Экспериментальное обоснование сочетанного применения ципрофлоксацина с окситоцином для местного лечения гнойных ран

Скоробогатых, Юрий Иванович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экспериментальное обоснование сочетанного применения ципрофлоксацина с окситоцином для местного лечения гнойных ран
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальное обоснование сочетанного применения ципрофлоксацина с окситоцином для местного лечения гнойных ран"

На правах рукописи

Скоробогатых Юрий Иванович

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СОЧЕТАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЦИПРОФЛОКСАЦИНА С ОКСИТОЦИНОМ ДЛЯ МЕСТНОГО ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН

03.02.03 — «Микробиология» 14.01.17 - «Хирургия»

4846163

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 2 МАЙ 2011

Оренбург-2011

4846163

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук «Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза» УрО РАН и в ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации.

Научные руководители: академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Бухарин Олег Валерьевич Курлаев Петр Петрович

Усвяцов Борис Яковлевич Сафронов Андрей Александрович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации.

рл?

Защита состоится » АЛ&Я 2011 г. в часов на заседании диссертационного совета Д. 208.066.03. при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, д. 6, телефон: (3532) 40-35-02, факс (3532) 77-24-59, зал заседаний диссертационного совета, официальный сайт: http://www.orgma.ru/

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОрГМА Автореферат разослан «Л 4 » 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного советаУ, Л

д. м. н., профессор Немцева Наталия Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Гнойная инфекция в хирургии занимает особое место среди наиболее важных проблем клинической медицины и с течением времени её актуальность приобретает все большую значимость (Ерюхин И. А., 1992; Русаков В. И., 2000). В настоящее время при лечении гнойных ран используются новые антисептики, химиотерапевтические и иммунотропные лекарственные средства, многокомпонентные мази на гидрофильной и гидрофобной основе, про-теолитические ферменты, включаемые в структуру перевязочных, шовных и пластических материалов, методы физического и электрохимического воздействия на рану (Девятов В.А., 2000, Лахно В.М., 2001; Яковлев В.П., 2002). Но, несмотря на это существенного прогресса в терапии хирургической инфекции не достигнуто. Во многих случаях низкая эффективность применения традиционных лекарственных средств обусловлена способностью микроорганизмов, инициирующих гнойно-воспалительный процесс, инактивировать факторы естественной резистентности макроорганизма: лизоцим, интерферон, комплемент и др. (Бухарин О.В., 1992, 1993, 2000), ростом доли анти-биотикорезистентных и антибиотикозависимых штаммов микроорганизмов (Курлаев П.П., 2001) и образовнием ими биопленок (Фадеев С.Б., 2006, 2010), частой сменой возбудителя в процессе лечения (Фадеев С.Б., 2005). Кроме того, препараты для местного медикаментозного лечения часто используются без учета фазы раневого процесса.

Местное применение сочетаний антибиотиков с окситоцином позволило значительно улучшить результаты лечения больных с гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей (Курлаев П.П., 2001), с острыми гнойными заболеваниями легких и плевры (Абрамзон О.М., 2002, 2004), с гнойным гайморитом (Райцелис И.В., 2000), при абдоминальном сепсисе в эксперименте (Кретинин C.B., 2008).

Эффективным в настоящее время при лечении гнойных ран считается применение мазей на гидрофильной основе с использованием смеси полиэти-леноксидов разной молекулярной массы (ПЭО-400 и ПЭО-1500 в соотношении 4:1) (Даценко Б.М., 1995), обладающей высоким осмотическим эффектом, необходимым в I фазу раневого процесса. Кроме того, перспективным является использование кремнийорганического глицерогидрогеля (Хонина Т.Г., 2005), обладающего высокой регенерирующей способностью, что важно для II и III фаз гнойных ран.

Однако, окситоцин совместно с фторхинолонами, имеющими цикло-пропильный радикал, в составе мазей на основе ПЭО и КОГ, ранее не применялся, неизвестно их сочетанное влияние на рост микроорганизмов и их пер-систентный потенциал.

В связи с выше перечисленным, создание мазей, включающих в свою структуру, помимо гидрофильной основы, препарат фторхинолонового ряда

(ципрофлоксацин) и окситоцин позволило бы расширить арсенал средств, используемых в лечении гнойных ран.

Цель и задачи исследования

Целью исследования явилось экспериментальное обоснование эффективности применения комбинации ципрофлоксацина с окситоцином на основе полиэтиленоксидов и кремнийорганического глицерогидрогеля для местного лечения гнойных ран.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить видовой состав, персистентные свойства и образование биопленок клинических штаммов бактерий, возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей.

2. Изучить антимикробный эффект комбинации «ципрофлокса-цин+окситоцин» и их влияние на антилизоцимную активность и биопленко-образование облигатно-анаэробных и факультативно-анаэробных бактерий, в сравнении с монопрепаратами.

3. Исследовать антимикробное действие гидрофильных основ (поли-этиленоксиды и кремнийорганический глицерогидрогель) совместно с комплексом «ципрофлоксацин+окситоцин», а также влияние комбинации данных препаратов на антилизоцимную активность и биопленкообразование микроорганизмов.

4. В эксперименте на животных при лечении гнойных ран оценить эффективность местного применения комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» с ПЭО основой (ципроксиновая мазь I) и комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» с КОГ основой (ципроксиновая мазь II).

Научная новизна

Проведенные исследования in vitro выявили высокую антимикробную активность совместного применения окситоцина и ципрофлоксацина, что выразилось в значительном снижении МПК ципрофлоксацина при его сочетании с окситоцином в отношении представителей различной гноеродной микрофлоры. При сочетании ципрофлоксацина с окситоцином не только повышалась чувствительность к ципрофлоксацину у чувствительных штаммов микроорганизмов, но и появлению чувствительности у резистентных культур бактерий, что, вероятно, может рассматриваться как один из подходов решения проблемы воздействия на антибиотикорезистентную госпитальную микрофлору.

Установлено выраженное снижение АЛА и БПО клинических изолятов микроорганизмов при их культивировании в питательной среде, включающей комбинацию ципрофлоксацина с окситоцином.

Комбинация «ципрофлоксацин+окситоцин» с гидрофильными основами (ПЭО и КОГ) обладала высокой антимикробной активностью и угнетала

антилизоцимную активность и биопленкообразование патогенов. Снижение средних значений АЛА и БПО микроорганизмов при действии комбинации препаратов «ципрофлоксацин+окситоцин» и их сочетания с гидрофильной основой сопровождалось перераспределением клонов бактерий в сторону увеличения численности диссоциантов с низкими значениями признака и без признака.

На основе экспериментальных данных создана мазь для лечения гнойных ран в первой фазе раневого процесса (мазь ципроксиновая I), включающая ципрофлоксацин с окситоцином на основе полиэтиленоксидов (патент РФ на изобретение № 2306947, 27.09.2007). Использование комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» на другой основе - кремнийорганический глице-рогидрогель, позволило создать мазь (мазь ципроксиновая II), пригодную для лечения II и III фаз гнойных ран (положительное решение формальной экспертизы по заявке на изобретение, регистрационный № 2011107059 от 24.02.2011).

Местное применение мази ципроксиновой I и II в эксперименте обеспечивало более раннюю элиминацию микрофлоры из очага воспаления, прекращение выделения гнойного экссудата и стимуляции репаративных процессов в ране, что в конечном итоге приводило к более быстрому выздоровлению животных.

Научно-практическое значение

Высокая экспрессивность и пенетрантность антилизоцимной активности и биопленкообразования стафилококков, как основных возбудителей ГВЗМТ, в сочетании с определением их антибиотикочувствительности, позволяет считать данные критерии в качестве информативных параметров при исследовании и создании препаратов, пригодных для борьбы с персисти-рующей инфекцией.

Практическое значение исследования заключается в разработке новой лекарственной формы - ципроксиновых мазей I и II, действенность которых доказана в экспериментах in vitro и in vivo при лечении гнойных ран животных: ципроксиновая мазь I показала свою эффективность в I фазу, а ципроксиновая мазь II - во II и III фазы раневого процесса.

Проведённые исследования служат основанием для представления материалов в отдел регистрации лекарственных средств, при «Федеральной службе по надзору в сфере Здравоохранения и социального развития» для получения разрешения на клиническую апробацию комбинированного препарата - ципрофлоксацина с окситоцином на основе полиэтиленоксидов и кремнийорганического глицерогидрогеля для лечения гнойных ран.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Широкая распространенность и высокая экспрессивность антилизо-цимной и биопленкообразующей активности стафилококков позволяет рекомендовать данные критерии для оценки эффективности препаратов при лечении гнойных ран.

2. Применение комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» в сочетании с ПЭО и КОГ показало высокую эффективность за счет увеличения антимикробного эффекта и снижения антилизоцимной и биопленкообразующей способностей патогенов in vitro и in vivo.

Апробация работы и публикации

Основные результаты исследований представлены и обсуждены на научной конференции ОрГМА «Актуальные вопросы экстренной и восстановительной хирургии» (Оренбург, 2005), научной конференции ОрГМА «Молодые ученые - здравоохранению» (Оренбург, 2006), научно-практической конференции ЮУЖД и ЧелГМА «Актуальные вопросы хирургии» (Челябинск, 2006), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 90-летию образования первой в России кафедры травматологии (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, получен патент РФ на изобретение и изданы методические рекомендации.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 166 страницах и состоит из введения, 7 глав, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Последний включает 266 источника, в том числе 216 работ отечественных и 50 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 6 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Проведены бактериологические посевы содержимого гнойных полостей (раневого отделяемого) полученного от 168 больных в возрасте от 18 до 84 лет, находившихся на лечении в Отделенческой клинической больнице на ст. Оренбург в период с 2000 по 2006 гг.

Бактериологическое исследование проводили путем посева гнойного отделяемого на селективные среды с определением уровня бактериальной обсемененности методом секторальных посевов (Биргер О.М., 1982). Для выделения облигатно-анаэробных бактерий анаэробные условия создавали с

помощью газогенераторных пакетов "GasPak Anaerobic System" (BBL, США) в анаэробной камере "GasPak 150" (BBL, США). Биохимический профиль факультативно-анаэробных микроорганизмов оценивали с помощью коммерческих тест-систем: "ENTEROtest 24", "STREPTOtest 16", "STAPHYtest 16", "NEFERMtest" (LACHEMA, Чехия) и "API20CAUX" (bioMerieux, Франция).

Антилизоцимную (АЛА), антикомплементарную (АКА), антикарно-зиновую (АКрА) и «антиинтерфероновую» (АИА) активности исследовали по методикам О.В. Бухарина с соавт. (1999). Образование биоплёнок оценивали по способности штаммов бактерий к адгезии на поверхности 96-луночных полистероловых стерильных планшет (OToole G., 2000). Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам проводили методом серийных микроразведений в соответствии с международным стандартом NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1997).

In vitro исследовано влияние ципрофлоксацина, ципрофлоксацина с ок-ситоцином и их сочетаний с ПЭО и КОГ на клинические штаммы бактерий: Staphylococcus aureus (12 штаммов), Staphylococcus epidermidis (12 штаммов), Streptococcus haemolyticus (12 штаммов), Escherichia coli (6 штаммов), Klebsiella pneumonia (6 штаммов), Proteus vulgaris (12 штаммов), Pseudomonas aeruginosae (12 штаммов), Bacteroides fragilis (6 штаммов), Peptostreptococcus anaerobius (6 штаммов).

При определении антимикробного эффекта ципрофлоксацина при его сочетании с окситоцином и гидрофильными основами, а также их влияния на персистентные свойства бактерий, проводилось сокультивирование микроорганизмов исследуемых групп с суббактериостатическим концентрациями антимикробного препарата ПЭО и КОГ смешивали с питательным бульоном в соотношении 1:9 (Кириллов Д.А., 2004).

Для характеристики гетерогенности популяций использовали ивдекс диссоциации, который рассчитывали как долю (%) колоний определенного фенотипа к общему числу колоний.

В исследованиях использовали ципрофлоксацин («Dr. Reddy's», Индия), окситоцин («Гедеон Рихтер», Венгрия), окситоцин-плацебо («Гедеон Рихтер», Венгрия), полиэтиленоксид (ПЭО) 1500 и ПЭО 400 (ОАО «СИБУР-НЕФТЕХИМ», Дзержинск), кремнийорганческий глицерогидрогель (ИОС им. И. Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург).

Названия полученных многокомпонетных мазей составлены в соответствии с методическими рекомендациями «Рациональный выбор названий лекарственных средств» (Стародубцев В.И., 2005).

В экспериментах in vivo использовали 87 взрослых белых крыс линии Vistar весом 150-200 гр., гнойные раны моделировались по методу Е. М. Данилиной (1983). Раны экспериментальных животных инфицировали штаммом

S.aureus № 104 в количестве 109 КОЕ/мл. На 4 сутки формировались гнойные раны. На 5 сутки начинали местное лечение.

Для сравнения эффективности лечения экспериментальных животных в I фазу раневого процесса разделили их на 4 группы (эксперимент №1): в 1-й группе (12 крыс) местно применяли комбинацию ципрофлоксацина с оксито-цином на основе ПЭО (ципроксиновая мазь I). Перевязки с изучаемой лекарственной формой проводили ежедневно до очищения раны и появления краевой эпителизации с последующим местным применением гидрофобной мази «Метилдиоксилин»; во 2-й сравниваемой группе (12 крыс) местно использовали по такой же методике ципрофлоксацин на гидрофильной основе без ок-ситоцина, в 3 сравниваемой группе (12 крыс) применяли только окситоцин на гидрофильной основе; в контрольной 4 группе (12 крыс) раны заживали естественным путем без применения лекарственных средств. В эксперименте №2 лечение животных было проведено на всех 3-х фазах раневого процесса. В 1-й группе (6 крыс) местно применяли ципроксиновую мазь I. Перевязки проводили по выше описанной методике, с последующим местным применением гидрофобной мази «Метилдиоксилин», в контрольной 2 группе (6 крыс) применяли мазь «Левомеколь» в первую фазу и во второй фазе мазь «Метилдиоксилин» и в сравниваемой 3 группе (6 крыс) в первую фазу раневого процесса использовали ципроксиновую мазь I и во второй фазе ципроксиновую мазь II. Оценка летальности в каждой из исследуемых групп животных была проведена на 21 крысе. Из ран производились отпечатки до лечения, на третьи и пятые сутки. Отпечатки фиксировали на предметных стеклах смесью этанола и метанола (в соотношении 1:1) для последующего микроскопического исследования. Процесс биопленкообразования изучали по нативным препаратам после их окраски кристаллвиолетом с использованием иммерсионной световой микроскопии при увеличении объективов Х40 и XI00 («Carl Zeiss»). Эффективность лечения оценивали по времени очищения и появления краевой эпителизации раны, срокам нормализации показателей периферической крови, высеваемости микрофлоры на 3 и 5 день лечения.

Для гистологических характеристик регенераторного процесса у крыс 1-й, 2-й и 3-й групп (эксперимент№2) брали кусочки тканей через все слои раны до начала лечения, на 5 и 7 сутки. Гистосрезы толщиной 6-8 мкм изготавливались на ротационном микротоме, после депарафинирования окрашивались гематоксиленом Майера и эозином, пикрофуксином по Ван Гизон, метиленовым зеленым по Браше, перйодатом К и реактивом Шиффа по Мак Манусу с постановкой энзиматических контролей (Э. Пирс, 1962) Цитологическая оценка раневого процесса проводилась после окраски препаратов азур-эозином под световым микроскопом путем подсчёта клеточных элементов и определения типа цитограмм по общепринятой методике (Покровская М.П., Макаров М.С., 1942; Кузин М.И., Костюченок Б.М., 1991).

Данные были подвергнуты статистической обработке в компьютерной оболочке Windows с помощью процессора электронных таблиц Microsoft Office Excel 2003 и программы «Биостат» путем подсчета средней арифметической (М) и средней ошибки средней величины (ш), вероятность значений разницы (р), коэффициента ранговой корреляции Спирмена для оценки силы и направленности корреляционной связи между двумя изучаемыми явлениями (Гланц С., 1999). Полученные результаты по влиянию ципрофлоксацина, окситоцина, ПЭО, кремнийорганического глицерогидрогеля и их сочетаний на чувствительность к антибиотикам и персистентные свойства бактерий оценивали непараметрическим методом с применением критерия Манна-Уитни. Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при значении р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Проведенный анализ видового состава микрофлоры, изолированной из ран пациентов с ГВЗМТ, показал, что этиологический фактор при данной патологии представлен широким спектром микроорганизмов. Преобладающее большинство изолированных микроорганизмов составили факультативно-анаэробные бактерии, которые были обнаружены у всех обследуемых пациентов, тогда как облигатно-анаэробные неспорообразующие бактерии выявлены только в 11,8 % случаев. Факультативно-анаэробные бактерии по видовому составу были ранжированы следующим образом: S. aureus (79 %) > Streptococcus spp. (7 %) > Е. coli, Proteus spp. (5 %) > Pseudomonas spp. (3 %) > C. albicans (1 %). Видовой состав облигатно-анаэробных микроорганизмов был представлен в 74,1 % В. fragilis и в 25,9 % анаэробными кокками. Полученные данные согласуются с результатами исследований других авторов (Блатун JI.A., 2007; Lina G. et al., 1996; Church D. et al., 2006), отметивших, что наряду с факультативно-анаэробными бактериями в видовом спектре при раневой инфекции, встречаются такие облигатно-анаэробные микроорганизмы, такие как В. fragilis и P. anaerobius.

На следующем этапе были изучены распространённость а выраженность факторов персистенции, от которых зависит продолжительность течения и наличие осложнений ряда заболеваний (Бухарин О.В. и соавт., 1993; Бухарин О.В., 1994, 2000; Чернова О Л. и соавт., 1997; Дерябин Д.Г., Шаги-нян И.А., 2000).

Распространенность персистентных признаков различалась у представителей грампозитивных кокков, грамнегативных бактерий и дрожжевых грибов. Так, для грампозитивных кокков распространенность секретируемых факторов персистенции убывала в ряду АЛА (69,5 %) > АКрА (65,7 %) > АКА (55,6 %) > АИА (46,5 %). У представителей грамнегативных бактерий и дрожжевых грибов распространенность персистентных свойств снижалась в ряду: АЛА (100 %)> АКА (85,7 % и 91,5 % соответственно) > АИА (68,9 % и 91,3 % соответственно) > АКрА (42 % и 46,5 % соответственно).

Установлено, что представители грамнегативной факультативно- и об-лигатно-анаэробной микрофлоры обладали более высокими значениями экспрессии антилизоцимной (в среднем 1,61±0,2 мкг/мл*ОП) и антикомплементарной (в среднем 2,0±0,3 анти-СН50) активностей в сравнении с грампози-тивными кокками (в среднем 1,1±0,2 мкг/мл*ОП и 1,2±0,2 анти-СН50 соответственно).

В настоящее время известно, что БПО является универсальным способом выживания патогенов в неблагоприятных условиях существования, а также широко распространено у возбудителей хирургической инфекции мягких тканей (Фадеев С.Б., 2010). Проведённые исследования показали, от 92,8 до 100 % патогенов были способны к формированию биоплёнок. Среди исследуемых штаммов бактерий наиболее высокими значениями БПО обладали культуры грамотрицательных факультативно- и облигатно-анаэробных бактерий: Е. coli (6,1±0,5 ед), Р. vulgaris (7,3±0,5 ед), Р. aeruginosa (7,7±0,5 ед и В. fragilis (4,9±0,5 ед).

Полученные результаты согласуются с известными литературными данными о роли микробных биопленок и способности патогенов инактивиро-вать лизоцим в развитии целого ряда инфекций человека, включая хирургическую патологию (Бухарин О.В., 2005; Фадеев С.Б., 2010; Davis S., 2008).

Таким образом, проведенные исследования позволяют заключить, что наиболее распространенными признаками персистенции среди возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей являлись АЛА и БПО патогенов, которые были обнаружены в среднем у 86,4% и 97,9 % штаммов соответственно.

Микробные биопленки обладают высокой резистентностью к воздействию различных антимикробных агентов, что затрудняет лечение инфекций у пациентов с различной патологией и приводит к высокой частоте летальных исходов заболеваний (Ильина Т.С., 2004; Costerton J.W., 1999; Donlan R. М., 2002). В связи с этим, на следующем этапе была изучена антибиотикочувст-вительность биопленкообразующих патогенов и проведён корреляционный анализ антибиотикорезистентности и персистентных свойств микроорганизмов. Было установлено, что наиболее эффективными препаратами в борьбе с возбудителями гнойных заболеваний мягких тканей являются антибиотики группы цефалоспоринов III поколения (цефабол), подавляющие 77,9 % исследуемых штаммов бактерий, за исключением изолятов В. fragilis, которые были наиболее чувствительны к фторхинолонам II поколения (ципрофлокса-цин). Кроме того, высокая частота (более 70%) обнаружения антибиотико-чувствительности к ципрофлоксацину выявлена у стафилококков, стрептококков и энтеробактерий. Резистентность к данному препарату выявлена у 15,4% клинических изолятов S. aureus, у 30,3% КОС, у 28,8% стрептококков, у 24% энтеробактерий, у 28,6% анаэробных кокков и у 95% бактероидов. Также обращает на себя внимание высокая распространенность антибиотикорезистентности микроорганизмов, изолированных из раневого отделяемого пациентов с ГВЗМТ в отношении антибиотиков пенициллинового ряда: чув-

ствительность к данному препарату была обнаружена всего у 2,2% S. aureus и 2,9% КОС.

Выявлена прямая корреляционная связь антибиотикорезистентности стафилококков с высоким уровнем экспрессии антилизоцимного признака (гху=0,85; р<0,01), биопленкообразования (гху = 0,76; р<0,01) и антикомплементарной активности (гху = 0,61; р<0,05) данных видов бактерий. Корреляционная связь антибиотикорезистентности стафилококков с их экспрессией антикарнозиновой и «антиинтерфероновой» активностями была слабой (гху = 0,44 и гху = 0,26 соответственно).

Анализ полученных данных позволил выбрать критерии эффективности влияния препаратов для последующего лечения ГВЗМТ, которыми являлись:

• использование в качестве модельных штаммов бактерий вида S. aureus;

• оценка изменений АЛА и БПО бактерий под влиянием препаратов.

Учитывая, что при лечении инфекции в последнее время используют

окситоцин, потенцирующий противомикробное действие ряда антибактериальных препаратов в отношении различной гноеродной микрофлоры (Курла-ев П.П., 1986) и подавляющий её персистентный потенциал (Курлаев П.П., 2001; Абрамзон О.М., 2004; Кретинин C.B., 2008), мы провели экспериментальное изучение антимикробного эффекта комбинации ципрофлоксацина с окситоцином на клинических штаммах бактерий видов S. aureus, S. epider-midis, E. coli, К. pneumoniae, P. aeruginosae, В. fragilis и P. anaerobius, изолированных из ран пациентов при ГВЗМТ.

Установлено, что грамнегативные и грампозитивные как факультативно-анаэробные, так и облигатно-анаэробные бактерии проявляли большую чувствительность к комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» по сравнению с чувствительностью к монопрепаратам. Внесение в среду культивирования окситоцина совместно с ципрофлоксацином приводило к снижению МПК антимикробного препарата у всех, как антибиотикочувствительных (S), так и антибиотикорезистентных (R) культур микроорганизмов. Среди S-штаммов бактерий МПК ципрофлоксацина под действием окситоцина снижалась в среднем в 16 раз от исходных значений (0,5 мкг/мл против 8 мкг/мл) (р<0,05). Отмечено исчезновение резистентности к ципрофлоксацину у исследуемых R-штаммов микроорганизмов, средние значения МПК которых снизились с 16 мкг/мл до 2 мкг/мл (в 8 раз)*(р<0,05), что соответствовало переходу МПК ципрофлоксацина из зоны резистентности в зону чувствительности.

Кроме этого, сочетание ципрофлоксацина с окситоцином более эффективно, чем ципрофлоксацин и окситоцин в отдельности, ингибировало анти-лизоцимную активность и способность к образованию биопленок патогенов. Соинкубирование исследуемых культур микроорганизмов с комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» приводило к снижению AJIA в среднем у 88,5±2,1% бактерий на 58,6±7,2% от исходного уровня признака (р<0,05) (рис. 1) и БПО в среднем у 73,3±4,1 % микробных культур на 44,7±8,3 % по сравнению с контролем (р<0,05)(рис.2).

Использование популяционного подхода для изучения влияния препаратов на их персистентные свойства, позволило определить, что одним из механизмов снижения значений антилизоцимной активности и биопленкообразования бактерий под действием комбинации

Enterobacteriaceae P. aeruginosa Staphylococcus spp. B. fragilis P. anaerobius

■ Окситоцин ВОкситоцин-плацебо ШЦипрофлоксацин И Ципрофлоксацин с окситоцином

Рис. 1 - Частота снижения антилизоцимной активности патогенов под влиянием окситоцина, окситоцина-плацебо, ципрофлоксацина, и комбинации ци-профлоксацина с окситоцином

Примечание: * - р <0,05 (по сравнению с ципрофлоксацином)

Enterobacteriaceae P. aeruginosa Staphylococcus spp. В. fragilis P. anaerobius

■ Окситоцин НОкситоцин-плацебо ■ Ципрофлоксацин В Ципрофлоксацин с окситоцином

Рис. 2 - Частота снижения способности патогенов к образованию биопленок под влиянием окситоцина, окситоцина-плацебо, ципрофлоксацина, и комбинации ципрофлоксацина с окситоцином Примечание: * - р <0,05 (по сравнению с ципрофлоксацином)

«цирофлоксацин+окситоцин» является перестройка структуры популяции бактерий по АЛА и БПО в сторону снижения доли диссоциантов с высоким уровнем признаков и появлением клонов, не обладающих АЛА и БПО.

Проведенные исследования in vitro позволяют рекомендовать комбинацию «ципрофлоксацин+окситоцин» в качестве эффективного средства в борьбе с антибиотикорезистентными персистирующими патогенами, возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей.

Несмотря на успехи клинической медицины и фармакологической науки, проблема лечения гнойных ран не перестает быть актуальной, поскольку вопросы эффективного лечения с учетом фазы раневого процесса решаются не всегда успешно, а применение антимикробных препаратов в отношении антибиотикорезистентной персистирующей микрофлоры не эффективно, что приводит к развитию микробных биопленок, устойчивых к терапевтическим воздействиям и рецидивированию воспалительного процесса в ране с развитием гнойно-септических осложнений.

В связи с этим в дальнейших исследованиях мы изучили антимикробную активность ципрофлоксацина с окситоцином и гидрофильными основами, а также совместное влияние этих препаратов на АЛА и БПО бактерий.

Известно, что раневой процесс представляет собой сложный комплекс реакций, который можно подразделить на три различающиеся между собой и последовательно протекающие фазы: воспаления (I фаза), регенерации (II фаза) и эпителизации раневой поверхности и реорганизация рубца (III фаза) (Кузин М.И., 1991).

В настоящее время в I фазу раневого процесса применяются мази на гидрофильной основе с использованием смеси полиэтиленоксидов с разной молекулярной массой (ПЭО-400 и ПЭО-1500 в соотношении 4:1) (Даценко Б.М., 1995), а также кремнийорганический глицерогидрогель, обладающий высокой регенерирующей способностью (Патент РФ 2255939 МКИ C07F 7/04 2005 г. Per. № 1075114) (патентообладатель - Институт органического синтеза им. И. Я. Постовского Уральского отделения РАН, г. Екатеринбург), что предполагает его использование во II и III фазы раневого процесса^

Установлено, что при сочетании комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» с ПЭО и КОГ, зона подавления роста исследуемой микрофлоры увеличивалась в среднем на 27,3±1,6% и 29,5±1,1% соответственно в сравнении с комбинацией «ципрофлоксацин+окситоцин» без гидрофильных основ (р<0,05).

Проведенные исследования позволили установить, что сочетание «ципрофлоксацин+окситоцин» с ПЭО и КОГ более эффективно, чем в отсутствии гидрофильных основ, ингибировало антилизоцимную активность и способность к образованию биопленок патогенов.

Enterobacteriaceae P- aeruginosa Staphylococcus spp. B. tragilis P. anaerobius

□ цип/окс Я ПЭО ВКОГ Нцип/окс/ПЭО Ицип/окс/КОГ

Рис. 3 - Частота снижения антшгазоцимной активности патогенов под влиянием комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин», ПЭО, КОГ и их сочетаний. Примечание:- р <0,05(по сравнению с комбинацией « цип+окс») цип - ципрофлоксацин; оке - окситоцин; ПЭО - полиэтиленоксиды; КОГ -кремнийорганический глицерогидрогель.

Enterobacteriaceae P. aeruginosa Staphylococcus spp. В. tragilis P. anaerobius

□ цип/окс ШПЭО а КОГ □цип/окс/ПЭО Ицип/окс/КОГ

Рис. 4 - Частота снижения способности патогенов к образованию биопленок под влиянием комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин», ПЭО, КОГ и их сочетаний. Примечание:- р <0,05(по сравнению с комбинацией « цип+окс»). цип - ципрофлоксацин; оке - окситоцин; ПЭО - полиэтиленоксиды; КОГ -кремнийорганический глицерогидрогель

Снижение АЛА бактерий чаще происходило под влиянием комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин+ПЭО» (в 98,4±1,6% случаев) и «ципрофлокса-цин+окситоцин+КОГ» (в 96,6±3,4% случаев), чем под действием комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» без гидрофильных основ (в 88,5±2Д% случаев) (рис. 3). Выраженность АЛА в среднем снижалась на 75,7±4,3 % в сравнении - с контролем (без влияния препаратов) (р<0,05) и на 17,1±2,0 % в сравнении с комбинацией «ципрофлоксацин+окситоцин» без ПЭО (р<0,05). Аналогичная закономерность была отмечена и при сочетании препаратов с КОГ: выраженность признака снижалась на 76,8±5,4 % в сравнении с контролем (р<0,05) и на 20,2+3,1 % в сравнении с комбинацией «ципрофлоксацин+окситоцин» без КОГ (р<0,05).

Схожие результаты были получены при влиянии исследуемых препаратов на БПО бактерий (рис. 4). Частота выявления ингибирующего эффекта препаратов при сочетании «ципрофлоксацин+окситоцин+ПЭО» на БПО бактерий была выше, чем комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» (73,3±4,1% против 91,7±3,7%) (р<0,05), а выраженность БПО микроорганизмов в среднем снижалась на 76,8±7,0 % в сравнении с контролем (р<0,05) и на 18,2±2,1 % в сравнении с комбинацией «ципрофлоксацин+окситоцин» без ПЭО (р<0,05). Внесение КОГ совместно с комбинацией «ципрофлоксацин+окситоцин» в среду культивирования бактерий способствовало увеличению частоты встречаемости ингибирующего эффекта действия препаратов на БПО бактерий в сравнении с комбинацией препаратов без основ (96,7+3,3% против 73,3±4,1 %) (р<0,05). Выраженность признака в среднем снижалась на 61,7+4,3 % в сравнении с контролем (р<0,05) и на 17±5,4 % в сравнении с комбинацией «ципрофлоксацин+окситоцин» без КОГ (р<0,05).

Использование популяции микроорганизмов в качестве модели для изучения влияния препаратов на персистентные свойства микроорганизмов, позволило определить, что одним из механизмов снижения значений АЛА и БПО при воздействии на них сочетаний «ципрофлоксацин+окситоцин» с ПЭО и КОГ, является перестройка популяции бактер'ий по АЛА и БПО в сторону снижения доли диссоциантов с высоким уровнем признаков и увеличением доли клонов с низким уровнем признака и не обладающих АЛА и БПО.

Проведенные исследования in vitro позволяют рекомендовать комбинацию «ципрофлоксацин+окситоцин+ПЭО» и «ципрофлоксацин+окситоцин-+КОГ» в качестве эффективных средств, в борьбе с персистирующими патогенами, возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей.

Экспериментальные исследования in vivo подтвердили более высокую эффективность местного применения сочетания ципрофлоксацина с оксито-цином на гидрофильной основе, по сравнению с использованием в

Табл. 1 - Сравнительные результаты лечения крыс с гнойными ранами мягких тканей в эксперименте № 1.

N. ГруППЫ N. крыс показатели \ группа 1 (п=12) группа 2 (п=12) группа 3 (п=12) группа 4 (п=12)

Высеваемость микрофлоры на 3 день лечения (число крыс) 4 7 12 12

Сроки очищения ран от начала лечения (сутки) 3,3+0,2* 7,8 ± 0,7 10,2 ± 0,8 11,2 + 2,3

Сроки нормализации показателей периферической крови (дни) 2,1 ± 0,5 * 4,6 ± 0,5 6,2 ± 0,5 6,6 + 0,5

Сроки появления краевой эпителизации (дни) 4,2 ± 0,4 * 6,9 ± 0,9 7,0 + 0,8 7,9 ± 0,8

Наличие микробных био-, пленок в ране наЗ сутки от начала лечения (% животных) 16,7±2,4% * 50 + 6,1% 100% 100%

Примечание: группа 1 - ципрофлоксацин + окситоцин + ПЭО; группа 2- ци-профлоксацин + ПЭО; группа 3 - окситоцин + ПЭО; группа 4 - без лечения (контроль)

* - р<0,05 ( в сравнении с другими группами животных)

лечении гнойных ран ципрофлоксацина или окситоцина в отдельности (табл.1), что выразилось в более ранних сроках очищения ран, появления краевой эпителизации и нормализации показателей периферической крови. В 1 группе животных получавших ципроксиновую мазь I на 3 день лечения посевы из раневого секрета не давали роста микрофлоры в 66,7% случаев, в то время как у животных во 2 группе этот показатель составлял 41,7%, а 3 и 4 группах леченных с применением окситоцина и без лечения рост микрофлоры регистрировался во всех случаях.

При проведении лечебных мероприятий на 3 и 5 сутки отмечалось полное отсутствие микробных биопленок в ране у 83,3 и 91,7 % крыс 1 группы, тогда как во 2 группе данный показатель составил 50 и 66,7% соответственно. Лечение крыс одним окситоцином практически не влияло на образование биопленок бактерий: микроскопическое исследование патологических образцов из ран крыс 3 группы было сходно с контрольной группой животных (не получавших лечение) и выявило наличие сформировавшихся (зрелых) микробных биопленок, занимающих большую часть поля зрения у всех животных. Изучение показателей цитограммы выявило более раннюю смену некротического типа в наиболее благоприятный регенераторный тип при использовании разработанных мазей по сравнению с другими группами. Экспериментальные исследования in vivo подтвердили более высокую эффективность местного применения сочетания ципрофлоксацина с окситоцином на гидрофильной основе, по сравнению с результатами лечения гнойных ранами во 2, 3 и 4 группах крыс, что выразилось в более ранних сроках очищения ран, появления краевой эпителизации и нормализации показателей периферической крови.

На следующем этапе произведено сравнение результатов лечения гнойных ран у крыс в эксперименте №2 (табл. 2). Как видно из полученных данных, у крыс, леченных в фазу воспаления путем применения мази «Левоме-коль» сроки обнаружения признаков наступления II фазы раневого процесса достоверно были увеличены по сравнению с I и III группами животных. При проведении лечения в фазу регенерации и эпителизации гнойных ран у животных, выявлены признаки вторичного инфицирования раны у 66,7 % крыс во II группе, тогда как повторное развитие инфекции в I и III группах отмечалось лишь в 16,7 % случаев.

Численность макрофагов и фибробластов, отражающих регенераторные процессы, происходящие в ране, были достоверны выше у крыс III группы, в сравнении с I и II группой. В результате проведенного лечения гнойных ран у животных III группы полное заживление раны происходило быстрее на 14,2 ± 0,7 сутки от начала лечения), чем у крыс I и II групп животных (соответственно на 17,4 ± 2,5 и 21,4 ± 2,5 сутки от начала лечения). Летальность во всех исследуемых группах животных отсутствовала.

Максимальные вышеописанные изменения отмечены при сочетанном действии ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим

Табл. 2 - Сравнительные результаты лечения крыс с гнойными ранами мягких тканей в эксперименте №2.

Группы крыс Показатели группа 1 (П=6) группа 2 (п=6) группа 3 (п=6)

Высеваемость микрофлоры на 3 день лечения 2 5 2

ПМО бактерий 3 день лечения (КОЕ/мл) 105 107 105

я и § в о АЛА бактерий 3 день лечения (средние значения АЛА в мкг/мл*ОП) 1,21± 0,1* 1,54±0,1 1,13+0,1*

й й БПО бактерий 3 день лечения (средние значения БПО в ед.) 8,2±0,9 * 10,9±1,1 7,9±0,9 *

Сроки очищения ран от начала лечения (сутки) 3,3 ± 0,2 * 7,8 ± 0,8 3,3 ± 0,2 *

Сроки нормализации показателей периферической крови (дни) 2,1 + 0,5 * 4,2 ± 0,5 2,1 + 0,5 *

Сроки появления краевой эпителизации (дни) 4,2 ± 0,8 * 8,9 ± 0,8 4,2 ± 0,8 *

'х Присоединения вторичной инфекции (% крыс) 16,7% * 66,7 % 16,7% *

1 ПМО бактерий (КОЕ/мл) 101 10" 101

со 8 Ц и 5 АЛА бактерий 5 день лечения (средние значения АЛА в мкг/мл*ОП) 0,61±0,08* 2,02±0,2 0,57+0,07*

т 18 БПО бактерий 5 день лечения (средние значения БПО в ед.) 5,4±0,9 * 13,8±1,2 4,6±0,9 *

•1 Он и ж Макрофаги (абс.) в условных полях зрения 14,6±4,1 * 6,3±1,5 16,6±4,1 *

о Й Фибробласты (малодифферен-цированные), % 2,7±0,1 * 1,4±0,2 3,9±0,2*

Е Пролиферирующие эпидер-моциты + единич. клетки +

Сроки полного заживления раны (дни) 17,4 ± 2,5 * 21,4 ± 2,5 14,2 ± 0,7 *

Примечание: *- р<0,01 по сравнению со II группой. Обозначения: 1 группа крыс - Ципроксиновая мазь I + «Метилдиоксилин», 2 группа крыс -«Левомеколь» + «Метилдиоксилин» , 3 группа крыс - Ципроксиновая мазь I + Ципроксиновая мазь II

глицерогидрогелем. Использование в фазах регенерации и эпителизации новой мази ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем в экспериментах in vivo, способствовало стимуляции регенераторных процессов в ткани, что приводило к более быстрому заживлению раны: на 7 дней

раньше, чем при традиционном лечении мазями «Левомеколь» и «Метилди-оксилин» и на 3 дня раньше, чем при лечении с применением комбинации ципрофлоксацина с окситоцином на основе смеси полиэтиленоксидов и «Ме-тилдиоксилин».

При микробиологическом обследовании ран экспериментальных животных установлено, что под влиянием комбинации «ципрофлок-сацин+окситоцин» с ПЭО и КОГ происходит снижение персистентных свойств бактерий, что, в конечном итоге, способствует элиминации микроорганизмов из раны.

Местное использование ципроксиновой мази I и II при лечении гнойных ран достоверно снижает уровень бактериальной обсемененности и обеспечивает эффективное очищение раны путем прямого влияния на инициирующую микрофлору. Можно полагать, что в основе механизма антимикробного действия комбинации окситоцина и ципрофлоксацина на основе ПЭО и КОГ, лежит не только снижение МПК химиопрепарата в отношении патогена, но и подавление его антилизоцимной активности и биопленкообра-зования в ране, увеличивает регенераторные возможности эндотелиоцитов, фибробластов и адвентициальных клеток, тем самым, способствуя эффективному формированию полноценной грануляционной ткани, что позволяет значительно сократить сроки заживления гнойной раны.

Проведенные исследования свидетельствуют о целесообразности совместного применения ципрофлоксацина с окситоцином и смесью полиэтиленоксидов при лечении гнойных ран, в I фазу раневого процесса, а во II и III фазы - комбинацию ципрофлоксацина с окситоцином и кремнийорганическим глицерогидрогелем. Применение в клинической практике предлагаемых лекарственных прописей позволит расширить арсенал препаратов, эффективных в отношении хирургической инфекции мягких тканей.

Таким образом, результаты проведённой работы позволили^ выделить три основных момента:

- наиболее распространенным возбудителем гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей в хирургической клинике остаются микроорганизмы рода Staphylococcus, обладающие высокой пенетрантностью и экспрессивностью факторов персистенции, включая способность к образованию биопленок;

- применение комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» приводит к ингибированию АЛА и БПО микроорганизмов, а использование различных основ способствует дальнейшему снижению персистентных свойств микроорганизмов;

- в условиях in vivo доказана эффективность местного применения ПЭО и кремнийорганического глицерогидрогеля в сочетании с комбинацией «ципрофлоксацин+окситоцин» при лечении гнойных ран.

ВЫВОДЫ

1. При ГВЗМТ преобладающее большинство изолированных микроорганизмов составили факультативно-анаэробные бактерии, которые были обнаружены у всех обследуемых пациентов, тогда как представители облигат-но-анаэробных неспорообразующих бактерий выявлены только в 11,8 % случаев. Факультативно-анаэробные бактерии по видовому составу были ранжированы следующим образом: S. aureus (79 %) > Streptococcus spp. (7 %) > Е. coli, Proteus spp. (5 %) > Pseudomonas spp. (3 %) > C. albicans (1 %). Видовой состав облигатно-анаэробных микроорганизмов был представлен в 74,1 % В. fragilis и в 25,9 % анаэробными кокками.

2. Высокая частота обнаружения золотистых стафилококков, проявляющих персистентные свойства и способность к биопленкообразованию, позволяет обосновать использование S. aureus в качестве модельного вида бактерий, пригодного для оценки эффективности воздействия лекарственных препаратов при лечении ГВЗМТ.

3. Экспериментально в условиях in vitro выявлено, что окситоцин повышал чувствительность к ципрофлоксацину у всех исследованных антибио-тикочувствительных культур бактерий в среднем в 16 раз и способствовал появлению чувствительности к антимикробному препарату у исследуемых антибиотикорезистентных микроорганизмов.

4. Применение окситоцина с ципрофлоксацином потенцировало инги-бирующий эффект препаратов в отношении персистентных свойств патогенов: угнетение AJIA выявлено у 88,5±2,1 % исследуемых штаммов, БПО - у 73,3±4,1 % культур.

5. Предложен новый препарат (ципроксиновая мазь I) содержащий комбинацию окситоцина с ципрофлоксацином на основе ПЭО в соотношении: 0,2 г ципрофлоксацина д 5 ME окситоцина, для борьбы с гноеродной микрофлорой. Включение основы ПЭО - 19,05 г полиэтиленоксида -1500 и 76,2 г полиэтиленоксида - 400 в комбинацию ципрофлоксацина с окситоци-ном повышало антибактериальный эффект в отношении всех тестируемых микроорганизмов и ингибировало АЛА у 98,4+1,6% культур и БПО у 91,7±3,7% штаммов.

6. Использование ципрофлоксацина с окситоцином на основе кремнийорганического глицерогидрогеля, позволило получить другую многокомпонентную мазь (ципроксиновая мазь II), эффективную во II и III фазах раневого процесса, обладающую высокой антимикробной и регенерирующей активностью, способностью подавлять АЛА и БПО патогенов.

7. Морфологическое изучение ран экспериментальных животных, леченных в I фазе раневого процесса ципроксиновой мазью I и во II и III фазах

ципроксиновой мазью II показало увеличение регенераторных возможностей эндотелиоцитов, фибробластов и адвентициальнах клеток, что способствует эффективному формированию полноценной грануляционной ткани и позволо значительно сократить сроки заживления гнойных ран.

8. Доклинические испытания ципроксиновой мази I при местном лечении гнойных ран у крыс выявили её высокую эффективность при лечении гнойных ран, что выражалось в более коротких сроках очищения ран (3,3 сут. против 11,2 сут.), ускоренных сроках нормализации показателей периферической крови (2,1 сут. против 6,6 сут.), ранних сроках появления краевой эпи-тализации (4,2 сут. против 7,9 сут.), а также в снижении частоты обнаружения микробных биопленок в ране на 5 день от начала лечения (8,4% против 100%). Ципроксиновая мазь II приводила к ускорению процессов регенерации тканей, сокращая длительность заживления ран (до 14,2 сут. против 21,4 сут.).

Список публикаций:

1. Скоробогатых Ю.И. Видовой состав возбудителей хирургической инфекции мягких тканей и их характеристика / Ю.И. Скоробогатых, П.П. Курлаев, Д.А. Кириллов // Актуальные вопросы экстренной и восстановительной хирургии.- Оренбург, 2005.- С. 89 - 90.

2. Скоробогатых Ю.И. Экспериментальное обоснование сочетанно-го применения ципрофлоксацина с окситоцином для местного лечения гнойных ран/ Ю.И. Скоробогатых, П.П. Курлаев, Ю.П. Овчинникова // Актуальные вопросы военной и практической медицины,- Оренбург, 2005, С. 436-438.

3. Скоробогатых Ю.И. Биологические свойства и видовой состав возбудителей гнойных заболеваний мягких тканей/ Ю.И. Скоробогатых, П.П. Курлаев, // Актуальные вопросы военной и практической медицины.- Оренбург, 2006, С. 70-71.

4. Скоробогатых Ю.И. Экспериментальное обоснование сочетан-ного применения ципрофлоксацина с окситоцином на гидрофильной основе для местного лечения гнойных ран/ Ю.И. Скоробогатых // Журнал «Вестник ОГУ» - Оренбург, 2006,-№13,- С. 281-283.

5. Скоробогатых Ю.И. Экспериментальное обоснование применения окситоциновой мази для местного лечения гнойных ран / Ю.И. Скоробогатых, П.П. Курлаев // Актуальные вопросы хирургии. - Челябинск, 2006г., С. 209-211

6. Бухарин О.В. Экспериментальное обоснование эффективности сочетанного применения ципрофлоксацина с окситоцином/ О.В. Бухарин, Ю.И. Скоробогатых, П.П. Курлаев // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунобиологии. 2007,-№5,- С 70-73.

7. Скоробогатых Ю.И. Экспериментальное обоснование применения комбинации ципрофлоксацина с окситоцином для лечения гнойных ран/ Ю.И. Скоробогатых, П.П. Курлаев, О.В. Бухарин // Журнал травматология и ортопедия России. Приложение. - Санкт-Петербург, 2008г № 3, - С 54-55.

8. Скоробогатых Ю.И. Применение сочетания ципрофлоксацина с окситоцином на гидрофильной основе при лечении гнойных ран в эксперименте / Ю.И. Скоробогатых, П.П. Курлаев, О.В. Бухарин // Актуальные вопросы хирургии. - Челябинск, 2008г., С. 139 -144.

9. Скоробогатых Ю.И. Сочетанное влияние ципрофлоксацина с окситоцином на биологические свойства возбудителей гнойных заболеваний мягких тканей / Ю.И. Скоробогатых, П.П. Курлаев // Актуальные вопросы хирургии: проблемы и пути решения (выпуск второй). - Оренбург, 2009. - с 127-130.

10. Скоробогатых Ю.И. Экспериментальное изучение комбинации ципрофлоксацина с окситоцином на образование биоплёнок условно патогенными бактериями / Ю.И. Скоробогатых, Н.Б. Перунова, П.П. Курлаев, О.В. Бухарин // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунобиологии. 2010,-№6,- С 3-7.

11. Курлаев П.П. Влияние ципрофлоксацина, окситоцина и их сочетания на образование биоплёнок условно - патогенными микроорганизмами / П.П. Курлаев, Ю.И. Скоробогатых, Н.Б. Перунова // Актуальные вопросы хирургии. - Челябинск, 2010 г., С. 139 -142.

Изобретения по теме диссертации

1. Патент РФ на изобретение № 2306947. Способ лечения гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей микробной этиологии / Ю.И. Скоробогатых, О.В. Бухарин, П.П. Курлаев, Д.А. Кириллов, В.А. Кириллов// Заявлено 09.06.05; опубл. 27.09.2007. Бюл. № 27.

2. Способ лечения гнойных ран в эксперименте/О.В. Бухарин, В.Н. Чарушин, О.Н. Чупахин, Ю.И. Скоробогатых, Н.Б. Перунова,Т.Г. Хонина// (получено положительное решение формальной экспертизы по заявке на изобретение регистрационный № 2011107059 от 24.02.2011).

Методические рекомендации

Лечение гнойно-воспалительных заболеваний: Методические рекомендации для врачей /"Курлаев П.П., Бухарин О.В., Скоробогатых Ю.Й и др.- ЮУЖД МПС: Челябинск, 2001.-15с.

Список сокращений:

АИА - «антиинтерфероновая» активность АКА - антикомплементарная активность АКрА - антикарнозиновая активность АЛА - антилизоцимная активность

ГВЗМТ - гнойно-воспалительные заболевания мягких тканей

КОГ - кремнийорганический глицерогидрогель

КОЕ - колониеобразующие единицы

МПК - минимальная подавляющая концентрация

ПЭО- полиэтиленоксиды

БПО - биопленкобразование

ПМО - показатель микробной обсемененности

СКОРОБОГАТЫХ ЮРИЙ ИВАНОВИЧ

Экспериментальное обоснование сочетанного применения ципрофлоксацина с окситоцином для местного лечения гнойных ран

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оригинал макет подготовлен в программе Word for Windows 2003 Подписано в печать 07/.04/.2011 Формат 60*84/16. Усл.-печ. л. 1,0. Печать оперативная. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Скоробогатых, Юрий Иванович

Введение.

Глава 1. Современные проблемы лечения гнойных ран (обзор литературы).

1.1.Особенности этиологии и патогенеза гнойных заболеваний мягких тканей на современном этапе.

1.2.Современные методы лечения гнойных заболеваний мягких тканей.

Глава 2.Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика культур микроорганизмов.

2.2.Методы выделения и идентификации микроорганизмов.

2.3. Методы определения биологических свойств микроорганизмов.

2.3.1.Определение антилизоцимной активности микроорганизмов.

2.3.2.0пределение антикомплементарной активности бактерий.

2.3.3. Определение антикарнозиновой активности микроорганизмов.

2.3.4. Определение «антиинтерфероновой» активности бактерий.

2.3.5. Методика определения образования биоплёнок условно-патогенными бактериями.

2.3.6. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом индикаторных дисков.

2.3.7. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом серийных микроразведений.

2.3.8. Исследование антимикробной активности сочетания ципрофлоксацина с окситоцином и гидрофильными основами.

2.4. Методика определения влияния препаратов на биологические свойства микроорганизмов и их антибиотикочувствительность.

2.5. Методика приготовления мазей и их наименование.

2.6. Методика моделирования гнойной раны у лабораторных животных.

2.7. Методика лечения гнойных ран экспериметальных животных.

2.8. Микробиологическая оценка раны.

2.9. Методика морфологического исследования ран.

2.9.1. Патогистологическое исследование ран.

2.9.2. Цитологическая оценка раневого процесса.

2.10. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Видовой состав и биологические свойства микрофлоры при острой хирургической инфекции мягких тканей.

3.1. Видовой состав микрофлоры, изолированной от больных с гнойными заболеваниями мягких тканей.

3.2. Характеристика персистентного потенциала микроорганизмов, выявляемых при гнойных заболеваниях мягких тканей.

3.3. Характеристика способности к образованию биопленок микроорганизмов при гнойных заболеваниях мягких тканей.

3.4. Антибиотикочувствительность изолированных штаммов.

Глава 4. Экспериментальное изучение антибактериального действия ципрофлоксацина, окситоцина и их сочетаний в отношении возбудителей острой хирургической инфекции мягких тканей.

4.1 Влияние окситоцина на МПК ципрофлоксацина.

4.2. Влияние окситоцина, ципрофлоксацина и их сочетаний на антилизоцимную и биопленкообразующую активности патогенов.

Глава 5. Экспериментальное изучение антимикробного и антиперсистентного эффекта комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» с гидрофильными основами.

5.1. Определение антимикробного эффекта комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» с полиэтиленоксидами и кремнийорганическим глицерогидрогелем.

5.2.Влияние сочетания «ципрофлоксацин+окситоцин» с полиэтиленоксидами и кремнийорганическим глицерогидрогелем на антилизоцимную активность и биопленкообразование микроорганизмов.

Глава 6. Сравнительный анализ течения экспериментальных гнойных ран при различных методах местного лечения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментальное обоснование сочетанного применения ципрофлоксацина с окситоцином для местного лечения гнойных ран"

Гнойная инфекция в хирургии занимает особое место среди наиболее важных проблем клинической медицины и с течением времени её актуальность приобретает все большую значимость (Ерюхин И. А., 1992; Русаков В. И., 2000). В настоящее время при лечении гнойных ран используются новые антисептики, химиотерапевтические и иммунотропные лекарственные средства, многокомпонентные мази на гидрофильной и гидрофобной основе, протеолитические ферменты, включаемые в структуру перевязочных, шовных и пластических материалов, методы физического и электрохимического воздействия на рану (Девятов В.А., 2000, Лахно В.М., 2001; Яковлев В.П., 2002). Но, несмотря на это существенного прогресса в терапии хирургической инфекции не достигнуто. Во многих случаях низкая эффективность применения традиционных лекарственных средств обусловлена способностью микроорганизмов, инициирующих гнойно-воспалительный процесс, инактивировать факторы естественной резистентности макроорганизма: лизоцим, интерферон, комплемент и др. (Бухарин О.В., 1992, 1993, 2000), ростом доли антибиотикорезистентных и антибиотикозависимых штаммов микроорганизмов (Курлаев П.П., 2001, Фадеев С.Б., 2006,) и образовнием ими биопленок (Фадеев С.Б., 2010), частой сменой возбудителя в процессе лечения (Фадеев С.Б., 2005). Кроме того, препараты для местного медикаментозного лечения часто используются без учета фазы раневого процесса.

Эффективным в настоящее время при лечении гнойных ран считается применение мазей на гидрофильной основе с использованием смеси полиэтиленоксидов разной молекулярной массы (ПЭ0400 и ПЭ01500 в соотношении 4:1) (Даценко Б.М., 1995), обладающей высоким осмотическим эффектом, необходимым в I фазу раневого процесса. Кроме того, перспективным является использование кремнийорганического глицеро-гидрогеля (КОГ) (Пат. РФ № 2255939), обладающего высокой регенерирующей способностью, что важно для II и III фаз гнойных ран.

Однако, окситоцин совместно с фторхинолонами, имеющими циклопропильный радикал, в составе мазей на основе ПЭО и КОГ, ранее не применялся, неизвестно их сочетанное влияние на рост микроорганизмов и их персистентный потенциал.

В связи с вышеперечисленным создание мазей, включающих в свою структуру, помимо гидрофильной основы, препарат фторхинолонового ряда (ципрофлоксацин) и окситоцин позволило бы расширить арсенал средств, используемых в лечении гнойных ран.

Цель и задачи исследования

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

2. Изучить антимикробный эффект комбинации «ципрофлок-сацин+окситоцин» и их влияние на антилизоцимную активность и биопленкообразование облигатно-анаэробных и факультативно-анаэробных бактерий, в сравнении с монопрепаратами. б

3. Исследовать антимикробное действие гидрофильных основ (полиэтиленоксиды и кремнийорганический глицерогидрогель) совместно с комплексом «ципрофлоксацин+окситоцин», а также влияние комбинации данных препаратов на антилизоцимную активность и биопленкообразование микроорганизмов.

Научная новизна

Установлено выраженное снижение антилизоцимной активности (АЛА) и биопленкообразование (БПО) клинических изолятов микроорганизмов при их культивировании в питательной среде, включающей комбинацию ципрофлоксацина с окситоцином.

Комбинация «ципрофлоксацин+окситоцин» с гидрофильными основами (ПЭО и КОГ) обладала высокой антимикробной активностью и угнетала антилизоцимную активность и биопленкообразование патогенов. Снижение средних значений АЛА и БПО микроорганизмов при действии комбинации препаратов «ципрофлоксацин+окситоцин» и их сочетания с гидрофильной 7 основой сопровождалось перераспределением клонов бактерий в сторону увеличения численности диссоциантов с низкими значениями признака и без признака.

На основе экспериментальных данных создана мазь для лечения гнойных ран в первой фазе раневого процесса (мазь ципроксиновая I), включающая ципрофлоксацин с окситоцином на основе полиэтиленоксидов (патент РФ на изобретение № 2306947, 27.09.2007). Использование комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» на другой основе - кремнийорганический глицерогидрогель, позволило создать мазь (мазь ципроксиновая II), пригодную для лечения II и III фаз гнойных ран (отправлена заявка на изобретение регистрационный № 2011107059 от 24.02.2011).

Научно-практическое значение

Проведённые исследования служат основанием для представления материалов в отдел регистрации лекарственных препаратов при Департаменте государственного регулирования обращения лекарственных средств Минздравсоцразвития России, для получения разрешения на клиническую апробацию комбинированного препарата - ципрофлоксацина с окситоцином на основе полиэтиленоксидов и кремнийорганического глицерогидрогеля для лечения гнойных ран.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

Апробация работы и публикации

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, получен патент РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 169 страницах и состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов и указателя литературы. Последний включает 266 источника, в том числе 215 работ отечественных и 51 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 6 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Скоробогатых, Юрий Иванович

выводы

1. При ГВЗМТ преобладающее большинство изолированных микроорганизмов составили факультативно-анаэробные бактерии, которые были обнаружены у всех обследуемых пациентов, тогда как представители облигатно-анаэробных неспорообразующих бактерий выявлены только в 11,8 % случаев. Факультативно-анаэробные бактерии по видовому составу были ранжированы следующим образом: S. aureus (79 %) > Streptococcus spp. (7 %) > Е. coli, Proteus spp. (5 %) > Pseudomonas spp. (3 %) > C. albicans (1 %). Видовой состав облигатно-анаэробных микроорганизмов был представлен в 74,1 % В. fragilis и в 25,9 % анаэробными кокками.

3. Экспериментально в условиях in vitro выявлено, что окситоцин повышал чувствительность к ципрофлоксацину у всех исследованных антибиотикочувствительных культур бактерий в среднем в 16 раз и способствовал появлению чувствительности к антимикробному препарату у исследуемых антибиотикорезистентных микроорганизмов.

4. Применение окситоцина с ципрофлоксацином потенцировало ингибирующий эффект препаратов в отношении персистентных свойств патогенов: угнетение АЛА выявлено у 88,5±2,1 % исследуемых штаммов, БПО - у 73,3±4,1 % культур.

5. Предложен новый препарат (ципроксиновая мазь I) содержащий комбинацию окситоцина с ципрофлоксацином на основе ПЭО в соотношении: 0,2 г ципрофлоксацина и 5 ME окситоцина, для борьбы с гноеродной микрофлорой. Включение основы ПЭО - 19,05 г полиэтиленоксида -1500 и 76,2 г полиэтиленоксида — 400 в комбинацию ципрофлоксацина с окситоцином повышало антибактериальный эффект в

139 отношении всех тестируемых микроорганизмов и ингибировало АЛА у 98,4±1,6% культур и БПО у 91,7+3,7% штаммов.

7. Морфологическое изучение ран экспериментальных животных, леченных в I фазе раневого процесса ципроксиновой мазью I и во II и III фазах ципроксиновой мазью II показало увеличение регенераторных возможностей эндотелиоцитов, фибробластов и адвентициальнах клеток, что способствует эффективному формированию полноценной грануляционной ткани и позволяло значительно сократить сроки заживления гнойных ран.

8. Доклинические испытания ципроксиновой мази I при местном лечении гнойных ран у крыс выявили её высокую эффективность при лечении гнойных ран, что выражалось в более коротких сроках очищения ран (3,3 сут. против 11,2 сут.), ускоренных сроках нормализации показателей периферической крови (2,1 сут. против 6,6 сут.), ранних сроках появления краевой эпитализации (4,2 сут. против 7,9 сут.), а также в снижении частоты обнаружения микробных биопленок в ране на 5 день от начала лечения (8,4% против 100%). Ципроксиновая мазь II приводила к ускорению процессов регенерации тканей, сокращая длительность заживления ран (до 14,2 сут. против 21,4 сут.).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На современном этапе развития хирургии лечение острых гнойных заболеваний мягких тканей сохраняет свою актуальность (Мартыненко В.А., 1995; Швецов ДА., 1996; Цеймах Е.А., Курасов В.Н., 1999; Блашенцева С.А., 2001; Gavazzi G. et al., 2001; Teixeira L.R. et al., 2000; King S., Thomson A., 2002).

Проводимая пациентам комплексная терапия не всегда оказывается эффективной из-за наличия антибиотикоустойчивой микрофлоры (Потапенко М.А., Шипулин П.П., 1995). Вместе с тем, от агрессивности последней в значительной степени зависит исход заболевания (Chen K.Y. et al., 2000).

Назначаемая парентеральная антибактериальная терапия оказывается малоэффективной из-за нарушения микроциркуляции, особенно выраженной в очаге поражения (Цеймах Е.А. и соавт., 2002). Поэтому, ведущим направлением в лечении ГЗМТ является максимально возможная местная санация гнойного очага (Гостищев В.К. и соавт., 2002).

Долгое время интерес клиницистов к этиологическому фактору инфекций ограничивался двумя требованиями: идентификацией микрофлоры и определению её чувствительности к антибиотикам (Ерюхин И.А., 1998).

Однако доказано, что от биологических свойств возбудителя во многом зависит исход заболевания (Первушина Л.А., 1990; Фадеев С.Б., 1998;

Черкасов С.В., 1998). Антибиотики в борьбе с микроорганизмом играют лишь вспомогательную роль, а основную — иммунная система организма

Кулаков А.В. и соавт., 2001). Для противодействия последней бактериальные патогены выработали целый комплекс защитных механизмов: экранирование» клеточной стенки бактерий, секретируемые протеазы, антигенная мимикрия, создание форм с отсутствием или дефектом собственной клеточной стенки (Бухарин О.В., 1999). Особую роль в этой борьбе играет «агрессивная защита» бактерий, то есть их способность секретировать вещества, ингибирующие факторы врожденного иммунитета

130 человека и определяемые как персистентные признаки (Бухарин О.В., 2000). Одной из причин тяжёлого течения нагноительного процесса является инфицирование возбудителем, обладающим этими свойствами (Prokesova L. et al., 1995). Вместе с тем, существование микрофлоры в организме хозяина без вирулентных признаков невозможно. При изучении агрессивных свойств микроорганизмов отмечается, что факторы персистенции и вирулентности взаимно дополняют друг друга (Усвяцов Б.Я. и соавт., 1994). «Вирулентность штамма следует рассматривать, как функцию его способности адаптироваться к организму хозяина. Чем сильнее выражена эта способность, тем больше вероятность развития инфекции» (Домарадский И.В., 1997).

Основным возбудителем гнойных заболеваний мягких тканей продолжает оставаться золотистый стафилококк, который выделяют в 8097% исследований (Грубник В.В. и соавт., 1992; Черкасская P.C., и соавт., 1994; Шевченко Ю.Л. и соавт., 1996; Grosserode М.Н.,. Wenzel R.P, 1991; Emmerson М., 1994). От биологических характеристик микроорганизмов, обеспечивающих длительное переживание патогенов в организме хозяина и обозначаемых как " факторы персистенции", зависит продолжительность течения и наличие осложнений этих заболеваний (Бухарин О.В. и соавт., 1993; Бухарин О.В. 2000; Дерябин Д.Г., 2000). Большинство бактериальных патогенов продуцируют секретируемые факторы деградации. защиты хозяина, обеспечивая себе возможность персистирования в организме (Бухарин О.В. 2000; Prokesova L. et al., 1995). Известно что, их способность инактивировать лизоцим хозяина являлась определяющей в развитии гнойных осложнений открытых переломов (Сафронов A.A., Желтова В.И., 1990) и острого холецистита (Швецов С.А., 1994), высокий уровень антикомплементарной активности микроорганизмов отмечен при гнойных осложнениях в ране после холецистэктомии (Брудастов Ю.А., 1992); в 5 раз чаще осложненное течение пиелонефрита наблюдали при инфицировании Е. coli с высоким уровнем способности к инактивации бактерицидного компонента интерферона (Челпаченко O.E., 1993). Важность наличия и выраженности биологических свойств микроорганизмов в исходе заболевания диктует необходимость поиска средств, инактивирующих персистентный потенциал возбудителя. Эта задача при некоторых инфекционных заболеваниях стафилококковой этиологии решалась с использованием окситоцина в сочетании с антибиотиком (Гавриленко В.Г., 2000; Райцелис И.В., 2000; Курлаев П.П., 2001). Однако, неизвестно, изменяются ли биологические (персистентные) свойства инициирующей микрофлоры под влиянием комбинации антибиотиков с окситоцином.

Выше приведенные факты послужили побудительным мотивом для проведения настоящего исследования, целью которого явилась разработка мазей содержащих комбинацию окситоцина с ципрофлоксацином на гидрофильных основах для лечения гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей.

Для реализации этой цели были решены следующие задачи: определён видовой состав и биологические свойства возбудителей гнойных ран в клинических условиях, изучена чувствительность основных возбудителей гнойных ран к антибиотикам и их сочетанию с окситоцином, определено влияние комбинации препаратов на мазевой основе на персистентные свойства микроорганизмов и процессы регенерации тканей. В результате проведенных исследований установлена доминирующая роль микроорганизмов рода Staphylococcus в инициации гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей. Полученные данные согласуются с результатами исследований других авторов (Доценко А.П., Ходос В.А., 1989; Сытник С.И. и соавт., 1987, 1988; Пигин С.А. и соавт., 1992; Jacquemin Т., 1990; Lina G. et al., 1996).

Изучение биологических свойств инициирующей микрофлоры выявило прямую корреляционную связь между наличием и высоким уровнем персистентного потенциала патогенов с одной стороны и длительностью течения гнойной инфекции мягких тканей с другой стороны.

Подобные результаты получены при изучении биологических особенностей патогенов, изолированных из желчи больных острым холециститом. Микроорганизмы с высоким уровнем способности к деградации ФБР обуславливали более тяжелое течение заболевания и увеличивали вероятность развития гнойных осложнений в послеоперационном периоде (Швецов С. А., 1994). При длительном осложненном течении раневой инфекции происходила смена видового состава возбудителей вследствие присоединения вторичной грамотрицательной микрофлоры, обладающей более высоким персистентным потенциалом (Фадеев С.Б., 1998). В последнее время, наряду с указанными персистентными характеристиками бактериальных патогенов, выявлена способность последних к инактивации дипептида карнозина (Бухарин О.В. и соавт., 2000; Стадников A.A. и соавт., 2000), бактерицидной активности сыворотки крови (Фадеев С.Б., 1998).

Определяемые персистентные возможности инициирующей микрофлоры, оказались достаточно информативными для выбора комбинации лекарственных средств, при лечении хирургической инфекции и легли в основу "Способа лечения острых гнойно-воспалительных заболеваний" (патент РФ №2306947), позволяющего добиться улучшения качества лечения гнойных ран.

Проведенные экспериментальные исследования выявили способность исследуемой мази снижать в 1,2 - 2,7 раз персистентный потенциал возбудителей.

Попытки изменения биологических свойств инициирующей микрофлоры предпринимались и ранее. Так, JI. А. Первушина и соавт. (1989), О. Е. Челпаченко и Л. С. Зыкова (1996) исследовали влияние лекарственных средств, в том числе и ряда антибиотиков, на выражение персистентных свойств (АЛА и АИА) уропатогенных штаммов энтеробактерий. Комбинации антибиотиков с окситоцином используются в лечении пиелонефрита (Комплексная терапия пиелонефрита у детей /

Методические рекомендации Минздрава РСФСР, 1987), гнойного гайморита (Райцелис И.В., 2000), гнойно-некротических поражений стоп при сахарном диабете (Гавриленко В.Г., 2000).

Положительные результаты местного применения окситоцина в комбинации с антибиотиками при лечении местной хирургической инфекции позволили разработать "Способ лечения гнойно-воспалительных заболеваний" (A.C. №1528502). Использование окситоцина в клинической практике не только позволило сократить продолжительность лечения гнойных заболеваний мягких тканей до 5 - 7 дней, но и значительно уменьшить (при различной патологии в 1,6 - 11,5 раз) число случаев неблагоприятного течения инфекции, что сопровождалось значительным снижением расходов на лечение каждого больного.

Выбор метода лечения гнойных заболеваний мягких тканей осуществлялся дифференцированно с учетом клинико-морфологической формы воспаления.

Микроорганизмы, инициирующие различные гнойные заболевания мягких тканей, оказались более чувствительными к ципрофлоксацину, цефаболу, цефазолину и гентамицину. В работе выявлено, что стафилококки, стрептококки и энтеробактерии наиболее чувствительны к цефаболу, ципрофлоксацину и гентамицину. Энтеробактерии также проявляли значительную чувствительность к рифампицину и цефазолину. Полученные результаты могут служить основанием для широкого использования этих антибактериальных препаратов в гнойной хирургии.

Применение при лечении хирургической инфекции пенициллина, метициллина, ампиокса, ампициллина, фурадонина, неомицина, эритромицина, стрептомицина, тетрациклина, фузидина Na, канамицина, к которым оказались чувствительны не более 10% изучаемых штаммов микроорганизмов, следует считать нецелесообразным в качестве первого антибиотика, использьзуемого до получения результатов бактериологического посева и определения чувствительности к ним микроорганизмов. Их применение оправдано только при положительных результатах изучения антибиотикочувствительности.

Сочетанное применение окситоцина с ципрофлоксацином повышает противомикробную активность последнего в отношении возбудителей острых гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей и увеличивает ингибирующее влияние на их персистентный потенциал.

Выявленная закономерность позволяет продолжить исследования в отношении возможности совместного применения окситоцина и ципрофлоксацина в клинической практике при лечении хирургической инфекции. Учитывая, что гидрофильная основа снижает чувсвительность микрофлоры к ципрофлоксацину и оказывает влияние на его способность к ингибиции факторов персистенции, а также её положительное влияние на раневой процесс перспективным представляется создание мази на гидрофильной основе для лечения первой фазы раневого процесса, включающий в свой состав ципрофлоксацин и окситоцин. Проведенные исследования in vitro выявили высокую эффективность совместного применения окситоцина и ципрофлоксацина, что выразилось в значительном снижении МПК ципрофлоксацина при его сочетании с окситоцином в отношении различных возбудителей гнойных заболеваний мягких тканей. Культивирование микроорганизмов в питательной среде с добавлением комбинации ципрофлоксацина и окситоцина приводило к снижению их AJIA в большем проценте случаев, чем при добавлении в питательную среду каждого из этих препаратов в отдельности. Местное применение мази по разработанному в эксперименте способу обеспечивало более раннее прекращение высеваемости микрофлоры из очага воспаления и выделение гнойного экссудата, что в конечном итоге приводило к более быстрому выздоровлению по сравнению с группой животных, получавших местно «Левомеколь», либо без лечения.

Установлено, что совместное действие ципрофлоксацина и окситоцина in vitro снижало способность различных видов облигатно-анаэробных и факультативно-анаэробных бактерий к биопленкообразованию. Ингибирующее влияние на образование биопленок патогенов чаще отмечали при сочетании ципрофлоксацина с окситоцином, нежели под действием монопрепаратов.

В основе механизма антимикробного действия комбинации окситоцина и ципрофлоксацина лежит не только снижение МГЖ химиопрепарата в отношении патогена, но и подавление его биопленкообразования и персистентного потенциала в ране, значительно облегчая борьбу с бактериальными возбудителями инфекции, снижая их устойчивость к антибактериальным агентам при инфекции, вызванной условно-патогенной микрофлорой. Проведенные исследования позволили установить, что сочетание ципрофлоксацина и окситоцина с полиэтиленоксидами и кремнийорганическим глицерогидрогелем более эффективно, чем в отсутствии гидрофильных основ, ингибировало антилизоцимную активность и способность к образованию биопленок патогенов. Внесение в среду культивирования ципрофлоксацин+окситоцин», гидрофильных основ (полиэтиленоксиды и кремнийорганический глицерогидрогель) приводило к нарастанию ингибирующего эффекта в отношении АЛА и БПО у 83,3 - 100 % штаммов исследуемых бактериальных патогенов в среднем на 38,4 - 49,4 % от исходного уровня признака (р<0,05). Отмечено потенцирующее действие гидрофильных основ в отношении ингибирующего влияния «ципрофлоксацин+окситоцин» на АЛА и БПО патогенов.

Использование популяции микроорганизмов в качестве модели для изучения влияния препаратов на персистентные свойства микроорганизмов, позволило определить, что одним из механизмов снижения значений антилизоцимной активности и биопленкообразования бактерий при воздействии на них сочетаний «ципрофлоксацин+окситоцин» с ПЭО и кремнийорганическим глицерогидрогелем, является перестройка популяции бактерий по АЛА и БПО в сторону снижения доли диссоциантов с высоким уровнем признаков и увеличением доли клонов с низким уровнем признака и не обладающих AJIA и БПО.

Проведенные исследования in vitro позволяют рекомендовать комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин+полиэтиленоксиды» и ципрофлоксацин+окситоцин+кремнийорганический глицерогидрогель» в качестве эффективных средств, в борьбе с персистирующими патогенами, возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей.

Местное использование ципроксиновой мази I и II при лечении гнойных ран достоверно снижает уровень бактериальной обсемененности и обеспечивает эффективное очищение раны путем прямого влияния на инициирующую микрофлору. Можно полагать, что в основе механизма антимикробного действия комбинации окситоцина и ципрофлоксацина на основе ПЭО и «Силативит», лежит не только снижение МПК химиопрепарата в отношении патогена, но и подавление его биопленкообразования в ране, увеличивает регенераторные возможности эндотелиоцитов, фибробластов и адвентициальнах клеток, тем самым, способствуя эффективному формированию полноценной грануляционной ткани, что позволяет значительно сократить сроки заживления гнойной раны.

Таким образом, результаты проведённой работы позволили выделить три основных момента:

- сочетание окситоцина с ципрофлоксацином повышало антимикробную активность антибактериального препарата в отношении различной гноеродной микрофлоры и способствовало более выраженному ингибированию AJIA и БПО микроорганизмов, а использование различных основ приводило к дальнейшему нарастанию этого эффекта;

Проведённые исследования могут служить основанием для проведения клинической апробации совместного применения ципрофлоксацина с окситоцином на основах ПЭО и КОГ при лечении хирургической инфекции мягких тканей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Скоробогатых, Юрий Иванович, Оренбург

1. Абрамзон, О.М. Антибактериальная терапия острых нагноительных заболеваний легких и плевры // Материалы IV Российского научного форума «Хирургия 2002».- Москва, 2002.- С. 8-9.

2. Абрамзон, О.М. Биологические свойства возбудителей и их коррекция при острых гнойных заболеваниях легких и плевры: автореф. дис. . д-ра мед. наук. Оренбург, 2004. - 42 с.

3. Абрамов, A.B. Роль окситоцина в регуляции функции поджелудочной железы у животных с сахарным диабетом, корригируемым интервальными гипоксическими тренировками // Проблемы эндокринологии.-1997.- Т. 43.- №5.- С. 35-38.

4. Абросимов, И. П. Лечение больных с гнойной инфекцией внутривенным введением аммиачного раствора хлористого серебра/ И. П. Абросимов, M. М. Джамбанов, А. С. Поповский, В. И. Молчанов// Хирургия.- 1997.- №7.- С. 62-63.

5. Абушкин, И. А. Лечение обширных гнойных ран у детей методом дозирования мягкотканной тензии (ДТМ)/ И. А. Абушкин, В. Г. Абушкина, Л. Б. Новокрещенов, В. А. Привалов // Первый Белорусский Международный конгресс хирургов.- Витебск, 1996.- С. 136-138.

6. Адамян, A.A. Современные подходы к оценке эффективности дренирующих сорбентов для местного лечения гнойных ран/ A.A. Адамян, C.B. Добыш, С.Х. Григорян, Л.Д. Кочергина// В кн: Местное лечение ран.-Матер. Всесоюз. конф.- Москва.-1991.- С. 191-192.

7. Адамян, А. А. Лечение гнойных ран гелевином и биологически активными дренирующими сорбентами / A.A. Адамян, С.С Добыш, С.П. Глянцев и др.// Хирургия.- 1998.- №3.- С. 28-30.

8. Алексеев, М.С. Современные принципы лечения больных с гнойно-воспалительными заболеваниями пальцев и кисти / A.A. Любский // Лечащий врач.- №10.- 1999.- С. 64.

9. Алиханов, X. А. Использование цитокинов в комплексном лечении гнойных ран / X. А. Алиханов, А. П. Чадаев, Ч. Е. Манзаев // Первый Белорусский Международный конгресс хирургов.- Витебск, 1996.- С. 143144.

10. Афиногенов, Г.Е. Применение антисептика повиаргола в лечении острых и хронических гнойных заболеваний опорно-двигательной системы / Г.Е Афиногенов, В.Д. Мамонтов, В.И. Кулик, JI.A. Егорова, Е.Ф. Панарин // Вестн. хирургии.-1991.- №5-6.- С. 59-61.

11. Барков, В.Н. Экспериментально-морфологическое обоснование применения нейропептидов и деминерализованного костного матрикса при лечении больных с кистами челюстей: автореф. дисс. . канд. мед. наук. — Оренбург, 2004.-19 с.

12. Белоненко, Г. А. Особенности комбинированной антимикробной терапии при стафилококковом мастите / Г. А. Белоненко, JI. Д. Тараненко, Ю. С. Варенко //Вестн. хир.-1993.- №3-4.- С. 96-98.

13. Биргер, О. М. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.; Медицина, 1982,С. 89-94.

14. Блатун, JI.A. Электронно-радиографическое исследование действие мази «Левосин» и мазевой основы полэтиленоксида на золотистый стафилококк / Л.А. Блатун, A.A. Пальцин, Н.В. Черновская, А.К. Бадикова // Антибиотики и химиотерапия, 1993-N1, С. 4-5.

15. Блатун, Л. А. Новые препараты для предупреждения и ликвидации госпитальной инфекции в хирургии / Л. А. Блатун, П. П. Яковлев, Н. А. Ляпунов и др. // Тез. докл. 8 Всеросс. съезда хирургов.- Краснодар, 1995.- С. 446-447.

16. Блатун, Л.А.Применение пефлоксацина для лечения больных с гнойными ранами мягких тканей / Л.А. Блатун, Л.С. Пучкова, П.С. Навашин, В.П. Яковлев, A.M. Светухин // Антибиотики и химиотерапия, 1999-N1, С. 20-22.

17. Блатун, JI.А. Клинико-лабораторная эффективность современных мазей на полиэтиленгликолевой основе при лечении гнойных ран / Л.А. Блатун, A.M. Светухин, A.A. Пальцин, H.A. Ляпунов, В.А. Агафонов // Антибиотики и химиотерапия, 1999-N7, С. 25-31.

18. Блатун, Л.А. Современные йодофоры в лечении и профилактике гнойно-воспалительных процессов в ранах / Л.А. Блатун, A.A. Светухин и др. // Врач.- 2000.- №11. С. 22-25.

19. Блатун, Л.А. Клиническая эффективность ципрофлоксацина при лечении хирургической инфекции мягких тканей /Л.А. Блатун, Р.П. Терехова, A.M. Светухин, A.A. Звягин// Consilium Medicum Том 09/№7/2007.

20. Блатун, Л. А. Флегмоны и абсцессы: современные возможности лечения // Лечащий врач. 2008. №7 - С. 30-40.

21. Блашенцева, С.А. Цитологическая характеристика бронхита у больных с острыми абсцессами лёгких // Хирургия.-2001.-№11. С.28-30.

22. Боженков, Ю. Г. Обработка гнойных ран охлажденным глицерином в амбулаторных условиях // Хирургия.- 1989.- №6.- С. 72-74.

23. Бондарев, В. И. Комбинированная антибактериальная терапия при остром лактационном мастите / В.И. Бондарев, Ю.С. Варенко, Г.А. Белоненко и др. // Клин, хир.- 1992.- №1.- С. 38-40.

24. Бондаренко, В. М. Антилизоцимный фактор Klebsiella pneumoniae: природа, биологтческие функции и генетический контроль / В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская, А.Л. Яблочков // ЖМЭИ.- Приложение, август-сентябрь.- 1994.- С. 22-27.

25. Боровик, A.C. Использование атомно-силовой микроскопии для изучения живых клеток / A.C. Боровик, О.С. Тарасова, A.B. Большакова, И.В. Яминский // Усп. соврем, биологии. 2000.- Т. 120.- №2.- С.217-224.

26. Бояковская, Т.Г. Разработка кремнийорганических глицерогидро-гелей и сравнительная оценка их транскутанной активности: автореф. дисс.у"канд. мед. наук, Екатеринбург, 2006. - 188 с.

27. Бояковская, Т.Г. Кремнийорганический глицерогидрогель как новая основа лекарственных и косметических средств / Т.Г. Бояковская, Т.Г. Хонина, Л.П. Ларионов// В кн. "Новые материалы для медицины». Екатеринбург, УрО РАН, 2006. с. 108-135.

28. Брудастов, Ю. А. Антикомплементарная активность бактерий: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Челябинск, 1992. - 21 с.

29. Буткевич, А.Ц. Хирургическое лечение глубоких форм панариция с применением дренажно-промывных систем и первичного шва: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Москва, 1986. - 22с.

30. Бухарин, О.В. Способ стандартизации биологической активности гормонов гипофиза / О.В. Бухарин, Б.А. Фролов, Г.Т. Сухих, К.Г. Сулейманов // А. С. СССР №757164.- Бюлл. по делам изобр. и откр.- 1980.-№31.- С. 10.

31. Бухарин, О.В., Васильев Н.В., Володина Е.П. Окситоцин и вазопрессин регуляторы иммунного гомеостаза / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев, Е.П. Володина // Регуляция иммунного гомеостаза. - Л., 1982. - С. 129-130.

32. Бухарин, О. В. Изучение антикомплементарной активности стафилококков / О. В. Бухарин, Ю. А. Брудастов, Д. Г. Дерябин // Клин. лаб. Диагностика.- 1992. №11-12. - С. 68-71.

33. Бухарин, О. В. Персистенция бактерий / Актовая речь на заседании Ученого Совета Оренбургского медицинского института. Оренбург, 1992.32 с.

34. Бухарин, О. В. Антилизоцимный признак стафилококков в диагностике и санации бактерионосительства / О. В. Бухарин, Б. Я. Усвяцов, О. Л. Чернова//ЖМЭИ. 1993. - №6. - С. 32-33.

35. Бухарин, О. В. Харатеристика антилизоцимной активности золотистого стафилококка при различных типах течения экспериментальной инфекции / О. В. Бухарин, Б. Я. Усвяцов, Н. В. Шеенков // Бюл. эксперим. биол. и мед.-1993. №2. - С. 178-180.

36. Бухарин, О. В. Бактерионосительство / О. В. Бухарин, Б. Я. Усвяцов // Екатеринбург, 1996. 207 с.

37. Бухарин, О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин // М.: Медицина, -1999. 368 с.

38. Бухарин, О. В. Антилизоцимная активность анаэробных бактерий фекальной микрофлоры человека / О.В. Бухарин, A.B. Валышев, H.H. Елагина //ЖМЭИ. 2000.- №5.- С. 20-22.

39. Бухарин, О. В. Значение персистенции бактериальных патогенов для клинической практики / О.В. Бухарин // Российские медицинские вести.-2000.-№3.-С. 18-25.

40. Бухарин, О. В. Персистенция патогенных бактерий: теория и практика / О.В. Бухарин // ЖМЭИ. 2000. - №4. - Приложение. - С. 4-7.

41. Бухарин, О.В. Механизмы выживания бактерий / О.В. Бухарин, А.Л. Гинцбург, Ю.М. Романова, Г.И. Эль-Регистан // М.: Медицина, 2005.

42. Буянов, В. М. Влияние абсорбирующих материалов с лекарственными препаратами на раневой процесс / В.М. Буянов, В.Н. Егиев, А.Я. Акимова, И.В. Грицкова // Хирургия. 1993. - №11. - С. 7-9.

43. Воронина, Л. Г. Антилизоцимная активность возбудителя в диагностике и прогнозировании течения гонококковой инфекции / Л.Г. Воронина// Журн. микробиол. 1997. - №4. - С. 96-98.

44. Гавриленко, В.Г. Клиническое обоснование применения окситоцина в комплексном лечении диабетических гнойно-некротических поражений стоп: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Оренбург. - 2000. - 25 с.

45. Гавриленко, В.Г. Применение окситоцина в комплексном лечении при гнойно-некротических поражениях стоп у больных с сахарным диабетом / В. Г. Гавриленко, A.A. Стадников, В.К. Есипов, А.Ф. Митькин // Вестн. хир. 2000. - №3 - С. 59-62.

46. Герасимов, А. А. Эфффективность регионарной электростимуляции узлов симпатического ствола в лечении гнойной раны / A.A. Герасимов, В.В. Петров, В.А. Липатова, М.А. Кузнецов // Клин. хир. 1992 .- №1. - С. 4-6.

47. Герасимович, Г. И. Госпитальная инфекция в акушерстве и гинекологии / Гнойно-септические осложнения в акушерстве и гинекологии. Минск: Беларусь, 1989. - С. 3-27.

48. Гланц, С. Медико-биологическая статистика: пер. с англ. /С. Гланц. М.: Практика, 1999.-460с.

49. Глянцев, С.П. Сравнительное изучение ферментосодержащих перевязочных средств, при лечении гнойных ран / С.П. Глянцев, A.A. Адамян, З.Г. Гончарова, Т.Л. Заяц // В кн.: Местное лечение ран. Матер. Всесоюз. конф.- Москва. -1991. С. 200-201.

50. Глянцев, С. П. Разработка современных ферментсодержащих перевязочных средств и совершенствование методов их применения в комплексном лечении гнойных ран: Клинико-экспериментальное исследование: дисс. . д-ра мед наук. М., 1993.

51. Глянцев, С. П. Повязки с протеолитическими ферментами в лечении гнойных ран / С. П. Глянцев // Хирургия. 1998. - №12. - С. 32-37.

52. Гостищев, В. К. Полимерный сорбент регенкур в лечении гнойных ран / В. К. Гостищев, Л. Ф. Муляев, А. В. Николаев и др. // Хирургия. 1993. -№11.-С. 3-6.

53. Гостищев, В.К. Низкочастотный ультразвук при первичной хирургической обработке гнойных ран / В.К. Гостищев, A.M. Ханин // Хирургия. 1999. - №5. - С. 29-33.

54. Гостищев, В.К. Принципы проведения интенсивной терапии у больных с острыми деструктивными заболеваниями лёгких / В.К. Гостищев,

55. A.A. Полиров, A.H. Афанасьев и др. // Новые хир. технологии и избранные в опр. клинической хирургии /Матер, международного конгресса хирургов. -Петрозаводск. 2002. - С.213-215.

56. Граменицкий, А.Б. Иммунологические и микробиологические аспекты госпитальной инфекции / Тезисы докладов 8-го Всероссийского съезда хирургов / А.Б. Граменицкий, Э.В. Малафеева // Краснодар, 1995. С. 472-473.

57. Грубник, В.В. . Использование лазерного излучения для профилактики и лечения осложнений после операций на лёгких и плевре /

58. B.В. Грубник, Со Бон Хо, П.П. Шипулин, A.B. Беляков // Клин. хир. 1992. -№4. - С.16-19.

59. Гублер, Е.В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях / Е.В. Гублер, A.A. Генкин // Л.: Медицина, 1973. 141 с.

60. Далгат, Д.М. Электрофорех серебра в лечении острых лактационных маститов / Д.М. Далгат, Р.Т. Меджидов, P.A. Исадибиров // Хирургия. 1989. - №5. - С. 19-22.

61. Данилина Е.М. Роль микробного фактора, некротических масс и инородного тела в развитии гнойного процесса в ранах/ Е.М. Данилина, С. А. Писаржевский, Г.Н. Дудникова, A.A. Карелин// Бюлл. эксп. биол. и мед., 1983. N3. с. 31-34.

62. Даценко, Б.М. Современные возможности и перспективы местного медикаментозного лечения гнойных ран// Местное лечение ран: Материалы Всесоюзной коференции / Б.М. Даценко, JI.M. Блатун, И.М. Перцев и др. -М., 1991. С.20-23.

63. Даценко, Б.М. Теория и практика местного лечения гнойных ран / Б.М. Даценко, О.О. Шалимов, Е.П. Безуглая // Киев, 1995. — 383 с.

64. Девятов, В.А. Применение в хирургии электрохимически активированных водных растворов и лекарственных средств на их основе // Врач. 2000. - №5,- С. 30-31.

65. Дерябин, Д.Г. Маркеры персистенции стафилококковой аэромикрофлоры медицинского стационара//ЖМЭИ.- 1994.-№ .- С. 91-95.

66. Дерябин, Д.Г. Стафилококки: экология и патогенность.-Екатеринбург: УрО РАН, 2000. 239 с.

67. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин // Екатеринбург: УрОРАН. 2001. - 278 с.

68. Домарадский, И.В. Вирулентность бактерий как функция адаптации //Журн. микробиол. 1997. - №4. - С. 16-20.

69. Доценко, А.П. Применение СОг-лазера в хирургическом лечении гнойных ран мягких тканей / А.П. Доценко, В.А. Ходос // Хирургия. 1989. -№6. - С. 54-57.

70. Дуденко, Г. И. Эффективность эндолимфатического введения антибиотиков в комплексном лечении гнойно-воспалительных процессов в мягких тканях / Г.И. Дуденко, Г.Д. Петренко, A.A. Антонов, В.Г. Дуленко // Клин. хир. 1990. - №1.- С. 33-35.

71. Ерюхин, И.А. Раневая инфекция / И.А. Ерюхин, A.C. Рожков, С.А. Шляпников, А.К. Рыбкин // Вестн. хир. 1992. - №7 -12. - С. 206-215.

72. Ерюхин, И. А. Инфекция в хирургии. Старая проблема накануне нового тысячелетия (часть 1) // Вестн. хир. 1998. - №1 С. 85-91.

73. Ерюхин, И.А. Хирургический сепсис (дискуссионные аспекты проблемы) / И. А. Ерюхин, С. А. Шляпников // Хирургия. 2000. - №3. - С. 44-46.

74. Жумадилов, Ж. Ш. Новые подходы к профилактике и лечению хирургической инфекции / Тезисы докладов 8-го Всероссийского съезда хирургов. Краснодар, 1995. - С. 481-482.

75. Заикина, O.JI. Клиническое значение антилизоцимного признака возбудителей инфекции мочевой системы у детей: автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 1995. -21с.

76. Зак, В.И. Местное лечение постинъекционных абсцессов комбинацией окситоцина и антибиотиков / В.И. Зак, П.П. Курлаев // Хирургия. 1985.- №5. - С. 112-115.

77. Зыкова, JI.C. Факторы персистенции уропатогенов в диагностике, прогнозировании и лечении пиелонефрита у детей: автореф. дисс. . д ра. мед. наук. - Оренбург, 1998.

78. Ильина, Т. С. Биопленки как способ существования бактерий в окружающей среде и организме хозяина: феномен, гене,тический контроль и системы регуляции и развития / Т. С. Ильина, Ю.М. Романова, A.JI. Гинцбург // Генетика. 2004. Т.40. №11. С. 1445-1456.

79. Кадощук, Т. А. Антибиотикотерапия гнойно-воспалительных заболеваний / Т.А. Кадощук, О.И. Бондарчук, С. В. Сандер // Клин. хир. -1991.-№1.-С. 21-23.

80. Каншин, H.H. Принципы закрытого аспирационно-промывного лечения загрязненных и нагноившихся ран // Хирургия.- 1989.- №6.- С. 112115.

81. Каншин, H.H. Принципиальные и спорные вопросы заживления ран и профилактики раневой инфекции / H.H. Каншин, A.B. Воленко, Г.П. Титова, Д.Д. Меньшиков // Первый Белорусский Международный конгресс хирургов.- Витебск. 1996. - С. 211-212.

82. Кебот, Е. Экспериментальная иммунохимия: пер. с англ. /Е. Кебот, М. Мейер. М., 1968.

83. Кириллов, Д.А. Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Оренбург, 2004. - 22с.

84. Киричук, В.Ф., Бурова М.Б. Влияние окситоцина на фибринолиз и состояние калликреин-кининовой системы / В.Ф. Киричук, М.Б. Бурова // Проблемы эндокринологии. 1989.- Т. 35.- №2. - С. 81-84.

85. Климушкин, A.B. Экспериментально-м орфологическое обоснование применения деминерализованной костной губки для ликвидации остаточных полостей печени: автореф. дисс. . канд. мед. наук. — Оренбург, 2003. 23 с.

86. Кожевников, В.А. Криохирургический метод в лечении гнойных заболеваний мягких тканей у детей / В.А. Кожевников, А.К. Смирнов, Ю.В. Ермаков // Хирургия. 1994. - №8. - С. 45-48.

87. Колесов, А. П. Анаэробные инфекции в хирургии / А.П. Колесов, А. В. Столбовой, В.И. Кочеровец // Л.: Медицина, 1989.- 159 с.

88. Конычев, A.B. Аппликационная терапия панариция / В.К. Константинов, И. Н. Пиксин, Г.Н. Плешаков, Г.И. Бекишев // В кн.: Местное лечение ран.- Матер. Всес. конф.- Москва.- 1991.- С. 80-81.

89. Королюк, А. М. Так победим?! (Взгляд микробиолога на проблему хирургической инфекции) // Вестн. хир.- 1998.- №5.- С. 148-151.

90. Косачев, И.Д. Местное применение "аубазипора" для лечения гнойных ран / И.Д. Косачев, С.А. Лысенко // Вестн. хир.- 1994.- №1-2.- С. 3841.

91. Косинец, А.Н. Современные принципы лечения гнойных ран / А.Н. Косинец, М.Г. Сачек, Ю.И. Москалев, В.Н. Гурко // Новости хирургии.-Республика Беларусь, Витебск, 1996.- №1.- С. 43-46.

92. Кочнев, О.С. Применеие ксимедона для стимуляции заживления и профилактики нагноения операционных ран / О.С. Кочнев, С.Г. Измайлов // Хирургия,-1991.- №5,- С. 27-30.

93. Кравец, В.П. Комплексное лечение острых гнойно-воспалительных заболеваний пальцев и кисти с применением декаметоксина// Клинич. хирургия.-1991.- №1.- С. 34-37.

94. Кравец, В.П. Профилактика острых гнойно-воспалительных заболеваний пальцев и кисти с применением декаметоксина // Клинич. хирургия.- 1992.- №12,- С. 42-43.

95. Кретинин, C.B. Экспериментальное обоснование сочетанного применения антибиотика и окситоцина в лечении абдоминального сепсиса: автореф. дисс. . канд. мед. наук.- Оренбург, 2008. -26с.

96. Крылов, Ю.Ф. Энциклопедия лекарств. Изд-е 8.- М: РЛС,2001,-1503с.

97. Кудашев, С. Г. Экспериментальное обоснование нового способа профилактики хирургической инфекции огнестрельных ран: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Оренбург, 2000,- 25 с.

98. Кузин, М.И. Раны и раневая инфекция. Руководство для врачей. 2-ое изд. пер. и доп./ М. И. Кузина, Б. М. Костюченка// М.: Медицина, 1990. -591 с.

99. Кузин, М.И. В кн.: Раны и раневая инфекция / М.И. Кузин, Б.М. Костюченок//М., 1991.- 608 с.

100. Кулиев, P.A. Лечение гнойных ран у больных сахарным диабетом магнитным полем и лазерным излучением / P.A. Кулиев, Р.Ф. Бабаев, Л.М. Ахмедова, А.И. Рагитова // Хирургия.- 1992,- №7-8.- С. 30-33.

101. Кулаков, P.A. Прогнозирование гнойных осложнений в хирургии с помощью определения аффинности антител / P.A. Кулаков, М.И. Карсонова, Б.В. Пинегин //Хирургия. 2001.-№11.-С.55-58.

102. Курлаев, П.П. Экспериментально-клиническое обоснование применения окситоцина в комплексной антибактериальной терапии гнойных забболеваний мягких тканей: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Пермь, 1986.- 24 с.

103. Курлаев, П.П. Применение окситоцина в комбинации с антибиотиками при лечении больных с лактационным маститом/ П.П. Курлаев, В.И. Зак // Хирургия. 1988.- №4.- С. 58-61.

104. Курлаев, П.П. Роль факторов бактериальной персистенции в патогенезе, прогнозировании и обосновании выбора метода лечения больных с гнойными заболеваниями мягких тканей: автореф. дисс. д-ра мед. наук.-Оренбург, 2001.- 46с.

105. Кутушев, Ф.Х. Внутриорганная эндолимфатическая антибиотикотерапия лактационных маститов /Ф.Х. Кутушев, Ю.А. Спесивцев, Л.З. Бегвая // Веста, хир.- 1995. №2. - С. 46-48.

106. Ларичев, А.Б. Роль вакуум- терапии в предупреждении реинфицирования раны / А.Б. Ларичев, А.Ю. Абрамов, А.Ю. Давыдов // Тезисы докладов 8 Всероссийского съезда хирургов.- Краснодар, 21-23 сентября 1995,- С. 504-505.

107. Лахно, В.М. Применение фаготерапии в хирургической практике / В.М. Лахно, В.Н. Бордуновский //Вестн. хирургии. 2001.- №1.- С.122-125.

108. Лахно, В.М. Стратегия антимикробной защиты на основе применения поливалентного пиобактериофага //Сборн. научно-практич. работ «Актуальные вопросы хирургии». Челябинск, 2001.- С. 486-492.

109. Лещенко, И.Г. Новая проблема хирургии анаэробная неклостридиальная инфекция /И.Г. Лещенко, B.C. Новокшенов. - Самара: СМИ, 1993.- 108 с.

110. Литвинов, Г.А. Опыт применения ослабленного геомагнитного поля в лечении острой и хронической хирургической инфекции /Г.А. Литвинов, С.Г. Безруков, Е.Г. Мещерякова // Вестн. хир. 1996.- №1. - С. 7778.

111. Лобенко, A.A. Применеие иммобилизованной эластотеразы для лечения острых гнойных заболеваний мягких тканей /A.A. Лобенко, A.A. Буров, М.Т. Площенко и др. // Клин. хир. -1991.- №1.- С. 19-21.

112. Мартыненко, В.А. Плазмоферез в комплексном лечении больных с тяжёлыми формами абсцессов и гангрен лёгких: автореф. дис. . канд. мед. наук. Барнаул, 1995. -27с.

113. Марфин, Б.И. Мочевина в местном лечении гнойно-воспалительных процессов мягких тканей / Б.И. Марфин, И.Г. Бачурина, Ф.К. Шурупува, Н.И. Павельева, Г.П. Сомов // Вестн. хирургии. 1988. - №1. - С. 96-98.

114. Маскин, С.С. Хирургические аспекты профилактики реинфицирования в гнойной хирургии / Тезисы докладов 8 Всероссийского съезда хирургов / С.С. Маскин, Г.И. Жидовинов, В.В. Широков. Краснодар, 21-23 сентября 1995.- С. 515-516.

115. Матинян, Л.А. Фонофорез папаина в лечении гнойных ран и воспалительных процессов / Л.А. Матинян, Х.О. Негапетян, С.С. Амирян // Хирургия.- 1990.- №9.- С. 74-76.

116. Матчин, A.A. Обоснование новой методики возмещения дефектов тканей челюстно-лицевой области // Матер. II конф. челюстно-лицевых хирургов.- СПб., 1996.- С.31.

117. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. -М. Медицина, 1993. 12-е изд. - Ч. 2. - С. 173.

118. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Пособие для врачей. Изд. 13-е.- Харьков, 1997.

119. Мелешевич, A.B. Профилактика и лечение гнойно-воспалительных осложнений травм кисти: автореф. дисс. . док. мед. наук, Минск, 1990.

120. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. — Москва, Г.Г. Онищенко, 2004. 74с.

121. Методические рекомендации «Рациональный выбор названий лекарственных средств». Москва, В.И. Стародубцев, 2005. — 27 с.

122. Мец, А.Г. Модификация дренирования // Хирургия.- 1997.- №9.-С.51-52.

123. Миронов, А.Ю. Микрофлора гнойно-септических заболеваний у больных Московской области / А.Ю. Миронов, К.И. Савицкая, A.A. Воробьев // ЖМЭИ.- 2000.- №5.- С. 11-15.

124. Мисетов И.А. Кинетический метод определения антикомплементарной активности бактерий /И.А. Мисетов// Сб. научн. работ I обл. конф. молодых ученых. Оренбург — 1993. С 73-74.

125. Михайлова, Е. А. Влияние окситоцина на показатели иммунитета и факторы естественной резистентности: автореф. дисс. . канд. био. наук. -Челябинск, 1987. 18 с.

126. Мурадян, Р.Г. Современные методы лечения ран, стимулирующие репаративные процессы. Экспериментально-клиническое исследование: автореф. дисс. .док-pa мед наук. М -1996.

127. Мурзёнок, П.П. Антипирогенные свойства окситоцина / П.П. Мурзёнок, Л.Ф. Куцаева, Т.И. Житкевич // Бюлл. эксперим. биол. и мед. -1989.-№Ю.-С. 426-428.

128. Нарциссов, Т.В. Местное лечение гнойных ран / Т.В. Нарциссов, A.B. Старицкий, Н.И. Василенко // Клин. хир. 1992,- №1.- С. 33-35.

129. Некрасов, А. В. Лечение постинъекционных абсцессов / Тезисы докладов 8-го Всороссийского съезда хирургов / A.B. Некрасов, В.Г. Кумахов. Краснодар, 1995.- С. 519.

130. Нигматуллин, P.A. Пластика послеоперационных раневых дефектов молочной железы при остром гнойном лактационном мастите на фоне сахарного диабета / P.A. Нигматуллин, P.M. Гарипов, A.A. Кузин // Вестн. хир. 1991. - №6. - С. 38.

131. Нузов, Б. Г. Клинико-морфологические особенности заживления гнойных ран в зависимости от методики лечения / Б.Г. Нузов, В.А. Яглинский // Вестн. хир.- 1991.- №6.- С. 31-32.

132. Нурмаганбетов, Т.К. Диагностика и хирургическое лечение панариция / Т.К. Нурмаганбетов, Н.В. Матвеев, Ю.В. Мантлер // Клинич. хирургия.- 1990.- №1. С. 67-68.

133. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Пер. с англ. / Под ред. Хоулт Дж., КригН., Снит П. и др. М.: Мир, 1997.

134. Павлов, В.В. Осложнения сорбционно-апликационной терапии гнойных ран / В.В. Павлов, В.П. Плешаков, И. В. Майбородин // Хирургия.-1999.-№1.- С. 12-13.

135. Парфенов, О.Г. Опыт санации стафилококковых бактерионосителей на базе санатория-профилактория УБР ПО

136. Оренбургнефть" / О.Г. Парфенов, В.А. Гриценко // Персистенция бактерий / Под ред. О. В. Бухарина. Куйбышев, 1990. - С. 121-124.

137. Первушина, JI. А. Антилизоцимный признак микроорганизмов в бактериологической диагностике и лечении воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов: автореф. дисс. . канд. мед. наук. -Челябинск, 1990.-21 с.

138. Перцев, И.М. Биологическая формация — современная теория оптимального производства и использование лекарств / И.М. Перцев, И.А. Зупанец // Клиническая формация. 1999.-Т.З, №2. - С. 128-132.

139. Пигин, С.А. Опыт лечения постинъекционных абсцессов / С.А. Пигин, A.B. Некрасов, В.Т. Кумахов // Вестн. хир. 1992.- №1-2-3.- С. 347352.

140. Пирс, Э. Гистохимия / Э. Пирс. М.: ИЛ.- 1962.- 700 с.

141. Писаржевский, С.А. Принципы биохимической диагностики раневого инфекционного процесса / С.А. Писаржевский, A.A. Карелин // Вестн. РАМН. 1998.- №8.- С. 46-51.

142. Покровская, М.П. Цитология раневого экссудата как показатель процесса заживления ран / М.П. Покровская, Макаров М.С. М.: Медгиз, 1942.- 42 с.

143. Поленов, А.Л. Гипоталамо-гипофизарный нейроэндокринный комплекс /А.Л. Поленов, М.С. Константинова, П.Е. Гарлов // Нейроэндокринология. СПб., 1994.- Ч. 2.- С. 139-186.

144. Попов, В.А. Панариций / В.А. Попов, В.В. Воробьев // Л.-Медицина.- 1986.- 189 с.

145. Потапенко, М.А. Эндоскопические методы лечения эмпиемы плевры и пиопневмоторакса / М.А. Потапенко, П.П. Шипулин //Груд, и серд.-сосуд. хир. 1995. - №1. - С.56-59.

146. Путилин, A.A. Применение ксенобрюшины, насыщенной лекарственными веществами, в лечении гнойных ран / A.A. Путилин, В.В. Мельников // Вестн. хирургии. 1988. - №1. - С. 77-80.

147. Райцелис, И. В. Клиническое значение биологических свойств микроорганизмов для прогнозирования течения и лечения больных гнойным гайморитом: автореф. дисс. канд. мед. наук. Оренбург. - 2000. - 26 с.

148. Розанов, А.Ю. Бактериальная палеонтология / А.Ю. Розанов, Г.А. Заварзин // Вестн. РАН. 1997. - Т. 67, № 3.- С. 241-245.

149. Розанов, А.Ю. Ископаемые бактерии, седиментогенез и ранние стадии эволюции биосферы / А.Ю. Розанов // Палеонт. журн. 2003. - № 6.-С.41-49.

150. Русаков, В. И. Некоторые общие проблемы хирургии / В.И. Русаков // Вестн. хир. 2000. - №4. - С. 99-101.

151. Роик, В.И. Участие вазопрессина и окситоцина в регуляции уровня гликемии и обмена углеводов в печени / В.И. Роик // Вестн. хирургии.- 1987.-№4.- С. 75-77.

152. Савельев, В.И. Применение размельченной деминерализованной костной ткани для лечения инфицированных ран / В.И. Савельев, Э.Г. Грязнухин, Н.В. Хлебович // Вестн. хирургии.- 1988.- №11.- С. 59-61.

153. Савельев, B.C. Госпитальная инфекция в хирургической клинике / B.C. Савельев, Б.Р. Гельфанд, В.А. Гологорский // Тезисы докладов 8-го Всероссийского съезда хирургов. Краснодар, 21-23 сентября 1995.- С. 538539.

154. Сафаров, С.Ю. Характеристика гнойных ран при лечении гомогенатом ксеногенной селезенки / С.Ю. Сафаров, М.А. Алиев // Хирургия. 1993.- №11. - С. 16-19.

155. Сафронов, A.A. Значение антилизоцимной активности микроорганизмов в диагностике осложнений открытых переломов / A.A. Сафронов, В.И. Желтова // Персистенция бактерий. Куйбышев, 1990. - С. 58-61.

156. Светухин, A.M. Общие принципы лечения гнойных ран и гнойных хирургических заболеваний / A.M. Светухин, В.А. Карлов, Ю.А., Амирасланов // Хирургия. 1990. - №12. - С. 79-84.

157. Серов, B.B. Воспаление / B.B. Серов, B.C. Пауков. M.: Медицина.- 1995.- 640 с.

158. Селиверстов, Д. В. Сравнительная оценка клинической эффективности некоторых комбинированных мазевых препаратов при лечении гнойных ран у больных сахарным диабетом / Д.В. Селиверстов, Б.Я. Гаусман, A.A. Петрунин и др // Хирургия. -1997. №9. - С. 43-46.

159. Сидоренко, С. В. Перспективы в области создания препаратов для лечения инфекций, вызываемых грамположительными микроорганизмами // Антибиотики и химиотерапия.- 2000.- №10.- С. 3-4.

160. Сидоренко, C.B. Исследования распространения антибиотикорезистентности: практическое значение для медицины // Инфекции и антимикробная терапия. 2002. - Т. 4. - № 2. - С. 38-41.

161. Сидоренко, C.B. Роль бактериальных биоплёнок в патологии человека. //Инфекции в хирургии.- 2004.- №2.- С. 16-20.

162. Слесаренко, С.С. Опыт лечения постинъекционных абсцессов / С.С. Слесаренко, М.А. Лагун, Д. В. Баранов // Казанский мед. журнал.- 1992.-№2.- С. 100-102.

163. Стадников, A.A. Гипоталямические факторы регуляции процессов роста, пролиферации и цитодифференцировки эпителия аденогипофиза / A.A. Стадников // Екатеринбург: УрО РАН.- 1999.- 137 с.

164. Стадников, A.A. Роль гипоталамических нонапептидов во взаимодействии про- и эукариотических клеток / A.A. Стадников, О.Л. Чернова, Л.В. Ковбык и др // Вестн. Российской АМН. 2000. - №2. - С. 4952.

165. Стадников, A.A. Роль гипоталамических нейропептидов во взаимодействиях про- и эукариот / A.A. Стадников. Изд. УрО РАН.-Екатеринбург, 2001.- 244 с.

166. Стадников, Б.А. Клинико-морфологическое обоснование целесообразности применения окситоцина в комплексной терапии острого панкреатита / Б.А. Стадников, // Тез. докл. V Всерос. конф. «Нейроэндокринология 2000». - СПб, 2000.- С. 121.

167. Странадко, Е.Ф. Фотодинамическая терапия при гнойных заболеваниях мягких тканей / Е.Ф. Странадко, У.М. Корабоев, М.П. Толстых // Хирургия. 2000. - №9. - С. 67-70.

168. Струков, А.И. Гранулематозное воспаление и гранулематозные болезни / А.И. Струков, О.Я. Кауфман, В.В. Серов. М.: Медицина.- 1989.234 с.

169. Струков, А.И. Патологическая анатомия / А.И. Струков, В.В. Серов. М.: Медицина.- 1995.- 688 с.

170. Сытник, С.И. Стафилококки в кожном микробиоценозе молочных желез беременных женщин // ЖМЭИ. 1987. - №8. - С. 15-19.

171. Сытник, С.И. Стафилококки в кожном микробиоценозе молочных желез кормящих женщин // ЖМЭИ. 1988. - №11. - С. 23-27.

172. Тарабанчук, В. В. Повышение эффективности лечения постинъекционных гнойно-некротических процессов / В. В. Тарабанчук // Клин, хир.- 1988.- №4.- С. 54-55.

173. Тец, В.В. Влияние экзогенных протеолитических ферментов на бактерии. Антибиот. и химиотер. 2004; 49 (12): 3-7.

174. Тец, В.В. Биопленки возбудителей уроинфекций и использование фторхинолонов / В.В. Тец, Н.К. Артеменко, Н.В. Заславская с соавт. // Consilium medicum.- 2008.- №4.- С. 110-114.

175. Торгунаков, А.П. Фашинный дренаж / А.П. Торгунаков // Вестн. хирургии. 1992. - №1-2-3. - С. 240-241.

176. Удод, В.М. Комбинированное лечение гнойных заболеваний пальцев и кисти / В.М. Удод, С.И. Маркелов, Б.А. Исмагамбетова, В.И. Россинский // Хирургия. 1984. - №1. - С. 62-65.

177. Усвяцов, Б.Я. Особенности формирования стафилококкового пейзажа слизистой носа у бактерионосителей разных типов / Б.Я. Усвяцов, О.Л. Чернова, И.И. Гербич и др. // Журн. микробиол. 1994. Приложение. -С.48-51.

178. Усвяцов, Б.Я. Подавляющее действие магнитно-лазерного луча и электролизного раствора гипохлорита натрия на факторы персистенции возбудителя / Б.Я. Усвяцов, А.И. Кириличев, Л Г. Воронина и др // Журн. микробиол. 1997. - №4. - С. 102-105.

179. Фадеев, С. Б. Видовой состав и персистентные характеристики возбудителей хирургической инфекции мягких тканей: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Оренбург, 1998.- 25 с.

180. Фадеев, С.Б. Формирование биопленок возбудителями раневой инфекции и флегмон мягких тканей./ С.Б. Фадеев, Н.В. Немцева, Н.Б. Перунова, О.В. Бухарин // Хирург.- 2010., №1.- С. 11-18.

181. Фадеев, С.Б. Хирургическая инфекция мягких тканей второго уровня, особенности этиотропной терапии: автореф. дис. . д-ра мед. наук. -Оренбург, 2010.-48 с.

182. Федоров, В.Д. Развитие исследований по проблемам хирургической инфекции / В.Д. Федоров// Хирургия.-1991.- №12.- С. 3-9.

183. Фельдман, Ю.М. Количественное определение бактерий в клинических материалах / Ю.М. Фельдман, Л.Г. Маханева, А.В.Шапиро с соавт. //Лаб. дело.- 1984.-№10. С. 616-618.

184. Халянин, Б.Д. Иммунология / Б.Д. Халянин, A.A. Прокопьев// 1986. №3.66 с.

185. Хрупкин, В.И. Использование эмульсии перфторуглеродов в местном лечении ран, осложненных хирургической инфекцией / В.И. Хрупкин, В.В. Мороз, Л.В. Писаренко, А.И. Хоменчук // Вестн. хир.- 1997.-№4.- С. 53-55.

186. Цеймах, В.И. Калликреин-кининовая система при острой эмпиеме плевры и пиопневмотораксе / В.И. Цеймах, В.Н. Курасов // Хирургия. 1999. - №7. -С.40-42.

187. Цеймах, В.И. Коррекция микроциркуляторных нарушений в комплексном лечении больных с острой эмпиемой плевры и пиопневмотораксом / В.И. Цеймах, Я.Н. Шойхет, И.П. Рощев и др. //Пульмонология.-2002.-№3.-С.44-47.

188. Чадаев, А.П. Гнойные заболевания пальцев и кисти / А.П. Чадаев, А.Ц. Буткевич, Г.Г. Савзян // М.- Геликон.- 1996.- 148 с.

189. Челпаченко, О. Е. Экспериментальное обоснование рациональной терапии пиелонефрита у детей под контролем маркеров персистенции возбудителя: автореф. дисс. канд. мед. наук. Челябинск, 1993.- 19 с.

190. Челпаченко, O.E. Влияние лекарственных препаратов на выражение персистентных свойств уропатогенных штаммов энтеробактерий / O.E. Челпаченко, Л.С. Зыкова//ЖМЭИ,- 1996.- №3.- С. 84-86.

191. Черкасов, C.B. Персистентные характеристики микрофлоры репродуктивного тракта у женщин в норме и при патологии: автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 1998. - 18с.

192. Черкасская, P.C. Микробиологическая характеристика гнойной раны при лазерном облучении / P.C. Черкасская, С.М. Нестерова, А.И. Эфендиев, А.И. Цейтлина // Хирургия.- 1994.- №6.- С. 32-35.

193. Чернова, О. Л. Антилизоцимная активность стафилококков, выделенных при бактерионосительстве: автореф. дисс. . канд. био. наук. -Челябинск. 1989. 17 с.

194. Чернова, О.Л. Роль факторов персистенции Staphylococcus epidermidis в инфекционном процессе /О.Л. Чернова. С.Б. Матюшина, Ю.Б. Иванов, И.В.Райцелис// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунбиологии. 1997, №4. с.81-84.

195. Чернух, A.M. Воспаление / A.M. Чернух.- М.: Медицина.- 1979.448 с.

196. Швецов, ДА. Направленный транспорт антибиотиков в лечении острых неспецифических воспалительных заболеваний лёгких и плевры: автореф. дис. . канд. мед. наук. Караганда, 1996. - 22с.

197. Швецов, С. А. Клиническое значение персистентных характеристик аэробной условно-патогенной микрофлоры у больных холециститом: автореф. дисс. канд. мед. наук. Пермь, 1994. - 31 с.

198. Шевченко, Ю.Л. Госпитальная инфекция и некоторые аспекты ее иммунопрофилактики / Ю.Л. Шевченко, В.А. Гришанин, С.А. Матвеев, К.В. Мазайшвили // Вестн. хир. 1996. - №5. - С. 104-106.

199. Шеина, Е.А. Экспериментальное обоснование местного применения окситоцина и антибиотика в лечении острого деструктивного панкреатита: автореф. дисс. . канд. мед. наук. Оренбург. - 2004.- 26с.

200. Ширшев, C.B. Влияние хорионического гонадотропина и окситоцина на уровень внутриклеточного калия в лимфоцитах периферической крови человека / C.B. Ширшев, О.Г. Лялина // Мед. иммунол. 1999. - №3-4.- С. 31.

201. Юрина, H.A. Морфофункциональная гетерогенность и взаимодействие клеток соединительной ткани /H.A. Юрина, А.И. Радостина.-М.: РУДН.- 1990. 322с.

202. Юсупов, Ю.Н. Програмированное орошение и дренирование в лечении больных с местной гнойно инфекцией мягких тканей /Ю.Н. Юсупов, М.В. Епифанов, В.Н. Данилин // Вестн. хир.- 2000.- №2.- С. 57-59.

203. Юхтин, В.И. Лечение глубоких форм панариция /В.И. Юхтин,

204. A.П. Чадаев A.C. Любский, А.Ц. Буткевич // Хирургия.- 1986. №6. - С. 154— 155.

205. Яковлев, В.Л. Ципрофлоксацин в клинической практике /В.Л. Яковлев, E.H. Падейская, C.B. Яковлев// М., 2000.-272с.

206. Яковлев, В.П. Рациональная антимикробная фармакотерапия /В.П. Яковлев, C.B. Яковлев. М.: Бионика, 2002. - 650 с.

207. Яремчук, А.Я. Диагностика и лечение панариция /А.Я. Яремчук,

208. B.Б. Короленко // Клинич. хирургия.- 1985,- №1.- С. 29-31.

209. Davey, M. Е. Microbial biofilms: from ecology to molecular genetics/ M. E. Davey, G. A. O'Toole. // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. - V. 64. - P. 847-867.

210. Davis, S.C. Microscopic and physiologic evidence for biofilm-associated wound colonization in vivo/ S.C. Davis, C. Ricotti, Cazzaniga A. et al.// Wound Repair. Regen. 2008.- Vol. 16(1).- P. 23-32.

211. Donlan, R.M., Costerton J.W. Biofilms: survival mechanism of clinically relevant microorganisms / R.M. Donlan, J.W. Costerton// Clin.Microbiol.Rev. 2002. Vol.15. P.167-193.

212. Costerton, J. W. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections/ J. W. Costerton, P. S. Stewart, E. P. Greenberg // Science. 1999. - V. 284.-P. 1318-1322.

213. Chen, K.Y. A 10-year experience with bacteriology of acute thoracic empyema: emphasis on Klebsiella pneumoniae in patients with diabetes mellitus/ K.Y. Chen, P.R. Hsueh, Y.S. Liaw et al. // Chest.-2000.-Vol. 117, №6.-P. 16851689.

214. Chen, K.Y. Sonographic septation: a useful prognostic indicator of acute thoracic empyema/ K.Y. Chen, Y.S. Liaw, H.C. Wang et al. // J. Ultrasound. Med.-2000.-Vol.l9.-№12.-P.837-843.

215. Church, D. Burn Wound Infections/ D. Church, S. Elsayed, O. Reid, B. Winston, R. Lindsay// CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS, Apr.2006, Vol.19, No.2. p.403 434.

216. Edwards, R. Bacteria and wound healing/ R. Edwards, K.G. Harding // Curr. Opin. Infect. Dis. 2004. - Vol. 17(2). - p. 91-96.

217. Emmerson, M. Nosocomial staphylococcal outbreaks / M. Emmerson// Scand. J. Infect. Dis. 1994. - V. 93. - Suppl. - P. 47-54.

218. Eriksen, N. H. Carriage of Staphylococcus aureus among 104 healthy persons during a 19-month period / N. H. Eriksen, F. Espersen, V. T. Rosdahl, K. Jensen // Epidemiol. Infect. 1995. - V. 115. - №1. - P. 51-60.

219. Farley, M. M. Streptococcal infection in older patients. Spectrum of disease and management strategies/ M. M. Farley, B. Group // Drugs Aging. -1995. №6 (4). - P. 293-300.

220. Finegold, S. M. Anaerobic infections / S. M. Finegold // Surg. Clin. N. Amer. 1980. - V. 60.- P. 49-64.

221. Flournoy, D. J. The relationship of organism pathogenicity and route of acguisition to antimicrobial susceptihilities / D. J. Flournoy, C. K. Murray // J. Natl. Med. Assoc.-1993.- V. 85.- №6.- P. 441-444.

222. Gao, L.Y. Mechanisms of the stimulation of insulin release by arginin-vasopressin in normal mouse islets/ L.Y. Gao, G. Drews, M. Nenguin et al. // J. Biol. Chem.- 1990.- V. 265.- №26.- P. 15724-15730.

223. Gavazzi, G. Thoracic empyema in very old patients: two types of clinical presentation/ G. Gavazzi, O. Orliaquet, M. Coume et al. //Rev. Med. Interne.-2001.-Vol.22.-№11.-P.1124-1127.

224. Gemmell, C.G. Antibiotics and the expression of staphylococcal virulence/ C.G. Gemmell// J. Antimicrob. Chemother. 1995. - V. 36. - №2.- P. 238-291.

225. Goessens, W. H. Basic mechanisms of antimicrobial agents/W.H. Goessens// Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1993. - V. 12. - Suppl. 1. - P. 9-12.

226. Gould, D.Staphylococcus aureus: a review of the literature/ D. Gould, A. Chamberlaine// J. Clin. Nurs. 1995. - V. 4. - №1.- P. 5-12.

227. Grosserode, M. H. The continuing importance of staphylococci as major hospital pathogens/ M.H. Grosserode, R.P. Wenzel // J. Hosp. Infect. 1991. - V. 19.- Suppl. B.- P. 3-17.

228. Huang, F. Coagulase-negative staphylococcal septicemia/ F. Huang, C. Wang, N. Chiu// Acta Paediatr. Sin. 1994.- V. 35.- №5.- P. 423-428.

229. Jarlov, J.O. Evaluation of staphylococci isolated from a blood culture system (Colorbact)/ J.O. Jarlov, J. Prag, V.T. Rosdahl, F. Espersen // APMIS.-1995.- V. 103.- №5.- P. 383-387.

230. Jacquemin, T. Les staphylocoques coagulase-negativs et leur pathologie/ T. Jacquemin // Infectiologie. 1990.- №30.- P. 60-62.

231. Kamath, U. Staphylococcus warneri. Clinical significance of Staphylococcus warneri: Bacteremia/ U. Kamath, C. Singer, H.D. Isenberg// J. Clin. Microbiol. -1992.- V. 330.- №2.- P. 261-264.

232. Kirketerp-Moller, К. Distribution, organization, and ecology of bacteria in chronic wounds/ K. Kirketerp-Moller, P.O. Jensen, M. Fazli et al.// J. Clin. Microbiol. -2008.- Vol. 46(8).- P. 2717-2722.

233. King, S. Radiological perspectives in empyema/ S. King, A. Thomson //Br. Med. Bull.-2002.-Vol.61.-№4.-P.203-214.

234. Kluytmans, J. Surveillance of postoperative infections in thoracic surgery/ J. Kluytmans, J.W. Mouton, A. P. Maat et al. // J. Hosp. Infect.- 1994.- V. 27.- №2.- P. 139-147.

235. Kuo, W.N. Regulation of staphylococcus protease using complement, interferon ond immunoglobulin as substrates/ W.N. Kuo, U. Ganesan, D.L. Davis et al. // Cytobios.-1992.- V. 71.- №284.- P. 29-36.

236. Lavery, L.A. Bacterial pathogens in infected puncture wounds in adults with diabetes/ L.A. Lavery, L.B. Harkless, K. Felder Johnson, S. Mundine// J. Foot. Ankle. Surg.- 1994.- V. 33.- №1.- P. 91-97

237. Lewis, K. Multidrug tolerance of biofilms and persister cells/ K. Lewis// Curr Top Microbiol Immunol 2008; Vol.322. - P. 107-131.

238. Manninger, I.B. Хирургия кисти/ I.B. Manninger// Оперативная хирургия под ред. И. Литтманна.- Будапешт, 1985.- С. 1011-1053.

239. Martin, М.А. Methicillin resistant Staphylococcus aureus: the persietent resistant nosocomial pathogen / M. A. Martin // Curr. Clin. Top. Infect. Dis. - 1994. - V. 14.- P. 170-191.

240. Miller, M.A. Attitudes and beliefs of Canadian infection control decision makers towards "borderline" methicillin - resistant Staphylococcus aureus /М.А. Miller, P. Orenstein, B. Amihod// Can. J. Infect. Control. - 1995. - V. 10.- №4.- P. 114-116.

241. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically. 4th ed. Approved standard M7-A4. NCCLS, Villanova, PA, 1990.

242. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria. Second Edition. Approved Standard. NCCLS document M11-A2. NCCLS, PA, 1997.

243. Nichols, R.L. Wound and intraabdominal infections: microbiological considerations and approaches to treatment/ R.L. Nichols, J.W. Smith// Clin. Infect. Diseases. -1993. V. 16. - Suppl. 4.- P. 266-272.

244. CTToole, G.F. Biofilm formation as micribial development/ G.F. CTToole, H.B. Kaplan, R. Kolter// Ann. Rev. Microbiol. 2000.- № 54.- p. 49-79.

245. Ou, L.F. Bacteriology of necrotizing fasciitis: a review of 58 cases/ L. F. Ou, F.L. Yeh, R.H. Fang, K.W. Yu// Cyund-hua-J-Hsueh- Tsa- Chin-Taibei.-1993.-№51 (4).-P. 271-275.

246. Palmer, R.J. Jr. Biofilms 2007: Broadened Horizons and New Emphases / R. J. Palmer, P. Stoodley// J. of Bacteriology. 2007. - Vol.189 (22). -p. 7948-7960.

247. Proctor, R.A. Persistent and relapsing infections associated with small-colony variants of Staphylococcus aureus /R.A. Proctor, P. Van-Langevelde, M. Kristjansson et al. // Clin. Infect. Dis. 1995. - V. 20. - №1.- P. 95-102.

248. Prokesova, L. Cleavage of human immunoglobulins by proteinase from Staphylococcus aureus/ L. Prokesova, B. Potuznikova, J. Potempa et al. // Adv.Exp. Med. Biol. 1995. - V. 371A. - P. 613-616.

249. Putman, J.H. Structure of the tetracellular surface of the gap function by atomic force microscopy / J.H. Putman, G. Hoh, J.P. Sosinsky et al. // Biophys. J.- 1994.- V. 58.- №1.- P. 149-163.

250. Rauss, A. Staphylococcus aureus nasal carriages and infection in intensive care patients / A. Rauss, P. Legrand, Y. Brun et al.// 5th Eur. Congr. Clin. Microbiol, and Infect. Diseases. Oslo, 1991. - P. 158.

251. Romero, I. El regreso de los grampositivos / I. Romero, I. I. Picazo// Enferm. Infect. Y Microbiol. Clin.-1993.- V. 11.- №5.- P. 231-234.

252. Schaechter, M. Mechanisms of microbial disease / M. Schaechter, G. Medoff, B.I. Eisenstein// 2-nd Ed. Baltimore, 1993.

253. Teixeria, L.R. Antibiotic levels in empyemic pleural fluid / L.R. Teixeria, S.A. Sasse, M.A. Villarino et al.//Chest.-2000.-Vol.H7.-№6.-P.1734-1739.

254. Verweiy, W.R. Early events after intra-abdominal infection with Bacteroides Fragilis and Escherichia coli / W.R. Verweiy, F. Namavar, W.F. Schouten, D.M. Maclaren // J. Med. Microbiol.-1991.- V. 35.- №1.- P. 18-22.

255. Wenzel, R.P. Epidemiology of hospital-acguired infection / R.P. Wenzel//Manual of Clinical Microbiology, Fifth Edition. Wachington: D. S. -1991.- P. 147-150.

256. Widmaier, E.P. Interactions between oxytocin, glucagon and streptozotocininduced diabetic rats / E.P. Widmaier, P.R. Shan, G. Lice// Regul. Peptides.-1991.- V. 34.- №3,- P. 235-249.

257. Yagupsky, P. Quantitative aspects of septicemia / P. Yagupsky, F.S. Nolte //Clin. Microbiol. Rev.- 1990.- V. 3.- №3.- P. 269-279.

258. Список основных сокращений

259. АИА — «антиинтерфероновая» активность АКА антикомплементарная активность АКрА - антикарнозиновая активность АЛА - антилизоцимная активность

260. ГВЗМТ гнойно-воспалительные заболевания мягких тканейг

261. КОГ кремнийорганический глицерогидрогель

262. КОЕ — колониеобразующие единицы

263. МПК минимальная подавляющая концентрация1. ПЭО— полиэтиленоксиды1. БПО — биопленкобразование

264. ПМО показатель микробной обсемененности

Информация о работе