Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние кишечных нематод (параскарид, стронгилят) на актиномицеты пищеварительного канала лошадей

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Влияние кишечных нематод (параскарид, стронгилят) на актиномицеты пищеварительного канала лошадей"

ХХЛШСКЛ Я АКАДЕМИ Я СЕЛЬСКОХОЗЯПСТВЕ!

РОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ ИМ. К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

^Ишимбасва Римivia Сахиулловна

Влияние кишечных нематод (иараскарид, стронгилят) на актином ицеты пищеварительного канала лошадей

Специальность: 03.00.19 - паразитология,

гельминтология

16.00.03 - ветеринарная микробиология. вирусология, эпизоотология. микология и иммунология

Автореферат ¡иссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

i !

Работа выполнена в Московской государственной академ теринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябн во Всероссийском научно-исследовательском институте лвотноводства.

Научные руководители: доктор ветеринарных наук,

профессор Акбаев М.Ш.; кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник Будников В.А.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор Васильков Г. В. (ВИЗ] кандидат ветеринарных наук, Саркисов К.А. (ВГНКИ).

Ведущая организация: Московская государственная акаде*

прикладной биотехнологии.

З&щита^циссертации состоится . 1995 г.

. . часов на заседании диссертационного совета 020.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институт« льминтологии имени К.И.Скрябина (ВИГИС).

Адрес: 117259, Москва, Б.Черемушкинская ул., 28.

диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС.

Автореферат разослан ■ .....1995

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор биологических наук Бережко В.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. У лошадей ( Equídae ).зарегистрировано сеышо 90 видов гельминтов. Среди них наиболее многочисленную и разнообразную группу составляют нематоды подотрядов Ascaridata и Strongylata, паразитирующие в кишечнике лошадей.

Несмотря на успехи, достигнутые а борьбе с важнейшими инвазиями лошадей, последние до сих пор наносят значительные экономические потери коневодству.

Многие ученце, определяя роль гельминтов в патологии млекопитающих, птиц и других животных, отмечают, что она характеризуется рядом факторов: механическим, аллергическим,трофическим,токсическим, а также изменением соотношений полезной и патогенной микрофлоры. ( К.И.Скрябин, 1925', М.И.Кузнецов, 1972; М.Ш.Акбаез, 1986; А.Г.Воробушков, 1989 и др.).

В последние годы стало и^. лестно, что наряду с предстоятелями полезной микрофлоры пищеварительного канала кивотных, актино-мидеты ( в иностранной литературе " стрептомицеты ") являются ваянекгоми продуцентами ттзмшоз группы В ( В.А. Будников, I860; С.Б. Коган, 1973; С.Ы. Гасэясза, 1974; О.И.Русович, 1990 и др.), антибиотических веществ, лкпкдсв, ферментов и других малоизученных биологически активных веществ ( Н.А.Красиль никое-, 1965; Л.С. Ксжеакна, 1977; O.A. Галатенко, 19-33).

В настоящее время очень мало работ по изучена микрофлоры желудочно-кишечного тракта лошадей (Alexander F. ,1969; Davies KL, 1971,1979,1983; 2ke, Nuruki, Imai. Ishii, 1982), вообще отсутствуют данные о влиянии кишечных нематод, паразитирующих у лошадей, на микрофлору, в том числе и на аютшомицеты.

Учитывая особенности пищеварения лошади (R.Wolter, 1982), основной синтез и всасывание витаминов группы В н толстом ¡ошейнике (Я.И.Слабицкий, Частов, 1982; Coates М., S.Ford, 1957) и склонность жеребят к копрофзгии ( вторичный пассаж и всасывание витаминов группы В ), кгучоние данной проблемы является актуальным и сыграгт большую роль в разработке соответствующей патогенетической терапии кишечных нематодозов лошадей.

Кроме того для борьбы с гельминтоза*«» необходимо изыскание новых эффективных препаратов, биологически и экологически безвредных. Поэтому исследование лярвицидных свойств различных культур актиномицетов из пищеварительного канала животных является очень важным для решения данной проблемы.

Дель исследований - изучение количественного состава и свойств актиномицетов пищеварительного канала лошадей при кишечных нематодозах (параскаридозе, стронгилятозах). Для достижения указанной цели мы поставили перед собой задачи изучить:

- количественный уровень актиномицетов в содержимом прямей кишки лошадей в норме и при кишечных нематодозах (параскаридозе, стронгилятозах);

- количественный состав актиномицетов по отделам желудочно-кишечного канала зараженных пар аскаридами и стронгилятами лошадей;

' - морфологию, культуралькые, антибиотические, витаминообра-зукицие свойства актиномицетов пищеварительного канала лошадей, ин-вазирсванных кишечными нематодами (параскаридами, стронгилятами);.

- влияние актиномицетов на инвазионные личинки стронгилят;

- уровень цианокобаламина и пепсиногена в крови лошадей, ин-вазированных возбудителями кишечных немзтодозев;

- эффективность применения антгельминтиксв : ивомека мелкс-гранулированного, галбазена , пиаветрина , двойного пиперазина против параскаридоза и стронгилятогов лошадей.

Научная новизна. Изучены количественный состав и свойства (морфологические,культуральные, антибиотические, витаминообразую-щие) актиномицетов пищеварительного канала лошадей в норме и при кишечных нематодозах (параскаридозе, стронгилятозах).

Установлены сроки и динамика заселения актиномицетами пищеварительного канала новорожденных жеребят в условиях стойло-во-пастбищного содержания.

Получены данные о содержании витамина Bis и пепсиногена в крови лошадей, зараженных кишечными нематодами. у

Изучено влияние биологически активных веществ .актиномицетов на инвазионные личинки стронгилят лошадей/

Изучена эффективность применения ивомека мелкогранулирован-ного, валбазена, пиаветрина и двойного пиперазина при кишечных нематодозах лошадей и влияние антгельминтиков на количественный состав актиномицетов пищеварительного канала.

Практическая ценность. В целях более глубокого раскрытия патогенеза при кишечных нематодозах ( параскаридозе и стронгилятозах ) нами изучено влияние параскарид и стронгилят на количествен- -

ныи состав и свойства (синтез цианокобаламина, антибиотических, лярвицидных веществ) актиномицетов пищеварительного канала.

Усовершенствована методика определения количественного уровня актиномицетов при исследовании содержимого пищеварительного канала лошадей.

На основании экспериментальных, и производственных опытов, проведенных по испытанию антгельминтиков дани рекомендации по применению ивомека мелкогранулированного ( разработка лаборатории арахнозов ВНИКАВ) в доге 0,2 г/кг живой массы (0,2 мг/кг по ДВ), двойного пиперазина ( высюпоочищенного пиперазина гексагидрата) в доге 0,1 г/кг массы тела, пиаветрина. Валбазен (новая препаративная форма альбендазола, содержащая 2,5% действующего вещества) не рекомендуется нами для применения в связи с низкой эффективностью против стронгилятогов лошадей.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертации доложены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотруднюсов и аспирантов Московской государственной академии ветеринарией медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина (1992,1993).

На защиту выносятся следующие вопросы:

1. Результаты изучения количественного состава и свойств актиномицетов пищеварительного канала лсшдей, инвазированных па-раскаридами и стронгилятами.

2. Результаты изучения содержания витамина Biß и пепсино-гена в крови лошадей, зараженных килечными нематодами.

3. Результаты изучения эффективности применения антгельминтиков (ивомека мелкогранулированного, валбазена, пиаветрина и двойного пиперазина) против параскаридоэа и стронгилятозов лошадей.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 169 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, (атериалов и методов, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений. Список литературы содержит 236 источников, из них 78 иностранных. Диссертация иллюстрирована 23 таблицами и 21 рисунком.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы 2.1.1. Характеристика опытных животных

Изучение количественного уровня и сзойств актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей в норме и при кишечных нематодо-8ах проводили на 6 жеребятах и 24 лошадях в возрасте 3-17 лет преимущественно рысистых пород, принадлежащих Московскому конза-воду N 1 (стойлово-пастбищное содержание) и Еиварио МГАВМиБ, в той числе - б животных, инвазкрованных параскаридами и стронгшш-тами и 1Б-только строгилятами,контролем служили 4 лошади. Изучение количественного состава актиномицетов по отделам пищеварительного канала лошадей осуществляли на мясокомбинате г. Егорьевска при вскрытии 17 лошадей 3-4 летнего возраста.Из них 6 животных были инвазированы параскаридами и стронгилятами. 5- только стронгиляташ.В контрольной группе было 6 лошадей.

Эффективность применения антгельминтиков устанавливали на вараженкых нематодами лошадях 3-4 летнего возраста (п»24), при-надлезшакх конно-спортивной баае "Измайлово" и павильону "Коневодство" Всероссийского выставочного центра. Контролем слукили 6 йивотных, аналогичного возраста и условий содержания.

2.1.2. Гельминтологические методы исследований

Для постановки диагноза на кишечные нематодо8ы лошадей и определения экстенсивности и интенсивности инвазий использовали следующие методы: гельминтоскопию, гельминтоовокопроскопию по ме- , тодике Кофоида - Барбера в модификации <йоллеборна (1927), количественные гельминтоовоскопические исследования стандартизированным методом Фюдлеборна в соответствии с методикой Н. В.Демидова. .

Инвазионные личинки стронгилят лошадей получали" с помощью метода культивирования личинок стронгилят ¿з инвазионной стадии и" методики Бермана.

2.1.3. Микробиологические методы исследований

Исследования проводили в лаборатории микробиологии Всероссийского научно-исследовательского института животноводства.

Количественный уровень актиномицетов в содержимом различных отделов пищеварительного канала (желудка, двенадцатиперстной, тощей. слепой, большой и «алой ободочной и прямой кшок) изучали с помощью общепринятых методик. Для выделения и подсчета колоний актиномицетов применяли селективные органические среды: овсяный агар(ВНИИА), среду Карвелла. Посевы инкубировали при 28°С в течение 5-6 суток.

Колонии актиномицетов, отличающиеся по форме, размеру, окраске воздушного и субстратного мицелия пересевали в мясопептон-ный бульон с цель» получения -»истых культур.

Выделенные культуры актиномицетов идентифицировали до рода с последующим разделением на серии и секции согласно Определителю актиномицетов Г.Ф- Гаузе, Т.П.-Преображенской, М.А. Свешниковой и др. (1983), а также с учетом Руководства по систематике микроорганизмов Д.Х. Берги (1989).

Морфологические признаки актиномицетов кзучагл путем выращивания их на минеральном агаре 1 (Гаузе, 1957).Характер споронос-цев определяли у взрослых культур на 7-14-е сутки роста.

Культуральные свойства актиномицетов (окраска воздушного и субстратного мицелия, наличие растворили пигментов) изучали согласно методикам Г.Ф. Гаузе, т.п. Преображенской, м.А. Свешико-вой. Л.П. Тереховой (1983). Определение цвета проводили на 7, 14,. 21:с сутки роста культур при 28°С с помощью шкалы цветов A.C. Вондарцева (1954). С этой целью использовали следующие среды: минеральный агар 1 (Гаузе, 1957), овсяный агар (S.Waksman, 1961), органический агар 2 (Гаузе, 1957), глюкозо-нитратный агар СР-1 (Красильников. 1950), пептонно-дрожжевой агар (E.B. Shlrllng, 1966).

Определение конфигурации диаминопимелиновой.кислоты (ДАПК) в клеточной стенке культур актиномицетов проводили методом восходящей тонкослойной хроматографии в целлюлозном- слое (T.Hasega-wa,l983) в модификации И.В. Алферовой, Л.П. Тереховой. Х.Праузер (1989).

- б -

Антибиотические свойства актиномицетов изучали по методикам Н.А. Красильникова (1950, 1058) и Г.Ф. Гаузе (1058.1959).

Способность культур актиномицетов синтезировать витамин В12 определяли при помощи микробиологического чашечного метода, предложенного С.М. Чайковской. Е.М. Дружининой (1957), с использованием витаминоэависимого тест-штамыа Escherichia coll 113-3.

Уровень витамина В12 в сыворотке крови лошадей изучали микробиологическим ускоренным индикаторным методом (по Новикову, Фортушному, Шуляк. Генсеровской. 1967).

2.1.4. Гематологические методы исследований

Морфологические показатели крови изучали по общепринятым ме:-тодикам. Количество зозинофилов в 1 мкл крови определяли по методу Р. Дунгера (1969).

Содержание пепсиногеяа в плазме крови устанавливали с помощью методики В.Н. Туголукова (1965).

2.1.5. Изучение лярвицидных свойств актиномицетов

Влияние актиномицетов на инвазионные личинки стронгилят лошадей изучали при использовании экстрактов, летучих веществ актиномицетов и исследования колоний актиномицетов на гельминтофагию. При оценке пользовались тестом, паралича личинок (М. Taylor, К. Hunt, 1989).

Полученные в диссертации цифровые материалы обрабатывали статистически по методу Сгьюдента с использованием компьютерной программы Selec.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей в норме и при кишечных нематодозах (параскаридозе, стронгилятозах)

Микробиологические исследования содержимого прямой кишки ин-вазированных кишечными нематодами (параскаридами^ стронгйлятами) лошадей показали, что в зимние месяцы (16.12.92; 4.01; 1.02;

18.02.93) количество актиномицетов в среднем составляло при слабой интенсивности инвазий - 83,0 ± 6,9 тыс в 1 г.при средней-41,3 ± 14,8 тыс и при 'сильной - 14.9 ± 2,1 тыс, тогда как у контрольных животных этот показатель был 80,8 ± 9,8 тыс. Исследования в сезонной динамике выявили также достоверно низкое количество изучаемых микроорганизмов у животных с высокой степенью зараженности: весной (15.04; 22.04.93) соответственно 129,6 ± 8,9 тыс. 69.8 ± 8.6 тыс и 27.4 ± 4.3 тыс против 136,6 ± 10.2 тыс в контроле; летом (16.06; 1.07.93) - 140,0 ± 12,2 тыс, 78,5 ± 4,9 тыс и 32,6 ± 3,3 тыс против 163,2 ± 5,2 тыс в контроле; осенью (28.09; 27.10; 4.11; 24.11.92) - 90,6 ± 1,9 тыс, 62.2 ± 15,7 ТЫС и 20,5 ± 5,2 тыс против 112,7 ± 7.8 тыс в контроле.

Количественный уровень актинешщетов. как у инвазирозанкнх, так и у свободных от гельминтоз лошадей, в стойловый перк д содержания был и 1,8 - 2.2 раза (Р<0.001) ниже, чем в пастбющый севЬн. ■ •••

достоверной разницы мваот количественным уровне«« актиномицетов у яивотиих, инваэиревгкных тальке стройгчиятпми и при смешанной инвазии параскаридамк и стронгидатами ке зарегистрировано; в *ии«н:е месяцу этот показатель составил соответственно 35,2 ± 3,1 тыс и 36,6 ±2.3 тыс в 1 г содержимого прямой кишки , летом -53,3 ± 4.9 тыс и 49,5 г 4,6 тыс (результаты по группам средне- и сильноинвазированных животных).

2.2.2. Сезоино-возрастная динамика колтества актиномицетов в содержимом прямой кишки жеребят

Изучение количественного уровня актиномицетов в содержимом поямой кишки жеребят в возрастном аспекте показало, что впервыз колонии в посевах содержимого прямой кишки были обнаружены у двухсуточных жеребят (март, 1993)- 15.5 ± 1,5 тыс в г. Количество актиномицетг ^ достигало максимума в среднем в возрасте 10 суток (1320.0 ± 21.0 тыс)Г Затем количественный уровень микроорганизмов снижался до 1-2-месячного возраста (72.5 ± 4.2 тыс), стабилизируясь в возрасте 5-6 месяцев (170,2 ± 5,8 тыс) после отъема животных при пастбищном содержании.

Таким образом, заселение актиномицетами пищеварительного капала жеребят начинается сразу после рождения. В дальнейшем по ые-

ре роста и развития животного происходит изменение количественного уровня этих микроорганизмов. на который оказывает влияние характер питания и условия содержания животных.

2.2.3. Количественные показатели актиномицетов по отделам пищеварительного канала здоровых и естественно зараженных кишечными нематодами лошадей

В результате исследования проб, взятых из различных отделов пищеварительного канала лошадей 3-4-летнего возраста, впервые установлен количественный состав актиномицетов в норме и при инвазии параскаридаыи и стронгилятами: при средней интенсивности инвазий параскаридами и стронгилятами и при сильной интенсивности инвазий стронгилятами в 1 г содержимого желудка количество микроорганизмов в среднем составляло соответственно 15,11 * 0,01 тыс и 12,28 ±1.07 тыс, что достоверно (Р<0,005) ниже контрольных показателей (24,33 ± 1,71 тыс), двенадцатиперстной - о.03 1 0,01 тыс и 0,04 ± 0,01 тыс против 0.15 ± 0,07 тыс в контроле; тощей -2,77 ± 0,77 тыс и 2,91 ± 1,01 тыс против 10,65 ± 0,91 тыс в контроле, слепой - 28,98 ± 5.12 тыс и 22,87 ± 4,28 тыс против 108,29 ± 8,64 тыс в контроле, большой ободочной - 53.32 ± 4,94 тыс и 35,15 ± 3,07 тыс против 135,63 ± 6,00 тыс в контроле, малой ободочной -72,30 ± 3,63 тыс и 36,63 * 2,30 тыс против 113,45 ± 5.03 тыс в контроле и в прямой кишке - 78,50 ± 4,96 тыс и 32,57 ± 3,31 тыс против 163,20 ± 5,16 тыс в контроле (Р<0,005).

Проведенные нами исследования показали, что несмотря на достоверное различие показателей количественного уровня актиномицетов у вараженных и свободных от кишечных нематод лошадей, распределение данных микроорганизмов по отделам желудочно-кишечного канала имело определенную закономерность: наименьшее количество актиномицетов отмечалось в двенадцатиперстной кишке, начиная с тощей кишки по направлению к толстому кишечнику количество микроорганизмов возрастало, достигая максимума в малой ободочной и прямой кишках.

2.2.4. Характеристика актиномицетов, выделенных из пищеварительного канала инвазированных параскаридами и стронгилятами лошадей

Основные свойства актиномицетов были изучены у 18? изолятов, выделенных из содержимого различных отделов пищеварительного канала лошадей, зараженных параскаридами и стронгилятами (144 культуру) к свсбсдая« от дани« гельминтов (43 культуру),

2.2.4.1. Морфология и культуральные свойства

Результаты изучения морфологических свойств и химического состава клеточной стенки (няличие LL-ДАПК) позволили нам все 187 культур отнести к семейству Streptomycetaceae, роду Streptomyces (согласно руководству по систематике микроорганизмов Л.Х.Берги,. 1<ЗЛР). Большинство культур (165) имели волнистые или пря»,о.'е спо-роносцы, у 22 культур пилочки спор оыли спиральные.

Исследование культуральных признаков (окраска воздушного и субстратного мицелия, наличие растворимых пигментов) показало, что большая часть выделенных культур (п - 113) принадлежала секции Cinereus сериям Achromogenes (n-31), Chrysomallus (п=32), Chranogertes (n=32), Aureus (n«8), Vloiaceus (п=10). Менее многочисленную группу составляли культуры секции Helvolo-flavus серии Helvolus (п-57). Остальные культуры относились к секции Albus сериям Albocoloratus (п»5) и Albus (п=4). секции Roseus серии Ruber (п=2) и по одной культуре сериям Lavendulae-roseus, Fr adlige к Rc seovlolaceus; секции Azureus (n*l) и секции Impirfectus (n-1) (согласно Определителю актиномицетов Г.Ф.Гаузе и др., 1983).

При сравнительной оценке состава актиномицетов, полученных от контрольных и инвазированных животных, выявлены изменения: при слабой интенсивности инвазий доля культур секции Cinereus составляла 44% против 62,82 в контроле, секции Helvolo-flavus 56% против 25.6% в контроле; при средней и сильной степени инвазий доля культур серии Achromogenes была меньше - соответственно 10,3% и 11,4Z, чем в контроле - 44,4%; а культур,' вырабатывающих яркие пигменты, больше: серии Chrysomallus - 34.6% и 34,4Z против 14.8% в контроле, серии Chromogenes - 37,9% и 31,4% против 25,9% в контроле и серии Aureus - 6,9% й 11,4% против 3.7% в контроле.

90Z культур обладали гешшстыы запахом и 102 - запахом мс лочной сыворотки.

2.2.4.2. Антибиотические свойства

Изучение антибиотических свойств 181 культуры актиномицето показало более выраженную активность у культур, полученных ив пи щеварительного канала слабоинвазированных кишечными нематодам лошадей, и в основном слабую антагонистическую активность пр средней и сильной интенсивности инвазий.

. Большее количество культур-антагонистов■было выделено в от ношении Staphylococcus aureus АТСС-21027 - соответственно 80% 58.7Х и 75.5Х против 70,7Х в контроле.Вас111us subtllls АТСС-663 - 80%, 58.7% и 51.IX против 78% в контроле и Saccharomyces cere vlslae G-381 - 73.32, 39.IX и 34.6Х против 73.12 в контроле. I отношении Micrococcus luteus АТСС-9341 ' было зарегистрирован* 53.32. 43.4Х и 20.3% актиномицетов-антагонистов иротив 53.6Х ] контроле. Micrococcus lysodelctlcus - 67.4%, 43,4% и 30.62 протш 46,6Х в контроле.

При изучении антагонистической активности против грамотрица-тельных бактерий Escherichia coll АТСС - 25922 среди актиномицетов контрольной группы антагонистов против кишечнбй палочки не выявлено, а при слабой и сильной интенсивности инвазий они составили соответственно 4.4% и 6.1% .

Большее число актиномицетов-антагонистов было получено oi слабоинвазированных лошадей 93,3% ( против 92,7% в контроле ), ие них сильной антагонистической активностью обладали 68,9% культур ( по сравнению с 58,82 в контроле ) и подавляли рост более половины (от 4 до 6) используемых тест-штаммов 64,4% против 51,22 в контроле.

При средней и сильной интенсивности инвазий зарегистрировано соответственно 87,02 и 85,7% культур антагонистов, с ярковыражен-ным антагонизмом - 52,22 и 53,02 и подавляющих рост более половины тест-микроорганизмов 28,3% и 22,4%.

2.2.4.3. Эитаминообразующне свойства

Результаты исследований витаминообразующей активности 108

иволятов актиномицетов позволили установить, что 107 культур, выделенные из пищеварительного канала инвазировгнных и. свободных от -кишечных нематод лошадей синтезировали витамин В12 в количестве от 2.09 до 8.18 нг/мл. 1 культура от сильноинвазированного животного не обладала этим свойством. В среднем количество витамина, синтезируемого актиноаицетаук от инвазировашшх животных - 4,S2 i 0,24 при слабой ИИ и 4,86 ±0,1 нг/мл при сильной Ш. достоверно не отличалось от контрольных показателей "- 5.20 ± 0,21 нг/мл.

Исследования взаимосвязи уровня витаминообразования с морфологией, культуральними и антибиотическими свойствами актиномицетов показали. что уровень биосинтеза Bi2 не зависит от принадлежности культуры к той или иной секции и серии и от проявления ею антибиотической активности.

2.2.4.4. Лярвицидные свойства

Изучение 22 культур актиномицетов, полученных от контрольных (10 культур) и инвазированных кияечньми нематодами лошадей ( 12 культур ), обладающих различными антибиотическими и вггаминооб-разующими свойствами, показало, что при испытании экстрактов актиномицетов ( полученных методом В.А.Будникова, 1955 ) 1 культура ( N 219 Roseus Fradlae ). выделенная от инваэированного животного, проявляла лярвицвдную активность: через 24 ч ( Т=37°С ) культивирования инвазионных личинок стронгилят б экстракте культуры большинство ( 80% ) личинок снижало подвижность по сравнен!® с контролем.

При испытании летучих веществ (придающих землистый запах) данных культур все личинки стронгилят сохраняли жизнеспособность

при температуре 37°С в течение от 0,5 до 48 часов культивирования .

При одновременном культивировании в чашках Петри актиномицетов и личинок стронгилят лошадей не выявлено культур-гельминтофа-гов. личинки свободно передвигались по. увлажненной поверхности агара между колониями актиномицетов.

В процессе культивирования яиц параскарид лошадей до инвазионной стадии обнаружено, что яйца Parascarls equorum как серого, так и темно-коричневого цвета достигают инвазионной стадии при комнатной температуре за 6-7 суток, что говорит об их оплодотво-ренности и жизнеспособности.

Микроскопическое исследование строения инвазионных личинок стронгилят лошадей показало, что личинки деляфондий имеют кишечные клетки трапецевидной формы, расположенные в два ряда, личинки альфортий - трехугольные кишечные клетки, также расположенные в два ряда и личинки трихонем - расположенные в один ряд за исключением первой пары вытянутые кишечные клетки.

2.2.5. Гематологические исследования «

2.2.5.1. Содержание витамина В^г в сыворотке крови

Результаты определения концентрации витамина В12 в крови ло-иадей показало достоверное снижение ее у инвазированных кишечными нематодами (параскаридами. стронгилятами) животных по сравнению с контрольными показателями.

' Количество витамина В*2 в сыворотке крови лошадей при слабой, средней и сильной интенсивности инвазий в среднем составило соответственно 2,51 ± 0.20 кг/мл, 1.91 ± 0,14 нг/мл и 1,01 ± 0,11 кг/мл (Р<0,005) по сравнению с 2.96 ± 0,10 нг/мл в контроле.

В стойловый период содержания уровень витамина В12 в сыворотке крови лошадей контрольной и опытных групп оказался ниже -при средней интенсивности инвазий 1,34 i 0.16 нг/мл, при сильной - 0,94 ± 0,09 нг/мл и в контроле - 2,91 ± 0.17 нг/мл, чем в пастбищный период - соответственно 2,23 ± 0,13 нг/мл. 1,08 ± 0,25 нг/мл и 3,01 * 0,, 12 нг/мл.

Полученные данные позволяют ..предположить, что одной из причин изменения концентрации витамина в крови является уменьшение в стойловый период и увеличение в пастбищный сезон количественного уровня вкгиномицетов, синтезирующих витамин В12 в пищеварительном тракте тавотных.

- Id -

2.2.5.2.Уровень пепсиногена в плазме крови

Нами установлено достоверное снижение содержания пепсиногена в плазме крови иивазироваиных кишечными нематодами лошадей.

Концентрация пепсиногена в плазме крови лошадей при средней интенсивности инвазий составляла 2.67 ± 0.12 mtZ иди в 1,7 раза меньше и при сильной Ш - 2,27 ± 0,48 мг% или в 1.9 раза меньше, чем у контрольных животных - 4,41 ± 0,27 мгХ (Р<0.005).

Самый низкий уровень пепсиногена в крови зарегистрирован у животных при смеиаккой инвазии параекаридачи и стронгилятачи -2.05 t 0.23 urZ, тогда как при гпгоазки тать га строяг'/лятами это? показатель составил 2,86 ± 0,09 мгХ.

При стойловом и пастбищном содержании животных достоверных изменений в содержании пепсиногена в плазме крови не отмечено.

2.2.6. Испытание антгельминтиков против параскаридова и стронгилятоэов лошадей

С цель» изыскания новых эффективны;: антгельиинтэтсов против кишечных нематод (параскарид, стронпшт) лошадей нами испытаны следующие препаративные формы:

- ивомек мелкогранулированный (разработка лаг-зратории арач-иозов Всероссийского института арахноэитомологии г. Тюмень) - беловато-серые гранулы без запаха, содержащие 0,1% изермектина, в налш опытах мы использовали в доге 0,2 г/кг массы тела животного (0.2 мг/кг по ДВ) per os;

- двойной пиперазин или пиперазина гексагидрат очищенный (разработан в иаучно-исследовательской лаборатории АО "Каустик" г. Стерлитамака) белый порошок со слабым запахом. Применяли в дозе 0,1 г/кг однократно per os;

- пиаветрин - порошок белого цвета, содержащий 10 X пиперазина- гидрохлорида. Применяли per os в дозе 0.1 г/кг массы тела животного;

- валбазен - 2.5 X суспензия альбендазола молочно-белого цвета без резкого запаха. Применяли per os в дозе 10 мг/кг по ДВ или 40 мг на 100 кг массы тела животного.

2.2.6.1. Эффективность лечения

Результаты испытания препаратов показали, что ивомек мелког- . ранулированньй, двойной пиперазин и пиаветрин в указанных дозах были наиболее эффективными антгельминтиками при кишечных немато-дозах лошадей, экстенсэффективность (93) которых составила 100 X.

Препарат валбазен оказался,малоэффективным при данных инвазиях - ЭЭ составила 20 X.

Клиническое состояние животных после дегельминтизации находилось в пределах физиологической нормы. Спустя 27 суток после, применения ивомека мелкогранулированного и пиаветрина физиологическое состояние животных приближалось к норме, о чем свидетельствовали полученные наш морфологические показатели крови , уровень пепсиногена в плазме и содержание витамина В12 в сыворотке крови. До дегельминтизации в крови инвазированных лошадей количество эритроцитов в среднем составило 6,35 ± 0,75х1012/л, лейкоцитов - 12.30 ± 0.30хЮ9/л, эозинофилов - 207.5 ± 46,2х106/л и гемоглобина - 93,5 ± 8.5 г/л, пепсиногена - 2,87 ± 0,12 мгХ и витамина Вт2 - 1,91 ±0,15 мкг/л. Через 27 суток после применения препаратов эти показатели составили соответственно: количество эритроцитов -6,95 ± 0,9х1012/л, лейкоцитов 9.25 ± 0,7х109/л,эозинофилов - 102,5' * 13.8х10б/л, гемоглобина - 123,5 ±13,5 г/л, пепсиногена - 4.46 ± 0,27 мгХ и витамина В12 - 2,72 ± 0,10 мкг/ л (Р<0.01 ).

2.2.6.2. Влияние антгельминтнков на количественный состав актиномицетов Пищеварительного канала лошадей

После применения ивомека мелкогранулированного количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей восстанавливайся через 9 недель (134, 9±40,8 тыс в 1 г) по сравнению с 15,8±2,0 тыс до дегельминтизации. При обработке пиаветрином количество актиномицетов в прямой кишке первоначально снижалось с 47,7±3,3 тыс до дегельминтизации до 33,1±4,6 тыс через 2 недели и 19.2±3.1 тыс черев 4 недели после применения препарата. Через 2 месяца количественный уровень актиномицетов составлял 99,2±19,2 тыс в 1 г содержимого прямой кишки.

Таким образом, препараты ивермектина оказывают более благоприятное воздействие на актиномицеты пищеварительного канала лошадей по сравнению с пиперазиновыми соединениями.

ВЫВОДЫ

1. Пищеварительный канал жеребят заселяется актиномицетами в первые сутки постнатального периода после приема молозива. Коли-

УрСijGiii> miiitpüCtjrUÄiiiowiCli и ПрЛтОЛ i'UHiliCIi

ребят достигает максимума ( 1320,0 ± 21,0 тыс/г ) ¡¡а 10-е сутки жизни я стабилизируется к 5 - 6 месячному возрасту после отъема животных ( 170,2 ± 5,8 тыс/г ).

2. Количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой кишки лошадей в условиях стойлово-пастбищного содержания находится в зависимости от интенсивности инвазий кишечными нематодами (параскаридами, стронгилятами ) и колеблется по сезонам года: при

и сильной интенсивности инваяий количество яктлномиив-тон достоверно уменьшается и составляет соответственно зимой -11,3±14,8 тыс/г и 14,9*2,1 тыс/г (против 80,8*9,8 тыс /г в контроле ); весной - 69,8*8,6 тыс/г и 27,4*4,3 тыс/г (против 136,6 * 10,2 тыс/г в контроле ); летом - 78,5*4,9 тыс/г и 32,6*3,3 тис/г ( против 163,2*5,2 тас/г в контроле ) и осенью - 62,2 ±15,7 тыс/г и 20,5*5,2 тыс/г (против 112,7*7.8 тыс/г в контроле ); п,::' слабо;' интенсивности инвазий достоверных изменений не обнаружено.

3. Паразитирование кишечных нематод (параскарщ, стронгилят) приводит к уменьшению количественного уровня актиномицетов во всех отделах пищеварительного канала лошадей: при средней и сильной интенсивности инвазий количество микроорганизмов в содержимом желудка было соответственно в 1,6 и 1,9 раза(р<0,001) меньше. чем у незараженных животных, в двенадцатиперстной кишке - в 4.0 и 3,4. тощей - в 3,8 и 3,6, слепой - 3,7 и 4,7. большой ободочной - в 2.5 и 3,8, малой ободочной - в 1,5 и 3,1 и прямой кишке - в 2,1 и 5.0 раза меньше, чем у контрольных лошадей (PcO.OOl).

4. Характер распределения актиномицетов по отделам пищеварительного канала лошадей подчинен общим закономерностям: наимень- ■ шее количество микроорганизмов зарегистрировано в тонком, а наибольшее - в толстом отделе кишечника.

5. Культуры актиномицетов (п - 187),. выделенные из содержи-., кого пищеварительного канала зараженных кишечными нематодами и контрольных лошадей, отнесены к семейству Streptomycetaceae, роду Streptomyces. При этом секции Clnereus принадлежали 60,41 от ис - . следованных культур, сериям Achromogenes - 27,4%, Aureus - 7,1%, Chrysomallus и Chromogenes no 28.3% и Vlolaceus - 8,8%; секции Helvolo-flavus серии Helvolus - 30,5%; секции Albus сериям Albo-coloratus и Albus -.4,8%; секции Roseus:сериям Ruber, Lavendu-lae-roseus, Roseovlolaceus. Fradlae - 3.2%: секциям A2ureus и Im-..-perfectus по 0,5% от исследованных культур. . .

6. Установлено, что актиномицеты пищеварительного тракта зараженных и свободных от кишечных нематод лошадей обладают антиби- , отической и витаминообразующей активностью:

- при слабой интенсивности инвазий в основном возрастает, а при средней и сильной снижается антагонистическая активность актиномицетов по отношению к грамположительным бактериям .(S.aureus соответственно 80%, 58,7%, 75.5% против 70,7% в контроле; М.lute-us - 53,3%, 43,2% и 20,3% против 53,6% в контроле; М.lysodelctl-cus - 67,4%, 43,4% и 30,6% против 46,6% в контроле); спорообразу-ющим микроорганизмам. (B.subtllls - 80%, 58,7% и 51% против 78% в контроле); дрожжеподобным грибам (S.cerevlslae - 73,3%, 39.1% и" 34,6% против 73,1% в контроле).. Актиномицеты, обладающие антибиотической активностью против грамотрицательных бактерий (E.coll) зарегистрированы только при слабой (4,4%) и сильной (6.1%) интенсивности инвазий;

- все актиномицеты синтезируют витамин В12 в юэличестве от 2,09 до 8.18 нг/мл,. за исключением одной культуры, выделенной от инвазировачного животного, не обладающей витаминообразующей активностью.

7. При испытании лярвицидной активности экстрактов 22 культур актиномицетов пищеварительного канала лошадей обнаружена 1 культура (N 219 секции Roseus серии Fradlae), полученная от инва-зированного животного, культивирование в экстракте которой в течение суток при 37°С снижало активность 80% инвазионных личинок стронгилят лошадей. --•'•■■'

8i Установлено, .что концентрация витамина Вгг в сыворотке крови лошадей: снижается в зависимости от степени, инвазии кишечными нематодами: .при средней - в 1,9 и при сильной- в 2,9 раз

(Р<0,005) по сравнению с 2.96 ± 0.10 нг/мл в контроле, что подтверждает отрицательное влияние параскарвд и стронгилят на биосинтез и всасывание витамина в кишечнике.

9. При кишечных нематодозах лошадей уровень пепсиногена в

плазме крови уменьшается при средней интенсивности инвазий в 1.7 и при сильной - в 1.9 раза (Р<0,005) по сравнению с контрольными показателями, что говорит 6 возникновении патологического процесса в желудке.

10. Впервые установлено, что новые антгельминтики - ивомек тслкогранулиоовашй^ а дозе С.2 г/кг иасси тела (0.2 иг/кг по ДЗЗ и двойной пиперазин в дозе 0,1 г/кг - обладают 1GGX зкстенсзффек-тивностью (ЗЭ) против параскарид и стронгилят лошадей. 33 пиавет-рина в дозе 0,1 г/кг массы животного составила при данных инвазиях 100%. а валбазена (2,5% ДВ) в дозе 10 мг/кг по ЛВ - 20%.

11. Ивомек оказывает более благоприятное воздействие на ак-тиномицетную флору кишечника: после дегельминтизаций ивомеком количественный уровень актиномицетов в содержимом прямой ¡сишки ло-Яйдей восстанавливается мере? ? месяца, при применении пмаветринА эти показатели но достигает кормы в указанные сроки.

12. С гюмощ&ю гель^интоовокопрсскопии проб от инвазкрованных ¿ошадгй установлено, что яйца Parascaris equorim серого ü коричневого циета при культивировгипги в течение 6-7 суток в одинаковой cî^r.emt ра^ъ'лваются до инвазионной стадии . то есть r-ssö?".;; '"-г лодотвореннымн и яиай«?спсссбнцми

ЦРАКТИ'ШСрЕ Ш^ЖОЖЕНИЯ

1. Для обоснования патогенетической терапии кишечных неызто-дозов лошадей на основании проведенных исследований и с учетом полученных результатов рекомендуем изучать количественный состав и свойства актиномицетов пищеварительного канала» а также концентрацию витамина В12 и пепсиногена в крови лошадбй.

2. Па основании результатов производственных опытов, проведенных по испытанию новых антгельминтиков против параскаркдоза . и стронгнлятозов лошадей, предлагаем использовать ивомек мелкогра-нулировашшй. днойной пшк'рааин и пияветрин в качестве высокоэф-, фективных преп.-фатов при данных инвазиях'. -

3. Для нормализации функций пищеварительного канала зараженных кишечными нематодами лошадей с учетом развития патогенеза рекомендуем наряду с использованием антгельминтиков применять витамин В12. пробиотики и другие продукты микробиального синтеза -биомициновый препарат М-20. биовит. мицелий актиномицетов, а также кормовые антибиотики и ферменты, улучшающие пищеварение.

4. Для определения количественного состава актиномицетов пищеварительного канала лошадей рекомендуем применять наиболее опт тимальные селективные органические среды, содержащие овес: ISP-3 (Waksman. 1967), овсяный агар (ВНИИА) и среду Карвелла.

5. С целью изучения лярвицидной активности актиномицетов рекомендуем применять метод культивирования личинок стронгилят в экстрактах культур актиномицетов, полученных по методике В.А.Буд-никова (1965)...

6. Результаты исследований по изучению влияния кишечных нематод (параскарид. стронгилят) на количественный состав и свойства (антибиотические, витаминообразущие) актиномицетов пищеварительного канала лошадей использованы при разработке методических указаний для ветеринарных специалистов и слушателей факультета повышения квалификации "Влияние гельминтов на микрофлору пищеварительного канала животных" (утверждены учебно - методической клинической комиссией МГАВМиБ 25 марта 1995 года), а также для чтения лекций и проведения лабораторно-практических занятий на кафедре паразитологии и инвазионных болезней животных МГАВМиБ.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

.1. Ишимбаева P.C. Морфология и культуральные свойства актиномицетов, выделенных из содержимого прямой кишки лошадей /Сб.науч.тр. МГАВМиБ.- М., 1994. - С. 19-25.

2. Ишимбаева P.C. Антибиотические свойства актиномицетов, выделенных из содержимого прямой кишки лошадей / Сб. науч. тр. МГАВМиБ.- М.. 1995.- С.23-29.

Размножено на ротапринте в Типогрсфш "POSjäO", задс^бЗ, lüuoica Мясницкая, 35.