Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Влияние янтарной кислоты на антгельминтную и иммуномодулирующую активность левамизола

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Влияние янтарной кислоты на антгельминтную и иммуномодулирующую активность левамизола"

На правах рукописи

КАРАЧЕВЦЕВА ЕВГЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА

ВЛИЯНИЕ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ НА АНТГЕЛЬМИНТНУ Ю И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩУЮ АКТИВНОСТЬ ЛЕВАМИЗОЛА

06.02.02,- Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

2 4 ОКТ 2073

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Курск-2013 005536030

005536030

Работа выполнена в лаборатории «Ветеринарная медицина» ГНУ «Курский НИИ агропромышленного производства» Россельхозакадемии

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Евглевский Алексей Алексеевич

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Скира Василий Николаевич

Официальные оппоненты: Мищенко Владимир Александрович,

доктор ветеринарных наук, профессор, ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», заведующий отделом болезней рогатого скота и свиней

Лебедева Марина Георгиевна,

кандидат ветеринарных наук, ОБУ «Станция по борьбе с болезнями животных» Курского района Курской области, руководитель

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-

исследовательский ветеринарный

институт патологии, фармакологии и терапии» Россельхозакадемии

Защита состоится «19» ноября 2013 года в «13-00» часов на заседании диссертационного совета Д 240.040.03 при ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И.Иванова» по адресу: 305021, г. Курск, ул. К.Маркса,70, КГСХА

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И.Иванова»

Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академии имени профессора И.И.Иванова и на Интернет - сайте ВАК: http://vak2.ed.gov. ги

Автореферат разослан «18» октября 2013 года

Ученый секретарь

диссертационного совета --Рыжкова Галина Федоровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний у животных предложено огромное количество иммуностимулирующих препаратов. Сфера применения иммуностимуляторов в ветеринарной практики постоянно расширяется. Об этом свидетельствуют многочисленные исследования и публикации. Придавая важное значение проблеме стимуляции иммунной системы, зачастую в стороне остаются вопросы нормализации обменных процессов. Между тем обменные и иммунные процессы тесно взаимосвязаны. Именно это обстоятельство выдвигает перед исследованиями задачу поиска и разработки нового поколения препаратов, обладающих иммунометаболиче-ским действием. В решении этой теоретически и практически важной задачи особое значение приобретает не только поиск новых оригинальных композиций, но и вопросы оптимизации лечебно-профилактических схем их применения, обеспечивающих максимальную биодоступность препаратов для клеток-мишеней и специфически направленных эффектов (Дауга-лиева Э.Х, Филлипов В.В., 1991; Игнатов П.Е., 1995; Федоров Ю.Н. с со-авт., 1999; Прудников С.И., Прудникова Т.М., 1997 и др.).

Всё вышеуказанное обусловило цель и задачи диссертационного исследования.

Цель исследования. Теоретическое и экспериментальное обоснование получения композиции на основе сочетания левамизола с янтарной кислотой и изучение ее антгельминтной и иммунометаболической активности.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- теоретически обосновать и клинически оценить разные варианты сочетаний левамизола с янтарной кислотой;

- провести оценку антгельминтной активности сочетаний левамизола и янтарной кислоты;

- изучить влияние разных композиций левамизола и янтарной кислоты на динамику иммунобиохимических и гематологических показателей поросят;

- в научно-производственном опыте провести оценку эффективности применения левамизола янтарного в системе мер обеспечения здоровья поросят в подсосный период выращивания.

Научная новизна. Теоретически обосновано и экспериментально доказана возможность сочетаний иммуномодулятора антгельминтика левамизола и метаболика янтарной кислоты. Изучена антгельминтная и им-мунометаболическая активность левамизола в комплексе с янтарной кислотой. Авторские научные исследования положены в основу способа получения комплексного препарата с иммунометаболической и антгельминтной активностью (Заявка зарегистрирована под №2012145513 от 25.10.2012г в Роспатенте); способ получения комплексного иммуномета-

болического препарата с антиинфекционной активностью (Заявка зарегистрирована под №2012145512 от 25.10.2012г. в Роспатенте).

Практическая значимость работы. Авторские научные исследования доказывают эффективность сочетания левамизола с янтарной кислотой для профилактики и лечения нематоцидных болезней свиней. Разработан способ получения комплексного препарата с антгельминтной и имму-нометаболической активностью. Разработан способ получения комплексного препарата с иммунометаболической активностью и показана эффективность его применения для коррекции обменных и иммунных процессов, профилактики желудочно-кишечных заболеваний поросят и создания благоприятного иммунобиохимического фона при их вакцинации. Материалы диссертационного исследования вошли составной частью во временные нормативные документы, утвержденные начальником управления ветеринарии Курской области и директором Курского НИИ агропромышленного производства Россельхозакадемии.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование сочетания иммуномо-дулятора антгельминтика левамизола с метаболиком янтарной кислоты.

2. Антгельминтная и иммунометаболическая активность нового варианта комплексного препарата.

3. Результаты научно-производственных опытов по применению левамизола янтарного для профилактики желудочно-кишечных заболеваний, коррекции иммунобиохимических процессов поросят подсосного периода выращивания и создания благоприятного иммунобиохимического фона при их вакцинации.

Апробация и публикация результатов исследования. Основные результаты диссертационного доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ «Курский НИИ агропромышленного производства» Россельхозакадемии (2010-2013 гг.), на заседании отдела животноводства и ветеринарии ГНУ «Курский НИИ агропромышленного производства» (2013 г); на Международной научно-практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» - Белгород, 2012.; Международной научно-практической конференции «Агропромышленный комплекс: контуры будущего» - Курск, 2012; Всероссийской научно-практической конференции «Инновационные пути развития агропромышленного комплекса: задачи и перспективы» - Зерно-град, 2012.

По материалам, представленным к защите диссертации опубликовано 6 статей, в том числе 2 в рецензированных журналах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений. Иллюстрирована 27 таблицами.

Список использованной литературы содержит 227 источников, из них 24 иностранных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2010 - 2013 гг. в лаборатории «Ветеринарная медицина» Курского НИИ агропромышленного производства Рос-сельхозакадемии по теме 08.02.01.01. «Разработать новые препараты, им-мунометаболической коррекции для обеспечения здоровья и управления эпизоотическими процессами при наиболее значимых факторных болезнях продуктивных животных».

Основные научно-производственные опыты проведены в СПК «Содружество» и на свинокомплексе ОАО «Магнитный» Курской области.

Иммунный статус подопытных животных изучали на основании показателей клеточной и гуморальной систем иммунитета.

Состояние клеточного иммунитета изучалось путем определения количества Т- и В-лимфоцитов по методике, разработанной Коромысловым Г. Ф. и Солодовниковым В.Л. (1982).

В-лимфоциты (В-л) определяли в реакции комплементарного розет-кообразования с эритроцитами мышей.

Бактерицидную активность по методике Смирновой О.В. и Кузьминой Т.А.

Лизоцимную активность определяли по методике Каграмановой К.А. и Ермольевой З.В. (1966).

Фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ) определяли согласно методических указаний ВНИВИПФиТ (2005г.).

Количество гемоглобина в крови определяли с помощью гемометра

Сали.

Содержание эритроцитов и лейкоцитов на счетчике частиц Культер-Каунтер (Франция).

Общий белок - рефрактометрическим методом. Щелочной резерв сыворотки крови, содержание общего кальция, содержание фосфора, каротин, уровень кетоновых тел определяли согласно методических указаний, изложенных в учебном пособии Шарабрина И.Г. (1975).

Клиническое исследование проводили общепринятыми методами. Экспериментальные опыты проводились на белых мышах.

В соответствующих разделах диссертационной работы мы более подробно детализируем методические подходы проведения экспериментальных и производственных опытов.

Статистическую обработку полученных данных провели согласно методическим указаниям Баюн Ю.К. (1988).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Теоретическое обоснование получения препаратов иммунометаболической направленности на основе янтарной

кислоты и левамизола Обозначенная концепция по одновременной стимуляции обменных и иммунных процессов нами была реализована при разработке комплексного препарата на основе янтарной кислоты и левамизола.

Янтарная кислота (ЯК) является мощным стимулятором обмена веществ живой клетки. Объектом ее действия являются клетки и ткани, находящиеся в состоянии возбуждения или патологически измененные. Абсолютная безвредность ЯК и ее соединений делают ее весьма привлекательной при разработке нового поколения так называемых «умных» лекарств (Кондрашова М.Н., 1996 г.).

Левамизол - давно известен как антигельминтный препарат. При изучении его антигельминтного действия было обнаружено, что он повышает общую сопротивляемость организма и может быть использован как средство для иммунотерапии различных заболеваний, патогенез которых связан с расстройством иммуногенеза. Однако левамизол обладает выраженным побочным, преимущественно судорожным действием на организм, в связи с чем его неохотно используют в клинике лечения больных животных. Совершенно очевидно, что снижение токсичности левамизола могло бы возродить интерес к нему иммунологов, инфекционистов, паразитологов. Именно эта задача представлялась для нас наиболее приоритетной при проведении собственных научных исследований.

Влияние янтарной кислоты на снижение токсичности фармакопейного левамизола

В предварительных опытах мы установили, что внутрибрюшное введение фармакопейного левамизола 10% и 7,5% концентрации в объеме 0,25 мл вызывало быстрое, в течение одной минуты развитие судорог и гибель мышей. При этом гибель мышей при введении 10% левамизола наступала в течение 40-70 секунд. Введение 7,5% левамизола вызвала гибель мышей в течение 2-3 минут при тех же симптомах.

Первая серия. Первоначально была апробирована схема раздельного применения янтарной кислоты (сукцината натрия) и фармакопейного раствора 7,5% левамизола. Растворы сукцината натрия (рН=5,5-6,0) имели 0,5-1-1,5 и 2,5% концентрацию янтарной кислоты.

С учетом быстроты развития клинических признаков и гибели белых мышей растворы сукцината натрия вводились за 30 и 5 минут до введения левамизола. Оба препарата вводились в объеме 0,25 мл.

Оценку действия препаратов провели визуально. Время гибели подопытных мышей отражено в таблице 1.

Таблица 1 - Влияние сукцината натрия на выживаемость белых мышей при применении левамизола

Сукцинат натрия с активностью ЯК Гибель мышей спустя (минут)

2-3 4-5 6-10

0,5% п=5/п=5 2/2 1/2

1% п=5/п=5 1/1

1,5% п=5/п=5 1/1

2,0% п=5/п=5 1/1

Контроль п=3 3

Примечание. Числитель - количество погибших мышей при введении сукцината натрия за 30 минут, знаменатель - количество погибших мышей при введении сукцината натрия за 5 минут до введения левамизола.

На фоне хорошо выраженных судорог у мышей контрольной группы, у особей из других подопытных клинический эффект на введение левамизола проявлялся заметно слабее. Развитие симптомов судорог наблюдали не у всех мышей. У остальных особей наблюдали лишь периодические вздрагивания без проявления судорог.

Результаты данной серии опытов свидетельствовали о том, что янтарная кислота, представленная сукцинатом натрия, обеспечивает выраженное снижение токсичности фармакопейного левамизола. При этом защитный эффект 1% янтарной кислоты не уступает её более концентрированным растворам.

Во второй серии экспериментальных опытов нами была апробирована композиция единого состава на основе 1% янтарной кислоты и 7,5% левамизола. При смешивании в растворе янтарной кислоты и левамизола выпадения осадка не произошло, что свидетельствовало о совместимости компонентов.

Тестирование на токсичность левамизола янтарного провели в на белых мышах. Опытной группе мышей (п=5) внутрибрюшинно в объеме 0,25 мл ввели комплексный состав левамизола с янтарной кислотой, контрольной группе мышей (п=5) был введен стандартный (7,5% фармакопейный) раствор левамизола в объеме 0,24 мл. Спустя 2-3 минуты у всех контрольных мышей наблюдали бурно выраженные судороги. Все контрольные мыши погибли в течение 3-5 минут после введения левамизола. У мышей опытной группы развитие судорог и гибель мышей наблюдали спустя 1015 минут.

Практически аналогичные данные были получены на группах мышей, которым вводился раствор левамизола с активностью 7,5 и 5 терапевтических доз. Результаты сравнительного испытания комплексного соста-

ва левамизола с янтарной кислотой и стандартного фармакопейного раствора левамизола представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Сравнительная оценка противосудорожного и летального эффекта комплексного препарата на фоне стандартного раствора левамизола

Группа мышей (п=5) Препарат (количество терапевтических доз-ТД) Развитие судорог после введения препарата (минут) Развитие угнетения (минут) Выживаемость, кол-во/%

начало продол-житель-ность начало продолжитель-ность

1 опытная Левамизол+ЯК (Ю ТД) 10-25 10-15 10-15 15-20 2(40)

1 контроль Левамизол 10 ТД 2-3 2-3 - - 1(20)

2 опытная Левамизол+ЯК 7,5 (ТД) 15-20 10-15 10-15 10-15 3(60)

2 контроль Левамизол 7,5 (ТД) 2-3 10-15 - - 1(20)

3 опытная Левамизол+ЯК (5 ТД) 10-15 10-15 5(100)

3 контроль Левамизол (5ТД) 2-3 10-15 5-7 15-20 3(60)

Оценка антгельминтной активности

Опыт проведен на поросятах со средней массой тела 30-35кг, спонтанно инвазированных аскаридозом и трихоцефалёзом.

Поросятам первой опытной группы (п-7) подкожно ввели 7,5% лева-мизол, а второй группе (п-7) испытуемый комплексный препарат. Оба препарата вводились в терапевтической дозе 1мл на 10кг массы тела (7,5мг/кг по АДВ).

После введения фармакопейного левамизола у животных, спустя 1015 минут начали проявляться выраженные признаки интоксикации: рвота, затрудненное дыхание, нервные явления. Данные симптомы проявлялись в течение часа, затем постепенно редуцировались. При применении комплексного препарата данные симптомы не зарегистрированы. Однако, у отдельных животных в слабо выраженной степени отмечались признаки беспокойства.

Результаты копрологических исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Антгельминтная активность левамизола и комплексного препарата

к- во жи в-х Количество яиц в 1 г фекалий Эффективность лечения

Аскаридоз Трихоцефалез Аскаридоз Трихоцефалез

До лечения После лечения До лечения После лечения ЭЭ (%) ИЭ (%) ЭЭ (%) ИЭ (%)

Г руппа № 1. Левамизол 7,5%

П-7 ЭИ-71,5 ЭИ-42,9 ЭИ-100 ЭИ-28,6 ЭЭ 40%± 0,9 ИЭ 76,7±0,7 ЭЭ 71,4±0,4 ИЭ 71,9%±0,6

ИИ- 39,5±2,2 ИИ- 9,2±0,7 ИИ- 45,2±2,6 ИИ-12,7±1,2

Группа № 2. Левамизол 7,5%+1% янтарной кислоты

П-7 ЭИ-71,5 ЭИ-14,3 ЭИ-100,0 ЭИ-38,6 ЭЭ 80% ИЭ 78%±0,5 ЭЭ 61,4±0,5 ИЭ 71,8%±0,6

ИИ- 37,9±2,2 ИИ- 8,2±0,7 ИИ-41,5±2,3 ИИ-11,7± 1,2

Примечание: ЭИ (экстенсивность инвазии) - количество зараженных особей из всего обследованного поголовья, выраженное в процентах.

ИИ (интенсивность инвазии) - количество выявленных паразитов определенного вида и оцениваются в экземплярах.

Следующий опыт был проведен на поросятах 2-2,5 месячного возраста, спонтанно инвазированных аскаридами. Животным первой группы внутримышечно инъецировали испытуемый препарат (7,5% левамизол + 1% ЯК+0,1% лимонной кислоты) в дозе 1мл на 10 кг массы тела, поросятам второй группы в той же дозе вводили известный препарат (7,5% левамизол + 1% ЯК). Поросятам третьей группы в аналогичном объеме вводился стандартный раствор 7,5% левамизола.

При клиническом наблюдении за подопытными животными установлено, что включение ЯК, а так же ЯК в сочетании с ЛК, в состав препарата позволило еще более выражено снизить токсическое действие левамизола на нервную систему организма животных.

Результаты копрологических исследований отражены в таблице 4.

Таблица 4 - Антгельминтная активность 7,5% левамизола + ЯК, 7.5% левамизола+ЯК+ЛК и стандартного 7,5% левамизола при аскаридозе

препарат коли- инвазированность Эффектив-

чест- ность лечения

во до введения через 18 дней ЭЭ иэ

живот (%) (%)

ных

левамизол + ЯК 10 эи- ИИ- эи-з ИИ- ээ- иэ-

8(80%) 68,3±2,7 (30%) 31,3±1,9 62,5% 54,2%

левамизол + 10 ЭИ-8 ИИ- эи-з ИИ- ЭЭ- иэ-

ЯК+ЛК (80 %) 65,4±2,2 (30%) 30,2±1,7 62,5% 53,8%

левамизол 10 ЭИ- ИИ- ЭИ-4 ИИ- ЭЭ- ИЭ-

10(100%) 69,1 ±3,4 (40%) 45,3±2,2 60% 34,5%

Примечание: ЭИ (экстенсивность инвазии) - количество зараженных особей из всего обследованного поголовья, выраженное в процентах.

ИИ (интенсивность инвазии) - количество выявленных паразитов определенного вида и оцениваются в экземплярах.

Проведённые опыты убедительно свидетельствовали о том, что полученный комплексный препарат по сравнению с фармакопейным левами-золом, обладал более высокой антгельминтной активностью и не проявлял токсического действия на организм животных.

Антгельминтная активность левамизола янтарного при снижении действующего вещества

Принимая во внимание, что добавление к фармакопейному левами-золу янтарной кислоты позволило усилить его антгельминтую активность на 27%. Это обстоятельство делало вполне возможным снизить содержание действующего вещества в рекомендованной терапевтической дозе не менее чем на 25%. С учетом вышеизложенного нами были изготовлены экспериментальные образцы инъекционного левамизола с 5% содержанием действующего вещества. При этом одна серия препарата дополнительно включала 1% янтарной кислоты.

Научно-производственный опыт был проведен на подсвинках 3-3,5 месячного возраста, спонтанно инвазированных нематодами. Опытной группе поросят (п=9) применили комплексный препарат (5% левамизола + 1% янтарной кислота) из расчета 10 мл на введение. Другой группе (п=8) был введен 5% левамизола в аналогичном объеме. Третьей группе (п=8) был введен фармакопейной 7,5% левамизол.

Еще на двух группах (четвертая п=7 и пятая п=8) мы апробировали схему сочетанного применения 1% сукцината натрия и левамизола 5 и

7,5% активности по действующему веществу. Сукцинат натрия вводился в объеме 5,0 мл внутримышечно.

По результатам клинических наблюдений установлено, что в ответ на введение фармакопейного 7,5% левамизола на 10-15 минуте у поросят начали проявляться вполне характерные симптомы выраженного тремора мышц, беспокойства, слюнотечения. У отдельных поросят позывы к рвоте. Побочное действие левамизола наблюдалась в течение 30-40 минут, после чего вышеуказанные симптомы начали постепенно редуцироваться.

Менее выраженные, симптомы побочного действия наблюдали на группе поросят, которым был введен 5% левамизол. Развитие симптомов отмечали на 10-15 минутах, а затухание спустя 20-25 минут.

Каких либо признаков беспокойства мы не отметили у поросят которым вводился левамизол янтарный (первая группа) и у животных 4-й группы (левамизол в сочетании с 1% сукцинатом натрия).

Слабовыраженные признаки незначительного беспокойства (без тремора и слюнотечения) были отмечены у 2 из 8 поросят пятой группы, которым был введен фармакопейный 7,5% левамизол в сочетании с 1% сукцинатом натрия.

По результатам копрологических исследований фецес установлено, что 5% левамизол янтарный не уступает по антгельминтной активности 7,5% фармакопейному. В то же время нематоцидная активность 5% левамизола без добавления янтарной кислоты была на 10-15% ниже 7,5% фармакопейного.

Влияние композиций левамизола с янтарной кислотой на иммунометаболическое состояние поросят.

Опыт был проведен на клинически здоровых поросятах 1,5 месячного возраста. Первой группе был введен 7,5% левамизол в комплексе с 1% янтарной кислотой. Второй группе - 7,5% фармакопейный левамизол. Данная группа выступала в качестве контрольной по отношению к первой. Третьей группе вводился 5% левамизол в комплексе с 1% янтарной кислотой. Четвертой - 5% левамизол. Данная группа являлась контрольной по отношению к третьей.

Результаты исследований представлены в таблицах 5 и 6.

Таблица 5 - Влияние левамизола и янтарной кислоты на уровень лимфоцитов (%)

Группа Периоды исследований (сутки)

В начале опыта 7 14 21

1 38,52±7,14 42,53±5,27 45,56±5,46 49,6±6,12

2 39,83±5,37 36,36±5,16 38,73±4,82 42,74±5,29

3 39,62±5,84 44,84±5,22 47,74±5,18 50,32±4,34

4 40,59±5,68 39,75±5,26 41,20±,57 43,54±4,68

Примечание: разница в показателях статистически достоверна по отношению к контролю (*р<0,05).

Таблица 6 - Влияние левамизола и янтарной кислоты на уровень Т-и В - лимфоцитов

группа Периоды исследований (сутки)

В начале опыта 7 14 21

Т-лимфоциты (10;/л)

1 33,6±2,8 35,2±3,4 38,4±4,1 39,1±3,8

2 34,2±2,7 31,4±2,3 33,6±2,7 34,5±2,6

3 35,1±3,4 39, Ш,6 41,6±4,2 42,0±3,8

4 33,8±2,9 34,5±3,2 37,3±3,4 37,8±3,2

Т-хелперы (%)

1 14,7±1,8 16,8±2,1 20,9±2,6 22,2±2,3

2 15, Ш,6 12,3±2,4 14,9±2,2 15,2±2,1

3 15,7±2,1 19,2±2,9 22,8±2,8 26,7±2,5

4 15,2±2,3 14,9±2,1 15,1±2,3 16,9±2,4

Т-супрессоры (%)

1 9,8±0,7 11,1±0,6 10,7±0,4 11,6±0,5

2 10,1 ±0,6 10,8±0,4 10,2±0,2 9,7±0,4

3 10,2±0,9 11,3±0,7 11,9±1,4 11,5±1,2

4 10,3±0,8 10,6±0,5 11,2±0,8 11,2±1,1

В-лимфоциты (%)

1 опытная 1,98±0,25 2,32±0,22 2,54±0,23 2,46±0,32

2контрольная 2,04±0,26 2,02±0,18 2,16±0,24 2,24±0,28

Зопытная 1,94±0,22 2,49±0,31 2,92±0,27 2,78±0,34

4контрольная 2,18±0,26 2,29±0,31 2,63±0,24 2,74±0,28

Примечание: * разница в показателях достоверно по отношению к контролю (*р<0,05).

Влияние левамизола и янтарной кислоты на гематологические и биохимические показатели крови представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Влияние левамизола и янтарной кислоты на гематологические и биохимические показатели крови

группа Периоды исследований (сутки)

В начале опыта 7 14 21

Эритроциты, млн/мкл

1 4,86±0,21 4,92±0,23 6,94±0,42 5,96±0,38

2 4,52±0,27 4,38±0,18 4,86±0,23 4,72±0,19

3 4,58±0,25 6,25±0,22 6,29±0,23 6,08±0,26

4 4,71±0,32 4,68±0,21 5,24±0,38 5,31±0,23

Гемоглобин, г/л

1 9,26±0,45 9,84±0,92 11,86±0,87 11,5±0,74

2 9,82±0,76 9,26±0,54 9,74±0,68 9,75±0,26

3 9,43±0,62 11,46±1,02 11,22±0,98 11,23±0,29

4 9,34±0,73 9,28±0,84 9,86±0,84 9,74±0,56

Общий кальций, ммоль/л

1 2,43±0,18 2,96±0,24 3,21±0,29 2,84±0,17

2 2,5б±0,24 2,64±0,18 2,68±0,262,7 2,63±0,19

3 2,47±0,26 3,12±0,29 3,34±0,244,2 3,12±0,18

4 2,36±0,18 2,44±0,22 2,51 ±0,18 2,46±0,28

Неорганический фосфор, ммоль/л

1 1,78±0,12 1,76±0,15 1,72±0,15 1,74±0,17

2 1,82±0,14 1,85±0,11 1,85±0,11 1,88±0,12

3 1,69±0,17 1,77±0,18 1,77±0,18 1,76±0,18

4 1,74 ±0,11 1,8б±0,17 1,86±0,17 1,82±0,15

Резервная щелочность, об % С02

1 29,8±2,1 49,6±3,1 40,8±3,1 34,8±2,7

2 30,2±2,7 27,6±2,3 29,8±2,9 31,4±3,1

3 30,5±2,3 45,2±2,9 42,6±2,7 37,5±2,9

4 29,6±2,9 28,4±2,3 30,6±3,1 32,5±2,4

Примечание: разница в показателях статистически достоверна по отношению к контролю (*р<0,05).

Теоретическое и экспериментальное обоснование получения комплексного нммунометаболического препарата

В практике ветеринарии 10% и 7,5% фармакопейные растворы левамизола для иммуностимуляции не применяют. Для проведения научно-экспериментальных опытов нами были изготовлены экспериментальные серии препаратов с 1,0-2,0 и 3,0% концентрации левамизола и 1% янтар-

ной кислоты. В качестве контроля были приготовлены испытуемые образцы левамизола аналогичной концентрации, но без янтарной кислоты. ^

Испытание на токсичность провели на 4-х группах белых мышей (по п=7 в каждой группе) массой 19-20г. При этом одной группе мышей внут-рибрюшинно вводился 1% левамизол в комплексе с 1% янтарной кислотой, другой 3% левамизол с 1% янтарной кислотой. Соответственно еще двум группам мышей( 3 и 4) вводился 1 и 3% левамизол, без янтарной кислоты (контрольные группы).

Испытуемые растворы левамизола и комплексного препарата вводили внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл. В перерасчете на действующее вещество (ДВ) это составляло 0,25 мг и 0,75 мг на одну мышь со средней массой тела 20 г. В перерасчете на 1 кг массы тела это составляло 12,5 мг (1% левамизола) и 37,5 мг (3% левамизола).

В ходе предварительных опытов нами было установлено, что 1Л}100 при внутрибрюшинном введении левамизола составила 2 мг на одну мышь с массой тела 20 г., в перерасчете на 1 кг массы тела это составляло 100 мг. По литературным данным, ЬБ50 при подкожном введении левамизола белым мышам составляет 200-210 мг на 1 кг массы тела. Исходя из этого, ЬОЮО должна быть в пределах 400-420 мг/мл. Следовательно, токсичность левамизола при внутрибрюшинном введении в 4 раза выше, чем при подкожным.

При первом введении комплексных препаратов мы не отметили видимых изменений в поведении подопытных мышей. Напротив, у 2-х из 7 мышей, которым был введен испытуемый 3% раствор левамизола спустя 20-30 минут, отмечались редкие вздрагивания тела. Через 20-30 минут эти симптомы полностью редуцировались.

Собственно аналогичная картина повторилась и при повторном, спустя 24 часа, введении образцов комплексного препарата и контрольных

растворов левамизола.

При последующих введениях препаратов отмечено нарастание интенсивности и продолжительности симптомов тремора у мышей контрольных групп. После четвертого введения у мышей контрольных групп были зарегистрированы судороги и их гибель.

Это указывало на то, что компенсаторные возможности их организма были уже исчерпаны.

Эффективность применения комплексного препарата для стимуляции иммунометаболических процессов в опытах на поросятах

Результаты испытания на поросятах гипотрофиках

В опыт включали поросят-гипотрофиков в возрасте 7-8 дней, имевших массу тела в пределах 1100-1200г. Поросятам первой группы внутримышечно вводился испытуемый комплексный иммунометаболический препарат (1% левамизол+1% янтарная кислота). Поросятам второй группы (она была контрольной по отношению к первой) вводили 1% левамизол.

Поросятам третьей группы вводили комплексный препарат с 1,5% активностью по левамизолу и 1% по янтарной кислоте. Соответственно, поросятам четвёртой группы вводили 1,5% левамизол. Поросятам пятой группы (она была контрольной по отношению к первой, второй, третьей и четвёртой группам) в качестве плацебо вводился изотонический раствор хлорида натрия.

Препараты вводили внутримышечно, трёхкратно, раз в пять дней, с дозы 1,0мл. При каждом последующем введении объём увеличивали на 0,5 мл.

Влияние испытуемых препаратов на динамику гематологических и биохимических показателей представлено в таблицах 8 и 9.

Таблица 8 - Влияние комплексного препарата, в сравнении с левамизолом на гематологические и биохимические показатели

Сроки исследований Группы Эритроциты (10 12/л)

Первая 1% як+1%л Вторая 1%л Третья 1%як+1,5л Четвертая 1,5%л Пятая изот. раствор

фон 4,18±0,15 4,03±0,16 4,07±0,12 4,02±0,25 4,27±0,17

7 4,94±0,39 4,21±0,14 4,92±0,44 4,17±0,23 4,36±0,24

14 6,02±0,28 4,37±0,29 5,84±0,23 4,36±0,28 4,29±0,19

21 6,56±0,34 4,52±0,23 6,48±0,29 4,49±0,21 4,3б±0,22

28 6,58±0,26 4,75±0,28 б,45±0,26 4,51±0,32 4,42±0,27

Гемоглобин (г/л)

фон 7,8±0,2 7,9±0,5 8,2±0,3 7,9±0,2 7,9±0,2

7 9,0±0,2 8,9±0,3 8,9±0,5 8,2±0,5 8,2±0,2

14 10,8±0,5 8,7±0,4 10,2±0,3 8,6±0,5 8,2±0,3

21 10,8±0,3 8,8±0,5 10,6±0,1 8,4±0,3 8,2±0,4

28 10,9±0,2 8,9±0,4 10,7±0,2 8,7±0,2 8,3 ±0,2

Прш1ечание:*разница достоверна (р-0,05)

Результаты биохимических исследований сыворотки крови представлены в таблице 9.

Таблица 9 - Влияние комплексного препарата в сравнении с левами-

золом на биохимические показатели подопытных поросят

Сроки исследовании Белок, г/л

Первая 1% як+1%л Вторая 1%л Третья 1%як+1,5л Четвертая 1,5%л Пятая изот. раствор

фон 49,3±2,1 50,0±2,7 49,8±1,9 51,3±1,7 50,6±1,8

7 53,8±2,6 52,1±2,5 55,4±2,3 54,8±2,1 49,7±2,9

14 59,6±3,2* 53,5±1,9 59,7±3,1* 55,3±2,8 50,1±2,7

21 62,2±2,1* 54,8±2,6 62,2±2,7* 56,7±2,2 49,8±2,4

28 64,4±2,7* 56,4±2,3 65,1±3,1* 55,9±2,9 50,6±2,1

Общий кальций, ммоль/л

фон 1,52±0,11 1,54±0,18 1,54±0,16 1,56±0,12 1,53±0,14

7 1,72±0,15 1,52±0,14 1,75±0,19 _1,54±0,18 1,51±0,19

14 2,14±0,12 1,65±0,12 2,17±0,16 1,67±0,14 1,56±0,15

21 2,21±0,10 1,72±0,16 2,23±0,18 1,72±0,15 1,48±0,17

28 2.17±0Л5 1,76±0,18 2,20±0,19 1.75±0,16 1,55±0,11

Неорганический фосфор, ммоль/л

фон 1,19±0,11 1,21±0,14 1,17±0,16 1,20±0,10 1,19±0,12

7 1,24±0,15 1,26±0.16 1,28±0,13 1,28±0,11 1,21±0,17

14 1,27±0,16 1,29±0,12 1,26±0,14 1,30±0,16 1,22±0,14

21 1,32±0,17 1,31±0Д 5 1,35±0,17 1,32±0,14 1,24±0,18

28 1,34±0,10 1,32±0,12 1,34±0,16 1,31±0,12 1,26±0,15

Сроки исследовании Группы (препарат)

Первая 1% як+1%л Вторая 1%л Третья 1%як+1,5л Четвертая 1,5%л Пятая изот. раствор

фон 27,9±2,1 29,8±2,3 28,1 ±2,1 29,3±2,2 28,2±2,6

7 39,4±2,9* 29,2±2,7 37,6±2,9* 28,9±2,2 28,3±2,1

14 37,3±3,1* 29,0±3,1 36,4±2,0* 28,2±2,7 28,1±2,7 ^

21 32,6±2,9* 30,2±2,7 32,2±2,1* 29,5±2,3 29,0±2,3

Примечание:* разница достоверна по отношению к контролю (р-0,05)

Влияние испытуемых препаратов на состояние неспецифической резистентности представлено в таблице 10.

Таблица 10 - Влияние комплексного препарата в сравнении с левамизолом на бактерицидную (БАСК) и лизоцимную активность сыворотки крови (ЛАСК)

Сроки исследований БАСК,%

Первая 1% як+1%л Вторая 1%л Третья 1%як+1,5л Четвертая 1,5%л Пятая изот. раствор

фон 46,3±1,3 47,1 ±2,4 48,3±1,9 47,8±2,1 47,3±2,6

7 49,4±2,7 49,8±2,1 52,1±1,7 50,2±2,3 48,1 ±2,4

14 59,4±2,5* 54,2±2,7 60,8±3,1* 55,2±2,9 48,1 ±2,6

21 61,8±2,3* 55,7±2,8 61,4±2,7* 57,2±1,8 47,5±2,6

28 63,5±3,1* 56,0±2,4 63,8,±2,1* 57,5±2,6 46,1±2,8

ЛАСК,%

Сроки исследований Группы (препарат)

Первая 1% як+1%л Вторая 1%л Третья 1%як+1,5л Четвертая 1,5%л Пятая изот. раствор

фон 5,34±0,89 5,28±0,23 5,95±0,18 5,22±0,48 5,41±0,02

7 6,14±0,23 6,08±0,94 6,45±0,47 6,95±0,18 5,22±0,10

14 6,18±0,57 6,11±0,57 6,98±0,92 7,01±0,27 5,17±0,94

21 6,39±0,73 6,15±0,29 7,05±0,52 7,04±0,26 5,32±0.48

Примечание: разница достоверна по отношению к контрольной группе (р<0,05).

На основании гематологических и иммунобиохимических исследований можно сделать заключение о том, что испытуемый состав препарата на основе янтарной кислоты и левамизола обеспечивает выраженную стимуляцию обменных и иммунных процессов. Это в полной мере соответствует тому, что данный препарат обладает иммунометаболическим действием.

Эффективность применения левамизола янтарного в системе мер обеспечения здоровья и сохранности подсосных поросят

Объектом для проведения опытов являлись подсосные поросята ле-вамизол янтарный применяли 5-10-17 и 24 сутки. Поросятам контрольных групп применяли в основном витаминные и железосодержащие препара-

ты, практикующие в данном хозяйстве. Опытным животным они также применялись.

Сводные результаты производственного испытания препарата представлены в таблице 11.

Таблица 11 - Результаты производственного испытания левамизола

янтарного

Группы поросят Производствен ный статус свиноматок Выявлено случаев заболевания диарей Общее кол-во павших Сохран ность, %

До отъема В течение 1 дней после отъема

Кол-во % Кол-во %

1 Опытная (п=78) Проверяемые 23 20,9 14 19,2 8 89,8

2 Контрольная (п=75) Проверяемые 39 52,0 32 40,2 17 78,3

3 Опытная (п=94) Основные 19 20,2 12 12,7 6 93,6

4 Контрольная (п=92) Основные 28 30,4 27 29,3 11 87,0

Эффективность применения левамизола янтарного при вакцинации поросят против сальмонеллёза

Для проведения опыта мы ограничились живой вакциной против сальмонеллеза из шт. ТС-177. Следует отметить, что ветеринарные специалисты весьма осторожно подходят к применению вакцины из шт. ТС-177. Это связано с высокой реактогенностью вакцины. Именно это обстоятельство предопределило возможность использования данной вакцины в качестве модельной при изучении возможности применения левамизола янтарного для создания благоприятного фона при вакцинации.

Научно-производственный опыт был проведен на 2-х группах поросят 30-35 дневного возраста с массой тела 10-11 кг. Одну группу поросят привили вакциной из шт. ТС-177; другую вакциной из шт. ТС-177 в сочетании с одновременным введением левамизола янтарного.

Вакцину применили однократно в дозировке, регламентированной инструкцией. Комплексный препарат (1% левамизол с 1% янтарной кислотой) вводили внутримышечно в дозе 2,0 мл. Титр противосальмонеллез-

ных агглютининов в сыворотки крови определяли в реакции агглютинации классическим пробирочным методом.

Контроль за изменением биохимического состояния и выработкой специфических антител против сальмонелл провели на 7 и 14 сутки после вакцинации.

Результаты проведенных исследований представлены в таблицах 12 и 13.

Таблица 12 - Динамика биохимических показателей крови при вакцинации живой вакциной из шт. ТС-177 в сочетании с левамизолом янтарным

Показатели Периоды исследований

фон 7 сутки 14 сутки

Белок, г/л 52,4±3,06 51,8±2,75 47,8±2,14 54,7±3,04 55,7±2,95 57,3±2,94

Резервная щелочность, 06/С02 34,2±1,9 33,9±2,14 41,4±2,3* 34,2±2,12 49,6±2,1 * 34,1±2,74

Кальций, ммоль/л 1,46±0,14 1,49±0,16 1,72±0,18 1,57±0,18 1,92±0,16 1,53±0,16

Фосфор, ммоль/л 1,21±0,12 1,24±0,11 1,27±0,14 1,29±0,12 1,24±0,12 1,25±0,18

Примечание: верхняя строка - показатели контрольной группы; нижняя строка - показатели опытной группы; *разница достоверна по отношению к контролю (р<0,05).

Улучшение обменных процессов позитивно отразилось и на синтезе специфических антител (таблица 12).

Следует отметить, что наличие специфических антител к сальмонеллез-ному антигену было выявлено у подопытных поросят еще до вакцинации. Это указывало на инфицирование организма полевыми штаммами сальмонелл, в результате чего был запущен синтез специфических антител.

Таблица 13 - Влияние живой вакцины из шт. ТС-177 и комплексного препарата на синтез специфических антител против сальмонелл

Группа Препарат Периоды исследований

фон 7 сутки 14 сутки

Первая Вакцина 1:28 1:54 1:108

Вторая Вакцина + комплексный препарат 1:16 1:102* 1:203*

Примечание: *разница достоверна по отношению к контролю (р<0,05).

выводы

1. Янтарная кислота является эффективным средством для снижения токсичности левамизола. Включение в состав левамизола 1-1,5% янтарной кислоты позволяет повысить 1Л)100 для белых мышей не менее чем в 5 раз.

2. Пятикратное с интервалом 24 часа внутрибрюшинное введение белым мышам 1-1,5% левамизола в сочетании с 1-1,5 % янтарной кислотой не приводит к гибели подопытных животных.

3. Комплексный препарат, включающий в своем составе 7,5% левамизола и 1-1,5% янтарной кислоты обеспечивает:

-повышение антгельминтной активности не менее чем на 25%;

-умеренное стимулирование гемопоэза;

-полную нормализацию обменных процессов;

-улучшение индекса Т-хелперов и Т-супрессоров с 1,6 до 2,2

-усиление синтеза иммуноглобулинов класса М с 2,32 до 2,76 +0,2мг/мл иве 8,95 + 0,45 до 9,04+0,42 мг/мл.

4. Комплексный препарат на основе 5% и 1-1,5% янтарной кислоты обладает равной, что и 7,5% фармакопейный левамизол, антгельминтной активностью при фактически полном отсутствии побочного действия на организм животных.

5. В опытах на поросятах-гипотрофиках установлено, что применение 1% левамизола в комплексе с 1% янтарной кислотой оказывает более выраженное стимулирующее действие на гемопоэз, обменные и иммунные процессы по отношению к составу, имеющему 1,5% концентрацию левамизола и янтарной кислоты и обеспечивает: увеличение количества эритроцитов с 4,18 до 6,56; гемоглобина с 7,9+0,2 до 10,8 +0,5 г/л; лейкоцитов с 7,13 +0,26 до 10,20+0,67 109/л; повышает уровень белка с 49,3 +2,1 до 62,2+2,3 г/л; щелочной баланс с 27,9+2,1 до 39,4+2,9; кальция с 1,52+0,11 до 2,20+0,10 ммоль/л; усиливает БАСК с 46,3+1,3 до 61,8+2,3%; ЛАСК с 5,34+0,89 до 6,39 +0,73%.

6. Применение комплексного препарата на основе 1% левамизола и 1% янтарной кислоты на клинически здоровых поросятах обеспечивает нормализацию основных биохимических процессов, что является благоприятным фоном для проведения вакцинации животных.

7. Применение 1% левамизола в комплексе с 1% янтарной кислотой на поросятах подсосного периода выращивания обеспечивает снижение случаев заболевания диареей с 30,4 -52,0 до 20,2 - 20,9% и повышает сохранность с 78,3 -87,0 до 89,8- 93,6% соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Янтарная кислота является эффективным средством для снижения токсичности антгельминтика - иммуномодулятора левамизола, что предопределяет перспективу получения препаратов с улучшенной фармакологической характеристикой, в том числе обладающих иммунометаболиче-ским действием.

2. Результаты проведенных научных исследований вошли в нормативную техническую документацию на способ получения комплексного иммунометаболического препарата с антгельминтной активностью.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.* Карачевцева Е.В. Новый подход к терапии инфекционных заболеваний животных / Ал.А. Евглевский, Е.В. Карачевцева, В.Н. Скира, О.М.Швец, Е.П. Евглевская, Ж.Г. Петрова, О.Н. Михайлова // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - № 2.- 2013.- С.-71-72.

2.*Карачевцева Е.В. Теоретические основы конструирования средств иммунометаболической направленности и эффективность их применения / Ал.А. Евглевский, О.М. Швец, Е.П Евглевская, В.Ю. Тарасов, Е.В. Карачевцева, О.Н. Михайлова // Вестник Курской ГСХА. - №7,- 2013. - С.-71-72.

3. Карачевцева Е.В. Инновационные разработки иммунометаболиче-ских препаратов и эффективность их применения в ветеринарии / A.A. Евглевский, О.М. Швец, Е.В. Карачевцева, Ж.Г. Петрова, О.Н. Михайлова, B.C. Попов, Е.П. Евглевская, // Материалы Международной Донской аграрной научно-практической конференции «Инновационные пути развития агропромышленного комплекса: задачи и перспективы» - Зерно-град,2012,- С,- 99-103.

4. Карачевцева Е.В. Влияние янтарной кислоты на снижение токсичности фармакопейного левамизола / Е.В. Карачевцева, Ж.Г. Петрова, О.Н. Михайлова // Материалы Международной научно - практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» - Белгород, 2012.- С.57-59.

5. Карачевцева Е.В. Иммунотерапия при инфекционных болезнях: известное и новое / С.Н. Кретова, Ж.Г. Петрова, Е.В. Карачевцева, О.Н. Михайлова // Материалы Международной научно - практической конференции «Агропромышленный комплекс: контуры будущего», Курск-2012.-С. 138-140.

6. Карачевцева Е.В. Влияние янтарной кислоты на антгельминтную активность левамизола/ Е.В. Карачевцева // Материалы научно - практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения»- Белгород, 2012,- С.59-62.

* - статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения комплексного препарата с иммунометаболиче-ской и антгельминтной активностью / Ал.А. Евглевский, Е.В. Карачевцева, О.Н. Михайлова, Е.П. Евглевская, Т.И. Михалева, Т.А. Евглевская, В.В. Коварда // (Заявка зарегистрирована под №2012145513 от 25.10.2012г в Роспатенте);

2. Способ получения комплексного иммунометаболического препарата с антиинфекционной активностью / О.Н. Михайлова, A.A. Евглевский, Е.В. Карачевцева, Ж.Г. Петрова, Т.А. Евглевская, В.В. Коварда // (Заявка зарегистрирована под №2012145512 в Роспатенте).

Формат 60x84 1/16. Бумага для множительных аппаратов.

Печать на копировальном аппарате КГСХА. Усл. печ. л. 1,0. Уч.-изд. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 195.

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Карачевцева, Евгения Владимировна, Б.м. Б.г.

Курский научно-исследовательский институт агропромышленного производства Россельхозакадемии

На правах рукописи

Карачевцева Евгения Владимировна

Влияние янтарной кислоты на антгельминтную и иммуномодулирующую активность левамизола

06.02.02 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

со

^ Научный руководитель:

^ доктор ветеринарных наук, профессор, Евглевский Ал.А

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 4

1.0. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8

1.1. Янтарная кислота: общие сведения, биологическая 8 активность, перспектива применения в медицине, ветеринарии и животноводстве

1.2. Иммунная система, иммунодефицитные состояния: общие 23 сведения, проблемы диагностики, коррекции и перспективы прикладных исследований

1.3. Левамизол: общие сведения, биологическая и биохимическая 35

характеристика

2.0. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 39

2.1. Материалы и методы исследований 39 3.0. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 42

3.1. Теоретическое обоснование сочетания янтарной кислоты и 42 левамизола

3.2. Влияние янтарной кислоты на снижение токсичности 45 фармакопейного левамизола

3.3. Результаты испытания левамизола янтарного на 50 продуктивных животных

3.3.1. Оценка антгельминтной активности 50

3.3.2. Влияние композиций левамизола с янтарной кислотой на 53 иммунометаболическое состояние поросят

3.3.3. Влияние композиций левамизола с янтарной кислотой на 56 иммунометаболическое состояние поросят

3.4. Теоретическое и экспериментальное обоснование получения 70 комплексного иммунометаболического препарата

3.5. Эффективность применения комплексного препарата для 75 стимуляции иммунометаболических процессов в опытах на

поросятах

3.5.1. Изучение иммунометаболической активности на поросятах 76

3.5.1.1. Результаты испытания на поросятах гипотрофиках 7 7

3.5.1.2. Результаты испытания препаратов на поросятах 86 нормотрофиках

3.6. Эффективность применения левамизола янтарного в системе 91 мер обеспечения здоровья и сохранности подсосных поросят

3.7. Эффективность применения левамизола янтарного при 93 вакцинации поросят против сальмонеллёза

4.0. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 98

5.0. ВЫВОДЫ 118

6.0 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 120

7.0. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 121

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение

Актуальность темы. Практика ведения современного животноводства свидетельствует о том, что нарушения обмена веществ и иммунодефицита животных приобрели массовый и повсеместный характер. Этот фон является благоприятным для активизации возбудителей эндогенной инфекции, что проявляется высокими показателями желудочно-кишечных и респираторных заболеваний (Воронин Е.С., Шахов А.Г., Федоров Ю.Н. с соавт., 1999).

В этой связи проблема стимуляции обменных и иммунных процессов в прогнозируемые периоды риска развития патологических состояний является одной из существенно важных задач ветеринарной науки и практики (Самохин В.Т. с соавт., 1999; Федоров Ю.Н. с соавт., 1999; Андреева A.B., 2003; Багманов М.А. с соавт., 2005; Нежданов А.Г. с соавт., 2005; Попов Ю.Г., 2005; Распутина О.В., 2007; Юрков В.М., Демидов Л.Д., 1999).

В настоящее время для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний у животных предложено огромное количество иммуностимулирующих препаратов. Сфера применения

иммуностимуляторов в ветеринарной практике постоянно расширяется. Об этом свидетельствуют многочисленные исследования и публикации (Александров И.Д., 2008; Артемов Б.Т. с соавт., 1999; Евглевский A.A. с соавт., 2008; 2010; 2011; Игнатов П.Е., 1995; Лебедев А.Ф. с соавт., 2005, 2009; Масычева В.И. с соавт., 1997; Прудников С.И., Прудникова Т.М., 1997; Уша Б.В., Беляков И.М., 1999; Швец О.М. с соавт., 2008; Петрянкин Ф.П., 2009; Сокол В.Д., 1989; Придыбайло Н.Д., 1991; Распутина О.В., 2007; Рябов Д.А., 2008; Слободяник В.И., 2005 и др.).

Придавая важное значение проблеме стимуляции иммунной системы, как о важной составляющей в системе обеспечения здоровья животных и профилактики факторных инфекционных болезней, зачастую в стороне остаются вопросы нормализации обменных процессов. Между тем обменные и иммунные процессы тесно взаимосвязаны. Именно это обстоятельство выдвигает перед исследованиями задачу поиска и разработки нового

поколения препаратов, обладающих иммунометаболическим действием. В решении этой теоретически и практически важной задачи особое значение приобретает поиск новых оригинальных композиций, обеспечивающих максимальную биодоступность препаратов для клеток-мишеней и специфически направленных эффектов (Даугалиева Э.Х, Филлипов В.В., 1991; Игнатов П.Е., 1995; Федоров Ю.Н. с соавт., 1999; Прудников С.И., Прудникова Т.М., 1997 и др.).

В настоящее время практическая ветеринария заинтересована в применении комплексных иммунометаболических средств, сочетающих в себе положительные свойства монопрепаратов в конкретной готовой лекарственной форме.

Всё вышеуказанное обусловило цель и задачи диссертационного исследования.

Цель исследования. Теоретическое и экспериментальное обоснование получения композиции на основе сочетания левамизола с янтарной кислотой и изучение ее антгельминтной и иммунометаболической активности.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- теоретически обосновать и клинически оценить разные варианты сочетаний левамизола с янтарной кислоты;

- провести оценку антгельминтной активности сочетаний левамизола и янтарной кислоты;

- изучить влияние разных композиций левамизола и янтарной кислоты на динамику иммунобиохимических и гематологических показателей поросят;

- в научно-производственном опыте провести оценку эффективности применения левамизола янтарного в системе мер обеспечения здоровья поросят в подсосный период выращивания.

Научная новизна. Теоретически обосновано и экспериментально доказана возможность сочетаний иммуномодулятора антгельминтика левамизола и метаболика янтарной кислоты. Изучена антгельминтная и иммунометаболическая активность левамизола в комплексе с янтарной кислотой. Авторские научные исследования положены в основу способа получения комплексного препарата с иммунометаболической и антгельминтной активностью (Заявка зарегистрирована под №2012145513 от 25.10.2012г в Роспатенте); способ получения комплексного иммунометаболического препарата с антиинфекционной активностью (Заявка зарегистрирована под №2012145512 от 25.10.2012г. в Роспатенте).

Практическая значимость работы. Авторские научные исследования доказывают эффективность сочетания левамизола с янтарной кислотой для профилактики и лечения нематоцидных болезней свиней. Разработан способ получения комплексного препарата с антгельминтной и иммунометаболической активностью. Разработан способ получения комплексного препарата с иммунометаболической активностью и показана эффективность его применения для коррекции обменных и иммунных процессов, профилактики желудочно-кишечных заболеваний поросят и создание благоприятного иммунобиохимического фона при их вакцинации. Материалы диссертационного исследования вошли составной частью во временные нормативные документы, утвержденные начальником управления ветеринарии Курской области и директором Курского НИИ агропромышленного производства Россельхозакадемии.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование сочетания иммуномодулятора левамизола с метаболиком янтарной кислоты.

2. Антгельминтная и иммунометаболическая активность нового варианта комплексного препарата.

3. Результаты научно-производственных опытов по применению левамизола янтарного для профилактики желудочно-кишечных заболеваний, коррекции иммунобиохимических процессов поросят подсосного периода выращивания и создания благоприятного иммунобиохимического фона при их вакцинации

Апробация и публикация результатов исследования. Основные результаты диссертационного доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ «Курский НИИ агропромышленного производства» Россельхозакадемии (2010-2013 гг.), на заседании отдела животноводства и ветеринарии ГНУ «Курский НИИ агропромышленного производства» (2013 г); на Международной научно-практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» - Белгород, 2012.; Международной научно-практической конференции «Агропромышленный комплекс: контуры будущего» - Курск, 2012; Международной научно - практической конференции «Инновационные пути развития агропромышленного комплекса: задачи и перспективы»- Зерноград,2012.

По материалам, представленным к защите диссертации, опубликовано

6 статей, в том числе 2 в рецензированных журналах. Подано 2 заявки на изобретение.

Внедрение. Применение авторской разработки регламентировано временной инструкцией, утвержденной начальником управления ветеринарии Курской области и директором ГПУ «Курский НИИ агропромышленного производства» Россельхозакадемии.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 146 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 27 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и обсуждения их результатов, выводов, предложений производству, списка использованной литературы. Список использованной литературы включает 227 источников, в том числе 24 иностранных авторов.

1.0. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1.Янтарная кислота: общие сведения, биологическая активность, перспектива применения в медицине, ветеринарии и животноводстве

Янтарь - один из самых древних драгоценных камней, известных человечеству. Во времена Римской империи, считая янтарь окаменевшем соком сосны он получил, название «сукцинум» (БиссиБ- сок). Первые упоминания о лечебных свойствах янтаря и применении его в медицине принадлежат знаменитому врачу древности Гиппократу (460-370 г.г. до н.э.) В древние времена целебные свойства янтаря наделялись почти магической силой (Балуева Г.А.,1983; Литвинова Т.И., 2002). В 17 веке путем перегонки янтаря была получена янтарная кислота. Это позволило начать поисковое исследование по изучению ее свойств и влияния на организм человека, животных и растений.

В ходе научных исследований установлено, что кислота, получившая от янтаря свое название, содержится не только в нем. Она присуща всему живому (Кондрашова М.Н, 1971). Вырабатывается в клетках человека, животных, растений, отвечает за энергетический обмен (Кондрашова М.Н, 1971; Литвинова Т.И.,2002). Во всех живых клетках - будь то клетки животных или растений содержатся особые тельца размером в несколько микрон, которые названы митохондриями (Кондрашова М.Н, с соавт.,1973).

Именно в митохондриях происходит выработка янтарной кислоты и ее использование для последующих энергетических реакций. В митохондриях при достаточном кислородном обеспечении все органические кислоты сгорают с образованием АТФ - универсального энергетического топлива для всех видов синтеза в клетке (Ивницкий Ю.Ю. с соавт., 1998; Кондрашова М.Н., 1971).

В тех ситуациях, когда доставка кислорода недостаточна, чтобы обеспечить функциональную нагрузку (работу) энергией, происходит активация анаэробного гликолиза, и в тканях накапливается конечный продукт гликолиза — молочная кислота (Вдовиченко В .И., 1976).

Какие бы питательные вещества не потреблял организм человека и животных (белки, жиры, углеводы) все они в конечном итоге превращаются в органические кислоты цикла Кребса и затем окисляются до углекислого газа и воды (Кондрашова М.Н., 1971,1973, Маевский Е.И. с соавт., 2000).

При достаточном кислородном обеспечении все органически кислоты сгорают в специализированных клеточных органеллах — митохондриях за счет потребляемого из воздуха кислорода (Василев С.Ц. с соавт.,2000; Ивницкий Ю.Ю. с соавт., 1998; Choudhy Z, 1986; Domingo I, 1988; Falkovski 1,1984; GiestingD, 1985;GoihlI, 1984).

В обычной последовательности реакций в митохондриях — в цикле Кребса — янтарная кислота является одним из промежуточных соединений. Как показали исследования профессора института теоретической и экспериментальной биофизики Российской Академии наук М.Н. Кондрашовой (1971,1972,1973,1976,1991), энергетическая мощность процесса синтеза АТФ при окислении янтарной кислоты существенно выше, чем при окислении любого другого субстрата. Но не только высокая энергетическая мощность окисления янтарной кислоты позволяет отдать ей предпочтение перед другими субстратами. При любой достаточно интенсивной физической нагрузке развивается так называемая рабочая гипоксия, когда потребление кислорода в реакциях энергетического обмена превышает возможности его доставки к клеткам. Практически при всех заболеваниях сердечно-сосудистой системы, легких, множестве заболеваний крови, отравлениях, интоксикациях, применение средств химиоантибиотикотерапии, нарушается либо доставка, либо использование кислорода вследствие чего развивается гипоксия (Деркачев Э.Ф.,1996; Кондрашова М.Н., 1989, 1991, 1997; Лукьянова Л.Д., 2000; Маевский В.И., 2001; Buoncore G е.а. 2001).

При гипоксии дыхательная цепь митохондрий не может принять на себя водород, от какого либо иного субстрата, кроме янтарной кислоты (Бендер К.И. с соавт., 1977; Кондрашова М.Н.,1971; Лукьянова Л.Д., 2000).

Ведь именно при ее окислении водород поступает на значительно более близкий к кислороду участок дыхательной цепи. При этом на участке даже при глубокой гипоксии сохраняется способность принимать водород. При окислении органических кислот отщепляется водород. Этот водород с помощью ферментов переносится на кислород. Именно в реакции взаимодействия водорода с кислородом освобождается энергия. В этом случае окисление янтарной кислоты в митохондриях остается одним из немногих источников АТФ.

В экспериментах in vitro было показано, что применение сукцината приводит к приросту потребления кислорода тканями за счёт окисления добавленных субстратов до конечных продуктов - углекислоты, воды и тепла. Одна молекула добавленной к ткани янтарной кислоты обеспечивает окисление многих эндогенных субстратов. Таким образом, превращение янтарной кислоты в организме связано с продукцией энергии необходимой для обеспечения жизнедеятельности. При возрастании нагрузки на любую из систем организма, поддержание ее работы обеспечивается преимущественно за счет окисления янтарной кислоты. Мощность системы энергопродукции, использующей янтарную кислоту, в сотни раз превосходит все другие системы энергообразования организма (Кондрашова М.Н., 1971).

Для пополнения пула всех органических кислот цикла Кребса у человека достаточным оказалось экзогенное введение лишь одного сукцината, который является стимулятором синтеза восстановительных эквивалентов в клетке. Биологическое значение данного явления заключается в быстром ресинтезе клетками АТФ и в повышении их антиоксидантной резистентности (Кондрашова М.Н., 1971, 1972, 1976).

Дополнительное поступление янтарной кислоты может существенно помочь жизнедеятельности организма при развитии гипоксического состояния (Лукьянова Л.Д., 2000; Маевский В.И., 2001). Та янтарная кислота, которая образуется в митохондриях, там же моментально и сгорает, поэтому текущая — стационарная концентрация присутствующей в тканях янтарной

кислоты не превышает в каждый момент времени 10-20 мг/кг массы ткани и, как правило, из митохондрий не выходит. Вне митохондрий, вне клетки, в кровотоке ее практически нет. Она появляется вне митохондрий во время тяжелого анаэробиоза или при глубокой гипоксии в каком-то участке ткани. В таких случаях рецепторные управляющие системы организма оценивают появление в кровотоке янтарной кислоты как сигнал о том, что в каком-то участке тела не хватает энергетических ресурсов или имеется кислородное голодание. Соответственно, организм реагирует на этот сигнал сдвигами в нейроэндокринной, гормональной регуляции, улучшением периферического кровотока, повышением силы сердечных сокращений, облегчением отдачи кислорода оксигемоглобином и рядом других физиологических и биохимических компенсаторных реакций. Это реакции мобилизации энергетического обмена (Бельченко Л.А., 2001; Кондрашова М.Н., 1971; КопёгозЬоуа М. е.а., 1991; ТЫпс! 8. е.а., 1978; Хафт в. е.а., 1985, 1986).

Аналогичная реакция организма проявляется и при экзогенном введении янтарной кислоты. И происходит она не в ответ на реально наступивший гипоксический энергетический дефицит, а на сигнал о том, что возможно, он имеет место (Кондрашова М.Н., 1971; Маевский Е.И. с соавт., 2000; КопагоБЬоуа М. е.а. ,1991).

Янтарная кислота активно вырабатывается в клетках живого организма. Здоровому организму хватает сукцинатов, которые он синтезирует или усваивает из пищи. Однако в результате влияния неблагоприятных факторов, в частности при интенсивной физической нагрузке, стресс