Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эмоциональный стресс и эффективность химиотерапии при экспериментальном трихолефалезе

ВАК РФ 03.00.20, Гельминтология

Автореферат диссертации по теме "Эмоциональный стресс и эффективность химиотерапии при экспериментальном трихолефалезе"

- Российская акадешя сельскохозяйственных наш

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛЬШНТОЛОГШ, имени академика К.И.Скрябина

На правах рукописи

ШЛА. Макге

ЭМОЦИОНАЛЬНЫЙ СТРЕСС И ЭШКЕИВНОСТЬ ХИ1ИОЕЕРА1Щ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТРИШЗШВЗЕ

03.00.20 - геттььзштотгогия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -

1993

Работа выполнена на кафедре зоологии беспозвоночных Московского государственного университета иы.М.В.Ломоносова

в отделении экспериментальной зсшиотерапии Институте медицинской паразитологии и тропической медицины иы. Е.И.мар-циновского

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Б.А.Астафьев, доктор ветеринарных наук, профессор

Т.К.иопоза

г.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук II.¿.Архипов, доктор биологические наук С.Г.Полетаева

Ведущая организация - Институт паразитологии

Российской академии кгук

Защита состоится " 1523

часов на заседании Специализированного созета Д-020..04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им. академика.К.К.Скрябина.

Адрес: 117259, йоскза, Б.Черемушкинская, 26.

С диссертацией мокно ознакомиться в библиотеке' ЕИШС.

Автореферат разослан "

1923 г.

Ученый секретарь Специализированного созета

доктор ветеринарных наук ^^д -__С.В.Березкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

.Актуальность -работы. Научно-технический прогресс, особенно усилившийся во второй половине XX века, резкое возрастание миграционных процессов в мире, интенсивные процессы урбанизации, огромные скопления людей на ограниченных территориях, межнациональные конфликты, отлучение детей от родителей посредством помещения их в детские дошкольные учреждения, дома ребенка и т.д. - все это и многие другие социальные явления, наблюдающиеся в современном обществе, часто сопровождаются социальными эмоциональными стрессами. Антропогенные воздействия на окружающую среду нарушили экологическое равновесие, привели к потеплению климата в течение XX столетия на 0,4-0,7°С и усилению природных бедствий. Так, подсчитано, что в 70-х годах количество природных бедствий, включая засухи, ураганы, наводнения, лесные пожары и т.д., было на 25$ больше, чем в 60-х годах, а в 80-х годах на 50% больше, чем в 70-х годах.

Все эти социальные и природные явления способствуют ломке сложившихся жизненных стереотипов, включая быт, климат, питание, привычное человеческое окружение и психологический микроклимат и т.д. Вследствие этого значительно повышается риск заражения инфекциями и инвазиями, в том числе новыми для данного индивидуума, к которым нет необходимой адаптации (Астафьев Б.А., 1983, 1987).

Естественно, возникает вопрос: изменяется ли в этих условиях (на фоне стрессов) эффективность специфической химиотерапии паразитозов и если изменяется, то как? Исследования в этом направлении тем более привлекают внимание, что подобных работ в мировой литературе нам найти не удалось.

Эффективность химиотерапия больных гельмянтозамя, в том числе трихоцефалезом, зависят от многих факторов. Одним из наиболее значимых является иммунный статус больного организма - человека или животного (Озерецковская H.H., 1980; Астафьев Б.А., 1987; Макарова И.А., 1989; Ралщд В.М., 1991; Даугаляева Э.Х., Филиппов В.В., 1991; и др.). Вместе с тем в последние года все большее внимание стала привлекать бихе-виоральная, или поведенческая, иммунология. Установлено, что эмоциональное состояние субъекта сказывается на его иммунном статусе (Корнева Е.А., 1988). При депрессивном эмоциональном фоне снижаются различные показатели иммунных реакций: функция ЕК-клеток, ответ лимфоцитов на мятогены, клеточные иммунные реакции (Schreiner G.Fo, Unanue E.R., 1975; Baxtrop R.W» et al., 1917; Архипов Г.С. и др., 1990; и др.). Таким образом, уже априори можно было ожидать обнаружение влияния эмоциональных стрессов на эффективность специфической химиотерапии, в частности при экспериментальном грихоцефалезе мышей.

Настоящая работа выполнена на базе отдела синтеза и доклинических исследований препаратов Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского Государственного комитета санитарно-эпидемиологического надзора Российской Федерации в соответствии с темой tè 10 "Создание отечественных альтернативных противогельмянтных препаратов я рациональных комбинаций" CI99I-I994 гг.), В гос. регистрации 01.9.10 003031.

Цель и задачи. Цель : исследование влияния эмоциональных стрессов на эффективность специфической химиотерапии при тря-хоцефалезе. Задачи: I) на экспериментальной модели Trichoce-phalus mûris мышей линии DBA/2 исследовать влияние эмоциональ-

ных стрессов на эффективность химиотерапии метиазолом; 2) исследовать возможность повышения эффективности специфической химиотерапии метиазолом на фоне эмоциональных стрессов с помощью а) препаратов, обладавших иодуномодулирующей активностью, б) транквилизатора мезапама.

Научная новизна. Впервые в эксперименте на мышах, зараженных 1г1сЬосерНа1ив гаигас и подвергнутых эмоциональным стрессам, установлено, что:

- периодические ежедневные эмоциональные стрессы снижают эффективность специфической химиотерапии этого гельминтоза мегиазолом;

- на фоне эмоциональных стрессов происходит дифференциация животных на две субпопуляции по их способности переносить эмоциональные стрессы: а) высокочувствительных к стрессам, у которых последние снижают эффективность специфической химиотерапии трихоцефалеза мегиазолом, б) низкочувствительных к стрессам, на фоне которых эффективность химиотерапия мегиазолом возрастает. Отражением этой дифференциация животных на фоне эмоциональных стрессов является значительное (в несколько раз) систематическое (повторяющееся в разных опытах) увеличение соотношения ЕД34 : ЕДд^ по сравнению с группами мышей, не подвергавшихся стрессам;

- использование иммуномодуляторов пенгоксила или ортофена с целью повышения эффективности специфической химиотерапии трихоцефалеза у животных, предварительно длительно (в течение 14 суток и более) подвергавшихся эмоциональным стрессам, нецелесообразно, так как вследствие их назначения соотношение ЕДд^ : не только не уменьшается, а

достигает огромных значений: от 44,6 до 57,1 (пентоксил), до 133,0 (ортофен);

- транквилизатор ыезапаы способствовал повышению эффективности специфической химиотерапии ыышей, больных трихоце-фалезом, метиазолом;

- инвазия 1«, тиг1Е фактически не отразилась на активности ферментов цитоплазматической мембраны макрофагов 5'-ну-клеотидазы и Ма-,к-аденозинтрифосфатазы;

- эмоциональные стрессы способствовали дифференциации мышей

- линии ПВА/2. на две субпопуляции: с низкой чувствительностью к стрессам и соответственно высоким содержанием

5' -яуклеотидазы в макрофагах перитонеальяого экссудата и с высокой чувствительностью к стрессам и низким содержанием в них 5' -нуклеотидазы и Иа-.-к-аденозинтрифосфатазы. Практическая значимость. Установлено, что эмоциональные стрессы снижают эффективность специфической химиотерапии три-хоцефалеза метиазолом, что препараты с иммуномодулярующим действием пентоксил или ортофен не повышают ее, но хороший терапевтический аффект в условиях длительно повторяющихся эмоциональных стрессов оказывает комплексная терапия транквилизатором мезапаыом и метиазолом. Б связи с этим в клинических условиях целесообразно испытать у больных трихоцефалезом людей с признаками эмоционального стресса эффективность комплексной терапии мезапама и ыегиазола, что, в соответствии с результатами наших экспериментальных исследований, должно способствовать ее повышению. Назначение таким больным препаратов с имму-номодулирующиы эффектом (пентоксила, ортофена) нецелесообразн В современных условиях нарастающих социальных конфликтов целесообразно расширение и углубление исследований как по изу

ченяю патогенеза влияния эмоциональных стрессов на эффективность специфической химиотерапии паразитозов, так и по повышению ее эффективности с помощью различных методов патогенетической терапии.

Положения, выносимые на защиту:

- эмоциональные стреста снижают эффективность специфической химиотерапии метиазолом мышей, экспериментально янвазяро-ванных в. mûris;

- назначение в качестве средства патогенетической терапии препаратов с иммуномодулирующш действием пентоксила или ортофена животным, больным трихоцефалезом, подвергающимся эмоциональным стрессам и получающих в качестве специфического химиотерапевтического средства метиазол, нецелесообразно;

- транквилизатор мэзалам повышает эффективность специфической химиотерапии метиазолом мышей, экспериментально зараженных î. mûris и находящихся в условиях эмоционального стресса;

- эмоциональные стрессы способствуют дифференциации мышей лилии DBA/2 на две субпопуляции: с низкой чувствительностью к стрессам и соответственно высоким содержанием

5' -нуклеотадазы в макрофагах перитонеального экссудата и с высокой чувствительностью к стрессам и низким содержанием в них 5' -яуклеотидазы и Ма-,К-аденозинтряфосфатазы. Внедрение в практику. Рекомендации диссертанта по экспериментальной химиотерапии трихоцефалеза используются в практике лабораторных исследований в ИШиТМ им. Е.И.Марциновского и учебном процессе на кафедре зоологии беспозвоночных биологического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова.

Публикации. По теме диссертации сданы б печать две статьи,

Апробация работы. Материалы диссертация доложены на собрании отдела синтеза и доклинического изучения противопарази-тарных препаратов Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского (28.04.93 г.) и апробированы на заседании кафедры зоологии беспозвоночных биологического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова 29.04.93 г.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов практических рекомендаций, списка литературы. Работа яллясгря-рована 27 таблицами, 4 рисунками. Список литературы включает 226 источников, в том числе 106 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал и методы исследований. В опытах использовано 65С мышей линии DßA/£st, которых получали из питомника "Столбовая". Вес мышей в начале опыта был 12-Г4 г, а к концу опыта of достигал 20-24 г. Животных содержали в пластмассовых клетках, по 10-15 мышей в каждой. Клетки ежедневно тщательно убирали. Полноценная диета: гранулированный корм для мышей и крыс (ПК-121-7), овощи, овес, творог, вода. Для заражения 1. miriE использовали мышей-самцов линии DBA/2.st. Мыши линии DBA/г, по данным Tomagovigova и соавт. (1988) и В.М.Ра шида (1991), характеризуются высокой восприимчивостью к этой инвазии. Используемая в опытах культура Т. m-uris была получен из Гельминтологического института Словацкой академии наук (г.Кошице) в 1988 г.

Инвазионную культуру яяц a. mûris получали из фекалий зараженных мышей. Применяли флотационный метод Фюллеборна, основным ингредиентом которого является насыщенный раствор поваренной соли, в комплексе с центрифугированием. После повторных отмываний соли яйца т.mûris наносили на часовое стекло диаметром 8,5-9,8 см в 1% раствор ksi и помещали во влажную камеру в чашку Петри. В течение 28-32 суток яйца развивались в термостате при 28°С. Обязательным условием их развития являетг-ся аэрация замкнутого пространства в чашке Петри через кадзше 24-48 часов, для этого, продолжая деряать культуру в термостате, на 1,5-2 часа приоткрывали крышку чашки Петри. При этом контролировали наличие тонкого слоя воды и влажной фильтровальной бумаги на дне чашкя л достаточность объема kci в часовом стекле с культурой яиц, который постепенно уменьшается вследствие испарения. Степень зрелости яиц контролировали под микроскопом.

Необходимую для заражения взвесь яиц готовили из расчета: запланированная доза инвазионных яиц в 0,5 мл физиологического раствора на одну мышь. Инвазионную дозу вводили непосредственно в пищевод с помощью шприца с насаженной, на него специальной металлической канвлей. На 36-38 дни инвазии мышей обследовали копрогельминтоовоскопотески с использованием метода нативного мазка (с просмотром до 3-4 мазков в случаях отрицательного результата) с целью выделения заразившихся г. mûris мышей.

Для исследований использовали метиазол (аналог альбенда-зола), ресинтезярованный в Институте медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского в 1987 г. Ф.С.Ми-хайлицыным и сотрудниками, производства Института химии растительных веществ АН Республики Узбекистан. В качестве иммуномо-

дуляторов использовали официальные форыы пентоксила, ортофена и имыгуноыодулятор органической природа M0ÏÏ-35 (коммерческий препарат "Дина" А/0 "Динафары"). Б качестве транквилизатора использовали официнальяый препарат - мезалам.

Все названные выше препараты вводили per os в вдде суспензий в 1% растворе крахмала из расчета: необходимая доза препарата в 0,5 мл раствора крахмала. Во всех опытах метиазол вводили 3-дневным курсом; суточную дозу делили на две равные разовые дозы.

Эмоциональный стресс создавали посредством подсаживания кошки в комнату 2,5 х 4 и, где находились клетки с мышами. Во всех опытах кошку подсаживали 2 раза в день на 2 часа (суммарно - на 4 часа в сутки) с интервалами мевду ними 4 часа дневного времени. Длительность экспериментального стрессирования в разных опытах колебалась от 4 до 31 суток.

С целью контроля результатов экспериментов всех мышей (как подопытных, так и контрольных) убивали на 4-5 сутки поел? окончания лечения подопытных животных. Из брюшной полости извлекали толстую кишку, включая слепую, и исследовали ее на наличие Т» mûris. Рассчитывали интенс-эффективность (ИЗ) и экстенс-эффективность (ЭЭ) метиазола при разных запланированных условиях опытов. Оценку эффективных доз метиазола произво дили по методу Лигчфилда-Уялкоксона (Беленький М.Л., 1963).

Активность 5' -яуклеотидазы (5' - ь* ) определяли в суспензи неразрушенных макрофагов перитонеального экссудата (МПЗ) по модифицированному М.А.Туманян и Г.Б.Кирилличевой (1984) метод Диксона и Дурдома. Активность фермента выражали в микрограмма

Г)

фосфора яа 10 клеток за I час. Активность Ыа-»Е-аДенозинтРи~ фосфатазы (АТФаза) определяли в суспензии неразрушенных МПЭ п

метолу Р.Уиттаыа (1978). Активность фермента выражали в микро-

7

гаммах фосфора в 10 клеток за 20 минут.

Статистическую обработку результатов опытов производили по Л.С.Каминскому (1959).

Сравнительное изучение противогельмянтной активности метиазола в зависимости от возраста половозрелой стадии ru ris

Б диссертационной работе В.М.Рашида (1991) был установлен факт изменения чувствительности i .mûris к противогельминтяым средствам в зависимости от возраста паразита. По данным этого автора, на личиночной стадии развития власоглава полное излечение достигается с помощью относительно небольших доз альбен-дазола и медамина. На половозрелой стадии для достижения такого же эффекта требуется 2-4-кратное повышение доз этих анти-гельминтиков. В.М.Рашид отмечает, что особенно значительной возрастная устойчивость власоглава к этим антигельминтикам была в начальный период выделения яиц, а затем она вновь понижалась. В.М.Рашид работал на относительно новой модели, так как незадолго до его опытов культура т0 mûris была доставлена из Чехословакии, и, возможно, еще продолжался период адаптации возбудителя к организму хозяина - мышей линии DBA/Sst (из питомника "Столбовая"). В связи с этим мы прежде всего решили уточнить этот вопрос.

В опыте было 73 мыши линии DBA/£St. Всех мышей заразили по 100 инвазионных яиц r.muxis. 1ивогные были разделены на 12 групп. В 1-й серии опыта 5 подопытных групп на 30, 31 и 32 сутки инвазии лечили 3-дневным курсом метиазола в разных суточных дозах: 50,0; 37,5; 25,0; 12,5; 5,0 мг/кг массы тела. Суточ-

- 12 -

яую дозу делили на 2 равные разовые дозы, которые вводили с интервалом 6 часов. Одна груша мышей оставалась нелеченной (контрольная). Вскрывали мышей через 4 суток после окончания лечения, т.е. на 56 сутки инвазии. Во 2-й серии этого опыта, проведенной по той же схеме, мышей лечили на 44, 45 и 46 сутк! инвазш, вс1фыгие - на 50 день инвазии.

Сравнение

результатов опыта показало, что статистически достоверные различия существуют между 3-й группой (I серия, суточная доза ме-тиазола 12,5 мг/кг) и 7-й группой (2 серия, суточная доза ме-тиазола также 12,5 мг/кг): интенс-эффективность препарата составила соответственно 3?,00±3,27# и 48,78^4,05^ (Р<0,05). Разница между другими группами, равноценными по дозе метиазо-ла, в обеих сериях не была статистически существенной.

Таким образом, этот опыт подтвердил данные В.М.Рашида (1991) о повышении чувствительности к метиазолу (альбендазолу половозрелых т. пгигас по мере их старения и показал, что при планировании и оценке последующих опытов необходимо учитывав срок инвазии.

Результаты изучения влияния эмоционального стресса на эффективность лечения мышей метиазолом

Было поставлено 3 опыта, отличавшиеся в основном длител: ностью стрессирования: 14, 21 и 31 сутки. В каждом из этих опытов группы мышей получали разные суточные дозы метиазола 5 до 50 мг/кг массы тела, что позволило оценить результаты опытов с помощью метода Литчфилда-Уилвоксона. Во всех этих опытах были получены идентичные результаты: эмоциональный стресс снижает суммарную (в популяции в целом) эффективность

специфической химиотерапии мышей метиазолоы вследствие дифференциации I. murin на две субпопуляции: с высокой и низкой чувствительностью к этому препарату. Вследствие этого в условиях эмоционального стресса хозяев (мышей) у т. mûris резко возрастало соотношение Elg^ : Eïïjg. Например, во 2-м опыте оно возросло с 3,38 (контрольные мыши, не подвергавшиеся стрессу) до 8,91 (стрессированные мыши). Эти изменения наглядно представлены на рис.1.

В других опытах на фоле эмоциональных стрессов это соотношение возрастало в 10 и более раз по сравнению с группами контрольных (нестресыфованных) мышей.

Рассчитанная раздельно для 6 и ç т. mûris ИЗ метиазола выявила существенные половые различия по чувствительности гельминта к этому препарату (таблица). Как в группах животных, не подвергавшихся экспериментальному стрессу, так и подвергавшихся таковому, ИЭ метиазола, установленная на самках, во всех случаях была более высокой, чем на самцах. В условиях длительных повторных эмоциональных стрессов снизилась ИЭ метиазола, установленная как на d , так и £ T.imiriс в группах мышей, получавших препарат в суточных дозах 25 мг/кг. Это свидетельствует о том, что в условиях стресса необходимо назначать более высокие дозы противогельминтного препарата или же попытаться средствами патогенетической терапии повысить эффективность метиазола, назначаемого в более низких дозах, что имеет большой практический смысл, так как позволяет избежать более значительного токсического воздействия метиазола. Этот вопрос изучался в следующих разделах настоящего исследования.

-14 -

2 25 3 4 5 6 7 691

1,5 ' 2 25 3 4 5

щ

95,95

рци

[ПТЩТг тгптгггг

«ж

ЩЕЦцшТр! цГь! Г'ШШйрНЩ

| 2 .2,5 3- А- © 6 7 6 9 1 @15 2 3

!д0 3ы

Рис.1 График интенс-эффективности ыетиозста у больных ® МТуХг трихоцефалезон мышей на фоне периодического эмоционального стрессирования в течение 21 суток. •I - группы мышей без экспериментального стрессирования (контрольные); ■ ©2 - группы ыч)'"!Л, подвергавшиеся эмоциональным стрессам.

Эффективность метиазола, рассчитанная раздельно для 4 я ф 0!.т«г1с в опыте на мышах линии овл/г, находившихся в течение 32 дней (с 8 по 39 день инвазии) в условиях периодического эмоционального стресса (опыт № 3)

'Гаолица

№

группы

Число мышей

Эмоциональный стресс

Суточная доза метиазола

(мг/кг)

Число гельминтов

(М±Б1 )

Интенс-эффективность

(М±тг^ )

Число гельминтов

(М±ш )

Интенс-эффективность

(М±ПЙ? )

Достоверность ;разницы по ин-:тенс-эффектив-;ности по отношению к 6 и 9 :т» :пиг±0 в СО; ответствугацих ;группах мышей (Р)

I 14 - 0 18,93*2,00 - 39,57*4,10 - -

2 II - 5 21,62*2,37 0 26,64*3,00 32,66-2,74 < 0,001

3 13 - 12,5 17,92-1,48 5,34*1,47 19,77-1,59 50,04*3,12 < 0,001

4 14 - 25 8,86*1,73 53,21*4,48 12,50*2,52 68,41*5,51 0,01

5 14 + 0 18,50-2,17 - 37,36*4,43 -

6 15 + 5 21,93*2,06 0 43,20-4,02 0 -

7 16 + 12,5 15,44-1,98 16,54-2,36 26,88*3,49 28,06*2,17 < 0,001

8 14 + 25 12,29*2,23 33,51*3,60 20,85*4,05 44,19*2,91 < 0,05

ы ся

Рд-Р7< 0,001 Р4-Р8<0,01

0,001 Р3-?7< 0,001 Р4-Р8^0,001

- 16 -

Результаты изучения влияния иммуномодуляторов на эффективность химиотерапии тряхоцефалеза мышей, находящихся в условиях эмоционального стресса

В трек опытах испытали влияние пентоксила, ортофена на эффективность химиотерапии ыетиазолом мышей, экспериментально инвазированных 1 .marl с. Пентоксил подопытным мышам начинали вводить за 10 суток до лечения метиазолом по схеме: 5-1фатное введение препарата per os с интервалами по 48 часов в суточной- (разовой) дозе 20 мг/кг массы тела. Эта схема дает оптимальный иммуностимулирующий эффект (Бекирова Ф.С., 1989; Макарова U.A., 1989). Ортофен вводили per os в суточной (разовой) дозе 1,5 мг/хг в течение 13 дней до лечения мышей метиазолом. В этих опытах установлен идентичный результат: ни пентоксил, ни ортофен не устранили влияния стрессов на повышение устойчивости E.nraris к метяазолу. Это, в частности, отражает рис.2.

Особое внимание обращает факт резкого различия в результа тах испытания влияния ортофена на эффективность химиотерапии метиазолом в условиях разной длительности эмоционального стрес сирования мышей: в течение 4-х дней (в том числе одного дня до лечения метиазолом и грех дней во время проведения курса специфической терапии) и в течение 28 дней, предшествующих курсу лечения метиазолом. В первом случае отношение ВД84 : ВДК = 7,31, а во втором - 133,0, т.е. возросло в 18,2 раза. Это еще раз свидетельствует od исключительно сильном влиянии длительно го эмоционального стресса на эффективность противопаразитарвой химиотерапии.

Б двух опытах испытали влияние иммуномодулятора M0ÏÏ-35, который вводили мышам per од в дозах 0,001; 0,01; 0,02; 0,1 мг/кг. Контрольные животные или не получали никакого лече-

99,99

99,95 £39.9

35,3 59 93

55

5 6 7 0 9 1

®Щр

йрпй

пМпп:!

Ш- !Й+М1Ь

-171,5 2 2,5 3 5 0 7

.¡;1|!,!'! I ' II ММ!

1фшш

-гтр,'

ре

:!!!!.!;ЦЩ:|! : : ШЩЩ! !: ШШШш

ЩШШШрШШ

Jjtl.~j~.l-. ; . | . | "}"Н"1 - •

■„■ГП

та

н4нНг

■ЦП

1 I '■' !|1 'г ^

й.Ч'к

!' Г II 1Ш !!):]!!!! !Й

гггКтт^

' !|| ' Ф !

¡¡г

! 4

I и! ,..мг-7

@7

Газы

6 7 5 31 - - -- -Дв»,

Рис.2 График ингонс-эВДгекгпБИости метиазсо у больных Вмгукг трихоиефатезом юте]'! н<ч фоне периодического эмоционального сгресснровония б течение 19 суток, в том чиста на фоне предварительного пе'-генпя пекто-ксппон. .

* I - группи гисэй без экспериментачьисго стрэссмрсган-чя;

©2 -' групп'! мтам, по;[пэргбЕШ!1еся строг:';.™;

- грутшн !.><жИ, под.'-'грггшшеоп стрс-ози I! печенные пентошщом.

ния, или лечились только препаратом МОП-35. Подопытные мыши получали этот препарат в дни лечения метиазолом. В результате установлено, что препарат МОП-35, по-видимому, через повышени иммунного статуса организма хозяина оказывает лечебное действие на мышей, инвазированных г. mûrie, как самостоятельно, та и в комплексе с метиазолом. Лучший эффект был получен при назначении препарата МОП-35 в суточной дозе 0,01 мг/кг, чем 0,001 мг/кг, и в другом опыте - 0,1 мг/кг, чем 0,02 ыг/кг. В обоих опытах на фоне лечения этим препаратом, как саыостоятел но, так и в комплексе с метиазолом, отмечена более значительв элиминация самцов T. mûris, чем самок.

- Результаты исследования влияния эмоционального стресса и инвазии E.nuris на характер иммуномодулиругацего эффекта МОП-35

Стресс - одно из проявлений генерализованных реакций организма животного или человека с вовлечением различных нейро-эндокринных комплексов. В этом опыте оценку влияния стресса на организм животного, а также препарата МОП-35 на иммунный статус, как s условиях стресса, так и без него, производили по изменению активности ферментов цитоплазматической мембран! - 5' -нуклеотядазы (5'- 41 ) и На-,к -аденозинтрифосфатазы {Ш>аза) в макрофагах перитонеального экссудата (МПЗ). Возмо: яость использования этих показателей метаболической активное: макрофагов для оценки дамуяомодуляругацего действия стресса и препаратов с иммуномодулярующей активностью базируется на выполненных ранее исследованиях (Кирилличева Г.В. и др., 1987 î б, 1988 а,б, 1992; и др.), где зависимость между иммунным ст, тусом и активностью 5'-n и АТФазы МПЭ установлена.

- 19 -

Исследования проведены на 47 мышах, которые были разбиты на 10 групп. Были выделены группы интакгных мышей, иявазировая-ных (по 130 инвазионных яиц т.mûris ), стрессированных (в течение 21 суток), леченных препаратом ЮП-35. Икмунокодулятор вводили на 36-е сутки инвазии внутривенно в дозах 10"^ или 10 мкг на мышь (в 10 часов утра), в том числе интактным, стрессирован-ным незарахенным, инвазированным 1,mûris и стрессированным. Активность 5'-к и АТФазы определяли через 5 минут после введения иммуномодулятора. Сравнивали ее с таковыми в других группах, в том числе и у интактных животных. - -

Инвазия фактически не сказалась на активности 5'- 1Г, так же как и Ка-,к -АТФазы. Стрессироваяие животных вызвало резкое повышение активности 5'-:: у части из них,

. составившее 139,7±5,3 % по отношению к интактным заветным, и исключительно сильное падение активности у других: дс 14,08,0 %. У этих (последних) животных отмечены снижение массц тела, взъерошенноегь шерстного покрова, вялость, малоподвихаость. Таким образом, длительный периодический стресс.как бы дифференцировал животных на выносливых к нему (низкочувствительных мышей) и невыносливых, или высокочувствительных к стрессу. В группе выносливых к стрессу мышей показатели АТФазы мало отличались от таковых интактной группы животных (Р>0,05), а в группе высокочувствительных мышей отмечено резкое падение активности АТФазы.

Эффект от введения мышам иммуномодулятора М0П-35 зависел от его дозы. У неинвазированных и нестрессированных животных введение препарата в дозе мкг/кг не сказалось существенно на активности ни 5'-n, ни АТФазы. Однако доза 10 мкг/кг существенно повысила активность этих ферментов. У стрессированных

и неинвазярованных щшей инъекции МСШ-35, наоборот, существенно понизили активность обоих ферментов в МПЭ. Однако у стрессиро-ванных и инвазированных мышей активность 5'-N даже несмотря на инъекцию иммуномодулягора оставалась на очень низком уровне, составляя всего 29,4*7,1 % (МОП-35 в дозе Ю-4 мкг/кг) по отношению к группе янтакгных мышей и в ipynne мышей, получивших МОП-35 в дозе 10 мкг/кг, - 46,2*6,2 %. Содержание АТФазы в первой из этих групп практически не отличалось от группы интактных мышей и было снижено во второй из них.

Таким образом, стрессирование мышей привело к изменению действия иммуномодулягора М0П-В5. Известно, что ферменты цито-плазматической мембраны макрофагов 5'-и и АТФаза являются факторами неспедафической резистентности организма к неблагоприятным воздействиям. Имеются сведения о взаимосвязи активности б'-м и АТФазы с уровнем резистентности организма к инфекции, уровнем спонтанной бласттрансформации лимфоцитов и другими иммунологическими показателями (Кирилличева Г.Б. и др., 1987 а,в, 1988 а,б; Кирилличева Г.Б. и др., 1992). Поэтому полученные в настоящем исследовании данные о влиянии стресса на характер действия иммуномодулятора на активность 5'-и и АЗФазы МПЭ позволяет предполагать, что действие имыуномодуля-торов на такие инте1ральные показатели, как чувствительность к инфекционным заболеваниям, радиорезистентность, также будет зависеть от исходного состояния нейроэндокринной системы.

Результаты испытания транквилизатора мезапама в качестве средства, повышающего эффективность терапии метиазолом мышей, инвазированных g.mûris и находящихся в условиях эмоционального стресса

Транквилизатор ыезапам обладает выраженным анксиолитиче-

ским действием. В связи с этим было предположено, что, снимая страх, он может повысить хшлиотерапевтический эффект ыетиазола у мышей, инвазированиых I.mûris и находящихся в состоянии длительного эмоционального стресса.

В опыте использована 51 мышь, зараженных по 150 яиц I.mûris. Подопытных мышей стрессировали с 27-х по 4S-e сутки инвазии. С 40-х по 46-е сутки инвазии подопытные мыши получали per os мезадам по 0,5 мг/кг массы тела 2 раза в день с интервалами по 6 часов. Лечение мышей метиазолом с 47-х по 49-е сутки инвазии. Вскрытие животных на 5-е сутки после окончания лечения, т.е. на 54-й день инвазии.

Статистическая обработка с использованием непараметрического метода Уклкоксона показала, что худшие результаты лечения при назначении метиазола в суточной дозе 40 мг/кг отмечены в группе мышей, подвергавшихся эмоциональному стрессу. Обработка материала по методу У? и по Колмогорову-Смирнову показала, что эффективность лечения мышей этой группы была достоверно ниже, чем в группах мышей, получавших мезапам, как находившихся под воздействием кошки, так и не подвергавшихся этому воздействию.

Мезапам, устраняя страх, по-видимому, предотвращает снижение неспецифической резистентности и таким образом, опосредованно, способствует повышению эффективности специфической химиотерапии. Однако, очевидно, вследствие относительно позднего назначения мезапама (на 14-е сутки стрессирования) о полном восстановлении неспецифической резистентности говорить не приходится, гак как при сравнении результатов лечения по интенс-эффективности его в разных группах мышей, получавших метиазол в единообразной суточной дозе 15 мкг/кг, статистически досто-

верно худшие результаты получены в группе мышей, подвергавших! воздействию кошки я леченных мезапамом, чем в группах, не подвергавшихся такому воздействию. Этот дефект неспецифической резистентности, возникший у мышей в результате повторяющихся эмоциональных стрессов, лучше выявляется при использовании с терапевтической целью относительно низких доз метиазола.

Таким образом, результаты этого опыта дают основание заключить, что в условиях эмоционального стресса транквилизатор мезапам, обладающий анксиолитическим действием, является тем патогенетическим средством, которое, по-видимому, предотвращая снижение неспецифической резистентности, повышает эффективность специфического курса лечения метиазолом мышей, экспериментально инвазированных ш» mûris«

выводы

1. Эмоциональный стресс, вызванный у подопытных мышей периодическим подсаживанием к ним кошки двавды в день по 2 часа в течение 14 и более суток, снижает эффективность специфической химиотерапии метиазолом мышей линии dba/z., экспериментально инвазированных a. mûris. При этом отмечается половая дифференциация гельминта по его чувствительности к ыетиа-золу.

2. На фоне длительного (14 суток и более) периодически повторяющегося эмоционального стресса возрастает EH^q препарата, увеличивается соотношение ЕИ84 : SUjg в сравнении с животными, не подвергавшимися стрессу, что в целом значительно снижает эффективность химиотерапии.

3. Применение иммуномодуляторов пентоксила или ортофена с

целью повышения эффективности химиотерапии мышей, инвазированных I. mûrie и подвергавшихся длительвому (14 суток или более) эмоциональному стрессу, нецелесообразно, так как при этом наблюдается усиление дий>еренццровки популяция гельминта на две субпопуляции: высоко- и низкочувствительных к метиазолу, о чем свидетельствуют очень высокие значения соотношения ЕДц^ : EHjg» достигающие в разных опытах при назначении пентоксила 44,56 - 57,14, а ортофена - 133,0.

4. Хороший терапевтический эффект оказал транквилизатор мезапам, использованный в качестве анксиолитического средства в комплексе с метиазолом при лечении мышей, экспериментально инвазированных т» mûris и подвергавшихся длительному эмоциональному стрессу.

5. Инвазия ïoimris фактически не сказалась на активности ферментов цитоплазматической мекбраны макрофагов 5' -ку-клеоткдазы и Ка-,К~адеЯ0зинтряф0сфатазы. Эмоциональные стрессы способствовали дифференциации мышей линии dba/2 на две субпопуляцш: с низкой чувствительностью к стрессам и соответственно высоким содержанием 5'-нуклеотидазы в макрофагах пери-товеального экссудата и с высокой чувствительностью к стрессам и низким содержанием в них 5'-нуклеотидазы и Ыа-,к-аде-нозинтрифосфатазы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

I. Эмоциональные стрессы снижают эффективность специфической противогельминтной терапии, что необходимо учитывать как в экспериментальной работе, гак, очевидно, и в клинической практике.

- 24 -

2. Б условиях периодически повторяющихся эмоциональных стрессовых факторов мозено повысить эффективность специфической химиотерапия с помощью транквилизатора мезапама.

аысок налпшх рлзот, опуаыкившш

ПО T?v.iE ДИССЕРТАЦИИ

1. Астафьев Б.А., Сипла И., Солоштин Н.В. Влияние эмоционального стресса на эффективность хшсиотерапии при экспериментальном трихоцефалезе // ¡лед. паразигол. (сдана в печать).

2. Астафьев Б.А., Силла Солоиатан Н.В. Влияние ишяу-номодуляторов а транквилизатора на эффективность химиотерапия при экспериментальном трихоцефалезе, находящихся в условиях эмоционального стресса // кед. параздтол. (сдана в печать).

Тирах 100 экз.