Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структурно-функциональные изменения мягких тканей в аспекте нероэндокринной регуляции при проникающих ранениях щечной области (экспериментально-гистологическое исследование)

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Структурно-функциональные изменения мягких тканей в аспекте нероэндокринной регуляции при проникающих ранениях щечной области (экспериментально-гистологическое исследование)"

□03432502

На правах рукописи

КОЧКИНА Наталья Николаевна

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ МЯГКИХ ТКАНЕЙ В АСПЕКТЕ НЕЙРОЭНДОКРИННОЙ РЕГУЛЯЦИИ ПРИ ПРОНИКАЮЩИХ РАНЕНИЯХ ЩЕЧНОЙ ОБЛАСТИ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.03.04 -клеточная биология, цитология, гистология

14.01.14 - стоматология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 5 ФЕВ 2010

Оренбург-2010

003492502

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

з.д.н. РФ, доктор биологических наук, профессор,

Стадников Александр Абрамович

заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук,

профессор Матчин Александр Артемьевич

доктор медицинских наук, профессор Брюхин Геннадий Васильевич

з.д.н. РФ, доктор медицинских наук, профессор

Соловьев Михаил Михайлович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится марта 2010 г. в /0 часов на заседании

диссертационного совета Д 208.066.04 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 460014, Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседаний Учёного совета.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии (460000, г.Оренбург, Парковый проспект д. 7)

Автореферат разослан « // » февраля 2010 г.

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор

Шевлюк Н. Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования

Проблема лечения и реабилитации больных с повреждениями мягких тканей и костей лицевого скелета остается одной из самых актуальных в челю-стно-лицевой хирургии.

Изменения в общественно-политической и социально-экономической жизни России в конце прошлого столетия и начале XXI века сопровождаются неуклонным повышением частоты ранений и повреждений челюстно-лицевой области (Алимова З.А., Ямуркова Н.Ф., 2007; Богатов В.В с соавт., 2007; Прохватилов Г.И., Панченко В.Н., 2007; Holt G.R.,2007).

Анализ литературы, посвященной структуре травматизма мирного времени свидетельствует не только об увеличении абсолютного числа пострадавших, но и об утяжелении повреждений челюстно-лицевой зоны, увеличении количества сочетан-ных травм, главным образом за счет дорожно-транспортных происшествий (Александров Н.М., Козлов В.А., 1981; Лимберг Ал.А. с соавт., 1987; Subhashraj К. et al., 2007; Месхиа Шота, 2008).

Многолетние наблюдения по лечению больных в клинике челюстно-лицевой хирургии Оренбургской государственной медицинской академии свидетельствуют о том, что значимое количество травм лица регистрируется у лиц трудоспособного возраста (Лебедянцев В.В., с соавт., 2007; Ямуркова Н.Ф., 2007). Это, в свою очередь, обусловливает существенный экономический ущерб в связи с временной и/или стойкой утратой трудоспособности травмированных и случаями преждевременной смерти (Матчин A.A., 1983; Матчин A.A. с соавт., 1988).

В сложной проблеме лечения пострадавших с ранами мягких тканей и костей лица значительное место занимает вопрос предупреждения общих и особенно местных послеоперационных инфекционных осложнений. Число последних все еще достаточно велико, особенно при тяжелых огнестрельных ранениях челюстно-лицевой области с обширными повреждениями мягких тканей, языка, неба, а также при всех ранениях, проникающих в полость рта (Лукьяненко A.B., 1996).

Среди местных факторов, препятствующих заживлению раны, большое значение исследователи отводят инфекции, химиотерапевтическим препаратам, глюко-кортикоидам, радиационному воздействию, ишемии (Гусев Е.Ю., Юрченко Л.Н., 2004; Матчин A.A., Стадников A.A., 2006; Беляев А.Н. с соавт., 2007; Fisher Е et Frodel Jr., 2007; Артамов О.Г. с соавт., 2009).

На протяжении сотен лет предпринимались попытки ускорить процесс заживления ран, но не было найдено ни одного средства или условия, позволяющих достичь этой цели.

В этом отношении структурно-функциональная реорганизация клеточных и тканевых структур в ране и окружающих ее тканей в аспекте нейроэндокринной регуляции этих процессов остаются до настоящего времени не изученными.

С полным основанием можно утверждать, что изучение патогенеза и лечение ран с позиции реактивности и рапаративности свойств тканей и является одной из основных проблем хирургии (Кузин М. И., Костюченок Б. М. 1990). Несмотря на

множество разнообразных методов и способов лечения раневых процессов, ни один из них полностью не удовлетворяет хирургов.

В последние годы опубликованы работы об оптимизирующем влиянии гипота-ламических нейропептидов (в частности окситоцина, вазопрессина) на репаратив-ные процессы тканей различного генеза (Поленов А. П. 1994; Стадников А. А., 1999, 2001; Барков В.Н. 2004; Гречихина C.B. с соавт, 2007). В этой связи формируется новое перспективное направление, открывающее целесообразность местного применения одного из гипоталамических нанопептидов окситоцина при лечении ряда заболеваний, в том числе воспалительного характера (Курлаев П. П. 1986, 2001, Си-вожелезов К. Г. 2005). Однако роль гипоталамической нейросекреции и антибактериальной терапии в стимуляции и оптимизации репаративных гистогенезов мягких тканей челюстно-лицевой области не выявлена.

Все вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования

Экспериментально-гистологическое обоснование способа лечения проникающих ран мягких тканей челюстно-лицевой области (4JIO) с применением окситоцина и антибиотиков.

Задачи исследования

1. Выявить морфофункциональные изменения в мягких тканях челюстно-лицевой области (4JIO) и гипоталамо-гипофизарной ней-росекреторной системе (ГГНС) при заживлении экспериментальных проникающих ран челюстно-лицевой области.

2. Изучить влияние окситоцина на течение раневого процесса в эксперименте, в том числе и в условиях инфицирования S. aureus.

3. Оценить роль, значение и возможности использования комбинации антибиотика и окситоцина при заживлении экспериментальных проникающих ран, в том числе и в условиях инфицирования S. aureus.

Научная новизна работы

Впервые с использованием световой и электронной микроскопии, иммуноцито-химии на основании экспериментально-гистологических исследований и выявленных закономерностей в течении раневого процесса обоснована целесообразность использования антибиотика в комбинации с окситоцином при лечении проникающих ранений мягких тканей челюстно-лицевой области с учетом закономерностей клеточного и тканевого гомеостаза, диапазона гисто- и органоспецифических потенций и эпителиальной, соединительной и мышечной тканей, а также особенностей микроциркулиции. Обоснована эффективность предложенного способа лечения проникающих экспериментальных ран челюстно-лицевой области.

Теоретическая и практическая значимость

Экспериментально обоснован новый способ лечения проникающих ранений мягких тканей челюстно-лицевой области с использованием окситоцина и антибиотика.

Выявленные морфологические и ультраструктурные изменения в ране и окружающих проникающую рану мягких тканях челюстно-лицевой области и ГГНС в

различные периоды течения раневого процесса значительно расширили существующее представление о фазах и закономерностях течения раневого процесса и механизмах заживления раны.

Обоснованный и разработанный в эксперименте способ лечения проникающих ранений мягких тканей может быть представлен к апробации в клинике после получения разрешения Росздравнадзора.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Репаративные процессы в окружающих проникающую рану щеки крыс тканях связаны с изменениями нейросекреции крупноклеточных ядер гипоталамуса, что свидетельствует о генерализованном адаптивном влиянии гипоталамических нонапептидов и доказывает существенную роль па-рааденогипофизарного пути в регуляции клеточного и тканевого гомеостаза структур челюстно-лицевой области.

2. Применение окситоцина в моделируемых условиях (включая дополнительное инфицирование проникающих экспериментальных ран) способствует ускорению реэпителизации раневых дефектов, закрытию их каналов за счет инициации пролиферации камбиальных элементов, сокращению сроков основных стадий раневого процесса, реализации органотипических программ гистогенезов.

3. Оптимизация репаративных гистогенезов обусловлена стимулирующим воздействием окситоцина на пролиферативную активность эндо-телиоцитов, фибробластов, эпителиоциов слизистой и кожной частей щеки, миосимпластов на функциональную деятельность макрофагов, что в конечном итоге способствует оптимальному развитию грануляционной ткани и эпителизации раневого дефекта. Это в свою очередь, ускоряет заживление раны в целом, а также восстановление специфической морфофункциональ-ной организации мягких тканей щеки.

Апробация материала.

Основные положения диссертационного исследования были доложены и обсуждены на II Всероссийском симпозиуме с международным участием «Клинические и фундаментальные аспекты тканевой терапии. Теория и практика клеточных биотехнологий» (Самара, 2004); на конференции хирургов, посвященной 100-летию со дня рождения профессора С.П. Вилесова. «Актуальные вопросы экстренной и восстановительной хирургии» (Оренбург, 2005); на VII Всероссийской научно- практической конференции врачей Приволжско - Уральского военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины» (Оренбург, 2006); на Всероссийской научной конференции. «Актуальные вопросы челюстно-лицевой хирургии и стоматологии» (Санкт-Петербург, 2007); на Всероссийской научной конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в ВУЗе, посвященная 100-летию со дня рождения Л.И. Фалина» (Москва, 2007); на IX, X Всероссийской научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа (Оренбург, 2008, 2009); на Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008); на

XIII Международной конференции челюстно - лицевых хирургов и стоматологов «Новые технологии в стоматологии» (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 15 работ, из них 4 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Реализация результатов исследования

Результаты исследований используются в используются в учебном процессе Оренбургской медицинской академии при чтении лекций и проведении практических занятий по гистологии, цитологии, эмбриологии и по хирургической стоматологии, а также используются в учебном процессе в Воронежской государственной медицинской академии им. Н.Н. Бурденко, Ижевской государственной медицинской академии.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы с описанием собственных исследований с четырьмя подглавами, главы-обсуждения их результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа содержит 14 таблиц, 45 иллюстраций.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Работа выполнена на 96 белых беспородных половозрелых крысах - самцах массой 220-250 г с созданием модели полнослойной сквозной раны челюстно-лицевой области (щеки). В экспериментальных условиях изучены тканевые реакции в области раны, в том числе при местном введении нейропептидов и (или) антибиотика.

Под наркозом (эфирным рауш-наркозом) у животных формировали модель полнослойной сквозной раны челюстно-лицевой области в области щеки с формированием дефекта 2x2 мм путем травматических повреждения. В области щеки наносилась сквозное ранение, проникающее в полость рта 2x2 мм, с помощью троакара. На раны швы не накладывались.

Для решения поставленных задач диссертационного исследования проведены 8 серий опытов, каждая на 12 животных.

В I серии создана экспериментальная модель полнослойной сквозной раны

(ЭСР).

Во II серии опытов при создании ЭСР в область раны вводилась капельно взвесь Staphylococcus aureus (штамм 209Р) в дозе 3*109 микробных тел в 1 мл изотонического раствора хлорида натрия с помощью шпица с тупой иглой (Левенец А.А., Шувалов С.М., Поляков А.В., 1989).

В III серии опытов при создании ЭСР в рану вводился окситоцин в ткани тонкой иглой с помощью инъекционного шприца в разовой дозе 1ЕД (ГЕДЕОН РИХТЕР А. О. Будапешт-Венгрия). В дальнейшем окситоцин таким же образом подво-

дился в зону дефекта в той же дозе 1 раз через сутки (на 1, 3, 5, 7 сутки после операции).

В IV серии опытов при создании ЭСР рана инфицировалась стафилококком (St. Aureus штамм 209Р, 3*108 микробных клеток) и вводился окситоцин в разовой дозе 1 ЕД. В дальнейшем окситоцин подводился в зону дефекта в той же дозе 1 раз через сутки (на 1, 3, 5, 7 сутки после операции).

В V серии опытов при создании ЭСР в область раны вводился антибиотик (30% линкомицин) [ОАО «Дальхимфарм»] разовой дозе 0,2 мл. После операции к ЭСР экзогенно подводился 30% линкомицин по 0,2 мл 1 раз через сутки (на 1, 3, 5 и 7 сутки).

В VI серии опытов при создании ЭСР в область раны вводился стафилококк (St. Aureus штамм 209Р, ЗхЮ8 микробных клеток) и антибиотик линкомицин 30% по 0,2мл. В дальнейшем к ЭСР экзогенно подводится антибиотик линкомицин (30% по

0.2мл) 1 раз через сутки (на 1, 3, 5 и 7 сутки).

В VII серии опытов при создании ЭСР в область раны вводился окситоцин и антибиотик в вышеперечисленных дозах. В дальнейшем к ЭСР экзогенно подводится линкомицин (30% по 0,2мл) в сочетании с окситоцином (1МЕ) 1 раз через сутки (на

1, 3, 5 и 7 сутки).

В VIII серии опытов при создании ЭСР в область раны вводился стафилококк (St.aureus штамм 209Р, 3ХЮ8 микробных клеток), окситоцин и антибиотик в вышеперечисленных дозах. В дальнейшем к ЭСР экзогенно подводится линкомицин (30% по 0,2мл) в сочетании с окситоцином (1МЕ) 1 раз через сутки (на 1, 3, 5 и 7 сутки).

Во всех сериях опытов область ЭСР и окружающие ее ткани иссекались на 3, 5, 10, 30 сутки (по 3 животных на каждую серию) и они подвергались однотипной гистологической обработке с использованием методов световой и электронной микроскопии, иммуноцитохимии и морфометрии с последующим статистическим анализом количественных данных. Все животные выводились из эксперимента путем их эвтаназии передозировкой эфирного наркоза. При выполнении исследований соблюдались «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» согласно приказу МЗ СССР № 755 от 13.08.1977 и Федеральный закон, принятый Государственной думой 1.12.1999г., «О защите животных от жестокого обращения».

Светооптическое исследование

Материал фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина, спирт-формоле, жидкости Буэна, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в целлоидин-парафин. Приготовление серийных срезов толщиной 5-6 мкм осуществляли на ротационном мокротоме МПС-2. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином Майера и эозином. Гликоген и нейтральные мукополиса-хариды (гликопротеиды) определяли с помощью перйодат-Шифф реакции по Мак-Манусу, гликозаминогликаны - толуидиновым синим при значении рН 2,7-3,0, ри-бонуклеопротеиды - метиленовым зеленым и пиронином «Ж» по Браше. Гистохимические реакции сопровождались ферментативными контролями (Э. Пирс, 1962).

Электронномикроскопическое исследование

Материал фиксировали при +4°С в 2,5%-м растворе глютарового альдегида на S-коллединовом буфере (рН 7,2-7,4). Постфиксацию проводили в четырехокиси осмия по прописи G. Millonig (1961). Материал обезвоживали при комнатной температуре в ацетоне возрастающей концентрации и заливали в смолу ЭПОН-812. Полимеризацию объектов проводили при +60°С в течении 2 суток. С каждого блока на ультратоме LKB-5 (Sweden-Bromma) получали полутонкие (1мкм) и ультратонкие (40-60 нм) срезы. Полутонкие срезы окрашивали метиленовым синим и основным фуксином по прописи Sato et Shamoto (1973). Полутонкие срезы использовали при подготовке блоков к заточке перед изготовлением ультратонких срезов, а также для анализа тканей и клеточной организации на световом уровне.

Полученные ультратонкие срезы, подвергали двойному контрастированию насыщенным спиртовым раствором уранилацетата при температуре +37°С в течении 20 минут и цитрате свинца по Reynolds (1963). Срезы изучали на электронном микроскопе ЭМВ 100АК, фотографирование структур проводили при увеличении от х5400 до х40000.

Морфометрические исследование выполняли на препаратах с использованием стандартной окулярной сетки Автандилова Г. Г. (1990), а также винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15хУ4,2.

Иммуноцитохимическое исследование

Для идентификации клеток с признаками апоптоза применяли следующие реакции с моноклональными антителами: на определение экспрессии проапоптотическо-го белка р 53, антиапоптотического белка Ьс12 и на выявление интрануклеосомной фрагментации ДНК. Исследование проводили на серийных парафиновых срезах, используя наборы реактивов фирмы "DaKo" (Дания) и "Intergen" (Канада). Доокра-шивание ядер производили 0,5% раствором метиленового зеленого на 0,1 М ацетоновом буфере.

Полученные количественные результаты исследования статистически оценивали по t-критерию Стьюдента, используя коммерческую программу Microsoft Excel 5.0а. Данные представлены в виде среднего арифметического по результатам каждого раздела работы, ± - стандартные отклонения. Достоверными считались отличия при р<0,05 (95%).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Характер морфологических изменений тканей щеки крысы при нанесении экспериментальных полнослойных сквозных ран.

Начальной реакцией на травматическое повреждение тканей слизистой оболочки, подслизистой основы щеки, мышц и структур кожи челюстно-лицевой области являются расширение сосудов микроциркуляции, эмиграции лейкоцитов и их хемотаксис в формирующийся очаг воспаления. Диаметр функционирующих микрососудов (артериол, венул, гемокапилляров) вокруг зоны альтерации на 3-е сутки после нанесения травмы превышает соответствующие показатели у интактных крыс на 50% (в зоне слизистой оболочки) и на 30% в (области дермы и гиподермы) (табл.1).

Таблица 1

Изменение диаметра кровеносных сосудов (капилляров) в мкм._

Ткани 3 сутки 5 сутки 10 сутки 30 сутки

Интактная крыса кожа 4,54±0,06 4,54±0,06 4,54±0,06 4,54±0,06

слизистая оболочка щеки 5,26±0,01 5,26±0,01 5,26±0,01 5,26±0,01

Рана кожа 9,31±0,51 6,11±0,22 5,62±0,22 4,88±0,14

слизистая оболочка щеки 10,55±0,71 8,31±0,14 5,78±0,11 4,61±0,10

р<0,05

Все это приводит к выраженной диффузной полиморфноклеточной инфильтрации с преобладанием нейтрофилов.

К 5-м суткам плотность инфильтрата нарастает, распространяясь на зоны гиперемии, раздвигая и сдавливая мышечные волокна, которые подвергаются некротическим изменениям. В эти же сроки формируется демаркационный вал (сосредоточие нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов), не четко разделяющий зону некроза и окружающие жизнеспособные ткани.

Этому процессу предшествует плазматическая экссудация за счет усиления сосудистой проницаемости. Нередко, особенно в гемокапиллярах собственной пластинки слизистой оболочки щеки, наблюдалась альтерация эндотелия. Воспалительный отек и набухание гистологических структур кожной и слизистой частей щеки, а также миосимпластов наиболее выражены к 5 суткам эксперимента. При этом продолжались некротические изменения тканей (как правило в зонах спазми-рованных и тромбированных кровеносных сосудов микроциркуляции).

Развитие пролиферативной фазы воспаления начинается уже в период осуществления экссудативной реакции (3-5 сутки опыта). Так, в краевой зоне сквозной раны, а затем среди полиморфноклеточного инфильтрата мы наблюдали пролиферацию фибробластов, скопления которых с гемокапиллярами направлялись в отечную область раны.

К 5-м суткам площадь вновь образованной малодифференцированной соединительной (грануляционной) ткани увеличивалось. В зоне некроза и рядом с ней отмечались макрофаги, лимфоциты, малодифференцированные фибробласты. Формирующаяся грануляционная ткань характеризовалась значительным количеством клеточных элементов и низким содержанием тонких светлоокрашенных коллагеновых волокон. При этом в кожной части раневого дефекта преобладали фибробласты, претерпевающие более быструю цитодифференцировку, приобретая фенотипиче-ские признаки фиброцитов. При этом явления экссудации в сосочковом слое дермы сохранились.

В нашем исследовании наибольшая плотность новообразованных сосудов наблюдалась к 10-м суткам после нанесения травмы (особенно в области слизистой оболочки и подслизистой основы щеки).

В более поздние сроки наблюдения (30 сутки) значительно снижалось количество сосудов микроциркуляторного русла и происходило уменьшение их диаметра в раневой области, что совпадало со структурно-функциональной реорганизацией соединительной ткани.

Развитие молодой соединительной ткани и ее васкуляризация осуществлялась одновременно с репаративной регенерацией многослойного плоского эпителия слизистой оболочки, эпидермиса и его дериватов (волосяные фолликулы, сальные и половые железы).

Через 3 сутки эксперимента митотический индекс эпителия слизистой оболочки составил 9,12% (у интактных крыс этот показатель был 5,31%). Наползающий эпителиальный регенерат состоял из крупных недифференцированных клеток и отличался слабой выраженностью базального слоя (рис.1).

Рис.1 Эпителиальной регенерат травмированной слизистой оболочки щеки крысы. Стадия: 3 суток. Фиксация: 10% раствор нейтрального формалина.

Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Увеличение: об. 40, ок. 10.

Митотических фигур в регенерате не отмечено. Максимальное количество митозов регистрировалось в прилегающем к раневому участку эпителиальном пласте (на уровне базального и шиповатого слоев). Эпителиальный покров слизистой щеки околораневой зоны был утолщен и инфильтрирован полиморфноядерными лейкоцитами.

Высокая митотическая активности эпителиальных клеток слизистой оболочки регистрировалась нами у животных и через 5 суток после травматического повреждения 4JIO. Однако впоследствии происходило ее снижение (табл. 2).

Таблица 2

Митотический индекс эпителиоцитов в краевой области раны слизистой оболочки щеки %о

3 сутки 5 сутки 10 сутки 15 сутки

Интактная крыса (4,31±0,07)

рана 9,12±0,63 11,3±0,37 8,9±0,51 6,2±1,22

Спустя 10 суток эпителизация раны в области слизистой оболочки щеки завершалась. Однако восстановленный эпителиальный пласт характеризовался сглаженной границей между эпителием и подлежащей соединительной тканью (отсутствие сосочкового слоя собственной пластинки, характерного для обычного состояния слизистой оболочки). Более рыхлое расположение клеток и коллагеновых волокон подэпителиальной соединительной ткани свидетельствовало о продолжающейся ее дифференцировке, которая завершается лишь к 30 суткам эксперимента.

На данном этапе происходит функциональная дифференцировка эпителиального регенерата. Можно четко идентифицировать клетки базального, шиповатого, покровного слоев. Однако эпителиоциты не демонстрировали способность синтеза кератогиалина, что свидетельствовало все-таки о незавершенности органотипиче-ской цитодифференцировки.

Ультраструктурный анализ реактивных изменений мышечных волокон, оказавшихся в раневом канале, показал следующее. После травмы в некротизирующихся участков миосимпластов наблюдается пикноз ядер (3-5 сутки эксперимента). У большинства мышечных волокон отмечается значительный отек саркоплазмы с расслоением и дезорганизацией миофибрилл, набухание митохондрий с разрушением их крист. У сарколеммы сохраненных фрагментов волокон определяются немногочисленные, окруженные узким ободком цитоплазмы вытянутые ядра с крупным ядрышком (миосателлитоциты).

В поврежденных мышечных волокон с 5 до 10 суток наблюдений обнаруживаются реактивно измененные, увеличенные в размерах собственно мышечные и под-саркалеммальные ядра миосателлитоцитов. В это же время на культях миосимпластов формируются слабобазофильные мышечные почки (рис.2). Последние, в ряде случаев, увеличиваясь в размерах, превращаются в примитивные миосимпласты, мигрирующие в саркоколеммный футляр.

Рис.2 Формирование базофильных «почек» роста миосимпластов в зоне сквозного дефекта ЧЛО крысы. Стадия: 10 суток. Фиксация: 10% раствор нейтральный формалин. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Увеличение: об. 40, ок. 10. Однако процесс образования подобных миобластов и миосимпластов не наблюдается в неповрежденных околораневых зонах щеки.

Гистологические особенности заживления ран в эксперименте в условиях инфицирования

В серии наших экспериментов с инфицированными животными были, в основном, отмечены те же основные этапы развития воспалительного процесса в области раневого дефекта щеки, что и в случаях без введения микробных патогенов. Однако выраженность и морфологические проявления фаз этого процесса имели существенные отличия.

Так, некротические явления и выраженность экссудативных реакций были более значительными. Повышение проницаемости стенки сосудов сопровождалось усиленными диапедезом форменных элементов крови (не только лейкоцитов, но и эритроцитов). Выраженная функциональная активация клеток эндотелия (скопления цитоплазматических везикул и гранул различной электронной плотности, набухание митохондрий, расширение полостей эндоплазматического ретикулума, возрастание количества пиноцитозных пузырьков) происходит на фоне ультраструктурных повреждений компартментов эндотелиоцитов и дискомплексации их цитомембран. При этом в цитоплазме данных клеток появляются крупные липосомы и ламелляр-ные тельца.

Нейтрофильные лейкоциты фагоцитируют микробов, а также некротизирован-ные массы, лизируют нежизнеспособные эпителиальные, соединительнотканные и мышечные структуры. В отличие от предыдущей серии опытов установлено, что при инфицировании раны, в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов обнаруживаются крупные фагосомы с тканевым детритом. При этом клетки подвергаются деструктивным изменениям и распаду (возрастает число клеток с признаками дегенерации).

Нами установлено, что при загрязнении раны микроорганизмами четкий лейкоцитарной вал (демаркационная зона) не образуется, что не обеспечивает отграничение жизнеспособных тканей щеки от омертвевших гистологических структур. При этом скопления полиморфноядерных лейкоцитов всегда тесно связаны с зоной расположения микробов в слизистой оболочке, подслизистой основе, в интермизии, дерме, гиподерме.

Развитие малодифференцированной (грануляционной) соединительной ткани в раневом канале носит очаговый характер. Она умеренно инфильтрирована лейкоцитами. Существенным моментом является быстрое созревание фибробластов, ускоренное формирование коллагеновых волокон, что наблюдается уже к 10 суткам эксперимента.

Ускоренная дифференцировка соединительной ткани в области раневого канала лимитирует регенерационные потенции эпителиальных и мышечных структур щеки. В итоге заживление раны осуществляется по принципу вторичного натяжения с образованием глубокого рубца. То есть, в данном случае речь идет о заживлении раны через нагноение и гранулирование, что, как известно, обосновано патологами и хирургами (И. В. Давыдовский, 1952; М. И. Кузин, Б. М. Костюченок 1990).

При инфицировании нами обнаружено снижение фагоцитарной активности ней-трофилов.

Таким образом, по результатам цитологического анализа раневого процесса в условиях инфицирования мы сделали заключение о его дегенеративно-воспалительном характере. Это обосновывается тем, что в раневой области (по срокам наблюдений 3, 5, 10 суток) содержится большое количество нейтрофилов и макрофагов (рис. 3) в состоянии дегенерации и деструкции в виде кариопикноза и кариорексиса, цитолиза. У сохраненных же нейтрофилов, при внутриклеточном расположении микробов, фагоцитоз носит преимущественно незавершенный характер.

Рис.3 Лейкоциты с признаками деструкции в области инфицированной раны щеки крысы. Стадия: 10 суток. Увеличение: 1500

Полученные нами данные по течению инфицированных ран щеки позволили сделать заключение о существенных нарушениях гомеостатических механизмов, приводящих к разобщению процессов воспаления и регенерации тканей и в последнем к неадекватному фиброзу. Эти события позволили нам их интерпретировать как проявления дисрегенерации, как результат нарушения (уклонения) кинетики воспа-лительно-репаративной реакции (В. В. Серов, В. С. Пауков, 1995).

Склерозирующие процессы негативно сказываются не только для посттравматического восстановления структур слизистой оболочки щеки, структур кожи, но и особенно для репаративного гистогенеза миосимпластов. Последнее обстоятельство, на наш взгляд, является особенно усугубляющим фактором для репарации и функционального состояния сократительного (жевательного) аппарата ЧЛО.

По данным ультраструктурного анализа в макрофагах уменьшено количество лизосом и фагосом, регистрируются признаки деструкции данных клеток. Отсутствуют макрофаго-фибробластические и макрофаго-лейкоцитарные контакты.

В фибробластах часто отмечаются ультраструктурные повреждения мембранных компартментов. Вследствие весьма незначительного числа миофибробластов тормозится контракция раневого дефекта. Регенерация эпителиев слизистой оболочки и кожи, мышечных структур щеки замедлена из-за выраженной воспалительной инфильтрации, некротических изменений грануляционной ткани, нарушения стромально-паренхиматозных взаимоотношений.

Резкое набухание, деструкция и десквамация эндотелия капилляров, утолщение и расслоение базальных мембран ведут к существенным нарушениям транскапил-

лярного обмена. С другой стороны, плазматическое пропитывание и нейтрофильная инфильтрация стенок кровеносных сосудов и периваскулярных пространств создают условия для развития эндо-, пери- и панваскулита, часто заканчивающегося облитерацией их просвета.

В своей совокупности описанные ранее процессы приводят к структурной перестройке поврежденных участков 4JIO, прогрессированию склероза, сочетающегося с отсутствием не только гистотипической регенерации, но и органотипической дифференцировки элементов, формирующихся в регенерате слизистой оболочки, подслизистой основы, мышц, дермы и ее дериватов. Подобная ситуация по определению патологов (А. И. Струков, В. С. Пауков, О. Я. Кауфман, 1990, А. Б. Шехтер, 1990) «является извращением морфологической функции соединительной ткани, которая как бы отмежевывается от паренхиматозных структур, действует в интересах сохранения формы органа, «жертвуя» его функцией».

При инфицировании отмечено значительное лимитированное развитие грануляционной (малодифференцированной) соединительной ткани в раневой области, что приводило к задержке эпителизации как гистоструктур кожи, так и слизистой оболочки щек (что было подтверждено нашими иммуноцитохимическими исследованиями по оценке антиапоптотического гена bel 2).

Как известно белок bel 2 способен контролировать процессы регенерации, ограничивает вступление клеток в апоптоз, обеспечивая межклеточные коммуникации и энергетические метаболические процессы (Selinfreund R. H., 2001; Корепанова О. А., 2007).

Наши исследования показали, что экспрессия синтеза данного белка в моделируемых условиях составила (подсчет позитивных клеток в условных полях зрения микроскопа МБИ - 15) в зависимости от сроков (5-10 суток) эксперимента (в %):

- эпителиоциты слизистой оболочки щеки 8,2±0,6 - 11,3±0,9 (интактные крысы 3±0,01);

- фибробласты в зоне сквозной раны щеки 16,2±1,1 - 22,2±0,9 (интактные крысы 4±0,01);

- эндотелиоциты раневой области 1±0,01 - 6,2±0,33 (интактные крысы 0).

Структурно-функциональная реорганизация крупноклеточных ядер гипоталамуса при сквозных ранениях челюстно-лицевой области крыс

Исходя из целевой установки нашей работы, мы на светооптическом и ультраструктурном уровне проанализировали морфофункциональное состояние нонпеп-тидергической нейросекреторной системы (супраоптические и паравентрикулярные ядра подбугорья головного мозга) у экспериментальных животных.

Наши исследования показали, что через трое суток от начала эксперимента (полнослойные сквозные раны щеки крыс) происходит достоверное увеличение размеров ядер, ядрышек и цитоплазмы «светлых» (то есть изначально функционально активных) нейросекреторных клеток (НСК) супраоптических (СО) и пара-вентрикулярных (ПВ) ядер гипоталамуса. Данные морфометрические показатели сохранялись повышенными (относительно интактных животных) через 5 и 10 суток.

В перикариотах НСК определяется расширенная эндоплазматическая сеть и большое количество свободные рибосом. Аппарат Гольджи представлен в виде нескольких компонентов (диктиосомы), локализованных перпендикулярно, развит хорошо. Митохондрии имеют обычное строение и рассредоточены по всей цитоплазме.

Нейросекреторные включения представлены двумя разновидностями: гранулами и каплями, имеющими позитивную окраску по Гомори-Габу (паральдегидфукси-ном). Элементарные секреторные гранулы при ультраструктурном исследовании имеют электронноплотную сердцевину, оптически прозрачное тело и пограничную мембрану. Размеры гранул в значительном состоянии варьируют.

В составе исследованных гипоталамических ядер экспериментальных животных в наблюдаемые сроки преобладают «светлые» функционально активные НСК. В подобных клетках синтез нейросекрета уравновешен с его выведением в аксоны и их терминали на уровне нейрогипофиза. Они имеют крупные размеры тела, ядра и ядрышка. Ядра светлые, содержат деконденсированный хроматин. Количество пик-номорфных НСК невелико.

Одновременно в эти сроки мы установили усиленное высвобождение нейросекрета по аксонам НСК на уровне тубероинфундибудярного тракта и аксовазальных контактов. При этом в терминалях аксонов НСК определялись в большом количестве «пустые пузырьки», то есть те ультраструктуры, которые прежде содержали ней-росекреторный материал. Однако степень высвобождения нейросекрета по стадиям опытов отличалась и существенно понижалась к 15 суткам.

Так, через 5 суток в нейрогипофизе травмированных крыс у 32,6±2,9% термина-лей аксонов нейросекреторных клеток, в том числе контактирующих с гемокапил-лярами, отмечалось скопление элементарных секреторных гранул в виде электрон-ноплотных конгломератов, напоминающих гипертрофированные тельца Герринга.

Через 15 суток эксперимента доля подобных терминалей составила 47,8±2,3%. Все это свидетельствует о депонировании нейросекрета и задержке (блокировки) его высвобождения в общий кровоток. Об этом же свидетельствует распад секреторных гранул в аксоплазме без явления экзоцитоза.

Кроме того происходила дегенерация части терминалей аксонов по «темному» типу. Такие терминали, вероятно, принадлежали пикноморфным, а также дегенерирующим функционально активным нейросекреторным клеткам супраоптическим и паравентрикулярным ядрам гипоталамуса. В них происходит деградация органелл (особенно микротрубочек и микрофиламентов), набухание и разрушение митохондрий. Часть фрагментирующихся аксонов фагоцитируется питуицитами.

Подобные изменения терминалей аксонов НСК были в 2,2-2,7 раза больше у инфицированных крыс. При этом в перикарионах подобных клеток появляются крупные (до 1 мкм) вторичные лизосомы. Они представлены аутофагическими вакуолями, мультивезикулярными, липофусциноподобными и остаточными тельцами. Во многих из них определяются следы лизируемых ими органелл и секреторных включений.

Мы особенно подчеркиваем, что у данных экспериментальных животных (в условиях инфицированных ран) в ядре гипоталамуса возрастает число пикноморфных НСК [по А. Л. Поленову (1993) клетки в состоянии «физиологической» дегенерации]. Они имеют угловатую, различной степени сжатости форму тела и пикнотиче-ские ядра, темную цитоплазму (рис. 4). У подобных клеток происходит массовая деградация органелл, потеря секреторных гранул.

Рис. 4 Пикноморфные нейросекреторные клетки паравентрикулярного ядра гипоталамуса крысы через 15 суток после травматического повреждения ЧЛО (в условиях инфицирования раны). Фиксация: жидкость Буэна. Окраска: паральдегидфуксин по Гомари-Габу в модификации А. Л. Поленова. Увеличение: об. 8, ок. 10.

Описанные явления можно трактовать с позиций особенностей секреторного цикла пептидергических нейронов переднего гипоталамуса, который как известно (А. Л. Поленов 1993), возможен в двух вариантах: спокойное функционирование и интенсивная гиперсекреция. Мы лишь делаем акцент на том, что активация гипота-ламо-гипофизарной нейросекреции (ГГНС) в условиях инфицирования ран ЧЛО происходит на фоне блокирования высвобождения нейросекрета в гемоциркуляцию животных, что, безусловно, приведет к дефициту данных адаптивных нейрогормо-нов в общий кровоток (особенно на стадии 15 суток эксперимента и особенно в условиях инфицирования). Заметим, что именно в эти сроки эксперимента в раневом канале щеки крыс наблюдались явления дисрегенераторного характера в ране.

Ультраструктурный анализ СО и ПВ ядер гипоталамуса у данных экспериментальных животных позволили получить дополнительную информацию о серьезных повреждениях секреторного процесса, что вероятно еще более усугубляет недостаточность поступления наннопептидных гормонов в гемоциркуляцию, тем самым создавая ограничения в регуляторном их влиянии на репаративные процессы.

Имеет также место дискомплексация канальцев гранулярного ретикулума, редукция комплекса Гольджи, увеличение числа лизосом, ауфагосом, ламеллярных телец и липосом. Секреторные гранулы локализуются в околоядерной зоне, а также по периферии клеток. Четко наблюдаются явления кринофагии.

Возрастает численность пикноморфных нейросекреторных клеток (дегенерирующих) с признаками кариопикноза, секвестрацией цитоплазмы.

Наши результаты не позволяют в полной мере ответить на вопрос, в какой степени изменения гипоталамо-гипофизарной нейросекреции в условиях инфициро-

ванной раны ЧЛО однонаправлено реализуются в общей гемоциркуляции по критериям содержания гормонов и их связей с лигард-рецепторами. Тем не менее мы можем сделать определенное заключение о том, что процессы, происходящие в раневом канале, ведут к «запуску» различных звеньев репарации тканей, в том числе и гипоталамо-гипофизарного. Безусловно, нарушение репаративного тканевого го-меостаза в инфицированной ране, рассинхронизация фаз воспаления, переход регенеративного процесса в дисрегенерацию протекает на фоне разбалансированных процессов продукции и высвобождения гуморальных факторов центрального звена нейроэндокринной регуляции, что может в свою очередь ограничить реализацию адаптогенного их влияния на паренхиматозные и стромальные элементы ЧЛО.

Влияние гипоталомических нейропептидов (окситоцина) на заживление ран в эксперименте, в том числе в условиях инфицирования Как было описано выше, морфологические процессы в раневом дефекте щеки экспериментальных крыс коррелировали с соответствующем реорганизацией нона-пептидергической ГГНС (СО и ПВЯ гипоталамума, нейрогипофиза).

Исходя из этого, мы приводим в данной главе диссертации морфологические сведения об эффектах воздействия окситоцина на течение раневого процесса. Прежде всего местное применение окситоцина приводит к 2,5-3-х кратному возрастанию митотического индекса эпителиоцитов слизистой оболочки щеки по срокам наблюдений (табл. 3). При этом усиление пролиферации отмечено и при совместном использовании данного нейропептида и антибиотика. Следует подчеркнуть, что анти-биотикотерапия раневого процесса без введения окситоцина подобного эффекта не оказывала.

Таблица 3

Митотическая активность (митотический индекс - МИ) эпителиоцитов слизи-

стой оболочки ротовой полости экспериментальных крыс.

МИ (в промиллях) 3 сутки 5 сутки 10 сутки 30 сутки

Контроль 3,34±0,03

Опыт (без лечения) 6,77±0,07 8,32±0,04 9,62±0,11 6,78±0,03

Опыт (окситоцин) 9,53±0,06 12,22±0,06 10,84±0,23 6,89±0,04

Опыт (антибиотик) 5,41±0,03 7,11±0,05 8,12±0,12 4,11±0,02

Опыт (антибиотик + окситоцин) 10,22±0,04 13,12±0,03 12,41±0,06 7,01±0,01

Кроме того, можно сделать заключение о том, что инициация клеточной репродукции под воздействием гипоталамического нонапептида (окситоцина), имеющаяся у эпителиоцитов на ранних этапах регенераторного процесса, не приводит в последующие сроки к чрезмерному разрастанию эпителиальной ткани. При этом пролиферация эпителиоцитов всегда происходит в ходе органотипической миграции клеток в область краев раны (рис. 5).

\

Рис. 5 Эпителиальный пролиферат в слизистой части сквозной раны щеки крысы через 5 суток после травматического повреждения (введения оксотоцина). Фиксация: спирт- формалин. Окраска: метиловый-зеленый и пиранин по Браше. Увеличение:

об. 20, ок. 10.

Коэффициент регенерации (соотношение эпителизированной поверхности к общей поверхности раны) был следующим (табл. 4):

Таблица 4

3 сутки 5 сутки 10 сутки

Опыт (без лечения) 0,24 0,54 0,83

Опыт (окситоцин) 0,43 0,67 0,97

Опыт (антибиотик) 0,22 0,49 0,78

Опыт (антибиотик+окситоцин) 0,45 0,81 1,00

* соотношение определилось с помощью окуляр-вставка (256 квадратов) в полях зрения микроскопа МБИ-15, ув. об. 8, ок. 7.

Таким образом, выявлено опережение появления краевой эпителизации и эпи-телизации раневого дефекта в целом у животных, которым вводили окситоцин, в том числе и совместно с антибиотиками, которые сам по себе подобный процесс не вызывал.

Существенно коррегировалось соотношение функционально специализированных клеток на «поле воспаления». Это касалось как кожной, так и слизистой части щеки животных (табл.5, табл.6)

Таблица 5

Содержание нейтрофильных лейкоцитов в тканях слизистой оболочки щеки %

3 сутки 5 сутки 10 сутки

Интактная крыса 0,61±0,03

Без окситоцина 37,2 Ш,13 19,14±1,13 10,71±1,22

Окситоцин 51,4±3,21 22,11±1,45 5,11±0,52

Антибиотик 28,6± 1,14 17,8±1,02 9,14±0,77

Окситоцин+антибиотик 56,8±1,33 31,4±1,09 6,82±0,78

Таблица 6

Содержание нейтрофильных лейкоцитов в тканях кожной части щеки (%)

3 сутки 5 сутки 10 сутки

Интактная крыса 0,31±0,01

Без окситоцина, асептические условия 41,12±1,82 31,81±2,08 27,31±3,14

Окситоцин, асептические условия 59,11±1,42 29,8±2,11 11,4±0,88

Антибиотик 39,82±2,14 28,8±2,31 26,31±0,97

Антибиотик +окситоцин 48,61±1,81 25,61±0,16 9,18±0,14

Наряду с нейтрофильными лейкоцитами из сосудистого русла эмигрируют на «поле воспаления» и макрофаги моноцитарного генеза. Исследование их количества на условную единицу гистологического препарата показало различный характер их экстравазации по сериям опыта (табл. 7).

Таблица 7

Содержание мононуклеаров (макрофагов) в слизистой оболочки щеки %

3 сутки 5 сутки 10 сутки

Интактная крыса 0,51±0,01

Без окситоцина, асептические условия 61,81±4,31 40,04±1,22 12,31±1,22

Окситоцин, асептические условия 71,21±2,41 51,12±2,44 18,21±2,13

Антибиотик 58,41±3,21 33,46±1,48 13,22±2,61

Антибиотик+окситоцин 69,11±1,22 52,11±2,61 17,81±1,66

Под влиянием окситоцина, в том числе и в сочетании с антибиотиком, содержания макрофагов, дифференцирующихся из моноцитов, достоверно увеличивается. Данная тенденция прослеживается и через 3-5 сутки эксперимента. Аналогичные результаты получены и в тканевых структурах кожи.

Следует полагать, что более быстрая дифференцировка мононуклеаров, их трансформация в макрофаги (в условиях местного воздействия на раневой дефект тканей щеки экспериментальных животных окситоцина) и последующая утилизация продуктов распада обеспечивают эффективное очищение очага воспаления и последующее развитие репаративных процессов эпителиальных и соединительнотканных структур.

Толщина эпителия слизистой оболочки щеки (в краевой зоне раневого дефекта) постепенно увеличивалась по срокам наблюдений в условиях введения окситоцина во всех сериях опытов. Так через 5 суток опыта толщина эпителия у неинфициро-ванных животных под воздействием окситоцина возрастает в 1,8 раза, а у инфицированных - в 1,4 раза.

Увеличение толщины эпителиального пласта происходило за счет активизации митотического деления клеток базального и шиповатого слоев (табл. 8).

Таблица 8

Митотическая активность эпителия слизистой оболочки щеки крыс (в краевой зоне раны)в %

3 сутки 5сутки 10 сутки 30 сутки

Животные без инфицирования 3,8±0,21 4,9±0,11 4Д±0,22 2,9±0,14

Инфицированные животные 2,7±0,11 2,2±0,12 1,7±0,05 1,4±0,03

Введение окситоцина (без инфициров) 5,5±0,26 9,1 ±0,31 7,3±0,21 4,0±0,24

Введение окситоцина (инфициров) 4,1±0,22 5,9±0,11 5Д±0,33 3,9±0,17

Инфицир. животные+антибиотик 2,6±0,08 1,4±0,01 1,8±0,22 1,2±0,02

Инфицр. живот.+антибиот+окситоцин 5,0±0,02 10,4±0,09 8,2±0,06 5,1±0,07

Нарастание толщины эпителия слизистой ротовой полости экспериментальных животных может рассматриваться как приспособительный механизм, который в сочетании с повышенной скоростью обновления эпителиоцитов усиливает барьерные свойства эпителиального покрова и препятствует транслокации микроорганизмов и их продуктов (Быков В. Л., 1996, Hill М. W., et al, 1981, Кулаева В. В., Быков В. Л., 2007).

При использовании окситоцина (и особенно в случаях инфицирования стафилококком) наиболее заметные отличительные изменения в ране (по сравнению с предыдущими сериями опытов) имели место в экссудативную и пролиферативную фазы воспаления. Так, электронномикроскопически выявлено возрастание в нейтро-фильных лейкоцитах числа свободных рибосом, что свидетельствует об усилении синтеза РНК при продолжающимся фагоцитозе микробов и тканевого детрита.

В условиях применения окситоцина (в чистом виде, либо в сочетании с антибиотиком) уже в течение первых суток формируется лейкоцитарный вал, на границе жизнеспособных и омертвевших тканей, отграничивающих их друг от друга.

Развитие малодифференцированной (грануляционной) соединительной ткни при введении в область раневого канала окситоцина происходит на 3-е сутки после травмы. Она достигает максимального развития через 5 суток эксперимента, заполняя раневой дефект.

Ее формирование сопровождается интенсивным новообразованием гемокапил-ляров. Интенсивный васкулогенез сочетается с появлением вокруг сосудов микро-циркуляторного русла активизированных и митотически деятельных периваскуляр-ных клеток и концентрацией тучных клеток (лаброцитов).

Важнейшим мобилизирующим клеточным компонентом грануляционной ткани при воздействии окситоцина являются фибробласты (малодифференцированные клеточные формы, функционально специализированные, и особенно миофибробла-сты). Последние, как известно, обеспечивают контрактильные процессы в раневом канале.

По нашим данным основным предшественником клеток фибробластического дифферона являются околососудистые камбиальные клетки. И в этом отношении наши данные согласуются с известными суждениями морфологов (Аничков H.H. 1951, Шумкевич Л. Л. 1965, Ross R., Ödland J. 1968).

Введение окситоцина (одного, либо в сочетании с антибиотиком) приводит к возрастанию количества фибробластов, и они к 10-15 суткам эксперимента становятся преобладающим пулом клеток в малодифференцированной соединительной ткани. Это, в свою очередь, создает адекватные условия для репаративной регенерации эпителиальных структур кожной (рис. 6) и слизистой (рис.7) части щеки экспериментальных животных.

г

Рис. 6 Участок регенерата кожной части щеки крысы через 10 суток после травматического повреждения ЧЛО (введение окситоци-на). Фиксация: 10% раствор нейтрального формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Увеличение: об. 40, ок. 10.

Рис.7 Эпителиальный регенерат слизистой части щеки через 10 суток после сквозного ранения (введение окситоцина). Фиксация: спирт, формалин. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Увеличение: об. 20, ок. 10.

По данным иммунохимического исследования, в фибробластах раневой области под воздействием окситоцина снижается проапоптотическая доминанта (по показаниям экспрессии гена р53), и возрастает число экспрессирующих синтез белков Ьс1-2 . Это может свидетельствовать о формировании у фибробластов «готовности» вступать в пролиферативный процесс по механизмам эндомитоза, эндорепродукции, не улавливаемыми нашими методическими подходами.

В таких клетках (в отличие от предыдущих сериях экспериментов) отмечались хорошо развитая гранулярная эндоплазматическая сеть, крупные митохондрии со светлым матриксом и разветвленными кристами. Они имели крупные ядра округло-овальной формы с 1-2 ядрышками, расположенными чаще всего прикариолеммно.

Необходимо подчеркнуть, что процессы фибриллогенеза в ране (при использовании окситоцина) были отсрочены по времени (по сравнению с предыдущими сериями опытов) до 30 суток. Именно в этот период происходит внутренняя перестройка фибробластов и формируется его способность к интенсивному синтезу коллагена.

Наши данные свидетельствуют о том, что экзогенно вводимый окситоцин интенсифицирует энергетический и метаболический потенциал фибробластов, направляет его на формирование малодифференцированного состояния соединительной ткани, пролонгируя период образования грануляционной ткани, когда коллагенез выражен слабо. Тем не менее, подобная пролонгация не исключает соответствующую подготовку соединительнотканных элементов к последующему фибриллогене-зу.

Интенсивный коллагенез в ране (в условиях лечебной коррекции окситоцин либо в его комбинации с антибиотиком) происходит в сроки более 15 суток от момента нанесения сквозного ранения щеки. Это обстоятельство обеспечивает необходимые условия для репаративного гистогенеза паренхиматозных структур ЧЛО экспериментальных животных (покровного и железистого эпителиев, миосимпластов, дериватов кожи).

Существенную активизацию под воздействием окситоцина демонстрируют не только фибробласты, макрофаги, но и тучные клетки. В этих условиях мы отметили активизацию процессов дегрануляции этих клеток с появлением вокруг них цито-плазматических гранул просветлений (вакуолей), которые имеют тенденцию к при плазмолеммной локализации.

Под воздействием окситоцина, в том числе и в сочетании с антибиотиком, на 5-е сутки эксперимента в грануляционной ткани возрастает число плазматических клеток (по сравнению с нелеченными экспериментальными животными). Они концентрируются, как правило, около кровеносных сосудов микроциркуляции. Следует заметить, что при этом в малодифференцированной соединительной ткани, заполняющий раневой канал, микроорганизмы не определяются, как это было отмечено в предыдущих опытах. Микроорганизмы, как жизнеспособные, так и фагоцитированные лейкоцитами и макрофагами, регистрируются в некротических массах.

Это лишний раз доказывает то обстоятельство, что применение антибиотикоте-рапии, в том числе и с использованием окситоцина, не исключает необходимости ранней некрэктомии, тщательного поиска малейших гнойных затеков и их ликвидации (Кузин М. И. с соавт., 1979).

Нами установлено, что параллельно с развитием грануляционной ткани в области сквозного раневого дефекта щеки крыс, под воздействием окситоцина (включая его сочетание с антибиотиками) происходит существенная оптимизация пролифера-тивной фазы посттравматического воспаления. Этот процесс начинается на 3-5 сутки эксперимента. При этом высокая скорость эпителизации раны обеспечивается митотической репродукцией базальных клеток эпителиального покрова слизистой оболочки щеки и эпидермиса кожи, эпителиоцитов волосяных фолликулов, миоэпи-телиальных клеток потовых желез, а также малодифференцированных элементов сальных желез.

Миграция пролиферирующих клеток эпителиальных пластов к 10 суткам опытов приводит к адекватному и полному закрытию раневого дефекта, как со стороны ротовой полости, так и со стороны кожных покровов. Следует подчеркнуть, что количество митозов возрастает и среди эпителиоцитов, удаленных от раневого канала.

Важно отметить, что в регенерате кожной части раны в условиях применения окситоцина наблюдается органотипическая дифференцировка новообразованных гистоструктур. Это касается не только формирования слоев эпидермиса, но и вторичной дифференцировки сальных, потовых желез и волосяных фолликулов.

Можно сделать заключение о том, что введение в рану окситоцина обеспечивает равновесие фаз воспаления (2-й и 3-й), в итоге приводя к оптимальному течению раневого процесса (т.е. заживлению по типу первичного натяжения).

С другой стороны, мы констатируем, что в случаях инфицирования раны St. aureus, даже при использовании антибиотикотерапии, заживление раны осуществляется с образованием глубокого рубца (вторичным натяжением).

Важно также подчеркнуть то обстоятельство, что использование окситоцина, как лечебного средства позитивным образом сказывалось и на репарации поперечнополосатой мышечной ткани щеки. При этом гибель части миосимпластов сопровождались выраженной репаративной регенераторной реакцией со стороны камбиальных элементов (миосателлитоцитов). В сроки наблюдений (5-10 сутки экспериментов) формируются многочисленных мышечные почки, состоящие из овальных или слабо отростчатых клеток с крупными светлыми ядрами. В дальнейшем из них образовывалась мышечные волокна, сформированные в пучки.

ВЫВОДЫ

1. Характер репаративных процессов в слизистой, кожной частях, а также поперечно-полосатой мускулатуре щеки крыс при моделировании послойных ран свя-

ан с изменениями нейросекреции крупноклеточных ядер гипоталамуса, свидетель-ствющими о генерализованном адаптивном влиянии гипоталамических нонапепти-,ов, и доказывает существенную роль парааденогипофизарного пути в регуляции клеточного и тканевого гомеостаза структур челюстно-лицевой области.

2. В условиях инфицирования послойных ран щеки экспериментальных жи-отных отмечается дисрегенераторный характер воспаления, что сопровождается ^синхронизацией (разбалансировкой) процессов синтеза и высвобождения гипо-аламических нейропептидов на уровне аксовазальных комплексов нейрогипофиза, имитирующих течение репаративных гистогенезов в области травматического по-реждения.

3. Наряду со светооптическими и ультраструктурными показателями, одним [3 доказательных критериев оценки эффективности репаративных гистогенезов в власти послойных ран щеки экспериментальных животных могут быть показатели кспрессии про- и антиапоптотических генов клеток, различных гистологических труктур щеки экспериментальных животных.

4. Применение окситоцина в экспериментальных условиях (включая инфици-ование послойных ран у крыс) способствует ускорению реэпителизации раневых ;ефектов, закрытию их каналов за счет инициации пролиферации камбиальных тка-[евых элементов, реализации гистобластических и органотипических программ гис-огенезов.

5. Оптимизация репаративных гистогенезов обусловлена стимулирующим оздействием окситоцина на пролиферативную активность эндотелиоцитов, фиб-юбластов, эпителиоцитов слизистой и кожной частей щеки, миосимпластов, на )ункциональную деятельность макрофагов, что в конечном итоге способствует за-швлению раны в целом, а также восстановлению специфической морфофункцио-[альной организации тканей щеки.

6. В своей совокупности полученные факты позволяют обосновать рекомеь дации для местного применения окситоцина в клинических испытаниях при леч< нии сквозных, в том числе и инфицированных, ран челюстно-лицевой области.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Барков В.Н. Стадников A.A. Лазарева Н.В. Матчин A.A. Кочкина H. I Влияние окситоцина на репаративные процессы при замещении дефекта челюст крысы деминерализованным костным матриксом// Клинические и фундаментальны аспекты тканевой терапии. Теория и практика клеточных биотехнологий. Матерш лы II Всероссийского симпозиума с международным участием. Самара- 2004,- С.8-9

2. Матчин A.A. Стадников A.A. Барков В.Н. Кочкина H. Н. Оптимизация pi паративных процесссов при ранениях челюстно-лицевой области//Актуальные вс просы челюстно-лицевой хирургии и стоматологии. Сборник научных трудов коь ференции, посвящённой 75-летию со дня основания кафедры челюстно-лицево хирургии и стоматологии. С.Петербург, 2004,- С. 104-105

3. Барков В.Н. Стадников А.А Матчин A.A. Северинова С.Б. Кочкина HT Экспериментально-гистологическое исследование ран, проникающих в полост ртаАктуальные вопросы экстренной и восстановительной хирургии. Материал] конференции хирургов, посвящённой 100-летию со дня рождения профессора С.Г Вилесова. Оренбург, 2005.- С. 18-20

4. Безносик В.Н., Гречихина C.B., Кочкина H.H., Северинова С.Б. Экспер* ментально-морфологическое обоснование оптимизации репаративных процессо при повреждении тканей.// Тезисы доклада VII Всероссийской конференции «Hei роэндокринология - 2005», С.-Петербург, ООО «Аграф», 2005, с. 22-23

5. Барков В.Н., Кочкина H.H., Кургина Е.С. Нейроэндокринные аспекты репе ративных гистогенезов в экспериментальной стоматологии.// Материалы научно конференции «Актуальные проблемы науки о тканях». С.-Петербург, Изд-во ВМ/ 2006, с. 16-18

6. Барков В.Н., Безносик В,Н. Гречихина С. В. Матчин A.A. .Северинов С.Б. Кочкина H.H. Гипоталамические нейропептиды и посттравматически репаративный гистогенез в челюстно-лицевой области в эксперименте.// Мо[ фология. - 2006, № 4. - С. 18-18

7. Кочкина H.H. Оптимизирующее влияние окситоцина на репаративны процессы при травме тканей челюстно-лицевой области.// Морфология, 2006,г 130, № 5, с. 54-55

8. Северинова С.Б., Кочкина H. Н., Матчин A.A., Стадников A.A., Барков ВТ Репаративный гистогенез мягких тканей и его регуляция при нанесении сквозно раны щеки Материалы Всероссийской Научной Конференции «Актуальные вопрос] челюстно-лицевой хирургии и стоматологии»,- Санкт-Петербург, 2007, с. 74-74

9. Кочкина H.H., Северинова С.Б., Стадников A.A., Матчин A.A., Барко В.Н. Экспериментально-гистологическое исследование влияния окситоцина н репаративные гистогенезы тканей щеки.// Морфология, т.131,№ 3,2007, с.76-7*

10. Матчин A.A., Кочкина H. H., Северинова С.Б., Стадников A.A., Барков В.Н. истологическое изучение возможности применения окситоцина для лечения сквоз-ых ранений тканей челюстно-лицевой области.// Информационный архив, том 1, №

1,2007, с. 73-73

11. Барков В.Н., Стадников A.A., Безносик В.Н., Гречихина C.B., Кочкина H.H., 'еверинова С.Б., Матчин A.A. Корригирующее влияние факторов нейроэндокрин-ой регуляции на процессы в тканях челюстно - лицевой области при механическом овреждении.// XIII Международная конференция челюстно - лицевых хирургов томатологов «Новые технологии в стоматологии» России, Санкт - Петербург, 202 мая 2008, с.34-34

12. Безносик В.Н., Гречихина C.B., Кочкина H.H., Северинова С.Б., Барков В.Н. ) возможностях прогнозирования течения репаративных процессов при травме че-юстно-лицевой области.// Информационный архив, том 2, №1,2008 с. 162-163

13. Барков В.Н., Безносик В.Н., Гречихина C.B., Кочкина H.H., Северинова !.Б., Стадников A.A., Матчин A.A. Экспериментальное обоснование применения ейропептидов при моделировании травматического дефекта челюстно - лицевой бласти для направленной регенерации ткани.// Нижегородский медицинский на-чно - практический журнал 2008, № 2, вып. 2. с.210-211

14. Кочкина H.H., Северинова С.Б., Барков В.Н. Реактивность и пластич-ость тканей при экспериментальном моделировании сквозных дефектов че-юстно-лицевой области (нейробиологические аспекты).// Морфология, 2008, т. 33, № 3, с. 57-58

15. Кочкина H.H., Северинова С.Б., Барков В.Н., Стадников A.A., Матчин A.A. 1зучение в эксперименте новых возможностей лечения воспалительных процессов каней челюстно-лицевой области с использованием механизмов центральной регу-яции репаративных гистогенезов- Информационный архив, том 3, № 3, 2009, с.87-8

Издательство отдел документационного обеспечения и контроля за исполнением документов ГОУ ВПО ОрГМА Росздрава Лицензия 021239 от 22.08.97 г. Подписано в печать 9.02.2010 г. Заказ № 13 Формат бумаги А-4. Тираж 100 экз. тел. 77-24-59

ряууГ)

о ^

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Кочкина, Наталья Николаевна

Введение.

Глава 1. Клинические и морфологические аспекты репаративных процессов челюстно-лицевой области (обзор литературы).

Глава 2. Материалы и методы исследования.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1. Характер морфологических изменений тканей щеки крысы при нанесении экспериментальных полнослойных сквозных ран.

3.2. Гистологические особенности заживления ран в эксперименте в условиях инфицирования.

3.3. Структурно-функциональная реорганизация крупноклеточных ядер гипоталамуса при сквозных ранениях челюстно-лицевой области крыс.

3.4. Влияние гипоталамических нейропептидов (окситоцина) на заживление ран в эксперименте, в том числе в условиях инфицирования.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Структурно-функциональные изменения мягких тканей в аспекте нероэндокринной регуляции при проникающих ранениях щечной области (экспериментально-гистологическое исследование)"

Актуальность исследования

Проблема лечения и реабилитации больных с повреждениями мягких тканей и костей лицевого скелета остается одной из самых актуальных в челюстно-лицевой хирургии. Это обусловлено многими причинами.

Во-первых, повреждения тканей лица имеют большое значение для пациента вследствие потенциально возможных функциональных и косметических нарушений, так как лицо человека имеет исключительную важность в социальном аспекте.

Именно поэтому Смирнов Е.И., возглавлявший медицинскую службу Советской армии в годы Великой Отечественной войны, подчеркивал, что «повреждение лица ведет к уродству, сопряженному с душевными переживаниями, личными и семейными страданиями и мучениями» (Смирнов Е.И., 1943).

Во-вторых, изменения в общественно-политической и социально-экономической жизни России в конце прошлого столетия и начале XXI века сопровождаются неуклонным повышением частоты ранений и повреждений челюстно-лицевой области (Алимова З.А., Ямуркова Н.Ф., 2007; Богатов В.В. с соавт., 2007; Прохватилов Г.И. 2007). По данным Росстата несчастные случаи, отравления и травмы в структуре смертности населения занимают в настоящее время третье место.

В третьих, анализ литературы, посвященной структуре травматизма мирного времени свидетельствуют не только об увеличении абсолютного числа пострадавших, но и об утяжелении повреждений челюстно-лицевой зоны, увеличении количества сочетанных травм, главным образом за счет дорожно-транспортных происшествий (Александров Н.М., Козлов В.А., 1981; Лимберг Ал.А. с соавт. 1987; Месхиа Шота, 2008; Subhashraj К. et al., 2007).

Кроме того, совершенствование всех видов стрелкового оружия, а также широкомасштабное использование минно-взрывных устройств в локальных конфликтах и войнах последних десятилетий привели к существенному утяжелению огнестрельных ранений и изменению структуры санитарных потерь за счет увеличения удельного веса множественных и сочетанных ранений (Ерохин И.А. с соавт., 1992; Нечаев Э.А., 1992; Нечаев Э.А. с соавт. 1993; Чиж И.М., Макаров Н.И. 1993; Прохватилов Г.И., 2007; Прохватилов Г.И., Асфендиаров Д.Д. 2007; Тваури И.А. с соавт. 2007; Торчинова С.Е. с соавт. 2007).

Так, по данным Vincent М.Р. (1988) сочетанные ранения челюстно-лицевой области в 54% случаев сопровождаются ранением конечностей, в 38% - головы и шеи, в 17% - груди и в 14% - живота.

Обобщенные данные медицинской службы 40-ой армии в Афганистане свидетельствуют о возрастании удельного веса сочетанных ранений в 1,5-2 раза по сравнению с опытом советской медицины в Великой Отечественной войне. При этом частота сочетанных ранений челюстно-лицевой области составила 4,5-5%, а удельный вес раненых в лицо достиг 9% (Александров Н.М. с соавт. 1981; Александров Н.М. 1986; Косачев И.Д. с соавт. 1991; Лукьяненко А.В. 1996).

Данные литературы и многолетние наблюдения по лечению больных в клинике челюстно-лицевой хирургии Оренбургской государственной медицинской академии свидетельствуют о том, что значимое количество травм лица регистрируется у лиц трудоспособного возраста (Лебедянцев В.В. с соавт., 2007; Ямуркова Н.Ф. 2007). Это, в свою очередь, обуславливает существенный экономический ущерб в связи с временной- или стойкой утратой трудоспособности травмированных и случаями преждевременной смерти (Матчин А.А. 1983).

В сложной проблеме лечения пострадавших с ранами мягких тканей и костей лица значительное место занимает вопрос предупреждения общих и особенно местных послеоперационных инфекционных осложнений. Число последних все еще достаточно велико особенно при тяжелых огнестрельных ранениях челюстно-лицевой области с обширными повреждениями мягких тканей, языка, неба, а также при всех ранениях, проникающих в полость рта (Лукьяненко А.В. 1996).

Структурно-функциональные изменения в тканях лицевой области в результате механического повреждения эпителиальных структур, кровеносных и лимфатических сосудов и нервов, а также нередко плохая разобщенность ротовой полости от раневого канала при проведении первичной хирургической обработки проникающих ранений, обусловленная дефицитом мягких тканей, предрасполагают к развитию ранних и поздних осложнений ранений.

Одним из определяющих факторов послеоперационного заживления является микробная инвазия ран. Известно, что только операционные раны при «чистых» операциях рассматриваются как практически свободные от микрофлоры. При всех случайных ранениях в рану внедряется большое количество микроорганизмов не только в момент ранения (первичное микробное загрязнение), но и в результате вторичного инфицирования разнообразной патогенной микрофлорой ротовой полости при проникающих ранениях, а также во время перевязки с кожи, через дренажи и т.д.

Гнойно-воспалительные процессы в ране часто ведут к частичному или полному некрозу перемещенных лоскутов слизистой оболочки и кожи, образованию оростом, свищей, аррозивным кровотечениям, вторичным Рубцовым деформациям челюстно-лицевой области и шеи, требующим повторных восстановительных и реконструктивных операций.

В многочисленных исследованиях показано, что заживление ранений мягких тканей является сложным многостадийным процессом, который включает комплекс координированных последовательных биологических реакций, регулирующихся нейроэндокринной системой.

Такие факторы, как раневая инфекция, применение глюкокортикоидов, химиотерапевтических препаратов, ишемия, радиационное воздействие часто препятствует заживлению ран (Гусев Е.Ю., Юрченко JI.H. 2004; Стадников А.А. 2006; Беляев А.Н. с соавт. 2007; Fisher Е. et Frodel Jr.J.L. 2007; Артамонов О.Г. с соавт. 2009).

В связи с этим исследования должны, по нашему мнению, прежде всего быть нацелены на изучение процессов нейроэндокринной регуляции структурно-функциональной реорганизации тканей на различных этапах течения раневого процесса и формирования рубца, в оптимизации репаративных гистогенезов, а также на исследование местных и общих факторов, препятствующих заживлению раны в оптимальные сроки, оценке роли этих факторов в возникновении воспалительных осложнений в ранах и мероприятиях по снижению риска и частоты осложнений.

Однако структурно-функциональная реорганизация клеточных и тканевых структур в ране и окружающих ее тканей в аспекте нейроэндокринной регуляции этих процессов остаются до настоящего времени на изученными (Калачева JI. А. 2002, Сапронова Е. А. 2003). Вместе с тем, в научной литературе постулируется положения о том, что результаты цито - и гистологического анализа структур челюстно-лицевой области в настоящее время заняли лидирующие позиции в диагностики многих патологических процессов и их исходов.

С полным основанием можно утверждать, что изучение патогенеза и лечение ран с позиции реактивности и репаративности свойств тканей и является одной из основных проблем хирургии (Кузин М. И. с соавт. 1990). Несмотря на множество разнообразных методов и способов лечения раневых процессов, ни один из них полностью не удовлетворяет хирургов.

Повышенный интерес и неослабное внимание к этой проблеме объясняются прежде всего тем, что представления о раневом процессе расширяются и детализируются вместе с развитием клинической медицины, гистологии и клеточной биологии. При этом важнейшим положением учения о ранах и единым связующим его разделы звеном является представление об общности гисто - и огранотипических закономерностях (Хлопин Н. Г. 1946) реализующихся при репарации раневых дефектов любого генеза и локализации.

В последние годы опубликованы работы об оптимизации влиянии гипоталамических нейропептидов (в частности окситоцина, вазопрессина) на репаративные процессы тканей различного генеза (Поленов A. J1. 1993; Стадников А. А. 1999, 2001; Барков В.Н. 2004; Гречихина С.В. с соавт. 2007). В этой связи формируется новое перспективное направление, открывающее целесообразность местного применения одного из гипоталамических нанопептидов окситоцина, при лечении ряда заболеваний, в том числе воспалительного характера (Курлаев П. П. 1986, 2001, Сивожелезов К. Г. 2005). Однако роль гипоталамической нейросекреции и антибактериальной терапии в стимуляции и оптимизации репаративных гистогенезов мягких тканей челюстно-лицевой области не выявлена.

Все вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования. Цель исследования

Экспериментально-гистологическое обоснование способа лечения проникающих ран мягких тканей челюстно-лицевой области (4J10) с применением окситоцина и антибиотиков. Задачи исследования.

1. Выявить морфофункциональные изменения в мягких тканях ЧЛО и гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системе (ГГНС) при заживлении экспериментальных проникающих ран челюстно-лицевой области.

2. Изучить влияние окситоцина на течение раневого процесса в эксперименте, в том числе и в условиях инфицирования S. aureus.

3. Оценить роль и значение и возможности использования комбинации антибиотика и окситоцина при заживлении экспериментальных проникающих ран, в том числе и в условиях инфицирования S. aureus.

Научная новизна

Впервые с использованием световой и электронной микроскопии на основании экспериментально-гистологических исследований и выявленных закономерностей в течение раневого процесса обоснована целесообразность использования антибиотика в комбинации с окситоцином при лечении проникающих ранений мягких тканей челюстно-лицевой области с учетом закономерностей клеточного и тканевого гомеостаза, диапазона гисто- и органоспецифических потенций и эпителиальной, соединительной и мышечной тканей, а также особенностей микроциркуляции. Доказана высокая эффективность предложенного способа лечения проникающих экспериментальных ран челюстно-лицевой области.

Выявленные морфологические и ультраструктурные изменения в ГГНС и в мягких тканях при проникающих ранениях в челюстно-лицевой области вносят существенный вклад в изучение патогенеза течения раневого процесса и процесса заживления раны. Научно-практическая значимость исследования

Экспериментально обоснован новый способ лечения проникающих ранений мягких тканей челюстно-лицевой области с использованием окситоцина и антибиотика.

Выявленные морфологические и ультраструктурные изменения в ране и окружающих проникающую рану мягких тканей челюстно-лицевой области и ГГНС в различные периоды течения раневого процесса существенно расширили существующее представление о фазах и закономерностях течения раневого процесса и механизмах заживления раны.

Обоснованный и разработанный в эксперименте способ лечения проникающих ранений мягких тканей может быть представлен к апробации в клинике после получения разрешения Министерства здравоохранения и социального развития РФ.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Репаративные процессы в окружающих проникающую рану щеки крыс тканях связаны с изменениями нейросекреции крупноклеточных ядер гипоталамуса, что свидетельствует о генерализованном адаптивном влиянии гипоталамических нанопептидов и доказывает существенную роль парааденогипофизарного пути в регуляции клеточного и тканевого гомеостаза структур челюстно-лицевой области.

2. Применение окситоцина в моделируемых условиях (включая дополнительное инфицирование проникающих экспериментальных ран) способствует ускорению реэпителизации раневых дефектов, закрытию их каналов за счет инициации пролиферации камбиальных элементов, сокращении сроков основных стадий раневого процесса, реализации органотипических программ гистогенезов.

3. Оптимизация репаративных гистогенезов обусловлена стимулирующим воздействием окситоцина на пролиферативную активность эндотелиоцитов, фибробластов, эпителиоцитов слизистой и кожной частей щеки, миосимпластов, на функциональную деятельность макрофагов, что в конечном итоге способствует оптимальному развитию грануляционной ткани и эпителизации раневого дефекта. Это в свою очередь, ускоряет заживление раны в целом, а также восстановление специфической морфофункциональной организации мягких тканей щеки.

Реализация и внедрение результатов исследований

Результаты исследований используются в учебном процессе Оренбургской медицинской академии при чтении лекций и проведении практических занятий по гистологии, цитологии, эмбриологии и по хирургической стоматологии, а'также используются в учебном процессе в Воронежской государственной медицинской академии им. Н.Н. Бурденко,

Ижевской государственной медицинской академии, Оренбургской государственной медицинской академии.

Апробация работы

Основные положения диссертационного исследования были доложены и обсуждены на II Всероссийском симпозиуме с международным участием «Клинические и фундаментальные аспекты тканевой терапии. Теория и практика клеточных биотехнологий» (Самара, 2004); на конференции хирургов, посвящённой 100-летию со дня рождения профессора С.П. Вилесова. «Актуальные вопросы экстренной и восстановительной хирургии» (Оренбург, 2005); на VII Всероссийской научно- практической конференции врачей Приволжско - Уральского военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины» (Оренбург, 2006); на Всероссийской научной конференции. «Актуальные вопросы челюстно-лицевой хирургии и стоматологии» (С-Петербург, 2007); на Всероссийской научной конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в ВУЗе, посвященная 100-летию со дня рождения Л.И. Фалина» (Москва, 2007); на IX, X Всероссийской научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа (Оренбург, 2008, 2009); на Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008); на XIII Международной конференции челюстно-лицевых хирургов и стоматологов «Новые технологии в стоматологии» (С-Петербург, 2008).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы с описанием собственных исследований с тремя подглавами, результатов собственных исследований, обсуждение полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Кочкина, Наталья Николаевна

выводы

1. Характер репаративных процессов в слизистой, кожной частях, а также поперечнополосатой мускулатуре щеки крыс при моделировании послойных ран связан с изменениями нейросекреции крупноклеточных ядер гипоталамуса, свидетельствующими о генерализованном адаптивном влиянии гипоталамических нанопептидов, и доказывает существенную роль парааденогипофизарного пути в регуляции клеточного и тканевого гомеостаза структур челюстно-лицевой области.

2. В условиях инфицирования послойных ран щеки экспериментальных животных отмечается дисрегенераторный характер воспаления, что сопровождается рассинхронизацией (разбалансировкой) процессов синтеза и высвобождением гипоталамических нейропептидов на уровне аксовазальных комплексов непрогппофиза, лимитирующих течение репаративных гистогенезов в области травматического повреждения.

3. Наряду со светоогхтическими и ультраструктурными показателями, одним из доказательных критериев оценки эффективности репаративных гистогенезов в области послойных pan щеки экспериментальных животных могут быть показатели экспрессии про- и антиапоптоти-ческих генов клеток, различных гистологических структур щеки экспериментальных животных.

4. Применение окситоцина в экспериментальных условиях (включая инфицирование послойных ран у крыс) способствует ускорению реэпи-телизации раневых дефектов, закрытию их каналов за счет инициации пролиферации камбиальных тканевых элементов, реализации гистобла-стических и органотипических программ гистогенезов.

5. Оптимизация репаративных гистогенезов обусловлена стимулирующим воздействием окситоцина на пролиферативную активность эндотелиоцитов, фибробластов, эпителиоцитов слизистой и кожной частей щеки, миосимпластов, на функциональную деятельность макрофагов, что в конечном итоге способствует заживлению раны в целом, а также восстановлению специфической морфофункциональной организации тканей щеки.

6. В своей совокупности полученные факты позволяют обосновать рекомендации для местного применения окситоцина в клинических испытаниях при лечении сквозных, в том числе и инфицированных, ран челюстно-лицевой области.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Кочкина, Наталья Николаевна, Оренбург

1. Агеев А. К. Сравнительная клинико-морфологическая характеристика анаэробных инфекций // Арх. патол. — 1960. №1. С. 57-63.

2. Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринология. Факты и гипотезы // Проблемы эндокринологии. 1997. - №1. С. 4-9.

3. Акмаев И.Г. Взаимодействие основных регулирующих систем (нервной, эндокринной, имунной). Клиническая манифестация их нарушений // Клин. мед. 1997. - №1. - С. 3-8.

4. Акмаев И.Г. Структурные основы механизма гипоталамических регуляций эндокринной системы. 1992 - М.: Наука. — 134 с.

5. Александров Н. М. Организация травматологической стоматологической помощи на этапах медицинской эвакуации. // Травмы челюстно-лицевой области. М., 1986. - С. 334-410.

6. Александров Н. М., Аржанцев П. 3., Вихриев Б. С., Травмы челюстно-лицевой области / Под ред. Н. М. Александрова, П. 3. Аржанцева. М.: Медицина, 1986.-448 с.

7. Александров Н. М., Аржанцев П. 3., Хата З.И. Объем медицинской помощи при ранениях челюстно-лицевой области на этапах медицинской эвакуации // Воен.-мед. журн. — 1981. №7. - С. 16-19.

8. Александров Н.М., Козлов В.А. Травмы челюстно-лицевой области и их лечение // Тр. VII Всесоюзного съезда стоматологов. Ташкент, 1981. -С. 47-54.

9. П.Алхимов П. В. Проблема травматизма в Российской Федерации и г. Екатеринбурге // Медицинский консультативный журнал. — Изд-во Уральского университета, 2000. №1 - С. 218-225.

10. Аничков Н. Н., Волкова К. Г., Гаршин В. Г. Морфология заживления ран. -М.: Медгиз, 1951. 123 с.

11. Аржанцев П. 3., Иващенко Г. М., Лурье Т. М. Лечение травм лица. — М.: Медицина, 1975. — 303 с.

12. Н.Аржанцев П. 3. Специализированная медицинская помощь челюстно-лицевым раненым Воен.-мед. журн. 1980. - № 2. - С. 23-26.

13. Артамонов О.Г., Богоутдинов З.А., Намоконов Е.В. Антиоксидантная стимуляция репаративных процессов в ране // Морфологические ведомости. М., 2009. - №3. с. 163-164.

14. Балин В. Н., Александров Н. М., Клиническая оперативная челюстно-лицевая хирургия. — СПб: «Специальная литература», 1998. С. 23-24.

15. Барков В. Н. Экспериментально-морфологическое обоснование применение нейропептидов и деминерализованного костного матрикса при лечении больных с кистами челюстей: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Оренбург, 2004. — 19 с.

16. Боровский Е.В, Леонтьев B.C. Биология полости рта. М., Медицина. -1991.-42с.

17. Безруков В. М., Робустова Т. Г., Руководство по хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии. — М.: Медицина, 2000. — С. 481-482, 483-484.

18. Беляев А.Н., Рыгин А.Н., Захватов А.Н. Системная и региональная антиоксидантная терапия при осложненных формах диабетической стопы // Хирургия. 2007. -№11. - С. 46-50.

19. Беркутов A. JL, Алексеев А. В. Цит. По Н. М. Александрову. 1986.

20. Беркутов A. JI. Лечение огнестрельных ран: Лекции. — Л., Воен.-мед. академия. 1978. - 17с.

21. Берлин Л. Б. Морфология кожи после ожогов и свободной пересадки. — Л.: Медицина, 1966. 226 с.

22. Вернадский Ю. И. Травматология и восстановительная хирургия челюстно-лицевой области. — Киев: «Здоровье», 1973. С. 3-4, 158.

23. Бисенков Л.Н., Тынянкин НА. Особенности оказания хирургической помощи пострадавшим с минно-взрывными ранениями • в армии Республики Афганистан // Воен.-мед. журн. 1992. - № 1. - С. 19-22.

24. Богатов В. В., Голиков Д. И., Замятин К. К., Выборнов В. В. Особенности повреждений и хирургической обработки мягких тканей лица / Актуальные проблемы стоматологии. М., 1999. — С. 18-20.

25. Богомолов Н. С., Пхакадзе Т. Я., Большаков Л. В. Проблемы инфекции в хирургии и пути их решения // Тез. докл. VIII Всерос. съезда хирургов. Краснодар, 1995. - 448 с.

26. Богомолец А. А. Руководство по патологической физиологии. — М.: ГосМед Издат, 1929. 72 с.

27. Бухарин О.В., Валышев А.В. "Анаэробная микрофлора человека". — Екатеринбург, 2004. — 148 с.

28. Бухарин О. В., Васильев Н. В., Володина Е. П. Окситоцин и вазопрессин — регуляторы иммунного гомеостаза. — Л., 1982. — С.129-130.

29. Бухарин О. В., Володина Е. П., Васильев Н. В. Гормоны задней доли гипофиза — окситоцин и вазопрессин как медиаторы иммуногенеза. Морфогенез и репарация покровного и железистых эпителиев в онтогенезе и условиях эксперимента. Оренбург, 1981. — С. 59-64.

30. Бухарин О. В., Ливтин В. Ю. Патогенные бактерии в природных экосистемах. Екатеринбург: УрО РАН, 1997. - 270 с.

31. Быков В. Л. Гистология и эмбриология органов полости рта человека. — С. Петербург. Спецлитература. — 1996. — 129с.

32. Витебский Я. Д. Основы клапанной гастроэнтерологии. — Челябинск, 1991.-304 с.

33. Вишневский А. А., Шрайбер М. И. Военно-полевая хирургия. М.: Медицина, 1975. - 332 с.

34. Гемонов В. В., Кутвицкая С. А., Череп О. Е., Чеботаева Т. Л. Некоторые особенности реактивности полости рта у животных с разными типами нервной системы. — Стоматология, 1996. №1. - С. 12-14.

35. Гирголав С.С. К характеристике процесса заживления ран // Сб. в ознамен. 40-летия науч., врач, и педагогич. деятельн. проф. С.П.Федорова. -М. -Л., 1933. С. 46-51.

36. Гирголав С.С. Общее понятие о ране и её заживлении, в кн.: Петров Н.Н. и др. Лечение ранений. Л. — М., 1935. - С. 5-12.

37. Гирголав С.С. Огнестрельные раны // Опыт советской медицины в Великой Отечественной войне 1941-1945 гг. — М-., 1951. — Т. 1. С. 1560, 125-132, 139-141.

38. Гирголав С.С. Огнестрельная рана. — Л.: Воен. мед. акад., 1956. — 330 с.

39. Гордеева А. В., Лабас Ю. А., Звягильская Р. А. Апоптоз одноклеточных организмов: механизмы и эволюция. — Биохимия. — 2004. Т. 69. — С. 1301-1313.

40. Гостищев В. К., Омельяновекий В. К. О путях заживления ран, нанесенных углекислотным лазером // Арх. патол. — 1997. № 9. — С. 4856.

41. Гуманенко Е.К. Сочетанные травмы с позиции объективной оценки тяжести травм: Автореф. дисс. . док. мед. наук. — СПб: Воен.-мед.акад., 1992. — 50 с.

42. Гусев Е.Ю., Юрченко Л.Н. Системное воспаление как типовой патологический процесс // Цитокины и воспаление. 2004. - Т.З, №3. -С. 48-53.

43. Давыдовский И. В. Морфология раневого процесса и основные закономерности его развития // Сб. трудов, посвящ. 60-летию со дня рожд. и 35-летию науч., педагогич. и обществ, деятельн. акад. Н.Н. Аничкова. Л., 1946. - С. 6-14.

44. Давыдовский И. В. Огнестрельная рана человека. — М.: Изд-во АМН СССР, 1952.-Т.1.-468 с.

45. Давыдовский И. В. Общая патология человека. — 2-е изд. — М.: Медицина, 1969. 611 с.

46. Долгушин И. И., Бухарин О. В. Нейтрофилы и гомеостаз. -Екатеринбург: УрОРАН, 2001. 278 с.

47. Дудина A. JI. Изолированные повреждения мягких тканей лица и полости рта. / Организация помощи и лечения травмы челюстно-лицевой области. — М., 1970. —С. 118-122.

48. Ерохин И.А., Хрупкин В.И., Самохвалов И.М. Лечение сочетанных огнестрельных и минно-взрывных повреждений на этапах медицинской эвакуации // Воен.-мед.журн., 1992. № 4-5. - С. 43-45.

49. Ерохин И.А. Тяжелая сочетанная травма как форма экстремального состояния организма человека / Актуальные проблемы множественных сочетанных травм. -Санкт-Петербург, -1992. С. 8-10.

50. Зуев В. П., Григорьянц JL А., Рахметов Б. Р. Иммунокоррекция вкомплексном лечении больных с остеомиелитом, развившимся после сочетанных повреждений//Стоматология., 1991.- №5.- С. 53-54.

51. Игумнов Б.В., Прахина О.В., Левенец АА., Борисов ГТ. Частота и особенности огнестрельных ранений лица мирного времени / Реконструктивная хирургия челюгтно-лицевой области. -Красноярск, 1989.-С. 38-42.

52. Ипполитов В. П. Посттравматические деформации лица: Автореф. дисс. . док. мед. наук. М., 1986. - 46 с.

53. Коздоба А. 3. Заживление ран и внутренняя секреция. Киев: Госмедиздат, 1935. — 65 с.

54. Козлов В. А. Повреждение тканей челюстно-лицевой области. / Неотложная стационарная стоматологическая помощь. — Л.: Медицина, 1988.-С. 200-265.

55. Кольцова JI. А., Иванов В. В., Давудов И. А. и др. Множественные и сочетанные переломы костей лица и их лечение на современном этапе // VII Всесоюзный съезд стоматологов: Тезисы докладов. — Ташкент: 1115 мая-1981.-М., 1981.-С. 122-123.

56. Корепанова, О. А. Эффект введения бактериального липополисахарида на синтетическую активность таницитарной глии третьего желудочка мозга крыс. М.: РАЕН, 2007. - 146 с.

57. Корнилов Н.В. Травматология и ортопедия. Изд-во: «Гиппократ» 2001. -с. 213.

58. Косачев И.Д., Бисенков JI.H., Шаповалов В.М. Взрывные повреждения (обзор литературы) // Воен.-мед. журн. 1991. - № 8. - С. 12-18.

59. Костюченок Б. М. Современные методы активного лечения гнойных ран и гнойных хирургических заболеваний.// Огнестрельная рана человека: Тез. докл. науч. конф. — JI. — 1981. -с.32-33.

60. Кузин М.И. лечение гнойных ран и ожогов в условиях регулируемой среды // Вест. АМН СССР. 1979. - № 3. - С. 56-62.

61. Кузин М.И., Костюченок Б.М., Амиросланов Ю.А. Управляемая абактериальная среда при лечении открытых переломов с обширным повреждением мягких тканей // Сов. мед. — 1982. № 11. — С. 20-26.

62. Кузин М.И., Костюченок Б.М., Белоцкий С.М. и соавт. Клинико-имму но логическая < диагностика и иммунотерапия гнойной хирургической инфекции: Метод, рекомендации. — М., 1985. 18 с.

63. Кузин М.И., Костюченок Б.М., Светухин A.M. и соавт. Хирургическое лечение гнойных, очагов у больных сепсисом: Метод, рекомендации. — М., 1986.-26 с.

64. Кузин М.И., Шимкевич JI.JI. Патогенез раневого процесса // Раны и раневая инфекция: руководство для врачей / Под ред. М.И. Кузина, Б.М.

65. Костюченок. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1990. - С. 90124.

66. М.И. Кузина, Б.М. Костюченок. Раны и раневая инфекция: руководство для врачей. М.: Медицина, 1990. - 592 с.

67. Кулаева В.В., Быков B.JI. Морфофункциональная характеристика эпителия языка при введении пептидного морфогена гидры. — Морфология. 2007. - С. 3, 41-44 .

68. Курлаев П. П. Экспериментально-клиническое обоснование применения окситоцина в комплексной антибактериальной терапии гнойных заболеваний мягких тканей: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Пермь, 1986. - 24 с.

69. Курлаев П.П. Роль факторов бактериальной персистенции в патогенезе, прогнозировании и обосновании выбора метода лечения больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Оренбург, 2001. — 32с.

70. Курлаев П. П., Зак В. И. Применение окситоцина в комбинации с антибиотиками при лечении больных с лактационным маститом. — Хирургия. 1988. - №4. - С. 58-61.

71. Курмангалиев 3. К. Клиника и лечение сочетанных черепно-лицевых травм: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. — Киев, 1988. -20 с.

72. Левенец А.А., Шувалов С.М., Поляков А.В. Влияние динатриевой соли этилендиаминтетраацетата на заживление экспериментальных гнойных ран. Стоматология. - 1989. - № 5. — С. 14-16.

73. Лимберг Ал. А. Актуальные проблемы организации медицинской помощи пострадавшим с сочетанной черепно-мозговой травмой. / Передовые технологии на стыке веков. — М, 2000. 50 с.

74. Лимберг Ал. А Отделение черепно-лицевой травмы Александровской городской многопрофильной больницы скорой помощи Санкт-Петербурга. / Травматол. и ортопед. России. 2000. - № 2-3. — С. 124125.

75. Лимберг Ал.А., Запалова Е.В., Муштанова Т.В. Специализированное лечение повреждений лица при сочетанной и множественной травме // Сов. медицина. 1987. - №10. - С. 58-60.

76. Лукьяненко А.В. Огнестрельные ранения лица. СПб.: Специальная литература, 1996. — 182 с.

77. Лурье Т. М. Организация травматологической стоматологической помощи в мирное время./ Травмы челюстно-лицевой области. — М., 1986.-С. 387-394.

78. Матчин А.А. Гнойный медиастинит у больного с переломом нижней челюсти. Стоматология. - 1983. - №3. - С. 84-85.

79. Матчин А. А., Исайчев Б. А., Стадников А. А., Барков В. Н. Обоснование новой методики возмещения дефектов тканей челюстно-лицевой области // Матер.2-й конф. челюстно-лицевых хирургов. -СПб., 1996.-31 с.

80. Медведев Ю. А. Сочетанные травмы средней зоны лицевого черепа: Автореф. дисс. . док. мед. наук. Новокузнецк, 1992. -42 с.

81. Месхиа Шота. Характеристика больных с повреждением средней зоны лица // XIII Международная конференция челюстно-лицевых хирургов и стоматологов «Новые технологии в стоматологии». Материалы конференции. Россия. - СПб., 20-22 мая 2008. - С. 153-154.

82. Михельсон Н. М. Повреждения лица и челюстей и их лечение. — М.: Медгиз, 1956.- 46 с.

83. Нечаев Э.А. Опыт медицинского обеспечения советских войск в Афганистане и вопросы дальнейшего развития военной медицины // Воен.-мед. журнал. -1992. №4-5. - С. 5-14.

84. Нечаев Э.А., Брюсов П.Г., Ерюхин И.А. Квалифицированная и специализированная хирургическая помощь в современной системе лечебно-эвакуационного обеспечения раненых // Воен.-мед. журн. -1993.-№1.-С. 17-21.

85. Ноговицын Е. С., Сагалович М. А., Василенко М. И., Макаров В. Д. Местное лечение гнойных ран. Клинич. хирургия. 1992. - №1. — С. 3335.

86. Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия: учебник. Т.1. -М.: Медицина. 2001. - 121с.

87. Петренко В. А. Неотложная стоматологическая помощь пострадавшим с повреждениями челюстно-лицевой области. / Медицинский консультативный журнал. Екатеринбург: Изд-во Уральского ун-та., 2000. -№ 1.-С. 108-140.

88. Петров В.П., Ерюхин И.А. Кишечная непроходимость. -М.: Медицина, 1999.-285 с.

89. Пирогов Н.И. Начала общей военно-полевой хирургии // Собр. соч. — М. 1961. — т. 5. — ч. 1.

90. Пирс. Э. Гистохимия. М.: ил. - 1962. - 700 с.

91. Поленов А. Л. (ред). Нейроэндокринология. СПб.: — 4.1. - 1993. -229 с.У132

92. Прохончуков А. А., Жижина Н. А. Лазеры в стоматологии. М.: Медицина. - 1986. - 175 с.

93. Рауэр А. Э. Переломы челюстей и повреждения мягких тканей лица. -М.: Медгиз. 1947. - С. 7-8, 28-34.

94. Робустова Т. Г., Стародубцев В. С., Травматические повреждения челюстно-лицевой области // Хирургическая стоматология / Под ред. Т. Г. Робустовой. -М.: Медицина. 1966. - С. 359-361.

95. Рузин Г. П. Клиника и лечение синдрома позиционного сдавливания шеи и нижних отделов лица. Стоматология. — 1998. - № 5. - С. 41-43.

96. Руфанов И.Г. Принципы профилактики и лечения раневых осложнений при восстановительной хирургии, Труды 2-й сесс. АМН СССР.-М.- 1947.-С. 56-61.

97. Рычков Ю. Г. с соавт. Физиологическая генетика человека в проблеме заживления ран. М.: «Наука». - 1985. - 183 с.

98. Сапронова Е. А., Служаев И. Ф., Рыжавский Б. Я. Морфометрические и цитохимические особенности эпителия слизистой оболочки десны у женщин в разные фазы менструального цикла. — Стоматология. — 2004. -№3.- с. 14-16.

99. Саркисов Д. С. Очерки по структурным основам гомеостаза. — М.: Медицина. 1977. - 352 с.

100. Саркисов Д.С., Пальцын А.А., Музыкант Л.И. и др. Морфология раневого процесса // Раны и раневая инфекция: руководство для врачей / Под ред. М.И. Кузина, Б.М. Костюченок. 2-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 1990. - С. 38-89.

101. Сафаров С. Ю., Османов Р. С., Гусейнов Р. Я., Эседова К. С. Характер микрофлоры гнойных повреждений мягких тканей и костей // В кн.: Тез. докл. XII съезда хирургов Дагестана. — Махачкала: — 1990. — С. 174-176.

102. Серов В. В., Пауков B.G Воспаление. М.: Медицина. - 1995. — 640с.

103. Серов В. В., Шехтер А. Б. Соединительная ткань. М.: Медицина. — 1981.-262 с.

104. Сивожелезов Е. Г. Комплексное лечение гнойно-воспалительных заболеваний пальцев и кисти: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. — Оренбург: 2005. - 19 с.

105. Смирнов Е. М., Бурденко П. М. Шок и борьба с ним. М. Медгиз. — 1944.-7с.

106. Стадников А. А. Гипоталомические факторы регулирования процессов роста, пролиферации и цитодифференцировки эпителия аденогипофиза. — Екатеринбург: УрО РАН. — 1999. — 137 с.

107. Стадников А. А. Роль гипоталамических нейропептидов во взаимодействиях про- и эукариот. Структурно-функциональные аспекты. Екатеринбург: - 2001. - С. 171 -198.

108. Стадников А. А., Саликова С. П., Семагин А. П., Поляков В. П. Структурно-функциональные изменения миокарда у больных с хронической сердечной недостаточностью в условиях кардиологии // Материалы научной конференции. СПб.: - 2001. -10 с.

109. Стадников А. А., Чернова О. JL, Ковбык JI. В. И др. Роль гипотоламических нонапептидов во взаимодействии, про- и эукариотических клеток // Вест. РАМН. 2000. - №2. - С. 49-52.

110. Стадников Б. А. Клинико-морфологическое обоснование целесообразности применения окситоцина в комплексной терапии острого панкреатита // Тезисы докладов V Всерос. Конференции «Нейроэндокринология-2000». — СПб.: — 2000. 121 с.

111. Струков А. И., Кауфман О. Я., Серов В.В., Смагин В.В. Гранул ематозное воспаление и гранулематозные болезни. — М.: Медицина. 1989. - 234 с.

112. Струков А.И., Пауков B.C., Кауфман О .Я. Воспаление. Общая патология. М.: - 1990. - т.2. - С. 64-67.

113. Струков А. И., Серов В. В. Патологическая анатомия. М.: Медицина. - 1995. - 688 с.

114. Стручков В. И., Григорян А. В., Гостищев В. К. Гнойная рана. М.: Медицина. - 1975. - 311 с.

115. Сукачёв В. А. Неогнестрельные повреждения: Руководство по хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии. — М.: Медицина. 2000. - С. 480, 556.

116. Титова А. Т. Пути улучшения организации специализированной помощи при повреждениях лица у пострадавших с сочетанной и множественной травмой // Лечение повреждений лица у пострадавших с множественной и сочетанной травмой. — Л.: — 1986. — С. 4-7.

117. Тонынин А. А., Сапрунова В. Б., Солодовникова И. М., Бакеева Л, Е., Ягужинский Л. С. Биохимия. 2003. - т.68. - С. 875-881.

118. Третьяков А. А. Клинико-экспериментальное обоснование комплексного лечения холонгита при механической желтухе: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. — Оренбург: 1998.

119. Трунин Д. А. Травма средней зоны лица. Москва: ОАО Стоматология. - СамГМУ: - 2001. - с. 18

120. Ушаков Р. В., Царев В. Н. Чувствительность возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области и шеи к антибактериальным препаратам. Стоматология. - 1993. - №1. - С. 1316.

121. Ханин А. Г., Беляева О. А. Воспаление и регенерация в тканях гнойных ран в условиях первичного шва. // Сов. медиц. — 1981. №11. — С. 105-108.

122. Хлопин Н. Н., Общебиологические и экспериментальные основы гистологии. М. Медгиз. - 1946. - 144с.

123. Хрущов Н. Г. Гистогенез соединительной ткани. М.: Наука. - 1976. - 117 с.

124. Черных А. М. Воспаление. М.: Медицина. - 1979. - 448 с.

125. Чиж И.М., Макаров Н.И. опыт медицинского обеспечения локальных войн и проблемы эвакуации раненых и больных по воздуху // Воен.-мед. журн. 1993. -№1. - С. 17-22.

126. Шапиро К. И., Захаров В. П. Специализированная помощь пострадавшим с повреждениями лица при сочетанной травме // Сб. науч. тр.-СПб.: 1991.-С.181-183.

127. Шапошников Ю. Г. и соавт. Диагностика и лечение ранений лица. — М.: Медицина. 1984. - С. 343-344.

128. Шапошников Ю.Г. Синдром длительного сдавливания. / Военно-полевая хирургия. ИМ.: Медицина. - 1982. - С. 103-112.

129. Шапошников Ю. Г. Травматология и ортопедия. Руководство для врачей. — т.1. Синдром длительного сдавления- Тольятти: -1997 — 454с.

130. Шаргородский А. Г. Травмы мягких тканей и костей лица. / М.: Издательский дом «ГЭОТАР-МЕД». 2004. - С. 3-7.

131. Шехтер А.Б. Изучение соединительной ткани в норме и патологии (заживление ран, склеротические и регенераторные процессы); морфологическое обоснование новых методов лечения. М.: Медицина. - 1990. - 56 с.

132. Шимкевич JI.JI., Амирасланов Ю.А. Система гемостаза при раневой инфекции. // Раны и раневая инфекция: руководство для врачей / Под ред. М.И. Кузина, Б.М. Костюченок. 2-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 1990.-С. 125-148.

133. Фаизов Т. Т., Афанасьев В. В., Ибатуллин И. А., Валеев Е. К. О патогенезе сочетанной челюстно-мозговой травмы. Стоматология. -1998. - №2. - С. 37-39.

134. Фалин Л.И. Гистология и эмбриология полости рта и зубов. М: ГосМедЛит. - 1963. - 23с.

135. Яковлев М. Ю, Роль кишечной микрофлоры и недостаточности барьерной функции печени в развитии эндотоксемии и воспаления. — Казан, мед. журн. 1999. - №5. - С. 353-358.

136. Abubaker АО, Rollert МК. Postoperative antibiotic prophylaxis in mandibular fractures: A preliminary randomized, double-blind, and placebo-controlled clinical study // J Oral Maxillofac Surg. 2001. - Dec; 59 (12) -P. 1415-1419.

137. Andrews W., Babior R. P. Changing patterns in surgical infection // Ann. Surg. 1987.-Vol. 178,N3.-P. 436-445.

138. Bodner L., Dayan D. Epithelium and connective tissue regeneration during palatal wound healing in desalivated rats--a comparative study. — Comp Biochem Physiol A Physiol. 1995. - Jul; 111(3). - P. 415-419.

139. Bryant WM. Wound healing. Clin Symp 1977; 29(3): 2.

140. Diegelmann RF, Cohen IK, Kaplan AM. The role of macrophages in wound repair: a review. Plast Reconstr Surg 1981; 68: p. 107.

141. Dubous H. et al. Facial injuries//Med. Corps Intern. 1988. -Vol.4, N1. - P. 26-30.

142. Goga D. et al. Traumatismes maxillo-laciaux par armes a leu. Etude retrospective a propos de 60 cas // Rev. StomatoL Chir. inaxillofacr 1988. -№ 4 -P. 242-247.

143. Goslen JB. Wound healing for the dermatologie surgeon. J Dermatol Surg Oncol 1988; 14(a): p.959.

144. Guicciardi. M. E., Deussing. J., Miyoshi. H., and Gores, G. J. 2000. J. Clin. Inv.-P. 106, 1127-1136.

145. Hill. M. W., Mackenzie I. C. The influence of subepithelial connective tissues onepithelial proliferation in the adaltmouse. Celland Tissue Reserch. Springen-Verlag. - 1989. - Vol. 255. - P. 179-182.

146. Igawa H. H., Sugihara Т., Yoshida Т., Kawashima K., Ohura T. Penetration of flomoxef into human maxillary and mandibular bones. —Scand J Plast Reconstr Surg Hand Surg. 1995. - Sep; 29(3). - P . 259-262.

147. Kanzler MH, Gosulowsky DC, Swanson NA. Basic mechanisms in the healing cutaneous wound. J Dermatol Surg Oncol 1986:12:1156.

148. Keneick T.C. Gunshot wounds of the head and neck //J. Laryngol. Otol. -1976. Vol. 90, № 4 -P. 335-344.

149. Lopes JA. Maxillofacial injuries sustained in war: experience gained during the Malvines war // Dental Coips. Intern. 1990. - Vol. 2, № - 1. -P.90.

150. Milles E. Wound Repair. Philadelphia; London; Toronto: W. B. Saunders. - 1966. - 699 p.

151. Millonig G.A. Advantages of a phosphate buffer for osmiumtetroxide solutions in fixation // J. Appl. Physics.-1961.-V.32.-P.1637-1643.

152. Nakamura T. et al. Facial fractures. Analysis of five years of experience // Arch. Otjlaryngol. 1973. - Vol. 97, № 3. - P. 288-290.

153. Nakolo. K. And Vousden К. H. 2001. - Mol Cell. - Vol. 7. - P. 683694.

154. Nguen Huy Phan. Klinik und Therapie von Kiefer-Gesichts-schadigungen durch Kiigelbomben // Ztschr. Milit. armed. 1977. - Jg. 18, H. 5. - S. 238240.

155. Neel S. Care of the wounded // Medical support of the U.S. Army in Vietnam 1965-1970. -Washington, 1973. P.65.

156. Nemeth T. Nasomazilami poraneni // Voj. Zdrav. Iisty. 1975 -Sv. 45. № 5. - S. 180-182.

157. Osborne D.B. Intermediate and reconstructive care of maxillo-facial missile wound /7 J. Oral. Surg. -1973.-Vol. 31, № 6 . P . 437-439.

158. Paatsama I., Suuronen R., Lindguist C.H. Establishing a clinical diagnosis and surgical treatment plan // Maxillofacial Surgery. Vol. 1. — N.Y.: Churchill Livingstone. - 1999. - P. 21-44.

159. Peacock EE, Cohen IK. Wound healing. In: McCarthy JG (eds). Plastic surgery, vol 1. Philadelphia: WB Saunders, 1990.

160. Pierce G. Macrophages: important physiologic and pathologic sources of polypeptide growth factors. Am J Respir Cell Mol Biol 1990;2:233.

161. Pinto J. R., Bosco A. F., Okamoto Т., Guerra J. В., Piza I. G. Effects of nicotine on the healing of extraction sockets in rats. — A histological study. Braz Dent J. 2002. - 13 (1) - P. 3-9.

162. Qamberg G.H. Facial injures // Med. Corps Intern. 1989. - Vol. 4, № 1. -P. 26-30.

163. Saski GH, Krizek TJ. Biology of tissue injury and repair. In: Giorgiade NG, et al (eds). Essentials of plastic maxillofacial and reconstructive surgery. Baltimore: Williams & Wilkins, 1967. p. 28-39.

164. SATO. M., SHAMOTO E., MIURA M., and. NAKAGAKI. K. The role of hyaluronan in tumour neovascularization its blood-vessel invasion Balazs and Darzynkiewicz. 1973. — 156 p.

165. Scott R. Projectile trauma. An enquiry into bullet wounds. Trauma unit. Chemical Defence Establishment Porton Down: England. 1975. - P. 53.

166. Selye H. The story of the adaptation syndrome. — Montreal.- 1952.- 225 p.

167. Selinfreund R.H.Insulin-like growth factor-I induces a rapid increase in calcium currents and spontaneous membrane activity in clonal pituitary cells. American Society for Pharmacology and Experimental Therapeutics. — 2001.-Issue 6.-P. 1215-1220.

168. Schyltz R.C. Facial Injuries. 3 rd ed. England. 1975. - P. 53

169. Skulachev V. P. IUBMB Life. 2000. - Vol. 49. - P. 365-373.

170. Slots, J., Sugar, C., and Kamma, J J. Cytomegalovirus periodontal presence is associated with subgingival Dialister pneumosintes and alveolar bone loss. Oral Microbiol. Immunol. - 2002. - Vol. 17. - P. 369-374.

171. Stouner H.B. et al. Measuring the severity of injury // Brit.Med. -1977. -Vol. 2, J 6097. P. 1247-1249.

172. Subhashraj K., Nandakumar N., Ravindran C. Review of maxillofacial injuries in Chennai, India: A study of 2748 cases // Brit. J. Cran. Maxillofac. surg. 2007. - Vol. 45, №8. - p. 637-639.

173. Subileau С et al. Les fracturies de la face, devaluation du dammage corporel en traumatologic faciale//J.Fr.Otorhinolaryngpl., 1977. T.26.№ 4. -P.297-306.

174. Thomas D. W., Hill С. M. Etiology and changing patterns of maxillofacial trauma // Maxillofacial Surgery. Vol. 1. - N.Y.: Churchill Livingstone. -1999.-P. 3-10.

175. Tinder Z.E. et al. Maxillofacial injures sustained in Vietnam conflict // Milit. Med. 1969. - Vol. 134, N 9. - P. 668-672.

176. TrykowskiJ. et al. Uwagi о loczeniu rannych z obran-zeniam-mami szezek i twarzy w ezasie konfliktu w Wietnamie // Czas.Stomatol. 1976. - T. 29, J 12.-S. 1105-1110.

177. Van Furth R., Cohn Z.A. Hirsch J.G. The mononuclear phago-cytic system; a new classification of macrophages, mono-cytes and their precursor cells. Bull. Wed. Hlh. Org. 46+ 1972, p. 845-853.

178. Van Winkle W. Цитировано: Fisher E. et Frodel J.L Jr. Заживление раны //Пластическая и реконструктивная хирургия лица / Под ред. А.Д. Пейпла; Пер. с англ. — М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2007. — С. 28

179. Vicker A., Chambers R., Zwejfach В., Dahelly D. Treatment abortif de Г infection des plaies // Press. Med. 1986. - Vol. 47. - P. 391-392.

180. Vincent M.P. Initial management of facial trauma in wartime. // Rev. Int. Serv. sante Forces Armees. 1988. - T. 61, N 7-9. - P. 193-196.

181. Vousden. К. H., and Vande Woude, G. F. 2000. - Nature Cell. Biol. - 2. E178-E180.

182. Webster G., Pearse A. Mediators of inflamation. N. Y.: L. - 1967. -204p.

183. Yugoshi L. I., Sala M. A., Brentegani L. G., Lamano Carvalho T. L. Histometric study of socket healing after tooth extraction in rats treated with diclofenac. Braz Dent J - 2002. - 13 (2). - P. 92-96.39.1. Сии П^лОУ^ОЮ