Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние токоферолсинтезирующего пробиотика на микрофлору желудочно-кишечного тракта и организм телят

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние токоферолсинтезирующего пробиотика на микрофлору желудочно-кишечного тракта и организм телят"

На правах рукописи

ШАЙДУЛЛИНА ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА

ВЛИЯНИЕ ТОКОФЕРОЛСИНТЕЗИРУЮЩЕГО ПРОБИОТИКА НА МИКРОФЛОРУ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА И ОРГАНИЗМ ТЕЛЯТ

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровицы Московской области 2004

Работа выполнена в отделе сертификации и экологических проблем в животноводстве Всероссийского государственного научно-исследовательского института животноводства

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Юрий Павлович Фомичев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Борис Васильевич Тараканов

доктор биологических наук Светлана Владимировна Воробьева

Ведущая организация: Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина

Защита состоится ^.„/п г., в 10 часов, на заседании

диссертационного совета Д 006.013.01 при Всероссийском государственном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес: 142132, Московская область, Подольский район, пос. Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических

'В. П. Губанова

1. ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Наметившаяся тенденция производства экологически чистых продуктов питания требует поиска новых типов добавок, повышающих продуктивность животных. Одной из реальных альтернатив на сегодняшний день являются пробиотики, препараты содержащие живые культуры микроорганизмов - симбионтов желудочно-кишечного тракта. Их применяют в качестве биологически активных веществ, обладающих ростостимулирующим и лечебно-профилактическим эффектом. Преимущество их в том, что они безвредны и не имеют недостатков, присущих антибиотикам и химиотерапев-тическим средствам (Антипов В. А., Субботин В. М, 1980; Тараканов Б.В.,1999).

Применение пробиотиков в животноводстве затрагивает ряд важных проблем, связанных с регулированием кишечного микробиоза, иммунной, гормональной и ферментативной систем организма молодняка (Панин А.Н., Малик Н.И., Вершинина И.Ю., 2002).

Для профилактики здоровья молодняка необходимо поддерживать популяцию полезных бактерий в пищеварительном тракте. Поэтому важно при его выращивании создавать необходимые условия, обеспечивающие формирование собственного микробиоценоза, включая применение средств, в том числе пробиотиков, способствующих формированию микрофлоры в нужном для организма направлении (Сизова А.В., 1974; Тимошко М.А, 1990,1992; Тараканов Б.В., 2003).

На сегодняшний день существует большое количество пробиотиков, созданных на основе лактобактерий, бифидумбактерий, молочнокислых, целлюлозолитических и других бактерий (Платонов А.В., 1985). Широко применяются в животноводстве и птицеводстве такие новые пробиотики как реалак, лаком, стрептобифид, ветом-1.1., субалин, целлобактерин, лактоами-ловарин и другие (Иноземцев В.П. и др., 1997; Тараканов ББ.и др., 2003;

Малик Н.И., Панин А.Н., 2001). В начале

гии л БИ

каро-

БИБЛИОТЕКА )

тинсинтезирующей культуры Rhodococcus получен пробиотик — каротино-бактерин, эффективный в рационах цыплят-бройлеров, молодняка крупного рогатого скота и свиней (Пивняк И.Г. и др., 1992,1998).

Поиск микроорганизмов, пригодных для получения новых эффективных пробиотических препаратов в настоящее время остается актуальным.

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось изучение токоферолсинтезирующего штамма №100 и создание на его основе нового пробиотического препарата - тококарина. Для достижения указанной цели ставились следующие задачи:

- получить сухую форму пробиотика тококарина;

- определить сохранность биомассы культуры штамма №100 и готового препарата - тококарина отдельно и в смеси с комбикормом и премик-сом;

- изучить безвредность, антибиотикоустойчивость, антагонистическую активность штамма № 100.

Изучить влияние тококарина на:

- интенсивность роста и профилактику заболеваний пищеварительного тракта телят;

- показатели естественной резистентности телят;

- состав микрофлоры пищеварительного тракта телят,

- содержание в крови телят витамина А, каротина и токоферола. Определить оптимальные дозы и экономическую эффективность применения препарата при выращивании телят.

Научная новизна. Впервые получен пробиотический препарат токо-карин на основе токоферолсинтезирующего штамма №100. Изучено его влияние при выращивании телят на:

- рост и сохранность; -неспецифическую резистентность;

- состав микрофлоры пищеварительного тракта;

- содержание в сыворотке крови витамина А, каротина и токоферола.

Практическая значимость работы. Разработаны лабораторный регламент получения сухой формы пробиотика тококарина на основе токоферол-синтезирующего штамма №100 и наставление по его применению при выращивании телят в молочный период (утверждено Ученым Советом ВНИИЖа 13 июня 2000 г., протокол №4).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на:

-третьей международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» (Боровск, ВНИИФБиП с.-х. животных, 2000);

-52-ой конференции молодых ученых и аспирантов «Молодые ученые животноводству» (п. Дубровицы, ВИЖ, 2003);

-научной конференции отдела кормления и приготовления кормов ВИ-Жа «Роль биологически активных веществ в кормлении сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию со дня рождения К.М. Солнцева (п. Дубровицы, ВИЖ, 2004).

На защиту выносятся следующие основные положения:

- разработка лабораторного регламента по получению сухого пробио-тика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100;

-результаты изучения влияния пробиотика тококарина на популяцию микроорганизмов пищеварительного тракта, содержание в крови телят витамина А, каротина и токоферола;

- результаты изучения влияния пробиотика тококарина на естественную резистентность, интенсивность роста и профилактику заболеваний пищеварительного тракта телят.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы в коли-

честве 145 источников, из них 30 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 3 схемами, 32 рисунками.

2. Материалы и методы исследования.

Экспериментальная работа по теме диссертации проводилась в 19982004 г.г. в лаборатории микробиологии отдела сертификации и эколого-генетических исследований в животноводстве ВИЖа и агрофирме «Щапо-во».

Материалом для исследований служил токоферолсинтезирующий штамм №100, выделенный в лаборатории микробиологии ВИЖа из содержимого толстого отдела кишечника цыплят-бройлеров (Худяева Е.Н., 1991), пробиотик тококарин, подопытные телята, а также сыворотка крови и кал телят.

Опыты по культивированию штамма №100 проводили на мясопептон-ном агаре (МПА) и специальной жидкой среде в пробирках, чашках Петри и конических колбах на качалке (Пивняк И. Г., Попов А. Н., Худяева Е. Н., 1994).

Биомассу культуры получали путем центрифугирования. Активность биомассы культуры штамма №100 и пробиотика тококарина определяли по количеству жизнеспособных клеток штамма №100 в 1 г. Бактериальную чистоту биомассы и готового препарата проверяли высевами на МПА и среду Эндо, а также микроскопированием.

Биомассу хранили в холодильнике при температуре +4 С. Полученный в лабораторных условиях сухой пробиотический препарат - тококарин, хранили в жестких условиях - в негерметизированной упаковке, при температуре не выше +20°С. Количество жизнеспособных клеток определяли путем подсчета колоний.

Испытание безвредности препарата проводили на здоровых белых мышах линии Balbeh живой массой 18-20 г. Пяти мышам выпаивали по 0,5 мл дистиллированной воды (контроль). Двум другим группам мышей по 5

голов в каждой выпаивали вместе с водой про биотический препарат в дозе 100 млн. (опытная-1) и 500 млн. клеток на голову в сутки (опытная-2).

Антибиотикоустойчивость определяли методом диффузии в агар с использованием дисков, этим же методом с использованием лунок определяли восприимчивость штамма к препарату - хитозану. Через 24 часа инкубирования измеряли зоны задержки роста культуры штамма №100.

Антагонистическую активность клеток штамма №100 в условиях in vitro определяли методом штриха в отношении тест - культур (Егоров Н.С., 1979; Биргер О., 1982).

Эффективность применения тококарина при выращивании новорожденных телят проводили в агрофирме «Щапово» на телочках черно-пестрой породы, аналогов по живой массе и возрасту по следующей схеме (табл. 1).

Таблица 1

Схема опытов

Группы телят Условия опытов Количество телят в группе, голов Период опыта, ДНИ

Опыт1 Опыт II

Контрольная ОР - основной рацион 13 12 60

Опытная-1 ОР + тококарин в дозе 5 млрд. клеток в возрасте 1-30 дней; 500 млн. клеток в возрасте 31-60 дней 13 12 60

Опытная-2 ОР + тококарин в дозе 10 млрд. клеток в возрасте 1-30 дней; 1 млрд. клеток в возрасте 31-60 дней 13 - -

Пробиотический препарат вносили с молозивом, молоком и комбикормом один раз в сутки. Телята в первые 10 дней жизни получали молозиво. Основной рацион состоял из молока цельного, сена, комбикорма.

Учитывали валовой прирост живой массы, количество дней с расстройством пищеварения, сохранность поголовья. Одновременно с этим изучали показатели неспецифического иммунитета по лизоцимной активно-

сти по методике Мутовина В.И. (1973) и бактерицидной активности по методике Матусевича В.Ф. (1968).

Для изучения влияния тококарина на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта были исследованы пробы кала телят контрольной и опытных групп в возрасте 3,10,21, 30 и 60 дней. В пробах определяли количество мезофильно-аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), количество молочнокислых микроорганизмов, бактерий группы кишечной палочки (БГКП), стафилококков, энтерококков, дрожжей, плесеней.

Определение каротина, витаминов А и Е в сыворотке крови телят проводили методом колончатой хроматографии (Пивняк И.Г. и др., 1970; Двинская Л.М. и др., 1979; Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов, 1998).

Все исследования проводили в трех повторностях и двух параллелях. Полученный цифровой материал обработан биометрически (Плохинский Н.А., 1980; Меркурьева Е.К., 1970) с использованием компьютерной программы Microsoft Excel 5.1.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка лабораторного регламента получения сухой формы пробиотика—тококарина.

Разработанный лабораторный регламент получения сухого готового препарата тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100 включает следующие этапы: подготовку посевного материала, получение маточной культуры, ферментационной культуральной среды и биомассы, приготовление и расфасовку препарата.

При этом, для получения посевного материала однородные характерные колонии культуры штамма №100 высевали в пробирки на скошенный МПА. В качестве посевного материала использовали чистую суточную культуру на скошенном МПА.

Для получения маточной культуры суточную культуру смывали с косяка МПА стерильным физиологическим раствором (5мл) и вносили в количестве 5-10% (по обьему) в конические колбы (750-1000 мл) с жидкой питательной специальной средой и культивируют 24 часа на качалке, при 180200 об/мин и температуре +34-35°С.

Для получения ферментационной культуральной среды маточную культуру засевали в количестве 5-10% на жидкую специальную среду и ферментируют в течение 72 часов при температуре +34-35°С на качалке при 180-200 об/мин при температуре +34-35°С.

По окончании ферментации культуральную жидкость центрифугировали 30 мин при 14 тыс. оборотов в минуту.

Регламент обеспечивал выход сырой биомассы бактерий в количестве -3 г, бактериальных клеток - 100 млрд. на 100 мл среды.

Получение препарата тококарина осуществляли методом контактной сушки биомассы штамма №100 с использованием наполнителя в соотношении 1:2; 1:2,5.

На каждом этапе работы проводили контроль активности и бактериальной чистоты культуры и готового пробиотика.

В результате работы получен пробиотик тококарин - концентрат, который имеет вид серого порошка средней текучести, состоящего из биомассы бактерий штамма №100 и наполнителя. Препарат содержал не менее 10 млрд. жизнеспособных бактерий штамма №100 в 1 г.

3.2. Безвредность и устойчивость к антибиотикам, восприимчивость к хитозану и антагонистическая активность штамма №100.

Исследования по безвредности препарата тококарина проводили на белых мышах. Установлено, что все животные оставались живыми и клинически здоровыми. Полученные данные свидетельствуют о безвредности исследуемого препарата.

При определении чувствительности клеток штамма №100 к водорастворимому сукцинату хитозана «Р» ММ 80кДа (рН-7,4 степень деацетили-

рования 84%) на дистиллированной воде через 24 часа инкубирования зон задержки роста культуры не было отмечено. Это свидетельствует о том, что хитозан в данных дозах можно применять в животноводстве совместно с пробиотиком тококарином.

При определении антибиотикоустойчивости установлено, что штамм №100 устойчив к нистатину, полимиксину, малочувствителен к стрептомицину и чувствителен к гентамицину, канамицину, левомицетину, неомици-ну, олеандомицину, тетрациклину, фурадонину, цифроспорину, эритромицину и высокочувствителен к ампициллину, бензилпенициллину и оксацил-лину.

Установлено, что клетки штамма №100 не оказывают подавляющего действия в условиях in vitro на следующие тест - культуры: Micrococcus lysodeicticus, E. coli ATCC 3912/41, Micrococcus flavus, Rhodococcus sp. 21, Micrococcus luteus, Sarcina lutea ATCC 939, Salmonella abony 103/39, Bacillus cereus var. mycoides 537, Bacillus cereus ATCC 11778, Bacillus subtilis ATCC 6633, Str. faecalis. Использованные тест - культуры не оказали подавляющего действия на штамм №100 за исключением Bacillus subtilis ATCC 6633.

3.3. Сохранность сырой биомассы штамма №100 и тококарина в чистом виде и в смеси с комбикормом и премиксом.

Исследованиям по получению сухой формы препарата предшествовало изучение сохранности клеток токоферолсинтезируюшего штамма №100 в сырой биомассе, которая являлась исходным материалом.

Культура сохраняла свою активность в течение 2-х месяцев хранения на исходном уровне, что является достаточным для получения сухой формы пробиотика. Сохранность живых клеток в полученном сухом препарате оставалась на исходном уровне в течение 3-х месяцев, а через 6 месяцев составила 77,0% при температуре хранения +10-20°С, что вполне приемлемо для производственного использования препарата.

Важным результатом исследований является установление возможно -сти сохранения пробиотика в составе комбикорма К-62-2 и премикса П-62-2.

Было определено, что внесенный в количестве 5% (по массе) тококарин в составе комбикорма и премикса сохранял на исходном уровне количество живых клеток в течение 2 месяцев хранения. По истечении 6 месяцев сохранность живых клеток составила более 80% от исходного уровня.

3.4. Эффективность использования сухого препарата тококарина при выращивании новорожденных телят.

Как видно из таблицы 2, в первом опыте, введение в рацион пробиотика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100 способствовало увеличению среднесуточных приростов живой массы, которые составили в контрольной группе 335, 8 г, а в опытных группах 359,0 - 374,3 г, что больше на 6,8 -11,5% соответственно.

Важным показателем при оценке эффективности выращивания молодняка сельскохозяйственных животных является величина затрат кормов на единицу прироста живой массы. На 1 кг прироста живой массы за 60 дней в опытных группах были затрачены: кормовых единиц в контроле — 5,9, в 1-ой опытной группе - 5,5, во 2-ой - 53. Переваримого протеина соответственно 712,4; 666,4 и 639,2. Введение в рацион пробиотика способствовало снижению затрат кормовых единиц на 6,4 -10,2%, переваримого протеина - на 6,4 - 10,3% по сравнению с контролем.

Во втором опыте, (табл. 2) применение тококарина также дало положительный эффект. При этом, среднесуточные приросты живой массы в контрольной группе составили 418,3 г, в опытной - 472,2 г, что выше на 12,9 %. Снижение затрат корма на 1 кг прироста живой массы в опытной группе составило: кормовых единиц на 11,4%, переваримого протеина на 11,4% , что подтверждает полученные ранее данные.

При учете количества дней с расстройством пищеварения отмечено значительное их снижение в опытных группах. Так, в первом опыте этот показатель снизился в 1,94 и в 2,34 раза, а во втором опыте - в 1,7 раза по отношению к контролю.

Таблица 2

Показатели интенсивности роста телят __

Показатели Контрольная Опытная Опытная Контрольная Опытная

Количества телят в группе, гол. 13 13 13 12 12

Живая масса при рождении, кг 32,75 ± 0,37 32,15 ±0,231 32,38 ± 0,25 33,00 ±0,31 32,67 ± 0,46

Валовой прирост за 60 дней опыта: кг 20,15 ±0,35 21,54 ±0,35* 22,46 ±035" 25,10 ±0,62 28,33 ± 0,53**

% 100 106,9 111,5 100 112,90

Среднесуточный прирост за 60 дней опыта: г 335,83 359,00 374,33 418,33 472,16

% 100 106,89 111,46 100 112,86

На 1 кг прироста затрачено за 60 дней опыта: кормовых единиц 5,97 ±0,11 5,59 ±0,09' 5,36 ± 0,09** 4,81 ±0,12 4,26 ±0,08***

% 100 93,63 89,78 100 88,56

переваримого протеина 712,44 ± 12,85 666,47 ± 10,60* 639,17 ± 10,60*** 631,10 ±13,96 559,20 ±9,85***

% 100 93,55 89,71 100 88,60

Количество дней с расстройством пищеварения, дни 10,3 ±0,53 5,30 ±0,44*** 4,40 ±0,15'** 9,40 ± 0,53 5,50 ±0,44'**

Сохранность поголовья, % 100 100 100 91 100

*Р<0,05;" Р<0,01;'"Р<0,001.

При этом необходимо отметить, что заболевания желудочно-кишечного тракта у телят, получавших тококарин, проходили в более легкой форме.

3.5. Влияние применения тококарина на естественную резистентность телят.

Показателями состояния иммунитета телят служили бактерицидная и ли-зоцимная активность сыворотки крови.

В первом опыте уже в возрасте 10 дней отмечено повышение показателя лизоцимной активности сыворотки крови телят опытных групп по сравнению с контролем (Р< 0,01).В возрасте 30 дней также отмечено повышение этого показателя в опытных группах (Р< 0,001), где он составил 32,43-42,53, а в контроле оставался на исходном уровне (табл. 3). Повышение бактерицидной активности сыворотки крови у опытных телят в 10 дней незначительное. В возрасте 30 дней этот показатель в опытных группах составил 88,83-91,32% , в то время как у телят контрольной группы остался на прежнем уровне 78,20% (Р< 0,01-0,001) (табл. 3).

Таблица 3

Показателя естественной резистентности телят в первом опыте (п=4)

Показатели Возраст телят, дни Группы телят

контрольная 1-опытная Н-опытная

Лизоцимный индекс 1 21,64 ± 1,38 25,49 ±0,92 21,41 ±0,73

10 24,04 ±1,05 31,84 ±1,10* 32,43+133*

30 26,79 ±1,20 42,14 ±1,08** 42,53 ± 1,29**

Бактерицидная активность (через 4 часа, %) 1 77,01 ± 2,86 76,62 ±2,73 80,88 ± 1,51

10 _ 79,87 ± 3,22 87,98 ± 1,23 89,15 ± 0,9*

30 78,20 ± 0,70 88,83 ± 0,86** 91,32 ±1,44*

*Р< 0,01; **Р< 0,001

Показатели Возраст телят, дни Группы телят

контрольная опытная

Лизоцимный индекс 1 25,83 ±2,77 20,73 ±3,90

10 26,45 ±2,97 34,75 + 1,79

30 27,76 + 3,96 45,71 ± 5,79**

Бактерицидная активность (через 4 часа, %) 1 78,13 ±4,35 74,29 ±2,91

10 73,97 ±3,17 75,49 ±1,41

30 67,40 ±1,31 80,69 ±0,82**

*Р<0,01;**Р< 0,001.

Во втором опыте в возрасте 10 дней повышение лизоцимной активности в опытной группе также было незначительным, а в возрасте 30 дней составила 27,76 - в контрольной группе и 45,71 - в опытной, что выше контроля на 64,7% (Р<0,001). Бактерицидная активность сыворотки крови телят в возрасте 30 дней в опытной группе повысилась и составила 80,69%, в контрольной - 67,40% (табл. 4).Это свидетельствует о том, что пробиотик стимулирует реакции неспецифического иммунитета и повышает естественную резистентность телят.

3.6. Влияние применения тококарина на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта телят.

Оценку динамики изменений состава микрофлоры проводили исследованием проб кала телят в возрасте 3,10,21,30, 60 дней.

В кишечном тракте телят, получавших тококарин, значительно возросло общее количество мезофильно-аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, в то время как у контрольных животных этот показатель не изменялся (табл. 5).

Количество клеток штамма № 100 в кале телят в опытных группах со временем повышалось, даже после снижения дозы препарата в 10 раз после 30 дневного возраста. Это свидетельствует о приживлении штамма № 100 в кишечнике телят.

Содержание молочнокислых микроорганизмов во всех группах возрастало до 30-дневного возраста. После месячного возраста было отмечено незначительное снижение бактерий этой группы. При этом наибольшая разница между группами была в возрасте 21 день, когда количество молочнокислых бактерий в кале телят опытных групп превышало контроль в 1,5-2,0 раза.

На рост бактерий группы кишечной палочки пробиотик оказал сдерживающее действие. В опытных группах количество данных микроорганизмов ниже, чем в контроле на 48-60% в возрасте от 10 до 30 дней. К двухмесячному возрасту в кале телят количество бактерий этой группы возросло на фоне повышения общего количества микроорганизмов, в том числе и молочнокислых, что можно считать положительным признаком. Соотношение кишечной палочки к молочнокислым бактериям в начале опыта у всех телят было 1:1, что говорит о нестабильном микробном балансе кишечника телят. В контрольной группе это соотношение сохранилось до конца опыта, а в опытных группах — составило

В опытных группах количество энтерококков в первом опыте было выше, чем в контроле на фоне общего снижения количества бактерий этой группы. Снижение отмечено и в контрольной и опытных группах.

У телят всех групп выделены микроорганизмы, которые относятся к условно-патогенной микрофлоре - стафилококки, дрожжи и плесени, способных на фоне других отрицательных факторов спровоцировать заболевания пищеварительного тракта молодняка сельскохозяйственных животных.

Влияние тококарина на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта телят в первом опыте (п=4)_

Группы микроорганизмов Группа телят Возраст, дни

3 10 21 30 60

1 2 3 4 5 6 7

КМАФАнМ, млн. КОЕ/г' К 75б,5±202,7 4341±4221 3450±1481 1710±683,65 2020±1909

0-1 875,0±273,8 3560±3114 5670*1289 4110^1691,8 8906±6885

0-2 734,0±318,0 4934±712 5457±424 592Ш349 18012±6885*

Штамм№100, млн. КОЕ/г К - - - - -

0-1 0,20±0,02 20,0^10,64 56,5±20,2 60,7±24,9

0-2 0,65±0Д2 4,55±1,93 24Г3±8Д 57,7±29,1 67,2±25,4

БГКП, млн. КОЕ/г К 229,0±78,1 391,3±21,4 237,7±81,5 434,8±163,8 296,5±78,1

0-1 210,6±119Д 139,7±95,0 101,8±56,2 262,4±181,9 270,0±89,1

0-2 318,5±77,7 188,1±103,7 155,2±30,7 175,0±40,8 257,2±135,6

Молочнокислые, млн. КОЕ/г К 228,6± 135,5 164,9±93,3 175,4±95,3 395,0±243,5 307,2± 195,4

0-1 212,0±57,9 140,1±75,1 264,1±42,6 581,5±90,5 433,1±77,7

0-2 331,6±145,9 237,1±180,6 356,6±61,0 439,0±72,6 467,5±76,4

1 2 3 4 5 6 7

Стафилококки, тыс. КОЕ/г К 2,60±0,64 62,6±19,7 23,3±4,75 4,46±0,58 0,58±0,27

0-1 2,51±2,74 6,63*4,35" 6,40±2,58* 1,87±0Д9 0,63±0,07

0-2 1,76±0,63 2,30±0,78" 2,05±0,17" 2Д9±0,32 0,25±0,15

Энтерококки, млн. КОЕ/г К 19,5±5,77 20,3±7,13 6,74±1,76 0,17±0,05 0,33±0,11

0-1 21,6±12,7 21,4±4,80 7,19±3,48 0,3±0,14 0,55±0,05

0-2 19,0*4,78 36,3±6,26 7,23±0,89 035±0,09 0,25±0,04

Дрожжи, КОЕ/г К ' 240,0±17,1 407,5± 176,3 1256,2±120,7 2185,0± 1536,08 647,5± 172,3

0-1 224,0±144,9 320,0±52,9 350,7±51,5 255,5±134,Г" 165,5±90,9

0-2 240,0±50,9 278,5±63,9 340,0±89,0 100,0±43,2 100,0±27,1*

Плесени, КОЕ /г К 123,0±97,5 100,0±29,4 210,25±50,5 106,0±71,6 133,7±37,7

0-1 113,7±30,2 102,4±17,0 122,0±15,5 87,5±33,0 52,0±10,4***

0-2 101,0±17,6 86,5±18,2 143,0±39,8 90,7±24,3 70,0±21,6*

*Р < 0,01; ** 3 < 0,001. КОЕ' - колониеобразующая единица

В опытных группах отмечено значительное снижение стафилококков, дрожжей и плесеней по сравнению с контрольной. Это свидетельствует о том, что штамм №100, вводимый в данных дозах в условиях in vivo, оказывает сдерживающий эффект по отношению к условно-патогенной микрофлоре при заселении желудочно-кишечного тракта микроорганизмами. В частности, количество стафилококков в кале телят опытных групп значительно ниже, в 2,8-3,1 раза в возрасте 10-21 дней.

При определении содержания дрожжей и плесеней в кале телят установлено, что в опытных группах их количество значительно снижается, в то время как в контроле остается на стабильно высоком уровне.

Состав микрофлоры кишечника у телят во втором опыте представлен в таблице 6. Как видно из таблицы 6, общее количество микроорганизмов в кале телят во втором опыте увеличивается в обеих группах. При этом в опытной группе в 2-х месячном возрасте этот показатель был выше в 4 раза.

Одновременно наблюдается стабильный рост количества клеток штамма №100 в кале телят опытной группы, получавших тококарин.

Содержание бактерий группы кишечной палочки в кале опытных телят было ниже, чем у контрольных животных на С возрастом количество молочнокислых микроорганизмов возросло в обеих группах и разница между группами была незначительной.

При этом важно отметить, что соотношение бактерий группы кишечной палочки к группе молочнокислых составило у контрольных животных 136:1; 1:1,2; 1:1; 1:1,2 соответственно в 10, 21, 30 и 60 дней. Данное соотношение у опытных телят, получавших тококарин, составило 1:1,8; 1:1,5; 1:1,6; 1:1,9 соответственно в 10,21,30 и 60 дней.

Влияние тококарина на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта телят во втором опыте (п=4)

Группы микроорганизмов Группы телят Возраст, дни

3 10 21 30 60

КМАФАнМ, млн. КОЕ/г К 700,0±485,7 6500±1093 6000*1117 4330±1273 5230*743,6

О 630,0±149,0 21600±3413" 36200*15972 32000*5376" 21000*4160"

Штамм№100, млн. КОЕ /г К - - - - -

О 0,32±0,11 5,10±1,78 30,6±22,2 47,20*15,03 54,7±6,51

БГКП, млн. КОЕ/г к 338,0±182,3 342,0±75,2 250,0±47,0 352,0*71,0 350,0±45,8

о 342,0±144Д 202,0±97,4 382,0±95Д 281,0±70,9 250,»±68,1

Молочнкнслые, млн. КОЕ /г к 328,0± 126,5 251,0±41,1 296,б±61,8 352,0*158,8 421,0*77,6

о 334,0±89,1 367±26,3 585,0± 186,1 462,2*88,5 480,0±35,5

Стафилококки, тыс. КОЕ /г к 2,10±0,91 3,52±0,86 4,02*0,72 4,70±0,60 5,03*0,29

о 2,11±0^4 4,52±1,61 4,71±1,03 2,78*0,20 1,40*0,41

Энтерококки, млн. КОЕ /г к 27,1±11,6 5,05±1,27 10,2*2,87 7,70±3,29 0,37*0,07

о 30,1±16,5 44,0±11,8* 25,0*3,97* 8,80*1,80 0,66±0Д0

Дрожжи, КОЕ/г к 210,0±35,0 521,0±115,2 490,0±258,3 720,0*86,6 342,0*32,9

О 250,0^81,6 270,7±82,5 270,0*54,3 310,0*37,5" 150,0*53,6"

Плесени, КОЕ/г к 100,0±22,0 230,0±20,0 120,0±36,0 140,0±20,0 202,0±20,2

о 120,0±54Д 100,0±41,2 100,0*2,94 120,0±30,9 150,0*30,4

*Р < 0,01; "Р< 0,001

Количество энтерококков в обеих группах с возрастом снижалось, как и в первом опыте. При этом разница между опытной и контрольной группами была наибольшей в возрасте от 10 до 30 дней в сторону увеличения в опытной группе.

Из кала телят обеих групп были выделены, как и в первом опыте условно-патогенные микроорганизмы.

Во втором опыте количество стафилококков в опытной группе составило 1,40 тыс. КОЕ/г, а в контроле - 5,03 тыс. КОЕ/г.

В конце опыта в кале телят, получавших тококарин количество плесеней снизилось в 13 раза, дрожжей - в 2,3 раза, чем у телят контрольной группы.

3.7. Влияние тококарина на содержание в сыворотке крови телят каротина, витамина А и токоферола.

Полученные данные свидетельствуют о том, что пробиотик тококарин способен повышать содержание каротина и токоферола в сыворотке крови телят молочного возраста. Результаты исследования сыворотки крови телят на содержание каротина, витамина А и токоферола представлены в таблицах 7 и 8.

В первом опыте получены положительные результаты. Так, содержание каротина в опытных группах уже в возрасте 30 дней превышало контроль и составило в контрольной группе 0,49 мкг/мл, в опытных - 0,56-0,58 мкг/мл, однако повышение было не достоверно. В возрасте 60 дней этот показатель составил в контрольной группе 1,80 мкг/мл, а в опытных - 2,58-2,78 мкг/мл, что превысило контроль на достоверную величину- 43,3-54,4% (Р< 0,001).

Содержание витамина А и токоферола в сыворотке крови с возрастом увеличивалось во всех группах, что характерно для животных данного возраста. В возрасте 60 дней содержание токоферола в сыворотке крови телят в контрольной группе составило 1,11 мкг/мл, а в опытных группах -1,58-1,54 мкг/мл, что на 38,7-42,3% (Р < 0,01) выше по отношению к контролю.

Содержание каротина, витамина А и токоферола

Витамины Группа телят Возраст телят, дни

3 30 60

%* %

Каротин, мкг/мл Контрольная 0,22±0,08 0,49±0,08 100 1,80±0,17 100

Опытная-1 0,2610,09 0,56+0,09- 114,3 2,5810,10** 143,3

Опытная-2 0,2310,12 0,5810,08 118,4 2,7810,15** 154,4

Витамин А, МЕ/мл Контрольная 0,40±0,046 1,12±0,18 100 1,8810,06 100

Опытная-1 0,41 ±0,073 1,1810,25 105,4 1,9510,21 103,7

Опытная-2 0,4310,15 1,18Ю,18* 106Д 1,9610,17 104,2

Витамин Е, мкг/мл Контрольная 0,50±0,15 0,75±0,25 100 1,1110,17 100

Опытная-1 0,5110,11 0,8910,13 118,7 1,5810,077* 142,3

Опытная-2 0,5710,17 0,8910,16 118,7 1,5410,10* 138,7

Р < 0,01; **Р < 0,001. %* - по отношению к контролю

Содержание каротина, витамина А и токоферола

Таблица 8

Витамины Группа телят Возраст телят, дни

3 30 60

% %

Каротин, мкг/мл Контрольная 0,22±0,10 0,38±0,07 100 1,ЗЗЮ,10 100

Опытная 0,2010,07 0,5010,07 131,6 1,88Ю,28** 141,3

Витамин А, МЕ/мл Контрольная 0,4110,13 1,05+0,066 100 1,5110,25 100

Опытная 0,3710,15 1,1310,16 107,6 1,7010,25 112,6

Витамин Е, мкг/мл Контрольная 0,5510,10 0,74±0,10 100 1.03Ю.07 100

Опытная 0,5310,12 0,8710,06 117,6 1,4410,15* 139,8

*Р < 0,01; **Р< 0,001.

Несмотря на то, что доза тококарина во второй опытной группе была

выше, чем в первой опытной группе в 2 раза, динамика содержания витамина А и токоферола в сыворотке крови телят между ними существенно не раз-

личалась. По содержанию каротина между опытными группами в возрасте 60 дней в первом опыте разница недостоверная.

Полученные в первом опыте данные по влиянию тококарина на обеспеченность организма телят витаминами были подтверждены во втором опыте. Содержание каротина в опытной группе было достоверно выше по сравнению с контролем (Р<0,001), витамина А с возрастом увеличилась, но оставалась недостоверной. В возрасте 60 дней в контрольной группе содержание токоферола в сыворотке крови составило 1,03 мкг/мл, а в опытной - 1,44 мкг/мл, что на 39,8% выше контроля (Р<0,01).

2.8. Экономическая эффективность применения тококарина в рационах телят молочного периода.

Экономическая эффективность от применения тококарина в рационах телят в дозе 5 млрд. клеток составила 1,6 руб. и 3,27 руб. на рубль затрат в первом и втором опыте соответственно.

ВЫВОДЫ

1. В лабораторных условиях получена сухая форма нового пробиотика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма № 100.

2. Штамм №100 устойчив к нистатину, полимиксину, малочувствителен к стрептомицину и чувствителен к группе тетрациклина и высокочувствителен к группе пенициллина.

3. Тест - культуры: Micrococcus lysodeicticus, E. coli ATCC 3912/41, Micrococcus flavus, Rhodococcus sp. 21, Micrococcus luteus, Sarcina lutea ATCC 939, Salmonella abony 103/39, Bacillus cereus var. mycoides 537, Bacillus cereus ATCC 11778, Str faecalis-не оказали подавляющего действия на штамм №100 в условиях in vitro, за исключением Bacillus subtilis ATCC 6633.

4. Введение водорастворимого сукцината хитозана «Р» ММ 80кДа (рН-7,4 степень деацетилирования 84%) в агаризованную среду не оказывает отрицательного действия на рост штамма №100, что дает возмож-

ность применять пробиотик тококарин совместно с хитозаном данной марки в животноводстве.

5. Препарат тококарин при хранении в готовом виде сохраняет активность в негерметизированной упаковке в течение 6 месяцев при температуре не выше +20°С.

6. Препарат тококарин сохраняет свою активность в составе комбикорма К-62-2 и премикса П-62-2 в течение 6 месяцев на уровне - 84 и 77 % соответственно.

7. Применение пробиотика тококарина в рационах телят способствует повышению среднесуточных приростов на 6,9-11,5%, сокращает количество дней с расстройством пищеварения в 1,9-2,3 раза по сравнению с контролем.

8. Пробиотик тококарин стимулирует реакции неспецифического иммунитета у телят — повышает лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови телят.

9. Пробиотих тококарин оказывает благоприятное действие на микрофлору желудочно-кишечного тракта телят - снижает количество бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, дрожжей и плесеней в кале телят.

Ю.Применение пробиотика тококарина в кормлении телят достоверно повышает содержание в сыворотке крови каротина на 41,3-54,4% и токоферола на 38,7-42,3%.

11.Эффективная доза препарата тококарина для телят 1-30-дневного возраста - 5 млрд. клеток, 31-60-дневного возраста - 500 млн. клеток на голову в сутки. При увеличении дозы в два раза положительный эффект сохраняется без отрицательных последствий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендовать производству лабораторный регламент получения сухой формы нового пробиотика тококарина на основе токоферол-синтезирующего штамма №100.

2. Рекомендовать использовать пробиотик тококарин при выращивании новорожденных телят в возрасте до 30 дней в дозе 5 млрд. клеток, а с 31 дня до 60-дневного возраста - 500 млн. клеток на голову в сутки для повышения жизнеспособности.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шайдуллина Р.Г., Пивняк И.Г., Заболотский В.А., Стукалова Л.Н., Чи-нина Т.В., Михеенко В.М. Новые про биотические препараты для животноводства.// Аграрная Россия. - 2000. - №5. - С. 64-69.

2. Шайдуллина Р.Г., Заболотский В.А., Стукалова Л.Н., Чинина Т.В., Михеенко В.М., Фоломова Е.О. Новые пробиотики для молодняка сельскохозяйственных животных и птицы./ Третья международная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». Тез. докладов ВНИИФБиП с.-х. животных, Боровск.-2000. -С.440-441.

3. Фомичев ЮП., Шайдуллина Т.В. Пробиотик тококарин в рационах животных. // Зоотехния. - 2003. №3. - С.18-19.

4. Шайдуллина Т.В. Новый пробиотик тококарин и его влияние на естественную резистентность телят./Материалы 52-й научной конференции молодых ученых и аспирантов. ВНИИ животноводства. - 2004. - С.41-45.

Издательство РУЦ ЭБТЖ 142132, Московская обл, Подольский р-н, п. Дубровицы Тел. (8 - 27) 65-14-24, (8 - 27) 65-14-07

Сдано в набор 24.05.2004. Подписано в печать 25.05.2004 _Заказ № 20. Печ. л 1,0 Тираж 100 экз._

04- 1 3 73 Т

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шайдуллина, Татьяна Викторовна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Микрофлора желудочно-кишечного тракта и ее значение для молодняка сельскохозяйственных животных.

1.2. Роль микрофлоры желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и птицы в обеспечении их каротином, витаминами А и Е

1.3. Использование микроорганизмов желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и птицы для получения пробиотиче-ских препаратов.

1.4. Применение пробиотиков в животноводстве, их значение в кормлении и профилактике заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние токоферолсинтезирующего пробиотика на микрофлору желудочно-кишечного тракта и организм телят"

Наметившаяся тенденция производства экологически чистых продуктов питания требует поиска новых типов добавок, повышающих продуктивность животных. Одной из реальных альтернатив на сегодняшний день являются пробиотики, препараты содержащие живые культуры микроорганизмов — симбионтов желудочно-кишечного тракта. Их применяют в качестве биологически активных веществ, обладающих ростостимулирующим и лечебно-профилактическим эффектом. Преимущество их в том, что они безвредны и не имеют недостатков, присущих антибиотикам и химиотерапевтическим средствам (Антипов В. А., Субботин В. М., 1980; Тараканов Б.В.,1999).

Применение пробиотиков в животноводстве затрагивает ряд важных проблем, связанных с регулированием кишечного микробиоценоза, иммунной, гормональной и ферментативной систем организма молодняка (Панин А.Н., Малик Н.К, Вершинина И.Ю., 2002).

Для профилактики здоровья молодняка необходимо поддерживать популяцию полезных бактерий в пищеварительном тракте. Поэтому важно при его выращивании создавать необходимые условия, обеспечивающие формирование собственного микробиоценоза, включая применение средств, в том числе пробиотиков, способствующих формированию микрофлоры в нужном для организма направлении (Сизова А.В., 1974; Тимошко М.А., 1990,1992; Тараканов Б.В., 2003).

На сегодняшний день существует большое количество пробиотиков, созданных на основе лактобактерий, бифидумбактерий, молочнокислых, целлюлозолитических и других бактерий (Платонов А.В., 1985). Широко применяются в животноводстве и птицеводстве такие новые пробиотики как реалак, лаком, стрептобифид, ветом-1.1., субалин, целлобактерин, лактоами-ловарин и другие (Иноземцев В.П.и др., 1997; Тараканов Б.В.и др., 1999,2002; Малик Н.И., Панин А.Н., 2001). В начале 90-х годов в ВИЖе на основе каро-тинсинтезирующей культуры Rhodococcus получен пробиотик - каротино-бактерин, эффективный в рационах цыплят-бройлеров, молодняка крупного рогатого скота и свиней (Пивняк И.Г. и др., 1992, 1998).

Поиск микроорганизмов, пригодных дня получения новых эффективных пробиотических препаратов в настоящее время остается актуальным. Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось изучение то-коферолсинтезирующего штамма №100 и создание на его основе нового про-биотического препарата - тококарина. Для достижения указанной цели ставились следующие задачи:

- получить сухую форму пробиотика тококарина;

- определить сохранность биомассы культуры штамма №100 и готового препарата - тококарина отдельно и в смеси с комбикормом и премиксом;

- изучить безвредность, антибиотикоустойчивость, антагонистическую активность штамма №100.

Изучить влияние тококарина на:

- интенсивность роста и профилактику заболеваний пищеварительного тракта телят;

- показатели естественной резистентности телят;

- состав микрофлоры пищеварительного тракта телят;

- содержание в крови телят витамина А, каротина и токоферола. Определить оптимальные дозы и экономическую эффективность применения препарата при выращивании телят.

Научная новизна. Впервые получен пробиотический препарат на основе то-коферолсинтезирующего штамма №100. Определены сроки его хранения в чистом виде и в смеси с комбикормом и премиксом, установлены дозы применения и изучено влияние при выращивании телят на:

- рост и развитие;

- на состояние иммунной системы;

- популяцию микроорганизмов пищеварительного тракта;

- содержание в сыворотке крови витамина А, каротина и токоферола. Практическое значение и реализация результатов исследований. Впервые разработаны лабораторный регламент получения сухой формы пробнотика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100 и наставление по применению пробиотика тококарина при выращивании телят молочного периода.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на:

-третьей международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», Боровск, ВНИИФБиП с.-х. животных (6-8 сентября, 2000); -52-ой конференции молодых ученых и аспирантов «Молодые ученые животноводству», п. Дубровицы, ВИЖ (27 июня, 2003);

-научной конференции отдела кормления и приготовления кормов ВИЖа «Роль биологически активных веществ в кормлении сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию со дня рождения К.М. Солнцева, п. Дубровицы, ВИЖ (14 апреля, 2004).

По материалам диссертации опубликовано 4 работы. На защиту выносятся следующие основные положения:

- разработка лабораторного регламента по получению сухого пробиотика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100;

-результаты изучения влияния пробиотика тококарина на популяцию микроорганизмов пищеварительного трасгга, содержание в крови телят витамина А, каротина и токоферола;

- результаты изучения влияния пробиотика тококарина на естественную резистентность, интенсивность роста и профилактику заболеваний пищеварительного тракта телят.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы в количестве 155 источников, из них 30 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 32 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Шайдуллина, Татьяна Викторовна

ВЫВОДЫ

1. В лабораторных условиях получена сухая форма нового пробиотика тококарина на основе токоферолсинтезирующего штамма №100.

2. Штамм №100 устойчив к нистатину, полимиксину, малочувствителен к стрептомицину и чувствителен к группе тетрациклина и высокочувствителен к группе пенициллина.

3. Тест - культуры: Micrococcus lysodeicticus, Е. coli АТСС 3912/41, Micrococcus flavus АТСС 10240, Rhodococcus sp. 21, Micrococcus lu-teus ATCC 9341, Sarcina lutea ATCC 939, Salmonella abony 103/39, Bacillus cereus var. mycoides 537, Bacillus cereus ATCC 11778, Bacillus subtilis ATCC 6633, Str. faecalis var. zymogenes 365 не оказали подавляющего действия на штамм №100 в условиях in vitro, за исключением Bacillus subtilis АТСС 6633.

4. Введение водорастворимого сукцината хитозана «Р» ММ 80кДа (рН-7,4 степень деацетилирования 84%) в агаризованную среду не оказывает отрицательного действия на рост штамма №100, что дает возможность применять пробиотик тококарин совместно с хигоза-ном данной марки в животноводстве.

5. Препарат тококарин сохраняет свою активность при температуре не выше +20°С в негерметизированной упаковке в течение 6 месяцев.

6. Препарат тококарин сохраняет свою активность при хранении в составе комбикорма К-62-2 и прем икса П-62-2 в течение 6 месяцев на уровне - 84 и 77% соответственно.

7. Применение пробиотика тококарина в рационах телят способствует повышению среднесуточных приростов на 6,9-11,5%, сокращает количество дней с расстройством пищеварения в 1,9-2,3 раза по сравнению с контролем.

8. Пробиотик тококарин стимулирует реакции неспецифического иммунитета у телят - повышает лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови телят.

9. Пробиотик тококарин оказывает благоприятное действие на формирование микробиоценоза желудочно-кишечного тракта телят - снижает количество бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, дрожжей и плесеней в кале телят.

10.Применение пробиотика тококарина в кормлении телят достоверно повышает содержание в сыворотке крови телят каротина на 41,354,4%, токоферола на 38,7-42,3 %.

11. Эффективная доза препарата тококарина для телят 1-30-дневного возраста - 5 млрд. клеток, а с 31-60 дневного возраста - 500 млн. клеток на голову в сутки. При увеличении рекомендуемой дозы в два раза положительный эффект сохранялся без отрицательных последствий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендовать производству лабораторный регламент получения сухой формы нового пробиотика тококарина на основе токоферолсин-тезирующего штамма №100.

2. Рекомендовать использовать пробиотик тококарин при выращивании новорожденных для телят в возрасте до 30-дней в дозе - 5 млрд. клеток, а с 31 дня до 60-дневного возраста - 500 млн. клеток на голову в сутки для повышения жизнеспособности.

1.5. Заключение

На сегодняшний день в связи с загрязнением окружающей среды применение безопасных биологически активных веществ становится наиболее актуальным. К таким веществам относятся витамины, широко и успешно применяемые при выращивании сельскохозяйственных животных.

Повышение эффективности выращивания молодняка сельскохозяйственных животных остаётся основной задачей животноводства. Наряду с улучшением условий содержания и кормления перспективным считается применение экологически безопасных препаратов, не оказывающих отрицательного влияния на окружающую среду, организм животных и животноводческую продукцию.

Среди заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных первое место занимают болезни органов пищеварения неинфекционной этиологии. При этом снижается уровень популяций нормальной микрофлоры и увеличение количества условно-патогенной, в частности, стафилококков, клостри-дий, эшерихий, протея, дрожжей и дрожжеподобной микрофлоры. В общем комплексе лечебных и профилактических мероприятий хорошо зарекомендовали себя препараты на основе живых микроорганизмов - пробиотики. Они не имеют отрицательных эффектов, как антибиотики и естественным образом восстанавливают микробный баланс в желудочно-кишечном тракте животных. Кроме того, введение пробиотических препаратов в организм животных способствует повышению энергии роста, повышению иммунитета, переваримости кормов и снижению количества заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных и птицы с диарейным синдромом. ® Микроорганизмы, входящие в состав ветеринарных пробиотиков, должны быть безвредны, являться облигатными для желудочно-кишечного тракта животных или птицы, обладать антагонистической активностью по отношению к патогенным микроорганизмам, антибиотикоустойчивостью, способных к колонизации на слизистой или в просвете желудочно-кишечного тракта, а также обладать другими ценными свойствами.

Микроорганизмы широко используются для производства биологически активных веществ, в частности каротина. Микробный каротин хорошо зарекомендовал себя при использовании в животноводстве и птицеводстве. ф В настоящее время ведется широкий поиск микроорганизмов для создания новых пробиотических препаратов. Учитывая тот факт, что микрофлора желудочно-кишечного тракта участвует в обеспечении организма животных витаминами, учеными ВИЖа была проведена работа по созданию коллекции микроорганизмов, способных синтезировать каротин и токоферол. Многочисленные исследования подтверждают важную роль этих веществ, наряду с другими биологически активными добавками, в кормлении молодняка крупного рогатого скота. Они влияют на энергию роста молодняка, использование питательных веществ рационов, на обмен веществ в организме. Ф Ведутся исследования по созданию новых пробиотических препаратов на основе микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и птицы. ф 40

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Материалом для исследований служили токоферолсинтезирующии пггамм №100, выделенный в лаборатории микробиологии ВИЖа из 10"6 разведения содержимого толстого отдела кишечника цыплят-бройлеров (Худяева Е.Н., 1991), пробиотик тококарин, подопытные телята, а также сыворотка крови и кал телят.

Опыты по культивированию штамма №100 проводили на мясопептонном агаре (МПА) и специальной среде в пробирках, чашках Петри, конических колбах на качалке.

Культура штамма №100 хранилась при температуре +4°С на скошенном МПА в пробирках с ватной пробкой, обернутой парафильмом в течение не более 3 месяцев. Для под держания штамма №100 его ежемесячно пересевали на МПА рН - 7,2. Микроорганизмы культивировали при температуре +37°С в течение 48 часов на скошенном МПА в стеклянных пробирках.

Для культивирования штамма №100 использовали жидкую специальную среду следующего состава: дрожжевой гидролизат - 250 мл; кукурузный экстракт - 14 мл; тиамин - 0,1%-10 мл; КН2Р04 - 0,5 г; MgS04- 0,5 г; ZnS04 - 0,05 г; FeS04 - 0,05 г; MgS04 - 0,05 г; CH3COONa - 1,0 г; воды водопроводной до 1 # л, рН - 6,0-6,2 (Худяева Е.Н., 1991; Пивняк И. Г., Попов А. Н., Худяева Е. Н., 1994).

Раствор тиамина подвергали дробной стерилизации в кипящей бане по 30 минут в течение 3-х дней. Затем его вносили перед посевом по 0,1 мл в колбу. Среду разливали по 200 мл в конические колбы емкостью 750-1000 мл. Питательную среду стерилизовали при 121°С в течение 30-40 минут.

Биомассу культуры получали путем центрифугирования.

Активность биомассы культуры штамма №100 и пробиотика тококарина определяли по количеству жизнеспособных клеток штамма №100 в 1 г каждые 30 дней. Из исследуемого материала готовили серию последовательных разве

РОССИЙСКАЯ

ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА дении 10"1- КГ6 на физиологическом растворе. На МПА в чашках Петри высевали по 0,1 мл суспензии поверхностным методом. Чашки инкубировали 48 часов в термостате при температуре +37° С. Количество жизнеспособных клеток определяли путем подсчета колоний.

Бактериальную чистоту биомассы и готового препарата проверяли высевами на МПА и среду Эндо, а также микроскопированием. Для этого делали высевы разведений Ю^'Ю"3 на МПА и среду Эндо по 0,1 мл.

Биомассу хранили в холодильнике при температуре +4° С. Полученный в лабораторных условиях препарат тококарин, хранили в жестких условиях - в негерметизированной упаковке при комнатной температуре. Для определения сроков хранения, каждые 30 дней проводили посев последовательных разведений на мясопептонный агар, инкубировали 48 часов при +37° С. Количество жизнеспособных клеток определяли путем подсчета колоний.

Испытание безвредности препарата проводили по Масловскому К.С. и Ковалеву В.Ф. (1975) на здоровых белых мышах линии Balbeh массой 18-20 г. Пяти мышам выпаивали внутрь по 0,5 мл дистиллированной воды (контроль). Двум другим группам мышей по 5 голов в каждой выпаивали пробиотический препарат в дозе 100 млн. клеток на голову в сутки (опытная-1) и 500 млн. клеток на голову в сутки (опытная-2).Для этого соответствующее количество препарата растирали в ступке в 10 мл дистиллированной воды. За мышами вели наблюдение в течение 3-х дней.

Антибиотикоустойчивость определяли методом диффузии в агар с использованием дисков. Этим же методом с использованием лунок определяли чувствительность штамма к препарату - хитозану (Справочник по микробиолог, и вирусолог, методам исследования, 1982). В лунки закапывали 0,5%, 1%, 2%, 3% и 5% растворы водорастворимого сукцината хитозана «Р» ММ 80кДа (рН-7,4 степень деацетилирования 84%) на дистиллированной воде. Через 24 часа инкубирования измеряли зоны задержки роста культуры штамма №100.

Антагонистическую активность клеток штамма №100 в условиях in vitro определяли методом штриха в отношении тест - культур (Лабинская А.С.,1978; Егоров Н.С., 1979; Справочник по микробиолог, и вирусолог, методам исследования, 1982,).

С целью изучения эффективности применения тококарина при выращивании новорожденных телят провели 2 опыта в агрофирме «Щапово» в 1998-1999 годах. Первый опыт - на 3-х группах телочек по 13 голов, а второй - на 2-х группах по 12 телочек чёрно-пёстрой породы в каждой, аналогов по живой массе и возрасту (табл. 2).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шайдуллина, Татьяна Викторовна, п. Дубровицы, Московской обл.

1. Аветисян Р.С. Динамика кишечной микрофлоры здоровых, больных и переболевших токсической диспепсией поросят в возрасте до 10 дней//Изв. с.-х. наук АрмССР. 1981. - №8. - С.46-50.

2. Алексеева Л.Ф., Драганов И.Ф., Бычкова Н.Г. Влияние {3-каротина на организм стельных коров//Зоотехния. — 2001. №3. - С. 15.

3. Антипов В. А., Субботин В. М. Эффективность и перспективы применения пробиотиков//Ветеринария. 1980. -№12. - С.55-57.

4. Балчюнайтис А., Стунджене А. Изучение видового состава кишечной микрофлоры некоторых биохимических показателей крови у здоровых и больных диспепсией телят//Труды Лит. НИИ ветеринарии. 1986. - №10. - С.22-28.

5. Беликова B.C. Выращивание телок при повышенных уровнях витаминов А и Е в рационе//Зоотехния.-1998.-№1.-С. 15-16.

6. Бортничук В.А., Степанюк О.В. Изучение роли условно-патогенной микрофлоры в этиологии гастроэнтеритов поро-сят//Болезни парнокопытных животных в условиях Украины. Киев. - 1986.-С. 18-22.

7. Вальдман А.Р. Витамин Е в питании сельскохозяйственных жи-вотных.//Витамины, VIII. Биохимия витамина Е и селена. Киев: Наукова думка. - 1975. - С. 105-122.

8. Вальдман А.Р. Витамины в животноводстве. Рига: Зинатне. -1977. - .352 с.

9. Ю.Виноградова А.И., Соловьев A.M. Оценка бактериоза кишечника поросят на фоне скармливания разных доз БВК в составе рационов.// Микробиология в сельском хозяйстве: II республ. конф. -Кишинев. -1991. -С.23-24.

10. П.Волкова Н.Т. Изучение физиолого-биохимических свойств Рубцовых бактерий Propionibacterium acnes с целью получения сухого препарата для животноводства. Автореф. дис. . канд. биол. наук. -МГУ.- 1980.-24 с.

11. Волошин А.В., Кирсанов А.Ф.Влияние А-витаминной обеспеченности жомовых рационов на концентрацию токоферолов в печени и сыворотке крови бычков//Физиолог. и биолог, основы высокой продуктивности животных. Саранск. - 1997. - С.67-70.

12. Вракин В.Ф., Ковальчук И.С. Биологические основы витаминного питания жвачных животных/Юбзор. М.: - 1969. - 130 с.

13. Вракин В.Ф., Ковальчук И.С. Идентификация бактерий, населяющих рубец жвачных//Сельское хозяйство за рубежом. 1968. - №3. - С.57.

14. Гаджиев A.M. Молочный комплекс «Щапово»// Зоотехния. 1998. №1. - С. 23-24.

15. Гаппоева B.C. Использование каротинобактерина в рационах цыплят-бройлеров: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Дубровицы. -1994.-21с.

16. Герасимова Г.Г., Нефедова Н.Н. Влияние концентрата витамина А на интенсивность роста телят//Зоотехния. -1985. - №12. - С.56-57.

17. Гусак Я.С., Паенок С.М., Андрийчук П.Е., Артюх Г.И. Усвоение бета-каротина телятами в раннем постнатальном периоде// Науч.-тех. бюл. Львов. - 1986. -Вып 8 (1). -С.31-33.

18. Девяткин В.А. 3-каротин в кормлении жвачных животных.// Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Тез. докладов. П междунар. конф. Боровск. -1995. - С.32-33.

19. Дмитровский А.А., Тапалцян С.Х. Энзим этические превращения и пути улучшения усвоения бета-каротина и витамина А//Витаминное питание с.-х. животных. М.: Колос. - 1973. - С. 1218.

20. Долгова М.С., Долгов И.А. Лактобиф комплексный препарат для профилактики и лечения дисбактериозов у телят// Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Тез. докладов. П междунар конф. - Боровск. -1995. - С.34.

21. Драганов И.Ф., Алексеева Л.В. Повышение резистентности организма коров с помощью 0-каротина//Зоотехния.- 2003. №9. -С.11-12.25.

22. Дубинин А.В., Бабин В.Н., Раевский П.М. Трофические связи кишечной микрофлоры и макроорганизма/ЛСлиническая медицина. -1991. №7. - С.24-25.

23. Душейко А.А., Великий Н.Н. О биологическом действии витамина А//Украинский биохимический журнал. — 1970. т.42. - №42. -С.530-541.

24. Евдокимов И. Храмцов А.Г., Рябцева С.А., Харитонов Д.В., Северов А.В. Современные тенденции развития в технологии пре-биотических продуктов из вторичного сырьяУ/Молочная индустрия: Материалы Международной науч.-практ. конф. 2004. - С.84-85.

25. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. — М.: «Высшая школа». 1979.-С. 158.

26. Емелина Н.Т., Крылова B.C., Петухова Е.А., Бромлей Н.В Витамины в кормлении сельскохозяйственных животных. М: Колос, 1970; -311 с.

27. Емельяненко П. А. Методы определения бактерицидной активности сыворотки крови//Методические указания тестирования естественной резистентности у крупного рогатого скота. М.: МВА. -1980. - С. 4-6.

28. Емельянов JI.B. Особенности динамики витамина А, каротина и белков крови у телят в первый месяц жизни// Тр. Латв. СХА. Елгава. - 1969. - Вып. 24. - С.202-206.

29. Жданов П.И Применение споробактерина для повышения сохранности и продуктивности свиней//Ветеринария. — 1994. №11. -С.36-40.

30. Зб.Иноземцев В.П., Бажовой О.В., Самсонов О.В., Мосин В. А. и др. Новый эффективный препарат для лечения телят с синдромом общего расстройства пищеварения/ТГазета "Ветеринария". 1997. -№ 17. — С.2-4.

31. Калашников А.П., Старых В.П., Погодаев С.Ф.и др. Совершенствование технологии производства молока/Мндустриализация производства продуктов животноводства М: Колос. - 1980. - С.28-35.

32. Каленюк В.Ф., Куприн С.П. Влияние молочнокислых бактерий на некоторые биохимические и морфологические показатели органов и тканей поросят//Сельскохозяйственная биология. 1992. - №2. -С.81-87.

33. Калина А.П. Идентификация энтерококков//Лабораторное дело. -1971. №6. - С.369-371.

34. Карпутъ И.М., Пивовар Л.М., Козельский B.JI. Действие витамина Е на иммунную реактивность поросят//Зоотехния.-1985. №12. - С. 55-56.

35. Киселева Н., Лаптев Г., СолдатоваВ. Использование целлобакте-рина в птицеводстве/ЛСомбикорма. 2000. - №5. - С. 16-17.

36. Кислюк С.М., Лаптев Г.Ю. Многофункциональный пробиотик целлобактерин позволяет оптимизировать набор кормовых добавок для свиней// Сельскохозяйственные вести. 2002. - №4.

37. Комаров Б.А. Почему хитозан полезен человеку//Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы шестой конф.-М.: Изд-во ВНИРО. -2001.-С. 187-194.

38. Кондрахин И.II., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и др. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии. — М.: Аропромиздат. — 1985. С. 130-133.

39. Копола де Бонилья Анна Мария Бактериальная флора кишечника телят при желудочно-кишечных заболеваниях в молочных хозяйствах Ташкентской области//Профилактика инфекционных болезней животных в Узбекистане. Ташкент. —1984. - С.32-35.

40. Костромитинов Н А. Современные представления о возникновении резистентных штаммов микроорганизмов к химиотерапевти-ческим препаратам/ЛЗестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2001. - №3. - С.73-76.

41. Кочеровский Ю.Э., Нечмирева Т.С., Голубева К.А. Высеваемостъ условно-патогенных бактерий при острых кишечных заболеваниях/Медицинский журнал Узбекистана. -1986. №2. - С.27-28.

42. Куваева И.Б. Обмен веществ организма и кишечная микрофлора. М. 1976. - 248 с.

43. Кузмин В.А., Щепеткина С.В., Вербицкая Н.Б., Балашова О.В. Клинические исследования синбиотика мультибактерин ветеринарный омега-10 на домашних животных/Ветеринарная практика -2000.-№4(11).-С.25.

44. Лаврентьева Л.И. Исследование каротинообразующих микроорганизмов в микрофлоре пищеварительного тракта овец/Сб. науч. трудов ВНИИЖ. Дубровицы.-1970. - Вып. 19. -С.98-99.

45. Ли В. Имагро — естественная защита здоровья животных //Животноводство России. 2003. - №2. - С.36-37.

46. Малик Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дис. .доктора биол. наук. Москва. - 2002. -51 с.

47. Малик Н. И., Панин А. Н. Ветеринарные пробиотические препара-тыУ/Ветеринария. 2001. - №1. - С.46-51.

48. Масловский К.С., Ковалев В.Ф. Методы контроля биологически активных веществ. Москва. - 1975. - С.52.

49. Матусевич В.Ф. Битюков В.А., Высокое Н.П. и др. Способы определения естественной резистентности организма животных// Труды Целиноградского СХИ. Целиноград. - 1970. - том 8. - вып. 10. - С.8-18.

50. Меркурьева Е.К. Биометрия в селекции и генетике сельскохозяйственных животных. М.: Колос. - 1970. -с.423.

51. Могильниченко Н.В. Изучение бактерий, образующих желтые пигменты в пищеварительном тракте овец//Научные исследования аспирантов, ВИЖ. Дубровицы. - 1972. - Вып. 27. -С.95-96.

52. Мутовин В.И., Митюшников В.И. Определение естественной резистентности организма живопшх//Ветеринария. 1973. - №12. -С. 103-104.

53. Никонов Б.А., Вербицкая Н.Б., Синева С.А., Антонов С.Ф. и др. Совместимость хитозана с микрофлорой кишечника и культурами клеток/ Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы 6-ой конф. М.: Изд-во ВНИРО. - 2001.- С.373-374.

54. Онуфриенко М.Э. Использование антиоксидантов в кормах для животных//Ветеринарная практика. 2000. - №3-4(10-11). - С. 1719.

55. Паенок С.М., Андрейчук П.Е., Гусак Я.С., Арпох Г.И. Усвоение бета-каротина в организме животных//Научные основы витаминного питания с.-х. животных. Юрмала. - 1987.-С. 156-157

56. Палфий Ф.Ю., Гамкало З.Г., Теслюк М.И. и др. Взаимосвязь состояния микрофлоры рубца и кроветворения у крупного рогатого скота при разных режимах содержания//Экологические аспекты изучения и охраны флоры и фауны СССР. М —1986. - С.87-88.

57. Панин А.Н., Малик Н.И., Вершинина И.Ю. Пробиотики: теоретические и практические аспекты//Био. 2002. - №3. — С. 9-12.

58. Панин А.Н., Серых Н.И., Малик Е.В., Гараев И.М., Боровиков Н.В., Денисов А.А. Повышение эффективности пробиотикотера-пии у поросят//Ветеринария. 1996. - №3. - С. 17-22.

59. Петухова Е.А., Бессарабова Р.Ф., Халенева Л.Д. Зоотехнический анализ кормов. М.:ВО «Агропромиздат». - 1989. - С. 157-166.

60. Пивняк И.Г., Лаврентьева Л.И. Каротинсинтезирующая микрофлора пищеварительного тракта овец//Результаты биохимических, микробиологических и радиологических исследований в животноводстве: Бюл. науч. работ. -1974. — Вып. 39. С. 101-103.

61. Пивняк И .Г., Тараканов Б.В. Микробиология пищеварения жвачных. М.: Колос. -1982. - С.202-203.

62. Пивняк И.Г., Шайдуллина Р.Г., Заболотский В.А. Новый пробиотик каротинобактерин в рационах для молодняка сельскохозяйственных животных и птицы//Актуалъные проблемы биологии в животноводстве: Тез. докладов П междунар конф. — Боровск. -1995. — С.82.

63. Пивняк И.Г., Шайдуллина Р.Г., Заболотский В.А. Каротинобактерин новый пробиотик для молодняка птицыУ/Зоотехния. - 1998 -№3. - С. 14-16.

64. Пинегин Б.В., Коршунов В.М., Мерецков В.В. Количественные закономерности изменения микрофлоры кишечника у облученных мышей/Журнал «Микробиология». -1977. -№7. С.88-94.

65. Платонов А.В. Производство препаратов для животноводства на основе микроорганизмов симбионтов желудочно-кишечного тракта. - М. - 1985. - 43 с.

66. Пляшенко С. И, Сидоров В.Т. Естественная резистентность организма животных. Ленинград: «Колос». - 1979. —184 с.

67. Плохинский Н.А. Алгоритмы биометрии. Издательство Московского университета. 1967. - С.5-9, 25.

68. Попов Ж.П., Никонорова A.K. Новый пробиотик для животноводства// Зоотехния. 1995. - №11. - С.21-22.

69. Привало О.Е., Паенок С.М., Гусак Я.С. и др. Витамины в кормлении сельскохозяйственных животных/Под ред. Привало О.Е.- К.: Урожай. 1983. -160 с.

70. Промышленная микробиология/ Аркадьева З.А., Безбородов A.M., Блохина И.Н., Воробьева Л.И. и др. М.: Высшая школа, 1989. -с.310-324.

71. Резниченко Л.В., Носков С.Б. Роль каротина в животноводстве и уровень обеспеченности им сельскохозяйственных животных в Белгородской области в 2002 году// Био. 2003. - №3. - С.30-31.

72. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов/Под ред. Скурихина И.М., Тутельяна В.А. М.: Бандес Медицина. - 1998. - С. 128-149.

73. Светликовская И. А. Синтез витаминов в рубце//Сельское хозяйство за рубежом. 1967. - №8. - С. 30-31.

74. Седов В.И,.Шумило О.М (1983), Нумерическая классификация энтерококков/Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1983.-№1. - С.33-34.

75. Семин В.Н., Ткачев И.Ф., Бухтиярова О.Н. Применение микробного каротина в рационах двух поколений кур в сравнении с другими источниками витамина А//Витаминное питание сельскохозяйственных животных.- М.: Колос. 1973. -С.286-298.

76. Сизова А.В. Значение микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных и использование бактерий симбионтов в животноводстве/Юбзорная информация. ML -1974. - С.39-74.

77. Слабицкий Я.И. Роль микрофлоры пищеварительного канала свиней в биосинтезе витаминов группы В//Сельскохозяйственная биология. -1982. т. 17. - С. 513-518.

78. Смирнов В. В. Антибиотики и/или пробиотики: размышления и факты.//«Лiкування та Д1агностика». 1998.- №2. - С. 8-13.

79. Смирнов ВВ, Резник СР., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. - Киев: Наукова думка. - 1982. - 280 с.

80. Сорокин В.В., Тимошко М.А., Николаева А.В. Микрофлора кишечника животных. Кишинев. -1983. -55с.

81. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования/ Биргер М. О., Ведьмина Е.А., Влодавец В.В., Жарикова М.С. и др.- М.: «Медицина». 1982.-С.93,168-170.

82. Тарабрина Н.П. Взаимодействие лактобацилл со слизистой оболочкой кишечника//Микробиология. 1980. - №2. - С.89-93.

83. Тараканов Б.В. Микробиологические процессы в рубце и эффективность применения нового биопрепарата стрептофагина в кормлении л актирующих коров//Сельхоз. биология. — 1993. -№6. С. 94105.

84. Тараканов Б.В. Регулирование микробиологических процессов в рубце жвачных животных с помощью нового биопрепарата стрептофагина// Актуальные проблемы биологии в животноводстве:

85. Тез. докладов. П междунар конф. Боровск. -1995. - С.98-99.

86. Тараканов Б.В. Биологические эффекты пробиотиков// Современные проблемы биотехнологии и биологии продуктивных животных: Сб. науч. тр. Том XXXVI11.-Боровск. -1999. С.78-86.

87. Тараканов Б.В. Аминокислоты и регулирование микробиологических процессов в рубце жвачных животных/УПроблемы кормления сельскохозяйственных животных в современных условиях развития животноводства. Дубровицы. - 2003. - С. 108.

88. Тараканов Б.В., Николичева Т.А. Биология целлюлозолитических бактерий, используемых для приготовления пробиотика целлобак-терина//Доклады РАСХН. 2000. - №3. - С.42-44.

89. Тараканов Б.В., Николичева Т.А., Алешин В.В., Комкова Н.М., Манухина А.Н., Бру скова О.Б. Изучение рекомбинантных штаммов энтерококков, экспрессирующих образование соматолибери-на, на организм кроликов// Био. 2002. - С. 13-16.

90. Тараканов Б.В., Эрнст JI.K. Перспективы создания новых пробиотиков на основе рекомбинантных штаммов бактерий, экспрессирующих эукориотические гены. М. - 2002. - С. 1-3.

91. Татарский В. Отечественный препарат аквимаг для птицеводст-ва/УЖивотноводство Рссии.-2003. -№2. С.28-29.

92. Тимошко М.А. Взаимодействие бифидобактерий, молочнокислых бактерий и эшерихий в кишечнике гнотобиологичеких цыплят: Автореф. Дис. . канд. биол. наук, Кишенев. 1973. -26 с.

93. Тимошко М.А. Микрофлора пищеварительного тракта молодняка сельскохозяйственных животных. Кишинев: «Штиинца». — 1990. - 190с.

94. Тимошко М.А. Микрофлора желудочно-кишечного тракта телят и поросят при стрессе/Стресс и адаптация сельскохозяйственных животных в условиях индустриальных технологий.- Кишинев: «Штиинца». 1992. -С. 147-175.

95. Ю.Тимошко М.А., Холмецкая В.Г., Бурсук И.Ф. Бактериоценоз пищеварительного тракта поросят. Кишинев. - 1983. - 56 с.

96. Феклистова Л. Современные пробиотики: новый взгляд на проблему //Российская врачебная газет: Медицинский вестник. -2003. -№10 (26 марта) С. 10.

97. Фурдуй Ф.И., Федоряка В.П., Хайдарлиу С.Х. и др. Стратегия создания адаптативной системы промышленного животноводства. -Кишинев. 1987. -188 с.

98. И4.Фомичев Ю.П., Шайдуллина Р.Г., Федоров Ю.Н. и др. Влияние хитозана на резистентность и рост телят//Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. 7-й между нар. конф. Санкт-Петербург. М.: Изд. ВНИРО. - 2003. - С.210-214.

99. Худяева Е.Н. Токоферолсинтезирующие микроорганизмы пищеварительного тракта сельскохозяйственной птицы: Автореф. дис. .канд. биол. наук. Дубровицы. - 1991. - 19 с.

100. Пб.Худяева Е.Н. Токоферолсинтезирующие микроорганизмы пищеварительного тракта птицы//Биотехнологические достижения и перспективы их развития//Тез. докладов. — Львов. — 1990. С. 107.

101. Чахава О.В. Гнотобиология как наука о микрофлоре организма хозяина//Вестник сельскохозяйственной науки. — 1984. №8. -С. 116-123.

102. Червинец В.М., Бондаренко В.М., Абдулов А.И., Комаров Б.А. Антимикробная активность хитозана с различной молекулярной массой//Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: Материалы 6-ой конф. М.: Изд-во ВНИРО. - 2001.- С.252-254

103. Чечеткин А.В., Головатский И.Д., Калиман П.А., Воронянский В.А. Биохимия животных. М.: Высшая школа. — 1982. - С. 125134.

104. Шубин А.А., Шубина Л.А., Поташов А.Н., Гизатулин И.С. Бактериальные препараты при профилактике желудочно-кишечных болезней телят//Ветеринария. 1994. - №3. - С.42-45.

105. Шихова Р.Я., Голубцова JI.H., Алиев В.Н. Естественная резистентность новорожденных телят при скармливании микробного бета-каротина//Физиология и биохимия питания сельскохозяйственных животных: Бюл. науч. работ. 1988. - вып. 90. - С.43-45.

106. Юрьев А.И., Головин А.В., Науменко П.А. Комплексный ферментный препарат МЭК СХ-3 в кормлении высокопродуктивных коров// Новое в приготовлении и использовании комбикормов и балансирующих добавок: Мат. науч.-практ. конф. Дубровицы. -2001. — С.42-44.

107. Bauernfeind J.C., Carottnoids as colorants and Vitamin A precursors: technological and nutrition application//New York. 1981. - P.436.

108. Binder A. Bacteriologiscche Untersuchungen zum Vorkommen gram-negative ver Anaerobe rim kot Von Schweinen: Inaug // Diss. Hannover. 1982. - 135 s.

109. BloksmaN., Ettekoven H. et al. Effects of lactobacilli on parameters of non-specific resistance of micelle//Med. Microbiol. Immunol. 1981. —170. — P.45-53.

110. Bogdanov I.G., Popkhirstov P. et al. Anticancer effect of antibioticumbulgaricum on sarcoma 180 and on the select form of Erlich carci-noma//Abstr. VI1 Intern. Cancer. Congres 1981. -№170. - P.45-53.

111. Bogdanov I.G., Dalev P.G. et al. Antitumor glocopeptides from Lac-tobacfflus bulgaricus cell wall// FEBS Lett. 1975. - Vol.57/ - P.259-261

112. Chan R.C.Y., Red G. et al. Competitive exclusion of uropathogens-from human uroepithelial cells by Lactobacillus whole cells and cell wall fragments//Infection and Immunity. -1985. V.47 - S.84-89.

113. Dubos R. Normal bacterial populatons of the intestine and their relation to intestinal function//The New England Journal of Medicine. -1964. V. 270. - № 14. - P.938-945.

114. Dubos R. The microbiota of the gastrointestinal tract//Gastroenterology. 1966. -V.51. -№5. -P.868.

115. Fuller R. Probiotics in man and animals. A review//J. Appl. Bcteriol. -1989.-V.66. №5. - P.365-378.

116. Gilliiand S.E. Health and nutritional benefits from lactic acid bacte-ria//FEMS Microbiol. Rev. 1990. - P.175-188.

117. Gilliiand S.E., Nelson C.R. et al. Assimilation of cholesterol by Lac-tobacillis acidophilus//Appl. Environ. Microbiol. 1985. -№49.1. P.377-381.

118. Golbin B.R., Gorbach S.L. The effect of milk and lactobacillus feeding on human intestinal bacterial enzyme activity// Amer. J. Clin. Nutr. -1984.-P.756-761.

119. Ianiszowska W. Intracellular localization of tocoferol biosynthsis in Calendulf officinalis//Phitochem. 1987. -V.26. - №5. - P. 1303-1407.

120. Lilly D.M., Stilwell R.H. Probiotics growth promoting factors produced by microorganisms.//Science. -1965. -P.747-748.

121. Ludwig W., Seewaldt E., Balz R.K.et al. The phylogenetic position of Streptococcus and Enterococcus//J. Gen. Miicrobiol. -1985. V. 131. -№3. -P543-551.

122. Mead G.C. Insolation media of group D streptococcus-comments//Int. J. Food. Microbiol. 1985. - V.2. - №1-2. - P. 115-117.

123. Marshal P.S., Mrris S.R., Threlfall D.R. Biosynthesis of tocopherols: a re-exemination of the biosynthesis and metabolism of 2-methyl-6-phytyl-1,4-benzoquinol//Phitochem. -1985. V.24. -№8. - P. 17051711.

124. Mitsuoka T. Recent trends in Research on intestinal flora//Bifidobact. and Microflora. 1982. -V.l. -№1. -P.3-24.

125. Mitsuoka T. Verleichende Unter suchungen uber die Lactobazillez aus der Faects von Menschen, Schweinen und Huhnern//Zbl. f. Bact., Para-siten. undHyg. 1969, a. Bd.210. №1. S.32-51.

126. Myers L.L., Shoop D.S., Firehammer B.D., Boder Moryon M. Association of Interotoxigenc Bacteroides fragillis with diarrheal disease in calves//J. Infec. Distacts. 1985. - V.152. - №6. - P. 13441347.

127. Mizutani Т., Mitsuoka T. Relationship between liver tumor genesis and intestinal bacteria in gnotobiotic С 3H/He Male mice: In Recent advancts in germfree Ressearch./Eda: S. Soscki et fl. Tocia. -1981. -P.639-643.

128. Parker R.B. Probiotics, the other half of the antibiotics story//Anim. Nutrition and health. -1974. V.29. - №12. - P.4-8.

129. Reddy G.V., Shahani K.M. et al. Inhibitory effect of the yoghurt on Erlich ascites tumor on cell proliferation//!, national Cancer. 1973. -V.50. -№.8. — P. 15-17.

130. Rowland I.R., Grasso P. Degradation of N-nitrosamine by intestinalbacteria//Appl. Microbiol. Sci. 1975. -№.29. - P.7-12.

131. Schleifer K.H., Kilpper-Balz R., Kraus J. und mitrab. Classification of strepnococci//Zbl. Bacteriol., Microbiol, und Hug. — 1986. A 262. -№2. - S.275.

132. Smith H.W. The development of the alimentary tracr in young ani-mals./J/ Pathol. Bacteriol. 1965. - V.90. - P.495-513.

133. Svosil D., Danek P., Kumprecht I., Zobac P. Ucinnost odstupnovanych hladin bacteril Streptococcus faecium M-74 ve vyzive telat//Zivocisna Vyroba. 1987. - V.32. - №3. - S.256-271.

134. Tannock G.W. The normal microflora: new concepts in health promo-tion//Microbiol. Sci. 1988. -V.5. -P.4-8.

135. Watkins B.A., Kratzer F.H. Effect of oral-gosing of Lactobacillus strains on gut colonization and liver biotion in broiler chics/ZPoultru Sci. 1983. V.62. - №1. - P.2088-2094.

136. Wilson K.H., Perini F., Gilliiand S.E. Role of competition for nutrients in Suppression of Clostridium difficile by the colonic micro-flora/ZInfection and Immunity. 1988. - V.56. -P.2610-2614.