иммунных спермоантител. Возможно, что механизм иммуносупрессии или толерантности к отдельным сиврмвтозотон создается ценою элиминированных сперматозоидов и громадное количество последних в эякуляте является эволюционным приспособлением, предназначенным не только для обеспечения возможности выбора, на и для осуществления этого механизма. Без этих допущений тсрлет синсл наличие у самца сложнейвгего механизма, обесп-.чивач'дсго за счет рекомбинации в процессе сперматогенеза,

генегический полиморфизм сперматозоидов.

Влияние осеменения на в ';я!ваемость кожного трансплантата, изучали в опытах, в которых свинкам (п ■ 10) пересаживали в период охоты кусочки коки того хряка, которым свинка двавды осеменялась в начале охотц н через сутки. В этих исследованиях наблюдали более позднее, чей в контроле (не осемененные свинки) отторжение кожных аллотрансп-лантатов у осемененных свинок в стрессорной ситуации (при фиксировании свинок в узких станках) и у осемененных рожавших свиноматок. Помимо метода кожного трансплантата, позволяющего судить преимущественно о реакции на антигены гистосовместимости, был использован тест (РГО11), позволяющий судить о сенсибилизации осемененных свинок (пв 45) к растворимым антигенам сперматозоидов. При использовании этого теста в период охоты не было выявлено сенсибилизации лимфоцитов осемененных свинок к антигенам сперматозоидов хряка. Вместе с тем необходимо отметить повышение адгезивной способности лейкоцитов осемененных свиноматок при добавлении антигенов сперматозоидов и появление в крови свиноматок фактора, влияющего на адгезивные свойства лейкоцитов. Тестирование свиноматок по Я1ПЛ на 6 день супоросностл выявило у части животных сенсибилизацию как к антигенам сперматозоидов, так и,к антигенам плазмы спермы. При постановке РППЛ с лейкоцитами выделенными из эндометрия положительный результат был получен у половины амвотных (п»10); из регионарных лимфатических узлов -соответственно у животных (п в II) и из подчечастных лимфоузлов - 25*. Эти данные свидетельствуют о том, что иммунные реакции на антигены спермы в первую очередь затрагивают иммунокомпетентние клетки репродуктивных органов. Вместе с тем, реакция лейкоцитов, выделенных из лимфатических узлов, не являющихся рзгпонарними по отнодк.лию к репродуктивным органам, говорит о том, что антигены спермы могут проникать во внутреннюю среду организма сьнно::атки.

Пре '.смвляет интерес то обстоятельство, что процент животных, вн-

явленных на б день супоросности, как сенсибилизированные к антигенам спермы по гесту РПП1 (£0 - 50%) и процент животных, у которых осеменение обусловливает появление антител комплементарных к антигенам сперматозоидов, выявляемых методом преципитации (около см.ниже), представляют близкие величины.

Влияние осеменения на функциональные свойства лимфоцитов свиноматок выявлено в нашей лаборатории и при использовании теста -бласттран-с^ормации лимфоцитов в мигогенстимулированной культуре фСрюков O.A., 1986).

В тесте PTMJI было выявлено in vitro влияние компонентов сперма хряка на активность миграции лейкоцитов свиноматок (п 4 38). Торможение миграции выявлено как в опытах с плазмой спермы (Р< 0,001), так и в опытах с секретами добавочных половых желез хряка -Р<0,01 (секрета желез получали от оперированного хряка). Отмечена тенденция к ингибированип миграции при добавлении в инкубационную среду экстрактов эякулированных и эпидидимальных сперматозоидов. Сперма, по-видимому, содержит ряд веществ, являющихся для лейкоцитов функциональными модуляторами, в том числе и нейтрофилтаксические пептиды, хемотак-сичность которых in vivo связана с комплементом. Возможно, в ближайшее время после осеменения сперма оказывает тормозящее влияние на миграционную активность лейкоцитов; позднее, по мере разбавления и всасывания компонентов спермы, начинают проявлять свое действие и хемат-трактакты нейтродинов.

При исследовании спонтанной миграции лейкоцитов крбви, без воздействия индуцирующих факторов, были выявлены отличия между миграционной активностью лейкоцитов свиноматок (л в 19) в лютеальнув фазу цикла и фолликулярную (Р<0,05). Снижаясь в фолликулярную фазу цикла, миграционная активность лейкоцитов возрастает в овуляторнуп фазу (Р<0,05) и в перпод супоросности (?<0,05).

В овуляторну» фазу у неосемененных свинок (п « 13) наблюдается

по сравнении с лютеальной фазой повышение в крови количества vYК -клеток. Увеличение количества этих клеток, могущих реализовать кил-лингэффект без предварительной сенсибилизации, "сигнализирует" о повышении иммунного статуса. Представляет интерес вопрос о причастности натуральных киллеров к элиминации сперматозоидов при осеменении и к механизмам, связанным с эмбриональной смертностью. Не выявлено существенной разницы в количестве нК -клеток в крови не осемененных свинок (п ■ 18) в овуляторную фазу цикла (¡2077 + 246jVK -клеток на 10б лимфоцитов) и свинок через час @59б + 401) и б часов (2495 + + 193) после осеменения. Через 24 - 40 часов после осеменения наблюдается уменьшение (PC 0,001) в крови нК -клеток (238 + 91). К 5 - 6 дню после осеменения, т.е. к моменту освобождения зигот от блестящей оболочки количество клеток (39 +11) продолжает уменьшаться (Р<0,05). Количество нК '-клеток к 5 - 6 дно после осеменения уменьшается не i^j'bKo в^рови, но и в эндометрии,- с 1788 + 598 в период охоты до ЭСТ + 143 в период 5-7 дня (Р<0,05); и лимфатических узлах -регионарных соответственно с 1321 + 330 до 203 + 85 (Р<0,01), нерегио-наркых -о 1326 ± 319 до 184 + 73 (Р<0,01).

1.2. Иммунекомпетентные клетки в репродуктивных органах свиноматок и их иммунная реактивность в связи с оплодотворяемостью и плодовитостью

. Предпосылкой настоящих исследований послужила идея о том, что иммунная ситуация в репродуктивных органах самки при осеменении складывается в зависимости от соотношения имкуносупресоивного (а также толерогенного) и инмуногенного действия спермы (Бурков H.A., 1976-IS83). Некоторые формы иммунного бесплодия, наблюдаемые у,человека и животных, являются, по-видимому, результатом более выраженного проявления иммуногеняого эффекта спермы. Иммуносупрессивное (и толеро-генное") действие спермы обусловливает такое изменение активности различных субпопуляиий лимфоцитов, и в первую очередь лимфоцитов суп-рассоров, которое оказывает влияние на степень фагоцитоза епермаго-

зондов, их переживаемость, селекцию и, в целом, на направленность иммунных процессов в организме самки в момент оплодотворения и в первые дни беременности.

В целях сопоставления оплодотворяеиости и плодовитости с количеством лимфоцитов в эндометрии, на 22 свинках -аналогах через 16 -26 часов после осеменения произведена биопсия матки, а на 26 - 32 день убой и определение количества плодов. Исследования выявили обратную корреляцию между слепеньи инфильтрации эндометрия лимфоцитами и оп-лодотворяемостью и плодовитостью свиноматок (т ■ - 0,60; Р<0,01). Среднее количество лимфоцитов по плодовитым группам было ровно + 6,8, а по прохолостевшим свиноматкам 93 + 20,8 (Р< 0,05). Возможно, у прохолостевших свиноматок в период осеменения в мотке преобладали еубпопуляции эффекторных, хелперных и усиливающих клеток и ситуация складыволась по иммуногенному варианту, и наоборот, у плодовитых животных преобладали лимфоциты -супрессора, соотношение складывалось в сторону иммуносупрессианого (толерогенного) влияния антигенов спермы. Возможно, что влияние количества лимфоцитов а эндометрии на оп~ лодотворяемость и плодовитость, включает не только иммунологические механизма реализуемые в период оплодотворения, но и в более поздний период. С целью оценки иммунологической реактивности свиноматок (п »7) по отношение к антигенам плодов, проведено с использованием теста РППЛ исследование с лейкоцитами выделенными из периферической крови на 48 - 54 день супоросности. В качестве антигенов использовали антигены селезенки и печени двухмесячных плодов. У исследованных по ИТПЛ свиноматок определены при убое плодовитость и эмбриональная смертность. Сенсибилизация к антигенам плодов выявлена у животных о более низкой плодовитостью.

С иммунологической точки зрения большой интерес представляет модель беременности, при которой плоды являются полностью аллогеины-ми, т.е. степень их генетического и иммунологического отличия от приемной матери резко возрастает, что наблюдается при трансплантации

эмбрионов. Исследование свиноматок -реципиентов (п «3), которым хирургическим методом были пересажены эмбрионы в возрасте 5-6 дней, и свиноматок с обычной супоросностью, было проведено с использованием иммунологических тестов: РППЛ - для судцения о сенсибилизации тестируемых животных к антигенам печени плодов; НСГ -тест - для оценки функционального состояния лейкоцитов и тест определения количества И К -клеток. Наибольшие отличия получены по содержанию в крови естественных киллеров. Увеличение в крови к К -клеток у свиноматок -ре- . ципиентов начинается уже в период 55 - 66 дня супоросности (Р<0,01). В период 73 - 78 дня происходит нарастание количества этих клеток (Р<0,001). Однако в последующий период (91 - 94 дни) количество их значительно уменьшается (Р<0,01). Совсем иная картина в содержании КК -клеток наблюдается при обычной супоросности - начавшееся уже на'2-ые сутки йосле осеменения снижение их количества, к 5 - 6 дню п^одолкве^ существенно уменьшаться и в период 2х - 3х месячной супоросности ПК -клетки в крови уже не выявляются. Разница в количестве естественных киллеров у свиноматок -реципиентов и свиноматок при обычной супоросности свидетельствует о различиях в иммунологической реактивности. Полностью аллогенные плоды -трансплантаты, отличаясь значительно генетически, отличаются и иммунологически, что обусловливает большую нагрузку на иммунную систему самки -реципиента. Нагрузка эта оказывается посильной, видимо, потому, что иммунологические механизмы, обеспечивающие возможность беременности, от-£аботаны в процессе эволюции с большим запасом прочности. У свиноматок -реципиентов супороснооть закончилась нормальным опоросом (средняя плодовитость - 9 поросят), родились клинически здоровые поросята с нормальней массой тела. Констатируя положительный исход супоросности, котао полагать, Еиесте с тем, что в развитии полностью аллогенной беременности имеются некоторые особенности, затрагивающие в первуи очарздь, иммунологические механизмы.

1.3. Иммунокомпетентные клетки в репродуктивных органах свиноматок в связи с супоросностью и временем отъема поросят

Механизм, обеспечивающий возможность сохранения и развития плода, вклпчает многие факторы. Среди них существенное значение придается иммунным клегочно-опосредованным реакциям и факту наличия антител способных образовывать иммунные комплексы с антигенами в пограничных мать-плод зонах. Проявление клеточно-опосредованных реакций обусловлено как количеством в органе лимфоидных клеток и их типом,■ так и присутствием в тканях тучных клеток, эозинофильных гранулоци-" tob ¡Т других клеток, которые могут оказывать влияние на иммунологическую ситуацию в органе. Исследованиями начального периода супорос-ности 7 сутки после осеменения), 18 дня (периода, когда завершается имплантация трофобласта) и 26 дня (периода плацентации), выявлены различия в степени инфильтрации эндометрия лимфоцитами и эо-зинофильннми гранулоцитами. На 4 сутки наблюдается максимальная, по сравнению как с периодом охоты, так и последующими периодами супоросности (Р<0,02), степень инфильтрации лимфоцитами. Отмечена не только значительная диффузная и очаговая инфильтрация лимфоцитами подэпителиального слоя, но и очаговая инфильтрация желез, покровного эпителия, проникновение лимфоцитов не только в эпителиальный слой, но и за его предела. Лимфоциты нередко обнаруживаются в сообществе с плазматическими клетками, гистиоцитами, эозинофильными гранулоцитами и другими клетками. К 7 дно супоросности степень инфильтрации матки лимфоцитами уменьшается, к 18 днп это уменьшение еще более выражено (Р<0,001), а к 26 дню в слизистой встречаются лишь единичные клетки. Максимальное количество эозинофилов в матке приходится на 7 день супоросности (Р<0,001). Выраженная тдоффузная и очаговая ин-фильт,ация эозинофилв"" подэпителиального слоя после 7 дня, идет на уб.чль и к периоду пладентяиии последние почти исчезают из матки, остаются едингчнке клетки (Р<0,0Я\ ложно предположить, что пли-

минация эозинофилами комплексов антиген-антитело имеет значение не только в иммунологическом плане, но и для предупреждения возможного усиления сократительной активности матки и тем самым сохранения зигот и бластоцист. Эозинофилии репродуктивных органов предшествует повышенная продукция эоэинофильных миелоцитов в костном мозге. Об этом, в частности свидетельствует явная эозин <х$илия крови (п в 20; Р<0,001), которая как бы опережает эозинофилии матки.

У свиноматок, в связи с внутриматочным типом рсеменения,особый интерес представляют исследования степени инфильтрации эндометрия тучными клетками,при дегрануляции которых высвобождается ряд биологически активных веществ. В случае адсорбции на поверхности тучных клеток спермоантител, антигены спермы могут индуцировать их дегра-нуляцию и, благодаря этому, влиять на вазоконстрикцив, проницаемость капилляров, концентрацию в тканях мукопротеинов, образование микротромбов, и самым на посгувление антигенов спермы из матки, в кровь и лимфу. Исследованиями эндометрия (п ■ 90) виргинных свинок (в первые 7 суток цикла), свиноматок при первой 01.2.3,4,7,18,26 дни) и повторной супоросности. (1,2,4,7,18 дни) и рожавших не осемененных овиноматок в период охоты (X - 4 дни), выявлены значительные различия в содержании тучных клеток. В эндометрии большинства виргинных свинок и свиноматок до 26 дня первой супоросности, тучные клетки не выявляются, лишь у отдельных животных (около 2С$) встречаются единичные клетки. В отличие от этого у рожавших свиноматок в период охоты и при повторных супоросностях эндометрий инфильтрирован тучными клетками - от единичных клеток до очень сильной степени (цо 24 клеток в поле зрения). Наибольшее количество клеток выявляв ся в собственно слизистой середины рогоэ матки; в яйцеводном конце рога их относительно меньше (Р<0,01). На 4 и 7 сутки при повторных супоросностях в эндометрии встречается много дегранулированных тучных клеток. Относительно высокая степень инфильтрации тучными.клетками

эндометрия рожавших свиноматок в первые дни цикла и супоросности обусловливает готовность тканей матки к локальному стрессу. Антигены спермы или их комплексы с антителами могут явиться в матке рожавших свиней местными стрессорами, а дегранудяция или активация тучных клеток и освобождение гистамина и других биологически активных веществ, будут способствовать инактивироваки» антигенов или их комплексов. Выявлено достоверное увеличение содержания воды в эндометрии (Р<0,001) у рожавших свиней в первые сутки после осеменения. Причиной этого может быть повышение концентрации гистамина в тканях матки и увеличение проницаемости капилляров для жидкой части крови и для клеток, осуществлявших фагоцитоз. Таким образом, значительно большая плотность популяции тучных клеток в эндометрии рожавших свиноматок обусловливает не только своеобразие тканевого гомеостаза, но и влияет на количество и функции других клеток.

Отличия эндометрия при первой и повторных супоросностях были обнаружены (Бурков, Никитина, 1975) при определении количества клеток, продуцирующих антитела к антигенам спермы хряка. Сопоставление количества этих клеток в регионарных лимфатических узлах с количеством их в селезенке и матке, дает основание предполагать, что основным продуцентом спермоантител, обнаруживаемых в крови, являются лимфатические узлы. Количество клеток, содержащих антитела как к антигенам сперматозоидов, так и к антигенам плазма спермы, во все исследованные периоды (4,7,13,26 дни супоросности) в тканях лимфатических узлов достоверно превышает количество аналогичных клеток в тканях репродуктивных органов и селезенке. Колебания количества клеток в лимфатических узлах и селезенке менее выражены, чем в репродуктивных органах, а при второй супоросности практически отсутствуют. В репродуктивных органах количество ангителопродуцирующих клеток, достигнув максимума к седьмому дна супоросности, в последующий период снижается и к 26 дни достигает минимума (Р<0,05;. Уровень же антителообразования в лимфоидных органах к периоду.имплантации и

плацентации эмбрионов остается относительно высоким. Можно полагать, что антителогенез в лимфоидных органах, индуцированный осеменением и проникновением антигенов спермы во внутреннею среду организма свиноматки, в последующем поддерживается антигенами плода.

Динамика ангителопродуцирувщих клеток в репродуктивных и лимфоидных органах свидетельствует о некоторых особенностях локального и системного иммунитета. По-видимому, в начальный период супоросности, в период освобождения блаетоцисты от оболочки и "свободного" существования эмбриона, превалирует протективная, экранирующая от разрушавшего действия лимфоцитов функция антител, синтезированных как локально, так и в лимфоидных органах. В более поздний период возрастает "иммунологическая зависимость" репродуктивных органов от лимфоидных.<

Для оценки иммунологической реактивности свиноматок в разные сроки пооле опороса проведено исследование (Бурков, Трубицина) количества иммунекомпетентных клеток в эндометрии (п • 16) при разных сроках отъема поросят (26 и 60 дней). Пришедшие через 4 - 6 дней пооле отъема в охоту осемененные свиноматки, были исследованы в конце вторых суток после начала охоты. Выявлено относительно большее количество лимфоцитов в подэпителиальном слое (Р<0,С2) и собственно слизистой (Р< 0,001) яйцеводних концов и собственно слизистой середины рогов матки (Р<0,01) свиноматок, при отъеме в 26 дневном возрасте. Возможно,эти отличия обусловлены различной степенью проница-емооти эндометрия для антигенов спермы и различной иммунологической реактивностью свиноматок. Исходя из положения о том, что в период овуляторноЯ фазы меньшая степень инфильтрации эндометрия лимфоцитами способствует лучшей оплодотворяемости, мо;;но допустить, что иммунологическая ситуация в эндометрии свиноматок при отъеме поросят в сО-дневном возрасте складывается более благоприятно, чем у свиноматок при отъеме в 26 дней.

2. Антигены спермы, сперноантитела, иммуноглобулины и репродуктивная функция свиноматок ■

2.1. Антигены спермы. Количество сперматозоидов и нейтрофилов в репродуктивных органах свиноматок в связи о режимом осеменения и иммунной реактивностью

Сперматозоиды и семенная жидкость содержат большое количество компонентов различного химического отроения, выполняющих различные функции, и потенциально могущих выступать в роли.антигенов в случае резорбции в репродуктивных органах самки. Крайне, мало извеогно о том, какие антигены и при каких условиях вызывают иммунную реакцию самки, т.е. являются для нее иммуногенными, какие обусловливают голероген-ный ответ и, таким образом, являются толерогенами и, наконец, какие антигены и при каких условиях могу« выступать в роли аллергенов или гаптенов.1 Возможна и, по-видимому, часто имеет место элиминация в организме самки многих антигенных субстанций спермы без включения иммунных механизмов. Начальные подходы к выявлению количественной динамики антигенов спермы, так или иначе связаны с оценкой количества сперматозоидов и плазмы спермы, в репродуктивных органах самки в период охоты при различных режимах осеменения. Данные по переживаемо с ти сперматозоидов у свиноматок довольно противоречивы, единичны исследования о влиянии на этот процесс режимов осеменения, отсутствуют сведения об этом в сравнительном аспекте - у виргинных и рожавших животных.

В исследованиях 05урков, Трубицина) показана динамика количества сперматозоидов в различных участках репродуктивного тракта в отдельные периоды охота в. связи с режимом осеменения и иммунологической реактивностью свиноматок. Изменения количества сперматозоидов расцениваются, как показатель количественных особенностей поступления антигенов спермы в организм свиноматки. Количество сперматозоидов в яйцеводах свиноматок через час после осеменения остается высоким как в период 12 - 18 часов охоты, так и в период - 43 часа.

Тенденция к возрастанию количества сперматозоидов в яйцеводах может быть отмечена только в период овуляции. Через б часов после осеменения количество сперматозоидов в яйцеводах значительно уменьшается (Р<0,05). Жидкость в матке к этому периоду уже не обнаруживается, что может свидетельствовать о всасывании компонентов плазмы. В последующие часы количество сперматозоидов в яйцеводах сохраняется на относительно постоянном уровне. Вместе с тем, в утерогрубном соединении —в депо сперматозоидов, количество их через 24 часа уменьшается на порядок (Р<0,01), в сре деем за час на 2-10"\ В первые б часов значительным резервом сперматозоидов, помимо утерогрубного соединения, могут быть верхние участки рогов матки. К 12 часу, а тем более к 24 часу после осеменения, количество сперматозоидов в этих участках матки остается небольшим; однако и на 48 час они еще обнаруживаются.

Значительное количество сперматозоидов поступающих в яйцеводы после осеменения, проведенного в различные периоды охоты в том числе и в начальный период, задолго до овуляции, создает возможность проникновения сперматозоидов в перитонеальную полость и их резорбцию с участием макрофагов.. Количественные особенности поступления антигенов спермы,- в начальный период после осеменения значительные количества антигенов, как сперматозоидов, гак и плазмы, а в последующий период постепенное их убывание,- могут способствовать проявлению толерогенного действия спермы на организм свиноматки.

На количестве'передававших сперматозоидов сказывается сочетание хряков при покрытии свиноматок. Двукратное осеменение одним и тем же хряком или генетически более близкими хряками обуоловлиааев большее содержание переживающих' сперматозоидов, чем при осеменении более различными хряками. Аналогичные варианты сочетания хряков были использованы при оценке степени инфильтрации эндометрия лимфоцитами. Это позволило выявить обратную корреляции иенду количеством ■

сперматозоидов и лимфоцитов. Участие лимфоцитов в регуляции численности сперматозоидов в половых органах самки может опосредоваться, благодаря выделяемый ими медиаторам, через нейтрофилы. Прямое цпто-гоксическое и циголигическое действие могуг оказывать и лимфоциты -киллеры. Этим процессам может способствовать, а возможно, и является непременным условием, наличие в секретах репродуктивного тракта естественных или иммунных спермоантител. Еслй допустить, что естественные спермоантитела появляются в организме санки в результате аутоиммунных процессов и к регуляции их возникновения причастен механизм идиотип-антиидиотипических взаимодействий, тогда естественные

спермоантитела при осеменении будут способствовать элиминированию более близких самке по антигенному спектру сперматозоидов, а оставаться и участвовать в оплодотворении будут сперматозоиды генетически более отличные, с большей степенью аллогенносги.

На первкиваемость сперматозоидов влияют различия в иммунном гомеостазе между виргинными и рожавшими свиноматками; у рожавших свиноматок через час, б часов и 24 часа после осеменения в яйцеводах содержится большее количество сперматозоидов, чем у впргинных свинок. Степень инфильтрации нейгрофплвми подэпителиального слоя эндометрия рогов матки 'в связи с осеменением у рожавших свиноматок меньшая, нежели у вкргинных. Имеются особенности в степени инфильтрации нейтрофилами различных отделов матки. Из общего количества исследованных в разных режимах осеменения свиноматок, только у 3 из 98, в яйцеводнон конце рога выявлена большая плотность нейтрофилов. Во всех остальных случаях под эпителием середины рогов обнаруживалось, больше нейтрофилов (в среднем 558 на мм**), чем под эпителием яйцеводных концов рогов натки (в среднем 183 на нм^, Р<0,001). По-видимому, в этом отделе фагоцитоз сперматозоидов происходит в меньшем объеме, благодаря чему и становится возможным их депонирование. Хенотаксической активностью по отношению к найгрофилам обладают при

естественной осеменении как компоненты семенной жидкости, так и сперматозоиды. К периоду овуляции у осемененных свинок количество нейтро-филов в утеротрубкых соединениях уменьшается.

Осеменение и супоросность влияют на функциональную активность лейкоцитов. Максимальная активность лейкоцитов крови по НСТ -тесту выявлена у двукратно осемененных свиноматок (с интервалом 24 часа) через б часов после второго осеменения (Р<0,001 + 0,02), что свидетельствует о том, что вещества спермы, активирующие нейтрофила, проникают в кровь. Исследования лейкоцитов, выделенных из крови сосудов натки, из эндометрия и из смыва слизистой, выявили их максимальную активность через б часов после осеменения. В период 5-7 дня после осеменения происходит значительное уменьшение количества нейт-рофилов в матке и их активности.

2.2. Спермоантитела и репродуктивная функция свиноматок Изучение роли спермоанаител в осуществлении репродуктивной функции в норме, при бесплодии и искусственной иммунизации антигенами спермы, позволит получить материал, который будет способствовать разработке иммунологических методов коррекции нарушений,' возникающих при бесплодии человека и животных.

Иммунизация самок кроликов ксеногенной спермой петуха, предпринятая Ущелью изучения ее влияния на ооотноиение полов в потомстве, негативно влияла на репродуктивную функцию. От 42 иммунизированных самок получено 340 крольчат, в среднем 8,09 в помете. "От 34 контрольных - 284 крольченка. по 8,35 на самку. Процент прохолостевших иммунизированных самок был большим (25&),чем контрольных (£5$). При системной иммунизации аллогенной спермой свиноматок также наблюдается негативное влияние. Необходимо подчеркнуть разницу между бесплодием индуцированным искусственно и бесплодием, возникающим у самок в сипу различных этиологических факторов и вклячающин в качестве патогенетического элемента нарушения нормального течения естественных им-

нунных реакций, как компонентов репродуктивной функции. Во втором случае, вначале происходит нарушение нормальной функции слизистых репродуктивного тракта и как следствие -изменение локального иммунного кзмеосгаза.

Р прови свиноматок выявляются антитела комплементарные к антигенам спермы хряка (п ж 106). Естественные спермоантитела появляются в крови в ранний период онтогенеза. В крови свинок и рожавших свиноматок титр спермоантигел определен в различные фазы цикла и в течение супоросности на 1,2,4,7,10,26,30,45,60,90 день и в конце супороснсо-ти (всего проведено 1896 анализов}. У рожавших свиноматок титр антител комплементарных к антигенам плазмы спермы колеблется в тех же пределах, что и у виргинных свинок, однако более высокие значения титра встречается чаще. Естественные антитела к антигенам сперматозоидов выявляются в реакции преципитации в крови виргинных свинок реже, не?сели антитела к плззме и в более ннзком тигре. После осеменения и во время беременности возрастает процент животных, у которых в крови выявляются антитела комплементарные к антигенам сперматозоидов (с 22,5л до 65,3.^; Р< 0,001). Эти данные даят основание для предположения о том, что у 43,22 животных в связи с осеменением возникают иммунные спермоантитела.

2.3. Спермоантитела и иммуноглобулины в репродуктивных органах

свиноматок

В экспериментах с использованием радиоактивных индикаторов, в ¡очетании с методом культуры тканей, было показано (Бурков И.Л., Ря-!ух В.П. 1974), что гкпни орпнов тепродуктпвного тракта свиней в [ериод охот^ способна т-п у иго продуцировать антитела, комплемента->нче к антигенам птсулнротанных сперматозоидов хряхе. Интенсивность юхельного синтеза спермоантител меняется в связи с фазами полового икла, иммунной реактивностью свиноматок и осеменением. Максима яь-чя интенсивность синтеза отмечена в период охоты у тканей яйцезод-ого конца рогов матки осеменениях не рожавших свиней (Р<0,01)-

К 7 дню цикла интенсивность синтеза существенно снижается (Р< 0,001). Относительно високий уровень синтеза в период охоты, еде более усиливается под .влиянием покрытия хряком за 20 часов до исследования,

что свидетельствует о влиянии на процесс синтеза антигенов, или им-

<-0

муномодуляторов спермы. Близкие, к отмеченным для репродуктивных органов, закономерности в интенсивности синтеза спермоантител, проявляются и в тканях лимфатических узлов регионарных к репродуктивным органам. Выявлены как и в репродуктивных органах отличия в интенсивности синтеса между рожавшими свиноматками и виргинними свинками (P-iO.OI). Целесообразность более высокого уроъня спермоантител, в период охоты и осеменения, заключается в возможности образования иммунных комплексов антиген-антитело, оказывающих влияние на функциональную активность соответствующих иммунокомпетентних клеток. Спер-моантитела могут выступать также в роли факторов специфического распознавания, принимать участие в антителозависимой клеточно-опосре-дованной (несенсибилизированными лимфоцитами) цитотоксичности по отношению к сперматозоидам и, следовательно, быть причастными к иммунной селекции последних.

В процессе беременности происходит снижение интенсивности синтеза спермоантител; при первой супоросносги ото снижение, как в репродуктивных, так и в лимйоидних органах, происходит к 26 дно, при второй - уже к 18 дню.

Исследования, проведенные в нашей лаборатории Бабышевой JI.B., выявили в период охоты у осемененных свиноматок повышение в крови уровня i£G иIj А (Р^0,05). Аналогичное закономерности отмечены в содержании в ;шдо..<ег-рии секреторного х^А. Иммуноглобулины секретов репродуктивных органов выполняют не только защитную функцию, но и роль, регуляторов гоиеостаза репродуктивных органов.

При изучении времени появления спермоантител в ранние периоды биогенеза, няни использована новорожденные поросята (п = 32), пас-

сивный иммунитет у которых, обеспечивали яр за очет иммуноглобулинов свиного молозива, а за счет молозива хоров. В натвй стране возможность выращивания н использования таких поросят била показана впервые

аэ7з).

3. Механизм регуляции иммунологических процессов у свиноматок в связи с воспроизводительной функцией

К регуляции иммунного гомеостаза репродуктивных органов причастий как общие механизмы регуляции иммунной системы, так и факторы, связанные с осуществлением репродуктивной функции,- деятельность половых желез, а такие плаценты и плода во время супоросности и влияние спермы 90 время осеменения. Слоганов и мало изученное влияние оказывает гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая система.

3.1. Некоторые аспекты регулирующего влияния гипотвламо-гипо-физарно-надпочечниховой системы

Исследованиями уроьня кортизола в крови 30 помесных свинок установлено (Бурков И.А., Трубищша Т.П.), что относительно низкий в период центральной лютеальной фазы уровень кортизола за 3 - 4 суток до начала охоты повышается (Р<0,05), а затеи е период, предшествующий охоте, начинает снижаться'(?< 0,02). В период овуляторной фазы

наблюдается новая волна подъема уровня.кортизола. Меняется в течение полового цикла и функциональный резерв надпочечников, повышение которого отмечено перед наступлением охоты (Р<0,05). Об этом свидетельствуют и данные норфо-метрической оценки надпочечников,- в пещ-од поздней фолликулярной фазы по сравнению с лютеальной фазой больше и масса надпочечников (Р<0,02), и относительная толщина пучковой зоны (Р< 0,001). Повышенные функциональные возможности надпочечников, в период непосредственно предшествующий охоте и в период охоты, обеспечивают организму более высокие адаптационные возможности и, ген самым, успешное осуществление воспроизводительной функции. В опыте на свиноматках (п = 12) лучшая плодовитость была выявлена у

животных, занявших по функциональному резерву надпочечников среднее положение. Более низкая плодовитость отмечена у свиноматок, у которых реакция На кортикотропин или не проявилась, или была чрезмерной.

С цельи моделирования иекр^орых сторон сгрессорного состояния были проведены опыты по введению свиноматкам экзогенного кортизола (п » 36). Выявлено, что избыточный уровень кортизола негативно сказывается на оплодотворяемости, количестве созревших и овулировавших фолликулов и плодовитости (Р-«-0,05). Наиболее сильно такое действие проявляется при введении кортизола в период ранней фолликулярной фазы. Отмечена тенденция к структурным изменениям матки (толщины эндометрия, диаметра маточных желез и высоты их эпителия). Изменения уровня кортизола в организме в разные фазы полового цикла сказываются на перераспределении иммунокомпетентных клеток и их миграции в репродуктивные органы. Под влиянием высокого уровня кортизола проио-ходит уменьшение степени инфильтрации эндометрия лимфоцитами как в яйцеводннх концах рогов матки (Р<0,02), так и в срединных участках, рогов (Р<0,01\ уменьшается масса регионарных лимфатических узлов (Р<0,02 + 0,001), селезенки С?<0,05). Картина крови у таких животных отражает те изменения, которые наблюдаются в различные периоды адаптации к действию стресс-агентов; в начальные дни, при реакции активации, в крови повышается количество эозииофилов и лимфоцитов (Р<.0,05), а затем наблюдается их снижение.

Механизм действия глюкокортикоидов на воспроизводительную функцию включает не только центральные звенья и влияние на перераспределение и миграцию лимфоцитов, но и на функциональное.состояние клеток, и уровень биологически активных метаболитов репродуктивных органах. Исследование в эндометрии свободных аминокислот в период охоты и супоросности (п »37) и уровня кортикостероидов в крови выявило обратную корреляцию ые^ду концентрацией свободного тирозина в эндометрии и уровнем как общих (т = 0,82; Р<0,05), так и свободных

II-оксикортикостероидов в крови (г» 0,85; Р-^-0,05). Отмечены различия в период охоты в содержании свободных аминокислот в эндометрии осемененных и неосемененных свиноматок, отличающихся между собой и по уровню кортикостероидов. Наибольшие отличия выявлены (Р » 0,05 *• * 0,001) по содержанию аргинина, аспарагиновой и глутаминовой кислот, валина, лейцина, аланина, тирозина, иетионина, фенилаланина, цисти-на и орнитина.

При исследовании (Бурков, Трубицина) у свиноматок (п * 201) относительной массы печени, выявлено ее увеличение (Р<0,01) в период месячной оупоросности. Известно о тесной взаимосвязи в реализации эффекта кортизола мевду печенья и линфоидной тканью. Исходя из этого, можно полагать, что повышение у свиноматок месячной оупоросности концентрации кортикостероидов в крови и относительной массы печени при одновременном снижении в эндометрии количества лимфоцитов и эозинофильных гранулоцитов, отражаю* функциональную связь между надпочечниками, печенью и иммунным гоиеостазом репродуктивных органов.

Одновременно с повышением глюкокортикоидов под влиянием покрытия хряком, в крови свиноматок повышается содержание тестостерона (Р<0,05), который может стимулировать образование из аргинина и орнитина под действием орнитин-декарбоксилазы полиаминоя-спермина и спернидина. Спермин, как образующийся в репродуктивных органах свиноматок, так и всасывающейся из спермы, может выступать в роли естественного метаболического иимунодепрессанта, влияя на'иммунокомпе-тентные клетки, в частности,на лимфоциты и нейтрофилы. В исследованиях Георгиевского В.И., Буркова И.А. и Власенко Б.В. под влиянием спермина наблюдалось уменьшение миграционной способности лейкоцитов (Р<0,01).

3.2. Роль половых гормонов в регуляции иммуногенеза и их причастность к регуляции иммунного гомеостаза репродуктивных органов

Была использована модель -циклирующая сапка. У свинок а различ-

ные фазы полового цикла определен иммунологический профиль по содержанию в крови Т- и В- лимфоцитов и иммуноглобулинов, а также уровень тестостерона (Бурков H.A., Георгиевский В.И..Бабышева Л.В., Панасен-ко В.Н.). Максимальное количество Т- и В- лимфоцитов и тестостерона в крови выявлено в период овуляторной фазы Сияя Т- лимфоцитов г «= ■ 0,60, Р<0,05; для В- лимфоцитов г= 0,40, Р<0,05). У покрытых свиноматок отмечен в овуляторную фазу более высокий уровень тестостерона и количество Т- и В- лимфоцитов, чем у непокрытых в эту же фазу. Под влиянием покрытия усиливается, по-видимому, синтез тестостерона как в надпочечниках, так и в яичниках. Возможно всасывание тестостерона и при резорбции спермы. Достоверное увеличение в овуляторную фазу цикла у■осемененных свинок отмечено и по аодержанию в крови Ige и J-g А, а в эндометрии секреторного IsA, что может быть связано с по-вчиением в период фолликулярной фазы уровнем, как упоминалось выше, бстрадиоЯ^, а позднее тестостерона.

Сложный характер взаимодействия лимфоидных органов и гонад подчеркивается во многих исследованиях. Известно, что как эстрогены, так и андрогены ускоряют инволюцию тимуса. Хантер Р; предполагает, что половозрелость и терпимость самки к отцовским антигенам во время беременности каким-то образом связаны. В наших исследованиях (п =187) максимальная относительная масса тимуса отмечена в возрасте 26 дней, л абсолютная в возрасте 3,5-4 месяцев. К периоду половозрелости относительная и абсолютная масса тимуса была ниже (Р< 0,001). Масса зга селезенки по мере роста прогрессивно увеличивается. Отмечена, в связи с фазами полового цикла, тенденция к изменению массы тимуса и его структуры.

Связанные с полом функциональные особенности лимфоидных органов в ранний пприоп онтогенеза изучены слабо. В исследованиях Буркова И.А Гестаксвой P.A., не выявлено существенной разницы в поглощении кисло-рогч иктохгарички печени евмцов и самок куриных эмбрионов (п ■ 395).

4. Некоторые аспекты иммуногенетики в связи с воспроизводительной функцией животных

4.1. Некоторые иммунологические аспекты регуляции пола Известно, что экспрессия или наэкспрессия Н-У- антигена определяет первичный пол всех видов млекопитающих. Экспрессия Н-У - антигена имеет место во всех типах клеток тела самца. Иммунизация самок тканями самцов с целью влияния на соотношение полов в потомстве предпринималась неоднократно с неоднозначными результатами. В наших исследованиях от самок кроликов, иммунизированных кровью самцов, э 48 окролах было получено 419 крольчат -209 самок и 210 самцов. Практически таким же было соотношение (1 : I) по полу э пометах контрольных самок. Не оказала влияния на соотношение полов и иммунизация самок кроликов (п ° 20) и самок мышей (п ° 24) тканями печени и селезенки самцов.

В опытах с использованием для иммунизации самок кроликов (п в 42) спермы петуха, являющегося моногаметным попои, было получено 340 крольчат,- на 100 - 139 От контрольных самок (п в 34) пол учено 284 крольченка, на 100 б* - 92 Наибольший сдвиг в потомстве, в. сторону самок наблюдался при иммунизации виргннных самок. Так, в потомстве иммунизированных самок при первой беременности на 100 было в потомстве однократно рожавших на 100 (Г - 141 £ и в

потомстве многократно рожавших на 100 105

4.2. Влияние на воспроизводительную функцию животных сочетаемости самца и самки по групповым факторам крови

В опыте с 12 самцами и 70 самками кроликов, идентифицированных по группе крови, получено 109 окролов от самок, покрытых совместимыми по группе крови самцами и 57 окролов - несовмеотиним. Процент прохолостевших самок по "совместимой" группе составил 20,7, а но "несовместимой" -21,5. Разница в плодовитости, соотношении полов в потомстве и массе новорожденных крольчат, статистически небыла дос-

товерной.

Влияние на плодовитость свиноматок совместимости по антигенам гистосовместимости выявлено в нашей лаборатории О.А.Крюковым. Лучшие результаты по плодовитости были получены при оптимальных значениях совместимости, определяемой в смешанной культуре лимфоцитов пар хряк - свиноматка.

В исследованиях различных вариантов сочетания хряков при двукратном осеменении^в начале охоты и через сутки и определении отцовства поросят .¡о групповым факторам крови (тестирование поросят, хряков и маток было проведено Безенко С.П.) выявлено, что первое осеменение свиноматок, произведенное в начале охоты, влияет на избирательность оплодотворения л, или, на предзиготную селекцию сперматозоидов при двойном покрытии различными хряками через сутки после начале охоты. Исходя из этих результатов и данных, характеризующих иммунный гсЙёостаз репродуктивных органов свиноматок при разных режиме* осеменения, можно сделать заключение о том, что в основе этого лежат иммунологические механизмы опознавания степени генетического различия гамет оамца и эффекторный механизм селекции сперматозоидов.

вывода

1Д) Нормальное осуществление воспроизводительной функции свино-мтгок связано с проявлением целого ряда иммунологических реакций и феноменов как в репродуктивных, так и в лимфоидных органах. Иммунологические механизмы играют у свиноматок существенную роль на всех этапах осуществления воспроизводительной функции. С помощью иммунологических, гистологических, цитологических, радиоизотопных, инмуно-флуоресцентных, хрокатографических, иымуногенетических и других методов исследования определены количественные и качественные характеристики популяции иммунокомпетентных клеток в репродуктивных органах и иммунной реактивности свиномпток в связи с режимом осеменения, оп-лодотворяемостью, супоросностм>, плоювитостыо и временем отъема по-

росят. По ряду иммунологических характеристик, слизистую репродуктивного тракта свиноматок молено квалифицировать, как локальную иммунную систему.

2. Иммунный гомеостаз репродуктивных органов свиноматок в связи с осеменением определяется как составом и свойствами оперны, так и иммунной реактивностью свиноматки. Условия иммунологического комфорта, складывающиеся для сперматозоидов и зигот в репродуктивных органах, обусловлены механизмами иммунной супрессии, толерантности, иммунной маскировки и, возможно, взаимодействиями идиотип-антиидиотип. Количественные особенности поступления антигенов спермы при осеменении,- в начальный период после осеменения значительное количество антигенов, как сперматозоидов, гак и семенной плазмы, а в последующий период постепенное их убывание,- могут способствовать толероген-ному действию антигенов спермы. Иммунологическая апробация режимов осеменения свиноматок дает основание полагать, что при двукратном осеменении - первый раз в начальный период охсты и второй раз через сутки, - в репродуктивных органах свиноматок складывается более благоприятная иммунологическая ситуация для осуществления репродуктивной функции, чей при однократном осеменении. Для пламенных хозяйств следует рекомендовать этот режим осеменения.

3. Численность популяции лимфоцитов в репродуктивных органах СЕиноматки и их функциональное состояние меняются в связи с периодом полового цикла, режимом осеменения, периодом супоросностн. Изменение иммунологической реактивьо^ти свиноматок в эти периоды сказывается и на состоянии лимфоидных органов, а это, в свою очередь, отражается

на количестве и функциональной активности лейкоцитов крови. Количество лимфоцитов в эндометрии зависит йе только от сроков и кратности осеменения свиьомагки, но и от сочетания хряков при двукратном осеменении. Двукратное осеменение в одну охоту одним и тем же хряксм или генетически более близкими хряками обусловливает меньшую степень ин-

фильтрации эндометрия иммунокомпетентными клетками, чем при осеменении генетически более различными хряками.

4. Различия в сочетании хряков при двукратном осеменении сказываются и на количестве переживающих сперматозоидов в репродуктивных органах свиноматок. Наблюдается обратная корреляция между количеством сперматозоидов и лимфоцитов. Двукратное осеменение в одну охоту одним и тем же хряком или генетически более близкими хряками обусловливает большее содержание переживающих сперматозоидов в репродуктивных органах свиноматок.

5. Установлена обратная корреляция между степенью инфильтрации эндометрия лимфоцитами в период овулягорной фазы у осемененных свиноматок и оплодотворяемостью и плодовитостью свиноматок. Индивидуальные особенности иммунологической реактивности свиноматок могут оп-рер«лять характер иммунного ответа на антигены спермы и плодов и быть причастными к оплодотворяемести и плодовитости животного.

6. Сенсибилизация к антигенам сперматозоидов в реакции подавления прилипания лейкоцитов выявляется на 6-7 день после осеменения: при использовании лейкоцитов эндометрия - у половины свиноматок; при использовании лейкоцитов регионарных лимфатических узлов у 36? животных и не регионарных,- у 2%. Сенсибилизация к антигенам плодов при использ'Зйании лейкоцитов крови выявлена у 30? свиноматок в период

дня оупоросности.

I ■

1 7. В результате сравнительной оценки по ряду морфофункциональ-ных и иммунологических тестов различных отделов репродуктивного тракта свиноматок выявлено, что утеротрубный участок, выполняющий функцию депонирования сперматозоидов, по своим иммунологическим характеристикам, в том числе и по содержанию в олизистой лимфоцитов и нейтрофилов, отличается от других участков матки.

В. Выявлены различия в иммунном гомеостазе и иммунологической реактивности межяу виргинными свинками и рожавшими свиноматками. Эти

различия проявляются также в степени инфильтрации эндометрия тучными клетками и нейтрофилами, и в продолжительности выживания трансплантатов кожи хряка. Различия в имиущюм гомеостазе между виргинныни и рожавшими свиноматками влияют и на проявления репродуктивной функции, в частности, на переживаемость сперматозоидов.

9. В крови свиноматок вшвляюгся антитела комплементарные к антигенам спермы хряка. Естественные спермоентитела появляются в крови в ранний период онтогенеза. У рожавших свиноматок титр антител комплементарных к антигенам плазмы спермы колеблется в тех же пределах, что и у виргинных свинок, однако более высокие значения титра встречаются чаще. Естественные антитела к антигенам сперматозоидов выявляются в реакции преципитации в крови виргинных свинок реке, нежели антитела к плазме- и в более низком титре. Пооле осеменения и во время беременности возрастает процент животных, у которых в крови выявляются антитела комплементарные к антигенам сперматозоидов (о £2,5$ до 65,8$; Р<0,001). Эти данные дают основание для предположения о том, что у 43,3$ животных возникают в связи с осеменением иммунные спермоантитела. - .

* 10. Тканями репродуктивных органов свиноматок синтезируются антитела комплементарные к антигенам сперматозоидов хряка. Интенсивность локального синтеза спермоантигел меняется в связи с разами полового цикла, иммунной реактивностью) свиноматок и осеменением. Максимальная -интенсивность синтеза спермсантител отмечена в период охоты у тканей яйцеводного конца рого^ матки осемененных не рожавших 'свиней. Близкие к отмеченным закономерности в интенсивности синтеза спермоантител проявляются и в ткенях лимфатических узлов регионарных к репродуктивным органам. Биологическая целесообразность отиосителто белее высокого уровня спермоантител, синтезированных локально илн поступивших из крови в период охоты и осемвнзния, заключается в возможности образования иммунных комплексов антиген-антитело, В -снове иммуносупрес-

сивного действия таких комплексов может лежать как связывание антигенов спермы, так и выключение функциональной активности соответствующих иммунокомпетентных клеток. Кроме того, спермоантитела могут выступать в роли факторов специфического распознавания и, тем самым, принимать участие в. антителозависймой клеточно-опосредованной (несе-нсибилизированными лимфоцитами) цитотоксичности по отношению к сперматозоидам и, следовательно; быть причастными к иммунной селекции последних.

11. Повышение в крови уровня IsO и IjA и в эндометрии BIgA в овуляторную фазу цикла у осемененных свиноматок, является дополнительным доказательством целесообразности повышения уровня антител и,

в частности, спермоангител в этот период. В овуляторную фазу у осемененных свиноматок наблюдается также максимальное, по сравнению с остальными фазами.цикла, количество в крови Т- и В- лимфоцитов. Макси-мальный^рровень как синтеза спермоантител, гак и содержания иммуноглобулинов в эндометрии наблюдается в период овуляторной фазы у естественно осемененных свиноматок. Это отличие осемененных свиноматок от неосемененных, исследованных в этот ке период цикла, дает основание полагать, что в основе этого отличия лежит многофакторный механизм, включающий как влияние самой спермы, так и физиологическую роль естесЪенного спаривания.

12. Выявлено влияние осеменения свиноматок и отдельных компонентов спермы хряка как in vivo» так и in vi-tro, на функциональное состояние иммунокомпетентных клеток. В крови осемененных свиноматок появляется фактор, оказывающий влияние на адгезивные свойства лейкоцитов. Под влиянием чнтигенов сперматозоидов in vitre повышаются адгезивные способности лейкоцитов осемененных свиноматок. Выявлено ин-гибирующее влияние in vitro секретов добавочных половых желез хряка и спермина но киграционнуг активность лейкоцитов свиноматок. Плазма опермы хряка усиливает in vitro адгезивные свойства лимфоцитов свиноматок и оказывает на них цитотоксическое действие.

13. ХемогаксическоЯ активностью по отношению к нейтрофилам обладают при естественном осеменении свиноматок как семенная жидкость, так и сперматозоида. В подэпителиачьнсм слое эндометрия утеротрубных участков наблюдается меньшая плотность нейтрофилов, чем в остальных участках матки. Это может свидетельствовать о меньшем объеме фагоцитоза сперматозоидов нейтрофилами в утерогрубннх соединениях. Особенно эта разница между яйцеводным концом рога матки и другими участками рогов проявляется при осеменении у виргинных свинок. Количество нейтрофилов в подэпителиальном слое эндометрия яйцеводных концов рогов матки осеменениях свинок уменьшается к периоду овуляции, что, по-видимому, свидетельствует о снижении потенциальной возможности фагоцитоза сперматозоидов в этот период.

II. Активность лейкоцитов свиноматок в НСТ -тесте меняется в связи с осеменением и супоросностью. Максимальная активность лейкоцитов крови и эндометрия отмечена через 6 часов после осеменения. В период 5-7 дня после осеменения происходит значительное уменьшение количества нейтрофилов в матке и их активности. В этот же период достоверно уменьшается, как в эндометрии, так и в лимфатических узлах, количество естественных лимфоцитов киллеров Си К -клеток). Количество их начинает уменьпаться уже через 24 - 40 чаоов после осеменения.

15. К регуляции иммунологических процессов у свиноматок в связи с воспроизводительной функцией причастны как иммунологические механизмы регуляции , так и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая система и половые гормоны. Выявлено, что оплодотворяемость и плодовитость свиноматок зависит как от степени инфильтрации эндометрия лимфоцитами в период овуляиионной фазы, так и от величины функционально-, го резерва надпочечников. Отмечено повышение функционального резерва надпочечников перед наступлением охоты. Кортизол Влияет на лимфоид-нне органы и на степень инфильтрации эндометрия лимфоцитами и, тем самым, на оплодотворяемоать и плодовитость свиноматок. Изменения

уровня кортизола в крови в разные фазы полового цикла сказываются на перераспределении иммунокомпетентных клеток и их миграции в репродуктивные органы. Избыточный уровень кортизола в организме свиноматок негативно сказывается на оплодотворяемости, количестве созревших и овулировавших фолликулов и плодовитости. Наиболее сильно такое действие проявляется при введении кортизола в период ранней фолликулярной фазы. Вывод о причастности половых гормонов к регуляции иммунного гомеостаза основывается на экспериментальных данных, свидетельствующих о изменении иммунологического профиля свиноматок в различные фазы полового цикла.

16. Повышение у свиноматок месячной супоросности концентрации кортикостероидов в крови и относительной массы печени при одновременном снижении в эндометрии количества лимфоцитов и эозинофильных сранулшитов, отражают функциональную взаимосвязь между надпочечниками, печенью и иммунным гомеостазом репродуктивных органов.

17. Возрастные изменения массы тимуса у свиней отражают видовые особенности. Максимальная относительная масса тимуса отмечена в конце первого месяца жизни, а максимальная абсолютная масса тимуса -в возрасте 3,5 - 4 месяца. У свиней, как и у других животных, уменьшение .^ассы тимуса -инволюция тимуса,- начинается в период предшесгву-згсий половой зрелости. Масса же селезенки продолжает возрастать по мере роста животного.

18. Выявлено, что антигены примененные с целью регуляции пола

в потомстве половозрелых самок, могут оказывать на механизм регуляции соотнесения попов модулирующий эффект. Иммунизация виргинных самок кролика моногаметной спермой птиц обусловливает эффект увеличения в потомстве самок (на 100 £ рождается 159

19. Установлена возможность создания пассивного иммунитета у поросят ад счет иммуноглобулинов молозива коров.

2С. Мсследсваны различные варипнты сочетенря хряков при двукрат-

ном осеменении в начале охоты и через сутки и определении отцовства поросят по групповым факторам крови. Выявлено, что первое осеменение свиноматок, произведенное в начале охоты влияет на избирательность оплодотворения н, или, на предзиготную селекции сперматозоидов при двойном покрытии различными хряками через сутки после начала охоты. Сделано заключение о том, что в основе этого лежат иммунологические механизмы опознавания степени генетического различия гамет оамца и эффекторный механизм селекции сперматозоидов.

21. Выявлены различия в иммунологическом профиле свиноматок -реципиентов (при трансплантации эмбрионов - полностью аллогенной беременностью]) и свиноматок с обычной супоросностью, эти различия свидетельствуют о том, что полностью аллогенная супоросность сопровождается большей нагрузкой на иммунную систему свиноматки -реципиента.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. При оценке пород, линий, технологий кормления или содержания ремонтных свинок и свиноматок рекомендуется использовать иммунологи-*еские гесты -определение в крови количества Т- и В- лимфоцитов; определение функциональной актив.ности лимфоцитов в реакции бласттранс-[юрмации; определение активности натуральных киллеров; выявление слеточно-опосредованной сенсибилизации к антигенам сперт и.антиге-тм плодов в теоте ИШЛ; определение функциональной активности лей-¡оцитов в тестах РП4Л и НС? -тесге; определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов основных классов С Г3А). 'Получение в диссертации по этим тестам данные рекомендуется использовать

! качестве нормативных в селекционно-племенной работе при опредении юрмального иммунологического профиля ремонтных свинок и свиноматок, [иагностики иммз нодефицигов и лозыоадой их коррекции.

2. В селекционной работе для прогнозирования плодовнтост^ сви-юматок рекомендуется исследовать в период фолликулярной и овулято-

рнэй фаз функциональный резерв надпочечников.

3. На основании иммунологической апробации режимов осеменения рекомендуется двукратное осеменение свиноматок. При однократном установлении охоты, осеменение проводить в первые часы после выявления охоты и повторно через сутки.

4. На основании данных косвенно подкрепляющих гипотезу о наличии у самок млекопитающих механизма предзиготной селекции сперматозоидов, рекомендуется усилить исследования характера иммунологических реакций, определяющих в„аи"оотношения организма самки со сперматозоидами на различных этапах их существования в репродуктивное тракте самки.

5. В целях коррекции состава питательных сред, используемых для работы со свкными яйцеклетками, зигогами и т.п., рекомендуется использовать данные по соде ранив свободных аминокислот в эндометрии свиноматок в различные периоды полового цикла и супорссности.

6. Рекомендуется использовать молозиво коров с целью создания пассивного иммунитета новорожденных поросят в случаях их изолированного выращивания (случаи агалактии, гибели свиноматки, ветеринарные показания^.

7. Выявленные различия в иммунном гоыеостазе и иммунологической реактивности меаду виргинными свинками и рожавшими свиноматками дают основание для апробации в будущем дифференцированной технологии осеменения для ремонтных свинок и для свиноматок.

8. Теоретическое обоснование иммуносупрессивного и толерогенно-го действия спермы на организм самки открываем новые возможности для исследований, путем добавления к сперме веществ с иммуномодулирую-щини сьойствами, иммунокорректирующих влияний на функциональное состояние репродуктивных органов самки с целью повышения оплодотворяе-мости и плодовитости.

9. Полученные дашше могут быть рекомендованы для включения в

справочные и учебные руководства по иммунологии и физиологии сельскохозяйственных животных. Отдельные материалы диссертации включены:

а) В монографию А.А.Сысоева - физиология размножения сельскохозяйственных животных. М. "Колос", 1978.

б) В монографию Соколовской И.И., Милованова В.К. - Иммунология воспроизведения животных. И. "Колос", 1981.

в) В монографию Говалло В.И. - Иммунология репродукции. М. "Медицина", 1987.

г) Идея и экспериментальная разработка Буркова И.А. о возможности регулирования пола в потомстве млекопитающих с помощью иммунизации самок моногаметной спермой птиц, использованы в запатентованной работе Hansock Ä.L.T. - Control oi Sex Ratio in mammalian offspring. United states Patent, США, 1978, Ч, 085, 205.

10. Материалы диссертации, свидетельствующие о том, что слизис-гая репродуктивных органов свиноматок функционирует как локальная 1ммунная система, рекомендуется использовать в практике преподава-шя физиолог™ и иммунологии с.-х. животных в ВУЗах соответствующих фофилей и в научных учреждениях при дальнейшей разработке вопросов, ¡вязанных с изучением иммунологии репродукции свиноматок.

СПИСОК ОСНШНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ

■ДИССЕРТАЦИИ

1.Бурков H.A. Влияние иммунизации кроликов спермой петуха на ол потомства. Материалы шестой Всесоюзн. конфер. по физиол. биохим. сновам повыш. продукт, с.-х. животных. Боровск, 1968. с.398-391.

2.Бурков И.А. Изоиммунизация самок кроликов и пол потомства, пл. ШИЙ5ВШ. 1959, вкп.1(9), с. 67-68.

3.Бурков И.А. Влияние совместимости по группе крови кполккоа

з оплодотворяекость, плодовитость и пол потомства. Труды ВНШ$ЕиП ,-х. животных. Боровск, 1970, т.УШ, с.344-351.

Бурков И.А. Определение групповых антигенов крови кроликов и оиготовление иммунных сывороток. В кн.: Новые методы и модификации юхимических и физиологических исследований в животноводстве ö-ieTo-<ческое руководство), 1972, ®.2, с.67-71.

5.Бурков H.A. Проблема молозивного иммунитета при сверхраннем ■ъеме поросят. Бгол. ВДИ'ЖиП с.-х. животных. Боровск, 1973, эыл.ЗС29)

6.Рябых В.П., Бурков ч.А. Использование радиоактивных изотопов и изучения сшпеза спермоантигел in vitro лимфоидными и репродукциями органами свиней. В сб."Использование ра.тлоачтивчых и стабиль-

них изотопов в изучении обмена веществ v сельскохозяйственных животных Методические указания. M. 1973, с.58-62.

7.Бурков H.A., Манухина А.И., Михайлова Т.П., Сорочинская Н.Л. Инфильтрация матки свиней эозинофильными гранулоцитами в связи с беременностью. Бел. ВНИИ§БиП с.-х. животных. Боровск, 1974, вып.2(32), с. 63-65.

В.Бурков И.А., Рябых В.П. Синтез спермоантител тканями репродуктивных органов свиней в первые дни беременности. Бюл. ВНИИ$БиП с.-х. животных. Боровск, 1974, вып.5(35\ с.52-55.

9.Никитина В.Н., Бурков И.А. Динамика содержания клеток, продуцирующих антитела к антигенам спермы хряка, в репродуктивных, лимфоид-ных органах свиноматок при второй беременности. Бюл. ВНИИ$БиП с.-х. животных. Боровск, 1975, вып.2(37), с.57-59.

Ю.Бурков И.А., Манухина А.И., Трубицина Т.П. Инфильтрация эндометрия свиней лимфоцитами в связи с беременностью. Бюл. ВНИИФБиП с.-х. животных. Боровск, 1975, вып.1(36), с.48-50.

11.ßurkoy I.A. Emlowe+ riwn free amino acids during edrus and ear

teetatii/rt in sivine.Procetdm' VIII Intern, congress on animal repro-ucticn and artificial insemination.. KraJcoV, I97é.Final Heport. Vol .III. the Physiology of Reproduction (selected papero).P.207-289.

12.Бурков И.А., Рябых В.П. Синтез спермоантител тканями лимфоид-ных органов свиноматок в первые дни беременности. Бюл. ВНИИФБиП с.-х. животных. Боровск, 1976, вып.1(40\ с.56-58.

13.Бурков И.А., Трубицина Т.П. Тучные клетки эндометрия свиней

в период эструса и ранней беременности. Бюл. ВНШйЕиП с.-х. животных, Боровск, 1977, вып.1(44), с.55-58.

14.Бурков И.А., Трубицина Т.П. Эозинофилмше гранулоциты в эндометрии сьнней в период эструса при разных режимах осеменения. Бюл. ВНИЙФБиП с.-х. живо1Ных. Боровск, 1977, вып. 3(46), с.68-71.

15.Бурков H.A. Иммунокомпетентнг.-е клетки эндометрия свиноматок при разных режимах осеменения. Тезисы докладов четвертого международного симпозиума по иммунологии репродукции. София, 1973, с.109.

16.Бурков И.А., Трубицина Т.П. Иммуноксмпегентные клетки эндометрия свиноматок при разных сроках отъема поросят. Бюл. ВНИИ§БиП с.-х. животных. Боровск, 1979, вып.2(54), с. 61-64.

17.Бурков И.А. Кортикостероиды крови свиней в период эструса и ранней супоросности."Биохимия и животноводство". Научные труды ВНИИ$БиП с.-х. животных. т.ХХИ, 1979, с.48-52.

18.Бурков И.А., Трубицина Т.П. Инфиль:рация лимфоцитами ?ндомет рия свиней в период эструса при разных режимах осеменения. Бюл. ВНИИФЕчП с.-х. животных. Боровск, 1979, вып. 1(53), с.52-56.

19.Бурков И.А. Кортикостероиды крови и тирозин эндометрия свиноматок в период эструса и ранней супоросности. Бюл. ВНИИФЕиП с.-х. животных. Боровск. IÔ80, вып.2(58), с. 57-60.

20.Бурков И.А. Иммунные явления в воспроизведении свиноматок. Тез. докл'. Второго Всеооюзн. симпозиума по иммунологии воспроизведения. 8. 1980, fr6-18 XII, 1980), с.193.

21.Бурков И.А. О толерогенном действии спермы хряка на организм свиноматки. Бюл. ВНИИФБиП с.-х. животных. Бооовск, I98Ï, вып. 1(61), с.54-Й.

22.Бурков И.А. Оплодотворяемость и плодовитость свиноматок • в связи с количеством лимфоцитов в эндометрии. Бюл. ВНИИ§БиП с.-х. животных. Боровск, 1981, вып.2(62), с.44-4о.

¿З.Бурков И.А. К вопросу о толерогенном действии спермы хряка на организм свиноматок. Бюл. ВНИИФБиП с.-х. животных. Боровск, 1961,

вып.4(64 \ с.47-52.

24.Бурков И.А. Иммуногенез в первые дни супоросности свиноматок. Труди У Международного симпозиума "Иммунология репродукции .Зарна,

Болгария, 19^2,^2б-29^мая^ ^^ Трубицина Т.П. Влияние спермы хряка

на проявление иммунных реакций лимфоцитов свиноматок в опытах m vrt-

го . Еюл. ШШФБиП с.-х. животных. Боровок, 1982, вып.4(68"), с.61-64.

26.Бурков H.A., Трубицина Т.П. Функциональная активность надпочечников свинок в связи со стадией полового цикла. В сб. научных-тру-дов ВНВДйБиП с.-х. животных "Нейроэндокринная регуляция воспроизводства и продуктивности с.-х. животных". Боровск, 1983, с.91-98.

27.Бурков И.А. Режим осеменения свиноматок и иммуноселекция сперматозоидов. Сб."Физиолого-биохим. основы высокой продуктивности с.-х. животных". "Наука". 1983, с.202-205.

28.Бурков И.А. Регуляция иммунного гомеостаза репродуктивных органов свиноматок. Доклады ВАСХНМ, 1983, 10, с.35-37.

29.Бурков H.A., Трубицина Т.П. К вопросу о влиянии кортизола на репродуктивные и лимфоидные органы свиноматок. Еюл. ВНИИФБиП с.-х. животных. Боровск. 1983, вып.3(71\ с.64-59.

30.Георгиевский В.П., Бабышева Л.В., Бурков И.А. Динамика Т- и В- лимфоцитов в крови свинок в связи с фазами полового цикла. Бюл. ВНИИФБиП с.-х. животных. Боровск, 1984, вып.1(73), с.54-58.

31.Бурков И.А., Власенко Б.В. Феномен спонтанной миграции лейкоцитов свиноматок при различных физиологических состояниях и под влиянием компонентов спермы хряка. Бюл. ВНИИФБиП с.-х. животных, Боровск, 1984, ВЫП.2Г74). с.45-48.

32.Burkov I.A. .Tronöitsina Т.Р. .BaMsfteva. I.V. Immune reactivity an serf's in relation to hoimone. le/els.American J. of Seprodootiv-e. Immunology and Microbiology, 1935, VC1.7,Ы2,p.63.

33.Бурков И.А. Иммунные реакции в репродуктивных органах самок в связи с осеменением. "Вестник с.-х. науки". 1985, I, с.128-133.

34.Бурков И.А., Власенко Б.В. Оценка реакцией подавления прилипания лейкоцитов иммунной реактивности свиноматок в связи с осеменением. Бюл. ВНИИФБШ с.-х. животных. Боровск, 1985, £3/79, с.66-70.

35.Георгиевский В.И., Бурков И.А., Власенко Б.В. Влияние сперми-ча на миграция лейкоцитов свиноматок. Ж. Иммунология. Н. 1985. Деп.

з ВИНИТИ, 1985, «597-85 Деп.

36.Бупков И.А., Георгиевский В.И., Бабышева 1.В., Панасенко В.Н. вровень тестостерона в крови и иммунологический профиль свиноматок в различные Фазы полового цикла. Бюл. БНИИФБйП с.-х. животных.Боровск, [986, вып.5(84), с.56-61.

37.Бурков И.А. Выявление у свиноматок клеточно-опосредованной генсибилизации к антигенам спермы хряка реакцией подавления прилипа-шя лейкоцитов. Бэл. ВНИИФБиП с.-х. животных. Bodobck, 1988, вып.2(90),

59-61.

ЗЗ.Бурков H.A., Майстров B.W., Трубицина Т.П. Активность лейкоцитов по НСТ-тесту в различные периоды воспроизводительного цикла свино-!аток. Еюл. ВНИИФЕиП с.-х. животных.Боровск, 1988, вып.3(91) с.72-74.

39.Burkov I.A. Exposure of cell-mediated ffensi.bilixa.ticn in sola о the Ъоаг sperm antigens by SAXR, in connection Wltfi insemination

ni pregnancy.ñtiericAn J. of Reproductive- Immunology an<J Microbiology,

988, vol.l6,WZ,p.áO

40.Бурков и.А., Трубицина Т.П., Бабышева Л.В. Естественные клет-:и-киллеры в различные пгриоды полового цикла и в связи с осеменением 1^с^поросностью. Бюл. ВНИиФБиП с.-х. животных. Боровск, 1989. вып.

41.Бурков И.А., Трубицина Т.П. Иммунологическая реактивность зиноматок-реципиентов при трансплантации эмбрионов. Бол. ВНИИФБиП .-х. животных. Боровск, 1989, вып.2(94), с.42-46.

42.Бурков И.А., Трубицина Т.П. Иммунологические аспекты количест-ia и переживаемости сперматозоидов в репродуктивных органах свиноматок

связи с режимом осеменения. Бюл. ВНИИФЁиП с.-х. животных. Боровск.

989, вып. 3(95). ............. . ... .

Пашгасчто в печать 28.12.89г. Формат 60x84/16 Объем 2 уч.-изд. л. ТиРаж 100. Заказ 5.

^отапРивг ВНИИдРева Балабаново Калужской области

Информация о работе

Бурков, Игорь Александрович
доктора биологических наук
Боровск, 1989
ВАК 03.00.13

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Иммунологические особенности репродуктивной функции свиноматок ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Иммунологические особенности репродуктивной функции свиноматок"

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунологические особенности репродуктивной функции свиноматок
ВАК РФ 03.00.13, Физиология