Генетическая природа аномалий личиночного развития в потомстве самок l(l)ts403(sbr10) у Drosophila melanogaster

Пугачева, Ольга Марковна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генетическая природа аномалий личиночного развития в потомстве самок l(l)ts403(sbr10) у Drosophila melanogaster
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетическая природа аномалий личиночного развития в потомстве самок l(l)ts403(sbr10) у Drosophila melanogaster"

СЛНЮ-ПЕ'ГГРБУРГ СКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ПУГАЧЕВА Ольга Марковна

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ПРИРОДА АНОМАЛИИ ЛИЧИНОЧНОГО РАЗВИТИЯ В ПОТОМСТВЕ САМОК Ц1)Ы03 (зЬгЩ У ОгожрИИа пк1ап<кшЯег.

специальность 03 00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2004

Работа выполнена на кафедре генетики и селекции Санкт-Петербургского госуларсшснною университета, и лаборатории генетики животных Ь'иНИИ СГ16ГУ

Научный руководитель доцент, кандидат биологических наук

Мамон Людмила Андреевна

Официальные оппоненты доктор биологических наук

Родионов Александр Викентьевич кандидат биологических наук Саранцева Светлана Владимировна

Ведущее учреждение Всероссийский Научно-Исследопательскнй

Институт акушерства и гинекологии им Д О Отта

Зашита состоится илиц^Р 2004 г в 'У часов на заседании Диссертационного совета Д 212 232 12 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Санкт-Петербургском Государственном университете по адресу 199034 Санкт-Петербург, Университетская наб. д 7/9, СПбГУ, биолого-почвенный факультет, кафедра генетики и селекции,аудитория I

С диссертацией можно ознакомиться в центральной библиотеке Санкт-Петербургского государственного университета

Автореферат разослан

2004 г

И о ученого секретаря Диссертационного совета Д 212 232 12 доктор биологических паук

А Ф Смирнов

О г; I ПАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЬО'1 Ы

Актуальность проблемы 'Зволюционио-консервативные гены, вовлеченные в контроль фундаментальных процессов жизнедеятельности клетки, как правило, характеризуются широким плейотропным эффектом Механизмы таких эффектов определить довольно трудно, так как их причинами являются дефекты, нарушающие связи многоуровневой цепи рефляции основных внутриклеточных функций Более того, гены, контролирующие жизненно важные процессы в клетке, часто являются полифункционзльными, так как имею г несколько продуктов (транскриптов), появляющихся в результате альтернативного сплайсинга

Ген sbr у Drosophila melanogasler является представителем семейства эволюционно-консервативных жизненно важных генов и имеет ортологов у различных групп эукариотических организмов от дрожжей (Мех67) до человека (Тар) (обз Третьякова и др, 2001). Одной из основных функций гена ibr является участие в ядерном чкспорзе мРНК (Wilkie et а!, 2001)

Мутантный аллель I(l)ts403 (сининим - sbr'0), представляющий ючковую замену в PIIK-связмваюшем домене белка SBR, имеет плейотропный эффект В условиях повышенной температуры мутация 1(1)1x403 влияет на синтез белков теплового шока (БТШ) (Evgen'ev et Ы 1985), конденсацию хроматина (Мамон, Куцковл, 1993а), нролиферативиую активность клеть (Мамон, Куцкова, 19936), эмбриональное развитие и морфогенез (Голубкова, 2004), расхождение половых хромосом в мейозе у самок (Мамон и др, 1990) и самцов (Комарова, 2001). Механизм влияния данной мутации на расхождение хромосом, также как и роль белка SBR в расхождении хромосом остаются неизвестными Неизвестно также, влияет ли мутация 1(1)1^403 на расхождени< аутосом в мейозе и на расхождение хромосом в эмбриональных митозах Среди фенотипическпх проявлений мутантиого аллеля UDti403 при действии тепловым шоком (ТШ) на ооциты взрослых самок особое место занимает высокая (до 18 %) частота гибели потомков на личиночной стадии развития Потомки подвергнутых тепловому воздействию самок погибают в первом личиночном возрасте и имеют характерные нарушения, прежде всего, мальпигиевых' сосудов Нами были выдвинуты два предположения о причинах появления таких аномальных личинок Учитывая то, что продукт гена sbr функционирует как транспортер мРНК из ядра в цитоплазму, мы предположили, что дефекты морфогенеза у аномальных личинок могут быть свякшы с нарушением транспорта тех мРНК, продукты которых необходимы для нормального развития личиночных органов

В основе второго предположения лежит идея о том, что аномальные лнчинки могут иметь нарушения хромосомного набора Такое, казалось бы, не очевидное предположение возникло на основании следующих фактов

Во-первых, оказалось, что аномальные личинки фенотипически идентичны личинкам, которые появляются в потомстве при анализе нерасхождения больших аутосом у O.melanogast * гибридологическим метолом не зависимо от того, присутствует ли в генотипе исследуемой лини,' мутация ¡(1)1*403 Исполыуя данный метод для определения частоты нерасхождения ауюсом и мейозе у самок D mi'lanogatfer, скрещивают самок, несущих свободные аутосомы с самцами, несущими компаундные хромосомы 2 или 3 (Evans, 1971) Так как в потомстве, один из родителем которого несет компаундные хромосомы, велика вероятность появления анеуплоидных потомков (Evans, 1971), мы предположили, что аномальные личинки из потомства мутантных самок I(l)ts403 также могут иметь нарушения хромосомного набора, например, быть трисомиками или моносомиками по какой-либо из больших аутосом

Во-вторых, было покашио, что мутация l(l)ts403 влияет на расхождение половых хромосом в мейозе как у самок (Мамон и др, 1990), так и у самцов (Комарова, 2001) Кроме того, известно, что анеуплоидия по аугосомам часто проявляется в различных врожденных аномалиях развития (Бочков и др . 1984), полому мы предположили, что аномальные личинки в потомстве муганшых самок HI)ts4<)3 и в потомстве самцов, несущих компаминые хромосомы moivt иметь нарушения числа хромосом в кариотипс

Цель и шдачи исследования Цслыо данной работы является выяснение генетической природы аномальных личинок легальною фенотипа пот " юи п

потомстве обработанных ТШ самок-имаго линии Iílits403 и имеющих дефекты в рамиш малыжгиевых сосудов В связи с этим необходимо решить следующие задачи

1 Дать характеристику признака «высокая частота аномальных личинок» в потомстве самок I(l)ts4<)3, подвергнутых тепловому воздействию' определить характер наследования, я также оценить способность к формированию терчотолерантности по данному признаку

2 Используя метод FISH (флуоресцентная гибридизация in situ), исследовать хромосомным набор аномальных личинок, появляющихся в потомстве самок 1(1)1.ч403

3 Исследовать хромосомный набор аномальных личинок, появляющихся при скрещивании самок, несущих свободные аутосомы, с самцами, имеющими компаундные хромосомы (2 или 3).

4 Определить содержание ДНК и размер ядер в клетках нервных ганглиев у нормальных и аномальных личинок первого возраста, появляющихся в потомстве обработанных ТШ самок 1(1)1x403.

Научная новизна работы Впервые показано, что у D. melanogaxter особи, несущие частичную или полную моносомию по какой-либо из больших аутосом, способны доживать до первого личиночного возраста, и имеют дефекты в развитии мальпигиевых сосудов Аномальные личинки, имеющие характерный летальный фенотип, появляются в потомстве обработанных ТШ самок-имаго I(l)ts403 с высокой частотой и имеют нарушения хромосомного набора, возможно являясь частичными или полными гаплоидами Установлено, что признак появление аномальных личинок является рецессивным и не зависит от нарушений в синтезе белков теплового шока Практическая ценность работы Определение частоты аномальных личинок с характерными нарушениями морфологии мальпигиевых сосудов можно предложить для разработки hoboi о экспресс-метода оценки анеугенного действия различных факторов на D. melanogaster

Метод хромосом-специфичной интерфазной флуоресцентной in situ ДНК-гибридизации адаптирован для выявления состава хромосомного набора у личинок первого возраста I) melanogaster Данные о связи морфологических нарушений развития выдйлительной системы с изменениями хромосомного набора могут иметь значение при изучении механизмов возникновения аномалий развития, как у различных модельных объектов, так и у человека Апробация работы Материалы диссертации были представлены на следующих конференциях' на III конгрессе по патофизиологии (Лахти, 1998); на 40-й (Беллвью, 1999), 41-й (Питсбург, 2000), 43-й (Сан-Диего, 2002); 44-й (Чикаго, 2003) Международных конференциях по дрозофиле, на 17-ои Европейской конференции по дрозофиле (Эдинбург, 2001), на II Съезде ВОГиС (Санкт-Петербург 2000)

Публикации По материалам работы диссертации опубликовано 12 работ (4 статьи. 8 тезисов), I статья в печати

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 167 страницах, состоит из Введения. Материалов и методов. Обзора литературы, Результатов, Обсуждения, Заключения и Выводов одного Приложения, содержит 27 рисунков и 12 таблиц. Список литературы включает 248 наименований, из которых 31 на русском языке.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В работе были использованы следующие линии Drosophila melanogaiter

1 Canton S - линия дикого типа,

2 1(1)11,403; bw; st - содержит мутации 1(1))ч403 (синоним - shr'a - термочувствительная клеточная леталь), brown и scarlet,

3 W'B - содержит мутации w/uicl'^r"и fiar,

4 C(2UItM, dp; С (2R¡liM, рх; \t е - содержит компа\ ндные хромосомы 2, которые маркированы мутациями dumpy и plexus (левое и правое плечи хромосом 2 соответственно), síurlel и ehom (хромосома 3),

5 (УЗ/¡KM; C(3R)HM, п - содержит компаундные хромосомы 1 Правое плечо хромосомы 1 маркировано мутациеи radius incompletes

Развитие особей всех линий происходило при температуре +24+0,5°С Трехдневных девственныч самок-имаго подвергали действию теплового шока ГГШ) +37°С , I ч ГШ проводили в водном

термостате UTU-3 Самок (30-50) особей помешали в специальные емкости объемом 0,5 см~\ которые опускали в предварительно прогретые пробирки, погруженные в воду, закрывая нх пробками ниже уровня воды в термостате

После воздействия и в контроле самок помешали с самцами линии waB массово в стеклянные емкости объемом О 7 л в соотношении 5 самок к 10 самцам В емкости также помещали агаровые пластины, смазанные дрожжевой суспензией. Каждые сутки агаровые пластины меняли на свежие, получая, таким образом, четыре суточные яйцекладки Подсчет яиц осуществляли сразу после смены пластинок Яйца оставляли на агаровой пластине во влажной камере и инкубировали в суховоздушном термостате при температуре +24±0,5°С Подсчет числа неразвившихся яиц, числа нормальных и аномальных личинок осуществляли через 24 и через 48 часов после яйцеоткладки

Препараты интерфазных ядер нейробластов из нервных ганглиев Препарировали личинок Drosophtla melanogasler первого возраста в растворе Эфрусси-Бидла с помощью специально 1 заточенных вольфрамовых игл Ганглии помещали в гипотонический раствор (0,5% цитрата

натрия) на 5-10 минут, фиксировали в течение 1,5 мин в смеси метанол/ледяная уксусная кислота (3 1) и перемещали в каплю 60% уксусной кислоты на 1-2 минуты Готовили давленный препарат который замораживали в жидком азоте 15-20 мин, удаляли покровное стекло и помешали препарат ( последовательно в заранее охлаждённые при-20 С растворы этилового спирта (70%, 80% и 96%»

по 5-7 мин Стёкла высушивали на воздухе С использованием фазово-контрастного микроскопа отбирали препараты с наибольшим количеством ядер для дальнейшей гибридизации или окраски по Фельгену.

Приготовление зондов для гибридизации В качестве зондов для ДНК-гибридизаций т sun использовали меченую биотином плазмидную ДИК, содержащую хромосом-специфичные для хромосом 2 или 3 дрозофилы последовательности ДНК Трансформацию бактериальных клеток плалмидами, выделение плазмидной ДНК из бактерий, электрофорез в агарозном геле проводили в соответствии со стандартными методиками (Манниатис и др. 1984, Sambrook et al, ¡9i¡9i Мечение плазмидной ДНК биотином (Ью-11-dUTP) проводили с использованием олигонуклеотидных праймеров («Силекс», Россия)

Гибридизация т situ интерфазного хроматина с меченым ДНК-зондом Препараты обрабагывх " раствором рибонуклеазы A lOOmg/ml («Sigma») при 37"С, 30 мин, раствором протеиназы К («Serva», Германия), при 10 минут, 4% параформальдегидом (рН-7.0) 10 минут при

комнатной температуре После каждой обработки препараты отмывали в трех сменах 2xSSC по 5 мин при комнатной температуре Препараты обезвоживали проведением через серию холодных спиртов возрастающей концентрации (70%-80% 96%) и высушивали на воздухе. Денатурацию ДНК интерфазного хроматина проводили инкубированием препаратов в растворе 70% формамиди в 2xSSC (рН-6 8), 2 мин. при температуре

на водяной бане. Затем препараты быстро охлаждали, обезвоживали проведением через серию холодных спиртов возрастающей к концентрации (70% 80%:96%) и высушивали на воздухе Денатурацию меченых ДНК-зондов

проводили нагреванием на водяной бане при температуре 80 -90°С в течение 7 минут в гибридизационной смеси следующего состава' 50% формамид. 10% декстрансульфат («Sigma» США), ДНК-зонд - 200 ng, 2xSSC Гибридизашюнную смесь быстро охлаждали и наносили на i препараты интерфазного хроматина из расчета 200 ng меченого ДНК-зонда под одно покровное

' стекло Препараты инкубировали в суховоздушном термостате часов при температурс-ЗУС во

влажной камере Препараты отмывали в трех сменах 2xSSC при тех же условиях Отмывки продолжали при комнатной температуре в трех сменах 2xSSC по 5 минут и в одной смене 0,1 xSSC при тех же условиях Препарагы инкубировали в 3% растворе блокирующего реагента (blocking reagent «Bochringer Mannheim», Германия) в 4xSSC/0,l%Tween20 при 37°С, 30 минут Препараты отмывали в трех сменах 4xSSC/0,f%Tween20 по 5 мнн при ?7"С Далее рабоп проводили в мтемнйнной комнате Дстекшио проводили, используя раствор коныогата авияин-FITC («Sigma» США) 5y/ml (30 минут при 37"С), раствор антител к авндин-НП С'-антиавидни-Вю («Sigma», США)

5y/ml (30 мину! при 17(,( ') Проводили вторичную обработку препаратов авидии-I IIC при rex же условиях После каждой обработки проводили стандартные отмывки в грех сменах 4xSSC/0,1 %Tween20 no 5 минут при VrC. При необходимости выполняли амплификацию гибридизаиионного сигнала. Препараты окрашивали раствором пропилиум иодида («Sigma», США) 2(ig/ml в ангивынветающем растворе («Vector», США) и анализировали с использованием системы флуоресцентного микроскопа «Люмам» при увеличении об )00\ ок 10*, CCD-камеры «CHIPER» и компьютерной программы Ista VideoTest-FISH 1.0.

Флуоресцентное окрашивание ДНК по Фельгену. Отобранные с изпользованисм фазово-ковтрастного микроскопа стекла с нейробластами дополнительно фиксировали метанолом и высушивали на воздухе. Гидролиз осуществляли в растворе 6N HCl в течение 8 мин. Стекла промывали в трех сменах дистиллированной воды. Окрашивали в 0,3% растворе аурамина, насыщенном хлористым тионилом (SOCI2) 1,5 ч. При 4-8°С. Стекла промывали в трех сменах дистиллированной воды и в трех сменах сернистой воды, по 3 мин. в каждой. Стекла промывали проточной водой в течение 15 минут, по окончании промывали один раз дистиллированной водой Препараты проводили через серию спиртов по 2 раза в каждой' 70%, 96% и 100%, затем высушивали.

Измерение содержания ДНК в окрашенных по Фельгену нейробластах личинок первого возраст:! Яркость свечения ДНК измеряли, используя флуоресцентный микроскоп «Люмам», CCD-камеру «CHIPER» и специальную программу Ista VideoTest Morphology. Содержание ДНК определяли как соотношение интегральной яркости ДНК к накоплению видиосигнала Площадь ядра в mkm определяли с помощью программы Ista VideoTest Morphology

Тесты, примененные для анализа данных по содержанию ДНК в ядрах личиночных иейробластов Анализ данных проводили с помощью компьютерной программы StatAdvisor. Сравнение двух исследуемых выборок проводилось по нескольким параметрам- t-тсст для сравнения значений двух выборок, F-тест для сравнения стандартных отклонений двух выборок, W-тест для сравнения медиан двух исследуемых выборок, тест Колмогорова-Смирнова для сравнения распределении двух выборок.

Статистическая обработка данных, полученных в генетических экспериментах. Статистическую обработку проводили с помощью t-критерия Стыодснта с ^-преобразованием Фишера при уровне значимости р « 0.05 (Лакин, 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Высокая частота аномальных личинок в потомстве - характерная особенность самок Ifl)ts403. Среди потомков как обработанных тепловых шоком (Till), так и интактных самок линии l(!)ts403 при скрещивании с самцами линии и>"В с высокой частотой (18,8 % в опыте и 3,4 % в контроле) встречаются личинки, которые имеют укороченное и утолщенное тело, дефекты развития мальпигиевых сосудов и пищеварительной системы Такие личинки медленно передвигаются и погибают в первом личиночном возрасте (рис. I).

Рисунок 1 Личинки первою ßoipjcta Drowphila mekmngaster а нормальная личинка, б аномальная личинка и i потомства обработанных 1111 самок Il Dis 103 скрещенных с самцами w"B « -аномальная личинка из ikhomcihu самок l(l)ls403. скрещенных с самцами

Ci'¿тм саюпм

~^ - МШ1М1И1 иены сосуды

Частота аномальных личинок в потомстве самок линии дикою типа Canton S после готового воздействия значительно меньше, чем в потомстве самок Ifl)lt403 Он.1 составляет 3,8 % в мерной суточной яйцекладке и не превышает 0,7 % в последующих 2-он. 3-ей и 1-ой суточных яйцекладках, не отличаясь от гакопой в контрольном варианте (6ei пощенсгвия) (Рис 2 и Î)

Динамика /миною noicaiaieia » hoiomctbc обработанных самок lll)i\-IDj имеет друюи характер распределения по сутчным яйцекладкам В погомсте, полученном т первой сугочнон яицекладки, час юта аномальных личинок составляет 18,8 %, ш шорой 12.9 %, из гретьеи - 10 s % а четвертая суточная яйцекладка 01личаегся снижением частогы исследуемого показателя .ю 0,4 % (Рис 2 и 3) Поскольку повышение частоты аномальных личинок мы наблюдали » погомсте полученном в течение грех дней после тепловою воздействия на самок Шн\ )Ч j можно предположить, чю в ooieneie происходит формирование тех детерминант, коюрыс способны повлиять на процесс формирования мальпигиевых сосудов, нарушение которых является наиболее ¡аметной особенностью аномальных личинок Важной особенностью оогенеы /.) melanngpster является активный транспорт макромолекул, в том числе и мРНК, из питающих клеток в растущий ооцит (Lasko, 1999) Участвует ли в этом транспорте продукт гена sbi -неизвестно Возможность учас!ия не только в ядерно-шпоплазматическом транспорт мРНК, но и цитоплазмагическом перемешепии мРНК обсуждается и для других членов семейства NXF (Jun et ni, 2001 ) Так продукт гена NXl-5 у человека не имеет ядерной локализации, как это характерно для фактора ЧАР человека (орюлога белка SBR) Бедок NXF5 обнаружен и основном, в цитоплазме тел нейритов и нейронов типокампа (Jun et al, 2001 )

Характерной особенностью мутантов rio гену sbr являются различные аномалии разлит» которые объясняют нарушениями транспорта мРНК (Korey et al, 2001) Предполагают, чю нарушения в формировании пути аксонов моторных нейронов и дефекты в развитии мышц моп i быть обусловлены снижением ядерного экспорта мРНК для факторов, участвующих i формировании правильною nviH аксоггов моторных нейронов и морфогенезе мышц Примером такого фактора может служить актин, играющий ключевую роль, как в развитии пути аксона, так и мышечных волокон (Korey et al, 2001) Для морфогенеза мальпигиевых сосудов так« немаловажное значение имеют как сам актин, так и гены, включенные в процесс перестрой актинового пигоскелета (actin remodeling) Такие гены участвуют в позднем морфогенезе сосуд.»и и необходимы для процессов элонгации или вытягивания сосудов, принятия ими правильной формы (Blake et al, 1999, Young et at, 1993) Возможно, что тепловая модификация продукта ты \h в ooreiieîe, часшчно снижает транспорт мРНК факторов, участвующих в морфогенез, так каь известно, что материнский продукт гена сохраняется до поздних стадий змбриогенеза (Korey et al 2001), и зиготический продукт SBR (NXF1), возможно, не способен компенсировать угле возникшие нарушения

□/да«» в Canton s

20 18 16 14

частота \2 аномальных 10 личинок % 8

12 3 4 сутки после воздействия

Рисунок 2 Частота аномальных личинок it потомстве обработанных *1Ш самок линий Ц1)1\А1)} и Сатоп S при скрещивании с самцами и"й * - достоверные межлинейные отличия, # • достоверные внутрипимейные отличия между опытом (fill) и контролем (оез воздействия)

18^1 16 14 12 10 8 6 4 2 0

*Н * It

0№403

В Canton S

12 3 4 сутки поело воздействия

Рисунок 3. 4jciora аномальных личинок к потомстве интактных самок линий l(l)ts403 и i'tvutm S при скрещивании с самиами w'li * - достоверные чежлннеиные отличия. № - тостопериые внутрилинейные отличия чеждч опытом (ГШ) и контролем (бег пошеие гоня)

Также нами было установлено, что признак «появление аномальных личинок» является рецессивным проявлением мутации ((Ilis4(l3, также как и большинство лруги\ признаков, за исключением «нарушения расхождения половых хромосом в мейозе мутантных самок», для которого был показан полудоминантный эффект (Никитина и др 2003) Мы показали, что по исследуемому признаку не вырабатывается термотолерантность, то есть появление аномальных личинок в потомстве обработанных ТШ самок I(ljl.s403, так же как и нарушение расхождения половых хромосом в мейозс мутантных самок, не зависит от дефекта в синтезе белков теплового шока, свойственного линии 1(1)1x403, а является самостоятельным проявлением мутации

Аномальные личинки сходного бенотипа появляются и в потомстве от скрещивания самок, несущих нормальные аутосомы, с самцами, несущими компаундные аутосомы /) melanogaster относится к наиболее разработанным объектам в отношении изучения механизмов нерасхождения хромосом Для этого объекта разработаны гибридологические методы анализа нарушений в расхождении всех хромосом генома, в том числе и больших аутосом (Рис 4). Определение частоты нерасхождения больших аутосом у дрозофилы осуществляют путем анализа потомков, полученных от скрещивания самок или самцов имеющих нормальные хромосомы, соответственно с самцами или самками, несущими хромосомные компаунды. Компаундные аутосомы имеют два идентичных плеча присоединенных к одной центромере У самцов, несущих компаундные аутосомы, образуются спермин 4-х типов 1) L L, 0, 2) О, R R, 3) L L. R R, 4) 0. 0 Частота появления каждого типа гамет составляет 0,25 в том случае, если L-L и R R- хромосомы в мейозс ведут себя независимо (Lutolf, Wurgler, 1970, Baldwin, Chovnik, 1967, Evans.. 1971, Gethmann, 1976; Holm, Chovnik, 1975)

Схема анализа нерасхождения no второй хромосоме представлена на рисунке 4 Самок I(l)ts4()3, несущих нормальные хромосомы 2, скрещивали с самцами C(2i)RM, dp, C(2R)RM, рх, >/ е. Мужские гаметы, несущие обе компаундные хромосомы - C(2L), dp + C(2R). рх (25 %) или вообще не содержащие вторую хромосому (25 %), имеют шансы дать жизнеспособное потомство, если встретятся с гаметой самки без хромосомы 2 или с двумя хромосомами 2, соответственно Наличие маркеров хромосомы 2 и 3 позволяет по фенотипу потомков определять их генетическое происхождение

Однако, кроме очень редко появляющихся жизнеспособных потомков, в скрещивании самок с нормальными хромосомами и не только l(lii.\403, но и самок дикого типа (anion S, с самцами, несущими компаундные хромосомы 2, появляются нежизнеспособные потомки, гибнущие на стадии личинки первого возраста. На появление нежизнеспособных потомкои обращали внимание и другие исследователи, полагая, что такие особи несут анеуплоидию по большим аутосомам Мы показали, что аномальные личинки, появляющиеся при использовании отцовской линии, несущей компаундные хромосомы 2, появляются с частотой от 2 % ло 12,3 что согласуется с данными других исследователей (Evans, 1971)

Исходя из схемы скрещивания (Рис 4), аномальные личинки могут быть трнсомнками но одному их плеч хромосомы 2, одновременно являясь моносомиками по другому плечу хромосомы 2 (на рис 4 ячейки 1 и 2) Не исключено также, что аномальные личинки могут быть н полными трнсомнками, появляясь в результате оплодотворения нормальной материнской гаметы смсрмием, несущим обе компаундные хромосомы (C(2l.), dp + C(2R), рх) (на рис 4 ячейка 3) Кроме тою, они могут быть моносомикамн по хромосоме 2. если появятся в результате встречи материнском гаметы с нормальным набором хромосом и отцовской гаметы, не несущей хромосомы 2 (на рис 4 ячейка 4)

Определение хромосомно;о набора аномальных личинок цитоло!ическим чекпом, к сожалению, ока ыл ось безчепешным iu-ta отсутствия метафа) на препаратах Определи п. число хромосом в ингсрфазныч ядрах можно, используя метол ннтерфашон ф/порсскентнон гибридизации т tilu (FISH - fluorescence т siiu hybridization)

Гаметы самца

Ф рх Л» с — рх Ьн ф рх Ьи ф рх Ьн о ,е Ф трхь» ,, в ,

dp т f'x st ле ар 1 Р рх М» л с; . Ptbv dp ^ рх bii 3 т0исомик тетрасомик А моносомик lip' ш рх / и' 5 жизнеспособный дисомик фенотип г?

dp т рХ Ь\\ и те Несбалансированный твтрасомик Несбалансированный твтрасомик 6 жизнеспособный дисомик фенотип bw st трисомик

dp л рх Ам

0 -•— Несбалансированный дисомик Несбалансированный дисомик 7 жизнеспособный дисомик нуллисомик моносомик

фенотип ф рх в?

1'№)нок 4 Схема скрещивания между самками линии ¡(¡¡МОЗ и лампами ("(-' 2И)КМ. рх (I 4) - потомки которые, возможно и являюк» иномальными личинками I - несбалансированная трисомия (по плечу 21.), 2 - несбалансированная трисомия (по плечу 2И), 3 - полная трисомия, 4 моносомия по второй хромосоме (5 - 7) - жизнеспособные особи, появляющиеся в результате 5 - распадения компауноа и восстановления нормальной ируктуры второй хромосомы в отцовской гамете, 6 - потери второй хромосомы в мейозе у самки. 7 - нерасхождения вторых хромосом в чейозе \ самки

PeiVJibTaii.i тбридизацни m \itii интерфашою хрома nina нейробластов личинок нсрмчо поврана со специфическими до1 ejopon и оля i_peiьси_ хромосом ДНК-пробами Нами ом ю проанализировано 378 ишерфазных ядер нейробластов полученных m нервных i.iin ш i следующих категорий личинок

1 Нормальные личинки, полученные при гкрешинании самок I(l/ts4()3 с самцами I(hts40> н ■ ¡ самцами w"ll,

2 Аномальные личинки, полученные при скрещивании самок I(hls401 с самцами w'H

3 Аномальные личинки, полученные при скрещивании самок 1(1 )1\ 4(13 или самок дикого ним ( union S с самцами CQURM. dp; C(2R). рх, st е

4 Аномальные личинки, полученные при скрешипаиии самок К!)1\Ю1 с самцами ( '( 11 ¡K \ I ( ■(3R)RM, п

Для каждою варианта гибридизацию m wtu проводили ne менее чем в грех иошорностих Количсово ядер на iipeiiapaïax варьировало от 3 jo 150, >ффективносз ь гибридизации m мш составила or 10 до №%

В качестве ДНК-проб исполыовали следующие меченные биотипом плдзчидныг Д1И-содержащие специфичные для хромосом 2 или 3 последовательности ДНК 60L>j с(1010с'гс1нук)|дая прнтеломерному участку вюрои хромосомы (2R плечо) I) те/шюцачгег lai hspH3 (bio-hspX3) D melanogasler, локализующийся в призеломерном учаегке хромосомы 3 » районе 63В11 (3L плечо) (сай| http //flyhasc Ью indiana cdii/ bin/tbidq htmPl-BimOOÛlîll), nu Orad2l /> melunoyuMer, соответствующий участку трегьец хромосомы, располагающийся прицепгромерном районе 3L плеча (Марков и лр , 2003)

При анализе препаратов интерфашых ядер, полученных m нейробластов нормаль» >. личинок, после проведения гибридизации m sitit с ДИК-зондом (63В11), специфичным in хромосомы 3, ¡ибридизация прошла успешно в 31 интерфазном ядре lice ядра содержали по i i сшнола Не было обнаружено ни одного ядра содержащего один стлал < mii<ui чаи располагался ближе к периферии ядрц, реже - в центре ядра (Рис 5, г;> Таким образом. не проанализированные иитерфазы, общее число которых составило 31, содержали по дне хромосомы 3

При анали ie препаратов интерфазных ядер нормальных личинок, гибридизованных с ДНК зондом (60D1-2), специфичным для второй хромосомы. 34 ядра имели по два сш нала и, таким образом содержали две хромосомы 2 (Рис 5, «) В ном варианте было оонаружено одно ядро содержащее только один сигнал

Hi аномальных личииок, подученных при скрещивании самок дикого типа < timon S пли самок l(i)ts403 с самцами Г(2!.)/>М, dp, С (2R)RM, рх были подучены препараты интерфазных ядер нейробластов В качестве хромосом-специфичного юнда использовали биотинилированную плазмидную Д11К, содержащую прителомерный участок правого плеча второй хромосомы 60DI -2 Было проанализировано 60 интерфазных ядер, в которых прошла гибридизация, причем все ядра содержали только по одному сигналу (Рис 5, «) Аномальные личинки, появляющиеся в потомс i не самок линий l(!)is403 и (anion S при скрещивании с самцами, несущими компаундные вюрые хромосомы, могу) быть двух генотипов Во-первых, они moi-vt нести моносомшо хромосомы 1 если появятся в результаю оплодотворения яйцеклетки с нормальным набором хромосом о i цовской гаметой, не несущей вторых хромосом (рис 4, ячейка 4) Во-вторых, они могут несш моносомшо только правого плеча хромосомы 2 и одновременно трисомшо левого плеча хромосомы 2, если появляются в результате оплодотворения я ¡i пекл с'тки с нормальным набором хромосом отцовской гаметой, несушей только одну компауидную хромосому ( '(?! ШМ <1р (рис t ячейка 1)

На препаратах интерфашых ядер нейробластов. полученных из аномальных личинок появляющихся в поюмсгве мутантных самок, ксорых скрещивали с самцами ('(il IR\I ( (3R)RM, п, была проведена серия гибридизации m мш с использованием ipex разных хромосом-июцифичных зондов Первые дна хроуюсом-снецифичных юта содержали клонированные юны дрозофилы hspH3 и rud2l, находящиеся соозвегсгпенно в нрнгеломерном и прнцентромерном у -мсгках хромосомы 3 H jtom случае было проанализировано l>7 tuep

Рисунок 5 Результаты i нбрндн Jaumi m sUu на интерфазиых ядрах нейробластов полученных »! нормальных личинок первого возраста (а (Л. аномальных личинок, появляющихся я потомстве самок линии 1(1)н41)3 при скрипим»!»! L самцами C/2DRM, dp. С (2R)RM, рх (в), аномальных личнцр, поивляюшихся » ноюмсгвс самок линий 1(1)<\403 при скрещивании с самцами C(3LiRM. С (3RIRM п I.

е) к аномальных личинок, из потомства обработанных ГШ самок I(l)ti403. скрещенных с самками w'B ;i качестве юндов использовали хромосом специфичные биотинилироваиные Д11К-пробы для второй (и и

ж) И для третьей хромосом (ô j hm-)npH3 ä bio-raißl) Фотографии были получены мнкрошисосьемкой при уче.шчатн объектнна \}(Н> с использованием масляной иммерсии, записаны помощью CCD-камеры Chiper и программы Viiieol'esl FISH в виде файлов отредактированы в про:гамме Adobe Photoshop 7.0

Мы показали, что все ядра содержали один сигнал (Рис 5, л <)), что свидетельствует о том. что аномальные личинки исследуемой категории также несут моносомию левого плеча третьей хромосомы Таким образом, аномальные личинки могли появиться при оплодотворении яйцеклетки с нормальным набором хромосом отцовской гаметой, не несушси третьей хромосомы или несущей только одну компаундную хромосому C(3R)RM, ri

В качестве дополнительного позитивною контроля мы провели гибридизацию ш ми интерфазното хроматина нейробластов аномальных личинок, полученных в потомстве от скрещивания самок 1(1)1*403 с самцами, несущими компаундную третью хромосому, исполыуя в качестве зонда ftio-60D1-2, который является специфичным для хромосомы 2 Такой подход по шолял определять число хромосом 2 у аномальных личинок, полученных в потомстве самцов с комплунлными хромосомами 1. но нормальными хромосомами 2 Поскольку хромосомы 2 были структурно нормальными, как у самок, так и у самцов, можно было ожидать, что, нарушения расхождения хромосом 2, как правило, происходить не будет. Мы пока или, что и> M проанализированных интерф.п 37 содержали по два сигнала и, таким образом, несомненно, несли две хромосомы 2 (РисЛ, е. ж ), н iojm.ko дна ядра содержали по одному ситалу Феиогипичсскос сходи но аномальных шчннок появляющихся к потомстве самок !(1)1\401 после leiuioiioio вощсиствни, с аномальными шчннками в ihm оме тс самцов с компауидными

хромосомами, которых скрещивали с самками различных генотипов, позволило предположить что причиной появления и гибели аномальных личинок может быть нарушение баланса больших аутосом Известно, что трисомии и моносомии приводят к существенным аномалиям развития описываемым, как синдромы, например, трисомия по хромосоме 21 известна, как синдром Дауна v человека (Бочков Н П., 1984) Это предположение подкреплялось тем, что для мутантов l(I)ls403 свойственно нарушение поведения половых хромосом в мейозе (Мамон и др, 1990, Комарова 2001).

Для выявления числа хромосом 2 у аномальных личинок из потомства обработанных ТШ самок l(l)ls403 нами было проанализировано 77 интерфазных ядер, в которых успешно прошла гибридизация с ДНК-зондом, специфичным для хромосомы 2 (bio-60Dl-2) Не было обнаружено ни одного ядра, содержащего два сигнала, все интерфазы содержали один сигнал (Рис.5) и, соответственно, только одну хромосому 2 Такие результаты дают нам основание предполагать, что аномальные личинки, возможно, несут моносомию хромосомы 1 Интригующим казался тот факт, что все аномальные личинки, из которых были сделаны препараты, несут моносомию хромосомы 2 Мы ожидали, что группа аномальных личинок, появляющихся в потомстве обработанных ТШ самок l(l)ls403 будет гетерогенной, то есть различные особи будут нести разные типы анеуплоидии по второй, по третьей а, возможно, и по другим хромосомам генома Имея хромосом-специфичный зонд для хромосомы 3, мы решили также гибридизовать его in silu с интерфазным хроматином нейробластов аномальных личинок, полученных от скрещивания самок 1(1)1\403, подвергнутых ТШ, с самцами WB

Нами бьша проведена серия гибридизаций биотинилированного ДНК-зонда Ью-h.spH} е интерфазным хроматином нейробластов аномальных личинок из потомства обработанных ТГ' самок 1(1)1x403 Всего проанализировано 73 интерфазных ядра, не выявлено ни одного интерфазного ядра содержащего два сигнала, все ядра содержали один сигнал (Рис 5), чы свидетельствовало о наличии только одной хромосомы 3.

Таким образом, по результатам FISH аномальные личинки, появляющиеся в потомстве обработанных ТШ самок 1(1)Ы03, вероятно, несут моносомию как хромосомы 2, так и 3 Для проверки нашей гипотезы мы решили провести дополнительные эксперименты, связанные с измерением содержания ДНК' методом цитофлуорометрии в окрашенных по Фельгену нейробластах нормальных личинок первого возраста и аномальных личинок Мы полагали, что отсутствие двух крупных хромосом генома естественным образом должно сказаться на содержании ДНК в интерфазных ядрах нейробластов аномальных личинок, которое в соответствие с нашей гипотезой должно было быть меньшим, чем в интерфазных ядрах нормальных личинок первого возраста.

Содержание ДНК в окрашенных по Фельгену интерфазных ядрах нейробластов нормальных личинок первого возраста и аномальных личинок, появляющихся в потомстве обработанных ТШ самок lff)t.i403, установленное методом цитофлуорометрии С помощью реакции Фельгена и цитофлуорометрии нами были измерены как содержание ДНК в интерфазных ядрах, так и площадь интерфазных ядер, полученных из нейробластов аномальных и нормальных личинок первого возраста Содержание ДНК определялось как отношение интегральной яркости ядра (измеренной с помощью специальной компьютерной программы Video Test Morphology) к накоплению видеосигнала (накопление сигнала является необходимой процедурой при микровидеосъемке для получения четких контуров ядра)

Для аномальных личинок содержание ДНК было измерено в 50 интерфазных ядрах, полученных от 8 разных личинок Полученные значения содержания ДНК варьировали от 1357,5 до 3134,5 Среднее значение составило 2048.4 Тогда как содержание ДНК в интерфазных ядрах нормальных личинок (анализу подверглись 26 ядер от 7 разных личинок) варьировало от 1419,4 до 7318,5, а среднее значение составило 4401.6, что в 2,1 раза больше, чем среднее значение содержания ДНК в интерфазных ядрах аномальных личинок Также нами была определена средняя площадь интерфазного ядра как аномальных, так н нормальных личинок Оказалось что средняя площадь интерфазных ядер нормальных личинок (152,9 мкм) также больше (в 2,8 раза), чем средняя площадь интерфазных ядер аномальных личинок (53.8 мкм)

Для сравнения двух выборок (норма и аномалии) по содержанию ДНК в ядре, использовали Л01 арифмированные значения сравниваемых выборок В этом случае распределение значении соответствовало нормальному распределению Сравнение двух выборок с использованием тес гон (t-recr для сравнения значений двух выборок, F-тесг л.ш сравнения стандартных отклонений, VV-тесг для сравнения медиан и тест Колмогорова-Смирнова для сравнения распределений программа StatAdvisor) показало, что они различаются при Р 0,05 Таким обраюч статистическая обработка значений содержания ДИК в интерфазных ядрах нормальных н аномальных личинок показала, что нейробласты аномальных и нормальных личинок представляют собой две разные популяции клеток, содержащих ядра с различным количеством ДНК

Итак, исходя из полученных данных, нами было выдвинуто предположение, что аномальные личинки, возможно, являются гаплоидами, появляющимися в результате потери материнских или отцовских хромосом в первом митотическом делении, а возможно и в последующих митотических делениях дробления эмбриона

Для D.mclcinn^aMer известно появление гаплоидного потомства, гибель которого наступает до вылупления личинки Существуют несколько генов, мутации по которым приводят к появлению гаплоидов за счет элиминации отцовских хромосом Гаплоидные эмбрионы материнского происхождения имеют уменьшенные размеры и специфические дефекты кутикулы они способны достигать поздних стадий эмбриогенеза, но не вылупляются (Loppin et al, 2001 > Если аномальные личинки из потомства обработанных ТШ самок-имаго l(l)IU()3 являют.:;, гаплоидными особями, то они, скорее всего, имеют материнское происхождение, посколик гаплоидные особи отцовского происхождения по[ибаюг на ранних сроках эмбриогенеза (Кошта and Endow, 1995)

Формирование веретена первого митотического деления зиготы происходит с участием как материнских, так и отцовских факторов (Loppin et ai. 2001) Существенная роль материнских продуктов в процессах, необходимых для преобразований мужского пронуклеуса и обеспечения первых делений дробления в эмбриогенезе, которые происходят также за счет продуктов запасенных в оогенезе, заставляет взглянуть на функции гена зЬг с этой точки зрения Интересно отметить, что мРНК гена sbr в эмбриогенезе представлена двумя транскриптами (мажорным и минорным) Концентрация мажорного транскрипта уменьшается в процессе эмбриогенеза (Когсч et al, 2001), что предполагает участие белка SBR, соответствующего данному транскрипту, в процессах раннего эмбриогенеза Возможно, функцией данного продукта является предотвращение потерь хромосом в эмбриональных митозах

Так как описанные в литературе гаплоидные особи в лучшем случае доживали до поздних стадий эмбриогенеза, мы предположили, что аномальные личинки в наших экспериментах, гибнущие сразу после вылупления, могут быть мозаиками, у которых часть личиночных тканей имеет гаплоидный набор, а часть - днплоидный возможно, за счет мозаицизма, аномальные личинки оказываются более жизнеспособными, чем полные гаплоиды

Потеря хромосом как отцовского, так и материнского происхождения может происходить не только в первом эмбриональном делении, но и в последующих митозах, приводя к вторичном ганлоидизации У некоторых видов грибов потеря одной хромосомы у диплоидов, возникших при парасексуальном процессе, приводит к обшей хромосомной нестабильности, ведущей к постепенной утрате и других хромосом генома, пока не останется число хромосом, соответствующее гаплоидному набору, что способствует стабилизации генетического материала (Kurichko, 1986) Процесс вторичной i аплоидизации у ч\тантов 1(1)н-403 (.\Ьг"') может быть связан как с недостатком факторов, необходимых для нормального расхождения хромосом в свяш с нарушением транспорта мРНК эгих факторов в оокпек, так и с недостатком нормальною продукта гена sbr, возможно, необходимого для правильною расхождения хромосом в процессе змбрнональных митозов

Ijkiim образом, нарушение ф>нкции прод\кта iска */>/• \ чм-анта !(/)is-W.' в ре>ульта1е теплового воздействия могут быть результатом различных событии

1 Нарушением транспорта тех мРНК, продукты которых вовлечены в контрозь чорфогснс и или стабильного поведения хромосом

2 Изменением функции молекул, взаимодействующих с белком SBR, например сигнальных молекул, втаимодеиствие с которыми показано для фактора I АР ( Yoon et al , 1997), являющеюся ортологом белка SBR Среди таких молекул наибольший интерес проставляет киназа Aurora R необходимая для конденсации хромосом, организации миютического веретена и расхождения хромосом в митозе у IJrmophila melamigusier (Adams et al ,2001, Gict and (¡lover, 2001)

3 Белок SBR може1 быть полифункииональным и участвовать не только в транспорте мРНК. но и расхождении хромосом В настоящий момент в литературе появляются данные свидетельствующие о том, что ряд компонентов ядерно-ци тошшматичеко! о транспорт оказываются вовлеченными и в процесс расхождения хромосом (Kalam A/ad et al, 2003 Babu et al, 2003).

Поскольку y мутанта по гену sbr описаны нарушения структуры хроматина (Купковл, Мамон, 1995), мы не можем исключить влияния этой особенности на эффективноегь используемых нами методов Однако, установление моносомии дня аномальных личинок полученных от родителей, не несущих мутации I(l)is403, в том случае, когда материнской был,г линия Canton S, а отцовской - линия с компаундными хромосомами, свидетельствует о том что причиной характерного фенотипа аномальных личинок может быть нарушение баланса больших аутосом

На сегодняшний день перспективы изучения функционирования продукта жишеино важного гена sbr у Drowphila melanogaster заключаются в определении локализации белка SUR в оогенезе и эмбриогенезе с использованием специфических антител и/ил и конструкции SRR-ГгГ ' Исходя из функциональной аетинности гена, важно определить, те находится белок SIÎR ч интерфазных и делящихся клетках.

ЗАКЛЮЧГ:НИ1

Испольювание методов f'ISH позволило нам определить, что аномальные личинки, с высоком частотой появляющиеся в потомстве обработанных ТШ самок l(I)ts401 IsbrIO) /) пмЬтщачсг и » iiouimubu самцов с компаундными хромосомами, имею! нарушения числа больших .пгосом Содержание ДНК в интерфазных ядрах нейробластов аномальных дичинок, появляющиеся в потомстве обработанных ГШ самок l(l)is403, в 2,1 раза меньше, чем в интерфашых ялрах нормальных личинок Мы предположили, что такие аномальные потомки могут быть как полными гаплоидами, так и частичными, являясь гаплоидно-диплоидными мозаиками Мы показали, что признак «появление аномальных личинок» не зависит от нарушенною синтеза KTIII и представляет собой самостоя!ельной проявление мутации ¡(ПЫОЗ f\br'°J Т а ким он pit ¡ом причиной появления аномальных личинок в потомстве мутантных самок является нарушение поведения хромосом в процессе оплодотворения и/или первых митогических делениях ipoô.iciins эмбриона Исходя из полученных данных, мы полагаем, что ieu sbr у Dro.mphita помимо основной функции ядерного экспорта мРНК. играет значительную роль в обеспечении стабильности хромосом, как в процессе мейоза, так и при митотических делениях

выводы

1 Приник высокая час. юга аномал.ных личинок в потомстве самок lfhi\4()3. полвсршушч [силовому воздействию (37'С , 1ч) является рецессивным Использование последовательною действия температур 35"С и 37'С показало, чю по данному признаку термотолерантность не вырабатывается

2 Аномальные личинки в потомстве подвергнутых тепловому воздсйсшию самок Ml)h4d.! фенотипически не отличаются от личинок, появляющихся в потомстве от скрещивания самок различных линий, несущих нормальные аутосомы, с самцами, несущими компаундные хромосомы 2 или 3 В обоих случаях личинки имеют сходные несовместимые с жизнью морфологические нарушения и погибают сразу после вылупления

3 С помощью метода интерфазной HSH показали, что аномальные личинки появляющиеся в потомстве самок, несущих свободные аутосомы, при скрещивании с самцами, несущими компаундные хромосомы (2 или 3), несут частичную или полную моносомию только по тон хромосоме, коюрая в отцовскоч1 геноме является компаунднон Тогда как аномальные личинки, появляющиеся в потомстие обработанных ТШ самок I(l)ts403 нссуг моносомию как по в торой, так и по третьей хромосоме

4 Измерение содержания Д1ПС методом цитофлуорометрии показало, что в интерфазных ядрах аномальных личинок среднее содержание ДНК в 2,1 раза меньше, чем в интерфажых ядра нормальных личинок Средняя площадь ядер в нейробластах аномальных личинок в 2,8 part меньше, чем у нормальных.

5 Мутация i(Uts403 увеличивает частоту нерасхождения и поiерь хромосом 2 в мешпе

музантных самок, обработанных ТШ 37° в течение I часа

* * *

Автор выражает глубокую и искреннюю благодарность своем\ научному руководителю -Людмиле Андреевне Мамон А также веем сотрудникам лаборатории генетики животных кафедры генетики и селекции СПбГУ и лаборатории физиологической генетики БиНИИ СПбГУ за помошь и поддержку, советы и дискуссии, Борису Николаевичу Кудрявцеву и сотрудникам лаборатории клеточной патологии Института Цитологии за помощь а проведении части экспериментов участие в обсуждении и советы по обработке материала, Александру Беляеву и Олые Раскнной за помощь в освоении методов и ценные советы За предоставленные зонды для m ut и гибридизации автор выражает благодарность Алле Калмыковой, Михаилу Борисовичу Евгеньеву и Антош Маркову

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМП ДИССИРТЛНИИ

1 О M Пу|ачева, Л А Мамон I енетический контроль развития мальпигиевыч сосудов v Dnmnphila meliutoRaster // Онтогенез 2003 Т 34 №5 С 325-342

2 F В Голубкова О M Пугачева. Г П Демина AC Мусорина. Л А Мамин Стерилизующих эффект муташпою аллеля \br"' (Ul)l\4ll3) п компаунде с нулевым аллетем v ымок l)m\aphiln те/чпохимчг //1 енетика 2004 Т 40 № 3 С 1 -8

3 Мамон Л А , Ьондарснко Л В . I регьякона И В . Комарова А В Нимнина I А 11мачева О M , Г'олубкона Е В Последствия клеточного стресса при нарушенном синтезе белков геп.ювого шока у дрозофилы // Вссгн С-Г1стербурр \н-та 1999 Сер 3 Вып 4 (№24) С 100-114

4 Мамон Л А, Никитина ЕА, Пугачева О.М. Голубкова L В Влияние материнского и отцовского организмов на определяемую мутацией l(l)ts-t()3 гепдочувствителыюсть ранних ¡морионовDrmophilamelanogastur //Генетика 1999 Т35 № X С 1078-1085

5 Pougatchova О М , Shershabova А N , Musorina A S, Golubkova V , Belvaev Г А , Mamon L Л Some lethal alleles of Drososphila melanogaster shr gene manifest their lethal effect during the late embryogenesis // 43th Annual Drosophila Research Conference San Diego, California, April 10-14 2002 408C P 141,

6 Pougatchova О M. Mamon, L A Monosomy on chromosome 2 can be the reason of Drosophila mulunogaster larvae with Malpighian tubules abnormalities in a progeny of heat-shocked l(l)ts40 ! females // 17'1' European Drosophila Res Conference Edinburgh, Scotland September 1-5 2001 C8 P68

7 Golubkova F V , Pougatchova О M . Musorma A S , Shershabova A N , Mamon 1. A Dose depend effects of I(l)ts-t03(sbrl0) allele of sbr locus in Drosophila melanoyister // 44lh Annual Drosophila Resaerch Conference Chicago, March 5-9,2003 P 109

8 Мамон Л A . Кьергаард А В , Глубкова E В , 11угачева О М . Иванкова Н А , Касаткина В В Перекрывающиеся компоненты ядерно-цитопла!матического транспорта и аппарата деления клетки // Цитология, 2003 Т 45 №9 С 889-890

9 Мамон Л А , Комарова А В , Никитина Е А , Третьякова И В Блрабанова Л В , Бондарепко Л В , Пугачева О М . Голубкова Е В Доминантные и рецессивные эффекты мутации Ifl)ti-I03 v Drmnphth melimoguster Н Тезисы докладов 2-ю съезда ВОГиС Санкт-Петербург 1-5 феврали 2000 Т 2 С.52-53

10 Mamon L А , Komarova А V , Nikitina Е А , Tretyakova I V , Golubkova Г V Pugatchova О М . Gudkova A A Dominant effect1; of !f!)t\401 mutation in Dте/ипоцииег / 41 th Annual Drosophila Research Conference Pittsburg Pennsylvania USA March 22-26 2000 412 С

11 LA Mamon, E A Nikitina, О M Pugatchova, П V Golubcova The influence of III Hs403 allele in the heat induction of the different malformation in Drmophila те/апоцамег development II 40th Annual Drosophila Research Conference March 24-28 1999 Bellevue WA USA P73IA

12 Mamon L A , Nikitina E A , Golubcova E V , Pugachova О M Heat shock induced cellular and early embrvonic death in Drosophila melanogaster /v-mutant strain // Pathophysiology -1998 -V 5 (Supplement 1) -P 9

Подписано в печать 06.05.04. Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная Печать офсетная. . Усл. печ л. 0,93. Тираж 60 экз. Заказ

ЦОП типографии Издательства СПбГУ 199061, С-Петербург, Средний пр , 41.

Hi 13 о 6 з

РНБ Русский фонд

2005-4 6124

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пугачева, Ольга Марковна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Молекулярно-генетическая и функциональная характеристика мутации l(l)ts403 (sbr 10) у Drosophila melanogaster.

1.1. Плейотропный эффект мутации l(l)ts403 (sbr 10).

1.1.1 Влияние мутации l(l)ts403 (sbr 10) на экспрессию генов

БТШ после ТШ.

1.1.2 Влияние мутации l(l)ts403 на плодовитость самок.

1.1.3 Влияние мутации l(l)ts403 на пролиферацию и конденсацию хроматина в соматических клетках у личинок, подвергнутых ТШ.

1.1.4 Влияние мутации l(l)ts403 на расхождение и потери половых хромосом в мейозе у самок, подвергнутых ТШ.

1.1.5 Влияние мутации l(l)ts403 на формирование долговременной

• памяти.

1.1.6 Исследование термотолерантности к ТШ у особей линии l(l)ts403 по различным критериям.

1.2. Генетические и цигогенетические данные о картировании локуса small bristles (sbr), содержащего мутацию l(l)ts403.

1.3. Организация гена sbr (nxfl) у Drosophila melanogaster.

1.4. NXF-зависимый экспорт мРНК.

1.4.1 Белки семейства NXF.

1.4.2 Механизм NXF-зависимого экспорта мРНК.

1.4.3 Нарушение NXF-зависимого транспорта мРНК.

• 2. Генетический контроль развития Мальпигиевых сосудов у йгоБоркИа те1апо£а81ег.

2.1. Ренальные сосуды насекомых

2.2. Формирование мальпигиевых сосудов в эмбриогенезе В.те1апо%аз1ег.

2.3. Генетический контроль формирования мальпигиевых сосудов в эмбриогенезе.

2.3.1 Обособление клеток будущих сосудов и формирование сосудистой закладки.

2.3.2 Регуляция клеточной пролиферации в примордиуме сосуда. Роль внутриклеточных сигналов в определении пролиферации клеток.

2.3.3 Регуляция клеточной пролиферации в примордиуме сосуда. Роль концевой клетки: клеточная спецификация, латеральное ингибирование, асимметричное деление клеток и их связь с митогенными сигналами.

2.3.4 Эндорепликация и рост клеток.

2.3.5 Морфогенетические изменения. Конвергентное удлинение, приводящее к вытягиванию сосудов.

2.3.6 Морфогенетические изменения. Пространственная организация сосудов в полости тела.

3. Мейоз и оплодотворение у самок йгоБорИИа те1<то£а$1ег. Механизмы расхождения хромосом.

3.1 Особенности мейоза у ОгозорИПа melanogaster.

3.2 Генетический контроль расхождения хромосом в первом деление мейоза у самок.

3.2.1 Расхождение хиазматических гомологов на ацентросомальном веретене.

3.2.2 Когезия сестринских хроматид в мейозе I.

3.3.3 Расхождение ахиазматических гомологов.

3.3.4 Расхождение ахизматических негомологов

3.3.5 Генетический контроль расхождения хромосом во втором делении мейоза. 56 3.4 Генетический контроль оплодотворения и первого митотического деления у Drosophila melanogaster.

3.4.1 Формирование мужского пронуклеуса.

3.4.2 Особенности первого митотического деления у Drosophila melanogaster. 58 4. Резюме

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Мутации и линии Drosophila melanogaster, использованные в работе.

2. Получение реципрокных гибридных самок Canton SH(l)ts403; bw; st.

3. Тепловая обработка самок-имаго.

4. Молекулярно-генетические методы.

4.1 Трансформация бактериальных клеток плазмидами.

4.2 Минивыделение плазмидной ДНК.

4.3 Олигонуклеотидное мечение ДНК-проб биотином.

5. Цитогенетические методы.

5.1 Приготовление препаратов интерфазных ядер.

5.2 Гибридизация in situ интерфазного хроматина с меченым ДНК-зондом.

5.3 Флуоресцентное окрашивание ДНК по Фельгену.

5.4 Измерение содержания ДНК в окрашенных по Фельгену нейробластов личинок первого возраста.

6. Статистические методы обработки данных.

6.1 Статистическая обработка данных, полученных в генетических экспериментах.

6.2 Тесты, примененные для анализа данных по содержанию ДНК в ядрах личиночных нейробластов.

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Определение частоты нерасхождения аутосом 2 в оогенезе у самок D.melanogaster линии l(l)ts403 с использованием тестерной линии, несущей компаундные хромосомы.

2. Определение частоты встречаемости аномальных личинок в потомстве самок линии l(l)ts403 в тесте на нерасхождение больших аутосом у дрозофилы.

3. Результаты гибридизации in situ интерфазного хроматина нейробластов аномальных личинок, полученных при скрещивании самок линии l(l)ts403 с самцами, несущими компаундные, либо 2-ую, либо 3-ю хромосомы, с биотинилированными ДНК-пробами.

4. Изучение характера доминирования и формирования термотолерантности по признаку частота эмбриональной смертности в потомстве обработанных и интактных самок линии l(l)ts403,

4.1 Частоты эмбриональной гибели в потомстве самок линии l(l)ts403.

4.2 Характер доминирования по признаку «частота эмбриональной гибели».

4.3 Изучение формирования термотолерантности по признаку «частота эмбриональной гибели» в линии l(l)ts403.

5. Изучение характера доминирования и формирования термотолерантности по признаку появление аномальных личинок с высокой частотой в потомстве обработанных ТШ самок линии l(I)ts403.

5.1 Определение частоты встречаемости аномальных личинок в потомстве обработанных ТШ самок линии l(l)ts403.

5.2 Характер доминирования по признаку аномальные личинки в линии l(l)ts403.

5.3 Изучение термотолерантности по признаку аномальные личинки в линии l(l)ts403.

6. Результаты гибридизации in situ интерфазного хроматина нейробластов личинок дрозофилы первого возраста из потомства обработанных тепловым шоком самок линии l(l)ts403 со специфическими для хромосом 2 и 3 биотинилированными ДНК-пробами.

7. Измерение содержания ДНК в окрашенных по Фельгену интерфазных ядрах нейробластов нормальных личинок первого возраста и аномальных личинок, появляющихся в потомстве обработанных ТШ самок l(l)ts403 методом цитофлуорометрии.

Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ

1. Тепловой шок индуцирует нерасхождение хромосомы 2 в мейозе у самок l(l)ts403. Выявление морфологически аномальных личинок с нарушением хромосомного набора.

2. Нарушение баланса больших аутосом, как возможная причина появления аномальных личинок.

3. Тепловой шок индуцирует появление аномальных личинок с высокой частотой в потомстве самок линии l(l)ts403.

4. Определение генетической природы аномальных личинок, появляющихся с высокой частотой в потомстве обработанных ТШ самок l(l)ts403.

5. Влияние мутации l(l)ts403 на нарушения хромосомного набора.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетическая природа аномалий личиночного развития в потомстве самок l(l)ts403(sbr10) у Drosophila melanogaster"

Актуальность проблемы. Эволюционно-консервативные гены, вовлеченные в контроль фундаментальных процессов жизнедеятельности клетки, как правило, характеризуются широким плейотропн^узц эффектом. Механизмы таких эффектов определить довольно трудно, так как их причинами являются дефекты, нарушающие связи многоуровневой цепи регуляции основных внутриклеточных функций. Более того, гены, контролирующие жизненно важные процессы в клетке, часто являются полифункциональными, так как имеют несколько продуктов (транскригггов), появляющихся в результате альтернативного сплайсинга.

Ген яЬг у ВгоБоркПа melanogaster является представителем семейства эволюционно-консервативных жизненно важных генов и имеет ортологов у различных групп эукариотических организмов от дрожжей (Мех67) до человека {Тар) (обз. Третьякова и др., 2001). Одной из основных функций гена бЬг является участие в ядерном экспорте мРНК (\Vilkie е1 а!., 2001).

Мутантный аллель 1(1)1б403 (сининим - яЬг10), представляющий точковую замену в гене яЬг, имеет плейотропный эффект и в условиях повышенной температуры влияет на синтез белков теплового шока (БТШ) (Еу§еп'еу е1 а!., 1985), конденсацию хроматина (Мамон, Куцкова, 1993а), пролиферативную активность клеток (Мамон, Куцкова, 19936), эмбриональное развитие и морфогенез (Голубкова, 2004), расхождение половых хромосом в мейозе у самок (Мамон и др., 1990) и самцов (Комарова, 2001). Механизм влияния данной мутации на расхождение хромосом, также как и роль белка в расхождении хромосом остаются неизвестными. Неизвестно также, влияет ли мутация 1(1)1ъ403 при действии тепловым шоком (ТШ) на взрослых мутантных самок на расхождение аутосом в мейозе и на расхождение хромосом в процессе эмбриональных митозов. Среди фенотипических проявлений мутантного аллеля 1(1)1x403 при действии ТШ на ооциты взрослых самок особое место занимает высокая (до 18 %) частота гибели потомков на личиночной стадии развития. Потомки подвергнутых тепловому воздействию самок погибают в первом личиночном возрасте и имеют характерные нарушения, прежде всего, мальпигиевых сосудов. Нами были выдвинуты два предположения о причинах появления таких аномальных личинок. Учитывая то, что продукт гена sbr функционирует как транспортер мРНК из ядра в цитоплазму, мы предположили, что дефекты морфогенеза у аномальных личинок могут быть связаны с нарушением транспорта в ооцитах тех мРНК, продукты которых необходимы для нормального развития личиночных органов.

В основе второго предположения лежит идея о том, что аномальные личинки могут иметь нарушения хромосомного набора. Такое, казалось бы, не очевидное предположение возникло благодаря уже имеющимся фактам.

Во-первых, оказалось, что аномальные личинки фенотипически идентичны личинкам, которые появляются в потомстве при анализе нерасхождения больших аутосом у D.melanogaster гибридологическим методом. Используя данный метод для определения нарушений в расхождении аутосом у самок, скрещивают самок, несущих свободные аутосомы, с самцами, несущими компаундные хромосомы 2 или 3 (Evans, 1971). В литературе рассматривалась гипотеза о том, что возможной причиной личиночной смертности потомков при использовании гибридологического метода анализа нарушений расхождения больших аутосом у самок D.melanogaster является нарушение хромосомного набора у таких потомков (Evans, 1971). Так как в потомстве, один из родителей которого несет компаундные хромосомы, велика вероятность появления анеуплоидных потомков, мы предположили, что аномальные личинки из потомства мутантных самок l(l)ts403 также могут иметь нарушения хромосомного набора, например, быть трисомиками или моносомиками по какой-либо из больших аутосом.

Во вторых, было показано, что мутация l(l)ts403 влияет на расхождение половых хромосом в мейозе как у самок (Мамон и др., 1990), так и у самцов (Комарова, 2001). Известно, что анеуплоидия по аутосомам часто проявляется в различных врожденных аномалиях развития (Бочков и др., 1984), поэтому наряду с дефектами развития мы рассматриваем и гипотезу нарушения числа хромосом в кариотипе аномальных личинок из потомства мутантных самок l(l)ts403.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы является выяснение генетической природы аномальных личинок летального фенотипа, появляющихся с высокой частотой в потомстве обработанных ТШ самок-имаго линии l(l)ts403 и имеющих дефекты в развитии мальпигиевых сосудов. В связи с этим необходимо решить следующие задачи:

1. Дать характеристику признака «высокая частота аномальных личинок» в потомстве самок l(l)ts403, подвергнутых тепловому воздействию: определить характер наследования, а также оценить способность к формированию термотолерантности по данному признаку.

2. Используя метод FISH (флуоресцентная гибридизация in situ), исследовать хромосомный набор аномальных личинок, появляющихся в потомстве самок l(l)ts403.

3. Исследовать хромосомный набор аномальных личинок, появляющихся при скрещивании самок, несущих свободные аутосомы, с самцами, имеющими компаундные хромосомы (2 или 3).

4. Определить содержание ДНК и размер ядер в клетках нервных ганглиев у нормальных и аномальных личинок первого возраста, появляющихся в потомстве обработанных ТШ самок l(l)ts403.

Научная новизна работы. Впервые показано, что у D. melanogaster особи, несущие частичную или полную моносомию по какой-либо из больших аутосом, способны доживать до первого личиночного возраста, и имеют дефекты в развитии мальпигиевых сосудов. Аномальные личинки, имеющие характерный летальный фенотип, появляются в потомстве обработанных ТШ самок-имаго l(l)ts403 с высокой частотой и имеют нарушения хромосомного набора, возможно являясь частичными или полными гаплоидами. Установлено, что признак появление аномальных личинок является рецессивным и не зависит от нарушений в синтезе белков теплового шока.

Практическая ценность работы. Определение частоты аномальных личинок с характерными нарушениями морфологии мальпигиевых сосудов можно предложить для разработки нового экспресс-метода оценки анеугенного действия различных факторов на D. melanogaster.

Метод хромосом-специфичной интерфазной флуоресцентной in situ ДНК-гибридизации адаптирован для выявления состава хромосомного набора у личинок первого возраста D. melanogaster. Данные о связи морфологических нарушений развития выделительной системы с изменениями хромосомного набора могут иметь значение при изучении механизмов возникновения аномалий развития, как у различных модельных объектов, так и у человека.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Пугачева, Ольга Марковна

выводы

1. Признак высокая частота аномальных личинок в потомстве самок l(l)ts403, подвергнутых тепловому воздействию (37°С, 1ч), является рецессивным. Использование последовательного действия температур 35°С и 37°С показало, что по данному признаку термотолерантность не вырабатывается.

2. Аномальные личинки в потомстве подвергнутых тепловому воздействию самок l(l)ts403, фенотипически не отличаются от личинок, появляющихся в потомстве от скрещивания самок различных линий, несущих нормальные аутосомы, с самцами, несущими компаундные хромосомы 2 или 3. В обоих случаях личинки имеют сходные несовместимые с жизнью морфологические нарушения и погибают сразу после вылупления.

3. С помощью метода интерфазной FISH показали, что аномальные личинки, появляющиеся в потомстве самок, несущих свободные аутосомы, при скрещивании с самцами, несущими компаундные хромосомы (2 или 3), несут частичную или полную моносомию только по той хромосоме, которая в отцовском геноме является компаундной. Тогда как аномальные личинки, появляющиеся в потомстве обработанных ТШ самок l(l)ts403 несут моносомию как по второй, так и по третьей хромосоме.

4. Измерение содержания ДНК методом цитофлуорометрии показало, что в интерфазных ядрах аномальных личинок среднее содержание ДНК в 2,1 раза меньше, чем в интерфазных ядрах нормальных личинок. Средняя площадь ядра у аномальных личинок также меньше, чем у нормальных в 2,8 раза.

5. Мутация l(l)ts403 увеличивает частоту нерасхождения и потерь хромосом 2 в мейозе мутантных самок, обработанных ТШ 37° в течение 1 часа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Использование методов FISH позволило нам определил», что аномальные личинки, с высокой частотой появляющиеся в потомстве обработанных ТШ самок l(l)ts403 (sbr 10) D. melanogaster и в потомстве самцов с компаундными хромосомами, имеют нарушения числа больших аутосом. Содержание ДНК в интерфазных ядрах нейробластов аномальных личинок, появляющиеся в потомстве обработанных Ш1 самок l(l)ts403, в 2,1 раза меньше, чем в интерфазных ядрах нормальных личинок. Мы предположили, что такие аномальные потомки могут быть как полными гаплоидами, так частичными, являясь гаплоидно-диплоидиыми, мозаиками. Мы показали, что признак «появление аномальных личиною) не зависит от нарушенного синтеза БШ1 и представляет собой самостоятельной проявление мутации l(l)ts403 (sbr 10). Таким образом, причиной появления аномальных личинок в потомстве мугангных самок является нарушение поведения хромосом в процессе оплодотворения и/или первых митотических делениях дробления эмбриона Исходя из полученных данных, мы полагаем, что ген sbr у Drosophila melanogaster, помимо основной функции ядерного экспорта мРНК, играет значительную роль в обеспечении стабильности хромосом, как в процессе мейоза, так и при митотических делениях.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пугачева, Ольга Марковна, Санкт-Петербург

1. Бочков Н.П., Захаров А.Ф., Иванов В.И. Медицинская генетика (руководство для врачей) // М.: Медицина. 1984. С. 123-152.

2. Голубкова Е.В. Влияние аллелей гена small bristles (sbr) на репродуктивные функции самок и морфогенез у Drosophila melanogaster. Автореф. дис. канд. Биол. Наук. Санкт-Петербург: СПбГУ. 2003. 17 с.

3. Голубкова Е.В., Пугачева О.М., Демина Е.П., Мусорина A.B., Шершабова А.Н., Мамон JI. А. Стерелизующий эффект мутантного ал л е ля sbr10 (l(l)ts403) в компаунде с нулевым аллелем у самок Drosophila melanogaster II Генетика. 2004. - Т. 40, №3. - С. 1-8.

4. Гришаева Т.М., Богданов Ю.Ф. Генетический контроль мейоза у дрозофилы // Генетика. 2000. - Т. 36, №10. - С. 1301-1321

5. Евгеньев М.Б., Денисенко О.Н. Влияние /^-мутации на экспрессию генов, индуцируемых тепловым шоком у Drosophila melanogaster. Сообщение III. Синтез белков, родственных БТШ70 // Генетика. 1990. - Т. 26, № 2. - С. 266-271.

6. Жимулев И.Ф., Бгатов A.B., Фомина О.В., Крамере П.Г.Н., Ээкен Я., Похолкова Г.В. Генетические локусы в интервале ras-dsh Х-хромосомы Drosophila melanogaster II Докл. АН СССР. 1980а. - Т.255, №3. - С.738-742.

7. Комарова A.B. Изучение нерасхождения и потерь половых хромосом в мейозе у Drosophila melanogaster при нарушении синтеза белков теплового шока: Автореф. дис. . канд. Биол. Наук. Санкт-Петербург: СПбГУ. 2001. 17 с.

8. Куцкова Ю.А., Мамон JI.A. Последствия экстремальных воздействий на соматические клетки Drosophila melanogaster в условиях нарушенного синтеза белков теплового шока // Генетика. 1996. - Т.32, №10.-С.1406- 1416.

9. И. Левин A.B., Лозовская Е.Р., Евгеньев М.Б. Влияние высокой температуры на экспрессию генов, индуцируемых тепловым шоком у Drosophila melanogaster. Сообщение II. Анализ действия /^-мутации // Генетика.- 1984,- Т.20, №6.- С.949-953.

10. Лозовская Е.Р., Левин A.B., Евгеньев М.Б. Тепловой шок у дрозофилы и регуляция активности генома // Генетика. 1982. - Т. 18, N11. -С. 1749-1762

11. Мамон Л.А., Барабанова Л.В. Неслучайное распределение спонтанных и индуцированных высокой температурой рецессивных летальных мутаций в Х-хромосоме дрозофилы // Генетика. -1991. Т.27, №9. - С. 1541-1546.

12. Мамон Л.А., Куцкова Ю.А Роль белков теплового шока в восстановлении клеточной пролиферации после воздействия высокойтемпературой на личинок D. melanogaster II Генетика. 19936. - Т.29, №5. -С.791-798.

13. Мамон Л.А., Куцкова Ю.А. Роль белков теплового шока в восстановлении индуцированных высокой температурой повреждений митотических хромосом у D. melanogaster И Генетика. 1993а. - Т.29, №4. -С.606-612.

14. Мамон JI.A., Комарова A.B., Бондаренко Л.В., Барабанова Л.В., Тихомирова М.М. Формирование термотолерантности у линии Drosophila melanogaster l(l)ts403 с нарушенным синтезом белков теплового шока // Генетика. 1998. - Т.34, №7. - С.920-928.

15. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование. М.: Мир. 1984. 479 с.

16. Марков A.B., Захаров A.A., Галкин А.П., Струнников A.B., Смирнов А.Ф. Локализация комплексов когезии в политенных хромосомах Drosophila melanogaster связана с междисками // Генетика. 2003. - Т. 39, №9 - С. 1-9

17. Маркова Е.Г. Генетическая и молекулярная характеристика ряда летальных аллелей гена small bristles у Drosophila melanogaster: Выпускная квалификационная работа (Магистерская диссертация). Санкт-Петербург: СПбГУ. 2002. 72 с.

18. Никитина Е.А., Токмачева Е.В., Саватеева-Попова Е.В. Тепловой шок на стадии развития центральных структур мозга Drosophila: формирование памяти у мутанта l(l)ts403 Drosophila melanogaster II Генетика. 20036. - Т. 39, №1. - С.25-31.

19. Похолкова Г.В., Жимулев И.Ф., Графодатская В.Е., Фомина

20. В., Баричева Э.М., Семешин В.Ф., Беляева Е.С. Цитогенетическое изучение района 9Е-10А Х-хромосомы Drosophila melanogaster. Сообщение III. Генетическое картирование локусов в интервале ras-dsh II Генетика. -1982. Т. 18, №2. - С.255-262

21. Семешин В.Ф., Жимулев И.Ф., Беляева Е.С. Цитогенетическое изучение района 9Е-10А Х-хромосомы Drosophila melanogaster. Сообщение

22. Морфология района и картирование делеций, затрагивающих диск 10А1-2 //Генетика. 1979. -Т.15, №10. - С.1784-1792.

23. Страшнюк В.Ю., Татлина О.В., Шахбазов В.Г. Параллельные изменения пуфинга политенных хромосом и биоэлектрических свойств клеточных ядер в слюнных железах Drosophila melanogaster после теплового шока // Генетика. 1990. - Т.26, №5. - С.874-878.

24. Тихомирова М.М., Мазур Е.Л., Барабанова Л.В., Мамон Л.А. Температурная модификация мутационного процесса и белки теплового шока // Генетика. 1993. - Т.29, N2. - С.280-287.

25. Третьякова И.В., Лезин Г.Т., Маркова Е.Г., Евгеньев М.Б., Мамон Л.А. Продукт гена sbr у Drosophila melanogaster и его ортологи у дрожжей и человека // Генетика. 2001. - Т. 37, №6. - С. 725-736.

26. Цю На. Аномалии развития у потомков при действиивысокой температуры на самок Drosophila melanogaster, различающихся по системебелков теплового шока. Выпускная квалификационная работа. СПбГУ. 1995. 64 С.

27. Abrell S., Carrera P., Jackie H. A modifier screen of ectopic Kruppel activity identifies autosomal Drosophila chromosomal sites and genes required for normal eye development // Chromosoma. 2000. - V. 109, №5 - P. 334 - 342.

28. Afshar K., Barton N.R., Hawley R.S., Goldstein L.S.B. DNA binding and meiotic chromosomal localization of the Drosophila Nod kinesin-like protein //1995. Cell. - 81. - V. 129-138.

29. Ainswort C., Wan S., Skaer H. Coordinating cell fate and morphogenesis in Drosophila renal tubules // Phil. Trans. R. Soc. (ser B). 2000. -V. 355.-P. 931-937.

30. Archer J., Solomon F. Deconstructing the microtubule organizing center. Cell. 1994. -V. 76. -P. 589-591.

31. Arking R. Temperature-sensitive cell-lethal mutants of Drosophila: isolation and characterization // Genetics. 1975. - V.80, N 3. - P.519-537.

32. Ashburner M. Patterns of puffing activity in salivary gland chromosomes of Drosophila. V. Responses to environmental treatment // Chromosoma. 1970. - V.31, N 3. - P.356-376.

33. Auger D.L., Newton K.J., Birchler J.A. Nuclear gene dosage effects upon the expression of maize mitochondrial genes // Genetics. 2001. V.157, №4.-P. 1711-1721.

34. Austin J., Maine E., Kimble J. Genetics of intercellular signalling in C.elegans II Development. 1989. - Suppl. -P.53 - 57.

35. Babu J.R., Jeganathan K.B., Baker D.J. et al. Rael is an essential mitotic checkpoint regulator that cooperates with Bub3 to prevent chromosome missegregation // J Cell Biol. 2003. - V. 160, №3. - P. 341-353.

36. Baker B.S., Carpenter A.T.C. Genetic analysis of sex chromosomal meiotic mutants in Drosophila melanogaster И 1972. Genetics. - V. 71. - P. 255-286.

37. Baldwin M., Chovnick A. Autosomal half-tetrad analysis in Drosophila melanogaster // Genetics. 1967. V. 55. - №2. - P.277-293.

38. Bard J. B. L., McConnell J. E., Davies J. A. Towards a genetic basis for kidney development // Mech. Devel. 1994. - V.48. - P. 3 - 11.

39. Baumann P., Skaer H. The Drosophila EGF receptor homolog (DER) is required for Malpighian tubules development // Development 1993 Suppl. P. 65-75.

40. Bickel S.E., Wyman D.W., Miyazaki W.Y., Moore D.P., Orr-Weaver T.L. Identification of ORD, a Drosophila protein essential for sister chromatid cohesion // 1996. EMBO J. - V. 15. - P. 1451-1459.

41. Bickel S.E., Wyman D.W., Orr-Weaver T.L. Mutational analysis of the Drosophila sister-chromatid cohesion protein ORD and its role in the maintenance of centromeric cohesion. 1997. -Genetics.-V. 146. P. 1319-1331.

42. Birchler J.A., Newton K.J. Modulation of protein level in chromosomal dosage series of maize: The biochemical basis of aneuploid syndromes // Genetics. 1981. V. 99. P. 625-637.

43. Birchler J.A., Bhadra U., Bhadra M.P., Auger D.L. Dosage-dependent gene regulation in multicellular eukaryotes: implications for dosage compensation, aneuploid syndromes, and quantitative traits // Dev Biol. 2001. - V. 15, №234(2). - P. 275-288.

44. Blake K. J., Myette G., Jack J. The products of ribbon and raw are necessary for proper cell shape and cellular localization of nonmuscle myosin in Drosophila // Devel. Biol. 1999. V. 203. P. 177 188.

45. Brown J.A., A.Bharathi, A.Ghosh, W.Whalen, E.Fitzgerald, and R.Dhar A mutation in the Schizosaccharomyces pombe rael gene causes defects in poly(A)+ RNA export and in the cytoskeleton. // J.Biol.Chem. V.270, №13,1995, P.7411-7419.

46. Callaini G., Riparbelli M.G. Fertilization in Drosophila melanogaster. centrosome inheritance and organization of the mitotic spindle // Dev Biol.1996.-V. 176.-P. 199-208.

47. Calvi B.R., Lilly M.A., Spradling A.C. Cell cycle control of chorion gene amplification// Genes Devel. 1998. V. 12. P. 734-744.

48. Campos-Ortega, J. A. Early neurogenesis in Drosophila melanogaster. // Development of Drosophila melanogaster / Eds. M. Bate, A. Martinez Arias. N.Y.: Cold Spring Harbor Lab. Press, 1993. P. 1091-1130.

49. Carrera P., Abrell S., Kerber B. et al. A modifier screen in the eye reveals control genes for Kriippel activity in the Drosophila embryo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V.95. P. 10779 10784.

50. Christian J.L. BMP, Wnt and Hedgehog signals: how far can they go? // Curr Opin Cell Biol. 2000 V. 12. №2. P.244-249.

51. Cullen C.F., Ohkura H. Msps protein is localized to acentrosomal poles to ensure bipolarity of Drosophila meiotic spindles // Nat. Cell. Biol. -2001.-V. 3.-P. 637-642.

52. Deng W.M., Althauser C., Ruohola-Baker H. Notch-Delta signaling induces a transition from mitotic cell cycle to endocycle in Drosophila follicle cells //Development. 2001. V. 128. P. 4737-4746.

53. Dow J. A. T., Davies S. A., Sozen M. A. Fluid secretion by the Drosophila Malpighian tubule // Am. Zool. 1998. V. 38. P. 450 460.

54. Duffy J., Perrimon N. The Torso pathway in Drosophila: lessons on receptor tyrosine kinase signaling and pattern formation // Devel. Biol. 1994. V. 166. P. 380 395.

55. Duronio R.J. Establishing links between developmental signaling pathways and cell-cycle regulation in Drosophila II Curr. Opin. Genet. Devel. 1999. V.9. P. 81-88.

56. Eeken J.C., Sobels F.H., Hyland V., Schalet A.P. Distribution of MR-induced sex-linked recessive lethal mutations in Drosophila melanogaster II Mutat. Res. 1985. - V.150, N 1-2. - P.261-275.

57. Duronio R.J., Bonnette P.C., O'Farrell P.H. Mutations of the Drosophila dDP, dE2F, and cyclin E genes reveal distinct roles for the E2F-DP transcription factor and cyclin E during the Gl-S transition // Mol. Cell. Biol. 1998. V. 18 P. 141-151.

58. Edgar B.A., Lehman D.A., O'Farrell P.H. Transcriptional regulation of string (cdc25): a link between developmental programming and the cell cycle //Development. -1994. V.120. - P. 3131-3143.

59. Evans W.H. Preliminary studies of autosomal disjunction in females of Drosophila melanogaster II Dros.Inter.Ser. 1971. №6. P. 123-124.

60. Evgenev M.B., Levin A.V., Losovskaya E.R. The analysis of temperature-sensitive (ts) mutation influencing the expression of heat shock-inducible genes in Drosophila melanogaster II Mol. Gen. Genet. -1979.- V.176, N2. P.275-280.

61. Evgen'ev M.B., Zatsepina O.L., Titarenco H. Autoregulation of heat-shock system in Drosophila melanogaster. Analysis of heat-shock responsce in atemperature sensitive cell lethal mutant // FEBS Lett. 1985. V.188, N2. P.286-290.

62. Fahmy O.G., Fahmy M. New mutants report // Dros. Inf. Serv. -1959.-V.33.-P.82-94.

63. Felix M., Antony C., Wright M., Maro, B. Centrosome assembly in vitro: Role of g-tubulin recruitment in Xenopus sperm aster formation // J. Cell BioL- 1994.-V. 124.-P. 19-31.

64. Feng Y., S.R.Wente, and P.W.Majerus Overexpression of the inositol phosphatase SopB in human 293 cells stimulates cellular chloride influx and inhibits nuclear mRNA export. // Proc. Natl. Acad. Sei. 2001. V.98, №3. - P. 875-879.

65. Filler G., Kotecha S., Milanska J., Lawson M.L. Trisomy 21 with hypercalcemia, hypercalciuria, medullary calcinosis and renal failure-a syndrome? // Pediatr Nephrol. 2001. V. 16. №1. P. 99-100.

66. Fitch K.R., Yasuda G.K., Owens K.N., Wakimoto B T. Paternal effects in Drosophila: implications for mechanisms of early development // Curr Top Dev Biol. 1998. V. 38. P. 1-34.

67. Fitch K.R., Wakimoto B.T. The paternal effect gene ms(3)sneaky is required for sperm activation and the initiation of embryogenesis in Drosophila melanogaster H Dev. Biol. 1998. - V. 197. - P. 270-282.

68. Foe V. E. Mitotic domains reveal early commitment of cells in Drosophila embryos // Development. 1989. V. 107. P.l -22.

69. Freeman M. Cell determination strategies in the Drosophila eye // Development 1997. V.124. P. 261 -270.

70. Gaul U., Weigel D. Regulation of Krüppel expression in the anlage of the Malpighian tubules in the Drosophila embryo // Mech. Devel. 1990. V. 33. P. 57 67.

71. Geer B.W., S.W.McKechnie, and M.L.Langevin Regulation of sn-glycerol-3-phosphate dehydrogenase in Drosophila melanogaster larvae by dietary ethanol and sucrose. // J.Nutr. V.113, №8 - 1983. - P. 1632-1642.

72. Geit R., Glover D.M. Drosophila Aurora B Kinase is required for histone H3 phosphorylation and condensin recruitment during chromosome condensation and to organize the central spindle during cytokinesis // J Cell Biol. 2001. V. 152, №4. P. 669-681.

73. Gethmann R.C. Meiosis in male Drosophila melanogaster. II. Nonrandom segregation of compound-second chromosomes // Genetics. 1976. V. 83. №4. P. 743-751.

74. Gethman R.C. The genetic analysis of a chromosome specific meiotic mutant that permits a premature separation of sister chromatid in Drosophila melanogaster II Genetics. 1984. - V. 107. - P. 65-77.

75. Ghysen A., O'Kane C. Neural enhancer-like elements as specific cell markers in Drosophila II Development. 1989. V. 105. P. 35 52.

76. Giunta K.L., Jang J.K., Manheim E.M., Subramanian G., McKim K.S. subito encodes a kinesin-like protein required for meiotic spindle pole formation in Drosophila melanogaster II2002. Genetics. - V. 160. - P. 14891501

77. Glover D. M. The centrosome in cell division and development of Drosophila II In "The Centrosome". V. I. Kalnins, Ed. Academic Press. New York.-1992.-P. 219-234.

78. Guo M, Davis D, Birchler J.A Dosage effects on gene expression in a maize ploidy series // Genetics. 1996. V. 142. №4. P. 1349-1355.

79. Guo M., Jan L. Y., Jan Y.N. Control of daughter cell fates during asymmetric division: Interaction of Numb and Notch // Neuron. 1996. V. 17. P. 27-41.

80. Guo M, Davis D, Birchler J. A. Dosage effects on gene expression in a maize ploidy series // Genetics. 1996. V. 142. №4. P. 1349-1355.

81. Hall A. Rho GTPases and the actin cytoskeleton // Science. 1998. V. 279. P. 509-514.

82. Harbecke R., Janning W. The segmentation gene Krüppel of Drosophila melanogaster has homeotic properties // Genes Devel. 1989. V. 3. P. 114-122.

83. Harbecke R., Lengyel J. Genes controlling posterior gut development in the Drosophila embryo // Roux's Archiv. Devel. Biol. 1995. V. 204. P. 308 -329.

84. Hawley R.S., McKim K.S., Arbel T. Meiotic segregation in Drosophila melanogaster females: molecules, mechanisms and myths // Annu. Rev. Genet. 1993.-V. 27.-P. 281-317

85. Hawley R.S., Theurkauf W.E. Requiem for distributive segregation: achiasmate segregation in Drosophila females // Trends Genet. 1993. - V. 9. -P. 310-317

86. Henderson S., Gao S., Lambie E., Kimble J. lag-2 may encode a signaling ligand for the GLP-1 and LIN-12 receptors of C. elegans II Development. 1994. V. 120. P. 2913-2924.

87. Herold A., T.Klymenko, and E.Izaurralde NXF 1/p 15 heterodimers are essential for mRNA nuclear export in Drosophila. // RNA. V.7, №12, 2001, P. 1768-1780.

88. Herzlinger D., Qiao J., Cohen D. et al. Induction of kidney epithelial morphogenesis by cells expressing Wnt-1 II Devel. Biol. 1994. V. 166. P. 815 -818.

89. Hetzer M., Gruss O.J., Mattaj I.W. The Ran GTPase as a marker of chromosome position in spindle formation and nuclear envelope assembly // Nat Cell Biol. 2002. V. №7. P. 177-184.

90. Hoch M., Broadie K., Jackie H., Skaer H. Sequential fates in a single cell are established by the neurogenic cascade in the Malpighian tubules of Drosophila II Development. 1994. V. 120. P. 3439 3450.

91. Hodge C.A., H.V.Colot, P.Stafford, and C.N.Cole Rat8p/Dbp5p is a shuttling transport factor that interacts with Rat7p/Nupl59p and Glelp and suppresses the mRNA export defect of xpol-1 cells. // EMBO J. V.18, №20,1999, P.5778-5788.

92. Holm D.G., Chovnik A. Compound autosomes in Drosophila melanogaster: The meiotic behavior of compound thirds // Genetics. 1975. -V.81, №2. - P. 293-311.

93. Holy J., Schatten G. Spindle pole centrosomes of sea urchin embryos are partially composed of material recruited from maternal stores // Dev. Biol. -1991.-V. 147.-P. 343-353.

94. Hua X.H., Yan H., Newport J. A role for Cdk2 kinase in negatively regulating DNA replication during S phase of the cell cycle // J. Cell Biol. 1997. V. 137. P. 183-192.

95. Jun L., Frints S., Duhamel H., et al. NXF5, a novel member of the nuclear RNA export factor family, is lost in a male patient with a syndromic form of mental retardation // Curr Biol. 2001. V. 11. №18. P. 1381-1391.

96. Jang J.K., Messina L., Erdman M.B., Arbel T., Hawley R.S. Induction of metaphase arrest in Drosophila oocytes by chiasma-based kinetochore tension //Science. 1995.-V. 268. - P. 1917-1919

97. Janning W., Lutz A., Wissen D. Clonal analysis of the blastodertm anlage of the Malpighian tubules in Drosophila melanogaster II Roux's Archiv. Devel. Biol. 1986. V. 195. P. 22-32.

98. Johnson K., Knust E., Skaer H. bloated tubules {blot) encodes a Drosophila member of the neurotransmitter transporter family required for organization of the apical cytocortex // Devel. Biol. 1999. V. 212. P. 440-454.

99. Kataoka N., J.Yong, V.N.Kim, F.Velazquez, R.A.Perkinson, F.Wang, and G.Dreyfiiss Pre-mRNA splicing imprints mRNA in the nucleus with a novel RNA-binding protein that persists in the cytoplasm. // Mol.Cell V.6, №3, 2000, P.673-682.

100. Karr T. L. Intracellular sperm/egg interactions in Drosophila: A three-dimensional structural analysis ofa apaternal product in the developing egg // Mech. Dev. -1991.- V. 34. P. 101-112.

101. Karr T.L. Paternal investment and intracellular sperm-egg interactions during and following fertilization in Drosophila H Curr Top Dev Biol 1996. V. 34.-P. 89-115.

102. Karr T.L., Pitnick S. The ins and out of fertilization // Nature 1996. -P. 379.-P. 405-406.

103. Kerber B., Fellert S., Hoch M. Seven-up, the Drosophila homolog of the COUP-TF orphan receptors, controls cell proliferation in the insect kidney // Gen. Devel. 1998. V. 1. P. 1781 1786.

104. Kerrebrock A.W., Miyazaki W.Y., Birnby D., Orr-Weaver T.L. The Drosophila mei-S332 gene promotes sister-chromatid cohesion in meiosis following kinetochore differentiation // Genetics. 1992. - V. 130. - P. 827841.

105. Kerrebrock A.W., Moore D.P., Wu J.S., Orr- Weaver T.L. Mei-S332, a Drosophila protein required for sister-chromatid cohesion, can localize to meiotic centromere regions // Cell. 1995. -V. 83. - P. 247-256.

106. Kim V.N., J.Yong, N.Kataoka, L.Abel, M.D.Diem, and G.Dreyfuss The Y14 protein communicates to the cytoplasm the position of exon-exon junctions. // EMBO J. V.20, №8, 2001, P.2062-2068.

107. Kimble J., White J. On the control of germ cell development in Caenorhahditis elegans II Devel. Biol. 1981. V. 81. P. 208 219.

108. Kispert A., Vainio S., McMahon A. P. Wnt-4 is a mesenchymal signal for epithelial transformation of metanephric mesenchyme in the developing kidney // Development. 1998. V. 125. P. 4225 4234.

109. Klyokawa E., Hashimoto Y., Kobayashi S. et al. Activation of Racl by a Crk SH3-binding protein, DOCKI8O // Genes Devel. 1998. V. 12. P. 3331 -3336.

110. Knowles B.A., Hawley R.S. Genetic analysis of microtubule motor proteins in Drosophila: A mutation at the ncd locus is a dominant enhancer of nod I 11991. Proc. Natl. Acad. Sci. - V. 88. - P. 7165-7169.

111. Komma D.J., Endow S.A. Haploidy and androgenesis in Drosophila II Proc Natl Acad Sci USA. 1995. V. 92(25) №5 P. 11884-1188.

112. Korey C.A., Wilkie G., Davis I. et al. small bristles is required for the morphogenesis of multiple tissues during Drosophila development // Genetics. 2001. V. 159. №4. P. 1659-1670.

113. Kraemer D. and G.Blobel mRNA binding protein mrnp 41 localizes to both nucleus and cytoplasm. // Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 1997. - V.94, №17. -P. 9119-9124.

114. Kramers P.G.N., Schalet A.P., Paradi E., Huiser-Hoogteyling L. High proportion of multi-locus deletions among hycanthone-induced X-linked recessive lethals in Drosophila melanogaster II Mutat. Res. 1983. - V.107, N 2. -P. 187-201

115. Kriplani A., Baneijee N., Jobanputra V., Kucheria K. Mosaic partial trisomy of chromosome 5 (q33-q ter) associated with fetal polycystic kidneys // Acta Genet. Med. Gemellol (Roma). 1998. V. 47. №2. P. 125-9.

116. Kuersten S., Ohno M., Mattaj I.W. Nucleocytoplasmic transport: Ran, beta and beyond // Trends Cell Biol. 2001. V. 11. № 12. P. 497-503.

117. Kurischko C. Parasexual process in the yeast Yarrowia lipolytica // J Basic Microbiol. 1986. V. 26. №1. P. 33-41.

118. Kurtz S., Ross J.J., Petko L., Lindquist S. An ancient developmental induction: Heat shock proteins induced in sporulation and oogenesis // Science. -1985.-V. 231.-P. 1154.

119. Kuure S., Vuolteenaho R., Vanio S. Kidney morphogenesis: cellular and molecular regulation // Mech. Devel. 2000. V. 92. P. 31 46.

120. Lasko P. RNA sorting in Drosophila oocytes and embryos. // FASEB J. V.13, №3,1999, P.421-433.

121. Lechner M. S., Dressier G. R. The molecular basis of kidney development//Mech. Devel. 1997. V. 62. P. 105 120.

122. Lee, S, Huang, K., Palmer, R. et al. The Wilms tumor suppressor WT1 encodes a transcriptional activator of amphiregulin // Cell. 1999. V. 98. P. 663 -673.

123. Lee J.Y., Orr-Weaver T.L. The molecular basis of sister-chromatid cohesion // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 2001. - V. 17. - P. 753-777.

124. Lefevre G.Jr. Salivary chromosome bands and the frequency of crossingover in Drosophila melanogaster // Genetics. 1971. - V.67, N 4.-P.497-513.

125. Le Hir H., D.Gatfield, I.C.Braun, D.Forler, and E.Izaurralde The protein Mago provides a link between splicing and mRNA localization. // EMBO.- 2001a.- V.2, №12, P. 1119-1124.

126. Le Hir H., D.Gatfield, E.Izaurralde, and M.J.Moore The exon-exon junction complex provides a binding platform for factors involved in mRNA export and nonsense-mediated mRNA decay. // EMBO J. V.20, №17, 2001b, P.4987-4997.

127. Le Hir H., E.Izaurralde, L.E.Maquat, and M.J.Moore The spliceosome deposits multiple proteins 20-24 nucleotides upstream of mRNA exon-exon junctions. // EMBO J. V.19, №24, 2000, P.6860-6869.

128. Lei E.P., H.Krebber, and P.A.Silver Messenger RNAs are recruited for nuclear export during transcription. // Genes Dev. V.15, №14, 2001, P. 17711782.

129. Lelongt B., Trugnan G., Murphy G., Ronco P. Matrix metalloproteinases MMP2 and MMP9 are produced in early stages of kidney morphogenesis but only MMP9 is required for renal organogenesis in vitro II J. Cell Biol. 1997. V. 136. P. 1363-1373.

130. Lieberfarb M.E., Chu T.E., Wreden C. et al. Mutations that perturb poly(a)-dependent maternal mRNA activation block the initiation of development //Development. 1996.-V. 122.-P. 579-588

131. Lilly M.A., Spradling A.C. The Drosophila endocycle is controlled by Cyclin E and lacks a checkpoint ensuring S-phase completion //

132. Gen. Devel. 1996. V. 10. P. 2514-2526.

133. Lindsley D.L., Grell E.H. Genetic variations of Drosophila melanogaster. Pubis Carnegie Instn., 1968. 627.469pp.

134. Lindsley, D.L., Zimm, G.G. The Genome of Drosophila melanogaster. Academic Press, 1992. 1133pp.

135. Lindquist S. The heat response I I Ann. Rev. Biochem. 1986. - V.55. -P. 1151-1191.

136. Lipshitz H.D., Smibert C.A. Mechanisms of RNA localization and translational regulation//Curr. Opin. Genet. Devel. 2000. V.10. P.476-488.

137. Liu S., McLoed E., Jack J. Four distinct regulatory regions of the cut locus and their effect on cell type specification in Drosophila I I Genetics. 1991. V. 127. P. 151-159.

138. Liu S., Jack J. Regulatory interactions and role in cell type specification of the Malpighian tubules by cut, Krüppel and caudal genes of Drosophila II Devel. Biol. 1992. V. 150. P. 133 143.

139. Liu X., Kiss K., Lengyel, J. A. Identification of genes controlling Malpighian tubule and other epithelial morphogenesis in Drosophila melanogaster II Genetics. 1999. V. 151. P. 685 695.

140. Lopez J. M., Song K., Hirshfeld A. B., Lin H., and Wolfner M. F. The

141. Drosophila fs(l)Ya protein, which is needed for the first mitotic division, is in thenuclear lamina and in the envelopes of cleavage nuclei, pronuclei, and nonmitoticnuclei // Dev. Biol. 1994. V. 163. P. 202-211.144

142. Loppin B., Docquier M., Bonneton F. et al. The maternal effect mutation sesame affects the formation of the male pronucleus in Drosophila melanogaster. DevBiol. 2000. V. 222(2). №15. P. 392-404.

143. Loppin B., Berger F., Couble P. The Drosophila maternal gene sesame is required for sperm chromatin remodeling at fertilization // Chromosoma. 2001a. V. 110 № 6. P. 430-440.

144. Loppin B., Berger F., Couble P. Paternal chromosome incorporation into the zygote nucleus is controlled by maternal haploid in Drosophila // Dev Biol. 20016. V. 231(2) №15. P. 383-396.

145. Lutolf H.U., Wurgler F.E. The frequency of meiotic primary nondisjunction of the large autosomes in Drosophila melanogaster. A preliminary report // Arch Genet (Zur). 1972. V. 45 №2. P. 126-128.

146. Maddrell S. H. P. The functional design of the insect excretory system // J. Experim. Biol. 1981. V. 90. P. 1-15.

147. Maddrell S. H. P., Lane N. J., Harrison J. B., and Gardiner B. O. C. DNA replication in binucleate cells of the Malpighian tubules of Hemipteran insects // Chromosoma. 1985. V. 91. P. 201 209.

148. Mahajam-Miklos S., Cooley L. Intercellular cytroplasm transport during Drosophila oogenesis // Devel. Biol. -1994. V. 165. -P. 336-351

149. Matsuura S., Ito E., Tauchi H. et al. Chromosomal instability syndrome of total premature chromatid separation with mosaic variegated aneuploidy is defective in mitotic-spindle checkpoint // Am. J. Hum. Genet. 2000. V. 67. P. 483-486.

150. Matthies H.J., McDonald H.B., Goldstein L.S., Theurkauf W.E. Anastral meiotic spindle morphogenesis: role of the non-claret disjunctional kinesin-like protein. J. Cell Biol. 1996. V. 134. p.455-464.

151. Matthies H.J., Baskin R.J., Hawley R.S. Orphan kinesin NOD lacks motile properties but does possess a microtubulestimulatedATPase activity // Mol. Biol. Cell. 2001. - V.12. - P. 4000-4012.

152. Mendelsohn С., Batourina E., Fung S. et al. Stromal cells mediate retinoid-dependent functions essential for renal development // Development. 1999. V. 126. P. 1139- 1148.

153. McKim KS, Jang JK, Theurkauf WE, Hawley RS. Mechanical basis of meiotic metaphase arrest // 1993. Nature. V. 362. - P. 364-366.

154. McKim K.S., Hawley R.S. Chromosomal control of meiotic cell division //1995. Science. - V. 270. - P. 1595-1601.

155. McKim K.S., Jang J.K., Manheim E.A. Meiotic recombination and chromosome segregation in D rosophila females I I Annu. Rev. Genet. 2002. -V.36. P. 205-232.

156. Miyazaki W.Y., Orr-Weaver T.L. Sister-chromatid misbehavior in Drosophila ord mutants // Genetics. 1992. - V. 132. - P. 1047-1061

157. Moerman D.G. A metalloprotease prepares the way // Curr. Biol. 1999. V. 23. №9. P. 701-703.

158. Moore D.P., Page A.W., Tang T.T., Kerrebrock A.W., Orr-Weaver T.L. The cohesion protein MEI-S332 localizes to condensed meiotic and mitotic centromeres until sister chromatids separate // J. Cell Biol. 1998. - V. 140. - V. 1003-1012.

159. Nasmyth K. Disseminating the genome: joining, resolving, and separating sister chromatids during mitosis and meiosis // Annu. Rev. Genet. -2001.-V. 35.-P.-673-745.180. NCBI gi:7292554 // 2002.

160. Nolan K., Barrett K., Lu Y. et al. Myoblast city, a Drosophila homolog of DOCK180/CED-5, is required in a rac signaling pathway utilized for multiple developmental processes // Genes Devel. // 1998. V. 12. P. 3337 3342.

161. Ntisslein-Volhard C. Determination of the embryonic axes of Drosophila II Development. 1991. Suppl. P. 1-10.

162. Obara-Ishihara Т., Kuhlman J., Niswander L., Hertzlinger D. The surface ectoderm is essential for nephric duct formation in intermediate mesoderm//Development. 1999. V. 126. P. 1103 1108.

163. Orr-Weaver T. L. Developmental modification of the Drosophila cell cycle // Trends Genet. 1994. V. 10. P. 321 327.

164. Orr-Weaver T. L. Meiosis in Drosophila: seeing is believing // Proc. Natl. Acad. Sci. -1995. -V. 92. P. 10443-10449.

165. Pierpont M. E. M., Hentges A. S., Gears L. J. et al. Unbalanced 4;6 translocation and progressive renal disease // Am. J. Med. Genetics. 2000. V. 95. №3. P. 275-280.

166. Poccia D., Collas P. Transforming sperm nuclei into male pronuclei in vivo and in vitro // Curr Top Dev Biol. 1996. - V. 34. - P. 25-88.

167. Pritchard C.E., M.Fornerod, L.H.Kasper, and J.M.van Deursen RAE1 is a shuttling mRNA export factor that binds to a GLEBS-like NUP98 motif at the nuclear pore complex through multiple domains. // J.Cell Biol. V.145, №2, 1999.-P. 237-254.

168. Preiss A., Rosenberg U.B., Kienlin A. et al. Molecular genetics of Kriippel, a gene required for segmentation of the Drosophila embryo // Nature. 1985. V. 313. P. 27-32.

169. Qureshi F., Jacques S.M, Feldman B. et aL Fetal Obstructive Uropathy in Trisomy Syndromes // Fetal Diagn. Ther. 2000. V. 15. №6. P. 342-347.

170. Reed R. and E.Hurt A conserved mRNA export machinery coupled to pre-mRNA splicing. // Cell V.108, №4,2002, P.523-531.

171. Ridley A. J., Paterson H. F., Johnston C. L. et al. The small GTP-binding Rac regulates growth factor-induced membrane ruffling // Cell. 1992. V. 70. P. 389-399.

172. Riparbelli M.G., Callaini G., Glover D.M., Avides Md. Mdo. C. A requirement for the Abnormal Spindle protein to organize microtubules of thecentral spindle for cytokinesis in Drosophila I I J. Cell Sci. 2002. - V. 115. - P. 913-922

173. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual 2nd ed // Cold Spring Harbor laboratory Press. - 1989.

174. Schweitzer R., Shilo B. Z. A thousand and one roles for the Drosophila EGF receptor // Trends Genet. 1997. V. 13. P. 191 -196.

175. Schalet A.P. The distribution of and complementation relationships between spontaneous X-linked recessive lethal mutations recovered from crossing long-term laboratory stocks of Drosophila melanogaster II Mutat. Res. -1986. V.163. -P.115-144.

176. Schatten G. The centrosome and its mode of inheritance: The reduction of the centrosome during gametogenesis and its restoration during fertilization // Dev. Biol. 1994. V. 165. - P. 299-335.

177. Shibata S., Shigeta M., Shu Y. et al. Initial pathological events in renal dysplasia with urinary tract obstruction in utero // Virchows Arch. 2001. V. 439. P. 560-570.

178. Shamsher M.K, Ploski J, Radu A. Karyopherin p2B participates in mRNA export from the nucleus IIPNAS. 2002. V. 99. №22. P. 14195-14199.

179. Skaer H. Cell division in Malpighian tubule development in Drosophila melanogaster is regulated by a single tip cell // Nature. 1989. V. 342. P. 566 569.

180. Skaer H. Cell proliferation and rearrangement in the development of the hemipteran, Rhodnius prolixus II Devel. Biol. 1992. V. 150. P. 372 380.

181. Skaer, H. The alimentary canal // The Development of Drosophila melanogaster / Eds. M. Bate, A. Martinez Arias. N.Y.: Cold Spring Harbor Lab. Press, 1993. P. 941 1012.

182. Skaer H., Harrison J. B., Maddrell S. H. P. Physiological and structural maturation of a polarised epithelium: the Malpighian tubules of a blood-sucking insect, Rhodnius prolixus II J. Cell Sci. 1990. V. 96. P. 537 547.

183. Skaer H., Martinez Arias A. The wingless product is required for cell proliferation in the Malpighian tubules of Drosophila melanogaster II Development. 1992. V. 116. P. 745 754.

184. Smith A. V., and Orr-Weaver T. L. The regulation of the cell cycle during Drosophila embryogenesis the transition to polyteny // Development. 1991. V. 112. P. 997 - 1008.

185. Sonnenblick B. P. The early embryology of Drosophila melanogaster. In "Biology of Drosophila" M. Demerec, Ed. Wiley, New York. 1950. - P. 62167.

186. SOzen M. A., Armstrong J. D., Yang M.-Y. et at Functional compartments are specified to single-cell resolution in a Drosophila epithelium // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 5207 5212.

187. Stark K., Vainio S., Vassileva G., McMahon A. P. Epithelial transformation of metanephric mesenchyme in the developing kidney regulated by Wnt-4 // Nature. 1994. V. 372. P. 679 683.

188. Stearns, T., Kirschner M. In vitro reconstitution of centrosome assembly and function: The role of g-tubulin // Cell. 1994 V. 76. - P. 623-637.

189. Su T.T., O'Farrell P.H. Chromosome association of minichromosome maintenance proteins in Drosophila endoreplication cycles // J. Cell Biol. 1998. V. 140. P. 451-460.

190. Sweeney H., Pelegano J. Wilms tumor in a child with trisomy 13 // J. Pediatr. Hematol. Oncol. 2000. V. 22. №2. P. 171-172.

191. SWISS-PROT Nuclear RNA export factor 1. //№Q9UBU9,2002a.

192. SWISS-PROT Q9U1H9. // 2002b.

193. Talhouk R.S., Bissell M.J., Werb Z. Coordinated expression of extracellular matrix-degrading proteinases and their inhibitors regulates mammary epithelial function during involution // J. Cell Biol. 1992. V.118. P. 1271-82.

194. Tan W., A.S.Zolotukhin, J.Bear, D.J.Patenaude, and B.K.Felber The mRNA export in Caenorhabditis elegans is mediated by Ce-NXF-1, an ortholog of human TAP/NXF and Saccharomyces cerevisiae Mex67p. // RNA. V.6, №12, 2000, P. 1762-1772.

195. Tang H., Wong-Staal F. Specific interaction between RNA helicase A and TAP, two cellular proteins that bind to the Constitutive Transport Element of type D retrovirus // J. Biol. Chem. 2000. - V.275, N42. - P.32694-32700.221. Tavosanis et al., 1997

196. Terhzaz S. O'Connell F.C., Pollock V.P. et al. Isolation and characterization of a leucokinin-like peptide of Drosophila melanogaster II J. Experim. Biol. 1999. V. 202. P. 3667-3676.

197. Theurkauf W.E., Hawley R.S. Meiotic spindle assembly in Drosophila females: behavior of nonexchange chromosomes and the effects of mutations in the nod kinesin-like protein 11 J. Cell Biol. 1992. - V. 116. - P. 1167-80

198. Vanden Heuvel G. B., Bodmer R., McConnell K. R. et al. Expression of a cut-related homeobox gene in developing and polycystic mouse kidney // Kindney Int. 1996. V. 50. P. 453 461.

199. Vinogradov AE, Anatskaya OV, Kudryavtsev BN. Relationship of hepatocyte ploidy levels with body size and growth rate in mammals // Genome. -2001 V. 44, №3. - P. 350-60.

200. Wan S., Cato A.-M., Skaer H. Multiple signalling pathways establish cell fate and cell number in Drosophila Malpighian tubules // Devel. Biol. 2000. V. 217. P. 153 165.

201. Waters J.C., Salmon E.D. Chromosomes take an active role in spindle assembly // BioEssays. 1995. - V. 17. - P. 911-914

202. Weiss A., Herzig A., Jacobs H., Lehner C.F. Continuous Cyclin E expression inhibits progression through endoreduplication cycles in Drosophila // Curr. Biol. 1998. V. 8. P. 239-242.

203. Wessing A., Eichelberg D. Malpighian tubules, rectal papillae and excretion. // The Genetics and Biology of Drosophila / Eds. M. Ashburner and T. R. F. Wright. L.: Academic Press, 1978. V. 2c. P. 1 42.

204. Wessing A., Zierold K., Bertram G. Carbonic anhydrase supports electrolyte transport in Drosophila Malpighian tubules. Evidence by X-Ray microanalysis of cryosections // J. Insect Physiol. 1997. V. 43. No. 1. P. 17-28.

205. Wigglesworth, V. B. The principles of insect physiology. L.: Methuen. 1939.

206. Wilkie G.S., Zimyanin V., Kirby R. et al. small bristles, the Drosophila ortholog of NXF-1, is essential for mRNA export throughout development// RNA. 2001. V. 7. №12. P. 1781-1792.

207. Wilkie G.S. and Davis I. Drosophila wingless and pair-rule transcripts localize apically by dynein-mediated transport of RNA particles. // Cell. 2001. - V.105. - P.209-219.

208. Wolpert L. Positional information and the spatial pattern of cellular differentiation // J. Theoret. Biol. 1969. - V. 25. - P. 1-47.

209. Wright S.J. Sperm nuclear activation during fertilization // Curr Top Dev Biol. 1999. - V. 46. - P. 133-178.

210. Wu Y. C., Horwitz H. H C. elegans phagocytosis and cell-migration protein CED-5 is similar to DOCK180 // Nature. 1998. V. 392. P. 501 504.

211. Yang J., H.P.Bogerd, P.J.Wang, D.C.Page, and B.R.Cullen Two closely related human nuclear export factors utilize entirely distinct export pathways. //Mol.Cell V.8, №2,2001, P.397-406.

212. Yasuda G.K., Schubiger G., Wakimoto B.T. Genetic characterization of ms (3) K81, a paternal effect gene of Drosophila melanogaster // Genetics. 1995 V. 140. №1. P. 219-229.

213. Yoon D.W., Lee H., Seol W., DeMaria M., Rosenzweig M., Jung J.U. Tap: a novel cellular protein that interacts with tip of herpesvirus saimiri and induces lymphocyte aggregation // Immunity. 1997. - V.6, N5. - P.571-582.

214. Young P. E., Richman A. M., Ketchum A. S., and Kiehart D. P. Morphogenesis in Drosophila required non-muscle myosin heavy chain function // Genes Devel. 1993. V. 7. P. 29-41.

215. Zhimulev I.F., Belyaeva E.S., Pokholkova G.V., Kotchneva G.V., Fomina O.V., Bgatov A.V., Khudyakov Ju., Patzevich I., Semeshin V.F., Baritcheva E.M., Aizenzon M.G., Kramers P., Eeken J. Report of new mutants // Dros. Inf. Serv.- 1982.-V.58.-P.210-214.

216. Zhimulev I.F., Ilyina O.V. Localization and some characteristics of sbr in Z). melanogaster II Dros. Inf. Serv. 1980. - V.55.-P.146.

217. Zitron A., Hawley R.S. The genetic analisys of distributive segregation in Drosophila melanogaster //1989. V. 122. - P. 801-822.

218. Zhong W., Feder J., Jiang M. et al . Asymmetric localization of mammalian Numb homolog during mouse cortical neurogenesis // Neuron. 1996. V. 17. P. 43 53.

Информация о работе

Пугачева, Ольга Марковна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2004
ВАК 03.00.15

Диссертация

Генетическая природа аномалий личиночного развития в потомстве самок l(l)ts403(sbr10) у Drosophila melanogaster - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы