Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного и животного происхождения и методы их снижения
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного и животного происхождения и методы их снижения"

ДК 504.064 + 504.75.05

□03056047 На правах рукописи

ФРОЛОВА НАДЕЖДА ВЛАДИМИРОВНА

ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ И МЕТОДЫ ИХ СНИЖЕНИЯ

Специальность 03.00.16 - Экология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Брянск - 2007

003056047

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Орловский государственный университет»

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Ладнова Галина Георгиевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Золотникова Галина Петровна

кандидат биологических наук, доцент Баширова Нина Федоровна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Воронежская государственная технологическая академия»

Защита диссертации состоится «25» апреля 2007 г. в 14 часов на заседании диссертационного совет К 212 020 01 в Брянском государственном университете им. академика И Г Петровского по адресу: 241036, г. Брянск, ул. Бежицкая, 14 Телефон (4832) 66-65-38 Факс (4832) 66-63-53 E-mail. bryanskgii@mail ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Брянского государственного университета им академика И Г. Петровского

Автореферат разослан «24» марта 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

/

J

Э М. Величкин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Одной из важных проблем экологии является охрана агроэкосистем от воздействия научно-технического прогресса, интенсификации и химизации сельского хозяйства, химического загрязнения окружающей среды, которое вызывает накопление в продуктах растениеводства и животноводства различных токсических веществ, особенно нитратов и нитритов Наряду с поступлением азота в виде азотных удобрений, примерно такое же количество азота поступает в биосферу в виде окислов от сжигания топлива и с выбросами промышленных предприятий. Вклад нитросоединений антропогенного и техногенного происхождения в общем круговороте азота устойчиво возрастает, что обусловливает увеличение нитрат-нитритной нагрузки на человека (Кряжимский ВФ, Большаков ВН, Корюкин ВИ, 2001, Суржиков ВД, Олещенко AM, Суржиков Д В ,. Ксенофонтова И Ю, Лапшин М С , 2003)

Известно, что поступление нитратов в больших количествах может вызвать различные нарушения функционального состояния организма - метгемоглобинемию, тканевую гипоксию, установлена также их способность к струмигенному и иммунодепрессивному действию (Ажипа Я И , Реутов В П, Каюшин Л П, 1990)

Экспериментальные и эпидемиологические исследования подтверждают роль нитратов как предшественников N-нитрозосоединений - группы веществ с выраженным канцерогенным и эмбриотоксическим действием (Жукова Г.Ф., 1990, Иванова A.C., Пахрова О А , Назаров С.Б , 2004)

Длительная высокая нитрат-нитритная нагрузка на организм человека может являться фактором повышения уровня эндогенного нитрозирования (Гоженко А И , Доренский ВС и др , 1996, Ильницкий А П, 1989) В связи с этим, особое внимание должно быть уделено снижению эндогенного синтеза нитрозосоединений из предшественников, входящих в состав пищевого рациона (нитратов, нитритов, аминов и других) и воздействию алиментарными факторами

Результаты выборочного контроля показывают, что ежегодно от 10 до 20 % и более проб овощных, плодовых и бахчевых пищевых продуктов превышает установленные ПДК (Ильницкий АП, 1991, Красовский ГН, Васюкович ЛЯ, Лутсоя X И и др , 1982, Марин С.В , Сидоров П И, 1999)

Поэтому разработка мероприятий, направленных на ограничение поступления нитратов в организм человека путем регламентирования и контроля содержания нитратов в пищевых продуктах является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилась экологическая оценка способов снижения содержания нитратов и нитритов и усовершенствование методов их анализа в пищевых продуктах растительного и животного происхождения

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

• изучить особенности метаболизма нитратов и нитритов в растительных и животных организмах;

• изучить современные методы анализа нитратов и нитритов в пищевых продуктах;

• усовершенствовать методы, позволяющие проводить анализы нитратов и нитритов в пищевых продуктах как растительного так и животного происхождения,

• изучить уровни содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах, продовольственном сырье, воде и дать экологическую оценку суточного поступления этих соединений в организм различных групп населения,

• разработать способы, позволяющие снижать содержание нитратов в растительных продуктах, уровень которых превышает установленные регламенты

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Впервые на региональном уровне усовершенствованы ионометрический и спектрофотометрический методы количественного анализа нитратов и нитритов в пищевых продуктах животного и растительного происхождения

Установлены уровни содержания нитратов и нитритов в основных видах пищевых продуктов и продовольственном сырье Учитывая полученные результаты, а также данные среднедушевого фактического потребления продуктов питания, дана эколого-гигиеническая оценка суточного поступления этих соединений с рационом питания четырех различных групп населения г. Орла

Определены уровни снижения содержания нитратов в овощах, подвергнутых кулинарной и промышленной обработке с использованием воды В связи с тем, что в

этих процессах происходит потеря многих биологически активных веществ, дана экологическая оценка физическим способам снижения содержания нитратов, основанным на экстрагировании их водой.

Предложен подход к утилизации растительных продуктов, уровень нитратов в которых существенно превышает предельно допустимые концентрации, основанный на биоконверсии таких продуктов в микробный белок с использованием микроорганизмов Candida tropicalis, Endomycopsis filuligera

Практическая значимость работы На основании проведенных исследований усовершенствованы методы, предназначенные для осуществления контроля качества пищевого сырья и продуктов питания Управлением Федеральной службы по надзору в сфере природопользования «Росприроднадзора по Орловской области» и ФГУЗ «Центра гигиены и эпидемиологии Орловской области».

На основании установленной топографии концентрации нитратов по объему овощей предложены приемы их первичной обработки, позволяющие снизить поступление нитратов с такими продуктами до 50 %

Установленная экспериментально-аналитическим путем функциональная зависимость остаточной концентрации нитратов в моркови дает возможность не только прогнозировать уровни снижения нитратов в заданных технологических условиях отваривания, но и определить комплекс технологических условий процесса, обеспечивающего заданный уровень снижения нитратов

Результаты исследований внедрены в учебный процесс ГОУ ВПО «Орловский государственный университет», ФГОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет»

Апробация материалов исследования.

Результаты исследования доложены и обсуждены на конференциях Международной научно-практической конференции «Приоритет России XXI века' от биосферы и техносферы к ноосфере» (г. Пенза, 21-22 января 2003 г), Региональной научно-практической конференции «Химико-экологические проблемы Центрального региона России» (г Орел, 2003), VI Международной научно-практической конференции «Эколого-гигиенические проблемы Каспийского моря» (г Астрахань, 15-16 октября 2003 г), Научно-практической конференции «Факторы риска и здоровье населения в регионах России» (г. Липецк, 2004), Республиканской научно-практической конференции «Экологические и социально-

гигиенические аспекты среды обитания человека» (г. Рязань, 2005), УШ Международной научно-практической конференции «Экология и жизнь» (г Пенза, 24-25 ноября 2005), на заседании кафедры экологии и основ природопользования Брянского государственного университета им. академика И Г. Петровского (г Брянск, 19 марта 2007)

Публикации.

По результатам исследований опубликовано 11 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, характеристики объектов, материалов, объемов и методов исследований, глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, содержащего 192 источника (из них 163 отечественных и 29 зарубежных) Основной текст диссертации изложен на 151 страницах машинописного текста, иллюстрирован 24 таблицами, 18 рисунками

Основные положения, выносимые на защиту:

• нитраты и особенности их метаболизма в живых организмах;

• ионометрический и спектрофотометрический методы количественного анализа нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного и животного происхождения,

• уровни содержания нитратов и нитритов в основных видах пищевых продуктах и продовольственном сырье,

• эколого-гигиеническая оценка суточного поступления нитратов и нитритов в организм четырех групп населения,

• методы, позволяющие снижать содержание нитратов в продуктах растительного происхождения, уровень которых превышает установленные регламенты.

ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ, ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Дня решения поставленных задач применен комплекс современных экологических, химических, микробиологических, биохимических и статистических методов, позволивший реализовать запланированный объем исследований (табл 1)

Изучено содержание нитратов и нитритов в более 3000 образцах пищевых продуктов, 60 наименований продуктов поступивших из торговой сети г Орла и 40 образцов питьевой воды.

Исследования условий водопользования и анализы воды выполнены в соответствии с требованиями ГОСТа 2874-82 «Вода питьевая», СанПиН 2.1 4 559-96 «Питьевая вода».

Особенности распределения нитратов в объеме растения исследованы в 12 наиболее распространенных овощах

Дана оценка содержания нитратов и нитритов в овоще-мясных консервах, молочных продуктах, в колбасных изделиях, мясокопченостях.

Анализ нитратов и нитритов в пищевых продуктах проводили усовершенствованными методами, разработанными на основе спектрофотометрического и ионометрического методов, согласно «Методическим указаниям по определению нитратов и нитритов в продукции растениеводства» (М, 1989), «Методическим указаниям по определению нитратов и нитритов в молоке и молочных продуктах» (М, 1991)

Исследованы методы, основанные на экстрагировании нитратов водой в пищевых продуктах Изучены особенности перехода нитратов при отваривании моркови и предложена расчетная формула, позволяющая определить комплекс технологических условий процесса - соотношение масс воды и моркови, начальной концентрации в них, времени отваривания

Таблица 1 Основные направления, объекты, методы и объемы исследований

Направление исследований Объекты, методы исследований Объем исследований

Усовершенствование методов определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах - ионометрический метод (капуста) фотометрический метод (продукты растительного происхождения) - зерно и зернопродукты -молоко и молочные продукты - вода 30 образцов 850 образцов 230 образцов 400 образцов 49 образцов

Экологическая характеристика методов снижения нитратов и нитритов - распределение нитратов в объеме растения (12 видов) -экстрагирование водой - микробиологический метод утилизации растительных продуктов 1186 образцов 230 образцов 25 образцов

Изучение суточного поступления в организм человека нитратов с пищевыми продуктами и водой взрослые (студенты, люди трудоспособного возраста, пенсионеры) - дети первого года жизни, находящиеся на естественном и искусственном вскармливании 140/100/60 чел 60/100 детей

Суточное поступление нитратов с рационом питания в организм взрослых (студентов, людей трудоспособного возраста, пенсионеров) и детей первого года жизни, находящихся на естественном и искусственном вскармливании проводили расчетным путем на основе данных анкетного опроса

Статистическая обработка материалов исследования проведена на ПЭВМ типа «Pentium - IV» с использованием приложения Excel 2003 Данные экспериментальных исследований обрабатывались и анализировались по выборочным средним значениям х , t-критерию Стьюдента, Для оценки достоверности использовался уровень значимости различий р<0,05, т.е. достоверность различий 95 %.

Вклад автора в организацию и проведение исследований - 80 %, в обработку и анализ полученных результатов - 100 %

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Усовершенствование методов определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах Учитывая возможности экологических, гигиенических и других служб, считали целесообразным для разработки методов определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах использовать доступные, достаточно чувствительные и точные фотометрический и ионометрический методы

Фотометрический метод определения нитратов и нитритов не позволял во многих случаях достаточно надежно проводить анализ этих соединений во многих видах пищевых продуктов из-за образования устойчивых эмульсий на стадии очистки экстракта, сильного влияния матрицы продукта на всех этапах количественного определения и других причин

Метод был унифицирован Суть унификации состояла в отработке оптимальных условий выделения, очистки экстрактов, стандартизации условий восстановления нитратов в нитриты и проведения цветной реакции.

Для устранения мешающих примесей и получения прозрачных экстрактов испытаны следующие реагенты, в том числе и разные их сочетания ацетат цинка, алюмокалиевые квасцы, сульфат цинка, калий железистосинеродистый, тетраборат натрия, хлорид ртути, хлорид свинца и ряд других Как показали проведенные исследования, наиболее эффективной, обеспечивающей высокую степень извлечения

добавленных нитратов и нитрите® является система осадителей, включающая калий железистосинеродистый, тетраборат натрия, сульфат цинка или ацетат цинка.

Были определены оптимальные условия, обеспечивающий стандартизацию ^рестановительных свойств кадмия. Показано, что последовательная обработка пористого кадмия 2 % раствором сульфата меди (II), 0,001 % раствором нитрата калия, буферным раствором (рН 9,6-9,7) и 3.4 % раствором "филона Б обеспечивала высокий уровень восстановления кадмием (99.014.3 %, п^24).

При -этом установлено, ЧТО восстановительная способность кадмия при определении нитратов и нитритов в молоке и молочных продуктах :!аиисит от рН исследуемых продуктов, который варьирует для этого вида продуктов от 43 До 8.4 Для стабилизации условий восстановления нитратов, которое осуществляется при строго определенном р! I (9.6-9.7). предложено рН экстрактов доводить до 8,0-9,0 добавлением от 2 до 5 мл (и зависимости от вида молочных продуктов) 30 % раствора гид роке и да натрия.

Анализ консервированных продуктов проводился с использованием пористого кадмия фотометрическим методом и ароматических аминов. Как показали исследования, что наиболее приемлемыми осадителями являются: калий железистосинеродистый, ацетат цинка, сульфат цинка и Щдроксвд натрия.

¡эпюре из

моркови и яблок

□ Пюре из тыквы и

яблок

□ Пюре из кабачков и яблок

Рисунок 1 Результаты определения нитратов п плодоовощных консервах иопометрическим и фотометрическим методами

ме-юп, Си метод, Сф

Рисунок 2 Результаты определения нитратов в плодовой годных коп серпах и он ометри ческим и фотометрическим методами

Для определения нитратов в натуральных плодоовощных, плодовоягодных, овощных кои серпах. технология изготовлений которых исключает добавление соли, мы рекомендуем использовать ионометрический метод (рис. 1-2). По н случаях превышения уровней предельно ^допустимых концентраций - необходим использовать фотометрический метод.

Проведенный Исследования выявили, 4Íto наиболее приемлемым методом определения нитратов и нитритов п зерне и зернопродуктах является фотометрический. Для осаждения белкйвй-углеродных комплексов используют калий железистосинеродистый и ацетат цинка, для коррекции фильтрата - буфер. рН которого равен 9.6-9.7.

Изучена влияние мафицы молока и молочное продуктов на достоверность определения указанных соединений Для этого количество нитратов и нитритов в пробе рассчитывали с учетом калибровочных коэффициентов, полученных при определении величины поглощения стандартных растворов нитратов и нитритов приготовленных на воде и экстракте соответствующих молочных продуктов (Жукова Г.Ф . 1991),

ДлЯ всех исследованных видов МОЛОЧНЫХ продуктов найден коэффициент (К), учитывающий влияние матрицы каждого продукта на определений нитратов и нитритов (табл.2).

Таблица 2 Значение коэффициента влияния матрицы продукта на определение нитратов и нитритов

Продукт К К, к2

1. Молоко пастер и стерил 1 09 1 06 1 43

2 Сливки 1 05 1.07 1.44

3. Кефир 0.95 1 05 1 42

4. Кефир фруктовый 1 09 1.18 1 59

5 Кефир с витамином С 1 13 1.14 1.53

6 Простокваша 1 0 1 0 1.0

7 Ряженка 0 87 0 99 1.33

8 Сметана 1 0 1 09 1 47

9 Творог 1 0 0 93 1 26

10 Творожные изделия 0 83 0 93 1 26

11 Пасты молочные 1 0 1 0 1.0

12 Сыры 0 96 1 05 1 42

13 Мороженое 1 0 0 99 1.33

14 Сгущенное молоко 0 99 1 05 1 34

15 Сухие молочные продукты 1 08 1.05 1 42

К - коэффициент, учитывающий влияние матрицы молочного продукта на определение нитритов

К] - коэффициент, учитывающий влияние матрицы молочного продукта на определение нитратов

К2 - 1,35 х Кь где 1,35 - переходной коэффициент от нитритов к нитратам

Рассчитано стандартное отклонение (8) установленных коэффициентов (К) и достоверность разницы 1 и среднего значения К для каждого продукта Не установлено достоверной разницы между К и 1 при определении нитратов в следующих продуктах' простокваше, мороженном, ряженке, пасте ацидофильной, а также при определении нитритов в твороге, простокваше, мороженном, пасте ацидофильной, сметане, сыре. Установлен коэффициент при расчете нитратов и нитритов в остальных видах молочных продуктов

Однако, ионометрический метод определения нитратов, заключающийся в прямом определении нитрат-ионов в экстракте раствора с помощью ионселективных электродов, оказался непригодным для анализа овощных культур семейства

крестоцветных из-за наличия в этих продуктах мешающих примесей неустановленной природы.

Для устранения влияния мешающих примесей были использованы различные подходы, основанные на удалении примесей путем сорбции на различных сорбентах неполярной природы, устранении влияния путем экстрагирования органическими растворителями или обработкой катионообменниками; использована новая модификация нитрат-селективного электрода, снабженного дополнительной защитной пленкой. Однако ни один из подходов не обеспечивал достоверности результатов

Наиболее перспективным подходом устранения мешающих примесей, как было установлено, явился способ, который сводился к окислению этих примесей перманганатом калия в кислой среде при определенной ионной силе раствора. Избыток перманганата калия, влияющего на потенциал системы, удалялся пероксидом водорода. Сравнение результатов определения нитратов в основной культуре семейства крестоцветных - капусте двумя методами - новым вариантом ионометрического и фотометрическим не выявило статистических различий.

2. Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного и животного происхождения

Проведено изучение содержания нитратов и нитритов в более чем 3 тыс образцах пищевых продуктов широкого ассортимента растительного и животного происхождения.

Исследования показали, что высокие концентрации нитратов содержались в следующих овощах: в свекле, репе, редисе, редьке, капусте, укропе, салате-латук (1015 - 7700 мг/кг) Кроме указанных овощей высокие уровни содержания нитратов обнаружены в шпинате, салате, петрушке, значение которых не выше 2 г.

Концентрация нитратов в ягодах была ниже 5 мг/кг, во фруктах не превышала предельно допустимую концентрацию - 60 мг/кг, а в зерновых - 20 мг/кг

Экологическая оценка содержания нитратов в пищевых продуктах показала, что 20 % проанализированных образцов содержат нитраты в количествах, превышающих установленные ПДК нитратов для соответствующих видов продуктов

Результаты количественного анализа нитритов выявили, что самые высокие их уровни содержат колбасные изделия, мяеокопчспности и мясные консервы (до 32.2 мг/кг). остальные виды продуктов содержат незначительные количества нитритов (в основном от 15 до 2 мг/кг), а но фруктах и ягодах нитриты не обнаружены.

На основании результатов анализа нитратов и нитритов в продуктах питания и воде с учетом средне-арифметических (X). медианных (М). 90 % уровней содержания нитратов (Рдо), а также с учетом суточного потребления пищевых продуктов рассчитано поступление нитратов и нитритов с рационом питания четырех групп населения, проживающих в г. Орле: I) студентов (рис. 3), 2) людей трудоспособного возраста (рис. 4). 3) пенсионеров (рис. 5). 4) детей первого года жизни (рис. 6-9). Анализ показал, что от 42 до 92 % поступления нитратов с рационом питания взрослых приходится на продукты растительного происхождения. Основными поставщиками нитритов являются мясные продукты, на долю которых приходится от 55 до 60 % от суммарного их поступления. Суточное поступление нитратов и нитритов с рационом питания и водой составляет для студентов - 2 мг/сутки, людей трудоспособного возраста - !,9 м г/сутки, пенсионеров - 1,6 мг/сутки, что подтверждается и другими исследователями (Бареельянц Г .Б. и другие, 1988:, Дерягина В.П, 1994).

X I190 С макс Потреб, в

сутки

Рисунок 3 Расчетное суточное поступление нитратов и нитритов в организм

студентов, где: Х- среднеарифметическое значение Р90 90 процентильный уровень

Смаю - величина максимального значения концентрации нитратов

Рисунок 4 Расчетное суточное поступление нитратов и нитритов в организм людей трудоспособного возраста, где: Х- среднеарифметическое зиаченке Р.ю 90 процен гильный уровень

С1111кс величину максимально^ значения концентрации нитратов

X Р 80 С макс Y

Щгеунок 5 Расчетное суточное поступление нитратов и нитритов в организм пенсионеров, где:

Х- среднеарифметическое значение

Ptio 90 ироцснтильный уровень

С1ИЖ величина максимального значения концентрации нитратов

Суточное поступление цитратов в орган и 374 взрослых, в основном, не превышает допустимою суточную дозу ЩСД) - 5 мг'кг массы те;т в пересчете па нитрат-ион и только при потреблении пищевых продуктов с максимальными уровнями в них нитратов может в 1,2- 1.8 раза превысить ДСД.

I поступление нитратов в организм детей может изменяться в широком интервале и отличаться и десятки раз. Самые низкие нагрузки нитратами испытывают дети до трех месяцев, находящиеся на естественном вскармливании (0.52 ■ 2.39 мг/кг массы тела ребенка). С четырехмесячного возраста поступление нитратов в организм лой группы детей существенно возрастает за счет введения в рацион питания оиощпых пюре. При

расчете максимальных уровней концентрации нитратов на 90 процентильных уровнях фактическое содержание в пище и воде может превышать установленные нормы (рис 6-7)

Дети, которые находятся на искусственном вскармливании при потреблении воды, содержащей нитраты на уровне ПДК уже с первых месяцев и в течении первого года жизни могут получать с рационом нитраты в количествах в 1,2-2,6 раза превышающих

Во втором полугодии жизни ребенка поступление нитратов с пищевым рационом практически не зависит от вида вскармливания и составляет 3,33-5,77 мг/кг массы тела ребенка

При искусственном вскармливании в течении первых трех месяцев нитраты, в основном, поступают в организм с водой (75,7-94,6 %) и к концу первого года жизни ребенка составляют 72,0-91,8 % от общего поступления (рис 8-9)

Вклад молочных продуктов в общее поступление нитратов в организм детей первого года жизни незначительный и составляет 2,1-5,5%

Проведенные исследования выявили, что необходимым условием снижения поступления высоких доз нитратов, прежде всего в организм детей, является обеспечение их питьевой водой, концентрация нитратов в которой не превышает 10 мг/л, что согласуется с данными литературы (Жукова Г Ф,. Филина С А и другие, 1991, Дерягина В.П, Жукова Г.Ф и другие, 1993) Помимо этого, необходим строгий контроль содержания нитратов в растительных продуктах, идущих на изготовление детских консервов.

Рисунок 6 Суточное поступление нитратов при естественном вскармливании

дед

□ Пищевые продукты ВВода

1-3 4-6 7-12 месяц месяц месяц

Рисунок 7 Расчетное суточное поступление нитратов при естественном вскармливании, где М - медианный уровень Р90 - 90 процентильный уровень

С„акс - величина максимального значения концентрации нитратов

□ Пищевые продукты

ВВода

1-3 месяц 4-6 месяц 7-12 месяц

Рисунок 8 Суточное потребление нитратов при искусственном вскармливании

...............1г,«1

1-3 месяц

4-6 месяц

7-12 месяц

Рисунок 9 Расчетное суточное поступление нитратов при искусственном вскармливании, где М - медианный уровень Р90 - 90 процентильный уровень

Смахс - величина максимального значения концентрации нитратов

3. Экологическая характеристика методов снижения нитратов и нитритов

в пищевых продуктах Одиним из подходов снижения поступления нитратов с растительными продуктами заключается в использовании в пищу частей растений, которые содержат меньшие количества нитратов Для выявления зон с меньшим содержанием нитратов изучены закономерности распределения нитратов в частях растений, легко отделяемых традиционными приемами при подготовке продукта и кулинарной обработке Показано, что удаление кожуры, стеблевой, корневой, сердцевинной и других частей, содержащих более высокие уровни нитратов, приводит к снижению их поступления с продуктами на 18-50 %.

Анализ влияния вымачивания, отваривания, консервирования на содержание нитратов в овощах показал, что вымачивание и консервирование позволяет снизить содержание нитратов соответственно на 11,2-52,0 %, 49,0-58,0 %, при промывании водой происходит частичное вымывание нитратов Отваривание в воде или на пару увеличивает переход нитратов в воду.

Нами изучен экспериментально-аналитическим путем процесс экстракции нитратов водой при отваривании овощей (на примере моркови) Экспериментально оценен коэффициент массоотдачи нитратов (от моркови в воду) и установлена функциональная зависимость остаточной концентрации нитратов в моркови от основных параметров процесса - соотношения масс воды и моркови, начальной концентрации нитратов в них, времени отваривания и тд., что позволяет рассчитать условия технологического процесса, обеспечивающие заданный уровень снижения нитратов

Процесс массопереноса нитратов при отваривании овощей мы разделили на несколько стадий, первая стадия - диффузия нитратов в толще продукта, вторая -стадия - массоотдача нитратов через поверхность раздела от продукта в отвар, третья - перенос нитратов в отвар

AM=DSACAt, где ДС - разность концентраций нитратов по обе стороны поверхности,At - длина промежутка времени,Д М - масса «перенесенных» нитратов, D - коэффициент массопередачи

т„х п (t) + т,х в (t) =т„хп (о) + т,х в (°) ~ сохранение количества нитратов

m„- (d х" (Oydt = - D Sn [xn (t) 'X в (t)/, Sn - площадь полной поверхности продукта,

— тп ■ уп(о) + те ■ ув(о)

%о =- -_ Средняя концентрация нитратов во всей системе в

то

начальный момент времени

-Ри _

Xn(t) = [хп(о)-хо] ev- +z0

-Ри _

Xe(t) =[х«(о)-хо] е +z„

-Ри

Zn(t)~ хо + Ув -&е- к

-Ри

/e(t) = /о-Vn-Ae-ln- 2Ve

г ---скорость перехода нитратов

Du

Т и

Сравнение способов снижения нитратов показало, что отваривание является самым эффективным и в зависимости от вида отвариваемого продукта и условий процесса снижение может достигать 93,4 % А приготовление многокомпонентных блюд (оладьев, котлет) на овощной основе позволило снизить содержание нитратов в готовом блюде на 11,2-52,0 % (табл 3) При приготовлении первых блюд суммарное количество в овощах и бульоне не изменяется

Оценивая способы снижения нитратов, основанные на экстрагировании их водой, можно заключить, что они позволяют существенно снизить уровни нитратов, но в то же время применение интенсивных видов обработки (длительное вымачивание, отваривание измельченных овощей в большом объеме воды и т д), ведущих к максимальному снижению нитратов, нецелесообразно из-за значительных потерь биологически активных веществ' витаминов, макро- и микроэлементов, поли фенолов и других

Таблица 3 Влияние вымачивания и отваривания на содержание нитратов в пищевых продуктах

Отваривание Вымачивание

Продукт Кол-во определ % снижения Продукт/время вымачивания, мин. Кол-во определ % снижения

Картофель целый в кожуре 12 12,2-39,0 Морковь/30 минут 5 11,2-22,3

Картофель очищенный 7 55,5-64,3 МоркоЕь/90 минут 8 12,0-36,4

Картофель очищенный и разрезанный на 2 части 5 51,5-64,5 Морковь/24 минуты 3 11,4-53,5

Картофель очищенный, разрезанный на 4-5 частей 17 75,5-93,4 Петрушка/90 минут 6 32,2-45,4

Свекла целая в кожуре 9 16,3-37,5 Укроп/90 минут 5 41,0-46,0

Отваривание с последующим обжариванием

Свекла шмельченная, очищенная 5 31,2-40,5 Оладьи картофельные 6 11,2-45,5

Морковь целая 6 20,4-38,2 Оладьи капустные 6 11,8-47,4

Морковь очищенная, шмельченная на 4 части 5 66,1-74,2 Котлеты морковные 5 31,2-52,2

4. Выработка технологий утилизации растительной продукции с повышенным содержанием нитратов

С целью рациональной утилизации непригодных для питания растительных продуктов с повышенным содержанием нитратов проведены исследования по разработке биоконверсии таких продуктов в белки с использованием микроорганизмов

Отобранные штаммы дрожжей Candida tropicalis С3, Endomycopsis filuhgera С4 в опытных условиях выращивали на средах, состоящих из измельченных овощей с высоким содержанием нитратов (моркови и свеклы) Найдены оптимальные условия процесса (температура культивирования, pH среды, длительность культивирования, аэрация), способствующие максимальному выходу биомассы и обеспечивающие более полное потребление нитратов Анализ питательной среды на содержание нитратов после завершения культивирования дрожжей показал значительное снижение их уровня (84 - 96 %), что указывает на высокую степень ассимиляции нитратов используемыми штаммами дрожжей (табл 4)

Таблица 4 Химический состав белковых препаратов

Продукт микробиологического синтеза Содержание компонентов в % к абсолютно-сухому веществу

Сырой белок Истинный белок Нуклеин, кислоты Нитраты (N0",) Нитриты (N01)

Белковый препарат (питат среда морковь) 30-31 13-14,1 3,6-3,8 0,06-0,08 0-0,004

Белковый препарат (питат среда-свекла) 32-35 11-12,9 3,0-3,1 0,06-0,07 0-0,02

Полученные белковые препараты характеризуются достаточно высоким уровнем белка, невысоким уровнем нуклеиновых кислот и нитратов В то же время, до 10 % белковых препаратов содержали нитриты, которые, по-видимому, являются продуктом неполного восстановления нитратов до аммония вследствии недостаточного соблюдения технологических параметров процесса

Таким образом, предложенный способ утилизации продуктов со значительным превышением ПДК нитратов в них позволяет в 90 % случаях получать ценные белковые препараты, соответствующие эколого-гигиеническим требованиям по содержанию нитратов и нитритов, что дает основание оценить способ как перспективный

ВЫВОДЫ

1 Впервые на региональном уровне усовершенствованы и переданы для внедрения в практику Управления Федеральной службы по надзору в сфере природопользования «Росприроднадзора по Орловской области» и ФГУЗ «Центра гигиены и эпидемиологии Орловской области» унифицированные методы определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах животного и растительного происхождения

2 Усовершенствован спеетрофогометрический метод определения нитратов и нитритов в консервированной продукции (предел обнаружения нитратов -1,6 мг/кг, нитритов - 0,7 мг/кг)

3 Усовершенствован ионометрический метод определения нитратов и спектрофотомегрический метод определения нитратов и нитритов в продуктах растительного происхождения (предел обнаружения ионометрического метода - 16 мг/кг, относительное стандартное отклонение - 0,04-0,12, предел обнаружения спектрофотометрического метода нитратов -1,6 мг/кг, нитритов - 0,7 мг/кг, относительное стандартное отклонение нитратов -0,04 - 0,2, нитритов - 0,04 - 0,08)

4 Усовершенствован спекгрофотометрический метод определения нитратов и нитритов в молоке и молочных продуктах (предел обнаружения метода нитратов - 0,26 мг/кг для

жидких и твердых продуктов и <3 мг/кг - для сухих продуктов, нитритов - 0,2 мг/кг для жидких и твердых продуктов и <2 мг/кг - для сухих продуктов, относительное стандартное отклонение' нитратов - 0,05 - 0,1, нитритов -0,05 - 0,26)

5 Усовершенствован спектрофотометрический метод определения нитратов и нитритов в зерне и зернопродуктах (предел обнаружения метода нитратов - 3,0 мг/кг, нитритов - 0,7 мг/кг, относительное стандартов отклонение нитратов - 0,1 - 0,15, нитритов - 0,11 - 031)

6 Дана экологическая оценка уровней содержания нитратов и нитритов в более чем 3000 образцов пищевых прсдуктов широкого ассортимента. Выявлено, что 20 % проанализированных образцов содержат нитраты в количествах, превышающих установленные предельно допустимые концентрации для этих продуктов

7 Установлено, что суточное поступление нитратов с рационом питания в организм взрослых, в основном, не превышает допустимую суточную дозу, дети, находящиеся на естественном вскармливании до 3 месяцев испытывают самые низкие нагрузки нитратами, с 4 месяцев при потреблении продуктов и воды с максимальным содержанием нитратов могут испытывать нагрузку этими веществами, превышающими допустимую суточную дозу, поступление нитратов в организм детей находящихся на искусственном вскармливании при потреблении воды, содержащей нитраты на уровне предельно допустимой концентрации в течении всего первого года жизни в 1,2-2,6 раза превышает допустимую суточную дозу С целью обеспечения безопасных уровней потребления нитратов с рационом питания детей, рекомендовано использовать воду с содержанием нитратов <10 мг/л

8 Дана экологическая оценка способам снижения содержания нитратов, основанным на использовании в пищу частей растений, содержащих меньшие количества нитратов и на экстрагировании нитратов водой. Показано, что первый способ позволяет снизить поступление нитратов с рационом на 18-50 %, второй - более эффективен - до 94 %

9 Изучена динамика процесса перехода нитратов при отваривании моркови и установлена аналитическая зависимость этого процесса от технологических факторов Расчетная формула позволяет определять комплекс технологических условий процесса, обеспечивающий заданный уровень снижения нитратов

10 Предложен подход к утилизации растительных продуктов, уровень нитратов в которых существенно превышает предельно допустимые концентрации, основанный на биоконверсии таких продуктов в микробный белок с использованием микроорганизмов Candida tropicalis, Endomycopsis filuligera.

Научные публикации

1 Николаев А В, Акульчева Н.Н, Рычко НВ, Курочицкая МГ. Безотходные и малоотходные производства как компоненты оптимизации природопользования/ А В Николаев, НН Акульчева, НВ Рычко, МГ. Курочицкая //Сборник материалов Международной научно-практической конференции «Приоритет России XXI века от биосферы и техносферы к ноосфере» (21-22 января 2003) -Пенза, 2003.-С 120-122.

2. Мальцева О И, Рычко НВ, Щербакова В Л Эколого-гигиеническая оценка способов снижения содержания нитратов в продукции растительного и животного происхождения/ О.И Мальцева, НВ Рычко, ВН. Щербакова // Сборник статей по материалам I Всероссийской научно-практической конференции «Химико-экологические проблемы Центрального региона России»/Под ред Оскотской Э.Р.. - Т. 1. - Орел, 2003 -С. 138-141.

3. Ладнова ГГ., Курочицкая МГ, Мальцева ОИ, Рычко НВ Эколого-гигиеническая безопасность труда и меры профилактики при работе с пестицидами / ГГ. Ладнова, МГ Курочицкая, ОИ. Мальцева, НВ. Рычко // Сборник статей по материалам I Всероссийской научно-практической конференции «Химико-экологические проблемы Центрального региона России»/Под ред Оскотской Э Р. - Т. 1 - Орел, 2003 -С 135-137

4 Ладнова ГГ., Рычко НВ Эколого-гигиенические исследования неблагоприятного воздействия автотранспорта на окружающую среду с использованием методов биоиндикации / Г Г Ладнова, НВ Рычко // VI Международная научно-практическая конференция «Эколого-гигиенические проблемы Каспийского моря» (15-16 октября 2003) - Астрахань, 2003. С

5 Ладнова ГГ., Курочицкая МГ, Рычко НВ Гигиеническая оценка методов снижения азотсодержащих веществ в продуктах растительного происхождения / ГГ Ладнова, МГ Курочицкая, НВ Рычко // Научные труды ФНЦ гигиены им Ф Ф Эрисмана «Факторы риска и здоровье населения в регионах России»/Под ред Акад РАМН, проф А И. Потапова -Вып 13 - Липецк,2004 -С 528-531

6 Рычко НВ Закономерности распределения нитратов в объеме растения / НВ Рычко // Материалы Республиканской научной конференции «Экологические и социально-гигиенические аспекты среды обитания человека»/Под ред акад РАО А П Лиферова, проф ВФ Горбича,Ряз Гос Пед Ун-тим СА Есенина -Рязань,2005.-С 162-165

7 Ладнова Г.Г., Курочицкая МГ, Рычко НВ, Дугина МБ Гигиеническая оценка остаточных количеств пестицидов и нитратов в картофеле на региональном уровне / Г.Г Ладнова, М Г. Курочицкая, НВ Рычко, МВ Дугина // «Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения» - Рязань, 2005. - С291-293

8 Ладнова Г.Г., Курочицкая М.Г, Рычко Н В, Дугина М.В. Оценка содержания пестицидов в клубнях картофеля в зависимости от времени года / Г.Г. Ладнова, МГ. Курочицкая, НВ. Рычко, М.В Дугина // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им И И. Мечникова - № 1. - С-Пб, 2005. -С212-214.

9. Курочицкая МГ., Фролова НВ (Рычко НВ), Конусова ЕА. Изучение содержания остаточных количеств фосфорорганических пестицидов и нитратов в зерне озимой пшеницы/ МГ. Курочицкая, НВ Фролова (НВ Рычко), ЕА Конусова // Материалы УШ Международной научно-практической конференции «Экология и жизнь» (24-25 ноябряуПодред акад ВВ Арбузова,проф ТМ Демиденко -Пенза,2005.-С. 14-15.

Ю.Фролова Н.В (Рычко НВ), Конусова ЕА Изучение экологического состояния поверхностных вод Орловского региона / НВ. Фролова (Н.В Рычко), ЕА Конусова // Материалы УШ Международной научно-практической конференции «Экология и жизнь» 24-25 ноября)/Под ред акад В В Арбузова, проф Т.М Демиденко. -Пенза, 2005.-С. 168-169.

11. Ладнова Г.Г., Курочицкая М Г., Кондыкова Н Н, Дугина М В., Фролова Н В. (Рычко НВ.) Экологическое образование и воспитание - важное звено в решении региональных экологических проблем / ГГ. Ладнова, М.Г Курочицкая, НН Кондыкова, МВ Дугина, Н.В. Фролова (НВ. Рычко) // Материалы УШ Международной научно-практической конференции «Экология и жизнь» 24-25 ноября)/Под ред акад ВВ. Арбузова,проф ТМ Демиденко.-Пенза,2005.-С.237-239

Подписано в печать 20.03 2007 г. Заказ №50 Тираж 100 экз

Издательство ГОУ ВПО «Орловский государственный университет» г Орел,ул Комсомольская, 95

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фролова, Надежда Владимировна

Введение.

Глава 1. Современная характеристика нитратов, нитритов и методов их определения.

1.1. Нитраты и особенности их метаболизма в растительных организмах.

1.2. Нитраты и особенности их метаболизма в животных организмах.

1.3. Нитрат-нитритная нагрузка на человека и факторы, способствующие ее снижению.

1.4. Современные методы определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах и их характеристика.

Глава 2. Объекты, материал, методы и объемы исследования.

Глава 3. Адаптирование методов определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах.

3.1. Адаптирование ионометрического метода определения нитратов в капусте.

3.2. Адаптирование фотометрического метода определения нитратов в продукции растениеводства.

3.3. Адаптирование метода анализа нитратов и нитритов в плодовоовощной консервированной продукции.

3.4. Адаптирование метода определения нитратов и нитритов в зерне и зернопродуктах.

3.5. Адаптирование метода определения нитратов и нитритов в молоке и молочных продуктах.

Глава 4. Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах и суточное поступление этих веществ в организм человека.

4.1. Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного происхождения.

4.2. Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах животного происхождения.

4.3. Изучение поступления нитратов в организм человека с пищевыми продуктами и водой.

Глава 5. Разработка методов снижения нитратов и нитритов в пищевых продуктах.

5.1. Топография содержания нитратов в овощной продукции.

5.2. Оценка методов снижения содержания нитратов в пищевых продуктах, основанных на экстрагировании их водой.

5.3. Изучение динамики экстракции нитратов при отваривании моркови.

5.4. Разработка метода утилизации растительной продукции с повышенным содержанием нитратов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного и животного происхождения и методы их снижения"

Одной из важных проблем экологии является охрана агроэкосистем от негативного воздействия научно-технического прогресса: интенсификации и химизации сельского хозяйства, химического загрязнения окружающей среды, которое вызывает накопление в продуктах растениеводства и животноводства различных токсических веществ, особенно нитратов и нитритов. Наряду с поступлением азота в виде азотных удобрений, примерно такое же количество азота поступает в биосферу в виде окислов от сжигания топлива и с выбросами промышленных предприятий. Вклад нитросоединений антропогенного и техногенного происхождения в общем круговороте азота устойчиво возрастает, что обусловливает увеличение нитрат-нитритной нагрузки на человека (Кряжимский В.Ф., Большаков В.Н., Корюкин В.И., 2001; Суржиков В.Д., Олещенко A.M., Суржиков Д.В.,. Ксенофонтова И.Ю, Лапшин М.С., 2003).

Известно, что поступление нитратов в больших количествах может вызвать различные нарушения функционального состояния организма -метгемоглобинемию, тканевую гипоксию, установлена также их способность к струмигенному и иммунодепрессивному действию (Ажипа Я.И., Реутов В.П., КаюшинЛ.П., 1990).

Экспериментальные и эпидемиологические исследования подтверждают роль нитратов как предшественников N-нитрозосоединений - группы веществ с выраженным канцерогенным и эмбриотоксическим действием (Жукова Г.Ф., 1990; Иванова А.С., Пахрова О.А, Назаров С.Б., 2004).

Длительная высокая нитрат-нитритная нагрузка на организм человека может являться фактором повышения уровня эндогенного нитрозирования (Гоженко А.И., Доренский B.C. и др., 1996;. Ильницкий А.П, 1989). В связи с этим, особое внимание должно быть уделено снижению эндогенного синтеза нитрозосоединений из предшественников, входящих в состав пищевого рациона (нитратов, нитритов, аминов и других) и воздействию алиментарными факторами.

Результаты выборочного контроля показывают, что ежегодно от 10 % до 20 % и более проб овощных, плодовых и бахчевых пищевых продуктов превышает установленные ПДК (Ильницкий А.П., 1991; Красовский Г.Н., Васюкович Л.Я., Лутсоя Х.И. и др., 1982; Марин СБ.,. Сидоров П.И, 1999).

Поэтому разработка мероприятий, направленных на ограничение поступления нитратов в организм человека путем регламентирования и более качественного контроля за содержанием нитратов в пищевых продуктах является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилась экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного и животного происхождения и разработка методов их снижения.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

• адаптировать методы (ионометрический и спектрофотометрический), позволяющие проводить анализы нитратов и нитритов в продуктах растительного и животного происхождения;

• провести сравнительный анализ содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах, продовольственном сырье и воде;

• дать экологическую оценку суточного поступления нитратов и нитритов в организм различных групп населения;

• разработать методы, позволяющие снижать содержание нитратов в растительных продуктах, уровень которых превышает установленные регламенты.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. На основании проведенных исследований впервые: на региональном уровне адаптированы ионометрический и спектрофотометрический методы количественного анализа нитратов и нитритов в пищевых продуктах; установлены пределы определения нитратов и нитритов в продуктах растительного и животного происхождения, консервированной плодоовощной и плодовоягодной продукции; определено среднедушевое суточное поступление нитратов и нитритов с рационом питания четырех различных групп населения г. Орла; разработаны методы снижения содержания нитратов в овощах подвергнутых кулинарной обработке с использованием воды; показана динамика процесса перехода нитратов в воду при отваривании овощей, установлена аналитическая зависимость этого процесса от технологических факторов и дана расчетная формула, позволяющая определять комплекс условий, обеспечивающий уровень снижения нитратов; разработан метод, основанный на биоконверсии, по утилизации растительных продуктов, уровень нитратов в которых существенно превышает предельно допустимые концентрации.

Практическая значимость работы. Результаты данного исследования могут быть использованы для совершенствования региональной деятельности экологической, гигиенической, санитарно-эпидемиологической служб мониторинга по контролю качества пищевого сырья и продуктов питания, по профилактике и снижению риска здоровью как взрослого, так и детского населения.

Адаптированные к региональным условиям методы (ионометрический и спектрофотометрический) позволяют на более качественном уровне осуществлять контроль за содержанием нитратов и нитритов в пищевом сырье и продуктах питания Управлением Федеральной службы по надзору в сфере природопользования «Росприроднадзора по Орловской области» и ФГУЗ «Центра гигиены и эпидемиологии Орловской области».

На основании установленной топографии концентрации нитратов по объему овощей предложены приемы их первичной обработки, позволяющие снизить поступление нитратов с такими продуктами до 50 %.

Установленная экспериментально-аналитическим путем функциональная зависимость остаточной концентрации нитратов при отваривании овощей дает возможность не только прогнозировать уровни снижения нитратов, но и определять комплекс технологических условий, обеспечивающих их уровень снижения.

Предложенный метод, основанный на биоконверсии позволит утилизировать растительные продукты, уровень нитратов в которых существенно превышает предельно допустимые концентрации.

Результаты исследований внедрены в учебный процесс ГОУ ВПО «Орловский государственный университет», ФГОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет», ФНЦ гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, ФГУЗ «Центра гигиены и эпидемиологии Орловской области».

Основные положения, выносимые на защиту:

• адаптированы к региональным условиям методы (ионометрический и спетрофотометрический) анализа нитратов и нитритов, апробированные на группах пищевых продуктах растительного и животного происхождения, консервированной плодоовощной и плодовоягодной продукции;

• содержание нитратов и нитритов в различной готовой растительной и животной продукции варьирует, зависит от многих факторов и в 20 % образцов превышает ПДК;

• основные источники поступления нитратов и нитритов с рационом питания приходятся на долю продуктов растительного происхождения; выявлено среднедушевое суточное поступление нитратов и нитритов с продуктами питания четырех различных групп населения;

• предложены методы снижения нитрат-нитритной нагрузки в растительной продукции в зависимости от кулинарной обработки, дана расчетная формула определения технологических условий, снижающих уровень нитратов в воде;

• разработан и апробирован метод биоконверсии утилизации продукции с содержанием нитратов, превышающих ПДК.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Фролова, Надежда Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Впервые на региональном уровне адаптированы и переданы для внедрения в практику Управления Федеральной службы по надзору в сфере природопользования «Росприроднадзора по Орловской области» и ФГУЗ «Центра гигиены и эпидемиологии Орловской области» методы определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах животного и растительного происхождения.

2. Адаптирован ионометрический метод определения нитратов и спектрофотометрический метод определения нитратов и нитритов в продуктах растительного происхождения (предел обнаружения ионометрического метода - 16 мг/кг, относительное стандартное отклонение

- 0,04-0,12; предел обнаружения спектрофотометрического метода: нитратов

- 1,6 мг/кг, нитритов - 0,7 мг/кг, относительное стандартное отклонение: нитратов - 0,04 - 0,2, нитритов - 0,04 - 0,08). Адаптирован спектрофотометрический метод определения нитратов и нитритов в зерне и зернопродуктах (предел обнаружения метода: нитратов - 3,0 мг/кг, нитритов

- 0,7 мг/кг; относительное стандартное отклонение: нитратов - 0,1 - 0,15, нитритов -0,11-0,31).

3. Адаптирован спектрофотометрический метод определения нитратов и нитритов в консервированной плодовоягодной и плодоовощной продукции (предел обнаружения: нитратов - 1,6 мг/кг, нитритов - 0,7 мг/кг).

4. Адаптирован спектрофотометрический метод определения нитратов и нитритов в молоке и молочных продуктах (предел обнаружения метода: нитратов - 0,26 мг/кг для жидких и твердых продуктов и <3 мг/кг - для сухих продуктов, нитритов - 0,2 мг/кг для жидких и твердых продуктов и <2 мг/кг - для сухих продуктов; относительное стандартное отклонение: нитратов - 0,05-0,1, нитритов-0,05-0,26).

5. Установлены уровни содержания нитратов и нитритов в более чем 3000 образцов пищевых продуктов широкого ассортимента, из них 20 % содержат нитраты в количествах, превышающих предельно допустимые концентрации.

6. Выявлено, что суточное поступление нитратов с рационом питания в организм взрослых, в основном, не превышает допустимую суточную дозу. Дети, находящиеся на естественном вскармливании до 3 месяцев испытывают самые низкие нагрузки нитратами, с 4 месяцев при введении в рацион питания овощных пюре могут испытывать нагрузку этими веществами, превышающими допустимую суточную дозу. Поступление же нитратов в организм детей, находящихся на искусственном вскармливании, в течении всего первого года жизни в 1,2-2,6 раза превышает допустимую суточную дозу. С целью обеспечения безопасных уровней потребления нитратов с рационом питания детей, рекомендовано использовать воду с содержанием нитратов < 10 мг/л.

7. Разработан метод снижения содержания нитратов, основанный на использовании в пищу частей растений, содержащих меньшие количества этих веществ и на экстрагировании их водой. Показано, что первый метод позволяет снизить поступление нитратов с рационом на 18%-50 %, второй -более эффективен - до 94 %

8. Изучена динамика процесса перехода нитратов в воду при отваривании овощей (на примере моркови) и установлена аналитическая зависимость этого процесса от технологических факторов. Расчетная формула позволяет определять комплекс технологических условий процесса, обеспечивающий заданный уровень снижения нитратов.

9. Разработан метод утилизации растительных продуктов, уровень нитратов в которых существенно превышает предельно допустимые концентрации, основанный на биоконверсии таких продуктов в микробный белок с использованием микроорганизмов Candida tropicalis, Endomycopsis filuligera.

130

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изменение характера и масштабов деятельности человека в течении последних десятилетий нарушило сложившуюся в течении веков устойчивость многих природных процессов и экологических систем. Вклад азотсодержащих соединений антропогенного и техногенного происхождения в общем круговороте азота за последний период устойчиво возрастает, что обусловливает увеличение нитрат-нитритной нагрузки на организм человека [17]. Поступление нитратов в организм в больших количествах может вызвать различные нарушения функционального состояния организма, вплоть до тяжелых отравлений. Токсическое действие нитратов отличается широким спектром проявлений. Помимо основных проявлений действий нитратов - гемической и гистотоксической гипоксии - эти соединения обладают струмигенным действием, а длительное поступление в организм может вызвать такие заболевания как анемии, неоплазмы и другие [103].

Экспериментальные и эпидемиологические исследования, проведенные в ряде стран мира и в нашей стране, подтверждают роль нитратов как предшественников N-нитрозосоединений - группы веществ с выраженным канцерогенным и эмбриотоксическим действием [129,169].

Все эти проявления как прямого, так и опосредованного токсического действия нитратов диктуют необходимость разработки мероприятий, направленных на уменьшение воздействия указанных соединений, путем снижения их поступления в организм извне и снижения их неблагоприятного действия на организм алиментарными факторами.

Контроль за соблюдением эколого-гигиенических регламентов содержания нитратов в ряде растительных продуктов требует необходимого методического обеспечения. Эффективность системы контроля неразрывно связана с обеспечением контролирующих служб достаточно чувствительными, надежными, селективными и доступными методами анализа нитратов и нитритов в различных пищевых продуктах и прежде всего тех, уровень нитратов в которых нормируется.

Высокочувствительные и селективные методы -ионохроматографические и хемилюминесцентный - имеют неоспоримые преимущества, но в то же время дорогостоящее приборное оснащение делает их практически недоступными для специалистов, осуществляющих контроль качества пищевых продуктов. При этом следует отметить, что концентрация нитратов в пищевых продуктах изменяется в широком диапазоне и это необходимо учитывать при выборе метода.

Среди многообразия имеющихся методов анализа нитратов и нитритов, учитывая возможности контролирующих служб, наиболее приемлемыми для анализа названных соединений в пищевых продуктах являются ионометрический и спектрофотометрический методы.

Необходимость обеспечения экологических, гигиенических и других служб достоверными методами анализа нитратов и нитритов потребовала разработки адаптированных методов анализа. Адаптирование фотометрического метода заключалась в отработке оптимальных условий выделения, очистки экстракта от мешающих примесей, восстановления, проведения цветной реакции и т.д. с учетом специфики физико-химических особенностей анализируемых групп продуктов: растительных, молочных, зерновых и консервированных. При спектрофотометрическом определении одной из наиболее важных является очистка экстракта от мешающих определению примесей и получения прозрачного фильтрата. Среди следующих апробированных реактивов для очистки экстрактов используют сульфат цинка, калия железистосинеродистый и тетраборат натрия в разных соотношениях в зависимости от вида исследуемого продукта. В некоторых случаях рекомендуется добавлять также ацетат цинка и гидроксид натрия.

При анализе нитратов в молоке и молочных продуктах установлено существенное влияние матрицы продукта, которое не удалось устранить. Установленные экспериментальным путем коэффициенты позволяют при расчете корректировать полученные результаты, и таким образом, учитывать влияние матрицы.

Был разработан новый вариант ионометрического определения нитратов в основной культуре семейства крестоцветных - капусте, который сводится к устранению влияния примесей окислением смесью перманганата калия и серной кислоты с последующей обработкой пероксидом водорода, разрушающей избыток перманганата, наличие которого может изменить потенциал электродной системы.

Даны ориентировочные оценки пределов обнаружения (Dl), нитратов ионометрическим методом в растениеводческой продукции, которые составляет 32 мг ЫО'з на 1 кг массы продукта. Фотометрический метод -более чувствительный, он позволяет надежно определить в зависимости от вида продукта от 2,2 до 2000 мг NC3 на 1 кг продукта. Установлен нижний предел определения нитритов - 0,5 мг NO2 /кг продукта.

При сравнении двух фотометрических методов с использованием Cd колонки и метода «сухого восстановителя» [55], а также ионометрического метода выявлено, что фотометрический метод, отличающийся универсальностью, дает наиболее точные результаты как в отношении случайных так и систематических погрешностей в области низких концентраций < 50 мг NOV кг продукта. В то же время, более экспрессный ионометрический метод эффективен в области средних и высоких концентраций (100-2000 мг/кг), которые представляют наибольший интерес для контроля безопасности пищевых продуктов. Однако, при этом необходимо учитывать ограниченные возможности этого метода, который может применяться только для анализа растениеводческой продукции.

Фотометрический метод с применением «сухого восстановителя» имеет более высокие значения случайных погрешностей, кроме того, он обнаруживает завышение результатов при низких и занижение при высоких концентрациях нитратов.

Для изучения содержания нитратов и нитритов были использованы ионометрические и спектрофотометрические методы в более чем 3 тыс. образцов пищевых продуктов широкого ассортимента: овощных, фруктах и ягодах, молоке и молочных, мясе и мясных, рыбных, зерне и зернопродуктах и консервированных продуктах. Наиболее высокие уровни содержания нитратов определены в следующих овощах: свекле, редисе, брюкве, редьке и зеленных - петрушке, салате латук, укропе - концентрация нитратов в некоторых достигает граммовых количеств. Молочные, мясные, рыбные, зерновые содержат малые количества нитратов, их уровень не превышает 20 мг/кг, 20 % проанализированных образцов содержат нитраты в количествах, превышающих установленные предельно допустимые концентрации для соответствующих видов продуктов [85]. Наиболее высокий процент превышения выявлен для свеклы, капусты, моркови, тепличных огурцов (до 40 %).

Результаты количественного анализа нитритов показывают, что самые высокие значения нитритов обнаружены в колбасных изделиях, мясокопченостях и мясных консервах, достигающие 32,2 мг ЫОУкг массы продукта, что не превышает предельно допустимых концентраций для этих видов продуктов [77, 85], в то время как остальные виды продуктов содержат нитриты в количествах - до 2 мг/кг. В свежих овощах и фруктах уровень содержания нитритов ниже предела определения фотометрического метода. Определены среднеарифметические, медианные и 90 % уровни содержания нитратов и нитритов в исследуемых продуктах.

На основании результатов анализа нитратов и нитритов в продуктах питания и воде с учетом среднеарифметических, медианных, 90 % уровней содержания нитратов, а также с учетом суточного потребления пищевых продуктов рассчитано возможное суточное поступление нитратов и нитритов с рационом четырех групп населения, проживающих в г. Орле: 1) детей, 2) студентов, 3) людей трудоспособного возраста, 4) пенсионеров. Анализ показывает, что от 42 % до 92 % поступления нитратов в организм взрослых приходится на продукты растительного происхождения.

Основными поставщиками нитритов являются мясные продукты, на долю которых приходится от 55% до 60 % от суммарного их поступления. Суточное поступление нитратов и нитритов с рационом питания составляет для студентов 2 мг/кг в сутки, людей трудоспособного возраста - 1,9 мг/кг в сутки, для пенсионеров -1,6 мг/кг в сутки.

Возможное суточное поступление нитратов в организм студентов, пенсионеров, в том числе и населения трудоспособного возраста рассчитанное по среднеарифметическому и 90 процентильным уровням фактического содержания в пище и воде, не превышает допустимую суточную дозу (ДСД), которая равна 300 мг NO'3, для человека массой 60 кг. При расчете на основе максимальных значений суточное поступление нитратов в организм взрослых в 1,2-1,8 раза превышает допустимую суточную дозу.

Оценка суточного поступления нитратов в организм детей, находящихся на естественном и искусственном вскармливании показывает, что оно может изменяться в широком интервале и отличаться в десятки раз. Самые низкие нагрузки нитратами (при любых вариантах расчета) испытывают дети до трех месяцев, находящиеся на естественном вскармливании (0,52-2,39 мг/кг массы тела ребенка). С четырехмесячного возраста поступление нитратов в организм этой группы детей существенно возрастает за счет введения в рацион питания овощных пюре. При расчете максимальных уровней концентрации нитратов на 90 процентильных уровнях фактическое содержание в пище и воде может превышать установленные регламенты.

Дети, которые находятся на искусственном вскармливании при расчете на среднеарифметические, 90 % и максимальные уровни, только первые три месяца могут получать с пищей и водой количества нитратов, не превышающие допустимой суточной дозы, во всех остальных случаях количество поступивших нитратов может быть близким или превышать допустимую суточную дозу. Если такие дети потребляют воду, концентрация нитратов в которой равна предельно допустимой, то уже с первых месяцев и в течении первого года жизни они испытывают нагрузку нитратами в 1,2-2,6 раза превышающую допустимую суточную дозу.

Таким образом, полученные результаты позволили сделать заключение о возможности поступления нитратов в количествах, превышающих допустимую суточную дозу, как в организм взрослых, так и детей, причем вероятность поступления высоких доз возрастает с увеличением концентрации нитратов в овощах и особенно, при концентрации нитратов в воде на уровне предельно допустимой концентрации и выше. Проведенный нами расчет показывает, что концентрация нитратов в питьевой воде, предназначенной для детей, не должны превышать 10 мг NOVkt, при более высоких уровнях необходима очистка воды или целевое снабжение водой с низким уровнем в ней нитратов. Помимо этого, необходим строгий контроль за соблюдением установленных регламентов содержания нитратов в растительных продуктах, особенно в овощах, идущих на изготовление детских консервов.

Возможность поступления нитратов в организм в количествах, превышающих допустимую суточную дозу, обусловила проведение исследований, направленных на снижение поступления нитратов в организм за счет снижения их уровней в растительных продуктах, уровень нитратов в которых превышает установленные нормы.

Одним из подходов снижения потребления нитратов с растительными продуктами заключается в использовании в пищу частей растений, которые содержат меньшие количества нитратов. Для выявления зон с меньшим содержанием нитратов изучены закономерности распределения нитратов в частях растений, легко отделяемых традиционными приемами при подготовке продукта к кулинарной обработке. Показано, что удаление частей с более высоким содержанием нитратов: стеблевой, корневой частей, кожуры и других приводит к уменьшению поступления нитратов с этим продуктом на 18%-50%.

Снижения содержания нитратов в продуктах можно достигнуть, применяя различные кулинарные и технологические приемы. Любой вид кулинарной или промышленной обработки, при котором используется вода: бланширование, отваривание, маринование, консервирование и т.д. приводит к перераспределению нитратов в системе продукт-вода и при концентрациях нитратов в воде более низких, чем в продукте - приводит к снижению нитратов в продукте.

Отваривание относят к одному из самых эффективных способов содержания нитратов в продуктах. В зависимости от условий отваривания: соотношения масс воды и продукта, исходных концентраций нитратов в продукте и воде, вида отвариваемого продукта, степени измельчения и т.д., количество нитратов в подвергнутых такой обработке овощах может снизиться на 12,2%-93,4 %.

Проведены исследования по изучению влияния консервирования в целом и каждый его стадии в отдельности на содержание нитратов в овощах - моркови и свекле. Показано, что механическая или химическая очистка, непродолжительное бланширование или шпарение приводит к незначительному снижению нитратов в овощах (3%-17 %). Наиболее существенное снижение содержания нитратов (40%-52 %) наблюдали на последней стадии консервирования - стерилизации. В целом, суммарное снижение нитратов в консервированных овощах по сравнению со свежими составило 49%-58 %.

Оценивая способы, позволяющие снизить уровни нитратов, основанные на экстрагировании нитратов водой: вымачивание, бланширование, отваривание, консервирование и другие необходимо отметить, что эти способы позволяют существенно снизить содержание нитратов в овощах (до 94 %), однако наряду с этим овощи теряют многие биологически активные соединения: витамины, макро- и микроэлементы, полифенолы и ряд других. Приемы, которые способствуют более полному удалению нитратов из продукта (отваривание измельченных продуктов в большом объеме воды, отваривание очищенных продуктов, многократное бланширование с заменой используемых порций воды) одновременно приводит к усилению перехода в отвар или разрушению ценных компонентов продукта от 17% до 85 % [151].

Проведено экспериментально-аналитическое изучение процесса перехода нитратов при отваривании овощей (на примере моркови). Экспериментально оценен коэффициент массоотдачи нитратов (от моркови в воду) и установлена функциональная зависимость остаточной концентрации нитратов в моркови от основных параметров процесса - соотношения масс воды и моркови, начальной концентрации нитратов в них, времени отваривания и т.п. Предложенные зависимости позволяют рассчитать условия технологического процесса, обеспечивающие тот или иной уровень снижения нитратов, т.е. прогнозировать конечную концентрацию нитратов в отвариваемой моркови при заданных условиях.

Результаты выборочного контроля показывают, что ежегодно 10%-20 % проб овощных, плодовых и бахчевых пищевых продуктов не соответствует установленным допустимым нормам содержания нитратов [89]. Продукты, уровень нитратов в которых более чем в 2 раза превышает установленные эколого-гигиенические регламенты относятся к продуктам, непригодным для питания людей. В то же время, эти продукты содержат высокие уровни азотистых веществ, полисахаридов, минеральных веществ, витаминов и других, откуда следует, что плодоовощные отходы, в принципе, могут быть использованы в качестве субстрата для культивирования микроорганизмов.

С целью рационального использования пищевых продуктов с высоким содержанием нитратов проведены исследования, направленные на изучение возможности биоконверсии таких продуктов в микробный белок с использованием микроорганизмов, обладающих способностью ассимилировать азот нитрата.

В результате поэтапно проведенных исследований были отобраны штаммы дрожжей Candida tropicalis Сз, Endomycopsis filuligera С4, которые при значительном выходе биомассы обеспечивают высокую степень потребления нитратов из субстрата. Отобранные штаммы выращивали на средах, состоящих из измельченных овощей (моркови и свеклы) с высоким содержанием нитратов. Найдены условия процесса, способствующие наилучшему росту дрожжей и обеспечивающие максимальное потребление нитратов: температура культивирования 30±2°С, рН среды 4,8-5,2, длительность культивирования 6-8 часов, аэрация - 1 объем воздуха на объем питательной среды в минуту. В результате культивирования штаммов дрожжей получены белковые препараты, содержащие соответственно сырого протеина 30%-35 % к АСВ, истинного белка 11,0%-14,1 % к АСВ, нуклеиновых кислот 3,0%-3,8 % к АСВ, нитратов 0,06%-0,08% к АСВ, т.е. характеризуется достаточно высоким уровнем белка, невысоким уровнем нуклеиновых кислот и нитратов. Вместе с тем, около 10 % полученных белковых препаратов содержали нитриты, уровень которых варьировал от 7 до 200 мг ИОУкг препарата. Анализ питательной среды на содержание нитратов после завершения процесса культивирования дрожжей показал значительное снижение их уровня (84%-96 %), что указывает на высокую степень ассимиляции используемыми штаммами дрожжей.

Таким образом, предложенный подход к утилизации продуктов со значительным превышением установленных допустимых уровней нитратов позволяет получать в 90 % случаях белковые препараты, отвечающие эколого-гигиеническим требованиям по содержанию нитратов и нитритов, что дает основание оценивать его как перспективный.

128

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фролова, Надежда Владимировна, Брянск

1. Авцын, А.П. Микроэлементозы человека / А.П. Авцын, А.А. Жаворонков, М.А. Риш, J1.C. Строчкова. - М.: Медицина, 1991. -С. 196-231.

2. Айвазян, JI.K. Морфологические исследования в токсикого-гигиенической оценке нитратов / JI.K //Гигиена и санитария. 1986. -№ 11.-С. 72-73.

3. Аксельруд, Г.А. Экстрагирование. Система твердое тело -жидкость / Г.А. Аксельруд, В.М. Лысянский JL: Химия, 1974. -С. 18-24.

4. Андрющенко, В.К. Содержание нитратов в овощах. / В.К Андрющенко //Вопросы питания. 1981. № 5. - С. 57-59.

5. Анохина, В.И. Содержание нитратов в плодоовощном сырье и возможности их снижения / В.И. Анохина, И.Ф. Овчинникова //Проблемы индустриализации общественного питания страны: тез. докл. 2 Всес. научн. конференции. Харьков, 1989. - С. 259-260.

6. Антипина, В.Д. «Нитратная проблема» и пути ее решения / В.Д. Антипина, З.П. Фалунина, Ю.Б. Моисеев, Н.Н. Рощина М.: Мосгорагропром НПО «Хранение», 1990. - 42 с.

7. Ажипа, Я.И. Реакция эндокринных желез на нитратную интоксикацию / Я.И. Ажипа //Эндокринная система организма и вредные факторы внешней среды: Матер. 2-й всес. конференции. -Л., 1983.-С. 7.

8. Ажипа, Я.И. Экологические и медико-биологические аспекты проблемы загрязнения окружающей среды нитратами и нитритами / Я.И. Ажипа, В.П. Реутов, Л.П. Каюшин //Физиология человека.-1990.-Т. 16. -№3 .-С. 131-149.

9. Безбородов, A.M. Биохимические основы микробиологического синтеза / A.M. Безбородов М.: высшая школа, 1984. -304 с.

10. Беккер, М.Е. Введение в биотехнологию / М.Е. Бекер М.: Пищевая промышленность, 1978.-С. 111-117.

11. Боговский, С.П. Количество видов и таксономическая принадлежность животных, для которых установлена канцерогенность нитрозосоединений / С.П. Боговский, П.А. Боговский //Экспериментальная онкология. 1982. - № 1. - С. 6063.

12. Боговский, П.А. Гигиенические аспекты изучения канцерогенных N нитрозосоединений: обзор / П.А. Боговский, К. Веттинг //Гигиена и санитария. - 1988. - № 4. - С. 58-63.

13. Большая Советская Энциклопедия. М.: Советская энциклопедия, 1973. - Т. 13. - С. 105-112.

14. Бочарова, Н.Н. Особенности действия денитрифицирующих бактерий на хлебопекарные дрожжи / Н.Н. Бочарова, В.Г. Черныш, Н.И. Сизова //Хлебопекарная и кондитерская промышленность. -1986. -№ 9. -С. 32-35.

15. Варламов, В. Коварное благо или о том, что все знают / В. Варламов //Химия и жизнь. 1988. - № 5. - С. 44-49.

16. Великая, Е.И. Лабораторный практикум по курсу общей технологии бродильных производств / Е.И. Великая, В.Ф. Суходол -М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983. 310 с.

17. Воронина, ЯЛ. Гигиеническая оценка нитратов в почве по транслокации их в растения / Я.П. Воронина //Гигиена и санитария.- 1988.-№ 1.-С. 39-41

18. Вредные вещества в промышленности. /Под. ред. Н.В. Лазарева. Л.: Химия, 1977. - Т. 3. - С. 376-383.

19. Габович, Д. Принципы гигиенических основ охраны продуктов питания от вредных химических веществ / Д. Габович, Л.С. Припутина Киев: Здоров'я. - 1997.

20. Гоженко, А.И. Причины и механизмы интоксикации нитратами и нитритами / А.И. Гоженко, B.C. Доренский и др. //Медицина труда и промышленная экология. 1996. - № 4. - С. 15-20.

21. Гоженко, А.И. Методика определения нитрит-нитратной экологической нагрузки на организм человека / А.И. Гоженко, И.Г. Славина, С.Г. Катюжинская и др. //Медицина труда и промышленная экология. 2001. - № 3. - С. 38-39.

22. ГОСТ СССР 2874-82. Вода питьевая. М.: Издательство стандартов.- 1982.

23. ГОСТ 13496. 19-86. Корма растительные. /Методы определения нитратов. Издательство стандартов. 1986. - 9 с.

24. Грин, Н. Биология / Н. Грин, У. Стаут, Д. Тейлор М.: Мир, 1990.-С. 313-315.

25. Гумаргалиева, К.З. Динамика нитратов в картофеле при хранении / К.З. Гумаргалиева, И.Г. Калинина //Пищевая промышленность. 1989. - № 1. - С. 61-62.

26. Денисенко, П.П. Поиск антидотных средств антигипоксантов при отравлении веществами-окислителями / П.П. Денисенко, А.Ф. Сафронова, А.Т. Бурбелло //Актуальные проблемы лекарственной токсикологии: тез. докл. научн. конференции. -М., 1990. С. 77.

27. Дерягина, В.П. Содержание в продуктах питания нитратов и нитритов и оценка их поступления с суточным рационом / В.П. Дерягина, Г.Ф. Жукова, С.А. Хотимченко //Вопросы питания. -1993.-№ 4.-С. 47-53.

28. Дискаленко, А.П. Водно-нитратная метгемоглобинемия и ее профилактика / А.П. Дискаленко Кишинев: Картя Молдовеняскэ, 1969.-71 с.

29. Дмитриев, М.Т. Газохроматографическое определение нитратов в пищевых продуктах / М.Т. Дмитриев, Г.П. Зарубин //Гигиена и санитария. 1985. - № 2. - С. 51-52.

30. Дмитриевич, Л.П. Влияние технологических факторов снижения нитратов в продуктах переработки свеклы / Л.П. Дмитриевич, Л.В. Терещенко //Там же. С. 13-14.

31. Добровольский, Г.В. Почва, микробы и азот в биосфере / Г.В. Добровольский, М.М. Умаров //Природа. № 6. - 2004. - С. 15-22.

32. Донченко, JI.В. Безопасность пищевой продукции / Л.В. Донченко, В.Д. Надыкта-М.: Пищепромиздат. -2001. С. 241-252.

33. Зайцева, Н.В. Обоснование региональных критериев безопасности химических веществ для обеспечения приемлемого уровня риска здоровью населения / Н.В. Зайцева, И.В. Май, П.З. Шур, Д.А. Кирьянов //Гигиена и санитария. 2003. - № 6. - С. 3134.

34. Зарубин, Г.П. Гигиеническая оценка нитратов в пищевых продуктах / Г.П. Зарубин, М.Т. Дмитриев, Е.И. Приходько и др. //Гигиена и санитария. 1984. - № 7. - С. 49-52.

35. Захарченко, Г.Л. Вопросы питания в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия в Орловской области / Г.Л. Захарченко, А.В. Истомин //Гигиена и санитария. 2000. - № 5. -С. 29-31.

36. Звягинцев, А.П. Об использовании продуктов растениеводства с повышенным содержанием нитратов / А.П. Звягинцев, Г.Л. Шеховцева //Военно-медицинский журнал 1999. -№ 6. - С. 20-22.

37. Блинов, Н.П. Химическая микробиология / Н.П. Блинов М.: Высшая школа, 1989. - С. 308-314.

38. Жулдакова, З.И. Методологические аспекты гигиенической оценки безопасности малогабаритных установок для очистки бытовых сточных вод / З.И. Жулдакова, Н.А. Зайцев, О.О. Синицына, А.Е. Недачин //Гигиена и санитария. 2002. - № 2.-С. 23-26.

39. Жукова, Г.Ф. Методы определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах: обзорная информация / Г.Ф. Жукова М.: ВНИИТЭИ Агропром, 1989. - 34 с.

40. Жукова, Г.Ф. Методы определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах / Г.Ф. Жукова //Вопросы питания № 6. - 1991. -С. 55-60.

41. Жукова, Г.Ф. Способы снижения воздействия нитросоединений на организм / Г.Ф. Жукова, В.П. Дерягина, P.M. Киселева, С.А. Хотимченко //Гигиена и санитария. 1994. - № 9. -С. 15-17.

42. Жукова, Г.Ф. Содержание в продуктах питания нитратов и нитритов и оценка их поступления с пищевым рационом / Г.Ф. Жукова, В.П. Дерягина, С.А. Хотимченко //Вопросы питания. -1993. -№ 4.- С. 47-52.

43. Жукова, Г.Ф. Снижение уровня загрязненности N-нитрозаминами продуктов животного происхождения: обзорная информация / Г.Ф. Жукова, М.В. Михайлова М.: ВНИИТЭИ Агропром, 1989. - 38 с.

44. Жукова Г.Ф.Поступление нитратов в составе рациона детей младшего возраста / Г.Ф. Жукова, С.А. Филина, А.Н. Зайцев, А.Г. Мамонова //Вопросы питания. 1991. - № 6. - С. 49-53.

45. Журавлев, В.Ф.Токсичность нитратов и нитритов / В.Ф. Журавлев, М.М. Цапков // Гигиена и санитария. 1983. - № 1. - С. 62-65.

46. Зоотехнический анализ кормов (Петухова Е.А., Бессарабова Р.Ф., Холенова Л.Д., Антонова О.А.). М.: Агропромиздат, 1989. -239 с.

47. Иванова, А.С. Состояние эритроцитарной системы белых крыс при длительной нитратной интоксикации / А.С. Иванова, О.А. Пахрова, С.Б. Назаров//Гигиена и санитария. 2004. - № 1. - С. 5860.

48. Измайлов, С.Ф. Азотный обмен в растениях / С.Ф. Измайлов -М.: Наука, 1986.-320 с.

49. Измайлов, С.Ф. Клеточная организация ассимиляции и накопления нитратов в растениях / С.Ф. Измайлов // Экологические проблемы накопления нитратов в окружающей среде: тез. докл. Всес. конференции. Пущина, 1989. - С. 95.

50. Ильницкий, А.П. Нитраты как новый средовый фактор, оказывающий влияние на здоровье населения / А.П. Ильницкий // Там же.-С. 130.

51. Ильницкий, А.П. О регламентировании нитратов в сельскохозяйственных продуктах растительного происхождения / А.П. Ильницкий //Вопросы питания. 1991. № 6. - С. 12-15.

52. Ильницкий, А.П. По страницам журнала «Химизация сельского хозяйства» / А.П. Ильницкий //Вопросы питания. 1991. №6,- С. 61-62.

53. Ильницкий, А.П. Модифицирующее влияние фруктовых и овощных соков на образование канцерогенных N-нитрозосоединений вжелудочном соке человека / А.П. Ильницкий , В.А. Юрченко //Вопросы человека. 1993. - № 4. - С. 44-46.

54. Камман, К. работа с ионоселектиными электродами / К. Камман-М.: Мир, 1980.-283 с.

55. Ким, И.Н. Содержание N-нитрозаминов в копченой рыбе и консервах / И.Н. Ким, Г.Н. Ким, JI.B. Кривошеева, И.А. Хитрово //Гигиена и санитария. 2002. - № 4. - С.35-38.

56. Козлюк, А.С. Иммунный статус детей, проживающих в районе с повышенным содержанием нитратов в питьевой воде / А.С. Козлюк, Г.В. Кушнир, JI.A. Анисимова и др. //Гигиена и санитария. 1989. - № 3. - С. 19-22.

57. Колодязная, B.C. Содержание нитратов в моркови при выращивании и хранении / B.C. Колодязная, А.В. Морозова //Консервная и овощесушильная промышленность. 1983. - № 8. -С. 24.

58. Корыта, И. Ионоселективные электроды / И. Корыта, К. Штулик М.: Мир, 1989. - 272 с.

59. Красовский, Г.Н. Методические подходы к установлению максимально допустимой нагрузки нитритов и нитратов поступающих с водой и пищей / Г.Н. Красовский, Л.Я. Васюкович, Х.И. Хутсоя и др. //Гигиена и санитария. 1982. - № 4. - С. 23-24.

60. Кретович, B.J1. Биохимия растений / B.JI. Кретович М.: Наука, 1986.-503 с.

61. Кретович, B.J1. Усвоение и метаболизм азота у растений/ B.J1. Кретович М.: Наука, 1987. - 486 с.

62. Кряжимский, Ф.В. Человек в свете современных экологических проблем / Ф.В. Кряжимский, В.Н. Большаков, В.И. Корюкин // Экология. 2001. - № 6. - С. 403-408.

63. Кудеяров ,В.Н. Экологические проблемы применения минеральных удобрений / В.Н. Кудеяров, А.Ю. Кудеярова

64. Доклады симпозиумов VII делегатского съезда Всес. общества почвоведов. Ч. 6. - Ташкент. - 1985.

65. Кучма, В.Р. Оценка риска влияния факторов окружающей среды на здоровье детей и подростков / В.Р. Кучма// Гигиена и санитария. 2002. - № 4. - С. 51-53.

66. Кушаковский, М.С. Клинические формы повреждения гемоглобина / М.С. Кушаковский JL: Медицина, 1968. - 325 с.

67. Лакин, Г.Ф. Биометрия: Учеб. пособие для университетов и пед. институтов / Г.Ф. Лакин М.: Высшая школа, 1976. - 343 с.

68. Леванова, Г.Ф. Оценка качества воды с помощью биотестирования индикаторными штаммами бактерий / Г.Ф. Леванова, С.Ю. Кашников //Гигиена и санитария. 2002. - № 4. -С.68-70.

69. Либберт, Э. Физиология растений / Э. Либберт М.: Мир, 1976,- С.261-262,318-329.

70. Львов, Н.П. Ассимиляция нитратов растениями/ В кн.: Итоги науки и техники / Н.П. Львов М.: Биологическая химия, 1987. - С. 94-101.

71. Лясковская, Ю.П. Влияние нитратов на качество мясных продуктов: обзорная информация / Ю.П. Лясковская, В.М. Горбатов М.: ЦНИИТЭИ Агропром,1984. -34с.

72. Майрапетян, А.Х. О нормировании содержания нитратов в суточном пищевом рационе человека / А.Х. Майрапетян, Г.Б. Барсельянц //Вопросы питания. 2002. - № 1. - С. 21-23.

73. Макарова, Л.Г. Технологические особенности снижения нитратов в овощных блюдах / Л.Г. Макарова, А.Ф. Крюкова //Проблемы влияния тепловой обработки на пищевую ценность продуктов питания: тез. Всес. научн. конференции. Харьков.-1990.-С. 121-123.

74. Малышева, А.Г. Неучтенная опасность воздействия химических веществ на здоровье человека / А.Г. Малышева //Гигиена и санитария. 2003. - № 6. - С. 34-36.

75. Марин, С.В. Стоит ли бояться нитратов? / С.В. Марин, П.И. Сидоров //Военно-медицинский журнал. 1999. - № 6. - С. 23-24.

76. Маркарова, Е.Н. Физилология корневого питания. /Учебн. пособие. / Е.Н. Маркарова М.: Московский университет, 1989. -С. 95-104.

77. Марков, Х.М. Роль оксида азота в патогенезе болезней детского возраста / Х.М. Марков //Российский вестник перикатологии и педиатрии. 2000. - Т. 45. - № 4. - С. 43-47.

78. Матюничев, В.Б. Ферментная активность тканей крыс при интоксикации нитратами калия / В.Ю. Матюничев, Е.Н. Верещагина, Б.А. Баринов и др. //Вестн. ЛГУ, сер. 3. 1990. - № 3. С. 70-75.

79. Медико-биологические требования и санитарные нормы качества продовольственного сырья и пищевых продуктов № 5061-89.-М.: Минздрав СССР, 1989. 185 с.

80. Методика определения нитратов и нитритов в пищевых продуктах /Временные методические рекомендации. Таллин: Минздрав ЭССР, 1984. - 11 с.

81. Методические рекомендации по использованию продуктов растениеводства с повышенным содержанием нитратов /Разработаны Ильницким А.П., Иваницким A.M., Митченковым В.Т.и др. / А.П. Ильницкий, A.M. Иваницкий, В.Т. Митченков и др. -М., 1992.-23 с.

82. Методические рекомендации: Пути снижения содержания нитратов в овощах и картофеле в Сибири/Разработаны Назарюк В.М., Якименко В.Н., Прозоров А.С. и др. / В.М. Назарюк, В.Н. Якименко, А.С. Прозоров и др. . Новосибирск, 1989. - 38 с.

83. Методические указания по определению азота нитратов и нитритов в почвах, природных водах, кормах и растениях. М.: МСХ СССР ЦИНАО., 1982. - 68 с.

84. Митченков, В.Т. Минеральные удобрения и качество растительных сельскохозяйственных продуктов / В.Т. Митченков //Вопросы питания. № 6. - 1991. - С. 38-41.

85. Митченков, В.Т. Токсиколого-гигиеническая оценка нитратно-нитритной нагрузки на организм человека и методические основы ее профилактики: автореф. дисс. на соиск. учен. степ. докт. мед. наук. / В.Т. Митченков М, 1992. - 41 с.

86. Москалюк, Л.И. Уровень азотных веществ в растительных пищевых продуктах в зависимости от их кулинарной обработки и способов хранения / Л.И. Москалюк, О.М. Жуковский, Р.Ф. Зинченко //Рациональное питание. Киев, 1983. - Вып. 18. - С. 8284.

87. Мотылев, В.Д. По вопросу о возрастной нитратно-нитритной метгемоглобинемии ее профилактике: автореф. дисс. на соиск. учен, степ. канд. мед. наук. / Мотылев В.Д. Л., 1969. - 23 с.

88. Мурох, В.И. Гигиеническая оценка пищевых продуктов в условиях интенсивного применения минеральных удобрений в Белорусской ССР: автореф. дисс. на соиск. учен. степ. докт. мед. наук. / В.И. Мурох- М., 1989. 49 с.

89. Назарюк, В.М. Эколого-агрохимические подходы к проблеме нитратного загрязнений в агроэкосистемах / В.М. Назарюк, М.И. Кленова, Ф.Р. Калимуллина //Экология. 2002. - № 6. - С. 416-421.

90. Николайкин, Н.И. Экология: Учеб. для вузов /Н.И. Николайкин, Н.Е. Николайкина, О.П. Мелехова. 3-е изд., стереотип. - М.: Дрофа, 2004. - С. 169

91. Нитраты. М.: Центр международных проектов ГКНТ, 1983. -47 с.

92. Нитраты, нитриты и N-нитрозосоединения. Гигиенические критерии состояния окружающей среды. Женева: ВОЗ, 1981. - 118 с.

93. Нитраты. М.: Центр международных проектов ГКНТ, 1983. - 36с.

94. Новиков, Ю.В. Влияние нитратов и нитритов на состояние здоровья населения / Ю.В. Новиков, И.И. Окладников, Сайфутдинов, И.А. Андреев // Гигиена и санитария. 1985. - № 8. -С. 58-62.

95. Определите ль бактерий Берджи. В 2-х т.: Пер. с англ./Под ред. Дж. Хоумба, Н. Брига, П. Снита, Дж. Стейли. С. Уильямса. М.: Мир, 1997.-432 с.

96. Ю4.0пополь, Н.И. Гигиеническая значимость нитратного загрязнения объектов окружающей среды //Экологические проблемы накопления нитратов в окружающей среде / Н.И. Опополь: тез. докл. Всес. конференции. Пущино, 1989. - С. 131-132.

97. Ю5.0пополь, Н.И. Гигиеническая оценка суммарного поступления нитратов в организм человека с продуктами питания и водой: автореф. дисс. на соиск. учен. степ. докт. мед. Наук / Н.И. Опополь -М., 1990.- 34 с.

98. Опополь, Н.И. Нитраты / Н.И. Опополь, Е.В. Добрянская Кишенев: Штиинца, 1986. 114 с.

99. Опополь, Н.И. Об особенностях токсического воздействия нитратов, содержащихся в растительных пищевых продуктах / Н.И. Опополь //Вопросы питания. № 6. - 1991. - С. 15-20

100. Ю8.0 санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2001 году: Государственный доклад. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2002. -160 с.

101. Полевой, В.В. Физиология растений / В.В. Полевой М.: Высшая школа, 1989.-С. 221

102. Ш.Пенчук, Я. Проблемы определения нитрат-иона в овощах физико-химическими методами / Я. Пенчук, Ю. Халдна //Изв. АН ЭССР: Химия, 1988. 37. - № 3. - С. 201-209.

103. Петербургский, А.В. Агрохимия и успехи современного земледелия/А.В.Петербургский -Пущино, 1989.-221 с.

104. Покровский, А.А. Метаболические аспекты фармакологии и токсикологии пищи/ А.А. Покровский М.: Медицина, 19798. -184 с.

105. Прохоров, Н.И. Влияние химических средств защиты растений на среду обитания и здоровье населения / Н.И. Прохоров, Т.В. Дроздова //Гигиена и санитария. 2003. - № 4. - С. 8-10.

106. Предельно допустимые концентрации для с/х животных и основных видов сырья для комбикормов. Утверждены МЗ СССР и Гл. Гос. Ветеринарным инспектором, № 143-41-78-50. 1989.

107. Принципы гигиенической регламентации допустимого содержания нитратов в пищевых продуктах /Методические рекомендации. Составители: Ильницкий А.П., Опополь Н.И., Митченков В.Т. и др.-М., 1988.- 15 с.

108. Пругар, Я. Избыточный азот в овощах / Я. Пругар, А. Пругарова -М.: Агропромиздат, 1990. С. 56-58.

109. Раснаускайте, М.Б. Особенности отравления детей нитратами / М.Б. Раснаускайте, Р.С. Пташекас, Д.Г. Красильщиков //Педиатрия. 1990. - № 4. - С. 62-65.

110. Рахманин, Ю.А. Методологические проблемы оценки угроз здоровью человека факторов окружающей среды / Ю.А. Рахманин, С.М. Новиков, Г.И. Румянцев //Гигиена и санитария. 2003. - № 6.- С. 5-10.

111. Рахманин, Ю.А. Методологические проблемы диагностики и профилактики заболеваний, связанных с воздействием факторов окружающей среды / Ю.А. Рахманин //Гигиена и санитария. -2001. -№ 5. -С. 3-7.

112. Ревич, Б.А. Биомониторинг токсичных веществ в организме человека / Б.А. Ревич//Гигиена и санитария. 2004. - № 6. - С.26-31.

113. Рекомендации по снижению содержания нитратов в растительных продуктах питания при кулинарной и промышленной переработке /Временные методические рекомендации. Таллин, 1984. - 17 с.

114. Реутов, В.П. Изучения механизмов восстановления нитритных ионов в окись азота в крови и митохондриях печени млекопитающих: автореф. дисс. на соиск. учен. канд. биол. наук. / В.П. Реутов М., 1988. - 245 с.

115. Роома, М.Я. Изучение содержания нитритов в слюне / М.Я. Роома//Гигиена и санитария. 1991. - № 6. - С. 76-78.

116. Роома, М.Я. Модификация метода определения нитратов в пищевых продуктах / М.Я. Рома, Н.С. Калашникова //Гигиена и санитария. 1986. - № 1. - С. 57-58.

117. Роома, М.Я. Модификация экспресс-метода определения нитритов / М.Я. Рома, Е.С. Яковлева, Х.И. Хутсоя //Вопросы питания. -1980. -№ 6.-С. 71-72.

118. Рубенчик, Б.Л. Образование канцерогенов из соединений азота / Б.Л. Рубенчик Киев: Наукова думка, 1990. - 220 с.

119. Рубенчик, Б.Л. Питание, канцерогены и рак / Б.Л. Рубенчик -Киев: Наукова думка, 1979. 212 е.

120. Рымарь-Щербина, Н.Б.Экологически чистые продукты питания и сохранение здоровья населения / Н.Б. Рымарь-Щербина, А.И. Селюченко, О.И. Цыганенко //Гигиена и санитария. 1995. -№ 1.-С. 18-22.

121. Рымарь-Щербина, Н.Б. Гигиеническая оценка овощей с высоким содержанием нитратов при длительном хранении / Н.Б. Рымарь

122. Щербина, О.И. Цыганенко //Вопросы питания. 1991. - № 6. - С. 42-45.

123. Самохвалов, С.Г. Определение нитратов в продукции / С.Г. Самохвалов, В.Г. Прижукова //Химизация сельского хозяйства. 1990. - № 8. - С. 44-47.

124. Самохвалов, С.Г.Экспрессное определение нитратов в растительных тканях с использованием игольчатого ион-селективного электрода / С.Г. Самохвалов, В.Г. Прижукова //Агрохимия. 1983. - № 4. - С. 106-108.

125. Семенов, В.М. Закономерности накопления нитратов в продукции растениеводства / В.М. Семенов, В.А. Агаев, О.А. Соколов //Вестник сельскохозяйственной науки. 1989. - № 1. - С. 122-129.

126. Соболева, Е.А. О содержании и гигиеническом значении нитратов растительных продуктов /автореф. дисс. на соиск. учен. канд. мед. наук. Иркутск, 1969. - 21 с.

127. Соколов, О.А. Нитраты в окружающей среде / О.А. Соколов, В.М. Семенов, В.А. Агаев- Пущино 1990. -317 с.

128. Соколов, О.А. Нитраты под строгий контроль / О.А. Соколов //Наука и жизнь. 1989. № 3. - С. 69-72.

129. Соколов, О.А. Атлас распределения нитратов в растениях / О.А. Соколов, Т.В. Бубнова Пущино, 1989. - 68 с.

130. Суржиков, В.Д. Здоровье человека и факторы окружающей среды в индустриальных городах / В.Д. Суржиков, A.M. Олещенко, Д.В. Сурживок, И.Ю. Ксенофонтова, М.С. Лапшин //Гигиена и санитария. 2003. - № 6. - С. 85-87.

131. Сухолотюк, И.С. Содержание нитратов в овощах не требующих кулинарной обработки / И.С. Сухолотюк, Н.И. Валентинова //Проблемы индустриализации общественного питания страны: Тез. докл. 2-й Всес. научн. конференции. Харьков, 1989. - 366 с.

132. Тахиров, М.Т. Материалы гигиенического обоснования допустимых остаточных количеств азот нитратов в бахчевых и овощных культурах / М.Т. Тахиров, Б.А. Пулатов, Ю.У. Хасанов //Гигиена и санитария. 1982. - № 10. - С. 10-12.

133. Терентьев, В.И. Перспективы совершенствования технологии обеззараживания воды поверхностных источников / В.И. Терентьев, В.К. Гриценко, С.А. Лопатин, Л.Ф. Кирьянова, К.К. Раевский, В.П Фоканов, А.В. Шалларь //Гигиена и санитария. -2002.-№3.- С. 29-33.

134. Тулупов, В.П. Токсико-гигиеническая оценка нитратов в пищевых продуктах / В.П. Тулупов, Е.И. Приходько, Э. Фомиченко //Вопросы питания. 2001. - № 2. - С. 32-34.

135. Тутельян, В.А. Ферментативные механизмы защиты организма от чужеродных веществ в пище / В.А. Тутельян //Вестник АМН СССР. 1984. - № 8. - С. 84-89.

136. Уильяме, У. Дж. Определение анионов / Дж. У. Уильяме М.: Химия, 1982.-С. 118-142.

137. Урбах, В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях / В.Ю. Урбах М.: Медицина, 1975. -295 с.

138. Физиология растений: учебник для студ. вузов / Н.Д, Алехина, Ю.В. Балнокин, В.Ф. Гавриленко и др.; Под ред. И.П. Ермакова. -М.: Издательский центр «Академия», 2005.

139. Флауменбаум, Б.Л. Основы консервирования пищевых продуктов. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 272 с.

140. Химический состав пищевых продуктов /Под ред. И.М. Скурихина, В. А Шатерникова М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984. - 328 с.

141. Химический состав пищевых продуктов /Под ред. И.М. Скурихина, М.Н. Волгарева. М.: Агропромиздат, 1987. - Кн. 2. -С. 344-347.

142. Ходжаев, В.Г. Влияние кипячения воды на содержание нитратов / В.Г. Ходжаев //Гигиена и санитария. 1987. - № 11. - С. 68-69.

143. Цыганенко, О.И. Гигиенический мониторинг нитратов в пищевых продуктах / О.И. Цыганенко, H.JI. Емченко, B.C. Лапченко, Н.Б. Рымарь-Щербина, О.Я. Слободянин //Гигиена и санитария. -1990.-№9.-С. 42-44.

144. Цыганенко, О.И. Определение тест-модели для оценки уровней воздействия нитратов на организм / О.И. Цыганенко, B.C. Лапченко, Н.Л. Емченко, Н.Б. Рымарь-Щедрина, Н.А. Гриль //Гигиена и санитария. 1993. - № 5. - С. 29-31.

145. Цыганенко, О.И. Метаболизм нитратов в организме человека и животных при их поступлении с питьевой водой и пищей / О.И. Цыганенко, М.В. Набока //Гигиена и санитария. 1989. - № 4. -С. 55-59.

146. Цыганенко, О.И. О путях снижения содержания нитратов в продуктах питания / О.И. Цыганенко, Н.Б. Рымарь-Щербина //Гигиена и санитария. 1991. - № 5. - С. 38-42.

147. Цыганенко, О.И. Гигиеническая оценка мяса свиней, получавших повышенные количества нитратов / О.И. Цыганенко, Г.А Хмельницкий, А. Бокор, B.C. Лапченко, Н.Л. Емченко, Н.А. Гиль //Вопросы питания № 6. - 1991. - С. 47-49.

148. Ченуша, В.П. О состоянии здоровья детей дошкольного возраста в регионе с повышенным уровнем нитратов и нитритов в окружающей среде / В.П. Ченуша, А.С. Коалюк, А.А. Донос //Здравоохранение. 1990. - № 6. - С. 20-22.

149. Чяпкявичене, Э.С. Как уменьшить содержание нитратов и нитритов в овощах / Э.С. Чяпкявичене //Гигиена и санитария. -1988.-№3.- С. 18.

150. Шепелев, А.Ф. Товароведение и экспертиза мясных, молочных и рыбных продуктов/ А.Ф. Шепелев, И.А. Печенежская, О.И. Кожукова, А.С. Туров Ростов-на- Дону. - 2002. - 61-62 с.

151. Ames, В. Dietaru carcinogens and anticarcinogens / В. Ames //Science. 1983,- Vol. 221.-P. 1256-1262.

152. Archer, M. C. Hazard of nitrate, nitrite and N-nitrosamines in human nutrition / M. C. Archer //In: Nutritional toxicology. /Ed. Hathcock I. N., № 4. Academic Press, Inc. 1982. - Vol. 1.1. - Chap. 9. - P. 327381.

153. Arillo, A. Nitrite binding to cytochrome P-450 from liver microsomal enzymes / A. Arillo, P. Mensi, G. Pirozzi //Toxicol. Lett. 1984. -Vol. 21., №3.-P. 369-374.

154. Bartholomew, B.A. The pharmacology of dietary nitrate and the origin of urinary nitrate / B. A. Bartholomew, M. J. Hill //Fd. Chem. Toxic. -1984. Vol. 22, № 10. - P. 789-795.

155. Bartsch, H. Inhibitors of endogenous nitrosation. Mechanisms and implications in human cancer prevention / H. Bartsch, M. Ohshima, B. Pignatelli //Mut. Res. 1988. - Vol 202, № 2. - P. 307-324.

156. Bergthaller W. EinfluP der Verarbeitung und der kuchentechnischen Zubereitun g auf den Nitratgehalt von Kartoffelerzeugnissen / W. Bergthaller, H. D. Ocker //Landwirt. Forsch. 1985. - № 41.-S. 288-297.

157. Brokhoven-van, L. W. role of various food products in the formation of N-nitroso compounds under acidic conditions / L. W. Brokhoven-van, W. M. F.Jongen, J. A. R. Davies M. J. S., Boekel van //IARS Sci. Publ. 1987. - № 84. - P. 360-363.

158. Buldursson, S. Analjsis of nitrate in food extracts using a thermostable formate linked nitrate reductase enzyme system / S. Buldursson, K. Krisijansson //Biotechnology Technigues. 1990. - Vol. 4, № 3. -P. 211-214.

159. Carlson, M. P. Determination of nitrate in forages by using selective ion electrode: collaborative study / J. Cerny, S. Matousck //J. Assoc. Off. Anal. Chem. 1986. - Vol. 69, № 2. - P. 296-298.

160. Cerny, J. Chemiluminiscencni stanoveni dusicnanu, dusitanu a nitrosaminu a moznosti jeno zavedeni hugienicke sluzbe / J. Cerny, S. Matousck //CS hygiena. 1987. - 32, № 6. - P. 368-376.

161. Combs, G. F. The role of selenium in nutrition / G. F. Combs, S. B. Combs //Academic Press, INC. Harcourt Brace Jovanovich, Publishers Orlando San Diego New York Austin Boston London Sydney Tokyo Toronto.- 1986,-P. 327-525.

162. Davison, W. Interference studies in the batch determination of nitrate in freshwater by reduction with cadmium to nitrite / W. Davison, C. Woof//Analyst. 1979. - Vol. 104, № 1238. - P. 385-390.

163. Eggers, N. J. High-pervomance liquid chromatographic method for the determination of nitrate and nitrite in cured meat / N. J. Eggers, L. Dawn, D. L. Cattle //J. Chromatog. 1986. - Vol. 354. - P. 490-494.

164. Emig, J. Reduction of nitrate and nitrite in vegetable juices priorto lactic acid fermentation / J. Emig, C. et. Al. Meisel //Food Biotechnol.- 1990. Vol. 4, № 1. - P. 575-577.

165. Fletcher, J. R. Effect of cooking on the nitrate levels in vegetables / J. R. Fletcher//Nutr. Health. 1987. - 5 (1-2). - P. 61-63.

166. Follet, M. J. Determination of nitrite and nitrate in meat products / M. J. Follet, P. Rateliff //J. Sci. Fd. Agric. 1963. - Vol. 14. - P. 138144.

167. Fox, J. B.Effect of residual ascorbate on determination of nitrite in commercial cured meat products / J. B. Fox, R. C. Doerr, R. Gates // J. Ass. Off. Anal. Chem. 1984/ - Vol. 67. - P. 692-697.

168. Heijden C. A. Nitrates in drinking water: health effects and risk / C. A. Heijden, G. K. Montizaan //Hum. Toxicol. 1988. - Vol. 7, № 1.- P 53-54.

169. Hepher, J. M. Zinc /Chromium (II) reduction for nitrate determination in agricultural materials by colometry or ion-selective electrode / J. M. Hepher, H. R. Alexander, J. Dixon //J. Sci. Food Agric. 1989. -49.-P.-379-383.

170. Knight, Т. M. Estimation of dietary intake of nitrate and nitrite in Great Britain / Т. M. Knight, D.Forman, S.A. Dabbagh, R. Doll // Fd.& Chem. Toxicology. 1987. - 25. - P. 277-285.

171. LEE, K. Nitrate, nitrite balance and de novosynthesis of nitrate in humans consuming cured meats / K. LEE, J. Z. Greger, J. R. et. Al. Consaul //Amer. C. Clin. Nutr. 1986. - Vol. 44, № 2. - P. 188-194.

172. Norwitz, G. Interference of ascorbic and isoascorbic acids in the spectrophotometric determination of by the diazotization couplingtechnigue / G. Norwitz, P. N. Keliher // Analyst. 1987. - Vol. 112. -P. 903-906.

173. Mansouri, A. M. Review: Methemoglobinemia / A. M. Mansouri //Amer. J. of the Med. Sci. 1985. - Vol. 289, № 5. - P. 200-241.

174. Paulus, K. Effect of heat treatment on the guality of cooked carrots / K. Paulus, I. Saguy //J. Food Science. Vol. 37. - P. 409-452.

175. Phillips, W. E. J. Naturally occurring nitrate and nitrite in food in relation to infant methaemogiobinaemia / W. E. J. Phillips //Food Cosmet. Toxicol. 1971. - Vol. 9, № 2/ - P. 219-223.

176. Sweetsur, W. M. Ion selective method for the determination of nitrate in grass and clover / W. M. Sweetsur, A. C.Wilson // Analyst. 1975. - Vol. 100.-P. 485-488

177. Variquaux, P. Tichitcal note: loss of nitrate from carrots during / P. Variquaux, F. Variquaux, L. Tichit //J. Food Technol. 1986. - Vol. 21.-P. 401-407.

178. Walters, C. L. A rapid method for the determination of nitrate and nitrite by chemiluminescence / C. L. Walters, P. N. Gillatt //Food Additiv. And Contamin. 1987. - Vol. 4, № 2. - P. 133-140.