Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Выделение и характеристика лентивируса зеленых мартышек, родственного ВИЧ

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Выделение и характеристика лентивируса зеленых мартышек, родственного ВИЧ"

К' В , ^

Г, б , А нйсттуг ПОЛИОМИЕЛИТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ РОССИЙСКОЙ /юдаш МЕДИЦИНСКИХ НАУК на правах рукописи

РЕЗИГСЯН СУСАННА АПЕТОВНА

ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕНТИВИРУСА ЗЕЛЕНЫХ МАРТЫШЕК, РОДСТВЕННОГО ВИЧ.

03. 00. 05 - ВИРУСОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологичекских наук

МОСКВА - 1992

Рэ.бота выполнена в Институте медицинской приматологии Российской АШ.

Научный руководитель: доктор медицинских наук

А.Воеводин

Стадиальные оппоненты: доктор медицинских наук

К.В.Ильин

кандидат биологических наук Г.Г.Пиллер

Ведущее учреждение: Государственный научно-исследовательский инст1 тут стандартизации и контроля медицинских, бис логических Препаратов ш. Л.А.Т&расевича

Защита состоится " 199&г. в /Очъь

на заседании Специализированного Ученого Совета Д.001.27.01 при Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов Российской АШ (142782, Московская обл.^, п/о Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов)..

С диссертацией мошо ознакомиться в библиотеке Института полиомиелита и вирусных энцефалитов Российской АШ.

Автореферат разослан

1992 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета

кандидат биологических наук О.А.медведкина

ОСЗДАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАбОТЫ

Актуальность проблемы.

Устойчивый интерес к изучению лентивируеов связан, превде всего, с тем, что представители этого подсемейства являются этиологическими агентами синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) человека [Gallo R., et al. , 1984; Clave 1 С. , et al. , 19863. Лентивирусы зеленых мартышек - члены большой группы лентивируеов обезьян, получившей название SIV (simian immunodeficiency viruses) и включающей ныне изоляты от шимпанзе (Pan troglodytes; SIVcpz), разных видов макак (Масаса mulatta, М. fascicularis, M.arctoides, М. nemestrina; SIVmac), дымчатых мангобеев (Cercocebus atys; SIVsm), мандрилов (Papio sphinx; SlVnind), голубых мартышек (Cercopithecus mitis; SIVsyk) и зеленых мартышек (Cercopithecus aethiops; SIVagm) CDesrosiers R. , et al., 198 ; Hirch V., et al., 1991]. По степени антигенного родства и гомологии геномов лентивирусы при--матов подразделяются на 4 группы: 1) ШЧ-1 и S1V шимпанзе; 2) ВИЧ-2, SIV дымчатых мангобеев и SIV макак; 3) SIV мандрилов; 4) SIV зеленых мартышек CDesrosiers et. al. , 1989]. Изоляты SIVagm составляют обособленную филогенетическую группу, равноудаленную от других SIV и ВИЧ. SIVagm характеризуются высокой генетической вариабельностью, причем степень ее значительно выше, чем у SlVmac, SIVsm и ВИЧ [Johnson P.R. , et al. 1990; Li Y. , et al. 1989). Лентивирусы зеленых мартышек присутствует в популяции естественных хозяев в течение длительного периода, о чем свидетельствует широкое распространение SIV-инфекции среди африканских зеленых мартышек, отсутствие патологии, связанной с SIV, дивергенция штаммов SIVagm [Ohta Y., et al. 1988; Allan j.S. , et al. 19911.

В связи с- высоким полиморфизмом лентивируеов зеленых мартышек представляет значительный интерес получение новых изоля-тов SIVagm. Их изучение может дать информацию, полезную для понимания эволюции ВИЧ, а также помочь в разработке доступной эпепериментальной модели ВИЧ-инфекции.

- У -

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы являлось получение изолята 31Уа-гт, биологическая и молекулярно-биологическая его характеристика. Б соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

- разработка методов диагностики инфекции БIV у обезьян;

- изучение инфицированности лентивирусом зеленых мартышек б местах естественного обитания и в питомниках КЖЭПиТ ;

- получение изолята ленгивируса зеленых мартышек;

- биологическая, иммунологическая и ыолеклярно-биологическая характеристика выделенного штамма. .

Научная новизна.

В результате проведенных исследований получен изолят лен-тивируса зеленых мартышек, получйвшй название 3IV-3111. С>т уже известных изолягов этот штамм отличается по некоторым

антигенным характеристикам, указывающим на более близкое его родство с 31Ушс. Сведения, полученные в результате реетрикци-онного картирования генома подтверждают сообщения о

высоком генетическом полиморфизме штаммов 31Уает. Впервые показано различие в инфицированности различных подвидов зеленых мартышек..

Практическая значимость.

Методическая база, полученная в диссертационной работе, используется в приматологических центрах НИИ экспериментальной патологии и терапии (г. Сухуми) и Института Медицинской Приматологии (г. Адлер) при оценке пригодности животных для медико-биологических экспериментов, при формировании ЗГУ-негатив-ного репродуктивного стада животных. Получение изолята Б1У-5Ш расширяет перспективы разработки адекватной модели СПИД на низших приматах с целью изучения возможности испытания вакцинных и терапевтических препатагов.

На защиту выносятся следующие основные положения диссертации.

1. Применение твердофазного иммуноферментяого анализа и/или вестерн-блотинга с использованием в качестве тест-антигена БГУпас обеспечивают выявление Б1У-инфекции обезьян.

2. Зеленые мартышки питомников НИИ экспериментальной патологии и терапии, а также животные этого вида, полученные из мест естественного распространения, спонтанно инфицированы БIV.

3. Полученный от Б1У-псзитивной зеленой мартышки изолят 51У-51Л принадлежит к подсемейству лентивирусов и, относясь к группе Б^'агт, характеризуется высоким родством к Б1Угас. .

Апробация работы.

Апробация проведена на межлабораторной конференции Института Медицинской Приматологии АМН РФ, г. Адлер, май 1992г.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работа

Структура и объем диссертации.

• Диссертация изложена на 96 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (включающего 2 главы) , собственных исследований, изложенных в 2 главах, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 8 таблицами и 13 рисунками. Список литературы включает 88 источников ( 3 отечественных и 85 зарубежных авторов).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Штериалы исследования.

Основными материалами для настоящего исследования .служили: 1) 448 обезьян следующих видов: Cercopithecus aethiops, Cercopithecus mona, Papio hamadryas, Papio spinx, Theropitecus gelada, Macaca muíatta Животные производственного стада НИИЭ-ШТ содержались в гаремных группах. Обезьяны вида Cercopithecus aethiops, привезенные из мест естественного обитания, содержались в индивидуальных вольерах. 2) Перевиваемые суспензионные клеточные линии Molt4 clone8, СЕМх174, HUT-78, HUT-78, продуцирующая SlVtnac, HUT-78, продуцирующая SIVsm были любезно предоставлены д-ром R. Desrosiers; U937, С8166, МТ-2 -д-ром J. Huesmann. 3) Вирусные препараты SIVmac, SIVsm получали

из культурадьной аидкости соответствующих клеточных линий; концентрат SIVagm был предоставлен д-ром R. Desrosiers. 4) Мо-ноклональные антитела aHT«-p2ySIVjnac EMinassian et al, 1983]. 5) Образцы геномной ДНК из клеток перевиваемых ланий, б) Молекулярные зонды, представляющее ДЕа субклона SIVagm 266; 5'р2бб - от Nco-Ï сайта в левом LTR до Nco-I сайта в центральном регионе; 3'р265 - or Nco-I сайта в центральном регионе до Nco-I сайта в правом LTR; любезно предоставлены д-ром R. Desrosiers. 7) SlVmac - специфические прайыеры, GAG область:

1. . 5' -ACTGTCTGCGTCATCTGGTGC-3'

2. 5' -CCAGSCATTT ААТСТТСАСБ-3' ;

S1V - группоспешфические праймеры, POL область: 1: 5' -GG6AGCAATGGTG6CCGGATTACTGAGC-3' 2. 5' -CATGCTCCTTCACCTTTC-3' ; любезно предоставлены д-ром R. Desrosi ers.

Методы исследования.

Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) проводили по модифицированной методике [Daniel M. et al., 19881. Тест-антиген получали из кульгуральной жидкости линии HUT-78, продуцирующей SIVrrac. В качестве хромогена использовали ортофенилен-диамин. • Значения оптической плотности определяли при длине волны 492нм.

Электрофорез вирусных белков в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия проводили по методикам tLaemmli U. , 1970; wureno et. al. ,19853.

Вестерн-блоттинг - э дект рофоре т иче с кий перенос белков и иммунодетекцию на нитроцеллюлозе - проводили по методике [Daniel M. et al. , 19883. Блокировку осуществляли 8% раствором сухого обезжиренного молока. Для выявления связанной перокси-дазы применяли диаминобензидин.

Выделение SIVagm от зеленых мартышек осуществляли кокуль-тивированием клеток моноцитарно-макрофагального ряда периферической крови серопозитивных животных с клетками перевиваемых линий HUT-78, CEMxl74 и Kbit4 clones. Мононуклеары периферической крови в концентрации 1x106 кл/мл стимулировали конкана-валином А, 25 млг/мл, в течение суток, затем культивировали в присутствии 10% среды, содержащей неочищенный интерлейкин-2. Через 72 часа лимфоциты кокультивировали с клетками лермиссив-

ных линий Е соотношении 1:1. Смену ростовой среды производили раз в 3-4 дня.

Чувствительность различных клеточных линий к SIV-SU1. В ¡качестве инокулируемого вируса использовали культуральную жидкость линии Molt4 cione8, продуцирующей SIV-SU1, через 48 часов после пассажа Клеточные линии Molt4 clone8, HUT-78, МГ-2, Ю37, С81 б, СЕМх174 инфицировались вируссодержащей культу-ральной жидкостью. Активность обратной транскриптазы оценивали по интенсивности включения 32Р dTTP в новосинтезированную ДНК в' реакции обратной транскрипции, проводившейся по методике [Daniel M. et al, 19851. В качестве праймера для синтеза ДНК использовали poly rA: lygo dT.

Радиоиммунопреципитация. Инфицированные клетки метили метаболически 353-мегионином по методике [Schneider J. et. al. , 1984]. - Иммунные комплексы адсорбировались на протеин л-сефарозэ, олюяровали и подвергали электрофорезу в 12. 5% ПАТ. 355метионик меченные белки визуализировали агторадиографичес-ки.

Выделение плазмидной ДНК, содержащей субклоны SlVagrrß65, проводили модифицированным методом щелочного лизиса [Гловер Д., 1988].

Рестрпкционный анализ генома SIV-SU1 осуществляли с помощью модифицированного СБ [Маниатис и др. 19851. Меченные 32Р комплексы обнаруживали авторадиографически.

Цепная полимеразная реакция. Амплификацию проводили по методике [Allan et al., 19913. Амплифицированную ДНК подвергали электрофорезу в 1% агарозном геле. Визуализацию ДНК проводили с помощью этидиум бромида.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение инфицированности лентивирусом зеленых мартышек, обитающих в питомниках НИКЭПИТ, а также полученных из мест естественного обитания.

При обследовании 273 зеленых мартышек (С. aethiops) четырех подвидов (С.a aethiops, С.a. pygerythrus, С. a.sabaeus, С. a. tantalus) с помощью ИФА было выявлено 34 серопозитивные особи. Экспериментом были охвачены обезьяны как полученные ив мест естественного обитания (Кения, Эфиопия, Танзания), так и

из производственного стада НИИЭПиТ, которое формировалось из импортированных из Кении, Эфиопии и Нигерии квотных, а также их потомков. Обследование зеленых мартышек производственного стада показало, что их инфицированность значительно варьирует в зависимости от ■ подвида: 17Z животных подвида С. a. pygerythrus, и 0,7Z - С. a. aethicps. Обнаружены также единичные серопозитиЕНые обезьяны подвидов С. a sabaeus, С. a tantal us (табл. 1).

Исследование потомства серопозитивных С. aetniops показало, что детеныши рождаются без антител к SIV и приобретают их после достижения половозрелого возраста, Продемонстрирована существенная разница в распространении инфекции среди зеленых мартышек, обследованных непосредственно после привоза из мест естественного обитания, ассоциированная как с подвидом, так и с ареалом распространения животных (табл. 2). Серопозитивных особей подвида С. a. aethiops, импортированных из Эфиопии, обнаружено не было. Среди животных подвида С. a. pygerythrus, импортированных из Кении и Танзании, .распространение инфекции значительно варьировало. Так, обследование 47 обезьян из Кении выявило 8 (17%) серопозитивных особей, тогда как среди 25 животных из Танзании серопозитивными оказались 14 ( 56Х).

Серологическому-обследованию на наличие антител к SIV были подвергнуты небольшие группы животных производственного стада, включаювде обезьян разных видов (Шсаса mulatta, Papio hamadryas, Cerccpithecus gelada, Papio sphinx, Cercopithecus mona). с&ропозитирных особей среди этих животных-идентифицировано не было.

Спектр антител е сыворотках серопозитивных зеленых мартышек был охарактеризован с помощью ББ с использованием в качестве тест-антигена SIVmac (рис.1). Большинство сывороток перекрестно реагировали с белками gp32 (продукт гена ENV, аналог gp41 ВИЧ-1). gpl20 (продукт гена ENV, аналог gplSO ВИЧ-1), а так же с главным структурным белком р24 (продукт гена GAG). Единичные сыворотки реагировали со структурными белками р53 и р15. Реактивность антител в сыворотках зеленых мартышек с различными антигенами SIVmac не зависела от подвида обезьян.

Таблица 1. Распространение Б1У инфекции среди зеленых мартышек производственного стада НИИЭПиТ.

II-г II подвид | ЦС. aethiops ) и 1 кол-во обе лед. особей -Ii кол-во позитивных II особей И ii

II 1 1]С. a. aethiops | и i 135 II 1(0,7%) || и

II 1 ¡¡С. a. pygerythrus | 35 II 6 (17%) I л

II 1 ||С. a sabaeus | II 1 2 II 1 II II

1С. a tantalus | ii i 1 II 1 II я

II 1 ¡гибриды С. aethiops| ii— i. 7 __ II з В .4

Таблиц- 2, 217 инфекция среди африканских зеленых мартышек, полученных из мест естественного распространения.

ii- ¡подвид ||С. aethiops и 1 | страна-| экспортер 1 1 Iкол-во обслед. | особей 1 --1! | кол-во позит. 1 | особей ||

II ||С. a aethiops и 1 | Эфиопия 1 1 21 1 10 ||

II ||C. a pygerythrus ii 1 | Кения 1 1 47 1 1 8 (17%) |

Ii ¡1С. a pygerithrus и 1 | Танзания 1 1 | 25 1 | 14 (56%) ||

II ¡всего животных 1 1 1 . . 1 I 93 1 I 22 (23£) || _ л

- s -

Рисунок 1.

Перекрестная реактивность сывороток зеленых мартышек с антигенами SIVmac.

£3-рб4 Ы«р53

: m

• gp32 «p24

J ..

с

I ♦

Треки 1-14 - сыворотки С. aaethiops; трек 19 - сыворотка С. a sabaeus; трек 28 - сыворотка С. a tantalus; треки 15-18, 20-27,29,30 - сыворотки С. a pygerythrus; - - отрицательный контроль; + - положительный контроль, сыворотка SIV позитивной Macaca mulatta

- 10 -

Получение изодята SIVagm.

В результате серологического исследования оказался возможным отбор серопозитивных особей для дальнейшей работы по получению изолятов SlVagm. При выборе животных учитывались следующие факторы: наличие в их сыворотках AT к структурным белкам SIV в р акции ВБ, их принадлежность к разным подвидам зеленых мартышек. Экспериментом была охвачена группа из 4 животных (2 особи С. a pygerythrus, 1 - С. aaethiops, 1 -С. a sabaeus).

Попытки выделения SIVagm осуществлялись тремя различными методами кокультивирования клеток моноцитарно-макрофагального ряда серопозитивных ливотных с перевиваемыми линиями Molt4 clone8, СЕК&174, HUT-78. Цитопагический эффект (ЦПЭ), проявляющийся в угнетении пролиферации клеток или формировании синци-тиев, наблюдали во всех клеточных линиях начиная с 7-11 дня кокульткЕирования. На 21 день кокульгивации в одной из клеточных линий в постановке ЕБ с использованием моноклональных антител анти-р24 [Minassian et. al., 1988] была подтверждена вирусная продукция по наличию р24 в культуральной идкости. Это была линия Molt4 clone8, кокультивированная с лимфоцитами' С. apygerythrus, самца 2,5 лет, потомка животных, импортированных из Кении.

Таким образом получена клеточная линия, продуцирующая SIVagm. Новому изоляту было присвоено название SIV-SU1.

Репликация SIV-SU1 в человеческих Т-клеточных линиях.

Первым этапом в работе по исследованию свойств штамма было изучение пермиссивности различных перевиваемых Т-клеточных линий человеческого происхождения для SIV-SU1. Клеточные линии были инфицированы вируссодержащей культуральной жидкостью Molt4 clones, продуцирующей SIY-SU1. Вирусный сток обладал ре-вертазной активностью 12x104 имп/мин. Активность обратной' транскриптазы в бесклеточной культуральной жидкости измерялась через каждые 7 дней с момента заражения. На рисунке 2 приведены данные об активности обратной транскриптазы SIV-SU1 в изученных клеточных линиях. Как видно из приведенных данных, SIV-SU1 наиболее успешно реплицировался в клетках Kfolt4 clones

и МТ-2. Средняя эффективность репликации наблюдалась в клетках CEMX174 и слабая в HUT-78, U937, С8166. В линиях С8166 и HUT-7S репликация вируса сопровождалась угнетением пролифера-тивной активности и привела к гибели клеток соответственно на 14 и 21 день после инфицирования. Инфекция МГ-2, Molt4 clone8, CEf>lxl74 сопровождалась ЩТЭ в виде гигантских многоядерных клеток, культура МГ-2 на 24 день после инфицирования погибла.

Антигенная характеристика SIV-SU1.

Следующая серия экспериментов была посвящена антигенной характеристике итамма. Исследование белков SIV-SU1 методом им-муноблоттинга■ с гомологичной сывороткой обезьяны выявило следующие антигены: структурные белки р17, р24, р5Б (GAG продукты), gp41 gpl30 (ENV продукты), а также белок с молекулярным Бесом в 68kDa (предполагаемый POL продукт). Было обнаружено существенное различие в электрофоретической подвижности структурных белков SIV-SU1 и SIVmac 251. Главный структурный белок р24 SIV-SU1 мигрировал в электрофорезе быстрее, a gpl3Q, р55 -медленнее, чем соответствующие белки SIVmac 251. С помощью ра-диойммунопреципитации была исследована перекрестная реактивность белков SIV-SU1 с другими ленгивирусами приматов: ВИЧ-1, ВИЧ-2, SIVsm, SIVmac, SlVmnd, SIVagrrr( рис. 3). Главный структурный белок р24 SIV-SU1 перекрестно реагировал со всем выше- . перечисленными вирусами. Кроме того, сыворотка SIVsm-позитивного дымчатого мангобея перекрестно реагировала с gpl30, pi7 SIV-SU1, ВИЧ-2 - с gpl30, сыворотка SIV позитивной зеленой мартышки - с р55. Наиболее широкий спектр белков SIV-SU1 пре-ципи провала сыворотка SIV-позитивной макаки: gpl30 (env белок) , р55 (предшественник gag продуктов), а также gag белки р17/ р24 (трек N5, рис.3). Результаты радиоиммунопреципитации указывают на большую филогенетическую близость нового изолята SlVagm к г уппе BM-2\SIVnac\SIVsni, в частности к SIVmac, чем .к другим лентивирусам приматов.

Рисунок 2.

Активность обратной транскриптазы БIУ-эи1 в различных клеточных линиях.

Условные обозначения: Ш МТ-2

□ Мо1Ъ4 с1опе8 Ьь С8166 СЕМх174

X иэзб

X НШ-78

Рисунок 3.

Результаты радиоиммунопреципитации белков SIV-SU1.

1 2 3 4 5 6 7 8

др130 - -

р17-

Сыворотки: трек N: - БИЧ негативного человека; трек N2 -БИЧ-1 позитивного человека; трек N3 - ВИЧ-2 позитивного человека; трек N4 - ВИЧ-2 инфицированной Pan troglodytes; трек N5 - SIV позитивного Масаса mulatta; трек N6 - SIV позитивного Cercocebus atys; трек N? - SIV позитивного Papio sphinx; трек N8 - SIV позитивного Cercopihecus aethiops.

Исследование генома SIV-SU1 с помощью Саузерн-блотинга и

ДПР.

'Тотальная клеточная ДНК линии Kfolt4 clone8, инфицированной SIV-SU1, . была гибридизована с зондами 5'р266 и З'р2бб. Гибридизация проводилась в жестких (50% формамида,42оС) и мягких (30% формамида, 37оС) условиях. Оба зонда не гибридизова-лись с провирусом SIV-SU1 при жестких условиях. При мягких условиях гибридизация имела место с зондом 5'р266, но не с З'р2б6. Связано это по-видимому с тем, что З'р2бб зонд содержит наименее консервативную часть генома SIV - ген ENV. Данные гибридизации свидетельствуют о неспецифичности сайтов интеграции провируса SIV-SU1 в геном клетки-хозяина Саузерн-блотинг с образцами ДНК, обработанными эндонуклеазами HindiII, Ncol, SacI, Xba! продемонстрировал наличие следующих фрагментов: Hindi II - фрагмент 6,6 kB ; Ncol - 2,2 kB; Sacl -3,5kB Xbal - мажорный фрагмент 3,1 kB и минорный - 2,6кВ. При обработке ДНК ферментом Narl на авторадиограмме выявился фрагмент размером более 23 kB. Двойная рестрикция Narl/Xbal продемострирова-ла, что SIV-SU1 обладает уникальным сайтом эндонуклеазы Narl (рис. 4). Этот сайт консервативен для всех исследованных в этом отношении лентивирусов приматов и локализован у 5"LTR С Li Y.,1988]. Сайты рестрикционных эндонуклеаз, по которым прокар-тирован геном SIV-SU1, не совпадают с таковыми у других ленти-вирусов приматов (за исключением сайта Marl). На рисунке 5 представлена рестриктная карта SIV-SU1.

В первой серии экспериментов, проведенных с помощью ЦПР, исследовалась ДНК Molt4 clone8, продуцирующей SIV-SU1, на наличие последовательностей, родственных SIVmac с использованием праймеров, специфических для участка гена GAG SIVmac длиной 230 пар нуклеотидов. Последовательностей, родственных соответствующему участку гека GAG SIVmac, обнаружено не было. Во второй серии экспериментов, использовались праймеры, позволяющие проводить амплификацию участка гена POL всех известных штаммов SIV. По имо ДНК клеточной линии, продуцирующей SIV-SU1, исследовалась ДНК клеточной линии, пермиссивной для некоторых штаммов SIV - CEMxl74 после кокультивирования с лимфоцитами SIV-позитивной зеленой мартышки подвида С. asabaeus. В том и другом случае амплифицировался фрагмент соответствующей длины

Рисунок 4.

Результаты Саузерн-блотинга геномной ДНК МоИ4 с1опе8, продуцирующей БIV-5111, с зондом 5'р266.

12 3 4

23"

9,46,6-

м-

2,3-г,о—

Трек N1 - ДНК, рестрицированная эндонуклеазой Маг1.;

трек N3 - ХЬа1;

трек N4 - Маг1/ХЬа1;

трек N5 - нерестрицированная ДНК.

- ±и -

Рисунок 5.

Рестриктная карта SIV-SU1.

Narl HindiII Xbal Xbal HindIII Xbal

III ! II

!-1-1-1-1-1-S-1

SIV-SUI ILTRI ¡LTRI i_i i_i

T

~r

-1

1-I-1-г

0123456789 10

■ kb

С1200 п. н.). В результате проведения ЦБР с использованием праймеров к различным участкам генома SIV было установлено: наличие в гене POL SIV-SU1 последовательностей, гомологичных SIV-группоспецифическим праймерам; наличие в культуре СЕМх174, кокультивированной с лимфоцитами SIV-позитивного С. a.sabaeus, интегрированного провируса, POL последовательность которого амплифицировалась с SIV-группоспецифическими праймерами.

Анализ полученных результатов позволяет сформулировать следующие основные выводы:

1.' Разработаны методы серологической диагностики инфекции SIV у обезьян - ИФА и ВВ.

2. Изучена распространенность SIV инфекции у обезьян различных видов. Показано, что зеленые мартышки подвида С. a pygerythrus являются носителями SIV чаще, чем зеленые мартышки подвида С. a aethiops.

-3. От SIV-позитивной зеленой мартышки выделен и охарактеризован оригинальный штамм вируса иммунодефицита зеленых мартышек - SIV-SU1.

4. Изучен спектр хозяев in vitro SIV-SU1. Наиболее пер-миссивной линией для этого штамма является Molt4 clone8.

5. Идентифицированы основные белки Еириона SIV-SU1: р17, р24, р55, р68, gp41, gplSO. По своим антигенным характеристикам SIV-SU1 ближе к SIVnac, чем к другим лентивирусам приматов. Рестрикционный анализ выделенного штамма подтвердил сообщения о высоком генетическом полиморфизме лентивирусов зеленых мартышек.

Основные результаты диссертации отражены в следующих работах.

Simian lentivirus from vervet monkey (Cercopithecus pygerithrus) related to both SIVagm and SlVmac. Voevodin A. , Rezikyan S. , Klots I. , Luke W. , Butler C. , Sutjipto S., Qettie A., Hunsmann 6. , Desrosiers R. , Marx P. Fifth International Conference on AIDS in Africa. Kinshasa, Zair, 199G, Abstracts, P. 187.