Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биосинтез липидных компонентов мембран в клетках печени линейных и гибридных крыс

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Биосинтез липидных компонентов мембран в клетках печени линейных и гибридных крыс"

У ~ г а ъ

\1 V1-'

ХАРЬКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ДОТОВИШ ВЖТОРИЯ ЛЕОНИДОВНА

БИОСИНТЕЗ ЛШОДНЫХ КОМПОНЕНТОВ МЕМБРАН. ' В КЛЕТКАХ ПЕЧЕНИ ЛИНЕЙНЫХ И П1ЕРИДНЫХ КРЫС

03.00.13 - Физиология человека и животных

00.• 00.15 - Генетика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Харьков - 1992

Диссертация выполнена в НИИ биологии Харьковского государственного университета.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор В.Г.Шахбазов

Научный консультант: кандидат биологических наук А.И.Божков

Официальные оппоненты: г^ктор биологических наук, профессор В.А.Бондаренко (Институт проблем криобиологии и криэмедищшы АН Украины, г.Харьков)

кандидат сельскохозяйственных наук М.Е.БрёславскиЯ (Украинский НИИ шелководства УААН, г.Мерефа)

Ведущая организация: Одесский государственный университет

Защита состоится " /ъг&оаь/Л 1993 г. в ■/5 _ часов на заседании специализированного совета К 053.06.07 Харьковского государственного университета (310077, г.Харьков-77, пл.Свободы, 4, аудитория 3-15).

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Харьковского госуниверситета.

Автореферат разослан "Я.К"^гксс^^ 1992, г.

Ученый секретарь

специализированного совета, /

кандидат биологических наук Ши— А.В.Некрасова

РОССИЙСКАЯ

ГОСУй'" - иЕННАЯ

БИЫтОТЕК^

ХАРАКЙРИСШКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение природы адаптации организмов ' к разнообразным факторам среди является одной из основных проблем современной биологии. Эта проблема не* может бить решена без учета генетических особенностей организма. Показано, что организмы с разнили генотипами обладают различной устойчивостью к стрессовым факторам (Шахбазов, I960 ; Шерешевская и др., 1977 ; Шахбазов и др. 1978 ; RuLderetaL., 1989).

Важную роль в механизмах адаптации играет клеточные мембраны. Особую актуальность приобретает изучение роли липидов в адаптивных реакциях клетки, так как они являются важнейшими структурными компонентами биологических мембран. В настоящее время интенсивно изучается фосфшшидний "состав биологичосрих мембран (Дят-ловицкая и др., 1973 ; Леменовская и др., 1976 ;Loni et aL, 1983 ; Singh at aL., 1988; Haranski, 1988). йиесте с тем, нейтральные-липиды, принимакщне участие в сформировании, структуры мембран, изучены недостаточно, Не выяснены механизмы липицного обмена, в частности, внутриклеточный транспорт липидов при различных функциональных нагрузках..'

Обмен липидов в организме подвержен влиянию различных экзогенных факторов ( Hutson et aL, 1985 ; Иванов и др., 1986 ; Hazel el d., 1986 ; T.'j burg ef ¿¡£.,1988 ; Коломийцева, 1989, Ми-"рахмедов и др. ,1990). Влесте с тем,в литературе есть данные, которые указывают на го,что содержание липидных компонентов в организме обусловлено,как средовшга так и генетическими факторами (Кучияскене и др. ,1986 ; Doucet et ¿1., 1987)'.

Исследование механизмов-гетерозиса позволило накопить большое количество данных по метаболизму многих веществ у гибридов и их родительских форм (Чечеткин, 1968 ; Карелина, 1974 ; Сарсенов и др.,1976 ; Божков, 1981; Шерешевская и др., 1984). Однако, генетические аспекты липидного обмена, особенно у животных организмов, остаются одной из наименее изученных генетических проблем.

Цели и задачи исследована*?. Целью работы явилось исследование генетических особенностей липицного обмена в клетках печени и зависимости обмена липидов от (функционального состояния исследуемых клеток.

Исходя из цели, были определены сяецуюцие задачи:

1. Изучить синтез в транспорт липидных компонентов клеток печени крыс лишш Вистар при регенерации и после локальной гипертермии печени.

2. Исследовать особенности липидного обмена в клетках печени крыс о разними генотипами.

3. Исследовать влияние ксенобиотика (препарат амниоцеи) на липидный обмен в клетках печени крцс с разными генотипами.

4. Изучить связь липиднс^о обмена шкросом с активностью ммбраносвязанного фермента глюкозо-6-фосфатазы клеток печени с учетом генотипа организма к функционального состояния органа.

Научная новизна. Установлено, что такие функциональные нагрузки как частичная гепагэкгомия и локальная гипертермия печени приводят к увеличению содержания общих липидов и изменению соотношений манду различим® фракциями липидов микросомальних мембран. При этих функциональных нагрузках происходит накопление липидов во фракции цитозоля.где содержание общих липидов в 2,3 раза больше в клетках регенарируищей печени и в 1,4 раза больше в клетках печени после локальной гипертермии по сравнению с таковым интактной печени. Показано, что липидпереносящиа белки при данных функциональных нагрузках связывай в 2 раза больше липидов по сравнению с нормой.

Обнаружено, что изменение содержания липидов в микросомах регенерирупцей печени и печени после локальной гипертермии сопровождается изменением функциональной активности мембран эндо-плазмагического ретикулума, вираиакщемся, в частности, в различной активности мембраносвязанного фермента глюкозо-6-фосфатазы.

Выявлено, что микросомальные мембраны печени крыс с разными генотипами характеризуется различным уровнем содержания и удельной радиоактивности липидов» Гибриды содержат меньшее количество общих липидов шкросом по сравнению с крысами линии Август и не отличаются по этому показателю от крыс Линии Вистар. Обнаружены генетические различия в изменений липидного обмена ми!фо-сом в огвег на действие ксенобиотика (препарат амнлоцен).

Основные положения4 виносимые на защиту:

I. Функциональные на^узки, такие как частичная гепатэкто-мия (13 часов после операции) и локальная гипертермия (45°С, 10 минут) приводят к значительным изменениям липидного обмена в клетках печени крнс.

2. Генотип оказывает внияние на липиднцй обмен микросом клеток печени крыс.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований имеет значение для раскрытия механизмов адаптации организма к разнообразным факторам среды и, в частности, пониманию адаптивных возможностей организмов с разными генотипами.

Обнеруженние изменения липидного обмена в клетках печени при функциональных нагрузках используются при испытании новых медицинских препаратов и могут быть учтены при оценке липидного обмена в случав патологии организма.

Апробация работи. Материалы диссертации доложены и обсукдены на Всесоюзной научной конференция по вспомогательным лекарственным препаратам (Харьков, 1982), па конференциях молодых ученых • Харьковского госуниверситета (1984, 3906), на У1 съезде Украинского общества генетиков и селекционеров ш,Н.И.Вавилова (Полтава, 1992).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ и одно изобретение.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит иэ введе-' ния, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, трех гаав экспериментальной части, заключения, выводов, списка литературы, содержащего 204 наименования. Работа изложена на • 138 страницах, включает 9 рисунков и 22 таблицы.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования компенсаторно-приспособительных реакций, возни- кающих в ответ на повышение функциональной нагрузки но клетки, проводили на клетках регенерирующей печени и печени после локальной гипертермии крыс линии Вистар. Часть экспериментальных животных за 13 й 23 часа до забоя подвергали частичной гепатэктоыии с удалением двух третей печени по методу ( И:9Ч'т$ et а.1., 1931). Влияние локальной.гипертермии на лшшдный обмен клеток печени

изучали на разработанной нами модели воспалительного процесса (Божков и др., 1989).

С целью исследования динамики удельной радиоактивности липи-дов в клетках печени контрольных и опытных животных за 30, 60 и 90 минут до забоя им вводили вйутрибртеиннош 5,55 МБк ^С-апета-та натрия на 100 г массы тела.

Изучение генетических особенностей липяцного обмена микросом клеток печени крыс проводили с использованием линейных животных и гибридов первого поколения, йбриды получали при скрещивании линии Впсгор (материнская форма) с линией Август (отцовская форма).

Бри исследовании влияния амнпоцона на липидный обмен шкросом клеток печени крыс линии Вистар и линии Август препарат вводили опытной группе подкокно в дозе 0,6 ш на 100 г массы тела за 24 часа до забоя животных.

Всего в экспериментах было использовано около 900 крыс обоего пола. Животных забивали декапиташей.

Из гомогенога моток печени животных: вшаляли ядра, микросо-ми, цитозоль, липидпереносящив белки. Ядра выделяли, как описано ( ßLobet et al., 1968). Выделение микросоы проводили методом дкффэ-ренпиального центрифугирования (Мэдди, 1979). Постмикросомадьнуо фракцию, полученную в результате центрифугирования при 105 ООО <j , использовали как фракцию цитозоля. Липидпереносящив белки выделяли из цитозоля, кгг описано (Гаппаров, 1980).

В выделенных фракциях: ядер, шкросом, цитозоля и липидпере-носящих белков проводили количественное определение белка (Lowry, 1951) и экстракцию липидов (Кейтс, 1975).

Липиды фракционировали методом тонкослойной .хроматографии на силикагелевых пластинках. Количественное ощ>еделение общйх липидов, фосфолипидов, холестерина, неэсгерифицированных жирных кислот и триглицеридов проводили, как описано (Грибанов и др.1975). Количественное определение рашгичных фракций фосфолипидов. (фос-фатидшшнозитидов , фосфатидилхолша, фосфатидилэтаноламина) проводили по неорганическому фосфору, как описано (Кейтс, 1975).

Определение удальной радиоактивности общих липидов и различных фракций липидов проводили с использованием сщштйлляционной жидкости на сцинтилляпионном счетчике ультра-Бета С LKB, Швеция).

Определение активности фермента глюкозо-6-фэсфатазы проводили в 0,1 мл суспензии микросом, как описано (/Uvares et &L, 1979). Активность фермента выражалась в микромолях неорганического фосфора на I № белка шкросом за определенное время инкубации при 37°С. •

Статистическую обработку полученных результатов проводили по методу Стыздекта-Фишера (Рокицкий, 1973) с использованием ЭВМ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЗДЫШЕ

Обмен липидов в клетках печени крнс линии Висгар при различных: функциональных состояниях

Исследование липидного обмена в клетках интакгной, регенерирующей печени и печени после локальной гипертермии показало, что регенерирующая печень и печень после локальной гипертермии характеризовались более высоким содержанием общих липидов микросом по сравнению с интактной печенью, что было обуслоалено увеличением содержания рааличных фракций липидов макросом (табл.1).

Таблица I

Содержание липидов в микросомах клеток интактной, регенери-руыцей печени (13 л 23 часа после операции) и печени после локальной гипертермии (45°С, 10 минут)

Содержание липидов (мкг па мг белка) в микросоыах клеток

Фракции

липидов и,;ТаКГЯОЙ пэ_

чени часов после _-_операции

Регенерирудцей печени

23 часа пос ле операции

Печени после локальной ги-" пертермии

X

2

3

4

5

Общие лйпиды

Холестерин

Неэстери-фицировая-нне жирные кислоти

Тригли-церидн

325,4+4,5 (20) Рх 2< 0,05 Р1'3<0,05 Р1|'4<0,05

16,9+0,9

(17) Р1)4<6,05

17,2*1,1

Рх 2<9^»05 Р1'3< 0,05

32,1*3,6

(18) Р1<2<0,05

383,5+4,1

(17) Р2)4<0,05

Р2(4<0,05

24,0+1,5 (14)

432,9+20,1 Р3>4(Л,05

19(4±1,0 Р3(4<0,05 25,3+1,8

41,2+2,8 37,0+5,3 (15) (6)

510,9+13,6 (4)

23,7+0,7 (4)

22,7+2,3 (5)

37,4±3,1 (4)д

2

Продолжение таблиц« I

_I 2_ 3_4_5_

Общие фос- 184,5+7,1 207,9+14,0 241,7+13,3 266,1+13,1 фаяипиды (17) (15) (7) (4)

Рх 3< 0,05 РГ14<0,05

Примечание: В этой таблице и во всех последующих таблицах;

1. В скобках указано количество повторов.

2. Р дано только для тех случаев, где Р< 0,05.

Обнаружено, что микросомалыше мембраны меток печени после локальной гипертермии отличались самым высоким уровнем содержания общих липицов.

Исследование фосфолипидного состава микросом свидетельствует о том, что уровень фосфатидилхолина более чем в 2 раза выше уровня фосфатидклэтаналашта в метках интактной и регенерирующей печени, что согласуется с данными литературы ( А1$еИ. , 1973). В случао локальной гипертермии в микросомах произошла значительное увеличение содержания фосфатидилхолина по сравнен™ с таковым в клетках интактной и регенериругацей печет.

Исследование уровня удельной радиоактивности (30-минутная экспозиция мечения) липидных компонентов в шкросомах клеток печени при различных функциональных состояниях обнаружило изменение уровня удельной радиоактивности некоторых фракций липядов в микросомах клеток регенерируюцей печени (неэстерифицированные жирные кислоты, триглицериды, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламш) и клеток печени после локальной гипертермии (фосфатидилинозитиды, фосфатидилэтанолашн) по сравнению с интактной печенью.

Изучение динашки удельной радиоактивности общих липицов в микросомах интактной и регенери^уэдей печени показало:

1. В микросомах клеток интактной печени удельная радиоактивность липицов уменьшалась к 60-ти минутам по сравнению с 30-ти минутной экспозицией, оставаясь на том же уровне до 90 минут,

2. .В микросомах клеток регенериругацей печени удельная радиоактивность липидов оставалась на одном уровне в течение 90 минут.

Известно, что в эндоплазматическом ретикулуме печени осу-щостатяется синтез различных липидных компонентов (1/ап баЫе 1977 ; 6а ¿с/пег е/ 1985 ; Кет Ьаг£ еЫ.,1Э87 {«Ы-,

1987). Из микросом липиды транспортируются в другие структуры клет-

ки (\ЛЛ"г12 е^ а/-.,1972). Межмембранний перенос липицов может осуществляться с помощью липидпереносящих балков цитозоля. Исследование нами лилидных компонентов, содержащихся во фракции цитозоля, показало, что в цитозоле обнаруживаются как нейтральное липиди, так и фосфалилиди. Сравнительный анализ содержания общих лппидов в цитозоле клеток печени при различных функциональных состояниях выявил, что содержание общих липидов в цитозоле выше в клетках регенерирувдей печени и печени после локальной гипертермии по сравнению о таковым интактной печени (табл.2).

Таблица 2

Содержание липидов в цитозоле клеток интактной, регенерирующей печени (13 часов после операции) и печени после локальной гипертермии (45 С, 10 минут)

Фракции липидов

Содержание липидов (мкг липидов на мг белка) ___в цитозоле клеток_

Интактной печени

Регенерирующей печени

Печени после • локальной гипер_терши_

Общие липиды

Холестерин

Кеэстерифи-цярованные жирные кислоты

Триглице-РВДЫ

Общие фос-фолипиды

32,59^5,77

(14) Р1 2-г0,05 Р1|3с0,05

3,29+0,23

(30) Рх 2<0,05

14,23+1,30

(И) Рг 2<=0,05

40,14+2,97

(13)

Р1 2<:0,05

13,93+1,26

•(Ю)

Рг 2с0 ,05

Р'з'.з*0'05

2

233,49+22,49 (8) Р2#3<0,05

7,56+0,64 ( V) Р2 3<0,05

31,50+2,63

(9) Р2 з<0,05

359,50+19,37

Р2>3Й,05

33,50+2,32 (8) Р2>3сО,05

3

133,94+14,12 (5)

3,60+0,36 (б)

13,04+3,90 (5)

50,50+8,30 (4)

24,36+3,27 (Б)

Регенерирукцэя печень отличалось самым высоким уровнем содержания общих липидов в цитозоле, что было обусловлено увеличением содержания всех исследуемых фракций липидов, особенно нейтральных липидов. Установлено, что содержание триглицерпцов в ци-гозояе регенерирующей печени в 4 раза превосходило этот показатель в цитозоле интактной печени.

Ряд исследователей при изучении связи активности липидперено-сящих белков с (функциональным гтстояшем клетки обнаружили повышенную скорость обмена между брганелламм опухолей и наличием-в цитозоле гепатом неспецифического фосфолипвдпереносящего белка (Тимофеева, 1978 ; РоогЫиЬ eíaL., 1980). В наших исследованиях определение содержания липидов в липидпереносящих белках клеток интактной, регенерирующей (13 часов поело операции) печени и печени после локальной гипертермии (45°С, 10 минут) показало, что в регенерирующей печени и печени после локальной гипертермии этот показатель увеличивается в 2 раза по сравнению с ингакгной печенью, что, вероятно, объясняете: увеличением степени связывания липидов белками цитозоля и усилением транспорта липидннх компонентов из места . их синтеза в другие структуры клетки при данных функциональных нагрузках.

Определение содержания липидов в ядрах клеток интактной, регенерирувдей печеш! и печени посла л окать ной гипертермии обнаружило, что они не различались манду собой по данному показателю.

Таким образом, проведенные исследования липидного обмена в клетках печени при различных функциональных состояниях показали, что при регенерации и после локальной гипертермии происходит . увеличение количества липидов в микросомах, где идет их синтез, значительное увеличение липидов в цитозоле, липидпереносящих белках, участвующих в транспорте липидов, при сохранении количества липидов в ядрах на уровне контроля.

Генетические особенности липидного обмена микросом клеток печени крыс

Вопрос о том, в какой степени генетические особенности организма проявляются на структурно-функциональной организации клеточных мембран, практически не изучен. Поэтому представляло интерес исследовать л.лидный обмен в микросомальных мембранах клеток печени линейных и гибридных животных. У исследованных нами объектов количество липидов в мембранах составило 40$ по

-Ю-

отношению к белку, что согласуется с данными литературы (Богач и др., 1981). Определение количества общих липидов в микросомах, печени крнс с разними геиотипаш показало, что гибриды содержали меньшее количество общих липидов по сравнению с крысами линии Август и не отличались по этому показателю от крыс линии Вистар. Обнаруженная разница в содержанки общих липидов между гибридами и крысами линии Август обусловлена фракциями неэстерифицирован-ных жирных кислот и фосфолипицов и, в частности, фракциями фос-фатидилхолина и фосфатидилэтаноломина. Показано, что линейные животные не различались между собой по содержанию общих липидов

МШфОСОМ,

Анализ уровня удельной радиоактивности липидов микросогяль-ных мембран у ирис с разными генотипами позволил обнаружить, что уровень удельной радиоактивности общих липидов у крыо линии Август превышал таковой у крыс линии Вистар и гибридов, которые между собой не различались по этому показателю. Таким образом, было обнаружено, что гибридные животные отличались по содержанию и уровню удельной радиоактивности общих липйдов мякросомальннх мембран от крыс линии Август. Линейные животные, не обнаружив различий в содержании общих липидов макросом, характеризовались, однако, различным уровнем удельной радиоактивности общих липидов микросом в клетках печени. Следовательно, можно предположить, что животные с разными генотипами характеризуются различной интенсивностью липидного обмена мияросомальннх мембран клеток печени.

Как отмечалось ранее, на липидный обмен может влиять целый ряд факторов. Исследование влияния ксенобиотиков, затрагивающих липидный обмен(с учетом особенностей влияния генетических факторов на эти процессы, может являться одним из подходов в изучении взаимоотношений факторов среды и генома организма. Выбранный нами .для исследования препарат амниоцен обладает мембранотроп-ным действием, что било доказано в наией лаборатории на мембранах различных типов.

Обнаружено, что амниоцен не' приводил к изменению уровня обоих липвдов в микросомах по сравнению с контролем у крыс двух генетических линий Вистар и Август (табл.З). •

Однако, крысы разных генетических линий проявили различную чувствительность к действию препарата амниоцен на содержание в

Таблица 3

Содержание дииицов (мкг на мг белка) в микросомах клеток печени крыс линии Вистар и Август в контроле и при введении препарата амниоцен

Фракции липидов

В;стар

Август

Контроль

Опыт

Контроль

Опыт

402,3+17,1 Общие (ЮТ

липиды

Холестерин 20,9+1,4 (10)

Неэстерифи- 21,4+1,1 цированные , жирные 1

кислоты Р < 0,05

431,3+29,4 412,6+11,6

(?)

Ш

Триглице- 32,9+2,0.

риды

(Ю)

23,4+1,6 23,1±1,1

(4) (10)

27,6+2,5 23,1+1,5 (4) (10)

19,9+4,4 38,6+4,9 (4) (8)

409.4+24,6 (4Т

20,8+1,7

(4) 24,1+2,3 (4)

24,5+1,4 (А)

0,05

Общие йос- 233,7+15,0 253,8+20,6 257,1*9,4 фолипиды (д^" ^

Р < 0,05

222,4+6,5 (Ю) (4)

Р< 0,05

микросомадьных мембранах фракции общих фосфолипидов и неэсгерифц-цированных жирных кислот (табл.3).

■ Показано, что удельная радиоактивность общих липидов микро-сом клеток печени у крыс линии Август выше чем у крис линии Вис-тар, Этот же характер сохранялся и под влиянием амниоцена, который снижал уровень удельной радиоактивности общих липидов микро-сом клеток печени крас обеих генетических линий. При этом препарат не приводил к изменению уровня удельной радиоактивности не-эстерифицированных жирных кислот, триглицеридов, холестерина микр'осом как у крыс линии Вистар, так и у крыс линии Август, но вызывал снижение уровня удельной радиоактивности фосфатидил-холина и фосфатидилэтаноламина в микросомах клеток печени крыс линии Вистар, не влияя на этот показатель у крыс линии Август.

Обнаруженные генетические различия по ряду показателей в ответ на действие амняоцеяа обусловлены, по-видимому, использованием у крыс линий Вист ар и Август различных метаболических путей формирования липидного состава микросом.

Исследование активности фермента глюкозо-б-фосфатазн в микросомах клеток печет крыс при различных функцио-нальнцх СОСТОЯ1ШЯХ, в зависимости от генотипа и под влиянием препарата амнноцен

Известно, что молекулы липидов принимают участие в регуляции активности мембраносвязанпых ферментов (Бурлакова, 1977 ; Бергельсон, 1982). В литературе имеется сведения об изменении лугпидного состава и активности фермента глюкозо-6-фосфатазы в микросомах печени крыс при изменении метаболической ситуации в организме ( б-аг| 1985). Епюкозо-б-фосфатаза является одним

из ключевых ферментов глюконеогенеза. Ферменты глтеонеогенеза отличаются большой сложностью регуляции, что связано с адаптивным значением'глкжонеогенеза и с необходимостью часто менять активность данных ферментов при изменении метаболической ситуации в организме (Гребенникова и др., 1980). Проведенные нами исследования лшгациого обмена в микросомах меток печени крыс линии Ейстар ври различных функциональных состояниях показали, что регенерирунцая печень и печень после локальной гипертермии характеризуются более высоким уровнем содержания липидных компонентов в микросомах по сравнению с интактной печенью. Исследование динамики активности фермента глюкозо-б-^-осфатазы в микросомах клеток печени крнс линии Вист ар при различных функциональных состояниях обнаружило, что активность фермента в микросомах регенерирующей печени и печени после локальной гипертермии во всех исследованных временных точках ниже таковой в микросомах клеток интактних животных (рио,1).

Таким образом, как в случае регенерирующей печени, так и печени после локальной гипертермии иаблвдались структурно-функциональные изменения мтаросомальных мембран го сравнению с интактной печенью, выражапциеся в увеличении содержания липидных . компонентов и угнетении активности мёмбраносвязанного фермента глюкоз о-6-фосфатазы.

к

л

а,

&

л ь о о к и к н ¡4

4.0

3.0 -

2.0 -

1.0.

1

V х 1 ч

/-К' .И

V л

у

5 10 15 20

Время, мин.

Рис.1. Активность глюкозо-6-с$осфатазц в микросомах интактной (I).регенерирующей (2) печени Г13 часов после операции) и после локальной гипертермии (3.) печени (45°С, 10 минут)

Проведеш-ше нами иссяёдования динамики активности глюкоз о-6-фос$атазы микросом клеток печени крыс двух генетических линий и их гибридов позволили обнаружить различный временной характер активности фермента у этих животных. Так, при 5-минутной инкубации фермента с субстратом его активность одинакова и у линейных и у гибридных животных. При увеличении времени инкубации активность глюкозо-6-фосфатазы у крыс линии Вистар через 10, 15 и 20 минут выше по сравнению с таковой микросом крыс линии Август и гибридов. Следовательно, микросомы печени крыс линии Вистар и Август различались между собой по активности глюкозо-6-фосфатазы, микросомы гибридов проявляли такой же характер в активности фермента, как и микросомы крыс линии'Август. Таким

образом, в результате исследования обнаружено одинаковое содержание обших липидов в микросомах печени линеРннх животных, но различная активность глюкозо-6-фосфатззи в микросомах печени этих животных, тогда как микросомы печени крыс линии Август и гибридов имели различное содержание обиих липидов и одинаковую активность исследуемого фермента. Отсутствие прямо? корреляции между активностью глгкозо-6-фосфатазы и содержанием обших липидов в мембранах клеток печени крыс разных генотипов, может бить связано о тем, что на этот показатель оказывает влияние содержание отдельных фракций липидов И скорость их обмена. Содержание и скорость обмена различных фракций липидов могут формировать генетичесзад обусловленный липидный состав мембран, опре-деяяидий их функциональную активность.

Изучение активности фермента глшоэо-6-фосфатазы в микросомах, выделенных из меток печени крыс линии Вистзр после введения ям амниоцена»показало, что через 10,15,20 минут после начала инкубации фермента в составе шкросом с субстратом наблюдалось снижение активности этого фермента в опытном варианта по сравнению с контрольным. Таким образом, проведенные исследования обнаружили, что введение крысам линии Вистар препарата амниоцен приводило к увеличению количества неэстерифицированних жирных кислот, уменьшению количества триглицеридов,снижению удшц ной радиоактивности общих липидов и различных фракций фосфолипидов (фосфатндилхолина, фосфатидилотаналамияа), угнетению активности хлшозо-6-фосфатазы в гакросомах меток печени 1фыс.

Полученные результаты указывают на наличке тесной связи между изменением липидного обмена мякросом и активностью фермента глюкозо-6-фосфатазы. Эта структурно-функциональная связь в мякросомах модифицируется особенностями генотипа организма, что гюхвт иметь значение при адаптации,

ВЫВОДЫ

I. Частичная гепатэктомия я локальная гипертермия печени (45°С, 10 минут) приводят к увеличению содержания общих липидов и изменению соотношений между различными фракциями липидов шкросом. В клетках регенерирупцей печени (13 часов после операции) увеличение содержания общих липидов в микросомах обусловлено фракциями неэстерифицированних жирных кислот и григая-

церицов, а в клетках печени после локальной гипертермии - фракциями неэстерифщированних жирных кислот, фосфолипидов, холестерина.

2. Частичная гепатэктомия и лональная гипертермия оказывают влияние на интенсивность обмена лжшдных компонентов в клетках печени, ввратаищемся в увеличении содержания общих липидов в цитозсле.

3. Фракция липидпереносящих белков регенерирующей печени и печени после локальной гипертермии связывает'в 2 раза больше липидов по сравнению с контролем, что коррелирует с накоплением липидов в цитозоле,

4. Ядра клеток интактной, реганерируыцёй печени и печени после локальной гипертермии не различаются между собой по содержанию липидов.

5. Изменение содержания липидов в микросомах клеток печени, вызванное частичной гепагэктомией, локальной гипертермией и амниоценом коррелировало с угнетением активности мембраносвя-занного (фермента глюкозо-б-фосфотазы.

6. Шкросомальные мембраны клеток печени крис с различными генотипами характеризовались разным уровнем содержания общих липидов, различными соотношениями фракций нейтральных липидов и фос-фолипидов и разнш уровнем удельной радиоактивности липидов. Гиб' риды содержали меньшее количество общих липидов микросом по сравнению с крысами линии Август и не отличались по этому показателю от крыс линии Вистар. Уровень удельной радиоактивности общих липидов макросом крыс линии Август превышал таковой у крыс'линии Вистар и гибридов.

7. Показано, что на действие мембранотропного агента (препарат амяиоцен) на липидннй обмен микросом оказывает влияние генотип организма.

8. Отношения между содержанием липидов в микросомах и активностью мамбраносвязанного фермента глюкозо-6-фосфатазы модифицируются генотипом организма.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. A.c. JT I4II604 СССР, МКИ3 С 09 1323/28. Способ моделирования гепатита/А.И.Божков, В.Г.Шахбазов, В.Г.Гопкалов, А.И.Скляр, Ц.М.Шереиевская, В.Л.Длубовская, М.К.Асадова, А.Л.Набоков (СССР). - Опуйл. 23.07.1988, Бюл. № 27.

2.- Длубовская В.Л., Божков А.И., Асадова М.К. Внутриклеточный транспорт липицоп в регенерирувдей печени крыс/ Харьк.ун-т,.-10 с. -Деп. в ШНИТИ 11.09.1989, 5759-В89.

3. Длубовская В.Я..Божков А.И. Динамика удельной радиоактивности липидов субклеточных фракций клеток регенерирующей печени крысДарьк. ун-т. - 9 с. - Деп. в ШШТИ I5.II.I989,

№ 6904-В89.

4. Божков А.И., Длубовская В.Л., Шерешевская Ц.М., Мензя-нова Н.Г. Генетические различия в активности макросом у крыс// Цитология"л генетика. - 1990. - Т. 24. - № 2. - С.5-10.

5. Божков А.И., Длубовская В.Л., Никитин В.Н. Соотношение синтеза и обмена липидов макросом как фактор, изменяющий-структурное состояние мембран // Докл. АН СССР. - 1990. -Т. 315. -№ 5. - С. 1260-1263.

6. Божков А.И., Длубовская В.Л., Шерешевская Ц.М. Изменения в микросомах печени крыс, индуцируемые препаратом амниоцен /Ред.журн. "Вопр. мед. химии". - М., 1991. - Т. 37. - № 2. -С. 94. - Деп. в В1НИШ 07.06,1990, № 3156-В.

7. Божков А.П., Длубовская В.1. Влияние гипертермии и частичной гепатэктоши печени на структурно-функциональные характеристики мембран эндоплазматической сети/ Ред. журн, "Бюлл, эксперим. биол. и мед.". - М., 1991. - Л 7. - С.111. - Деп. в -ШНИТИ 23.10,1990, Л 5451-В.

8. -Божков А.И., Длубовская В.Л. Лигощный обмен и структурно-^ функциональные особенности мембран эндопдазматического ретикулу-ма регенерирующей печени крыс // Биохимия. - 1992. - Т. 57. -Вып. I. - С.8-15.

9. Божков А.И., Длубовская В.Л., Асадова М.К., Скляр А.И., Шерешевская Ц.М. Генетические особенности липидного обмена и адаптация к гипертермии при гетерозисе// Тез. докл. УТ съезда Укр. об-ва генетиков и селекционеров, Полтава, 1992. - Киев,

- 1992. - Т. I. - С. 150-151.