Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние различных факторов на биологическую активность гонадотропина сыворотки жеребых кобыл

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние различных факторов на биологическую активность гонадотропина сыворотки жеребых кобыл"

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ГОНАДОТРОПИНА СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖЕРЕБЫХ КОБЫЛ

03.00.13 - Физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы - 2006

Работа выполнена в отделе эндокринологии с.-х. животных Всероссийского государственного научно-исследовательского института животноводства и на конеферме ООО «Башагроген».

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор Клинский Юрий Дмитриевич.

Официальные оппоненты - доктор биологических наук, профессор

Ерохин Анатолий Сергеевич; доктор биологических наук, профессор Марзанов Нурбий Сафарбиевич.

Ведущее учреждение - ФГОУ Российская академия

менеджмента в животноводстве

Защита диссертации состоится «//^>» 2006 года, в 10 часов,

на заседании диссертационного совета Д 006.013.01. во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142132, Московская область,

Подольский район, п. Дубровицы, ВИЖ. т/факс (4967) 65-11-01

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВИЖа. Автореферат разослан » 2006г.

Ученый секретарь диссертационно! совета, кандидат биологических

В. П. Губанова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. За последнее десятилетие, в силу неблагоприятно сложившихся экономических условий производства в сельском хозяйстве, в нашей стране произошло значительное снижение численности поголовья в различных отраслях животноводства, что неблагоприятно отразилось на количестве выпускаемой продукции. Так по данным ЦСУ (на апрель 2004 г.) в последние три года ежегодно поголовье крупного рогатого скота сокращается на 500 - 700 тыс., свиней на 1млн голов. В данных обстоятельствах выход, наряду с повышением сохранности поголовья, следует искать в совершенствовании методов регуляции репродуктивной функции животных. Одним из них является использование гормональных препаратов на основе гонадотропина сыворотки жеребых кобыл (СЖК). Этот препарат, благодаря исследованиям академика М.М. Заводовского, A.JI. Падучевой, А.И. Лопырина и др., эффективно используется в животноводстве с начала 30-х годов XX столетия до настоящего времени. Его применяют с целью повышения многоплодия в свиноводстве, звероводстве, мясном скотоводстве, а также с целью синхронизации охоты и борьбы с некоторыми видами функционального бесплодия у самок сельскохозяйственных животных (Прокофьев М.И.,1979; Копытин В.К.,1986; Даровских В.Е.,1990; Чомаев A.M., Клинский Ю.Д., 2004). Препарат СЖК содержит гонадотропный гормон, который при введении животному стимулирует функцию половых желез, вызывает развитие дополнительных фолликулов при полноценном половом цикле и регулирует его фазы при некоторых формах бесплодия.

Заготовка сыворотки жеребых кобыл осуществляется в период с 40-45 по 90-100 день жеребости, когда в ней содержится максимальное количество гонадотропных гормонов. Однако, вследствие не совершенных методов определения гонадотропной активности, а также достоверно не изученных факторов прямо или косвенно влияющих на активность гонадотропина

сыворотки, вопрос рационального использования животных реципиентов, улучшения качества, а также увеличения производства СЖК остается открытым, что в конечном итоге снижает экономическую эффективность использования препаратов изготовленных на основе СЖК. Все это требует более детального изучения причин, влияющих на гонадотропную активность СЖК, а также совершенствования старых и разработки новых методов определения гонадотропина в сыворотке крови жеребых кобыл.

Цель и задачи исследований. Учитывая вышеизложенное, нами была поставлена цель - изучение факторов, влияющих на биологическое качество получаемой СЖК и дальнейшее совершенствование технологии производства гонадотропного гормона.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- определить гонадотропную активность сыворотки крови жеребых кобыл в зависимости от индивидуальных особенностей продуцентов;

- изучить влияние условий содержания продуцентов на биологическое качество СЖК;

- определить оптимальные параметры эксплуатации кобыл-доноров;

- изыскать наиболее оптимальные и экономически целесообразные методы определения гонадотропной активности СЖК;

- провести анализ полученных данных и сформулировать выводы и практические предложения.

Научная новизна исследований. Для массовой заготовки СЖК в производственных условиях предложен и внедрен метод иммуноферментной диагностики активности гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл, а также проведена его сравнительная оценка с биологическим методом определения активности СЖК. С целью преодоления сезонной овариальной дисфункции у кобыл охота синхронизировалась с использованием гонадотропин содержащих препаратов. Впервые в качестве продуцентов ГСЖК использованы кобылки двухлетнего возраста. Дано технологическое

обоснование выбора наиболее приемлемых продуцентов гонадотропина в условиях республики Башкортостан.

Практическая значимость работы. В условиях производства СЖК внедрен метод определения гонадотропной активности с наименьшими экономическими затратами и наибольшей достоверностью, что позволяет значительно повысить качество производимого гонадотропина из сыворотки крови жеребых кобыл.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и одобрены на ученых советах Всероссийского государственного НИИ животноводства (2005 - 2006); на объединенной конференции отдела эндокринологии, селекции молочного скота, лабораторий генетики и биохимии животных (2006). Материалы диссертации были представлены на III Международной научно-практической конференции «Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России» (Дубровицы, 2005).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 3 работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 100 страницах компьютерной верстки, содержит 11 таблиц, 1 схему, 1 гистограмму, 2 графика. Структурно включает введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, список литературы, включающий 183 источника, из них 133 иностранных.

Положения, выносимые на защиту:

- оценка и диагностика гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл;

- изучение влияния различных факторов на биологическую активность гонадотропина сыворотки жеребых кобыл.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Научно - производственные исследования проводили в республике Башкортостан, на конеферме ООО «Башагроген» с численностью поголовья 320 голов, преимущественно местных башкирского типа лошадей. Исследования включали в себя изучение факторов, влияющих на активность гонадотропина СЖК, а именно влияние генотипа жеребца, изучение индивидуальных особенностей доноров (возраст, вес, сроки жеребости), влияние сезона случки, кратность взятия крови. Лабораторные исследования по определению предварительной активности гонадотропина методом ИФА осуществлялись на месте, последующие - методом биопробы на крысах, по утвержденной методике ВИЖа в отделе эндокринологии. Исследования гематологических показателей проводились в Научно-производственной Республиканской ветеринарной лаборатории г. Уфы.

Детальное описание методик экспериментов дано по ходу текста диссертации.

В рацион животных, участвующих в опыте, в стойловый период (ноябрь - апрель) входили: сено, сенаж, корнеплоды, концентрированные корма, соль и минеральные добавки. В пастбищный период (май - октябрь) в состав рациона входила зеленая масса культурного пастбища и концентрированные корма, а также соль и минеральные добавки (табл.1).

Таблица 1

Рацион кормления кобыл живой массой 500 кг, на голову в сутки

Показатели Зима Лето

Сено многолетних трав, кг 6 -

Сенаж бобово-злаковый, кг 10 -

Свекла кормовая, кг 6 -

Трава культурного пастбища, кг - 17

Зеленая подкормка, кг - 25

Овес (зерно), кг 3,0 4,0

Отруби, кг 1,5 2

Соль поваренная, г 51 51

Премикс, г 50 50

б

Кормление животных осуществлялось по нормам, принятым в данном хозяйстве. Содержание питательных веществ в рационе представлены в таблице 2.

Таблица 2

Содержание в рационе питательных веществ

Показатели Зима Лето

Сухого вещества, кг 14,0 12,7

Кормовых единиц 11,8 12,2

Обменной энергии, МДж 132,0 128,5

Сырого протеина, кг 2,03 1,9

Переваримого протеина, кг 1,3 1,37

Кальция, г 91 115

Фосфора, г 60 66

Меди, мг 120 120

Цинка, мг 425 600

Кобальта, мг 7 7

Иода, мг 7,0 7,0

Каротина, мг 730 1180

Витамина Бз, тыс. МЕ 12,0 11,9

Витамина Е, мг 1155 2020

Научный эксперимент проводили по следующей схеме (схема 1).

Схема 1

Схема исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Синхронизация охоты у кобыл

Первый научно - производственный опыт проведен с целью изучения синхронизации половой охоты на двух группах кобыл, подобранных по принципу аналогов по двадцать голов в каждой, где практиковалась варковая случка с использованием жеребцов, которые сами выявляли кобыл в охоте и покрывали их. На момент обработки все кобылы были холостыми и находились на разных стадиях полового цикла (проверены ректально). В первой группе каждой кобыле внутримышечно был инъецирован фоллимаг в дозе 1000 И.ед., второй сурфагон в дозе 50мкг (10мл). Результат обработки представлен в таблице 3.

Таблица 3

Результативность осеменения кобыл при синхронизации охоты __фоллимагом и сурфагоном__

Препарат Обработ. голов Пришло в Стало жеребыми Всего жеребых Всего холостых

об{ )-КИ 1-й цикл 2-й цикл

гол. % гол. % гол. % гол. % гол. %

Фоллимаг 20 20 100 10 50 ±11,18 5 25 ±9,68 16 80 ±8,94 4 20 ±8,94

Сурфагон 20 19 95 ±4,87 7 35 ±10,66 3 15 ±7,5 12 60 ±10,95 8 40 ±10,95

Наступление охоты в двух группах фиксировалось на второй день после гормонального воздействия и продолжалось до семи дней, что в пределах физиологической нормы для данного вида животных. Животные проверялись ректально на предмет наличия плодного пузыря и желтых тел, на яичниках спустя 35-40 дней после гормональной обработки. Установлено, что в группе обработанной фоллимагом процент зажеребляемости выше впервые два цикла соответственно на 4,2% в первом и 6,2% во втором. Зажеребляемость кобыл в последующие половые циклы нами не

учитывалась вследствие непродолжительного действия инъецированных гормональных препаратов.

3.2. Влияние генотипа жеребца на биологическую активность гонадотропина сыворотки жеребых кобыл

Во втором опыте с целью получения высокоактивной сыворотки было изучено влияние генотипа жеребцов на биологическую активность гонадотропина СЖК. С этой целью кобылы были разбиты на группы в зависимости от жеребца, участвовавшего в случке. Для каждой группы была определена средняя гонадотропная активность СЖК. Кроме того, по содержанию гонадотропина в сыворотке крови определялся процент высоко-, средне - и низкоактивных кобыл в группе каждого жеребца, который нами был условно обозначен как: низкая активность до 50 И.ед./мл, средняя 50 -100 И.ед./мл и высокая более 100 И.ед./мл. Активность гонадотропина определялась биопробой на самках инфантильных крыс. В опыте участвовало 86 кобыл. Было учтено влияние 9 жеребцов различных генотипов (табл.4).

Таблица 4

Характеристика и влияние генотипа жеребца на активность ГСЖК

Кличка жеребца Порода Живая масса, кг Возраст Покрыто кобыл Средняя активность СЖК, ИЕ/мл Количество и процент кобыл имевших наивысшую активность СЖК

п % Акт., ИЕ

0-31 Башкирская 450 5 19 70,5±7,6 3 15,7 151,8

Рома Рус.рысистая 440 6 16 65,2±8,09 2 12,5 146,1

Кристалл Орловский рысак 460 8 16 79,3± 10,76 5 31,2 144

Муртаза Башкирская 430 4 8 80,5± 15,78 1 12,5 186,8

Ж.кулак Рус.рысистая 440 7 7 81,9±18,68 4 50 146,4

Посох Башкирская 435 6 7 65,5±9,63 1 16,6 108,5

Малыш Башкирская 450 4 5 96± 16,66* 2 33,3 152,8

Орлик Беспородный 470 9 4 45±12,54 - - 77,8

Фугас Рус.рысистая 440 10 4 84,5± 16,24 1 25 125,2

примечание: *Р<0,05

Как показали исследования наибольшее влияние на гонадотропную активность СЖК оказал жеребец Малыш башкирской породы. Из 5 покрытых кобыл этим жеребцом 2 или 33,3% имели высокую активность СЖК (152,8ИЕ/мл), при этом разница достоверна (Р<0,05). В остальных случаях разница не достоверна. Также высокая активность ГСЖК была получена от кобыл покрытых жеребцами Железный кулак и Кристалл, где наивысшая средняя активность была соответственно 146,4 и 144 при достаточно высоких процентах высокоактивных кобыл в группе данных жеребцов (50 и 31,2).Наименыпее значение гонадотропина сыворотки жеребых кобыл получено от кобыл покрытых беспородным жеребцом Орлик, средняя активность составляет 77,8 ИЕ/мл.

3.3. Влияние сезона случки на активность сывороточного гонадотропина и период использования кобыл в качестве продуцентов СЖК

Учитывая физиологическую особенность жеребых кобыл в плодоношении и сезонности проявления половых функций, где далеко не последнюю роль играет эпифиз, нами было решено проверить гипотезу о влиянии продолжительности светового дня на активность сывороточного гонадотропина у жеребых кобыл.

С этой целью, в ретроспективе, случная компания была разделена по месяцам случки на 4 сезона: март, апрель, май, июнь и в соответствии с этим было подобрано 4 группы жеребых кобыл, у которых было изучено время появления гонадотропина, его средняя активность и период использования кобыл в качестве доноров. Активность гонадотропина определялась методом биопробы на крысах. Взятия крови осуществлялись 4-6 раз при активности гонадотропина не ниже 30 ИЕ/мл (табл.5).

Полученные результаты дают основание сделать вывод о том, что кобылы, покрытые в апреле - мае и ставшие донорами в июне - июле имели наивысшую активность 93,3 и 94,1 ИЕ/мл с наибольшим периодом взятия крови в 29 дней и приблизительно с одинаковыми показателями по

количеству доноров с высокой средней активностью гонадотропина, в процентном соотношении выраженные как 35,2 и 37,5%.

Таблица 5

Влияние времени случки на активность гонадотропина СЖК

№№ п.п. Сезон случки Количество животных в группе Средняя активность гонадотропина, ИЕ/мл Период взятия крови, дни Количество и % высокоактивных кобыл

п %

1 март 7 92,1 ±14,66 25(57-82) 3 42,8

2 апрель 17 93,3±8,39 29(50-79) 6 35,2

3 май 16 94,1±5,82 29(49-78) 6 37,5

4 июнь 8 77,7±16,97 27(47-75) 1 12,5

У некоторых животных второй группы первое крововзятие приходится на 46 день жеребости с активностью гонадотропина в 43 ИЕ/мл, а последнее - шестое на 88 день, с активностью 34 ИЕ/мл. У кобыл - доноров, покрытых в мае активность гонадотропина выше, чем у второй группы на 0,8 и на 16,4единицы, чем у доноров покрытых в июне. Начало и окончание использования кобыл в качестве доноров приходится у отдельных особей на 45 и 90 день жеребости при максимальном периоде эксплуатации в 35 дней.

3.4. Изучение активности гонадотропина сыворотки крови у кобыл разного возраста

Для изучения влияния индивидуальных особенностей продуцентов на активность сывороточного гонадотропина, в частности возраста, было исследовано 89 проб СЖК, полученных от кобыл разного возраста за различные циклы крововзятий. Учитывалась средняя активность гонадотропина в группе каждого возраста, а также процент высокоактивных кобыл (табл.6).

Так, разница между трехлетними и десятилетними кобылами по

активности гонадотропина составляет 49,6 ИЕ/мл, при этом кобыл с уровнем гонадотропина выше 100ИЕ/мл не выявлено как в группе десятилетних, так и девятилетних кобыл, а в группе восьмилетних выявлена одна голова или в

процентном соотношении 12,5%.

Таблица 6

Возраст кобыл и гонадотропная активность сыворотки

№ п/п Возраст, лет Число животных в группе Средняя активность гонадотропина в сыворотке крови, ИЕ/МЛ Количество и процент кобыл имевших наивысшую активность

п % Активность, ИЕ/мл

1 3 5 104,4±15,34 * 2 40 152,8

2 4 15 86,2± 11,66 5 33,3 186,8

3 5 21 70,1±8,06 5 23,8 146,1

4 6 8 " 72,2± 14,49 1 12,5 144

5 7 23 63,8±6,91 4 17,3 141,8

6 8 10 62,5± 11,41 1 12,5 130,6

7 9 2 55,7±17,70 - - 73,4

8 10 5 54,8±11,4 - - 93,2

примечание: *Р<0,05

Кроме того, с целью определения влияния первой жеребости на биологическую активность гонадотропина сыворотки крови, нами была изучена средняя активность у кобылок двухлетнего возраста. Образцы крови для исследования отбирались через каждые 7 дней до отсутствия положительной реакции на гонадотропин. Группа кобылок двухлетнего возраста составила 8 голов. Средняя активность двухлетних кобылок оказалась выше на 6,7 ИЕ/мл активности 3-х летних, на 24,9 ИЕ/мл активности 4-х летних, а активности 9 и 10 летних кобыл почти в два раза: 55,4 ИЕ/мл и 56,3 ИЕ/мл, причем разница оказалось достоверной (Р<0,02).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что интенсивный обмен веществ характерный для молодых животных и особей с небольшой живой массой и обусловливает более высокую гонадотропную активность сыворотки продуцентов. Учитывая факт отсутствия физиологической

зрелости у данной группы животных, все кобылки нами подверглись искусственному прерыванию жеребости на сроке до трех месяцев.

3.5. Изучение активности гонадотропина сыворотки крови в зависимости от массы тела животных

С целью изучения взаимосвязи массы тела с уровнем активности сывороточного гонадотропина за день до взятия первой порции донорской крови кобыл взвешивали на весах и распределяли по группам в зависимости от живой массы. С учетом средней активности гонадотропина СЖК в группе по всему циклу крововзятий было проведено сравнение активности кобыл по живой массе среди 5 подопытных групп (табл. 7).

Таблица 7

Живая масса кобыл и гонадотропная активность сыворотки крови

№ п/п Живая масса, кг Число животных в группе Средняя активность гонадотропина СЖК, ИЕ/мл Количество и процент высокоактивных кобыл в группе

п % Активность, ИЕ/мл

1 300-350 8 111,9±14,66 * 5 62,5 186,8

2 350-400 34 76,8±6,40 ** 7 20,5 152,8

3 400-450 36 60,4±5,55 6 16,6 130,6

4 450-500 9 60,1±3,30 - - 75

5 Свыше 500 3 63,8±20,94 - - 63,8

примечание: *Р<0,001, **Р<0,01

Максимальная гонадотропная активность выявлена у кобыл с живой массой менее 350 кг — 111,9 ИЕ/мл (Р<0,001), у отдельной особи средняя гонадотропная активность СЖК по 6 крововзятиям составила 186,8 ИЕ/мл. В этой же группе и самый высокий процент высокоактивных кобыл - 62,5%. На долю кобыл с живой массой тела 350 — 400 кг также приходится высокий процент доноров имеющих наивысшую активность - 20,5%. С увеличением массы тела активность снижается. В группах кобыл с массой 450 кг и более, животных с высокой активностью не выявлено, а средняя активность в них составляет не выше 63,8 ИЕ/мл с незначительной разницей - 3,7 ИЕ/мл между группами.

З.б. Уровень гонадотропного гормона в сыворотке крови кобыл на различных стадиях жеребости

Нами была поставлена цель изучить динамику накопления гонадотропина в сыворотке крови жеребых кобыл, а также изыскать способы определения количественного состава этого гормона в сыворотке с возможностью заготавливать более качественное сырье для последующего производства гонадотропин - содержащих препаратов.

В этой связи было подобрано две опытные группы кобыл, в ретроспективе условно разделенных по гонадотропной активности на две группы в зависимости от полноты цикла крововзятий и средней активности гормона в группах. Гонадотропная активность определялась методом иммуноферментного анализа и биопробой на крысах с учетом времени крововзятий на различных сроках жеребости (табл. 8).

Таблица 8

Динамика накопления гонадотропина___

№ п п Количество животных в группе Метод определения гормона Сроки взятия крови, дни жеребости | Средняя активность, ИЕ/мл

50 57 64 71 78 85

1 23 Биопроба 66,2 ±5,6 102 ±8,77* 109 ±7,39* 84,9 ±5,11 50,9 ±4,05 - 82,6

ИФА 73,7 ±7,56 124,2 ±11,53* 126 ±6,63 108,9 ±8* 54,7 ±4,47 *** - 97,5

2 14 Биопроба 60,7 ±8,1 122,2 ±10,8 153,5 ±11,7 179,1 ±16,1 137 ±13,4 100 ±11,3** 125,4

ИФА 71 ±8,96 158,8 ±7,6 174,8 ±10,37 181,4 ±10,07 143,2 ±12,1 104 ±8,95*** 138,8

*- при Р<0,001; ♦»- при Р<0,01; ***- при Р<0,02

Из приведенных данных таблицы 8 видно, что накопление гонадотропина сыворотки у кобыл в различные сроки жеребости имеет разную динамику. Так первое взятие крови у кобыл продуцентов ГСЖК

приходится на 50-й день жеребости в обеих группах. У кобыл первой группы пик активности гормона приходится на 64 день жеребости (Р<0,001) с титром нарастания в первую неделю 5,1 ИЕ/мл. У кобыл второй группы этот показатель составляет 8,7 ИЕ/мл, а максимум гонадотропной активности приходится на 71 день беременности, с последующей динамикой снижения на 6 ИЕ/мл до 78 дня и 5,2 ИЕ/мл на 85-й день соответственно, причем в этой группе данные достоверны по обоим методам исследования (Р<0,01 и Р<0,02). Период крововзятий составил 35 дней во второй группе и 28 дней в первой. Появление гормона фиксировалось методом ИФА на сроке 39 дней жеребости со значением в 2 ИЕ/мл, минимальное значение титра сывороточного гонадотропина на первом взятии крови, в первой группе, составило 27 ИЕ/мл, максимальное — 208 ИЕ/мл на третье взятие крови со сроком жеребости 64 дня. Во второй, при шести взятиях крови - у группы кобыл с более высокой активностью гормона: минимальное значение титра гонадотропина на первом взятии крови 39 ИЕ/мл, максимальное 278 ИЕ/мл на сроке 71-й день беременности или 4-ое взятие.

График I

Сравнительная оценка применения биологической пробы и метода ИФА для диагностики сывороточного гонадотропина жеребых кобыл

[ Биопроба 5 кр.вз. ИФА 5 кр.вз ■"-Биопроба 6 кр.ва. — ИФА 6 кр.вз. |

Кроме вышеприведенных показателей динамики накопления гонадотропина, нами был проведен сравнительный анализ двух методов определения гонадотропина в сыворотке крови жеребых кобыл в тех же группах, который представлен на графике 1.

Общая разница по всем взятиям крови в двух группах между биологической пробой и иммуноферментным анализом составляет 12% в сторону завышения показаний ИФА.

3.7. Изучение гематологических показателей у кобыл — продуцентов ГСЖК в период эксплуатации

С целью изучения гематологических показателей была подобрана группа из 10 кобыл - доноров, разного возраста и живой массы. От каждой кобылы было проведено по шесть взятий крови в объеме 7 литров за одно крововзятие, с периодичностью в семь дней. После каждого взятия крови определялся средний гематологический показатель. Изучались следующие параметры: содержание гемоглобина, содержание эритроцитов, лейкоцитов, определялась лейкоцитарная формула (табл. 9).

Все гематологические параметры крови после первых трех взятий находятся в пределах физиологической нормы, причем содержание количества эритроцитов и гемоглобина достоверно на этапе третьего взятия крови (Г<0,02 и Р<0,01 соответственно). Однако общая гематологическая динамика имеет тенденцию к снижению основных показателей. Так, содержание гемоглобина снизилось на 1,93 г%, эритроцитов на 800 тыс. кровяных телец, лейкоцитов на 0,45 тыс. В лейкоцитарной формуле количество базофилов, эозинофилов, лимфоцитов, моноцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов остается на одном уровне, за исключением юных нейтрофилов, количество которых по сравнению с первым взятием крови увеличилось на 6%, что может свидетельствовать о включении компенсаторных механизмов в организме, связанных с потерей крови.

а ■а х

и &

о

я ж

Т)

л о о ю

< < 0 я - Кратность взятия крови

5Р О чо оо 00 # о То оч 10,94±0,37 оз I оо * и> 1 1 41 Содержание гемоглобина, г/%

^г» н- 00 „о £ ОО £ С\ чо V о £ * * ЧО оо КО "ы Р О ы Эритроциты, млн.

ъ 00 н-„© ¡3 "чо но к> 00 Хл * о * оо ОО 8? о ЧО с но чо ЧО гг о ЧО Лейкоциты, тыс.

"чо VI г; О 00 о Ъч о ОЧ базофилы Лейкоцитарная формула (%)

Л 4* 1л о 1л 1Л "чо (_Л Ъч эозинофилы

|ч> О оо с* То о "чо о "(О 1 £ ■ ( Нейтрофилы 1

У Оо 1л . ¿о 1о ы 41 "(О палочка-ядерные

ил Оч 1*. и> ЧО 41 и» "ю 41 VI VI ■ь ОО "■о сегменто-| ядерные

и> М ш ш 1о ил оч VI Оч ил 41 1а 41 Лимфоциты

Ю О К) оо и» и "о К) о е з: 3 О я ® Ко

По сравнению с третьим взятием крови на шестом происходит снижение гемоглобина на 4,11г%, эритроцитов на 1,7 млн., лейкоцитов на 1,48 тыс., а в сравнении с первым эта разница еще более очевидней, для гемоглобина составляет 6,04г%, эритроцитов 2,5 млн., лейкоцитов 1,93 тыс -на четвертом взятии крови эта разница достоверна (Р<0,02). В лейкоформуле также характерна тенденция дальнейшего увеличения доли юных нейтрофилов, которая составляет 17% на шестом крововзятии, против 0,2% на первом, что на 16,8% больше. Отмечается также увеличение процентной доли палочкоядерных нейтрофилов и базофилов на 2,2% и 1,3% соответственно, при относительном постоянном содержании моноцитов и незначительном снижении эозинофилов (1,2%) и лимфоцитов (6,9%).

3.8. Применение сурфагона с целью повышения активности гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл

Учитывая фармакодинамическое действие сурфагона как гонадотропин - рилизинг гормона, стимулирующего выделение гонадотропинов в кровь, нами было решено использовать его для искусственного увеличения концентрации сывороточного гонадотропина за счет гипофизарного, путем экзогенного воздействия указанным гормоном.

С этой целью было подобрано две группы кобыл по 10 голов в каждой группе. Животным первой группы за 30 минут до взятия крови внутримышечно инъецировали сурфагон в дозе 50 мкг (опыт). Животным второй группы, в объеме 10 мл, также внутримышечно за 30 минут перед крововзятием вводили физиологический раствор (контроль). У животных обеих групп до инъекций физиологического раствора и сурфагона были взяты пробы крови с целью определения предварительной активности сывороточного гонадотропина методом ИФА. Окончательное определение активности гормона фиксировалось также методом ИФА после основного взятия крови через 30 минут после инъекции растворов (табл. 10).

Таблица 10

Эффективность применения сурфагона для искусственного повышения активности гонадотропина

№№ Количество Активность гонадотропина, ИЕ/мл

П.п Группа голов до введения после введения

1 Опыт 10 77,3± 10,48 82,4±10,74

2 Контроль 10 64,8± 11,02 65,4±11,33

Из приведенной таблицы 11 видно, что увеличение активности гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл при применении сурфагона составляет 5,1 ИЕ/мл, при этом в контроле этот показатель составляет 0,6 ИЕ/мл, что на 4,5 ИЕ/мл меньше, чем при экзогенном воздействии гонадотропин - рилизинг гормона.

3.9. Экономическая эффективность повышения гонадотропной активности СЖК

На примере использования гонадотропин — рилизинг гормона (сурфагона) эффективность методов повышения гонадотропной активности сыворотки крови у лошадей определяется как стоимость выхода дополнительной продукции полученной в результате применения этого препарата, за вычетом затрат на его приобретение и обработку животных.

Для определения общей гонадотропной активности СЖК, полученной за весь период взятия крови от одного донора, необходимо учитывать общее количество полученной сыворотки и ее среднюю гонадотропную активность. Средний выход сыворотки за период взятия крови от животных всех групп составляет 69,5%, при объеме 7 литров взятой крови, а ее средняя гонадотропная активность - 68 ИЕ/мл при применении испытуемой композиции 73,1 ИЕ, что на 5,1 ед. больше чем в контроле. Если учесть, что от кобылы производится в среднем по пять взятий крови, а средний выход от одного взятия крови составляет 4,8 литров сыворотки, то за полный период

взятия крови будет получено около 5,0 х 4,8 = 24,3 литра сыворотки, общая гонадотропная активность которой составит 24300 х 73,1 = 1776330 ИЕ. Без обработки лошадей гонадотропная активность их сыворотки составляет 68 ИЕ/мл, а суммарная активность полученного от них гормона 24300 х 68 = 1652400 ИЕ. Разница между общим количеством гонадотропной активности по группам животных обработанных сурфагоном составляет 1776330 — 1652400 = 123930 ИЕ. При стоимости одной тысячи единиц активности гонадотропина 28 рублей общая сумма полученной сыворотки составит 28 х 123,93 = 3469,2 рубля.

Общая стоимость затрат на приобретение и обработку им одного животного составляет 133,5 рублей.

Таким образом, применение предложенного метода повышения гонадотропной активности сыворотки крови у кобыл - продуцентов ГСЖК позволяет получить дополнительную прибыль в размере 3469,2 - 133,5 = 3335,7 рублей.

4. ВЫВОДЫ

1. Активность гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл возрастает с 39 до 71 дня жеребости с максимальным пиком активности у отдельного донора в 278 ИЕ/мл определенной биопробой на крысах, с последующим снижением до уровня 34 ИЕ/мл и ниже на сроке в 90 и более дней беременности.

2. С целью преодоления сезонной гипофункции и коррекции воспроизводительных качеств в переходный период между зимней анофродезией и сезоном размножения для полноценного использования кобыл в качестве продуцентов ГСЖК, применение препаратов на основе сывороточного гонадотропина является целесообразным. Это подтверждается тем, что экзогенное воздействие препаратов этой группы позволило приблизить сезон регулярной половой цикличности у кобыл.

3. Более высокая гонадотропная активность сыворотки обуславливается интенсивным обменом веществ, который характерен для особей с небольшой живой массой тела, а также для молодых животных. Оптимальный возраст использования кобыл в качестве продуцентов ГСЖК от 3 до 8 лет с живой массой тела 300 — 400 кг.

4. Генотип жеребцов оказывает значительное влияние на гонадотропную активность сыворотки крови кобыл. От беспородного жеребца Орлик у 4-х кобыл имелась средняя активность СЖК 45 ИЕ/мл, а от жеребцов русской рысистой породы (27 кобыл) средняя активность СЖК у покрытых ими кобыл колебалась от 65,2 до 84,5 ИЕ/мл. Самая высокая активность установлена от кобыл, покрытых жеребцом Малыш башкирской породы. Активность составила 96 ИЕ/мл (Р<0,05).

5. Гонадотропная активность сыворотки зависит также от фактора сезона случки, то есть взятие крови должно осуществляться в период наибольшей продолжительности светового дня, когда отрицательное действие эпифиза и секретируемого им мелатонина на выработку сывороточного гонадотропина минимально.

6. При более интенсивной эксплуатации кобыл, то есть с увеличением кратности взятия крови (до шести) происходит изменение гематологической картины в сторону снижения гемоглобина на б,04г%, эритроцитов на 2,5 млн., лейкоцитов на 1,93 тыс., снижения форменных элементов крови при сдвиге лейкоцитарной формулы в сторону юных и палочкоядерных нейтрофилов. В связи с указанным рекомендуется использовать кобыл в качестве доноров не более 4 — 5 раз.

7. При определении активности сывороточного гонадотропина биологическим методом на крысах и иммуноферментным анализом установлена разница в показателях биологической активности, которая составила 12%, причем в сторону завышения данных по ИФА.

8. С целью повышения гонадотропной активности целесообразно использовать сурфагон в дозе 50 мкг на голову внутримышечно, однократно за 10-20 минут до взятия крови. При этом активность гонадотропина сыворотки увеличивается по сравнению с контролем в среднем на 4,5 ИЕ/мл, а экономическая эффективность от использования сурфагона за пять крововзятий от одной кобылы составляет 3335,7 рублей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

С целью оптимизации производства сыворотки крови и повышения ее гонадотропной активности у кобыл — продуцентов ГСЖК рекомендуется:

1. Для повышения экономической эффективности заготовки ГСЖК использовать иммуноферментный метод определения биологической активности сывороточного гонадотропина.

2. Отбор крови для получения сыворотки у жеребых кобыл башкирской породы проводить в период 45 - 90 дней жеребости, когда активность сывороточного гонадотропина максимальна.

3. Для повышения биологической активности сывороточного гонадотропина, кобылам - продуцентам ГСЖК перед началом отбора крови, однократное внутримышечное введение синтетического аналога гонадотропин - рилизинг гормона сурфагона в дозе 10 мл (50мкг).

Список работ опубликованных по теме диссертации:

1. Логинов, P.O. Иммуноферментный метод определения гонадотропной активности сыворотки жеребых кобыл / P.O. Логинов, Ю.Д. Клинский, В.Е. Калужский, A.M. Чомаев //Материалы III научно-практической конференции. Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России / ВНИИ животноводства.-Дубровицы, 2005,- Т.2.- С.238-239.

2. Логинов, P.O. Влияние генотипа жеребца на биологическую активность гонадотропина сыворотки жеребых кобыл / P.O. Логинов, Ю.Д. Клинский, A.M. Чомаев //Материалы III научно-практической конференции. Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России / ВНИИ животноводства.- Дубровицы, 2005,- Т.2.-С.239-240.

3. Калужский В.Е. Результаты работы башкирмосагрогена конефермы (УФА) на получение сыворотки жеребых кобыл / В.Е. Калужский, P.O. Логинов, Ю.Д. Клинский, A.M. Чомаев //Материалы III научно-практической конференции. Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России / ВНИИ животноводства.- Дубровицы, 2005,- Т.2.- С.242-243.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 26.04.06 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,5 Печать авторефератов (495) 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Логинов, Роман Олегович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль гонадотропных гормонов в нейрогуморальной регуляции функции воспроизводства у сельскохозяйственных животных.

1.2. Гонадотропин сыворотки жеребых кобыл.

1.2.1. Химический состав.

1.2.2. Биологические свойства.

1.3. Методы определения гонадотропина СЖК в биологических

4, жидкостях и их сравнительная оценка.

1.3.1. Общие принципы метода тИФА.

1.3.1.1. Определение антител.

1.3.1.2. Определение антигенов.

1.4. Значение сывороточного гонадотропина в период ранней жеребости у кобыл.

1.5. Опыт применения препаратов на основе ГСЖК в животноводстве и ветеринарии. ф 1.5.1. Применение ГСЖК для повышения мясной продуктивности.

1.5.2. Гормональное воздействие и получение дополнительного приплода.

1.5.3. Применение препаратов ГСЖК с целью синхронизации охоты и преодоления некоторых функциональных расстройств репродуктивной системы самок.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Условия проведения опыта.

2.2. Краткая характеристика лошадей башкирской породы. щ 2.3. Условия содержания кобыл - продуцентов.

2.4. Организация и проведение случной компании.

2.5. Взятие крови от кобыл - продуцентов ГСЖК.

2.6. Исследование крови.

2.6.1. Определение гонадотропной активности СЖК при помощи иммуноферментного анализа.

2.6.2. Определение гонадотропной активности СЖК с помощью биологической пробы на крысах.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Синхронизация охоты кобыл.

3.2. Влияние генотипа жеребца на биологическую активность гонадотропина сыворотки жеребых кобыл.

3.3. Влияние сезона случки на активность сывороточного ^ гонадотропина и период использования кобыл в качестве продуцентов ГСЖК.

3.4. Изучение активности гонадотропина сыворотки крови у кобыл разного возраста.

3.5. Изучение активности гонадотропина сыворотки крови в зависимости от массы тела животных.

3.6. Уровень гонадотропного гормона в сыворотке крови кобыл на различных стадиях жеребости. ц 3.7. Изучение гематологических показателей кобыл - продуцентов

ГСЖК в период эксплуатации.

3.8. Применение сурфагона с целью повышения активности гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл.

3.9. Экономическая эффективность повышения гонадотропной активности СЖК.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние различных факторов на биологическую активность гонадотропина сыворотки жеребых кобыл"

Актуальность темы. За последнее десятилетие в силу неблагоприятно сложившихся экономических условий производства в сельском хозяйстве, в нашей стране произошло значительное снижение численности поголовья в различных отраслях животноводства, что неблагоприятно отразилось на количестве выпускаемой продукции. Так по данным ЦСУ (на апрель 2004 г.) в последние три года ежегодно поголовье крупного рогатого скота сокращается на 500 - 700 тыс., свиней на 1млн голов. В данных обстоятельствах выход, наряду с повышением сохранности поголовья, следует искать в совершенствовании методов регуляции репродуктивной функции животных. Одним из них является использование гормональных препаратов на основе гонадотропина сыворотки жеребых кобыл (СЖК), который эффективно применяют с целью повышения многоплодия в овцеводстве, свиноводстве, звероводстве, мясном скотоводстве, а также с целью синхронизации охоты и борьбы с некоторыми видами функционального бесплодия у самок сельскохозяйственных животных. (М.И.Прокофьев, 1979; В.К.Копытин,1986;В.Е.Даровских,1990; A.M. Чомаев, Ю.Д. Клинский, 2004). Препарат СЖК содержит гонадотропный гормон, который при введении животному стимулирует функцию половых желез, вызывает развитие дополнительных фолликулов при полноценном половом цикле и регулирует его фазы при некоторых формах бесплодия.

Заготовка сыворотки жеребых кобыл осуществляется в период с 40-45 по 90-100 день жеребости, когда в ней содержится максимальное количество гонадотропных гормонов. Однако, вследствие не совершенных методов определения гонадотропной активности, а также достоверно не изученных факторов прямо или косвенно влияющих на активность гонадотропина сыворотки, вопрос рационального использования животных реципиентов, улучшения качества, а также увеличения производства СЖК остается открытым, что в конечном итоге снижает экономическую эффективность использования препаратов изготовленных на основе СЖК. Все это требует более детального изучения причин влияющих на гонадотропную активность СЖК, а также совершенствования старых и разработки новых методов определения гонадотропина в сыворотке крови жеребых кобыл.

Цель и задачи исследований. Учитывая вышеизложенное, мы поставили перед собой цель - изучение факторов влияющих на биологическое качество получаемой СЖК и дальнейшее совершенствование технологии производства гонадотропного гормона.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить гонадотропную активность сыворотки крови жеребых кобыл в зависимости от индивидуальных особенностей продуцентов.

2.Изучить влияние условий содержания продуцентов на биологическое качество СЖК.

3.Определить оптимальные параметры эксплуатации кобыл-доноров.

4.Изыскать наиболее оптимальные и экономически целесообразные методы определения гонадотропной активности СЖК.

5.Провести анализ полученных данных и сформулировать выводы и практические предложения.

Научная новизна исследований. Впервые в качестве продуцентов ГСЖК использованы кобылки двухлетнего возраста. С целью преодоления сезонной гипофункции яичников у кобыл охота синхронизировалась с использованием гонадотропин содержащих препаратов. Для массовой заготовки СЖК в производственных условиях предложен и внедрен метод иммуноферментной диагностики активности гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл, а также проведена его сравнительная оценка с биологическим методом определения активности СЖК. Дано I технологическое обоснование выбора наиболее приемлемых продуцентов гонадотропина в условиях республики Башкортостан.

Практическая значимость работы. В условиях производства СЖК внедрен метод определения гонадотропной активности с наименьшими экономическими затратами и наибольшей достоверностью, что позволяет значительно повысить качество производимого гонадотропина из сыворотки жеребых кобыл.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и одобрены на ученых советах Всероссийского государственного НИИ животноводства (2005 - 2006); на объединенной конференции отдела эндокринологии, селекции молочного скота, лабораторий генетики животных и биохимии (2006). Материалы диссертации были представлены на III Международной научно-практической конференции «Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России», Дубровицы (2005).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 3 работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 100 страницах компьютерной верстки, содержит 11 таблиц, 1 схему, 1 гистограмму, 2 графика. Структурно включает введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, список литературы, включающий 183 источника, из них 133 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Логинов, Роман Олегович

выводы

1. Активность гонадотропина сыворотки крови жеребых кобыл возрастает с 39 до 71 дня жеребости с максимальным пиком активности у отдельного донора в 278 ИЕ/мл определенной биопробой на крысах, с последующим снижением до уровня 34 ИЕ/мл и ниже на сроке в 90 и более дней беременности.

2. С целью преодоления сезонной гипофункции и коррекции воспроизводительных качеств в переходный период между зимней анофродезией и сезоном размножения для полноценного использования кобыл в качестве продуцентов ГСЖК, применение препаратов на основе сывороточного гонадотропина является целесообразным. Это подтверждается тем, что экзогенное воздействие препаратов этой группы позволило приблизить сезон регулярной половой цикличности у кобыл.

3. Более высокая гонадотропная активность сыворотки обуславливается интенсивным обменом веществ, который характерен для особей с небольшой живой массой тела, а также для молодых животных. Оптимальный возраст использования кобыл в качестве продуцентов ГСЖК от 3 до 8 лет с живой массой тела 300 - 400 кг.

4. Генотип жеребцов оказывает значительное влияние на гонадотропную активность сыворотки крови кобыл. От беспородного жеребца Орлик у 4-х кобыл имелась средняя активность СЖК 45 ИЕ/мл, а от жеребцов русской рысистой породы (27 кобыл) средняя активность СЖК у покрытых ими кобыл колебалась от 65,2 до 84,5 ИЕ/мл. Самая высокая активность установлена от кобыл, покрытых жеребцом Малыш башкирской породы. Активность составила 96 ИЕ/мл (Р<0,05).

5. Гонадотропная активность сыворотки зависит также от фактора сезона случки, то есть взятие крови должно осуществляться в период наибольшей продолжительности светового дня, когда отрицательное действие эпифиза и секретируемого им мелатонина на выработку сывороточного гонадотропина минимально.

6. При более интенсивной эксплуатации кобыл, то есть с увеличением кратности взятия крови (до шести) происходит изменение гематологической картины в сторону снижения гемоглобина на 6,04г%, эритроцитов на 2,5 млн., лейкоцитов на 1,93 тыс., снижения форменных элементов крови при сдвиге лейкоцитарной формулы в сторону юных и палочкоядерных нейтрофилов. В связи с указанным рекомендуется использовать кобыл в качестве доноров не более 4-5 раз.

7. При определении активности сывороточного гонадотропина биологическим методом на крысах и иммуноферментным анализом установлена разница в показателях биологической активности, которая составила 12%, причем в сторону завышения данных по ИФА.

8. С целью повышения гонадотропной активности целесообразно использовать сурфагон в дозе 50 мкг на голову внутримышечно, однократно за 10-20 минут до взятия крови. При этом активность гонадотропина сыворотки увеличивается по сравнению с контролем в среднем на 4,5 ИЕ/мл, а экономическая эффективность от использования сурфагона за пять крововзятий от одной кобылы составляет 3335,7 рублей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

С целью оптимизации производства сыворотки крови и повышения ее гонадотропной активности у кобыл - продуцентов ГСЖК рекомендуется:

1. Для повышения экономической эффективности заготовки ГСЖК использовать иммуноферментный метод определения биологической активности сывороточного гонадотропина.

2. Отбор крови для получения сыворотки у жеребых кобыл башкирской породы проводить в период 45 - 90 дней жеребости, когда активность сывороточного гонадотропина максимальна.

3. Для повышения биологической активности сывороточного гонадотропина, кобылам - продуцентам ГСЖК перед началом отбора крови, однократное внутримышечное введение синтетического аналога гонадотропин - рилизинг гормона сурфагона в дозе 10 мл (50мкг).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Логинов, Роман Олегович, Дубровицы

1. Абугалиев, P.M. Опыт производства и применения препаратов СЖК в животноводстве. Алма-Ата, 1958,-134с.

2. Алешин, Б.В. О путях и способах осуществления регуляторных влияний гипоталамуса на переднюю долю гипофиза //Успехи современной биологии.- I960.- Т.50.- Вып.2.- С. 132-135.

3. Арутюнян, H.A. Морфологические характеристики реакций матки неонатально андрогенизированных крыс на введение половых стероидов / H.A. Арутюнян, О.Н. Савченко, Е.В. Секретарева //Проблемы эндокринологии.-1987.- Т.ЗЗ.-№6.-С.59-61.

4. Бахитов, К.И. Проявление анэструса у новотельных коров разной продуктивности //Зоотехния. 1998. - №9. - С. 28-30.

5. Вареников, М.В. / М.В. Вареников, A.M. Чомаев, В.М. Артюх Применение различных прогестагенов при гипофункции яичников у первотелок //Зоотехния. 2002.- №8. - С. 25-27.

6. Вареников, М.В. Комплексное применение диамола с ГСЖК релизинг -гормоном при гипофункции яичников у коров первотелок / М.В. Вареников, A.M. Чомаев, В.А. Анзоров // Био.-2003.- №7.- С.9

7. Власов, С.А. Содержание белков в крови коров при гипофункции яичников и воздействие СЖК //Ветеринария. 1991. - №7. - С.52-54.

8. Волосков, П.А. Применение СЖК в скотоводстве //Мясное и молочное скотоводство.-1960.-№8.-С.45-47.

9. Воробьев, H.H. Оплодотворяемость и показатели крови у коров с гипофункцией яичников //Ветеринария. 1980. - №4. - С.43-44.

10. Вундер, В.А. Процессы саморегуляции в эндокринной системе,- М.: Медицина. 1965.- 248с.

11. Гончаров, В.П. Профилактика бесплодия лошадей,- М.: Россельхозиздат, 1984.- 157с.

12. Горев, Э.Л. Значение лютеинизирующего фактора в гормональных свойствах СЖК //Ветеринария.-1966.-№5.-С. 17-18.

13. Егоров, A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова.- М.: Высш.шк.-1991.- 288с.

14. Журбенко, A.M. Гормоны и продуктивность животных. Киев: Урожай, 1983.-128с.

15. Завадовский, Б.М. Зоотехническая эндокринология в СССР //Сборник «Проблемы зоотехнической экспериментальной эндокринологии». -1934.-Т.1.-С. 145-147.

16. Завадовский, М.М. Принцип «плюс-минус» взаимодействия //Труды по динамике развития.- М.-Л., 1935.- Т.9.- С.47-51.

17. Клинский Ю.Д. Биологические свойства гонадотропина сыворотки крови жеребых их применение в каракулеводстве // авт. дис.док. биол. наук. Дубровицы.-1971.- 36с.

18. Клинский, Ю.Д. К вопросу о гормональной активности СЖК //Овцеводство. 1967. - №6. - С.24-27.

19. Клинский, Ю.Д. Методические рекомендации по применению диамола в комплексе с другими биологически активными веществами для активации половой функции коров при глубокой гипофункции яичников / Ю.Д. Клинский, A.M. Чомаев.- Дубровицы, 1999 9с.

20. Клинский, Ю.Д. Морфологические изменения в яичниках и матки жеребых кобыл в период циркуляции в крови гонадотропина //Морфологические исследования в практике здравоохранения и животноводства.- М., 1984.- С. 130-133.22,23,24,25,26