Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Закономерности фолликуло- и гаметогенеза и некоторые показатели репродуктивной функции при гормональной индукции суперовуляции у крыс

ВАК РФ 03.00.11, Эмбриология, гистология и цитология

Автореферат диссертации по теме "Закономерности фолликуло- и гаметогенеза и некоторые показатели репродуктивной функции при гормональной индукции суперовуляции у крыс"

ЛЕНИНГРАДСКИ й ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ Г0СУДАРСТЗЕ''.НЬШ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи УДК 612.621.94612.018.2]:591.465.1

ЗЕЛЕНИНА Наталья Васильевна

ЗАКОНОМЕРНОСТИ «ШИКУЮ- И ГАМЕТ01?НЕЗА И НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ ПРИ Г0РМ0!1АЛЬН0Я ИНДУКЦИИ СУПЕРОБУЛЯЦИИ У КРНС

03.00.11 -э.»"бриологии, гистолоилп и ц:ттологте

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических неук

Ленинград 1990

Работа выполнена п ордена Трудового Красного Знамени институте акушерства и гинекологии АМН СССР.

Научный руксподитель: доктор медицинских наук, профессор А.И.НИКИТИН

Официальные оппоненты: доктор биологических наук В.С.БАРАНОВ доктор биологических наук 0.Н.САВЧ5Ж0

Ведущее учреждение - Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики к разведения сельскохозяйственных животных ВАСХНИЛ СССР.

Защита диссертаций состоится илхм^у_1590 г.

на заседании Специализированного совета ДО-63.5'7.22 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических неук при Ленинградском ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственно!.? университете.

Адрес: 199034, Ленинград, Университетская набережная, 9/9 биолого-почвенный факультет, аудитория 133.

С диссертацией можно ознакомиться в неучноЧ библиотеке им.А.М.Горького Ленинградского государственного университете.

Автореферат разослан " ^.-¿уг^чГ^х. 1У90 г. Ученый секретяр;.

Специализированного совета \

кандидат биологических наук д)А.Г.ДЕСКЩЮЙ

0ЕЦ4Я М'ЖТЕГКЖи PAEOTLi

Актуальность га.и. В н"отодас время кетод гормональной етвдулятда фушада лячзгаоз с пспоп&ю гопадотропиков (СлК, ЧМГ, 5Л и ХГ) находпг изрокоэ прллепотше з медицинской ьрактяко, животноводство и гкспэрж.тэнтллыиог исс^вдозоншге. ü экспаримен-Т9 ето ьспользуот для получения большого числа яйцеклеток, изучения закономерностей фэллпкуло- и га-«етогекега н др. В ыпзот-новодстве етилулягисо суппровуляцля пр^'.^нит1 для Еродугцял большего лолдчества э:.;брисков вксокопорстскл производителями. 3 пэдкцлнской практике гонадогроплая Стгыуячцгл используется при летгнкч некоторых ;рорс« бвсгаюдкя, нарушен; тй менструальной функция и в программе оплодотвориск in vitro (Х'Т?).

Однако, несмотря не без msoro 30-лэтлпй опит яеподъзова-кк этого метода, результат'! гормонального воздействия далеко кз зо всех случаях ошзавт уцовлзтворктельнн: частота наступления борэдашкотп остается низко!'? (2С - (Алиева Э.Л. и соавт., КБ?; Карат В., 1303), наблюдается eucokjö процент ршнпа гая-ягцсеп, обусловленной недостаточность*: зелтого тала л друпси ост'лизтаччси lis глволизгодчс-ской практлжз известно, -¡¡то при суперэтзуляцип передки случал образования кистозпкх .^олашпулоз, пра-лег.рэ:-*энного лстэолаза и поядяешн отю:яш,ннх дли зздэрхашшх з развипгл эмбрионов (Betteridga K.J., 1377).

Прячипа невысокой зКектнзлоотп гонадотротшой стпмуляцпч ксгут боть овязащ с ке всегда адекватной реакцке2 яичиктов па введение экзогенннх горланов, а такзе о неполноценностью овули-руткск гамет. ¡"¡маются сведения о том, что способность ялчнякоб тел. кта другим образов реагировать на экзогепнув симуляцию суаэстзошп вэрь^фует в течошпг никла и завяолт от дозы вводимых гормонов (ü.S.Greenwald., 1979; Hunter R.H., IS79). Однако дашшэ cö э'ойектЕШооти стимуляция, проводимой в разные стадам оваркаяького цтала, пзмнигочяслаши л противоречивы. Это определяет необходимость и актуальность настоящей работы.

Цель исследования - изучить в эксперименте завясигоста ко-ллчестзэ и качества суперэвулярую'дих яйцеклеток и нзменеллЯ характера эстратького цшела от стадии взедэкпя и дозы гоиадотро-плнэв.

ГЗадачп исследования:

1. Изучить изменения хар&чтора астрального цикла ггри евэдз-Ш1и гонадатрошшэЕ на различи® стадиях цкига.

2. Изучать зависимость колкч&стел овул'зруидах яйцеклеток от стадия вподоння го£«онов.

3. Оцепить качоство озулируарях яЗцьялеток при введении го pailón па различи.-tx сталигх ц:жла.

4. Изучить особенности псолодуомых показателей у инбредяш: ii нолинейянх лшеояшх.

5. Исследовать влияние дозы веодгсшх: гормонов на количество и качество овулирущих яйцеглотон и вас яичников.

Исследование вшолпено в соответствии с планом основных работ I9ü3 - I9C9 гг. ILIT /ЛЯ СПОР по psirem-iio научно-тзхниче-скоЛ проблэш & I6.G4.0I, ногюр государственной регистрации ох.егт.оззш.

Научная новпска работы и личнпЯ вхаап пп?от>н в раз-оаботгу тода. Впэрвае систематически изучены пзненоняя характера астрального цикла крпс после введения С'ЛК. Выявтена : эодшшковая чувствительность животных, находящихся да различных стадиях цикла, к гонадотропнон стимуляция. Установлено наличие индивидуальной чувствительности животных, надо,яяцихоя на одной стадии цикла, к гормональному воздействии. Проведено сравнение изучаемых доказателен у линейных и нелинейных кявстгшх. Апаллз по-лучэшшх данных позволил разработать новую модель динамики роста к атреяш фолликулов е яичнике крысы. При изучении качественного состояния супсровулирующти яйцеклеток установлен важшш факт снижения у стимулированных яивотнше по сравнения с штакт-шми относительного числа геизнеспособни х гамет, зашеящий от стадии цикла, на которой вводами СЕК. Вперзне проведено сравнение периода фертильности супер--п эстественноовулярувдпх яйцеклеток. Установлена возможность разобщения цитоплазматкческога и ядерного созревания яйцеклеток in vivo при стимуляции суиер-овуляцки, описаны условия его возникновения. Впервно обнаружено снижение порога чувствительности к стрессу у стимулированных животнше. Детально изучено влитие дози вводимой СЕК на количество овуларущих яйцеклеток. Впервые обнаружено, что при пере-

дозировке СЕК, повышается число гамет, неспособтас к оплодотворен:® .

Экспериментатытое хтаслэдовлние, разработка подзлой, anaína лолучзпшгс данних п ж статистическая обработка, проводидяоь автором лично.

Иатчкпя и практическая онсч^г.гчотъ рабо'л:. Дшшыэ о злвяси-ыостп количества к качества овулнпуичих яйцеклеток и характера зстралъного цтткла от стадш вводенля :i доз гочадотрояннов могут быть попользованы при разработке более адекватнее методов сты-!/!УЛяцпп репродуктгтпсГ) -дункцит! з медицинской практике и ;.пгоот-нсзодотзэ. Пподтоке ¡шип в работе способ стимуляции супэрозуля-щш у лабораторгьо: грызунов попет бить использовал в экспаря-;зптадъннх ::соледова1и:ях тля получения наибольшего колпностзз газпеспособчих яйцеклеток при наженьппх затратах препаратов и зквотшх. Использование предложенной модели дячгшкь роста и атрозяп фодагскулэв в яичгшках крас перспективно при рапьпойаом изучении закономерностей 'юл.тпкуяэгенеза у мтскопягаягдех. Обна-догвниую возмоотость уззобирпая цктоптазматического и ядерного созревания яйцеклеток" in vivo в условиях резкого стероидного .дисбаланса, обусловленного присутствием гелраовулпрозав-зш: фол-лаяулог, нзо&одкю учнтнвать при изучении при-сш озсшгодия у человека. Бцдзленное оягаокиэ порога чувствительности к стрессу у cTiMyjnrpoBítHHiix. "'.raoTtíux обуславливает целесообразность организации ясжотерапевтических мероприятий при проведении го-надотрогшого лечения бесплодия. Дачгшо о влиянии величины дозы G3C на качество и количество овулиругатгс яйцеклеток, а тшехе выявленная индивидуальная чувствительность г-ивотних к CSZÍ, свидетельствуют о необходимости тщательного подбора олтяжльних доз в эксперитлечтэшшх работах, а в медицинской праккгке - о необходимости индазидуального контроля за подъемом эстрогенов з крови у !г.е:пгдп.

Апробация гг.ботц и ^гублнкагттгл. Результата работа бшш доломаны яа X, XI научнее конференциях молодых специалистов аку-щерско-гинекслогичзских клиник г. Ленинграда (1285, 198(3), па XXX нон\:9репции студентов и аспирантов морфологических карэдр и лабораторий Ленинградских Еузоз и научно-исследовательских

институтов ( 19У7). Прочитала лекдзя для ггушороз-гииоконогов ЮТ АМН СССР (1086).

Но глтержлам диссертации опубликовано 5 работ. Автором получено полошгольное рошониа государственной научно-технической зкспэртпгц (от 1.02.89 167) на Изобретение "Способ гормональной стигдуляцпч суперовуляцгн у лабораториях животных" (J? са'чвкч 4424735/14 729QS).

Структура ory^e'vi ллосуотэдуи. Работа изложена на 121 стр. машинописного текста, состоя! K"s введения, обзора литературы, описания матерлалов л испмьэованкых методов исследования, результатов еобстсэгшьие кабдадонта, обсуждонет полученных данных, выводов и указателя литературы Ç Xi5 — отечественных, 101 - иностранных источников). Текст иллюстрирован 10 таблкцаш, Т.2 фото-графэтяа, 14 рисунками.

Работа выполнена б лаборатории раннего эмбриогенеза человека илг лж асср.

СОДЕЕГ-МКЕ Р:1Б0ТЫ

Материалы и метода исследования. Зкопери ленты вшюлнекы на половозрелых самках белых йоспороята крыс к крно лшши Вис-тар из питомника "1'ахшолово", жактах возраст 3-4 месяца и вес 180 - 200 г. Крыс содеркали в стандартных условия:: вквзрпя при дозированном освещении (свот с 8.00 до 20.00). В опыт брата только крно с ненарушенным 4-х дневным астральный циклом, характер которого определяли по ежедневным утренним влагалыпвым мазкам. Всего в работе было попользовано 268 беспородных крно и 314 крыс линии Вистар.

Гокадотрощую стимуляцию проводили по стандартной методике. С этой целью группе крыс, находящихся на определенной стадия цикла, сначала вводили внутрибрлнляно (в/б) СЯК в доза от 15 до 75 V4 (международных единиц). Спустя 55 часов производилась шгьекцил 20 МЗ ХГ также в/б. Доза ХГ подбиралась в предварительных экспериментах, как наименьшая элективная доза, вызывающая овуляции. В работе были использованы лиефшгазкрован-ные препараты: СЖ - Geetyi (фнрп "Org&ncm") и S1 - нее (»шр-i..a "3oyva"). Гормоны для инъекций готовили на физиологической

растворе к хранили но I мл при -10°С не болзэ 2-х месяцев. Максимальная однократная пнъэкцго? :ге превышала 0,4 :т.

Характер эстрадного итога изучали гго цитологической картл-не влагалищных иазкоз, которая позволяет определить не только стеджэ пэлозого цикла жгзотного, но и служит качеглиегшои характеристикой эстроген-прогестероттовой нлстадашости организма.

Для изучения влияния гопадотронной стимуляции на последуй- ■ щий цикл у экспериментальных животных "исследозэли ваглналкше мазки еяэднзвно с момента введения СГК и .вплоть до овуляции.

ПроозулироваЕЕке ооцитк извлекали из а-.шулн яйцеводов не позднее 5 часов от сродного временя овуляции, так как уке через 6-7 часов з яйцеклетках развиваются дегенеративнко изменения, обусловленные процессом их ''старения" (Кокопчсцева 1.». и Пучков 3.5., 1975) и подочитешаш их количество. Для оценки качсстза я1гцеклеток готозиля тотальные препарата по ыето.ду Тарковского (1366) с послздукщеЗ окраской по Романовскзму-Гимза. Патогенетический анализ проводили на стадии мета^ази П мейоза при увеличении х!С00. Для оцет«! качества яйцеклеток изучали состояние хроэдеои на мата разных пластаннах. Лпаллз числовых и структурно* аберраций проводили на препарата:; без признаков дегеноративпт: изменений хромосом или их наложений.

Оплодствсряемость яйцеклеток крыс оценивали по их споеоб-1юсти к первому 7(еленяя дробления. С этой целью самок крыс подсаживали на нон. к самцам: гормонально стимулированных - сразу после введения ХГ, а нктактных - в ночь с проэструса на эструс.. Утром у самок определяли наличие спэрлиев во влагалищном мазке л считали этот день первым даем беременности. Зскрытио проводили в 9 - 10 часов утра второго дня беременности. Дробящиеся зи-готн извлекали из яйцеводов промыванием последних теплой пита-тальной средой с помощью эприца под контролем бинокулярной лупи. Подсчитывали число двуклеточпих зародшек, нсоплодотворлв-пгахоя или дегенеративно дробящихся яйцеклеток. Морулы получали промнзанием рогов глатки и яйцеводов на 4-й день беременности. Полечит:шали число нормальных и апомальпчх эмбрионов.

Полученные результата подвергали статистической обработав. Достоверность рааличяй оценивала по критерию Стьюдента и при

- о -

доверительном интервале 0,05.

результату иссдщовжад и облекшие

1. Итстгаггое характера астрального цикла у крно, сттг.тули-роваттнх на разных стадиях цикла. Введение СЖ существенно сказывается ка поатедуедда! характере эстрадного цикла. Причем, эти юмоцеизя зависят от исходной стадии, tía которой производилась стагфляция. Так, при введении СЕК на стадии проэструс цикл укорачивается ка 2 суток, минуя стада мотэструс и диэст-рус. Стжлуллция на стадии зструс ведет к укорочению цикла на сутки за счет исчезновения стадии диэотрус, а введение СЖК на кетэструсе не влияет ни на продолжительность цикла, ни на последовательность его ста,-да. И, наконец, стимуляция на стадии дкзотрус у.птаняет цикл на одни сутки за счет того, что проэструс продолкается 2 суток. Огмечоно такта, что независимо от стадии введения CIK, спустя 2 суток у всех иодояэтных животных наступает проэструс.

Эстральный цш:л является важным интегральным показателе?/, отражающим с одно« стороны стероидсинтетическую активность яичников, которая влияет на количество и качество овулируших яйцеклеток, а с другой - опредалявдим готовность гениталыгаго тракта к предстоящей беременности. Таким образок, наименее благоприятна в этом отношении стимуляция на стадиях проэструс и диэетрус, ведущая к укорочению ши удлинению цикла на 2 суток.

2. Величина овуляции при отимушти суперовуляпгя у кто

в различные дни цикла ж ее связь с характером к скоростью атре-зип "юлликулэв. Результаты проведенного исследования показали (табл.1), что иаибольиее количество яйцлслаток овулирует при введении СЖ крысам в пачале цикла на стадии эструс сразу после естественной овуляции ( ^ 37 ооцктов ка животное)- Наименьшее -в конце цикла на стадии проэструс ( ~19 ооцитов) (р < 0,05). Поскольку в литературе увеличение чиола оьулирувдих гамот при стимуляции суцеровуляции связывается со ояшкением частоты ат-резии антрадьяых фолликулов (шrahiielct A.n., 1986; СЫгая d.d., Grcen-.vaid L.c.s., IS7Ö), маяно излагать, что обнаруженная нам

Зэлпчииа овуляция к состояние хромосом яйцеклеток у беспородных крыс при стагфляции суперовуляции в различала да! цикла

Таблица I

Стадия зведенкя Величина овуляции, M и- а К-во крыс с данной величиной овуляции, % Сшдкяя. величина овуляции Количество ооцитов с нормальной МП. % (среднее, %)

Контроль I. П+1 100 I. II I. 82,0+2,6

Эструс 2. бз7г 30 71,1x2, G

3. 32+2 50 2. 37 2. 55,0j;3,I(G3,8)

4. 13+3 20 64,8^5,9

Кетеструс 5. 32±.2 80 3. 23 3. 65,8+2,4(62,4)

6. I4+I 20 29, ¿6,3

Дизструс 7. 41х2 57 4, 32 4. 47,9+2,5(39,0)

8. 2I+I 43 15,8+3,0

Прозструс 9. 3.3+3 27 5. IS 5. 57,9^3,7(67,9)

10. 14+2 73 76,7+3,3

р<^ 0,05

ст

1-2,3 5,7,8,9;

2-3; 3-4; 5-S; 7-8; 9-10

X2 •

2-4;4-3;

3-5;5-1

X2

2, 3, 5-4: 2, 3, 4, 5-1

"зависимость величины овуляции ст стадии введения CI3Î зависит от распространенности атретичеекого процесса в яичниках.

Крог.га того, была обнаружена неодинаковая чувствительность к гормональному воздействию беспородных крас, находящихся на одной стадии цикла. Выявлялись 3 достоверно отличающиеся по величине овуляции группы животных: с вксокоЁ ( л» 60 ооцитов), средней (30 - 40 ооцитов) и низкой (10-20 ооцитов) величиной овуляции, причем количество животных в грушах зависело от стадии введения СЕК (табл.1/. Аналогичное исследование, проведенное на крысах линии Бкстар, выявшга у них сходную неоднородность (табл.2).

Таким образом, разная чувствительность к гормональной стимуляции крыс, находящихся на одной стадии цикля, не связана с

Таблица 2

Величина овуляции, цитология влагатичрптх мазков, состоянло хромосом на поепаратах я:!цс1:лето1: и количество 2-клеточ:шх бмбрионов у самок крис лшяк Вистар при симуляции суперсзуляции па СТаДКИ эструс

Характер эст-Гругша тльного цик-крис ла после ввз-

К-во осця-тов о НОр-

К-во 2-кл змбшонов

дэния СЛС

1 1Б Э М Л II

2 Э Ы П Э

1Л 3 У, (ДП)

10+2 ао 9+3,3 92,31.4,1

17+1 ' 10 100,0ь'3,{! 5,5x3,1

31+3 50 55,3+2,2 67,8+2,5

<50 + 2 30 70,3+2,3 88,5+1,7

II £ I 100 81,2+1,8 98,3+2,0

Э М II (ОМ)

Контр. 3 У, Д Т1 Э

0,05

ст

. о тг п о V

«о—о; ¿—о; о—л.

генотипом, а является проявлением физиологических особенностей. Как уне говорилось, окпаетю средней йеллчднн овуляция у стсму-лированнш; крис при введения СКК от эструса к проэструеу связано с распространением атреткческих процессов в яичниках к концу щала, В таком случае .|изиологичосзам фактором, обуславливающим различную величину озупящга у сушровулируювдс крис, сткму-лировашшх ка одной стадии цикла, мояет быть разная скорость атреткческих процессов в яичниках разлпчгпк животных. По существующим представлениям атретический процесс з растущих щоллику-лах носит постепошшй характер, расширяясь к углубляясь от эструса К проэструеу (П1гз11£1е.\й. А.11., 1336; Вуакоу А.0.3,, 1974). Обнаруженный в работе факт отсутствия у суперовулнругадлх крыс, стимулированных на одной стадии цикла, кепрернвного спектра величины овуляции, а наличие довольно фиксированных значений количества "Будирующих яйцеклеток позволяет нам высказать предположение о ступенчатом характере атретическсго процесса в яичнике.

На рисунке I ш приводим собственную гипотетическую модель фолликулярного роста и этрззик в яичнике криси, в основа которой

лета'" представление о ступенчатом характере роста преантратышх Лолликуов в течение цикла и о ступенчатости и различной скорости атретяческчх процессов в антральных фолликула . Эта модель позволяет объяснить воличину овуляции при стиг.1у.ляц:п1 суперовуллцпл у крыс на разлита:;;: стадиях цикла.

ступени антральных фолликулов

3 15 К $5 КЗ 2 1С 10 10 Ю ¿ 5 5 5 )!,

стадии цикла

э м д п

ступени больгак

ирзантоалы-шх

■¿олликулои

b ъ О 10

о о

к-зо пол..вовлекаемых в рост СИС/яячншс

величина овуляции

Рис. I. Модель фолликулярного тазвптич в япчшше крысы я величина овулш-у.ш при стимуляции супзрозуляцик в различные .дни цикла.

10, 15 - здоровые поиккулы;

J8, J5 - атрэтичные.

30 15 20 15

S0 30 40 30

3- -ипанесиособность яйцеклеток оуперопулттую'.дж крыс. При введении ОГК на стадиях эструс, метзструс и проэструс относительное количество яйцеклеток с нормальной г.ютаЪапой П приблизительно одгяаково и составляет 30 - 70$ (в контроле ~ ÜC%), а при введении C.VK на стадии диэструс снижается до ~ 40)» (Р< 0,05) (табл.1). Цитогепотичсский анализ частоты хромосомных аберрации в ооцктах стимулирозанных крис не выявил повииента количества гамет с чпсловшж и структурными аберрациями по сравнения с контролем (3,8; 2,6 к 2,2%, Р ^ С,05). Полученные результаты согласуются с данными других авторов (Gray м., Ghria-man е., I9C0; Kaufman U.u., 1973).

Изучение сплодотворяедастп in vivo яйцеклеток суперовули-руэдих "рис, сталулированных на стадии эструс, показало, что _ относительное количество оплодотворившихся яйцеклеток у них меньше, чоч в контроле, различно у животных с различной величиной овуляции и корралирует с количеством яйцеклеток о нормальной мета^азой П (исключая крыо с низкой величиной овуляции

~ю ооцитов) (г - 0,994, Р < 0,05) (таби.2). Наиболее оптимальной с точки зрения получения наибольшего колзгчсства полноценных яйцеклеток, является гонадотропнач стимуляция на стадии

эструс. При этом в средам на одну стимулированную крысу овулк-руот ~ 30 яйцеклеток, способных оплодотвориться к развиться в потомство , то есть в ~ 3 раза больше, чем у интактной самки.

У части стимулировании:: коне с низкой величиной овуляции (группа 15, табл.2), хан показал цитологический анализ влага-л:пщшх мазков, ка следующий день после введения хориогонкна сохранялся проэструо, характеризующий большим содержанием эстрогенов в крова. При вскрытии било обнаружено, что яичники этих jumoTHux содержали больше число непрсовулировав'лях'ллтеинизи-рованных аюлликулов, а почти все яйдеклотки (94$) оказались не-способннма к оплодотворение, хотя по результатам цитогенэтиче-ского анализа имели нормальные хромосомщ на стадии мета^аза П. Неспособность этих яйцзклеток я оплодотворению свидетельствует о нарушении их цитопласкатическсго созревания, обусловленного, по-видимому, стероидным дисбалансом в периовуляторном периоде, Независимость ядерного и цптошшзматнческого созревания - факт, давно известный из опытов по спонтанному созреванию ооцитов in vitro. При этом ряд авторов отмечаот существенную роль стероидов в цитоплазматическом созревании ооцитов in v. ero (¡¿oor it.¿;., 1980; Скойлина M.K., 1982). Наши данные показывают, что аналогичное явление может наблюдаться и in vivo при созревании яйцеклеток в условиях резкого стероидного дисбаланса, обусловленного присутствием кспроэвулировавших лютеинизирсванннх фолликулов .

Период .Зертильности яйцеклеток является одни из вахних качественных показателей, поскольку по мнении ргда авторов ошгодо-творэнке стареющих ооцитов монет бить причиной бесплодия к возникновения врожденных патологических состояний (Никитин А.И., 1981; Smitb.A.Z., Zodge J.R., 1987). В настоящем исследовании для определения периода 'рэртильнооти суперовулирующих яйцеклеток подо.читявали относительное число ооцитов с нормальным состоянием хромооом в зависимости от"времени, прошедаего после овуляции. Была обнаружена прямая корреляция меяду нормальным состоянием хромосом яйцеклеток- и их опяодотворяэмостыо. Оказалось, что у стимулированных крас, также, как я у интактнше, в течение 5 часов после овуляции количество ооцитоз о нормальной мета^азой П остается неизменным, а затем сникаатся и через 6-7 часов боль-

ше половины яйцеклеток шит патологически измененные хромосома и но способны оплодотвориться. Таким образом, процесс стареть у супэровулирукздгс яйцеклеток накатается не раньше, чем у ову-лирующпх естественно.

При изучении ошгсдотворяемссти in vivo яйцеклеток стимулированных крыс было обнаружено, что после подсадки к самцам у ~ 38% из них имела место аповуляция, обусловленная, по нажему мнению, возникающим при этом состоянием стресса.

Известно, что стрессирущее зоздэйстзие вызывает нарушение овариального цикл и ановулящга у эксперимент?лькых глшотных (Collu R. et al., 1984; Uivrev С. ot al., I9S6) . В норме юдсод-ка к самцам не является стрессом, но становится таковой в условиях гонадотрогогой стимуляции. Недавно опублшчовашше данные •Тортановсй с соавторами (IS89) об активизации функции надпочечников при лечении лепщия менопаузальным гонадотрэгошом проливают свет на заявленную сверхчувствительность к стрессу у супер-овулирувщих крыс. В таком случае, успех гонадотропнего лечения будет определяться правильной организацией психотерапевтических мероприятий в клинике.

4. Слияние дозы СТК на эффективность еттпглятята оутгарозу-ляции. Как показали наши исследования, оптимальной" дозой CL3Í, вызывающей овуляцию наибольшего количества яйцеклеток является 25 МЫ на 20U г веса. Она вызывает у крыс, стимулированных на стадии эструс овуляцию ~ 37 ооцитов на животное. Изменение дозы вводимой СЕК в ту или иную сторону от оптимальной неизменно снизало сроднаго величину овуляции. Передозировка СЖ сопровох- ' дается увеличением веса яичников и появлением в них нэпрооьули-ровавших лютеинкзпрованных фолликулов. Изменение стероидного профиля, обусловленного гипертрофией яичников и наличие?»! в нем непроовулировазшкх литзшизированных фолликулов, может неблагоприятно сказаться на готовности гепиталького тракта к восприятию зародыша.

Анализ качественного состояния яйцеклеток показал, что передозировка CIS водет к возрастанию количества социтов с нормальной МЁЛ ко на" способнкх оплодотворкхьсл.

^5 • Зксгертаэнтельтш дашш^ стимуляции оупоровулячии и оя-

орулягогл в клинике кенского беслюдия. По существующим представлениям механизма, ''запускающие" рост антральлих фолликулов в яичниках приматов к грызунов, иггеэт пршщипкалыюе отличие. Считается (Uodgsn G.D., Ко2), что у грызунов запуск быстрого роста антраиышх фолликулов осуществляет волна гопадотропшюв, а у человека переход фолликулов из фаза медленного роста в фазу быстрого происходит спонтанно и л» дом'шаптные структура (доминантный фолликул, кзлтзе тело) препятствуют их дальнейшему росту. Обоснованием таких иродсгавлешш является обнаружение •оакта спонтанной овуляции у кенакл, происходящей через 13 jtíieii поело удаления дог.цгнантного фолликула (до волна гонадотропилов) или гдзлтого тола (после волен: гоиадотроггоноз). Однако данная схема-не в состоянии объяснить .причину поочередного функционирования якчшпгав у гсзящ;ш.

Проведенное нами сопоставление механизмов регуляции циклов, действия гонадотропичов на характер роста и атрозии фолликулов у приматов и гразунов выявило, в лротивошяошеси. общепринятым взглядам, больлоо сходство этчи процессов у них, что позволило ю-ловому представить схему опариального цикла у приматов (pnc.¿). В основе еэ лекпт представление о том, что рост ант-ральних фолли.;улов е яичниках приматов начинается на спонтанно в начале цчклэ, а "запускается" гонадотропной волной в предццу-ЩьйТ цикле п лига ускоряется посла шгволгсции келтого тола.

3 нашем исследовании было обнаружено, что у крис наиболее оптимальным для успешной стимуляции роста фолликулов является период сразу после естественной овуляции, то есть во время начала роста и атрезш глалнх антральных фолликулов. Экстраполируя полученные экоперпменталыше данные, с учетом представленной схемы овариального цикла у человека, можо утвередать, что наиболае "физиологичным" является начало стимуляции в середине цикла и за 2 цикла до предполагаемого зачатия. В настоящее время согласно большинству схем стимуляции CÜK или ЧМГ вводят больным с I - 5 дня цикла (в- начале фолликулярной фазы), в течение 5-7 дней, а затем инъекцией ХГ вызываю? овуляцию (Ллие-

Рис.2. Схема роете фолликулов в литниках приматов.

ЛФ, ФФ - лютеиновая и фолликулярная фазы менструального шхяа соответственно; ОБ - овуляция; А - волны гонгдотропкнов.

ва Э.Л., Т&87; Карал В., I9&S). Ооцэпрлнялая схем лечения основывается на морфологических данные об стборо доминантного фолликула, происходящего примерно па 4-5 день от начала цик- ■ ла, то есть по каао.ч схеме введение Ф'ЛГ пригодится на завершающие этапы фоллик.улогэнсза. Стимуляция фолликулогеноза на его завершающих зтаяах, в не совсем "физиологически адекватные" сроки является, по нага«;' »¿пению, ярлчшгой невысокой о ^Фиктивности гонадотропного лечения в клинике венского бесшсод!«.

ВЫВОДЫ

1. Введешк СЙС крысам оказывает вчыяние на последующий характер эстрального цикла, изменяя как очередность его стадий, так и их цродолнит&лькооть. Иаьменъшое воалоИствза на ц>шл оказывает введение СгЖ па стадии мзгэстр/с.

2. При гояадотропнзй стк.г/л5»цкк суперовуляции у крыс количество овулирушкх яйцеклеток зависит от стадии цикла, на которой вводалось СЕК. Наибольшее количество яйцеклеток окулирует при введении СПС сразу после естественной озуляцин на стадии зотрус (в среднем ~ С? яйцеклеток на крысу). Крысы, находящиеся на одной стадии цикла, обладают неодинаковой чувствительностью к гсьадотропной стйлудлции, разделяясь по величине овуляции на три достоверно отлнчагэдиеся группы: с высокой

( ~ 60 ооциюв), сродней (30 - 40 ооцитов) и низкой (10 - 20 яйцеклеток) величиной овуляции. Количество кивот.чнх в группах зависит от стада! цикла, па которой вводилась С:ЛС.

3. В результате анализа полученных данных разработана новая модель динамики роста атромш фолликулов в япчшиез крысы, в основе которой ло;/ыт представление о ступенчатом гпоакторз роста прзантральных фолликулов в течении цикла и о ступенчатости и различной скорости атретпческих процессов в ентральных фолликулах.

4. Относительное число яйцеклеток, способных к оплодотворению и дальнейшему развитию в потомство при гонадотройной стимуляции ниже, чем при естественной овуляции, к зависит от стадии цикла, на которой вводитесь СЖ. Наямэпее благоприятна в этом отношении стимуляция на стадии днэструс. Абсолютный "вы-

ход" -полноценншс яйцеклеток у суперэвулирующях крыс выдз, чем у интактннх; при этом наиболькее количество полноценных яйцо-клеток овулирует ври введении СТ. на стадии эс трус. Частота хромосомных аберраций в ооцитах стимулированных крыс не отличается от контрольной; период фертилъиости суперовулируощих яйцеклеток не меньше, чем у озуллруюащх естественно.

5. Обнаружено разобщение цитспдазматячаского и ядерного созрэЕаиий in vivo в условиях суперовуляшга при созревании яйцеклеток на фоне резко измененного стероидного синтеза, обусловленного присуитвием непроовулировавшнх лкгэпнизировашшх фоллзжулов.

G. Полученные данные выявили у стимулированных животных снижение порога чувствительности к стрессу, аедущеэ к апсвуляцин.

7. Обнаружено существование оптимальной дозы СЖК, вызывающей овуляцию наибольшего количества яйцеклеток (25 ГЛВ на 20U г веса). Изменение дозы в ту или иную сторону от оптимальной сни-х:ает срэднкио воли'пшу овуляции. Передозировка GKK водет к сни-жепию оплодотворчомости суперовулиру:сщих яйцеклеток.

8. Предложена новая схема овариального цикла у прнматоз.

в основе которой лехит представление о том, что рост антральных фолликулов происходит не сг.онтшпю з начале цакла, а "запускается" гонадотропной волноП в предыдущем цикло и лияь ускоряется после инволюции жалтого тела. Высказано предложение о целесообразности изменения схемы гонадотропного лечения в клинике женского босгоюдия, основанное ка результатах собственных зкспери- -ментальных исследовании с учетом предложенной схемы овариального цикла у приматов. Согласно этой с/оме введение СЫК или ЧМГ следует начинать не с Í - 5 дня цикла, как принято в настоящее вромя, а с середины aro за 2 месяца до предполагаемого зачатия.

СПИСОК РАБОТ, 0ПУБЯ!«0]"ИШХ 110 TIME ДИССЕРТАЦИИ

I. Изменение астрального цикла, частота овуляции и состояние гамет у крыс при сулэровуляцяи (Н.В.Зеленина, Э.М.Китаев, М.Н.Пименова // Кури.экоперим.биол.мед. - 1987, - № 3. - С.352 -354).

2. Изменение характера астрального цикла и гамэтогенеза при стимулящш суперэвуляции у крас в различные дни цикла (Н.В.Зеленина, Э.М.Китаез, М.НЛЪшэцова, В.В.Семенов // Тез. на УП всесоюз.совзщ.эмбриологон. - Д., 1986).

3. Особенности ультраструктуры ооцитов крыс при суперовуляции (В.В.Семенов, Э.Ы.Китаов, II.С.Зеленина // Отология. -1986. - & 28, т.11. - 0.1269-1261).

4. Сравненгх1 чувствительности к гонадотропипам при стимуляции супоровуляции у самок кпцо линии- Вистар и б/п. (П.3.Зеленина // Деп. во ВИНИМ Г- 8334-3 от 25.11.87).

бГ'Зпутри- и зизяичнчкозьге механизмы гормональной регуляции гамотогенезг к факторы, влзываюаугэ их нарушение (А.И.Никитин, Э.Н.Китаев, П.З.Ьалэшша, П.М.Олозша // Тез. на П Всесоюз. яонф. "Эздокриакач система организма и факторы окружающей среда". -Д., К37. - С. 168).

й. изобретение "Способ герлонаяьной стимуляции суперовуляции у лабораторных хквотннх". Положительное решение государственной научно-технической экспертизы изобретении от 1.02.89